FR2965358A1 - Use of at least one amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence or of nucleic acid sequence, as a biomarker of a state of aged skin and/or signs of aging, optionally associated with dry skin - Google Patents
Use of at least one amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence or of nucleic acid sequence, as a biomarker of a state of aged skin and/or signs of aging, optionally associated with dry skin Download PDFInfo
- Publication number
- FR2965358A1 FR2965358A1 FR1057699A FR1057699A FR2965358A1 FR 2965358 A1 FR2965358 A1 FR 2965358A1 FR 1057699 A FR1057699 A FR 1057699A FR 1057699 A FR1057699 A FR 1057699A FR 2965358 A1 FR2965358 A1 FR 2965358A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- acid sequence
- skin
- amino acid
- nucleic acid
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6881—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/007—Preparations for dry skin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/20—Dermatological disorders
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Birds (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
Description
La présente invention se rapporte au domaine des biomarqueurs de la peau, et plus particulièrement de la peau sèche, ainsi qu'à leur mise en oeuvre à titre de cibles ou d'agents actifs cosmétiques. L'épiderme, partie superficielle de la peau, est un tissu dont les cellules sont jointives et solidaires les unes des autres et reposent sur une membrane basale. Il forme un revêtement externe comprenant des glandes sébacées ou sudoripares et les follicules pileux. Plus précisément, l'épiderme est une structure dont l'homéostasie résulte de la mise en oeuvre d'un ensemble finement régulé de signaux intracellulaires et extracellulaires agissant à toutes les étapes de la prolifération, de la migration, de la différenciation cellulaire, ainsi que de la synthèse des différents composants de la matrice extracellulaire. Ces signaux peuvent, notamment, résulter de l'action de facteurs produits par les kératinocytes. L'épiderme est conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes contenant, notamment, des cellules souches cutanées et constituant la couche germinative de l'épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyhédriques disposées sur la couche basale, une couche dite granuleuse comprenant une à trois couches dites de cellules aplaties contenant des inclusions cytoplasmiques distinctes, les grains de kératohyaline, et enfin, un ensemble de couches supérieures, appelé couche cornée, ou stratum corneum, constituée de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation, appelés cornéocytes. Le stratum corneum, la partie la plus externe de la peau qui assure la fonction barrière entre l'organisme et l'environnement, et la tige pilaire, partie émergente du follicule pileux qui constitue la chevelure, représentent tous deux l'aboutissement du processus de différenciation des kératinocytes. La différenciation épidermique suit un processus de maturation dans lequel des kératinocytes de la couche basale se différencient et migrent pour aboutir à la formation des cornéocytes, cellules mortes totalement kératinisées. Cette différenciation est la résultante de phénomènes parfaitement coordonnés qui vont conduire au maintien de l'homéostasie et de l'hydratation de l'épiderme, et conférer à la peau un aspect sain, jeune, lumineux et lisse. Le stratum corneum, de par sa solidité et sa structure stratifiée compacte, assure une fonction barrière : il s'oppose notamment à la perte en eau transcutanée, aussi appelée «perte insensible en eau ». Ainsi, l'une des fonctions du stratum corneum est de capter et retenir l'eau contenue dans l'épiderme, et toute altération de sa structure et/ou de sa fonction pourra se traduire par des modifications de l'hydratation cutanée. L'hydratation est apportée à la peau par l'eau des couches profondes et par la sueur. Un déséquilibre de l'hydratation de la peau peut se traduire par de profondes conséquences tout autant physiologiques que cosmétiques. Des troubles de l'hydratation cutanée, et notamment une sécheresse cutanée, sont souvent observés avec l'âge et/ou à des changements climatiques. Toutefois, de tels états peuvent également se manifester chez des sujets jeunes. The present invention relates to the field of biomarkers of the skin, and more particularly of dry skin, and to their use as targets or cosmetic active agents. The epidermis, the superficial part of the skin, is a tissue whose cells are contiguous and integral with one another and rest on a basement membrane. It forms an outer coating comprising sebaceous or sweat glands and hair follicles. More specifically, the epidermis is a structure whose homeostasis results from the implementation of a finely regulated set of intracellular and extracellular signals acting at all stages of proliferation, migration, cell differentiation, as well as of the synthesis of the different components of the extracellular matrix. These signals may, in particular, result from the action of factors produced by the keratinocytes. The epidermis is conventionally divided into a basal layer of keratinocytes containing, in particular, cutaneous stem cells and constituting the germinal layer of the epidermis, a so-called spinous layer consisting of several layers of polyhedral cells arranged on the basal layer, a so-called granulosa comprising one to three layers of flattened cells containing distinct cytoplasmic inclusions, keratohyaline grains, and finally, a set of upper layers, called stratum corneum, or corneal layer, consisting of keratinocytes at the end stage of their differentiation, called corneocytes . The stratum corneum, the outermost part of the skin that provides the barrier function between the body and the environment, and the hair shaft, the emergent part of the hair follicle that makes up the hair, are both the culmination of the healing process. differentiation of keratinocytes. Epidermal differentiation follows a maturation process in which basal layer keratinocytes differentiate and migrate to form corneocytes, dead cells that are completely keratinized. This differentiation is the result of perfectly coordinated phenomena that will lead to the maintenance of homeostasis and hydration of the epidermis, and give the skin a healthy, youthful, luminous and smooth appearance. The stratum corneum, because of its solidity and its compact stratified structure, provides a barrier function: it opposes in particular the loss of transcutaneous water, also called "insensible loss of water". Thus, one of the functions of the stratum corneum is to capture and retain the water contained in the epidermis, and any alteration of its structure and / or function may result in changes in skin hydration. Hydration is provided to the skin by deep-layer water and sweat. An imbalance in the hydration of the skin can have profound consequences, both physiological and cosmetic. Skin hydration disorders, including skin dryness, are often observed with age and / or climate change. However, such states may also occur in young subjects.
L'état de sécheresse cutanée peut être d'origine acquise ou constitutionnelle non pathologique ou elle peut avoir une origine constitutionnelle pathologique. De nombreux facteurs extérieurs peuvent entraîner l'assèchement de la peau ou aggraver cet état. Parmi ces facteurs, on peut citer les conditions climatiques telles que le froid ou le vent, les rayons solaires, l'exposition à certains agents chimiques ou thérapeutiques. Sur le plan physiologique, une peau sèche est souvent associée à une baisse du taux d'hydratation cutanée ainsi qu'à une modification du processus de maturation du stratum corneum ayant pour signe le plus visible l'apparition de squames à la surface cutanée. Sur le plan sensoriel, une peau sèche peut être caractérisée par une sensation de tiraillement et/ou de tension cutanée. De nombreux facteurs épidermiques, dont l'expression, l'activité biologique ou la maturation sont altérées, diminuées ou augmentées, sont connus pour être impliqués, directement ou indirectement, dans la survenue et la manifestation d'une sécheresse de la peau ou des différents signes de sécheresse cutanée associés. The state of cutaneous dryness can be of origin acquired or constitutional non-pathological or it can have a pathological constitutional origin. Many external factors can dry the skin or make it worse. These factors include climatic conditions such as cold or wind, sunlight, exposure to certain chemical or therapeutic agents. Physiologically, dry skin is often associated with a decrease in the level of skin hydration and a change in the process of maturation of the stratum corneum with the most visible sign of the appearance of dander on the skin surface. On the sensory level, dry skin can be characterized by a feeling of tightness and / or cutaneous tension. Many epidermal factors, whose expression, biological activity or maturation are altered, diminished or increased, are known to be involved, directly or indirectly, in the occurrence and manifestation of a dryness of the skin or different signs of skin dryness associated.
Ces facteurs peuvent être utilisés à titre de bio-marqueurs de la peau sèche, comme cibles de criblage pour de nouveaux traitements de la sécheresse cutanée, voire comme actifs cosmétiques à l'égard de l'hydratation de la peau et de traitement de la peau sèche. Toutefois, il demeure encore de nombreuses inconnues quant au mécanisme 30 intime et quant à l'ensemble des facteurs impliqués dans l'hydratation et la sécheresse de la peau. These factors can be used as bio-markers of dry skin, as screening targets for new skin dryness treatments, or even as cosmetic active agents for skin hydration and skin treatment. dried. However, there are still many unknowns as to the intimate mechanism and all the factors involved in the hydration and dryness of the skin.
Ainsi, il demeure un besoin d'identifier de nouveaux biomarqueurs de la peau, et en particulier de la peau sèche ou des signes de sécheresse cutanée. Il existe également un besoin de disposer de nouveaux biomarqueurs permettant de caractériser un état de la peau, et en particulier une peau sèche ou des signes de sécheresse cutanée. Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux outils ou cibles pour le criblage d'agents actifs ou de traitements physiques convenant au soin de la peau, et plus particulièrement utiles pour prévenir et/ou traiter la peau sèche ou les signes de sécheresse cutanée. Thus, there remains a need to identify new biomarkers of the skin, and in particular dry skin or signs of dry skin. There is also a need for new biomarkers to characterize a state of the skin, and in particular dry skin or signs of dry skin. There is still a need for new tools or targets for the screening of active agents or physical treatments suitable for the care of the skin, and more particularly useful for preventing and / or treating dry skin or signs of dry skin.
Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux outils ou cibles pour le criblage d'agents actifs ou de traitements physiques pour favoriser ou renforcer l'hydratation de la peau. Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux actifs ou de nouveaux traitements pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. There is still a need for new tools or targets for the screening of active agents or physical treatments to promote or enhance the hydration of the skin. There is still a need for new actives or treatments to promote and / or enhance the hydration of the skin.
Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux actifs ou de nouveaux traitements pour la prévention et/ou le traitement de la peau sèche ou des signes de sécheresse cutanée. Il existe encore un besoin de disposer de nouvelles cibles cosmétiques pour le soin de la peau, notamment pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau et en particulier pour la prévention et/ou le traitement de la peau sèche ou des signes de sécheresse cutanée. La présente invention a pour objet de satisfaire à ces besoins. Ainsi, la présente invention concerne, selon un de ses premiers objets, l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés codés par une séquence d'acides nucléiques représentés par SEQ ID NO: 1, d'un analogue ou d'un fragment de ladite séquence d'acides aminés, ou (ii) de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre de biomarqueur d'un état d'hydratation de la peau, et en particulier de la peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée. Au sens de l'invention, on entend par « biomarqueur », une molécule ou l'activité d'une molécule, dont la présence, la teneur ou le degré d'activité est caractéristique d'un processus biologique, physiologique ou pathologique, ou de l'impact ou de l'effet induit par l'administration d'un agent actif ou d'un traitement physique sur un tel processus. Au sens de l'invention, on entend désigner par « peau » l'ensemble de l'épiderme d'un corps humain, y compris le cuir chevelu et les lèvres. Plus particulièrement, la peau considérée dans la présente invention est de préférence les lèvres, la peau du visage, du décolleté, des bras ou des jambes, et de manière préférée, la peau du visage et/ou du décolleté. De manière inattendue, au cours d'une étude de protéomique comparative par Western Blot, les inventeurs ont observé à partir de protéines extraites de strippings vernis de populations présentant différents degrés d'hydratation cutanée que la Dermcidine (ou DCD) se révélait être un biomarqueur sensible et spécifique de la peau sèche. Plus précisément, les inventeurs ont observé que le taux d'expression de la Dermcidine, et plus particulièrement d'un peptide identifié par la séquence SEQ ID NO: 14 était systématiquement diminué dans les peaux sèches par rapport aux peaux normalement hydratées. A la connaissance des inventeurs, cette protéine antimicrobienne de la surface cutanée n'a jamais été classée comme variant au cours de la sécheresse de la peau et encore moins comme l'un des biomarqueurs les plus pertinents ressortant de ce type d'études. Il est connu que la Dermcidine est une protéine sudoripare (Schittek, Hipfel et al., 2001), mais la sécheresse cutanée est un phénomène complexe qui n'est pas systématiquement associé à un déficit sudoripare. En revanche, les données expérimentales obtenues par les inventeurs montrent de façon surprenante et inattendue qu'il existe un déficit spécifique d'expression net et/ou une maturation excessive de la DCD dans la sécheresse cutanée. There is still a need for new assets or treatments for the prevention and / or treatment of dry skin or signs of skin dryness. There is still a need for new cosmetic targets for the care of the skin, in particular to promote and / or enhance the hydration of the skin and in particular for the prevention and / or treatment of dry skin or signs of skin. cutaneous dryness. The object of the present invention is to satisfy these needs. Thus, according to one of its first objects, the present invention relates to the use (i) of at least one amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, an analogue or a fragment of said amino acid sequence, or (ii) of said nucleic acid sequence, as a biomarker of a state of hydration of the skin, and in particular of dry skin and / or signs of dry skin. For the purposes of the invention, the term "biomarker" means a molecule or the activity of a molecule, the presence, content or degree of activity of which is characteristic of a biological, physiological or pathological process, or the impact or effect of administering an active agent or physical treatment on such a process. For the purposes of the invention, the term "skin" refers to the entire epidermis of a human body, including the scalp and lips. More particularly, the skin considered in the present invention is preferably the lips, the skin of the face, décolleté, arms or legs, and preferably the skin of the face and / or décolleté. Unexpectedly, in a Western blot comparative proteomics study, the inventors observed from proteins extracted from varnished strippings from populations with different degrees of skin hydration that Dermcidin (or DCD) was found to be a biomarker. sensitive and specific to dry skin. More specifically, the inventors have observed that the level of expression of Dermcidine, and more particularly of a peptide identified by the sequence SEQ ID NO: 14 was systematically decreased in dry skin compared to the normally hydrated skin. To the inventors' knowledge, this cutaneous surface antimicrobial protein has never been classified as varying during dryness of the skin and even less as one of the most relevant biomarkers emerging from this type of study. Dermcidin is known to be a sudoriparous protein (Schittek, Hipfel et al., 2001), but skin dryness is a complex phenomenon that is not systematically associated with a sudoriparous deficit. On the other hand, the experimental data obtained by the inventors show, surprisingly and unexpectedly, that there is a specific deficit in net expression and / or excessive maturation of DCD in cutaneous dryness.
Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour cribler des agents actifs ou des traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques et destinés à favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. De manière préférée, de tels agents actifs ou traitements physiques peuvent être destinés à prévenir et/ou traiter la peau sèche et/ou les signes de sécheresse cutanée. According to yet another of its objects, the present invention relates to the use (i) of at least one amino acid sequence of the invention, or (ii) a nucleic acid sequence of the invention, for screening active agents or physical treatments capable of modulating the activity, expression or maturation of said amino acid sequence or said nucleic acid sequence and intended to promote and / or enhance the hydration of the skin. Preferably, such active agents or physical treatments may be intended to prevent and / or treat dry skin and / or signs of dry skin.
Au sens de l'invention on entend par « expression » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa teneur ou la variation de sa teneur par rapport à une référence. For the purposes of the invention, the term "expression" with respect to an amino acid sequence, for example a protein or a peptide, or a nucleic acid sequence, for example an mRNA, its content or the variation of its content with respect to a reference.
Au sens de l'invention on entend par « maturation » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, les modifications qui suivent leur synthèse dans un environnement cellulaire. Par exemple, dans le cas d'une séquence d'acides aminés, on entend par « maturation », les modifications post-traductionnelles, telle la glycosylation ou la farnésylation de certains acides aminés, ou les étapes protéolytiques conduisant à l'élimination de séquences dites « signal » ou « sécrétoire » ou à la libération de séquences présentant des propriétés biologiques particulières. Dans le cas d'une séquence d'acides nucléiques, on entend par « maturation », par exemple, l' épissage alternatif d'un ARNm. Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, l'activité biologique de la séquence d'acides aminés, le cas échéant après maturation, telle qu'une activité enzymatique, une activité d'agoniste ou d'antagoniste vis-à-vis d'un récepteur, ou d'activateur ou d'inhibiteur d'une enzyme, une activité dite de « structure », ou une activité antimicrobienne. For the purposes of the invention, the term "maturation" with respect to an amino acid sequence, for example a protein or a peptide, or a nucleic acid sequence, for example an mRNA, the modifications who follow their synthesis in a cellular environment. For example, in the case of an amino acid sequence, "maturation" is understood to mean post-translational modifications, such as the glycosylation or the farnesylation of certain amino acids, or the proteolytic steps leading to the elimination of sequences. so-called "signal" or "secretory" or the release of sequences with particular biological properties. In the case of a nucleic acid sequence, the term "maturation" is understood to mean, for example, the alternative splicing of an mRNA. Within the meaning of the invention, the term "activity", with respect to an amino acid sequence, for example a protein or a peptide, the biological activity of the amino acid sequence, where appropriate after maturation, such as enzymatic activity, receptor agonist or antagonist activity, or enzyme activator or inhibitor, so-called "structure" activity, or antimicrobial activity.
Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa traduction. Selon un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'une quantité efficace (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre d'agent actif pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. Within the meaning of the invention, the term "activity" refers to a nucleic acid sequence, for example an mRNA, its translation. According to another of its objects, the present invention relates to the use (i) of at least one amino acid sequence of the invention, or (ii) at least one nucleic acid sequence of the invention , to characterize the effectiveness of a cosmetic treatment of dry skin and / or signs of dry skin. According to yet another of its objects, the present invention relates to the cosmetic use of an effective amount (i) of at least one amino acid sequence of the invention, or (ii) at least one sequence of nucleic acids of the invention, or (iii) at least one agent modulating the activity, expression or maturation of said amino acid sequence or said nucleic acid sequence, active agent to promote and / or enhance the hydration of the skin.
De manière préférée, une utilisation de l'invention peut être dédiée à prévenir et/ou traiter la peau sèche et/ou les signes de sècheresse cutanée. Au sens de la présente invention, on entend par « quantité efficace » d'un composé de l'invention, une quantité suffisante et nécessaire de ce composé pour obtenir un effet recherché, et plus particulièrement un effet cosmétique ou de soin à l'égard de l'hydratation de la peau, et en particulier de la peau sèche et/ou des signes de sècheresse cutanée. Au sens de l'invention, on entend par « prévenir », le fait de réduire le risque de survenue ou de ralentir la survenue d'un phénomène donné, à savoir dans la présente 10 invention, la peau sèche et/ou les signes de sècheresse cutanée. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne un procédé pour caractériser un état d'hydratation de la peau, et en particulier une peau sèche et/ou des signes cutanés de sècheresse, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, dans un échantillon isolé d'une peau, une mesure qualitative ou 15 quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence. Selon la différence observée entre la mesure obtenue et la mesure de référence, la peau sera qualifiée de peau normalement hydratée ou de peau sèche. 20 Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne un procédé de criblage d'agents actifs ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention et destinés à favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau sèche, comprenant au moins les étapes consistant à : 25 a) disposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques dans des conditions propices à l'activité, l'expression ou la maturation desdites séquences, b) mettre en contact ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un agent actif à tester, ou exposer ladite séquence 30 d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec un traitement physique à tester, c) effectuer une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et d) comparer ladite mesure à une mesure de référence. Preferably, a use of the invention may be dedicated to preventing and / or treating dry skin and / or signs of cutaneous dryness. Within the meaning of the present invention, the term "effective amount" of a compound of the invention, a sufficient and necessary amount of this compound to obtain a desired effect, and more particularly a cosmetic effect or care with regard to hydration of the skin, and in particular of dry skin and / or signs of cutaneous dryness. Within the meaning of the invention, the term "prevent" means reducing the risk of occurrence or slowing down the occurrence of a given phenomenon, namely in the present invention, dry skin and / or signs of cutaneous dryness. According to yet another of its objects, the present invention relates to a method for characterizing a state of hydration of the skin, and in particular dry skin and / or cutaneous signs of drought, comprising at least the steps of: a) performing, in an isolated sample of a skin, a qualitative or quantitative measure of the expression, the maturation or the activity of said amino acid sequence or said nucleic acid sequence, and b) compare said measurement carried out in step a) to a reference measurement. Depending on the difference observed between the measurement obtained and the reference measurement, the skin will be described as normally hydrated skin or dry skin. According to yet another of its objects, the present invention relates to a method for screening active agents or physical treatments capable of modulating the activity, expression or maturation of an amino acid sequence of the invention. or a nucleic acid sequence of the invention for promoting and / or enhancing the hydration of dry skin, comprising at least the steps of: a) disposing of said amino acid sequence or said sequence nucleic acid under conditions conducive to the activity, expression or maturation of said sequences, b) contacting said amino acid sequence or said nucleic acid sequence with at least one active agent to be tested, or exposing said amino acid sequence or said nucleic acid sequence with a physical treatment to be tested; c) performing a qualitative or quantitative measurement of the expression, maturation or activity of said nucleic acid sequence; quence of amino acids or said nucleic acid sequence; and d) comparing said measurement with a reference measurement.
Selon la différence observée entre la mesure obtenue et la mesure de référence, le composé ou le traitement physique criblé seront caractérisés ou non comme étant utiles pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. Selon un mode de réalisation préféré, des actifs utiles pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau pourront être mis en oeuvre à l'égard de la prévention et/ou du traitement de la peau sèche. Depending on the difference observed between the measurement obtained and the reference measurement, the compound or the physical treatment screened will be characterized or not as being useful for promoting and / or enhancing the hydration of the skin. According to a preferred embodiment, active agents that promote and / or enhance the hydration of the skin may be used for the prevention and / or treatment of dry skin.
Selon un mode préféré de réalisation, un procédé ou une utilisation conforme à l'invention peuvent être mis en oeuvre in vivo, in vitro, ou ex vivo, et de manière plus préférée encore in vitro ou ex vivo. La présente invention a pour avantage de proposer un nouveau biomarqueur sensible et spécifique de l'hydratation de la peau, et en particulier de la peau sèche ou des signes de sécheresse cutanée. L'observation de la présence de la Dermcidine dans le stratum corneum rend avantageusement possible une détermination quantitative ou qualitative de l'expression ou de l'activité de cette protéine, ou des peptides correspondant, par simple prélèvement topique. According to a preferred embodiment, a method or a use in accordance with the invention may be carried out in vivo, in vitro, or ex vivo, and even more preferably in vitro or ex vivo. The present invention has the advantage of providing a new biomarker sensitive and specific to the hydration of the skin, and in particular dry skin or signs of dry skin. The observation of the presence of Dermcidin in the stratum corneum advantageously makes possible a quantitative or qualitative determination of the expression or the activity of this protein, or the corresponding peptides, by simple topical sampling.
La méthode de prélèvement peut par exemple être une technique de type stripping consistant à appliquer sur l'épiderme considéré une portion de ruban adhésif. En décollant ce ruban adhésif, une fraction de la surface de la peau est prélevée. Après extraction protéique, celle-ci peut être ensuite analysée par des méthodes conventionnelles, telles que le dosage immuno-enzymatique ELISA ou la méthode de protéomique différentielle iTRAQ, ou plus particulièrement par une analyse Western-Biot telle que définie ci-après. Egalement, la présente invention a pour avantage de pouvoir mettre à disposition un nouveau biomarqueur convenant au criblage de nouveaux agents actifs ou de nouveaux traitements physiques utiles pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. De manière préférée, de tels agents ou traitement peuvent convenir à la prévention et/ou au traitement de la peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée. The sampling method may for example be a stripping type of technique to apply to the epidermis considered a portion of adhesive tape. By peeling off this tape, a fraction of the surface of the skin is removed. After protein extraction, this can then be analyzed by conventional methods, such as the enzyme immunoassay ELISA or the differential proteomic method iTRAQ, or more particularly by Western-Biot analysis as defined below. Also, the present invention has the advantage of being able to provide a new biomarker suitable for screening new active agents or new physical treatments useful for promoting and / or enhancing the hydration of the skin. Preferably, such agents or treatment may be suitable for preventing and / or treating dry skin and / or signs of dry skin.
Egalement, selon un autre avantage, la présente invention permet de proposer de nouveaux agents actifs utiles pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. De manière préférée, de tels agents ou traitement peuvent convenir à la prévention et/ou au traitement des peaux sèches et/ou des signes de sécheresse cutanée. Also, according to another advantage, the present invention makes it possible to propose new active agents that are useful for promoting and / or enhancing the hydration of the skin. Preferably, such agents or treatment may be suitable for the prevention and / or treatment of dry skin and / or signs of dry skin.
Séquences d'acides aminés et d'acides nucléiques La Dermcidine ou Preproteolysin (DCD) est une protéine de 110 acides aminés (SEQ ID NO: 9) comportant un peptide signal de 19 acides aminés (SEQ ID NO: 12) dont le gène est localisé sur le chromosome 12, locus 12813.1. Deux isoformes de cette protéine sont recensées, l'une plus courte, isoforme 1 (SEQ ID NO: 8), l'autre plus longue, isoforme 2 (SEQ ID NO: 9). Elle est secrétée dans la sueur (Schittek, Hipfel et al. 2001). Après clivage du peptide signal, la Dermcidine (DCD) est une protéine de 90 acides aminés selon la séquence SEQ ID NO: 14. Après une maturation post-traductionnelle protéolytique, essentiellement par la Cathepsine D, qui a lieu dans la sueur (Baechle, Flad et al., 2006), ce précurseur protéique donne naissance à la DCD-1 (SEQ ID NO: 15) et à la DCD-1L (SEQ ID NO:16) ainsi qu'à de nombreux peptides dont la longueur varie de 25 à 48 aa (Flad, Bogumil et al., 2002). Sauf indication contraire, le terme « Dermcidine » vise à désigner dans la présente demande les séquences d'acides aminés représentées par SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 1l, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO : 15 et SEQ ID NO: 16, ayant, ou non, subi une maturation post-traductionnelle. Selon un mode de réalisation préféré, on entend désigner par Dermcidine plus particulièrement la séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO: 14. Amino Acid and Nucleic Acid Sequences Dermcidine or Preproteolysin (DCD) is a 110 amino acid protein (SEQ ID NO: 9) having a 19 amino acid signal peptide (SEQ ID NO: 12) whose gene is located on chromosome 12, locus 12813.1. Two isoforms of this protein are identified, one shorter, isoform 1 (SEQ ID NO: 8), the other longer, isoform 2 (SEQ ID NO: 9). It is secreted in sweat (Schittek, Hipfel et al., 2001). After cleavage of the signal peptide, Dermcidine (DCD) is a protein of 90 amino acids according to the sequence SEQ ID NO: 14. After a proteolytic post-translational processing, essentially by Cathepsin D, which takes place in sweat (Baechle, Flad et al., 2006), this protein precursor gives rise to DCD-1 (SEQ ID NO: 15) and DCD-1L (SEQ ID NO: 16) as well as to many peptides whose length varies from 25 to 48 aa (Flad, Bogumil et al., 2002). Unless otherwise indicated, the term "Dermcidin" is intended to mean in this application the amino acid sequences represented by SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 and SEQ ID NO: 16, whether or not undergoing post-translational processing. According to a preferred embodiment, Dermcidine is more particularly referred to as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14.
Parmi les peptides issus de la maturation de la Dermcidine, comme décrit dans US 2008/020976, certains montrent des activités antimicrobiennes contre différents microorganismes, tel que Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, ou Candida albicans. Les peptides antimicrobiens sont dérivés de la partie C-terminale de la protéine. Among the peptides derived from the maturation of Dermcidin, as described in US 2008/020976, some show antimicrobial activities against various microorganisms, such as Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, or Candida albicans. The antimicrobial peptides are derived from the C-terminal portion of the protein.
La partie N-terminale de la protéine (SEQ ID NO: 13) est constituée d'un facteur biologiquement actif favorisant la survie cellulaire (Cunningham, Hodge et al. 1998). The N-terminal portion of the protein (SEQ ID NO: 13) consists of a biologically active factor promoting cell survival (Cunningham, Hodge et al., 1998).
Cette protéine est exprimée de façon constitutive dans la glande sudoripare (Rieg, Garb et al. 2004), et est impliquée dans les voies de signalisation de type PI3K/AKT/mTOR particulièrement importante dans les phénomènes de prolifération et de survie cellulaire (Moreira, Strauss et al. 2008). La diminution de la DCD observée dans la sueur des individus souffrant d'atopie pourrait expliquer en partie leur susceptibilité microbienne (Rieg, Steffen et al. 2005). Certains des fragments antimicrobiens ainsi que de la partie N-terminale sont capables de stimuler la production de cytokines/chemokines par des kératinocytes ou d'autres types cellulaires l'impliquant dans la régulation de l'immunité cutanée (Watchorn, Dowidar et al. 2005 ; Niyonsaba, Suzuki et al. 2009). Il a récemment été proposé l'utilisation de la DCD comme un marqueur spécifique particulièrement sensible de la présence de traces de sueur par RT-PCR ou par ELISA utilisable dans le domaine médico-légal (Sakurada, Akutsu et al. 2009). This protein is constitutively expressed in the sweat gland (Rieg, Garb et al., 2004), and is implicated in particularly important PI3K / AKT / mTOR signaling pathways in cell proliferation and survival (Moreira, Strauss et al., 2008). The decrease in DCD observed in the sweat of individuals with atopy could partly explain their microbial susceptibility (Rieg, Steffen et al., 2005). Some of the antimicrobial and N-terminal fragments are capable of stimulating the production of cytokines / chemokines by keratinocytes or other cell types involved in the regulation of cutaneous immunity (Watchorn, Dowidar et al., 2005). Niyonsaba, Suzuki et al., 2009). The use of DCD has recently been proposed as a particularly sensitive specific marker for the presence of sweat traces by RT-PCR or ELISA for use in the forensic field (Sakurada, Akutsu et al., 2009).
Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être codée par une séquence d'acides nucléiques représentées par SEQ ID NO: 1, ou être un analogue ou un fragment de cette séquence d'acides aminés. Par « analogue d'une séquence d'acides aminés » conforme à l'invention, on entend désigner toute séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 % avec ladite séquence, et une activité biologique de même nature. Par « activité biologique de même nature » à l'égard d'une séquence d'acides aminés selon l'invention, on entend les propriétés antimicrobiennes ou de stimulation de la survie et/ou de la prolifération cellulaire habituellement attribuées à la Dermcidine. According to one embodiment, an amino acid sequence suitable for the invention may be encoded by a nucleic acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or be an analogue or a fragment of this amino acid sequence. By "analogue of an amino acid sequence" according to the invention is meant any amino acid sequence having a sequence identity of at least 85%, preferably at least 90%, and more. preferably at least 95% with said sequence, and a biological activity of the same nature. By "biological activity of the same nature" with respect to an amino acid sequence according to the invention is meant the antimicrobial or stimulation properties of the survival and / or cell proliferation usually attributed to Dermcidin.
L'identité de séquence peut être déterminée par comparaison visuelle ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut. Un analogue conforme à l'invention peut être un agent peptidomimétique. Sequence identity can be determined by visual comparison or by any computer tool commonly used in the domain, such as BLAST programs available at www.ncbi.nlm.nih.gov and used with default settings. An analogue according to the invention may be a peptidomimetic agent.
Un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore d'un épissage alternatif. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. Avantageusement, un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à cette séquence d'acides aminés. A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105). Une séquence d'acides aminés ou un analogue de celle-ci visé par la présente invention peut être une séquence d'acides aminés ayant subi une ou plusieurs maturation(s) post-traductionnelle(s). Par « maturation(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'une séquence d'acides aminés est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou de type clivage à l'intérieur de la séquence peptidique. Un analogue d'une séquence d'acides aminés présente, par ailleurs, sensiblement la même activité biologique que cette séquence d'acides aminés. An analogue of an amino acid sequence of the invention may result from modifications resulting from mutation or variation in the sequences of the peptides according to the invention either from the deletion or from the insertion of one or more amino acids either the substitution of one or more amino acids or alternatively splicing. Many of these changes can be combined. Advantageously, an analogue of an amino acid sequence of the invention may comprise conservative substitutions with respect to this amino acid sequence. By way of example of mutations which may be considered in the present invention, it may be mentioned, in a non-exhaustive manner, the replacement of one or more amino acid residues by amino acid residues having a subscript. similar hydropathic without substantially affecting the biological properties of the polypeptide. The hydropathic index is an index attributed to amino acids as a function of their hydrophobicity and charge (Kyte et al (1982) J. Mol Biol., 157: 105). An amino acid sequence or an analogue thereof targeted by the present invention may be an amino acid sequence having undergone one or more post-translational processing (s). By "post-translational processing (s)" is intended to encompass all the modifications that an amino acid sequence is likely to undergo at the end of its synthesis in a cell, such as, for example, a or phosphorylation (s), thiolation (s), acetylation (s), glycosylation (s), lipidation (s), such as farnesylation or palmitoylation, rearrangement Disulfide-type and / or cleavage-type structural bonding within the peptide sequence. An analogue of an amino acid sequence has, moreover, substantially the same biological activity as this amino acid sequence.
Il est par ailleurs connu qu'une séquence primaire d'acides aminés, peut comprendre des sites spécifiquement reconnus par des enzymes de type protéase, telles que la trypsine, qui, une fois la reconnaissance de ces sites effective vont induire le clivage de la séquence par protéolyse. Cette protéolyse résulte en la génération de divers peptides, ou fragments de séquences d'acides aminés de l'invention. It is moreover known that a primary amino acid sequence may comprise sites specifically recognized by protease-type enzymes, such as trypsin, which, once the recognition of these effective sites will induce the cleavage of the sequence by proteolysis. This proteolysis results in the generation of various peptides, or fragments of amino acid sequences of the invention.
En conséquence, l'invention s'étend également aux fragments de la Dermcidine, issus le cas échéant de sa protéolyse. Consequently, the invention also extends to fragments of Dermcidin, possibly resulting from its proteolysis.
Au sens de l'invention, on entend par « fragment d'une séquence d'acides aminés » toute portion de la séquence d'acides aminés conforme à l'invention comprenant de 3 à 48 acides aminés consécutifs de ladite séquence, de préférence de 6 à 36, de préférence 8 à 32, et plus préférentiellement de 10 à 30 acides aminés consécutifs de ladite séquence, et a une activité biologique de même nature. Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 9 à 16, notamment parmi SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celle-ci, Selon un mode de réalisation préférée, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, un analogue, ou un fragment de celle-ci. De manière préférée encore, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 ou SEQ ID NO: 16, un analogue ou un fragment de celle-ci. De préférence, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentés par une séquence choisie parmi, 20 SEQ ID NO: 14, un analogue ou un fragment de celle-ci. Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut également être une séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenue après lyse enzymatique ou chimique de la Dermcidine ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, comme 25 par exemple la peau, exprimant naturellement cette séquence d'acides aminés ou après transfection de celui-ci, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore toute séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement une séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants et les analogues. 30 L'homme de l'art peut obtenir une séquence d'acides aminés conforme à l'invention au moyen de procédés à base d'ADN recombinant, comme par exemple, ceux décrits dans le manuel « Molecular Cloning - A Laboratory Manual » (2éme édition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook). Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut également être une séquence d'acides aminés telle que définie précédemment, fusionnée avec une autre séquence d'acides aminés, un agent de ciblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bio-conversion, un agent de marquage luminescent, radioactif ou colorimétrique. De manière non limitative, on peut citer comme exemple de composés susceptibles d'être couplés à une séquence d'acides aminés conforme à l'invention des protéines fluorescentes comme la « Green Fluorescent Protein », des composés chimiques fluorescents, tels que la rhodamine, la fluorescéine, ou le Texas Red®, des composés phosphorescents, des éléments radioactifs, tels que 3H 14C 35S 1211 ou 125I, ou des agents de marquage colorimétrique comme les substrats chromogènes sensibles à l'action de la galactosidase, de la peroxydase, de la chloramphénicol acétyltransférase, de la luciférase ou de la phosphatase alcaline. Selon la nature des composés susceptibles d'être couplés avec une séquence d'acides aminés de l'invention, le couplage peut être opéré par des procédés chimiques, notamment au moyen de fonctions chimiques réactives ou par des procédés de biologie moléculaire connus de l'homme de l'art. Within the meaning of the invention, the term "fragment of an amino acid sequence" means any portion of the amino acid sequence according to the invention comprising from 3 to 48 consecutive amino acids of said sequence, preferably from 6 to 36, preferably 8 to 32, and more preferably 10 to 30 consecutive amino acids of said sequence, and has a biological activity of the same kind. According to one embodiment, an amino acid sequence that is suitable for the invention may be an amino acid sequence represented by a sequence chosen from SEQ ID NO: 9 to 16, in particular from SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO: 11, an analogue, or a fragment thereof, According to a preferred embodiment, an amino acid sequence suitable for the invention may be an amino acid sequence represented by a sequence selected from SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, an analogue, or a fragment thereof. Still more preferably, an amino acid sequence suitable for the invention may be an amino acid sequence represented by a sequence chosen from SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 or SEQ ID NO: 16, an analogue or a fragment thereof. Preferably, an amino acid sequence suitable for the invention may be an amino acid sequence represented by a sequence selected from SEQ ID NO: 14, an analogue or a fragment thereof. According to another embodiment, a polypeptide that is suitable for the invention may also be a natural or synthetic amino acid sequence, which may optionally be obtained after enzymatic or chemical lysis of Dermcidine or by chemical or biological synthesis, or by extraction from a biological tissue, such as for example the skin, naturally expressing this amino acid sequence or after transfection thereof, as well as the various post-translational forms thereof, or any sequence of natural or synthetic amino acids whose sequence completely or partially comprises a aforementioned amino acid sequence, for example variants and analogs. Those skilled in the art can obtain an amino acid sequence according to the invention by means of recombinant DNA methods, such as, for example, those described in the manual "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" ( 2nd edition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook). According to another embodiment, an amino acid sequence that is suitable for the invention may also be an amino acid sequence as defined above, fused with another amino acid sequence, a hydrophilic or hydrophobic targeting agent, a bio-conversion precursor, a luminescent, radioactive or colorimetric labeling agent. Without limitation, examples of compounds that may be coupled to an amino acid sequence according to the invention include fluorescent proteins such as "Green Fluorescent Protein", fluorescent chemical compounds, such as rhodamine, fluorescein, or Texas Red®, phosphorescent compounds, radioactive elements, such as 3H 14C 35S 1211 or 125I, or colorimetric labeling agents such as chromogenic substrates sensitive to the action of galactosidase, peroxidase, chloramphenicol acetyltransferase, luciferase or alkaline phosphatase. Depending on the nature of the compounds capable of being coupled with an amino acid sequence of the invention, the coupling may be carried out by chemical methods, in particular by means of reactive chemical functions or by molecular biological methods known to the art. skilled in the art.
Avantageusement, une séquence d'acides aminés de l'invention peut être codée par une séquence d'acides nucléiques choisie parmi une séquence représentée par SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, un analogue ou un fragment de celle-ci. Advantageously, an amino acid sequence of the invention may be encoded by a nucleic acid sequence selected from a sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, an analogue or fragment thereof.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également des séquences d'acides nucléiques codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention et leur mise en oeuvre dans les différentes utilisations et procédés conformes à l'invention. Ainsi, la présente invention se rapporte également à une séquence d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques, représentée par SEQ ID NO: 1, un analogue ou un fragment de celle-ci. Au sens de la présente invention, on entend par « fragment de séquence d'acides nucléiques », une séquence d'acides nucléiques comprenant de 9 à 144 paires de bases consécutives de ladite séquence, de préférence de 18 à 108, de préférence 24 à 96, et plus préférentiellement de 30 à 90 paires de bases consécutives de ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. According to one embodiment, the present invention also relates to nucleic acid sequences coding for an amino acid sequence of the invention and their use in the various uses and processes according to the invention. Thus, the present invention also relates to a nucleic acid sequence, in particular of deoxyribonucleic acids, or of ribonucleic acids, represented by SEQ ID NO: 1, an analogue or a fragment thereof. For the purposes of the present invention, the term "nucleic acid sequence fragment" means a nucleic acid sequence comprising from 9 to 144 consecutive base pairs of said sequence, preferably from 18 to 108, preferably 24 to 96, and more preferably from 30 to 90 consecutive base pairs of said sequence, and encoding an amino acid sequence having a biological activity of the same nature as the amino acid sequence encoded by said sequence.
Au sens de la présente invention, on entend par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques » une séquence d'acides nucléiques ayant une identité de séquence d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 % avec ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. For the purposes of the present invention, the term "nucleic acid sequence analogue" means a nucleic acid sequence having a sequence identity of at least 85%, preferably at least 90%, and more. preferably at least 95% with said sequence, and coding for an amino acid sequence having a biological activity of the same nature as the amino acid sequence encoded by said sequence.
Par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques », on entend désigner une séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour une séquence d'acides aminés conforme à l'invention, notamment tel que défini précédemment. Selon un mode de réalisation préféré, une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 et SEQ ID NO: 8, un analogue ou un fragment de celle-ci. Une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes, tels que par exemple virus, phages, ou bactéries entre autres, ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine. Selon un mode de réalisation, l'invention se rapporte également aux séquences d'acides nucléiques isolées et purifiées codant pour une séquence d'acides aminés considérés selon l'invention, ainsi qu'à leurs analogues et fragments. Une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut comprendre une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à une séquence codant pour un polypeptide conforme à l'invention. L'invention a également pour objet des séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides ribonucléiques ou désoxyribonucléiques, comprenant une séquence sens ou anti-sens, notamment « small interferent RNA » (siRNA), correspondant au moins à une séquence codant pour un polypeptide de l'invention ou une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, un analogue ou un fragment de celle-ci. By "analog of a nucleic acid sequence" is meant a nucleic acid sequence, possibly resulting from the degeneracy of the nucleic acid code, and coding for an amino acid sequence according to the invention, in particular as defined above. According to a preferred embodiment, a nucleic acid sequence of the invention may be represented by a sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ. ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 8, an analogue or fragment thereof. A nucleic acid sequence of the invention may be of any possible origin, namely either animal, in particular mammalian and even more particularly human, either plant, or micro-organisms, such as for example viruses, phages, or bacteria, among others, or fungi, without prejudging the fact that they are naturally present or not in said original organism. According to one embodiment, the invention also relates to the isolated and purified nucleic acid sequences coding for an amino acid sequence considered according to the invention, as well as to their analogs and fragments. A nucleic acid sequence according to the invention may comprise a sense, antisense or interferential sequence corresponding to a sequence coding for a polypeptide according to the invention. The subject of the invention is also nucleic acid sequences, in particular of ribonucleic or deoxyribonucleic acids, comprising a sense or antisense sequence, in particular "small interferent RNA" (siRNA), corresponding at least to a sequence coding for a polypeptide of the invention or a nucleic acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, an analogue or a fragment thereof.
Hydratation de la peau - peau sèche et signes de sécheresse cutanée On entend par « hydratation de la peau », l'ensemble des mécanismes cellulaires et moléculaires qui conduisent à assurer et à maintenir la présence d'une quantité d'eau physiologique dans l'épiderme et le derme, ainsi que la quantité d'eau résultante. Hydration of the skin - dry skin and signs of skin dryness "Skin hydration" is understood to mean all the cellular and molecular mechanisms that lead to ensuring and maintaining the presence of a quantity of physiological water in the skin. epidermis and dermis, as well as the resulting amount of water.
Selon un aspect, l'invention vise à maintenir voire à stimuler l'homéostasie de ces mécanismes, et ainsi à favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. Ainsi, selon un aspect, l'invention s'adresse aux peaux présentant un état hydraté physiologique, également qualifié de normal. Selon un autre aspect, l'invention vise à restaurer l'équilibre ou à réduire le 15 risque de survenue d'un déséquilibre dans l'homéostasie de ces mécanismes, et ainsi prévenir et/ou traiter la peau sèche et/ou les signes de sécheresse cutanée. Par « peau sèche », on entend un état général de la peau résultant d'un déficit en eau de l'épiderme et/ou du derme. Par « signes de sécheresse cutanée », on entend toutes les modifications de 20 l'aspect de la peau dues à un déficit en eau dans l'épiderme et/ou le derme. Selon le degré de manifestation du déficit en eau de la peau, une peau sèche peut apparaître rugueuse au toucher, ridée, voire couverte de squames. Une peau sèche peut se manifester, pour l'essentiel, par une sensation de tiraillements et/ou de tension. Une peau sèche peut se manifester par un trouble de la desquamation et 25 présenter différents stades en fonction de la sévérité de cette desquamation. Lorsque la peau est légèrement sèche, ces squames sont abondantes mais peu visibles à l'oeil nu, l'élimination s'effectue cornéocyte par cornéocyte. Elles sont de moins en moins nombreuses mais de plus en plus visibles à l'oeil nu lorsque ce désordre s'aggrave, les amas peuvent comprendre plusieurs centaines de cornéocytes, représentant 30 ainsi des amas plus ou moins grands, appelées squames. According to one aspect, the invention aims to maintain or even stimulate the homeostasis of these mechanisms, and thus to promote and / or enhance the hydration of the skin. Thus, in one aspect, the invention is directed to skins having a physiological hydrated state, also known as normal. According to another aspect, the invention aims at restoring the equilibrium or at reducing the risk of occurrence of an imbalance in the homeostasis of these mechanisms, and thus preventing and / or treating dry skin and / or signs of cutaneous dryness. By "dry skin" is meant a general condition of the skin resulting from a water deficiency of the epidermis and / or dermis. By "signs of skin dryness" is meant any changes in the appearance of the skin due to water deficiency in the epidermis and / or dermis. Depending on the degree of manifestation of water deficit in the skin, dry skin may appear rough to the touch, wrinkled or even covered with scales. Dry skin can be manifested, for the most part, by a feeling of tightness and / or tension. Dry skin may manifest as a desquamation disorder and exhibit different stages depending on the severity of this desquamation. When the skin is slightly dry, these scales are abundant but not very visible to the naked eye, elimination corneocyte corneocyte. They are fewer in number but more and more visible to the naked eye when this disorder worsens, the clusters may include several hundred corneocytes, thus representing more or less large clusters, called dander.
La sécheresse cutanée peut être constitutionnelle ou acquise. Cutaneous dryness can be constitutional or acquired.
Dans le cas de la peau sèche constitutionnelle, on peut distinguer deux catégories : les peaux pathologiques et les peaux non pathologiques. In the case of constitutional dry skin, two categories can be distinguished: pathological skin and non-pathological skin.
Les peaux sèches constitutionnelles pathologiques sont essentiellement représentées par la dermatite atopique et les ichthyoses. Elles sont quasiment indépendantes des conditions extérieures et ont pour origine des modifications génétiques connues ou inconnues. Parmi les modifications génétiques connues affectant l'hydratation cutanée on peut citer par exemple des modifications du gène de la Transglutaminase-1 ou celles du gène de la Filaggrine. The constitutional dry pathological skins are essentially represented by atopic dermatitis and ichthyoses. They are almost independent of external conditions and originate from known or unknown genetic modifications. Known genetic modifications affecting cutaneous hydration include, for example, modifications of the Transglutaminase-1 gene or those of the Filaggrin gene.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne une composition pharmaceutique ou dermatologique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable une quantité efficace (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter les peaux sèches constitutionnelles pathologiques choisies parmi la dermatite atopique et les ichtyoses. According to one embodiment, the present invention relates to a pharmaceutical or dermatological composition comprising in a physiologically acceptable medium an effective amount (i) of at least one amino acid sequence of the invention, or (ii) at least one a nucleic acid sequence of the invention, or (iii) at least one agent modulating the activity, expression or maturation of said amino acid sequence or said nucleic acid sequence as an active agent for preventing and / or treating pathological constitutional dry skin selected from atopic dermatitis and ichthyosis.
Dans le cas des peaux sèches constitutionnelles non pathologiques, la sévérité de l'état de sécheresse peut, pour sa part, dépendre de facteurs extérieurs. Rentrent dans cette catégorie de peau, la peau sénile (caractérisée par une diminution générale du métabolisme cutané avec l'âge), la peau fragile (très sensible aux facteurs extérieurs et souvent accompagnée d'érythème et de rosacée) et la xérose vulgaire (d'origine génétique probable et se manifestant en priorité sur le visage, les membres et le dos des mains). In the case of non-pathological constitutional dry skin, the severity of the drought condition may, in turn, depend on external factors. Included in this skin category are senile skin (characterized by a general decrease in cutaneous metabolism with age), fragile skin (very sensitive to external factors and often accompanied by erythema and rosacea) and vulvar xerosis (d probable genetic origin and manifesting itself primarily on the face, limbs and back of the hands).
Dans le cas de peau sèche acquise, l'intervention de paramètres extérieurs tels que l'exposition aux agents chimiques, à des conditions climatiques difficiles, aux rayons solaires ou bien encore certains traitements thérapeutiques (rétinoïdes, par exemple) est déterminante. Sous ces influences extérieures, l'épiderme peut devenir alors momentanément et localement sec. Cela peut concerner tout type d'épiderme. In the case of acquired dry skin, the intervention of external parameters such as exposure to chemical agents, difficult climatic conditions, solar rays or even certain therapeutic treatments (retinoids, for example) is crucial. Under these external influences, the epidermis can then become momentarily and locally dry. This can affect any type of epidermis.
Quelle qu'en soit l'origine, une peau atteinte de sécheresse cutanée peut présenter, généralement, les signes suivants : aspect rugueux au toucher et écailleux, ainsi qu'une souplesse et une élasticité diminuées. Regardless of the origin, a skin with dryness of the skin may present, generally, the following signs: roughness to the touch and scaly, as well as reduced flexibility and elasticity.
La peau sèche, également dénommée « xérose », peut apparaître à n'importe quel âge, et n'être pas liée à une condition pathologique. On parlera dans ce cas de sécheresse « acquise ». Cependant, la xérose devient plus fréquente et gênante avec l'âge, notamment chez les femmes. On parle alors de xérose sénile. Par ailleurs, les femmes subissent généralement une aggravation de l'assèchement cutané lors de la ménopause, probablement du fait du dérèglement hormonal caractéristique de ce phénomène. Les zones les plus affectées sont la partie inférieure des jambes, la partie dorsale des avant-bras et les mains. Dry skin, also called "xerosis", can appear at any age, and not be linked to a pathological condition. We will speak in this case of "acquired" drought. However, xerosis becomes more common and troublesome with age, especially in women. This is called senile xerosis. In addition, women usually experience a worsening of skin dryness during menopause, probably due to the hormonal imbalance characteristic of this phenomenon. The most affected areas are the lower legs, the dorsal forearm and the hands.
Comme mentionné précédemment, la sécheresse acquise peut subir l'influence de facteurs extérieurs. Par exemple, l'apparition de la peau sèche peut être favorisée par un temps froid, sec et hivernal. On parle alors de xérose hivernale. La sécheresse cutanée peut également être induite par un stress exogène, d'origine chimique, par exemple de type détergent anionique, ou encore d'origine mécanique (frottement, rasage). As mentioned earlier, acquired drought can be influenced by external factors. For example, the appearance of dry skin can be promoted by cold, dry, and wintry weather. We are talking about winter xerosis. Skin dryness can also be induced by exogenous stress, of chemical origin, for example of the anionic detergent type, or else of mechanical origin (friction, shaving).
Selon un mode de réalisation, une utilisation cosmétique de l'invention peut avantageusement convenir pour prévenir et/ou traiter les peaux sèches séniles ou fragiles, ou la xérose, notamment choisie parmi la xérose vulgaire, la xérose sénile, et la xérose hivernale. Selon un mode de réalisation, une peau sèche considérée dans l'invention peut 20 être en particulier une peau jeune. Bien qu'aucune étude n'ait démontré une incidence de la sécheresse sur l'origine et la formation des rides et ridules qui sont essentiellement attribuables au vieillissement, sur le plan visuel, une peau sèche rend celles-ci plus apparentes. Une peau sèche peut donc être une peau jeune ou âgée présentant des rides ou ridules. Les rides et 25 ridules consécutives à la sécheresse cutanée ne sont donc pas associées au vieillissement cutané. Par ailleurs, sur le plan sensoriel, la sécheresse cutanée est caractérisée par une sensation de tiraillements et/ou de démangeaisons. Pour des raisons évidentes, ces manifestations sont non seulement source d'inconforts, voire de douleurs, mais également 30 d'une apparence inesthétique. According to one embodiment, a cosmetic use of the invention may advantageously be suitable for preventing and / or treating senile or fragile dry skin, or xerosis, in particular chosen from xerosis vulgaris, senile xerosis, and winter xerosis. According to one embodiment, a dry skin considered in the invention may be in particular a young skin. Although no studies have shown that dryness has an impact on the origin and formation of fine lines and wrinkles that are mainly due to aging, on the visual side dry skin makes them more noticeable. Dry skin can therefore be young or aged skin with wrinkles or fine lines. Wrinkles and fine lines resulting from cutaneous dryness are therefore not associated with skin aging. In addition, on the sensory level, skin dryness is characterized by a feeling of tightness and / or itching. For obvious reasons, these manifestations are not only a source of discomfort, even pain, but also of an unsightly appearance.
Selon un mode de réalisation, une utilisation cosmétique de l'invention peut avantageusement convenir pour prévenir et/ou traiter les sensations de tiraillements et/ou de démangeaisons associées aux peaux sèches. A titre d'exemple de signes de sécheresse cutanée considérés dans l'invention, on peut citer la peau flétrie, le manque d'élasticité, de souplesse et/ou de tonus de la peau, le toucher rugueux, la présence de crevasse, la desquamation, la présence d'écailles, ou les rides et ridules associées à la peau sèche. Les signes de sécheresse cutanée considérés sont également toutes les modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié, comme par exemple toutes les dégradations internes de la peau, et plus particulièrement la dégradation des fibres d'élastine, ou fibres élastiques, consécutives à un assèchement du derme. According to one embodiment, a cosmetic use of the invention may advantageously be suitable to prevent and / or treat feelings of tightness and / or itching associated with dry skin. By way of example of signs of cutaneous dryness considered in the invention, mention may be made of skin that is withered, lack of elasticity, suppleness and / or tone of the skin, rough touch, the presence of crevices, desquamation, the presence of scales, or wrinkles and fine lines associated with dry skin. The signs of cutaneous dryness considered are also all internal changes in the skin that do not always result in a modified external appearance, such as, for example, all internal skin damage, and more particularly the degradation of elastin fibers, or elastic fibers, following drying of the dermis.
Biomarqueur La présente invention concerne l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, à titre de biomarqueur d'un état d'hydratation de la peau, et plus particulièrement de la peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée. Selon un mode de réalisation, une diminution de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être indicative d'une peau en déficit d'hydratation, et plus particulièrement d'une peau sèche et/ou de signes de sécheresse cutanée. La présente invention concerne, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée. Selon un mode de réalisation, une augmentation de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être indicative d'un traitement cosmétique efficace pour exercer un effet bénéfique sur la peau en déficit d'hydratation, et plus préférentiellement un effet à l'égard de la peau sèche et/ou de signes de sécheresse cutanée. Biomarker The present invention relates to the use of at least one amino acid sequence of the invention, or at least one nucleic acid sequence of the invention, as a biomarker of a hydration state. skin, and more particularly dry skin and / or signs of skin dryness. According to one embodiment, a decrease in the activity, expression or maturation of said biomarker may be indicative of a skin deficient in hydration, and more particularly of a dry skin and / or signs of cutaneous dryness. The present invention relates, in another of its aspects, to the use of at least one amino acid sequence of the invention, or at least one nucleic acid sequence of the invention, to characterize the effectiveness of a cosmetic treatment of dry skin and / or signs of skin dryness. According to one embodiment, an increase in the activity, the expression or the maturation of said biomarker may be indicative of an effective cosmetic treatment to exert a beneficial effect on the skin in the absence of hydration, and more preferentially a effect on dry skin and / or signs of skin dryness.
Dans une utilisation conforme à l'invention, une diminution ou une augmentation de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être déterminée par comparaison à une mesure de référence obtenue selon toute méthode connue de l'homme de l'art. In a use according to the invention, a decrease or an increase of the activity, the expression or the maturation of said biomarker can be determined by comparison with a reference measurement obtained according to any method known to man of the 'art.
Une « mesure de référence » au regard d'un paramètre donné, est une mesure qualitative ou quantitative de ce paramètre effectuée dans des conditions dites « contrôles » ou « normales », par exemple déterminée dans un échantillon de référence, ou déterminée dans un échantillon en l'absence d'un traitement présumé avoir un effet sur le paramètre. Par exemple, une mesure de référence pour une séquence d'acides aminés ou une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon de peau jeune, physiologiquement saine et normalement hydratée, ou déterminée dans un échantillon de peau sèche, avant un traitement cosmétique. A "reference measurement" for a given parameter, is a qualitative or quantitative measure of this parameter carried out under so-called "control" or "normal" conditions, for example determined in a reference sample, or determined in a sample in the absence of a treatment alleged to have an effect on the parameter. For example, a reference measurement for an amino acid sequence or a nucleic acid sequence according to the invention may be a quantitative or qualitative value relating to the expression, the maturation or the activity of said sequences determined in a skin sample young, physiologically healthy and normally hydrated, or determined in a sample of dry skin, before a cosmetic treatment.
De préférence, une mesure de référence est une mesure statistique, c'est à dire ayant été répétée sur différents échantillons de sorte à obtenir une moyenne. La mesure de référence peut être effectuée parallèlement ou séquentiellement à la mesure test. Elle peut également être une mesure « historique », c'est-à-dire effectuée 20 antérieurement à la mesure test, et stockée, par exemple dans une base de données, en vue d'une utilisation ultérieure. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant au paramètre mesuré, par exemple la diminution ou 25 l'augmentation l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention. Une telle information peut être ultérieurement mise en oeuvre pour déterminer le caractère normalement hydraté ou sec d'une peau. Un procédé selon l'invention peut également être effectué sur un échantillon de 30 peau, prélevé à partir d'un modèle cellulaire épidermique, ou d'une peau isolée reconstruite afin d'en qualifier l'état. Preferably, a reference measurement is a statistical measurement, that is to say having been repeated on different samples so as to obtain an average. The reference measurement can be performed in parallel or sequentially with the test measurement. It can also be a "historical" measure, that is to say done prior to the test measurement, and stored, for example in a database, for later use. A comparison of the test measurement with a reference measurement, and an observation of a deviation or no deviation between the two measurements, makes it possible to derive information as to the measured parameter, for example the decrease or the increase. the expression, the processing or the activity of an amino acid sequence or a nucleic acid sequence according to the invention. Such information may subsequently be used to determine the normally hydrated or dry nature of a skin. A method according to the invention may also be performed on a skin sample taken from an epidermal cell model, or a reconstructed isolated skin to qualify the condition.
Selon un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé, en particulier in vitro ou ex vivo, pour caractériser un état d'hydratation de la peau. Un procédé de l'invention permet avantageusement de caractériser un état sec de la peau et/ou des signes de sécheresse cutanée. According to one embodiment, the invention relates to a method, in particular in vitro or ex vivo, for characterizing a state of hydration of the skin. A method of the invention advantageously allows to characterize a dry state of the skin and / or signs of dry skin.
Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne un procédé cosmétique, ou non thérapeutique, en particulier in vitro ou ex vivo, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée, chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant la mise en oeuvre du traitement cosmétique, dans un premier échantillon de peau isolé prélevé chez ledit individu, au moins une première mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, b) effectuer, après la mise en oeuvre du traitement cosmétique, dans un second échantillon de peau isolé prélevé chez ledit individu, au moins une seconde mesure, qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés de l'invention ou de ladite séquence d'acides nucléiques de l'invention, et c) comparer les première et deuxième mesures, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins de la mise en oeuvre du traitement cosmétique. According to another embodiment, the invention relates to a cosmetic or non-therapeutic method, in particular in vitro or ex vivo, for characterizing the effectiveness of a cosmetic treatment of dry skin and / or signs of cutaneous dryness, in an individual in need, comprising at least the steps of: a) performing, before carrying out the cosmetic treatment, in a first isolated skin sample taken from said individual, at least a first qualitative or quantitative measure of the expression, maturation or activity of an amino acid sequence of the invention or a nucleic acid sequence of the invention, b) performing, after the cosmetic treatment is carried out, in a second isolated skin sample taken from said individual, at least a second, qualitative or quantitative measure of the expression, the maturation or the activity of said amino acid sequence of the invention or of said nucleic acid sequence of the invention, and c) comparing the first and second measurements, in particular in order to deduce information relating to an effect at least from the implementation of the cosmetic treatment.
Il va de soit que les mesures effectuées aux étapes a) et b) doivent être comparables l'une à l'autre, et donc être relatives au même paramètre. De manière préférée, un procédé de l'invention permet de mettre en évidence un effet d'un traitement cosmétique susceptible de faire régresser la peau sèche et/ou les signes de sécheresse cutanée. It goes without saying that the measurements made in steps a) and b) must be comparable to one another, and therefore be relative to the same parameter. Preferably, a method of the invention makes it possible to demonstrate an effect of a cosmetic treatment that can make the dry skin and / or the signs of dryness of the skin regress.
La mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre d'exemple de méthodes convenant à l'invention, il peut être fait mention de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR), quantitative (Q-PCR) ou non, en présence ou non de transcriptase inverse (RT-PCR ou Q-RT-PCR), du Northern-blot, de la méthode « ribonuclease protection assay », des méthodes avec des puces à ADN, des méthodes avec des puces transcriptomiques, des méthodes avec des puces à oligonucléotides, des méthodes d'hybridation in situ. A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, et en particulier d'une séquence d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides nucléiques marquées pouvant s'hybrider à une séquence d'acides nucléiques de l'invention. Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute méthode connue de l'homme de l'art. Ainsi, les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent être utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou anti-sens, qui s'hybrident dans des conditions de forte stringence à au moins une des séquences SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, un analogue ou un fragment celle-ci. L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut également être déterminée, de manière indirecte, par la détermination de l'expression de la séquence d'acides aminées codée par ladite séquence, au moyen de toute technique connue dans le domaine, telle que le Western-Biot, l'ELISA, la méthode de BRADFORD ou de LOWRY, ou comme indiqué ci-après. La mesure qualitative ou quantitative, de l'expression, de la maturation, ou de 20 l'activité d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être effectuée au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre de méthodes de détection de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de 25 type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d'Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l'immunofluorescence, de l'absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d'énergie par résonance de 30 fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery alter photobleaching/recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d'AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques, des méthodes mettant en oeuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d'anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse, des méthodes de spectrométrie de type SELDI-TOF (Ciphergen). The qualitative or quantitative measurement of the expression, the maturation or the activity of a nucleic acid sequence of the invention can be determined by any method known to those skilled in the art. By way of example of methods that are suitable for the invention, mention may be made of the polymerase chain reaction (PCR), quantitative (Q-PCR) or not, in the presence or absence of reverse transcriptase (RT-PCR or Q-RT-PCR), Northern-blot, ribonuclease protection assay, microarray methods, transcriptomic chip methods, oligonucleotide microarray methods, hybridization methods if you. By way of example of agents suitable for the detection of a nucleic acid sequence of the invention, and in particular of an mRNA sequence, mention may be made of labeled nucleic acid probes which can be hybridizing to a nucleic acid sequence of the invention. Such a nucleic acid probe can be easily obtained by any method known to those skilled in the art. Thus, the nucleic acid sequences according to the invention can be used to produce sense and / or antisense oligonucleotide primers, which hybridize under conditions of high stringency to at least one of the sequences SEQ ID NO: 1 , SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, an analogue or fragment thereof. this. The expression of a nucleic acid sequence may also be determined, indirectly, by determining the expression of the amino acid sequence encoded by said sequence, by means of any technique known in the art, such as Western-Biot, ELISA, BRADFORD or LOWRY method, or as indicated below. The qualitative or quantitative measurement, expression, maturation, or activity of an amino acid sequence of the invention may be carried out by any method known to those skilled in the art. . As methods for detecting the expression, the maturation, or the activity of an amino acid sequence, mention may be made of Western blot, blot-blot, dot-blot, single or multiplexed Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay (ELISA) methods, proteomics or glycomic methods, staining polypeptides in a silver-based dye polyacrylamide gel, Coomassie blue, or SYPRO, immunofluorescence, UV absorption, immunohistochemical methods in conventional electron or confocal microscopy, FRET (fluorescence resonance energy transfer), TR-FRET methods (time resolved FRET / FRET in time resolution), fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) methods, FSPIM methods (fluorescence spectral imaging microscopy / spectrum microscopy imaging) fluorescence recovery), fluorescence recovery alter photobleaching (FRAP) methods, reporter gene methods, atomic force microscopy (AFM) methods, surface plasmon resonance methods , microcalorimetry methods, flow cytometry methods, biosensor methods, radioimmunoassay (RIA) methods, isoelectric focusing methods, and enzymatic tests, methods using peptide chips, sugar chips, antibody chips, mass spectrometry methods, SELDI-TOF spectrometry methods (Ciphergen).
De façon plus générale, des méthodes de dosage immunoenzymatiques à partir de solutions de protéines, plus quantitatives et sensibles peuvent en particulier être utilisées. Ces méthodes de type ELISA associent des couples d'anticorps de capture et de détection spécifique de l'antigène ciblé. Des anticorps commerciaux ou des anticorps polyclonaux, monoclonaux ou recombinants développés spécifiquement peuvent être utilisés. Des techniques ELISA multiplexes de grande capacité peuvent également être mises en oeuvre. On peut ainsi citer l'approche multiplexe de type anticorps sur billes Luminex (par exemple Bioplex de Bio-Rad), de type anticorps sur surface plane (« antibodies-arrays ») (par exemple approche proposée par la société MesoScale Discovery). More generally, immunoenzymatic assay methods from more quantitative and sensitive protein solutions can in particular be used. These ELISA methods combine couples of capture antibodies and specific detection of the targeted antigen. Specifically developed commercial or polyclonal, monoclonal or recombinant antibodies can be used. High capacity multiplexed ELISA techniques can also be implemented. It is thus possible to mention the Luminex antibody-type multiplexed approach (for example Bioplex from Bio-Rad), of the antibody-on-flat surface type ("antibodies-arrays") (for example, an approach proposed by MesoScale Discovery).
En particulier, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée. Un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement ou détectable par réaction avec un autre réactif. Par « anticorps », on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et qui peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure enzymatique ou chimique d'anticorps intact. Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'outil d'évaluation d'un état d'un épiderme peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans « Antibodies: A Laboratory Manual », Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990). In particular, it may be advantageous to detect the expression of an amino acid sequence of the invention by means of an antibody, where appropriate in a labeled form. Such an antibody can be labeled with a directly detectable or detectable substance by reaction with another reagent. By "antibodies" is generally meant monoclonal or polyclonal antibodies, as well as immunoglobulin fragments capable of binding an antigen and which may be produced by any genetic engineering technique known to those skilled in the art. by enzymatic or chemical cleavage of intact antibody. An antibody that can be used as a skin condition assessment tool can be obtained by any method known to those skilled in the art, as described in "Antibodies: A Laboratory Manual". , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1990).
Selon un mode de réalisation préféré, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'une méthode protéomique différentiel « iTRAQ ». Selon un mode de réalisation préféré, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'un Western Blot. De telles méthodes sont connues de l'homme de l'art et peuvent avantageusement être mises en oeuvre comme décrit dans les exemples ci-après. De manière particulière, par « activité » à l'égard d'une séquence d'acides aminés de l'invention on entend une activité antimicrobienne, une activité de stimulation de la survie cellulaire, une activité de stimulation de la prolifération cellulaire, ou une activité de réduction ou de prévention de la peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée, comme indiqué ci-dessus. Une telle activité peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, comme par exemple, par évaluation de la prolifération ou de la survie de cellules épidermiques en cultures, telles que des kératinocytes, ou par évaluation de l'activité antimicrobienne sur des bactéries en culture, telles que Staphylococcus aureus ou Escherichia coli. De manière préférée, la détermination d'un état d'hydratation de la peau ou la caractérisation de l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau sèche peuvent être effectuées par mesure de la variation de l'expression d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 ou SEQ ID NO: 16, un analogue ou un fragment de celle-ci. According to a preferred embodiment, it may be advantageous to detect the expression of an amino acid sequence of the invention by means of a differential proteomic method "iTRAQ". According to a preferred embodiment, it may be advantageous to detect the expression of an amino acid sequence of the invention by means of a Western blot. Such methods are known to those skilled in the art and may advantageously be implemented as described in the examples below. In particular, the term "activity" with respect to an amino acid sequence of the invention means an antimicrobial activity, an activity for stimulating cell survival, an activity for stimulating cell proliferation, or a activity of reducing or preventing dry skin and / or signs of skin dryness, as indicated above. Such activity can be determined by any method known to those skilled in the art, such as, for example, by evaluating the proliferation or survival of epidermal cells in cultures, such as keratinocytes, or by evaluating the activity. antimicrobial on cultured bacteria, such as Staphylococcus aureus or Escherichia coli. Preferably, the determination of a state of hydration of the skin or the characterization of the effectiveness of a cosmetic treatment of the dry skin can be carried out by measuring the variation of the expression of a sequence of amino acids of the invention, and preferably represented by a sequence selected from SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 or SEQ ID NO: 16, an analogue or a fragment thereof.
Les procédés de l'invention sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne nécessite pas de recourir à une technique invasive. Un échantillon d'épiderme peut ainsi être obtenu par des techniques dites de « stripping » et directement analysé par une technique d'analyse conventionnelle connue de l'homme de l'art. Ces strippings sont des surfaces collantes appliquées à la surface de l'épiderme comme le Blenderm de 3M, le D'squam (adhésif commercial de CuDERM), la colle cyanoacrylate ou la méthode du « stripping » vernis. Grâce à ces « strippings », les cornéocytes adhérents et le contenu de leurs espaces intercellulaires peuvent être prélevés et soumis par la suite à une extraction permettant d'avoir accès au contenu protéique. Le prélèvement d'un échantillon convenant à un procédé de l'invention peut aussi être effectué de façon plus directe par « lavages » de la surface cutanée, au moyen par exemple d'accessoires de type turbine à ailette, de type cellule à spirale telle que décrit dans le brevet FR 2 667 778 associée à un circuit fluidique, ou simplement par ajout/prélèvement d'une goutte de tampon à la surface de la peau. A titre indicatif, d'autres méthodes de prélèvement adaptées à la mise en oeuvre de l'invention peuvent être mentionnées, telles que des méthodes par grattage de la partie supérieure du stratum corneum au moyen d'un système bilames. Cette technique permet de recueillir des squames qui peuvent ensuite être directement analysés par différentes techniques pour déterminer les taux en minéraux, aminoacides ou lipides. Avantageusement, un des marqueurs de l'invention peut être mise en oeuvre à des fins de sélection préclinique, plus efficace et plus rigoureuse, d'individus, en vue d'évaluer l'efficacité de traitement ou d'actif cosmétique pour le soin de la peau sèche. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut avantageusement être mis en oeuvre comme indiqué précédemment pour évaluer l'efficacité d'un agent actif, in vitro, ex vivo ou in vivo à l'égard d'un déficit d'hydratation de la peau, ou des peaux sèches ou des signes de sécheresse cutanée. The methods of the invention are particularly advantageous in that their implementation does not require the use of an invasive technique. An epidermis sample can thus be obtained by so-called "stripping" techniques and directly analyzed by a conventional analysis technique known to those skilled in the art. These strippings are tacky surfaces applied to the surface of the epidermis such as 3M's Blenderm, D'squam (commercial adhesive from CuDERM), cyanoacrylate glue or the "stripping" varnish method. Thanks to these "strippings", adherent corneocytes and the contents of their intercellular spaces can be removed and subsequently subjected to an extraction allowing access to the protein content. Sampling of a sample suitable for a process of the invention may also be carried out more directly by "washing" the skin surface, for example by means of turbine-type propellers such as spiral cells. as described in patent FR 2,667,778 associated with a fluid circuit, or simply by adding / removing a drop of buffer on the surface of the skin. As an indication, other sampling methods adapted to the implementation of the invention may be mentioned, such as scraping methods of the upper part of the stratum corneum by means of a bimetallic system. This technique allows the collection of scales that can then be directly analyzed by different techniques to determine the levels of minerals, amino acids or lipids. Advantageously, one of the markers of the invention can be used for purposes of preclinical selection, more effective and more rigorous, of individuals, with a view to evaluating the effectiveness of treatment or cosmetic active for the care of dry skin. Also, a biomarker of the invention may advantageously be used as indicated above to evaluate the efficacy of an active agent, in vitro, ex vivo or in vivo, with respect to a deficit in hydration of the skin. , or dry skin or signs of dry skin.
Egalement, un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre pour établir un conseil personnalisé d'un traitement cosmétique pour un individu en fonction de son profil d'expression de biomarqueurs cutanés. Also, a biomarker of the invention can be used to establish a personalized advice of a cosmetic treatment for an individual according to its expression profile of cutaneous biomarkers.
Criblage Selon un de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'une séquence d'acides aminés, d'acides nucléiques de l'invention, pour cribler ou dans un procédé de criblage, en particulier in vitro ou ex vivo, d'agents actifs ou de traitements physiques, convenant particulièrement au soin de la peau et destinés à favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. Screening According to one of its aspects, the present invention relates to the use of an amino acid sequence, of nucleic acids of the invention, for screening or in a screening method, in particular in vitro or ex vivo, of active agents or physical treatments, particularly suitable for the care of the skin and intended to promote and / or enhance the hydration of the skin.
Les agents actifs ou les traitements physiques criblés peuvent notamment convenir au soin de la peau sèche, et/ou à la prévention et/ou au traitement des signes de sécheresse cutanée. The active agents or the screened physical treatments may in particular be suitable for the care of dry skin, and / or for the prevention and / or treatment of the signs of cutaneous dryness.
Une utilisation ou un procédé de l'invention peuvent comprendre la comparaison d'une mesure de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acide aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention à une mesure de référence. A use or a method of the invention may comprise comparing a measurement of the activity, expression or processing of an amino acid sequence or nucleic acid sequence according to the invention. invention to a reference measurement.
Une mesure de référence peut être telle que définie précédemment. En particulier une mesure de référence peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon en l'absence d'agent actif ou de traitement physique testé. Ainsi, une mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes d'un procédé de l'invention, et notamment les étapes a), b) et c) d'un procédé de l'invention tel que défini précédemment, en l'absence de composés biologiques ou chimiques, ou de traitements physiques à tester. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant à l'effet de l'agent actif ou du traitement physique testé. La détermination quantitative ou qualitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être effectuée par toute méthode connue de l'homme de l'art, et notamment comme décrit précédemment. A reference measurement may be as previously defined. In particular, a reference measurement may be a quantitative or qualitative value relative to the expression, the maturation or the activity of said sequences determined in a sample in the absence of active agent or physical treatment tested. Thus, a reference measurement can be obtained by repeating the steps of a method of the invention, and in particular steps a), b) and c) of a method of the invention as defined above, in the absence of biological or chemical compounds, or physical treatments to be tested. A comparison of the test measurement with a reference measurement, and an observation of a deviation or absence of deviation between the two measurements, makes it possible to draw information as to the effect of the active agent or the physical treatment. tested. The quantitative or qualitative determination of the expression, the maturation or the activity of an amino acid sequence or of a nucleic acid sequence of the invention may be carried out by any method known to man of art, and especially as described above.
Selon un mode de réalisation, le criblage d'un agent actif ou d'un traitement physique susceptible de moduler l'activité d'une séquence d'acides aminées de l'invention peut se faire par mesure de l'activité ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ladite d'une séquence d'acides aminées, tel que par exemple un système de gène reporteur. Selon un mode de réalisation, un procédé de l'invention peut être mis en oeuvre dans un système acellulaire, i.e. dans un système ne comprenant pas de cellules mais reproduisant des fonctions cellulaires, ou dans un échantillon cellulaire isolé. Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé, un échantillon acellulaire, sur une séquence d'acides aminés isolée ou sur une séquence d'acides nucléiques isolée de l'invention, obtenus par biopsie cutanée, à partir de cellules en culture, notamment à partir d'un modèle épidermique, ou d'un prélèvement de surface cutané non-invasif, notamment par adhésif (« tape-stripping ») de stratum corneum ou par simple lavage, comme décrit précédemment. Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire convenant à l'invention, on peut mentionner un échantillon de kératinocytes ou tout autre type cellulaire de la peau exprimant une séquence d'acides aminés de l'invention. De manière préférée, le criblage d'un agent actif ou d'un traitement physique peut être effectuée par mesure de la variation de l'expression, en présence et en absence de l'agent actif ou du traitement physique criblé, d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, ou SEQ ID NO: 16, un analogue ou un fragment de celle-ci. According to one embodiment, the screening of an active agent or a physical treatment capable of modulating the activity of an amino acid sequence of the invention can be done by measuring the activity or the expressing a target molecule belonging to the signaling or metabolism pathways in which may be involved said of an amino acid sequence, such as for example a reporter gene system. According to one embodiment, a method of the invention can be implemented in a cell-free system, i.e. in a system not comprising cells but reproducing cellular functions, or in an isolated cell sample. A method according to the invention can be carried out on an isolated cell sample, an acellular sample, an isolated amino acid sequence or an isolated nucleic acid sequence of the invention, obtained by cutaneous biopsy, from cells in culture, in particular from an epidermal model, or a non-invasive skin surface sample, in particular by stratum corneum tape-stripping or by simple washing, as previously described. Advantageously, as a cellular sample that is suitable for the invention, there may be mentioned a sample of keratinocytes or any other cell type of the skin expressing an amino acid sequence of the invention. Preferably, the screening of an active agent or a physical treatment can be carried out by measuring the variation of the expression, in the presence and absence of the active agent or the screened physical treatment, of a sequence of amino acids of the invention, and preferably represented by a sequence selected from SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, or SEQ ID NO: 16, an analogue or a fragment thereof.
Agent modulateur Au sens de la présente invention, on entend par « agent modulateur » ou « agent actif ou un traitement physique susceptible de moduler l'expression, la maturation ou l'activité d'une séquence d'acides aminées ou d'une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention», tout composé ou phénomène physique susceptible d'agir, directement ou indirectement, sur au moins une séquence d'acides aminées ou une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention, ou sur un élément d'une voie de signalisation intra ou extra-cellulaire, ou d'une voie métabolique, ou de régulation de la transcription et/ou de la traduction impliquant ladite séquence d'acides aminées ou ladite séquence d'acides nucléiques. Au sens de l'invention, on entend par « moduler », au regard d'un effet donné, l'action de stimuler ou d'inhiber cet effet. Les agents actifs ou les traitements physiques issus d'un criblage selon l'invention peuvent être avantageusement utilisés à des fins cosmétiques, notamment au regard de l'hydratation de la peau, et en particulier de la peau sèche ou des signes de sécheresse cutanée. Modulating agent For the purposes of the present invention, the term "modulating agent" or "active agent or a physical treatment capable of modulating the expression, the maturation or the activity of an amino acid sequence or of a sequence nucleic acids according to the invention ", any compound or physical phenomenon capable of acting, directly or indirectly, on at least one amino acid sequence or a nucleic acid sequence in accordance with the invention, or on a element of an intra or extracellular signaling pathway, or a metabolic pathway, or transcriptional and / or translational regulation involving said amino acid sequence or said nucleic acid sequence. For the purposes of the invention, the term "modulate", with respect to a given effect, the action of stimulating or inhibiting this effect. The active agents or the physical treatments resulting from a screening according to the invention can be advantageously used for cosmetic purposes, in particular with regard to the hydration of the skin, and in particular dry skin or signs of dry skin.
Selon un mode de réalisation, un agent actif de à l'invention peut être un agent stimulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminées de l'invention. According to one embodiment, an active agent of the invention may be a stimulating agent for the activity, expression or maturation of an amino acid sequence of the invention.
En particulier, un agent stimulateur peut être choisi parmi choisi parmi un lysat de Bifidobacterium sp. et un mélange composé d'un lysat de Bifidobacterium sp. et de phytosphingosine-salicylate. De manière préféré un lysat de Bifidobacterium sp. peut être un lysat de Bifidobacterium longum. Un lysat de Bifidobacterium longum convenant à l'invention peut être le lysat enregistré sous le nom INCI : Bifidat ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N° 306-168-4, et sous le N° CAS : N° 96507-89-0. Un tel lysat est notamment commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH. In particular, a stimulating agent may be chosen from among a lysate of Bifidobacterium sp. and a mixture of a lysate of Bifidobacterium sp. and phytosphingosine-salicylate. Preferably, a lysate of Bifidobacterium sp. may be a lysate of Bifidobacterium longum. A lysate of Bifidobacterium longum suitable for the invention may be the lysate registered under the name INCI: Bifidat ferments Lysate, under the name EINECS: Bifidobacterium longum, under the EINECS No.: No. 306-168-4, and under the N ° CAS: N ° 96507-89-0. Such a lysate is sold, for example, under the name Repair Complex CLR® by K. Richter GmbH.
Un mélange composé d'un lysat de Bifidobacterium sp. et de phytosphingosine-salicylate selon l'invention peut comprendre un lysat de Bifidobacterium longum tel que défini précédemment et un dérivé de phytosphingosine-salicylate. Un dérivé de phytosphingosine-salicylate convenant à l'invention peut être le dérivé commercialisé par la société EVONICK GOLDSCHMIDT sous la dénomination Phytosphingosine SLC®. Un mélange selon l'invention peut comprendre un lysat de Bifidobacterium sp. à raison de 10 % et un dérivé de phytosphingosine-salicylate à raison de 0,002 %. A titre d'agent modulateur susceptible d'être criblé selon une utilisation ou un procédé conforme à l'invention, on peut également mentionner les anticorps, ou les ARN interférents. A mixture composed of a lysate of Bifidobacterium sp. and phytosphingosine-salicylate according to the invention may comprise a lysate of Bifidobacterium longum as defined above and a phytosphingosine-salicylate derivative. A phytosphingosine-salicylate derivative that is suitable for use in the invention may be the derivative sold by the company Evonick GOLDSCHMIDT under the name Phytosphingosine SLC®. A mixture according to the invention may comprise a lysate of Bifidobacterium sp. at a rate of 10% and a phytosphingosine-salicylate derivative at a rate of 0.002%. As a modulating agent that can be screened according to a use or a process in accordance with the invention, mention may also be made of antibodies or interfering RNAs.
Compositions La présente invention concerne également des compositions, cosmétiques, pharmaceutiques ou dermatologiques, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un agent actif apte à moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques. Au sens de la présente invention, on entend désigner par « milieu physiologiquement acceptable », un milieu convenant à l'administration d'une composition par voie topique sur la peau, le cuir chevelu, ou les lèvres, ou par voie orale ou par voie parentérale, telle que la voie intradermique ou sous-cutanée. Compositions The present invention also relates to compositions, cosmetic, pharmaceutical or dermatological, comprising in a physiologically acceptable medium an effective amount of at least one amino acid sequence of the invention, or at least one nucleic acid sequence of the invention, or at least one active agent capable of modulating the activity, the expression or the maturation of said amino acid sequence or of said nucleic acid sequence. For the purposes of the present invention, the term "physiologically acceptable medium" is intended to mean a medium that is suitable for the administration of a composition topically to the skin, the scalp, or the lips, or orally or by the route. parenteral, such as the intradermal or subcutaneous route.
Une composition de l'invention peut contenir des adjuvants habituels dans le domaine considéré, tels que des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes. A composition of the invention may contain adjuvants customary in the field in question, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic additives, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, filters, absorbers odor and coloring matter.
Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. La quantité de séquence d'acides aminés, ou de séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'agent actif conformes à l'invention contenue dans une composition de l'invention, encore dite « quantité efficace » est, bien entendu, fonction de la nature de l'actif et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure. Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir une séquence d'acides aminés, ou une séquence d'acides nucléiques, ou un agent actif conformes à l'invention en une quantité représentant de 0,00001 % à 50 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 10 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Selon un autre mode de réalisation, une composition de l'invention peut comprendre, en outre, au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique additionnel. The amounts of the various constituents of the compositions according to the invention are those conventionally used in the fields under consideration. The amount of amino acid sequence, or nucleic acid sequence of the invention, or active agent according to the invention contained in a composition of the invention, also called "effective amount" is, of course depending on the nature of the asset and the effect sought and may therefore vary to a large extent. To give an order of magnitude, a composition may contain an amino acid sequence, or a nucleic acid sequence, or an active agent according to the invention in an amount representing from 0.00001% to 50% of the total weight of the composition, in particular in an amount representing from 0.001% to 10% of the total weight of the composition, and more particularly in an amount representing from 0.1% to 1% of the total weight of the composition. According to another embodiment, a composition of the invention may comprise, in addition, at least one additional active cosmetic and / or therapeutic agent.
Actifs additionnels Comme exemples d'agents actifs additionnels utilisables dans le cadre de la présente invention, il peut être fait mention d'huiles cosmétiques, telles que les huiles de silicone, les huiles végétales de type triglycérides, les huiles hydrocarbonées telles que l'huile de PARLEAM et les esters d'acides gras et d'alcool gras. Additional active ingredients As examples of additional active agents that can be used in the context of the present invention, mention may be made of cosmetic oils, such as silicone oils, vegetable oils of the triglyceride type, and hydrocarbon oils such as oil. PARLEAM and esters of fatty acids and fatty alcohol.
Il peut également être possible d'utiliser d'autres agents actifs permettant d'améliorer l'état de la peau et/ou de ses annexes, tels que des actifs anti-âges ou d'autres actifs hydratants ou humidifiants ou des agents actifs permettant d'améliorer la barrière lipidique naturelle, tels que des céramides, des sulfates de cholestérol et/ou des acides gras, et leurs mélanges. It may also be possible to use other active agents that make it possible to improve the state of the skin and / or its appendages, such as anti-aging active agents or other moisturizing or moisturizing agents or active agents that make it possible to improve the natural lipid barrier, such as ceramides, cholesterol sulphates and / or fatty acids, and mixtures thereof.
Il peut également être possible d'utiliser des enzymes ayant une activité sur la peau et/ou de ses annexes, telles que des protéases, des lipases, des glucosidases, des amidases, des cérébrosidases et/ou des mélanases, et leurs mélanges. It may also be possible to use enzymes having an activity on the skin and / or its annexes, such as proteases, lipases, glucosidases, amidases, cerebrosidases and / or melanases, and mixtures thereof.
Comme autres exemples d'agents actifs convenant à la mise en oeuvre de la présente invention figurent : des actifs analgésiques, des actifs anti-levures, des actifs antibactériens, des actifs antiparasitaires, des actifs antifongiques, des actifs antiviraux, des actifs anti-inflammatoires stéroïdiens, des actifs anesthésiques, des actifs antiprurigineux, des actifs kératolytiques, des actifs anti-radicaux libres, des actifs anti-séborrhéiques, des actifs antipelliculaires, des actifs anti-acnéiques, des actifs visant à prévenir le vieillissement de la peau et/ou à améliorer son état, des actifs anti-dermatites, des actifs anti-irritants, des actifs immuno-modulateurs, des actifs pour le traitement de la peau sèche, des actifs anti-transpirants, des actifs anti-psoriatiques, des actifs protecteurs contre les UV, des actifs antihistaminiques, des actifs cicatrisants, des actifs auto-bronzants, des antioxydants tels que le thé vert ou des fractions actives de celui-ci, la glycérine, la laponite, la caféine, des huiles essentielles aromatiques, des colorants, des actifs dépigmentants, des lipo-régulateurs, des actifs adoucissants, rafraîchissants, déodorants, insensibilisants, blanchissants, nourrissants, des actifs diminuant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée, et leurs mélanges. A titre d'actifs additionnels susceptibles de convenir plus particulièrement à l'invention, on peut mentionner également des microorganismes probiotiques, autres que ceux considérés dans le lysat précédemment décrit, des actifs prébiotiques, des actifs favorisant la synthèse de facteur de défense de la peau, des actifs permettant de rétablir l'équilibre différentiation/prolifération des cellules de l'épiderme, en particulier tels que des actifs de type retinol ou retinol-like, des actifs hydratants ou des actifs stimulant l'activité de protéase cutanée, notamment de la Cathepsine D. Other examples of active agents that are suitable for the implementation of the present invention include: analgesic active agents, anti-yeast active agents, antibacterial active agents, antiparasitic active agents, antifungal active agents, antiviral active agents, anti-inflammatory active agents steroidal agents, anesthetic active agents, antipruritic active ingredients, keratolytic active agents, anti-free radical active agents, anti-seborrhoeic active ingredients, anti-dandruff active ingredients, anti-acne active agents, active agents to prevent skin aging and / or to improve its condition, anti-dermatitis active agents, anti-irritant active ingredients, immunomodulatory active ingredients, active agents for the treatment of dry skin, antiperspirant active ingredients, anti-psoriatic active ingredients, protective active ingredients against UV, antihistamine active ingredients, healing active ingredients, self-tanning active ingredients, antioxidants such as green tea or active fractions thereof, l glycerine, laponite, caffeine, aromatic essential oils, dyes, depigmenting agents, lipo-regulators, softening, refreshing, deodorant, numbing, whitening, nourishing, active ingredients that reduce differentiation and / or proliferation and / or skin pigmentation, and mixtures thereof. As additional active agents that may be more particularly suitable for the invention, mention may also be made of probiotic microorganisms, other than those considered in the lysate previously described, of prebiotic active agents, active agents promoting the synthesis of skin defense factor. , agents that make it possible to restore the differentiation / proliferation equilibrium of the cells of the epidermis, in particular such as retinol-like or retinol-like active agents, moisturizing active agents or active agents stimulating cutaneous protease activity, in particular Cathepsin D.
Utilisation cosmétique La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et notamment un agent modulateur tel que défini précédemment, à titre d'agent actif pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau. Selon un mode de réalisation préférée, une utilisation de l'invention peut être dédiée à prévenir et/ou traiter une peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée. The present invention relates to the cosmetic use of an effective amount of at least one amino acid or nucleic acid sequence of the invention or at least one activity-modulating agent, of the expressing or maturing said amino acid sequence or said nucleic acid sequence, and in particular a modulating agent as defined above, as an active agent for promoting and / or enhancing the hydration of the skin. According to a preferred embodiment, a use of the invention may be dedicated to preventing and / or treating dry skin and / or signs of dry skin.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé cosmétique, ou non thérapeutique, pour favoriser et/ou renforcer l'hydratation de la peau, et de préférence pour prévenir et/ou traiter une peau sèche et/ou des signes de sécheresse cutanée, chez un individu en ayant besoin, le procédé comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'agent actif (i) au moins une séquence d'acides aminés de l'invention ou (ii) au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation desdites séquences de l'invention, notamment tels que définis ci-avant. According to another aspect, the present invention relates to a cosmetic process, or non-therapeutic, for promoting and / or strengthening the hydration of the skin, and preferably for preventing and / or treating dry skin and / or signs of dryness of the skin in an individual in need, the method comprising at least one step of administering to said individual at least one composition comprising as active agent (i) at least one amino acid sequence of the invention or (ii) ) at least one nucleic acid sequence of the invention, or (iii) at least one agent modulating the activity, expression or maturation of said sequences of the invention, in particular as defined above .
Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de conférer et/ou de restaurer un aspect hydraté et sain à la peau, se manifestant par une peau lisse, élastique, tonique, ou ferme, ou un teint lumineux. Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de prévenir et/ou de réduire la présence de squames, de rugosités, de crevasses, d'écailles et/ou de rides ou 15 ridules associées à la peau sèche ou en déficit d'hydratation. Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de renforcer les propriétés barrières de la peau. De manière préférée, un procédé de l'invention peut comprendre l'application par voie topique sur au moins une partie de la peau d'un individu en ayant besoin, en 20 particulier sur la peau du visage et/ou du décolleté, d'au moins une couche d'une composition topique de l'invention. Avantageusement, un procédé de l'invention par voie topique peut comprendre l'application sur la peau, et notamment sur la peau du visage, d'une composition de l'invention sous forme d'un masque. 25 Un procédé cosmétique par voie topique selon l'invention peut avantageusement comprendre l'application d'une composition de l'invention, en association de manière simultanée, successive ou séparée dans le temps avec une composition cosmétique ou dermatologique additionnelle distincte de la composition de l'invention et destinée au soin et/ou au maquillage de la peau. 30 Selon un autre mode de réalisation préféré, un procédé cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre par voie orale, notamment par administration d'au moins une composition alimentaire ou diététique à visée cosmétique. A method or a use of the invention makes it possible to confer and / or restore a hydrated and healthy appearance to the skin, manifesting itself in a smooth, elastic, toned or firm skin, or a luminous complexion. A method or a use of the invention makes it possible to prevent and / or reduce the presence of scales, roughnesses, crevices, scales and / or wrinkles or wrinkles associated with dry skin or lack of hydration. . A method or use of the invention enhances the barrier properties of the skin. Preferably, a method of the invention may comprise topically applying to at least a portion of the skin of an individual in need thereof, particularly to the skin of the face and / or décolleté, of at least one layer of a topical composition of the invention. Advantageously, a method of the invention topically may comprise the application on the skin, and in particular on the skin of the face, of a composition of the invention in the form of a mask. A topical cosmetic process according to the invention may advantageously comprise the application of a composition of the invention, in combination simultaneously, sequentially or separately in time with an additional cosmetic or dermatological composition distinct from the composition of the invention. the invention and intended for care and / or make-up of the skin. According to another preferred embodiment, a cosmetic process of the invention may be carried out orally, in particular by administration of at least one food or dietary composition for cosmetic purposes.
Selon un autre mode de réalisation préféré, un procédé cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre par voie parentérale. La mise en oeuvre par voie parentérale d'un procédé cosmétique de l'invention est effectuée à l'exclusion de toute intervention chirurgicale et ne vise qu'à exercer un traitement de surface de la peau à des fins esthétiques. Ainsi, un procédé cosmétique de l'invention par voie parentérale est mis en oeuvre par toute technique d'injection ou dispositif convenant à une injection intraépidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée. According to another preferred embodiment, a cosmetic process of the invention may be carried out parenterally. The parenteral use of a cosmetic process of the invention is carried out to the exclusion of any surgical intervention and is intended only to exert a surface treatment of the skin for aesthetic purposes. Thus, a cosmetic process of the invention parenterally is implemented by any injection technique or device suitable for intraepidermal injection and / or intradermal and / or subcutaneous.
Une telle administration peut être effectuée, par exemple, par mésothérapie. Un procédé cosmétique par voie parentérale ne se traduit donc que par une effraction superficielle de la peau et sort donc de tout cadre médical ou thérapeutique. Pour la voie parentérale, on pourra alternativement privilégier l'administration par patch à visée systémique. Such administration may be effected, for example, by mesotherapy. A cosmetic process parenterally is therefore translated only by a superficial break in the skin and therefore goes out of any medical or therapeutic setting. For the parenteral route, alternatively, systemic patch administration may be preferred.
Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre de façon journalière, par exemple à raison d'une administration unique par jour, ou d'une administration fractionnée en deux ou trois fois par jour, par exemple une fois le matin et une fois le soir. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre sur une période de temps variant d'une semaine à plusieurs semaines, voire plusieurs mois, cette période pouvant par ailleurs être répétée après des périodes de non traitement pendant plusieurs mois, voire plusieurs années. A titre d'exemple, de procédé cosmétique selon l'invention on peut prévoir une administration d'une composition de l'invention, par exemple, à raison de 1, 2 ou 3 fois par jour, ou plus, et généralement sur une durée prolongé d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d'interruption. A cosmetic process according to the invention may be carried out on a daily basis, for example on the basis of a single administration per day, or of a divided administration in two or three times a day, for example once in the morning and once in the morning. times in the evening. A cosmetic process according to the invention may be carried out over a period of time varying from one week to several weeks, or even several months, this period being able to be repeated after periods of non-treatment for several months or even several years. . By way of example, a cosmetic process according to the invention may be provided for administering a composition of the invention, for example, at a rate of 1, 2 or 3 times a day, or more, and generally over a period of time. extended by at least 4 weeks, or even 4 to 15 weeks, with one or more periods of interruption if necessary.
Figure 1 : représente la variation de l'expression de la Dermcidine (moyenne ± sem) mesurée par Western-Biot en fonction du degré d'hydratation de la peau. Figure 1: represents the variation of the expression of Dermcidin (average ± sem) measured by Western Biot according to the degree of hydration of the skin.
Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ». For the purposes of the present invention, "a" must be understood, unless otherwise indicated, in the sense of "at least one".
Les exemples et figures ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention. The examples and figures below are presented for illustrative and not limiting of the invention.
Exemple 1 Expression de la Dermcidine dans la peau 1- Matériels et méthodes a- Protocole Western-Biot La détection de l'expression de la Dermcidine (DCD) a été réalisée au moyen d'une méthode de Western-Biot. 10 Le principe de cette méthode est le suivant : les protéines sont séparées par migration électrophorétique sur un gel Critérion SDS-PAGE 10-20 % (Bio-Rad). Après un transfert semi-sec sur membrane PVDF, les protéines sont incubées dans une solution de blocage (TBS+ 0.1 %Tween+ 1 % lait) puis incubées avec l'anticorps primaire dirigé 15 contre la protéine d'intérêt pendant une nuit à 4 °C. Une seconde incubation avec l'anticorps secondaire (couplé à une peroxydase) dirigé contre l'anticorps primaire est effectuée pendant une heure à température ambiante. Selon le degré de sensibilité, différents kits sont utilisés pour la révélation : ECL, ECL+ ou ECL Advance (Amersham). L'image est acquise au F1uorSmax (Biorad) et 20 les bandes quantifiées à l'aide d'un logiciel Quantity-One (Biorad) Protéine Nature Anticorps Dilution Anticorps Détection Poids échantillons I II mol. calculé Dermcidine Dénaturé Sc- 1/100 IgG anti- ECL+ 9kDa 27466/poly Chèvre- 60sec HRP b- Prélèvement et traitement des échantillons cutanés 120 individus de sexe féminin, âgés de 18 à 70 ans, ont été sélectionnés pour 25 cette étude. Quatre zones par jambe ont été délimitées (jambe gauche externe/interne, jambe droite externe/interne). Les prélèvements sont réalisés par Stripping Vernis (site du bas de la jambe) selon le protocole décrit par Mehul et al., (J. Biol. Chem., 2000, 275(17):12841-7) 325 Pour cette étude, l'analyse est effectuée sur une zone : jambe gauche externe. Les échantillons issus des strippings vernis ont été utilisés pour l'analyse en Western Blot. Avant la réalisation des prélèvements, les types de peaux ont été caractérisés par un scorage clinique. EXAMPLE 1 Expression of Dermcidin in Skin 1- Materials and Methods a Western-Biot Protocol The detection of Dermcidine expression (DCD) was carried out using a Western-Biot method. The principle of this method is as follows: the proteins are separated by electrophoretic migration on a 10-20% SDS-PAGE criterion gel (Bio-Rad). After a semi-dry transfer on a PVDF membrane, the proteins are incubated in a blocking solution (TBS + 0.1% Tween + 1% milk) and then incubated with the primary antibody directed against the protein of interest overnight at 4 ° C. . A second incubation with the secondary antibody (peroxidase coupled) directed against the primary antibody is performed for one hour at room temperature. Depending on the degree of sensitivity, different kits are used for revelation: ECL, ECL + or ECL Advance (Amersham). The image is acquired at F1uorSmax (Biorad) and quantified bands using Quantity-One software (Biorad) Protein Nature Antibody Dilution Antibody Detection Weight samples I II mol. calculated Dermcidin Denatured Sc-1/100 IgG anti-ECL + 9kDa 27466 / poly Goat-60sec HRP b-Collection and treatment of skin samples 120 female subjects, aged 18 to 70 years, were selected for this study. Four zones per leg have been delineated (external / internal left leg, external / internal right leg). The samples are taken by Stripping Vernis (lower leg site) according to the protocol described by Mehul et al., (J. Biol Chem., 2000, 275 (17): 12841-7). analysis is performed on an area: external left leg. Samples from varnished strippings were used for Western Blot analysis. Before the samples were taken, the skin types were characterized by clinical scoring.
Le scorage clinique est réalisé par un dermatologue selon l'« Atlas de la peau sèche sur les jambes » afin d'identifier les différents types de peaux selon les degrés ci-dessous : 0 : peau normale, relief cutané régulier, aspect lisse 1 : peau légèrement sèche, relief cutané strié, aspect rêche 2 : peau sèche, relief cutané strié et quelques squames, aspect rêche 3 : peau très sèche, squames nombreuses et quelques écailles, aspect rugueux 4 : peau extrêmement sèche, écailles nombreuses, aspect rugueux The clinical scoring is done by a dermatologist according to the "Atlas of dry skin on the legs" to identify the different types of skin according to the degrees below: 0: normal skin, regular cutaneous relief, smooth aspect 1: slightly dry skin, ribbed skin surface, rough appearance 2: dry skin, ribbed skin texture and some scales, rough appearance 3: very dry skin, numerous scales and some scales, rough appearance 4: extremely dry skin, numerous scales, rough appearance
Préparation des poudres acétoniques Chaque stripping vernis de 75cm2 est plongé dans 75m1 d'acétone. Le vernis se dissout et les cornéocytes sont en suspension. Le mélange est filtré sur pompe à vide sur membrane de nylon de 40µm pour recueillir les cornéocytes. Deux lavages successifs sont effectués avec le même volume d'acétone. On obtient des poudres acétoniques de stratum corneum sous forme sèche. Preparation of acetone powders Each 75 cm2 varnish stripping is immersed in 75 ml of acetone. The varnish dissolves and the corneocytes are in suspension. The mixture is filtered through a vacuum pump on a 40 μm nylon membrane to collect the corneocytes. Two successive washes are performed with the same volume of acetone. Acetonitrile powders of stratum corneum are obtained in dry form.
Extraction des échantillons Deux types d'extraction sont réalisés de manière successive : extraction native puis dénaturante. Extraction native Les poudres acétoniques sont pesées et mises dans des tubes Eppendorf de 1,5 ml (Trefflab cat.No.96.07246.9.01). 100 µl de tampon PBS 0,1 % triton X100 sont ajoutées pour 1 mg de poudre acétonique et le mélange est laissé une heure en contact dans la glace. Puis il est broyé pendant 30 secondes dans la glace. Le milieu est ensuite récupéré dans des colonnes Millipore Ultraree de 0,45 µm puis centrifugé pendant 5 min à 10000 g à 4 °C : le surnageant est alors recueilli. Un dosage de protéines est réalisé selon la technique du BCA (kit BCA Pierce). Les échantillons sont ajustés à une concentration de 0.15 mg/ml en tampon Laemmli 4X et conservés à -20 °C en attendant l'analyse. Extraction of samples Two types of extraction are carried out successively: native extraction then denaturing. Native Extraction The acetone powders are weighed and put into 1.5 ml Eppendorf tubes (Trefflab cat.No.96.07246.9.01). 100 μl of PBS 0.1% triton X100 buffer are added to 1 mg of acetone powder and the mixture is left for one hour in contact with ice. Then it is ground for 30 seconds in the ice. The medium is then recovered in 0.45 μm Millipore Ultraree columns and then centrifuged for 5 min at 10,000 g at 4 ° C.: the supernatant is then collected. A protein assay is performed according to the BCA technique (BCA Pierce kit). The samples are adjusted to a concentration of 0.15 mg / ml in Laemmli 4X buffer and stored at -20 ° C pending analysis.
Extraction dénaturante Elle est réalisée à partir du culot de l'extrait natif. Dans des tubes Eppendorf de 1,5 ml (Trefflab cat.No.96.07246.9.01) 1001.11 de tampon Laemmli 1X est ajouté au culot pour 1 mg de poudre acétonique. Le mélange est bouilli pendant 10 min à 90 °C puis broyé pendant 20 secondes et centrifugé 10 min à 10000 g/min. Le surnageant est recueilli. Un dosage de protéines est réalisé selon la technique de Bradford. Les échantillons sont ajustés à 1 mg/ml et conservés à -20 °C en attendant l'analyse. Denaturing Extraction It is made from the base of the native extract. In 1.5 ml Eppendorf tubes (Trefflab cat.No.96.07246.9.01) 1001.11 of Laemmli 1X buffer is added to the pellet for 1 mg of acetone powder. The mixture is boiled for 10 min at 90 ° C and then milled for 20 seconds and centrifuged for 10 min at 10000 g / min. The supernatant is collected. A protein assay is performed according to the Bradford technique. Samples are adjusted to 1 mg / ml and stored at -20 ° C pending analysis.
Ces prélèvements de peau sont ensuite analysés par Western-Biot comme 10 précédemment décrit. Les résultats ont été obtenus à partir des extraits dénaturés. These skin samples are then analyzed by Western-Biot as previously described. The results were obtained from the denatured extracts.
Analyses Statistiques L'effet de la sécheresse cutanée (score clinique) sur le niveau d'expression des bio-marqueurs a été analysé à la fois graphiquement en représentant les valeurs moyennes 15 avec leur intervalle de confiance en fonction des classes d'âge ou du score clinique de sécheresse cutanée, et à l'aide d'un modèle de régression multiple avec les paramètres âge et score de sécheresse cutanée en covariables. La significativité des coefficients (test de Student) associés aux covariables permet de tester l'association entre le bio-marqueur étudié avec l'âge et le score de 20 sécheresse. La prise en compte des deux paramètres dans le modèle permet d'estimer l'effet d'un des paramètres tout en ajustant sur l'effet du second (toute chose égale par ailleurs). Le niveau de significativité des tests est fixé à 5 % dans une approche bilatérale non ajustée. Les analyses ont été effectuées à l'aide du logiciel SPPSS version 17. Les 25 niveaux d'expression des bio-marqueurs ont été préalablement transformés (racine carrée ou Logl0) lorsque cela était utile pour à la fois symétriser leur distribution et stabiliser leur variance. Statistical Analyzes The effect of skin dryness (clinical score) on the level of expression of bio-markers was analyzed both graphically by representing mean values with their confidence interval as a function of age classes or Clinical score of cutaneous dryness, and using a multiple regression model with age and cutaneous dryness score parameters in covariates. The significance of the coefficients (Student's test) associated with the covariates makes it possible to test the association between the bio-marker studied with age and the drought score. Taking into account the two parameters in the model makes it possible to estimate the effect of one of the parameters while adjusting on the effect of the second (everything else being equal). The level of significance of the tests is set at 5% in an unadjusted bilateral approach. The analyzes were carried out using SPPSS software version 17. The levels of expression of the bio-markers were previously transformed (square root or Log10) when it was useful to both symmetrize their distribution and stabilize their variance. .
2- Résultats 30 Les résultats obtenus, illustrés par la Figure 1, montrent clairement une diminution de l'expression de la Dermcidine corrélée avec une augmentation du degré de déshydratation, ou de sécheresse, de l'épiderme. 2- Results The results obtained, illustrated in FIG. 1, clearly show a decrease in the expression of Dermcidine correlated with an increase in the degree of dehydration, or dryness, of the epidermis.
L'analyse statistique confirme une diminution significative de l'expression de la Dermcidine dans les peaux sèches par rapport aux peaux normales (p=0.046). Cette étude valide ainsi l'utilisation de la Dermcidine à titre de biomarqueur d'exception de l'hydratation de la peau, et plus particulièrement de la peau sèche. Exemple 2 Effet d'un lysat de Bifidobacterium sp. sur l'expression de la Dermcidine Statistical analysis confirms a significant decrease in the expression of Dermcidine in dry skin compared to normal skin (p = 0.046). This study validates the use of Dermcidine as an exceptional biomarker of skin hydration, especially dry skin. Example 2 Effect of a lysate of Bifidobacterium sp. on the expression of Dermcidin
1- Matériels et méthodes 10 Les prélèvements d'échantillons de peaux, et les mesures de l'expression de la Dermcidine sont réalisés comme indiqué à l'exemple 1. Les volontaires sont des sujets féminins âgés de 30 à 65 ans présentant un score clinique peau sèche supérieur ou égal à 2. Ils ont été combinés et répartis en deux sous-groupes selon le traitement administré, un groupe « Placebo », et un groupe « Traité ». 15 Le groupe « Traité » reçoit par voie topique, sur la jambe, à raison de 2 fois par jour, matin et soir, pendant 56 jours, soit 2 mois, une composition comprenant 10 % de Repair Complexe dans une formule support correspondant à une émulsion huile dans eau déminéralisée Arlacel/Myrj contenant 5 % de Parleam, 15 % de cyclopentasiloxane, 3 % de glycérine et 2 % de vaseline. 20 Le Repair Complexe comprend un lysat de Bifidobacterium longum enregistré sous le nom INCI : Bifida ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N° 306-168-4, et sous le N° CAS : N° 96507-89-0. Ce lysat est commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH. 25 Le groupe « Placebo » reçoit en revanche uniquement la formule support. 1- Materials and Methods The samples of skin samples, and the measurements of the expression of Dermcidine are carried out as indicated in Example 1. The volunteers are female subjects aged 30 to 65 years presenting a clinical score dry skin greater than or equal to 2. They were combined and divided into two subgroups according to the treatment administered, a "placebo" group, and a "treated" group. The "treated" group receives topically, on the leg, twice daily, morning and evening, for 56 days, ie 2 months, a composition comprising 10% Repair Complexe in a support formula corresponding to a oil emulsion in demineralised water Arlacel / Myrj containing 5% Parleam, 15% cyclopentasiloxane, 3% glycerin and 2% petrolatum. The Repair Complex comprises a lysate of Bifidobacterium longum registered under the name INCI: Bifida ferment Lysate, under the name EINECS: Bifidobacterium longum, under the EINECS No.: No. 306-168-4, and under the CAS No. N 96507-89-0. This lysate is marketed under the name Repair Complex CLR® by K. Richter GmbH. On the other hand, the "Placebo" group receives only the support formula.
Les prélèvements de peau sont ensuite analysés par protéomique au moyen de la technique dite de « marquage isobarique », en utilisant le kit iTRAQ Reagents Multiplex kit (4352135), d'Applied Biosystems, conformément aux instructions du fabricant. 30 La détection de l'expression de la Dermcidine (DCD) a été réalisée au moyen de la méthode iTRAQ (Isobaric Tagging Reagents for Quantitative Proteomic Analysis) développée par la société Applied Biosystems. Cette méthode permet la quantification de5 peptides préalablement marqués par un Tag isobarique. Il existe 4 tags différents et on peut comparer jusqu'à 4 types d'échantillons distincts dans une même analyse LC/MS-MS. The skin samples are then proteomically analyzed using the so-called "isobaric labeling" technique, using the Appliance Biosystems iTRAQ Reagents Multiplex kit (4352135) according to the manufacturer's instructions. The detection of Dermcidin expression (DCD) was performed using the iTRAQ method (Isobaric Tagging Reagents for Quantitative Proteomic Analysis) developed by Applied Biosystems. This method allows the quantification of peptides previously labeled with an isobaric tag. There are 4 different tags and up to 4 different types of samples can be compared in the same LC / MS-MS analysis.
Le principe de cette méthode est le suivant : - Digestion d'extraits protéiques et marquage : Dans un premier temps, chaque extrait protéique est digéré par une enzyme protéolytique : la trypsine. Dans un second temps, chaque mélange peptidique obtenu est marqué avec un Tag isobarique d'une masse totale 145, comprenant un groupe « reporter » de masse 114, 115, 116 ou 117, et un groupe « balance » de masse 31, 30, 29 ou 28, liés entre eux par un site de fragmentation MS. Le marquage est obtenu par réaction du Peptide Reactive Group de chaque tag avec les amines primaires des peptides (extrémité N-terminale des peptides ou la chaîne latérale des lysines ou des tyrosines. - Analyse LC/MS-MS et quantification : Après l'étape de marquage, les échantillons sont mis en commun et analysés par spectrométrie de masse. Un peptide donné, présent dans plusieurs échantillons, aura une masse parente identique mais son spectre de fragmentation MS/MS va générer la masse du groupe rapporteur caractéristique de chacun des réactifs iTRAQ. La comparaison de l'intensité de chaque ion rapporteur (114, 115, 116 ou 117) permet alors la quantification du peptide. La méthode iTRAQ est plus précisément décrite par Zieske (J. Exp. Bot., 2006, 57 :1501) ou Wiese et al. (Proteomics, 2007, 7 :340). The principle of this method is as follows: Digestion of protein extracts and labeling: First, each protein extract is digested by a proteolytic enzyme: trypsin. In a second step, each peptide mixture obtained is labeled with an isobaric tag having a total mass 145, comprising a "reporter" group of mass 114, 115, 116 or 117, and a mass "balance" group 31, 30, 29 or 28, linked together by an MS fragmentation site. The labeling is obtained by reacting the Peptide Reactive Group of each tag with the primary amines of the peptides (N-terminal end of the peptides or the lysine or tyrosine side chain) LC / MS-MS analysis and quantification: After the step labeling, the samples are pooled and analyzed by mass spectrometry.A given peptide, present in several samples, will have an identical parent mass but its MS / MS fragmentation spectrum will generate the mass of the reporter group characteristic of each of the reagents The comparison of the intensity of each reporter ion (114, 115, 116 or 117) then makes it possible to quantify the peptide The iTRAQ method is more precisely described by Zieske (J. Exp.Bot., 2006, 57: 1501 ) or Wiese et al (Proteomics, 2007, 7: 340).
Pour chaque condition sujets « Traité » et « Placebo », une moyenne des ratios J56/JO est obtenue, permettant ainsi d'évaluer l'effet du traitement. Les ratios J56/JO sont calculés selon la formule suivante : For each subject condition "Treaty" and "Placebo", an average of the ratios J56 / OJ is obtained, thus making it possible to evaluate the effect of the treatment. The J56 / OJ ratios are calculated according to the following formula:
% effet du traitement = 100 * Ratio J56/JO « Traité » - Ratio J56/JO « Placebo » ratio J56/JO «Placebo » 2- Résultats Les données brutes obtenues à l'issue de l'expérience sont les suivantes : Expérience 1 Ratio J56/JO Ratio J56/JO Placebo Traité 2,70 3,10 Expérience 2 Ratio J56/JO Ratio Placebo J56/JO Traité 1,00 1,62 La valeur moyenne du ratio J56/JO «Placebo » est de 1,85, alors que la valeur 5 moyenne du ratio J56/JO « Traité » est de 2,36. Le traitement par le Repair Complex® se traduit par une augmentation du signal de 27 % par rapport au placebo. Ainsi l'administration, par voie topique, d'un lysat de Bifidobacterium longum accroît l'expression de la Dermcidine d'environ 30 % après 2 mois de traitement. 10 L'administration, par voie topique, d'un lysat de Bifidobacterium sp. permet donc de restaurer un niveau d'expression de la Dermcidine au niveau de la peau sèche, propice à renforcer son action de protection de la peau, à renforcer les propriétés barrières de la peau, et à réduire les signes de sécheresse cutanée. Cette étude valide en outre l'utilisation de la Dermcidine à titre de biomarqueur 15 pour évaluer l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau sèche, ainsi qu'à titre d'outil de criblage de nouveaux agents actifs destinés au traitement de la peau sèche. % effect of treatment = 100 * Ratio J56 / OJ "Treaty" - Ratio J56 / OJ "Placebo" ratio J56 / OJ "Placebo" 2- Results The raw data obtained at the end of the experiment are as follows: Experience 1 Ratio J56 / JO Ratio J56 / JO Placebo Treaty 2,70 3,10 Experience 2 Ratio J56 / JO Ratio Placebo J56 / JO Treaty 1,00 1,62 The average value of the ratio J56 / JO "Placebo" is 1.85 while the average value of ratio J56 / OJ "Treaty" is 2.36. Treatment with Repair Complex® results in a 27% increase in signal compared to placebo. Thus the topical administration of a Bifidobacterium longum lysate increases the expression of Dermcidine by approximately 30% after 2 months of treatment. Topical administration of a lysate of Bifidobacterium sp. Thus, it is possible to restore a level of expression of Dermcidin in dry skin, which is conducive to reinforcing its protective action on the skin, reinforcing the barrier properties of the skin, and reducing the signs of dry skin. This study also validates the use of Dermcidin as a biomarker to evaluate the efficacy of a cosmetic treatment of dry skin, as well as a tool for screening new active agents for the treatment of the skin. dry skin.
Exemple 3 Effet d'un mélange lysat de Bifidobacterium longum et de phytosphingosine 20 salicylate sur l'expression de la Dermcidine Example 3 Effect of a lysate mixture of Bifidobacterium longum and phytosphingosine salicylate on the expression of Dermcidine
1- Matériels et méthodes 1- Materials and methods
Les prélèvements d'échantillons de peaux, et les mesures de l'expression de la 25 Dermcidine sont réalisés comme indiqué à l'exemple 2. Samples of skin samples, and measurements of the expression of Dermcidine are carried out as indicated in Example 2.
Les volontaires sont des sujets féminins âgés de 40 à 45 ans Présentant une peau sèche sur les zones prélevées (évaluation dermascore). Chaque sujet est son propre témoin, les deux bras sont prélevés mais un seul est traité avec le produit testé et le second bras reçoit un placebo. Volunteers are female subjects aged 40 to 45 years old with dry skin on the areas sampled (dermascore assessment). Each subject is his own control, both arms are removed but only one is treated with the tested product and the second arm receives a placebo.
Le bras « Traité » reçoit par voie topique, à raison de 2 fois par jour, matin et soir, pendant 56 jours, soit 2 mois, une composition comprenant 10 % de Repair Complexe et 0,002 % de Phytosphingosine-SLC dans une formule support correspondant à une émulsion huile dans eau déminéralisée Arlacel/Myrj contenant 5 % de Parleam, 15 % de cyclopentasiloxane, 3 % de glycérine et 2 % de vaseline. The "treated" arm receives, topically, twice daily, morning and evening, for 56 days, ie 2 months, a composition comprising 10% of Repair Complexe and 0.002% of Phytosphingosine-SLC in a corresponding support formula. an oil-in-demineralized water emulsion Arlacel / Myrj containing 5% Parleam, 15% cyclopentasiloxane, 3% glycerine and 2% petrolatum.
Le Repair Complexe comprend un Bifidobacterium longum enregistré sous le nom INCI : Bifida ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N° 306-168-4, et sous le N° CAS : N° 96507-89-0. Ce lysat est commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH. The Repair Complex comprises a Bifidobacterium longum registered under the name INCI: Bifida ferment Lysate, under the name EINECS: Bifidobacterium longum, under the EINECS N °: 306-168-4, and under the CAS N °: 96507- 89-0. This lysate is marketed under the name Repair Complex CLR® by K. Richter GmbH.
Le dérivé phytosphingosine-salicylate est celui commercialisé par la société EVONICK GOLDSCHMIDT sous la dénomination Phytosphingosine SLC®. Le bras « Placebo » reçoit uniquement la formule support. Pour chaque condition « Traité » et « Placebo », une moyenne des ratios J56/JO est obtenue comme indiqué précédemment, permettant ainsi d'évaluer l'effet du traitement. 20 2- Résultats Les données brutes obtenues à l'issue de l'expérience sont les suivantes : Expérience n°1 Ratio J56/JO Ratio J56/JO Placebo Traité 0.75 1.66 Expérience n°2 Ratio J56/JO Ratio J56/JO Placebo Traité 0.45 0.81 La valeur moyenne du ratio J56/JO « Placebo » est de 0,6, alors que la valeur 25 moyenne du ratio J56/JO « Traité » est de 1,235. The phytosphingosine-salicylate derivative is that marketed by the company Evonick GOLDSCHMIDT under the name Phytosphingosine SLC®. The "Placebo" arm receives only the support formula. For each "Treaty" and "Placebo" condition, an average of the J56 / OJ ratios is obtained as indicated above, thus making it possible to evaluate the effect of the treatment. 2- Results The raw data obtained at the end of the experiment are the following: Experiment n ° 1 Ratio J56 / JO Ratio J56 / JO Placebo Treaty 0.75 1.66 Experiment n ° 2 Ratio J56 / JO Ratio J56 / JO Placebo Treaty 0.45 0.81 The average value of the J56 / OJ "Placebo" ratio is 0.6, while the average value of the "Treaty" J56 / OJ ratio is 1.235.
L'effet traitement est égal à 105 %, et traduit un doublement de l'expression de la Dermcidine par rapport au « Placebo ». Ainsi l'administration, par voie topique, d'un mélange comprenant un lysat de Bifidobacterium longum et de la phytosphingosine-salicylate accroît l'expression de la 5 Dermcidine de plus de 100 %. L'administration, par voie topique, d'un mélange comprenant un lysat de Bifidobacterium longum et de la phytosphingosine-salicylate permet donc de restaurer un niveau d'expression de la Dermcidine au niveau de la peau, et notamment de la peau sèche, propice à renforcer son action de protection de la peau, à renforcer les propriétés barrières 10 de la peau, et à réduire les signes de sécheresse cutanée. The treatment effect is equal to 105%, and reflects a doubling of the expression of Dermcidine compared to "placebo". Thus, topical administration of a mixture comprising a Bifidobacterium longum lysate and phytosphingosine salicylate increases the expression of Dermcidin by more than 100%. The topical administration of a mixture comprising a Bifidobacterium longum lysate and phytosphingosine-salicylate thus makes it possible to restore a level of Dermcidin expression at the level of the skin, and in particular of the dry, favorable skin. to reinforce its protective action of the skin, to strengthen the barrier properties of the skin, and to reduce the signs of cutaneous dryness.
Baechle, D., T. Flad, et al. (2006). « Cathepsin D is present in human eccrine sweat and involved in the postsecretory processing of the antimicrobial peptide DCD-1L » J. Biol. Chem. 281(9):5406-5415. Cunningham, T. J., L. Hodge et al. (1998) « Identification of a survivalpromoting peptide in medium conditioned by oxidatively stressed cell lines of nervous system origin » J. Neurosci 18(18):7047-7060. Flad, T., R. Bogumil et al. (2002) « Detection of dermcidin-derived peptides in 10 sweat by ProteinChip Technology» J. Immunol. Methods 270(1): 53-62. Kenney, W. L. and S. R. Fowler (1988) « Methylcholine-activated eccrine sweat gland density and output as a function of age » J. Appl. Physiol. 65(3):1082-1086. Kyte et al., (1982), J. Mol. Biol., 157: 105. Mehul B. et al., (2000) « Identification and Cloning of a New Calmodulin-like 15 Protein from Human Epidermis » J. Biol. Chem. 275(17):12841-12847 Moreira, D. F, B. E. Strauss et al. (2008) « Genes up- and down-regulated by dermcidin in breast cancer: a microarray analysis » Genet. Mol. Res. 7(3): 925-932. Niyonsaba, F. A. Suzuki et al. (2009) « The human antimicrobial peptide dermcidin activates normal human keratinocytes » Br. J. Dermatol. 160(2): 243-249. 20 Rieg, S.C., Garbe et al. (2004) « Dermcidin is constitutively produced by eccrine sweat gland and is not induced in epidermal cells under inflammatory skin conditions » Br. J. Dermatol. 151(3): 534-539. Rieg S., II Steffen et al. (2005) « Deficiency of dermcidin-derived antimicrobial peptides in sweat of patients with atopic dermatitis correlates with an 25 impaired innate defense of human skin in vivo » J. Immunol. 174(12):8003-8010. Sakurada K., T. Akutsu, et al., (2009) « Detection of dermcidin for sweat identification by real-time RT-PCR and ELISA» Forensic. Sci. Int. 2010 Jan. 30;194(1-3):80-4. Epub 2009 Nov. 13. Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring 30 Harbor Press, NY. Schittek, B, R. Hipfel et al. (2001) : « Dermcidin: a novel human antibiotic peptide secreted by sweat glands » Nat. Immunol. 2(12): 1133-11137. Baechle, D., Flad, T., et al. (2006). "Cathepsin D is present in human eccrine sweat and involved in the postsecretory processing of the antimicrobial peptide DCD-1L" J. Biol. Chem. 281 (9): 5406-5415. Cunningham, T.J., L. Hodge et al. (1998) J. Neurosci 18 (18): 7047-7060. Flad, T., Bogumil R. et al. (2002) "Detection of dermcidin-derived peptides in 10 sweat by ProteinChip Technology" J. Immunol. Methods 270 (1): 53-62. Kenney, W.L. and S.R. Fowler (1988) "Methylcholine-activated eccrine sweat gland density and output as a function of age" J. Appl. Physiol. 65 (3): 1082-1086. Kyte et al., (1982) J. Mol. Biol., 157: 105. Mehul B. et al., (2000) "Identification and Cloning of a New Calmodulin-like Protein from Human Epidermis" J. Biol. Chem. 275 (17): 12841-12847 Moreira, D.F., B.E. Strauss et al. (2008) Genes up-and-down-regulated by dermcidin in breast cancer: a microarray analysis Genet. Mol. Res. 7 (3): 925-932. Niyonsaba, F. A. Suzuki et al. (2009) "The human antimicrobial peptide dermcidin activates normal human keratinocytes" Br. J. Dermatol. 160 (2): 243-249. Rieg, S.C., Garbe et al. (2004) "Dermcidin is constitutively produced by eccrine sweat gland and is not induced in epidermal cells under inflammatory skin conditions" Br. J. Dermatol. 151 (3): 534-539. Rieg S., Steffen II et al. (2005) "Deficiency of dermcidin-derived antimicrobial peptides in patients with atopic dermatitis correlates with an impaired innate defense of human skin in vivo" J. Immunol. 174 (12): 8003-8010. Sakurada K., T. Akutsu, et al., (2009) "Detection of dermcidin for sweat identification by real-time RT-PCR and ELISA" Forensic. Sci. Int. 2010 Jan. 30; 194 (1-3): 80-4. Epub 2009 Nov. 13. Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY. Schittek, B, R. Hipfel et al. (2001): "Dermcidin: a novel human antibiotic secret peptide by sweat tassels" Nat. Immunol. 2 (12): 1133-11137.
Watchorn, T. M. N. Dowidar et al. (2005) « The chachectic mediator proteolysis inducing factor activates NF-kappaB and STAT3 in human Kupffer cells and monocytes » Int. J. Oncol. 27(4): 1105-1111. Wiese et al., (2007) « Protein labeling by iTRAQ: A new tool for quantitative 5 mass spectrometry in proteome research » Proteomics 7(3):340-350 Zieske et al. (2006) « A perspective on the use of iTRAQ reagent technology for protein complex and profiling studies » J. Exp. Bot. 57(7):1051-1058. Watchorn, T. M. N. Dowidar et al. (2005) "The chachectic mediator proteolysis inducing factor activates NF-kappaB and STAT3 in human kupffer cells and monocytes" Int. J. Oncol. 27 (4): 1105-1111. Wiese et al., (2007) Protein labeling by iTRAQ: A new tool for quantitative mass spectrometry in proteome research Proteomics 7 (3): 340-350 Zieske et al. (2006) "A perspective on the use of iTRAQ reagent technology for protein complex and profiling studies" J. Exp. Bot. 57 (7): 1051-1058.
Claims (16)
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR1057699A FR2965358B1 (en) | 2010-09-24 | 2010-09-24 | COSMETIC USE OF DERMCIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF |
ES11773870.8T ES2605957T3 (en) | 2010-09-24 | 2011-09-23 | Cosmetic use of dermicidine or fragments thereof |
EP11773870.8A EP2618808B1 (en) | 2010-09-24 | 2011-09-23 | Cosmetic use of dermicidin and fragments thereof |
PCT/IB2011/054190 WO2012038929A1 (en) | 2010-09-24 | 2011-09-23 | Cosmetic use of dermicidin, and analogues or fragments thereof |
US13/824,674 US20130324476A1 (en) | 2010-09-24 | 2011-09-23 | Cosmetic use of dermicidin, and analogues or fragments thereof |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR1057699A FR2965358B1 (en) | 2010-09-24 | 2010-09-24 | COSMETIC USE OF DERMCIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2965358A1 true FR2965358A1 (en) | 2012-03-30 |
FR2965358B1 FR2965358B1 (en) | 2014-10-10 |
Family
ID=43712547
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR1057699A Expired - Fee Related FR2965358B1 (en) | 2010-09-24 | 2010-09-24 | COSMETIC USE OF DERMCIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
FR (1) | FR2965358B1 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR3006897A1 (en) * | 2013-06-14 | 2014-12-19 | Oreal | COSMETIC OR THERAPEUTIC USE, IN PARTICULAR DERMATOLOGY OF DERMICIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF FOR PREVENTING THE APPEARANCE OF IMPERFECTIONS, AS WELL AS FOR THE TREATMENT AND DIAGNOSIS OF ACNEIC OR ACNETIC TREND SKIN |
FR3006890A1 (en) * | 2013-06-14 | 2014-12-19 | Oreal | COSMETIC USE OF DERMICIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF FOR THE PREVENTION AND / OR TREATMENT AND DIAGNOSIS OF FAT SKIN AND AESTHETIC SKIN DISORDERS ASSOCIATED THEREWITH |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007136159A1 (en) * | 2006-05-18 | 2007-11-29 | Amorepacific Corporation | Use of sphingosylphosphorylcholine antagonist for restoring the expression of antimicrobial peptides |
US20080020976A1 (en) * | 2001-06-13 | 2008-01-24 | Claus Garbe | Antimicrobially active peptide |
WO2009026949A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | Dsm Ip Assets B.V. | 4-amidino benzylamines for cosmetic and/or dermatological use |
EP2033628A2 (en) * | 2007-09-04 | 2009-03-11 | L'oreal | Cosmetic use of a Bifidobacterium species lysate for treating dry skin |
FR2924946A1 (en) * | 2007-12-18 | 2009-06-19 | Oreal | COSMETIC USE OF ACID CERAMIDASE-LIKE PROTEINS |
FR2938762A1 (en) * | 2008-11-21 | 2010-05-28 | Oreal | COSMETIC USE OF DJ-1 PROTEINS FOR THE TREATMENT OF SKIN DROUGHT |
EP2206493A1 (en) * | 2009-01-12 | 2010-07-14 | L'oreal | Cosmetic combination of a microorganism and a phytosphingosine derivative |
-
2010
- 2010-09-24 FR FR1057699A patent/FR2965358B1/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080020976A1 (en) * | 2001-06-13 | 2008-01-24 | Claus Garbe | Antimicrobially active peptide |
WO2007136159A1 (en) * | 2006-05-18 | 2007-11-29 | Amorepacific Corporation | Use of sphingosylphosphorylcholine antagonist for restoring the expression of antimicrobial peptides |
WO2009026949A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | Dsm Ip Assets B.V. | 4-amidino benzylamines for cosmetic and/or dermatological use |
EP2033628A2 (en) * | 2007-09-04 | 2009-03-11 | L'oreal | Cosmetic use of a Bifidobacterium species lysate for treating dry skin |
FR2924946A1 (en) * | 2007-12-18 | 2009-06-19 | Oreal | COSMETIC USE OF ACID CERAMIDASE-LIKE PROTEINS |
FR2938762A1 (en) * | 2008-11-21 | 2010-05-28 | Oreal | COSMETIC USE OF DJ-1 PROTEINS FOR THE TREATMENT OF SKIN DROUGHT |
EP2206493A1 (en) * | 2009-01-12 | 2010-07-14 | L'oreal | Cosmetic combination of a microorganism and a phytosphingosine derivative |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
GUENICHE A ET AL: "Reactive Skin: Clinical efficacy of a probiotic lysate is associated with specific changes in stratum corneum protein pattern", JOURNAL OF INVESTIGATIVE DERMATOLOGY, vol. 129, no. Suppl. 2, September 2009 (2009-09-01), & 39TH ANNUAL MEETING OF THE EUROPEAN-SOCIETY-FOR-DERMATOLOGICAL-RESEA RCH; BUDAPEST, HUNGARY; SEPTEMBER 09 -12, 2009, pages S29, XP002628494, ISSN: 0022-202X * |
RIEG SIEGBERT ET AL: "Deficiency of dermcidin-derived antimicrobial peptides in sweat of patients with atopic dermatitis correlates with an impaired innate defense of human skin in vivo.", JOURNAL OF IMMUNOLOGY (BALTIMORE, MD. : 1950) 15 JUN 2005 LNKD- PUBMED:15944307, vol. 174, no. 12, 15 June 2005 (2005-06-15), pages 8003 - 8010, XP002628831, ISSN: 0022-1767 * |
YAMASAKI KENSHI ET AL: "Antimicrobial peptides in human skin disease.", EUROPEAN JOURNAL OF DERMATOLOGY : EJD 2008 JAN-FEB LNKD- PUBMED:18086583, vol. 18, no. 1, January 2008 (2008-01-01), pages 11 - 21, XP002628832, ISSN: 1167-1122 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR3006897A1 (en) * | 2013-06-14 | 2014-12-19 | Oreal | COSMETIC OR THERAPEUTIC USE, IN PARTICULAR DERMATOLOGY OF DERMICIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF FOR PREVENTING THE APPEARANCE OF IMPERFECTIONS, AS WELL AS FOR THE TREATMENT AND DIAGNOSIS OF ACNEIC OR ACNETIC TREND SKIN |
FR3006890A1 (en) * | 2013-06-14 | 2014-12-19 | Oreal | COSMETIC USE OF DERMICIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF FOR THE PREVENTION AND / OR TREATMENT AND DIAGNOSIS OF FAT SKIN AND AESTHETIC SKIN DISORDERS ASSOCIATED THEREWITH |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2965358B1 (en) | 2014-10-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2618808B1 (en) | Cosmetic use of dermicidin and fragments thereof | |
FR2948021A1 (en) | COSMETIC USE OF LACRITIN-TYPE POLYPEPTIDES | |
EP2089720A2 (en) | Cosmetic use of a protein belonging to the ribonuclease family<0} | |
FR2924946A1 (en) | COSMETIC USE OF ACID CERAMIDASE-LIKE PROTEINS | |
FR2925312A1 (en) | COSMETIC USE OF DESMOGLEINE I PROTEINS | |
FR2924613A1 (en) | Use of heat shock protein 27 or related substances to prevent or treat signs of skin aging | |
FR2924947A1 (en) | Use of calmodulin-like skin protein or related substances to prevent or treat signs of skin aging | |
FR2925313A1 (en) | COSMETIC USE OF PLAKOGLOBIN PROTEINS | |
FR2924614A1 (en) | Use of calgranulin A or related substances to prevent or treat signs of skin aging | |
FR2917629A1 (en) | COSMETIC USE OF APOLIPOPROTEIN TYPE PROTEINS | |
EP2652512B1 (en) | Use of ide as a biomarker for a scalp condition | |
FR2925314A1 (en) | Use of transglutaminase 3 or related substances to prevent or treat signs of skin aging | |
FR2965357A1 (en) | Use of at least one amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence or of nucleic acid sequence, as a biomarker of a state of aged skin and/or signs of aging, optionally associated with dry skin | |
EP2349319B1 (en) | Use of proteins of dj-1 type for characterizing skin dryness | |
FR2965358A1 (en) | Use of at least one amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence or of nucleic acid sequence, as a biomarker of a state of aged skin and/or signs of aging, optionally associated with dry skin | |
FR2908654A1 (en) | Stimulating terminal epithelial differentiation and/or proteoglycan synthesis, e.g. to combat skin aging, using chitinase family protein YKL-40 or its derivative or analog | |
EP2271357B1 (en) | Cosmetic use of annexin ii-type proteins for treating dryness of the skin | |
EP2209005A1 (en) | Use of complex forms of the calmodulin-like skin protein CLSP | |
EP3007718A2 (en) | Use of dermicidin to treat oily, acne-prone skin or to prevent the appearance of imperfections | |
FR2983868A1 (en) | In vitro or ex vivo use of an amino acid sequence coded by nucleic acid sequence or nucleic acid sequence coding amino acid sequence, as a biomarker e.g. to identify active agents to prevent or treat impaired barrier function of scalp | |
FR3006890A1 (en) | COSMETIC USE OF DERMICIDINE, ANALOGUES OR FRAGMENTS THEREOF FOR THE PREVENTION AND / OR TREATMENT AND DIAGNOSIS OF FAT SKIN AND AESTHETIC SKIN DISORDERS ASSOCIATED THEREWITH | |
FR2932087A1 (en) | Cosmetic use of polypeptide amino acid sequence encoded by specific nucleic acid sequence, or nucleic acid sequence encoding the polypeptide, or modulator of activity, stability or expression of the polypeptide as agent to treat dry skin | |
WO2014093053A1 (en) | Modulation of thymosin beta-4 in skin | |
FR2938761A1 (en) | Cosmetic use of polypeptide of amino acid sequence encoded by nucleic acid sequence, nucleic acid sequence encoding for polypeptide or agent modulating e.g. the activity of polypeptide as agent to prevent and/or treat signs of skin dryness | |
FR2929518A1 (en) | Cosmetic use of polypeptide of amino acid sequence encoded by nucleic acid sequence represented by a sequence, nucleic acid sequence encoding for polypeptide or modulating agent, to prevent and/or treat e.g. signs of skin aging |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 7 |
|
PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 8 |
|
PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 9 |
|
PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 10 |
|
ST | Notification of lapse |
Effective date: 20210505 |