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FR2601591A1 - STABLE PHARMACEUTICAL PREPARATION CONTAINING A GRANULOCYTA LINE STIMULATION FACTOR, AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF - Google Patents

STABLE PHARMACEUTICAL PREPARATION CONTAINING A GRANULOCYTA LINE STIMULATION FACTOR, AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF Download PDF

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Abstract

ON DECRIT UNE PREPARATION PHARMACEUTIQUE STABLE CONTENANT UN FACTEUR DE STIMULATION DE LA LIGNEE GRANULOCYTAIRE. CELLE-CI CONTIENT, OUTRE LE FACTEUR DE STIMULATION DE LA LIGNEE GRANULOCYTAIRE PRESENT EN TANT QUE LE COMPOSANT ACTIF, AU MOINS UNE SUBSTANCE CHOISIE PARMI UN SURFACTIF, UN SACCHARIDE, UNE PROTEINE ET UN COMPOSE A HAUT POIDS MOLECULAIRE, PHARMACEUTIQUEMENT ACCEPTABLES.A STABLE PHARMACEUTICAL PREPARATION CONTAINING A GRANULOCYTA LINE STIMULATION FACTOR IS DESCRIBED. THIS CONTAINS, IN ADDITION TO THE FACTOR OF STIMULATION OF THE GRANULOCYTAINE LINE PRESENT AS THE ACTIVE INGREDIENT, AT LEAST A SUBSTANCE SELECTED AMONG A SURFACTANT, A SACCHARIDE, A PROTEIN AND A COMPOUND WITH HIGH MOLECULAR WEIGHT, PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE.

Description

-- I -La présente invention concerne une préparation pharma5 ceutique- I - The present invention relates to a pharmaceutical pharma5 preparation

contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire. En particulier, la présente invention concerne une préparation pharmaceutique stabilisée, contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire, qui est protégée contre la perte ou l'inactivation du composant actif (à savoir le facteur de stimulation de la lignée granulocytaire), dues à l'adsorption sur les parois d'un contenant dans lequel est placée la préparation, ou à l'association, la  containing a factor for stimulating the granulocyte line. In particular, the present invention relates to a stabilized pharmaceutical preparation, containing a factor for stimulating the granulocytic line, which is protected against loss or inactivation of the active component (namely the factor for stimulating the granulocytic line), due to adsorption on the walls of a container in which the preparation is placed, or in combination, the

polymérisation ou l'oxydation dudit composant.  polymerization or oxidation of said component.

Une méthode appliquée pour le traitement de diverses maladies infectieuses est la chimiothérapie, mais on a récemment constaté que la chimiothérapie est la cause de certains problèmes cliniques graves, tels que l'apparition d'organismes résistant aux médicaments, la modification des organismes pathogènes et la manifestation de nombreux effets secondaires. Dans le but d'éviter ces problèmes associés à la chimiothérapie, qui fait appel à l'utilisation d'agents thérapeutiques tels qu'antibiotiques et bactéricides, on fait  One method used for the treatment of various infectious diseases is chemotherapy, but chemotherapy has recently been found to be the cause of some serious clinical problems, such as the development of drug-resistant organisms, modification of pathogens, and manifestation of many side effects. In order to avoid these problems associated with chemotherapy, which involves the use of therapeutic agents such as antibiotics and bactericides,

actuellement des tentatives pour utiliser une substance activant les capacités prophylactiques de l'hôte d'un organisme 25 pathogène, et apporter ainsi une solution radicale aux pro-  currently attempts to use a substance activating the prophylactic capacities of the host of a pathogenic organism, and thus to provide a radical solution to the

- 2 blèmes précités de la chimiothérapie. Parmi les diverses capacités prophylactiques de l'hôte, l'action bactéricide phagocytaire des leucocytes est considérée avoir les effets  - 2 aforementioned chemotherapy problems. Among the various prophylactic capacities of the host, the phagocytic bactericidal action of leukocytes is considered to have the effects

les plus marqués dans la période initiale de l'infection bac5 térienne, et on considère par consequent qu'il est important d'accroître les capacités protectrices de l'hôte contre l'infection, en favorisant la croissance des polynucléaires neutrophiles et leur différenciation aboutissant à la maturité.  most marked in the initial period of bac5 terian infection, and it is therefore considered important to increase the protective capacities of the host against infection, by promoting the growth of neutrophils and their differentiation resulting at maturity.

Le facteur de stimulation de la lignée granulocytaire (G-CSF= 10 Granulocyte Colony Stimulating Factor) est l'une des substances très utiles qui manifestent de telles actions, et la déposante de la présente invention a déposé précédemment  The stimulating factor of the granulocyte line (G-CSF = 10 Granulocyte Colony Stimulating Factor) is one of the very useful substances which manifest such actions, and the applicant of the present invention has previously deposited

une demande concernant un agent de protection contre l'infection, utilisant le G-CSF (JP-A 23777/1985).  one request for an infection protection agent using G-CSF (JP-A 23777/1985).

Comme mentionné plus haut, telle qu'elle est actuellement pratiquée, la chimiothérapie entraîne divers problèmes inévitables, et de grands efforts sont faits en ce moment pour utiliser une substance médicamenteuse qui soit capable  As mentioned above, as it is currently practiced, chemotherapy causes various inevitable problems, and great efforts are being made at this time to use a drug substance which is capable

d'activer les fonctions prophylactiques de l'hôte ou du sujet 20 qui a été infecté.  activate the prophylactic functions of the host or subject who has been infected.

Il va sans dire que le G-CSF manifeste en soi la capacité d'activer les fonctions prophylatiques de l'hôte, et on a également constaté que le GCSF fait preuve d'effets thérapeutiques plus marqués dans des applications cliniques lorsqu'on l'utilise en conjonction avec une substance qui  It goes without saying that G-CSF in itself manifests the ability to activate prophylactic functions of the host, and GCSF has also been found to exhibit more marked therapeutic effects in clinical applications when use in conjunction with a substance that

active lés capacités prophylactiques de l'hôte.  activates prophylactic capacities of the host.

On utilise le G-CSF en une très faible quantité, et on utilise habituellement une préparation pharmaceutique contenant 0,1-500 pg (de préférence 5-50 pg) de G-CSF, à une fré30 quence d'administration de 1-7 fois par semaine pour un adulte. Toutefois, le G-CSF a tendance à être adsorbé sur la paroi de son contenant, tel qu'ampoule pour injection ou seringue. En conséquence, lorsqu'on utilise le médicament sous forme d'une préparation injectable telle qu'une solution 35 aqueuse, il est adsorbé sur la paroi de son contenant, tel - 3 qu'une ampoule ou une seringue. Ce phénomène d'adsorption, soit conduit à l'incapacité du G-CSF à manifester totalement son activité en tant qu'agent pharmaceutique, soit nécessite l'incorporation de G-CSF en une quantité plus que nécessaire, tenant compte de la perte possible de celui-ci, due à l'adsorption. En outre, le G-CSF est labile et extrêmement sensible à des facteurs ambiants tels que température, humidité, oxygène et rayons ultraviolets. Sous l'action de ces facteurs, le 10 G-CSF connait des changements physiques ou chimiques tels qu'association, polymérisation et oxydation, et subit une  G-CSF is used in a very small amount, and usually a pharmaceutical preparation containing 0.1-500 pg (preferably 5-50 pg) of G-CSF is used, at a frequency of administration of 1-7 once a week for an adult. However, G-CSF tends to be adsorbed on the wall of its container, such as a vial for injection or syringe. Consequently, when the drug is used in the form of an injectable preparation such as an aqueous solution, it is adsorbed on the wall of its container, such as an ampoule or syringe. This adsorption phenomenon either leads to the inability of G-CSF to fully manifest its activity as a pharmaceutical agent, or requires the incorporation of G-CSF in an amount more than necessary, taking into account the possible loss. of it, due to adsorption. In addition, G-CSF is labile and extremely sensitive to environmental factors such as temperature, humidity, oxygen and ultraviolet rays. Under the action of these factors, 10 G-CSF undergoes physical or chemical changes such as association, polymerization and oxidation, and undergoes a

grande perte d'activité. Ces phénomènes font qu'il est difficile de garantir un accomplissement total d'un acte thérapeutique par administration d'une très faible quantité de G-CSF 15 d'une façon très précise.  great loss of activity. These phenomena make it difficult to guarantee complete accomplishment of a therapeutic act by administering a very small amount of G-CSF 15 in a very precise manner.

Il est par conséquent nécessaire de mette au point une préparation pharmaceutique stable de G-CSF qui soit totalement protégée contre une perte de l'activité de son composant actif. Ceci fait l'cbjet principal de la présente invention, 20 laquelle fournit une préparation pharmaceutique stable de  It is therefore necessary to develop a stable pharmaceutical preparation of G-CSF which is fully protected against loss of activity of its active component. This is the main object of the present invention, which provides a stable pharmaceutical preparation of

G-CSF.G-CSF.

Les auteurs de la présente invention ont poursuivi des recherches poussées dans le but d'accroître la stabilité d'une préparation pharmaceutique contenant du G-CSF, et ils 25 ont découvert que ce but peut être réellement atteint par addition d'un surfactif, un saccharide, une protéine ou un  The authors of the present invention have pursued extensive research in order to increase the stability of a pharmaceutical preparation containing G-CSF, and they have discovered that this object can actually be achieved by adding a surfactant, a saccharide, protein or

composé à haut poids moléculaire, pharmaceutiquement acceptable.  high molecular weight, pharmaceutically acceptable compound.

En conséquence, la préparation pharmaceutique stable de 30 la présente invention, contenant du G-CSF, est caractérisée en ce qu'elle contient à la fois du G-CSF et au moins une  Consequently, the stable pharmaceutical preparation of the present invention, containing G-CSF, is characterized in that it contains both G-CSF and at least one

substance choisie parmi un surfactif, un saccharide, une protéine et un composé à haut poids moléculaire, pharmaceutiquement acceptables.  substance selected from a surfactant, a saccharide, a protein and a compound with high molecular weight, pharmaceutically acceptable.

-4 Le G-CSF qui doit être contenu dans la préparation pharmaceutique de la présente invention peut être obtenu par l'un quelconque des procédés tels que ceux décrits dans JP-A 153273/1984, 269455/1985, 269456/1985, 270838/1985 et 5 270839/1985. Par exemple, on peut préparer un G-CSF humain soit par culture d'une lignée cellulaire (CNCM numéro 1-315 ou 1483) provenant de cellules tumorales de patients atteints de cancer de la cavité buccale, ou par l'expression d'un ADN recombinant (ayant été préparé sous l'action d'un 10 gène codant pour le G-CSF humain) dans une cellule hôte appropriée (par exemple E. coli, cellule C 127 ou cellules  -4 G-CSF which must be contained in the pharmaceutical preparation of the present invention can be obtained by any of the methods such as those described in JP-A 153273/1984, 269455/1985, 269456/1985, 270838 / 1985 and 5 270839/1985. For example, a human G-CSF can be prepared either by culture of a cell line (CNCM number 1-315 or 1483) originating from tumor cells of patients with cancer of the oral cavity, or by the expression of a Recombinant DNA (having been prepared by the action of a gene encoding human G-CSF) in an appropriate host cell (e.g. E. coli, C 127 cell or cells

ovariennes de hamster d'Asie.Asian hamster ovaries.

Tout G-CSF humain ayant été purifié à un haut degré  Any human G-CSF that has been purified to a high degree

peut être utilisé en tant que le G-CSF destiné à être contenu 15 dans la préparation pharmaceutique de la présente invention.  can be used as the G-CSF intended to be contained in the pharmaceutical preparation of the present invention.

Des G-CSF humains préférés sont ceux obtenus par isolement à partir du surnageant de la culture d'une cellule productrice de G-CSF humain, ainsi qu'une glycoprotéine ou un polypeptide, ayant l'activité du G-CSF humain, que l'on obtient 20 par transformation d'un hôte par un vecteur recombinant dans lequel est incorporé un gène codant pour un polypeptide ayant  Preferred human G-CSFs are those obtained by isolation from the culture supernatant of a cell producing human G-CSF, as well as a glycoprotein or a polypeptide, having the activity of human G-CSF, that the '' is obtained by transformation of a host with a recombinant vector in which is incorporated a gene coding for a polypeptide having

l'activité du G-CSF humain.human G-CSF activity.

On donne ci-dessous deux exemples particulièrement préférés de G-CSF humains: (1) G-CSF humain ayant les propriétés physico-chimiques suivantes: I) poids moléculaire: environ 19 000 + 1 000, tel que mesuré suré par électrophorèse en gel de polyacrylamide-dodécylsulate de sodium; 30 II) point isoélectrique: ayant au moins l'un des trois points isoélectriques: pI= 5,5 + 0,1, pI= 5,8 + 0,1 et pI= 6,1 + 0,1; III) absorption dans l'ultraviolet: ayant une absorption maximale a 280 nm et une absorption 35 minimale à 250 nm; -5 (IV) séquence d'acides aminés des 21 restes à partir de la terminaison N: H2N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-SerSer-Leu-Pro-Gln-SerPhe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-Gln-Val(2) G-CSF humain contenant soit un polypeptide ayant l'activité du facteur humain de stimulation granulocytaire, lequel est représenté par la totalité ou une partie de la séquence d'acides aminés indiquée ci-dessous, soit une glycoprotéine comportant à la fois ledit polypeptide et une portion de chafne glucidique: 10 20 30 (Met)nThr Gin Ser Arg Lys Glu Lys Leu Cys His Ser Ser Cys Cys Leu Tyr Gln Ser Pro Gln Leu Trp Gln Ala Leu Phe Ala Val Leu Glu Val Gln Pro Phe Leu Ile Gln Leu (Val His Pro Leu Gly Pro Ser Ser Gln Gly Leu Glu Leu Asp Val Gln Met Gln -Pro Ser Ala Val Ala Ser Tyr Leu Gly Ser Glu Ile Gin Leu Leu Gly Ala Glu Thr Phe Ser Arg Lys Cys Asp Gly Glu)mCys Glu Leu Pro Trp Ala Leu His Ser Gln Ala Pro Thr Asp Phe Glu Leu Gln Gly Gln Arg His Leu Val Leu Pro Leu Gly Pro Ala Ser Leu Ala Ala Val Ala Gln Gly Leu Leu Ala Gly Ala Arg Gln Arg Ser Glu Ala Thr Leu Pro Leu Leu Glu Asp Thr Met Met Ala Ser His Leu Gln Leu Tyr Leu Leu Ala Phe Gly Thr Thr Ala Pro Gly Phe Leu Pro Val Gln Lys Gly Ser Gly Leu Ile Leu Ile Pro Ala Gly Leu Ala  Two particularly preferred examples of human G-CSF are given below: (1) Human G-CSF having the following physicochemical properties: I) molecular weight: approximately 19,000 + 1,000, as measured by gel electrophoresis sodium polyacrylamide-dodecylsulate; II) isoelectric point: having at least one of the three isoelectric points: pI = 5.5 + 0.1, pI = 5.8 + 0.1 and pI = 6.1 + 0.1; III) absorption in the ultraviolet: having a maximum absorption at 280 nm and a minimum absorption at 250 nm; -5 (IV) amino acid sequence of the 21 residues starting from the N termination: H2N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-SerSer-Leu-Pro-Gln-SerPhe-Leu-Leu-Lys- Cys-Leu-Glu-Gln-Val (2) Human G-CSF containing either a polypeptide having the activity of the human granulocytic stimulating factor, which is represented by all or part of the amino acid sequence indicated above below, or a glycoprotein comprising both said polypeptide and a portion of carbohydrate chain: 10 20 30 (Met) nThr Gin Ser Arg Lys Glu Lys Leu Cys His Ser Ser Cys Cys Leu Tyr Gln Ser Pro Gln Leu Trp Gln Ala Leu Phe Ala Val Leu Glu Val Gln Pro Phe Leu Ile Gln Leu (Val His Pro Leu Gly Pro Ser Ser Gln Gly Leu Glu Leu Asp Val Gln Met Gln -Pro Ser Ala Val Ala Ser Tyr Leu Gly Ser Glu Ile Gin Leu Leu Gly Ala Glu Thr Phe Ser Arg Lys Cys Asp Gly Glu) mCys Glu Leu Pro Trp Ala Leu His Ser Gln Ala Pro Thr Asp Phe Glu Leu Gln Gly Gln Arg His Leu Val Leu Pro Leu Gly Pro Ala Ser Leu Ala Ala Val Ala Gln Gly Leu Leu Ala Gly Ala Arg Gln Arg Ser Glu Ala Thr Leu Pro Leu Leu Glu Asp Thr Met Met Ala Ser His Leu Gln Leu Tyr Leu Leu Ala Phe Gly Thr Thr Ala Pro Gly Phe Leu Pro Val Gln Lys Gly Ser Gly Leu Ile Leu Ile Pro Ala Gly Leu To the

(étant entendu que m est 0 ou 1; et n est 0 ou 1).  (it being understood that m is 0 or 1; and n is 0 or 1).

-6 Pour des détails concernant le procédé de préparation de ces deux types de G-CSF, voir JP-A 153273/1984, 269455/1985, 269456/1985, 270838/1985 et 270839/1985, toutes ces demandes ayant été déposées par le cessionnaire de la présente invention. Un autre procédé qui peut être utilisé consiste à effectuer la fusion d'une cellule productrice de G-CSF et d'une cellule de tumeur maligne auto-proliférante, et à  -6 For details concerning the process for the preparation of these two types of G-CSF, see JP-A 153273/1984, 269455/1985, 269456/1985, 270838/1985 and 270839/1985, all these requests having been filed by the assignee of the present invention. Another method which can be used is to effect the fusion of a G-CSF producer cell and a self-proliferating malignant tumor cell, and to

cultiver l'hybridome résultant, en présence ou en absence de 10 mitogène.  culturing the resulting hybridoma, in the presence or absence of a mitogen.

La solution obtenue, contenant du G-CSF humain, peut être stockée à l'état congelé, ou après avoir été purifiée davantage et concentrée, si nécessaire, par une technique connue quelconque. Une autre possibilité consiste à stocker la solution après l'avoir déshydratée par des moyens tels que lyophilisation. On peut traiter selon la présente invention tous les G-CSF humains ainsi préparés, afin d'obtenir des préparations  The solution obtained, containing human G-CSF, can be stored frozen, or after being further purified and concentrated, if necessary, by any known technique. Another possibility is to store the solution after having dehydrated it by means such as lyophilization. All the human G-CSFs thus prepared can be treated according to the present invention, in order to obtain preparations

pharmaceutiques stables contenant du G-CSF.  stable pharmaceuticals containing G-CSF.

Dans la liste ci-dessous, on donne des exemples caractéristiques du surfactif utilisé pour l'obtention des preparations pharmaceutiques stables, contenant du G-CSF, de la présente invention: surfactifs non ioniques ayant un HLB (équilibre hydrophile-lipophile) allant de 6 à 18, tels qu'esters d'acides aliphatiques et de sorbitanne (par exemple monocaprylate de sorbitanne, monolaurate de sorbitanne et monopalmitate de sorbitanne), esters d'acides aliphatiques et de glycérol (par exemple monocaprylate de glycérol, monomyristate de glycérol et monostéarate de glycérol), esters 30 d'acides aliphatiques et de polyglycérol (par exemple monostéarate de décaglycéryle, distéarate de décaglycéryle et monolinoléate de décaglycéryle), esters polyoxyéthyléniques d'acides aliphatiques et de sorbitanne (par exemple monolaurate polyoxyéthylénique de sorbitanne, mono-oléate poly35 oxyéthylénique de sorbitanne, monostéarate polyoxyéthylénique -7 de sorbitanne, monopalmitate polyoxyéthylènique de sorbitanne, tri-oléate polyoxyéthylénique de sorbitanne et tristéarate polyoxyéthylénique de sorbitanne), esters polyoxyéthyléniques d'acides aliphatiques et de sorbitol (par exemple tétrastéarate polyoxyéthylénique de sorbitol et tétra-oléate polyoxyéthylénique de sorbitol), esters polyoxyéthyléniques d'acides aliphatiques et de glycérol (par exemple monostéarate polyoxyéthylénique de glycéryle), esters d'acides aliphatiques et de polyéthylèneglycol (par exemple 10 distéarate de polyéthylèneglycol), polyoxyéthylène-alkyléthers (par exemple polyoxyéthylène-lauryléther), polyoxyéthylènepolyoxypropylène-alkyléthers (par exemple polyoxyéthylènepolyoxypropylène-glycoléther, polyoxyéthylènepolyoxypropylène-propyléther et polyoxyéthylène-polyoxy15 propylène-cétyléther), polyoxyéthylènealkylphényléthers (par exemple polyoxyéthylène-nonylphényléther), huile de ricin polyoxyéthylée, huile de ricin polyoxyéthylée solidifiée (huile de ricin polyoxyéthylée hydrogénée), dérivés polyoxyéthylés de cire d'abeilles (par exemple dérivé de sorbi20 tanne et cire d'abeilles polyoxyéthylé), dérivés de lanoline et polyoxyéthylène (par exemple polyoxyéthylènelanoline), et dérivés de polyoxyéthylène et amides d'acides aliphatiques (par exemple polyoxyéthylène-amide stéarique); surfactifs non ioniques tels que sels d'acides alkylsulfuriques ayant un 25 radical alkyle en C14-C18 (par exemple cétylsulfate de sodium, laurylsulfate de sodium et oléylsulfate de sodium), sels d'acides alkylsulfuriques polyoxyéthyléniques dans lesquels le nombre moyen de moles d'oxyde d'éthylène ajoutées va de 2 à 4 et le radical alkyle a de 10 à 18 atomes de carbone (par exemple laurylsulfate polyoxyéthylénique de sodium), sels d'esters de type alkylsulfosuccinate dans lesquels le groupe alkyle a de 8 à 18 atomes de carbone (par exemple laurylsulfosuccinate de sodium); et surfactifs naturels tels que lécithine, glycérophospholipides, sphingophospholipides 35 (par exemple sphingomyéline) et esters d'acides aliphatiques -8 et de saccharose, dans lesquels l'acide aliphatique a de 12 à 18 atomes de carbone. Ces surfactifs peuvent évidemment être  In the list below, examples are given which are characteristic of the surfactant used for obtaining stable pharmaceutical preparations, containing G-CSF, of the present invention: nonionic surfactants having an HLB (hydrophilic-lipophilic balance) ranging from 6 to 18, such as esters of aliphatic acids and sorbitan (for example sorbitan monocaprylate, sorbitan monolaurate and sorbitan monopalmitate), esters of aliphatic acids and glycerol (for example glycerol monocaprylate, glycerol monomyristate and monostearate glycerol), esters of aliphatic acids and polyglycerol (e.g. decaglyceryl monostearate, decaglyceryl distearate and decaglyceryl monolinoleate), polyoxyethylene esters of aliphatic acids and sorbitan (e.g. polyoxyethylene sorbitan monolaurate, mono-oleate sorbitan oxyethylene, sorbitan polyoxyethylene monostearate -7, sorbita polyoxyethylene monopalmitate nne, polyoxyethylene sorbitan tri-oleate and polyoxyethylene sorbitan tristearate), polyoxyethylene esters of aliphatic acids and sorbitol (for example polyoxyethylene sorbitol tetrastearate and polyoxyethylene sorbitol tetraoleeate), polyoxyethylene glycol esters for example polyoxyethylene glyceryl monostearate), esters of aliphatic acids and polyethylene glycol (for example polyethylene glycol distearate), polyoxyethylene-alkyl ethers (for example polyoxyethylene-lauryl ether), polyoxyethylene polyoxypropylene-alkyl ethers (for example polyoxyethylene polyethylene propyleneoxypropylene polyoxyethylene-polyoxy15 propylene-ketyl ether), polyoxyethylenealkylphenyl ethers (for example polyoxyethylene-nonylphenyl ether), polyoxyethylated castor oil, solidified polyoxyethylated castor oil (polyoxyethylated hydrogenated castor oil), polyoxyethylated derivatives of ab wax eilles (for example derivative of sorbi20 tanne and polyoxyethylated beeswax), derivatives of lanolin and polyoxyethylene (for example polyoxyethylenelanoline), and derivatives of polyoxyethylene and amides of aliphatic acids (for example polyoxyethylene-stearic amide); nonionic surfactants such as salts of alkylsulfuric acids having a C14-C18 alkyl radical (e.g. sodium cetylsulfate, sodium laurylsulfate and sodium oleylsulfate), salts of polyoxyethylene alkylsulfuric acids in which the average number of moles of added ethylene oxide ranges from 2 to 4 and the alkyl radical has from 10 to 18 carbon atoms (for example polyoxyethylene sodium lauryl sulfate), ester salts of the alkyl sulfosuccinate type in which the alkyl group has from 8 to 18 carbon atoms carbon (e.g. sodium laurylsulfosuccinate); and natural surfactants such as lecithin, glycerophospholipids, sphingophospholipids (eg sphingomyelin) and esters of aliphatic acids -8 and sucrose, in which the aliphatic acid has from 12 to 18 carbon atoms. These surfactants can obviously be

utilisés soit individuellement, soit en mélange.  used either individually or as a mixture.

On utilise les surfactifs énumérés ci-dessus de préfé5 rence en quantités allant de 1 à 10 000 parties en poids, par partie en poids de G-CSF.  The surfactants listed above are preferably used in amounts ranging from 1 to 10,000 parts by weight, per part by weight of G-CSF.

Le saccharide utilisé dans la production de la préparation pharmaceutique stable, contenant du G-CSF, de la présente invention, peut être choisi parmi des monosaccharides, 10 oligosaccharides et polysaccharides, ainsi qu'esters phosphoriques et dérivés nucléotidiques de ceux-ci, dans la mesure o ces composés sont pharmaceutiquement acceptables. On peut citer comme exemples caractéristiques: alcools glucidiques à trois fonctions alcool et plus, tels que glycérol, érythri15 tol, arabitol, xylitol, sorbitol et mannitol; acides glucidiques tels qu'acide glucuronique, acide iduronique, acide neuraminique, acide galacturonique, acide gluconique, acide mannuronique, acide cétoglycolique, acide cétogalactonique et acide cétogulonique; acide hyaluronique et ses sels, sulfate 20 de chondroftine et ses sels, héparine, inuline, chitine et leurs dérivés, chitosane et ses dérivés, dextrine, dextrane ayant un poids moléculaire moyen allant de 5 000 à 150 000, et acide alginique et ses sels. Tous ces saccharides peuvent avantageusement être utilisés soit individuellement soit en  The saccharide used in the production of the stable pharmaceutical preparation, containing G-CSF, of the present invention can be selected from monosaccharides, oligosaccharides and polysaccharides, as well as phosphoric esters and nucleotide derivatives thereof, in the as these compounds are pharmaceutically acceptable. As characteristic examples, mention may be made of: carbohydrate alcohols with three alcohol functions and more, such as glycerol, erythri15 tol, arabitol, xylitol, sorbitol and mannitol; carbohydrate acids such as glucuronic acid, iduronic acid, neuraminic acid, galacturonic acid, gluconic acid, mannuronic acid, ketoglycolic acid, ketogalactonic acid and ketogulonic acid; hyaluronic acid and its salts, chondroftin sulfate and its salts, heparin, inulin, chitin and their derivatives, chitosan and its derivatives, dextrin, dextran having an average molecular weight ranging from 5,000 to 150,000, and alginic acid and its salts . All these saccharides can advantageously be used either individually or in combination

mélange.mixed.

On utilise les saccharides énumérés plus haut de préférence en quantités allant de 1 à 10 000 parties en poids, par  The saccharides listed above are preferably used in amounts ranging from 1 to 10,000 parts by weight, per

partie en poids de G-CSF.part by weight of G-CSF.

Des exemples caractéristiques de la protéine à utiliser 30 dans la production de la préparation pharmaceutique stable, contenant du G-CSF, de la présente invention, comprennent: albumine de sérum humain, globuline de sérum humain, gélatine, gélatine traitée par un acide (poids moléculaire moyen= 7 000 - 100 000), gélatine traitée par un alcali (poids molé35 culaire moyen = 7 000 - 100 000) et collagène. Il va sans  Typical examples of the protein for use in the production of the stable pharmaceutical preparation, containing G-CSF, of the present invention include: human serum albumin, human serum globulin, gelatin, acid treated gelatin (weight average molecular = 7,000 - 100,000), gelatin treated with an alkali (average molecular weight = 7,000 - 100,000) and collagen. He goes without

dire que l'on peut utiliser ces protéines soit individuelle-  say that we can use these proteins to be individual-

-9-9

ment soit en mélange.either be mixed.

On utilise les protéines énumérées ci-dessus de préférence en quantités allant de 1 à 20 000 parties en poids, par  The proteins listed above are preferably used in amounts ranging from 1 to 20,000 parts by weight, per

partie en poids de G-CSF.part by weight of G-CSF.

Des exemples caractéristiques du composé à haut poids moléculaire, à utiliser dans la production de la préparation stable, contenant du G-CSF, de la présente invention, comprennent des polymères naturels tels qu'hydroxypropylcellulose, hydroxyméthylcellulose, carboxyméthylcellulose sodique 10 et hydroxyéthylcellulose; et des polymères de synthèse, tels que polyéthylèneglycol (poids moléculaire = 300 - 6 000), alcool polyvinylique (poids moléculaire = 20 000 - 100 000) et polyvinylpyrrolidone (poids moléculaire = 20 000  Typical examples of the high molecular weight compound for use in the production of the stable preparation, containing G-CSF, of the present invention include natural polymers such as hydroxypropylcellulose, hydroxymethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and hydroxyethylcellulose; and synthetic polymers, such as polyethylene glycol (molecular weight = 300 - 6,000), polyvinyl alcohol (molecular weight = 20,000 - 100,000) and polyvinylpyrrolidone (molecular weight = 20,000

000). Il va sans dire que ces composés à haut poids molé15 culaire peuvent être utilisés soit seuls, soit en combinaison.  000). It goes without saying that these high molecular weight compounds can be used either alone or in combination.

On utilise les composés à haut poids moléculaire, énumérés ci-dessus, de façon souhaitable en quantités allant de 1 à 20 000 parties en poids, par partie en poids de G-CSF. 20 Dans la production de la préparation pharmaceutique, contenant du G-CSF, de la présente invention, on peut également incorporer, outre le surfactif, le saccharide, la protéine ou le composé à haut poids moléculaire, décrits plus haut, au moins une substance choisie parmi un acide aminé, un 25 agent réducteur sulfureux et un antioxydant. Comme exemples d'acides aminés on peut citer la glycine, la thréonine, le tryptophane, la lysine, l'hydroxylysine, l'histidine, l'arginine, la cystéine, la cystine et la méthionine. Comme exemples d'agents réducteurs sulfureux, on peut citer: N-acétylcystéine, N-acétylhomocystéine, acide thioctique, thiodiglycol, thioéthanolamine, thioglycérol, thiosorbitol, acide thioglycolique et ses sels, thiosulfate de sodium, hydrogénosulfite de sodium, pyrosulfite de sodium, sulfite de  The high molecular weight compounds listed above are desirably used in amounts ranging from 1 to 20,000 parts by weight per part by weight of G-CSF. In the production of the pharmaceutical preparation, containing G-CSF, of the present invention, it is also possible to incorporate, in addition to the surfactant, the saccharide, the protein or the high molecular weight compound, described above, at least one substance. selected from an amino acid, a sulfur reducing agent and an antioxidant. Examples of amino acids include glycine, threonine, tryptophan, lysine, hydroxylysine, histidine, arginine, cysteine, cystine and methionine. As examples of sulfur-reducing agents, there may be mentioned: N-acetylcysteine, N-acetylhomocysteine, thioctic acid, thiodiglycol, thioethanolamine, thioglycerol, thiosorbitol, thioglycolic acid and its salts, sodium thiosulfate, sodium hydrogen sulfite, sodium pyrosulfite of

sodium, acide thiolactique, dithiothréitol, glutathion et un 35 agent réducteur sulfureux doux comportant un groupe sulfhy-  sodium, thiolactic acid, dithiothreitol, glutathione and a mild sulfur reducing agent having a sulfhy-

2601591-2601591-

- 10 dryle, tel qu'un acide thioalcanoique en C1-C7. Comme exemples d'antioxydants, on peut citer: acide érythorbique, dibutylhydroxytoluène, butylhydroxyanisole, dl-a-tocophérol, acétate de tocophérol, acide Lascorbique et ses sels, L-ascorbopalmitate, L-ascorbostéarate, gallate de triamyle, gallate de propyle et agents chélateurs tels qu'éthylènediaminetétra-acétate disodique (EDTA), pyrophosphate de  - 10 dryles, such as a C1-C7 thioalkanoic acid. Examples of antioxidants that may be mentioned include: erythorbic acid, dibutylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, dl-a-tocopherol, tocopherol acetate, Lascorbic acid and its salts, L-ascorbopalmitate, L-ascorbostearate, triamyl gallate, propyl gallate and agents chelators such as ethylenediaminetetra disodium acetate (EDTA), pyrophosphate

sodium et métaphosphate de sodium.sodium and sodium metaphosphate.

On utilise les acides aminés, agents réducteurs sulfu10 reux et antioxydants, énumérés plus haut, ou des mélanges de  Amino acids, sulfur reducing agents and antioxidants, listed above, are used, or mixtures of

ceux-ci, de préférence en quantités allant de 1 à 10 000 parties en poids, par partie en poids de G-CSF.  these, preferably in amounts ranging from 1 to 10,000 parts by weight, per part by weight of G-CSF.

Pour la formulation de la préparation stable contenant du G-CSF de la présente invention, en une forme pharmaceu15 tique appropriée, on peut incorporer un ou plusieurs des agents suivants: un diluant, un solubilisant, un agent d'isotonie, un excipient, un modificateur de pH, un édulcorant et  For the formulation of the stable preparation containing G-CSF of the present invention, in a suitable pharmaceutical form, one or more of the following agents may be incorporated: a diluent, a solubilizer, an isotonic agent, an excipient, a pH modifier, a sweetener and

un tampon.a tampon.

La préparation pharmaceutique de G-CSF stabilisée de la 20 présente invention peut être formulée soit pour l'administration orale, soit pour l'administration parentérale, comme par exemple administration par injection effectuée de diverses façons, et on peut utiliser diverses formes pharmaceutiques selon le mode spécifique d'administration. Les formes pharma25 ceutiques caractéristiques comprennent celles destinées à l'administration orale, telles que comprimés, pillules, capsules, granulés et suspensions; solutions, suspensions et préparations lyophilisées destinées essentiellement à l'injection intraveineuse, l'injection intramusculaire, l'injec30 tion sous-cutanée et l'injection intradermique; et celles destinées à l'administration transmucosale, telles que suppositoires rectaux, compositions administrées par voie nasale  The stabilized G-CSF pharmaceutical preparation of the present invention can be formulated either for oral administration or for parenteral administration, such as for example administration by injection carried out in various ways, and various pharmaceutical forms can be used depending on the specific mode of administration. Typical pharmaceutical forms include those for oral administration, such as tablets, pills, capsules, granules and suspensions; lyophilized solutions, suspensions and preparations intended mainly for intravenous injection, intramuscular injection, subcutaneous injection and intradermal injection; and those intended for transmucosal administration, such as rectal suppositories, compositions administered by the nasal route

et suppositoires vaginaux.and vaginal suppositories.

Selon la présente invention, on ajoute à-la préparation 35 pharmaceutique, contenant du G-CSF, au moins une substance  According to the present invention, at least one substance is added to the pharmaceutical preparation containing G-CSF

- 1- 1

choisie parmi un surfactif, un saccharide, une protéine ou un composé à haut poids moléculaire, de sorte que l'on empêche son adsorption sur les parois de son contenant ou d'une seringue,et en même temps celle-ci reste stable pendant une durée prolongée. Le mécanisme détaillé par lequel les substances mentionnées plus haut ont stabilisé le G-CSF ou l'empêchent d'être adsorbé reste encore à éclaircir. En présence d'un surfactif, le GCSF, qui est une protéine hydrophobe, aurait 10 sa surface recouverte par le surfactif en devenant ainsi solubilisé, de manière à empêcher efficacement l'adsorption du G-CSF, présent à l'état de traces, sur la paroi de son contenant ou d'une seringue. Un saccharide ou un composé hydrophile à haut poids moléculaire formerait une couche hydratée entre le G-CSF et la surface adsorbante de la paroi de son contenant ou d'une seringue, empêchant ainsi d'une façon efficace l'adsorption du G-CSF. Une protéine entrerait en compétition avec le G-CSF pour l'adsorption sur la paroi  chosen from a surfactant, a saccharide, a protein or a high molecular weight compound, so that its adsorption is prevented on the walls of its container or of a syringe, and at the same time it remains stable for one extended duration. The detailed mechanism by which the substances mentioned above stabilized G-CSF or prevented it from being adsorbed remains to be clarified. In the presence of a surfactant, GCSF, which is a hydrophobic protein, would have its surface covered by the surfactant, thereby becoming solubilized, so as to effectively prevent the adsorption of the trace-present G-CSF, on the wall of its container or syringe. A high molecular weight saccharide or hydrophilic compound would form a hydrated layer between G-CSF and the adsorbent surface of the wall of its container or syringe, effectively preventing the adsorption of G-CSF. A protein would compete with G-CSF for adsorption on the wall

de son contenant ou d'une seringue, inhibant ainsi efficace20 ment l'adsorption du G-CSF.  container or syringe, effectively inhibiting the adsorption of G-CSF.

En plus de la prévention de l'adsorption du G-CSF, les substances mentionnées plus haut contribueraient également à empêcher l'association ou la polymérisation des molécules de G-CSF. En présence d'un surfactif, d'un saccharide, d'une protéine ou d'un composé à haut poids moléculaire, les molécules individuelles du G-CSF sont dispersées dans ces substances, et l'interaction entre les molécules du G-CSF est suffisamment réduite pour entraîner une diminution importante de la probabilité de leur association ou polymérisation. En outre, ces substances retarderaient l'auto-oxydation du G-CSF qui est accélérée à haute température ou en présence d'un haut degré d'humidité, ou empêcheraient l'association ou la polymérisation du G-CSF à la suite de son auto-oxydation. Ces effets de retardement de l'auto-oxydation du G-CSF ou d'in35 hibition de son association ou de sa polymérisation seraient - 12 encore accrus par addition d'un acide aminé, d'un agent  In addition to preventing the adsorption of G-CSF, the substances mentioned above would also help prevent the association or polymerization of G-CSF molecules. In the presence of a surfactant, a saccharide, a protein or a high molecular weight compound, the individual molecules of G-CSF are dispersed in these substances, and the interaction between the molecules of G-CSF is reduced enough to cause a significant decrease in the likelihood of their association or polymerization. In addition, these substances would delay the auto-oxidation of G-CSF which is accelerated at high temperature or in the presence of a high degree of humidity, or would prevent the association or polymerization of G-CSF as a result of its auto-oxidation. These effects of delaying the auto-oxidation of G-CSF or of inhibition of its association or of its polymerization would be further increased by the addition of an amino acid, an agent

réducteur sulfureux ou d'un antioxydant.  sulfur reducer or antioxidant.

Les problèmes décrits plus haut sont particulièrement perceptibles dans des solutions injectables et dans des sus5 pensions, mais ils -peuvent également apparaître dans le processus de formulation du G-CSF en d'autres formes pharmaceutiques telles que comprimés. L'addition de surfactifs, saccharides, protéines ou composés à haut poids moléculaire est  The problems described above are particularly noticeable in injectable solutions and in suspensions, but they can also appear in the process of formulation of G-CSF in other pharmaceutical forms such as tablets. The addition of surfactants, saccharides, proteins or high molecular weight compounds is

également efficace dans ce dernier cas.  also effective in the latter case.

Grâce à l'addition d'au moins une substance choisie parmi un surfactif, un saccharide, une protéine et un composé à haut poids moléculaire, le G- CSF est hautement stabilisé et maintient son activité pendant une durée prolongée, comme on va le démontrer dans les exemples qui suivent. Pour obtenir 15 ces résultats, la quantité de chacune de ces substances est critique, en particulier sa limite inférieure, et les plages suivantes sont souhaitables: 1 - 10 000 parties en poids de surfactif, 1 - 10 000 parties en poids de saccharide, 1 000 parties en poids de protéine et 1 20 000 parties en 20 poids de composé à haut poids moléculaire, pour une partie en  Thanks to the addition of at least one substance chosen from a surfactant, a saccharide, a protein and a high molecular weight compound, G-CSF is highly stabilized and maintains its activity for a prolonged period, as will be demonstrated in the following examples. To obtain these results, the amount of each of these substances is critical, particularly its lower limit, and the following ranges are desirable: 1 - 10,000 parts by weight of surfactant, 1 - 10,000 parts by weight of saccharide, 1 000 parts by weight of protein and 1 20 000 parts by weight of high molecular weight compound, for one part in

poids de G-CSF.weight of G-CSF.

Selon la présente invention, on utilise en une concentration spécifiée un surfactif, un saccharide, une protéine et/ou un composé à haut poids moléculaire, et cela est effi25 cace non seulement pour empêcher l'adsorption du G-CSF sur la paroi de son contenant ou d'une seringue, mais également pour accroître la stabilité d'une préparation pharmaceutique contenant du G-CSF. Il en résulte qu'il devient possible de garantir l'administration d'une dose faible mais très précise 30 de G- CSF à des patients; comme le G-CSF est coûteux, son utilisation efficace doit entraîner des coûts plus faibles pour la production de préparations pharmaceutiques contenant du  According to the present invention, a surfactant, a saccharide, a protein and / or a high molecular weight compound is used in a specified concentration, and this is effective not only to prevent adsorption of G-CSF on the sound wall. container or syringe, but also to increase the stability of a pharmaceutical preparation containing G-CSF. As a result, it becomes possible to guarantee the administration of a low but very precise dose of G-CSF to patients; as G-CSF is expensive, its effective use should result in lower costs for the production of pharmaceutical preparations containing

G-CSF.G-CSF.

Les exemples qui suivent sont donnés dans le but d'il35 lustrer plus en détail la présente invention, mais ne doivent - 13 en aucune manière être considérés comme limitatifs. Dans ces exemples, on a déterminé l'activité résiduelle-du G-CSF par  The following examples are given for the purpose of illustrating the present invention in more detail, but are not to be construed as limiting in any way. In these examples, the residual activity of G-CSF was determined by

l'une des méthodes suivantes.one of the following methods.

(a) Méthode au milieu gélosé semi-solide utilisant des cel5 lules de moelle osseuse de souris: On a mélangé 0,4 ml de sérum de cheval, 0,1 ml de l'échantillon, 0,1 ml d'une suspension de cellules de moelle osseuse de souris C3H/He (femelles) (0,5 - 1 x 105 cellules nuclées), et 0,4 ml d'une solution de culture de McCoy 5A modifiée, contenant 0,75 % de gélose, on a versé le mélange dans une boite en matière plastique pour culture de tissus (35 mm de diamètre), on l'a laissé prendre en masse, et on a effectué la culture pendant 5 jours à 37 C dans une atmosphère constituée de 95% d'air et 5% de CO2, et à 100% d'humi15 dité. On a compté le nombre des colonies formées (une colonie  (a) Method in semi-solid agar medium using mouse bone marrow cells: 0.4 ml of horse serum, 0.1 ml of the sample, 0.1 ml of a suspension of C3H / He mouse bone marrow cells (females) (0.5 - 1 x 105 nucleated cells), and 0.4 ml of a modified McCoy 5A culture solution containing 0.75% agar poured the mixture into a plastic box for tissue culture (35 mm in diameter), it was allowed to solidify, and the culture was carried out for 5 days at 37 ° C. in an atmosphere consisting of 95% of air and 5% CO2, and 100% humidity. We counted the number of colonies formed (one colony

consistant en au moins 50 cellules), et on a déterminé l'activité en définissant une unité comme l'activité pour la formation d'une colonie.  consisting of at least 50 cells), and activity was determined by defining a unit as activity for colony formation.

La solution de culture de McCoy 5A modifiée, utilisée 20 dans la méthode (a), était préparée de la façon suivante.  The modified McCoy 5A culture solution, used in method (a), was prepared as follows.

Solution de culture de McCoy modifiée (double concentration) On a dissous deux fois dans 500 ml d'eau distillée 12 g  Modified McCoy culture solution (double concentration) Twice dissolved in 500 ml of distilled water 12 g

de solution de culture de McCoy 5A (Gibco), 2,55 g de milieu aux acides aminés et vitamines MEM (Nissui Seiyaku Co. Ltd.), 25 2,18 g de bicarbonate de sodium et 50 000 unités de pénicilline G potassique, et on a stérilisé la solution par filtration à travers un filtre Millipore (0, 22 gm).  culture solution of McCoy 5A (Gibco), 2.55 g of medium with amino acids and vitamins MEM (Nissui Seiyaku Co. Ltd.), 2.18 g of sodium bicarbonate and 50,000 units of potassium penicillin G, and the solution was sterilized by filtration through a Millipore filter (0.22 gm).

(b) Chromatographie liquide à haute performance en phase inversée: En utilisant une colonne C8 à phase inversée (4,6 mm x 300 mm; 5 pm) et un mélange de n-propanol et acide trifluoroacétique en tant que phase mobile, on a déterminé l'activité résiduelle du G-CSF (injecté en une quantité équivalente à 1 pg) dans les conditions de gradient suivantes: - 14 Temps (s) Solvant (A) Solvant (B) Gradient  (b) High performance reverse phase liquid chromatography: Using a reverse phase C8 column (4.6 mm x 300 mm; 5 µm) and a mixture of n-propanol and trifluoroacetic acid as the mobile phase, determined the residual activity of G-CSF (injected in an amount equivalent to 1 pg) under the following gradient conditions: - 14 Time (s) Solvent (A) Solvent (B) Gradient

0 100% 0%0 100% 0%

linéairelinear

0% 100%0% 100%

2 % linéaire2% linear

100% 0%100% 0%

Solvant (A): 30% de n-propanol et 0,1% d'acide trifluoroacétique.  Solvent (A): 30% n-propanol and 0.1% trifluoroacetic acid.

Solvant (B): 60% de n-propanol et 0,1% d'acide trifluoro10 acétique.  Solvent (B): 60% n-propanol and 0.1% trifluoro10 acetic acid.

On a effectué la détection à une longueur d'onde de 210 nm, et on a calculé le pourcentage de l'activité résiduelle du G-CSF au moyen de la formule suivante: quantité résiduelle de G-CDF après 15 Activité résiduelle = un intervalle de temps déterminé x100 du G-CSF (%) quantité initiale de G-CSF La quantité résiduelle de G-CSF déterminée par cette méthode était en très bon accord avec le résultat obtenu dans  Detection was carried out at a wavelength of 210 nm, and the percentage of the residual activity of G-CSF was calculated using the following formula: residual amount of G-CDF after 15 Residual activity = one interval determined time x100 of G-CSF (%) initial amount of G-CSF The residual amount of G-CSF determined by this method was in very good agreement with the result obtained in

la mesure par la méthode au milieu gélosé semi-solide (a), 20 utilisant des cellules de moelle osseuse de souris.  measurement by the semi-solid agar method (a), using mouse bone marrow cells.

Exemple 1Example 1

On a ajouté à 5 pg-de G-CSF un des agents de stabilisation énumérés dans le tableau 1, et on a dissous le mélange aseptiquement dans une solution tampon de phosphate 20 mM (contenant 100 mM de chlorure de sodium; pH 7,4) , pour produire une préparation pharmaceutique contenant 5 pg de G-CSF par ml, que l'on a ensuite lyophilisée. On a mesuré par la méthode (a) la variation de l'activité du G-CSF en fonction  One of the stabilizers listed in Table 1 was added to 5 µg-G-CSF, and the mixture was aseptically dissolved in 20 mM phosphate buffer solution (containing 100 mM sodium chloride; pH 7.4 ), to produce a pharmaceutical preparation containing 5 µg of G-CSF per ml, which was then lyophilized. We measured by method (a) the variation of the activity of G-CSF as a function

du temps, et les résultats sont donnés dans le tableau 1.  time, and the results are given in Table 1.

Dans le tableau, le terme "activité (%)" représente l'activité résiduelle du G-CSF par rapport à l'unité initiale, et il est défini par la formule suivante: unités d'activité après un Activité (%) = intervalle de temps déterminé x 100 35 unités d'activité initiales - 15 On a effectué la lyophilisation par la méthode suivante: On a placé dans un flacon de verre traité au sulfate, stérile, la solution de G-CSF contenant un agent de stabili5 sation, on l'a congelée à -40 C, on l'a soumise à un premier séchage par chauffage de -40 à 0 C en l'espace de 48 heures, en augmentant la pression de 3,99 à 13,3 Pa (0,03 - 0,1 torr), puis à un second séchage par chauffage de 0 à 20 C pendant une période de 12 heures, en augmentant la pression 10 de 3,99 à 10,64 Pa (0,03 - 0,08 torr); après cela, on a rempli l'intérieur du flacon avec de l'azote gazeux sec, stérile, jusqu'à l'obtention d'une pression égale à la pression atmosphérique, puis on a fermé le falcon avec un bouchon de  In the table, the term "activity (%)" represents the residual activity of G-CSF relative to the initial unit, and it is defined by the following formula: activity units after an Activity (%) = interval determined time x 100 35 initial activity units - The lyophilization was carried out by the following method: The solution of G-CSF containing a stabilizing agent was placed in a sterile sulfate-treated glass vial, it was frozen at -40 C, it was subjected to a first drying by heating from -40 to 0 C in the space of 48 hours, increasing the pressure from 3.99 to 13.3 Pa (0 , 03 - 0.1 torr), then a second drying by heating from 0 to 20 C for a period of 12 hours, increasing the pressure 10 from 3.99 to 10.64 Pa (0.03 - 0.08 torr); after that, the inside of the bottle was filled with dry, sterile nitrogen gas, until a pressure equal to atmospheric pressure was obtained, then the falcon was closed with a stopper.

coutchouc pour lyophilisation, et on l'a ensuite scellé avec 15 une capsule en aluminium.  coutchouc for lyophilization, and then sealed with an aluminum cap.

tableau 1table 1

ACTIVITEACTIVITY

QUANTITEQUANTITY

(partie en Après stock- Après stockANT STABILISANT poids) age à 4 C - age à 37 C pendant 6 pendant 1 mois mois xylitol 10 000 92 86 mannitol 10 000 91 85 acide glucuronique 10 000 86 82 acide hyaluronique 2 000 92 89 dextrane(m.w. 40,000) 2 000 95 90 héparine 5 000 85 80 chitosane 2 000 93 91 acide aiginique 2 000 90 90 albumine de sérum humain 1 000 98 99 globuline de sérum humain 1 000 98 95 gélatine traitée par un 2000 97 95 acide gelatine traitée par un 1000 99 96 alcali 1 0 0 99 96 collagène 2 000 95 90 (po.yw.thy negycol 10 000 94 90 (m.w. 4,000) hydroxypropylcellulose 1 000 98 94 carboxymerhyl 1000 88 80 cellulose sodique hydroxymethylcellulose 5 000 92 90 carboxyméthylcellulose 2 000 96 95  (part in After stock - After storing STABILIZING weight) age at 4 C - age at 37 C for 6 for 1 month months xylitol 10,000 92 86 mannitol 10,000 91 85 glucuronic acid 10,000 86 82 hyaluronic acid 2,000 92 89 dextran ( mw 40,000) 2,000 95 90 heparin 5,000 85 80 chitosan 2,000 93 91 aiginic acid 2,000 90 90 human serum albumin 1,000 98 99 human serum globulin 1,000 98 95 gelatin treated with 2000 97 95 gelatin acid treated with un 1000 99 96 alkali 1 0 0 99 96 collagen 2000 95 90 (po.yw.thy negycol 10,000 94 90 (mw 4,000) hydroxypropylcellulose 1,000 98 94 carboxymerhyl 1000 88 80 sodium cellulose hydroxymethylcellulose 5,000 92 90 carboxymethylcellulose 2,000 96 95

(P. M. 50 000)(P. M. 50,000)

polyvinylpyrrolidone 2000 95 94polyvinylpyrrolidone 2000 95 94

(P.M. 50 000) I(P.M. 50,000) I

albumine de sérum humain 2 000 mannitol 2 000 100 97 cystéine 100  human serum albumin 2,000 mannitol 2,000 100 97 cysteine 100

- 17 -- 17 -

TABLEAU 1TABLE 1

(suite) l - ACTIVITE(continued) l - ACTIVITY

QUANTITEQUANTITY

AGENT STABILISANT (partie en Après stock- Après stock.poids) - age à 4 Cage à 37 C pendant 6 pendant 1 fiois mois albumine de sérum humain 2 000 polyoxy6thylene monolaurate de sorbitanne 99 96 mannitol 2 000 albumine de sérum huamin 2 000 hydroxypropylcellulose 500 98 92 dextrane(P. M. 40, 000) 2 000 polyoxyéthylène 100 monolaurate de sorbitanne;, 98 96 sorbitol 2 000 huile de ricin polyoxyéthyléE 100 durcie  STABILIZING AGENT (part in After stock- After stock.weight) - age at 4 Cage at 37 C for 6 for 1 month month human serum albumin 2000 polyoxy6thylene sorbitan monolaurate 99 96 mannitol 2000 albumin serum huamin 2000 hydroxypropylcellulose 500 98 92 dextran (PM 40,000) 2,000 polyoxyethylene 100 sorbitan monolaurate ;, 98 96 sorbitol 2,000 cast polyoxyethylated castor oil E 100

94 9294 92

dextrane(P.M. 40 000) 2 000 Aucun - 74 58  dextran (P.M. 40,000) 2,000 None - 74 58

Exemple 2Example 2

On a ajouté à 10 pg de G-CSF un des agents de stabili25 sation énumérés dans le tableau 2, et on a dissous aseptiquement le mélange dans une solution de tampon phosphate 20 mM (contenant 100 mM de chlorure de sodium; pH 7,4) pour produire une préparation pharmaceutique contenant 10 gg de G-CSF par ml. On a introduit aseptiquement la préparation dans un 30 flacon de verre traité au sulfate, et on a scellé celui-ci pour préparer une solution de G-CSF. On a mesuré, par la même méthode que celle utilisée dans l'exemple 1, la variation de l'activité du G-CSF dans cette solution en fonction du temps,  One of the stabilizers listed in Table 2 was added to 10 µg G-CSF, and the mixture was aseptically dissolved in 20 mM phosphate buffer solution (containing 100 mM sodium chloride; pH 7.4 ) to produce a pharmaceutical preparation containing 10 gg of G-CSF per ml. The preparation was aseptically introduced into a sulfate treated glass vial, and sealed to prepare a G-CSF solution. The variation in the activity of G-CSF in this solution as a function of time was measured by the same method as that used in Example 1.

et les résultats sont donnés dans le tableau 2.  and the results are given in Table 2.

26015 9126 015 91

TABLEAU 2TABLE 2

ACTIVITESACTIVITIES

QUANTITEQUANTITY

(partie Aprs stock- Aps stdk Apres stxckAGENT STABILISANT enpoids) age à 4 C ag à 4 C age parlat pa3-dt 7 p3ait 2 1 mois à la jurs miths tfltrabre ar iante mannitol 5 000 91 87 82 acide hyaluronique 2 000 93 87 70 dextrane(P.M. 40 000) 2 000 96 95 85 glyceriol 10 000 90 90 88 acide neuraminique 5 000 93 91 84 chitine 2 000 95 92 86 dextrine 2 000 90 92 87 albumine de sérum humain 1 000 99 95 92 globuline de sérum humain 1 000 98 94 90 éclatine traitée par un 2 000 97 96 87 gélatine traitée par un 500 99 95 92 alcali collagene 2 000 99 94 88 Ppolyethyleneglycol 10 000 94 89 90  (part after stock- Aps stdk After stxckAGENT STABILIZER in weight) age at 4 C ag at 4 C age parlat pa3-dt 7 p3ait 2 1 month on the day miths tfltrabre ar iante mannitol 5,000 91 87 82 hyaluronic acid 2,000 93 87 70 dextran (PM 40,000) 2,000 96 95 85 glyceriol 10,000 90 90 88 neuraminic acid 5,000 93 91 84 chitin 2,000 95 92 86 dextrin 2,000 90 92 87 human serum albumin 1,000 99 95 92 human serum globulin 1 000 98 94 90 eclatine treated with a 2,000 97 96 87 gelatin treated with a 500 99 95 92 alkali collagen 2,000 99 94 88 Ppolyethyleneglycol 10,000 94 89 90

(P. M. 4 000)(P. M. 4 000)

hydroxypropylcellulose c. 2 000 98 95 92 carboxymethyl- 2 000 92 91 80 cellulose sodique hydroxyethylcellulose. 4 000 92 94 90 alcohol polyvinylique 4 000 97 93 90  hydroxypropylcellulose c. 2,000 98 95 92 carboxymethyl- 2,000 92 91 80 sodium cellulose hydroxyethylcellulose. 4,000 92 94 90 polyvinyl alcohol 4,000 97 93 90

4 000 97 93 904,000 97 93 90

(P.M. 50 000)(P.M. 50,000)

polyvinylpyrrolidone 4 000 95 95 92polyvinylpyrrolidone 4,000 95 95 92

4 000 95 95 924,000 95 95 92

(P.M. 50 000) monolaurate de sorbitanne 400 97 96 95 polyoxyéthylene monolau- 400 1 96 9 400rate de sorbitanne96 94 rate de sorbitanne TABLEAU 2 (suite)  (P.M. 50,000) sorbitan monolaurate 400 97 96 95 polyoxyethylene monolau- 400 1 96 9 400 sorbitan rate96 94 sorbitan rate TABLE 2 (continued)

! ACTIVITE QUANTITE! QUANTITY ACTIVITY

QUArTITE AFres stock- ApFrs stxck- AFrs stockAGENT STABILISANT en poids) a à 4 C age à 4 C age peiat npOlt 7 pan-it 2 1 mis à la jars ma*hs - te[irrc a*ite polyoxyéthylene monosté- 400 98 97 94 arate de sorbitanne polyoxyéthylène polyoxypropylène 400 100 94 93 g1 ycoléther huile de ricin polyoxyéthylée solidifiée 400 99 98 90 laurylsulfate de sodium 2 000 97 93 87 lecithine 2 000 97 94 90 albumine de sérum humain 2 000 mannitol 2 000 100 99 97 cystéine 100 albumine de sérum hamain 2 000 monolaurate de polyoxyéthylène de sorbitanne 100 99 97 95  QUArTITE AFres stock- ApFrs stxck- AFrs STORAGE STABILIZER by weight) a at 4 C age at 4 C age peiat npOlt 7 pan-it 2 1 put in jars ma * hs - te [irrc a * ite polyoxyethylene monosté - 400 98 97 94 sorbitan arate polyoxyethylene polyoxypropylene 400 100 94 93 g1 ycolether solidified polyoxyethylated castor oil 400 99 98 90 sodium lauryl sulfate 2,000 97 93 87 lecithin 2,000 97 94 90 human serum albumin 2,000 mannitol 2,000 100 99 97 cysteine 100 albumin of hamain serum 2000 sorbitan polyoxyethylene monolaurate 100 99 97 95

99 97 9599 97 95

mannitol 2 000 albumine de sérum humain 1 000 hydroxypropylcellulose 500 99 97 95 dextrane(P.M. 40,000) 2 000 monopalmitate derpolyoxyéthylène sorbitanne 96 96 93 sorbitol 2 000 huille de ricin polyoxyéthylée solidifiée  mannitol 2,000 human serum albumin 1,000 hydroxypropylcellulose 500 99 97 95 dextran (P.M. 40,000) 2,000 derpolyoxyethylene sorbitan monopalmitate 96 96 93 sorbitol 2,000 solidified polyoxyethylated castor oil

92 9292 92

dextranc(p.M. 40 000) 2 000 Auncun 72 61 47 -  dextranc (p.M. 40,000) 2,000 None 72 61 47 -

Exemple.3Example. 3

On a ajouté à 10 pg de G-CSF un des agents de stabilisation énumérés dans le tableau 3, et on a dissous aseptiquement le mélange dans une solution de tampon phosphate 20 mM 5 (contenant 100 mM de chlorure de sodium; pH 7, 4), pour produire une préparation pharmaceutique contenant 10 gg de G-CSF par ml. On a introduit 1 ml de la préparation dans un flacon de verre traité au sulfate, revêtu de silicone, et on a maintenu celui-ci à 4 C. On a évalué l'efficacité de chaque agent 10 stabilisant dans l'inhibition de l'adsorption de G-CSF, en mesurant l'activité résiduelle du G-CSF dans la solution après 0,5, 2 et 24 heures. On a effectué la mesure par la  One of the stabilizers listed in Table 3 was added to 10 µg G-CSF, and the mixture was aseptically dissolved in 20 mM phosphate buffer solution 5 (containing 100 mM sodium chloride; pH 7.4 ), to produce a pharmaceutical preparation containing 10 gg of G-CSF per ml. 1 ml of the preparation was placed in a sulfate-coated glass flask, coated with silicone, and kept at 4 C. The effectiveness of each stabilizing agent in inhibiting the reaction was evaluated. adsorption of G-CSF, by measuring the residual activity of G-CSF in the solution after 0.5, 2 and 24 hours. The measurement was made by

méthode (b) utilisant la chromatographie liquide à haute performance en phase inversée. Les résultats sont donnés dans le 15 tableau 3.  method (b) using high performance liquid chromatography in reverse phase. The results are given in Table 3.

TABLEAU 3TABLE 3

QUANTITE ACITIVITE RESIDUELLE (%)QUANTITY RESIDUAL ACTIVITY (%)

AGENT STABILISANT (partie en Poids) initial- 0,5 h 2 h 24 h monnitol 5 000 100 93 90 91 acide hyaluronique acide 2 000 100 97 92 92 dextrane(P. x 40 00Q) 2 000 100 98 95 96 glycérine 10 000 100 94 91 90 he'parine 2 000 100 92 90 90 acide glucuronique 5 000 100 96 90 91 acide cétoglycolique 5 000 100 92 88 90 albumine de sérum humain 1 000 100 100 101 99 globuline de sérum humain 1 000 100 98 100 98 g$a1tine traitée par un 500 100 99 98 99 acide gélatine traitée par un 2 000 100 99 97 97 alcali__ _ _ _ _ _ _ _ _ alcali 2 000 100 99 97 97 collagene 2 000 100 100 98 99 polyethylènecelulose 10 000 100- 100 0 100 99 (p. 4 4,000) hydroxypropylcellulose 2 000 100 100 100 99 carboxym'éthyl 2 000 100. 98 96 95 cellulose sodique hydroxyethylcellulose 4 000 100 96 93 92 alcool polyvinylique  STABILIZING AGENT (part by Weight) initial - 0.5 h 2 h 24 h monnitol 5,000 100 93 90 91 hyaluronic acid 2,000 100,000 97 92 92 dextran (P x 40 00Q) 2,000 100 98 95 96 glycerin 10,000 100 94 91 90 heparin 2,000 100 92 90 90 glucuronic acid 5,000 100 96 90 91 ketoglycolic acid 5,000 100 92 88 90 human serum albumin 1,000 100 100 101 99 human serum globulin 1,000 100 98 100 98 g $ a1tine treated with a 500 100 99 98 99 gelatin acid treated with a 2,000 100 99 97 97 alkali__ _ _ _ _ _ _ _ _ alkali 2,000 100 99 97 97 collagen 2,000 100 100 98 99 polyethylene cellulose 10,000 100- 100 0 100 99 (p. 4 4,000) hydroxypropylcellulose 2,000 100 100 100 99 carboxymethyl 2,000 100. 98 96 95 sodium cellulose hydroxyethylcellulose 4,000 100 96 93 92 polyvinyl alcohol

(PM. 50 -000) 4 000 100 99 100 98(PM. 50 -000) 4,000 100 99 100 98

(P -M. 50 -000)(P -M. 50 -000)

polyvinylpyrrolidone 4 000 100 98 98 96  polyvinylpyrrolidone 4,000 100 98 98 96

(P.M. 50 000)(P.M. 50,000)

monocaprylate de sorbitanne 400 100 100 100 98 monostearate de polyoxyéthylène de sorbitanne 400 100 100 98 100 huile de ricin polyoxyethy1de solidifiye 400 100 99 101 99 TABLEAU 3 (suite)  sorbitan monocaprylate 400 100 100 100 98 sorbitan polyoxyethylene monostearate 400 100 100 98 100 solidified polyoxyethylene castor oil 400 100 99 101 99 TABLE 3 (continued)

QUANTITE ACTIVITE RESIDUELLE (%)QUANTITY RESIDUAL ACTIVITY (%)

(partie AGENT STABILISANT en poids) initiale 0,5 h 2 h 24 h laurylsulfate de sodium 2 000 100 100 99 97 lecithine 2 000 100 99 100 98 albumine de sérum humain 2 000 mannitol 2 000 100 100 100 101 cysteine 100 albumine de sérum humain 2 000 monolaurate de polyoxyéthy- 100 100 100 98 99 lène sorbitanne mannitol 2 000 albumine de sérum humain 1,000 hydroxypropylcellulose 500 100 101 99 100 dextrane(p. M. 40,000) 2 000 :monolaurate de polyoxyéthy- 100 lène sorbitanne  (part STABILIZING AGENT by weight) initial 0.5 h 2 h 24 h sodium lauryl sulfate 2,000 100 100 99 97 lecithin 2,000 100 99 100 98 human serum albumin 2,000 mannitol 2,000 100 100 100 101 cysteine 100 serum albumin human 2,000 polyoxyethylene monolaurate 100 100 100 98 99 lene sorbitan mannitol 2,000 human serum albumin 1,000 hydroxypropylcellulose 500 100 101 99 100 dextran (p. M. 40,000) 2,000: polyoxyethylene monolaurate 100 sorbitan

100 99 99100 99 99

sorbitol 2 000 huile de ricin polyoxyéthy- 100 lée solidifiée  sorbitol 2,000 solidified polyoxyethylated castor oil

100 98 97100 98 97

dextrare (P. x 40 000) 2 000 Aucun - 100 91 72 73 - 23  dextrare (P. x 40,000) 2,000 None - 100 91 72 73 - 23

Claims (10)

REVENDICATIONS 1. Préparation pharmaceutique stable contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire, laquelle contient, en plus du facteur de stimulation de la lignée granulocytaire présent en tant que le composant actif, au moins une substance choisie parmi un surfactif, un saccharide, une protéine et un composé à haut poids  1. Stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocytic line, which contains, in addition to the factor for stimulating the granulocytic line present as the active component, at least one substance chosen from a surfactant, a saccharide, a protein and a high-weight compound moléculaire, pharmaceutiquement acceptables.  molecular, pharmaceutically acceptable. 2. Préparation pharmaceutique stable contenant un fac10 teur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient le surfactif en une quantité de 1 000 parties en poids, par partie en poids du facteur de stimulation de la lignée granulocytaire.  2. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1, characterized in that it contains the surfactant in an amount of 1000 parts by weight, per part by weight of the factor for stimulating the line. granulocytic. 3. Préparation pharmaceutique stable contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit surfactif est au moins un composé choisi parmi un surfactif non ionique, un surfactif anionique et un surfactif naturel, le 20 surfactif non ionique étant un ester d'acide aliphatique et de sorbitanne, un ester d'acide aliphatique et de glycérol, un ester d'acide aliphatique et de polyglycérol, un ester polyoxyéthylénique d'acide aliphatique et de sorbitanne, un ester polyoxyéthylénique d'acide aliphatique et de sorbitol, 25 un ester polyoxyéthylénique d'acide aliphatique et de glycérol, un ester d'acide aliphatique et de polyéthylèneglycol, un polyoxyéthylènealkyléther, un polyoxyéthylène-polyoxypropylène-alkyléther, un polyoxyéthylènealkylphényléther, une huile de ricin polyoxyéthylée solidifiée, un dérivé de cire d'abeilles polyoxyéthylé, un dérivé de lanoline polyoxyéthylé ou un polyoxyéthylène-amide d'acide aliphatique, le surfactif anionique étant un sulfate d'alkyle, un sel d'acide alkylsulfurique polyoxyéthylénique ou un sel d'ester sulfosuccinate d'alkyle, et le surfactif naturel étant la lécithine, un glycérophospholipide, un sphingophospholipide3. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1 or 2, characterized in that said surfactant is at least one compound chosen from a nonionic surfactant, an anionic surfactant and a natural surfactant, the surfactant nonionic being an ester of aliphatic acid and sorbitan, an ester of aliphatic acid and glycerol, an ester of aliphatic acid and polyglycerol, a polyoxyethylene ester of aliphatic acid and sorbitan, a polyoxyethylene ester of acid aliphatic and sorbitol, a polyoxyethylene ester of aliphatic acid and glycerol, an ester of aliphatic acid and polyethylene glycol, a polyoxyethylenealkyl ether, a polyoxyethylene-polyoxypropylene-alkyl ether, a polyoxyethylenealkylphenyl ether, a solidified polyoxyethylated castor oil polyoxyethylated beeswax, a polyoxyethylated lanolin derivative or a polyoxyethylene amide of aliphatic acid, anionic surfactant being an alkyl sulphate, a salt of polyoxyethylenic alkyl sulphuric acid or a salt of alkyl sulphosuccinate ester, and the natural surfactant being lecithin, a glycerophospholipid, a sphingophospholipid ou un ester d'acide aliphatique et de saccharose.  or an ester of aliphatic acid and sucrose. - 24  - 24 4. Préparation pharmaceutique stable contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1, laquelle contient le saccharide en une quantité allant de 1 à 10 000 parties par partie en poids du facteur de stimulation de la lignée granulocytaire.4. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1, which contains the saccharide in an amount ranging from 1 to 10,000 parts per part by weight of the factor for stimulating the granulocytic line. 5. Préparation pharmaceutique stable contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1 ou 4, dans laquelle ledit saccharide est au moins un composé choisi parmi le glycérol, l'érythritol, l'arabitol, le sorbitol, le mannitol, l'acide glucuronique, l'acide iduronique, l'acide galacturonique, l'acide neuraminique, l'acide glyconique, l'acide mannuronique, l'acide cétoglycolique, l'acide cétogalactonique, l'acide cétogulogulonique, l'acide hyaluronique et leurs sels, le sulfate de 15 chondroltine et ses sels, l'héparine, l'inuline, la chitine et leurs dérivés, le chitosane et ses dérivés, une dextrine, un dextrane ayant un poids moléculaire moyen de 5 0005. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1 or 4, wherein said saccharide is at least one compound chosen from glycerol, erythritol, arabitol, sorbitol, mannitol, l glucuronic acid, iduronic acid, galacturonic acid, neuraminic acid, glyconic acid, mannuronic acid, ketoglycolic acid, ketogalactonic acid, ketogulogulonic acid, hyaluronic acid and their salts, chondroltin sulfate and its salts, heparin, inulin, chitin and their derivatives, chitosan and its derivatives, a dextrin, a dextran having an average molecular weight of 5,000 000, et l'acide alginique et ses sels.  000, and alginic acid and its salts. 6. Préparation pharmaceutique stable contenant un fac20 teur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1, laquelle contient la protéine en une quantité allant de 1 à 20 000 parties en poids, par partie en  6. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1, which contains the protein in an amount ranging from 1 to 20,000 parts by weight, per part in poids du facteur de stimulation de la lignée granulocytaire.  weight of the stimulating factor of the granulocytic line. 7. Préparation pharmaceutique stable contenant un fac25 teur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1 ou 6, dans laquelle ladite protéine est au  7. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1 or 6, wherein said protein is at moins une substance choisie parmi l'albumine de serum humain, une globuline de sérum humain, la gélatine, la gélatine traitée par un acide ou par un alcali, ayant un poids moléculaire 30 moyen de 7 000 à 100 000, et le collagène.  minus one substance selected from human serum albumin, human serum globulin, gelatin, acid or alkali treated gelatin, having an average molecular weight of 7,000 to 100,000, and collagen. 8. Préparation pharmaceutique stable contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1, laquelle contient le composé à haut poids moléculaire en une quantité de 1 - 20 000 parties en poids, 35 par partie en poids du facteur de stimulation de la lignée granulocytaire.  8. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1, which contains the high molecular weight compound in an amount of 1 to 20,000 parts by weight, per part by weight of the factor for stimulating the granulocytic line. 9. Préparation pharmaceutique stable contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire selon la revendication 1 ou 8, dans laquelle ledit composé à haut poids moléculaire est au moins un composé choisi parmi l'hydroxypropylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose sodique, l'hydroxyéthylcellulose, un polyéthylèneglycol ayant un poids moléculaire de 300 à 6 000, un alcool polyvinylique ayant un poids moléculaire de 20 000 10 à 100 000, et une polyvinylpyrrolidone ayant un poids9. A stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocyte line according to claim 1 or 8, in which said high molecular weight compound is at least one compound chosen from hydroxypropylcellulose, hydroxymethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, a polyethylene glycol having a molecular weight of 300 to 6,000, a polyvinyl alcohol having a molecular weight of 20,000 10 to 100,000, and a polyvinylpyrrolidone having a weight moléculaire de 20 000 à 100 000.molecular from 20,000 to 100,000. 10. Procédé pour la production d'une préparation pharmaceutique stable contenant un facteur de stimulation de la lignée granulocytaire, caractérisé en ce qu'on ajoute au facteur de 15 stimulation de la lignée granulocytaire présent en tant que le composant actif, au moins une substance choisie parmi un surfactif, un saccharide, une protéine et un composé à haut  10. Process for the production of a stable pharmaceutical preparation containing a factor for stimulating the granulocytic line, characterized in that at least one substance is added to the stimulating factor for the granulocytic line present as the active component chosen from a surfactant, a saccharide, a protein and a compound with high poids moléculaire, pharmaceutiquement acceptables.  molecular weight, pharmaceutically acceptable.
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