JP2001522241A

JP2001522241A - 診断方法および試薬

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Publication number: JP2001522241A
Application number: JP54254598A
Authority: JP
Inventors: レーウウェン，フレデリクウェー．ファン; ヘー．フロスフェルト，フランクリン; ペーテルヘンリビュルバフ，ヨハネス
Original assignee: ロイヤルネザーランズアカデミーオブアーツアンドサイエンシズ; エラスムスユニバーシテイロッテルダム; ユニバーシテイオブユトレヒト
Priority date: 1997-04-10
Filing date: 1998-04-02
Publication date: 2001-11-13
Also published as: WO1998045322A3; EP0971952A2; AU7071598A; WO1998045322A2; CA2287084A1

Abstract

(57)【要約】本発明はフレームシフト突然変異を起こす転写変異含有ＲＮＡ分子を原因とする、あるいはそれに関連する疾患の診断もしくは治療の方法および試薬に関する。該診断方法は患者から体液もしくは組織サンプルを採取し、該サンプルにつきフレームシフト突然変異を有するＲＮＡ分子またはそれによってエンコードされたタンパク質が存在するか否か分析する工程からなり、そこでの突然変異ＲＮＡ分子またはエンコードされたタンパク質の存在は疾病の兆候となる。治療処置は突然変異ＲＮＡ分子を細胞から選択的に除去する物質を投与することからなる。

Description

【発明の詳細な説明】診断方法および試薬発明の背景本発明はＲＮＡ分子内でのフレームシフト突然変異を起こす転写変異を原因とする、あるいはそれに関連する疾患の診断方法および試薬に関する。該診断方法は患者から体液もしくは組織サンプルを採取し、該サンプルにつきフレームシフト突然変異を有するＲＮＡ分子またはそれによってエンコードされたタンパク質が存在するか否か分析する工程からなり、そこでの突然変異ＲＮＡ分子またはエンコードされたタンパク質の存在は疾病の兆候となる。本発明の目的は転写突然変異の関与する疾患、特に加齢に関係する疾患の検出方法およびアッセイ法および/または治療法を提供することにあり、該疾患の罹患可能性は患者の加齢とともに増大する。本発明は細胞のＲＮＡ分子に起こる突然変異が原因の加齢関連疾患の検出および/または治療を意図するものである。該突然変異が訂正されない場合、当該疾患に至る。本発明のさらなる目的は、本発明により同定された疾患を治療するために、当該疾患に悩む患者あるいは当該疾患に罹り易い患者に酵素またはオリゴヌクレオチドなどの矯正薬を提供することである。さらに本発明のさらなる目的は、該疾患とヌクレオチド配列の突然変異ホットスポットとを関連付けることにより加齢関連疾患を同定する方法を提供することである。本発明の他の目的は以下の加齢関連疾患の同定、検出および治療に関する：癌（とりわけ、非遺伝性癌）および神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、ダウン症、前頭葉性痴呆（ピック病）、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）および多発タウ陽性糸状病変を伴う他の疾患（例えば、皮質基底変性、ボクサー痴呆、繊維濃縮体のみの痴呆、繊維濃縮体および石灰化を伴う痴呆、染色体１７にリンクするパーキンソン病を伴う前頭側頭痴呆、繊維濃縮体をもつゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカ病、筋緊張性異栄養症、ニーマン・ピック病タイプＣ，グアムのパーキンソン痴呆複合症、脳炎後遺症性パーキンソン病、および亜急性硬化性全脳炎）、パーキンソン病（ＰＤ）、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、多発性硬化症、レーヴィ小体をもつ痴呆、多系統萎縮症、ユビキチンと関連する他の封入体疾患（例えば、アレキサンダー病、アルコール性肝疾患、苔癬アミロイドーシス、および加齢のマリネスコ体と硝子質封入体）、II型糖尿病、および他の変性疾患、例えば、心臓血管疾患とリューマチ性関節炎。有効な治療のためには早期疾患の診断が重要である。アルツハイマー病は多くの場合加齢に関係する疾患である。ＡＤは大脳皮質、皮質下部領域および海馬での神経細胞の萎縮、およびプラーク、異栄養軸索、神経網糸および神経原繊維濃縮体の存在により特徴づけられる。殆どの場合、ＡＤが遺伝子の異常によるのか、あるいは環境因子によるのか、またはその両方なのかは解っていない。病原となる突然変異は未知である。本発明のさらなる目的は生存患者におけるＡＤの決定的診断を可能とするＡＤ診断試験法を提供することである。さらに、ＡＤは進行性の疾患であるため、防御措置が計れるようできるだけ早い時期にＡＤを診断することが望ましい。多数の診断法がＡＤ診断のためにこれまで提案されているが、その殆どはβ− アミロイド前駆体タンパク質に焦点を絞ったものである。例えば、米国特許４，６６６，８２９、４，８１６，４１６、および４，９３３，１５９を参照されたい。しかし、β−アミロイド沈着物は痴呆の徴候を示していない個体、とりわけ加齢者にも見出されている（J．Biol．Chem．、２６５、１５９７７頁、１９９０、および表３〜５参照）。従って、β−アミロイドタンパク質に基づく診断試験法はＡＤに対する特異性を欠いている。米国特許４，７２７，０４１では、Ｌ−dopa投与前駆活性試験に続くソマトトロビンとソマトメジン−Cの血清中レベル測定に基づくＡＤの診断試験法を記載している。国際特許出願WO ９４/０２８５１では、対となったらせん状フィラメントに親和性をもつ抗体を用い、脳脊髄液中の対となったらせん状フィラメントのレベルを定量するために、ＡＤを同定する方法を記載している。対となったらせん状フィラメントの存在はＡＤの兆候であると主張している。その他の診断方法は脳脊髄液中の「疾患特異マーカータンパク質」の同定に基づいている。国際特許出願WO ９５／０５６０４では、例えば、5種類の疾患特異タンパク質をその分子量により同定している。しかし、そのタンパク質の特異的本性は未知であり、ＡＤ病因との特定の関連性も未知である。従って、５種類の「疾患特異マーカータンパク質」は、もっと基本的な細胞性もしくは生化学的変化の結果として存在するのかも知れない。本発明のさらなる目的は、好ましくは疾患状態の早期にＡＤを検出し得る方法を提供することである。望ましいのは、直接当該疾患の原因となっている、あるいは疾患の発生機序に早期に関わっている、あるいは関わっていないとしても、それにも拘わらず該疾患の原因となる機序により、直接または間接的に産生されるタンパク質または物質を検出することである。かかるタンパク質または物質は該疾患の「原因」作因物質であり、病状の診断という意味では病状と「関係している」と言える。最近、シャーリントン（Sherrington）ら（Nature、３７５、２５４〜２６０頁、１９９５）はミスセンス突然変異をもつ遺伝子を染色体１４上に同定したが、その変異は常染色体優性早期発病ＡＤ例の３３％にまで関連している（表１）。ミスセンス突然変異はヌクレオチドの置換を意味し、通常は単一ヌクレオチドの置換であって、それにより対応するコドンでのアミノ酸置換に至る。シャーリントンらが開示しているミスセンス突然変異は以下の位置でのエンコードされたアミノ酸が変化することを予言する：（最初の推定開始コドンから番号を付す）コドン１４６のMetからLeu；コドン１６３のHisからArg；コドン２４６のAlaからGlu；コドン２８６のLeuからVal；コドン４１０のCysからTyr。これらの突然変異は早期発病ＡＤを同定するのに有用であろうと提案されている。上述のように、ＡＤ症例の大半が後期発病（６５歳以降；表１）であり、従って、ＡＤに罹患した個体の大半、特に後期発病ＡＤを同定するにはなお問題がある。これらの疾患がＲＮＡレベルで起こり、ＤＮＡレベルで起こるのではないという証拠はない。従って、先行技術の検出法は、変異したＤＮＡまたは変異したＤＮＡによりエンコードされたタンパク質に対してのものであり、ＲＮＡ分子の転写突然変異の存在を示すものではない。現在、ＡＤの治療に有用であると主張する物質は数多くある。しかし、これらの物質で達成した成功も非常に限られたものである。ＡＤを効果的に治療および／または防止する方法はなお必要とされる（アレンおよびバーンズ（Allen and Burns）、Journal of Psychopharmacology、９、４３〜５６頁、１９９５、参照）。発明の要約本発明はフレームシフト突然変異を含み、対応する突然変異タンパク質をエンコードするＲＮＡ分子が疾患の存在と相関するという観察に基づいている。本発明に従えば、フレームシフト突然変異を起こす１またはそれ以上の突然変異を有するＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患の診断方法が提供されるものであって、該方法は（イ）患者から体液もしくは組織サンプルなどの生体サンプルを採取し、（ロ）該サンプルにつきフレームシフト突然変異を有するＲＮＡ分子またはそれによってエンコードされた突然変異タンパク質が存在するか否か分析することを含み、そこでの突然変異されたＲＮＡ分子または突然変異タンパク質の存在を疾病の兆候とするものである。「突然変異」タンパク質とは突然変異ｍＲＮＡによりエンコードされたポリペプチドであって、少なくともその一部は、当初の開始コドンに関して本来のまたは野生型の読み枠のものからずれている読み枠内にあり、結果、野生型遺伝子配列の＋１または＋２読み枠によりエンコードされた異常カルボキシ末端部分をもつタンパク質を含むこととなる。このように、突然変異タンパク質はハイブリッドの野生型/ナンセンス・タンパク質を包含し、該タンパク質はその有するアミノ末端アミノ酸配列が野生型（Ｏ）読み枠によりエンコードされ、かつ、カルボキシ末端アミノ酸配列が＋１または＋２読み枠によりエンコードされていて、それが突然変異タンパク質のナンセンス部分となっている。野生型とナンセンスアミノ酸配列間の重なり点がフレームシフト突然変異を含むコドンである。本発明は罹患した個体からの組織中にかかる突然変異タンパク質が存在するという、あるいは１以上の突然変異タンパク質が蓄積しているという発見、また、当該突然変異タンパク質が該疾患の兆候として同定されるという発見に基づいている。また、本発明は突然変異タンパク質を生じる突然変異がＲＮＡレベルで起こり、ＤＮＡレベルで起こるのではないという発見にも基づいている。「原因となる、あるいはそれと関連する」とは、ＲＮＡ分子が疾患に対しての全部の原因あるいは一部の原因であるか、あるいはＲＮＡ分子が疾患の原因ではないが、病状を診断するという意味で病状と関連するという意味で用いる。フレームシフト突然変異を起こす１またはそれ以上の突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患とは以下の疾患である：非遺伝性癌、神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）；ダウン症候群；前頭葉性痴呆（ピック病）；進行性核上麻痺（ＰＳＰ）および多発タウ陽性糸状病変を伴う他の疾患、例えば、皮質基底変性、ボクサー痴呆、繊維濃縮体のみの痴呆、繊維濃縮体および石灰化を伴う痴呆、染色体１７にリンクするパーキンソン病を伴う前頭側頭痴呆、繊維濃縮体をもつゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカ病、筋緊張性異栄養症、ニーマン・ピック病タイプＣ、グアムのパーキンソン痴呆複合症、脳炎後遺症性パーキンソン病、および亜急性硬化性全脳炎；パーキンソン病（ＰＤ）筋萎縮性側索硬化症；ハンチントン病；多発性硬化症；レーヴィ小体をもつ痴呆、多系統萎縮症およびユビキチンと関連する他の封入体疾患、例えば、アレキサンダー病、アルコール性肝疾患、苔癬アミロイドーシス、および加齢のマリネスコ体と硝子質封入体；および他の変性疾患、例えば、心臓血管疾患、リューマチ性関節炎およびII型糖尿病。本発明により治療し得る癌は、これらに限られるものではないが、ホジキン病、急性および慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、および胃癌、または膀胱癌である。フレームシフト突然変異に導く転写突然変異を有するＲＮＡは、本明細書では「突然変異ＲＮＡ」と称するが、フレームシフト突然変異に導く少なくとも１つの転写突然変異を有するＲＮＡ分子である。該ＲＮＡ分子は一次転写体およびメッセンジャ−ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含むＲＮＡ分子である。用語「転写突然変異」とはＲＮＡレベルでは起こるが、ＤＮＡからＲＮＡが転写される際のＤＮＡには起こらない突然変異をいう。転写突然変異を同定するためには、ＲＮＡとＲＮＡが転写されるＤＮＡとを比較しなければならない。「フレームシフト突然変異」とは1個以上のヌクレオチドをオープンリーディングフレーム内で欠失または挿入することを言い、例えば、単一のヌクレオチドまたはジヌクレオチドの欠失または挿入であって、それによってコーディング領域の読み枠がヌクレオチド1個分または2個分シフトする。フレームシフト突然変異は、好ましくは1個のヌクレオチドもしくはジヌクレオチドが欠失して＋１または＋２のフレームシフト突然変異に導くことである。しかし、もしフレームシフト突然変異が結果として生じるならば、ヌクレオチド欠失は多数起こり得る。また、1個以上のヌクレオチドの挿入がフレームシフトを生じ、かかる突然変異もまた本発明の一部を形成する。フレームシフトを生じる他の遺伝子修飾も本発明の一部を形成する。例えば、ヌクレオチド配列の変化が異なる位置からの翻訳開始に導く、あるいはコーディング領域外の突然変異、例えば、イントロン内（もしＲＮＡ分子が一次転写物であるならば）、または５'もしくは３'非翻訳領域の突然変異が誤翻訳および突然変異タンパク質の産生に至る。突然変異はヌクレオチド、より好ましくはジヌクレオチドの欠失もしくは挿入がＲＮＡ分子のヌクレオチド配列ＧＡＧＡまたはその相補配列ＣＴＣＴと関連しており、とりわけ好ましいフレームシフト突然変異は、ＲＮＡのヌクレオチド配列がＧＡＧＡＸまたはＣＴＣＴＸ（ただし、ＸはＧ、Ａ、ＵまたはＣのうちの１つ）からなるものと会合している変異であり、好ましいモチーフはＧＡＧＡＧ、ＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＴおよびＧＡＧＡＡならびにＣＴＣＴＣ、ＣＴＣＴＧ、ＣＴＣＴＡおよびＣＴＣＴＴである。本明細書で使用する用語「ＧＡＧＡ突然変異」は、ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフそれ自体内、またはＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフそれ自体に隣接した（５−もしくは３'一末端であって、５〜１０ヌクレオチド内）の単一のヌクレオチドの挿入もしくは欠失またはジヌクレオチドの挿入もしくは欠失をいう。好適には、ジヌクレオチドの欠失はＧＡＧＡモチーフ内のＧＡ欠失、またはＧＡＧＡモチーフ直後のＧＴ欠失（すなわち、３'の１０ヌクレオチド内）、およびＣＴＣＴモチーフのＣＴ欠失である。さらに好適なのは、突然変異RNAが１個または２個のジヌクレオチド欠失を有し、それがＧＡＧＡ、ＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＧ、ＧＡＧＡＴまたはＧＡＧＡＡと、あるいはＣＴＣＴ、ＣＴＣＴＧ、ＣＴＣＴＣ、ＣＴＣＴＡまたはＣＴＣＴＴと会合して、それぞれ＋１または＋２フレームシフト突然変異に導くものである。本発明の好適な態様において、転写突然変異は神経細胞系のＲＮＡ分子に起こり、その場合の病気が神経変性疾患である。「神経細胞系」とは、すべての細胞、ＲＮＡ分子、タンパク質、または、ニューロン、グリア細胞、タンパク質およびタンパク質をエンコードするＲＮＡ分子などの神経細胞系に関係する、もしくはその一部を形成する物質と定義され、該タンパク質とは、タウ（Tau）、βアミロイド前駆体タンパク質、ユビキチンB、アポリポタンパク質Ｅ４、神経細糸タンパク質および微小管会合タンパク質ILプレセニリンI、プレセニリンII、ビッグタウ、グリア原繊維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ヒトＰ５３細胞性腫瘍抗原、ヒトＢ細胞白血病/リンパ腫２（ＢＣＬ −２）プロトオンコジーン、セマホリン、酵母アップフレームシフトタンパク質Ｉのヒト同族体（ＨＵＰＦ−Ｉ）、ヒト能動性群タンパク質（ＨＭＧ）、ニューロン特異タンパク質Ａ（ＮＳＰ−Ａ）を含む。該疾患が神経変性疾患、特にＡＤであるとき、本発明の好ましい突然変異ＲＮＡ分子は、βアミロイド前駆体タンパク質、タウタンパク質、ユビキチン、アポリポタンパク質Ｅ４（Ａｐｏ−Ｅ₄）、微小管結合タンパク質II（ＭＡＰ２）、神経細糸タンパク質、プレセニリンI、プレセニリンII、ビッグタウ、ＧＦＡＰ、Ｐ５３、ＢＣＬ２、ＨＵＰＦ−Ｉ、ＨＭＧおよびＮＳＰ−ＡをエンコードするＲＮＡ分子であり、該RNA分子は、フレームシフト突然変異に導く欠失、挿入または他の修飾を有する。本発明の最も好ましい突然変異ＲＮＡ分子は、フレームシフト突然変異を有するβアミロイド前駆体タンパク質、ユビキチンＢ、ＭＡＰ２、神経細糸タンパク質、プレセニリンI、プレセニリンII、ビッグタウ、ＧＦＡＰ、Ｐ５３、ＢＣＬ２、およびＨＵＰＦ−ＩをエンコードするＲＮＡ分子である。好ましくは、突然変異が、フレームシフト突然変異に導くＧＡＧＡまたはＧＡＧＡＸ配（５'または３'の１０ヌクレオチド内）と会合するＧＡまたはＧＴジヌクレオチドの欠失、あるいはフレームシフト突然変異に導くＣＴＣＴまたはＣＴＣＴＸ配列（５'または３'の１０ヌクレオチド内）と会合するＣＴまたはＣＡジヌクレオチドの欠失というものである。本明細書で用いる用語「突然変異タンパク質」は本発明の突然変異ＲＮＡ分子によりエンコードされるタンパク質と定義される。本発明の方法はフレームシフト突然変異を起こす１またはそれ以上の突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患の診断方法であることが好ましい。本発明により診断する好ましい疾患はＡＤであるが、ただし、染色体１、１４および２１に関連して発見される早期発病ＡＤの場合は例外である。本発明の方法は若年および後期発病ＡＤ、とりわけ、非家族性または「散在性」後期発病ＡＤ例の診断方法であることがさらに好ましい。本明細書で用いる「生体サンプル」とはタンパク質および/または細胞を含む体液または体組織を言い、そこから核酸およびタンパク質を単離し得るものである。好ましい起源は、口腔綿棒採取物、血液、精液、上皮または他の組織、乳汁、尿、脳脊髄液、喀痰、便試料、肺吸引物、喉頭綿棒採取物、生殖器綿棒採取物および分泌物、直腸綿棒採取物、および鼻咽頭吸引物である。体液サンプルとは、フレームシフト突然変異を起こし、該疾患の原因となる、あるいはそれと関連する転写突然変異をもつ細胞を含む体液である。該疾患が神経変性疾患である場合、体液サンプルは神経細胞系の細胞またはかかる細胞の産物を含むことが好ましい。該疾患が神経変性疾患である場合、好ましい体液サンプルは脳脊髄液であり、これは腰椎穿刺により入手し得る（ランフェルト（Lann felt）ら、Nature Medicin、１、８２９〜８３２頁、１９９５）。他の好適な体液は血液（静脈血、動脈血および臍帯血を包含するが、これらに限定されるものではない）であるが、血液は簡単に入手可能であって、突然変異ＲＮＡ分子またはエンコードされたタンパク質の存在を分析し得るリンパ球を含む。組織サンプルとはいずれの組織であっても好いが、好ましくは容易に入手可能な組織、例えば、皮膚および鼻上皮などである。突然変異ＲＮＡ分子用にサンプルを分析する場合、好ましくは核酸プローブを使用する。該核酸プローブは、好ましくはフレームシフト突然変異を起こす突然変異を含む突然変異ＲＮＡ分子の部分に相補的な配列をもつヌクレオチドプローブである。該プローブはＲＮＡもしくはＲＮＡから逆転写したＤＮＡを検出するのに用いるが、ゲノムＤＮＡは突然変異を含んでいないので、ゲノムＤＮＡを検出するのに用いてはならない。本発明はさらに、フレームシフト突然変異に導く突然変異を含む突然変異ＲＮＡ分子の部分に相補的な配列をもつ核酸プローブを提供する。該プローブはＲＮＡ分子の突然変異配列に好ましくは十分に相補的であり、その結果緊縮条件下で該プローブのみが突然変異配列に結合したままとなり、緊縮条件下、突然変異体と対応する野生型転写物とを識別し得るものとなる。「緊縮」条件とは、ここではＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッド形成条件と定義され、５０％ホルムアミドと０．１ＸＳＳＣに等価のハイブリッド形成バッファーを用い６５℃で実施することができる（下記およびエバンス（Evans）ら、ＰＮＡＳ（１９９４）９；６０５９〜６０６３、６０６０参照）。「緊縮」条件は、好ましくはまたエバンスら（同上）の記載どおり緊縮洗浄をも包含する。該プローブはいかなる長さでもよいが、好ましくは５ないし５０ヌクレオチドの長さ、より好ましくは１０ないし３０ヌクレオチドの長さである。例えば、該プローブは、５、１０、１５、２０、２５、または３０ヌクレオチドの長さであってもよい。好適な態様において、該プローブはヌクレオチドまたはジヌクレオチドの欠失または挿入を有し、ＧＡＧＡもしくはＧＡＧＡＸに相補的な、またはＣＴＣＴもしくはＣＴＣＴＸに相補的な配列、および野生型ＲＮＡ分子のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフをフランキングするヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含んで成る。もし突然変異RNA配列に相補的な逆転写ＤＮＡがプローブであるならば、相補的ＤＮＡに存在する対応するＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフに相補的な配列からなるプローブを用いることは、当業者には明らかであろう。突然変異ＲＮＡ分子の存在を検出する方法は、フレームシフト突然変異を生じる突然変異の両側の配列に相補的な配列を有するプライマーを使用する、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を含む。先ず、１個のプライマーをＲＮＡからＤＮＡへの逆転写に用い、第２に、下記のように２個のプライマーを用いてＤＮＡを増幅する。上記ＲＴ−ＰＣＲ法に用いられるプライマーはそのサイズが、２０ｂｐないし２〜３ｋｂ、例えば、２０ｂｐ、５０ｂｐ、１００ｂｐ、５００ｂｐ、１０００ｂｐ、１５００ｂｐ、２０００ｂｐ、または３０００ｂｐと変わり得る。プライマーは多くの標準的技法、例えば、増幅すべきヌクレオチド領域をフランキングする配列のクローニング、あるいはホスファーアミダイト法によりプライマーを合成するなどによって調製することができる。さらに、本発明は突然変異を含むヌクレオチド領域増幅のための上記定義のＲＴ−ＰＣＲ法に使用するプライマーを提供する。好ましくは、本発明の突然変異タンパク質用サンプルを分析する際には免疫学的試験を採用する。免疫学的試験は、好ましくは、本発明の突然変異タンパク質に特異性を示し、野生型タンパク質には示さない抗体分子の使用を基本とする。かくして本発明はさらに本発明の突然変異タンパク質に特異性を示し、野生型タンパク質には示さない抗体分子を提供する。好ましくは、該抗体は突然変異タンパク質のカルボキシ末端に特異的なものである。さらに本発明は神経変性疾患または他の加齢関連疾患の診断法、あるいはこれらの疾患に罹患し易い人の診断法を提供するものであって、該方法は（イ）患者から体液もしくは組織サンプルを採取し、（ロ）該サンプルにつきフレームシフト突然変異を有する神経細胞系のＲＮＡ分子またはそれによってエンコードされたタンパク質が存在するか否か分析することを含み、そこでの突然変異されたＲＮＡ分子の存在を疾病の兆候とするものである。好ましくは、神経変性疾患とはＡＤおよびダウン症候群である。また、本発明は該疾患の防止および/または治療法、該疾患の防止および/または治療用および診断薬生産用のベクター、該疾患の防止および/または治療用組成物、本発明に使用する核酸配列、プローブおよび抗体分子、および形質転換動物に関する。本発明により期待される治療法は、突然変異転写物を含む細胞に、突然変異転写物を選択的に除去（すなわち、切断）することの可能なリボザイムを提供し、それによって転写物を翻訳不能とするものである。また、該治療法はリボザイムでこのように処理した細胞に、リボザイムにより実質的に切断し得ない対応する野生型転写物を提供することを含む。野生型転写物は、ＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ順列を除く突然変異RNA配列に対応し、野生型タンパク質をエンコードする野生型配列を含んでもよく、また、野生型ＲＮＡを突然変異RNA配列からさらに識別し、それによってさらにリボザイムの認識および切断に関し該配列を識別する第３の塩基（コドン内に）サイレント突然変異を含んでもよい。また、本発明により包含される治療法は、突然変異RNAを含む細胞に、該突然変異RNAに相補的であって、かつ、細胞中で翻訳不能な突然変異RNAと二重らせんを形成し得るＲＮＡまたはＤＮＡを提供することをも包含する。相補的配列は突然変異RNAの全長であってもよいが、好ましくは、より短い、例えば、１０、２０、５０または１００ヌクレオチドの長さのものである。相補的配列はかくしてオリゴヌクレオチドの形状で投与しても、あるいはベクターに組入れた発現可能な配列によりエンコードしてもよいが、該ベクターは細胞に投与する。従って、本発明はＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有する標的ＲＮＡを選択的に切断するリボザイムを、製剤学的に許容し得る担体と混合して含んで成る製剤組成物を包含する。また、本発明はＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有する標的ＲＮＡとフレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ配列を有するＲＮＡの野生型類似体とを選択的に切断するリボザイムを、製剤学的に許容し得る担体と混合して含んで成る製剤組成物をも包含する。また、本発明はフレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ配列を有するＲＮＡの野生型類似体を、製剤学的に許容し得る担体と混合して含んで成る製剤組成物をも包含する。また、本発明は該ＲＮＡの野生型類似体が第３塩基サイレント突然変異を有するヌクレオチド配列を含んで成る製剤組成物をも包含する。また、本発明はフレームシフト突然変異を生じる１以上のＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡに相補的な配列をもつ一本鎖核酸と製剤学的に許容し得る担体とを混合して含んで成る製剤組成物をも包含する。また、本発明は突然変異タンパク質の野生型類似体と製剤学的に許容し得る担体とを混合して含んで成る製剤組成物をも包含する。また、本発明はＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ配列を有する標的ＲＮＡを選択的に切断するリボザイムをエンコードする発現可能な遺伝子を含んで成るベクターを包含する。また、本発明はフレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡに相補的な配列をエンコードする発現可能な遺伝子を含んで成るベクターを包含する。また、本発明は本明細書記載のベクターを含む宿主細胞を包含する。また、本発明はフレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡが原因となる、あるいはそれと関連する疾患の治療および /または防止方法であって、当該疾患に罹患した患者または罹患し易い患者に上記の組成物、ベクターまたは宿主細胞を投与することからなる方法を包含する。また、本発明は治療においてプロモーターの制御下ＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有する標的ＲＮＡを選択的に切断するリボザイムをエンコードするベクターの使用を包含する。また、本発明はフレームシフト突然変異を生じる１以上のＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡが原因となる、あるいはそれと関連する疾患の治療のための組成物製造に際し、プロモーターの制御下にリボザイムをエンコードするベクターの使用を包含する。また、本発明は治療においてプロモーターの制御下フレームシフト突然変異を生じる１以上のＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡに相補的な配列をエンコードするベクターの使用を包含する。また、本発明は治療において任意の組合わせで、上記の組成物、ベクター、または宿主細胞の１つより多くの使用を包含する。また、本発明はフレームシフト突然変異を生じる１以上のＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴ突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡが原因となる、あるいはそれと関連する疾患の治療および/または防止において、任意の組合わせで、本明細書記載の組成物、ベクター、または宿主細胞の１つより多くの使用を包含する。本発明はさらに神経変性疾患に対する早期マーカーを提供する。本発明はフレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患を診断するための診断キットを提供し、該キットは（イ）フレームシフト突然変異に導く突然変異を包含する突然変異ＲＮＡ分子の部分に相補的な配列を有する核酸プローブとそのためのパッケージング材料、および（ロ）突然変異ＲＮＡ分子に結合したプローブを検出するための手段を含んで成る。本発明はさらにフレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患を診断するための診断キットを提供し、該キットは（イ）ＲＴ−ＰＣＲ反応に使用するプライマーであって、フレームシフト突然変異を生じる突然変異の両側の配列に相補的な配列を有するプライマー、そのためのパッケージング材料、およびＲＴ−ＰＣＲ反応を実施し、突然変異を含むＤＮＡ配列を増幅するための試薬と、（ロ）増幅した、突然変異を含むＤＮＡ配列を検出するための手段を含んで成る。本発明はさらにフレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患を診断するための診断キットを提供し、該キットは（イ）本発明の突然変異タンパク質に特異性を示し、野生型タンパク質には示さない抗体分子、および（ロ）該突然変異タンパク質に結合した抗体分子を検出するための手段を含んで成る。該抗体分子、および結合した抗体分子を検出するための手段は上記定義のとおりである。本発明のさらなる態様において、上記記載の診断キットはさらに（イ）野生型タンパク質に特異性を有する抗体分子、および（ロ）フレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患を診断するための対照としての野生型タンパク質に結合した抗体分子を検出する手段を含んで成る。本発明はさらに該疾患の原因となるまたは関連するフレームシフト突然変異を生じる、１以上の転写突然変異を有するＲＮＡ分子を提供する。本発明はさらに数種（１以上）のＲＮＡ分子を提供するが、該ＲＮＡ分子はＧＡＧＡもしくはＣＴＣＴモチーフまでは同一のアミノ酸配列をエンコードし、それ以降は異なる配列をエンコードするものである。例えば、単一の細胞において、例えば、β−ａｐｐに基づくフレームシフトタンパク質をエンコードする１つのＲＮＡ分子は、該ＲＮＡ配列のエクソン９のＧＡＧＡモチーフに、または該モチーフ内に突然変異を含み、β−ａｐｐをエンコードする第２のＲＮＡ分子は該配列のエクソン１０のＧＡＧＡモチーフに、または該モチーフ内に突然変異を含んでいてもよい。本発明はさらに疾患の兆候であると判明した突然変異したＲＮＡ分子によりエンコードされた、突然変異されたタンパク質を提供するものであり、該突然変異ＲＮＡ分子はフレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する。好ましくは、該突然変異タンパク質は疾患状態に特異的な抗原エピトープを含有する。その例を表９に示す。本発明の好適な態様において、突然変異されたＲＮＡ分子は、図２ないし１９のいずれか１つにおいて＋１もしくは＋２とした配列の少なくとも一部またはその免疫学的に等価なフラグメントを含むタンパク質をエンコードする。好適な態様において、突然変異されたタンパク質は、とりわけ該疾患がＡＤなどの神経変性疾患である場合、以下の個々の配列のいずれか１つを含んで成る。ＲＧＲＴＳＳＫＥＬＡ［配列識別番号：１］；ＨＧＲＬＡＰＡＲＨＡＳ［配列識別番号：２］；ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱ［配列識別番号：３］；ＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ［配列識別番号：４］；ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ［配列識別番号：１４００］；ＧＧＧＡＱ［配列識別番号：５］；ＧＡＰＲＬＰＰＡＱＡＡ［配列識別番号：６］；ＫＴＲＦＱＲＫＧＰＳ［配列識別番号：７］；ＰＧＮＲＳＭＧＨＥ［配列識別番号：８］；ＥＡＥＧＧＳＲＳ［配列識別番号：９］；ＶＧＡＡＲＤＳＲＡＡ［配列識別番号：１０］；ＨＤＹＰＰＧＧＳＶ［配列識別番号：１１］；ＳＩＱＫＦＱＶ［配列識別番号：１２］；ＶＥＫＰＧＥＲＧＧＲ［配列識別番号：１３］；ＰＬＦＧＲＧＨＫＲＧ［配列識別番号：１４］；ＥＤＲＧＤＡＧＷＲＧＨ［配列識別番号：１５］；ＱＥＲＧＡＳＰＲＡＡＰＲＥＨ［配列識別番号：１６］；ＲＱＰＧＤＶＡＰＧＧＱＨＲＰＶＤＤ［配列識別番号：１７］；ＡＧＬＬＡＩＰＥＡＫ［配列識別番号：１８］；ＹＶＤＶＹＮＧＧＫＦＳ［配列識別番号：１９］；ＡＡＤＥＲＲＣＨＬＬＨＭＣＧＲＲ［配列識別番号：２０］；ＱＱＡＴＥＡＧＱＨＹＱＰＧＳＰＬＨＤＨＳＨＶ［配列識別番号：２１］；ＰＱＥＡＡＡＲＴＮＲ［配列識別番号：２２］；ＲＳＷＶ号：２１］；ＰＱＥＡＡＡＲＴＮＲ［配列識別番号：２２］；ＲＳＷＶＨＰＡＰＰＹＱＭＣＬＧ［配列識別番号：２３］；およびＧＧＳＲＴＨＰＲ［配列識別番号：２４］。好適な態様において、本発明の抗体分子は上記定義の突然変異タンパク質に対し親和性を有する。また、本発明はフレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患を治療および/または防止するための方法に関する。突然変異タンパク質の産生をリードし、疾患の兆候となるＲＮＡ分子の突然変異についての知見は、該疾患を治療および/または防止する多数の方法を導いている。本発明はさらにフレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患を同定する方法を提供する。該方法は、（イ）疾患の病因に関係すると疑われるＲＮＡ分子の配列を提供し、（ロ）フレームシフト突然変異にたいし３'末端のＲＮＡ配列によりエンコードされた突然変異タンパク質の配列を同定し、（ハ）該突然変異タンパク質またはそのフラグメントに対するプローブを調製し、次いで（ニ）疾患をもつ患者および疾患をもたない患者からの体液または組織をプローブし、突然変異タンパク質の存在および病状間の相関を見出すことを含む。好ましくは、該プローブは本明細書に定義した抗体分子である。さらに好ましくは、抗体分子は、とりわけ該疾患がＡＤなどの神経変性疾患である場合、少なくとも１つの以下の配列を含むタンパク質に対し親和性を有するものである。ＲＧＲＴＳＳＫＥＬＡ［配列識別番号：１］；ＨＧＲＬＡＰＡＲＨＡＳ［配列識別番号：２］；ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱ［配列識別番号：３］；ＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ［配列識別番号：４］；ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ［配列識別番号：１４００］；ＧＧＧＡＱ［配列識別番号：５］；ＧＡＰＲＬＰＰＡＱＡＡ［配列識別番号：６］；ＫＴＲＦＱＲＫＧＰＳ［配列識別番号：７］；ＰＧＮＲＳＭＧＨＥ［配列識別番号：８］；ＥＡＥＧＧＳＲＳ［配列識別番号：９］；ＶＧＡＡＲＤＳＲＡＡ［配列識別番号：１０］；ＨＤＹＰＰＧＧＳＶ［配列識別番号：１１］；ＳＩＱＫＦＱＶ［配列識別番号：１２］；ＶＥＫＰＧＥＲＧＧＲ［配列識別番号：１３］；ＰＬＦＧＲＧＨＫＲＧ［配列識別番号：１ＧＲ［配列識別番号：１３］；ＰＬＦＧＲＧＨＫＲＧ［配列識別番号：１４］；ＥＤＲＧＤＡＧＷＲＧＨ［配列識別番号：１５］；ＱＥＲＧＡＳＰＲＡＡＰＲＥＨ［配列識別番号：１６］；ＲＱＰＧＤＶＡＰＧＧＱＨＲＰＶＤＤ［配列識別番号：１７］；ＡＧＬＬＡＩＰＥＡＫ［配列識別番号：１８］；ＹＶＤＶＹＮＧＧＫＦＳ［配列識別番号：１９］；ＡＡＤＥＲＲＣＨＬＬＨＭＣＧＲＲ［配列識別番号：２０］；ＱＱＡＴＥＡＧＱＨＹＱＰＧＳＰＬＨＤＨＳＨＶ［配列識別番号：２１］；ＰＱＥＡＡＡＲＴＮＲ［配列識別番号：２２］；ＲＳＷＶＨＰＡＰＰＹＱＭＣＬＧ［配列識別番号：２３］；およびＧＧＳＲＴＨＰＲ［配列識別番号：２４］。本発明の他の特徴および利点は、以下の好適な実施例の詳細な説明、および特許請求の範囲から明らかとなろう。図面の簡単な説明本発明を以下の図面に関する例示により説明する。図１は女子アルツハイマー患者（７０歳、＃８３００２；表２）の前頭皮質のパラフィン切片コピーであり、βＡＰＰの＋１読み枠により予測されたペプチドに対する抗体と免疫細胞化学的にインキュベートしたものである（図２０）。異栄養軸索（矢印先端）および繊維濃縮体（矢印）が皮質層IIIに鮮明に観察し得る。図２はヒトβアミロイド前駆体タンパク質遺伝子転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：２５］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：８３および８４］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：５０〜８２］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：２６〜４９］を示す。図３はヒト微小管結合タンパク質タウ遺伝子転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：８５］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：９９］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：８６〜９８］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：１００〜１１２］を示す。図４はヒトユビキチンＢ遺伝子転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：１１３］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：１２５および１２６］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：１１４〜１２４］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：１２７〜１３６］を示す。図５はヒトアポリポタンパク質Ｅ遺伝子転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：１３７］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：１４４〜１４６］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：１３８〜１４３］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：１４７〜１５２］を示す。制限酵素部位に関する情報も示す。図６はヒト微小管結合タンパク質２転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：１５３］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：１５４〜１５８］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：２３２〜３４７］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：１５９〜２３１］を示す。図７はヒトニューロフィラメントサブユニットＮＦ−低転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：３４８］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：４６６〜５１３］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：４１３〜４６５］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：３４９〜４１２］を示す。図８はヒトニューロフィラメントサブユニットＮＦ−Ｍ転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：５１４］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：５１５〜５７４］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：６２９〜６９５］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：５７５〜６２８］を示す。図９はヒトニューロフィラメントサブユニットＮＦ−Ｈ遺伝子転写物のコーディングヌクレオチド配列［配列識別番号：６９６］、野生型タンパク質のアミノ酸配列［配列識別番号：６９７〜６９８］、突然変異＋１フレームシフトタンパク質［配列識別番号：７０８〜７１０］、および突然変異＋２フレームシフトタンパク質［配列識別番号：６９９〜７０７］を示す。図１０は野生型に発現されたプレセニリンＩのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：７１１］およびアミノ酸配列［配列識別番号：７１２］、＋１読み枠［配列識別番号：７３３〜７５３］、および＋２読み枠［配列識別番号：７１３〜７３２］を示す。図１１は野生型に発現されたプレセニリンIIのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：７５４］およびアミノ酸配列［配列識別番号：７７６〜７８７］、＋１読み枠［配列識別番号：７５５〜７７５］、および＋２読み枠［配列識別番号：７８８〜８１４］を示す。図１２は野生型に発現されたビッグタウのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：８１５］およびアミノ酸配列［配列識別番号：８１６〜８１８］、＋１読み枠［配列識別番号：８２４〜８３４］、および＋２読み枠［配列識別番号：８１９〜８２３］を示す。図１３は野生型に発現されたＧＦＡＰのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：８３５］およびアミノ酸配列［配列識別番号：８３６〜８５２］、＋１読み枠［配列識別番号：８８３〜９１４］、および＋２読み枠［配列識別番号：８５３〜８８２］を示す。図１４は野生型に発現されたＰ５３のコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：９１５］およびアミノ酸配列［配列識別番号：９４０〜９４９］、＋１読み枠［配列識別番号：９１６〜９３９］、および＋２読み枠［配列識別番号：９５０〜９６５］を示す。図１５は野生型に発現されたＢＣＬ２のコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：９６６］およびアミノ酸配列［配列識別番号：９６７〜１０１５］、＋１読み枠［配列識別番号：１０７５〜１１２６］、および＋２読み枠［配列識別番号：１０１６〜１０７４］を示す。図１６は野生型に発現されたセマホリンIIIのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：１１２７］およびアミノ酸配列［配列識別番号：１１２８〜１１３１］、＋１読み枠［配列識別番号：１１６２〜１２１２］、および＋２読み枠［配列識別番号：１１３２〜１１６１］を示す。図１７は野生型に発現されたＨＵＰＦのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：１２１３］およびアミノ酸配列［配列識別番号：１２４１〜１２４４］、＋１読み枠［配列識別番号：１２１４〜１２４０］、および＋２読み枠［配列識別番号：１２４５〜１２８１］を示す。図１８は野生型に発現されたＨＭＧのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：１２８２］およびアミノ酸配列［配列識別番号：１２９７〜１２９９］、＋１読み枠［配列識別番号：１２８９〜１２９6]、および＋２読み枠［配列識別番号：１２８３〜１２８８］を示す。図１９は野生型に発現されたＮＳＰ−ＡのコーディングｍＲＮＡヌクレオチド配列［配列識別番号：１３００］およびアミノ酸配列［配列識別番号：１３７４〜１３８７］、＋１読み枠［配列識別番号：１３３９〜１３７３］、および＋２読み枠［配列識別番号：１３０１〜１３３８］を示す。図２０は野生型および＋１読み枠に発現された２種のヒトニューロンタンパク質（βアミロイド前駆体タンパク質（エクソン９および１０）およびユビキチンＢ（エクソン２））の部分ｍＲＮＡヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図２１：βアミロイド前駆体タンパク質およびユビキチンＢの転写物においてジヌクレオチド欠失により生成した新たな制限部位の２例（野生型ヌクレオチド配列［配列識別番号：２５および１１３］、βアミロイド前駆体タンパク質欠失配列［配列識別番号：１３９６および１３９７］、ユビキチン欠失配列［配列識別番号：１３９８および１３９９］）。説明以下の非制限的例示により本発明を説明するが、ここでは以下の材料と方法を採用する。ここに引用した各参考文献の全開示を参照によりここに組込む。本発明はフレームシフト突然変異が単一のＲＮＡ分子または複数のＲＮＡ分子に起こり、その産物が病状と関連するかまたは兆候を示す突然変異タンパク質であるという発見に基づいている。本発明はフレームシフト突然変異の存在がフレームシフト突然変異を含む細胞にとっての新たなコーディング配列となり、疾患と関連してその兆候を示す新たなポリペプチド（本明細書では突然変異タンパク質と呼称する）となるという認識に基づいている。本発明によると、フレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患の診断および/または同定が本明細書に記載のように達成される。本発明によると、該疾患を防止および/または治療するための方法、該疾患を防止および/または治療するための、また、診断薬生産のためのベクター、該疾患を防止および/または治療するための組成物、本発明に使用する核酸配列、プローブおよび抗体分子、および形質転換動物が本明細書に記載のように達成される。本発明によると、転写メカニズムにおけるエラーの検出法が本明細書に記載のように達成される。それ故、本発明の突然変異ＲＮＡ分子に見出される突然変異の修正が疾病を撲滅する、価値ある方法である。疾患の診断と治療の方法および試薬につき以下により詳細に記載する。本発明による疾患の診断本発明はフレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連する疾患の診断方法に関する。かかる疾患はこれらに限定されるものではないが以下の疾患である。癌、II型糖尿病および神経変性疾患、例えば、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、前頭葉性痴呆（ピック病）；進行性核上麻痺（ＰＳＰ）および多発タウ陽性糸状病変を伴う他の疾患、例えば、皮質基底変性、ボクサー痴呆、繊維濃縮体のみの痴呆、繊維濃縮体および石灰化を伴う痴呆、染色体１７にリンクするパーキンソン病を伴う前頭側頭痴呆、繊維濃縮体をもつゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカ病、筋緊張性異栄養症、ニーマン・ピック病タイプＣ、グアムのパーキンソン痴呆複合症、脳炎後遺症性パーキンソン病、亜急性硬化性全脳炎、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、レーヴィ小体をもつ痴呆、多系統萎縮症、ユビキチンと関連する他の封入体疾患、例えば、アレキサンダー病、アルコール性肝疾患、苔癬アミロイドーシス、および加齢のマリネスコ体と硝子質封入体、多発性硬化症、ダウン症候群および他の変性疾患、例えば、心臓血管疾患、リューマチ性関節炎およびII型糖尿病。体細胞の突然変異は遺伝子機能を異なるものとし、その結果特定の癌など、加齢に関連付けられる疾患に関係する。しかし、非増殖性の細胞は染色体レベルで重大な変化を受けることがないと一般に考えられている。例えば、染色体の変化は主に細胞の増殖に関係しており（スミス（Smith）、Mutation Research、２７７、１３９〜１４２頁、１９９２）、殆どのニューロンなどの非増殖性細胞にとって増殖は生後生活の初期に終了するとこれまでは考えられていた（ラキック（ Rakic）、Science、２７７、１０５４〜１０５６頁、１９８５）。しかし、エバンス（Evans）ら（Proc．Nat．Acad．Sci.、９１：６０５９、１９９４）は、体細胞突然変異が神経細胞系、すなわち有糸核分裂後のニューロンの遺伝子に起こることを示唆した。抗利尿ホルモン・バソプレッシン（ＶＰ）欠如のために重症の尿崩症に罹患しているdi/diブラットルボロ（Brattleboro）ラットがエバンスらの報文の対象であった。以前に確立されていたことではあるが、ブラットルボロ・ラットにはＶＰ遺伝子の第２エクソンの単−Ｇ残基が欠失し、その結果Ｃ− 末端アミノ酸配列の変化した突然変異ＶＰ前駆体となるために、ＶＰホルモンが欠如している。また、di/diラットの少数のニューロンはヘテロ接合体＋/diフェノタイプを示し、明らかに正常なＶＰ遺伝子産物を発現することが観察されていた。di/diラットの分子生物学の研究により、エバンスらは、配列の変化が突然変異ＶＰ前駆体ｍＲＮＡの読み枠をもとに戻しており、それがＧＡＧＡモチーフのジヌクレオチド欠失に基づくものであると同定した。彼らは単一大型細胞ニューロンの少量の正常ＶＰ遺伝子産物の存在とフレームシフト突然変異から生じる突然変異遺伝子の復帰とを相関させた。エバンズらの結論は、＋１フレームシフト突然変異が野生型ラットおよびdi/diラット両方のＶＰ転写物に存在するので、これらの突然変異に導く事象はdi/diラットそれ自身の病状が原因ではないということであった。このように、エバンスらは突然変異ＧＡＧＡＧホットスポットと病状または疾患の好発とを相関させなかった。さらに、先行技術には、転写突然変異が起こっていること、また、かかる転写突然変異が疾患を原因とする、あるいはそれと関連するという示唆はない。突然変異はこれまでＤＮＡに起こると考えられていたので、染色体ＤＮＡには突然変異がないとするような、また、染色体ＤＮＡのプロービングが突然変異の有無について間違った結果を与えるような検出方法には信頼性がなかった。本発明においては、エバンスらの観察、すなわち、野生型様ＶＰ遺伝子産物に導くdi/diラットの単一ニューロン内においてＶＰ転写物のＧＡＧＡＧホットスポットで野生型読み枠での復帰に関するという観察が拡張発展された。本発明によると、突然変異ホットスポットで起こっていて、フレームシフト突然変異を生じる１以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子が原因となる、あるいはそれと関連するヒトの疾患が同定および/または診断される。病気の原因に関係していると疑われるＲＮＡ分子のヌクレオチド配列が、例えば、公開された遺伝子配列から、あるいは疑わしいＲＮＡ分子のクローニングおよび配列決定から得られる。該ＲＮＡ分子によりエンコードされるアミノ酸配列は、エンコードされた突然変異タンパク質のアミノ酸配列であると予測される。突然変異タンパク質配列は、仮定されたフレームシフト突然変異に従う＋１および＋２読み枠において予測される。フレームシフト突然変異の位置は、フレームシフト突然変異の発生が疑われる所定のヌクレオチド配列モチーフに関して仮定することができる；ＲＮＡ分子に存在するかかるモチーフの例は以下のものであるが、これらに限定されるものではない：ＧＡＧＡを含んで成る、例えばＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＧ、ＧＡＧＡＴ、およびＧＡＧＡＡ；またはＣＴＣＴを含んで成る、例えばＣＴＣＴＣ、ＣＴＣＴＧ、ＣＴＣＴＡ、およびＣＴＣＴＴである。突然変異タンパク質またはその抗原性フラグメントに特異的なプローブを調製する（かかるプローブについてはタンパク質またはタンパク質フラグメントの検出のためのものとして上記した）。フレームシフトに導く突然変異が起こる場所によって、突然変異タンパク質の部分は野生型タンパク質と同じ配列を有し、該タンパク質の部分は突然変異タンパク質の配列を有する。さらに、突然変異が起こる場所によって、突然変異タンパク質は、ヌクレオチド配列が停止コドンをコードしている場合には停止する（図中＊として示す）。このように突然変異が起こる場所により異なる突然変異タンパク質が産生される。アルツハイマー病（ＡＤ）は本発明により診断可能な、また治療し得る典型的な疾患である。ＡＤは特発性進行性の痴呆を特徴とする神経変性疾患であり、先進国では４番目に高い主要な死因である。６５歳を越える人口の５％ないし１１％が罹患し、８５歳を越えるとそれが人口の４７％にも及ぶ。現在、米国ではＡＤ罹患患者が４百万人と推定され（参照：コールマン（Coleman）、Neurobiol． of Aging、１５、補遺２、５７７〜５７８頁、１９９４）、世界全体ではアルツ f Aging、１５、補遺２、５７７〜５７８頁、１９９４）、世界全体ではアルツハイマー患者が２千万人と推定される。ＡＤ診断に対する臨床基準が規定されている（参照：ライスベルグ（Reisberg ）ら、Am．J．Psych.、１２、１１３６〜１１３９頁、１９８２；マックカーン（MacKhann）ら、Neurology、３４、９３９〜９４４頁、１９８４）。ＡＤの初期症候は多様ではあるが、一般に鬱状態、妄想および不安を伴う。また、知的機能および記憶の緩慢な退化がある。特に、認識機能障害、特異言語障害（失語症）、行動活性障害（失行症）、および知覚認識障害（失認症）が起こる。しかしそれでも、ＡＤに関係する病因機序の知識が欠如しているために、生存中にＡＤを診断する一般的な合意はない。ＡＤの診断は、脳組織の検査によって行われる。かかる診断は通常死後の個々人について実施される。該診断は多数の神経細胞内の神経原繊維濃縮体の存在、および脳組織、特に新皮質および海馬における軸索プラークの存在に基づいている。種々のタイプのプラーク（例えば、軸索プラーク）、神経網糸、および神経原繊維濃縮体を同定するために、いくつかの脳組織切片につき染色と微視的試験が必要である。軸索プラークは変性した軸索（例えば、神経網糸）、神経末端、そして恐らく星状神経膠細胞性ミクログリア要素から構成されていると信じられている。また、軸索プラークはアミロイドタンパクコアを有することがしばしば見出されている。神経原繊維濃縮体は正常のペアらせん状フィラメントからなり、幾つかのタンパク質から構成されると信じられている。ＡＤには２つの主要なタイプ、すなわち、後期発病（＞６５歳）および早期発病（＜６５歳）がある。すべてのＡＤ症例の大凡８５％が後期発病であり、早期発病はわずか１５％である。後者群の０．３％は染色体２１にリンクする遺伝型のＡＤから構成され、症例の２％が染色体１４にリンクすると考えられ、染色体１は以下に検討するごとく若年での発病（＜０．１％）に関係することが判明している。散在性症例は早期発病ＡＤのもつとも顕著な群（４０％）である。もっとも共通している後期発病群において、症例の４０％が家族性であると考えられるが、これはアルツハイマーが一次血縁に観察されたことを意味している。この家族型の内、１０％のみが常染色体優性である。残りの後期発病例（６０％）は非家族性であるか、「散在性」症例である（表１参照）。これらの症例）は非家族性であるか、「散在性」症例である（表１参照）。これらの症例についてはあまり知られておらず、これまでもＡＤの可能性のある原因を示唆するようなデータは入手し得なかった。現在、軸索プラークおよび/または神経原繊維濃縮体の形成が直接ＡＤを引き起こす原因であるか否かは明らかでない。軸索プラーク、神経網糸および/または神経原繊維濃縮体の形成は、より基本的な細胞上のまたは生化学的変化の結果である可能性がある。本発明の診断法は、本明細書に記載のとおり、核酸配列の検出を包含し、該検出は、好ましくは２つの核酸鎖の間の、すなわち、核酸プローブと、突然変異RN Aまたは生体サンプルから単離した突然変異体ＲＮＡからの逆転写突然変異ＤＮＡにおける相補的配列との間の核酸二重鎖の形成に関与する手法を介した検出であり、本診断法はまた、タンパク質の検出、好ましくは突然変異またはハイブリッド野生型/ナンセンスタンパク質を検出することをも包含する。１．遺伝子スクリーニングのためのＲＮＡの調製および検出典型的に、ＲＮＡは、当該分野において周知のＤＮＡ抽出手順（例えば、Samb rook et al.，1990，A Laboratory Manual for Cloning，Cold Spring Harbor P ress，CSH，NY参照）によって、生物学的サンプルから調製され、および所望であれば、分析の前に、例えば、電気溶出によって、さらに精製され得る。生物学的サンプルから突然変異ＲＮＡ分子を検出する方法は、以下を包含するが、これらに制限されない：（１）逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、次いでサイズ分離ゲル電気泳動、または対立遺伝子特異的（または、配列特異的）プローブでのハイブリダイゼーション、（２）突然変異されたＲＮＡに相補的である核酸プローブで溶出されたＲＮＡのハイブリダイゼーション、（３）ＡＲＭＳ試験、ここでは、１つのプライマーは、フレームシフト突然変異を生じる突然変異を含む相補的な配列を有し、そして増幅は、突然変異された配列が存在する場合のみ生じる、（４）ヌクレオチド配列決定、（５）ＲＴ−ＰＣＲおよびＴ７ポリメラーゼを介するＲＮＡ増幅、および（６）ＲＴ−ＰＣＲ増幅後のＲＮＡにおけるジヌクレオチド欠失によって、ｃＤＮＡは、新規な制限部位を伴って作製され得る（図２１）。本発明に従う有用な核酸プローブは、好ましくは、緊縮条件下で、プローブのみが突然変異配列に結合したままであるように、ＲＮＡ分子の突然変異配列に十分に相補的である（Evans et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，91:6059-6063 (1994)を参照のこと）。プローブは、好ましくは、³²Ｐもしくは任意の他の標準的なアイソトープを放射活性に使用するか、またはビオチンまたはＤＩＧ標識化を含む非放射性の方法を使用するような、当業者に公知の任意の標準的な技術を使用して、標識される。次いで、標識化プローブは、当業者に周知の方法によって容易に検出され得る。突然変異ＲＮＡ分子の存在を検出するための代替の方法は、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を介する。フレームシフト突然変異を生じる突然変異のいずれかの側の配列に相補的な配列を有するプライマーは、ＲＮＡを逆転写し、そして突然変異を含む逆転写されたＤＮＡを増幅するために使用される。次いで、増幅されたフラグメントにおける突然変異は、上記のプローブを使用して標準的な技術を使用して、または増幅された配列を配列決定することによって、検出され得る。ＲＴ−ＰＣＲ反応を使用する利点は、開始材料が少なくてすむこと、およびＰＣＲ法は、定量的および定性的な決定を可能にすることである。定量的な決定によって、特定のサンプル中に存在する突然変異されたＲＮＡ分子のコピー数の推定が可能となり、そしてこの情報を考慮して、疾患状態の重篤度が推定され得る。突然変異ＲＮＡ分子の存在を検出するための別の代替の方法は、１つのプライマーが、フレームシフト突然変異を生じる突然変異を含む相補的な配列を有する方法である。したがって、増幅は、突然変異された配列が存在する場合にのみ生じる。Newton et al.，Nucl．Acids．Res．17:2503,1989。この方法は、嚢胞性線維症を担う遺伝子における突然変異の検出において以前から使用されており、当業者は、本発明の突然変異ＲＮＡまたは、突然変異ＲＮＡに対応する逆転写されたＤＮＡの検出のために、この試験を容易に行い得る。例示的な分析方法（１）は、以下のとおりである。ＲＮＡは、逆転写され、次いで、ＤＮＡは、分析の前に、例えば、ＰＣＲを使用して増幅される。任意の１つのＰＣＲ、すなわち、特定の配列を標的化するＰＣＲ、または任意の１つの多重ＰＣＲ、すなわち、配列の特定のセットを標的化するＰＣＲ、についての特異的な条件は、変化し得るが、当業者に理解されるであろう。突然変異されたまたは野生型の、逆転写されたＤＮＡ配列の増幅は、以下のように調製されたＤＮＡのアリコートから、直接的に達成され得る。２５μｌのＤＮＡを、２５μｌのＨ₂Ｏ、５０μｌのマスターミックス（以下を参照のこと）、０．５μｌのＡｍｐｌｉｔａｑ（Perkin Elmer Cetus，Norwal k，CT）および０．５μｌＵＮＧ（Perkin Elmer Cetus，Norwalk，CT）を含有する反応チューブに、アリコート化される。５０μｌのマスターミックスは、２０ｍＭＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ８．３、１００ｍＭＫＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂ 、各０．０２μモルのｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ、０．０４μモルのｄＵＴＰ、２０ｐｍｏｌの各プライマー（Perkin Elmer Cetus，Norwalk，CT）、および２５μｌゼラチンを含有する。次いで、選択された増幅配列に特徴的なフラグメントは、増幅のアリコートが電気泳動された１３％ポリアクリルアミドゲルを、エチジウムブロマイド染色した後に、紫外線光下で可視化され得る。あるいは、対立遺伝子特異的プローブでのハイブリダイゼーションは、正常なおよび／または突然変異対立遺伝子のいずれかから増幅された産物の存在を、同定し得る。２．遺伝子スクリーニングのためのタンパク質の調製および検出分析される生物学的分子がタンパク質である場合、タンパク質溶出の前に生物学的サンプルの細胞から核酸を放出するか、またはタンパク質分析の前にサンプル溶出物から核酸を除去することが、所望され得る。したがって、サンプルまたは溶出物は、まず、機械的破壊（例えば、凍結／溶解、摩砕、超音波処理）、物理学的／化学的破壊、例えば、洗浄剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ、Ｔｗｅｅｎ、またはドデシル硫酸ナトリウム）での処理、浸透圧ショック、熱、酵素学的溶解（リゾチーム、プロテイナーゼＫ、ペプシンなど）、またはヌクレアーゼ処理によって、全て当該分野において周知の従来の方法に従って、核酸を放出または除去するために処理され得る。生物学的サンプルが突然変異タンパク質を含む場合、その存在または不在は、遺伝子疾患を示し、そのタンパク質は、従来の検出アッセイ、例えば、抗体プローブのようなタンパク質特異的プローブを使用して、検出され得る。同様に、遺伝子疾患がアミノ酸またはアミノ酸の配列の存在または不在と相関する場合、これらのアミノ酸は、従来の手段、例えば、ネイティブな配列または突然変異配列に特異的である抗体を使用して、検出され得る（突然変異タンパク質に存在するアミノ酸配列の例について、表９を参照のこと）。本発明の方法において有用な任意の抗体試薬は、全抗体、抗体フラグメント、多機能性抗体凝集物、または、一般に、抗体からの１つまたはそれ以上の特異的な結合部位を含有する任意の物質を含有してもよい。抗体フラグメントは、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ'）₂フラグメント、またはその任意の誘導体、例えば、１本鎖Ｆｖフラグメントであってもよい。抗体または抗体フラグメントは、非組換え、組換え、またはヒト化であってもよい。抗体は、任意の免疫グロブリンイソタイプ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭなどであってもよい。さらに、適切である場合には免疫グロブリンの凝集物、ポリマー、誘導体、および結合体、またはそのフラグメントを使用してもよい。抗体試薬についての免疫グロブリン供給源は、例えば、従来のポリクローナル抗血清の調製、もしくはモノクローナル抗体またはキメラ抗体の調製によって、任意の様式において得ることができる。抗血清は、十分に確立された技術によって得ることができ、これは、マウス、ウサギ、モルモット、またはヤギのような動物を、適切な免疫原で免疫化することを含む。抗体の調製１．ポリクローナル抗体ペプチドまたはポリペプチドは、その免疫原性を増加するために従来のキャリア（例えば、サイログロブリン）に結合されてもよく、そしてペプチド−キャリア結合体に対する抗血清は、ウサギにおいて惹起される。キャリアタンパク質へのペプチドの結合および免疫化は、記載されているように行う(Dymecki，S.M.， et al.，J．Biol．Chem 267:4815-4823，1992）。このペプチドに対するウサギの抗体は惹起され、そして血清は、ＥＬＩＳＡによって、あるいはドットまたはスポットブロッティングによって、ペプチド抗原に対して力価測定される（Boersma and Van Leeuwen，1994，Jour．Neurosci．Methods 51: 317）。同時に、抗血清は、組織切片において使用され得る。血清は、グリーン（Green）ら、Cell，28，477-487(1982)の手順に従い、ＥＬＩＳＡによって、適切なペプチドと強力に反応することが示される。最も高い力価を示す血清は、その後の実験において使用される。２．モノクローナル抗体モノクローナル抗体を調製するための技術は周知であり、本発明のモノクローナル抗体は、アルンハイタ（Arnheiter）ら、Nature，294，278-280(1981)によって記載されるように、合成ペプチドを使用して、好適にはキャリアに結合された合成ペプチドを使用して調整されてもよい。モノクローナル抗体は、典型的に、ハイブリドーマ組織培養物、またはハイブリドーマ組織が導入された動物から得られる腹水液から得られる。それにもかかわらず、モノクローナル抗体は、合成ペプチドまたはそれらの結合体に対して「惹起される」か、またはこれらによって「誘導される」として記載され得る。特に好ましい免疫学的試験は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかの使用に依存し、固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロッティング、免疫沈降、および放射性免疫検定法を含む。Voller，A.，Diagnostic H orizons 2:1-7，1978，Microbiological Associates Quarterly Publication，W alkersville，MD;Voller，A．et al.，J．Clin．Pathol．31:507-520(1978)；米国再発行特許第３１，００６号；英国特許第２，０１９，４０８号；Butler，J. E.，Meth．Enzymol．73:482-523(1981);Maggio，E.(ed.)，Enzyme Immunoassay ，CRC Press，Boca Raton，FL，1980)または放射性免疫検定法（ＲＩＡ）(Weint raub，B.，Principles of radioimmunoassays，Seventh Training Course on Ra dioligand Assay Techniques，The Endocrine Society，March 1986，pp．1-5， 46-49and68-78）を参照のこと。本発明の突然変異タンパク質の存在について組織を分析するために、好ましくは免疫組識化学的技術が使用される。突然変異タンパク質の容易な検出を促進するために抗体分子が標識されるべきであることは、当業者に明らかである。抗体分子を標識するための技術は、当業者に周知である（Harlour and Lane，Antibodies，Cold Spring Harb our Laboratory，pp 1-726，1989を参照のこと）。あるいは、サンドイッチハイブリダイゼーション技術、例えば、所与のタンパク質に特異的な抗体が使用され得る。さらに、結合タンパク質に結合されたハプテン基に特異的な抗体が、使用され得る。検出に有用な別のサンドイッチ検出系は、アビジンまたはストレプトアビジン系であり、ここでは検出可能なタンパク質に特異的なタンパク質は、ビオチンの付加によって修飾されている。さらに別の実施形態において、抗体は、免疫グロブリン分子に結合する能力を有する非免疫グロブリンタンパク質、例えば、当該分野において周知である、ブドウ球菌のプロテインＡまたは連鎖球菌のプロテインＧで置き換えられてもよい。タンパク質は、それ自身検出可能に標識され得るか、または検出可能に標識された二次結合タンパク質、例えば、一次抗体に特異的な二次抗体によって間接的に検出され得るかのいずれかである。したがって、ウサギ抗ハイブリッド野生型／ノンセンスタンパク質抗体が、一次結合タンパク質として作用する場合、標識されたヤギ抗ウサギ免疫グロブリン抗体が、二次結合タンパク質である。別の実施形態において、ハイブリッド野生型／ノンセンスタンパク質の存在によって作製されるシグナルは、検出可能に標識されるその融合タンパク質に特異的な抗体、例えば、抗βガラクトシダーゼ抗体との反応によって、増幅される。当業者は、当該分野で周知の従来の方法を使用して、過度の実験を伴わずに、多くのこのような可能な一次および二次結合タンパク質系を案出し得る。あるいは、他の技術は、突然変異タンパク質を検出するために使用されることができ、ＳＤＳＰＡＧＥ、等電点電気泳動、ウェスタンブロッティング、ＨＰＬＣ、およびキャピラリー電気泳動のようなクロマトグラフィー法を含む。本発明に従う疾患の同定本発明は、フレームシフト突然変異を生じる１つまたはそれ以上の転写突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡ分子を原因とするか、またはそれと関連する疾患を同定するための方法を提供する。疾患は、以下のように本発明に従って同定される。疾患の病原性に関与することが疑われるＲＮＡ分子のヌクレオチド配列は、例えば、公開された遺伝子配列から、または疑わしい遺伝子のクローニングおよび配列決定から、提供される。次いで、ＲＮＡによってエンコードされるアミノ酸配列が、エンコードされる突然変異タンパク質のアミノ酸配列であるので、予測される。突然変異タンパク質の配列は、仮説されるフレームシフト突然変異に従って、＋１および＋２リーディングフレームにおいて予測される。フレームシフト突然変異の位置は、ＲＮＡ分子における、あるヌクレオチド配列モチーフに関して仮説されることができ、このようなモチーフの例としては、ＧＡＧＡ、例えばＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＧ、ＧＡＧＡＴ、およびＧＡＧＡＡ、またはＣＴＣＴ、例えばＣＴＣＴＧ、ＣＴＣＴＣ、ＣＴＣＴＡ、およびＣＴＣＴＴが挙げられるが、これらに制限されない。次いで、突然変異タンパク質に特異的であるか、またはその免疫原フラグメントに特異的であるプローブが調製される（このようなプローブは、タンパク質またはタンパク質フラグメントの検出について本明細書において上記されている）。フレームシフトを導く突然変異がどこで生じるのかに依存して、突然変異タンパク質の部分は、野生型タンパク質と同じ配列を有し、タンパク質の部分は、突然変異タンパク質の配列を有するであろう。さらに、どこで突然変異が生じるのかに依存して、ヌクレオチド配列が停止コドンをコードする場合、突然変異タンパク質は終結する（図において＊として示される）。したがって、どこで突然変異が生じるのかに依存して、異なる突然変異タンパク質が生成される。特定の突然変異タンパク質の存在についてプローブするもっとも簡単な方法は、そのタンパク質またはその免疫原性部分に対する抗体を作製することである。突然変異が配列中の別の部分で生じた場合であっても、由来する突然変異タンパク質がペプチド配列を含む可能性は増加されるので、予測される突然変異タンパク質のＣ末端に対応する免疫原性フラグメントが、合成され得る。例えば、β− ＡｐｐをエンコードするＲＮＡにおいて、同一のＣ末端配列を有する２つのフレームシフトされたタンパク質を生じる２つの異なる転写改変（すなわち、２つの異なるＧＡＧＡモチーフ）が生じる。さらに、タンパク質のＣ末端領域は、タンパク質の他の領域よりも、エピトープを形成するようである。いったんプローブが作製されると、疾患を有する患者からの生物学的サンプル、および疾患を有しない患者からの生物学的サンプルは、また上記されるように、突然変異タンパク質の存在または不在についてプローブされる。あるいは、いくつかのプローブが調製されてもよく、そしてプローブの組み合わせが、組識サンプルをプローブするために使用されてもよい。疾患を有する患者からの生物学的サンプルにおける突然変異タンパク質の存在、および疾患を有しない患者からの生物学的サンプルにおける突然変異タンパク質の不在は、その突然変異タンパク質が、疾患または疾患に対する罹患性についてのマーカーであることを示す。本発明に従う疾患の処置本発明はまた、疾患を予防および／または治療するための方法、疾患を予防および／または治療するためのベクター、および疾患を予防および／または治療するための、核酸配列およびタンパク質のような組成物に関し、その方法および組成物は、遺伝子治療およびタンパク質治療において有用である。本発明は、フレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡまたはＣＴＣＴにおける突然変異を有するＲＮＡを原因とするか、またはそれと関連する疾患の治療および／または予防の方法を包含し、ここでは、リボザイム、野生型ＲＮＡ、もしくはその両方、突然変異ＲＮＡに相補的でありかつ突然変異ＲＮＡとのハイブリッドを形成し得るＲＮＡまたはＤＮＡ、または任意のこれらの配列をエンコードする配列を含有するベクター、または突然変異体タンパク質の野生型形態が、疾患にかかっているか、または疾患にかかりやすい患者に投与される。本発明に従って治療される好ましい疾患としては、ガン、または神経退行性疾患、特にＡＤが挙げられるが、これらに制限されず、本発明の好ましい突然変異ＲＮＡとしては、フレームシフト突然変異を導くＲＮＡにおける欠失、挿入、または他の改変を有する、βアミロイド前駆体タンパク質、タウタンパク質、ユビキチンＢ、アポリポタンパク質−Ｅ₄（Ａｐｏ−Ｅ₄）、微小管結合タンパク質ＩＩ（ＭＡＰ２）、ニューロフィラメントタンパク質（Ｌ、Ｍ、Ｈ）、プレセニリン（presenilin）Ｉ、プレセニリンII、ビッグタウ(Big Tau)、ＧＦＡＰ、Ｐ５３、ＢＣＬ２、セマフォリン（semaphorin）III、ＨＵＰＦ、ＨＭＧ、およびＮＳＰ−Ａが挙げられるが、これらに制限されない。本発明に従う治療において有用なリボザイムは、好ましくは、ハンマーヘッド型リボザイムである。本発明に従う薬学的組成物としては、キャリアとの混合物において、治療学的に有効な量のリボザイム、突然変異ＲＮＡの野生型アナログ、またはその両方、もしくは突然変異ＲＮＡに相補的でありかつインビボで翻訳できない配列とハイブリッドを形成し得るＤＮＡもしくはＲＮＡを含み得る。治療学的に有効な量は、患者に投与される場合、患者に治療学的利益を提供する量であると考えられる。このような量は、一般に、１０μｇ〜１００ｍｇの治療学的タンパク質／患者のｋｇ体重、好ましくは５０μｇ〜１０ｍｇ、および最も好ましくは、１００μ ｇ〜１ｍｇの範囲である。ベクターが、本発明に従って有用である場合、ベクターは、当業者に公知の広範な一連の文献において概説されるように、直線状または環状の構造であってもよく、宿主細胞中でのエピゾーマル、またはインテグレートな存在のために適応し得る。ベクターは、ウイルス送達系または非ウイルス送達系を使用して、細胞に送達されてもよい。送達系の選択は、物質が、選択される中枢神経系または神経細胞タイプに送達されるのか、もしくは一般にこれらの細胞に送達されるのかに依存する。本発明のベクターは、エンコードされる遺伝子のより制御された発現を導くために、さらなる制御配列、例えば、エンハンサーまたは遺伝子配座制御領域（ＬＣＳ）をさらに含み得る。ＬＣＳは、ＥＰ−Ａ−０３３２６６７において記載されている。遺伝子配座制御領域（ＬＣ）の包含は、ＤＮＡが取込みの部位で開始状態で確実に挿入され、それによってベクター中に含まれる遺伝子の発現が確実に可能となるので、特に好ましい。本発明のベクターは、エクスビボおよびインビボの遺伝子治療において、広範な用途を有する。本発明に従う疾患診断および治療のための動物モデル本発明はまた、試験または治療についての疾患のモデルとして使用するための、安定な細胞株およびトランスジェニック動物を含む。本発明に従う安定な細胞株またはトランスジェニック動物は、本明細書中で導入遺伝子としても知られ、疾患を引き起こすか、または疾患と関連するフレームシフト突然変異を生じる１つまたはそれ以上の突然変異をエンコードする、組換え遺伝子を含む。組換え遺伝子は、疾患を示すことが見出された突然変異されたタンパク質をエンコードするＲＮＡをエンコードする。好ましくは、突然変異タンパク質は、疾患状態に特異的な抗原性エピトープを含む。組換え遺伝子は、図２〜９のいずれかにおいて＋１または＋２と示される配列の少なくとも一部、またはその免疫学的に等価なフラグメントを含有するタンパク質をエンコードし得る。本明細書中に記載されるように、突然変異タンパク質をエンコードする導入遺伝子を含む細胞株は、細胞中に外来遺伝子を導入するための当該分野において公知のいくつかの手順のうちのいずれかに従って、選択された細胞株に導入遺伝子を導入することによって、作製される。このような導入遺伝子を含むトランスジェニック動物としては、げっ歯類、例えば、ラットまたはマウス、もしくは他の哺乳動物、例えば、ヤギ、ウシなどが挙げられ、当該分野において周知の手順に従って作製され得る。トランスジェニック動物は、フレームシフト突然変異を生じる１つまたはそれ以上の突然変異を含有するＲＮＡをエンコードする少なくとも１つの遺伝子を原因とするか、またはそれと関連する疾患、およびその治療の研究目的のための疾患モデルとして、本発明に従って有用である。上述で定義されるように、１つまたはそれ以上の突然変異遺伝子を特異的に発現することによって、疾患の発症に対するこのような突然変異体の効果が研究され得る。さらに、遺伝子治療、および種々の薬物を含む治療が、トランスジェニック動物に対して試験され得る。本発明において有用なトランスジェニック動物を作製するために、動物に導入される組換え遺伝子としては、本明細書中に具体的に開示される遺伝子が挙げられ、遺伝子の野生型配列に関してジヌクレオチドの欠失または挿入、ヌクレオチド配列ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴと関連するジヌクレオチドの欠失または挿入、例えば、ＧＡＧＡＸまたはＣＴＣＴＸ、ここでＸは、Ｇ、Ａ、Ｔ、またはＣのうちの１つであり、例えば、ＧＡＧＡＧ、ＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＴ、およびＧＡＧＡＡ）またはＣＴＣＴＧ、ＣＴＣＴＣ、ＣＴＣＴＴ、およびＣＴＣＴＡを含む。このような導入遺伝子は、好ましくは、ＧＡＧＡＧ（図２０）に極めて近接するＡＧ欠失またはＧＴ欠失、例えば、それぞれ、＋１または＋２フレームシフト突然変異を導くＧＡＧＡ、ＧＡＧＡＧ、ＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＴ、ＧＡＧＡＡと関連する１つまたは２つのジヌクレオチド欠失を含む。類似の様式において、ＣＴＣＴＸは、同じ欠失プロセス（△ＣＴ）を受け得る。疾患の動物モデルにおいて特に有用であるこのような突然変異を含む組換え導入遺伝子としては、神経退行性疾患、特に、アルツハイマー病と関連する導入遺伝子が挙げられ、突然変異体βアミロイド前駆体タンパク質、タウタンパク質、ユビキチンＢ、アポリポタンパク質−Ｅ₄（Ａｐｏ−Ｅ₄）、微小管結合タンパク質II（ＭＡＰ２）、神経線維タンパク質（Ｌ、Ｍ、Ｈ）、プレセニリンＩ、プレセニリンII、ビッグタウ(Big Tau)、ＧＦＡＰ、Ｐ５３、ＢＣＬ２、セマフォリンIII、ＨＵＰＦ、ＨＭＧ、およびＮＳＰ−Ａをエンコードする、本明細書中に開示される突然変異遺伝子配列が挙げられるが、これらに制限されない（表２〜８もまた参照のこと）。本発明のトランスジェニック動物は、対応の野生型タンパク質が、動物の発生および成熟の選択された段階の間で、ならびに選択された組織において、発現されるように、そして突然変異体遺伝子が、所望される場合に作動されるように、調節可能なおよび／または調節化プロモーターを介して制御される導入遺伝子を含み得る。これは、動物モデルが、アルツハイマー病のものである場合、特に望ましく、この場合突然変異タンパク質は、動物の生涯において後に発現され始める。従って、突然変異遺伝子が、脳特異的な誘導性のプロモーター、例えば、ニューロフィラメント、アルドラーゼ、または改変されたＴｈｙ−１のプロモーターの制御下にある場合、疾患の発症は、突然変異遺伝子の発現を介して制御され得る。本発明に従うトランスジェニック動物は、ａ）ヒトβアミロイド前駆体タンパク質＋１、ｂ）ヒトユビキチン＋１タンパク質、ｃ）ヒトニューロフィラメントタンパク質、を過剰発現するために作製され得る。実施例１以下で、ニューロン組織中に存在するタンパク質をコードしているＲＮＡ分子中の転写フレームシフト突然変異の同定に係わる本発明の実施態様とこのような突然変異が或る種の疾病状態の診断においてどのように有用であるのかについて記載する。ヒトβアミロイド前駆体タンパク質、タウ、ユビキチン、アポリポタンパク質Ｅ４、ＭＡＰ２、低（Ｌ）、中（Ｍ）および高（Ｈ）ニューロフィラメントサブユニット、プレセニリンＩ、プレセニリンII、ビッグタウ（Big Tau）、ＧＦＡＰ、Ｐ５３、ＢＣＬ２、セマホリンIII、ＨＵＰＦ−Ｉ、ＨＭＧ、ならびにＮＳＰ-ＡをコードしているｃＤＮＡ配列は種々の遺伝子配列データベースから得た。配列データを使用して、配列中の種々のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフを同定し、そして欠失を仮定して、誘導される突然変異タンパク質の配列を図２〜１９に示されているように予測した。＋１と＋２のフレームシフト突然変異タンパク質の両配列を予測した。仮定された突然変異タンパク質の配列を試験して、仮定された突然変異タンパク質のＣ末端に相当するペプチドを合成した。これらのペプチドは当該技術分野の熟練者に知られている標準的な技術を使用して合成した。次の配列を有するペプチドを合成した：ＲＧＲＴＳＳＫＥＬＡ［配列識別番号：１］、ＨＧＲＬＡＰＡＲＨＡＳ［配列識別番号：２］、ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱ［配列識別番号：３］、ＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ［配列識別番号：４］、ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ［配列識別番号：１４００］、ＧＧＧＡＱ［配列識別番号：５］、ＧＡＰＲＬＰＰＡＱＡＡ［配列識別番号：６］、ＫＴＲＦＱＲＫＧＰＳ［配列識別番号：７］、ＰＧＮＲＳＭＧＨＥ［配列識別番号：８］、ＥＡＥＧＧＳＲＳ［配列識別番号：９］、ＶＧＡＡＲＤＳＲＡＡ［配列識別番号：１０］、ＨＤＹＰＰＧＧＳＶ［配列識別番号：１１］、ＳＩＱＫＦＱＶ［配列識別番号：１２］、ＶＥＫＰＧＥＲＧＧＲ［配列識別番号：１３］、Ｐ配列識別番号：１２］、ＶＥＫＰＧＥＲＧＧＲ［配列識別番号：１３］、ＰＬＦＧＲＧＨＫＲＧ［配列識別番号：１４］、ＥＤＲＧＤＡＧＷＲＧＨ［配列識別番号：１５］、ＱＥＲＧＡＳＰＲＡＡＰＲＥＨ［配列識別番号：１６］、ＲＱＰＧＤＶＡＰＧＧＱＨＲＰＶＤＤ［配列識別番号：１７］、ＡＧＬＬＡＩＰＥＡＫ［配列識別番号：１８］、ＹＶＤＶＹＮＧＧＫＦＳ［配列識別番号：１９］、ＡＡＤＥＲＲＣＨＬＬＨＭＣＧＲＲ［配列識別番号：２０］、ＱＱＡＴＥＡＧＱＨＹＱＰＧＳＰＬＨＤＨＳＨＶ［配列識別番号：２１］、ＰＱＥＡＡＡＲＴＮＲ［配列識別番号：２２］、ＲＳＷＶＨＰＡＰＰＹＱＭＣＬＧ［配列識別番号：２３］、およびＧＧＳＲＴＨＰＲ［配列識別番号：２４］。フレームシフトに至らしめる突然変異が何処に生起するのかに依存して、突然変異タンパク質の一部分は野生型タンパク質と同じ配列を有していると思われ、およびタンパク質の一部分は突然変異タンパク質の配列を有してると思われる。更に、突然変異が何処に生起するのかに依存して、ヌクレオチド配列が停止コドン（図面中に＊で示されている）をコードしているとき、突然変異タンパク質は終了するであろう。かくして、突然変異が何処に生起するのかに依存して、種々の突然変異タンパク質が産生されよう。ｃＤＮＡ中のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフに突然変異が生起することが予測されるので、それに従って突然変異タンパク質の配列が予測される。たとえ配列中の別の位置で突然変異が生起したとしても、誘導される突然変異タンパク質は予測される突然変異タンパク質のＣ末端に相当するペプチド配列を含有している可能性が高いので、このようなペプチドを合成した。更に、タンパク質のＣ末端領域はこのタンパク質の他の領域より一層エピトープを形成し易いように思われる。合成されたペプチドの固有性は遺伝子配列データベース検索によって確認した。次いで、合成した各ペプチドをウサギに注入し、そしてこのペプチドに親和性を有する抗体を精製した。抗体を得るために使用した技術は当該技術分野の熟練者に知られている標準的な技術である。次いで、得られた抗体は神経病理学的に確認されたＡＤ症例および対照の非ＡＤ症例の前頭皮質、側頭葉および海馬の剖検材料で試験した。抗体の存在は当該技術分野の熟練者に知られている標準的な検出法を使用して測定される。図１は、βアミロイド前駆体タンパク質の＋１読み取り枠で予測されるペプチドに対する抗体を使用して同定されたアルツハイマー患者の前頭皮質におけるβ アミロイド前駆体突然変異タンパク質（βＡＰＰ⁺¹）の存在を示している。使用した抗体は次の配列、ＲＧＲＴＳＳＫＥＬＡ［配列識別番号：１］を有するペプチドに対して親和性を有していた。予測されたペプチドに対する抗体を使用して実施した他の免疫反応試験の結果は表２〜５に示す。突然変異タンパク質の存在は検出することができ、そしてＡＤを有する被験者と相関していることが分かる。それ故、１種またはそれより多くの突然変異タンパク質の存在はＡＤの指標であることが分かる。表６は前頭皮質（領域１１）、側頭皮質（領域３８）および海馬内部の免疫反応性の結果を要約している。他の疾病も本明細書で定義した突然変異タンパク質の存在と相関している可能性がある。例えば、７人のダウン症候群患者を本発明に従って試験した。ダウン症候群は、β-アミロイド前駆体タンパク質の過剰発現をもたらす染色体２１の３染色体性である。本発明者はこれら患者の前頭および側頭大脳皮質ならびに海馬がプラークやもつれた状態のニューロフィブリンを含有していることに注目して、このような過剰発現が、過剰に発現されたβ-アミロイド遺伝子中のＧＡＧＡＧモチーフのフレームシフト突然変異によってニューロンに転写突然変異の蓄積を促進する可能性があると仮定した。アミロイド＋１カルボキシ末端ペプチドに特異的な上記抗体を有するダウン症患者の前頭および側頭大脳皮質から得られる組織を免疫細胞化学的に染色した後、７人の患者のうち６人のもつれた状態のニューロフィブリンに免疫反応性が観察された。対合対照の前頭皮質は染色されなかった。それ故、突然変異アミロイドタンパク質はアルツハイマー病だけでなく他の疾病、例えばアルツハイマー神経病理学に係わっているダウン症にも相関している。多数の突然変異がＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフで生起することが見い出されている。表７は神経細胞系の種々のｃＤＮＡ中に相補的なＧＡＧＡモチーフが存在していることを示している。このモチーフまたはタウおよびアポリポタンパク質Ｅ４の配列から分かるように、（ｃＤＮＡ中の）ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＡおよびＧＡＧＡＴのような類似のモチーフはこれらの疾病になるかまたはこれらの疾病と関係しているフレームシフト突然変異に関係付けることができる。他のＲＮＡ分子中にこのモチーフまたは類似のモチーフが存在していることは、これらモチーフが疾病に関係していることを示している可能性がある。このようなモチーフとは関係がないが、依然として疾病を引き起こすかまたは疾病と関係のあるフレームシフト突然変異に導く他の突然変異が生起している可能性もある。表８は、神経細胞系の特定のＲＮＡ分子中にＧＡＧＡＣモチーフ、即ちβＡＰＰ、タウおよびユビキチンが存在していることを示している。この表はまた、なかんずく、遺伝子（この遺伝子から突然変異ＲＮＡ分子が転写される）の染色体位置およびこのＲＮＡ分子によってコードされる最長ポリペプチド形態の分子量とそのＣ末端（このＣ末端に対して抗体が産生させられる）を有する異常な＋１ペプチドの予測される大きさも示している。これらのペプチドはウエスタンブロットで示され、そしてまた、影響を受けていない野生型Ｎ末端のエピトープを認識する別の抗体を使用しても同定された。実施例２抗原性ペプチドの選択本明細書で記載したように、配列中で突然変異タンパク質の一部分に相当する合成ポリペプチド（このようなペプチドが化学的に合成されるにしろ、化学的若しくは組換え技術で産生されたタンパク質フラグメントであるにしろ）は、これらが以下の特徴を有している場合、本発明に従って突然変異タンパク質に特異的な抗体を産生するための抗原性ペプチドとして有用であろう。合成ペプチドは最小限８個の、そして好ましくは１２〜１５個のアミノ酸残基を含んでおり、そして最適の長さは２０〜２１個のアミノ酸であろう。ハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質のアミノ酸配列の親水性と抗原性指数は、コンピュータープログラミングを使用するアナリティカルバイオテクノロジーサイエンシズ（Analytical Biotechnology Sciences）、マサチューセッツ州ボストン、によって測定することができる。本発明に従って有用となる可能性のある合成ペプチドは、好ましくはハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質の１００〜１５０個のカルボキシ末端アミノ酸の範囲内の１２〜２０個の範囲のアミノ酸を含んでいる。選択されたペプチドのアミノ酸配列は、相応の濃度で、任意の１つのペプチドに対する抗血清が既知の配列の任意のタンパク質と特異的に相互作用する可能性を排除するために、配列に関するコンピューターデータベース（例えば、GenBan k）で検索する。好ましい配列は、近似する相同性（即ち、「近似する」とは８０〜１００％の同一性を意味する）を有していないことが決定されている配列である。実施例３「突然変異」タンパク質の検出本発明のもう１つの実施態様は、疾病状態の指標として所与の組織における「突然変異体」または突然変異タンパク質の存在のアッセイに関係している。ここで、上記した抗体を調製する。次いで、抗体またはそのイディオタイプ含有ポリアミド部分を候補組織および指示基と混合する。天然生起アミノ酸配列の存在は、指示基で信号化される免疫反応の形成によって確認される。候補組織には、上記したような突然変異タンパク質の存在を試験すべき任意の組織若しくは細胞系または体液が含まれる。所与のハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質の発現は、以下のようにハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質中のカルボキシ末端範囲のアミノ酸に相当するペプチドに対してウサギで調製した血清を使用して調査することができる。ＣＭＫ細胞またはＵ３Ｔ３細胞は³⁵Ｓ-メチオニンで代謝過程で標識され、そして抽出物は抗血清で免疫沈降させられる。ハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質が細胞内に存在している場合には、対応する分子量のタンパク質種がＣＭＫおよびＵ３Ｔ３細胞内で検出されるであろう。このタンパク質は、Towbin e t al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，76 ，4350〜4354(1979)に一般的に記載されているようにして、核、膜および細胞質フラクションのウエスタンブロット分析によって膜、核または細胞質に対して位置を決定することができる。この位置決定は主として形質膜に関係している免疫蛍光分析によって確認することができる。代謝標識化免疫沈降および免疫学的位置決定アッセイは以前に記載された(Fur th，et al.，Oncogene 1:47〜58、1987;Laemmli，U.K.、Neture 227:680〜685， 1970;Yarden，Y．et al.，EMBO J．6:3341〜3351，1987;Konopka，J.B.，et al. ，Mol．Cell．Biol．5:3116〜3123，1985)ようにして行われる。免疫ブロット分析用に、総溶解物を調製する（フルース（Fruth）の溶解緩衝液を使用して）（F ruth，M.E.，et al.，Oncogene，1:47〜58，1987）。相対タンパク質濃度は、標準品としてウシ血清アルブミンを使用して比色アッセイキット（Bio-Rad）で測定する。概ね０.０５mgのタンパク質を含有する溶解物のタンパク質を、２-メルカプトエタノールを含有する等量の２ｘＳＤＳ試料緩衝液と混合し、５分間沸騰させ、１０％のポリアクリルアミド-ＳＤＳゲル(Konopka，J.B．et al.，J．Vir ol.，51:223〜232，1984)で分画し、そしてイムノビロンポリビニルジンジフルオリド（Millipore Corp.、マサチューセッツ州ベッドフォード）フィルターに移した。タンパク質ブロットは、特異的な抗ペプチド抗体（下記参照）で処理した。特異的抗体の主要な結合は、ホースラディッシュペルオキシダーゼに抱合した抗IgG第二抗体を使用し、そしてその後化学発光発現ＥＣＬウエスタンブロットシステム（Amersham International）を使用して検出することができる。代謝標識化のために、１０⁶個の細胞は、メチオニンを除いたダルベッコの修正イーグル培地（Amersham Corp.）１ml中１００μCiの³⁵Ｓ-メチオニンを使用して１６時間標識する。抗ペプチド抗血清で標識した細胞から得られるタンパク質の免疫沈降は記載された（Dymecki，S.M.等、J．Biol．Chem．２６７：４８１５〜４８２３、１９９２年）ようにして実施する。１０⁷cpmの酸不溶性³⁵Ｓ -メチオニンを含有する溶解物の一部を抗血清１μgと共に０.５mlの反応混合物中でインキュベートした。免疫沈降試料はＳＤＳ-ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびオートラジオグラフィーで分析した。免疫学的位置決定試験のために、１０⁷個のＣＭＫ細胞を音波処理緩衝液（６０ｍＭのトリス-HCl、ｐＨ７.５、６ｍＭのＥＤＴＡ、１５ｍＭのＥＧＴＡ、０．７５Ｍのスクロース、０.０３％のロイペプチン、１２ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド、３０ｍＭの２-メルカプトエタノール）中に再懸濁する。細胞は６回、各１０秒間音波処理し、そして２５,０００×ｇで１０分間４℃ で遠心する。このペレットを音波処理緩衝液１mlに溶解し、そして２５,０００ ×ｇで１０分間４℃で遠心する。このペレット（核フラクション）を音波処理緩衝液１mlに再懸濁し、そして等量の２ｘＳＤＳ試料緩衝液に添加する。上記で得られた（最初の音波処理後の）上清液を１００,０００×ｇで４０分間４℃で再度遠心する。この上清液（サイトゾルフラクション）を取り出し、そして等量の２ｘ濃縮ＳＤＳ試料緩衝液に添加する。残っているペレット（膜フラクション）を洗浄し、そして上記したようにして音波処理緩衝液およびＳＤＳ試料緩衝液に溶解する。タンパク質試料は、レムリ（Laemmli）法（Konopka，J.B.等、Mol．Cell．Biol．５:３１１６〜３１２３、１９８５年）に従って１０％ポリアクリルアミドゲルで電気泳動して分析する。これらのタンパク質は、その後の免疫ブロット分析用に上記ゲルから０. ４５μmのポリビニリジンジフルオリド膜に移す。抗体の主要な結合はホースラディッシュペルオキシダーゼに抱合した抗IgG第二抗体を使用して検出する。所与のタンパク質の免疫組織化学的位置決定のために、所望の場合、ＣＭＫ細胞またはＵ３Ｔ３はカバーガラス上で概ね５０％の集密になるまで増殖させ、そして培地を除去した後にＰＢＳ（ｐＨ７.４）で洗浄する。これらの細胞は、０. ０７５％のトリトンＸ-１００を含有する１％のパラホルムアルデヒド中３７℃で１分間予備的に固定し、ＰＢＳですすぎ、そしてその後４％のパラホルムアルデヒドで１０分間固定する。固定段階後、細胞をＰＢＳ中ですすぎ、０．１を有するＰＢＳ中で反応を停止させ、そして最後にＰＢＳ中で再度すすぐ。抗体を染色するために、細胞は先ず遮断溶液（ＰＢＳ中３％のウシ血清アルブミン）で遮断し、そして３７℃で１時間インキュベートする。次いで、細胞を抗血清（１：１００希釈または前免疫ウサギ血清（１：１００）（下記参照））と共に３７℃で１時間インキュベートする。一次抗体とのインキュベーション後、細胞は３％のウシ血清アルブミンおよび０.１％のトゥイーン２０を含有するＰＢＳ中で洗浄し、そして遮断溶液中で１：１００に希釈したフルオレセイン抱合ロバ抗ウサギIgG（Jackson Immunoresearch、メイン州）中３７℃で１時間インキュベートする。カバーガラスをＰＢＳ（ｐＨ８.０）中で洗浄し、そしてガラススライドに載せる前に各カバーガラスにグリセリンを添加し、そして透明なマニキュア液で密封する。ガラススライドは全てツァイスアキシオホト（Zeiss Axiophoto）顕微鏡で試験した。実施例４生物学的試料の分析所与の突然変異タンパク質または核酸に関する上記検出方法は、マーカータンパク質を含有している疑いのある組織、細胞系および体液（例えば、脳脊髄液または、静脈血、動脈血および臍帯血を含むがこれらに限定されない血液）に係わる分析に適用できる。例えば、疾病状態の疑いのあるＣＮＳ組織の試料を分析することができ、この場合にはこの特定の疾病状態の組織が健常組織と比較して検出可能な値のハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質を含有していることが本発明に従って前以て観察されている。この疑いのある試料と健常対照試料の分別物を準備し、そして本明細書に記載したハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質に特異的な抗体の有効量および指示基と混合する。この混合物は典型的には、免疫反応を生じさせるのに十分な時間、知られているようにしてインキュベートする。次いで、インキュベートした混合物は指示基で示される免疫反応の存在についてアッセイする。次いで、疑いのある試料と対照試料中のハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質の相対的な値を比較することによって、疑いのある試料における疾病状態または健常状態の診断が可能になる。ハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質の存在を分析する上記タイプは、勿論、コード化ＲＮＡについての分析、例えば当該技術分野で慣用であり且つ知られているノーザンブロット分析またはＲＮＡドットブロット分析によって実施することができる。本発明による疾病治療法本発明による疾病治療法は突然変異転写物の除去を意図している。転写突然変異ＲＮＡ分子の存在を支持する証拠とは、ホモ接合性のブラトレボロ（Brattleb oro）視床下部細胞でフレームシフト突然変異を有するバソプレシンｃＤＮＡが１００個のコロニー中１個のコロニーで観察され、一方フレームシフト突然変異を有するゲノムバソプレシンＤＮＡは同定されなかったということである。ヒト視床下部中では、バソプレシン＋１免疫反応性細胞数の年齢に関係した増加は観察されていない（ラットとは対照的に）。しかしながら、胎内期（妊娠２９〜４２週）では、＋１バソプレシンタンパク質を含有する＋１免疫反応性細胞数の膨大な増加が検出される。誕生後、これらの細胞数はほんの２,３個にまで後退する。βapp遺伝子の発現が非常に高い（正常より５倍高い）ダウン症候群では、βappおよび＋１突然変異タンパク質の最高値も観察され、これはβapp遺伝子の発現が正常値以上に増加することが見い出されていないＡＤより高かった。βＡＰＰ＋１突然変異タンパク質とUbiB＋１突然変異タンパク質が同一細胞内に共存している（且つもつれた状態で、そして栄養障害性神経突起に存在している）ことも見い出された。従って、この一時的な増加がゲノム事象によるものとは思われない。フレームシフト突然変異を含有するＲＮＡ分子（即ち、フレームシフトした転写物）または突然変異タンパク質が或る疾病状態と相関関係にある場合、この疾病は本発明に従って次のようにして治療することができる、フレームシフトしたＲＮＡを開裂によって選択的に除去するのに役立つ酵素、例えばリボザイムをこのような酵素の投与を必要としている患者に投与することによって、好ましくは実質的に非開裂形態の突然変異ＲＮＡの野生型のものを投与することによって、ハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質の野生型のものを投与することによって、または突然変異ＲＮＡを翻訳不能にする核酸重複物を形成するために突然変異ＲＮＡに相補的なオリゴヌクレオチド若しくはこのようなオリゴヌクレオチドをコードしている配列を細胞に投与することによって。上記の投与を必要としている患者には、疾病の症状を示している患者、更には疾病を発現している疑いのある患者、即ちフレームシフトしたペプチド（例えば、＋１または＋２読取り枠にアミノ酸配列を有しているペプチド）の存在について組織試料、例えば脳脊髄液を測定して本発明に従ってモニターされる患者が含まれる。本発明によって、リボザイムは影響を受けているかまたは疑いのある細胞に送達されて、突然変異ＲＮＡを開裂させそしてその結果突然変異ＲＮＡを突然変異タンパク質に翻訳する細胞の能力を不能にすることができる。野生型タンパク質は、細胞によってそれまでに産生されていなかった場合、タンパク質形態で提供するかまたは野生型ＲＮＡをリボザイムと一緒に細胞に投与することによって提供することができる。野生型ＲＮＡは、単なるＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異のレベルではない突然変異ＲＮＡ配列と識別できる配列を含有するように操作することができる。例えば、突然変異ＲＮＡは第三塩基サイレント突然変異、即ちＲＮＡのコード化配列は変えないが野生型ＲＮＡをリボザイムによる開裂に対して殆どまたは実質的に非感受性にする突然変異を含有することができる。１つの理論で拘束されないが、突然変異ＲＮＡの割合を減少させそしてハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質に関して産生される正しいタンパク質の割合を増加させることによって疾病の更なる進行を低下させるかまたは防止し、そして多分疾病状態を逆転させることが示唆される。加えて、全ての突然変異転写がニューロン組織に直接毒性の突然変異タンパク質を生じさせるのではないことも考えられる。例えば、突然変異タンパク質はプロテアソーム系および／またはリソソーム系に輸送されるか、或いはすぐに分泌され（例えば、構成性経路または調節性経路によって）そして他の場所で分解されると思われる。しかしながら、ときには突然変異タンパク質は、例えば小胞体内の小器官の膜に蓄積され、その結果細胞機構の正常な過程を破壊するであろう。突然変異ＲＮＡの野生型のものは正しいタンパク質をコードしている。疾病が神経退行変性疾病であるとき、好ましい野生型配列にはβアミロイド前駆体タンパク質遺伝子、タウ遺伝子、ユビキチンＢ遺伝子、アポリポタンパク質-Ｅ₄遺伝子、微小管結合タンパク質II（ＭＡＰ２）遺伝子、ニューロフィラメントタンパク質遺伝子（Ｌ、ＭおよびＨ）、プレセニリンＩおよびII遺伝子、ビッグタウ（ Big Tau）、ＧＦＡＰ、Ｐ５３、ＢＣＬ２、セマホリンIII、ＨＵＰＦ-１、ＨＭＧおよびＮＳＰ-ＡによってコードされるＲＮＡが含まれる。これら遺伝子の配列は本明細書の図面中で提供されている。他の好ましい野生型ＲＮＡはアルファおよびベータチューブリン遺伝子によってコードされており、そしてこれら遺伝子の配列はそれぞれ、Cowan et al.，Mol．Cell．Biol.，3 ，1738〜1745(1983); Lewis et al.，J．Mol．Biol．182，11〜20(1985)中に見られる。疾病が非遺伝性の癌であるとき、好ましい野生型ＲＮＡは、ヒトｐ５３遺伝子およびＢＣＬ-２遺伝子を含んでいるがこれらに限定されない遺伝子配列でコードされている。哺乳類リンタンパク質ｐ５３は細胞分割の調節で必須の役割を果たしておりそして細胞周期のＧ０期からＧ１期への移行に必要であることが示されている。ｐ５３は通常、正常細胞では非常に低い値で存在しておりそして腫瘍サプレッサー遺伝子であると信じられている、ｐ５３が高い値で存在しているとき、ｐ５３は形質転換や悪性で或る役割を果たすことが示されている。正常および悪性組織から得られるｐ５３遺伝子対立因子はBglII部位多形性を有していることが示されている(Buchman et al.，1988， Gene 70:245)。ｐ５３コード化領域は幾つかのＧＡＧＡモチーフ、例えばブッフマン（Buchman）等で発表された配列の１４７６位のＧＡＧＡＣ、１４９８位のＧＡＧＡ、１６４３位のＧＡＧＡ、および１７１３位のＧＡＧＡを含有しており、そしてこれらのモチーフは本発明によるフレームシフトＲＮＡの候補部位を提示している。かくして、ｐ５３ＲＮＡ内のフレームシフト突然変異は天然ｐ５３腫瘍サプレッサー機能の喪失につながる可能性がある。ｐ５３内のこのような突然変異の検出は前癌性または悪性の診断法となることができ、そしてｐ５３機能を修正する本明細書に記載した治療法は腫瘍サプレッサー機能を回復させることができる。高齢者において高頻度で生じるII型真性糖尿病では、ランゲルハンス島が、多分種々の転写物（例えば、ユビキチン転写物）におけるフレームシフト突然変異の結果として退行変性する。本発明はまた、ＲＮＡ転写物を標的とすることによってフレームシフト突然変異を生じさせる１つまたはそれより多くのＧＡ、ＧＴまたはＣＴ欠失を有する少なくとも１つのＲＮＡによって引き起こされる疾病と闘う方法も包含する。かくして、本発明に従って、ＲＮＡ内のフレームシフト突然変異を、突然変異ＲＮＡ配列に特異性を有するリボザイムを使用して開裂させ（Denman等、Arch．Of Bio chem．Biophysics．３２３、７１〜７８、１９９５年）そして突然変異ｍＲＮＡを除去して、フレームシフトしたＲＮＡ値を修正できることも意図されている。それ故、フレームシフトしたＲＮＡに関連した疾病は適当なリボザイムまたは該リボザイムをコードする配列を患者に投与することによって治療される。選択された特異性を有するリボザイムはサレンジャー（Sullenger）およびセック（Cech）、Nature ３７１：６１９〜６２２、１９９４年）（これは本明細書に参照して組み入れる）が記載したようにして製造することができる。リボザイムやリボザイムをコードする配列はタッシュル（Tuschl）等、Curr．Opin．St ruc．Biol．５:２９６、１９９５年およびワール（Wahl）等、Curr．Opin．Stru c．Biol．５:２８２、１９９５年が記載したようにして調製することができる。ることができる。本発明はまた、フレームシフトしたＲＮＡを含有する標的細胞に相補的オリゴヌクレオチドまたは相補的オリゴヌクレオチドをコードする配列を送達することによって、フレームシフトを生じさせる１つまたはそれより多くのＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡによって引き起こされるかまたはこれに関係のある疾病を治療する方法も包含する。上記オリゴヌクレオチドはＧＡ、ＧＴまたはＣＴ欠失を含有する突然変異ＲＮＡの領域に関して突然変異配列を有しており、そしてその結果突然変異ＲＮＡとインビボでハイブリッドを形成してこのようなＲＮＡの転写不能化に寄与することができる。強い標的部位結合親和性、即ち十分な標的部位相同性を有するオリゴヌクレオチドが好ましい。ヌクレオチドの長さが１０から３０個の間でありそしてＣＴＣＴ、ＣＴＣＴＧ、ＣＴＣＴＣ、ＣＴＣＴＴ若しくはＣＴＣＴＡモチーフまたはＧＡＧＡ、ＧＡＧＡＧ、ＧＡＧＡＣ、ＧＡＧＡＴ若しくはＧＡＧＡＡモチーフを含有するオリゴヌクレオチドも好ましい。本発明による疾病の治療法は以下に記載されており、そして投与される物質の調製および疾病を患っている患者に該物質を本発明に従って投与することを含んでいる。本明細書で使用するとき、「物質」とは次の任意のものを言う、リボザイム、リボザイムをコードしている核酸配列、野生型転写物、アンチセンス突然変異ＲＮＡ若しくはＤＮＡまたはアンチセンス配列をコードしている核酸配列、野生型遺伝子によってコードされている野生型タンパク質、フレームシフトした（ナンセンス）タンパク質に特異的な抗体。本発明による疾病の治療法は次のようにして達成することができる。実施例５では、本発明に従ってリボザイムを使用する治療法を記載する。実施例６では、ベクターの投与を記載する。実施例７では、タンパク質、リボザイムまたはリポソームを使用する核酸ベクターの投与を記載する。実施例８では、血液−脳関門を通過するこれら物質の送達を記載する。最後に、実施例９では、タンパク質、リボザイムまたは他の核酸、例えば遺伝子発現構築物を有するベクターを含んでいる細胞の送達方法を記載する。実施例５リボザイムを使用する本発明による治療法フレームシフトしたＲＮＡの選択的除去を行うかまたは促進するリボザイムまたはリボザイムをコードする核酸配列の調製および送達は次のようにして実施する。本発明による突然変異転写物の選択的除去かくして、本発明は、β-ＡＰＰおよびユビキチンＢ遺伝子中のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴモチーフにおいてまたはこれらに近接して生じる転写背信の結果であるフレームシフトしたｍＲＮＡの転写によって引き起こされる疾病の治療方法も包含する。これらのメッセージによってコードされる異常なタンパク質の蓄積がアルツハイマー病の進行に寄与すると信じられている、それ故、突然変異転写物の除去は治療的に価値がある。本明細書に記載した突然変異転写物が、本明細書に記載したようにして設計されそして投与されるリボザイムを使用するリボザイム介在性開裂によって細胞内で翻訳不能にされることも本発明によって意図されている。加えて、或る状況下ではリボザイムで開裂されたメッセージを、野生型タンパク質をコードする外来性転写物で置換することが有利であることもあり、その際該転写物は開裂抵抗性であり、そしてそれ故その合成は、本明細書に記載した突然変異転写物を産生するような転写エラーまたは転写後修正に付されない。細胞内のユビキチンＢおよびβ-ＡＰＰ突然変異転写物を選択的に除去するための治療方策を以下に記載する。しかしながら、本発明は以下に記載する方法に従って他の突然変異転写物を、これらが本明細書に開示されていようと、後になって発見されようと、選択的に除去することも意図している。ハンマーヘッドクラスのリボザイムは知られている最小のものであり、そしてインビトロ合成および細胞への送達の両方に役立つ(Sullivan，J．Invest．Derm atol．103:85S〜98S，1994;Usman et al.，Curr．Opin．Struct．Biol．6:527〜 533，1996によって要約されている)。ハンマーヘッド開裂標的には配列モチーフＵＨ（式中、ＨはリボヌクレオチドＡ、ＵまたはＣを示すが、Ｇは示さない）を含んでいることが必要であり、そしてこの配列はＨの後で開裂される。ハンマーヘッドリボザイムのコア機能ユニットは、ヘリックスＩ（これは開裂部位の３'ｍＲＮＡ配列とハイブリッドを形成する）、ヘリックスII（開裂反応に介在する２２個のリボヌクレオチド触媒ドメイン）およびヘリックスIII（これはＵＨ開裂モチーフの５'配列および該モチーフの「Ｕ」を含んでいる５'配列とハイブリッドを形成する）から構成されている３分節構造である(Haseloff and Gerlach,Nature 334：585〜591，1988年;Ruffner et al.，Biochemistry 33 :10695〜10702，1990)。研究によって、ヘリックスＩおよびIIIの長さは、リボザイムが開裂部位周囲の領域に結合し且つ開裂後にリボザイム自体を該領域から放出する効率と比例することが示された、前者は標的の認識に重要であり、一方後者は真の触媒活性、即ち不活性化された標的分子対リボザイムの比率をアンチセンス-ＲＮＡ介在性の不活性化で観察される１：１の化学量論的比率以上に高める触媒活性を示す動力学の維持に重要である。理想的には、ヘリックスＩは、ヘリックスIIIでの９〜１３個のリボヌクレオチドに対して３〜５個のリボヌクレオチドの長さである（Tabler et al.，Nucleic Acids Res．22:3958〜3965，1 994;Hendry andMcCall，Nucleic Acids Res．24:2679〜2684，1996)。他の因子、例えば非結合リボザイムにおけるステムループ形成や標的ｍＲＮＡも反応動力学やリボザイムの安定性において或る役割を果たしており、そしてこのような相互作用を予測しそして／または相殺するために、多数のリボザイムデザインの分子モデル作成試験やインビトロ試験がしばしば行われる(Sioud et al.，Nucleic Acids Res．22:5571〜5575，1994;Gavin and Gupta，J．Biol．Chem．272:1461 〜1472，1997)。突然変異ユビキチンＢ転写物は、細胞に送達されるハンマーヘッドリボザイムをリポソームベクター内で適用することによってこれら細胞から除去することができる。本発明は、これらリボザイムを使用して、５'部位の突然変異転写物を認識してこれら転写物を転写中のポリメラーゼのずれの源になっているＧＡＧＡまたはＧＧＴ含有部位に開裂し、そしてそれによってこれらの欠陥メッセージの翻訳産生物のフレームシフト部分を細胞から除去することを含んでいる。ユビキチン転写物のＧＡＧＡモチーフの直前の配列はＧＣＧＵＣＵであり、そしてこれは開裂認識モチーフＵＣを含有している。上記で述べた長さに関する考慮を所与のものとすると、特定の突然変異に対してヘリックスＩで理想的に結合される配列はＧＡＧである、しかしながら、このようなリボザイムは突然変異転写物や野生型転写物と同等の効率で結合すると予期されるので、ヘリックスＩは４個のヌクレオチドを更に含むように延長し、その結果７個の塩基は全て突然変異転写物とハイブリッドを形成するが、野生型配列との結合を不安定にする程十分なミスマッチを生じさせるようにしなければならない。この方策は突然変異転写物が挿入によってというよりはむしろ欠失によって生じている場合に一層効率的である。何故なら、前者においては標的放出に与えるヘリックスＩの絶対的な長さの効果が関心事になる、しかしながら、リボザイムの効率的な結合を阻害する程野生型配列と十分にミスマッチしているユビキチンの場合には、ＧＡＧＡモチーフまたはＧＧＴ配列の不正確な転写から生じ得る種々の突然変異配列と相補的な種々に設計されたリボザイムのプールを送達すると、大部分の欠陥メッセージのフレームシフト産生物は翻訳されないであろう。このような方策は、開裂部位が開裂部位の５'側まで１個から（せいぜい）５個の塩基である状況下で実用的である、しかしながら、距離が長ければ長いほどそれに応じてより長いヘリックスＩ結合ドメインが必要であり、そしてこれによって、突然変異転写物と野生型転写物間の識別に３'ミスマッチを創製する必要性と相俟って、このような手法が或る種の突然変異を取り扱うのに不適切となっている。これはβ-ＡＰＰのＧＡＧＡ-欠失転写物に当てはまる。１つのＧＡＧＡモチーフは１個の塩基で開裂部位から分離されているが、残りの４つのモチーフは最も近い５'開裂部位から７個と２０個の塩基の間にある。このような場合には、ハンマーヘッドリボザイムによる野生型転写物の開裂も回避できないので、開裂抵抗性の転写物による置換を突然変異転写物の除去と同時に行われなければならない(開裂抵抗性の転写物を生じさせる可能性のある配列置換体については表１０参照)、ここで、リボザイムは最初のＧＡＧＡモチーフの任意のＵＨ５'部位で両タイプのメッセージを開裂するように設計されている。 β-ＡＰＰ転写物が必要な全ての細胞でβ-ＡＰＰ転写物を置換することが有利であると思われる、それ故、β-ＡＰＰプロモーター配列によって駆動される、スプライシングされたβ-ＡＰＰミニ遺伝子を有する発現ベクターの同時送達を使用することができる。このプロモーターに関して多数の研究が行われており（なかでも、Lahiri and Robakis，Brain Res．Mol．Brain Res．9:253〜257，199 1年;Bourbonniere and Nalbantoglu，Brain Res．Mol.Brain Res．19:246〜250 ，1993年;Lukiw et al.，Brain Res．Mol．Brain Res．22:121〜131,1994年;Lah iri and Nall，Brain Res．Mol．BrainRes．32:233〜240，1995年;Bourbonniere and Nalbantoglu，Brain Res．Mol．BrainRes．35:304〜308，1996年;Quitschk e et al.，J．Biol．Chem．271:22231〜22239，1996）、そして組織培養中の細胞型特異的プロモーター活性には転写開始部位に対して５'の９６塩基対で十分であることが証明されている(Quitschke and Goldgaber，J．Biol．Chem．267:1 7362〜17368，1992)。これらの９６塩基対は、リボザイム認識部位で改変されて置換β-ＡＰＰ転写物の開裂を防止し、そしてＧＡＧＡモチーフで改変されて最初に突然変異転写物を産生するような転写機構のずれを阻止するように操作されたミニ遺伝子と融合することができる、これらの置換は、各々の場合において翻訳上の「サイレント」突然変異が導入されるように実施されなければならない。このような変更の例は表１０に示されている。実施例６核酸ベクターの調製リボザイムをコードする配列若しくは突然変異ＲＮＡの野生型のもの、またはアンチセンス（相補的）突然変異オリゴヌクレオチド配列は所望の哺乳類細胞内で発現させるために適当なベクター中にクローン化することができる。このようなベクターは標的細胞型で発現されるプロモーターを含んでおり、そして更には所与の細胞型で発現させるために選択されたエンハンサーや遺伝子座調節領域を含んでいることもできる。本発明による有用なベクターの例には、標的哺乳類細胞にコード化配列を成功裏に伝達させる任意のベクターが含まれるがこれに限定されない。核酸は、ウイルス性（例えば、アデノウイルス性またはレトロウイルス性）または非ウイルス性ＤＮＡ若しくはＲＮＡベクター（その際、非ウイルス性ベクターにはプラスミド、直鎖核酸分子、人工染色体およびエピソームベクターが含まれるがこれらに限定されない）を使用して本発明で使用するためにトランスフェクションすることができる。異種遺伝子の発現は、プラスミドＤＮＡを筋肉(Wolff J.A．et al.，1990年，Science，247:1465〜1468;Carson D .A．et al．米国特許第５,５８０,８５９号）、甲状腺(Sykes et al.，1994;Hum an Gene Ther．5:837〜844)、メラノーマ(Vile et al.，1993年，Cancer Res.,5 3 :962〜967)、皮膚(Hengge et al.，1995，Nature Genet.，10:161〜166)、肝臓 (Hickman et al.，1994，Human Gene Therapy，5:1477〜1483)内に注入した後や気道上皮(Meyer et al.，1995，Gene Therapy，2:450〜460)の暴露後に観察された。例えば、レトロウイルス遺伝子伝達ベクターＳＡＸ(Kantoff et al.，Proc．N at．Aca．Sci．83:6563，1986)を使用して標的細胞内に選択されたコード化配列を挿入することができる。ＳＡＸは、レトロウイルスＬＴＲから開始するneoR遺伝子と内部ＳＶ４０プロモーターから開始するヒトＡＤＡ遺伝子を有するモロニーウイルスに基づくベクターである。かくして、ＳＡＸベクターは、例えばＳＡＸベクター内のｈＡＤＡコード化領域を所望のコード化領域に置換することによって、リボザイムのコード化配列若しくは野生型ＲＮＡ、或いは本明細書に記載されたようにして同定される選択されたアンチセンス配列を含有するように当該技術分野の熟練者が操作することができる。選択されたリボザイムをコードするかまたはコードするように操作することができる発現ベクターは当該技術分野で知られている。Yuyama et al.，Nucl．Aci ds Res．22:5060，1994、は幾つかのリボザイムをコードしている多機能発現ベクターを記載している。このベクターは、選択されたリボザイム配列をベクター内の１つまたは両リボザイム配列に置換することによって選択された特異性を有するリボザイムをコードするように適合させることができる。Zhou et al .，Gene 149:33，1994;Yamada et al.，Virology 205:121，1994はＴ細胞内へのリボザイム配列のレトロウイルス形質導入を記載している。これらのレトロウイルスベクターは選択されたリボザイム配列をコードするように適合させることができる。Liu er al.，Gene Therapy 1:32，1994;Lee et al.，Gene Therapy 2:3 77,1995は本発明によって意図されている任意の核酸配列の発現に使用するのに適合できる発現ベクターを記載している。一般的に、核酸分子は投与量製剤に適合した態様で、そして予防的におよび／または治療的に有効であるような量で投与される。最終産生物（例えば、アンチセンスＲＮＡ分子またはリボザイム）を直接投与するとき、投与すべき投与量は細胞当たりで必要な量およびトランスフェクションすべき細胞数と正比例し、補正係数はこれら分子の取込み効率である。遺伝子を核酸分子から発現させなければならない場合、コードされている産生物の適当な値を生じさせる標的細胞当たりの核酸分子数の算出においては、関連した転写調節配列の強さも考慮しなければならない。遺伝子発現構築物を投与する場合、適当な投与量範囲は単回投与量では０.５〜１μgまたは１〜１０μg、或いは任意に１０〜１００μgの核酸のオーダーである。１mgまでの投与量が有利に使用できると考えられる。細胞当たりのモル当量数は構築物の大きさと共に変動するので、それに応じて使用されるＤＮＡの絶対量を調節して、大きな構築物を注入するときには適当な遺伝子コピー数を確保するようにしなければならないことに注意されたい。本発明に従って投与される核酸分子は、例えば、水、リン酸緩衝生理食塩液または生理食塩液のような生理学的に許容され得る希釈剤中で処方することができ、そして更にアジュバントを含めることができる、しかしながら、他の製剤を有利に使用できることも意図されている。不完全フロイントアジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウムまたはミョウバンのようなアジュバントは当該技術分野で周知の材料である。本明細書に記載した核酸分子は局所的または全身的のどちらかで投与することができる。薬理学的組成物を局所的および全身的に投与する方法は共に当該技術分野で良く知られている。本発明で使用される核酸構築物は単回または多数回投与量で投与することができる。多数回投与量スケジュールは、投与初期コースが１〜１０回の別個の投与量を含んでいることができ、そしてトランスフェクションされた核酸の細胞値の維持および／または増強に必要なその後の時間間隔で投与される他の投与量が続くというものである。このような間隔は治療用核酸に対する受容者の必要性の持続、投与された核酸が受容者のゲノム内に組み込まれるようにならない場合には該核酸が哺乳類細胞内で自己複製する能力および更新不能な核酸（例えば、自己複製しない分子）の半減期に依存する。好ましくは、受容哺乳類の医学的必要性によって核酸またはその産生物がその寿命中または少なくとも長期問、例えば１年またはそれ以上に亘って必要であることが決定されるとき、核酸は標的細胞内で自己複製するベクター配列でコードされていることができる。核酸分子のトランスフェクションとその後の維持の有効性は、トランスフェクションされた構築物を更に含んでいることができるマーカー遺伝子の活性をモニターするかまたは、問題の遺伝子でコードされているタンパク質か若しくは産生を阻害するように設計されているタンパク質値の減少のどちらかを直接測定することによってアッセイすることができる。これらのアッセイは、当該技術分野の熟練者に知られているような慣用の分子および生化学的技術を使用して実施することができる。本発明の核酸分子を使用する治療法の成功は既知の臨床的指標（例えば、神経退行変性疾病、認識または運動機能の喪失に関する）を評価して決定することができる。被治療者におけるこのような症状の進行または（治療法が、疾病の危険性があると信じられている患者で予防的に行われる場合）発現を、治療を受けていない対照被験者で観察されるものと比較する、対照被験者と比較して、治療を受けた患者の状態の改善が観察される場合、治療法は有効であると判断される。このような評価を行うことは正に当該技術分野の熟練者の知識の範囲内である。実施例７本発明によるリポソーム送達物質は当該技術分野で知られている任意の送達手段を使用して本発明に従って投与することができる。リポソーム送達を以下に記載する。本明細書に記載した物質、例えばリボザイムを投与するために使用されるリポソームは種々のタイプのものであることができ、そして種々の組成を有することができる。主要な制限はリポソームが生存細胞に有毒であってはならないことおよび処置される細胞内部にまでリポソームの内容物を送達しなければならないということである。カルセインやＦＩＴＣデキストランの細胞質送達に介在するためにｐＨ感受性リポソームを使用することが記載されている(Straubinger et al.，Cell 32:106 9〜1079，1983;Straubinger et al.，FEBS Letters 179:148〜154，1985参照）。ｐＨ感受性リポソームに関する他の考察は、エイ．イー．サワーズ（A.E．Sow ers）によって編集されたネジャットダズグネス（Nejat Duzgunes）等の「二価陽イオンとプロトンによって誘導されるリン脂質小胞の融合」という題名の教本セルフュージョン（CELL FUSION）、プレナムプレス（Plenum Press）、ニューヨーク州、１９８７年、２４１〜２６７の１１章に見ることができる。Ellens e et al.，Biochemistry，23:1532〜1538,1984;Bentzetal.，Biochemistry，26: 2105〜2116，1987も参照。リポソームは種々の大きさであることができ、そして内部および外部隔室を分離する１つまたは幾つかの膜層を有していることができる。リポソーム構造における最も重要な要素は、物質を送達するために僅か１個または２,３個のリポソームしか各細胞に入る必要がないように十分な量の酵素または核酸を隔離していること、そしてリポソームが破壊に対して抵抗性であることである。リポソーム構造体には小さな単ラメラ小胞（SUVs、直径２５０オングストローム未満）、大きな単ラメラ小胞（LUVs、直径５００オングストローム以上）および多重ラメラ小胞（MLs）が含まれる。以下で示す実施例では、リボザイムを投与するためにS UVsが使用されるが、これらの方法は本明細書に記載した任意の物質を投与するために適用することができる。 SUVsは分子量によって他のリポソームおよび取り込まれなかった酵素から単離することができ、そしてモレキュラーシーブクロマトグラフィー（この方法は正確であるが時間がかかりそしてリポソームを希釈する）または微分遠心法（この方法は迅速であるがより広範囲の大きさのリポソームを生じさせる）によって他のリポソームや取り込まれなかった酵素から単離することができる。リポソームは天然および合成リン脂質、糖脂質、ならびに他の脂質および脂質同属体、コレステロール、コレステロール誘導体および他のコレステロール同属体、膜に正味電荷を付与する荷電種、リポソーム形成後に更に分子をリポソーム膜と結合させるように反応し得る反応性種、ならびに化学的または生物学的活性を有する他の脂質可溶性成分から製造することができる。本発明による有用なリポソームは、例えば、リボザイムを含有するリポソームの調製を記載している米国特許第５,２９６,２３１号に記載されているようにして調製することができるが、本発明による有用なリポソームは本明細書に記載した物質の任意のものを含有できることに留意しなければならない。簡単に言えば、リン脂質成分をリボザイム（または所望の物質）を含有する水性成分と小胞が形成される条件下で組み合わせることによって。リン脂質の濃度はラメラ構造体を形成するのに十分なものであり且つ水性成分は酵素の生物学的安定性と適合可能でなければならない。リン脂質をガラス上に組み合わせそしてその後小胞を形成させる方法には:リン脂質をガラス上に乾燥させ、そしてその後これらを水性成分中に分散させ、揮発性または非揮発性有機溶媒に溶解したリン脂質を前以て加熱した上記水性成分中に注入し、そして界面活性剤を使用してリン脂質を水性層に溶解し、そしてその後透析して界面活性剤を除去する、ことが含まれる。水性成分中のリボザイムの濃度は、この酵素を乾燥リン脂質上に凍結させ、次いでこの混合物を、水性緩衝液の量を少なくして再度水和して高めることができる。 SUVsは上記混合物を音波処理するかまたは小孔管若しくはフレンチプレス（Fren ch Press）の小孔を通して分散させることによって上記混合物から製造することができる。リポソームに取り込まれたリボザイムは生存細胞に内部的にまたは局所的に投与することができる。動物またはヒトの内部に投与するためにはリポソームは発熱物質不含で且つ無菌でなければならない。発熱物質を排除するためには、化学品、酵素および水を含めて全て発熱物質不含の原料を使用してリポソームを形成する。滅菌は０.２ミクロンのフィルターでリポソームをろ過して実施することができる。注射用には、リポソームは無菌の発熱物質不含緩衝液中に生理学的に有効な濃度で懸濁する。局所投与でもリポソーム製剤は発熱物質不含でなければならず、そして無菌であることが望ましい。この場合には、たとえ皮膚に適用するためであっても、生理学的に有効な濃度のリポソームは緩衝化した高分子グリコールゲル中に懸濁することができる。一般的に、ゲルはリポソーム膜を破壊する可能性のある非イオン性界面活性剤を含んでいてはならない。リポソームを局所的に適用するために他の小胞を使用することもできる。最終調製物中の物質の濃度は広範囲に亘って変動することができ、典型的な濃度は５０μg/mlのオーダーである。ｐＨ感受性リポソームの場合には、より低濃度の物質を、例えば、細胞に内部的に投与されるリポソームでは０.０１〜１.０ μg/mlのオーダーで使用することができる。局所適用の場合には、より高いリポソーム濃度、例えば１０倍またはそれ以上高い濃度を使用することができる。実施例８血液−脳関門を通過する投与投与された材料が血液−脳関門を通過するように、本明細書に記載した物質若しくはそのコード化配列、またはこのような物質を含有するリポソームを個体に投与することが本発明に従って望ましい場合、幾つかの方法が当該技術分野で知られている。例えば、投与すべき物質は、これがタンパク質であれ、核酸であれ、またはリポソームであれ、ポリペプチド、例えば血液−脳関門における透過性を高める親油性ポリペプチドと同時に投与することができる。このようなポリペプチドの例にはブラジキニンおよびレセプター介在性透過剤、例えば米国特許第５, １１２,５９６号および第５,２６８,１６４号に記載されているＡ−７またはその立体配座類似体が含まれるが、これらに限定されない。透過性ポリペプチドによって、同時投与されたリボザイム、コード化配列またはリポソームは血液−脳関門を貫通することができ、そして脳の脳脊髄液隔室に到達することができ、そしてそこでリボザイムまたはコード化配列はその後標的ニューロン細胞に達しそして該細胞内に入ることができる。或いは、投与される物質はステロイド系エストロゲルまたはアンドロゲルとカップリングさせてステロイドレセプターとの結合を高め、そしてその結果脳に接近することができる。リボザイム、抗体、核酸またはこのような分子を含有するリポソームのような物質を本発明に従って投与するもう１つの代表的な方法には、米国特許第５,１８２,１０７号に記載されているように、投与される物質と、トランスフェリンレセプターと反応性の抗体との間でコンプレックスを形成することが含まれる。このコンプレックスは開裂可能であるかまたは開裂不可能なリンカーを含んでいることができ、そして脳の毛細管内皮細胞上で抗体とトランスフェリンレセプターとの結合が生じる条件下で投与されるので、上記物質は活性形態で血液−脳関門を通過して伝達される。実施例９エクスビボ治療法インビボ治療法（即ち、細胞による取込みおよびその後のインシトゥ発現用に核酸を患者に直接投与する治療法）だけでなくエクスビボ治療法（即ち、インビトロで培養されるかまたは移植された細胞に核酸を投与し、そしてトランスフェクションされた細胞を引き続いて臨床患者に移植して治療用産生物を供給する治療法）に使用するためにも治療用核酸を投与することができる。エクスビボ遺伝子療法の方法は本明細書で詳細に記載する。これらの方法によって、形質転換されるかまたはトランスフェクションされた細胞が哺乳類のような多細胞宿主に投与された（例えば、移植によって）後にこのような細胞内で依然として維持されているプラスミドは上記宿主に遺伝子産生物を送達する。問題の遺伝子、特に治療用遺伝子は移植された細胞によって発現され、そしてそれによって必要なＲＮＡ（例えば、アンチセンスＲＮＡまたはリボザイム）またはタンパク質を受容生物、特にヒトに提供することが意図されている。当該技術分野で知られているような核酸トランスフェクション方法になじみ易い細胞型を本発明に従って使用することができる。このような細胞には受容生物と同一種の生物の細胞、または更には、再導入前にエクスビボ核酸トランスフェクション用に受容生物自身から採取された細胞を含めることができる。このような自己由来細胞移植片は当該技術分野で知られている。１つの一般的な例は骨髄移植のものであり、その際骨髄はドナーからかまたは臨床患者（例えば、高投与量の電離放射線のような細胞毒性治療法を受けようとしている患者）から取り出され、そしてその後注入して患者に移植され、その結果細胞は骨や造血系の他の器官に再移住する。ａ．細胞投与量受容生物に投与するトランスフェクションした細胞の数は、生物に必要な治療用または他の遺伝子産生物の絶対量をトランスフェクションした細胞が産生する上記作用剤の平均的な量で割って決定される。定常状態のプラスミドコピー数は、プラスミドに包含される問題の遺伝子の発現値（この値もその関係するプロモーターの強さおよび所与の宿主細胞背景におけるヌクレオチドおよび転写因子の利用可能性によって決定される）と同様に、その複製起点の強さならびに宿主細胞環境によって決定される因子、ヌクレオチドおよび複製酵素コンプレックスの利用可能性に依存して変動することに注意されたい。その結果、問題の所与の遺伝子の細胞当たりの発現値は受容体に細胞を投与する前に経験的に決定しなければならない。細胞のトランスフェクションや移植の効率的な方法は当該技術分野で知られているが、これらの方法ではトランスフェクションされた細胞が不死であるということは保証されていない。加えて、導入遺伝子によってコードされる産生物に対する受容生物の必要性は長い間に変動する可能性がある。これらの考慮事項からみて、細胞は、必要に応じて単回投与量または多数回投与量で投与できることが意図されている。多数回投与量スケジュールは、投与初期コースが１〜１０回の別個の投与量を含んでいることができ、そしてトランスフェクションされた核酸の細胞値の維持および／または増強に必要なその後の時間間隔で投与される他の投与量が続くというものである。このような間隔は治療用遺伝子産生物に対する受容者の必要性の持続に依存する。好ましくは、受容哺乳類の医学的必要性によって遺伝子産生物がその寿命中または少なくとも長期間、例えば１年またはそれ以上に亘って必要であることが決定されるとき、トランスフェクションされた細胞は、このような細胞が受容患者に永久的な態様で、例えば成功的な骨髄細胞移植の場合に当てはまるような態様で移住し得ない限り、定期的なスケジュールで、例えば月に１回または月に２回補充されよう。ｂ．核酸投与量トランスフェクションされた細胞内で複製し得る核酸ベクターが使用される場合、このようなベクターの少なくとも１つのコピーを受け取っている細胞内ではこのベクターはコピー数の平衡が達成されるまで複製するので、移植前に細胞内にトランスフェクションされる核酸の絶対量は決定的ではない。最初の概算として、トランスフェクションされる細胞当たり１から１０個の間のコピーと等価のベクター量を使用することができる、当該技術分野の熟練者は、ベクター取込みを最適化するのに必要なプラスミド分子対細胞の比率を調整することができる。本発明で特に使用されるベクターまたはトランスフェクション技術は、トランスフェクションされた細胞の染色体内への問題の遺伝子の安定した組込みを生じさせ、その結果、受容多細胞生物、例えばヒトに移植した後にベクターを有している細胞に対する選択を維持する必要性を回避できるものである。ｃ．自己由来または同系細胞の投与単一種の個体間（または、或る個体から細胞培養系に取り出しそして同一個体に戻すことであっても）に通常移植される細胞型は骨髄中に存在する造血幹細胞（HSCs）の細胞型である、このような細胞は培養中に核酸トランスフェクションになじみ易いという利点を有しており、そしてそれ故、本発明で使用するのに正に適している。HSCsの培養物は、オペレーター配列と問題の遺伝子を含んでいる最小限のプラスミドでトランスフェクションされ、そしてこのトランスフェクションされた細胞はこの遺伝子産生物を必要としている受容哺乳類に投与される。造血幹細胞のトランスフェクションはMannion-Henderson et a l.,1995，Exp．Hematol.，23:1628;Schiffmann et al .，1995，Blood，86:1218 ;Williams,1990;Bone Marrow Transplant，5:141;Boggs，1990，Int．Ｊ．Cell Cloning，8:80;Martensson et al.，1987，Eur．J．Immunol.，17:1499;Okabe e t al.，1992，Eur．J．Immunol.，22:37〜43;Banerji et al.，1983 Cell，33:7 29に記載されている。このような方法は本発明に従って有利に使用することができる。トランスフェクションされた細胞の投与は、以下で記載するように、トランスフェクションされていない細胞の投与で確立された方法に従って進める。例えば骨髄移植におけるような造血細胞の移植は当該技術分野で一般的に、トーマス（Thomas）等(1975，New England J．Med.，292:832〜843)によって記載されているような方法およびその修正された方法で実施される。このような方法は簡単に次のように要約される:同系移植片または免疫学的欠損を患っている患者の場合には、免疫を抑制する前処置管理は必要でない、しかしながら、非自己ドナーの細胞が応答免疫系を有する患者に投与される場合、免疫抑制医薬品、例えばシクロホスファミド（５０mg/kg（体重）、４日間毎日、最後の投与量は移植３６時間後）を投与しなければならない。白血病患者は、癌性血液細胞を除去するために１０００ラドの正中線線量の全身照射を定型的に受ける、この照射も免疫抑制効果を有している。前処置の後に、骨髄細胞（この集団は少数の多分化能造血幹細胞またはHSCsを含んでいる）は注入して投与され、そしてその後、これら細胞は受容宿主の造血系に移住する。移植片の成功は、当該技術分野で周知の免疫学的および分子的方法によって多数の成熟血液細胞型の再出現をモニターすることによって測定される。理論的には１〜１０個ほどの少ないHSCsしか致死的に照射された受容哺乳類に長期間移住し且つ再定住できない場合、ヒト骨髄移植患者で再定住が生じる割合を最適にすることが有利である、それ故、治療的に有効であるためには１０〜１００個、または更には１００〜１０００個のHSCsを含んでいる移植骨髄試料を投与すベきである。リンパ系細胞および実質細胞は共に本発明で使用されるように意図されている。このような実質細胞にはランゲルハンス島、甲状腺、副腎皮質、筋肉、軟骨性または他の滑膜組織、腎臓、上皮組織（特に、腸腔、肺、心臓、肝臓、腎臓、ニューロンおよび滑膜細胞の外部および内部上皮組織）、そして特に神経系が含まれる。受容生物による免疫拒絶に対して移植細胞を、少なくとも集合的に、抵抗性にするために、高い値の活性化されたＮＦκＢ（高いＮＦκＢ「セットポイント」）を発現する移植細胞が、これらは依然として自己免疫宿主リンパ球によって破壊されるが、細胞殺害の速度を上回る速度で増殖するように強い増殖能力という利点を享有し、そしてそれによって長期間生存する治療用細胞集団を受容生物に提供することが意図されている。このような細胞は、自体トランスジェニック動物であることができるようなドナーから取り出されたタンパク質抽出物を使用する当該技術分野で周知の方法によって、インビトロ転写アッセイまたはＤＮＡ／タンパク質結合アッセイで測定される高い値の活性化されたＮＦκＢを産生する遺伝子発現構築物でトランスフェクションされているかまたは高い内在性ＮＦκ Ｂ活性で選択したドナーから得られた細胞であることができる。ｄ．異種細胞と同種細胞の投与受容生物と同様な種の個体または細胞培養系から得られる細胞のトランスフェクションそしてそれに引き続いて移植を行うことができるが、別の生物（例えば、良く特徴付けられた真核微生物、例えば酵母、この場合には、治療用遺伝子によってコードされているタンパク質は適切にプロセシングされると思われそして有用な複製起点が知られている）の細胞を使用して本発明を実施できることも同等に当てはまる。このような場合には、一定の注意を払わなければならない。第一に、タンパク質が問題の遺伝子によってコードされているとき、移植細胞は受容生物に有用な形態でそのタンパク質を産生しなければならない。転写後プロセシング（開裂およびグリコシル化パターンを含むがこれらに限定されない）は、受容体の適切な機能と一致しなければならない。加えて、合成後に、例えば移植細胞からの分泌、排泄またはエキソサイトーシスによって、問題のタンパク質またはＲＮＡ分子のどちらかが受容体に利用可能にならなければならない。前者を扱うために、トランスフェクションされた細胞によって産生されたタンパク質はタンパク質化学の分野で周知の生化学的方法によって受容生物と同一種の個体によって産生された天然タンパク質と定性的に比較することができる。後者、即ち移植される細胞による問題のタンパク質の放出は、トランスフェクションされた細胞から傾瀉された培養培地からかまたはこのような細胞が分離されている（即ち、遠心またはろ過によって）培養培地からタンパク質を単離し、そして問題のタンパク質に向けられた抗体を使用してウエスタン分析を行ってアッセイすることができる。多数のタンパク質に対する抗体が市販で入手可能である、抗体分子の産生に関する技術は当該技術分野で良く知られている。第二に、細胞は受容生物による免疫拒絶から遮蔽されなければならない。このような細胞は受容患者に特徴的な細胞表面マーカー（例えば、ＭＨＣ抗原）を発現する構築物でトランスフェクションして、これら細胞に生化学的カモフラージュを提供できることが意図されている。更に、発酵器のような人工的増殖環境かまたは受容生物中で増殖させるために生存細胞培養物をカプセル化する方法が開発されており、そして本発明に従ってトランスフェクションした細胞の投与においてはこのような方法を使用することもできる。このようなカプセル化系によって免疫検出に対して細胞が見えなくなり、そして加えて、移植細胞と宿主生物環境間で材料（例えば、問題の遺伝子産生物、酸素、栄養素および老廃物）の自由な交換が可能になる。細胞カプセル化の方法やデバイスは多数の米国特許、なかんずく、第４,３５３,８８８号、第４,４０９,３１１号、第４,６７３,５６６号、第４,７４４,９３３号、第４,７９８,７８６号、第４,８０３，１６８号、第４,８９２,５３８号、第５,０１１,４７２号、第５,１５８,８８１号、第５,１８２,１１１号、第５,２８３,１８７号、第５,４７４,５４７号、第５,４９８,４０１号(これは特に細菌および酵母細胞のキトサン中でのカプセル化に向けられている)、第５,５５０,０５０号、第５,５７３,９３４号、第５,５７８,３１４号、第５,６２０,８８３号、第５,６２６,５６１号、第５,６５３,６８７号、第５,６８６, １１５号、第５,６９３,５１３号、および第５,６９８,４１３号に開示されており、そしてこれらの内容は全体として本明細書に参照して組み入れる。カプセル化された細胞の上首尾な培養には典型的には、生物適合性の（即ち、カプセル化した細胞と受容宿主の両者に寛容される）選択的透過性の外部被覆または「皮膚」、ならびに、任意に、内部または上部に細胞が分散されており、その結果足場依存性細胞自体が結合できる構造支持体および基質を提供するマトリックスが必要である。本発明で使用するために適用できるカプセル化デバイスに関して、用語「選択的透過性」とは、小分子（約５０,０００Ｍ.Ｗ.〜１００,０００Ｍ.Ｗ. までの分子を含む）は通過するが、より大きな分子、例えば抗体（概ね１５０, ０００Ｍ.Ｗ.）は排除される開口部を含んでいる材料を言う。適当な被覆材料には多孔性および／またはポリマー材料、例えば、ポリアスパルテート、ポリグルタメート、ポリアクリレート（例えば、アクリルコポリマーまたはＲＬ(登録商標、Monsanto Corporation)、ポリフッ化ビニリデン、ポリビニリジエン、ポリ塩化ビニル、ポリウレタン、ポリウレタンイソシアネート、ポリスチレン、ポリアミド、セルロース系ポリマー（例えば、セルロースアセテートおよびセルロースニトレート）、ポリメチル−アクリレート、ポリアルギネート、ポリスルホン、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリアクリロニトリルならびにこれらの誘導体、コポリマーおよび／または混合物、伸展ポリテトラフルオロエチレン（米国特許第３,９５３,５６６号および第４,１８７,３９０号、これらは共に本明細書に参照して組み入れる）、伸展ポリプロピレン、伸展ポリエチレン、多孔性ポリフッ化ビニリデン、織若しくは不織繊維または糸集合物、例えば「エンジェルヘア（Angel Hair）」(Anderson，Science，246:747〜749;Thompso n et al.，1989， Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A.，86:7928〜7932)、単独か若しくは組み合わせた繊維マトリックス（米国特許第５,３８７,２３７号参照、これは本明細書に参照して組み入れる）またはシリコン-酸素−シリコンマトリックス（米国特許第５,６９３,５１３号）が含まれるがこれらに限定されない。１０,０００〜３０, ０００、好ましくは１５,０００〜２５,０００、そして最も好ましくは１７,０００の分子量を有するポリリシンも本発明で有用である（米国特許第4,６７３, ５６６号参照）。或いは、本発明のトランスフェクションされた細胞を含んでいるマトリックス材料は、以下に考察するように、それ自身の外部被覆を形成するように誘導する条件に付される。米国特許第５,６２６,５６１号に記載されているように、このような被覆の選択的透過性は多孔性ポリマー材料（例えば、進展ポリテトラフルオロエチレン）の間隙空間をヒドロゲル材料で飽和させて変化させることができる。ヒドロゲル材料は多孔性ポリマー材料の空隙空間を実質的に全て、または該空隙空間の一部分だけを飽和させることができる。例えば、多孔性ポリマー材料の内部表面に隣接しそして／または該表面に沿った材料内部の連続帯で多孔性ポリマー材料をヒドロゲル材料で飽和させることによって、該材料の選択的透過性は該材料の外部横断面領域から該材料の内部横断面領域まで鋭敏に変化させられる。多孔性ポリマー材料中に飽和されるヒドロゲル材料の量と組成は移植用の細胞をカプセル化するために使用される特定の多孔性ポリマー材料に大部分依存している。適当なヒドロゲル材料の例には、単独または組み合わせたＨＹＰＡＮ（登録商標）構造ヒドロゲル(Structural Hydrogel)(Hymedix International，Inc.、ニュージャージー州デイトン)、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０５４６１（これは本明細書で参照して組み入れる）中でドリアン（Dorian）によって教示されている非繊維形成誘導性アルギネート、アガロース、アルギン酸、カラゲエニン、コラーゲン、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（Ｎ−ビニル-２-ピロリドン）またはゲランガムが含まれるが、これらに限定されない。マトリックスは典型的には、高い表面積対容量比を有しており、内部または上部に細胞が増殖できそして液体が通過できる孔または他の空間を含んでおり、加えて、適当なマトリックス材料は受容生物に移植した後に安定である。好ましくは、マトリックスは多数の粒子、繊維または薄層の集合を含んでいる。或いは、マトリックスは水溶液、例えば生理学的緩衝液または受容生物から得られる体液を含んでいることができる（米国特許第５,０１１,４７２号参照）。適当なマトリックス材料には、アミノ化したグルコ多糖（例えば、脱アセチル化キチン、またはカニ若しくは他の甲殻類動物の粉末殻から調製されそして乾燥粉末として市販で入手可能な「キトサン」、カタログ番号Ｃ３６４６、Sigma、ミズーリー州セントルイス）、アルギン酸塩（米国特許第４,４０９,３３１号）、ポリ-β-１−５-Ｎ-アセチルグルコサミン（ｐ−G1cNAc）多糖種（単独かまたはコラーゲンとのコポリマーとして処方されている、米国特許第５,６８６,１１５号参照）、再構成細胞外マトリックス調製物（例えば、Matrigel（登録商標）、Collaborative Research，Inc.,マサチューセッツ州レキシントン、Babensee et al.，1992年，J．Biomed．Matr．Res.,26 ：1401）、タンパク質、ポリアクリルアミド、アガロース等の液体、ゲル状、ポリマー、コポリマーまたは微粒子製剤が含まれる。このような材料を使用して細胞をカプセル化する方法は多種多様である。上記した半透過性膜材料を含んでいるカプセル化デバイスを予め形成し、細胞を満たし（例えば、注入または他の手動手段によって）、そしてその後密封する（米国特許第４,８９２,５３８号、第５,０１１,４７２号、第５,６２６,５６号、および第５,６５３,６８７号）ことができ、このような密封は効果的には永久的（例えば、ヒートシール法を使用して）、半永久的（例えば、水性環境下で溶解または分解しないエポキシのような生物適合性接着剤を使用して）または一時的（例えば、離脱式キャップ若しくはプラグを使用して、またはバルブ若しくはコック栓を閉めることによって）であることができる。永久的および半永久的に密封する方法は米国特許第５,６５３,６８７号に開示されている。予め形成され、半透過性の細胞容器の使用の変法としては、マトリックス材料中に懸濁された細胞とカプセル化デバイスの外部被覆を形成する物質を細胞／マトリックス混合物を生じさせる条件下で一緒に押し出す方法であり、細胞／マトリックス混合物を生じさせる条件下で一緒に押し出す方法であり、そして該混合物は、このような押出し条件下で形成するかまたは架橋する半透過性ポリマーの連続管に入れられるように液体または半液体（即ち、ゲル状）の形態であることができる、このような押出し法によって僅か１個の細胞容器を有している（米国特許第５,２８３,１８７号）かまたは複数の別個の隔室に別れている（米国特許第５,１５８,８８１号）カプセルが形成される。両タイプの方法の変法として、液体または半液体（即ち、ゲル状）細胞／マトリックス混合物の小滴を、半透過性バリヤー（米国特許第４,７９８,７８６号および第５,４８９,４０１号）を形成するマトリックス材料の外部層の「硬化」若しくは架橋を誘導する物質中かまたはポリマー材料（またはそのモノマー）溶液（これは細胞／マトリックス小滴と接触して重合しそして／または架橋してその結果半透過性膜が上に沈着する）（米国特許第４,３５３,８８８号、第４,６７３,５６６号、第４,７４４,９３３号、第５,６２０,８８３号、および第５,６９３,５１３号）中に懸濁させる。当該技術分野の熟練者は、適当なマトリックスおよび半透過性材料を選択しそして上記した細胞−カプセル化デバイスを十分構築することができる。このようなデバイスの移植は、最も安全で且つ最も適当と考えられる標準的な技術によって、問題の遺伝子によってコードされる産生物を送達すべき解剖学的位置の部位にまたはその近辺で外科的に達成される。このようなデバイスは、球状、ペレットまたは他のカプセル形状、円盤、棒または管形状を含むがこれらに限定されない好都合な形状を取ることができる、しばしば、デバイスの形状はその合成方法によって決定される。例えば、細胞懸濁物とポリマー被覆材料の共押出しによって形成される形状は典型的には管状であり、一方マトリックス材料内に細胞を含んでいる小滴上での被覆物沈着によって形成される形状は球状であると思われる。上記で考察したように、移植しなければならない（そしてそれ故、カプセル化しなければならない）細胞数はトランスフェクションされた遺伝子の産生物に対する受容生物の必要性に依存する。上記したカプセル化デバイスは典型的には小さく（最も有用には、直径１０μm〜１mmであり、その結果外部被覆物とマトリックスに最も深く埋め込まれた細胞との間の物質の端から端への効率的な拡散が可能になる）、そしてこのようなデバイスはそれぞれ１０個から１０¹⁰個の間の細胞を有することができるように意図されている。より多数の細胞の必要性が予期される場合、複数（２個、１０個または更には１００個若しくはそれ以上）の上記インビボ培養デバイスを製造しそしてこれらを所与の受容生物に移植することができる。カプセル化細胞デバイスは永久的な設置を意図することができる、或いは、当該技術分野の熟練者、例えば医者（医者は所与の細胞移植片が受容生物に有益な期間を症例毎に決定しなければならない）の裁量で問題の遺伝子産生物の受容生物への送達を終了させるためにしろ、または長期間（即ち、数カ月から数年）使用した後デバイスに新たな細胞を補充するためにしろ、デバイスを回収することがが望ましい場合がある。後者の目的で、移植デバイスは有用には、誘導ワイヤーのような回収補助器具および細胞容器に接近できるように開閉可能なキャップまたは他の入口（これらは共に米国特許第４,８９２,５３８号に記載されている）を含んでいることができる。カプセル化した細胞の生存培養物は受容動物の組織に遺伝子産生物を送達するために上首尾に使用されている。米国特許第４,６７３,５６６号は、カプセル化したラットランゲルハンス島細胞を移植した糖尿病ラットにおいて正常な血糖値を維持するのに成功したことを開示している、各々３,０００個の細胞を２回投与すると６カ月間有効であり、一方１,０００個の細胞の単回投与量は２カ月間有効であった。同様に、カプセル化されたランゲルハンス島細胞の異種特異的移植は糖尿病を首尾良く治療することが証明されている（イヌランゲルハンス島細胞をマウス受容体に、米国特許第５,５７８,３１４号;ブタランゲルハンス島細胞をマウス受容体に、Sun et al.，1992，ASAIO J.，38:124）。このような手法はヒトの真性糖尿病の臨床的治療法に有望であると信じられている(Calafiore，1992，ASAIO J.，38:34)。トランスフェクションされていない細胞に成功裏に適用されているこれらの技術は、本発明で使用される治療用核酸分子でトランスフェクションされる細胞で有利に使用することができる。ｅ．受容生物における移植細胞の有効性アッセイこのように投与されたトランスフェクション細胞の有効性およびそれに引き続くこれら細胞の受容宿主内での維持は、トランスフェクションされた構築物が追加的に含んでいることができるマーカー遺伝子の活性をモニターするかまたは問題の遺伝子によってコードされる産生物（例えば、タンパク質）か若しくは上記産生物（アンチセンスメッセージまたはリボザイム）がその産生を阻害するように設計されているタンパク質値の減少のどちらかを直接測定することによってアッセイすることができる。これらのアッセイは、当該技術分野の熟練者に知られているような慣用の分子的および生化学的技術を使用して行うことができるかまたは組織学的試料採取（即ち、剖検）および移植細胞若しくは器官の検査を含んでいることができる。トランスフェクションされた／移植された細胞内のベクターが有している問題の遺伝子によってコードされる血液または標的組織中のタンパク質または核酸値の直接的測定に加えて、問題の遺伝子が維持されている細胞の移植によって遺伝子伝達を受けている患者の疾病状態の変化をモニターし、そしてこれらの変化を、問題の遺伝子を欠失しているベクター構築物でトランスフェクションした比較用細胞を投与されている患者の疾病の進行または持続と比較することができる。他の投与量および投与様式フレームシフト突然変異に関係のある疾病状態にある患者は、上記したように、本発明に従って、インビボ、エクスビボまたはインビトロ方法で治療することができる。例えば、インビボ治療法では、リボザイム或いはリボザイム、野生型ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ若しくはＤＮＡをコードしている核酸ベクターまたはアンチセンスＲＮＡをコードしている配列、またはハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質の野生型のものを、好ましくは製薬的に許容し得る送達媒体および生物学的に適合可能な溶液中で、摂取、注入、吸入または他の多くの方法によって上記患者に投与することができる。投与される量は患者問で変動することができる、「有効投与量」は、伝達される遺伝子材料が機能を強化する値を有害な副作用の危険性と比較考量して決定される。遺伝子発現および／或いはコードされている突然変異ＲＮＡまたはタンパク質若しくはその対応する「センス」タンパク質の存在または値のモニタリングが投与される投与量の選択および調節の助けとなるであろう。一般的に、リボザイムのような核タンパク質を含んでいる組成物は、医者によって決定されるような単回または多数回投与量で、５０μg〜１mgの範囲内または１００μg〜５００μｇの範囲内で投与されよう。オリゴヌクレオチドを含んでいる組成物は、５ng〜１０μgの範囲内または１００ng〜５００ngの範囲内で単回投与量で投与されよう。野生型ＲＮＡまたはベクターを含んでいる組成物は単回投与量で、上記配列の少なくとも１つのコピーが各標的細胞内に送達されるように１０ng〜１００μg／kg（体重）の範囲内、好ましくは１００ng〜１０μg／kg（体重）の範囲内で投与されよう。タンパク質、例えばハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質の野生型のものを含んでいる組成物は医者によって決定されるような単回または多数回投与量で、１０μg〜１mgの範囲内または１００μg〜５０μgの範囲内で投与されよう。上記投与量の任意のものを、医者によって決定されるように、患者の体重に従って投与することができる。エクスビボ形質導入も本発明の範囲内で意図されている。細胞集団は患者から取り出されるかまたは他の方法で提供され、本発明に従ってベクターを使用して形質導入され、次いで患者に再導入することができる。患者に再導入された細胞数はベクター伝達の効率に依存し、そして一般的には１０⁴〜１０⁶個の形質導入された細胞／患者の範囲内であろう。本発明に従ってエクスビボ遺伝子伝達の標的となる細胞にはベクターの送達が望まれる任意の細胞、例えば、ニューロン細胞または幹細胞が含まれる。本発明に従って投与されるタンパク質、核酸または細胞は好ましくは製薬的に許容され得る担体物質、例えば、炭酸マグネシウム、ラクトースまたはミセルを形成するリン脂質との混合物として投与され、そして上記担体とタンパク質、核酸または細胞は一緒になって治療用組成物、例えば、哺乳類の経口投与用のピル、錠剤、カプセルまたは液体を形成することができる。他の形態の組成物、例えば、ドロップ若しくはスプレーとして経鼻的に投与し得る液体または静脈内、非経口、皮下若しくは腹腔内に投与し得る液体も構想されている。投与される物質は筋肉内投与用の生物分解性の放出持続製剤の形態であることができる。有効性を最高にするためにゼロのオーダーの放出が望ましい場合、例えば移植可能なまたは外部ポンプ、例えばインフセッド（Infusaid^TM）ポンプ（Infusaid C orp、マサチューセッツ州）を使用することができる。本発明による有用なキット本発明は、本発明による疾病の診断または治療用のキットを包含する。診断キットには適当な包装材料および１つまたはそれより多くの次の試薬:上記で定義された核酸プローブおよびその相補的配列と結合したときプローブを検出する任意の手段を含んでいる。例えば、核酸プローブは、例えば放射性標識、蛍光標識等で標識することができ、または当該技術分野で周知の間接的標識化技術によって、例えばビオチン／アビジン系を使用して検出することができる。好ましくはキット形態の診断系は本発明の更にもう１つの実施態様を構成する。この系は、免疫コンプレックスの形成によって細胞内でのハイブリッド野生型／ナンセンスタンパク質またはその誘導体の存在をアッセイするのに有用である。この系は本発明の抗体を含有している少なくとも１つのパッケージを含んでいる。任意に、キットは陽性の組織試料対照を含んでいることもできる。抗体はまた、ときには「標識」とも呼ばれる「指示基」と一緒に使用される。この指示基または標識は、免疫反応が生じているかどうかを測定する手段、そして場合によってはこのような反応の程度を測定する手段として抗体と一緒に使用される。用語「指示基」または「標識」は本明細書では抗体と結合しているかまたは別々に使用される単一の原子および分子（これらの原子または分子が単独で使用されるにしろ、追加的な試薬と一緒に使用されるにしろ）を含むように使用される。このような指示基または標識は免疫化学で自体周知であり、そしてこれらは他の新規な抗体、方法および／または系と一緒に使用される限りにおいてだけ本発明の一部を構成する。例えば、抗原特異的抗体または抗体フラグメントは酵素と結合させて検出可能なように標識され、そしてＥＩＡまたはエリザ法（ELISA）で使用される。この酵素は、順次、その後、例えば比色法、蛍光定量法または、最も好ましくは、可視的手段によって検出することができる化学的部分を生じさせるようにして基質に暴露される。基質は、裸眼で見える反応生成物を産生する色素原性基質であることができる。所望の検出可能な突然変異タンパク質に特異的な結合タンパク質を検出可能なように標識するために使用できる酵素にはアルカリホスファターゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、グルコース-６-リン酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ-Ｖ-ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ-グリセロホスフェートデヒドロゲナーゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、アスパラギナーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース-６-リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが含まれるが、これらに限定されない。結合タンパク質、例えば抗体を放射性標識することによって、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を使用して、固体支持体に結合した抗原を検出することができる。放射性同位元素は、ガンマカウンター若しくはシンチレーションカウンターを使用するような手段によってまたはオートラジオグラフィーによって検出することができる。本発明の目的で特に有用な同位元素は：³Ｈ、¹³¹Ｉ、¹⁴Ｃ、そして好ましくは¹²⁵Ｉである。第一または第二の結合タンパク質を蛍光化合物で標識することもできる。蛍光標識した抗体を適当な波長の光線に暴露するとき、蛍光によってその存在を検出することができる。最も一般的に使用される蛍光標識化合物にはフルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリスリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ-フタルデヒドおよびフルオレスカミンがある。第一または第二結合タンパク質は化学発光化合物と結合させて検出できるように標識することもできる。次いで、化学発光標識抗体の存在は、化学反応の経過中に生じる発光の存在を検出することによって測定される。特に有用な化学発光標識化合物の例はルミノール、イソルミノール、テロマチックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩および蓚酸エステルである。同様に、生物発光化合物を使用して第一または第二結合タンパク質を標識することができる。生物発光は、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を高める生物学的系に見られる化学発光の１つのタイプである。生物発光タンパク質の存在は発光の存在を検出することによって測定される。標識目的で重要な生物発光化合物はルシフェリン、ルシフェラーゼおよびエコリンである。本発明にはまた、本発明で使用される診断用試薬、例えば核酸配列、プローブおよび抗体分子および／または上記したような陽性組織対照、ならびに疾病の診断または治療に使用されるような試薬を含んでいるキットも含まれる。指示基または標識は好ましくは抗体と一緒に提供し、そして抗体と一緒に包装するかまたは別々に包装することができる。ＨＲＰのような指示基を使用するとき、過酸化水素およびジアミノベンジジンならびに硫酸アンモニウムニッケルのような追加的な試薬もこの系に含めることができる。このような材料は、多数の指示基と同様に市販で容易に入手できるので、診断系と一緒に提供する必要はない。更に、過酸化水素のような試薬のなかには放置すると分解するかまたはそうではなくて放射性元素のように寿命の短いものもあるので、最終ユーザーによってより良好に提供される。他の実施態様本発明は説明のためにだけ記載されていることが理解されよう。本明細書に記載した実施態様に加えて本発明の他の多数の実施態様は、下記請求の範囲で定義されている本発明の範囲から離れることなく、本明細書でなされた説明から当該技術分野の熟練者に明白であろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｐ 3/10 48/00 21/04 Ａ６１Ｐ 3/10 25/14 21/04 25/16 25/14 25/28 25/16 35/00 25/28 Ｃ０７Ｋ 7/06 35/00 7/08 Ｃ０７Ｋ 7/06 14/47 7/08 Ｃ１２Ｎ 1/15 14/47 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/10 5/00 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人ユニバーシテイオブユトレヒトオランダ国エヌエル―3000 デーエルロッテルダムデアイトフユニフェルシテイツウェフ 100 (72)発明者ファンレーウウェン，フレデリクウェー. オランダ国エヌエル―3063 セーエルマールセンケルクウェフ 37 (72)発明者フロスフェルト，フランクリンヘー. オランダ国エヌエル―3065 エンハーロッテルダムヤコビュスファンフェッセルムシンヘル９ (72)発明者ビュルバフ，ヨハネスペーテルヘンリオランダ国エヌエル―3981 エスベービュニクコペルスラヘルスフーク９

Claims

【特許請求の範囲】１．フレームシフト突然変異を生じる転写突然変異を有するＲＮＡ分子を原因とする、またはそれに関連する疾患を診断するための方法において：ｉ．該疾患を有するかまたは発症する疑いのある患者から生物学的サンプルを得る工程、およびｉｉ．フレームシフト突然変異を有する突然変異体ＲＮＡ分子またはそれによってエンコードされるタンパク質の存在を、該サンプルにおいて検出する工程とを包含し、検出は疾患を示すことを特徴とする方法。２．フレームシフト突然変異が、ヌクレオチドの欠失または挿入を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。３．フレームシフト突然変異が、ヌクレオチド配列ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴと関連することを特徴とする請求項２に記載の方法。４．フレームシフト突然変異が、ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴを含有するヌクレオチド配列と関連するジヌクレオチド突然変異を含むことを特徴とする請求項３に記載の方法。５．前記配列が、ＧＡＧＡＸまたはＣＴＣＴＸを含み、ここでＸは、Ｇ、Ａ、Ｔ、またはＣのうちの１つであることを特徴とする請求項３に記載の方法。６．前記配列が、ＧＡＧＡＣ、ＣＴＣＴＧ、ＧＡＧＡＧ、またはＣＴＣＴＣのうちの１つであることを特徴とする請求項３に記載の方法。７．前記疾患が、ガンまたは神経退行性の疾患であることを特徴とする請求項１に記載の方法。８．前記疾患が、アルツハイマー病またはダウン症候群；前頭葉痴呆（ピック病）；進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、および、皮質基底変形と、ボクサー性痴呆と、もつれのみを伴う痴呆と、もつれおよびカルシウム沈着を伴う痴呆と、第１７染色体に関連する振せん麻痺を伴う前頭側頭骨痴呆と、もつれを伴うック病Ｃ型と、グアムの振せん麻痺−痴呆複合症と、脳炎後の振せん麻痺と、亜急性硬化性汎脳炎とを含む群から選択される多発タウ陽性の糸状病変を伴う他の疾患；パーキンソン氏病；筋萎縮側索硬化症；ハンティングトン病；多発性硬化症；レーヴィ体を伴う痴呆；多系統萎縮症；アレキサンダー病と、アルコール性肝疾患と、苔癬アミロイドーシスと、マリネスコ体およびガラス質封入体の存在とを含む群から選択されるユビキチンと関連する他の封入体病；糖尿病ＩＩ型；および他の退行性疾患であることを特徴とする請求項７に記載の方法。９．フレームシフト突然変異を有する前記ＲＮＡが、野生型配列に含まれる場合、βアミロイド前駆体タンパク質、タウタンパク質、ユビキチン、アポリポタンパク質−Ｅ₄（Ａｐｏ−Ｅ₄）、微小管結合タンパク質ＩＩ（ＭＡＰ２）、神経線維タンパク質（Ｌ、Ｍ、Ｈ）、プレセニリンＩ、プレセニリンＩＩ、ビッグタウ(Big Tau)、ＧＦＡＰ、Ｐ５３、ＢＣＬ２、セマホリンＩＩＩ、ＨＵＰＦ−Ｉ、ＨＭＧ、およびＮＳＰ−Ａをエンコードすることを特徴とする請求項１に記載の方法。１０．前記生物学的サンプルが、体液または組織を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。１１．前記体液が、脳脊髄液または血液を含むことを特徴とする請求項１０に記載の方法。１２．前記組織が、皮膚または鼻上皮を含むことを特徴とする請求項１０に記載の方法。１３．前記突然変異体ＲＮＡ分子が、核酸２本鎖の形成によって検出され、該２本鎖の第１の鎖は、フレームシフト突然変異を生じる突然変異を含む突然変異体ＲＮＡ分子の部分に相補的な配列を有する核酸プローブを含み、該２本鎖の第２の鎖は、該プローブに相補的であるＲＮＡ分子の突然変異体の核酸配列を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。１４．突然変異体ＲＮＡ分子が、ＲＴ−ＰＣＲを使用して突然変異体ＲＮＡ分子を逆転写し、次いで、突然変異体ＲＮＡ分子に対応する逆転写されたＤＮＡの少なくともフラグメントを増幅し、該突然変異体ＲＮＡ分子は、フレームシフトを生じる突然変異を含み、次いで、フレームシフト突然変異を生じる突然変異を含む逆転写されたＤＮＡの部分に相補的な配列を有する核酸プローブを使用して、増幅されたフラグメントをプローブするか、または増幅されたフラグメントを配列決定することによって、検出されることを特徴とする請求項１に記載の方法。１５．突然変異体ＲＮＡ分子によってエンコードされるタンパク質が、突然変異体タンパク質に特異性を有し、野生型タンパク質に特異性を有しない抗体分子を使用して検出されることを特徴とする請求項１に記載の方法。１６．フレームシフト突然変異を生じる転写突然変異を有するＲＮＡ分子を原因とする、またはそれと関連する疾患を同定するための方法において：ｉ．疾患の病原性に関与することが疑われるＲＮＡ分子の配列を提供する工程、ｉｉ．フレームシフト突然変異の３'末端のＲＮＡ配列によってエンコードされる突然変異体タンパク質の配列を同定する工程、ｉｉｉ．突然変異体タンパク質またはそのフラグメントに対するプローブを調製する工程、およびｉｖ．疾患を有する患者からの生物学的サンプル、および疾患を有しない患者からの生物学的サンプルをプローブする工程を包含し、疾患を有する患者からの生物学的サンプルにおける該突然変異体タンパク質の存在、および疾患を有しない患者からの生物学的サンプルにおける該突然変異体タンパク質の不在は、生物学的サンプル中の突然変異体タンパク質の存在が疾患または疾患に対する罹患性にっいてのマーカーであることを示すことを特徴とする方法。１７．フレームシフト突然変異を生じる転写突然変異を有するＲＮＡ分子を原因とするか、またはそれと関連する疾患を診断するための診断キットであって、ｉ．フレームシフト突然変異を導く突然変異を含む突然変異体ＲＮＡ分子の部分に相補的な配列を有する標識化核酸プローブ、およびｉｉ．そのためのパッケージング材料を含有することを特徴とするキット。１８．フレームシフト突然変異を生じる転写突然変異を有するＲＮＡ分子を原因とするか、またはそれと関連する疾患を診断するための診断キットであって、ｉ．ＲＴ−ＰＣＲ反応のためのプライマーの対であって、フレームシフト突然変異を生じる突然変異のいずれかの側における配列に相補的な配列を有するプライマーの対、およびＲＴ−ＰＣＲを行うために必要な試薬、ならびにｉｉ．そのためのパッケージング材料を含有することを特徴とするキット。１９．フレームシフト突然変異を生じる１つまたはそれ以上の転写突然変異を有する、少なくとも１つのＲＮＡ分子を原因とするか、またはそれと関連する疾患を診断するための診断キットにおいて、ｉ．突然変異体ＲＮＡによってエンコードされる突然変異体タンパク質についての特異性を有し、野生型タンパク質についての特異性を有しない抗体分子、ならびにｉｉ．そのためのパッケージング材料を含有することを特徴とするキット。２０．請求項１から９のいずれかに記載の、フレームシフト突然変異を有することを特徴とする組換えＲＮＡ分子。２１．請求項２０に記載のＲＮＡ分子であって、図２〜１９のいずれかにおいて示される＋１または＋２と示されるタンパク質配列の少なくとも部分をエンコードすることを特徴とするＲＮＡ分子。２２．請求項２０または２１に記載のＲＮＡによってエンコードされることを特徴とする突然変異体タンパク質。２３．請求項２２に記載の突然変異体タンパク質の免疫原性フラグメント。２４．請求項２２に記載の突然変異体タンパク質または請求項２３に記載の免疫原性フラグメントであって、アミノ酸配列：ＲＧＲＴＳＳＫＥＬＡ（配列識別番号１）、ＨＧＲＬＡＰＡＲＨＡＳ（配列識別番号２）、ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱ（配列識別番号３）、ＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ（配列識別番号４）、ＹＡＤＬＲＥＤＰＤＲＱＤＨＨＰＧＳＧＡＱ（配列識別番号１４００）、ＧＧＧＡＱ（配列識別番号５）、ＧＡＰＲＬＰＰＡＱＡＡ（配列識別番号６）、ＫＴＲＦＱＲＫＧＰＳ（配列識別番号７）、ＰＧＮＲＳＭＧＨＥ（配列識別番号８）、ＥＡＥＧＧＳＲＳ（配列識別番号９）、ＶＧＡＡＲＤＳＲＡＡ（配列識別番号１０）、ＨＤＹＰＰＧＧＳＶ（配列識別番号１１）、ＳＩＱＫＦＱＶ（配列識別番号１２）、ＶＥＫＰＧＥＲＧＧＲ（配列識別番号１３）、ＰＬＦＧＲＧＨＫＲＧ（配列識別番号１４）、ＥＤＲＧＤＡＧＷＲＧＨ（配列識別番号１５）、ＱＥＲＧＡＳＰＲＡＡＰＲＥＨ（配列識別番号１６）、ＲＱＰＧＤＶＡＰＧＧＱＨＲＰＶＤＤ（配列識別番号１７）、ＡＧＬＬＡＩＰＥＡＫ（配列識別番号１８）、ＹＶＤＶＹＮＧＧＫＦＳ（配列識別番号１９）、ＡＡＤＥＲＲＣＨＬＬＨＭＣＧＲＲ（配列識別番号２０）、ＱＱＡＴＥＡＧＱＨＹＱＰＧＳＰＬＨＤＨＳＨＶ（配列識別番号２１）、ＰＱＥＡＡＡＲＴＮＲ（配列識別番号２２）、ＲＳＷＶＨＰＡＰＰＹＱＭＣＬＧ（配列識別番号２３）、またはＧＧＳＲＴＨＰＲ（配列識別番号２４）を含有することを特徴とする突然変異体タンパク質または免疫原性フラグメント。２５．薬学的に受容可能なキャリアと混合される、ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴを有する標的ＲＮＡを選択的に切断するリボザイムを含有することを特徴とする薬学的組成物。２６．薬学的に受容可能なキャリアと混合される、ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴを有する標的ＲＮＡを選択的に切断するリボザイム、およびフレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡ配列を有するＲＮＡの野生型アナログを含有することを特徴とする薬学的組成物。２７．薬学的に受容可能なキャリアとに混合される、フレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ配列を有するＲＮＡの野生型アナログを含有することを特徴とする薬学的組成物。２８．前記ＲＮＡの野生型アナログが、第３番目の塩基のサイレント突然変異を有するヌクレオチド配列を含有することを特徴とする請求項２７に記載の薬学的組成物。２９．薬学的に受容可能なキャリアと混合される、フレームシフト突然変異を生じる、１つまたはそれ以上のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡに相補的である配列を有する１本鎖核酸を含むことを特徴とする薬学的組成物。３０．薬学的に受容可能なキャリアとの混合物における、突然変異体タンパク質の野生型アナログを含有することを特徴とする薬学的組成物。３１．ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴを有する標的ＲＮＡを選択的に切断するリボザイムをエンコードする発現可能な遺伝子を含有することを特徴とするベクター。３２．フレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡに相補的な配列をエンコードする発現可能な遺伝子を含有することを特徴とするベクター。３３．請求項３１または３２に記載のベクターを含有することを特徴とする宿主細胞。３４．フレームシフト突然変異を生じるＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡを原因とするか、またはそれと関連する疾患を処置および／または予防する方法であって、請求項２５から３０のいずれかに記載の組成物、請求項３１または３２に記載のベクター、または請求項３３に記載の宿主細胞を、疾患に羅患している患者または疾患に罹患性の患者に投与することを包含する方法。３５．治療において、プロモーターの制御下で、ＧＡＧＡまたはＣＴＣＴを有する標的ＲＮＡを選択的に切断するリボザイムをエンコードすることを特徴とするベクターの使用。３６．フレームシフト突然変異を生じる１つまたはそれ以上のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡを原因とするか、またはこれと関連する疾患の処置のための組成物の製造における、プロモーターの制御下でリボザイムをエンコードすることを特徴とするベクターの使用。３７．治療において、プロモーターの制御下で、フレームシフト突然変異を生じる１つまたはそれ以上のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異を有するＲＮＡに相補的な配列をエンコードすることを特徴とするベクターの使用。３８．請求項２５〜３０のいずれかに記載の組成物、請求項３１もしくは３２に記載のベクター、または請求項３３に記載の宿主細胞の１つより多くの任意の組み合わせによる治療における使用。３９．フレームシフト突然変異を生じる１つまたはそれ以上のＧＡＧＡまたはＣＴＣＴ突然変異を有する少なくとも１つのＲＮＡを原因とするか、またはそれと関連する疾患の処置および／または予防において、請求項２５〜３０のいずれかに記載の組成物、請求項３１もしくは３２に記載のベクター、または請求項３３に記載の宿主細胞の１つより多くの任意の組み合わせによる使用。