JP2003201253A - 臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症の予防及び／又は治療剤 - Google Patents
臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症の予防及び／又は治療剤Info
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- JP2003201253A JP2003201253A JP2002320881A JP2002320881A JP2003201253A JP 2003201253 A JP2003201253 A JP 2003201253A JP 2002320881 A JP2002320881 A JP 2002320881A JP 2002320881 A JP2002320881 A JP 2002320881A JP 2003201253 A JP2003201253 A JP 2003201253A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻
害剤を有効成分とする臓器移植後拒絶反応としての移植
後動脈硬化症又は自家・同種動静脈グラフト移植後内膜
肥厚の予防及び／又は治療剤。 【効果】 ＭＣＰ−１機能阻害剤を投与することによ
り、臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症（内
膜肥厚）及び自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚
を防止又は治療できる。
害剤を有効成分とする臓器移植後拒絶反応としての移植
後動脈硬化症又は自家・同種動静脈グラフト移植後内膜
肥厚の予防及び／又は治療剤。 【効果】 ＭＣＰ−１機能阻害剤を投与することによ
り、臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症（内
膜肥厚）及び自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚
を防止又は治療できる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、臓器移植後拒絶反
応としての移植後動脈硬化症又は自家・同種動静脈グラ
フト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤、並びに臓
器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・
同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治
療方法に関する。
応としての移植後動脈硬化症又は自家・同種動静脈グラ
フト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤、並びに臓
器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・
同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治
療方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】臓器（心臓、腎臓、血管など）移植後、
移植後拒絶反応として、移植（臓器内の）血管の炎症が
早期に生じ、後期には動脈硬化病変（内膜肥厚）が形成
される。この移植後動脈硬化の発生は移植臓器の機能不
全ならびに生着率の低下につながることから臨床上大き
な問題である。拒絶反応の治療・防止のために種々の免
疫抑制剤が用いられているが、その効果は充分ではな
く、副作用も少なくない。したがって、病態の発生機序
にそった新しい治療法の開発が求められている（非特許
文献１参照）。同様に、自家・同種動静脈グラフト移植
後内膜肥厚にも同様の炎症性変化が関与すると考えられ
る。
移植後拒絶反応として、移植（臓器内の）血管の炎症が
早期に生じ、後期には動脈硬化病変（内膜肥厚）が形成
される。この移植後動脈硬化の発生は移植臓器の機能不
全ならびに生着率の低下につながることから臨床上大き
な問題である。拒絶反応の治療・防止のために種々の免
疫抑制剤が用いられているが、その効果は充分ではな
く、副作用も少なくない。したがって、病態の発生機序
にそった新しい治療法の開発が求められている（非特許
文献１参照）。同様に、自家・同種動静脈グラフト移植
後内膜肥厚にも同様の炎症性変化が関与すると考えられ
る。
【０００３】最近の血管生物学的研究からこれらの難治
性疾患の発生機序に共通に炎症が関与する可能性が示唆
されている（非特許文献２参照）。白血球は生体外から
侵入した異物の処理機能を有し、また組織が損傷を受け
た場合には損傷部位に集まり、組織の修復に関与する。
炎症反応は、白血球の自己防衛能が過剰に働くことによ
り、かえって自己組織を損傷する場合であり、例えば、
心臓移植後の冠動脈硬化の発生は、主に過剰な自己防衛
反応により炎症が惹起されることによると考えられる。
これは、脂質の浸潤とそれを貪食するマクロファージの
泡沫化により生じる、通常の動脈硬化とは発生メカニズ
ムを明らかに異にする。
性疾患の発生機序に共通に炎症が関与する可能性が示唆
されている（非特許文献２参照）。白血球は生体外から
侵入した異物の処理機能を有し、また組織が損傷を受け
た場合には損傷部位に集まり、組織の修復に関与する。
炎症反応は、白血球の自己防衛能が過剰に働くことによ
り、かえって自己組織を損傷する場合であり、例えば、
心臓移植後の冠動脈硬化の発生は、主に過剰な自己防衛
反応により炎症が惹起されることによると考えられる。
これは、脂質の浸潤とそれを貪食するマクロファージの
泡沫化により生じる、通常の動脈硬化とは発生メカニズ
ムを明らかに異にする。
【０００４】本発明の目的は、臓器移植時において生じ
る移植動脈への白血球の浸潤・集積と、白血球の活性化
による種々のサイトカイン、ケモカインの産生を防止す
ることによって、臓器移植後の動脈硬化及び内膜肥厚の
発症を防ぐ方策を見出すことにある。
る移植動脈への白血球の浸潤・集積と、白血球の活性化
による種々のサイトカイン、ケモカインの産生を防止す
ることによって、臓器移植後の動脈硬化及び内膜肥厚の
発症を防ぐ方策を見出すことにある。
【０００５】ところで、ケモカインは、白血球やリンパ
球に対して、遊走活性を有する一群の蛋白質である。ケ
モカインは、その構造から大きく４種類に分けられ、１
番目と２番目のシステインが連続して配置されているも
のは、ＣＣケモカインと称されている。
球に対して、遊走活性を有する一群の蛋白質である。ケ
モカインは、その構造から大きく４種類に分けられ、１
番目と２番目のシステインが連続して配置されているも
のは、ＣＣケモカインと称されている。
【０００６】ＣＣケモカインのひとつである単球遊走因
子−１（ＭＣＰ−１）は、それ自身が蛋白として報告さ
れ、またほぼ同時期にｃＤＮＡ配列も明らかになった
（非特許文献３〜５参照）。
子−１（ＭＣＰ−１）は、それ自身が蛋白として報告さ
れ、またほぼ同時期にｃＤＮＡ配列も明らかになった
（非特許文献３〜５参照）。
【０００７】ＭＣＰ−１を認識する受容体はすでに同定
され、またｃＤＮＡもクローニングされている（非特許
文献６、７参照）。現在、ＣＣケモカイン受容体として
１１種類の受容体が知られており、ＭＣＰ−１受容体は
ＣＣＲ２と呼ばれている。
され、またｃＤＮＡもクローニングされている（非特許
文献６、７参照）。現在、ＣＣケモカイン受容体として
１１種類の受容体が知られており、ＭＣＰ−１受容体は
ＣＣＲ２と呼ばれている。
【０００８】ロリンズらは、ＭＣＰ−１蛋白のアミノ酸
変異体を各種作成し、そのうちいくつかは細胞遊走活性
が消失することを報告した（非特許文献８参照）。これ
らの変異体のうち、Ｎ末端から数えて２から８番目のア
ミノ酸を欠失させた変異体７ＮＤ−ＭＣＰ−１は、ＣＣ
Ｒ２に対する結合能はあるが、細胞遊走を惹起しない、
又はドミナントネガティブ（dominant negative）とし
て野生型ＭＣＰ−１とダイマーを形成し、ＭＣＰ−１の
機能を阻害した。また、ケモカインのＮ末端欠失が、ケ
モカインの対応する内在性単量体とのヘテロ２量体を形
成することによるケモカイン受容体の相互作用の有力な
ドミナントネガティブ阻害剤になり得、このものが関節
リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、肺繊維症など
の慢性肺炎等の炎症、自己免疫疾患等の治療に有効であ
ることが知られている（特許文献１参照）。
変異体を各種作成し、そのうちいくつかは細胞遊走活性
が消失することを報告した（非特許文献８参照）。これ
らの変異体のうち、Ｎ末端から数えて２から８番目のア
ミノ酸を欠失させた変異体７ＮＤ−ＭＣＰ−１は、ＣＣ
Ｒ２に対する結合能はあるが、細胞遊走を惹起しない、
又はドミナントネガティブ（dominant negative）とし
て野生型ＭＣＰ−１とダイマーを形成し、ＭＣＰ−１の
機能を阻害した。また、ケモカインのＮ末端欠失が、ケ
モカインの対応する内在性単量体とのヘテロ２量体を形
成することによるケモカイン受容体の相互作用の有力な
ドミナントネガティブ阻害剤になり得、このものが関節
リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、肺繊維症など
の慢性肺炎等の炎症、自己免疫疾患等の治療に有効であ
ることが知られている（特許文献１参照）。
【０００９】
【特許文献１】特表平１１−５０６００５号公報
【非特許文献１】Transplantation 72 (6 Suppl):S16-
9, 2001
9, 2001
【非特許文献２】N. Engl. J. Med. 340, 115-126, 199
9
9
【非特許文献３】J. Exp. Med. 169, 1449-1459, 1989
【非特許文献４】J. Exp. Med. 169, 1485-1490, 1989
【非特許文献５】FEBS lett, 244, 487-493, 1989
【非特許文献６】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 27
52-2756, 1994
52-2756, 1994
【非特許文献７】Biochem. Biophys. Res. Commun. 20
2, 1156-1162, 1994
2, 1156-1162, 1994
【非特許文献８】J. Bio. Chem. 269, 15918-15924, 19
94
94
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、臓器
移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・同
種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療
剤、更には、臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬
化症又は自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予
防又は／治療方法を提供することである。
移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・同
種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療
剤、更には、臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬
化症又は自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予
防又は／治療方法を提供することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、７ＮＤ−
ＭＣＰ−１遺伝子を含む発現ベクター（ｐｃＤＮＡ３）
をモデル動物（マウス）の大腿部に筋肉注射し、ベクタ
ープラスミドが導入された筋肉細胞で産生される７ＮＤ
−ＭＣＰ−１が移植心臓の動脈硬化進展（内膜肥厚）を
有意に抑制することを確認し、ＭＣＰ−１機能阻害剤
が、移植後動脈硬化症又は自家・同種動静脈グラフト移
植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤として有用である
ことを見出し、本発明を完成した。
ＭＣＰ−１遺伝子を含む発現ベクター（ｐｃＤＮＡ３）
をモデル動物（マウス）の大腿部に筋肉注射し、ベクタ
ープラスミドが導入された筋肉細胞で産生される７ＮＤ
−ＭＣＰ−１が移植心臓の動脈硬化進展（内膜肥厚）を
有意に抑制することを確認し、ＭＣＰ−１機能阻害剤
が、移植後動脈硬化症又は自家・同種動静脈グラフト移
植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤として有用である
ことを見出し、本発明を完成した。
【００１２】すなわち、本発明は、単球遊走因子−１
（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を有効成分とする臓器移植後
拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・同種動静
脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤を提
供するものである。また本発明は、単球遊走因子−１
（ＭＣＰ−１）機能阻害剤の有効量を投与することを特
徴とする臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症
又は自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及
び／又は治療方法を提供するものである。
（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を有効成分とする臓器移植後
拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・同種動静
脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤を提
供するものである。また本発明は、単球遊走因子−１
（ＭＣＰ−１）機能阻害剤の有効量を投与することを特
徴とする臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症
又は自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及
び／又は治療方法を提供するものである。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明に係るＭＣＰ−１機能阻害
剤は、生体におけるＭＣＰ−１の機能を阻害できるもの
であれば特に限定されるものではない。具体的には、抗
ＭＣＰ−１抗体（ポリクローナル及びモノクローナルを
含む）、ＭＣＰ−１アンタゴニスト（蛋白及び非蛋白低
分子化合物を含む）、ＭＣＰ−１ドミナントネガティブ
（蛋白及び非蛋白低分子化合物を含む）、及びＭＣＰ−
１機能を阻害するものが蛋白の場合は、それらをコード
する遺伝子をも挙げることができる。これらの抗体、ア
ンタゴニスト、ドミナントネガティブ及びこれらをコー
ドする遺伝子はすでに種々のものが知られており、また
公知の手法により得ることが可能なものを本発明におい
ては用いることができる。
剤は、生体におけるＭＣＰ−１の機能を阻害できるもの
であれば特に限定されるものではない。具体的には、抗
ＭＣＰ−１抗体（ポリクローナル及びモノクローナルを
含む）、ＭＣＰ−１アンタゴニスト（蛋白及び非蛋白低
分子化合物を含む）、ＭＣＰ−１ドミナントネガティブ
（蛋白及び非蛋白低分子化合物を含む）、及びＭＣＰ−
１機能を阻害するものが蛋白の場合は、それらをコード
する遺伝子をも挙げることができる。これらの抗体、ア
ンタゴニスト、ドミナントネガティブ及びこれらをコー
ドする遺伝子はすでに種々のものが知られており、また
公知の手法により得ることが可能なものを本発明におい
ては用いることができる。
【００１４】例えば、抗ＭＣＰ−１抗体は、J. Immunol
ogy, 147, 2229-2233, 1991に記載の方法により得るこ
とができ、ＭＣＰ−１アンタゴニスト及びＭＣＰ−１ド
ミナントネガティブは、特表平１１−５０６００５号公
報等で知られている。
ogy, 147, 2229-2233, 1991に記載の方法により得るこ
とができ、ＭＣＰ−１アンタゴニスト及びＭＣＰ−１ド
ミナントネガティブは、特表平１１−５０６００５号公
報等で知られている。
【００１５】本発明においては、蛋白としてのＭＣＰ−
１機能阻害剤を生体へ投与するよりも、ＭＣＰ−１機能
阻害剤をコードする遺伝子を導入する方が、遺伝子を生
体（血）中で長く存在させることができるため好まし
い。
１機能阻害剤を生体へ投与するよりも、ＭＣＰ−１機能
阻害剤をコードする遺伝子を導入する方が、遺伝子を生
体（血）中で長く存在させることができるため好まし
い。
【００１６】本発明においては、ＭＣＰ−１アンタゴニ
スト又はＭＣＰ−１ドミナントネガティブが好ましく、
中でも７ＮＤ−ＭＣＰ−１が好ましい。更には、ＭＣＰ
−１アンタゴニスト又はＭＣＰ−１ドミナントネガティ
ブをコードする遺伝子が好ましく、中でも７ＮＤ−ＭＣ
Ｐ−１をコードする遺伝子が好ましい。７ＮＤ−ＭＣＰ
−１をコードする遺伝子としては、配列番号１に示され
る塩基配列を有するＤＮＡが用いられる。このＤＮＡ
は、それ自体公知の遺伝子工学的手法によって作成する
ことができる。すなわち、配列番号２で示される野生型
ＭＣＰ−１をコードするＤＮＡの塩基配列より、合成プ
ライマーを用いたＰＣＲ法を用いて作成すればよい。
スト又はＭＣＰ−１ドミナントネガティブが好ましく、
中でも７ＮＤ−ＭＣＰ−１が好ましい。更には、ＭＣＰ
−１アンタゴニスト又はＭＣＰ−１ドミナントネガティ
ブをコードする遺伝子が好ましく、中でも７ＮＤ−ＭＣ
Ｐ−１をコードする遺伝子が好ましい。７ＮＤ−ＭＣＰ
−１をコードする遺伝子としては、配列番号１に示され
る塩基配列を有するＤＮＡが用いられる。このＤＮＡ
は、それ自体公知の遺伝子工学的手法によって作成する
ことができる。すなわち、配列番号２で示される野生型
ＭＣＰ−１をコードするＤＮＡの塩基配列より、合成プ
ライマーを用いたＰＣＲ法を用いて作成すればよい。
【００１７】遺伝子を生体内で発現させるために用いる
発現ベクターとしては、その機能を発揮するものであれ
ば特に限定されるものではなく、例えばｐｃＤＮＡ３、
ｐＥＦ−ＢＯＳ、ｐＸＴ１などのプラスミドベクターや
アデノウイルス、センダイウイルスなどのレトロウイル
スベクターを挙げることができる。また、発現ベクター
を構築する際にはプロモーターやエンハンサーを用いて
もよく、プロモーターやエンハンサーは、宿主（生体）
内で機能するものであれば特に限定されるものではな
い。プロモーターとしては、例えばＳＶ４０プロモータ
ー、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ−ＴＫ、ＳＲα、ＲＳ
Ｖなどを挙げることができる。
発現ベクターとしては、その機能を発揮するものであれ
ば特に限定されるものではなく、例えばｐｃＤＮＡ３、
ｐＥＦ−ＢＯＳ、ｐＸＴ１などのプラスミドベクターや
アデノウイルス、センダイウイルスなどのレトロウイル
スベクターを挙げることができる。また、発現ベクター
を構築する際にはプロモーターやエンハンサーを用いて
もよく、プロモーターやエンハンサーは、宿主（生体）
内で機能するものであれば特に限定されるものではな
い。プロモーターとしては、例えばＳＶ４０プロモータ
ー、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ−ＴＫ、ＳＲα、ＲＳ
Ｖなどを挙げることができる。
【００１８】また、遺伝子を宿主（生体）内で発現させ
るためには、リポソームも用いることができる。この場
合、遺伝子はリポソームの内部、またリポソームを構成
する脂質二重膜の内部もしくは膜の外側に存在していて
もよい。遺伝子を宿主（生体）内で発現させることが可
能なリポソームの組成は、種々のものが知られている。
るためには、リポソームも用いることができる。この場
合、遺伝子はリポソームの内部、またリポソームを構成
する脂質二重膜の内部もしくは膜の外側に存在していて
もよい。遺伝子を宿主（生体）内で発現させることが可
能なリポソームの組成は、種々のものが知られている。
【００１９】導入された７ＮＤ−ＭＣＰ−１遺伝子より
７ＮＤ−ＭＣＰ−１蛋白が生産されていることの確認
は、蛋白が血清中に存在するか否かをＥＬＩＳＡ法によ
り検出すればよい。
７ＮＤ−ＭＣＰ−１蛋白が生産されていることの確認
は、蛋白が血清中に存在するか否かをＥＬＩＳＡ法によ
り検出すればよい。
【００２０】本発明の医薬の適応対象となる疾患として
は、臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症（内
膜肥厚）及び自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚
が挙げられる。本発明の臓器移植後動脈硬化症又は自家
・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は
治療剤の有効成分であるＭＣＰ−１機能阻害剤の生体へ
の投与は、経口的又は非経口的に行えばよい。なお、Ｍ
ＣＰ−１機能阻害剤が蛋白の場合は、非経口的に投与す
ることが望ましい。非経口的投与の方法としては、注射
によるものを挙げることができ、注射部位は特に限定さ
れるものではなく、動脈、静脈、筋肉、皮膚、皮下等移
植臓器又はグラフト以外の部位に行えばよい。ＭＣＰ−
１機能阻害剤を注射するための製剤（剤形）としては、
注射剤を挙げることができ、このものは公知の製剤化技
術により製することができる。注射剤を製するに際して
は、公知の製剤添加物を配合することができ、例えば、
等張化剤、緩衝剤、保存剤、賦形剤、無痛化剤等を挙げ
ることができる。なお、患者への投与量は、患者の症
状、年齢、性別、体重等により適宜検討すればよいが、
例えば、蛋白の場合は、０．１〜１０００mgを、遺伝子
の場合は、０．０１〜１００mgを、２〜４週間に１回投
与すればよい。
は、臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症（内
膜肥厚）及び自家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚
が挙げられる。本発明の臓器移植後動脈硬化症又は自家
・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は
治療剤の有効成分であるＭＣＰ−１機能阻害剤の生体へ
の投与は、経口的又は非経口的に行えばよい。なお、Ｍ
ＣＰ−１機能阻害剤が蛋白の場合は、非経口的に投与す
ることが望ましい。非経口的投与の方法としては、注射
によるものを挙げることができ、注射部位は特に限定さ
れるものではなく、動脈、静脈、筋肉、皮膚、皮下等移
植臓器又はグラフト以外の部位に行えばよい。ＭＣＰ−
１機能阻害剤を注射するための製剤（剤形）としては、
注射剤を挙げることができ、このものは公知の製剤化技
術により製することができる。注射剤を製するに際して
は、公知の製剤添加物を配合することができ、例えば、
等張化剤、緩衝剤、保存剤、賦形剤、無痛化剤等を挙げ
ることができる。なお、患者への投与量は、患者の症
状、年齢、性別、体重等により適宜検討すればよいが、
例えば、蛋白の場合は、０．１〜１０００mgを、遺伝子
の場合は、０．０１〜１００mgを、２〜４週間に１回投
与すればよい。
【００２１】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明は何らこれに限定されるものではない。 （１）７ＮＤ−ＭＣＰ−１の構築と発現 ７ＮＤ−ＭＣＰ−１をコードするベクタープラスミド
は、ＭＣＰ−１をコードするｐｃＤＮＡ３ベクタープラ
スミドを鋳型にして、組換えＰＣＲ法を用いて作成し
た。すべての変異は、両方向からのＤＮＡシークエンス
解析により確認した。得られた７ＮＤ−ＭＣＰ−１をコ
ードするＰＣＲ産物をｐｃＤＮＡ３ベクタープラスミド
のマルチクローニング部位に組込んだ後、大腸菌にトラ
ンスフォームし、キアゲン社プラスミドギガキットを用
いてプラスミドＤＮＡを精製した。
するが、本発明は何らこれに限定されるものではない。 （１）７ＮＤ−ＭＣＰ−１の構築と発現 ７ＮＤ−ＭＣＰ−１をコードするベクタープラスミド
は、ＭＣＰ−１をコードするｐｃＤＮＡ３ベクタープラ
スミドを鋳型にして、組換えＰＣＲ法を用いて作成し
た。すべての変異は、両方向からのＤＮＡシークエンス
解析により確認した。得られた７ＮＤ−ＭＣＰ−１をコ
ードするＰＣＲ産物をｐｃＤＮＡ３ベクタープラスミド
のマルチクローニング部位に組込んだ後、大腸菌にトラ
ンスフォームし、キアゲン社プラスミドギガキットを用
いてプラスミドＤＮＡを精製した。
【００２２】（２）マウス異所性心臓移植モデル
雄性６週令B10.D2マウスの両側大腿筋に７ＮＤ−ＭＣＰ
−１遺伝子/ｐｃＤＮＡ３（ｎ＝９；以下、７ＮＤ治療
群と略す。）もしくはコントロールとして、Green Flou
rescent Protein遺伝子/ｐｃＤＮＡ３（ｎ＝９；以下、
コントロール群と略す。）50μｇを筋肉注射した（右25
μｇ/25μl Tris/EDTA buffer 、左25μｇ/25μl Tris/
EDTA buffer）。直後にAihara & Miyazaki (Nature Bio
tech vol16. 867-870. 1998)の方法で100V６回の通電を
行なった。
−１遺伝子/ｐｃＤＮＡ３（ｎ＝９；以下、７ＮＤ治療
群と略す。）もしくはコントロールとして、Green Flou
rescent Protein遺伝子/ｐｃＤＮＡ３（ｎ＝９；以下、
コントロール群と略す。）50μｇを筋肉注射した（右25
μｇ/25μl Tris/EDTA buffer 、左25μｇ/25μl Tris/
EDTA buffer）。直後にAihara & Miyazaki (Nature Bio
tech vol16. 867-870. 1998)の方法で100V６回の通電を
行なった。
【００２３】遺伝子導入３日後のB10.D2マウスの腹部
に、雄性６週令のDBA2マウスの心臓をFurukawaらの方法
(Circulation. 1996, 93, 333-339)で移した。すなわ
ち、DBA2マウスから心臓を取り出し直ちにB10.D2マウス
の腹部動静脈に吻合し心臓移植を実施した。８週後に移
植心を摘出し、フォルマリンで固定した。パラフィン包
埋後、各心臓より、500μmおきに５切片を作製した。ヘ
マトキシリン−エオシン染色後、１０冠動脈の断面を無
作為に選出し形態学的計測を行なった。
に、雄性６週令のDBA2マウスの心臓をFurukawaらの方法
(Circulation. 1996, 93, 333-339)で移した。すなわ
ち、DBA2マウスから心臓を取り出し直ちにB10.D2マウス
の腹部動静脈に吻合し心臓移植を実施した。８週後に移
植心を摘出し、フォルマリンで固定した。パラフィン包
埋後、各心臓より、500μmおきに５切片を作製した。ヘ
マトキシリン−エオシン染色後、１０冠動脈の断面を無
作為に選出し形態学的計測を行なった。
【００２４】（３）結果
新生内膜／中膜比が、コントロール群では０．８４／
０．０７であるのに対し、７ＮＤ治療群では０．５４／
０．０９であり、７ＮＤ治療群は、コントロール群と比
較して有意に新生内膜形成が抑制されていた。
０．０７であるのに対し、７ＮＤ治療群では０．５４／
０．０９であり、７ＮＤ治療群は、コントロール群と比
較して有意に新生内膜形成が抑制されていた。
【００２５】したがって、ＭＣＰ−１機能阻害剤を投与
することにより、移植後動脈硬化症の予防及び／又は治
療に有効であることが明らかとなった。その作用機序
は、レシピエント炎症細胞のグラフト血管への浸潤、付
着を抑制するためであると考えられる。
することにより、移植後動脈硬化症の予防及び／又は治
療に有効であることが明らかとなった。その作用機序
は、レシピエント炎症細胞のグラフト血管への浸潤、付
着を抑制するためであると考えられる。
【００２６】
【発明の効果】ＭＣＰ−１機能阻害剤は、臓器移植後拒
絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・同種動静脈
グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤、更に
は臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自
家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又
は治療方法として有用である。
絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・同種動静脈
グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療剤、更に
は臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症又は自
家・同種動静脈グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又
は治療方法として有用である。
【００２７】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> EGASHIRA KENSUKE
DAIICHI PHARMACEUTICAL CO., LTD
<120> Preventing and/or therapeutic agent for artery disease as rejectio
n after organ transplantation
<130> P05021411
<140>
<141>
<150> JP P2001-337861
<151> 2001-11-02
<160> 2
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 279
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60
gggctcgctc aggtcacctg ctgttataac ttcaccaata ggaagatctc agtgcagagg 120
ctcgcgagct atagaagaat caccagcagc aagtgtccca aagaagctgt gatcttcaag 180
accattgtgg ccaaggagat ctgtgctgac cccaagcaga agtgggttca ggattccatg 240
gaccacctgg acaagcaaac ccaaactccg aagacttga 279
<210> 2
<211> 300
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<300>
<301> Yoshimura, T.
Yuhki, N.
Moore, S.K.
Appella, E.
Lerman, M.I.
Leonard, E.J.
<302> Human monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1): full
length DNA cloning, expression in mitten-stimulated
blood mononuclear leukocytes, and sequence similarity
to mouse competence gene JE.
<303> FEBS Lett.
<304> 244
<305> 2
<306> 487-493
<307> 1989-02
<400> 2
atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60
gggctcgctc agccagatgc aatcaatgcc ccagtcacct gctgttataa cttcaccaat 120
aggaagatct cagtgcagag gctcgcgagc tatagaagaa tcaccagcag caagtgtccc 180
aaagaagctg tgatcttcaa gaccattgtg gccaaggaga tctgtgctga ccccaagcag 240
aagtgggttc aggattccat ggaccacctg gacaagcaaa cccaaactcc gaagacttga 300
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 竹下 彰
福岡県大野城市平野台２丁目19番15号
(72)発明者 佐田 政隆
東京都豊島区西池袋４−40−17−503
Ｆターム(参考） 4C084 AA13 AA17 BA35 CA53 NA14
ZA45
4C085 AA14 CC04 CC29 EE01
Claims (8)
- 【請求項１】 単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻
害剤を有効成分とする臓器移植後拒絶反応としての移植
後動脈硬化症又は自家・同種動静脈グラフト移植後内膜
肥厚の予防及び／又は治療剤。 - 【請求項２】 ＭＣＰ−１機能阻害剤が、抗ＭＣＰ−１
抗体、ＭＣＰ−１アンタゴニスト、ＭＣＰ−１ドミナン
トネガティブ及びそれらをコードする遺伝子から選ばれ
る１種又は２種以上のものである請求項１記載の予防及
び／又は治療剤。 - 【請求項３】 ＭＣＰ−１ドミナントネガティブをコー
ドする遺伝子が、配列番号１で表わされるものである請
求項２記載の予防及び／又は治療剤。 - 【請求項４】 単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻
害剤の有効量を投与することを特徴とする臓器移植後拒
絶反応としての移植後動脈硬化症又は自家・同種動静脈
グラフト移植後内膜肥厚の予防及び／又は治療方法。 - 【請求項５】 ＭＣＰ−１機能阻害剤が、抗ＭＣＰ−１
抗体、ＭＣＰ−１アンタゴニスト、ＭＣＰ−１ドミナン
トネガティブ及びそれらをコードする遺伝子から選ばれ
る１種又は２種以上のものである請求項４記載の予防及
び／又は治療方法。 - 【請求項６】 ＭＣＰ−１ドミナントネガティブをコー
ドする遺伝子が、配列番号１で表わされるものである請
求項５記載の予防及び／又は治療方法。 - 【請求項７】 遺伝子を移植臓器又はグラフト以外の部
位に投与するものである請求項６記載の予防及び／又は
治療方法。 - 【請求項８】 投与部位が筋肉である請求項７記載の予
防及び／又は治療方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002320881A JP2003201253A (ja) | 2001-11-02 | 2002-11-05 | 臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症の予防及び／又は治療剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001337861 | 2001-11-02 | ||
| JP2001-337861 | 2001-11-02 | ||
| JP2002320881A JP2003201253A (ja) | 2001-11-02 | 2002-11-05 | 臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症の予防及び／又は治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003201253A true JP2003201253A (ja) | 2003-07-18 |
Family
ID=27666840
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002320881A Pending JP2003201253A (ja) | 2001-11-02 | 2002-11-05 | 臓器移植後拒絶反応としての移植後動脈硬化症の予防及び／又は治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003201253A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013117081A (ja) * | 2011-12-05 | 2013-06-13 | Toray Ind Inc | サイジング剤塗布炭素繊維の製造方法 |
-
2002
- 2002-11-05 JP JP2002320881A patent/JP2003201253A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013117081A (ja) * | 2011-12-05 | 2013-06-13 | Toray Ind Inc | サイジング剤塗布炭素繊維の製造方法 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Effective date: 20050526 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20080805 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20081209 |