JP2002514168A

JP2002514168A - 組織の再上皮形成または再内皮形成を高めるか、または促進させるためのデヒドロエピアンドロステロン誘導体の使用

Info

Publication number: JP2002514168A
Application number: JP50797298A
Authority: JP
Inventors: アラネオ，バーバラ・エイ
Original assignee: ユニバーシティ・オブ・ユタ・リサーチ・ファウンデーション
Priority date: 1996-08-01
Filing date: 1997-07-31
Publication date: 2002-05-14
Also published as: US5922701A; CA2262086C; AU3891797A; ATE216242T1; DE69712065D1; ES2174275T3; AU713850B2; EP0915702A2; WO1998005338A2; CA2262086A1; WO1998005338A3; DK0915702T3; EP0915702B1; DE69712065T2

Abstract

(57)【要約】本発明は、それを必要とする対象における組織の再上皮形成または再内皮形成を促進させる医薬組成物を調製するための、本明細書中に記載するデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体またはその医薬上許容される塩の使用に関する。本発明が特に適する再上皮形成の例には、限定されるものではないが、（ａ）外科的創傷後の皮膚、（ｂ）機械的損傷、腐食性の薬剤または火傷によって引起こされた皮膚擦過傷、（ｃ）白内障手術または角膜移植後の角膜、（ｄ）感染症、非病理的病因または薬物療法後の（呼吸器系、胃腸系、尿生殖器系、乳房系、口腔系、眼組織、肝臓および腎臓の）粘膜上皮、（ｅ）移植後の皮膚、ならびに（ｆ）急性管状組織壊死後の細尿管、の再上皮形成が含まれる。本発明が特に適する再内皮形成の例には、限定されるものではないが、血管形成、フィブリン塊の溶解または冠状動脈中の血栓の溶解もしくは機械的破壊の後の血管における再内皮形成（または内皮細胞の再増殖）が含まれる。本発明によれば、再上皮形成または再内皮形成が完了するまでの時間が、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体を投与することによって高められるか、または促進される。

Description

【発明の詳細な説明】組織の再上皮形成または再内皮形成を高めるか、または促進させるためのデヒドロエピアンドロステロン誘導体の使用発明の背景本発明は、それを必要とする対象における組織の再上皮形成または再内皮形成を促進させる医薬組成物を調製するための、本明細書中に記載するデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体またはその医薬上許容される塩の使用に関する。本発明が特に適する再上皮形成の例には、限定されるものではないが、（ａ）外科的創傷後の皮膚、（ｂ）機械的損傷、腐食性の薬剤または火傷によって引起こされた皮膚擦過傷、（ｃ）白内障手術または角膜移植後の角膜、（ｄ）感染症、非病理的病因または薬物療法後の（呼吸器系、胃腸系、尿生殖器系、乳房系、口腔系、眼組織、肝臓および腎臓の）粘膜上皮、（ｅ）移植後の皮膚、ならびに（ｆ）急性管状組織壊死後の細尿管、の再上皮形成が含まれる。本発明が特に適する再内皮形成の例には、限定されるものではないが、血管形成、フィブリン塊の溶解または冠状動脈中の血栓の溶解もしくは機械的破壊の後の血管における再内皮形成（または内皮細胞の再増殖）が含まれる。本発明は、火傷部位へ適用するためにおよび熱的に損傷された皮膚の組織および微小血管の修復のために、表皮組織がそこから採取されるドナー部位の再上皮形成に特に適する。本発明によれば、再上皮形成または再内皮形成が完了するまでの時間が、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体を投与することによって高められるか、または促進される。本明細書中にて用いる刊行物および他の材料は、発明の背景を明らかにし、特別の場合には、実施に対応するさらなる詳細を提供するためのものであり、出典明示して本明細書の一部とみなされ、簡便のために以下の明細書中では数字で参照し、添付した参照書目中に各々グループ化している。表皮に外傷が起った後は、遅れることなく真皮への外界の接近を遮断することが生存のために極めて重要となる。この事象においては、２つの一時的に関連したステップ:数分以内に一時的なバリアを再確立する血餅を形成することによって、次いで数時間ないし数日以内に血餅の下方であって下側の真皮の上方での残存する上皮の移動よって(再上皮形成のプロセス)：で身体が創傷閉鎖を行う。血餅形成ならびに血管壁、血小板および凝固蛋白質へのその依存を含む第一の工程は最近の概説（１）の主題となっている。すべての上皮細胞の特徴は、遊離表面をカバーする性質である。明らかに、裸にされた表面をカバーするためには、上皮細胞はその創傷上で（１）運動し、次いで（２）増殖しなければならない。両プロセスとも創傷形成によって刺激されるが、初期の創傷閉鎖におけるより重要なプロセスは細胞移動であり、これは細胞分裂から独立している(２−６)。実際、実験条件下において細胞分裂を遮断しても、上皮細胞運動または創傷閉鎖の速度に何ら影響を与えない(７−９)。移動する細胞は、外傷の周辺部の残存上皮細胞からか、またはよりしばしば、創傷基部の残存発毛構造または残存発汗構造から生じる。大きな、深い皮膚の外傷においては、創傷領域をカバーする上皮細胞は創傷周辺部から生じる。しかしながら、小さな、ごく表面の皮膚創傷においては、大部分の上皮細胞が残存毛脂腺構造または残存エクリン構造から生じる(５、１０、１１)。しかしながら、最近の知見は、ある種の環境下においては間葉細胞がトランスフォームし、再生する上皮細胞の一部分となり得ることを示唆しているが(１２)；恐らくは、その現象は大部分の創傷の閉鎖において小さな役割しかを演じていない。再上皮形成は基底膜ゾーンを無傷のままとするごく表面の創傷の上方で最も迅速に起こる。例えば、創傷の床部が無傷の緻密板（lamina densa）(吸引が透明板（lamina lucida）内の真皮から表皮の分離を引起こす)よりなる吸引疱疹の修復においては、上皮細胞の短い舌部（short tongue）が残存上皮構造から迅速に（１２〜２４時間以内に）増殖する(１３)。２４〜７２時間までに、大部分の創傷基部が上皮細胞の薄層によってカバーされ、４日までにそれは層化ケラチノサイトによってカバーされる(１３、１４)。すべての系において、創傷形成に応答して移動を開始するのは基部細胞、すなわち、下層に付着した細胞である。これらの周縁細胞は創傷の向きで平らになり、下層の上方に細胞質突起（projection）を出す(１５、１６)。それらの運動の準備においては、上皮細胞はその細胞間および下層の付着を緩くする。それは半接着斑接合部を有し、そのトノフィラメントが細胞周辺から離脱し、基底膜ゾーンがはっきりとしなくなる(１３、１７−１９)。加えて、前先端の細胞は組織残渣および赤血球を摘む、活発な貧食細胞となる。表皮細胞のこの貧食特性は、表皮細胞によって取込まれるフルオレセイン−コート・ビーズまたはThorotrast粒子を用いて研究室で実証することができる(１６、１７、２０)。この性質は創傷流体中のフィブロネクチンによって高められる(２１)。１または２日以内に、創傷をカバーする細胞の新たな集団を生成しつつ、移動正面の後ろの上皮細胞が増殖し始める(６、１３)。一旦上皮形成が完了して創傷領域がカバーされたら、該上皮細胞はその正常な原型に戻り、その細胞間および基底膜の接触を取り戻す。いずれの創傷上の再上皮形成も、ひろげたカーペットまたは軍隊の隊形のように、シートのごとき上皮細胞の運動によって起こるであろう。上皮細胞が共有する強固な細胞問接着を考慮すれば、これらの細胞が単細胞として創傷上を移動するのではなく、小さなクラスターまたはシートとして移動することは驚くに当たらない。上皮細胞のシートが直接観察された場合には、運動するシートの周縁の細胞は能動的な運動性のように見えるが、該周縁細胞の後ろ（または、層状化した層で上方）の細胞が受動的に引きずられている(２２、２３)。基体への周縁細胞の付着が乱された場合には、張力下にて、移動するシートが離脱するであろう。シート運動のこの様式は「創傷閉鎖の滑りモデル」といい、組織培養における上皮細胞(２２)、胚性上皮運動について(２４)、両生類の創傷閉鎖について(２３)、および角膜創傷閉鎖について(２５)、直接的に立証されている。真皮の厚さおよび不透明のため、哺乳動物皮膚の創傷閉鎖を直接実験することは遥かに困難である。さらに、哺乳動物表皮の移動する上皮シートは多層化されており、故に、滑りモデルを立証している系よりもより複雑である。哺乳動物の表皮の修復について、Winter（２６）は「カエル飛び(leap-frog)」モデルまたは表皮シート運動を提唱した。このモデルは、移動正面の細胞が、代るがわるその上方またはその後ろの細胞によって正面で置換わる基体のみに付着することを示唆する超微細形態学データから間接的に推論された。引き続いて、周縁に近い細胞はカエル飛び様式で新たな接着基底細胞の上方をゆっくりと進むと思われる。このモデルを支持する細胞マーカー実験が示されており、そこでは、無傷表皮のより大きな基底細胞中に見出されたケラチン抗原（Ｋ１０、Ｋ１）が移動する先端の基底細胞中に見出されている。これらの結果を細胞運動によるものとすることもできるが、これらの変化は外傷後にケラチノサイトがその分化パターンを切り替えて、基底層中の細胞の中に通常は見出されないケラチンを発現するというその能力によっても説明し得る(２８)。データは間接的であるが、哺乳動物の表皮創傷閉鎖の「カエル飛び」モデルは多くの支持者を有する(６、１３、２７ −３０)。この論点が未だ解決されていないため、滑りモデルによって単純な上皮が運動する一方、多層化上皮細胞がより複雑なパターンを現し得るという主張が現在のところ納得のいくものである。哺乳動物においては、影響される上皮細胞の状態および特性に依存して、いずれかまたは双方の機構（滑りおよびカエル飛び）が創傷閉鎖において機能し得る(３１)。再上皮形成または再内皮形成の速度を高めるかまたは促進し、かくして前に注記したごとく組織の再上皮形成または再内皮形成を援助するであろう化合物を同定することが望ましい。ＤＨＥＡは、アンドロゲンおよびエストロゲンの双方の生合成において主要な前駆体として作用する内生のアンドロゲン性ステロイドであり(３２)、無数の生物活性を有することが示されている。ＤＨＥＡは肥満症、糖尿病、発癌、自己免疫疾患、神経性記憶喪失において緩和する役割を演じること(３３−３６)、ならびにげっ歯類Ｔ−細胞によるＩＬ−２産生に対するＧＣＳの負の作用（３７）が報告されている。Araneoら（３８）は、外傷後１時間以内に火傷したネズミにＤＨＥＡを投与すると、Ｔ−細胞由来リンホカインを産生する正常な能力、細胞性免疫応答の生起および誘導された感染症に抵抗する能力を含む、正常な免疫学的反応能の保存を生じることを示している。Eichら（３９、４０）は、各々、ＤＨＥＡを使用することにより血小板凝集の速度が低下すること、ならびにＤＨＥＡまたはＤＨＥＡ−硫酸（ＤＨＥＡ−Ｓ）を使用することによりトロンボキサンの産生が低下することを記載している。 Nestlerら（４１）は、ＤＨＥＡを投与することにより、ヒト患者において身体の脂肪塊を減少させ、筋肉塊を増加させ、ＨＤＬコレステロールのレベルに影響することなくＬＤＬコレステロールのレベルを低下させ、血清アポリポ蛋白質Ｂのレベルを低下させることができ、かつインスリンに対する組織感受性に影響し得ないことを示した。Kent（４２）は、ＤＨＥＡが肥満症、老化、真性糖尿病および心疾患を予防し得る「魔法の薬」であると報告している。ＤＨＥＡは長年、薬物治療物として広く処方されていた。しかしながら、最近、米国食品医薬局はその使用を制限した。ＤＨＥＡは細胞内のスルファターゼおよびスルホトランスフェラーゼの作用を介してその硫酸エステル、ＤＨＥＡ−Ｓと容易に相互変換可能である。 Daynesら（４３）は、進行性組織壊死、再かん流損傷、細菌移行および成人呼吸窮迫症候群を軽減または予防するのにある種のＤＨＥＡ誘導体の投与が有用であることを示している。Daynesら（４４）は、ＤＨＥＡＳおよび他のＤＨＥＡ誘導体の投与も、これらの用途に適することを示している。最後に、Araneoら（４５）は、肺高血圧症を軽減または予防するのにＤＨＥＡ誘導体が有用であることを示している。無数の生物活性がＤＨＥＡ誘導体について報告されたにもかかわらず、ＤＨＥＡ誘導体が再上皮形成に対して何らかの影響を有することは全く報告されていない。発明の概要本発明は、それを必要とする対象において組織の再上皮形成または再内皮形成を促進させる医薬組成物を調製するための、本明細書中に記載するデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体またはその医薬上許容される塩の使用に関する。本発明が特に適する再上皮形成の例には、限定されるものではないが、（ａ）外科的創傷後の皮膚、（ｂ）機械的損傷、腐食性の薬剤または火傷によって引起こされた皮膚擦過傷、（ｃ）白内障手術または角膜移植後の角膜、（ｄ）感染症、非病理的病因または薬物療法後の（呼吸器系、胃腸系、尿生殖器系、乳房系、口腔系、眼組織、肝臓および腎臓の）粘膜上皮、（ｅ）移植後の皮膚、ならびに（ｆ）急性管状組織壊死後の細尿管、の再上皮形成が含まれる。本発明が特に適する再内皮形成の例には、限定されるものではないが、血管形成、フィブリン塊の溶解または冠状動脈中の血栓の溶解もしくは機械的破壊の後の血管中の再内皮形成（または内皮細胞の再増殖）が含まれる。本発明は、火傷部位へ適用するためにならびに熱的に損傷された皮膚の組織および微小血管の修復のために、表皮組織がそこから収集されるドナー部位の再上皮形成に特に適している。本発明によれば、デヒドロエビアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体を投与することによって、再上皮形成または再内皮形成の速度が高められるかまたは促進される。図面の簡単な説明図１はマウスにおける創傷治癒に対するＤＨＥＡＳの効果を示す。図１は成熟成体マウス(▲)、老齢マウス（■）およびＤＨＥＡＳ処理した老齢マウス（●）の結果を示す。図２は％再上皮形成／部位／日で表す、ブタにおける角膜切除部位の閉鎖に対するＤＨＥＡＳの効果を示す。図２は対照(担体、■)、４ｍｇ／ｋｇ用量のＤＨＥＡＳ（●）および１２ｍｇ／ｋｇ用量のＤＨＥＡＳ（▲）の結果を示す。図３は角膜切除術−誘導創傷閉鎖の結果のグラフ図を示す。図３における結果は図２のものと同じである。発明の詳細な説明本発明は、それを必要とする対象において組織の再上皮形成または再内皮形成を促進させる医薬組成物を調製するための、本明細書中に記載するデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体またはその医薬上許容される塩の使用に関する。本発明が特に適する再上皮形成の例には、限定されるものではないが、（ａ）外科的創傷後の皮膚、（ｂ）機械的損傷、腐食性の薬剤または火傷によって引起こされた皮膚擦過傷、（ｃ）白内障手術または角膜移植後の角膜、（ｄ）感染症、非病理的病因または薬物療法後の（呼吸器系、胃腸系、尿生殖器系、乳房系、口腔系、眼組織、肝臓および腎臓の）粘膜上皮細胞、(ｅ)移植後の皮膚、ならびに (ｆ)急性管状組織壊死後の細尿管、の再上皮形成が含まれる。本発明が特に適する再内皮形成の例には、限定されるものではないが、血管形成、およびフィブリン塊の溶解または冠状動脈中の血栓の溶解もしくは機械的破壊の後の血管中の再内皮形成（または内皮細胞の再増殖）が含まれる。本発明によれば、再上皮形成または再内皮形成を必要とする患者に、好ましくは静脈内で、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体を投与することによって、再上皮形成または再内皮形成が完了するまでの時間が高められるかまたは促進される。ＤＨＥＡ誘導体の例には、限定されるものではないが、一般式Ｉ：［式中、ＸはＨまたはハロゲンであり；Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は独立して、=Ｏ、-ＯＨ、-ＳＨ、Ｈ、ハロゲン、医薬上許容されるエステル、医薬上許容されるチオエステル、医薬上許容されるエーテル、医薬上許容されるチオエーテル、医薬上許容される無機エステル、医薬上許容される単糖、二糖もしくはオリゴ糖、スピロオキシラン、スピロチラン、-ＯＳＯ₂Ｒ⁴または-ＯＰＯＲ⁴Ｒ⁵であり；Ｒ⁴およびＲ⁵は独立して、-ＯＨ、医薬上許容されるエステルまたは医薬上許容されるエーテルである］を有する化合物およびその医薬上許容される塩が含まれる。ＤＨＥＡ誘導体のさらなる例には、限定されるものではないが、一般式ＩＩおよびＩＩＩ：［式中、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸ 、Ｒ¹⁹およびＲ²⁴は独立して、Ｈ、-ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルコキシであり；Ｒ¹⁰はＨ、-ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルコキシまたはＯＳＯ₂Ｒ²⁵であり；Ｒ²⁰は、（１）Ｒ²¹が-Ｃ(Ｏ)ＯＲ²⁶である場合、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルコキシであり；または（２）Ｒ²¹がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルキルである場合、Ｈ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルキルであり；または（３）Ｒ²¹がＯＨである場合、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルケニル、Ｃ_1-10アルキニル、ホルミル、Ｃ_1-10アルカノイルまたはエポキシであり；あるいはＲ²⁰およびＲ²¹は一緒になって=Ｏとなり；Ｒ²²およびＲ²³は独立して、（１）Ｒ²¹がＨ、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたは-Ｃ(Ｏ)ＯＲ²⁶である場合、Ｈ、-ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルコキシであり；または（２）Ｒ²⁰およびＲ²¹が一緒になって=Ｏとなる場合、Ｈ、(Ｃ_1-10アルキル)_n アミノ、(Ｃ_1-10アルキル)_nアミノ-Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルコキシ、ヒドロキシ-Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルコキシ-Ｃ_1-10アルキル、(ハロゲン)_m-Ｃ_1-10 アルキル、Ｃ_1-10アルカノイル、ホルミル、Ｃ_1-10カルボアルコキシまたはＣ_1- ₁₀ アルカノイルオキシであり；あるいはＲ²²およびＲ²³は一緒になって=Ｏとなるか、またはそれらが結合する炭素と一緒になって０または１個の酸素原子を含む３-６員環を形成し；あるいはＲ²⁰およびＲ²²はそれらが結合する炭素と一緒になってエポキシド環を形成し ; Ｒ²⁵はＯＨ、医薬上許容されるエステルまたは医薬上許容されるエーテルであり；Ｒ²⁶はＨ、(ハロゲン)_m-Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルキルであり；ｎは０、１または２であって；およびｍは１、２または３であり；但し、（ａ）Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸ 、Ｒ¹⁹およびＲ²²がＨであってＲ¹⁶がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルコキシであってＲ²³がＨまたはハロゲンであってＲ²⁰およびＲ²¹が一緒になって= Ｏとなる場合、Ｒ¹⁰はＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルコキシまたはＯＳＯ₂Ｒ²⁵ではなく；および（ｂ）Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｒ¹⁹ およびＲ²²がＨであってＲ¹⁶がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルコキシであってＲ²³がＨまたはハロゲンであってＲ²⁰がＨであってＲ²¹がＨ、ＯＨまたはハロゲンである場合、Ｒ¹⁰はＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルコキシまたはＯＳＯ₂Ｒ²⁵ではない］を有する化合物およびそれらの医薬上許容される塩が含まれる。一般式Ｉによって表される化合物は多くの立体異性体で存在し、該式は種々の立体異性体を包含することを意図する。式Ｉで示される適当なＤＨＥＡ同種物の例には、（１）Ｒ²が=Ｏであり、Ｒ³およびＸが各々Ｈであって、Ｒ¹が=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（２）Ｒ²が＝Ｏであり、Ｒ³がＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹が=Ｏ、 -ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（３）Ｒ²が=Ｏであり、Ｒ³およびＸが各々Ｈであって、Ｒ¹が-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（４）Ｒ²が=Ｏであり、Ｒ³がＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹が-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（５）Ｒ²が=Ｏであり、ＸがＨであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（６）Ｒ²が=Ｏであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、= Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（７）Ｒ²が=Ｏであり、ＸがＨであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（８）Ｒ²が=Ｏであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、- ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（９）Ｒ²が-ＯＨであり、Ｒ³およびＸが各々Ｈであって、Ｒ¹が=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１０）Ｒ²が-ＯＨであり、Ｒ³がＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹が= Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１１）Ｒ²が-ＯＨであり、Ｒ³およびＸが各々Ｈであって、Ｒ¹が-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１２）Ｒ²が-ＯＨであり、Ｒ³がＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹が- ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１３）Ｒ²が-ＯＨであり、ＸがＨであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１４）Ｒ²が-ＯＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１５）Ｒ²が-ＯＨであり、ＸがＨであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１６）Ｒ²が-ＯＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１７）Ｒ²が-ＳＨであり、Ｒ³およびＸが各々Ｈであって、Ｒ¹が=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１８）Ｒ²が-ＳＨであり、Ｒ³がＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹が= Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（１９）Ｒ²が-ＳＨであり、Ｒ³およびＸが各々Ｈであって、Ｒ¹が-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（２０）Ｒ²が-ＳＨであり、Ｒ³がＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹が- ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（２１）Ｒ²が-ＳＨであり、ＸがＨであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である；（２２）Ｒ²が-ＳＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまてたは医薬上許容される塩である；（２３）Ｒ²が-ＳＨであり、ＸがＨであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（２４）Ｒ²が-ＳＨであり、Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹およびＲ³が独立して、-ＳＨ、その医薬上許容されるチオエステル、その医薬上許容されるチオエーテルまたは医薬上許容される塩である；（２５）ＸがＨであって、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、糖残基、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩であり、ここにＲ¹、Ｒ²およびＲ³のうちの少なくとも１個が糖残基である；（２６）Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、糖残基、その医薬上許容されるエステル、その医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩であり、ここにＲ¹、Ｒ²およびＲ³のうちの少なくとも１個が糖残基である；（２７）ＸがＨであって、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容される無機エステルまたは医薬上許容される塩であり、ここにＲ¹、Ｒ²およびＲ³のうちの少なくとも１個が無機エステルである；（２８）Ｘがハロゲンであって、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³が独立して、=Ｏ、-ＯＨ、その医薬上許容される無機エステルまたは医薬上許容される塩であり、ここにＲ¹、Ｒ²およびＲ³のうちの少なくとも１個が無機エステルである；化合物が含まれる。医薬上許容されるエステルまたはチオエステルには、限定されるものではないが、式-Ｏ０ＣＲまたは-ＳＯＣＲ（式中、Ｒはプロピオナート、エナンタート、シピオナート、スクシナート、デカノアートおよびフェニルプロピオナート・エステルのごとき、医薬上許容されるアルキル、アルケニル、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、スフィンゴシンまたは置換スフィンゴリン脂質基である）で示されるエステルまたはチオエステルが含まれる。医薬上許容されるエーテルまたはチオエーテルには、限定されるものではないが、式-ＯＲまたは-ＳＲ（式中、Ｒは前記定義に同じかまたはエノールであり、または-ＯＲは非置換もしくは置換スピロオキシランであり、または-ＳＲはスピロチアンである）で示されるエーテルまたはチオエーテルが含まれる。適当な糖残基には、限定されるものではないが、グルクロナートのごとき単糖、二糖およびオリゴ糖が含まれる。医薬上許容される無機エステルには、限定されるものではないが、式-ＯＳＯ₂ Ｒ⁴または-ＯＰＯＲ⁴Ｒ⁵（式中、Ｒ⁴およびＲ⁵は独立して、-ＯＨ、医薬上許容されるエステル、医薬上許容されるエーテルまたは医薬上許容される塩である）で示される無機エステルが含まれる。一般式ＩＩおよびＩＩＩで示される化合物は、出典明示して本明細書の一部とみなす米国特許第4,898,694号;第5,001,119号；第5,028,631号；および第5,175, 154号に記載されているごとく合成する。一般式ＩＩおよびＩＩＩによって表される化合物には多くの立体異性体が存在し、これらの式は種々の立体異性体を包含することを意図する。一般式ＩＩおよびＩＩＩの範囲に入る代表的な化合物の例には以下のものが含まれる：５α-アンドロスタン-１７-オン；１６α-フルオロ-５α-アンドロスタン-１７-オン；３β-メチル-５α-アンドロステン-１７-オン；１６α-フルオロ-５α-アンドロスタン-１７-オン；１７β-ブロモ-５-アンドロステン-１６-オン；１７β-フルオロ-３β-メチル-５-アンドロステン-１６-オン；１７α-フルオロ-５α-アンドロスタン-１６-オン；３β-ヒドロキシ-５-アンドロステン-１７-オン；１７α-メチル-５α-アンドロスタン-１６-オン；１６α-メチル-５-アンドロステン-１７-オン；３β，１６α-ジメチル-５-アンドロステン-１７-オン；３β，１７α-ジメチル-５-アンドロステン-１６-オン；１６α-ヒドロキシ-５-アンドロステン-１７-オン；１６α-フルオロ-１６β-メチル-５-アンドロステン-１７-オン；１６α-メチル-５α-アンドロスタン-１７-オン；１６-ジメチルアミノメチル-５α-アンドロスタン-１７-オン；１６β-メトキシ-５-アンドロステン-１７-オン；１６α-フルオロメチル-５-アンドロステン-１７-オン；１６-メチレン-５-アンドロステン-１７-オン；１６-シクロプロピル-５α-アンドロスタン-１７-オン；１６-シクロブチル-５-アンドロステン-１７-オン；１６-ヒドロキシメチレン-５-アンドロステン-１７-オン；３α-ブロモ-１６α-メトキシ-５-アンドロステン-１７-オン；１６-オキシメチレン-５-アンドロステン-１７-オン；３β-メチル-１６ξ-トリフルオロメチル-５α-アンドロスタン-１７- オン；１６-カルボメトキシ-５-アンドロステン-１７-オン；３β-メチル-１６β-メトキシ-５α-アンドロスタン-１７-オン；３β-ヒドロキシ-１６α-ジメチルアミノ-５-アンドロステン-１７-オン；１７α-メチル-５-アンドロステン-１７β-オール；１７α-エチニル-５α-アンドロスタン-１７β-オール；１７β-ホルミル-５α-アンドロスタン-１７β-オール；２０,２１-エポキシ-５α-プレグナン-１７α-オール；３β-ヒドロキシ-２０,２１-エポキシ-５α-プレグナン-１７α-オール；１６α-フルオロ-１７α-エテニル-５-アンドロステン-１７β-オール；１６α-ヒドロキシ-５-アンドロステン-１７α-オール；１６α-メチル-５α-アンドロスタン-１７α-オール；１６α-メチル-１６β-フルオロ-５α-アンドロスタン-１７α-オール；１６α-メチル-１６β-フルオロ-３-ヒドロキシ-５-アンドロステン-１７α-オール；３β,１６β-ジメチル-５-アンドロステン-１７β-オール；３β,１６,１６-トリメチル-５-アンドロステン-１７β-オール；３β,１６,１６-トリメチル-５-アンドロステン-１７-オン；３β-ヒドロキシ-４α-メチル-５-アンドロステン-１７α-オール；３β-ヒドロキシ-４α-メチル-５-アンドロステン-１７-オン；３α-ヒドロキシ-１α-メチル-５-アンドロステン-１７-オン；３α-エトキシ-５α-アンドロスタン-１７β-オール；５α-プレグナン-２０-オン；３β-メチル-５α-プレグナン-２０-オン；１６ａ-メチル-５-プレグネン-２０-オン；１６α-メチル-３β-ヒドロキシ-５-プレグネン-２０-オン；１７α-フルオロ-５-プレグネン-２０-オン；２１-フルオロ-５α-プレグナン-２０-オン；１７α-メチル-５-プレグネン-２０-オン；２０-アセトキシ-シス-１７(２０)-５α-プレグネン；３α-メチル-１６,１７-エポキシ-５-プレグネン-２０-オン。最初の検討によって、ＤＨＥＡまたはＤＨＥＡＳの投与により、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）に対するＴ-細胞応答が回復されることが立証された。ＰＤＧＦおよび種々の他の増殖因子が創傷治癒、血管形成および他の修復プロセスに関与していることは知られている。以下に詳記する実験においては、ＤＨＥＡＳを老齢マウスに投与することにより背面尾部皮膚の全厚(full thickness)裂傷後の創傷閉鎖の速度が高められることが発見された。以下に詳記するさらなる実験においては、ＤＨＥＡＳまたはＤＨＥＡをマウスに投与することにより背面胴部皮膚上の熱傷火傷後の再上皮形成プロセスが高められることが発見された。以下に詳記する最後の実験においては、再上皮形成プロセスの向上または促進が部分厚(partial thickness)創傷治癒のブタ・モデルにおいて示された。上皮または内皮表面の生理学的または機械的な崩壊を引起こす事象後、可能な限り早く生理学的に許容し得る担体中の治療有効量のＤＨＥＡ誘導体を患者に投与することにより、再上皮形成または再内皮形成の促進または向上が生じることが発見された。ＤＨＥＡ誘導体は事象の４〜１２時間、より好ましくは４〜６時間以内に投与するのが好ましい。再上皮形成または再内皮形成の促進により、前に注記したごとく、生存するために重要であるより早期の創傷閉鎖を生じる。ＤＨＥＡ誘導体は該事象の４〜６時間以内に投与するのが好ましいが、ＤＨＥＡ誘導体はより遅く投与することもでき、その場合でもなお再上皮形成または再内皮形成を高めるかまたは促進することができる。いずれの創傷の治癒の初期相でも、無菌の生組織と血流の外部環境との間のバリアとして作用する新たな表面（上皮または内皮）の創生が必要である。再増殖のプロセスは、上皮または内皮を形成する細胞の移動および増殖という２つの他のプロセスの結果である。治療有効量のＤＨＥＡ誘導体の投与により、再増殖のプロセスが高められるかまたは促進されて、創傷閉鎖までの合計時間が短縮される。医薬担体との緊密な混合物中に有効成分としてＤＨＥＡ誘導体を含有する医薬組成物は、慣用的な医薬組成化技術に従って調製することができる。例えば、Re mington's Pharmaceutical Sciences，17th Ed.(1985，Mack Publishing Co.，E aston，PA)を参照されたし。担体は、投与、例えば静脈内投与または経口投与、に望まれる調製物の形態に依存して広範な種々の形態を採り得る。該組成物を経口投与量形態に調製することにおいては、経口液体調製物（例えば、懸濁剤、エリクシル剤および液剤のごとき）の場合には、例えば、水、グリコール、油剤、アルコール、賦香剤、保存剤、着色剤などのごときいずれの通常の医薬媒体；または経口固形調製物（例えば、散剤、カプセル剤および錠剤のごとき）の場合には、デンプン、砂糖、希釈剤、顆粒化剤、湿潤剤、結合剤、崩壊剤などのごとき担体を用い得る。望むなら、錠剤は標準的技術によって糖衣または腸溶性コートとし得る。担体には、例えば溶解性を助けるためかまたは保存目的で他の成分を含ませることもできるが、滅菌水を含み得る。注射溶液剤または懸濁剤も調製することができ、その場合においては適当な液体担体、懸濁化剤などを用いることができる。有効成分は静脈内注射によって投与するのが好ましい。ＤＨＥＡ誘導体の用量は、よく知られている医薬上許容し得る原則に基づき、例えば、２-５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは２-２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５-２００ｍｇ／ｋｇ、および最も好ましくは５-５０ｍｇ／ｋｇのＤＨＥＡＳ当量をデリバリーする。特に好ましいＤＨＥＡＳ当量は５-４０ｍｇ／ｋｇである。一般的に、このレベルのＤＨＥＡＳ用量またはＤＨＥＡＳ当量をデリバリーするために必要なＤＨＥＡ誘導体の用量は１−１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは２-８００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２-５００ｍｇ／ｋｇである。ＤＨＥＡ誘導体の用量は慣用的な方法を用いて容易に決定することができ、一般的にはＤＨＥＡＳについて特定された用量の範囲内に存在するであろう。非保護化合物、すなわちヒト・スルフォトランスフェラーゼまたはスルファターゼによって硫酸化され得るもの、に関しては、特にスルファターゼが組織傷害の部位で活性でない場合、過剰用量を投与して十分な活性因子が投与されることを保証しておくことが好ましい。患者は、組織が再上皮形成または再内皮形成するまで、組織の再上皮形成または再内皮形成を要する事象の後可能な限り迅速にＤＨＥＡ誘導体で治療する。該治療は、一般的には４５日、好ましくは２８日、最も好ましくは７-１４日を超えない。本発明を以下の実施例に参照して記載するが、これらは説明様式によって供されており、如何なる場合においても本発明を限定することを意図するものではない。当該技術分野でよく知られている標準的技術または以下に特記する技術を用いた。実施例１ＤＨＥＡＳ処理はin vivoで老齢マウスにおける創傷治癒を高めるＷＯ93/21711号は、ＩＬ-６がＰＤＧＦに対する細胞応答に影響すること、およびＤＨＥＡＳ処理によりＰＤＧＦに対するＴ-細胞応答が回復されることを立証している。ＰＤＧＦおよび種々の他の増殖因子は創傷治癒、血管形成および他の修復プロセスに関与しているため、この実験を行ってＤＨＥＡＳ処理が創傷治癒を高め得るかを判定した。成熟成体マウスの群(ほぼ６月齢、▲)、老齢マウスの対照群(２年齢を超える、■)、および経口補充ＤＨＥＡ-Ｓにおいて維持したもう１つの老齢マウス群( ●)を、背面尾部皮膚の全厚裂傷後の創傷治癒の相対速度について比較した。全マウスを麻酔し、尾の基部から２ｃｍの正確な裂傷を施した。各マウスの切部は尾部を横切るほぼ３ｍｍ長であった。２４時間（１日目）に開始して１８日間毎日続け、創傷部位の治癒についてマウスを検査して数値評価を得た。成熟成体マウスおよびＤＨＥＡＳ-処理老齢マウスの双方の創傷は、それらの創傷の安定した治癒を示した。これらの創傷は傷害４日以内に完全に閉鎖して痂皮化した。しかしながら、非処理老齢マウスは遥かに遅い治癒の速度を示し、創傷閉鎖および痂皮化が発生するまで約１４日を要した。これらの結果を図１に示し、図中においては以下の等級を用いた：０＝新鮮裂傷１＝完全開口創傷２＝周縁から閉鎖している（中間点）３＝周縁から閉鎖している（中間点を超えて）４＝完全に閉鎖した創傷、腫化している５＝完全に痂皮化した創傷、腫化している６＝わずかに腫化している７＝腫化していないこの実施例により、ＤＨＥＡＳを投与することによって老齢動物における創傷治癒の速度が促進されることが立証された。ＤＨＥＡおよび前記した化合物についても同様の結果が得られた。実施例２マウスにおける火傷創傷再上皮形成の実験火傷創傷の再上皮形成は、熱的傷害のげっ歯類モデルにおいて最初に実験した。麻酔した６週齢Ｂａｌｂ/ｃ雌性マウスの背面胴部皮膚を剃毛し、脱毛クリームで裸にした。２４時間後に、各マウスを麻酔して７１℃にて５秒間暴露の浸漬、熱湯火傷を施した。火傷４時間後に、無作為にマウスを選抜し、別の１２ｍｇ／ｋｇのＤＨＥＡＳ ivまたはプラセボを給受させた。薬剤またはプラセボは毎日１回、６日間投与した。若齢マウスを用いるこれらの条件下においては、生存率は１００％であって、治療介在していない傷害３日後の火傷の深さは真皮第二度火傷であった。２または３匹のマウス群を火傷後３、５および７日目に各処理群から安楽死させ、傷害部位の皮膚を切り取った。組織を完全に平板化し、標識し、次いで１０％緩衝化ホルマリンに浸漬した。一週間固定した後に、その組織をパラフィン中に包埋した。中線を横切って伸長し双方の火傷周縁を含む５ｍｍ幅の３本の完全なストリップを、該切り出して固定した組織から調製した。切片は５μｍ厚で切り出し、再上皮形成した火傷創傷の直線距離（％ＲＥ）を顕微鏡で測定するためにＨおよびＥで染色した。マウスに投与して、部分厚火傷創傷は滅菌包帯で保護しない場合には、再上皮形成の開始において２-３日の遅延を示し得た。プラセボ処理マウスの中では、再上皮形成は＋３日目では１５％直線閉鎖(ｎ＝９)、５日目では３５％閉鎖（ｎ＝９)、７日目でもわずか６５％閉鎖（ｎ＝９）に平均化された。それに対して、ＤＨＥＡＳ処理により再上皮形成プロセスが促進された。本発明者らは、＋３日目では４８％直線閉鎖(ｎ＝９)、および＋５日目では９４％直線閉鎖の平均を観察した。これらの創傷は５日目に閉鎖すると考えられたため、＋７日目のマウスの熱的傷害背面胴部皮膚から取出した火傷も完全に閉鎖されたことには驚かなかった。ＤＨＥＡについても同様の結果が得られた。前記の化合物についても同様の結果が得られた。さらなる実験により、熱的傷害の後にＩＧＦ-ＩおよびＩＧＦ-ＩＩ遺伝子転写が火傷後早期に皮膚中でリプレスされることが確認された。しかしながら、傷害後のＤＨＥＡＳの治療投薬によって、皮膚組織におけるＩＧＦ遺伝子の火傷誘導リプレッションが遮断された。部分厚火傷創傷の再上皮形成をげっ歯類モデルで実験し得ることは明らかである。より重要なことには、該結果は、ＤＨＥＡ／ＤＨＥＡＳの静脈内投与によって創傷の閉鎖が完了するまでの時間が短縮されることを示した。実施例３ブタの部分厚創傷閉鎖のモデルにおける再上皮形成に対するＤＨＥＡＳの効果の実験本実験の目的は、角膜切除によって誘導した部分厚創傷治癒のブタ・モデルにおける２種の用量レベル（４および１２ｍｇ／ｋｇ）のＤＨＥＡＳの効果を判定することにある。該方法は、火傷部位に適用するためにドナー移植部位から角膜切除術によって上皮組織を採取し得る臨床状況を模倣したであろう。試験物での処理の効率は、担体での処理と比較した、再上皮形成の程度（％ＲＥ）を測定することによって評価した。角膜切除術創傷後の再上皮形成の評価に選択した時点は文献（４６、４７）で用いられたものに基づいた。典型的には、創傷治癒のこの動物モデルを用いて、創傷の全身的処理よりもむしろ局所的処理を評価した。麻酔下の切除生検によって種々の時間に単一のブタから複数の創傷をしばしば採取した。このモデルにおける非処理（空気-暴露）角膜切除術創傷の完全な再上皮形成（％ＲＥ＝１００）には６-７日かかり得た（４６、４７）が、閉鎖包帯でカバーすることにより完全な再上皮形成に要する時間を５日まで短縮し得た(４８)。典型的に創傷治癒（プロットした％ＲＥ）は、線形速度に適合しない再上皮形成を生じた。従って、ＨＴ₅₀値を％ＲＥ-対-時間のプロットから推定した(４６、４７)。非処理放置（対照）か、閉鎖包帯でカバーしたか、またはペトロラタムで処理した角膜切除術創傷は、各々、４.３日、２.６日、または〜５日のＨＴ₅₀値で関連付けられていた(４６)。これは、閉鎖包帯およびペトロラタムについて、各々、＋４０％および−１６％のＲＨＲ値に相当した(４６)。Test Facilityにおいては、角膜切除術モデルは対照（非処理）創傷について４.０日、および閉鎖包帯でカバーした創傷について３.１日のＨＴ₅₀値が以前に得ている。Ａ．実験デザイン１．概観実験は群当たり動物６匹の３群よりなる。この実験における動物には、用量を投与し、部分厚角膜切除術を受けるために頚静脈中に留置カテーテルを備えさせた。処理は、特定の時間における担体またはＤＨＥＡＳの静脈内投与よりなる。アッセイ用に採血し、血清を加工した。つづいて、再上皮形成を評価するためにすべての動物を安楽死させ、該創傷を採取した。２．実験デザイン明細書の第１表は実験デザインを要約している。３．弁明この実験は、ブタにおける創傷治癒のモデルを用いるためにデザインして、試験物の潜在的効率を評価した。この実験で用いた動物の数は、結果の評価に許容し得る最小数と考えられた。この生成物は、その予想される使用がヒトにおいてであろうため、in vivoモデルを用いたその性能の評価が必要であった。ブタは、その皮膚とヒト皮膚とが類似しているため、創傷治癒実験について許容されたモデルである。該処理様式は、ヒトにおいて予想される投与を刺激する。Ｂ．材料および方法１．動物受入れ：２０匹の雌性ヨークシャー（Yorkshire）ブタを、Earl M.Parsons an d Sons,Inc.社（Hadley,Massachusetts）から1９９５年１２月２７日に受入れた。受入れの際に、ブタは疾病または傷害の臨床的徴候について検査し、１９.２〜２４．３ｋｇと計量された。検疫：ブタは７日間検疫した。この期間、ブタは檻の中で飼育し、実験に用いる環境条件に順化させた。該動物は、Marek Piechowiakによってそれらの健康状態を評価する目視検査の後に、１９９６年１月２日に検疫から開放した。順化：検疫の間、全ての実験動物を外科的工程の前の保護アルミニウムジャケットの装着に順化させ、接近したヒトの接触にそれらが順化するように毎日取り扱った。同定／無作為化：各動物は、耳タグで示されるユニーク番号で同定した。カラーコード檻ラベルは、実験番号、群番号、性別、種、個々の動物の同定番号および実験指揮者で各檻を同定した。該動物を、コンピュータ-発生乱数選抜によって３群に無作為化した。２．試験物受入れ：１９９５年１２月１９日に、各々、２００ｍｇの試験物、ＤＨＥＳＡＳ−ＩＶを含有する９０本のバイアルを、Pharmaco-LSR社(Austin,Texas 78704) から受入れた。試験物および対照物は白色の結晶状粉末と記載されており、Test Facilityによって２２±５℃にて保存された。Test Facilityによって供給された希釈剤、注射用滅菌水(SWI)、USPは透明液体と記載されており、Test Facilit yによって２２±5℃にて保存された。処方：静脈内用量処方は、以下の手法に従い、滅菌器具および技術を用いて１０ｍｇ／ｍｌの濃度で毎日調製した。望む数のバイアルを復元するのに十分な注射用滅菌水（SWI）の供給物は、ウォーターバス中にて３４-４０℃まで温めた。層流フード下にて、２０ｍｌのＳＷＩを必要な担体または試験物の各バイアルに無菌的に移した。各復元バイアルの内容物を穏やかに振とうすることによって混合させた。処方化試験材料は使用前は常温にて保存し、調製して２時間以内に使用した。３．外科的工程-手術前麻酔：最初に、粘膜内投与するケタミンＨＣｌ(２５ｍｇ／ｋｇ)、アトロピン (０．０４ｍｇ／ｋｇ)、ブトルファノール（０.５５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（２ｍｇ／ｋｇ）の混合物でブタを麻酔した。該ブタを挿管し、容量-調節人工呼吸装置を介して配給されるイソフルラン吸入麻酔で麻酔状態に維持した。要すれば、血管内にアクセスできるように末梢静脈中に経皮カテーテルを設置した。示した場合には、適当な麻酔管理用の薬剤を投与用に入手できた。抗生物質投与：プロカイン／ゼンザチンペニシリンＧ（１ｍｌ／４.５ｋｇ、ＩＭ）を手術前に投与した。投与の用量、経路、時間および部位を記録した。手術準備：各動物につき、胴体部、背部、ならびに頚部カテーテルの頚動脈カテーテル法および外面化の部位の全毛を留めた。これらの部位は、プロビドン- ヨウ素洗浄溶液と７０％イソプロピルアルコールの３回の相互の洗浄で清潔にし、プロビドン-ヨウ素溶液の最後の適用は放置して乾燥させた。操作部位は、無菌的な手術用に適当に覆いをかけた。手術工程：手術技術の詳細は、Surgical Techniques Memorandum（補遺Ａ）に記録されている。創傷の創生：角膜切除術：窒素で動力を供給するダーマトームを用いて背部脊椎傍および胸部の皮膚で、動物の各側にほぼ５０×５０ｃ０.５ｍｍの大きさの２個の方形創傷（動物当たり４個のブレード傷）を作成した。カテーテル法：頚動脈を外科的に単離し、カテーテルを入れた。カテーテルは皮下的に通し、ブタの背部中線上に外面化させた。カテーテルを設置した後に、切開部を縫合した。カテーテルおよび創傷はブタに装着したアルミニウムジャケットによって保護した。４．外科的工程-手術後術後無痛法：術後無痛法用の抜管の前にブプレノルフィン（０．０３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）およびアセチルプロマジン（０．７５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）を各々ブタに投与し、麻酔からの回復を促進させた。次いで、ブプレノルフィンをさらに２日間投与した。実験指揮者またはTest Facilityの獣医師によって適当に求められた場合には、さらなる無痛薬剤を投与した。すべての無痛法用の投与の用量、経路および部位は、実験ファイルに記録した。切開部位：外科的切開は、感染症、炎症および一般的な一体性(integrity)について、毎日２回観察した。カテーテルの維持：頚部カテーテルは適当に充填し"ロックした"。すべての工程は無菌技術に厳守する。カテーテルを維持するために必要な場合はさらなる工程を行った。包帯の維持：保護アルミニウム・ジャケットを各動物に装着させて、包帯の崩れを防いだ。アルミニウム・ジャケットおよび包帯は毎日２回チェックし、要すれば取り替えるか、または調節した。Tegaderm^TMは毎日または必要により取り換えた。５．処理担体またはＤＨＥＡＳでの処理は、表１中に特定した時間に（頚動脈中の留置カテーテルを介した）静脈内かん流によって臨床等級かん流ポンプを用いて１０分間にわたって投与した。投与容量は最も最近の体重に基づいて算出し、およそ最も近い０.１ｍｌとした。試験物質の投与は各実験動物について記録し；容量、時間および部位を記録した。６．創傷生検すべての動物を麻酔し、すべての創傷を切取って平面位置にピン留めし、固定用の１０％中性緩衝化ホルマリンに浸漬した。ほぼ２４時間後に、該生検をピンから外し１０％中性緩衝化ホルマリンの適当に標識した容器に移した。固定後に、各創傷の中央から５ｍｍのストリップを組織病理学用に切り整えて加工した。特別の組織学：すべての動物について、生検採取創傷を全体として薄片化し、大きな顕微鏡スライドガラス上に載せた。７．病理学安楽死：安楽死（要すればケタミンおよびキシラジンでの鎮静化、要すればつづくナトリウムペントバルビタール、２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶでの麻酔および安楽死、および要すれば全採血）は、認められたAmerican Veterinary Medical Asso ciationのガイドライン[Report of the American Veterjnary Medical Associat ion（AVMA）panel on Euthanasja，Journal of the American Veterinary Medic al Association，202:229-249(1993)]に従って行った。８．データ分析創傷治癒の評価：角膜切除術創傷は別々に評価した。各創傷の組織病理学スライドを再検討し、各創傷の合計直線距離および移動上皮細胞によってカバーされた直線距離を測定した。以下の算出を行った：各角膜切除術についての％ＲＥ_K＝再度上皮形成された直線距離×100 ％再上皮形成合計創傷の線形距離各時点における各処理％ＲＥ_KT＝ Σ％ＲＥ_K についての％再上皮形成：創傷の数創傷治癒データを表２に示す。ブタにおける角膜切除術部位の閉鎖に対するＤＨＥＡＳの効果を図２および３に示す。これらの図は、対照(担体、■)、４ｍｇ／ｋｇ用量のＤＨＥＡＳ(●)および１２ｍｇ／ｋｇ用量のＤＨＥＡＳ(▲)についての結果を示す。９．結果３、５または７日目の無作為化スケジュールに従ってすべての動物を安楽死させた。角膜切除術創傷および火傷創傷の双方を、再上皮形成の組織学的評価用に切取して調製した。各角膜切除術の直線長および各々の再上皮形成の直線長の分析を用いて、各時間間隔において再上皮形成された創傷のパーセンテージを算出した。次いで、線形回帰分析を用いて、プラセボ-対-試験物処理群における創傷の１００％再上皮形成までの平均時間を導き出した。この実験の結果を表２に供する。プラセボ処理群における閉鎖は６.９日の閉鎖までの平均時間で、直線であった。１２ｍｇ／ｋｇ用量のＤＨＥＡＳについては、５日目に創傷は９４％閉鎖し、回帰分析によって５.３日の閉鎖までの平均時間が算定された(ｐ＜０.０５対-プラセボ)。４ｍｇ／ｋｇ用量のＤＨＥＡＳにおけるブタの創傷は５日目までに８６％閉鎖し、これは５.８日の完全閉鎖までの平均時間を示した。この実験から引出される結論は、ブタ・モデルにおける角膜切除術創傷の閉鎖までの平均時間を短縮されることに対して、ＤＨＥＡＳＩＶが有意な生物学的効果を有していたということである。プラセボについての閉鎖の予想平均時間は、完全まで７日付近という、組織測定と異ならなかった。ＤＨＥＡＳの投与により、角膜切除術創傷の閉鎖が完了するまでの時間がほぼ２日間明らかに短縮された。ＤＨＥＡおよび前記した化合物についても同様の結果が得られた。本発明の方法および組成物は種々の態様の形態で取込まれ得、そのうちの数種のみしか本明細書中には開示していないことは理解されるであろう。他の態様が存在し、それらも本発明の趣旨から逸脱しないことは当業者であれば明らかであろう。従って、記載した具体例は説明目的のものであって、限定的に解釈されてはならない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 43/00 １１１Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ // Ａ６１Ｐ 27/02 27/02 (31)優先権主張番号０８／９０１，０８５ (32)優先日平成９年７月28日(1997．7．28) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims

【特許請求の範囲】１．それを必要とする対象における組織の再上皮形成または再内皮形成を促進させる医薬組成物を調製するための、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）誘導体またはその医薬上許容される塩の使用。２．該ＤＨＥＡ誘導体が、一般式Ｉ：［式中、ＸはＨまたはハロゲンであり；Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は独立して、=Ｏ、-ＯＨ、-ＳＨ、Ｈ、ハロゲン、医薬上許容されるエステル、医薬上許容されるチオエステル、医薬上許容されるエーテル、医薬上許容されるチオエーテル、医薬上許容される無機エステル、医薬上許容される単糖、二糖もしくはオリゴ糖、スピロオキシラン、スピロチラン、 -ＯＳＯ₂Ｒ⁴または-ＯＰＯＲ⁴Ｒ⁵であり；Ｒ⁴およびＲ⁵は独立して、-ＯＨ、医薬上許容されるエステルまたは医薬上許容されるエーテルである］を有する化合物およびその医薬上許容される塩である請求項１記載の使用。３．Ｒ²が＝Ｏである請求項２記載の使用。４．該ＤＨＥＡ誘導体がデヒドロエピアンドロステロン硫酸またはその医薬上許容される塩である請求項３記載の使用。５．該ＤＨＥＡ誘導体がデヒドロエピアンドロステロンである請求項３記載の使用。６．Ｒ²が−ＯＨ、−ＳＨ、医薬上許容されるエステル、医薬上許容されるエーテル、医薬上許容されるチオエステルまたは医薬上許容されるチオエーテルである請求項２記載の使用。７．該ＤＨＥＡ誘導体が一般式ＩＩまたはＩＩＩ：［式中、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸ 、Ｒ¹⁹およびＲ²⁴は独立して、Ｈ、-ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルコキシであり；Ｒ¹⁰はＨ、-ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルコキシまたはＯＳＯ₂Ｒ²⁵であり；Ｒ²⁰は、（１）Ｒ²¹が-Ｃ(Ｏ)ＯＲ²⁶である場合、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルコキシであり；または（２）Ｒ²¹がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルキルである場合、Ｈ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルキルであり；または（３）Ｒ²¹がＯＨである場合、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルケニル、Ｃ_1-10アルキニル、ホルミル、Ｃ_1-10アルカノイルまたはエポキシであり；あるいはＲ²⁰およびＲ²¹は一緒になって=Ｏとなり；Ｒ²²およびＲ²³は独立して、（１）Ｒ²¹がＨ、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたは-Ｃ(Ｏ)ＯＲ²⁶である場合、Ｈ、-ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルコキシであり；または（２）Ｒ²⁰およびＲ²¹が一緒になって=Ｏとなる場合、Ｈ、(Ｃ_1-10アルキル)_n アミノ、(Ｃ_1-10アルキル)_nアミノ-Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルコキシ、ヒドロキシ-Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルコキシ-Ｃ_1-10アルキル、(ハロゲン)_m-Ｃ_1-10 アルキル、Ｃ_1-10アルカノイル、ホルミル、Ｃ_1-10カルボアルコキシまたはＣ_1- ₁₀ アルカノイルオキシであり；あるいはＲ²²およびＲ²³は一緒になって=Ｏとなるか、またはそれらが結合する炭素と一緒になって０または１個の酸素原子を含む３-６員環を形成し；あるいはＲ²⁰およびＲ²²はそれらが結合する炭素と一緒になってエポキシド環を形成し ; Ｒ²⁵はＯＨ、医薬上許容されるエステルまたは医薬上許容されるエーテルであり；Ｒ²⁶はＨ、(ハロゲン)_m-Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルキルであり；ｎは０、１または２であって；およびｍは１、２または３であり；但し、（ａ）Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸ 、Ｒ¹⁹およびＲ²²がＨであってＲ¹⁶がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルコキシであってＲ²³がＨまたはハロゲンであってＲ²⁰およびＲ²¹が一緒になって= Ｏとなる場合、Ｒ¹⁰はＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルコキシまたはＯＳＯ₂Ｒ²⁵ではなく；および（ｂ）Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸、Ｒ¹⁹ およびＲ²²がＨであってＲ¹⁶がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルコキシであってＲ²³がＨまたはハロゲンであってＲ²⁰がＨであってＲ²¹がＨ、ＯＨまたはハロゲンである場合、Ｒ¹⁰はＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルコキシまたはＯＳＯ₂Ｒ²⁵ではない］を有する化合物およびそれらの医薬上許容される塩である請求項１記載の使用。８．Ｒ²⁰がＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキルまたはＣ_1-10アルコキシであって、Ｒ²¹が−Ｃ(Ｏ)ＯＲ²⁴である請求項７記載の使用。９．Ｒ²⁰がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルキルであって、Ｒ²¹がＨ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ_1-10アルキルである請求項７記載の使用。１０．Ｒ²⁰がＨ、ハロゲン、Ｃ_1-10アルキル、Ｃ_1-10アルケニル、Ｃ_1-10アルキニル、ホルミル、Ｃ_1-10アルカノイルまたはエポキシであって、Ｒ²¹がＯＨである請求項７記載の使用。１１．Ｒ²⁰およびＲ²¹が一緒になって＝Ｏとなる請求項７記載の使用。１２．該化合物を１−１０００ｍｇ／ｋｇの量で投与する前記請求項いずれか１項に記載の使用。１３．該化合物を２−５００ｍｇ／ｋｇの量で投与する前記請求項いずれか１項に記載の使用。１４．該化合物を２−２００ｍｇ／ｋｇの量で投与する前記請求項いずれか１項に記載の使用。１５．該化合物を２−５００ｍｇ／ｋｇのＤＨＥＡＳ当量で投与する請求項１ −１１いずれか１項に記載の使用。１６．該化合物を２−２００ｍｇ／ｋｇのＤＨＥＡＳ当量で投与する請求項１ −１１または１５いずれか１項に記載の使用。１７．該化合物を５−２００ｍｇ／ｋｇのＤＨＥＡＳ当量で投与する請求項１ −１１、１５または１６いずれか１項に記載の使用。１８．該化合物を５−５０ｍｇ／ｋｇのＤＨＥＡＳ当量で投与する請求項１− １１または１５−１７いずれか１項に記載の使用。１９．該化合物を５−４０ｍｇ／ｋｇのＤＨＥＡＳ当量で投与することを特徴とする請求項１−１１または１５−１８いずれか１項に記載の方法。２０．該ＤＨＥＡ誘導体を静脈内投与することを特徴とする前記請求項いずれか１項に記載の方法。２１．該化合物を単一または複数の用量で投与することを特徴とする前記請求項いずれか１項に記載の方法。２２．上皮または内皮の表面の生理学的または機械的な崩壊を引起こす事象の４−１２時間以内に該化合物を投与することを特徴とする前記請求項いずれか１項に記載の方法。２３．上皮または内皮の表面の生理学的または機械的な崩壊を引起こす事象の４−６時間以内に該化合物を投与することを特徴とする前記請求項いずれか１項に記載の方法。