FR3018424A1

FR3018424A1 - DOUBLE-STABLE EMULSIONS COMPRISING A BIOLOGICAL ENTITY AND USES THEREOF, IN PARTICULAR IN THE PHYTOSANITARY FIELD

Info

Publication number: FR3018424A1
Application number: FR1452030A
Authority: FR
Inventors: Maxime P Nollet; Samantha V Besse; Veronique V Schmitt; Olivier J Soubabere
Original assignee: Natural Plant Prot Npp; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Current assignee: Natural Plant Prot Npp; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date: 2014-03-12
Filing date: 2014-03-12
Publication date: 2015-09-18
Anticipated expiration: 2034-03-12
Also published as: FR3018424B1

Abstract

La présente invention est relative à des émulsions doubles qui contiennent une entité biologique choisie parmi les micro-organismes pathogènes, à leur procédé de préparation, ainsi qu'à des compositions phytosanitaires contenants ces émulsions et leur utilisation pour le traitement contre des espèces nuisibles.The present invention relates to dual emulsions which contain a biological entity selected from pathogenic microorganisms, to their process of preparation, as well as to phytosanitary compositions containing these emulsions and their use for the treatment against harmful species.

Description

La présente invention est relative au domaine technique général de la formulation qui trouve application notamment dans le domaine agrochimique. Elle est en particulier relative au domaine technique des émulsions, et notamment des émulsions doubles.The present invention relates to the general technical field of the formulation which finds application in particular in the agrochemical field. It is particularly related to the technical field of emulsions, and in particular double emulsions.

Les produits phytosanitaires sont utiles pour soigner ou plus généralement prévenir les maladies des plantes. Ils agissent en repoussant ou en éliminant les espèces nuisibles (insectes, autres végétaux indésirables et champignons), appelées ravageurs de la plante considérée. Les produits phytosanitaires sont généralement constitués d'une ou plusieurs substances actives, que ce soit d'origine naturelle, notamment minérale comme le sulfate de cuivre par exemple, ou biologique comme les micro-organismes, ou issue(s) de la chimie de synthèse. De nombreux effets non intentionnels ont été répertoriés lors de l'utilisation intensive de composés chimiques, en particulier à large spectre d'action. En revanche, l'utilisation de substances plus sélectives ne cause que peu de dommages collatéraux, et notamment à l'écosystème environnant. Les préoccupations d'efficacité, de sélectivité et de faible impact sur la santé et l'environnement ont donc augmenté l'intérêt pour l'utilisation et le développement de moyens alternatifs de contrôle, qui passent notamment par l'utilisation de substances naturelles telles que les micro-organismes, qui comme les virus, présentent naturellement une certaine sélectivité liée à leur gamme d'hôtes. Dans le cas de substances actives naturelles, outre la nécessité de pouvoir être produite à l'échelle industrielle, il est également crucial de pouvoir préserver l'activité phytosanitaire souhaitée au cours du temps, à la fois avant l'utilisation, notamment lors du stockage ; pendant l'utilisation, notamment lors de l'application par l'utilisateur ; et après l'utilisation, notamment une fois appliquée aux plantes concernées, pour assurer une persistance suffisante sur le terrain. Différentes types d'encapsulation peuvent être envisagés à cette fin. Les capsules polymériques sont composées d'un réseau de polymères, dont les propriétés dépendent de la réticulation. Elles peuvent se présenter sous une forme filamenteuse, une suite linéaire d'agrégats ou sous une forme particulaire, constituées d'agrégats sphériques. Ces systèmes agissent comme des ligands, établissant diverses interactions avec les espèces encapsulées. D'autres types de micro- ou nanoparticules encapsulent des espèces actives en formant une structure coeur-écorce plus ou moins complexe. Selon la taille des particules et la nature de la matrice de l'écorce, les cinétiques de libération peuvent être modulées. Néanmoins, leur formulation nécessite souvent l'utilisation d'agents organiques ou de traitements thermiques, et peut conduire à des problèmes de toxicité ou de destruction des espèces encapsulées. Les liposomes, quant à eux, sont des vésicules constituées de bicouches phospholipidiques. Ce sont des capsules, en général biocompatibles, qui sont faciles à préparer. L'inconvénient majeur des liposomes réside dans leur faible taux d'encapsulation d'actifs hydrophiles et faible capacité de rétention de ce type de molécules au cours du temps. Grâce à leur structure compartimentée, les émulsions doubles sont rapidement apparues comme des systèmes intéressants grâce à leur grande capacité à encapsuler des composés hydrosolubles. Ainsi, de nombreuses études ont été menées sur ces systèmes pour des applications cosmétiques, pharmaceutiques afin d'encapsuler des hormones, des stéroïdes ou des antiseptiques, ou encore agroalimentaire pour l'encapsulation de vitamines ou de sels minéraux par exemple.Phytosanitary products are useful for treating or more generally preventing plant diseases. They act by repelling or eliminating the harmful species (insects, other undesirable plants and fungi), called pests of the considered plant. Phytosanitary products generally consist of one or more active substances, whether of natural origin, in particular mineral such as copper sulphate for example, or biological as microorganisms, or issue (s) of synthetic chemistry . Many unintended effects have been reported during the intensive use of chemical compounds, especially with broad spectrum of action. On the other hand, the use of more selective substances causes little collateral damage, especially to the surrounding ecosystem. The concerns of efficiency, selectivity and low impact on health and the environment have therefore increased the interest in the use and development of alternative means of control, which include the use of natural substances such as microorganisms, which like viruses, naturally have a certain selectivity related to their range of hosts. In the case of natural active substances, besides the need to be able to be produced on an industrial scale, it is also crucial to be able to preserve the desired phytosanitary activity over time, both before use, especially during storage. ; during use, especially when applied by the user; and after use, especially when applied to the plants concerned, to ensure sufficient persistence in the field. Different types of encapsulation can be envisaged for this purpose. The polymeric capsules are composed of a network of polymers whose properties depend on the crosslinking. They may be in a filamentous form, a linear sequence of aggregates or in a particulate form, consisting of spherical aggregates. These systems act as ligands, establishing various interactions with the encapsulated species. Other types of micro- or nanoparticles encapsulate active species forming a more or less complex core-shell structure. Depending on the size of the particles and the nature of the bark matrix, the release kinetics can be modulated. Nevertheless, their formulation often requires the use of organic agents or heat treatments, and can lead to problems of toxicity or destruction of the encapsulated species. Liposomes, in turn, are vesicles consisting of phospholipid bilayers. These are capsules, usually biocompatible, which are easy to prepare. The major disadvantage of liposomes lies in their low level of encapsulation of hydrophilic active agents and low retention capacity of this type of molecules over time. Thanks to their compartmentalized structure, double emulsions have quickly emerged as interesting systems because of their great ability to encapsulate water-soluble compounds. Thus, numerous studies have been conducted on these systems for cosmetic applications, pharmaceuticals to encapsulate hormones, steroids or antiseptics, or agri-food for the encapsulation of vitamins or minerals for example.

Néanmoins dans les émulsions, comme dans tous les systèmes colloïdaux, la stabilité reste un enjeu crucial. En effet, les systèmes colloïdaux finement divisés, tels que les émulsions, sont caractérisés par la surface développée entre les deux milieux non miscibles. La formation de gouttes d'un liquide dans l'autre conduit à un accroissement de la quantité d'interface entre les deux phases et s'accompagne d'une augmentation de l'énergie libre totale du système (l'entropie contribue de façon minoritaire). Cet accroissement d'énergie rend les émulsions thermodynamiquement instables. Les propriétés de l'interface jouent un rôle fondamental dans l'évolution cinétique et les propriétés macroscopiques de ces systèmes. La métastabilité inhérente aux émulsions constitue un frein à leur développement et leur utilisation et il apparaît indispensable de pouvoir contrôler leur stabilité cinétique.Nevertheless, in emulsions, as in all colloidal systems, stability remains a crucial issue. In fact, finely divided colloidal systems, such as emulsions, are characterized by the surface developed between the two immiscible media. The formation of drops of one liquid in the other leads to an increase in the amount of interface between the two phases and is accompanied by an increase in the total free energy of the system (the entropy contributes in a minority way ). This increase in energy makes the emulsions thermodynamically unstable. The properties of the interface play a fundamental role in the kinetic evolution and macroscopic properties of these systems. The metastability inherent in emulsions hinders their development and use, and it seems essential to be able to control their kinetic stability.

Il existe donc un besoin constant de pouvoir mettre au point des émulsions qui restent stables au cours du temps, permettant de disposer d'une quantité efficace et suffisante de la substance encapsulée à tous les stades de l'utilisation de celle-ci. Ce besoin est tout particulièrement critique lorsque la substance encapsulée est une matière biologique active et que les diverses conditions d'utilisations sont susceptibles d'affecter la stabilité de l'émulsion. Dans ce contexte, la présente invention se propose de fournir de nouvelles formulations qui contiennent une substance biologique et qui sont stables dans le temps, et ce à la fois au stockage, lors des différentes étapes d'utilisation et une fois appliquée à la végétation à traiter (ensoleillement, oxydation, séchage, etc). En raison de l'application visée, les inventeurs se sont particulièrement attachés à fournir des formulations qui puissent être appliquées aisément par l'utilisateur, et notamment en utilisant de l'eau comme diluant. Par ailleurs, les substances biologiques actives contre les nuisibles sont majoritairement hydrophiles. Selon un premier aspect, la présente invention a donc pour objet des 5 émulsions doubles (E/H/E) comprenant : - au moins une entité biologique hydrophile choisie parmi les micro-organismes pathogènes, - au moins un tensio-actif lipophile de poids moléculaire correspondant à une gamme allant de 1000 à 1 million g/mol, 10 - au moins un tensio-actif hydrophile de poids moléculaire correspondant à une gamme allant de 4000 à 1 million g/mol, et/ou des particules d'une taille correspondant à une gamme allant de 5 nm à 35 iinn. Dans la présente invention, ces particules d'une taille correspondant à une gamme allant de 5 nm à 35 lm sont de préférence des particules 15 d'oxyde métallique, de métalloïdes ou de polysaccharides. Les émulsions sont des systèmes métastables composées d'une dispersion colloïdale de deux liquides non miscibles entre eux ou qui ont une miscibilité particulièrement limitée l'une par rapport à l'autre, tels que l'eau et l'huile. Par apport d'énergie, l'un des liquides, appelé phase 20 dispersée, est fragmenté sous forme de gouttelettes dans l'autre liquide, appelé phase dispersante. Il y a différents types d'émulsions : - Les émulsions simples directes (H/E) ou inverses (E/H), formées de gouttes liquides dispersées dans une phase continue, - Les émulsions doubles (directes E/H/E, ou inverses H/E/H), aussi 25 appelées émulsions multiples, qui sont des dispersions de gouttelettes internes dans des globules, eux-mêmes dispersés dans une phase continue.There is therefore a constant need to be able to develop emulsions which remain stable over time, making it possible to have an effective and sufficient quantity of the encapsulated substance at all stages of use thereof. This need is particularly critical when the encapsulated substance is an active biological material and the various conditions of use are likely to affect the stability of the emulsion. In this context, the present invention proposes to provide new formulations which contain a biological substance and which are stable over time, and this both at storage, during the various stages of use and once applied to the vegetation at the same time. treat (sunshine, oxidation, drying, etc.). Due to the intended application, the inventors have been particularly concerned with providing formulations that can be easily applied by the user, and in particular using water as a diluent. Moreover, biological substances that are active against pests are predominantly hydrophilic. According to a first aspect, the subject of the present invention is therefore dual emulsions (W / O / W) comprising: at least one hydrophilic biological entity chosen from pathogenic microorganisms, at least one lipophilic surfactant of weight molecular weight corresponding to a range of from 1000 to 1 million g / mol, at least one hydrophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range of from 4000 to 1 million g / mol, and / or particles of a size corresponding to a range from 5 nm to 35 iinn. In the present invention, these particles with a size ranging from 5 nm to 35 μm are preferably metal oxide particles, metalloids or polysaccharides. Emulsions are metastable systems composed of a colloidal dispersion of two immiscible liquids with each other or which have a particularly limited miscibility with respect to each other, such as water and oil. By supply of energy, one of the liquids, called the dispersed phase, is fragmented in the form of droplets in the other liquid, called the dispersing phase. There are different types of emulsions: - Direct (O / W) or inverse (W / O) single emulsions, consisting of liquid drops dispersed in a continuous phase, - Double emulsions (direct E / H / E, or inverse H / E / H), also called multiple emulsions, which are dispersions of internal droplets in globules, themselves dispersed in a continuous phase.

Une émulsion H/E est dite « directe » alors qu'une émulsion E/H dans laquelle un liquide aqueux est dispersé dans un liquide huileux est dite « inverse ». S'agissant des émulsions doubles, de la même manière on parle d'émulsions doubles H/E/H dites « double inverse » ou d'émulsions doubles E/H/E « double directe » dans laquelle des gouttelettes d'eau sont dispersées dans des globules d'huile, eux-mêmes dispersés dans une phase aqueuse externe. Dans le cadre de la présente invention, les émulsions doubles 10 contiennent au moins une entité biologique hydrophile qui est présente dans la phase aqueuse interne de l'émulsion double. D'une manière plus précise, les émulsions doubles selon l'invention comportent des gouttelettes constituées d'une phase aqueuse (ou phase aqueuse interne) contenant au moins une entité biologique (active) 15 hydrophile choisie parmi les micro-organismes pathogènes qui sont dispersées dans une phase huileuse comprenant au moins un tensio-actif lipophile de poids moléculaire correspondant à une gamme allant de 1000 à 1 million g/mol pour former des globules huileux, lesdits globules étant eux-mêmes dispersées dans une phase aqueuse (ou phase aqueuse 20 externe) contenant au moins un tensio-actif hydrophile de poids moléculaire correspondant à une gamme allant de 4000 à 1 million g/mol ou des particules d'une taille correspondant à une gamme allant de 5 nm à 35 lm. Pour plus de commodité, dans tout le texte qui suit, les abréviations 25 suivantes seront utilisées : « entité hydrophile choisie» pour « au moins une entité biologique hydrophile choisie parmi les micro-organismes pathogènes » ; « TA lipophile» pour « un tensio-actif lipophile de poids moléculaire correspondant à une gamme allant de 1000 à 1 million g/mol » ; « TA hydrophile » pour « un tensio-actif hydrophile de poids moléculaire correspondant à une gamme allant de 4000 à 1 million 5 g/mol » ; et « particules choisies» pour les « particules d'une taille correspondant à une gamme allant de 5 nm à 35 gm ». De plus, dans la cadre de la présente invention, on entend par « poids moléculaire » le poids moléculaire en poids. 10 Outre le ou les TA lipophile(s) qui sont présents dans la phase huileuse des émulsions doubles selon l'invention, la phase huileuse peut également comprendre d'autre(s) composé(s) huileux tel qu'une huile végétale, et en particulier l'huile de tournesol, l'huile de ricin, l'huile de colza, l'huile d'olive, l'huile de noyaux d'abricot, de préférence de l'huile de 15 tournesol, des esters d'acides gras, et en particulier des triesters d'acides gras saturés dont la chaîne est composée de 8 à 18 atomes de carbone (C8 à C18), des alcanes dont la chaîne carbonée est d'environ 20 atomes de carbone tels que l'eicosane, le docosane, le nonadécane, l'heneicosane, le tricosane, tétracosane, le pentacosane, l'octadécane et l'héxacosane. 20 De manière préférée, la phase huileuse qui comprend au moins un TA lipophile contient en outre une huile, notamment végétale, qui est : - soit liquide à la température de stockage employée, qui est classiquement d'environ +4°C, - soit solide à la température atteinte sur le terrain en pleine 25 exposition au soleil lors de la saison de l'épandage, c'est-à-dire entre +15°C et +50°C. Ainsi, la phase huileuse des émulsions doubles selon l'invention contient une huile qui est liquide ou solide à une température qui correspond à une gamme allant de +4°C à +60°C, de préférence à une gamme allant de +4°C à +40°C. De manière particulièrement avantageuse, l'émulsion double selon l'invention contient une huile solide à une température correspondant aux gammes mentionnées ci-dessus.An O / W emulsion is said to be "direct" whereas an W / O emulsion in which an aqueous liquid is dispersed in an oily liquid is called "inverse". In the case of double emulsions, in the same way we speak of double "inverse double" H / E / H emulsions or double direct "double" E / H / E emulsions in which droplets of water are dispersed. in oil globules, themselves dispersed in an external aqueous phase. In the context of the present invention, the double emulsions contain at least one hydrophilic biological entity that is present in the internal aqueous phase of the double emulsion. More precisely, the double emulsions according to the invention comprise droplets consisting of an aqueous phase (or internal aqueous phase) containing at least one hydrophilic (active) biological entity chosen from pathogenic microorganisms which are dispersed in an oily phase comprising at least one lipophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range of from 1000 to 1 million g / mol to form oily globules, said globules being themselves dispersed in an aqueous phase (or aqueous phase). external) containing at least one hydrophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range of from 4000 to 1 million g / mol or particles of a size corresponding to a range from 5 nm to 35 μm. For convenience, throughout the text that follows, the following abbreviations will be used: "selected hydrophilic entity" for "at least one hydrophilic biological entity selected from pathogenic microorganisms"; "Lipophilic TA" for "a lipophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range of 1000 to 1 million g / mol"; "Hydrophilic TA" for "a hydrophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range of 4000 to 1 million 5 g / mol"; and "selected particles" for "particles of a size ranging from 5 nm to 35 gm". In addition, in the context of the present invention, the term "molecular weight" means the molecular weight by weight. In addition to the lipophilic TA (s) present in the oily phase of the double emulsions according to the invention, the oily phase may also comprise other oily compound (s) such as a vegetable oil, and especially sunflower oil, castor oil, rapeseed oil, olive oil, apricot kernel oil, preferably sunflower oil, esters of fatty acids, and in particular triesters of saturated fatty acids whose chain is composed of 8 to 18 carbon atoms (C8 to C18), alkanes whose carbon chain is about 20 carbon atoms such as eicosane , docosan, nonadecane, heneicosane, tricosane, tetracosane, pentacosane, octadecane and hexacosane. Preferably, the oily phase which comprises at least one lipophilic TA also contains an oil, in particular a vegetable oil, which is: - either liquid at the storage temperature employed, which is conventionally about + 4 ° C., - or solid at the temperature reached in the field in full sun exposure during the spreading season, that is, between + 15 ° C and + 50 ° C. Thus, the oily phase of the double emulsions according to the invention contains an oil which is liquid or solid at a temperature which corresponds to a range of from + 4 ° C. to + 60 ° C., preferably to a range of + 4 ° C. C at + 40 ° C. In a particularly advantageous manner, the double emulsion according to the invention contains a solid oil at a temperature corresponding to the ranges mentioned above.

En particulier, l'huile sera choisie en fonction de la température correspondant à la saison de la végétation à traiter. Ainsi, l'huile choisie devra avoir une température de fusion plus élevée que la température maximale à laquelle sera exposée la culture à traiter. Par exemple, si le traitement se fait au printemps on pourra choisir une huile solide jusqu'à au moins 25°C et si le traitement se fait en été il sera préférable de choisir une huile dont la température de fusion est d'au moins 40°C. Les émulsions selon la présente invention ont l'avantage d'être stables et notamment de présenter un taux d'encapsulation de la ou des entité(s) biologique(s) hydrophile(s) élevé.In particular, the oil will be chosen according to the temperature corresponding to the season of the vegetation to be treated. Thus, the chosen oil will have a higher melting point than the maximum temperature at which the crop to be treated will be exposed. For example, if the treatment is done in spring we can choose a solid oil up to at least 25 ° C and if the treatment is done in summer it will be better to choose an oil with a melting temperature of at least 40 ° C. The emulsions according to the present invention have the advantage of being stable and in particular of having a degree of encapsulation of the hydrophilic biological entity (s) high.

La déstabilisation des émulsions peut se faire soit par des phénomènes n'entraînant pas de diminution de la quantité d'interface entre les deux phases (phénomènes réversibles), soit par des phénomènes destructifs (phénomènes irréversibles). Parmi les premiers, la floculation et le crémage ou la sédimentation, 20 conduisent à une répartition non homogène des gouttes dans l'ensemble de l'émulsion, et l'agitation permet alors généralement de re-disperser les gouttes. S'agissant en revanche des phénomènes irréversibles, la destruction d'une émulsion est attribuée à deux mécanismes bien distincts : le 25 mûrissement d'Ostwald et la coalescence, les deux pouvant se produire simultanément. La coalescence est un mécanisme consistant en la fusion de deux gouttes de phase dispersée en contact. Elle implique donc la rupture du film séparant les deux gouttes. Ce phénomène se produit dans l'ensemble de l'émulsion conduisant peu à peu à la séparation macroscopique des phases en présence. Le mûrissement d'Ostwald est dû à la différence de pressions de Laplace (pression de Laplace=excès de pression à l'intérieur d'une goutte de rayon R) qui existe entre des gouttes de tailles différentes. Le mûrissement consiste en un transfert de matière à travers le milieu continu depuis les gouttes de petite taille, où la pression de Laplace est la plus grande, vers les gouttes de plus grande taille. La stabilité est évaluée par un critère morphologique (maintien de la structure compartimentée, diamètre des globules huileux inchangé) et par un critère d'encapsulation (détermination de la cinétique de libération de l'entité encapsulée). Les émulsions doubles selon l'invention ne présentent pas ou pratiquement pas d'instabilité par mûrissement d'Ostwald et/ou par coalescence, que ce soit coalescence globules huileux-globules huileux, coalescence gouttelettes-gouttelettes, ou coalescence gouttelettes-globules huileux. Ainsi, les émulsions selon l'invention sont des « émulsions stables », en ce sens qu'elles présentent un taux d'encapsulation de la ou des entité(s) hydrophile(s) choisie(s) d'au moins 75 % et qui est maintenu dans cette gamme pendant au moins 30 jours, et même au moins 5 mois. Ainsi, une émulsion est considérée comme stable dans le cadre de la présente invention si elle remplit ce critère, même si elle peut éventuellement présenter un flux sortant ou entrant d'eau car il ne s'agit pas d'un mécanisme qui conduit à la destruction de l'émulsion ou à une diminution de l'encapsulation. Le taux d'encapsulation peut se faire par un comptage par observation en microscopie optique ou électronique (ou par un dosage par les méthodes classiques de spectroscopie adaptée à l'entité encapsulée (UV-Vis, Raman, RMN...) de la phase externe par un simple prélèvement. Le dosage par les mêmes méthodes peut aussi s'opérer sur la phase interne après une étape de séparation des deux phases par centrifugation et une étape de destruction de l'émulsion par exemple par ultracentrifigation. Le dosage se fera de préférence dans la phase externe. La consistance de l'émulsion quantifiée par le module élastique de cisaillement G' dépend de la taille des globules et de la fraction volumique en globules tout comme dans le cas d'une émulsion simple (voir par exemple l'article « Jamming phase diagram for attractive particles » Nature 411, n° 6839 (2001) pages 772-775). L'existence d'un flux sortant peut donc être mise en évidence par une diminution de la consistance et quantifiée par la mesure du module élastique à l'aide d'un rhéomètre avec une détermination conjointe par microscopie optique de la taille des globules. Le flux sortant maximal correspond à une diminution de la fraction massique des globules de 15 %. L'existence d'un flux entrant peut être mise en évidence par une augmentation de la consistance et quantifiée par la mesure du module élastique à l'aide d'un rhéomètre avec une détermination conjointe par microscopie optique de la taille des globules. Le flux entrant maximal correspond à une diminution de la fraction massique des globules de 2,5%. De manière préférée, l'entité biologique hydrophile est un microorganisme pathogène des invertébrés ou pathogène des plantes ou pathogène des champignons, de préférence pathogène des invertébrés.The destabilization of the emulsions can be done either by phenomena that do not entail a reduction in the amount of interface between the two phases (reversible phenomena), or by destructive phenomena (irreversible phenomena). Among the former, flocculation and creaming or sedimentation lead to a non-homogeneous distribution of the drops throughout the emulsion, and the stirring then generally allows redispersion of the drops. On the other hand irreversible phenomena, the destruction of an emulsion is attributed to two very distinct mechanisms: Ostwald ripening and coalescence, both of which can occur simultaneously. Coalescence is a mechanism consisting of the fusion of two drops of dispersed phase in contact. It therefore involves breaking the film separating the two drops. This phenomenon occurs throughout the emulsion gradually leading to the macroscopic separation of the phases in the presence. The Ostwald ripening is due to the difference in Laplace pressures (Laplace pressure = excess pressure inside a drop of radius R) that exists between drops of different sizes. Maturing consists of a transfer of material through the continuous medium from the small drops, where the Laplace pressure is greatest, to the larger drops. The stability is evaluated by a morphological criterion (maintenance of the compartmentalized structure, unchanged diameter of the oily globules) and by an encapsulation criterion (determination of the kinetics of release of the encapsulated entity). The double emulsions according to the invention have no or practically no instability by Ostwald ripening and / or by coalescence, whether it is coalescence oily globules-oily globules, coalescence droplet-droplets, or coalescence droplets-oily globules. Thus, the emulsions according to the invention are "stable emulsions", in that they have a degree of encapsulation of the hydrophilic entity (s) chosen (s) of at least 75% and which is maintained in this range for at least 30 days, and even at least 5 months. Thus, an emulsion is considered stable in the context of the present invention if it fulfills this criterion, even though it may possibly have an outgoing or incoming flow of water because it is not a mechanism that leads to the destruction of the emulsion or a decrease in encapsulation. The rate of encapsulation can be done by counting by optical or electron microscopic observation (or by an assay by conventional methods of spectroscopy adapted to the encapsulated entity (UV-Vis, Raman, NMR, etc.) of the phase The assay by the same methods can also be carried out on the internal phase after a step of separating the two phases by centrifugation and a step of destroying the emulsion, for example by ultracentrifigation. Preferably, the consistency of the emulsion quantified by the elastic shear modulus G 'depends on the size of the globules and the volume fraction in globules just as in the case of a single emulsion (see, for example, US Pat. article "Jamming phase diagram for attractive particles" Nature 411, n ° 6839 (2001) pages 772-775) .The existence of an outflow can thus be evidenced by a decrease in the consistency and uantified by the measurement of elastic modulus using a rheometer with a joint determination by optical microscopy of the size of the globules. The maximum outflow corresponds to a decrease in the mass fraction of the cells of 15%. The existence of an inflow can be evidenced by an increase in consistency and quantified by the measurement of elastic modulus using a rheometer with a joint determination by optical microscopy of the size of the globules. The maximum inflow corresponds to a decrease in the mass fraction of globules of 2.5%. Preferably, the hydrophilic biological entity is a pathogenic microorganism of invertebrates or plant pathogen or fungal pathogen, preferably pathogen of invertebrates.

Il est entendu que l'entité biologique hydrophile encapsulée dans les émulsions doubles selon la présente invention est une entité biologique active, c'est-à-dire qui possède ou qui est capable d'avoir une activité pathogène effective.It is understood that the hydrophilic biological entity encapsulated in the double emulsions according to the present invention is an active biological entity, that is to say which possesses or is capable of having an effective pathogenic activity.

Ce micro-organisme pathogène est en particulier choisi parmi les virus et les bactéries, de préférence parmi les virus pathogènes des insectes, que ce soit des virus à ADN ou bien des virus à ARN, et que ceux-ci soient simple brin ou double brin.This pathogenic microorganism is in particular chosen from viruses and bacteria, preferably from pathogenic viruses of insects, whether it be DNA viruses or RNA viruses, and whether these are single-stranded or double-stranded. .

Au sein des virus pathogènes des insectes, l'entité biologique hydrophile est de préférence choisie parmi les Baculoviridae tels que les Alphabaculovirus, Betabaculovirus, Gammabaculovirus ou Deltabaculovirus et en particulier les Betabaculovirus, parmi les Entomopoxvirinae tels que les Alphaentomopoxvirus, Betaentomopoxvirus et Gammaentomopoxvirus, parmi les Parvoviridae tels que les Densovirus, Iteravirus, Brevidensovirus et Pefudensovirus et en particulier les Densovirus, et parmi les Reoviridae tels que les Aquareovirus, Cardoreovirus, Coltivirus, Cypovirus, Dinovernavirus, Idnoreovirus et Seadomavirus. Parmi les Alphabaculovirus, on peut mentionner de manière préférée les nucléopolyhédrovirus, et parmi les Betabaculovirus on peut également mentionner de manière préférée les granulovirus . De manière particulièrement préférée, l'entité biologique hydrophile présente dans les émulsions de l'invention est un Betabaculovirus et notamment un granulovirus, et en particulier le Cydia pomonella 20 granulovirus (CpGV). De manière préférée, l'entité biologique hydrophile choisie pour être présente dans les émulsions selon la présente invention a une taille correspondant à une gamme allant de 0,015 à 15 pm de longueur, de préférence allant de 0,1 à 0,8 pm de longueur, la taille de l'entité 25 biologique étant mesurée par une technique de microscopie, et en particulier par microscopie électronique. Par « taille de l'entité biologique », on entend ici la plus grande longueur.Within the insect pathogenic viruses, the hydrophilic biological entity is preferably chosen from Baculoviridae such as Alphabaculovirus, Betabaculovirus, Gammabaculovirus or Deltabaculovirus and in particular Betabaculoviruses, among Entomopoxvirinae such as Alphaentomopoxvirus, Betaentomopoxvirus and Gammaentomopoxvirus, among the Parvoviridae such as Densovirus, Iteravirus, Brevidensovirus and Pefudensovirus and in particular Densoviruses, and among Reoviridae such as Aquareovirus, Cardoreovirus, Coltivirus, Cypovirus, Dinovernavirus, Idnoreovirus and Seadomavirus. Among the Alphabaculoviruses, nucleopolyhedroviruses may be mentioned in a preferred manner, and among the Betabaculoviruses granuloviruses may also be mentioned in a preferred manner. In a particularly preferred manner, the hydrophilic biological entity present in the emulsions of the invention is a Betabaculovirus and in particular a granulovirus, and in particular Cydia pomonella granulovirus (CpGV). Preferably, the hydrophilic biological entity chosen to be present in the emulsions according to the present invention has a size corresponding to a range from 0.015 to 15 μm in length, preferably ranging from 0.1 to 0.8 μm in length. the size of the biological entity being measured by a microscopy technique, and in particular by electron microscopy. By "size of biological entity" is meant here the greatest length.

L'entité biologique hydrophile qui est présente dans les émulsions doubles selon l'invention peut l'être sous une forme purifiée ou non purifiée comme par exemple dans le cas d'une production industrielle où d'autres éléments que l'entité biologique proprement dite peuvent être présents du fait notamment du procédé de production de ladite entité biologique. Par exemple, lorsque les émulsions doubles selon l'invention contiennent une entité biologique hydrophile de type virale, celle-ci peut être présente sous la forme de particules virales purifiées, par exemple par centrifugation ou filtration, ou bien sous une forme non purifiée, c'est- à-dire qu'elle peut également contenir, en plus des particules virales proprement dites, d'autres éléments du fait du procédé de production virale, tels que des éléments nutritifs présents dans le milieu d'élevage des larves lors de la production in vivo de la suspension virale, ou dans le milieu de culture des cellules d'insectes permettant la production in vitro de la suspension virale. L'entité biologique est présente à une concentration allant de 1.109 particules/L à 1.1015 particules/L. Le ou les tensio-actif(s) ou stabilisant(s) qui sont présents dans les émulsions de l'invention, qu'ils soient lipophiles ou hydrophiles, sont des tensio-actifs qui peuvent être utilisés notamment en agrochimie et en agro-alimentaire, et en particulier pour la culture de produits destinés à l'alimentation animale ou humaine. Les tensio-actifs sont des composés qui modifient la tension interfaciale entre deux surfaces. Au niveau chimique, il s'agit de molécules amphiphiles présentant, au sein d'une même entité, deux parties de polarités différentes : l'une à caractère hydrophile, l'autre à caractère lipophile. En raison de leur diversité, ils sont classés en fonction de différents critères, tels que la charge portée par la tête polaire (les tensioactifs anioniques chargés négativement (e.g., dodécyl sulfate de sodium (SDS)), les tensio-actifs cationiques chargés positivement (e.g., bromure de tétradécyltriméthyl ammonium (TTAB)), les tensio-actifs non ioniques (neutres) (e.g., monostéarate de glycérol) et les tensio-actifs amphotères portant les deux types de charge (e.g., phospholipides), mais également le poids moléculaire (les tensio-actifs de bas poids moléculaire (e.g., mono-et di-glycérides, sucroesters) et les tensio-actifs de haut poids moléculaire qui sont des polymères naturels (e.g.,protéines) ou synthétiques (e.g., polyricinoléate de polyglycérol (PGPR)). Dans le cadre de l'invention, le ou les tensio-actif(s) ou stabilisant(s) sont dits lipophiles ou hydrophiles en fonction de leur solubilité préférentielle dans un milieu lipophile ou hydrophile respectivement. De manière préférée, le poids moléculaire du ou des tensio-actif(s) lipophile(s) présent(s) dans les émulsions de l'invention correspond à une gamme allant de 1000 à 1 million g/mol, de préférence de 1000 à 6000 g/mol, et de manière encore préférée de 3000 à 6000 g/mol. Parmi les exemples de tensio-actifs lipophiles qui peuvent être présents dans les émulsions selon l'invention, on peut notamment citer les esters / polyesters d'acides gras, de préférence d'acide gras contenant au moins douze atomes de carbone, avec des polyols d'origine naturelle, notamment dérivés de sucres y compris le glycérol, ou d'origine synthétique tels que des polyéthylèneglycols et polypropylèneglycols. Il peut s'agir de mono-, di-, tri- ou poly-esters selon le nombre de groupes hydroxy (-OH) qui forment des liaisons ester avec les acides gras. Des exemples préférés dans le cadre de la présente invention comprennent : le polyricinoléate de polyglycérol (PGPR), les mono-, di- et tri-oléates de sorbitane connus sous les appellations commerciales Span® 80, Span® 83, et Span 85®, et l'isostéarate de sorbitane connu sous l'appellation commerciale Span® 120, les esters de polyglycérol-10 / huile végétale et les polyglycérol-10 / esters d'acide gras. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, les émulsions contiennent au moins du polyricinoléate de polyglycérol (PGPR) en tant que tensio-actif lipophile. La formule chimique du polyricinoléate de polyglycérol (PGPR) est : R1-0-(CH2-CH(0R2)-CH20),-,-R3 où n= 2 à 12 ; R', R2 et R3 représentent chacun indépendamment, H ou un ester de l'acide ricinoléique de formule : H-[0-CH((CH2)5CH3)-CH2-CH=CH-(CH2)7-00]nnoù m=2 à 10. De préférence, n= 2 à 10 et/ou m=2 à 10 ; plus préférentiellement, n= 2 à 5 et/ou rn= 4 à 10.The hydrophilic biological entity that is present in the double emulsions according to the invention may be in a purified or non-purified form, for example in the case of industrial production or other elements than the biological entity itself. may be present due in particular to the production process of said biological entity. For example, when the dual emulsions according to the invention contain a viral-type hydrophilic biological entity, this may be present in the form of purified viral particles, for example by centrifugation or filtration, or in an unpurified form, c. that is, it can also contain, in addition to the viral particles themselves, other elements due to the viral production process, such as nutrients present in the larval rearing medium at the time of the production. in vivo production of the viral suspension, or in the insect cell culture medium for the in vitro production of the viral suspension. The biological entity is present at a concentration ranging from 1.109 particles / L to 1.1015 particles / L. The surfactant (s) or stabilizer (s) which are present in the emulsions of the invention, whether they are lipophilic or hydrophilic, are surfactants which can be used in particular in agrochemicals and in the food industry. , and in particular for the cultivation of products intended for animal or human food. Surfactants are compounds that modify the interfacial tension between two surfaces. At the chemical level, it is amphiphilic molecules having, within the same entity, two parts of different polarities: one with hydrophilic character, the other with lipophilic character. Because of their diversity, they are classified according to different criteria, such as the charge carried by the polar head (negatively charged anionic surfactants (eg, sodium dodecyl sulfate (SDS)), positively charged cationic surfactants ( eg, tetradecyltrimethylammonium bromide (TTAB)), nonionic (neutral) surfactants (eg, glycerol monostearate) and amphoteric surfactants carrying both types of filler (eg, phospholipids), but also molecular weight (low molecular weight surfactants (eg, mono-and di-glycerides, sucroesters) and high molecular weight surfactants which are natural (eg, protein) or synthetic polymers (eg, polyglycerol polyricinoleate (PGPR) In the context of the invention, the surfactant (s) or stabilizer (s) are said to be lipophilic or hydrophilic depending on their preferential solubility in a lipophilic or hydrophilic medium resp. In a preferred manner, the molecular weight of the lipophilic surfactant (s) present in the emulsions of the invention corresponds to a range of from 1000 to 1 million g / mol, preferably from 1000 to 6000 g / mol, and more preferably 3000 to 6000 g / mol. Examples of lipophilic surfactants that may be present in the emulsions according to the invention include esters / polyesters of fatty acids, preferably of fatty acids containing at least 12 carbon atoms, with polyols. of natural origin, especially derivatives of sugars including glycerol, or of synthetic origin such as polyethylene glycols and polypropylene glycols. It can be mono-, di-, tri- or poly-esters depending on the number of hydroxy groups (-OH) which form ester bonds with the fatty acids. Preferred examples within the scope of the present invention include: polyglycerol polyricinoleate (PGPR), sorbitan mono-, di- and trioleate compounds known under the trade names Span® 80, Span® 83, and Span 85®, and sorbitan isostearate known under the trade name Span® 120, polyglycerol-10 esters / vegetable oil and polyglycerol-10 / fatty acid esters. According to a particularly preferred embodiment of the invention, the emulsions contain at least polyglycerol polyricinoleate (PGPR) as a lipophilic surfactant. The chemical formula of polyglycerol polyricinoleate (PGPR) is: R1-0- (CH2-CH (OR2) -CH2O), -, - R3 where n = 2 to 12; R ', R2 and R3 are each independently H or a ricinoleic acid ester of the formula: ## STR2 ## = 2 to 10. Preferably, n = 2 to 10 and / or m = 2 to 10; more preferably, n = 2 to 5 and / or rn = 4 to 10.

De manière également préférée, le poids moléculaire du ou des tensio-actif(s) hydrophile(s) présent(s) dans les émulsions de l'invention correspond à une gamme allant de 4000 à 1 million g/mol, de préférence de 4000 à 500 000 g/mol. Parmi les exemples de tensio-actifs hydrophiles qui peuvent être présents dans les émulsions selon l'invention, on peut notamment citer les protéines, les polysaccharides, les tensioactifs ioniques, les tensioactifs non-ioniques et les particules. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, les émulsions contiennent au moins un tensio-actif hydrophile choisi parmi : - les protéines telles que les protéines d'origine végétale comme les protéines de soja ou les protéines du pois ou telles que les protéines animales comme le caséinate de sodium ou de calcium, les protéines d'oeufs, les protéines bovines et par exemple les albumines de sérum bovin, et - les polysaccharides, tels que la gomme arabique, la cellulose, l'amidon, l'agar-agar, le carraghénane, le dextrane, les pectines ou des 5 polysaccharides modifiés, pectines modifiées, notamment par un complexe conjugué (dextrane, maltrodextrine, etc).. Avantageusement, les émulsions doubles de l'invention contiennent au moins un tensio-actif hydrophile choisi parmi le caséinate de sodium (tensio-actif hydrophile protéique) et la gomme arabique (tensio-actif 10 polysaccharidique). De préférence, la quantité massique en tensioactif(s) hydrophile(s), notamment par exemple le caséinate de sodium et/ou la gomme arabique, sera comprise entre 1 et 30% en poids par rapport à la masse totale de la phase aqueuse externe, plus préférentiellement entre 5 et 25% et encore 15 plus préférentiellement entre 10 et 20% (masse du/des tensioactif(s) hydrophile(s) par rapport à la masse totale de la phase aqueuse externe). De préférence, la quantité massique en tensioactif(s) lipophile(s), par exemple notamment le polyricinoléate de polyglycérol (PGPR), sera comprise entre 0,5 et 15% en poids par rapport à la masse totale du 20 milieu lipophile, plus préférentiellement entre 1 et 7%. De préférence, la quantité massique de la phase aqueuse externe par rapport à la masse totale de l'émulsion eau-dans-huile-dans-eau (E/H/E) sera comprise entre 10 et 50%, plus préférentiellement entre 20 et 40%. De préférence, la quantité massique de la phase aqueuse interne 25 par rapport à la masse totale de l'émulsion eau-dans-huile-dans-eau (E/H/E) sera comprise entre 10 et 50%, plus préférentiellement entre 20 et 40%. De préférence, la quantité massique de la phase huileuse interne (milieu lipophile) de l'émulsion eau-dans-huile-dans-eau (E/H/E) sera comprise entre 10 et 50%, plus préférentiellement entre 20 et 40%, par rapport à la masse totale de l'émulsion (E/H/E). Lorsque l'émulsion double selon l'invention contient des protéines en tant que tensio-actif hydrophile, et notamment du caséinate de sodium, le tensio-actif lipophile sera de préférence présent dans l'émulsion double à une concentration correspondante à une gamme allant de 1% à 7% par rapport à la masse du milieu lipophile, et ce indépendamment de la fraction massique de l'émulsion inverse. En outre, lorsque l'émulsion double selon l'invention contient des polysaccharides en tant que tensio-actif hydrophile, et notamment de la gomme arabique, la concentration du tensio-actif lipophile présent dans l'émulsion double sera de préférence adaptée à la fraction massique de l'émulsion inverse. Ainsi, plus la concentration du tensio-actif lipophile est importante, plus la fraction massique en gouttelettes d'eau sera importante également. Par exemple, pour une concentration en tensioactif lipophile correspondant à une gamme allant de 1% à 3% par rapport à la masse du milieu lipophile, la fraction massique en gouttelettes d'eau de l'émulsion inverse correspondra idéalement à une gamme allant de 5% à 40% par rapport à la masse de l'émulsion inverse.Also preferably, the molecular weight of the hydrophilic surfactant (s) present in the emulsions of the invention corresponds to a range of 4000 to 1 million g / mol, preferably 4000 at 500,000 g / mol. Examples of hydrophilic surfactants which may be present in the emulsions according to the invention include, in particular, proteins, polysaccharides, ionic surfactants, nonionic surfactants and particles. According to a particularly preferred embodiment of the invention, the emulsions contain at least one hydrophilic surfactant chosen from: proteins such as proteins of plant origin, such as soy proteins or pea proteins, or such as animal proteins such as sodium or calcium caseinate, egg proteins, bovine proteins and for example bovine serum albumin, and polysaccharides, such as gum arabic, cellulose, starch, agar agar, carrageenan, dextran, pectins or modified polysaccharides, modified pectins, in particular with a conjugated complex (dextran, maltrodextrin, etc.). Advantageously, the double emulsions of the invention contain at least one surfactant. hydrophilic selected from sodium caseinate (hydrophilic protein surfactant) and gum arabic (polysaccharide surfactant). Preferably, the mass quantity of hydrophilic surfactant (s), in particular for example sodium caseinate and / or gum arabic, will be between 1 and 30% by weight relative to the total mass of the external aqueous phase. more preferably between 5 and 25% and even more preferably between 10 and 20% (mass of the hydrophilic surfactant (s) relative to the total mass of the external aqueous phase). Preferably, the mass quantity of lipophilic surfactant (s), for example, especially polyglycerol polyricinoleate (PGPR), will be between 0.5 and 15% by weight relative to the total weight of the lipophilic medium, plus preferably between 1 and 7%. Preferably, the mass quantity of the external aqueous phase relative to the total mass of the water-in-oil-in-water emulsion (W / O / W) will be between 10 and 50%, more preferably between 20 and 40%. Preferably, the mass quantity of the internal aqueous phase relative to the total mass of the water-in-oil-in-water emulsion (W / O / W) will be between 10 and 50%, more preferably between 20 and 50%. and 40%. Preferably, the mass quantity of the internal oily phase (lipophilic medium) of the water-in-oil-in-water emulsion (W / O / W) will be between 10 and 50%, more preferably between 20 and 40%. , relative to the total mass of the emulsion (W / O / W). When the double emulsion according to the invention contains proteins as hydrophilic surfactant, and in particular sodium caseinate, the lipophilic surfactant will preferably be present in the double emulsion at a concentration corresponding to a range from 1% to 7% relative to the weight of the lipophilic medium, and this independently of the mass fraction of the inverse emulsion. In addition, when the double emulsion according to the invention contains polysaccharides as hydrophilic surfactant, and in particular gum arabic, the concentration of the lipophilic surfactant present in the double emulsion will preferably be adapted to the fraction mass of the inverse emulsion. Thus, the higher the concentration of the lipophilic surfactant, the greater the mass fraction in water droplets will be important as well. For example, for a lipophilic surfactant concentration corresponding to a range of 1% to 3% with respect to the weight of the lipophilic medium, the water droplet mass fraction of the inverse emulsion will ideally correspond to a range of from % to 40% relative to the mass of the inverse emulsion.

En plus ou en remplacement du ou des tensio-actif(s) hydrophile(s), les émulsions de l'invention peuvent contenir des particules d'une taille correspondant à une gamme allant de 5 nm à 35 iim. Au sens de l'invention, le terme « particules » se rapporte à des particules colloïdales amphiphiles, qui peuvent éventuellement être fonctionnalisées de manière à augmenter le caractère lipophile des particules. Une telle fonctionnalisation, certes non nécessaire, peut permettre éventuellement de favoriser l'adsorption des particules à l'interface entre la phase continue aqueuse externe et l'émulsion inverse de l'émulsion double.In addition to or instead of the hydrophilic surfactant (s), the emulsions of the invention may contain particles of a size corresponding to a range from 5 nm to 35 μm. For the purposes of the invention, the term "particles" refers to amphiphilic colloidal particles, which may optionally be functionalized so as to increase the lipophilic nature of the particles. Such functionalization, which is certainly not necessary, may possibly make it possible to promote the adsorption of the particles at the interface between the external aqueous continuous phase and the inverse emulsion of the double emulsion.

Par « taille des particules », on entend ici le diamètre moyen des particules élémentaires (particules primaires, avant toute agglomération éventuelle), qui peut être mesurée par les techniques classiques : microscopie électronique, diffusion dynamique de la lumière si le diamètre est inférieur au micromètre et par diffusion statique de la lumière si les particules ont un diamètre supérieur au micromètre. Dans la pratique, cette valeur sera souvent donnée par le fournisseur commercial. Parmi les particules qui peuvent être présentes dans les émulsions selon l'invention, on peut notamment citer des particules d'oxyde métallique / de métalloïdes tels que le Si02, le FeO, le TiO2, ou des particules de polysaccharides tels que l'amidon, l'amidon modifié (par exemple, au moyen de l'octényl succinate), et de préférence des particules de SiO2. De préférence, la quantité massique en particules, notamment par 15 exemple des particules de Si02, sera comprise entre 0,1 et 20% en poids par rapport à la masse totale de la phase aqueuse externe, plus préférentiellement entre 0,1 et 2% (masse des particules par rapport à la masse totale de la phase aqueuse externe). Dans le cas où les particules présentes dans les émulsions selon 20 l'invention sont fonctionnalisées, elles peuvent l'être notamment par des tensio-actifs, et en particulier des tensio-actifs cationiques, mais également par des tensioactifs non ioniques, des amines, des acides, des polysaccharides, etc. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, l'émulsion 25 double contient un virus de la famille des Baculoviridae de préférence un baculovirus et notamment le CpGV, avec du PGPR comme tensio-actif lipophile et du caséinate de sodium ou de la gomme arabique comme tensio-actifs hydrophiles ou des particules de SiO2. De manière avantageuse, ces émulsions doubles qui constituent un mode de réalisation préféré de l'invention contiennent en outre une huile solide (entre -4°C et +40°C) dans la phase huileuse. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, l'émulsion double contient un virus de la famille des Baculoviridae, de préférence un baculovirus et notamment le CpGV, avec du PGPR comme tensio-actif lipophile et une huile additionnée à la phase huileuse, ainsi que des particules de SiO2. Selon encore un autre mode de réalisation particulier de l'invention, l'émulsion double contient un virus de la famille des Baculoviridae, de préférence un baculovirus et notamment le CpGV, avec du PGPR comme tensio-actif lipophile et une huile solide (de préférence entre -4°C et +40°C) additionnée à la phase huileuse, ainsi que de la gomme arabique comme tensio-actifs hydrophiles.By "particle size" is meant here the average diameter of the elementary particles (primary particles, before any possible agglomeration), which can be measured by conventional techniques: electron microscopy, dynamic scattering of light if the diameter is less than one micrometer and by static scattering of light if the particles have a diameter greater than one micrometer. In practice, this value will often be given by the commercial supplier. Among the particles that may be present in the emulsions according to the invention, mention may in particular be made of metal oxide / metalloid particles such as SiO 2, FeO, TiO 2, or particles of polysaccharides such as starch, modified starch (for example, using octenyl succinate), and preferably SiO2 particles. Preferably, the mass quantity of particles, in particular for example particles of SiO 2, will be between 0.1 and 20% by weight relative to the total mass of the external aqueous phase, more preferably between 0.1 and 2%. (mass of the particles relative to the total mass of the external aqueous phase). In the case where the particles present in the emulsions according to the invention are functionalized, they may be especially in the form of surfactants, and in particular cationic surfactants, but also by nonionic surfactants, amines, acids, polysaccharides, etc. According to one particular embodiment of the invention, the double emulsion contains a virus of the Baculoviridae family, preferably a baculovirus and in particular CpGV, with PGPR as lipophilic surfactant and sodium caseinate or gum. arabic as hydrophilic surfactants or SiO2 particles. Advantageously, these double emulsions, which constitute a preferred embodiment of the invention, also contain a solid oil (between -4 ° C. and + 40 ° C.) in the oily phase. According to another particular embodiment of the invention, the double emulsion contains a virus of the Baculoviridae family, preferably a baculovirus and in particular CpGV, with PGPR as lipophilic surfactant and an oil added to the oily phase. as well as SiO2 particles. According to yet another particular embodiment of the invention, the double emulsion contains a virus of the Baculoviridae family, preferably a baculovirus and in particular CpGV, with PGPR as lipophilic surfactant and a solid oil (preferably between -4 ° C and + 40 ° C) added to the oily phase, as well as gum arabic as hydrophilic surfactants.

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, l'émulsion double contient un virus de la famille des Baculoviridae, de préférence un baculovirus et notamment le CpGV, avec du PGPR comme tensio-actif lipophile et une huile solide additionnée à la phase huileuse, ainsi que du caséinate de sodium comme tensio-actifs hydrophiles, à condition que l'huile solide possède une température de fusion inférieure à la température de dénaturation du caséinate de sodium (environ 70°C). En plus de l'entité biologique à encapsuler et des tensio-actifs hydrophile et lipophile décrits ci-dessus, les émulsions doubles selon la présente invention peuvent également contenir d'autres composés classiquement utilisés dans les émulsions, à condition que ceux-ci n'aient pas d'effet néfaste sur la stabilité des émulsions doubles préparées. En particulier, les émulsions doubles selon la présente invention peuvent également contenir un ou plusieurs agents permettant de protéger l'entité biologique à encapsuler des différentes conditions relatives à l'utilisation de l'émulsion, tant au niveau du stockage, de la dilution lors de l'application que de la persistance in situ. A titre d'exemples d'agents permettant de protéger l'entité biologique à encapsuler, on peut notamment citer les agents anti-UV, les agents anti- oxydants et des conservateurs. Selon un mode de réalisation préférée de la présente invention, les émulsions peuvent contenir une solution saline comme phase aqueuse interne et/ou externe. Dans le cas d'un sel monovalent comme NaCI, KCI, 10 ou KBr, la concentration en sel sera comprise entre 0,01 et 0,6 mol/L et de préférence entre 0,04 et 0,1 mol/l. Dans le cas d'un sel m-valent les concentrations seront divisées par m. Il est connu que l'addition de sel peut favoriser l'adsorption des tensioactifs ou des particules à l'interface en conduisant à une interface plus dense, il est également connu que 15 l'huile est moins soluble dans une phase aqueuse salée, réduisant ainsi le phénomène de mûrissement. Cependant le sel n'est pas nécessaire dans le cas de la présente invention. Il est également connu qu'une différence de concentration en sel entre les deux phases aqueuses a un effet déstabilisant (déséquilibre 20 osmotique). Selon la présente invention, il est préférable que ce déséquilibre reste inférieur à 0,3 mol/1 ce qui correspond à une différence de pression de 11 atm. Selon un mode de réalisation de la présente invention, les émulsions doubles peuvent également contenir au moins un agent anti-UV 25 liposoluble et/ou au moins un agent anti-oxydant liposoluble dans la phase huileuse. Parmi les agents anti-UV liposolubles qui peuvent être utilisés, on peut notamment citer l'octocrylène, l'acide para-aminobenzoïque ou PABA, l'éthylhexyl salicylate, l'ethylhexyl triazone, l'homosalate, 4- methylbenzylidene camphor, le polysilicone-15, le methylene bisbenzotriazolyl tetrannethylbutylphenol, l'ethylhexyl methoxycinnamate, la benzophenone-3, le 3-benzylidene camphor, le bis-ethylhexyloxyphenol methoxyphenyl triazine, le butyl methoxydibenzoylmethane, le diethylamino hydroxy benzoyl hexyl benzoate, le drometrizole trisiloxane, l'ethyhexyl dimethyl PABA. Parmi les agents anti-oxydants liposolubles qui peuvent être utilisés, on peut notamment citer la vitamine E, ascorbyl palmitate, hydroxyanisole butylé, hydroxytoluène butylé. Parmi les agents conservateurs qui peuvent être utilisés, on peut notamment citer l'acide citrique, l'acide ascorbique, le NaN3 et un biocide à base de 1,2-benzisothiazole-3(2H)-one, 2-méthy1-2H-isothiazole-3-one et d'un mélange de 5-chloro-2-méthy1-4-isothiazolin-3-one et 2-méthy1-4- isothiazolin-3-one et de 5-chloro-2-méthyl-2H-isothiazole-3-one et 2- methy1-2H-isothiazole-3-one (Nuosept KLD, fournisseur : ISP Biochema Schwaben GmbH). Avantageusement, les émulsions doubles selon la présente invention contiennent de l'octocrylène ou de l'éthylhexyl salicylate en tant qu'agent anti-UV et/ou de la vitamine E en tant qu'agent anti-oxydant, en plus de l'entité biologique à encapsuler et des tensio-actifs hydrophile et lipophile, et notamment choisis parmi ceux décrits ci-dessus, et en particulier ceux mentionnés comme préférés. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, les émulsions doubles contiennent un virus de la famille des Baculoviridae, et notamment le CpGV, avec du PGPR comme tensio-actif lipophile et du caséinate de sodium ou la gomme arabique comme tensio-actifs hydrophiles ou des particules de SiO2, ainsi que de l'octocrylène ou de l'éthylhexyl salicylate et/ou de la vitamine E. Encore plus avantageusement, ces émulsions doubles contiennent en outre une huile solide dans la phase huileuse, et en particulier une huile solide qui a une température de fusion inférieure à la température de dénaturation du caséinate de sodium lorsque celui-ci est présent dans l'émulsion en tant que tensio-actif hydrophile. Dans un deuxième aspect, la présente invention est relative à un procédé de préparation d'une émulsion double E/H/E stable contenant au moins une entité biologique hydrophile telle que définie ci-10 dessus, comprenant les étapes suivantes : - préparer une émulsion inverse eau-dans-huile (E/H) qui comprend ladite ou lesdites entité(s) biologique(s) hydrophile(s) présente(s) dans une première phase aqueuse et au moins un tensio-actif lipophile de poids moléculaire correspondant à une 15 gamme allant de 1000 à 1 million g/mol dans la phase huileuse, - préparer une émulsion double avec une deuxième phase aqueuse comprenant au moins un tensio-actif hydrophile de poids moléculaire correspondant à une gamme allant de 4000 à 1 million g/mol ou des particules d'une taille correspondant à une 20 gamme allant de 5 nm à 35 gnn. Dans le cadre de ce deuxième aspect, il est à noter que tous les modes de réalisation préférés et leurs combinaisons qui sont mentionnés ci-dessus concernant les constituants des émulsions doubles sont également des modes de réalisation et des combinaisons préférés 25 s'agissant du procédé de préparation de ces émulsions. En particulier, le procédé de préparation selon la présente invention vise à préparer une émulsion doubles E/H/E stable contenant un virus de la famille des baculovirus, et notamment le CpGV, avec du PGPR comme tensio-actif lipophile et du caséinate de sodium comme tensio-actif hydrophile. Lorsque l'émulsion double contient en outre un ou plusieurs agents permettant de protéger l'entité biologique à encapsuler tel(s) que mentionné(s) ci-dessus, et en particulier au moins un agent anti-UV liposoluble et/ou au moins un agent anti-oxydant liposoluble, celui-ci ou ceux-ci sont incorporés dans la phase huileuse, avant la fabrication de l'émulsion inverse. Le procédé de fabrication des émulsions E/H/E selon la présente invention se fait en deux étapes. La première est la préparation de l'émulsion inverse (E/H). Pour ce faire la phase aqueuse interne ou première phase aqueuse est introduite dans le milieu lipophile en maintenant une agitation constante, par exemple à l'aide d'un UltraTurrax® (Janke & Kunkel, IKA Labortechnik) équipé d'un axe S25KV25F opérant à une vitesse de rotation comprise entre 8 000 et 24 000 rotations par minutes (rpm) pendant 1 minute. Une fois l'émulsion inverse obtenue, la seconde étape du procédé de la présente invention est la préparation de l'émulsion double (E/H/E). Pour ce faire l'émulsion inverse (E/H) précédemment préparée peut par exemple être introduite dans la phase aqueuse externe ou deuxième phase aqueuse en maintenant une agitation constante à l'aide d'un Rayneri® (Turbotest 33/300P, VMI) opérant à une vitesse comprise entre 100 et 3300 rpm pendant 1 à 3 minutes. De préférence l'agitation à l'échelle industrielle est obtenue par un procédé de cuve agitée classique dans le domaine des émulsions et par des homogénéiseurs de type rotor/stator à l'échelle du laboratoire (Ultra- turrax, Rayneri, Heidoph, émulsificateur Couette distribué par Ademtech. De préférence l'agitation est maintenue quelques minutes entre 1 et 5rnin quelle que soit l'échelle de production après incorporation de l'eau dans l'émulsion inverse et après incorporation de l'émulsion inverse pour l'émulsion double. La concentration en sel, et notamment en chlorure de sodium, présente dans la phase aqueuse externe n'est pas une caractéristique limitative pour l'encapsulation de l'entité biologique dans les émulsions doubles de l'invention. Selon un troisième aspect, la présente invention concerne une composition phytosanitaire comprenant une émulsion double E/H/E telle que définie ci-dessus conformément à l'invention.According to one particular embodiment of the invention, the double emulsion contains a virus of the Baculoviridae family, preferably a baculovirus and in particular CpGV, with PGPR as lipophilic surfactant and a solid oil added to the oily phase. as well as sodium caseinate as hydrophilic surfactants, provided that the solid oil has a melting temperature below the denaturation temperature of sodium caseinate (about 70 ° C). In addition to the biological entity to be encapsulated and the hydrophilic and lipophilic surfactants described above, the double emulsions according to the present invention may also contain other compounds conventionally used in emulsions, provided that they do not have no detrimental effect on the stability of the prepared double emulsions. In particular, the double emulsions according to the present invention may also contain one or more agents making it possible to protect the biological entity to encapsulate various conditions relating to the use of the emulsion, both in terms of storage, dilution during the application only of persistence in situ. As examples of agents for protecting the biological entity to be encapsulated, there may be mentioned anti-UV agents, antioxidants and preservatives. According to a preferred embodiment of the present invention, the emulsions may contain a saline solution as internal and / or external aqueous phase. In the case of a monovalent salt such as NaCl, KCl, or KBr, the salt concentration will be between 0.01 and 0.6 mol / l and preferably between 0.04 and 0.1 mol / l. In the case of a salt, the concentrations will be divided by m. It is known that addition of salt can promote the adsorption of surfactants or particles at the interface leading to a denser interface, it is also known that the oil is less soluble in an aqueous saline phase, reducing thus the phenomenon of ripening. However, salt is not necessary in the case of the present invention. It is also known that a difference in salt concentration between the two aqueous phases has a destabilizing effect (osmotic imbalance). According to the present invention, it is preferable that this imbalance remains below 0.3 mol / l, which corresponds to a pressure difference of 11 atm. According to one embodiment of the present invention, the double emulsions may also contain at least one liposoluble anti-UV agent and / or at least one liposoluble anti-oxidant agent in the oily phase. Among the liposoluble anti-UV agents that may be used, there may be mentioned octocrylene, para-aminobenzoic acid or PABA, ethylhexyl salicylate, ethylhexyl triazone, homosalate, 4-methylbenzylidene camphor, polysilicone -15, methylene bisbenzotriazolyl tetranyl butylphenol, ethylhexyl methoxycinnamate, benzophenone-3, 3-benzylidene camphor, bis-ethylhexyloxyphenol methoxyphenyl triazine, butyl methoxydibenzoylmethane, diethylamino hydroxy benzoyl hexyl benzoate, drometrizole trisiloxane, ethyhexyl dimethyl PABA. Among the liposoluble anti-oxidizing agents that may be used, there may be mentioned vitamin E, ascorbyl palmitate, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene. Among the preservatives that may be used, mention may be made of citric acid, ascorbic acid, NaN 3 and a biocide based on 1,2-benzisothiazole-3 (2H) -one, 2-methyl-2H- isothiazol-3-one and a mixture of 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one and 2-methyl-4-isothiazolin-3-one and 5-chloro-2-methyl-2H- isothiazol-3-one and 2-methyl-2H-isothiazol-3-one (Nuosept KLD, supplier: ISP Biochema Schwaben GmbH). Advantageously, the double emulsions according to the present invention contain octocrylene or ethylhexyl salicylate as anti-UV agent and / or vitamin E as an antioxidant, in addition to the entity biological composition to be encapsulated and hydrophilic and lipophilic surfactants, and especially chosen from those described above, and in particular those mentioned as preferred. According to a particularly advantageous embodiment of the present invention, the double emulsions contain a virus of the Baculoviridae family, and in particular CpGV, with PGPR as lipophilic surfactant and sodium caseinate or gum arabic as surfactants. hydrophilic or SiO2 particles, as well as octocrylene or ethylhexyl salicylate and / or vitamin E. More advantageously, these double emulsions further contain a solid oil in the oily phase, and in particular an oil solid which has a melting temperature below the denaturation temperature of sodium caseinate when it is present in the emulsion as a hydrophilic surfactant. In a second aspect, the present invention relates to a process for preparing a stable double W / O / W emulsion containing at least one hydrophilic biological entity as defined above, comprising the following steps: - preparing an emulsion reverse water-in-oil (W / O) which comprises said hydrophilic biological entity (s) present in a first aqueous phase and at least one lipophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range of from 1000 to 1 million g / mol in the oily phase, - preparing a double emulsion with a second aqueous phase comprising at least one hydrophilic surfactant with a molecular weight corresponding to a range from 4000 to 1 million g / mol or particles of a size corresponding to a range from 5 nm to 35 gnn. In the context of this second aspect, it should be noted that all of the preferred embodiments and combinations thereof mentioned above with respect to the constituents of the double emulsions are also preferred embodiments and combinations with respect to the process. of preparing these emulsions. In particular, the preparation method according to the present invention aims to prepare a stable double E / H / E emulsion containing a virus of the baculovirus family, and in particular CpGV, with PGPR as lipophilic surfactant and sodium caseinate. as hydrophilic surfactant. When the double emulsion additionally contains one or more agents which make it possible to protect the biological entity to be encapsulated as mentioned above, and in particular at least one liposoluble anti-UV agent and / or at least one a liposoluble anti-oxidant agent, the latter or they are incorporated into the oily phase, before the manufacture of the inverse emulsion. The process for manufacturing the W / O / W emulsions according to the present invention is in two steps. The first is the preparation of the inverse emulsion (W / O). To do this, the internal aqueous phase or first aqueous phase is introduced into the lipophilic medium while maintaining constant agitation, for example using an UltraTurrax® (Janke & Kunkel, IKA Labortechnik) equipped with an axis S25KV25F operating at a rotation speed of between 8,000 and 24,000 rotations per minute (rpm) for 1 minute. Once the inverse emulsion has been obtained, the second step of the process of the present invention is the preparation of the double emulsion (W / O / W). To do this, the previously prepared inverse emulsion (W / O) may, for example, be introduced into the external aqueous phase or the second aqueous phase while maintaining constant stirring using a Rayneri® (Turbotest 33 / 300P, VMI). operating at a speed between 100 and 3300 rpm for 1 to 3 minutes. Preferably the stirring on an industrial scale is obtained by a stirred tank process conventional in the field of emulsions and by homogenizers of the rotor / stator type at laboratory scale (Ultra-turrax, Rayneri, Heidoph, emulsifier Couette The agitation is preferably maintained for a few minutes between 1 and 5 min in any scale of production after incorporation of the water in the inverse emulsion and after incorporation of the inverse emulsion for the double emulsion. The concentration of salt, and in particular sodium chloride, present in the external aqueous phase is not a limiting characteristic for the encapsulation of the biological entity in the double emulsions of the invention. The invention relates to a phytosanitary composition comprising a double W / O / W emulsion as defined above according to the invention.

Avantageusement la composition phytosanitaire selon la présente invention est une composition insecticide, fongicide, herbicide, et de préférence insecticide. Un exemple de composition phytosanitaire particulièrement avantageux est constitué de l'émulsion double selon l'invention en tant qu'ingrédient principal, voire unique ; cet ingrédient pouvant être simplement dilué dans de l'eau notamment, et en particulier dans une gamme de dilution allant de 100 à 3000, préférentiellement de 400 à 2000. Dans le cadre de ce troisième aspect, il est également entendu que tous les modes de réalisation préférés et leurs combinaisons qui sont mentionnés ci-dessus concernant les constituants des émulsions doubles et leur procédé de préparation sont également des modes de réalisation et des combinaisons préférés s'agissant des compositions phytosanitaires contenant lesdites émulsions et de leur procédé de préparation.Advantageously, the phytosanitary composition according to the present invention is an insecticidal, fungicidal, herbicidal and preferably insecticidal composition. An example of a particularly advantageous phytosanitary composition consists of the double emulsion according to the invention as a main ingredient, or even a single ingredient; this ingredient can be simply diluted in water in particular, and in particular in a dilution range from 100 to 3000, preferably 400 to 2000. In the context of this third aspect, it is also understood that all modes of Preferred embodiments and combinations thereof mentioned above relating to the components of the double emulsions and their method of preparation are also preferred embodiments and combinations with respect to the phytosanitary compositions containing said emulsions and their method of preparation.

Selon un autre aspect, la présente invention concerne également l'utilisation de l'émulsion double ou d'une composition contenant une telle émulsion selon l'invention comme décrites ci-dessus, en tant que composant phytosanitaire, seul ou mélangé avec une autre composition dite « composition receveuse », notamment avec une autre composition phytosanitaire. Cette « composition receveuse » ne devra bien évidemment pas contenir de composés qui pourraient affecter l'activité biologique de l'émulsion double selon l'invention ou de la composition la contenant. En particulier, cette « composition receveuse » est une composition aqueuse. Les émulsions doubles ou les compositions phytosanitaires les contenant selon l'invention peuvent être utilisées directement comme composition insecticide après dilution dans l'eau du robinet, l'eau d'un puits ou l'eau issue d'un cours d'eau comme décrit ci-dessus, dans des gammes de dilution allant de 100 à 3000, préférentiellement de 400 à 2000, de manière encore plus préférée d'environ 1000. De manière préférée, les émulsions doubles ou les compositions phytosanitaires les contenant seront utilisés en mélange avec une autre composition, et notamment une composition fongicide, insecticide ou acaricide, qu'elle soit chimique ou biologique. Enfin, selon un dernier aspect, la présente invention a également pour objet un procédé de traitement contre les espèces nuisibles ou ravageurs, comprenant l'application de l'émulsion double H/E/H ou d'une composition la contenant, telles que définies ci-dessus conformément à l'invention. Les émulsions doubles ou les compositions les contenant selon l'invention sont de préférence utilisées dans un procédé de traitement de la végétation en zones agricoles ou non agricoles, de manière préférentielle en arboriculture. Le procédé de traitement de l'invention est destiné à lutter contre les espèces nuisibles ou ravageurs tels que les invertébrés, les plantes, les champignons, de préférence les invertébrés et en particulier les insectes.According to another aspect, the present invention also relates to the use of the double emulsion or a composition containing such an emulsion according to the invention as described above, as a phytosanitary component, alone or mixed with another composition. so-called "recipient composition", especially with another phytosanitary composition. This "recipient composition" should obviously not contain compounds that could affect the biological activity of the double emulsion according to the invention or the composition containing it. In particular, this "recipient composition" is an aqueous composition. The double emulsions or the phytosanitary compositions containing them according to the invention can be used directly as an insecticidal composition after dilution in tap water, well water or stream water as described. above, in dilution ranges from 100 to 3000, preferably 400 to 2000, even more preferably about 1000. Preferably, the double emulsions or the phytosanitary compositions containing them will be used in a mixture with a other composition, and in particular a fungicidal, insecticidal or acaricidal composition, whether chemical or biological. Finally, according to a last aspect, the subject of the present invention is also a method of treatment against harmful or pest species, comprising the application of the double O / W / H emulsion or of a composition containing it, as defined above according to the invention. The double emulsions or compositions containing them according to the invention are preferably used in a method of treating vegetation in agricultural or non-agricultural zones, preferably in arboriculture. The treatment method of the invention is intended to fight against harmful or pest species such as invertebrates, plants, fungi, preferably invertebrates and in particular insects.

Les espèces nuisibles correspondent à des végétations cibles qui feront l'objet du procédé de traitement selon l'invention. Les espèces nuisibles qui font l'objet du procédé de traitement selon l'invention correspondent donc à la cible de l'entité biologique encapsulée, c'est-à- dire des micro-organismes pathogènes présents dans les émulsions qui seront utilisées. Dans le cadre du procédé de traitement selon la présente invention, l'émulsion double ou la composition la contenant peuvent être appliquées par n'importe quelle méthode classique dans le domaine, comme par exemple par trempage ou par épandage, notamment par pulvérisation, projection, aspersion, dispersion grâce à des atomiseurs ou pulvérisateurs utilisés par voie terrestre ou par voie aérienne. De préférence, l'émulsion double ou la composition se présente sous une forme concentrée qui sera ensuite diluée par l'utilisation, avantageusement dans de l'eau, au moment ou juste avant l'application sur le terrain, de manière préférentielle selon les pratiques agricoles en vigueur. S'agissant de l'application proprement dite, l'émulsion ou la composition la contenant est appliquée à raison de 0,5 à 4 litres par hectare de terrain, de préférence à la dose de 1 L/ha. Dans le cadre de l'utilisation des émulsions doubles ou des compositions les contenants telles que décrites ci-dessus, en tant que composant phytosanitaire ou bien dans le cadre d'un procédé de traitement tels que définis ci-dessus, il est à nouveau entendu que tous les modes de réalisation préférés et leurs combinaisons qui sont mentionnés dans la présente demande concernant les émulsions doubles, les compositions les contenant et leur procédé de préparation sont également des modes de réalisation et des combinaisons préférés s'agissant de leurs utilisations phytosanitaires selon les deux derniers aspect de l'invention tels que mentionnés ci-dessus. Dans le cadre des deux derniers aspects de l'invention, à savoir l'utilisation des émulsions doubles de l'invention en tant que composant phytosanitaire et le procédé de traitement utilisant ces émulsions, on utilisera de préférence des émulsions contenant une huile solide (de préférence entre -4°C et +40°C) dans la phase huileuse, et dans le cas où le caséinate de sodium est présent en tant que TA hydrophile, une huile solide qui a une température de fusion inférieure à la température de dénaturation du caséinate de sodium. Dans les figures annexées : - la Figure la représente les domaines de formulation d'émulsions doubles, x est la proportion d'eau dans l'émulsion et y est la quantité de PGPR non adsorbé présent dans l'huile. - la figure lb est une photo de microscopie optique pour une émulsion double obtenue comme décrit à l'exemple 1 avec x = 1% et y = 40%. - la Figure 2a représente les domaines de formulation d'émulsions doubles, x est la proportion d'eau dans l'émulsion et y est la quantité de PGPR non adsorbé présent dans l'huile. - la figure 2b est une photo de microscopie optique pour une émulsion double obtenue comme décrit à l'exemple 2 avec x = 1% et y = 40%.The harmful species correspond to target vegetations which will be the subject of the treatment method according to the invention. The harmful species that are the subject of the treatment method according to the invention therefore correspond to the target of the encapsulated biological entity, that is to say pathogenic microorganisms present in the emulsions that will be used. In the context of the treatment process according to the present invention, the double emulsion or the composition containing it may be applied by any conventional method in the field, for example by dipping or by spreading, in particular by spraying, spraying, spraying, dispersal using atomizers or sprayers used by land or by air. Preferably, the double emulsion or the composition is in a concentrated form which will then be diluted by use, advantageously in water, at or just before the application in the field, preferably according to the practices. in force. With regard to the actual application, the emulsion or the composition containing it is applied at a rate of 0.5 to 4 liters per hectare of soil, preferably at a dose of 1 L / ha. In the context of the use of the double emulsions or the compositions of the containers as described above, as a phytosanitary component or as part of a treatment process as defined above, it is again heard all of the preferred embodiments and their combinations which are mentioned in the present application with regard to double emulsions, the compositions containing them and their method of preparation are also preferred embodiments and combinations with respect to their phytosanitary uses according to last two aspects of the invention as mentioned above. In the context of the last two aspects of the invention, namely the use of the dual emulsions of the invention as a phytosanitary component and the treatment method using these emulsions, emulsions containing a solid oil (from preferably between -4 ° C and + 40 ° C) in the oily phase, and in the case where the sodium caseinate is present as hydrophilic TA, a solid oil which has a melting temperature below the denaturation temperature of the sodium caseinate. In the accompanying figures: - Figure la represents the double emulsion formulation domains, x is the proportion of water in the emulsion and y is the amount of unadsorbed PGPR present in the oil. FIG. 1b is a light microscopy photograph for a double emulsion obtained as described in Example 1 with x = 1% and y = 40%. Figure 2a shows the double emulsion formulation domains, x is the proportion of water in the emulsion and y is the amount of unadsorbed PGPR present in the oil. FIG. 2b is a light microscopy photo for a double emulsion obtained as described in example 2 with x = 1% and y = 40%.

EXEMPLES Les exemples expérimentaux suivants illustrent mais ne limitent pas la portée de l'invention. Le travail expérimental ci-après a notamment permis de mettre en oeuvre la stabilité des émulsions selon l'invention.EXAMPLES The following experimental examples illustrate but do not limit the scope of the invention. The experimental work below has notably made it possible to implement the stability of the emulsions according to the invention.

Pour les exemples suivants, la fraction massique d'eau ou suspension virale/ par rapport à la masse de milieu lipophile sera notée , = Meau/( ci lipophile), de plus la fraction massique d'émulsion inverse par rapport à la masse totale d'émulsion double sera notée (Pd = M'émulsion inverse /mtotale Dans tous les exemples suivants, la suspension virale est obtenue par inoculation de larves de Cydia pomonella avec une concentration de 1,6.10E7 GV dans 100 ml d'eau distillée d'étalon viral CpGV-M (isolat mexicain) en collection à Natural Plant Protection et fournie par l'INRA (Institut National pour la Recherche Agronomique) dans le cadre d'un contrat de licence en date du 20/04/1994. Une fois contaminées, les larves sont récoltées 5 jours après inoculation du virus puis broyées dans deux volumes d'eau distillé stérile 5 jours plus tard. Quatre filtrations successives sont ensuite réalisées sur des membranes de filtration de porosité 1000 pm, 500 pm, 250 pm et 100 pm. Le filtrat est centrifugé dans de l'eau distillée stérile à 1250 g pendant 5 minutes et seul le surnageant est conservé. Cette étape est renouvelée une fois. Le surnageant subit une nouvelle centrifugation à 16 000 g pendant 30 minutes. Le culot de virus est conservé puis mis en suspension dans de l'eau distillée stérile. Deux filtrations successives, sur Büchner à 5 pm, 3,2 pm, puis une troisième sur filtre seringue acétate à 0,8 pm terminent ce procédé de préparation avant comptage par microscopie à fond noir afin de déterminer la concentration finale en CpGV-M de la suspension.For the following examples, the mass fraction of water or virus suspension / with respect to the weight of lipophilic medium will be noted, = M / lipophilic, plus the mass fraction of the inverse emulsion with respect to the total mass of Double emulsion will be noted (Pd = Inverse emulsion / mtotal In all of the following examples, the viral suspension is obtained by inoculation of larvae of Cydia pomonella with a concentration of 1.6 × 10E7 GV in 100 ml of distilled water. viral standard CpGV-M (Mexican isolate) in collection at Natural Plant Protection and provided by the INRA (National Institute for Agronomic Research) under a license agreement dated April 20, 1994. Once contaminated the larvae are harvested 5 days after virus inoculation and then ground in two volumes of sterile distilled water 5 days later Four successive filtrations are then carried out on filtration membranes of porosity 1000 μm, 500 μm, 250 μm and 100 μm. . The The filtrate is centrifuged in sterile distilled water at 1250 g for 5 minutes and only the supernatant is retained. This step is renewed once. The supernatant is re-centrifuged at 16,000 g for 30 minutes. The virus pellet is stored and then suspended in sterile distilled water. Two successive filtrations, on Buchner at 5 μm, 3.2 μm, and then a third on a 0.8 μm acetate syringe filter, complete this process of preparation before counting by dark field microscopy in order to determine the final CpGV-M concentration. suspension.

Exemple 1 : Emulsions doubles contenant du caséinate de sodium Dans une première étape une suspension aqueuse de CpGV est préparée selon le procédé décrit en préambule et diluée dans de l'eau distillée de manière à obtenir une suspension à une concentration de 1013 GV/L dans l'eau. Dans une deuxième étape 70g d'une émulsion inverse sont préparés en incorporant 28g, 14g, 7g ou 3,5g (D1 =40%, 20%, 10% ou 5% massique) de la suspension dans l'huile de tournesol achetée chez Sigma Aldrich et contenant des quantités de PGPR fourni par Palsgaard variant de 1,64 à 6,28% en masse par rapport à la phase lipophile. Cette émulsion inverse (huile-dans-eau (distillé, sans sel) est agitée à l'aide d'un homogénéiseur Ultra-Turrax® de la marque IKA équipé d'un 10 axe S25KV25F opérant à 24 000 rpm pendant 1 minute. Le PGPR se répartit entre la surface des gouttes (1,28°/0 en masse par rapport à la phase lipophile quelle que soit la quantité initiale de PGPR) et l'huile de tournesol (entre 0,36% et 5% en masse par rapport à la phase lipophile). Cette émulsion est ensuite diluée avec de l'huile de tournesol contenant 15 du PGPR correspondant à la fraction dans l'huile pour la maintenir constante). Dans une troisième étape, l'émulsion inverse ainsi obtenue est incorporée dans 30 g de phase aqueuse externe. La fraction d'émulsion inverse par rapport à l'émulsion totale est de (Dd=70%. La phase aqueuse 20 externe contient 12% de caséinate de sodium achetée chez Sigma Aldrich (C8654). L'émulsion double obtenue est cisaillée à l'aide d'un émulsificateur de Couette commercialisé par la société Ademtech à l'aide d'un rotor/stator espacés de 200pm à différentes vitesses de rotation. La vitesse a été choisie afin de maintenir la taille des globules constante et 25 indépendante de D1. Le taux de cisaillement est précisé dans le tableau 1 dans lequel est listée la composition des différentes émulsions doubles formulées. Les compositions sont données pour 100g de l'émulsion double.EXAMPLE 1 Double Emulsions Containing Sodium Caseinate In a first step, an aqueous suspension of CpGV is prepared according to the method described in the preamble and diluted in distilled water so as to obtain a suspension at a concentration of 1013 GV / L in the water. In a second step 70 g of an inverse emulsion are prepared by incorporating 28 g, 14 g, 7 g or 3.5 g (D 1 = 40%, 20%, 10% or 5% by weight) of the suspension into sunflower oil purchased from Sigma Aldrich and containing amounts of PGPR provided by Palsgaard ranging from 1.64 to 6.28% by weight relative to the lipophilic phase. This inverse oil-in-water emulsion (distilled, without salt) is stirred using an IKA Ultra-Turrax® homogenizer equipped with an S25KV25F axis operating at 24,000 rpm for 1 minute. PGPR is distributed between the surface of the drops (1.28 ° / 0 by weight relative to the lipophilic phase irrespective of the initial quantity of PGPR) and sunflower oil (between 0.36% and 5% by mass This emulsion is then diluted with sunflower oil containing PGPR corresponding to the fraction in the oil to keep it constant). In a third step, the inverse emulsion thus obtained is incorporated in 30 g of external aqueous phase. The inverse emulsion fraction with respect to the total emulsion is (Dd = 70%) The external aqueous phase contains 12% of sodium caseinate purchased from Sigma Aldrich (C8654) The double emulsion obtained is sheared off Using a Couette emulsifier marketed by Ademtech using a rotor / stator spaced 200pm at different rotational speeds, the rate was chosen to keep the cell size constant and 25 independent of D1. The shear rate is specified in Table 1 in which the composition of the various double emulsions formulated is listed The compositions are given per 100 g of the double emulsion.

L'ensemble de ces émulsions permet d'étudier l'influence de la fraction en suspension virale (Di et la quantité de PGPR sur la stabilité des émulsions. Tableau 1 Phase aqueuse interne Emulsion inverse répartition du PGPR Phase aqueuse externe Agitation 1), Suspension virale (g) PGPR (g) huile (g) dans l'huile adsorbé à caséinate de sodium eau (g) total s-1 l'interface (g) externe (g) 3.5 0.78 65.72 0.24 0.54 3.6 26.4 30 523 5 3.5 1.20 65.30 0.67 0.54 3.6 26.4 30 523 5 3.5 2.20 64.30 1.66 0.54 3.6 26.4 30 523 5 3.5 3.86 62.64 3.33 0.54 3.6 26.4 30 523 7 0.76 62.24 0.23 0.54 3.6 26.4 30 1050 10 7 1.17 61.83 0.63 0.54 3.6 26.4 30 1050 10 7 2.11 60.89 1.58 0.54 3.6 26.4 30 1050 10 7 3.69 59.31 3.15 0.54 3.6 26.4 30 1050 20 14 0.74 55.26 0.20 0.54 3.6 26.4 30 3140 20 14 1.10 54.90 0.56 0.54 3.6 26.4 30 3140 20 14 1.94 54.06 1.40 0.54 3.6 26.4 30 3140 20 14 3.34 52.66 2.80 0.54 3.6 26.4 30 3140 40 28 0.69 41.31 0.15 0.54 3.6 26.4 30 5250 40 28 0.96 41.04 0.42 0.54 3.6 26.4 30 5250 40 28 1.59 40.41 1.05 0.54 3.6 26.4 30 5250 40 28 2.64 39.36 2.10 0.54 3.6 26.4 30 4200 5 Dans tous les cas le taux d'encapsulation du virus initial déterminé par un comptage en microscopie optique est de 90%. Sur l'ensemble de 10 ces émulsions, l'encapsulation, le flux d'eau et la taille des globules a été quantifiés à intervalles de temps réguliers entre la fabrication et 35 jours. Les résultats sont reportés sur la figure la et lb.All these emulsions make it possible to study the influence of the viral suspension fraction (Di and the amount of PGPR on the stability of the emulsions) Table 1 Internal aqueous phase Reverse emulsion PGPR distribution External aqueous phase Agitation 1), Suspension viral (g) PGPR (g) oil (g) in sodium caseinate adsorbed oil water (g) total s-1 interface (g) external (g) 3.5 0.78 65.72 0.24 0.54 3.6 26.4 30 523 5 3.5 1.20 65.30 0.67 0.54 3.6 26.4 30 523 5 3.5 2.20 64.30 1.66 0.54 3.6 26.4 30 523 5 3.5 3.86 62.64 3.33 0.54 3.6 26.4 30 523 7 0.76 62.24 0.23 0.54 3.6 26.4 30 1050 10 7 1.17 61.83 0.63 0.54 3.6 26.4 30 1050 10 7 2.11 60.89 1.58 0.54 3.6 26.4 30 1050 10 7 3.69 59.31 3.15 0.54 3.6 26.4 30 1050 20 14 0.74 55.26 0.20 0.54 3.6 26.4 30 3140 20 14 1.10 54.90 0.56 0.54 3.6 26.4 30 3140 20 14 1.94 54.06 1.40 0.54 3.6 26.4 30 3140 20 14 3.34 52.66 2.80 0.54 3.6 26.4 30 3140 40 28 0.69 41.31 0.15 0.54 3.6 26.4 30 5250 40 28 0.96 41.04 0.42 0.54 3.6 26.4 30 5250 4 0 28 1.59 40.41 1.05 0.54 3.6 26.4 30 5250 40 28 2.64 39.36 2.10 0.54 3.6 26.4 30 4200 5 In all cases the degree of encapsulation of the initial virus determined by an optical microscopy count is 90%. Over all of these emulsions, encapsulation, water flow and cell size were quantified at regular time intervals between manufacture and 35 days. The results are reported in Figure la and lb.

Dans la zone 1 (losanges) les émulsions ne sont pas stables au sens de l'invention puisque l'encapsulation du virus a chuté de moitié au bout de 35 jours. Les zones 2 et 3 (carrés et triangles) sont des zones intéressantes puisque les émulsions sont stables. Dans la zone 2, aucun flux et aucune perte d'encapsulation n'ont été observés. Dans la zone 3, l'encapsulation est préservée et un flux de l'eau interne a pu être mis en évidence. Selon la fraction en phase aqueuse interne ce flux varie et abaisse la fraction en globule de 1,75 à 14%.In zone 1 (diamonds) the emulsions are not stable within the meaning of the invention since the encapsulation of the virus has dropped by half after 35 days. Zones 2 and 3 (squares and triangles) are interesting areas since the emulsions are stable. In zone 2, no flux and no loss of encapsulation were observed. In zone 3, the encapsulation is preserved and an internal water flow could be highlighted. Depending on the internal aqueous phase fraction, this flux varies and lowers the fraction in the cell from 1.75 to 14%.

De cet exemple il est possible de conclure qu'une quantité de PGPR dans l'huile (non adsorbé) supérieure ou égale à 0,36% est avantageuse indépendamment de la fraction 14. Exemple 2 : Emulsions doubles contenant de la gomme arabique Dans une première étape une suspension aqueuse de CpGV est préparée selon le procédé décrit en préambule et diluée dans de l'eau distillée de manière à obtenir une suspension à une concentration de 1013 GV/L dans l'eau distillée. Dans une deuxième étape 70g d'une émulsion inverse sont préparés en incorporant 28g, 14g, 7g ou 3,5g ((DI =40%, 20%, 10% ou 5% massique) de la suspension dans l'huile de tournesol achetée chez Sigma Aldrich et contenant des quantités de PGPR fourni par Palsgaard variant de 1,64 à 6,28% en masse par rapport à la phase lipophile. Cette émulsion inverse est agitée à l'aide d'un homogénéiseur Ultra- Turrax® de la marque IKA équipé d'un axe S25KV25F opérant à 24 000 rpm pendant lminute. Le PGPR se répartit entre la surface des gouttes (1,28% en masse par rapport à la phase lipophile quelle que soit la quantité initiale de PGPR) et l'huile de tournesol (entre 0,36% et 5% en masse par rapport à la phase lipophile). Cette émulsion est ensuite diluée avec de l'huile de tournesol contenant du PGPR correspondant à la fraction dans l'huile pour la maintenir constante. Dans une troisième étape, l'émulsion inverse ainsi obtenue a été incorporée dans 30 g de phase aqueuse externe. La fraction d'émulsion inverse par rapport à l'émulsion totale est de Od=70°/0. La phase aqueuse externe contient 20% de gomme arabique (soit 6 g de gomme arabique et 24g d'eau) fournie par CNI. L'émulsion double obtenue est cisaillée à l'aide d'un émulsificateur de Couette commercialisé par la société Ademtech à l'aide d'un rotor/stator espacés de 100pm à une vitesse de rotation de 12 600 s-1 quelle que soit la composition. Les compositions sont données pour 100g de l'émulsion double. Le taux de cisaillement est de 12600s-1 quelle que soit la composition. Dans le tableau 2 est listée la composition des différentes 15 émulsions doubles formulées. Les compositions sont données pour 100g de l'émulsion double. Tableau 2 Phase Emulsion inverse répartition du PGPR Phase aqueuse externe aqueuse interne 0, Suspension PGPR huile (g) dans adsorbé Gomme Eau (g) total virale (g) (g) l'huile à arabique externe l'interface (g) 5 3,5 0,78 65,72 0,24 0,54 6 24 30 5 3,5 1,20 65,30 0,67 0,54 6 24 30 5 3,5 2,20 64,30 1,66 0,54 6 24 30 5 3,5 3,86 62,64 3,33 0,54 6 24 30 10 7 0,76 62,24 0,23 0,54 6 24 30 10 7 1,17 61,83 0,63 0,54 6 24 30 10 7 2,11 60,89 1,58 0,54 6 24 30 10 7 3,69 59,31 3,15 0,54 6 24 30 20 14 0,74 55,26 0,20 0,54 6 24 30 20 14 1,10 54,90 0,56 0,54 6 24 30 20 14 1,94 54,06 1,40 0,54 6 24 30 20 14 3,34 52,66 2,80 0,54 6 24 30 40 28 0,69 41,31 0,15 0,54 6 24 30 40 28 0,96 41,04 0,42 0,54 6 24 30 40 28 1,59 40,41 1,05 0,54 6 24 30 40 28 2,64 39,36 2,10 0,54 6 24 30 Dans tous les cas le taux d'encapsulation du virus initial déterminé par un comptage en microscopie optique est de 90%. Sur l'ensemble de ces émulsions, l'encapsulation, le flux d'eau et la taille des globules a été quantifiés à intervalles de temps réguliers entre la fabrication et 35 jours. Les résultats sont reportés sur la figure 2a et 2b. Dans la zone 1 (triangles) les émulsions sont stables au sens de l'invention puisque l'encapsulation n'a pas chuté au bout de 35 jours. De plus, aucun flux n'a pu être mis en évidence. Les zones 2 et 3 (losanges et carrés) sont des zones où les émulsions ne sont pas stables au sens de l'invention. Dans la zone 2, une inversion de l'émulsion se produit au cours du temps entraînant l'apparition et la coexistence d'émulsions inverse, directe et double. Dans la zone 3, l'émulsion n'est pas réalisable.From this example it is possible to conclude that an amount of PGPR in the oil (not adsorbed) greater than or equal to 0.36% is advantageous independently of the fraction 14. EXAMPLE 2 Double emulsions containing gum arabic In a first step an aqueous suspension of CpGV is prepared according to the method described in the preamble and diluted in distilled water so as to obtain a suspension at a concentration of 1013 GV / L in distilled water. In a second step, 70 g of an inverse emulsion are prepared by incorporating 28 g, 14 g, 7 g or 3.5 g ((DI = 40%, 20%, 10% or 5% by weight) of the suspension into the purchased sunflower oil. in Sigma Aldrich and containing amounts of PGPR supplied by Palsgaard ranging from 1.64 to 6.28% by weight relative to the lipophilic phase.This inverse emulsion is stirred using an Ultra-Turrax® homogenizer of the IKA brand equipped with an axis S25KV25F operating at 24 000 rpm during the minute.The PGPR is divided between the surface of the drops (1.28% by weight relative to the lipophilic phase irrespective of the initial quantity of PGPR) and the sunflower oil (between 0.36% and 5% by weight relative to the lipophilic phase) This emulsion is then diluted with sunflower oil containing PGPR corresponding to the fraction in the oil to keep it constant. In a third step, the inverse emulsion thus obtained was incorporated in 30 g of aqueous phase. The inverse emulsion fraction with respect to the total emulsion is Od = 70 ° / 0. The external aqueous phase contains 20% gum arabic (ie 6 g of gum arabic and 24 g of water) supplied by CNI. The double emulsion obtained is sheared using a Couette emulsifier marketed by the company Ademtech using a rotor / stator spaced at 100 μm at a rotation speed of 12,600 s -1 regardless of the composition. The compositions are given per 100 g of the double emulsion. The shear rate is 12600s-1 regardless of the composition. In Table 2 is listed the composition of the various formulated double emulsions. The compositions are given per 100 g of the double emulsion. Table 2 Phase Inverse Emulsion Distribution of PGPR Inner aqueous external aqueous phase 0, PGPR oil suspension (g) in adsorbed Gum Water (g) viral total (g) (g) arabic oil external interface (g) 5 3 , 0.78 65.72 0.24 0.54 6 24 30 5 3.5 1.20 65.30 0.67 0.54 6 24 30 5 3.5 2.20 64.30 1.66 0 , 54 6 24 30 5 3.5 3.86 62.64 3.33 0.54 6 24 30 10 7 0.76 62.24 0.23 0.54 6 24 30 10 7 1.17 61.83 0 , 63 0.54 6 24 30 10 7 2.11 60.89 1.58 0.54 6 24 30 10 7 3.69 59.31 3.15 0.54 6 24 30 20 14 0.74 55.26 0.20 0.54 6 24 30 20 14 1.10 54.90 0.56 0.54 6 24 30 20 14 1.94 54.06 1.40 0.54 6 24 30 20 14 3.34 52 66 2.80 0.54 6 24 30 40 28 0.69 41.31 0.15 0.54 6 24 30 40 28 0.96 41.04 0.42 0.54 6 24 30 40 28 1.59 40 , 41 1.05 0.54 6 24 30 40 28 2.64 39.36 2.10 0.54 6 24 30 In all cases the degree of encapsulation of the initial virus determined by an optical microscopy count is 90 %. Of all these emulsions, encapsulation, water flow and cell size were quantified at regular time intervals between manufacture and 35 days. The results are reported in Figure 2a and 2b. In zone 1 (triangles) the emulsions are stable within the meaning of the invention since the encapsulation has not dropped after 35 days. Moreover, no flow could be highlighted. Zones 2 and 3 (diamonds and squares) are areas where the emulsions are not stable within the meaning of the invention. In zone 2, an inversion of the emulsion occurs over time resulting in the appearance and coexistence of inverse, direct and double emulsions. In zone 3, the emulsion is not feasible.

De cet exemple il est possible de conclure que pour une quantité fixée de PGPR un accroissement de la fraction massique en émulsion inverse a un effet stabilisant. Exemple 3 : Emulsions doubles avec co-encaspulation d'agents 20 anti-UV ou anti-oxydants Dans une première étape une suspension aqueuse de CpGV est préparée selon le procédé décrit en préambule et diluée dans de l'eau distillée de manière à obtenir une suspension à une concentration de 1013 GV/L dans l'eau.From this example it is possible to conclude that for a fixed amount of PGPR an increase of the mass fraction in inverse emulsion has a stabilizing effect. EXAMPLE 3 Double emulsions with co-encapsulation of anti-UV or antioxidant agents In a first step, an aqueous suspension of CpGV is prepared according to the method described in the preamble and diluted in distilled water so as to obtain a suspension at a concentration of 1013 GV / L in water.

Dans une deuxième étape 70g d'une émulsion inverse sont préparés en incorporant 28g, 14g, 7g ou 3,5g (11); =40%, 20%, 10% ou 5% massique) de la suspension dans l'huile de tournesol achetée chez Sigma Aldrich et contenant des quantités de PGPR fourni par Palsgaard variant de 1,64 à 6,28% en masse et 14,3% en masse d'octocrylène par rapport à la phase lipophile. Cette émulsion inverse est agitée à l'aide d'un homogénéiseur UltraTurrax® de la marque IKA équipé d'un axe S25KV25F opérant à 24 000 rpm pendant lnninute. Le PGPR se répartit entre la surface des gouttes (1,28% en masse par rapport à la phase lipophile quelle que soit la quantité initiale de PGPR) et l'huile de tournesol (entre 0,36% et 5% en masse par rapport à la phase lipophile). Cette émulsion est ensuite diluée avec de l'huile de tournesol contenant du PGPR correspondant à la fraction dans l'huile pour la maintenir constante). Dans une troisième étape, l'émulsion inverse ainsi obtenue a été 20 incorporée dans 30 g de phase aqueuse externe. La fraction d'émulsion inverse par rapport à l'émulsion totale est de Od=70%. La phase aqueuse externe contient 12% de caséinate de sodium achetée chez Sigma Aldrich. L'émulsion double obtenue est cisaillée à l'aide d'un émulsificateur de Couette commercialisé par la société Ademtech à l'aide d'un rotor/stator 25 espacés de 200pm à différentes vitesses de rotation. La vitesse a été choisie afin de maintenir la taille des globules constante et indépendante de Oh Le taux de cisaillement est précisé dans le tableau 1 de l'exemple 1.In a second step, 70 g of an inverse emulsion are prepared by incorporating 28 g, 14 g, 7 g or 3.5 g (11); = 40%, 20%, 10% or 5% by weight) of the suspension in sunflower oil purchased from Sigma Aldrich and containing amounts of PGPR supplied by Palsgaard ranging from 1.64 to 6.28% by weight and 14% by weight. , 3% by weight of octocrylene relative to the lipophilic phase. This inverse emulsion is stirred using an IKA brand UltraTurrax® homogenizer equipped with an S25KV25F axis operating at 24,000 rpm for one minute. The PGPR is distributed between the surface of the drops (1.28% by weight relative to the lipophilic phase irrespective of the initial quantity of PGPR) and the sunflower oil (between 0.36% and 5% by mass relative to in the lipophilic phase). This emulsion is then diluted with sunflower oil containing PGPR corresponding to the fraction in the oil to keep it constant). In a third step, the resulting inverse emulsion was incorporated in 30 g of external aqueous phase. The inverse emulsion fraction with respect to the total emulsion is of Od = 70%. The outer aqueous phase contains 12% sodium caseinate purchased from Sigma Aldrich. The double emulsion obtained is sheared using a Couette emulsifier sold by the company Ademtech using a rotor / stator 25 spaced at 200 μm at different speeds of rotation. The rate was chosen in order to maintain the constant and independent size of the blood cells. The shear rate is specified in Table 1 of Example 1.

Les résultats obtenus en termes de stabilité sont similaires à ceux de l'exemple 1, Ainsi, l'ajout d'un agent anti-UV ne modifie pas la stabilité de l'émulsion double contenant le virus CpGV.The results obtained in terms of stability are similar to those of Example 1. Thus, the addition of an anti-UV agent does not modify the stability of the double emulsion containing the CpGV virus.

Exemple 4 : Protection de l'entité biologique encapsulée dans des émulsions doubles contenant un agent anti-UV L'efficacité de la protection anti-UV des diverses émulsions contenant du CpGV est testée grâce au protocole suivant : Les différentes émulsions doubles ont été exposées aux 10 rayonnements UV dans une chambre d'irradiation recréant le spectre solaire (Sun Test CPS d'une puissance de 650 W/m2, fournisseur : Atlas MTT GmbH). Dans cette chambre, 24h d'exposition sont équivalentes à 7 jours d'exposition en extérieur. Chaque préparation contenant le CpGV est diluée au 1/1000e (concentration finale permettant d'entraîner la mort de 15 95% des larves de carpocapse qui ingèreraient cette suspension) dans de l'eau distillée et du NaCI à 0,1 M, aliquotée en récipient en verre de dimensions 32 x 11,6 mm (Fournisseur : Atlantic labo, référence: FL FVVI 0012), à raison de 20 pl/fiole et placée de manière aléatoire au sein de l'enceinte de l'appareil. Trois répétitions indépendantes sont irradiées 20 pendant 10, 20, 30, 50, 70 ou 90 minutes, Les fioles sont laissées ouvertes durant l'irradiation. Des témoins sont réalisés en déposant 20 pl d'échantillon dans des fioles ambrées bouchées (Fournisseur : Dominique Dutscher, référence: 048427 et 048431) ne laissant pas passer les UV. Ces témoins ont été irradiés pendant le temps maximal d'exposition, à savoir 25 60 minutes. Chaque échantillon est récupéré après irradiation. L'efficacité de la suspension est mesurée par test biologique sur larves de carpocapses en l'incorporant à un milieu nutritif artificiel (Jones K. A., 2000, Bioassays of Entomopathogenic Viruses, In: Navon, A, and Ascher, K.R.S. (eds) Bioassays of Entomopathogenic Microbes and Nematodes, CABI Publishing, Oxon, UK, pp, 95-140) et en déterminant au bout de 9 jours la mortalité résiduelle induite par le CpGV irradié. Le TL50 ou temps létal 50 est déterminé grâce au logiciel d'analyses statistiques GenStat (16ème édition, fournisseur : vsn') : il s'agit du temps d'exposition nécessaire pour désactiver 50 % de la quantité de CpGV présente initialement dans l'échantillon, La concentration initiale de la suspension virale irradiée permettant d'induire 95 % de mortalité larvaire, la mortalité résiduelle après irradiation ne sera alors plus que de 50%. Les résultats ont été comparés à ceux obtenus dans les mêmes conditions avec des échantillons témoins, à savoir des suspensions contenant le virus CpGV sans protection et d'émulsion double ne contenant pas de protection.EXAMPLE 4 Protection of the encapsulated biological entity in double emulsions containing an anti-UV agent The effectiveness of the UV protection of the various emulsions containing CpGV is tested by means of the following protocol: The different double emulsions were exposed to 10 UV radiation in an irradiation chamber recreating the solar spectrum (Sun Test CPS with a power of 650 W / m2, supplier: Atlas MTT GmbH). In this room, 24 hours of exposure are equivalent to 7 days of outdoor exposure. Each CpGV-containing preparation is diluted 1/1000 (final concentration to kill 95% of the codling moth larvae that would ingest this suspension) in distilled water and 0.1M NaCl, aliquoted as follows. glass container measuring 32 x 11.6 mm (Supplier: Atlantic labo, reference: FL FVVI 0012), 20 μl / vial and placed randomly within the enclosure of the apparatus. Three independent repeats are irradiated for 10, 20, 30, 50, 70 or 90 minutes. The vials are left open during irradiation. Controls are carried out by depositing 20 μl of sample in clotted amber jars (Provider: Dominique Dutscher, reference: 048427 and 048431) not letting the UV pass. These controls were irradiated for the maximum exposure time of 60 minutes. Each sample is recovered after irradiation. The effectiveness of the suspension is measured by biological test on carpocapses larvae by incorporating it into an artificial nutrient medium (Jones KA, 2000, Bioassays of Entomopathogenic Viruses, In: Navon, A, and Ascher, KRS (eds) Bioassays of Entomopathogenic Microbes and Nematodes, CABI Publishing, Oxon, UK, pp, 95-140) and determining after 9 days the residual mortality induced by irradiated CpGV. The TL50 or lethal time 50 is determined by GenStat statistical analysis software (16th edition, supplier: vsn '): this is the exposure time needed to disable 50% of the amount of CpGV initially present in the sample, the initial concentration of the irradiated viral suspension to induce 95% of larval mortality, the residual mortality after irradiation will then be more than 50%. The results were compared with those obtained under the same conditions with control samples, namely suspensions containing CpGV virus without protection and double emulsion containing no protection.

L'échantillon de référence a été préparé à partir d'une suspension de CpGV-M dans de l'eau distillée tel que décrit en préambule de la partie exemple à une concentration de 10E13 virus/litre. L'émulsion de base est préparée selon l'exemple 1 « Emulsions doubles contenant du caséinate de sodium » avec une composition de 2,28%m de PGPR dans la phase huileuse et 40%m d'eau dans l'émulsion inverse. A cette émulsion de base ont pu être ajoutés des anti-UV comme l'octocrylène tel que décrit à l'exemple 3 : « Emulsions doubles avec co-encapsulation d'agents antiUV», ou l'éthylhexyl salicylate à une concentration de 5% en masse de la phase lipophile, selon le même procédé que celui présenté à l'exemple 3 « Emulsions doubles avec co-encapsulation d'agents anti-UV ». Les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau 3 suivant : Tableau 3 Echantillon TL5o minimal du TL5o moyen du TL5o CpGV en min CpGV en min maximal du CpGV en min Echantillon de référence 9,4 10,7 12,0 Emulsion double 28,7 31,7 35,3 Emulsion double + 44,5 50,1 57,1 octocrylène Emulsion double + 33,5 36,2 39,0 éthylhexyl salicylate Ces résultats montrent que le TL50 de l'échantillon de référence est environ trois fois plus faible que celui de l'émulsion double. La technologie d'encapsulation du CpGV mise en oeuvre permet donc d'augmenter significativement la durée de vie du virus. Parmi les deux agents anti-UV testés, l'éthylhexyl salicylate n'apporte pas d'amélioration sur la persistance du CpGV en comparaison avec l'émulsion double sans agent anti-UV. L'émulsion double contenant l'octocrylène présente une augmentation statistique du TL50. Cet agent anti-UV semble le plus à même de protéger le CpGV du rayonnement UV et augmente ainsi sa persistance suite à une exposition au sein de l'enceinte de l'appareil. Exemple 5 : Emulsions doubles contenant des particules (+huile liquide) Dans une première étape une suspension aqueuse de CpGV est préparée selon le procédé décrit en préambule et diluée dans de l'eau distillée de manière à obtenir une suspension à une concentration de 1013 GV/L dans l'eau. Dans une deuxième étape 70 g d'une émulsion inverse sont préparés 20 en incorporant 28g ((Pi =40% massique) de la suspension dans 42 g de la phase lipophile composée d'huile de tournesol achetée chez Sigma Aldrich (41,04 g) et de 2,28% en masse par rapport à la phase lipophile de PGPR (soit 0,96 g) fourni par Palsgaard. Cette émulsion inverse est agitée à l'aide d'un homogénéiseur UltraTurrax® de la marque IKA équipé d'un axe S25KV25F opérant à 24 000 5 rpm pendant 1 minute. Dans une troisième étape, l'émulsion inverse ainsi obtenue a été incorporée dans 30 g de phase aqueuse externe afin d'obtenir une émulsion double. La fraction d'émulsion inverse par rapport à l'émulsion totale est de cDd=70°/0. La phase aqueuse externe contient 16 mg de 10 particules R816 (fournies par Evonik) par gramme d'émulsion inverse introduite et a une concentration en NaCI égale à 0,1 mol/L. Les particules R816 sont des particules de SiO2 fonctionnalisées avec du CTAB (à hauteur de 1 molécule de CTAB par 12 nm2 de surface d'une particule soit un rapport massique de 12 mg de CTAB/g de silice). Cette émulsion est 15 agitée à l'aide d'un homogénéiseur Ultra-Turrax® de la marque IKA équipé d'un axe S25KV25F opérant à 10 000 rpm pendant lminute. Les résultats montrent qu'une émulsion double contenant une suspension virale de CpGV, du PGPR dans de l'huile de tournesol, des particules R816 est stable puisqu'elle présente un taux d'encapsulation 20 constant de 92 % sur une durée supérieure à 65 jours, l'émulsion double ayant été conservée à 4°C. Aucun flux n'a pu être détecté. Exemple 6 : Emulsions doubles contenant des huiles solides et soit des particules, soit de la gomme arabique 25 Exemple 6-1 Dans une première étape une suspension aqueuse de CpGV est préparée selon le procédé décrit en préambule et diluée dans de l'eau distillée de manière à obtenir une suspension à une concentration de 1013 GV/L dans l'eau. Dans une deuxième étape 40 g d'une émulsion inverse sont préparés en incorporant 4 g ((Di =10% massique) de la suspension dans de l'huile 5 solide telle que l'eicosane achetée chez Sigma Aldrich et contenant 2,28% en masse par rapport à la phase lipophile de PGPR fourni par Palsgaard. Le mélange est porté à une température de 40°C pour s'assurer de l'état liquide de l'huile. Cette émulsion inverse est agitée à l'aide d'un homogénéiseur Ultra-Turrax® de la marque IKA équipé d'un axe 10 S25KV25F opérant à 24 000 rpm pendant 1 minute. Dans une troisième étape, l'émulsion inverse ainsi obtenue a été incorporée dans 60 g de phase aqueuse externe afin d'obtenir une émulsion double. La fraction d'émulsion inverse par rapport à l'émulsion totale est de (Dd=40%. La phase aqueuse externe contient 10 mg de 15 particules R816 (fournies par Evonik) par gramme d'émulsion inverse introduite et a une concentration en NaCI égale à 0,1 mol/L. Les particules R816 sont des particules de SiO2 fonctionnalisées avec du CTAB (à hauteur de 1 molécule de CTAB par 12nm2 de surface de silice soit un rapport massique 12 mg/g de silice). Cette émulsion est agitée à l'aide 20 d'un homogénéiseur Ultra-Turrax® de la marque IKA équipé d'un axe S25KV25F opérant à 10 000 rpm pendant 1 minute. Les résultats montrent qu'une émulsion double contenant une suspension virale de CpGV, du PGPR dans de l'eicosane, des particules R816 est stable puisqu'elle présente un taux d'encapsulation constant de 25 80 % sur une durée supérieure à 30 jours, l'émulsion double ayant été conservée à 18°C. Aucun flux n'a pu être détecté. Exemple 6-2 Dans une première étape une suspension aqueuse de CpGV est préparée selon le procédé décrit en préambule et diluée dans de l'eau distillée de manière à obtenir une suspension à une concentration de 1013 GV/L dans l'eau.The reference sample was prepared from a suspension of CpGV-M in distilled water as described in the preamble of the example portion at a concentration of 10E13 virus / liter. The basic emulsion is prepared according to Example 1 "Double emulsions containing sodium caseinate" with a composition of 2.28% m of PGPR in the oily phase and 40% of water in the inverse emulsion. To this base emulsion could be added anti-UV such as octocrylene as described in Example 3: "Double emulsions with co-encapsulation of antiUV agents", or ethylhexyl salicylate at a concentration of 5% in mass of the lipophilic phase, according to the same method as that presented in Example 3 "Double emulsions with co-encapsulation of anti-UV agents". The results obtained are grouped together in the following table 3: Table 3 Sample TL5o minimum TL5o mean TL5o CpGV in min CpGV min min CpGV in min Sample reference 9.4 10.7 12.0 Double emulsion 28.7 31 , 7 35.3 Double emulsion + 44.5 50.1 57.1 octocrylene Double emulsion + 33.5 36.2 39.0 ethylhexyl salicylate These results show that the TL50 of the reference sample is approximately three times lower than that of the double emulsion. The CpGV encapsulation technology used therefore makes it possible to significantly increase the lifetime of the virus. Of the two anti-UV agents tested, ethylhexyl salicylate did not improve the persistence of CpGV compared to the double emulsion without anti-UV agent. The double emulsion containing octocrylene shows a statistical increase of TL50. This anti-UV agent seems the most likely to protect the CpGV from UV radiation and thus increases its persistence following exposure within the enclosure of the device. EXAMPLE 5 Double emulsions containing particles (+ liquid oil) In a first step, an aqueous suspension of CpGV is prepared according to the method described in the preamble and diluted in distilled water so as to obtain a suspension at a concentration of 1013 GV / L in water. In a second step, 70 g of an inverse emulsion are prepared by incorporating 28 g ((Pi = 40% by weight) of the suspension into 42 g of the lipophilic phase composed of sunflower oil purchased from Sigma Aldrich (41.04 g). ) and 2.28% by weight relative to the lipophilic phase of PGPR (ie 0.96 g) provided by Palsgaard.This inverse emulsion is stirred using an UltraTurrax® homogenizer brand IKA equipped with a S25KV25F axis operating at 24,000 rpm for 1 minute In a third step, the resulting inverse emulsion was incorporated in 30 g of external aqueous phase in order to obtain a double emulsion. The total aqueous emulsion is cDd = 70 ° / 0. The external aqueous phase contains 16 mg of R816 particles (provided by Evonik) per gram of introduced inverse emulsion and has a NaCl concentration equal to 0.1 mol / l. L. R816 particles are functionalized SiO2 particles with CTAB (at ha 1 CTAB molecule per 12 nm 2 surface area of a particle, ie a mass ratio of 12 mg CTAB / g silica). This emulsion is stirred using an IKA Ultra-Turrax® homogenizer equipped with an S25KV25F axis operating at 10,000 rpm for one minute. The results show that a double emulsion containing a viral suspension of CpGV, PGPR in sunflower oil, R816 particles is stable since it has a constant encapsulation rate of 92% over a duration greater than 65. days, the double emulsion having been stored at 4 ° C. No stream could be detected. Example 6: Double emulsions containing solid oils and either particles or gum arabic Example 6-1 In a first step, an aqueous suspension of CpGV is prepared according to the method described in the preamble and diluted in distilled water of to obtain a suspension at a concentration of 1013 GV / L in water. In a second step, 40 g of an inverse emulsion are prepared by incorporating 4 g ((Di = 10% by mass) of the suspension into solid oil such as eicosane purchased from Sigma Aldrich and containing 2.28%. The mixture is heated to a temperature of 40 ° C. to ensure the liquid state of the oil. an Ultra-Turrax® homogenizer of the brand IKA equipped with an axis S25KV25F operating at 24,000 rpm for 1 minute In a third step, the inverse emulsion thus obtained was incorporated in 60 g of external aqueous phase in order to The inverse emulsion fraction with respect to the total emulsion is (Dd = 40%) The external aqueous phase contains 10 mg of R816 particles (provided by Evonik) per gram of introduced inverse emulsion and has an NaCl concentration equal to 0.1 mol / L. The R816 particles are functionalized SiO2 particles with CTAB (at a level of 1 molecule of CTAB per 12 nm 2 of silica surface, ie a mass ratio of 12 mg / g of silica). This emulsion is stirred using an IKA Ultra-Turrax® homogenizer equipped with an S25KV25F axis operating at 10,000 rpm for 1 minute. The results show that a double emulsion containing a viral suspension of CpGV, PGPR in eicosane, R816 particles is stable since it has a constant encapsulation rate of 80% over a period greater than 30 days, the double emulsion having been stored at 18 ° C. No stream could be detected. Example 6-2 In a first step an aqueous suspension of CpGV is prepared according to the method described in the preamble and diluted in distilled water so as to obtain a suspension at a concentration of 1013 GV / L in water.

Dans une deuxième étape 40g d'une émulsion inverse sont préparés en incorporant 4g ($1:1; =10% massique) de la suspension dans de l'huile solide telle que l'eicosane achetée chez Sigma Aldrich et 2,28% en masse par rapport à la phase lipophile de PGPR fourni par Palsgaard. Le mélange est porté à une température de 40°C pour s'assurer de l'état liquide de l'huile. Cette émulsion inverse est agitée à l'aide d'un homogénéiseur Ultra-Turrax® de la marque IKA équipé d'un axe S25KV25F opérant à 24 000 rpm pendant lminute. Dans une troisième étape, l'émulsion inverse ainsi obtenue a été incorporée dans 60 g de phase aqueuse externe afin d'obtenir une émulsion double. La fraction d'émulsion inverse par rapport à l'émulsion totale est de Od=40%. La phase aqueuse externe contient 20% de gomme arabique par rapport à la masse d'eau et a une concentration en NaCI égale à 0,1 mol/L. Cette émulsion est agitée à l'aide d'un homogénéiseur Ultra-Turrax® de la marque IKA équipé d'un axe S25KV25F opérant à 10 000 rpm pendant 1minute. Les résultats montrent qu'une émulsion double contenant une suspension virale de CpGV, du PGPR dans de l'eicosane, de la gomme arabique est stable puisqu'elle présente un taux d'encapsulation constant de 95 % sur une durée supérieure à 30 jours l'émulsion double ayant été conservée à 18°C. Aucun flux n'a pu être détecté. Exemple 7 : Exemple de composition phytosanitaire Les émulsions doubles préparées selon les exemples 1, 2, 3, 5 et 6 ont été chacune diluées dans de l'eau d'une facteur 1000, avant d'être utilisées sur le terrain.In a second step, 40 g of an inverse emulsion are prepared by incorporating 4 g ($ 1: 1, = 10% by mass) of the suspension into solid oil such as eicosane purchased from Sigma Aldrich and 2.28% by weight. compared to the lipophilic phase of PGPR provided by Palsgaard. The mixture is brought to a temperature of 40 ° C to ensure the liquid state of the oil. This inverse emulsion is stirred using an IKA brand Ultra-Turrax® homogenizer equipped with an S25KV25F axis operating at 24,000 rpm for one minute. In a third step, the inverse emulsion thus obtained was incorporated in 60 g of external aqueous phase in order to obtain a double emulsion. The inverse emulsion fraction with respect to the total emulsion is of Od = 40%. The external aqueous phase contains 20% gum arabic relative to the water mass and has a NaCl concentration equal to 0.1 mol / L. This emulsion is stirred using an IKA Ultra-Turrax® homogenizer equipped with an S25KV25F axis operating at 10 000 rpm for 1 minute. The results show that a double emulsion containing a viral suspension of CpGV, PGPR in eicosane, and gum arabic is stable since it has a constant encapsulation rate of 95% over a period greater than 30 days. double emulsion having been stored at 18 ° C. No stream could be detected. Example 7: Example of phytosanitary composition The double emulsions prepared according to Examples 1, 2, 3, 5 and 6 were each diluted in water by a factor of 1000, before being used in the field.

Exemple 8 : Résultats tests terrain en vergers Deux essais d'efficacité ont été menés en 2011 en France, dans la Vallée de la Loire et dans le Sud-Ouest sur pommiers afin de lutter contre le carpocapse des pommes, Cydia pomonella. Des parcelles de 3 à 5 pommiers ont été traitées avec différentes 10 modalités afin de pouvoir comptabiliser au moins 250 pommes. Pour s'assurer de la bonne reproductibilité, chaque modalité est répétée 4 fois, Cinq modalités ont été testées : -Témoin non traité (modalité 1) -Parcelles traitées à la dose de 2 L/ha avec un insecticide chimique à 15 base de 250 g/L de Chlorpyrifos-éthyl, homologué contre le carpocapse en France sous le numéro 9900104 (modalité 2) -Parcelles traitées à la dose de 1 L/ha avec un insecticide biologique à base de 10E13 GV/L de CpGV, homologué contre le carpocapse en France sous le numéro 9800076 (modalité 3) 20 -Parcelles traitées à la dose de 0,5 L/ha avec un insecticide biologique à base de 10E13 GV/L de CpGV, homologué contre le carpocapse en France sous le numéro 9800076 (modalité 4) -Parcelles traitées à la dose de 1L/ha avec une émulsion double préparée conformément à l'exemple 2 « Emulsions doubles 25 contenant de la gomme arabique » à une concentration en CpGV de 5,10E12 CpGV/litre (modalité 5) La date de la première application est déterminée par le nombre de carpocapses détectés par hectare de vergers. La première application s'effectue 10 jours après avoir observé 5-6 papillons par hectare à l'aide de pulvérisateurs équipés de buses. Au cours des essais, les différentes modalités sont appliquées tous les 10-12 jours suivant les conditions météorologiques (renouvellement de l'application après une chute de 2025 mm de pluie). A la fin de l'essai, le pourcentage de fruits attaqués a été déterminé en prenant en compte les fruits attaqués sur l'arbre et ceux tombés au sol.Example 8: Field test results in orchards Two efficacy trials were conducted in 2011 in France, in the Loire Valley and in the South-West on apple trees to control codling moth, Cydia pomonella. Plots of 3 to 5 apple trees were treated with different modalities in order to count at least 250 apples. To ensure good reproducibility, each modality is repeated 4 times, Five modalities were tested: - Untreated indicator (modality 1) - Plants treated at the rate of 2 L / ha with a chemical insecticide at base of 250 g / L of Chlorpyrifos-ethyl, registered against codling moth in France under number 9900104 (modality 2) -Parelles treated at the rate of 1 L / ha with a biological insecticide based on 10E13 GV / L of CpGV, approved against codling moth in France under number 9800076 (modality 3) 20 -Parelles treated at a dose of 0.5 L / ha with a biological insecticide based on 10E13 GV / L of CpGV, registered against codling moth in France under number 9800076 ( modality 4) -Parcelles treated at the dose of 1L / ha with a double emulsion prepared in accordance with Example 2 "Double emulsions containing gum arabic" at a CpGV concentration of 5.10E12 CpGV / liter (modality 5) The date of the first application is completed by the number of codling moth detected per hectare of orchards. The first application is made 10 days after observing 5-6 moths per hectare using sprayers equipped with nozzles. During the tests, the different modalities are applied every 10-12 days according to the meteorological conditions (renewal of the application after a fall of 2025 mm of rain). At the end of the trial, the percentage of fruits attacked was determined by taking into account the fruits attacked on the tree and those fallen on the ground.

Résultats à la récolte des pommes - moyenne des 2 essais % de fruits attaqués par les larves de carpocapses pour les différentes modalités Sud-Ouest Vallée de la Loire Modalité 1 22,67 a 28,38 a Modalité 2 2,29 d 5,91 c Modalité 3 8,49 bc 6,55 bc Modalité 4 9,61 b 9,52 b Modalité 5 6,55 c 9,99 b Les pourcentages suivis d'une même lettre ne diffèrent pas significativement. L'émulsion double présente une efficacité semblable à celle de l'insecticide biologique à la dose de 1 L/ha ou de 0,5 L/ha. L'encapsulation 20 du CpGV par la méthode décrite à l'exemple 2 n'altère pas son efficacité mais ne permet pas de l'améliorer dans les conditions de ces deux essais.Results at harvest of apples - average of 2 trials% of fruits attacked by larvae of carpocapses for different modalities South-West Loire Valley Modality 1 22.67 to 28.38 a Modality 2 2.29 d 5.91 c Modality 3 8.49 bc 6.55 bc Modality 4 9.61 b 9.52 b Modality 5 6.55 c 9.99 b The percentages followed by the same letter do not differ significantly. The double emulsion has similar efficacy to that of the biological insecticide at the rate of 1 L / ha or 0.5 L / ha. Encapsulation of CpGV by the method described in Example 2 does not impair its effectiveness but does not improve it under the conditions of these two tests.

En 2012, quatre nouveaux essais terrain ont été menés en France, dans la Vallée de la Loire, le Sud-Ouest et le Sud-Est sur pommiers afin de lutter contre le carpocapse des pommes, Cydia pomonella, selon le même protocole que celui mentionné ci-dessus pour les essais menés en 2011.In 2012, four new field trials were conducted in France, in the Loire Valley, the South-West and the South-East on apple trees to control codling moth, Cydia pomonella, according to the same protocol as mentioned above for the tests conducted in 2011.

Huit modalités ont été testées : -Témoin non traité (modalité 1) -Parcelles traitées à la dose de 2 L/ha avec un insecticide chimique à base de 250 g/L de Chlorpyrifos-éthyl, homologué contre le carpocapse en France sous le numéro 9900104 (modalité 2) -Parcelles traitées à la dose de 1 L/ha avec un insecticide biologique à base de 10E13 GV/L de CpGV, homologué contre le carpocapse en France sous le numéro 9800076 (modalité 3) -Parcelles traitées à la dose de 1 L/ha avec une émulsion double préparée conformément à l'exemple 1 « Emulsions doubles contenant du caséinate de sodium » à une concentration en CpGV de 10E13 GV/litre (modalité 4) -Parcelles traitées à la dose de 1 L/ha avec une émulsion double préparée avec de l'octocrylène conformément à l'exemple 3 « Emulsions doubles avec co-encaspulation d'agents anti-UV ou anti-oxydants » à une concentration en CpGV de 10E13 GV/litre (modalité 5) -Parcelles traitées à la dose de 1 L/ha avec une émulsion double préparée avec de l'éthylhexyl salicylate conformément à l'exemple 3 « Emulsions doubles avec co-encaspulation d'agents anti-UV ou anti-oxydants » à une concentration en CpGV de 10E13 GV/Iitre (modalité 6) -Parcelles traitées à la dose de 1L/ha avec une émulsion double préparée avec des particules conformément à l'exemple 5 « Emulsions doubles contenant des particules (+huile liquide) » à une concentration en CpGV de 10E13 GV/litre (modalité 7) A la fin de l'essai, le pourcentage de fruits attaqués a été 5 déterminé en prenant en compte les fruits attaqués sur l'arbre et ceux tombés au sol ainsi que le pourcentage d'efficacité des différentes modalités grâce à la formule suivante : (% de fruits attaqués à la récolte dans la modalité traitée - % de fruits attaqués à la récolte dans la modalité témoin) / % de fruits 10 attaqués à la récolte dans la modalité témoin. Résultats à la récolte des pommes - moyenne des 4 essais °h de fruits attaqués par les larves de carpocapses et % d'efficacité des différentes modalités 15 A la récolte et % d'efficacité sur les fruits tombés au sol Modalité 1 46 a Modalité 2 11 d 75 a Modalité 3 30 bc 33 b Modalité 4 26 c 43 b Modalité 5 28 bc 35 b Modalité 6 29 bc 38 b Modalité 7 30 bc 34 b Les pourcentages suivis d'une même lettre ne diffèrent pas significativement.Eight modalities were tested: - Untreated indicator (modality 1) - Plants treated at the rate of 2 L / ha with a chemical insecticide based on 250 g / L of Chlorpyrifos-ethyl, registered against codling moth in France under the number 9900104 (modality 2) -Parcelles treated at the rate of 1 L / ha with a biological insecticide based on 10E13 GV / L of CpGV, registered against codling moth in France under number 9800076 (modality 3) -Parcelles treated with the dose of 1 L / ha with a double emulsion prepared according to Example 1 "Double emulsions containing sodium caseinate" at a CpGV concentration of 10E13 GV / liter (modality 4) -Parcelles treated at a dose of 1 L / ha with a double emulsion prepared with octocrylene according to Example 3 "Double emulsions with co-encapsulation of anti-UV or anti-oxidant agents" at a CpGV concentration of 10E13 GV / liter (modality 5) -Parcelles treated at the rate of 1 L / ha with a double emulsion prepared with ethylhexyl salicylate according to Example 3 "Double emulsions with co-encapsulation of anti-UV or antioxidant agents" at a CpGV concentration of 10E13 GV / Iiter (modality 6) -Parcelles treated at a dose of 1 L / ha with a double emulsion prepared with particles according to Example 5 "Double emulsions containing particles (+ liquid oil)" at a CpGV concentration of 10E13 GV / liter (modality 7) At the end of the test, the percentage of fruits attacked was determined by taking into account the fruits attacked on the tree and those fallen on the ground as well as the percentage of effectiveness of the different modalities thanks to the following formula: attacked at harvest in the treated modality -% of fruits attacked at harvest in the control modality) /% of fruits attacked at harvest in the control modality. Results at harvest of apples - average of 4 trials ° h of fruit attacked by larvae of carpocapses and% of effectiveness of the different modalities 15 At harvest and% of efficiency on fruits fallen to the ground Modality 1 46 a Modality 2 11 d 75 a Modality 3 30 bc 33 b Modality 4 26 c 43 b Modality 5 28 bc 35 b Modality 6 29 bc 38 b Modality 7 30 bc 34 b The percentages followed by the same letter do not differ significantly.

Ces résultats montrent que l'entité biologique encapsulée dans les émulsions doubles selon l'invention reste active. Le protocole de cet essai n'a pas permis de mettre en évidence l'avantage généré par la coencapsulation d'un agent anti-UV avec le CpGV puisque la similarité des intervalles de traitements (10 jours) entre les différentes modalités n'a pas permis de travailler sur la persistance du CpGV au verger.These results show that the biological entity encapsulated in the double emulsions according to the invention remains active. The protocol of this test did not highlight the advantage generated by the coencapsulation of an anti-UV agent with CpGV since the similarity of the treatment intervals (10 days) between the different modalities did not allowed to work on the persistence of CpGV in the orchard.

Claims

REVENDICATIONS1. Double water-in-oil-in-water (W / O / W) emulsion comprising: at least one hydrophilic biological entity chosen from pathogenic microorganisms, at least one lipophilic surfactant of molecular weight corresponding to one ranging from 1000 to 1 million g / mol, - at least one hydrophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range of 4000 to 1 million g / mol, and / or metal oxide particles, metalloids or polysaccharides of a size corresponding to a range from 5 nm to 35 gin.

2. Double emulsion according to claim 1, characterized in that the hydrophilic biological entity (s) is (are) present in the internal aqueous phase of the double emulsion.

3. Double emulsion according to claim 1 or claim 2, characterized in that the hydrophilic biological entity is a pathogenic microorganism of invertebrates or plant pathogen or pathogen of fungi, preferably pathogenic invertebrates.

4. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the hydrophilic biological entity is selected from viruses and bacteria. 25

5. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the hydrophilic biological entity is a pathogenic virus of insects, preferably selected from baculoviruses, such as granuloviruses, nucleopolyhedroviruses, and parvoviruses such as densoviruses.

6. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the hydrophilic biological entity has a size corresponding to a range from 0.015 to 15 μm.

7. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the molecular weight of the lipophilic surfactant corresponds to a range from 1000 to 6000 g / mol, and preferably from 3000 to 6000 g / mol.

8. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the lipophilic surfactant is a (poly) ester of fatty acids with one or more polyol (s), and preferably polyglycerol polyricinoleate ( PGPR).

9. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the molecular weight of the hydrophilic surfactant corresponding to a range of 4000 to 500 000 g / mol.

10. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the hydrophilic surfactant is selected from proteins, preferably sodium caseinate, and polysaccharides, preferably gum arabic.

11. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that the particles are S102 particles.

12. Double emulsion according to any one of the preceding claims, characterized in that it further comprises at least one anti-UV agent and / or at least one anti-oxidant agent soluble in the oily phase,

13. A process for preparing a stable double W / O / E emulsion containing at least one hydrophilic biological entity as defined in any one of claims 1 to 12, comprising the following steps: - preparing a water-in inverse emulsion oil (W / O) which comprises said one or more hydrophilic biological entity (s) present in a first aqueous phase and at least one lipophilic surfactant of molecular weight corresponding to a range from 1000 to 1 million g / mol in the oily phase, - preparing a double emulsion with a second aqueous phase comprising at least one hydrophilic surfactant with a molecular weight corresponding to a range from 4000 to 1 million g / mol or particles of a size corresponding to a range from 5 nm to 35 gm.

14. A phytosanitary composition comprising a double W / O / W emulsion as defined in any one of claims 1 to 12.

15. Use of the double W / O / W emulsion as defined in any one of claims 1 to 12 or of a composition containing such an emulsion as defined in claim 14, as a phytosanitary component, alone. or mixed with another composition, especially with another insecticidal composition.

16. A method of treatment against harmful or pest species, in particular against invertebrates, preferably insects, comprising applying the double W / E / H emulsion as defined in any one of claims 1 to 12. or a composition as defined in claim 14.