JP2002302452A - ヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックａｍｐホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤およびラジカル消去剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 アレルギー性疾患や炎症性疾患等の予防・治
療、皮膚の老化（例えば、皮膚のしわ形成や弾力性低下
等）の予防・治療などに有用な、ヒスタミン遊離抑制
剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、
活性酸素消去剤またはラジカル消去剤を提供する。 【解決手段】 ヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡ
ＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤また
はラジカル消去剤に、五斂子の葉部からの抽出物を有効
成分として含有せしめる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒスタミン遊離抑
制作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害
作用、活性酸素消去作用またはラジカル消去作用を有
し、アレルギー性疾患や炎症性疾患等の予防・治療、皮
膚の老化（例えば、皮膚のしわ形成や弾力性低下等）の
予防・治療などに有用な植物抽出物を含有する各種薬剤
に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、花粉症、アレルギー性鼻炎、気管
支喘息、アトピー性皮膚炎など、アレルギー反応を通じ
て発症するアレルギー性疾患は、子供から成人にまで及
ぶ広い年代層において見られる現代病の一つとなってい
る。その原因となるアレルギー反応はＩ型からＩＶ型に
分けられる。例えば、アレルギー性鼻炎や気管支喘息に
代表されるＩ型アレルギー（即時型アレルギー）におい
ては、肥満細胞や好塩基球からヒスタミン、ロイコトリ
エン、プロスタグランジン等のケミカルメディエーター
が放出され、これらケミカルメディエーターが鼻炎や喘
息などの症状を伴う炎症反応を引き起こす。また、アレ
ルギー性接触性皮膚炎に代表されるＩＶ型アレルギー
（遅延型アレルギー）においては、Ｔ細胞が放出するサ
イトカインが好酸球やマクロファージを活性化し集積さ
せ、炎症反応を引き起こす。

【０００３】このようなアレルギー反応やそれに伴う炎
症反応は、体内におけるヒスタミン遊離、血小板凝集、
活性酸素やラジカルの発生などが原因となって生じる。

【０００４】ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミ
ンが細胞外に遊離する現象で、遊離されたヒスタミンが
炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻
害・抑制する物質によりアレルギー性疾患や炎症性疾患
を予防・治療する試みがなされており、そのようなヒス
タミン遊離抑制剤として、トラニラスト、クロモグリク
酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメ
タジン等が用いられてきた。しかしながら、これらの物
質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題となって
いた。

【０００５】血小板凝集は、アラキドン酸カスケードの
ホスホリパーゼＡ_２の活性化を招き、それにより放出さ
れたロイコトリエンＢ_４やプロスタグランジンＥ_２等が
炎症反応を引き起こす。このため、血小板の凝集を阻害
・抑制する物質によりアレルギー性疾患や炎症性疾患を
予防・治療する試みがなされており、そのような血小板
凝集阻害物質として、アスピリン、チクロピジン、スル
フィピラゾン等が用いられてきた。しかしながら、これ
らの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題と
なっていた。一方、血小板の凝集は血小板中のサイクリ
ックＡＭＰの濃度と関係があり、サイクリックＡＭＰホ
スホジエステラーゼによってサイクリックＡＭＰが分解
されてサイクリックＡＭＰの濃度が低下すると、血小板
は凝集しやすくなる。従って、サイクリックＡＭＰホス
ホジエステラーゼの作用を抑制してサイクリックＡＭＰ
濃度の低下を防止すれば、血小板凝集を防止できるもの
と考えられる。

【０００６】活性酸素やラジカルは、体内で過剰に産生
されたり、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）に
よる消去が不十分であったりして、体内における濃度が
高くなると、アレルギー性炎症を生じさせるだけでな
く、様々な組織障害の原因となる。特に、皮膚は紫外線
など環境因子の刺激を直接受けるため活性酸素やラジカ
ルが発生しやすい器官であり、活性酸素やラジカルは、
コラーゲン等の生体組織を分解、変性あるいは架橋した
り、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を
生成したりして、皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚
の老化を引き起こす。このため、活性酸素消去物質やラ
ジカル消去物質を安全性の点で有利な天然物から得る試
みがなされており、ウワミズザクラのプルヌソールＡ、
ユーカリ等のエラグ酸、大麦、黒米、黒インゲン等の穀
類のフラボノイド類、茶のカテキン、ゴマのセサミン
類、セージ、ローズマリー等のハーブ類に含まれるカル
ノソールやロズマノール等の有効性が確認されている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】アレルギー反応やそれ
に伴う炎症反応を阻害・抑制し、アレルギー性疾患や炎
症性疾患を予防・治療するには、その原因となるヒスタ
ミン遊離、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼに
よるサイクリックＡＭＰの分解、活性酸素や生体内ラジ
カルの発生等を阻害・抑制することが有用であると考え
られる。また、活性酸素や生体内ラジカルの発生の阻害
・抑制により、過酸化脂質の生成の抑制等を通じて皮膚
のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を予防・治療で
きるものと考えられる。

【０００８】そこで、本発明は、第一に、天然物の中か
らヒスタミン遊離抑制作用を有するものを見出し、それ
を有効成分としたヒスタミン遊離抑制剤を提供すること
を目的とする。また、本発明は、第二に、天然物の中か
らサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を
有するものを見出し、それを有効成分としたサイクリッ
クＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を提供することを
目的とする。さらに、本発明は、第三に、天然物の中か
ら活性酸素消去作用を有するものを見出し、それを有効
成分とした活性酸素消去剤を提供することを目的とす
る。さらに、本発明は、第四に、天然物の中からラジカ
ル消去作用を有するものを見出し、それを有効成分とし
たラジカル消去剤を提供することを目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明により提供されるヒスタミン遊離抑制剤、サ
イクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸
素消去剤またはラジカル消去剤は、五斂子（Averrhoa c
arambola L.）の葉部からの抽出物を有効成分として含
有することを特徴とする。

【００１０】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡ
ＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤また
はラジカル消去剤の有効成分である「五斂子の葉部から
の抽出物」には、抽出処理によって五斂子の葉部から得
られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽
出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製
物若しくは精製物のいずれもが含まれる。

【００１１】抽出処理の際に抽出原料として使用するも
のは、五斂子（学名：Averrhoa carambola L.；生薬
名：陽桃）の葉部である。葉部には、完全葉の他、葉の
一部（例えば葉身、葉柄、托葉など）が含まれる。ま
た、五斂子の茎部も抽出原料として使用することができ
るので、茎部を葉部とともに抽出原料とすることや、茎
部のみを抽出原料とすることも可能である。

【００１２】五斂子はカタバミ科に属し、新鮮な果実は
食用される。五斂子は、中国では紀元前から文献に記載
され、その果実は断面が星形のことからスターフルーツ
とも呼ばれている。五斂子は沖縄、中国東南部や雲南そ
の他熱帯各地で栽培されており、これらの地域から容易
に入手することができる。

【００１３】抽出原料として使用する五斂子の葉部は、
採取後ただちに乾燥し、中切または細切したもの、ある
いは粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行っても
よいし、通常使用される乾燥器を用いて行ってもよい。
五斂子の葉部は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒に
よって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用
してもよい。脱脂等の前処理を行なうことにより、五斂
子の葉部の極性溶媒による抽出処理を効率よく行なうこ
とができる。

【００１４】抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶
媒を使用するのが好ましい。五斂子の葉部に含まれるヒ
スタミン遊離抑制作用、サイクリックＡＭＰホスホジエ
ステラーゼ阻害作用、活性酸素消去作用またはラジカル
消去作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出
処理によって容易に抽出することができる。

【００１５】好適な抽出溶媒の具体例としては、水、低
級脂肪族アルコール、含水の低級脂肪族アルコール等を
例示でき、これらを単独で、またはこれら２種以上の混
合物として使用することができる。好適な低級脂肪族ア
ルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、
プロパノール、イソプロパノール、1,3−ブチレングリ
コール、エチレングリコール、グリセリン、プロピレン
グリコール、イソプレングリコール等を例示することが
できる。これらの抽出溶媒は取り扱いが容易であり、抽
出作業を比較的容易に行なうことができる。

【００１６】抽出溶媒として使用し得る水には、純水、
水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等
の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に
施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、
ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれ
る。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る
水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リ
ン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

【００１７】２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒と
して使用する場合、その混合比は適宜調整することがで
きる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を
使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合
比を７：３〜２：８（重量比）とすることができる。

【００１８】抽出処理は、五斂子の葉部に含まれる可溶
性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、
常法に従って行なうことができる。抽出処理の際には、
特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流
加熱下において任意の装置を使用することができる。

【００１９】例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出
原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を溶出
させる。この際、抽出条件は抽出原料等に応じて適宜調
整し得るが、抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍
量（重量比）あり、抽出時間は通常１〜３時間であり、
抽出温度は通常、常温〜９５℃である。

【００２０】抽出処理により可溶性成分を溶出させた
後、ろ過して抽出残渣を除くことによって、抽出液を得
ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液
若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、またはこれらの粗
精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希
釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。例え
ば、抽出液を遠心分離などにより固液分離して目的とな
る抽出物を得ることができる。

【００２１】得られた抽出液はそのままでもヒスタミン
遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ
阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消去剤として使
用することができるが、活性が低い場合もあるため、濃
縮液またはその乾燥物としたものの方が利用しやすい。
例えば、適当に濃縮したエキス状物や、スプレードライ
等の方法を用いてさらに乾固させた乾燥エキスとして使
用することができる。抽出液の乾燥物を得るにあたって
は、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキ
ストリン等のキャリアーを添加してもよい。

【００２２】また、五斂子の葉部は特有の匂いと味を有
しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱
色、脱臭等を目的とする精製を行なうことも可能である
が、化粧料や飲食品に添加する場合には大量に使用する
ものではないから、未精製のままでも実用上支障はな
い。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イ
オン交換樹脂処理等によって行なうことができる。

【００２３】以上のようにして得られる五斂子の葉部か
らの抽出物は、ヒスタミン遊離抑制作用、サイクリック
ＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、活性酸素消去作
用またはラジカル消去作用を有する。

【００２４】五斂子の葉部からの抽出物は、そのままで
もヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホスホジ
エステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカル消
去剤として使用することができるが、常法に従って製剤
化して使用することもできる。製剤化する場合、保存や
取り扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデ
キストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他
任意の助剤を添加することができる。五斂子の葉部から
の抽出物は、製剤化により錠剤、カプセル剤、散剤、液
剤等、任意の剤形とすることができ、外皮用剤、内服液
剤、内服固形剤注射剤、座剤等として使用することがで
きる。また、五斂子の葉部からの抽出物は、飲食品、皮
膚外用剤、化粧料、医薬部外品、医薬品等の構成成分と
して広く利用することができる。

【００２５】本発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリ
ックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去
剤またはラジカル消去剤の投与量は、用法、患者の年
齢、性別、疾患の程度等により適宜決定することができ
る。

【００２６】本発明のヒスタミン遊離抑制剤は、ヒスタ
ミンの遊離を抑制することができる。本発明のヒスタミ
ン遊離抑制剤によれば、Ｉ型アレルギー反応に伴う肥満
細胞からのヒスタミンの遊離を抑制することができ、こ
れによりヒスタミンによって引き起こされる炎症反応を
抑制することができる。したがって、本発明のヒスタミ
ン遊離抑制剤によれば、ヒスタミン遊離が関与するアレ
ルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療することができ
る。

【００２７】本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエス
テラーゼ阻害剤は、サイクリックＡＭＰホスホジエステ
ラーゼの活性を阻害することができる。血小板の凝集は
血小板中のサイクリックＡＭＰの濃度と関係があり、サ
イクリックＡＭＰホスホジエステラーゼによってサイク
リックＡＭＰが分解されてサイクリックＡＭＰの濃度が
低下すると、血小板は凝集しやすくなる。そして、血小
板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ
_２の活性化を招き、それにより放出されたロイコトリエ
ンＢ_４やプロスタグランジンＥ_２等が炎症反応を引き起
こす。したがって、本発明のサイクリックＡＭＰホスホ
ジエステラーゼ阻害剤によれば、サイクリックＡＭＰホ
スホジエステラーゼの作用を抑制して血小板凝集を防止
でき、これにより血小板凝集が関与する炎症反応を抑制
することができる。また、本発明のサイクリックＡＭＰ
ホスホジエステラーゼ阻害剤によれば、血小板凝集が関
与するアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療する
ことができる。

【００２８】本発明の活性酸素消去剤は、活性酸素を消
去することができる。ここで、「活性酸素」には、スー
パーオキサイド、過酸化水素、ヒドロキシラジカル、一
重項酸素等が含まれる。本発明の活性酸素消去剤は、こ
れらの活性酸素種のうち特に過酸化水素を消去するため
に好適に使用することができる。活性酸素は、アレルギ
ー性炎症を生じさせるだけでなく、生体内の膜や組織を
構成する生体内分子を攻撃し、種々の炎症性疾患を誘発
する。したがって、本発明の活性酸素消去剤によれば、
活性酸素が関与するアレルギー性疾患や炎症性疾患を予
防・治療することができる。また、活性酸素は、コラー
ゲン等の生体組織を分解、変性あるいは架橋したり、油
脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成し
たりして、皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化
を引き起こす。したがって、本発明の活性酸素消去剤に
よれば、過酸化脂質の生成の抑制等を通じて、皮膚のし
わ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を防止することがで
きる。

【００２９】本発明のラジカル消去剤は、ラジカルを消
去することができる。ここで、「ラジカル」とは、不対
電子を１つまたはそれ以上有する分子または原子を意味
する。本発明のラジカル消去剤が消去し得るラジカルは
特に限定されないが、本発明のラジカル消去剤は、スー
パーオキサイド、ヒドロキシラジカル、ＤＰＰＨ等のラ
ジカルを消去するために好適に使用することができる。
スーパーオキサイド、ヒドロキシラジカル等の生体内ラ
ジカルは、アレルギー性炎症を生じさせるだけでなく、
生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、種々
の炎症性疾患を誘発する。したがって、本発明のラジカ
ル消去剤によれば、生体内ラジカルが関与するアレルギ
ー性疾患や炎症性疾患を予防・治療することができる。
また、生体内ラジカルは、皮膚の老化に関与する過酸化
脂質を生成する根源であり、特に、ヒドロキシラジカル
は、生体内に存在する脂質、蛋白質、核酸または糖質等
と直ちに化学反応し、細胞膜の脂質の過酸化を引き起こ
す。したがって、本発明のラジカル消去剤によれば、生
体内ラジカルによる過酸化脂質の生成の抑制等を通じ
て、皮膚のしわ形成や弾力性低下等の皮膚の老化を防止
することができる。

【００３０】本発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリ
ックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去
剤またはラジカル消去剤は、患者に直接投与（例えば経
口投与）してもよいが、皮膚外用剤、飲食品等に配合し
て使用することが好ましい。

【００３１】ここで、「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用
される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外
品、医薬品、浴用剤等が含まれる。皮膚外用剤の具体例
としては、肌に対するものとして、軟膏、パップ、クリ
ーム、乳液、ローション、パック、ゼリー等を例示で
き、頭皮に対するものとして、トニック、リンス、シャ
ンプー、アストリンゼント等を例示することができる。

【００３２】また、飲食品の具体例としては、清涼飲
料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料
（これら飲料の濃縮液および調製用粉末を含む）；アイ
スクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の氷菓；そ
ば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、シュウマイの
皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガ
ム、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリ
ー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼ
こ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工
乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、天ぷら油、マーガリ
ン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、
ドレッシング等の油脂および油脂加工食品；ソース、た
れ等の調味料；錠剤状、顆粒状等の種々の形態の健康・
栄養補助食品類；その他スープ、シチュー、サラダ、惣
菜、漬物、等を例示することができる。

【００３３】皮膚外用剤への配合量は、五斂子の葉部か
らの抽出物の活性の強さや、当該抽出物を配合する皮膚
外用剤の種類によって適宜調整し得るが、通常０．００
１〜１．０重量％である。また、飲食物への配合量は、
五斂子の葉部からの抽出物の摂取量が１日あたり１〜１
０００ｍｇとなるように調整することが好ましい。

【００３４】以上に説明したヒスタミン遊離抑制剤、サ
イクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、活性酸
素消去剤またはラジカル消去剤は、ヒトに対して好適に
適用するものであるが、ヒト以外の動物に対して適用す
ることもできる。

【００３５】

【実施例】以下、本発明に係る実施例を示し、本発明に
ついて更に詳細に説明する。

【００３６】〔製造例１〕五斂子（学名：Averrhoa car
ambola L.）の葉部の粗粉砕物300gを抽出溶媒2000mlに
投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、70℃に保った。
その後ろ過し、ろ液を40℃で減圧下にて濃縮し、さらに
減圧乾燥機で乾燥して五斂子の葉部からの抽出物を得
た。４種類の抽出溶媒を用いて上記抽出処理を行ったと
ころ、抽出物の収率は表１のとおりであった。なお、抽
出溶媒が混合物の場合、以下に示す混合比は重量基準に
よるものである。

【００３７】 ［表１］試 料 抽 出 溶 媒 抽出物収率（重量％） １ 水 ２５ ２ エタノール/水（1/1） ２３ ３ エタノール １８ ４ プロパノール/水（1/1） １２

【００３８】〔試験例１〕過酸化水素消去作用（ＳＯＤ
様活性）の試験 製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノー
ル抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）およ
び50％プロパノール抽出物（試料４）について、以下の
方法で過酸化水素消去作用を試験した。

【００３９】（１）過酸化水素の標準溶液（濃度1.5m
M）10μLに、試料１〜４をそれぞれ含有する試料溶液10
μLを加え、37℃で20分間インキュベートした後、発色
試薬［DA-64（和光純薬）を10mMおよびトライトンX-100
を0.5％含む0.1M PIPES緩衝液（pH7.0）に、ペルオキシ
ダーゼ溶液（100unit/mL，和光純薬）1mLを加え、全量
を100mLに調整したもの］2.98mLを添加し、37℃で５分
間インキュベートした後、波長727nmにおける吸光度を
測定した。以下、この吸光度を「過酸化水素標準溶液添
加、試料溶液添加時の吸光度」という。

【００４０】（２）上記（１）において、過酸化水素の
標準溶液を添加しない場合についても同様にして吸光度
を測定した。以下、この吸光度を「過酸化水素標準溶液
無添加、試料溶液添加時の吸光度」という。

【００４１】（３）上記（１）および（２）において、
試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても
同様にして吸光度を測定した。以下、これらの吸光度を
それぞれ「過酸化水素標準溶液添加、試料溶液無添加時
の吸光度」および「過酸化水素標準溶液無添加、試料溶
液無添加時の吸光度」という。

【００４２】（４）次式に基づいて、試料１〜４の過酸
化水素消去率（％）を求めた。

【００４３】

【式１】過酸化水素消去率（％）＝〔１−(C−D)/(A−
B)〕×100

【００４４】なお、式中、「Ａ」は過酸化水素標準溶液
添加、試料溶液無添加時の吸光度を、「Ｂ」は過酸化水
素標準溶液無添加、試料溶液無添加時の吸光度を、
「Ｃ」は過酸化水素標準溶液添加、試料溶液添加時の吸
光度を、「Ｄ」は過酸化水素標準溶液無添加、試料溶液
添加時の吸光度を表す。

【００４５】試料溶液の終濃度を段階的に変化させて過
酸化水素消去率（％）の測定を行ない、過酸化水素消去
率が50％になる試料濃度(ppm；μg/mL)を内挿法により
求めた。試料１〜３の過酸化水素50％消去濃度は以下の
表２に示すとおりであった。

【００４６】

【００４７】表２に示す結果から、五斂子の葉部からの
水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料
２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノ
ール抽出物（試料４）はいずれも過酸化水素消去作用
（ＳＯＤ様活性）を有することが示された。また、これ
らの抽出物の中でも特に50％エタノール抽出物（試料
２）が優れた過酸化水素消去作用（ＳＯＤ様活性）を有
することが示された。また、抽出物の濃度を変化させる
ことにより、過酸化水素消去作用（ＳＯＤ様活性）の強
さを変化させることができることが示された。

【００４８】〔試験例２〕ラジカル消去作用 製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノー
ル抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）およ
び50％プロパノール抽出物（試料４）について、非常に
安定なラジカルであるDPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhyd
razyl）を使用して以下の方法によりラジカル消去作用
を試験した。

【００４９】（１）1.5×10^-4M DPPH（1,1-Diphenyl-2-
picrylhydrazyl）エタノール溶液３mLに、試料１〜４を
それぞれ含有する試料溶液３mLを加え、直ちに容器を密
栓して振り混ぜた後、30分間静置した。その後、520nm
における吸光度を測定した。以下、この吸光度を「試料
溶液添加時の吸光度」という。

【００５０】（２）コントロールとして、試料溶液の代
わりに試料を溶解した溶媒を用いた場合についても同様
にして520nmにおける吸光度を測定した。以下、この吸
光度を「コントロールの吸光度」という。

【００５１】（３）ブランクとして、エタノール３mLに
試料溶液３mLを加えた後、直ちに520nmにおける吸光度
を測定した。以下、この吸光度を「ブランクの吸光度」
という。

【００５２】（４）次式に基づいて、試料１〜４のラジ
カル消去率（％）を求めた。

【００５３】

【式２】ラジカル消去率（％）＝〔１−(B−C)/A〕×10
0

【００５４】なお、式中、「Ａ」はコントロールの吸光
度を、「Ｂ」は試料溶液添加時の吸光度を、「Ｃ」はブ
ランクの吸光度を表す。

【００５５】試料濃度の試料濃度を段階的に変化させて
ラジカル消去率（％）を測定し、ラジカル消去率が50％
になる試料濃度（ppm；μg/mL）を内挿法により求め
た。試料１〜４のラジカル50％消去濃度は以下の表３に
示すとおりであった。

【００５６】

【００５７】表３に示す結果から、五斂子の葉部からの
水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料
２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノ
ール抽出物（試料４）はいずれもラジカル消去作用を有
することが示された。また、これらの抽出物の中でも特
に50％エタノール抽出物（試料２）が優れたラジカル消
去作用を有することが示された。また、抽出物の濃度を
変化させることにより、ラジカル消去作用の強さを変化
させることができることが示された。

【００５８】〔試験例３〕ヒスタミン遊離抑制作用の試
験 製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノー
ル抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）およ
び50％プロパノール抽出物（試料４）について、以下の
方法でヒスタミン遊離抑制作用を試験した。なお、以下
の方法は、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘ
キソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニ
ダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する
方法である。

【００５９】（１）25mLの培養フラスコに入れた培地
（15％FBS添加S-MEM培地；以下同じ）にRBL-2H3細胞 1.
0×10⁶個を播種し、37℃、5％CO₂-95％airの下で４日間
培養した。次いで、トリプシン処理し、遠心分離（800r
pmで４分間）して細胞を集めた。得られた細胞を4.0×1
0⁵cell/mLで培地に懸濁し、そこにマウスモノクローナ
ル抗ジニトロフェニル基IgE（DNP-Specific IgE）を0.5
μg/mLの濃度で添加した。この細胞浮遊液を96ウェルプ
レートの各ウェルに100μLずつ播種し、37℃、5％CO₂-9
5％airの下で24時間培養した。培養終了後、各ウェル中
の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で２回洗浄した。
次いで、上記緩衝液30μLと試料１〜４をそれぞれ含有
する試料溶液10μLとを加え、37℃で10分間インキュベ
ートした後、ジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン
（DNP-BSA）10μLを加え、さらに37℃で15分間インキュ
ベートした。その後、氷冷下で上清10μLを新たな96ウ
ェルプレートに移し替え、これに１mmol/L p-ニトロフ
ェニル-N-アセチル-β-D-グルコサミド溶液10μLを加
え、37℃で１時間インキュベートした。反応終了後、0.
1mol/L Na₂CO₃−NaHCO₃溶液250μLを加え、マイクロプ
レートリーダーにて650nmを対照に415nmにおける吸光度
を測定した（以下、この吸光度を「吸光度Ａ」とい
う）。

【００６０】（２）試料溶液の代わりにシラガニアン緩
衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度
の測定を行なった（以下、この吸光度を「吸光度Ｂ」と
いう）。

【００６１】（３）細胞上清と0.1mol/L Na₂CO₃−NaHCO
₃溶液を同様の処理で反応させたものについても吸光度
の測定を行なった（以下、この吸光度を「吸光度Ｃ」と
いう）。

【００６２】（４）DNP-BSAの代わりにシラガニアン緩
衝液を加えたものについても同様の処理と吸光度の測定
を行なった（以下、この吸光度を「吸光度Ｄ」とい
う）。

【００６３】（５）次式に基づいて、試料１〜４のヘキ
ソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を求めた。

【００６４】

【式３】ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−
〔(A−C−D)/(B−D)〕｝×100

【００６５】なお、式中、「Ａ」は吸光度Ａを、「Ｂ」
は吸光度Ｂを、「Ｃ」は吸光度Ｃを、「Ｄ」は吸光度Ｄ
を表す。

【００６６】試料溶液の試料濃度を段階的に変化させて
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を測定し、ヘキソ
サミニダーゼの遊離を50％阻害する試料濃度ＩＣ_５０(p
pm；μg/mL)を内挿法により求めた。試料１〜４のＩＣ
_５０は以下の表４に示すとおりであった。

【００６７】

【００６８】表４に示す結果から、五斂子の葉部からの
水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料
２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノ
ール抽出物（試料４）はいずれもヒスタミン遊離抑制作
用を有することが示された。また、これらの抽出物の中
でも特に50％エタノール抽出物（試料２）が優れたヒス
タミン遊離抑制作用を有することが示された。また、抽
出物の濃度を変化させることにより、ヒスタミン遊離抑
制作用の強さを変化させることができることが示され
た。

【００６９】〔試験例４〕サイクリックＡＭＰホスホジ
エステラーゼ阻害作用の試験 製造例１で得られた水抽出物（試料１）、50％エタノー
ル抽出物（試料２）、エタノール抽出物（試料３）およ
び50％プロパノール抽出物（試料４）について、以下の
方法でサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作
用を試験した。

【００７０】（１）５mM塩化マグネシウムを含有する50
mMトリス塩酸緩衝液（pH7.5）0.2mLにウシ胎児血清アル
ブミン溶液（2.5mg/mL）0.1mLおよびサイクリックＡＭ
Ｐホスホジエステラーゼ溶液（0.1mg/mL）0.1mLを加
え、さらに試料１〜４をそれぞれ含有する試料溶液0.05
mLを加え、37℃で５分間インキュベートした。次いで、
サイクリックＡＭＰ溶液（0.5mg/mL）0.05mLを加え、37
℃で60分間反応させた。反応後、沸騰水上で３分間煮沸
して反応を停止させ、４℃で遠心分離し、上清中の反応
基質（サイクリックＡＭＰ）を高速液体クロマトグラフ
ィーにより定量した。

【００７１】（２）試料溶液を加えずに同様の酵素反応
と反応基質の定量を行ない、試料無添加時の反応基質量
に対する試料添加時の反応基質量の比率より、試料１〜
４のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率
（％）を求めた。

【００７２】（３）試料溶液の試料濃度を段階的に変化
させてサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻
害率（％）を測定し、サイクリックＡＭＰホスホジエス
テラーゼの活性を50％阻害する試料濃度ＩＣ_５０（pp
m；μg/mL）を内挿法により求めた。試料１〜４のＩＣ
_５０（ppm）は以下の表５に示すとおりであった。

【００７３】

【００７４】表５に示す結果から、五斂子の葉部からの
水抽出物（試料１）、50％エタノール抽出物（試料
２）、エタノール抽出物（試料３）および50％プロパノ
ール抽出物（試料４）はいずれもサイクリックＡＭＰホ
スホジエステラーゼ阻害作用を有することが示された。
また、これらの抽出物の中でも特に50％エタノール抽出
物（試料２）が優れたサイクリックＡＭＰホスホジエス
テラーゼ阻害作用を有することが示された。また、抽出
物の濃度を変化させることにより、サイクリックＡＭＰ
ホスホジエステラーゼ阻害作用の強さを変化させること
ができることが示された。

【００７５】〔試験例５〕肌荒れ改善作用（皮膚の老化
防止・改善作用）の試験 製造例１で得られた五斂子の葉部からの５０％エタノー
ル抽出物（試料２）を配合した乳液（以下「実施例乳
液」という。）を常法に従って調製した。実施例乳液の
組成を以下に示す。

【００７６】 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２） ０．１ｇ セチルアルコール ０．５ｇ ミツロウ ２．０ｇ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（10E.0） １．０ｇ モノステアリン酸グリセリル １．０ｇ ヒアルロン酸 ０．１ｇ プロピレングリコール ５．０ｇ エタノール ３．０ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．３ｇ 香料 ０．０３ｇ 精製水 残部（全量を１００mlとする）

【００７７】実施例乳液と、五斂子の葉部からの抽出物
を含まないほかは実施例乳液と同じ組成からなる比較例
乳液とについて、下記の評価試験を行った。 被験者：２２〜４３歳の女性多数の中から、皮溝・皮丘
が消え、広範囲の角質がめくれている（表６に示す評価
が１）、または皮溝・皮丘が不鮮明で、角質が部分的に
めくれている（表６に示す評価が２）、肌荒れと判定さ
れた２０名を選抜して被験者とした。 塗布試験：各被験者に、顔の右半分には実施例乳液を、
左半分には比較例乳液を、朝夕各１回、３０日間塗布さ
せた。

【００７８】 [表６]評点 評 価 １ 皮溝・皮丘が消え、広範囲の角質がめくれている。（肌荒れ状態） ２ 皮溝・皮丘が不鮮明。角質が部分的にめくれている。（肌荒れ状態） ３ 皮溝・皮丘が認められるが平坦である。（普通肌） ４ 皮溝・皮丘が鮮明である。（比較的美しい肌） ５ 皮溝・皮丘が極めて鮮明で整っている。（美しい肌）

【００７９】[判定１：肌荒れ改善効果]塗布試験終了
後、シルフロ（FLEXICL DEVELOPMENTS LTD製）によるレ
プリカ法を用いて顔のレプリカをとり、５０倍の顕微鏡
で皮紋の状態および角質剥離の状態を観察し、表６に示
す評価基準で肌の状態を判定した。判定結果を表７に示
す。

【００８０】 [表７]評点 試験開始前 実施例乳液塗布部 比較例乳液塗布部 １ １２名 ０名 ８名 ２ ８名 ０名 ８名 ３ ０名 ６名 ４名 ４ ０名 ９名 ０名 ５ ０名 ５名 ０名

【００８１】表７に示されるように、実施例乳液を塗布
した領域は、比較例乳液を塗布した領域に比べて顕著に
肌荒れ（皮膚の老化）が改善された。

【００８２】[判定２・官能評価]使用感と肌への効果に
ついて、実施例乳液と比較例乳液とを比較した場合の優
劣を被験者全員に質問した。回答の集計結果を表８に示
す。

【００８３】 [表８]評 価 項 目 実施例乳液が良い 比較例乳液が良い 優劣なし 肌へのなじみ １３名 ５名 ２名 しっとり感 １９名 ０名 １名 肌へののび １５名 ３名 ２名 肌荒れ改善の満足感 １７名 ２名 １名 肌色改善の満足感 １４名 ４名 ２名 シワの数と深さの改善 １９名 １名 ０名

【００８４】表８に示される結果より、官能評価によっ
ても、上記判定１と同様の効果と、優れた使用感とが確
認された。

【００８５】判定１および２の結果より五斂子の葉部か
らの抽出物を配合した皮膚化粧料が皮膚の老化防止・改
善作用（肌荒れ改善作用）を有するとともに、皮膚に適
用した場合の使用感と安全性に優れていることが確認さ
れた。

【００８６】〔配合例〕製造例１で得られた五斂子の葉
部からの抽出物を用いて以下の化粧料、食品および薬剤
を製造したところ、いずれの場合においても、良好な化
粧料、食品および薬剤を得ることができた。

【００８７】（配合例１ 乳液）下記の組成の乳液を常
法により製造した。 ホホバオイル ４ｇ オリーブオイル ２ｇ スクワラン ２ｇ セタノール ２ｇ モノステアリン酸グリセリル ２ｇ ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.0） ２．５ｇ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.0) ２ｇ １，３−ブチレングリコール ３ｇ アスコルビン酸リン酸マグネシウム ０．１ｇ カミツレ抽出物 ０．１ｇ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ 黄杞抽出物 ０．１ｇ シャクヤク抽出物 ０．１ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ 香料 ０．０５ｇ 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１） １ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００８８】（配合例２ 化粧水）下記の組成の化粧水
を常法により製造した。 グリセリン ３ｇ １，３−ブチレングリコール ３ｇ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.0) ０．５ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ クエン酸 ０．１ｇ クエン酸ソーダ ０．１ｇ 油溶性甘草抽出物 ０．０５g 酢酸トコフェロール ０．０５ｇ アロエ抽出物 ０．１ｇ マロニエエキス ０．１ｇ クジン抽出物 ０．１ｇ シラカバ抽出物 ０．１ｇ 香料 ０．０５ｇ 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２） ０．５ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００８９】（配合例３ クリーム）下記の組成のクリ
ームを常法により製造した。 流動パラフィン ５ｇ サラシミツロウ ４ｇ セタノール ３ｇ スクワラン １０ｇ ラノリン ２ｇ ステアリン酸 １ｇ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.0) １．５ｇ モノステアリン酸グリセリル ３ｇ １，３−ブチレングリコール ６ｇ パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ コンキオリン加水分解物 ０．１ｇ ニンジンエキス ０．１ｇ 香料 ０．１ｇ 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料３） ２ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００９０】（配合例４ パック）下記の組成のパック
を常法により製造した。 ポリビニルアルコール １５ｇ ポリエチレングリコール ３ｇ プロピレングリコール ７ｇ エタノール １０ｇ パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ チンピ抽出液 ０．１ｇ ローヤルゼリー抽出液 ０．１ｇ ソウハクヒエキス ０．１ｇ コメヌカ抽出液 ０．１ｇ 香料 ０．０５ｇ 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料４） ５ｇ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【００９１】（配合例５ 健康・栄養補助食品）下記の
混合物を打錠して、錠剤状健康・栄養補助食品を製造し
た。 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１） １００重量部 コラーゲン ３０重量部 ムコ多糖・タンパク(コンドロイチン) １０重量部 ヒアルロン酸 １重量部 ハス胚芽抽出物 ２０重量部 月桃葉茎抽出物 ２０重量部 黒米抽出物 ２０重量部 甘草抽出物(グリチルリチンを含む) １０重量部 ミルク蛋白加水分解物(アミノ酸、低分子ペプチドを含む)１０重量部 ビタミンＢ群混合粉末(全ビタミンＢ群を含む) ４重量部 ビタミンＣ １０重量部 粉糖（ショ糖） ５３重量部 グリセリン脂肪酸エステル １２重量部

【００９２】（配合例６ 健康・栄養補助食品）下記の
混合物を顆粒状に形成して健康・栄養補助食品を製造し
た。 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２） ２００重量部 ハス胚芽抽出物 ５０重量部 真珠蛋白加水分解(各種アミノ酸、ペプチドを含む) １５重量部 シルク蛋白加水分解物（各種アミノ酸、ペプチドを含む）１５重量部 大豆イソフラボン １０重量部 紫米抽出物 ５０重量部 赤ワインエキスパウダー(プロシアニジンを含む) ３０重量部 酵母エキス １０重量部 (グルタチオン、核酸、アミノ酸、ビタミンを含む) ザクロ種子抽出物 １０重量部 小麦胚芽抽出物 １０重量部 (ビタミン、クロム、セレン、モリブデンを含む) ＤＮＡ ３０重量部 ビートオリゴ糖 １０６０重量部 ステビア抽出物 １０重量部

【００９３】（配合例７ 健康・栄養補助食品）下記の
混合物をゼラチンカプセル化して、錠剤状健康・栄養補
助食品を製造した。 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１） ５０重量部 ハス胚芽抽出物 １５重量部 セラミド ３０重量部 リン脂質(レシチン) １０重量部 ビタミンＥ(トコフェロール) １７重量部 マルチカロチン(αおよびβカロチン、ルテイン、リコペン)１０重量部 赤米抽出物（シクロアルテノールエステルを含む） １５重量部 オクタコサノール １重量部 植物ステロール ５重量部 シソの実油(αリノレン酸を含む) ２０重量部 精製魚油(ＤＨＡ、ＥＰＡを含む) ２０重量部 ごま油(リグナン化合物を含む) ２０重量部 オリーブ油 １０重量部 大豆、菜種混合油 ６５重量部 グリセリン脂肪酸エステル １２重量部

【００９４】（配合例８ 清涼飲料水）下記の混合物を
常法に従い混合し清涼飲料水を製造した。 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料１） １重量部 ハス胚芽抽出物 １重量部 ローヤルゼリー ３重量部 水溶性コラーゲン ８重量部 ハトムギエキス １重量部 高麗ニンジンエキス １重量部 プラセンタ(胎盤)エキス １重量部 プエラリアエキス １重量部 パープルヤムエキス １重量部 オリゴ糖 ５重量部 ショ糖 １０重量部 プルーン果汁 ２重量部 ザクロ果汁 ５重量部 グレープフルーツ果汁 １０重量部 ビタミンＣ １重量部 グレープフルーツフレーバー ０．７重量部 水 残部（全量を１００重量部とする）

【００９５】（配合例９ キャンディー）下記の混合物
を常法に従い混合しキャンディーを製造した。 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２） ２重量部 ハス胚芽抽出物 １重量部 水あめ ３０重量部 甘草エキス ３重量部 甜茶エキス １重量部 ブルーベリーエキス １重量部 ストロベリー１／５濃縮果汁 １重量部 赤キャベツ色素 ０．０５重量部 レモン果汁 ０．５重量部 水 ５重量部

【００９６】(配合例１０ 錠剤)下記成分分量に基づ
き、錠剤製造の常法により処理して錠剤を製造した。

【００９７】 五斂子葉部抽出物（製造例１の試料２） ０．２重量部 乳糖 ９５．０重量部 ステアリン酸マグネシウム ０．０１重量部 着色料 微量 香料 適量

【００９８】

【発明の効果】本発明によれば、ヒスタミン遊離抑制
剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、
活性酸素消去剤またはラジカル消去剤が提供される。本
発明のヒスタミン遊離抑制剤、サイクリックＡＭＰホス
ホジエステラーゼ阻害剤、活性酸素消去剤またはラジカ
ル消去剤は、アレルギー性疾患や炎症性疾患等の予防・
治療、皮膚の老化（例えば、皮膚のしわ形成や弾力性低
下等）の予防・治療などに有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ １１３ １１３ (72)発明者 周 艶陽 広島県尾道市向東町14703−10 丸善製薬 株式会社内 (72)発明者 岸田 直子 広島県尾道市向東町14703−10 丸善製薬 株式会社内 Ｆターム(参考） 4C088 AB12 AC05 BA08 CA03 NA14 ZA89 ZA91 ZB11 ZB13 ZC02 ZC13 ZC20

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉
   部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴と
   するヒスタミン遊離抑制剤。
2. 【請求項２】 五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉
   部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴と
   するサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤。
3. 【請求項３】 五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉
   部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴と
   する活性酸素消去剤。
4. 【請求項４】 五斂子（Averrhoa carambola L.）の葉
   部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴と
   するラジカル消去剤。