JP2002511388A - ヒトｇタンパク質共役受容体（ｇｐｒ２５） - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 GPR25ポリペプチドおよびポリヌクレオチド、ならびにかかるポリペプチドを組換え技術により生産する方法が開示される。また、治療におけるGPR25ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法、ならびにそのための診断アッセイも開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野 本発明は、新たに同定されたポリペプチド、このポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチド、前記のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの治療および該治
療に有用であると思われるアゴニスト、アンタゴニストおよび／またはインヒビ
ターであり得る化合物の同定における使用、並びに前記のポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドの生産方法に関する。

【０００２】発明の背景 薬物探索プロセスには目下根本的な大変化が生じている。というのは、それが
「機能性遺伝子科学」(functional genomics)、すなわちハイスループット（高
効率）のゲノムまたは遺伝子ベースの生物学に及んでいるからである。このアプ
ローチは「ポジショナルクローニング」に基づいた比較的初期のアプローチに急
速に取って代わりつつある。表現型、つまり生物学的機能または遺伝病、が同定
され、続いてその遺伝子地図の位置を手がかりとして病因遺伝子が突き止められ
るだろう。

【０００３】 機能性遺伝子科学は、現在入手できる多くの分子生物学データベースから興味
のもてそうな遺伝子配列を同定するための生物情報科学(bioinformatics)の様々
なツールに大きく依存している。依然として、まだ未解明の遺伝子およびその関
連ポリペプチド／タンパク質を薬物探索の標的として同定し特性づける必要性が
存在している。

【０００４】 医学的に重要な生物学的プロセスの多くが、Ｇタンパク質を含めたシグナル伝
達経路に関与しているタンパク質および／または第二メッセンジャー（例えば、
ｃＡＭＰ）により媒介されることはよく知られている (Lefkowitz, Nature, 199
1, 351:353-354) 。ここでは、これらのタンパク質はＧタンパク質を含む経路に
関与しているタンパク質つまりＰＰＧタンパク質と称される。こうしたタンパク
質の例として、アドレナリン作動薬やドーパミンの受容体(Kobilka, B.K.ら, Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84:46-50; Kobilka, B.K.ら, Science, 1987
, 238:650-656; Bunzow, J.R.ら, Nature, 1988, 336:783-787)、Ｇタンパク質
それ自体、エフェクタータンパク質（例：ホスホリパーゼＣ、アデニルシクラー
ゼ、ホスホジエステラーゼ）、およびアクチュエータータンパク質（例：プロテ
インキナーゼＡ、プロテインキナーゼＣ）(Simon, M.I.ら, Science, 1991, 252
:802-8) の受容体のようなＧＰＣ受容体を挙げることができる。

【０００５】 例えば、シグナル伝達の一つのタイプでは、ホルモンの結合の結果として細胞
内で酵素アデニル酸シクラーゼが活性化される。この酵素のホルモンによる活性
化はヌクレオチドＧＴＰの存在に依存し、このＧＴＰもホルモンの結合に影響を
及ぼす。Ｇタンパク質はホルモン受容体をアデニル酸シクラーゼと結びつけてい
る。ホルモン受容体により活性化されると、Ｇタンパク質は結合していたＧＤＰ
をＧＴＰと交換することが見いだされた。その後、ＧＴＰ担持形態が活性化され
たアデニル酸シクラーゼと結合する。ＧＴＰがＧＤＰへ加水分解されると（この
加水分解はＧタンパク質自体により触媒される）、Ｇタンパク質はその不活性な
基底形態へと戻る。こうして、Ｇタンパク質は二重の役割を果たしており、すな
わち、受容体からのシグナルをエフェクターに中継する中間体として、さらにシ
グナルの持続時間を制御する時計として機能している。

【０００６】 Ｇタンパク質共役受容体の膜タンパク質遺伝子スーパーファミリーは、７つの
推定上の膜貫通ドメインを有すると特性付けられた。これらのドメインは細胞外
または細胞質ループにより接続された膜貫通αヘリックスに相当すると考えられ
る。Ｇタンパク質共役受容体には、ホルモン、ウイルス、増殖因子、神経の受容
体などの多くの生物学的に活性な受容体が含まれる。

【０００７】 Ｇタンパク質共役受容体（７ＴＭ受容体としても知られる）は、少なくとも８
つの異なる親水性ループをつなぐ、約２０〜３０個のアミノ酸からなる７つの保
存された疎水性領域を含むと特性付けられてきた。Ｇタンパク質共役受容体のフ
ァミリーには、精神疾患および神経疾患の治療に用いられる神経弛緩薬と結合す
るドーパミン受容体が含まれる。このファミリーに含まれるメンバーのその他の
例としては、カルシトニン、アドレナリン、エンドセリン、ｃＡＭＰ、アデノシ
ン、ムスカリン、アセチルコリン、セロトニン、ヒスタミン、トロンビン、キニ
ン、卵胞刺激ホルモン、オプシン、内皮細胞分化遺伝子−１、ロドプシン、にお
い物質、サイトメガロウイルスの受容体が挙げられるが、これらに限らない。

【０００８】 大部分のＧタンパク質共役受容体は、機能性タンパク質の構造を安定化させる
と考えられるジスルフィド結合を形成する保存されたシステイン残基を、最初の
２つの細胞外ループのそれぞれに１個もっている。７つの膜貫通領域はＴＭ１、
ＴＭ２、ＴＭ３、ＴＭ４、ＴＭ５、ＴＭ６およびＴＭ７と呼ばれる。ＴＭ３がシ
グナル伝達に係わっている。

【０００９】 システイン残基のリン酸化およびリピド化（パルミチル化またはファルネシル
化）は、いくつかのＧタンパク質共役受容体のシグナル伝達に影響を与えること
ができる。Ｇタンパク質共役受容体はその第三細胞質ループおよび／またはカル
ボキシ末端にリン酸化部位を含むことが多い。βアドレナリン受容体のような数
種のＧタンパク質共役受容体においては、プロテインキナーゼＡおよび／または
特異的な受容体キナーゼによるリン酸化が受容体の脱感受性を媒介している。

【００１０】 いくつかの受容体では、Ｇタンパク質共役受容体のリガンド結合部位はＧタン
パク質共役受容体の数個の膜貫通ドメインにより形成される親水性ソケット(soc
ket)を含み、このソケットがＧタンパク質共役受容体の疎水性残基によりとり囲
まれていると考えられている。Ｇタンパク質共役受容体のそれぞれの膜貫通ヘリ
ックスの親水側は、内側に面して極性のリガンド結合部位を形成していると仮定
される。一部のＧタンパク質共役受容体では、ＴＭ３がＴＭ３のアスパラギン酸
残基のようなリガンド結合部位をもつとしてリガンドの結合に関与してきた。Ｔ
Ｍ５のセリン、ＴＭ６のアスパラギン、さらにＴＭ６やＴＭ７のフェニルアラニ
ンまたはチロシンもリガンドの結合に関与している。

【００１１】 Ｇタンパク質共役受容体は、ヘテロ三量体のＧタンパク質により、種々の細胞
内酵素、イオンチャンネルおよびトランスポーターに細胞内で結合することがで
きる (Johnson ら, Endoc. Rev., 1989, 10:317-331 を参照のこと) 。個々のＧ
タンパク質のαサブユニットが特定のエフェクターを優先的に刺激して細胞のさ
まざまな生物学的機能をモジュレートする。Ｇタンパク質共役受容体の細胞質側
の残基のリン酸化は、一部のＧタンパク質共役受容体のＧタンパク質共役を調節
するための重要な作用機構として同定された。Ｇタンパク質共役受容体は哺乳動
物宿主のいろいろな部位で見いだされている。ここ１５年の間に、細胞膜を７回
貫通する（7 transmembrane:７ＴＭ）受容体をターゲットとする３５０種類ほど
の治療薬が市場に導入され、成功を収めてきた。

【００１２】発明の概要 本発明は、GPR25、特にGPR25ポリペプチドおよびGPR25ポリヌクレオチド、組
換え物質、並びにその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様は前記のポリ
ペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関する。こうした使用には、とり
わけ、感染症（例えば、細菌、真菌、原生動物およびウイルスによる感染症、特
にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２が引き起こす感染症）、疼痛、癌、糖尿病、肥満
、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿
閉、骨粗しょう症、狭心症、心筋梗塞、卒中、潰瘍、アレルギー、良性前立腺肥
大、片頭痛、嘔吐、精神および神経障害（不安、精神分裂、そううつ、抑うつ、
せん妄、痴呆、重症の精神遅滞を含む）ならびに運動異常（例えばハンチントン
舞踏病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群を含む）（以後まとめて「前記疾患
」という）の治療が含まれる。他の態様では、本発明は、本発明により提供され
る物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニストを同定する方法、並びに同定さ
れた化合物を用いてGPR25の平衡異常と関連した症状を治療することに関する。
本発明のさらに他の態様は、不適当なGPR25活性またはGPR25レベルと関連した疾
病を検出するための診断アッセイに関する。

【００１３】発明の説明 最初の態様において、本発明はGPR25ポリペプチドに関する。この種のペプチ
ドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくと
も７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少な
くとも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も
好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる
単離されたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドとしては配列番号２
のアミノ酸配列を含むものがある。

【００１４】 本発明の他のペプチドには、そのアミノ酸配列が配列番号２の全長にわたる配
列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なく
とも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらにより好
ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の
同一性を有する単離されたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドとし
ては配列番号２のポリペプチドがある。

【００１５】 本発明の更なるペプチドには、配列番号１に含まれる配列を含んでなるポリヌ
クレオチドによりコードされる単離されたポリペプチドが含まれる。

【００１６】 本発明のポリペプチドはＧタンパク質共役７回膜貫通受容体遺伝子ファミリー
のメンバーであると考えられる。それゆえ、それらには興味がもてる。なぜなら
、脾臓のｃＤＮＡをＰＣＲ増幅して得られたこのタンパク質の配列は、GPR25に
ついて公開された配列(GenBank受託番号Ｕ９１９３９、該公開配列はエラーを含
むと考えられている)と６個のアミノ酸が相違しているからである。これらの特
性を以後「GPR25活性」または「GPR25ポリペプチド活性」または「GPR25の生物
学的活性」という。これらの活性の中には、前記GPR25ポリペプチドの抗原性お
よび免疫原性活性、特に配列番号２のポリペプチドの抗原性および免疫原性活性
も含まれる。本発明のポリペプチドはGPR25の少なくとも１つの生物学的活性を
示すことが好ましい。

【００１７】 本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク質の形であっても、融合タンパク質
のような、より大きいタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加のアミ
ノ酸配列を含めることが有利であり、このようなアミノ酸配列としては、分泌す
なわちリーダー配列、プロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列
、または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配列などがある。

【００１８】 また、前記ポリペプチドの変異体、すなわち同類アミノ酸置換（ある残基が性
質の似ている他の残基により置換される）により基準ポリペプチドと相違してい
るポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこうした置換は、Ala, Val, Leu
および Ileの間；Ser とThr の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；
塩基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr の間で起こる。特に、
数個、５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任意
の組合せで置換、欠失または付加されている変異体が好適である。

【００１９】 本発明のポリペプチドは任意の適当な方法で製造することができる。このよう
なポリペプチドには、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産されたポ
リペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、またはこれらの方法の組合せに
より製造されたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。

【００２０】 本発明の更なる態様において、本発明は、GPR25ポリヌクレオチドに関する。
このようなポリヌクレオチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミ
ノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同
一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでな
る単離されたポリヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９７％の
同一性を有するポリペプチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一
性を有するものがより一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリペ
プチドが最も好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、配列番号２
のポリペプチドをコードする配列番号１に含まれるヌクレオチド配列を含んでな
るポリヌクレオチドが挙げられる。

【００２１】 本発明の更なるポリヌクレオチドには、配列番号２のポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列に対して、その全コード領域にわたって、少なくとも７０％
の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９
０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドが含まれる。これに関して、少
なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくと
も９８〜９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、少なくとも９９％の
同一性を有するポリヌクレオチドが最も好ましいものである。

【００２２】 本発明の更なるポリヌクレオチドには、配列番号１の全長にわたる配列番号１
のポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも
８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは
少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポ
リヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有する
ポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一性を有する
ものがより一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド
が最も好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、配列番号１のポリ
ヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドおよび配列番号１のポリヌクレオチ
ドが挙げられる。

【００２３】 本発明はまた、上記の全てのポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオ
チドを提供する。

【００２４】 配列番号１のヌクレオチド配列はGPR25(Jung,B.P.ら、Biochem. Biophys, Res
. Commun. 230(1), 69-72(1997))との相同性を示す。配列番号１のヌクレオチド
配列はｃＤＮＡ配列であり、配列番号２のポリペプチドである361個のアミノ酸
のポリペプチドをコードするポリペプチドコード配列(ヌクレオチド番号79-1161
)を含む。

【００２５】 配列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１に含
まれるポリペプチドコード配列と同一であっても、遺伝子コードの重複性（縮重
）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコードする、配列番号１に含まれ
る配列以外の配列であってもよい。配列番号２のポリペプチドはＧタンパク質共
役７回膜貫通受容体遺伝子ファミリーの他のタンパク質と構造的に関連しており
、GPR25(Jung,B.P.ら、Biochem. Biophys, Res. Commun. 230(1), 69-72(1997))
との相同性および／または構造類似性を有する。

【００２６】 本発明の好適なポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とりわけ、それと相
同なポリペプチドおよびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をもつこ
とが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは少なくとも１つのGPR25活性を有する。

【００２７】 本発明のポリヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリーニング技
術により、ヒト脾臓の細胞中のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーか
ら、ＥＳＴ(エクスプレスド・シーケンス・タグ)分析（Adams, M.D.ら, Science
(1991) 252:1651-1656; Adams, M.D.ら, Nature (1992) 355:632-634; Adams,
M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174）を用いて得ることができる。また、本
発明のポリヌクレオチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から得るこ
とができ、商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成することもできる。

【００２８】 本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリペプチドの組換え体生産のために用
いる場合、そのポリヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単独、ま
たは他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌配列、プレ−、プロ−もし
くはプレプロ−タンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの
）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプチドのコード配列が含まれ
る。例えば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列がコードされ得
る。本発明のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、ｐＱＥベクタ
ー(Qiagen, Inc.)により提供されかつ Gentzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (
1989) 86:821-824に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、またはＨ
Ａタグである。また、このポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例えば
、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２９】 本発明の更なる具体例としては、数個、例えば５〜１０個、１〜５個、１〜３
個、１〜２個、または１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付
加されている、配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド変異体をコ
ードするポリヌクレオチドがある。

【００３０】 配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列と同一であるか十分に同一である本
発明のポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡお
よびゲノムクローンを単離するために、また、配列番号１との配列類似性が高い
他の遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体(ortholog)をコ
ードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、ｃ
ＤＮＡおよびゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとして、または核
酸増幅反応(PCR)用のプライマーとして用いることができる。一般的に、これら
のヌクレオチド配列は基準ヌクレオチド配列に対して７０％、好ましくは８０％
、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％の同一性を有する。プローブま
たはプライマーはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好ましくは３０個
以上を含み、５０個以上のヌクレオチドを有していてもよい。特に好ましいプロ
ーブは３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００３１】 本発明のポリペプチド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体を
含む）をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド配列または
その断片を有する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で適当なライブラリーをスクリーニングし、前記のポリヌクレオチ
ド配列を含む全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでなる
方法により得られる。このようなハイブリダイゼーション技法は当業者に公知で
ある。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、50% ホルムアミド、
５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウム (
pH7.6)、５×Denhardt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/mlの変性し剪断
したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中で４２℃で一夜インキュベートし、次いで
フィルターを 0.1×SSC 中約６５℃で洗浄する条件である。従って、本発明はさ
らに、配列番号１の配列またはその断片を有する標識プローブを用いて、ストリ
ンジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリーニ
ングすることにより得られるポリヌクレオチドも含む。

【００３２】 当業者には理解されるように、多くの場合、ポリペプチドをコードする領域が
そのｃＤＮＡの5'末端で短く切断されることから、単離されたｃＤＮＡ配列は不
完全であるだろう。それは逆転写酵素のためであり、この酵素はもともと「プロ
セシビティ」（processivity：重合反応中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の
能力の尺度）が低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮＡ鋳型のＤＮＡコピーを
完成させることができない。

【００３３】 全長ｃＤＮＡを得るための、または短鎖ｃＤＮＡを伸長させるための、当業者
に公知で利用可能な方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法（Ｒ
ＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohmanら, PNAS USA 85, 8998-9002,
1988を参照のこと）。例えばMarathonＴＭ技術(Clontech Laboratories Inc.)
により示されるような、上記技法の最近の改良により、より長いｃＤＮＡの検索
が大いに簡便化された。MarathonＴＭ技術では、所定の組織より抽出されたｍＲ
ＮＡからｃＤＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結する。続いて、
遺伝子特異的およびアダプター特異的なオリゴヌクレオチドプライマーの組合せ
を用いて核酸増幅（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅する。次
に、「nested」プライマー、すなわち増幅産物の内部にアニールするように設計
されたプライマー（典型的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールするア
ダプター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさらに5'側にアニールする遺
伝子特異的プライマー）を用いてＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産
物をＤＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃＤＮＡに直接結合す
るか、または5'プライマー設計用の新たな配列情報を用いて別の全長ＰＣＲを行
うことにより、全長ｃＤＮＡを構築することができる。

【００３４】 本発明の組換え体ポリペプチドは、当業界で公知の方法を用いて、発現系を含
有する遺伝子操作宿主細胞から生産することができる。したがって、更なる態様
において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレオチドを含有する発現系、該
発現系により遺伝子操作された宿主細胞、および組換え法による本発明ポリペプ
チドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡを用いてこの
種のタンパク質を生産するために、無細胞翻訳系を使用することもできる。

【００３５】 組換え体生産に関しては、本発明のポリヌクレオチドの発現系またはその一部
を組み込むために宿主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチドの
導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Biology (1986) および Sambro
okら, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbo
r Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) などの多くの標準的な
実験室マニュアルに記載された方法により行うことができる。好適なこうした方
法として、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキス
トラン媒介トランスフェクション、トランスベクション(transvection)、マイク
ロインジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポ
レーション、形質導入、スクレープローディング(scrape loading)、弾丸導入(b
allistic introduction)または感染などがある。

【００３６】 適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞（例：ストレプトコッカス、スタフ
ィロコッカス、大腸菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵母、ア
スペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ２、スポドプテラＳｆ９）、動
物細胞（例：ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 293
、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられる。

【００３７】 多種多様な発現系を使用することができる。こうした発現系として、特に、染
色体、エピソームおよびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由来、バク
テリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入因子由来
、酵母染色体エレメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０のよ
うなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮
性狂犬病ウイルス、レトロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せに
由来するベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプラスミドとバク
テリオファージの遺伝的要素に由来するものがある。これらの発現系は発現を起
こさせるだけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。一般的に、宿
主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現
することができる系またはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Molecula
r Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載されるような、日常的に用いら
れる公知の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入する
ことができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細胞周辺腔に、または
細胞外の環境に分泌させるために、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに
組み込むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに対して内因性
であっても、異種シグナルであってもよい。

【００３８】 スクリーニングアッセイで使用するため本発明のポリペプチドを発現させよう
とする場合、一般にそのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先立って細胞を回収する。
該ポリペプチドが培地に分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製する
ために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その細胞をまず溶解し、そ
の後にポリペプチドを回収する必要がある。

【００３９】 組換え細胞培養物から本発明のポリペプチドを回収し精製するには、硫酸アン
モニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマト
グラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグ
ラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含めた公知の方法を用いるこ
とができる。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる
。ポリペプチドが細胞内合成、単離および／または精製中に変性されるときは、
タンパク質を再生させるための公知の技法を用いて、活性のあるコンフォメーシ
ョンを復元することが可能である。

【００４０】 本発明はまた、診断薬としての本発明のポリヌクレオチドの使用に関する。機
能障害と関連した、配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴づけられる遺伝子
の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現または変化した発現により生
ずる疾病またはその疾病への罹りやすさの診断に追加しうる、またはその診断を
下しうる診断用ツールを提供するだろう。該遺伝子に突然変異がある個体を、さ
まざまな技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すことができる。

【００４１】 診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血液、尿、唾液、組織の生検または剖
検材料由来の細胞から得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用
してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使ってゲノムＤＮＡを酵素的
に増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる
。欠失および挿入突然変異は、正常な遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイ
ズの変化により検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識GPR25ヌクレオチド
配列とハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチした配列とミスマ
ッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により区別でき
る。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲルでのＤＮＡ
断片の電気泳動の移動度の変化により、または直接ＤＮＡ塩基配列決定によって
も検出できる（例えば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこと）。
特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮア
ーゼおよびＳ１プロテクション）または化学的開裂法によっても確認できる（Co
ttonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-4401を参照のこと）。別
の実施態様では、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、
GPR25ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレオチドプローブのア
レイ(array)を構築することができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能
性を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分子遺伝学のさ
まざまな問題を解きあかすために用いられている（例えば、M. Cheeら, Science
, Vol.274, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００４２】 診断アッセイは、前記の方法によりGPR25遺伝子の変異を検出することで、前
記疾患への罹りやすさを診断または判定する方法を提供する。さらに、被験者か
ら得られたサンプルからポリペプチドまたはｍＲＮＡのレベルの異常な低下また
は増加を測定する方法により、前記疾患の診断を下すことができる。発現の低下
または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチドの定量法、例えば核酸増幅（例
：ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ）、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロッティン
グ、その他のハイブリダイゼーション法のいずれかによりＲＮＡレベルで測定す
ることができる。宿主から得られたサンプル中の本発明ポリペプチドのようなタ
ンパク質のレベルを測定するアッセイ法は当業者によく知られている。こうした
アッセイ法として、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロ
ット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００４３】 かくして、もう一つの態様において、本発明は、 (a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１のヌクレオチド配列
）もしくはその断片、 (b) (a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、 (c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）もしく
はその断片、または (d) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対す
る抗体、 を含んでなる診断用キットに関する。

【００４４】 このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分
であることが理解されよう。かかるキットは疾患または疾患への罹りやすさ、特
に感染症（例えば、細菌、真菌、原生動物およびウイルスによる感染症、特にＨ
ＩＶ−１またはＨＩＶ−２が引き起こす感染症）、疼痛、癌、糖尿病、肥満、食
欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿閉、
骨粗しょう症、狭心症、心筋梗塞、卒中、潰瘍、アレルギー、良性前立腺肥大、
片頭痛、嘔吐、精神および神経障害（不安、精神分裂、そううつ、抑うつ、せん
妄、痴呆、重症の精神遅滞を含む）ならびに運動異常（例えばハンチントン舞踏
病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群を含む）を診断するうえで有用である。

【００４５】 また、本発明のヌクレオチド配列は染色体の同定にも有用である。この配列は
個々のヒト染色体上の特定の位置をターゲッティングし、その特定位置とハイブ
リダイズすることができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成するこ
とは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一段階であ
る。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされたら、その染色体上のその配
列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることができる。この種のデータは
、例えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (Johns Hopkins Unive
rsity Welch Medical Library からオンラインで入手可能) 中に見いだせる。そ
の後、同一の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連鎖解析（物理
的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認する。

【００４６】 罹患個体と非罹患個体とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることがで
きる。罹患個体の一部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体にも
観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因である可能性がある。

【００４７】 本発明のポリペプチド、その断片もしくは類似体、またはそれらを発現する細
胞は、本発明のポリペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原として
も使用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が従来技術における他
の関連ポリペプチドに対するその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実
質的に高い親和性を示すことを意味する。

【００４８】 本発明のポリペプチドに対する抗体は、慣用のプロトコールを用いて、動物（
好ましくはヒト以外の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノクローナル抗体の調製に
は、連続細胞系の培養物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができる
。例を挙げると、ハイブリドーマ法 (Kohler, G.およびMilstein, C., Nature (
1975) 256:495-497)、トリオーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法 (Kozborら,
Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハイブリドーマ法 (Coleら, Mo
noclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp.77-96, Alan R. Liss, Inc., 19
85) などがある。

【００４９】 本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体をつくるために、米国特許第4,946,
778号に記載されるような一本鎖抗体の調製法を適応させることができる。また
、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動
物を含む他の生物を利用することができる。

【００５０】 前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現するクローンを単離・同定した
り、アフィニティークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製することもで
きる。

【００５１】 本発明のポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、前記疾患の治療に使用でき
る可能性がある。

【００５２】 本発明の更なる態様において、本発明は、本発明のポリペプチドまたはその断
片と、各種サブクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリンの
Ｈ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含んでなる遺伝子工学的に作製さ
れた可溶性融合タンパク質に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特に
ＩｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒンジ領域で起こる。特
定例では、血液凝固因子Ｘａで開裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部
分を簡単に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク質の遺伝子工学
的作製方法、並びに薬物スクリーニング、診断および治療におけるそれらの使用
に関する。また、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質をコードする
ポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質技術の例は国際特許出願 WO94/2945
8 およびWO94/22914に見いだせる。

【００５３】 本発明の更なる態様は哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関し、
この方法は、特に前記疾患から該動物を防御するための抗体および／またはＴ細
胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチドを哺乳動物に接種すること
を含んでなる。本発明のさらに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗
体を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in vivo で本発明のポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を指令するベクターを介して該ポ
リペプチドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫学的応答を引き
出す方法に関する。

【００５４】 本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導入したとき、その哺乳動物において
本発明のポリペプチドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン製剤
（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチド
を含有する。ワクチン製剤は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチ
ドは胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に（例えば、皮下、筋肉内
、静脈内または皮内注射により）投与することが好ましい。非経口投与に適した
製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤を受容者の血液と等
張にする溶質を含みうる水性および非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または
増粘剤を含みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回量
容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルおよびバイアル）で提供すること
ができ、また、使用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で
保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性を増強するためのア
ジュバント系、例えば水中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性により変化するが、ルー
チンな実験操作により簡単に決定できる。

【００５５】 本発明のポリペプチドは、多くの病的状態、特に前記疾患を含めて、さまざま
な生物学的機能に関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を刺激また
は抑制する化合物を同定するスクリーニング法を開発することが望ましい。した
がって、更なる態様において、本発明は、このポリペプチドの機能を刺激または
抑制する化合物を同定するための化合物のスクリーニング法を提供する。一般的
には、前記疾患の治療および予防目的のためにアゴニストまたはアンタゴニスト
が使用される。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学物質ライブラ
リーおよび天然産物の混合物から化合物を同定することができる。このように同
定されたアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合により、該ポ
リペプチドの天然のまたは修飾された基質、リガンド、受容体、酵素などであっ
てよく、また、その構造的または機能的なミメティックであってもよい（Coliga
nら, Current Protocols in Immunology 1(2): Chapter 5 (1991)を参照のこと
）。

【００５６】 スクリーニング法では、本発明のポリペプチド、または該ポリペプチドを担持
する細胞もしくは膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合を、候補
化合物に直接または間接的に結合された標識を用いて簡単に測定できる。あるい
はまた、スクリーニング法では標識した競合物質との競合を用いることもある。
さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合物がポリペプチドの活性化ま
たは抑制により生ずるシグナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを
担持する細胞に適した検出系を用いて試験することができる。一般的には、既知
のアゴニストの存在下で活性化のインヒビターをアッセイして、アゴニストによ
る活性化に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニストまたはインヒビ
ターの不在下で、候補化合物がポリペプチドの活性化を抑制するか否かを調べる
ことによる逆アゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、構成的に
活性のあるポリペプチドが用いられる。さらに、これらのスクリーニング法は、
候補化合物と本発明のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつくり
、この混合物中のGPR25活性を測定し、そしてこの混合物のGPR25活性をスタンダ
ードと比較する各ステップを単に含むだけでよい。本発明のポリペプチドのアン
タゴニストを同定するハイスループットスクリーニングアッセイでは、上記のよ
うなＦｃ部分とGPR25ポリペプチドから作製されるような融合タンパク質も使用
することができる(D. Bennettら, J. Mol. Recognition, 8:52-58 (1995) およ
びK. Johansonら, J. Biol. Chem., 270(16):9459-9471 (1995)を参照のこと）
。

【００５７】 また、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドまたは該ポリペプチドに対す
る抗体を用いて、細胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添加化
合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組み立てることができる。例え
ば、当業界で公知の標準方法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を
用いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベルを測定するためのＥＬ
ＩＳＡアッセイを構築することができ、これは適切に操作された細胞または組織
からのポリペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれアンタゴニスト
またはアゴニストともいう）の探索に用いることができる。

【００５８】 膜に結合した受容体または可溶性の受容体が存在するのであれば、当業界で公
知の標準的な受容体結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明のポリ
ペプチドを用いることができる。こうした受容体結合法には、限定するものでは
ないが、リガンド結合アッセイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に修
飾（例：ビオチン化）するか、または検出や精製に適したペプチド配列に融合さ
せ、そして推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液など
）とインキュベートする。その他の方法としては、表面プラズモン共鳴および分
光学のような生物物理的方法がある。これらのスクリーニング法は、該ポリペプ
チドまたは（存在するのであれば）その受容体への結合と競合する該ポリペプチ
ドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するために用いることもできる。か
かるアッセイを行うための標準的な方法は当業界でよく理解されている。

【００５９】 本発明のポリペプチドの潜在的なアンタゴニストの例としては、抗体、ある場
合には、該ポリペプチドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係があ
るオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例えば、リガンド、基質、受容体、
酵素などの断片）、または本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子などがある。

【００６０】 かくして、他の態様において、本発明は、本発明のポリペプチドのアゴニスト
、アンタゴニスト、リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポリペ
プチドの産生を低下または増加させる化合物を同定するためのスクリーニングキ
ットに関し、このキットは、 (a) 本発明のポリペプチド、 (b) 本発明のポリペプチドを発現している組換え細胞、 (c) 本発明のポリペプチドを発現している細胞膜、または (d) 本発明のポリペプチドに対する抗体、 を含んでなり、前記ポリペプチドは好ましくは配列番号２のポリペプチドである
。 このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成
分であることが理解されよう。

【００６１】 当業者であれば、本発明のポリペプチドは、その構造に基づいて該ポリペプチ
ドのアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも使用で
きることが容易に理解されよう。この方法は、 (a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、 (b) アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実と思われる反応部
位または結合部位の三次元構造を想定し、 (c) 想定された反応部位または結合部位と結合または反応すると予想される候
補化合物を合成し、そして (d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビター
であるか否かを調べる、 ことを含んでなる。これは通常反復プロセスであることがさらに理解されよう。

【００６２】 更なる態様において、本発明は、GPR25ポリペプチド活性の過剰量と不足量の
いずれかに関係した、例えば感染症（例えば、細菌、真菌、原生動物およびウイ
ルスによる感染症、特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２が引き起こす感染症）、疼
痛、癌、糖尿病、肥満、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全
、低血圧、高血圧、尿閉、骨粗しょう症、狭心症、心筋梗塞、卒中、潰瘍、アレ
ルギー、良性前立腺肥大、片頭痛、嘔吐、精神および神経障害（不安、精神分裂
、そううつ、抑うつ、せん妄、痴呆、重症の精神遅滞を含む）ならびに運動異常
（例えばハンチントン舞踏病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群を含む）など
の異常な状態の治療法を提供する。

【００６３】 該ポリペプチドの活性が過剰である場合は、いくつかのアプローチが利用可能
である。一つのアプローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの結
合をブロックすることにより、または第２のシグナルを抑制することで異常な状
態を軽減することにより、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、上
記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに
患者に投与することを含んでなる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペ
プチドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと結合する能力がまだ
ある可溶性形態のポリペプチドを投与することができる。このような競合物質の
典型的な例はGPR25ポリペプチドの断片である。

【００６４】 さらに別のアプローチでは、発現阻止法を使って内因性GPR25ポリペプチドを
コードする遺伝子の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、体内で
産生されるか外部から投与されるアンチセンス配列の使用を必要とする（例えば
、Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (遺伝
子発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリゴデオキシヌクレオチド), CRC
Press, Boca Raton, FL (1988) 中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56:560を
参照のこと）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせん(トリプルヘリック
ス)を形成するオリゴヌクレオチドを供給することもできる（例えば、Leeら, Nu
cleic Acids Res (1979) 6:3073; Cooneyら, Science (1988) 241:456; Dervan
ら, Science (1991) 251:1360 を参照のこと）。これらのオリゴマーはそれ自体
を投与することもできるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させることもでき
る。

【００６５】 GPR25およびその活性の過少発現に関係した異常な状態を治療する場合も、い
くつかのアプローチを取ることができる。一つのアプローチは、治療に有効な量
の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（すなわち、前記アゴニスト）を製剤
学上許容される担体とともに患者に投与して、異常な状態を緩和することを含ん
でなる。別法として、患者の関連細胞においてGPR25を内因的に産生させるため
に遺伝子治療を用いることができる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロ
ウイルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオチドを遺伝子操作す
る。次にレトロウイルス発現構築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードす
るＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入されたパッケ
ージング細胞に導入する。その結果、パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有
する感染性のウイルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操作およびin v
ivo ポリペプチド発現のために、これらのプロデューサー細胞を患者に投与する
。遺伝子治療の概論に関しては、Human Molecular Genetics, T Strachan and A
P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996)中のChapter 20, Gene Thera
py and other Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches(およびその中
の引用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは治療量の本発明のポリペプ
チドを適当な製剤学上の担体とともに投与することである。

【００６６】 更なる態様において、本発明は、治療に有効な量のポリペプチド（例えば、可
溶性形態の本発明ポリペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド
、または小分子化合物を製剤学上許容される担体または賦形剤と共に含有する医
薬組成物を提供する。この種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロ
ース、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組合せがあるが、これら
に限らない。本発明はさらに、上記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１
以上の容器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発明のポリペプチ
ドおよび他の化合物は単独で使用しても、他の化合物、例えば治療用化合物と一
緒に使用してもよい。

【００６７】 医薬組成物は投与経路、例えば全身または経口による投与経路に適合させるこ
とができる。全身投与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注である。
皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用できる。全身投与の別の
手段には、胆汁酸塩、フシジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経
粘膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチドまたは他の化合物を
腸溶剤またはカプセル剤として製剤化し得るのであれば、経口投与も可能である
。これらの化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投与しても、かつ
／または局在化させてもよい。

【００６８】 必要な投与量範囲は、本発明のペプチドまたは他の化合物の選択、投与経路、
製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な投与
量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲である。入手可能な化合物が多様
であること、投与経路の効率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は
広範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静注による投与よりも高
い投与量を必要とすると予想されよう。こうした投与量レベルの変動は、当業界
でよく理解されているような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整すること
ができる。

【００６９】 治療に用いるポリペプチドは、上述したような「遺伝子治療」と称する治療法
において、患者の体内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞を、
ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより
、例えばレトロウイルスプラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的
に操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。

【００７０】 ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配列は、類似の相同性を有する別の配
列を同定する際の価値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコンピュ
ータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデータを用いてＧＣＣのような
公知の検索ツールにより配列データベースを検索することで最大限促進される。
したがって、更なる態様において、本発明は、配列番号１の配列を含んでなるポ
リヌクレオチドおよび／またはそれによりコードされるポリペプチドを保存した
コンピュータ読み取り可能媒体を提供する。

【００７１】 以下の定義は上記の説明中でしばしば用いられた用語を理解しやすくするため
のものである。

【００７２】 本明細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体
、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリ
ン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。

【００７３】 「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によって」改変されたことを
意味する。「単離された」組成物または物質が天然に存在するのであれば、それ
はそのもとの環境から変化しているか分離されており、またはその両方である。
例えば、生存している動物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物質から分離
されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、本明細書中で用いられるように
、「単離された」ものである。

【００７４】 「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデ
オキシリボヌクレオチドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ
、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る。「ポリヌクレオチド」に
は、制限するものではないが、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖
領域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも
、またはより典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合っ
たものでもよい）が含まれる。加えて、「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤ
ＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポリヌクレ
オチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ
、および安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲ
ＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチル化された塩基およびイノ
シンのような特殊な塩基がある。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を
行うことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界に一般的に存在
するポリヌクレオチドの化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、並びに
ウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。ま
た、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称される比較的短
いポリヌクレオチドも包含する。

【００７５】 「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合（すなわ
ち、ペプチドアイソスター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペプチ
ドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」は短鎖（通常はペプチド、オ
リゴペプチドまたはオリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）
の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化アミノ酸以外のアミノ
酸を含んでもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプ
ロセスで、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修飾されたアミノ酸
配列を含む。このような修飾は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究
文献に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノまたはカル
ボキシル末端を含めてポリペプチドのどこでも行うことができる。同じタイプの
修飾が所定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異なる
程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチドが多くのタイプの修飾を含ん
でいてもよい。ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のあ
る又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、または分枝した環状のポリ
ペプチドは翻訳後の天然プロセスから生じることがあり、また、合成法によって
製造することもできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシ
ル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファ
チジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチ
ル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミ
ル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル
化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシング
、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のよ
うなタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある（
例えば、Proteins - Structure and Molecular Properties, 2nd Ed., T.E. Cre
ighton, W.H. Freeman and Company, New York, 1993; Posttranslational Cova
lent Modification of Proteins, B.C. Johnson編, Academic Press, New York,
1983中のWold, F., Post-translational Protein Modifications: Perspective
s and Prospects, pgs. 1-12; Seifterら, “Analysis for protein modificati
ons and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (1990) 182:626-646; および R
attanら, “Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging
", Ann NY Acad Sci (1992) 663:48-62 を参照のこと）。

【００７６】 本明細書中で用いる「変異体」とは、基準のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドと異なるが、不可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変異体は基準ポリヌクレオチド
とヌクレオチド配列の点で相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、
基準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変更
しても、しなくてもよい。ヌクレオチドの変化は、以下で述べるように、基準配
列によりコードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付加、融合および
末端切断（トランケーション）をもたらしうる。典型的なポリペプチドの変異体
は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準ポリペプ
チドの配列と変異体の配列が全般的によく類似しており、多くの領域で同一とな
るような相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１以
上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違していてよい。置換または挿入
されるアミノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっても、なくて
もよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はアレル変異体のように
天然に存在するものでも、天然に存在することが知られていない変異体であって
もよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない変異体は、突
然変異誘発法または直接合成により作製することができる。

【００７７】 「同一性」はヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性の尺度である。一
般に、最大級のマッチ(match)が得られるように配列をアライメント（並列化）
する。「同一性」それ自体は当業界で認識された意味をもち、発表された技法を
使って算出することができる（例えば、Computational Molecular Biology, Les
k, A.M. 編, Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Infor
matics and Genome Projects, Smith, D.W. 編, Academic Press, New York, 19
93; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. and Griffi
n, H.G. 編, Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecul
ar Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; および Sequence Analys
is Primer, Gribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press, New York,
1991を参照のこと）。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の同一
性を決定する方法は多数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者に
は公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:
1073) 。２つの配列間の同一性または類似性を決定するために汎用される方法と
しては、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編, Academic Press, Sa
n Diego, 1994 および Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J Applied Math (19
88) 48:1073 に記載される方法があるが、これらに限らない。同一性および類似
性の決定方法はコンピュータプログラムに集成されている。２つの配列間の同一
性および類似性を決定するための好適なコンピュータプログラム法としては、Ｇ
ＣＧプログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucleic Acids Research (1984)
12(1):387)、BLASTP、BLASTN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990)
215:403)があるが、これらに限らない。

【００７８】 例えば、本発明のポリヌクレオチド配列は、配列番号１の基準ヌクレオチド配
列と同一である、すなわち基準ヌクレオチド配列に対して100％の同一性を有す
るか、または該基準配列に対してある整数個までのヌクレオチド変異を含むこと
ができる。このような変異は少なくとも１個のヌクレオチドの欠失、置換（トラ
ンジションおよびトランスバージョンを含む）および挿入よりなる群から選択さ
れ、これらの変異は基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位置、またはこれ
らの末端位置の間のどこに存在してもよく、基準配列中のヌクレオチドの間に個
々に、または基準配列内に１以上の連続したグループとして点在することができ
る。ヌクレオチド変異の数は、配列番号１中のヌクレオチドの総数に、それぞれ
の（100で割った）同一性％の数値を掛け、その積を配列番号１中のヌクレオチ
ドの総数から差し引くことにより、すなわち次式により求められる。

【００７９】 ｎ_n ≦ｘ_n −（ｘ_n・ｙ） 式中、ｎ_nはヌクレオチド変異の数であり、ｘ_nは配列番号１中のヌクレオチドの
総数であり、ｙは50％については0.50、60％については0.60、70％については0.
70、80％については0.80、85％については0.85、90％については0.90、95％につ
いては0.95、97％については0.97または100％については1.00であり、ここでｘ_n とｙの非整数の積は、その積をｘ_nから引く前に、最も近似する整数に切り下げ
る。配列番号２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の改変により
、そのコード配列にナンセンス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を起
こさせ、こうした変異後に該ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド
を改変させることができる。

【００８０】 同様に、本発明のポリペプチド配列は、配列番号２の基準配列と同一である、
すなわち基準配列に対して100％の同一性を有するか、または同一性％が100％未
満となるように基準配列に対してある整数個までのアミノ酸変異を含むことがで
きる。このような変異は少なくとも１個のアミノ酸の欠失、置換（同類および非
同類アミノ酸置換を含む）および挿入よりなる群から選択され、これらの変異は
基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、またはこれらの末
端位置の間のどこに存在してもよく、基準配列中のアミノ酸の間に個々に、また
は基準配列内に１以上の連続したグループとして点在することができる。所定の
同一性％に関するアミノ酸変異の数は、配列番号２中のアミノ酸の総数にそれぞ
れの（100で割った）同一性％の数値を掛け、その積を配列番号２中のアミノ酸
の総数から引くことにより、すなわち次式により求められる。

【００８１】 ｎ_a ≦ｘ_a −（ｘ_a・ｙ） 式中、ｎ_aはアミノ酸変異の数であり、ｘ_aは配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは例えば70％については0.70、80％については0.80、85％については0.85
などであり、ｘ_aとｙの非整数の積は、その積をｘ_aから引く前に、最も近似する
整数に切り下げる。

【００８２】 「融合タンパク質」とは、２つの、しばしば無関係の、融合された遺伝子また
はその断片によりコードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A-0 4
64には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部分と他のヒトタンパク質また
はその一部とを含んでなる融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療
および診断における使用には、融合タンパク質の一部として免疫グロブリンＦｃ
領域を使用することが有利であり、これにより例えば薬物速度論的性質が向上す
る（例えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつかの使用にとっては
、その融合タンパク質を発現させ、検出し、精製した後でＦｃ部分を除去するこ
とが望ましいだろう。

【００８３】 本明細書中に引用された、特許および特許出願明細書を含めた全ての刊行物は
、あたかも各刊行物が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体を参
考としてここに組み入れるものとする。

【００８４】実施例 実施例１： 哺乳動物細胞による発現 ヒト胚腎臓 293 (ＨＥＫ293)細胞または接着dhfrＣＨＯ細胞のいずれかで本発
明の受容体を発現させた。受容体の発現を最大限高めるために、一般的には、ｐ
ＣＤＮまたはｐＣＤＮＡ３ベクターに挿入する前に受容体ｃＤＮＡから全部の5'
および3'非翻訳領域（ＵＴＲ）を除去した。リポフェクションを用いて細胞を個
々の受容体ｃＤＮＡによりトランスフェクトし、400 mg/ml のＧ４１８の存在下
で選択した。３週間の選択後、個々のクローンを取り上げ、更なる分析のため増
殖させた。ベクターのみでトランスフェクトしたＨＥＫ293 またはＣＨＯ細胞を
陰性対照として用いた。各受容体を安定して発現している細胞系を分離するため
、一般的には約２４個のクローンを選択し、ノーザンブロットにより分析した。
受容体ｍＲＮＡは、通常、分析したＧ４１８耐性クローンの約５０％において検
出可能であった。

【００８５】実施例２： 結合および機能アッセイ用のリガンドバンク スクリーニングのために２００以上の推定上の受容体リガンドを含むバンクが
構成されている。このバンクには、ヒト７膜貫通（７ＴＭ）受容体を介して作用
することが知られている伝達物質、ホルモンおよびケモカイン；ヒト７ＴＭ受容
体の推定上のアゴニストでありうる天然の化合物；哺乳動物の等価物がまだ同定
されていない非哺乳動物の生理活性ペプチド；および天然には見いだせないが未
知の天然リガンドと共に７ＴＭ受容体を活性化する化合物が含まれる。このバン
クは、結合アッセイと機能（すなわち、カルシウム、ｃＡＭＰ、ミクロフィジオ
メーター(microphysiometer)、卵母細胞の電気生理学など、下記参照）アッセイ
の両方を用いて、既知リガンドについて該受容体を最初にスクリーニングするた
めに使用された。

【００８６】実施例３： リガンド結合アッセイ リガンド結合アッセイは受容体の薬理を確かめるための直接的な方法を提供す
るもので、高処理量のフォーマットに適応可能である。結合実験のために、受容
体の精製したリガンドを高比活性（50〜2000 Ci/mmol) に放射性標識した。次に
、この放射性標識化のプロセスがリガンドのその受容体の方へ向かう活性を弱め
ないことを確認した。膜受容体源と全細胞受容体源の両方に使用可能なシグナル
対ノイズ比を確立するために、緩衝液、イオン、ｐＨおよび他のモジュレーター
（例えば、ヌクレオチド）についてのアッセイ条件を最適化した。これらのアッ
セイでは、特異的な受容体結合を、過剰の未標識競合リガンドの存在下で測定し
た放射能を全結合放射能から引いた放射能値として規定した。可能な場合は、２
以上の競合リガンドを用いて残留非特異的結合を規定する。

【００８７】実施例４： ツメガエル卵母細胞による機能アッセイ 本発明の受容体ｃＤＮＡをコードする線状プラスミド鋳型からのキャップされ
たＲＮＡ転写物を、標準的な手法に従ってＲＮＡポリメラーゼを用いてin vitro
で合成した。このin vitro転写物を0.2 mg/mlの最終濃度で水中に懸濁した。成
熟雌カエルから卵巣葉(ovarian lobes) を摘出し、卵胞を取り除いた第Ｖ期の卵
母細胞を得、マイクロインジェクション装置を使って50 nlボーラスでＲＮＡ転
写物（卵母細胞につき10 ng)を注入した。２個の電極電圧クランプを用いて、ア
ゴニストへの暴露に応答して発生した個々のツメガエル卵母細胞からの電流を測
定した。Ｃａ²⁺不含のBarth培地中で室温にて記録した。このツメガエル系は活
性化用リガンドに関して既知のリガンドおよび／または組織／細胞抽出物をスク
リーニングするのに使用できる。

【００８８】実施例５： ミクロフィジオメトリックアッセイ さまざまな第二メッセンジャー系を活性化すると、細胞から少量の酸が排出さ
れる。この酸は主に細胞内シグナル伝達プロセスを刺激するのに必要とされる代
謝活性の増強の結果として生成される。この細胞の周辺培地のｐＨ変化はごくわ
ずかであるが、CYTOSENSORミクロフィジオメーター (Molecular Devices Ltd.,
Menlo Park, CA) により検出可能である。かくして、このCYTOSENSORは、本発明
のＧタンパク質共役受容体のような、細胞内シグナル伝達経路を利用するエネル
ギーと共役する受容体の活性化を検出することが可能である。

【００８９】実施例６： 抽出物／細胞上清スクリーニング 多数の哺乳動物受容体は、同一動物種のその活性化用リガンド（アゴニスト）
が今のところまだ見いだされていない。それゆえ、これらの受容体の活性リガン
ドはこれまでに同定されたリガンドバンクに含まれていない可能性がある。した
がって、本発明の７ＴＭ受容体も、天然リガンドを同定するために組織抽出物に
対して機能的に（カルシウム、ｃＡＭＰ、ミクロフィジオメーター、卵母細胞の
電気生理学などの機能スクリーンを用いて）スクリーニングされた。活性化用リ
ガンドが単離・同定されるまで、陽性の機能応答をもたらした抽出物を順次サブ
分画化する。

【００９０】実施例７： カルシウムおよびｃＡＭＰ機能アッセイ ＨＥＫ293 細胞において発現された７ＴＭ受容体は、ＰＬＣおよびカルシウム
の動員の活性化および／またはｃＡＭＰの刺激または阻害に機能的に共役するこ
とが判明した。受容体−トランスフェクト細胞またはベクター対照細胞における
ＨＥＫ293 細胞での基底カルシウムレベルは、正常な100 nM〜200 nMの範囲にあ
ることが観察された。組換え受容体を発現しているＨＥＫ293 細胞にfura 2を添
加し、一日で150を超える選択したリガンドまたは組織／細胞抽出物をアゴニス
ト誘導カルシウム動員に関して評価した。同様に、組換え受容体を発現している
ＨＥＫ293 細胞を、標準的なｃＡＭＰ定量アッセイを用いて、ｃＡＭＰ生成の刺
激または阻害について評価した。カルシウムの一過性動員またはｃＡＭＰの変動
を示すアゴニストをベクター対照細胞において試験し、その応答が受容体を発現
しているトランスフェクト細胞に特異的なものであるかを調べた。

【００９１】配列表フリーテキスト 配列情報 配列番号１

【００９２】 配列番号２

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｐ ４Ｈ０４５ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/50 33/542 Ｂ 33/566 33/542 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/566 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者 レーン，パメラ，エイ． アメリカ合衆国 19401 ペンシルバニア 州，ノリスタウン，コルトン ドライブ 31 (72)発明者 ツイ，ピン アメリカ合衆国 19312 ペンシルバニア 州，ベルウィン， ベルウィン‐パオリ ロード 1237 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA34 AA35 AA40 BB20 CB01 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 FB03 FB07 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 DA02 EA04 GA13 GA18 HA12 HA17 4B063 QA01 QA18 QQ08 QQ20 QQ42 QQ52 QQ63 QQ89 QR56 QR62 QR69 QR77 QR80 QS05 QS24 QS25 QS28 QS34 4B064 AG20 AG27 CA10 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA91X AA93X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4H045 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA76 DA86 EA20 EA50 FA74

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の(i)〜(ii)からなる群から選択される単離されたポリ
   ペプチド： (i) 配列番号２のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド、および (ii) 配列番号２のアミノ酸配列からなる単離されたポリペプチド。
2. 【請求項２】 以下の(i)〜(iii)からなる群から選択される単離されたポリ
   ヌクレオチド、またはその単離されたポリヌクレオチドに相補的なヌクレオチド
   配列： (i) 配列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる単
   離されたポリヌクレオチド、 (ii) 配列番号１のポリヌクレオチドからなる単離されたポリヌクレオチド、 (iii) 適当なライブラリーを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条
   件下で、配列番号１の配列またはその断片を有する標識プローブでスクリーニン
   グすることにより得られる単離されたポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 請求項１に記載のポリペプチドに対して免疫特異的な抗体。
4. 【請求項４】 以下の(i)または(ii)の方法： (i) 請求項１に記載のポリペプチドの活性または発現を増強する必要がある被
   験者を治療するための方法であって、 (a) 治療に有効な量の、該ポリペプチドに対するアゴニストを該被験者に
   投与すること、および／または (b) 該ポリペプチド活性のin vivo産生をもたらす形態の、該ポリペプチ
   ドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドを該
   被験者に提供すること、 を含んでなる方法；または (ii) 請求項１に記載のポリペプチドの活性または発現を抑制する必要がある被
   験者を治療するための方法であって、 (a) 治療に有効な量の、該ポリペプチドに対するアンタゴニストを該被験
   者に投与すること、および／または (b) 該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を抑制する核酸
   分子を該被験者に投与すること、および／または (c) 治療に有効な量の、該ポリペプチドのリガンド、基質または受容体に
   対して該ポリペプチドと競合するポリペプチドを該被験者に投与すること、 を含んでなる方法。
5. 【請求項５】 被験者における請求項１に記載のポリペプチドの発現または
   活性に関連した疾病または該疾病への罹りやすさを診断する方法であって、 (a) 該被験者のゲノム内の該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に突
   然変異があるか否かを調べること、および／または (b) 該被験者から得られたサンプル中の該ポリペプチド発現の存在または量を
   分析すること、 を含んでなる方法。
6. 【請求項６】 請求項１に記載のポリペプチドの機能を刺激または抑制する
   化合物を同定するためのスクリーニング法であって、 (a) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプチドを担持している細
   胞もしくはその膜）またはその融合タンパク質と、の結合を、該候補化合物に直
   接または間接的に結合させた標識により測定すること、 (b) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプチドを担持している細
   胞もしくはその膜）またはその融合タンパク質と、の結合を、標識競合物質の存
   在下で測定すること、 (c) 候補化合物が該ポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグナルを
   もたらすか否かを、該ポリペプチドを担持している細胞または細胞膜に適した検
   出系を用いて調べること、 (d) 候補化合物と、該ポリペプチドを含有する溶液と、を一緒にして混合物を
   調製し、該混合物中の該ポリペプチドの活性を測定して、該混合物の活性をスタ
   ンダードと比較すること、および (e) 候補化合物が細胞における該ポリペプチドをコードするｍＲＮＡおよび該
   ポリペプチドの産生に及ぼす効果を、例えばＥＬＩＳＡアッセイを用いて、検出
   すること、 よりなる群から選択される方法を含んでなるスクリーニング法。
7. 【請求項７】 請求項１に記載のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴ
   ニスト。
8. 【請求項８】 適合性の宿主細胞内に存在するとき、請求項１に記載のポリ
   ペプチドを産生し得るポリヌクレオチドを含有する発現系。
9. 【請求項９】 宿主細胞が適当な培養条件下で配列番号２の全長にわたる配
   列番号２のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを産生するように、請求項８
   に記載の発現系を用いて細胞を形質転換またはトランスフェクションすることを
   含んでなる、組換え宿主細胞の作製方法。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の方法により得られる組換え宿主細胞。
11. 【請求項１１】 配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを発
    現している請求項１０に記載の組換え宿主細胞の膜。
12. 【請求項１２】 請求項１０に記載の宿主細胞を前記ポリペプチドを産生さ
    せるのに十分な条件下で培養し、その培養培地から該ポリペプチドを回収するこ
    とを含んでなる、前記ポリペプチドの生産方法。