JP2001514854A - クリングル１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 クリングル１ポリペプチドおよびポリヌクレオチドならびに組換え技術によりこのようなポリペプチドを生産する方法が開示される。また、クリングル１ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを治療に利用する方法、およびそうした利用のための診断アッセイも開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本出願は米国仮出願第60/056,032号(1997年9月2日出願)の恩恵を主張するもの
であり、その記載内容は参照により本明細書中に含めるものとする。

【０００２】 （発明の属する技術分野） 本発明は、新たに同定されたポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチド、該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの治療の際のまたは治療
に有効でありうるアゴニスト、アンタゴニストおよび／またはインヒビターであ
る化合物を同定する際の使用、並びに該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの
生産方法に関する。

【０００３】 （発明の背景） 薬物探索プロセスには目下根本的な大変化が生じている。というのは、それが
「機能性遺伝子科学」(functional genomics) 、すなわちハイスループット（高
効率）のゲノムまたは遺伝子ベースの生物学に及んでいるからである。このアプ
ローチは「ポジショナルクローニング」に基づいた比較的初期のアプローチに急
速に取って代わりつつある。表現型、つまり生物学的機能または遺伝病、が同定
され、続いてその遺伝子地図の位置を手がかりとして病因遺伝子が突き止められ
るだろう。

【０００４】 機能性遺伝子科学は、現在入手できる多くの分子生物学データベースから興味
のもてそうな遺伝子配列を同定するための生物情報科学(bioinformatics)の様々
なツールに大きく依存している。依然として、まだ未解明の遺伝子およびその関
連ポリペプチド／タンパク質を薬物探索の標的として同定し特性づける必要性が
存在している。

【０００５】 （発明の概要） 本発明は、クリングル１(kringle1)、特にクリングル１ポリペプチドおよびク
リングル１ポリヌクレオチド、組換え物質、並びにその生産方法に関する。もう
一つの態様において、本発明は、癌、炎症、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、
慢性関節リウマチ、CNS炎症、小脳変性、アルツハイマー病、パーキンソン病、 多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、頭部損傷ダメージ、ならびに他の神経性異
常、敗血症性ショック、敗血症、発作、骨粗鬆症、変形性関節症、虚血再灌流障
害、心血管疾患、腎臓病、肝臓病、虚血性障害、心筋梗塞、低血圧、高血圧、AI DS、骨髄形成異常症候群ならびに他の血液異常、再生不良性貧血、男性型禿頭症
、ならびに細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（以後まとめ
て「前記疾患」という）の治療をはじめとする、前記ポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドの使用方法に関する。他の態様では、本発明は、本発明により提供さ
れる物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニスト／インヒビターを同定する方
法、並びに同定された化合物を用いてクリングル１平衡異常と関連した症状を治
療することに関する。さらに他の態様において、本発明は不適当なクリングル１
活性またはクリングル１レベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイに
関する。

【０００６】 （発明の説明） 一つの態様において、本発明はクリングル１ポリペプチドに関する。この種の
ペプチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましく
は少なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最
も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでな
る単離されたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドには配列番号２の
アミノ酸配列を含んでなるポリペプチドが含まれる。

【０００７】 本発明の他のペプチドには、そのアミノ酸配列が配列番号２の全長にわたる配
列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なく
とも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好まし
くは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一
性を有する単離されたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドとしては
配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがある。

【０００８】 本発明の更なるペプチドには、配列番号１に含まれるヌクレオチド配列を含ん
でなるポリヌクレオチドによりコードされる単離されたポリペプチドが含まれる
。

【０００９】 本発明のポリペプチドはクリングルファミリーのメンバーであると考えられる
。それゆえ、それらには興味がもてる。なぜなら、クリングル含有タンパク質は
急性および慢性の冠状静動脈性心疾患(Gulba,D.C.ら、Ann.Hematol, 73 Suppl 1 , p.S9-S27(1996))ならびに虚血性発作(Albers,G.W., West J.Med., 166(4):p25 3-262(1997))の治療の際に臨床的に使用されてきたからである。これらの特性を
以後「クリングル１活性」または「クリングル１ポリペプチド活性」または「ク
リングル１の生物学的活性」という。これらの活性の中には、前記クリングル１
ポリペプチドの抗原活性および免疫活性、特に配列番号２のポリペプチドの抗原
活性および免疫活性も含まれる。本発明のポリペプチドはクリングル１の少なく
とも１つの生物学的活性を示すことが好ましい。

【００１０】 本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク質の形であっても、融合タンパク質
のような、より大きいタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加のアミ
ノ酸配列を含めることが有利であり、このようなアミノ酸配列としては、分泌す
なわちリーダー配列、プロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列
、または組換え生産の間の安定性を確保する付加的配列などがある。

【００１１】 また、前記ポリペプチドの変異体、すなわち保存的アミノ酸置換（ある残基が
性質の似ている他の残基により置換される）により基準ポリペプチドと相違して
いるポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこうした置換は、Ala, Val, Le u および Ileの間；Ser とThr の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間
；塩基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr の間で起こる。特に
、数個、５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任
意の組合せで置換、欠失または付加されている変異体が好適である。

【００１２】 本発明のポリペプチドは任意の適当な方法で製造することができる。このよう
なポリペプチドには、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産されたポ
リペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、またはこれらの方法の組合せに
より製造されたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。

【００１３】 本発明の更なる態様において、本発明は、クリングル１ポリヌクレオチドに関
する。このようなポリヌクレオチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２
のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０
％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少な
くとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含
んでなる単離されたポリヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９
７％の同一性を有するポリペプチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％
の同一性を有するものがより一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有する
ポリペプチドが最も好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、配列
番号２のポリペプチドをコードする配列番号１に含まれるヌクレオチド配列を含
んでなるポリヌクレオチドが挙げられる。

【００１４】 本発明の更なるポリヌクレオチドには、配列番号２のポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列に対して、その全コード領域にわたって、少なくとも７０％
の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９
０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドが含まれる。これに関して、少
なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくと
も９８〜９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、少なくとも９９％の
同一性を有するポリヌクレオチドが最も好ましいものである。

【００１５】 本発明の更なるポリヌクレオチドには、配列番号１の全長にわたる配列番号１
のポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも
８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは
少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポ
リヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有する
ポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一性を有する
ものがより一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド
が最も好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、配列番号１のポリ
ヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドおよび配列番号１のポリヌクレオチ
ドが挙げられる。

【００１６】 本発明はまた、上記の全てのポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオ
チドを提供する。

【００１７】 配列番号１のヌクレオチド配列はヒトPACクローンDJ515N1(GenBank受託番号AC 002073)との相同性を示す。配列番号１のヌクレオチド配列はｃＤＮＡ配列であ り、配列番号２のポリペプチドである263個のアミノ酸からなるポリペプチドを コードするポリペプチドコード配列(ヌクレオチド番号41〜832)を含む。配列番 号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１に含まれるポ
リペプチドコード配列と同一であっても、遺伝子コードの重複性（縮重）のため
、やはり配列番号２のポリペプチドをコードする、配列番号１に含まれる配列以
外の配列であってもよい。配列番号２のポリペプチドはWUGSC:DJ515N1.2(GenBan k受託番号2078470)との相同性および／または構造類似性を有するkringleファミ
リーの他のタンパク質に構造的に関連する。

【００１８】 本発明の好適なポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とりわけ、それと相
同なポリペプチドおよびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をもつこ
とが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは少なくとも１つのクリングル１活性を有する。

【００１９】 また、本発明は、配列番号１および配列番号２の対応する全長配列の決定に先
立って最初に同定された部分的なまたは他のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドに関する。

【００２０】 したがって、更なる態様において、本発明は、 (a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチド配列に対して少なく
とも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好
ましくは９７〜９９％の同一性を有するヌクレオチド配列、 (b) 配列番号３の全長にわたる配列番号１のヌクレオチド配列に対して少なく
とも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好
ましくは９７〜９９％の同一性を有するヌクレオチド配列、または (c) 配列番号３のポリヌクレオチド、または （d）配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なく
とも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好まし
くは９７〜９９％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
、 を含んでなる単離されたポリヌクレオチドならびに配列番号３のポリヌクレオチ
ドを提供する。

【００２１】 本発明はさらに、 (a) 配列番号４の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なく
とも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好まし
くは９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、 (b) 配列番号４の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なく
とも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好まし
くは９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、および (d) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、 ならびに配列番号３に含まれる配列を含んでなるポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチドを提供する。

【００２２】 配列番号３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペプチド配列は
エクスプレスド・シーケンス・タグ（Expressed Sequence Tag：ＥＳＴ）配列か
ら誘導される。当業者であれば、ＥＳＴ配列中に若干のヌクレオチド配列読み取
り誤差が必然的に存在することを理解するであろう（Adams, M.D.ら, Nature 37 7 (supp)3, 1995を参照のこと）。したがって、配列番号３のヌクレオチド配列 ならびにそれによりコードされるペプチド配列は配列精度において同一の固有の
限界を受ける。さらに、配列番号３によりコードされるペプチド配列は、最も相
同性または構造類似性が高いタンパク質と同一の領域、または高い相同性および
／または構造類似性（例えば、保存的アミノ酸の差異）の領域を含んでいる。

【００２３】 本発明のポリヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリーニング技
術により、ヒト心臓、脳、胎盤、肺、骨格筋、腎臓、および膵臓の細胞中のｍＲ
ＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、ＥＳＴ分析（Adams, M.D.ら, S cience (1991) 252:1651-1656; Adams, M.D.ら, Nature (1992) 355:632-634; A dams, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174）を用いて得ることができる。ま
た、本発明のポリヌクレオチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から
得ることができ、商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成することもできる
。

【００２４】 本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリペプチドの組換え体生産のために用
いる場合、そのポリヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単独、ま
たは他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌配列、プレ-、プロ-もしく
はプレプロ-タンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの） と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプチドのコード配列が含まれる
。例えば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列がコードされ得る
。本発明のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター
(Qiagen, Inc.)により提供されかつ Gentzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (19 89) 86:821-824に記載されるような、ヘキサ-ヒスチジンペプチド、またはＨＡ タグである。また、このポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例えば、
転写されるが翻訳されない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル
、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２５】 本発明の更なる具体例としては、数個、例えば５〜１０個、１〜５個、１〜３
個、１〜２個、または１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付
加されている、配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド変異体をコ
ードするポリヌクレオチドがある。

【００２６】 配列番号１に含まれるヌクレオチド配列と同一であるか十分に同一であるポリ
ヌクレオチドは、本発明のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲノム
クローンを単離するために、また、配列番号１に対して高い配列類似性を有する
他の遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体(ortholog)をコ
ードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、ｃ
ＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブとして、または
核酸増幅（ＰＣＲ）反応用のプライマーとして用いることができる。一般的に、
これらのヌクレオチド配列は基準のヌクレオチド配列と７０％、好ましくは８０
％、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％同一である。プローブまたは
プライマーはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好ましくは３０個以上
を含み、５０個以上のヌクレオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブ
は３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００２７】 本発明のポリペプチド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体を
含む）をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１の配列またはその断片を有
する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
で適当なライブラリーをスクリーニングし、該ポリヌクレオチド配列を含む全長
ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでなる方法により得られ
る。このようなハイブリダイゼーション技法は当業者に公知である。好ましいス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、50% ホルムアミド、５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、
５×Denhardt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/mlの変性し剪断したサケ
精子ＤＮＡを含有する溶液中４２℃で一夜インキュベートし、次いでフィルター
を 0.1×SSC 中約６５℃で洗浄することを含む。かくして、本発明は、配列番号
１の配列またはその断片を有する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハ
イブリダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリーニングすることに
より得られるポリヌクレオチドをも包含する。

【００２８】 当業者には理解されるように、多くの場合、ポリペプチドをコードする領域が
そのｃＤＮＡの5'末端で短く切断されることから、単離されたｃＤＮＡ配列は不
完全であるだろう。それは逆転写酵素のためであり、この酵素はもともと「プロ
セシビティ」（processivity：重合反応中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の
能力の尺度）が低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮＡ鋳型のＤＮＡコピーを
完成させることができない。

【００２９】 全長ｃＤＮＡを得るための、または短鎖ｃＤＮＡを伸長させるための、当業者
に公知で利用可能な方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法（Ｒ
ＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohmanら, PNAS USA 85, 8998-9002, 1988を参照のこと）。例えばMarathon^TM技術(Clontech Laboratories Inc.)に より示されるような、上記技法の最近の改良により、より長いｃＤＮＡの検索が
大いに簡便化された。Marathon^TM技術では、所定の組織より抽出されたｍＲＮＡ
からｃＤＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結する。続いて、遺伝
子特異的およびアダプター特異的なオリゴヌクレオチドプライマーの組合せを用
いて核酸増幅（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅する。次に、
「nested」プライマー、すなわち増幅産物の内部にアニールするように設計され
たプライマー（典型的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールするアダプ
ター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさらに5'側にアニールする遺伝子
特異的プライマー）を用いてＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物を
ＤＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃＤＮＡに直接結合して完
全な配列とするか、または5'プライマー設計用の新たな配列情報を用いて別の全
長ＰＣＲを行うことにより、全長ｃＤＮＡを構築することができる。

【００３０】 本発明の組換え体ポリペプチドは、当業界で公知の方法を用いて、発現系を含
有する遺伝子操作宿主細胞から生産することができる。したがって、更なる態様
において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレオチドを含有する発現系、該
発現系により遺伝子操作された宿主細胞、および組換え法による本発明ポリペプ
チドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡを用いてこの
種のタンパク質を生産するために、無細胞翻訳系を使用することもできる。

【００３１】 組換え体生産に関しては、本発明のポリヌクレオチドの発現系またはその一部
を組み込むために宿主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチドの
導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Biology (1986) および Sambro okら, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbo r Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) などの多くの標準的な
実験室マニュアルに記載された方法により行うことができる。好適なこうした方
法として、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ-デキス トラン媒介トランスフェクション、トランスベクション(transvection)、マイク
ロインジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポ
レーション、形質導入、スクレープローディング(scrape loading)、弾丸導入(b allistic introduction)または感染などがある。

【００３２】 適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞（例：ストレプトコッカス、スタフ
ィロコッカス、大腸菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵母、ア
スペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ２、スポドプテラＳｆ９）、動
物細胞（例：ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 293 、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられる。

【００３３】 多種多様な発現系を使用することができる。こうした発現系として、例えば、
染色体、エピソームおよびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由来、バ
クテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入因子由
来、酵母染色体エレメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０の
ようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、
仮性狂犬病ウイルス、レトロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプラスミドとバ
クテリオファージの遺伝的要素に由来するものがある。これらの発現系は発現を
起こさせるだけでなく発現を調節する制御領域を含んでいてもよい。一般的に、
宿主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌクレオチドを維持し、増やし、発
現することができる系またはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Molecu lar Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載されるような、日常的に用い
られる公知の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入す
ることができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細胞周辺腔に、また
は細胞外の環境に分泌させるために、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチド
に組み込むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに対して内因
性であっても、異種シグナルであってもよい。

【００３４】 スクリーニングアッセイで使用するため本発明のポリペプチドを発現させよう
とする場合、一般にそのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先立って細胞を回収する。
該ポリペプチドが培地に分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製する
ために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その細胞をまず溶解し、そ
の後にポリペプチドを回収する必要がある。

【００３５】 組換え細胞培養物から本発明のポリペプチドを回収し精製するには、硫酸アン
モニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマト
グラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグ
ラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含めた公知の方法を用いるこ
とができる。最も好ましくは、高性能液体クロマトグラフィーが精製に用いられ
る。ポリペプチドが細胞内合成、単離および／または精製中に変性されるときは
、タンパク質を再生させるための公知の技法を用いて、活性のあるコンフォメー
ションを復元することが可能である。

【００３６】 本発明はまた、診断薬としての本発明のポリヌクレオチドの使用に関する。機
能障害と関連した、配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴づけられる遺伝子
の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現または変化した発現により生
ずる疾病またはその疾病への罹りやすさの診断に追加しうる、またはその診断を
下しうる診断用ツールを提供するだろう。該遺伝子に突然変異がある個体を、さ
まざまな技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すことができる。

【００３７】 診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血液、尿、唾液、組織の生検または剖
検材料由来の細胞から得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用
してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使ってゲノムＤＮＡを酵素的
に増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる
。欠失および挿入は、正常な遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化
により検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識 クリングル１ヌクレオチド 配列とハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチした配列とミスマ
ッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により区別でき
る。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲルでのＤＮＡ
断片の電気泳動の移動度の変化により、または直接ＤＮＡ塩基配列決定によって
も検出できる（例えば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこと）。 特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮア
ーゼおよびＳ１プロテクション）または化学的開裂法によっても確認できる（Co ttonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-4401を参照のこと）。別
の実施態様では、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、
クリングル１ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレオチドプロー
ブのアレイ(array)を構築することができる。アレイ技法は公知で、一般的な適 用可能性を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分子遺伝
学のさまざまな問題を解きあかすために用いられている（例えば、M. Cheeら, S cience, Vol.274, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００３８】 診断アッセイは、前記の方法によりクリングル１遺伝子の変異を検出すること
で、前記疾患への罹りやすさを診断または判定する方法を提供する。さらに、被
験者から得られたサンプルからポリペプチドまたはｍＲＮＡのレベルの異常な低
下または増加を測定する方法により、前記疾患の診断を下すことができる。発現
の低下または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチドの定量法、例えば核酸増
幅（例：ＰＣＲ、ＲＴ-ＰＣＲ）、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロッ ティング、その他のハイブリダイゼーション法のいずれかによりＲＮＡレベルで
測定することができる。宿主から得られたサンプル中の本発明ポリペプチドのよ
うなタンパク質のレベルを測定するために使用できるアッセイ法は当業者によく
知られている。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッセイ、競合結合ア
ッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００３９】 かくして、もう一つの態様において、本発明は、 (a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１のヌクレオチド配列
）もしくはその断片、 (b) (a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、 (c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）もしく
はその断片、または (d) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対す
る抗体、 を含んでなる診断用キットに関する。

【００４０】 このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分
であることが理解されよう。かかるキットは疾患または疾患への罹りやすさ、特
に癌、炎症、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、慢性関節リウマチ、CNS炎症、 小脳変性、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬
化症、頭部損傷ダメージ、ならびに他の神経性異常、敗血症性ショック、敗血症
、発作、骨粗鬆症、変形性関節症、虚血再灌流障害、心血管疾患、腎臓病、肝臓
病、虚血性障害、心筋梗塞、低血圧、高血圧、AIDS、骨髄形成異常症候群ならび
に他の血液異常、再生不良性貧血、男性型禿頭症、ならびに細菌感染、真菌感染
、原生動物感染およびウイルス感染等を診断するうえで有用である。

【００４１】 また、本発明のヌクレオチド配列は染色体の同定にも有用である。この配列は
個々のヒト染色体上の特定の位置を特異的にターゲッティングし、その特定位置
とハイブリダイズすることができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作
成することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一
段階である。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされたら、その染色体上
のその配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることができる。この種の
データは、例えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (Johns Hopki ns University Welch Medical Library からオンラインで入手可能) 中に見いだ
せる。その後、同一の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連鎖解
析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認する。

【００４２】 罹患個体と非罹患個体とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることがで
きる。罹患個体の一部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体にも
観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因である可能性がある。本発明の
遺伝子はヒト染色体２２q１１．２〜ｑ２２上にマップされる。

【００４３】 本発明のポリペプチド、その断片もしくは類似体、またはそれらを発現する細
胞は、本発明のポリペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原として
も使用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が従来技術における他
の関連ポリペプチドに対するその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実
質的に高い親和性を示すことを意味する。

【００４４】 本発明のポリペプチドに対する抗体は、慣用のプロトコールを用いて、動物（
好ましくはヒト以外の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノクローナル抗体の調製に
は、連続細胞系の培養物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができる
。例を挙げると、ハイブリドーマ法 (Kohler, G.およびMilstein, C., Nature ( 1975) 256:495-497)、トリオーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法 (Kozborら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ-ハイブリドーマ法 (Coleら, Mon oclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp.77-96, Alan R. Liss, Inc., 198 5) などがある。

【００４５】 本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体をつくるために、米国特許第4,946, 778号に記載されるような一本鎖抗体の調製法を適応させることができる。また 、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動
物を含む他の生物を利用することができる。

【００４６】 前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現するクローンを単離・同定した
り、アフィニティークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製することもで
きる。

【００４７】 本発明のポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、前記疾患の治療に使用でき
る可能性がある。

【００４８】 本発明の更なる態様において、本発明は、本発明のポリペプチドまたはその断
片と、各種サブクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリンの
Ｈ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含んでなる遺伝子工学的に作製さ
れた可溶性融合タンパク質に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特に
ＩｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒンジ領域で起こる。特
定例では、血液凝固因子Ｘａで開裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部
分を簡単に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク質の遺伝子工学
的作製方法、並びに薬物スクリーニング、診断および治療におけるそれらの使用
に関する。また、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質をコードする
ポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質技術の例は国際特許出願 WO94/2945 8 およびWO94/22914に見いだせる。

【００４９】 本発明の更なる態様は哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関し、
この方法は、特に前記疾患から該動物を防御するための抗体および／またはＴ細
胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチドを哺乳動物に接種すること
を含んでなる。本発明のさらに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗
体を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in vivo で本発明のポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を指令するベクターを介して該ポ
リペプチドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫学的応答を引き
出す方法に関する。

【００５０】 本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導入したとき、その哺乳動物において
本発明のポリペプチドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン製剤
（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチド
を含有する。ワクチン製剤は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチ
ドは胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に（例えば、皮下、筋肉内
、静脈内または皮内注射により）投与することが好ましい。非経口投与に適した
製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤を受容者の血液と等
張にする溶質を含みうる水性および非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または
増粘剤を含みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回量
容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルおよびバイアル）で提供すること
ができ、また、使用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で
保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性を増強するためのア
ジュバント系、例えば水中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性により変化するが、ルー
チンな実験操作により簡単に決定できる。

【００５１】 本発明のポリペプチドは、多くの病的状態、特に前記疾患を含めて、さまざま
な生物学的機能に関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を刺激また
は抑制する化合物を同定するスクリーニング法を開発することが望ましい。した
がって、更なる態様において、本発明は、このポリペプチドを刺激または抑制す
る化合物を同定するための化合物のスクリーニング法を提供する。一般的には、
前記疾患の治療および予防目的のためにアゴニストまたはアンタゴニストが使用
される。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリーお
よび天然産物の混合物から化合物を同定することができる。このように同定され
たアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合により、該ポリペプ
チドの天然のまたは修飾された基質、リガンド、受容体、酵素などであってよく
、また、その構造的または機能的なミメティックであってもよい（Coliganら, C urrent Protocols in Immunology 1(2): Chapter 5 (1991)を参照のこと）。

【００５２】 スクリーニング法では、本発明のポリペプチド、または該ポリペプチドを担持
する細胞もしくは膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合を、候補
化合物に直接または間接的に結合された標識を用いて簡単に測定できる。あるい
はまた、スクリーニング法では標識した競合物質との競合を用いることもある。
さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合物がポリペプチドの活性化ま
たは抑制により生ずるシグナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを
担持する細胞に適した検出系を用いて試験することができる。一般的には、既知
のアゴニストの存在下で活性化のインヒビターをアッセイして、アゴニストによ
る活性化に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニストまたはインヒビ
ターの不在下で、候補化合物がポリペプチドの活性化を抑制するか否かを調べる
ことによる逆アゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、構成的に
活性のあるポリペプチドが用いられる。さらに、これらのスクリーニング法は、
候補化合物と本発明のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつくり
、この混合物中の クリングル１活性を測定し、そしてこの混合物の クリングル
１活性をスタンダードと比較する各ステップを単に含むだけでよい。本発明のポ
リペプチドのアンタゴニストを同定するハイスループットスクリーニングアッセ
イでは、上記のようなＦｃ部分とクリングル１ポリペプチドから作製されるよう
な融合タンパク質も使用することができる(D. Bennettら, J. Mol. Recognition , 8:52-58 (1995) およびK. Johansonら, J. Biol. Chem., 270(16):9459-9471 (1995)を参照のこと）。

【００５３】 また、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドまたは該ポリペプチドに対す
る抗体を用いて、細胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添加化
合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組み立てることができる。例え
ば、当業界で公知の標準方法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を
用いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベルを測定するためのＥＬ
ＩＳＡアッセイを構築することができ、これは適切に操作された細胞または組織
からのポリペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれアンタゴニスト
またはアゴニストともいう）の探索に用いることができる。

【００５４】 膜に結合した受容体または可溶性の受容体が存在するのであれば、当業界で公
知の標準的な受容体結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明のポリ
ペプチドを用いることができる。こうした受容体結合法には、限定するものでは
ないが、リガンド結合アッセイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に修
飾（例：ビオチン化）するか、または検出や精製に適したペプチド配列に融合さ
せ、そして推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液など
）とインキュベートする。その他の方法としては、表面プラズモン共鳴および分
光学のような生物物理的方法がある。これらのスクリーニング法は、該ポリペプ
チドまたは（存在するのであれば）その受容体への結合と競合する該ポリペプチ
ドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するために用いることもできる。ス
クリーニングアッセイを行うための標準的な方法は当業界でよく理解されている
。

【００５５】 本発明のポリペプチドの潜在的なアンタゴニストの例としては、抗体、ある場
合には、該ポリペプチドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係があ
るオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例えば、リガンド、基質、受容体、
酵素などの断片）、または本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子などがある。

【００５６】 かくして、他の態様において、本発明は、本発明のポリペプチドのアゴニスト
、アンタゴニスト、リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポリペ
プチドの産生を低下または増加させる化合物を同定するためのスクリーニングキ
ットに関し、このキットは、 (a) 本発明のポリペプチド、 (b) 本発明のポリペプチドを発現している組換え細胞、 (c) 本発明のポリペプチドを発現している細胞膜、または (d) 本発明のポリペプチドに対する抗体、 を含んでなり、前記ポリペプチドは好ましくは配列番号２のポリペプチドである
。 このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成
成分であることが理解されよう。

【００５７】 当業者であれば、本発明のポリペプチドは、その構造に基づいて該ポリペプチ
ドのアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも使用で
きることが容易に理解されよう。この方法は、 (a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、 (b) アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実と思われる反応部
位または結合部位の三次元構造を想定し、 (c) 想定された反応部位または結合部位と結合または反応すると予想される候
補化合物を合成し、そして (d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビター
であるか否かを調べる、 ことを含んでなる。これは通常相互作用プロセスであることがさらに理解されよ
う。

【００５８】 更なる態様において、本発明は、クリングル１ポリペプチド活性の過剰量と不
足量のいずれかに関係した、例えば癌、炎症、自己免疫疾患、アレルギー、喘息
、慢性関節リウマチ、CNS炎症、小脳変性、アルツハイマー病、パーキンソン病 、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、頭部損傷ダメージ、ならびに他の神経性
異常、敗血症性ショック、敗血症、発作、骨粗鬆症、変形性関節症、虚血再灌流
障害、心血管疾患、腎臓病、肝臓病、虚血性障害、心筋梗塞、低血圧、高血圧、
AIDS、骨髄形成異常症候群ならびに他の血液異常、再生不良性貧血、男性型禿頭
症、ならびに細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染などの異常
な状態の治療法を提供する。

【００５９】 該ポリペプチドの活性が過剰である場合は、いくつかのアプローチが利用可能
である。一つのアプローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの結
合をブロックすることにより、または第２のシグナルを抑制することで異常な状
態を軽減することにより、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、上
記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに
患者に投与することを含んでなる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペ
プチドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと結合する能力がまだ
ある可溶性形態のポリペプチドを投与することができる。このような競合物質の
典型的な例はクリングル１ポリペプチドの断片である。

【００６０】 さらに別のアプローチでは、発現阻止法を使って内因性 クリングル１ポリペ プチドをコードする遺伝子の発現を抑制することができる。こうした公知技術は
、体内で産生されるか別個に投与されるアンチセンス配列の使用を必要とする（
例えば、Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (遺伝子発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリゴデオキシヌクレオチド
), CRC Press, Boca Raton, FL (1988) 中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56 :560を参照のこと）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせんを形成するオ
リゴヌクレオチドを供給することもできる（例えば、Leeら, Nucleic Acids Res (1979) 6:3073; Cooneyら, Science (1988) 241:456; Dervanら, Science (199 1) 251:1360 を参照のこと）。これらのオリゴマーはそれ自体を投与することも
できるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させることもできる。

【００６１】 クリングル１およびその活性の過少発現に関係した異常な状態を治療する場合
も、いくつかのアプローチを取ることができる。一つのアプローチは、治療に有
効な量の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（すなわち、前記アゴニスト）
を製剤学上許容される担体とともに患者に投与して、異常な状態を緩和すること
を含んでなる。別法として、患者の関連細胞においてクリングル１を内因的に産
生させるために遺伝子治療を用いることができる。例えば、上で述べたような複
製欠損レトロウイルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオチドを
遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物を単離し、本発明のポリペプチ
ドをコードするＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入
されたパッケージング細胞に導入する。その結果、パッケージング細胞は対象の
遺伝子を含有する感染性のウイルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操
作およびin vivo ポリペプチド発現のために、これらのプロデューサー細胞を患
者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、Human Molecular Genetics, T St rachan and A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996)中のChapter 20 , Gene Therapy and other Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches( およびその中の引用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは治療量の本発
明のポリペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与することである。

【００６２】 更なる態様において、本発明は、治療に有効な量のポリペプチド（例えば、可
溶性形態の本発明ポリペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド
、または小分子化合物を製剤学上許容される担体または賦形剤と共に含有する医
薬組成物を提供する。この種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロ
ース、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組合せがあるが、これら
に限らない。本発明はさらに、上記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１
以上の容器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発明のポリペプチ
ドおよび他の化合物は単独で使用しても、他の化合物、例えば治療用化合物と一
緒に使用してもよい。

【００６３】 医薬組成物は投与経路、例えば全身または経口による投与経路に適合させるこ
とができる。全身投与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注である。
皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用できる。全身投与の別の
手段には、胆汁酸塩、フシジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経
粘膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチドまたは他の化合物を
腸溶剤またはカプセル剤として製剤化し得るのであれば、経口投与も可能である
。これらの化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投与しても、かつ
／または局在化させてもよい。

【００６４】 必要な投与量範囲は、本発明のペプチドまたは他の化合物の選択、投与経路、
製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な投与
量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲である。入手可能な化合物が多様 であること、投与経路の効率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は
広範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静注による投与よりも高
い投与量を必要とすると予想されよう。こうした投与量レベルの変動は、当業界
でよく理解されているような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整すること
ができる。

【００６５】 治療に用いるポリペプチドは、上述したような「遺伝子治療」と称する治療法
において、患者の体内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞を、
ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより
、例えばレトロウイルスプラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的
に操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。

【００６６】 ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配列は、類似の相同性を有する別の配
列を同定する際の価値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコンピュ
ータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデータを用いてＧＣＣのような
公知の検索ツールにより配列データベースを検索することで最大限促進される。
したがって、更なる態様において、本発明は、配列番号１の配列を含んでなるポ
リヌクレオチドおよび／またはそれによりコードされるポリペプチドを保存した
コンピュータ読み取り可能媒体を提供する。

【００６７】 以下の定義は上記の説明中でしばしば用いられた用語を理解しやすくするため
のものである。 本明細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体
、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリ
ン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。

【００６８】 「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によって」改変されたことを
意味する。「単離された」組成物または物質が天然に存在するのであれば、それ
はそのもとの環境から変化しているか分離されており、またはその両方である。
例えば、生存している動物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物質から分離
されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、本明細書中で用いられるように
、「単離された」ものである。

【００６９】 「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデ
オキシリボヌクレオチドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ
、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る。「ポリヌクレオチド」に
は、制限するものではないが、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖
領域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも
、またはより典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合っ
たものでもよい）が含まれる。加えて、「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤ
ＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポリヌクレ
オチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ
、および安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲ
ＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチル化された塩基およびイノ
シンのような特殊な塩基がある。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を
行うことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界に一般的に存在
するポリヌクレオチドの化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、並びに
ウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。ま
た、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称される比較的短
いポリヌクレオチドも包含する。

【００７０】 「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合（すなわ
ち、ペプチドアイソスター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペプチ
ドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」は短鎖（通常はペプチド、オ
リゴペプチドまたはオリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）
の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化アミノ酸以外のアミノ
酸を含んでもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプ
ロセスで、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修飾されたアミノ酸
配列を含む。このような修飾は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究
文献に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノまたはカル
ボキシル末端を含めてポリペプチドのどこでも行うことができる。同じタイプの
修飾が所定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異なる
程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチドが多くのタイプの修飾を含ん
でいてもよい。ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のあ
る又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、または分枝した環状のポリ
ペプチドは翻訳後の天然プロセスから生じることがあり、また、合成法によって
製造することもできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ-リボシ ル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファ
チジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチ
ル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミ
ル化、γ-カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル 化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシング
、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のよ
うなタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある（
例えば、Proteins - Structure and Molecular Properties 2nd Ed., T.E. Cre ighton, W.H. Freeman and Company, New York, 1993; Posttranslational Cova lent Modification of Proteins, B.C. Johnson編, Academic Press, New York, 1983中のWold, F., Post-translational Protein Modifications: Perspective s and Prospects, pgs. 1-12; Seifterら, “Analysis for protein modificati ons and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (1990) 182:626-646; および R attanら, “Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging ", Ann NY Acad Sci (1992) 663:48-62 を参照のこと）。

【００７１】 本明細書中で用いる「変異体」とは、基準のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドと異なるが、不可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変異体は基準ポリヌクレオチド
とヌクレオチド配列の点で相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、
基準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変更
しても、しなくてもよい。ヌクレオチドの変化は、以下で述べるように、基準配
列によりコードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付加、融合および
末端切断（トランケーション）をもたらしうる。典型的なポリペプチドの変異体
は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準ポリペプ
チドの配列と変異体の配列が全般的によく類似しており、多くの領域で同一とな
るような相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１以
上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違していてよい。置換または付加
されるアミノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっても、なくて
もよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はアレル変異体のように
天然に存在するものでも、天然に存在することが知られていない変異体であって
もよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない変異体は、突
然変異誘発法または直接合成により作製することができる。

【００７２】 当技術分野で知られた「同一性」とは、ポリペプチド配列またはポリヌクレオ
チド配列の比較により決定された、２以上のかかる配列間の関連性のことである
。当技術分野ではまた、「同一性」はポリペプチド配列またはポリヌクレオチド
配列の鎖間のマッチ(match)により決定された、このような配列間の配列関連性 の程度を意味する。「同一性」は公知の方法により難なく算出することができ、
こうした方法として、例えば Computational Molecular Biology, Lesk, A.M.編
, Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W. 編, Academic Press, New York, 1993; Comput er Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. and Griffin, H.G. 編
, Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology , von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribsk ov, M. and Devereux, J. 編, M Stockton Press, New York, 1991; および Car illo, H. and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988) に記載さ
れた方法があるが、これらに限らない。同一性を決定するための方法は、検討す
る配列間で最大級のマッチが得られるように設計される。さらに、同一性を決定
する方法は一般に入手可能なコンピュータプログラムに編集されている。２配列
間の同一性を決定するコンピュータプログラム法としては、ＧＣＧプログラムパ
ッケージ (Devereux, J.ら, Nucleic Acids Research 12(1):387 (1984))、ＢＬ
ＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ (Atschul, S.F.ら, J. Molec. Biol. 215:403-410 (1990)) があるが、これらに限らない。ＢＬＡＳＴ Ｘプログラム
はＮＣＢＩおよび他のソースから一般に入手可能である (BLAST Manual, Altsch ul, S.ら, NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S.ら, J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990))。公知のSmith Watermanアルゴリズムも同一性の決定に 使用することができる。

【００７３】 ポリペプチド配列を比較するためのパラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970)
比較マトリックス：BLOSSUM62 、Hentikoff and Hentikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 10915-10919 (1992) ギャップペナルティー：12 ギャップ長ペナルティー：４ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Genetics Computer Group （Madison WI）から「ｇａｐ」プログラムとして一般に入手可能である。前記の
パラメーターはペプチド比較のためのデフォルトパラメーター(default paramet er) である（末端ギャップのペナルティーは無し）。

【００７４】 ポリヌクレオチド配列を比較するためのパラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：マッチ＝＋10、ミスマッチ＝０ ギャップペナルティー：50 ギャップ長ペナルティー：３ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Genetics Computer Group (Madison WI)から「ｇａｐ」プログラムとして入手可能である。これらは核酸比
較のためのデフォルトパラメーターである。

【００７５】 ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの「同一性」についての好適な意味は、
場合により下記(１)および（２）において提供される。 （１） ポリヌクレオチドの具体例は、配列番号１の基準配列に対して少なくと
も50、60、70、80、85、90、95、97または100％の同一性を有するポリヌクレオ チド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドをさらに含む。前記ポリヌク
レオチド配列は配列番号１の基準配列と同一であっても、該基準配列に対して、
ある整数個までのヌクレオチド変異を含んでいてもよい。前記変異は少なくとも
１個のヌクレオチドの欠失、置換（トランジションおよびトランスバージョンを
含む）または挿入よりなる群から選択され、こうした変異は基準ヌクレオチド配
列の 5'もしくは 3'末端位置、またはこれらの末端位置の間のどこに存在しても
よく、基準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列内に１以上の連
続するグループとして介在することができる。ヌクレオチド変異の数は、配列番
号１のヌクレオチドの総数に、それぞれの（100で割った）同一性％値を掛け、 その積を配列番号１のヌクレオチドの総数から差し引くことにより、すなわち、
次式： ｎ_n ＜ ｘ_n -（ｘ_n・ｙ） により求めることができる。式中、ｎ_nはヌクレオチド変異の数であり、ｘ_nは配
列番号１のヌクレオチドの総数であり、ｙは50％については0.50、60％について
は0.60、70％については0.70、80％については0.80、85％については0.85、90％
については0.90、95％については0.95、97％については0.97または100％につい ては1.00であり、・は乗法演算子を表す記号であり、ｘ_nとｙの非整数の積は、 その積をｘ_nから引く前に、最も近似する整数に切り下げる。配列番号２のポリ ペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の改変は、そのコード配列にナンセ
ンス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を生じさせ、それにより、こう
した変異後に該ポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチドを改変させる
ことができる。

【００７６】 例として、本発明のポリヌクレオチド配列は、配列番号２の基準配列と同一で
ある、すなわち基準配列に対して100％の同一性を有するか、または同一性％が1 00％未満となるように基準配列に対してある整数個までのアミノ酸変異を含むこ
とができる。前記変異は少なくとも１個の核酸の欠失、置換（トランジションお
よびトランスバージョンを含む）または挿入よりなる群から選択され、こうした
変異は基準ポリヌクレオチド配列の 5'もしくは 3'末端位置、またはこれらの末
端位置の間のどこに存在してもよく、基準配列中の核酸の間に個々に、または基
準配列内に１以上の連続するグループとして介在することができる。核酸変異の
数は、配列番号２のアミノ酸の総数に、それぞれの（100で割った）同一性％値 を掛け、その積を配列番号２のアミノ酸の総数から差し引くことにより、すなわ
ち、次式： ｎ_n ＜ ｘ_n -（ｘ_n・ｙ） により求めることができる。式中、ｎ_nはアミノ酸変異の数であり、ｘ_nは配列番
号２中のアミノ酸の総数であり、ｙは例えば70％については0.70、80％について
は0.80、85％については0.85などであり、・は乗法演算子を表す記号であり、ｘ
_nとｙの非整数の積は、その積をｘ_nから引く前に、最も近似する整数に切り下げ
る。

【００７７】 （２） ポリペプチドの具体例は、配列番号２の基準配列に対して少なくとも50 、60、70、80、85、90、95、97または100％の同一性を有するポリペプチドを含 んでなる単離されたポリペプチドをさらに含む。前記ポリペプチド配列は配列番
号２の基準配列と同一であっても、該基準配列に対して、ある整数個までのアミ
ノ酸変異を含んでいてもよい。このような変異は少なくとも１個のアミノ酸の欠
失、置換（保存的および非保存的アミノ酸置換を含む）または挿入よりなる群か
ら選択され、これらの変異は基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカルボキシ
末端位置、またはこれらの末端位置の間のどこに存在してもよく、基準配列中の
アミノ酸の間に個々に、または基準配列内に１以上の連続したグループとして点
在することができる。アミノ酸変異の数は、配列番号２中のアミノ酸の総数にそ
れぞれの（100で割った）同一性％の数値を掛け、その積を配列番号２中のアミ ノ酸の総数から引くことにより、すなわち次式により求められる。 ｎ_a ＜ ｘ_a -（ｘ_a・ｙ） 式中、ｎ_aはアミノ酸変異の数であり、ｘ_aは配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは50％については0.50、60％については0.60、70％については0.70、80％
については0.80、85％については0.85、90％については0.90、95％については0. 95、97％については0.97または100％については1.00であり、・は乗法演算子を 表す記号であり、ｘ_aとｙの非整数の積は、その積をｘ_aから引く前に、最も近似
する整数に切り下げる。

【００７８】 例として、本発明のポリペプチド配列は、配列番号２の基準配列と同一である
、すなわち基準配列に対して100％の同一性を有するか、または同一性％が100％
未満となるように基準配列に対してある整数個までのアミノ酸変異を含むことが
できる。このような変異は少なくとも１個のアミノ酸の欠失、置換（保存的およ
び非保存的アミノ酸置換を含む）または挿入よりなる群から選択され、これらの
変異は基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、またはこれ
らの末端位置の間のどこに存在してもよく、基準配列中のアミノ酸の間に個々に
、または基準配列内に１以上の連続したグループとして点在することができる。
アミノ酸変異の数は、配列番号２中のアミノ酸の総数にそれぞれの（100で割っ た）同一性％の数値を掛け、その積を配列番号２中のアミノ酸の総数から引くこ
とにより、すなわち次式により求められる。 ｎ_a ＜ ｘ_a -（ｘ_a・ｙ） 式中、ｎ_aはアミノ酸変異の数であり、ｘ_aは配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは例えば70％については0.70、80％については0.80、85％については0.85 等であり、・は乗法演算子を表す記号であり、ｘ_aとｙの非整数の積は、その積 をｘ_aから引く前に、最も近似する整数に切り下げる。

【００７９】 「融合タンパク質」とは、２つの、しばしば無関係の、融合された遺伝子または
その断片によりコードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A-0 464 には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部分と他のヒトタンパク質または
その一部とを含んでなる融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療お
よび診断における使用には、融合タンパク質の一部として免疫グロブリンＦｃ領
域を使用することが有利であり、これにより例えば薬物速度論的性質が向上する
（例えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつかの使用にとっては、
その融合タンパク質を発現させ、検出し、精製した後でＦｃ部分を除去すること
が望ましいだろう。

【００８０】 本明細書中に引用された、特許および特許出願明細書を含めた全ての刊行物は
、あたかも各刊行物が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体を参
考としてここに組み入れるものとする。

【００８１】 配列情報 配列番号１ 配列番号２ 配列番号３ 配列番号４

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/02 Ｃ０７Ｋ 16/18 43/00 １１１ Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｚ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/68 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｇ０１Ｎ 33/68 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＡ，ＪＰ (72)発明者 キクリー，クリスティン，ケー アメリカ合衆国 19468 ペンシルバニア 州，リンフィールド，リメリック センタ ー ロード 499

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプ
   チド、または配列番号２のアミノ酸配列からなる単離されたポリペプチド。
2. 【請求項２】 以下の(i)〜(iv)からなる群から選択される単離されたポリ ヌクレオチド、またはその単離されたポリヌクレオチドに相補的なヌクレオチド
   配列： (i) 配列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる 単離されたポリヌクレオチド、 (ii) 配列番号１の全長にわたる配列番号１のヌクレオチド配列に対して少な くとも (a) ７０％の同一性、 (b) ８０％の同一性、 (c) ９０％の同一性、もしくは (d) ９５％の同一性、 を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、 (iii) 配列番号１のポリヌクレオチドからなる単離されたポリヌクレオチド、 および (iv) 適当なライブラリーを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件
   下で、配列番号１の配列またはその断片を有する標識プローブでスクリーニング
   することにより得られる単離されたポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 請求項１に記載のポリペプチドに対して免疫特異的な抗体。
4. 【請求項４】 被験者を治療する方法であって、 (i) 該被験者が請求項１に記載のポリペプチドの活性または発現の増加を必要と
   する場合には、 (a) 前記ポリペプチドに対する治療上有効な量のアゴニストを該被験者 に投与すること、および／または (b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離 されたポリヌクレオチドを、in vivo で該ポリペプチド活性を産生さ せるような形態で被験者に投与すること、 を含んでなり、 (ii)該被験者が請求項１に記載のポリペプチドの活性または発現の抑制を必要
   とする場合には、 (a) 前記ポリペプチドに対する治療上有効な量のアンタゴニストを被験 者に投与すること、および／または (b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を抑制する核 酸分子を被験者に投与すること、および／または (c) 前記ポリペプチドと、そのリガンド、基質、もしくは受容体について 競合する治療上有効な量のポリペプチドを被験者に投与すること、 を含んでなる、上記被験者を治療する方法。
5. 【請求項５】 被験者における請求項１に記載のポリペプチドの発現または
   活性に関連した該被験者の疾病または該疾病への罹りやすさを診断する方法であ
   って、 (a) 該被験者のゲノム内の該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列中に
   突然変異が存在するか否かを調べること、および／または (b) 該被験者から得られたサンプル中の該ポリペプチド発現の存在または量を
   分析すること、 を含んでなる方法。
6. 【請求項６】 請求項１に記載のポリペプチドの機能を刺激または抑制する
   化合物を同定するためのスクリーニング法であって、 (a) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプチドを担持している細
   胞もしくはその膜）またはその融合タンパク質と、の結合を、該候補化合 物に直接または間接的に結合させた標識により測定すること、 (b) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプチドを担持している細
   胞もしくはその膜）またはその融合タンパク質と、の結合を、標識競合物 質の存在下で測定すること、 (c) 候補化合物が該ポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグナルを
   もたらすか否かを、該ポリペプチドを担持している細胞または細胞膜に適 した検出系を用いて調べること、 (d) 候補化合物と、該ポリペプチドを含有する溶液と、を一緒にして混合物を
   調製し、該混合物中の該ポリペプチドの活性を測定して、該混合物の活性 をスタンダードと比較すること、および (e) 候補化合物が細胞における該ポリペプチドをコードするｍＲＮＡおよび該
   ポリペプチドの産生に及ぼす効果を例えばELISAアッセイを用いて検出する こと、 よりなる群から選択される方法を含んでなるスクリーニング法。
7. 【請求項７】 請求項１に記載のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴ
   ニスト。
8. 【請求項８】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在するとき請求項１に
   記載のポリペプチドを産生し得るポリヌクレオチドを含有する発現系。
9. 【請求項９】 宿主細胞が適当な培養条件下で配列番号２のアミノ酸配列を
   含んでなるポリペプチドを産生するように、請求項８に記載の発現系を用いて細
   胞を形質転換またはトランスフェクションすることを含んでなる、組換え宿主細
   胞の作製方法。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の方法により得られる組換え宿主細胞。
11. 【請求項１１】 配列番号２のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含んで
    なるポリペプチドを発現している請求項１０に記載の組換え宿主細胞の膜。
12. 【請求項１２】 請求項１０に記載の宿主細胞を前記ポリペプチドを産生さ
    せるのに十分な条件下で培養し、その培養培地から該ポリペプチドを回収するこ
    とを含んでなる、前記ポリペプチドの生産方法。
13. 【請求項１３】 以下の(a)〜(d)からなる群から選択される単離されたポリ
    ヌクレオチド： (a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチド配列に対して少な
    とも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％の同一性を有するヌクレオチド配
    列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、 (b) 配列番号３のポリヌクレオチドを含んでなる単離されたポリヌクレオチド
    、 (c) 配列番号３のポリヌクレオチド、または (d) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
    ７０％、８０％、９０％、９５％、９７〜９９％の同一性を有するポリペプチド
    をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
14. 【請求項１４】 以下の(a)〜(e)からなる群から選択されるポリペプチド： (a) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
    ７０％、８０％、９０％、９５％、９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含んでなるポリペプチド、 (b) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
    ７０％、８０％、９０％、９５％、９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列
    を有するポリペプチド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、または （d）配列番号４のポリペプチドからなるポリペプチド、 (e) 配列番号３に含まれる配列を含んでなるポリヌクレオチドによりコードさ
    れるポリペプチド。