FI104373B - Menetelmä valmistaa farmaseuttisesti käyttökelpoisia 7-aminosubstituoituja 10,11-metyleenidioksi- tai 10,11-etyleenidioksi-kamptotekiinijohdannaisia - Google Patents

Description

104373

Menetelmä valmistaa farmaseuttisesti käyttökelpoisia 7-aminosubstituoituja 10.11 -metyleenidioksi- tai 10,11 -etyleenidioksi-kamptotekiinijohdannaisia Förfarande för att framställa farmaceutiskt användbara 7-aminosubstituerade 10.11 -metylendioxi- eller 10,11 -etylendioxi-kamptotekinderivat 5 Tämä keksintö koskee menetelmää valmistaa farmaseuttisesti käyttökelpoisia 7-aminosubstituoituja 10,11-metyleenidioksi- tai 10,11-etyleenidioksi-kampto-tekiinijohdannaisia.

10 Kamptotekiini, luonnollisesti esiintyvä, sytotoksinen alkaloidi on topoisomeraa-si l-inhibiittori ja voimakas kasvaintenvastainen aine. Sen eristi ensin kiinalaisen kasvin, Camtpotheca accuminata’n lehdistä ja kuoresta Wall, et ai. (J. Am. Chem. Soc. 88 (1966) 3888).

15 Kuten kuvataan, on kamtotekiini fuusioitunut rengasjärjestelmä, joka koostuu kinoliinista (Aja B), joka on fuusioitunut pyrrolidiinirenkaaseen (C), joka on fuusioitunut α-pyridonirenkaaseen (D), joka puolestaan on fuusioitunut lakto-nirenkaaseen (E).

• JL e 20 10 4 o ; : : j| A I B c N~—f

!'··· D

Oj E \> '·· |t|\20 / /51V-/ • . Xl' 19 * : HO o .·’:·! 25 • · «

KAMPTOTEKIINI

• · · • · « • · ·

Siinä on 20-asemassa asymmetrinen hiili, joka tekee kaksi enantiomeeristä 11 ^. muotoa mahdolliseksi. Luonnollisesti esiintyvä yhdiste on kuitenkin edellä ~ t % ,,,,. 30 esitetyssä “S”-konfiguraatiossa.

4 4 4 < (

• 4 I

Sytotoksisia aineita käytetään sen kasvainten kontrollointiin tai poistamiseen, ts. ne ovat kemoterapeuttisia aineita. Kamptotekiinin sytotoksisen aktiivisuu- 2 104373 den ajatellaan liittyvän suoraan kamtotekiinin tehoon topoisomeraasi-inhibiit-torina. [Yksityiskohtaisia kuvauksia varten topoisomeraasin toiminnasta katso teoksia A. Lehninger, Principles of Biochemistry, 813, Worth Publishers,

New York (1982); L.F.Liu, “DNA Topoisomerases”, CRC Critical Review in 5 Biochemistry, 15 (1983) 1- 24 ja H Vosberg, “DNA Topoisomerases: Enzymes that Control DNA Conformation", Current Topics in Microbiology and Immunology, 19, Springer-Verlag, Berlin (1985).] Erityisesti kamptotekiinin on osoitettu olevan tehokas esimerkiksi hoidettaessa leukemiaa (L-1210) ja määrättyjä kiinteitä kasvaimia laboratorioeläimissä, katso julkaisuja Chem. Rev. 23 (1973) 10 385; ja Cancer Treat. Rep. 60 (1967) 1007.

Epäonneksi kamtotekiinin lupaus kliinisellä tasolla tehokkaana kasvaimenvas-taisena aineena ei ole täysin täyttynyt. Kamptotekiini on oleellisen ei-liukoinen fysiologisesti yhteensopiviin vesipohjaisiin väliaineisiin, ja se on modifioitava 15 sen tekemiseksi riittävän liukoiseksi patenteraaliseen antoon, joka on edullinen kasvaimenvastainen hoitotapa. Se voidaan tehdä liukoiseksi muodostamalla sen natriumsuolan, ts. avaamalla laktonin natriumhydroksidilla (katso F.M. Muggia, et ai., Cancer Chemotherapy Reports osa 1, 56 (1972) 515). Kuitenkin, M.C. Wani, et ai., J. Med. Chem. 23 (1980) 554, kuvasi, että E-renkaan 20 α-hydroksilaktoniryhmä on kasvaimenvastainen aktiivisuuden ehdoton vaati-mus.

• · · 9 9 9 • · · • a » ' Tekniikan tasolla on esimerkkejä kamptotekiinin modifikaatioista ja johdannai- sista, jotka on valmistettu sen vesiliukoisuuden parantamiseksi. Vaikka useat • · · l..\ 25 näistä johdannaisista olivat aktiivisia in vitro ja varhaisissa eläinkokeissa, • · · joissa käytettiin leukemia (L-121)-malleja, ne tuottivat pettymyksen kroonisissa eläinmalleissa, joissa istutettiin kiinteitä kasvaimia.

• · · « · • a · • 99 • . Miyasaka, et ai., US-patenttijulkaisu 4399282, kuvaa ryhmän kamptotekiinijoh- 30 dannaisia, jotka on substituoitu 7-asemaan mm. hydroksimetyylillä ja alkoksi- « « . metyylillä. Lisäksi Miyasaka et ai., US-patenttijulkaisussa 4399276, kuvaa « I * kamptotekiini-7-aldehydin ja määrätyt sen sukuiset aldehydijohdannaiset kuten asetaalit, oksiimit ja hydratsonit. Läheisemmässä menneisyydessä Ί ! ' 3 104373

Vishnuvajjala, et ai., US-patenttijulkaisussa 4943579, kuvasi sarjan vesiliukoisia kamptotekiinijohdannaisia, joissa oli substituentteja A-renkaassa, samoin kuin Boehm, et ai., EP-patenttijulkaisu 0321122A2. Muita esimerkkejä kampto-tekiinijohdannaisista ovat mm. Miyasaka, et ai., US-patenttijulkaisut 4473692 ja 5 4545880; ja W. Kingsbury, et ai., J. Med. Chem. 34 (1991) 98. Missään näistä viitteistä ei kuvattu yhdisteitä, joilla on suurempi kasvaimenvastainen aktiivisuus kuin kamptotekiinilla itsellään.

Wani ja apulaiset kuvasivat, että 10,11-metyleenidioksikamptotekiini on tehok-10 kaampi kuin substituoimaton kamptotekiini (katso M.C. Wani, et al.( J. Med. Chem. 29 (1986) 2358, ja 30 (1987) 2317). Sen vesiliukoisuus on kuitenkin yhtä huono kuin kamptotekiinin, mikä rajoittaa sen kliinistä käyttökelpoisuutta vakavasti.

15 Olemme nyt keksineet kamptotekiinin vesiliukoisia johdannaisia, joilla on hyvä toposiomeraasi l-estoaktiivisuus in vitro ja vaikuttava kasvaimenvastainen aktiivisuus vi vivo.

Keksinnön mukaan saadaan kaavan I mukaisia kamptotekiinianalogeja 20 ^nrV

| I: - jossa • » · ' n on kokonaisluku 1 tai 2; ja • · · * _. 30 i) R1 ja R2 ovat toisistaan riippumatta vety, C^-alkyyli tai hydroksi-C1_6-alkyyIi; ' ' ii) R1 on vety ja R2 on -COR3, jossa R3 on trifluori-C^-alkyyli; tai 4 104373 iii) R1 ja R2 otettuna yhdessä yhdistävän typen kanssa muodostavat atsetidii-nin, pyrrolidiinin, piperidiinin, morfoliinin, tiomorfoliinin tai piperatsiinin, joka piperatsiini on mahdollisesti N-substituoitu alemmalla alkyylillä, fenyyli, joka fenyyli voi olla substituoitu trifluori-C^-alkyyli- tai C-^-alkoksiryhmällä; tai 5 -COR5, jossa R5 on C^-alkoksi, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja tai solvaatteja.

Farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ovat ei-rajoittavasti mm. suolat epäorgaanisten happojen kanssa, kuten hydrokloridi, sulfaatti, fosfaatti, difosfaatti, 10 hydrobromidi ja nitraatti, tai suolat orgaanisen hapon kanssa, kuten asetaatti, malaatti, maleaatti, fumaraatti, tartraatti, sukkinaatti, sitraatti, laktaatti, metaa-nisulfonaatti, p-tolueenisulfonaatti, palmoaatti, salisylaatti ja stearaatti. Muut hapot, kuten oksaalihappo, vaikka eivät itsekään ole farmaseuttisesti hyväksyttäviä, voivat olla käyttökelpoisia välituotteina keksinnön mukaisten yhdisteiden 15 ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen saamisessa.

Raktonirengas, rengas E, voidaan avata alkalimetalli- tai maa-alkalimetalli-emäksillä, esimerkiksi natriumhydroksidilla tai kalsiumhydroksidilla muodostamaan kaavan I mukaisen yhdisteen vastaavan avoimen E-rengasmuodon 20 alkalimetalli- tai maa-alkalimetallisuoloja. Paremmasta vesiliukoisuudestaan 11« I I t . johtuen avoin E-rengasmuoto voidaan puhdistaa edullisesti tavanomaisilla \ . uudelleenkiteytystekniikoilla. Niinpä mainittua avointa E-rengasmuotoa voi- \\t daan käyttää sitten välituotteena kaavan I mukaisten yhdisteiden muodostami- seksi, esimerkiksi käsittelemällä hapolla, esimerkiksi suolahapolla, ja tuottaa • · · .·:·! 25 täten kaavan I mukaisten yhdisteiden puhdasta muotoa.

• ·

Kuten edellä mainittiin, kamptotekiiniryhmässä on asymmetrinen hiiliatomi 20-asemassa tehden mahdolliseksi kaksi enantiomeeristä muotoa, ts. “R”-ja • · · ' ^. “S"-konfiguraatiot. Tähän keksintöön luetaan mukaan molemmat enantiomeeri- <1 30 set muodot ja näiden muotojen kaikki yhdistelmät. Yksinkertaisuuden vuoksi, kun rakennekaavoissa ei kuvata erityistä konfiguraatiota 20-asemassa, ymmär- ' retään, että esitetään sekä enantiomeeriset muodot että niiden seokset. Ellei toisin ole mainittu, terminologiasopimus “(R,S)”, merkitsee R-ja S-enantiomee- I « 104373 s rien raseemista (suunnilleen yhtä suuret osat) seosta, kun taas “(R)" ja “(S)" merkitsevät optisesti oleellisen puhtaita R- ja S-enantiomeerejä, vastaavasti. Keksintöön luetaan mukaan myös muut kaavan I mukaisen yhdisteen muodot, kuten solvaatit, hydraatit, polymorfit ja vastaavat.

5 Tässä käytetään käsite “alempi” alkyyliin ja alkoksiin viitattaessa tarkoittaa 1-6 hiiltä, ja tarkoittaa alkenyyliin viitattaessa 3-6 hiiltä (sillä ehdolla, että kaksoissidos ei ole kiinnittynyt hiileen, joka on kiinnittynyt typpeen). Käsite “perhalogeeni” tarkoittaa, että kaikki vedyt on korvattu halogeenillä, esimerkik-10 si perhalogeeni-alempi alkyyli, esimerkiksi trifluorimetyyli. Käsite “aryyli” tarkoittaa fenyyliä tai naftyyliä.

Erityisiä kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat: 15 Esim.

numero Yhdisteen nimi 1. 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, 2. 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11 -metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, 20 3. 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, • · · ’ ·' ·' 4. 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, • · " 5. 7-morfolinometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, • · # ’ · Y 6. 7-morfolinometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, • · · 7. 7-pyrrolidinometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, • · · 25 8. 7-pyrrolidinometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, « · · 9. 7-piperidinometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, 10. 7-(4-metyylipiperatsinometyleeni)-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptote- · · ··· kiini, • « · * • · · 11. 7-(4-metyylipiperatsinometyleeni)-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekii- 30 ni, 12. 7-dietyyliaminometyleeni-10l11-metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini,

«M

: 13. 7-dietyyliaminometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini,

III

5 · : 14. 7-dietyyliaminometyIeeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, 6 104373 15. 7-NH7ietyylietanoliaminometyleeni-10l11-metyleenidioksi-20(R,S)-kampto-tekiini, 16. 7-N-metyylietanoliaminometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(R,S)-kamptote-kiini, 5 17. 7-dietanoliaminometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, 18. 7-dietanoliaminometyleeni-10,11-etyleendioksi-20(S)-kamptotekiini, 19. 7-atsetidinometyleeni-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, 20. 7-atsetidinometyleeni-10,11 -metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, 21. 7-tiomorfolinometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, 10 22. 7-atsetidinometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, 23. 7-(4-metyylipiperatsinometyleeni)-10,11 -metyleenidioksi-20(S)-kamptote-kiini, 24. 7-trifluoriasetamidometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini,

25. 7-trifluoriasetamidometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiiniI

15 26. 7-aminometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinidihydrokloridi, 27. 7-aminometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinidihydroklori- di, 28. 7-tert-butyylioksikarbonyylipiperatsinometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, 20 29. 7-piperatsinometyleeni-10,11-eetyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinitri- « · « !; '* fluorietikkahapposuola, • · 30. 7-(a,a,a-trifluori-m-tolyyli)piperatsinomtyleeni-10,11-etyleendioksi-20(S)- • · · • · · kamptotekiini, 31. 7-(2-metoksifenyylipiperastino)metyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)- • ♦ · 25 kamptotekiini ja « · · 32. 7-fenyylipiperatsinometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini.

• t · • · · • · ·

Yhdisteiden valmistaminen • · — 30 Yleisen menetelmän (A) mukaisesti kaavan I mukaiset yhdistelmät voidaan valmistaa alla kaavion I vaiheessa 2 esitetyllä menetelmällä: 14« 4 · 4 4 4« f « I · 14« 7 104373 (CHJn ]| 0 + L· / \ 0^\^"-nh2 ° \ («) " Λ-/° 5 HO o f x vaihe 1 /0Υ\\λ o <CH,)n N— (iv) \ ° 10 /ηΓΛ HNR’R2 (V) , f vaihe 2

^NRV

,°YVVa o (CH^ Il I I N^° 15 ro \ ° Hö\

KAAVIO I

20 • · · et» .1/ Kaavion I vaiheessa 1 kaavan II mukainen yhdiste, jossa X on poistuva ryhmä e » \f.t (määriteltynä teoksessa J. March, Advanced Organic Chemistry, 3. painos, s.

e e » 179, John Wiley & Sons, New York (1985)), esimerkiksi halogeeni, esimerkiksi ]\'i kloori, voidaan saattaa reagoimaan kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa • · · .·:·! 25 menetelmällä, joka kuvataan US-patenttijulkaisussa 4894456 (tämän jälkeen • · · '456), julkaistu 16. tammikuuta 1990, Wall et ai., joka liitetään tähän viitteeksi, jolloin saadaan kaavan IV mukainen yhdiste.

· f tee e · · γ Vaiheessa 2 (Yleinen menetelmä A) kaavan IV mukaiset yhdisteet voidaan e · 30 muuttaa kaavan I mukaisiksi yhdisteiksi syrjäyttämällä poistuvan ryhmän, X, • kaavan V mukaisella yhdisteellä, jossa R1 ja R2 ovat kaavalle I määritellyt.

e e e Y / Tämä syrjäytysreaktio voidaan suorittaa sopivasti liuotinjärjestelmässä, esimer- · '··* kiksi vedessä, CM-alkanilissa, C^-alkyleenidiolissa, 1-hydroksi-2-metok- g 104373 sietaanissa, dimetyyliasetamidossa (DMAC), N-metyylipyrrolidinonissa, dime-tyyliformamidissa (DMF), tetrahydrofuraanissa (THF), dimetyylisulfoksidissa (DMSO), tolueenissa tai näiden liuottimien seoksessa amiinin, ts. kaavan V mukaisen yhdisteen ylimäärän läsnä ollessa, emäksen, esimerkiksi kalium-5 karbonaatin kanssa tai ilman.

Tämä menetelmä on erityisen käyttökelpoinen valmistettaessa kaavan I mukaisia yhdisteitä, jossa kumpikaan ryhmistä R1 ja R2 ei ole vety.

10 Toisen yleisen menetelmän (B) mukaisesti kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa alla kaavion 1A vaiheessa 2a esitetyllä menetelmällä: 15 HNR’Ri / (ll) (V) / vaihe 1a r"NRlR2 ,chCXX^° * 20 ('"> \ ° • · («a) Λ_/ * * vaihe 2a HO q '"YVS—\ o ···: |C^ Jl A A s—f e:S·: 25

* (i) JV O

™>o • · · • · ·

/:·. KAAVIO 1A

• · · * • · . 30 Vaiheessa 1 a kaavan V mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan II * · . mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan kaavan HA mukainen yhdiste, • * * *·' ’ jossa R1 ja R2 ovat kaavan I mukaisille yhdisteille määritellyt. Tämä reaktio « « • · • I · 9 104373 voidaan suorittaa samanlaisissa olosuhteissa kuin yleiselle menetelmälle (A) (Kaavio 1, vaihe 2) kuvattiin.

Vaiheessa 2a (yleinen menetelmä B) kaavan IIA mukainen yhdiste saatetaan 5 reagoimaan kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa samalla lailla kuin esitettiin edellä kaavion 1 vaiheessa 1, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste.

Menetelmän (B) erityisessä suoritusmuodossa kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa alla kaaviossa IB esitetyllä menetelmällä: 10 rx X / (||) (Hal),C NRi / vaihe1b (Va) / 15 (Hal),C^° '•€05 · 00 (Hl) \ o <llb) A / vaihe 2b HO n . · 20 • · · • 4 f

(Hal),C^O

\ '/ NR1

·:· (CHi 1 T I nV

s;. ~ 0¾ H*B* HÖ \ H,+ ^.NRi B- v: (CH?)n | | Γ n—y° 30 <») ' \ o Hö\ 4 · « · · • » · » »

KAAVIO IB

10 104373

Vaiheessa 1b kaavan Va mukainen yhdiste (jossa "Hai" on halogeeni, ts. fluori, kloori, bromi tai jodi), esimerkiksi trifluoriasetamidi, saatetaan reagoimaan kaavan II mukaisen yhdisteen kanssa poolisessa, aproottisessa liuottimessa, esimerkiksi asetonitriilissä, emäksen läsnä ollessa, joka on liukoinen pooli-5 seen, aproottiseen liuottimeen, esimerkiksi cesiumkarbonaattia, jos liuotin on asetonitriiliä, jolloin saadaan kaavan Hb mukainen yhdiste.

Vaiheessa 2b kaavan Hb mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa samalla tavalla kuin esitetään kaavion 1 vaihees-10 sa 1, jolloin saadaan kaavan IVb mukainen yhdiste.

Vaiheessa 3b kaavan IVb mukainen yhdiste käsitellään hapolla H+B', kuten mineraalihapolla, esimerkiksi suolahapolla, jolloin saadaan kaavan Ib mukainen yhdiste, ts. kaavan I mukaisen yhdisteen suola. Kaavan Ib mukainen yh-15 diste voidaan käsitellä emäksellä tekniikan tason vakiomenetelmän mukaisesti, jolloin saadaan vastaava vapaa emäs. Vapaa emäs voidaan sitten vaadittaessa muuttaa tavanomaisella tavalla farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Tämä varamenetelmä on erityisen käyttökelpoinen valmistettaessa kaavan I <Vt 20 mukaisia yhdisteitä, joissa sekä R1 että R2 ovat vety tai R2 on vety.

I · I

• * • « I · »

Kaavan II mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa kaaviossa II esitetyllä menetel- • · · mällä: : : : 25 o—vaihe 1 o^V^x v xNH2 nNH2 , (VI) 0 (VII) Ac vaihe 2a ! γ JL vaihe 2

I.. I

:T: τ (Vili) 30 deasylointi

(RH2)n I I - — (CH2)J J

υ xnh2 υ nnh2 («ο οχ) Ac < f

KAAVIOII

11 104373

Kaavion II vaiheessa 1 kaavan VI mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan asylointireagenssin, esimerkiksi C2.5-alkaanihappohalogenidin tai C2.5-alkaani-happoanhydridin, esimerkiksi asetyylikloridin tai etikka-anhydridin kanssa heikon emäksen, esimerkiksi kaliumkarbonaatin, esimerkiksi kaliumkarbonaatin 5 läsnä ollessa poolisessa, aproottisessa liuottimessa, esimerkiksi kloroformissa, jolloin saadaan kaavan VII mukainen yhdiste, jossa Ac on C2^-asyyliryhmä.

Vaiheessa 2 kaavan VII mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan Vili mukaisen yhdisteen kanssa, jossa X on kaavan IV mukaiselle yhdisteelle mää-10 ritelty poistuva ryhmä, ja Hai on halogeeni, metallihalogenidin, esimerkiksi sinkkikloridin läsnä ollessa poolisessa, aproottisessa liuottimessa, esimerkiksi nitrometaanissa, jolloin saadaan kaavan IX mukainen yhdiste. Kaavan Vili mukainen yhdiste voi olla esimerkiksi halogeeniasetyylihalogenidi, esimerkiksi klooriasetyylikloridi, tai halogeeniasetnitriili, esimerkiksi klooriasetonitriili.

15

Vaiheessa 3 kaavan II mukainen yhdiste muodostetaan poistamalla asyyliryh- män, Ac, kaavan IX mukaisesta yhdisteestä, ts. deasyloimalla tekniikan tasolla tunnetuilla menetelmillä, kuten sellaisilla, jotka esitetään käsikirjassa T. Green,

Protective Groups in Organic Chemistry, luku 7, John Wiley, New York (1981).

. y, 20 Esimerkiksi kaavan IX mukaista yhdistettä voidaan kuumentaa refluksoiden • · : . konsentroidussa suolahapossa, ja tulokseksi saatu suola säätää neutraaliin « pH-arvoon emäksellä, esimerkiksi natriumhydroksidilla, jolloin saadaan kaavan c · ··· Il mukainen yhdiste.

···· • · • · · • ·· • · :T: 25 Kaavion II vaiheessa 2a, kun kaavan VI mukainen yhdiste on etyleenidioksiyh- diste, ts. n on 2, se voidaan saattaa reagoimaan suoraan kaavan Vili mukaisen :T: yhdisteen kanssa, suojaamatta ensin aminoryhmää asyloimalla, jolloin saa- daan kaavan III mukainen vastaava yhdiste.

• · •: · · - 30 Vaihtoehtoisesti kaavan II mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa menetelmällä, ,·]·, joka kuvataan julkaisussa: T. Sugasawa, et ai.; J. Org. Chem. 44 (1979) 578.

< i t » · I • · • * • * * 12 104373

Kaavan 111 mukainen yhdiste voidaan valmistaa menettelytavalla, joka kuvataan Wall, et al.:n patenttijulkaisussa '456, palstalla 11, alkaen riviltä 30. Kaaviosta 1 ilmenee, että kaavan III mukainen yhdisteen asymmetrisen hiilen konfiguraatio määrää kaavan I mukaisten yhdisteiden konfiguraation. Kaavan 5 III mukainen raseeminen yhdiste voidaan resolvoida kummaksikin enantiomee-reistään menetelmällä, jonka on kuvannut Wani, et ai., US-patenttijulkaisussa 5053512 (tämän jälkeen "'512"), joka liitetään tähän viitteeksi.

Kaavojen II, IIA ja IV mukaiset uudet välituoteyhdisteet kuuluvat keksinnön 10 suoja-alaan.

Yleisen menetelmän (D) mukaisesti kaavan I mukainen yhdiste voidaan muuttaa keksinnön mukaiseksi toiseksi yhdisteeksi tavanomaisia menettelytapoja käyttämällä.

15

Siten esimerkiksi kaavan I mukainen yhdiste, jossa yksi tai usea ryhmistä R1 ja R2 on vetyatomi, voidaan alkyloida tavanomaisia tekniikkoja käyttämällä. Reaktio voidaan suorittaa käyttämällä sopivaa alkylointireagenssia kuten alkyyliha-logenidi, alkyylitosylaatti tai dialkyylisulfaatti. Alkylointireaktio voidaan suorittaa * * * ]·*·* 20 sopivasti orgaanisessa liuottimessa kuten amidi, esimerkiksi dimetyyliform- amidi, tai eetteri, esimerkiksi tetrahydrofuraani, edullisesti emäksen läsnä • ♦ · ***:’ ollessa. Sopiviin emäksiin luetaan mukaan esimerkiksi alkalimetallihydridit • · · T\ kuten natriumhydridi, alkalimetallikarbonaatit kuten natriumkarbonaatti, tai • · · I..* alkalimetallialkoksidit kuten natrium- tai kaliummetoksidi, -etoksidi tai -t-butok- • · · ♦ ♦ · 25 sidi. Alkylointireaktio suoritetaan sopivasti lämpötilassa 25 - 100°C.

• · · « · · ♦ · ·

Vaihtoehtoisesti kaavan I mukainen yhdiste, jossa yksi tai usea ryhmistä R1 ja • · · R2 on vetyatomi, voidaan muuttaa toiseksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi * pelkistävällä alkyloinnilla. Pelkistävä alkylointi sopivalla aldehydillä tai ketonilla 30 voidaan suorittaa käyttämällä maa-alkalimetalliborohydridiä tai-syaaniboro- • · · v : hydridiä. Reaktio voidaan suorittaa vesipohjaisessa tai vedettömässä väliai- • · · neessa, sopivasti alkoholissa, esimerkiksi metanolissa tai etanolissa tai eetterissä, esimerkiksi dioksaanissa tai tetrahydrofuraanissa, mahdollisesti veden 13 104373 läsnä ollessa. Reaktio voidaan suorittaa sopivasti lämpötilassa alueella 0-100°C, edullisesti 5 - 50°C.

Vaihtoehtoisesti kaavan I mukaiset yhdisteet jossa R1 on hydroksialkyyliryhmä, 5 voidaan valmistaa pelkistämällä kaavan I mukaisen yhdisteen, jossa R2 on ryhmä COR3, jossa R3 on alempi alkoksiryhmä. Pelkistys voidaan suorittaa sopivasti käyttämällä sopivaa hydridipelkistysreagenssia, esimerkiksi litium-aluminiumhydridiä tai litiumtrietyyliborohydridiä sopivassa liuottimessa kuten eetteri, esimerkiksi dietyylieetteri, tetrahydrofuraani tai dioksaani, tai hiilivety 10 kuten tolueeni. Reaktio suoritetaan sopivasti lämpötilassa -78 - 100°C, edullisesti noin 0°C:ssa.

Toisen yleisen menetelmän (E) mukaisesti kaavan I mukainen yhdiste tai sen suola voidaan valmistaa alistamalla kaavan I mukaisen suojatun johdannaisen 15 tai sen suolan reaktiolle suojaryhmän tai -ryhmien poistamiseksi.

Siten aikaisemmassa vaiheessa kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen suolan valmistuksessa voi olla välttämätöntä ja/tai toivottavaa suojata molekyylissä yksi tai usea herkkä ryhmä ei-toivottujen sivureaktioiden välttämiseksi.

• · I

• · 20

I

• . Kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistuksessa käytettyjä suojaryhmiä voi- • · « ' ! daan käyttää tavanomaisella tavalla. Katso esimerkiksi ‘Protective Groups in

Organic Chemistry’, toimittaja J.F.W. McOmie (Plenum Press 1973) tai • · · λ/ 'Protective Groups in Organic Synthesis’, kirjoittanut Theodora W Greene • · · 25 (John Wiley and Sons 1981).

• · · • · t • · ·

Tavanomaisiin aminosuojaryhmiin luetaan mukaan esimerkiksi aralkyyliryhmät, • , kuten bentsyyli-, difenyylimetyyli- tai trifenyylimetyyliryhmät; ja asyyliryhmät • ·

. kuten N-bentsyylioksikarbonyyli tai t-butoksikarbonyyli. Siten yleisen kaavan I

« « . 30 mukaiset yhdisteet, jossa yksi tai usea ryhmistä R1 ja R2 on vety, voidaan vai- • I · :' mistaa poistamalla suojaus vastaavasta suojatusta yhdisteestä.

| · I f • t · 14 104373

Hydroksiryhmät voidaan suojata esimerkiksi aralkyyliryhmällä kuten bentsyyli-, difenyylimetyyli- tai trifenyylimetyyliryhmillä, asyyliryhmillä kuten asetyyli, pii-suojaryhmillä, kuten trimetyylisilyyli- tai t-butyylimetyylisilyyliryhmät, tai tetra-hydropyraanijohdannaisina.

5

Kaikkien läsnä olevien suojaryhmien poistaminen voidaan suorittaa tavanomaisia menettelytapoja käyttämällä. Siten esimerkiksi aralkyyliryhmä kuten bentsyyli, voidaan lohkaista hydrogenolyysillä katalysaattorin (esimerkiksi Pd/C) läsnä ollessa; asyyliryhmä kuten N-bentsyylioksikarbonyyli voidaan poistaa 10 hydrolyysillä esimerkiksi vetybromidilla etkkahapossa tai pelkistämällä, esimerkiksi katalyyttisellä hydrogenoinnilla; piisuojaryhmät voidaan poistaa esimerkiksi käsittelemällä fluoridi-ionilla tai hydrolyysillä happamissa olosuhteissa; tetra-hydropyraaniryhmät voidaan lohkaista hydrolyysillä happamissa olosuhteissa.

15 Kuten ymmärretään, voi missä hyvänsä edellä kuvatuista yleisistä menetelmistä (A) - (D) olla välttämätöntä tai toivottavaa suojata kaikki molekyylissä olevat suojaryhmät juuri kuvatulla tavalla. Siten reaktiovaihe, johon liittyy yleisen kaavan I mukaisen suojatun johdannaisen tai sen suolan suojauksenpoisto, ; y; voidaan suorittaa seuraavaksi minkä hyvänsä edellä kuvatuista menetelmistä 20 (A) - (D) jälkeen.

« I « t I I < I 4 < • Siten keksinnön edelleen erään näkökannan mukaisesti seuraavat reaktiot «II» . voidaan, mikäli välttämätöntä ja/tai haluttaessa, suorittaa missä hyvänsä järjes- :T: tyksessä minkä hyvänsä menetelmistä (A) - (D) jälkeen 25 (i) kaikkien suojaryhmien poistaminen; ja v*: (ii) kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen suolan muuttaminen farmaseuttisesti v : hyväksyttäväksi suolakseen.

* • · •: · ·: Kun on toivottavaa eristää keksinnön mukainen yhdiste suolana, esimerkiksi 30 happoadditiosuolana, tämä voidaan saavuttaa käsittelemällä kaavan I mukai- . · · ·. sen vapaan emäksen sopivalla hapolla, edullisesti ekvivalentilla määrällä, tai « · kreatiniinisulfaatilla sopivassa liuottimessa (esimerkiksi vesipohjainen etanoli).

15 104373

Yhtä hyvin kuin että käytetään viimeisenä päävaiheena valmistusjaksossa, voidaan edellä ilmaistuja yleisiä menetelmiä keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistukseen käyttää myös toivottavien ryhmien lisäämiseen vaaditun yhdisteen valmistuksen välivaiheessa. Sen vuoksi olisi ymmärrettävä, että reaktioi-5 den jakso pitäisi valita tällaisissa monivaiheisissa menetelmissä jotta reaktio-olosuhteet eivät vaikuttaisi molekyylissä läsnä oleviin ryhmiin, jotka ovat toivottavia lopputuotteessa.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden biologinen aktiivisuus vaikuttaa perustuvan 10 S-enantiomeeriin, ja R-enantiomeerilla on vähän tai ei lainkaan aktiivisuutta. Siten kaavan I mukaisen yhdisteen S-enantiomeeri on yleensä edullinen R:n ja S:n seokseen kuten raseemiseen seokseen verrattuna. Jos R-enantiomeeria kuitenkin haluttaisiin, esimerkiksi kontrollitutkimuksiin tai muiden yhdisteiden synteesiin, se voitaisiin valmistaa sopivasti edellä olevalla menetelmällä käyt-15 täen R-enantiomeeriä kaavan III mukaisesta yhdisteestä, jotka valmistetaan ‘512:n esitysten mukaisesti.

Kaavan I mukainen yhdiste, joka valmistetaan kaavion I, IA tai Ib mukaisella ,., , reaktiolla, voidaan puhdistaa tekniikan tason tavanomaisilla menetelmillä, 20 esimerkiksi kromatografialla, tislauksella tai kiteyttämällä.

* *

Lohkaistavan kompleksin in vitro-määritvs t · · · • · • · · • · · • «

Alla taulukossa A olevat tiedot osoittavat kaavan I mukaisten yhdisteiden suh-25 teellisen topoisomeraasityypin I estävän aktiivisuuden. Tämä määritys, joka suoritettiin menetelmällä, joka kuvataan julkaisussa: Hsiang, Y, et ai., J. Biol. Chem. 260 (1985) 14873-14878, korreloi hyvin topoisomeraasi-inhibiittorien, esimerkiksi kamptotekiinin ja sen analogien in vivo-kasvaimenvastaisen aktiivi-....: suuden kanssa syövän eläinmalleissa. Katso julkaisuja: Hsiang et ai. Cancer il 30 Research 49 (1989) 4385-4389; ja Jaxel et ai., Cancer Research 49 (1989) 1465-1469.

• t * t · 16 104373

Ne yhdisteet, joilla on havaittavissa oleva aktiivisuus konsentraatioilla yli 2000 nM (“+” taulukossa A), pidetään heikosti/kohtuullisen aktiivisina, kun taas sellaiset, jotka ovat aktiivisia konsentraatioilla alle 500 nM (“++++” taulukossa A) ovat hyvin aktiivisia. Käsite ΊΟ·»" tarkoittaa kaavan I mukaisen yhdisteen 5 konsentraatiota, jolla 50 % DNA-substraatista on miehitetty topoisomeraasilla.

TAULUKKO A

Kaavan I mukaisten yhdisteiden topoisomeraasi-inhibitioaktiivisuus lohkaistava 10 kompleksi-määrityksessä

Esimerkki Isomeerinen suhteellinen numero muoto IC^* 2 (S) ++++ 15 6 (S) ++++ 11 (S) ++++ 1 (R,S) ++++ 17 (R,S) ++++ : ! : 5 (R,S) ++++ 20 4 (S)+++ 9 (R,S) +++ 10 (R,S) +++ V-j 13 (R,S) +++ 0’: 16 (R,S) ++ 25 7 (R,S) ++ : 15 (R,S)++ • · · : 16 (R,S) ++ ·:··: 19 (R,S) ++ 8 (R,S) + 30 I * « I I < t · «

< I I

17 104373 * ICgo-alue

Symboli nM

++++ <~500 ++++ <~1000>~500 5 ++++ <~2000>~1000 ++++ >-2000

Myös kaavan IV mukaisilla yhdisteillä on keksitty olevan hyvä topoisomeraasi l-inhibitioaktiivisuus.

10

Ihmisen kasvainksenoaraftit

Viime vuosina paljaisiin hiiriin heteroistutettuja ihmisen kasvainksenografteja on käytetty laajalti syöpäkemoterapeuttisten aineiden kasvaimenvastaisen 15 aktiivisuuden määrittämiseksi. Katso Giovanella, B.C., Stehlin, Jr. J.S.,

Shepard, R.C. ja Williams, Jr. L.J., "Correlation between response to chemotherapy of human tumors in patients and in nude mice", Cancer 52 (1983) 1146-1152; Boven, E. ja Winograd, B, toimittajat The Nude Mouse in Oncology Research CRC Press, Inc., Boca Raton, FL, (1991); ja Fiebig, H.H., ;' ,. 20 "comparison of tumor response in nude mice and in patients", Human Tumour

Xenografts in Anticancer Drug Development, Winograd, B., Peckham, M.J. ja :· Pinedo, H.M., toimittajat, E.S.O. Monographs, Springer, Heidelberg, 25 (1988).

II·· • · • * t ·. ·: :T: Yleensä ihmisen kasvainksenografteilla ei säily ainoastaan histologiset, bioke- 25 mialliset ja antigeeniominaispiirteet, vaan myös alkuperän kasvainkudoksen :T: kemosensitiivisyys (Boven, et ai., yllä). Pitkälliset tutkimukset ovat tuottaneet v : todisteita siitä, että ihmisen kasvainksenografteilla säilyy nämä alkuperäiset kasvainominaisuudet, mukaan lukien biologinen ei-stabiilisuus, kuten tiedetään ·:<·: tapahtuvan potilaan kasvaimissa (Boven, et ai., yllä). Mikä tärkeintä, useimmat , \ - # 30 tutkijat ovat kuvanneet, että lääkkeen vaikutuksilla ihmiskasvainksenografteihin

* f I

ja kliinisillä tuloksilla ihmispotilailla on hyvät korrelaatiot (Giovanella, et ai., ja

Fiebig edellä).

i 18 104373

Ihmisen paksusuolen ia peräsuolen adenokarsinooma HT-29-ksenoaraftin in vivo-määritvs

Naaraspuolisia NU/NU-hiiriä painoltaan 21 ± 2 g käytetään tähän modifioituun 5 versioon testistä, joka kuvataan julkaisussa: B.C. Giovanella, et ai.; Science 246 (1989) 1046. Kontrolli-ja testieläimet injisoidaan ihonalaisesti lapaluun-alaiselle alueelle suspensiolla, jossa on 106 elävää HT-29 ihmisen paksusuolen kasvainsolua päivänä 0. Kasvaimet saavat kasvaa 2 viikon ajan ennen lääkkeen antamista. Kullakin lääkkeellä valitaan useita annoksia perustuen 10 sen in vitro-aktiivisuuteen topoisomeraasi l:tä vastaan. Kukin annostasoryhmä sisältää 8 eläintä. Testiyhdisteet valmistetaan joko 0,1 M asetaattipuskuriin, pH 5 (väliaine "a"), tai 87,5 %:iin fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, 12,375 %:iin dimetyylisulfoksidia ja 0,125 %:iin Tween 80:tä (tavaramerkki yhtiöstä ICI America polyoksietyleenisorbitaanimono-oleaatille) (väliaine "b"), 15 ja niitä annetaan ihonalaisesti kahdesti viikossa 5 viikon ajan alkaen 14. päivänä. Annokset annetaan mg/kg-pohjalta kunkin häkin keskimääräisen kehonpainon mukaisesti.

V: Kasvaimen paino lasketaan kasvaimen kahdesta mittaharppimittauksesta käyt- I « . 20 tämällä kaavaa: kasvaimen paino = pituus x leveys2 + 2 yksikössä mm. Kulla- i V: kin eläimellä kasvaimen painoa tarkkaillaan kokeen ajan. Tulokset esitetään f t;; · kullekin ryhmälle suhteena keskimääräisestä kasvaimen painosta välittömästi i/.j 5 viikon käsittelyn jälkeen (päivä 50) jaettuna keskimääräisellä kasvaimen v‘: painolla välittömästi ennen käsittelyä (päivä 14). Tulokset esitetään taulukossa 25 B. Kummallakin väliainekontrollilla suhde on noin 20, ilmaisten että kasvaimen ·«· v : paino kasvoi kokeen suorituksen aikana lääkehoidon puuttuessa suunnilleen «4« v 1 20-kertaiseksi. Vastakohtava suhde 1 ilmaisee kasvaimen kehityksen pysähty- ·:··· misen, kun taas suhde alle 1 ilmaisee kasvaimen taantumisen. Siten yhdisteet 4 ja 6 aiheuttivat kasvaimen kehityksen pysähdyksen, kun taas yhdisteet 11 ja , · i ·. 30 23 aiheuttivat kasvaimen taantumisen. Kasvaimenvastaisen aktiivisuuden « 4 f , · * ·. kriteeri on kasvaimen kasvun ainakin 50-% esto 5 viikon annostelun jälkeen f 4 4 (päivä 50), antaen suhteen pienempi tai yhtä suuri kuin 10.

19 104373

TAULUKKO B

Optimaalinen annos in vivo-kasvaimenvastainen aktiivisuus 5 (kasvaimen painopäivä50 +

Yhdiste (malka) kasvaimen paino kontrolli - 20l0a,21,8b (väliaine yksinään) 10 2 0,8 1,8b 4 7,0 1, 3a, 1,0b 6 1,0 1,0b 11 9,0 0,6a 14 2,0 2,0a 15 20 1,5 1,5a 22 12,0 1,6a 23 3,0 0,5a a. väliaine, jossa on 0,1 M asetaattipuskuria, pH 5.

;;: 20 b. väliaine, jossa on 87,5 % fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, 12,375 % dimetyylisulfoksidia ja 0,125 % Tween 80:tä.

( « • · · • Käyttökelpoisuus • · • · · • · · • · :T: 25 Tällaisen aktiivisuuden valossa kaavan I mukaiset yhdisteet ovat aktiivisia nisäkäs(-, mukaan lukien ihmisten) kasvainten ja syöpämäisten kasvujen laa-’’Χ· jaa kirjoa vastaan, kuten suuontelon ja nielun (huuli, kieli, suu, nielu), ruokator-

• M

v 1 ven, mahalaukun, ohutsuolen, paksusuolen, peräsuolen, maksan, sappitiehy- : · eiden, haiman, kurkunpään, keuhkojen (mukaan lukien "non-small ceU"-keuh- 30 kosyövän), luun, sidekudoksen, ihon, paksusuolen, rinta-, kohdunkaulan, .·«·. corpus endometrium, munasarjan, eturauhasen, kiveksen, virtsarakon, munu- f « « . ·' · ·. aisten ja muiden virtsatiekudosten, silmän, aivojen ja keskushermoston, kilpi- « · rauhasen ja muun umpieritysrauhasen, leukemiat (imusolun, jyvässolun, mo- 20 104373 nosyytin), Hodginsintauti, ei-Hodginsintauti-imukudoskasvain, multippeli mye-looma ja vastaavat. Käsitteitä "kasvain”, "syöpä” ja "syöpämäiset kasvut" käytetään tässä synonyyminomaisesti.

5 Kaavan I mukaisen yhdisteen määrä, joka vaaditaan jotta se olisi tehokas kasvaimenvastaisena aineena, vaihtelee hoidettavan yksittäisen nisäkkään mukaan, ja riippuu viime kädessä lääkärin tai eläinlääkärin harkinnasta. Huomioon otettavia seikkoja ovat mm. hoidettava tila, antoreitti, formulaation luonne, nisäkkään kehonpaino, pinta-ala, ikä ja yleistila, ja erityinen annettava 10 yhdiste. Sopiva tehokas kasvaimenvastainen annos on kuitenkin alueella noin 0,1 - noin 200 mg/kg kehonpainoa päivässä, edullisesti alueella noin 1 - noin 100 mg/kg kehonpainoa päivässä. Koko päivittäisannos voidaan antaa yhtenä ainoana annoksena, useina annoksina, esimerkiksi 2-6 kertaa päivässä, tai laskimonsisäisellä infuusiolla valittua kestoa varten. Edellä mainitun alueen 15 ylittävät ja alittavat annokset kuuluvat keksinnön suoja-alaan ja voidaan antaa yksittäiselle potilaalle haluttaessa ja tarvittaessa.

Esimerkiksi 75-kg nisäkkäälle annosalue olisi noin 75 - noin 7500 mg/päivä, ja tyypillinen annos olisi noin 800 mg/päivä. Mikäli määrätään erillisiä moninker-: Y: 20 täisiä annoksia, niin hoito olisi tyypillisesti 200 mg kaavan I mukaista yhdistettä annettuna neljästi päivässä.

• « · # • · · ...T Formulaatiot • · · • ·

• I

• · · v : 25 Keksinnön mukaiset lääketieteelliseen käyttöön tarkoitetut formulaatiot käsittä vät aktiivista yhdistettä, ts. kaavan I mukaista yhdistettä, yhdessä hyväksyttä-

IM

v : vän väliaineensa ja mahdollisesti muiden terapeuttisesti aktiivisten valmistusai- • · · v : neiden kanssa. Väliaineen on oltava farmaseuttisesti yhteensopivaa siinä mie- •: · : iessä, että se on yhteensopivaa formulaation muiden valmistusaineiden kans- ':'': 30 sa eikä ole haitaksi sen vastaanottajalle.

• Il

« ( I

« ( I 1

f I

I

• I

« I « 21 104373

Sen vuoksi tämä keksintö antaa edelleen käyttöön farmaseuttisen formulaati-on, joka sisältää kaavan I mukaista yhdistettä yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän väliaineensa kanssa.

5 Formulaatioita ovat mm. sellaiset, jotka sopivat oraaliseen, rektaaliseen, vagi-naaliseen, transdermaaliseen tai parenteraaliseen (mukaan luettuna ihonalaiseen, lihaksensisäiseen ja laskimonsisäiseen) antoon. Edullisia ovat sellaiset, jotka soveltuvat oraaliseen tai parenteraaliseen antoon.

10 Formulaatiot voidaan tarjota sopivasti yksikköannosmuodossa, ja nämä voidaan valmistaa millä hyvänsä farmasian alalla hyvin tunnetuista menetelmistä. Kaikkiin menetelmiin liittyy vaihe, jossa aktiivinen yhdiste saatetaan väliaineen yhteyteen, joka käsittää yhtä tai useaa lisävalmistusainetta. Yleensä formulaatiot valmistetaan saattamalla aktiivisen yhdisteen tasaisesti ja intiimisti koske-15 fuksiin nestemäisen väliaineen ja hienojakoisen kiinteän väliaineen kanssa ja sitten, mikäli välttämätöntä, tuotteen muotoilun haluttuun yksikköannosmuo-toon.

Keksinnön mukaiset formulaatiot, jotka soveltuvat oraaliseen antoon, voidaan ;: 20 tarjota erillisinä yksikköinä kuten kapselit, lääkepussit, tabletit tai imeskelytab- I ( letit, jotka kukin sisältävät ennaltamäärätyn määrän aktiivista yhdistettä; jauhei-na tai rakeina; tai suspensiona tai vesipohjaisena liuoksena tai vedettömänä • · ·' liuoksena, esimerkiksi siirappina, eliksiirinä, emulsiona tai lääkekerta-annokse- 11*1 na.

• · * * * -- : : : 25

Tabletti voidaan valmistaa puristamalla tai muottipuristamalla, mahdollisesti :T: yhden tai usean lisävalmistusaineen kanssa. Puristetut tabletit voidaan valmis- v : taa puristamalla sopivassa koneessa aktiivinen yhdiste, joka on vapaasti valu- •: < · · vassa muodossa, esimerkiksi jauhetta tai rakeita, mahdollisesti sekoitettuna 30 lisävalmistusaineiden kanssa, esimerkiksi sideaineiden, voiteluaineiden, inert- . | , tien laimennusaineiden, pinta-aktiivisten aineiden tai dispergoimisaineiden.

« « · . · ·. Muottipuristetut tabletit voidaan valmistaa muottipuristamalla sopivassa ko-

I

I I · 22 104373 neessa jauhetun aktiivisen aineen seosta minkä hyvänsä sopivan väliaineen kanssa.

Siirappi tai suspensio voidaan valmistaa lisäämällä aktiivinen yhdiste sokerin, 5 esimerkiksi sakkaroosin konsentroituun vesiliuokseen, johon voidaan lisätä myös mitä hyvänsä lisävalmistusaineita. Täilaisia/tällainen lisävalmis-tusaine(ita) voi(vat) olla mm. makuaine, aine, joka hidastaa sokerin kiteytymistä, tai aine, joka lisää minkä hyvänsä muun valmistusaineen liukoisuutta, esimerkiksi polyhydristä alkoholia, esimerkiksi glyserolia tai sorbitolia.

10

Rektaaliseen tai vaginaaliseen antoon tarkoitetut formulaatiot voidaan tarjota puikkoina tavanomaisen väliaineen kanssa, esimerkiksi kaakaovoin tai Whitepsol $55:n (tavaramerkki yhtiöstä Dynamine Nobel Chemical, Saksa, peräpuikkoperusaineelle).

15

Transdermaaliseen antoon keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan formuloida voiteiksi, geeleiksi, ihovoiteiksi tai huuhtelunesteiksi, tai ihon läpi vapauttavaksi laastariksi. Tällaiset koostumukset voidaan formuloida esimerkiksi vesi- tai öljypohjaisen perusaineen kanssa lisäten sopivia sakeutus-, geeliyttämis-, 20 emulgointi-, stabilointi-, dispergoimis-, suspendoimis-ja/tai väriaineita.

I I

: V: Parenteraaliseen antoon tarkoitetut formulaatiot sisältävät sopivasti aktiivisen yhdisteen steriiliä vesipohjaista valmistetta, joka on edullisesti isotonista vas- • ·

taanottajan veren kanssa. Tällaiset formulaatiot käsittävät sopivasti kaavan I

• · · : 25 mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti ja farmakologisesti hyväksyttävän happo- additiosuolan liuosta tai suspensiota, joka on isotonista vastaanottajan veren » · v : kanssa. Tällaiset formulaatiot voivat sisältää sopivasti tislattua vettä, 5 % deks- • · · v : troosia tislatussa vedessä tai suolaliuoksessa, ja kaavan I mukaisen yhdisteen •: · ·: farmaseuttisesti ja farmakologisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa, jolla on :"! 30 sopiva liukoisuus näihin liuottimiin, esimerkiksi hydrokloridia. Käyttökelpoiset * . *: *. formulaatiot käsittävät myös konsentroituja liuoksia tai kiinteitä aineita, jotka :: sisältävät kaavan I mukaista yhdistettä, ja jotka antavat sopivalla liuottimena (Il laimennettaessa edellä kuvatun, parenteraaliseen antoon sopivan liuoksen.

23 104373

Edellä mainittujen valmistusaineiden lisäksi keksinnön mukaiset formulaatiot voivat lisäksi sisältää yhtä tai useaa mahdollista lisävalmistusainetta, joita käytetään farmaseuttisten formulaatioiden alalla, esimerkiksi laimennusaineita, puskurointiaineita, aromiaineita, sideaineita, pinta-aktiivisia aineita, sakeutus-5 aineita, vioiteliaineita, suspendoimisaineita, säilöntäaineita (mukaan luettuna hapetuksenestoaineet) ja vastaavat.

Esimerkit 10 Seuraavat esimerkit kuvaavat tämän keksinnön näkökantoja, mutta niitä ei pitäisi ymmärtää rajoittaviksi. Näissä esimerkeissä käytetyt symbolit ja yleiset tavat ovat yhdenmukaisia nykyajan kemiallisessa kirjallisuudessa, esimerkiksi julkaisussa Journal of the American Chemical Society käytettyjen kanssa. Tässä käytettäessä käsite "huoneenlämpötila" tarkoittaa noin 25°C.

15

Esimerkki 1 7-dimetwliaminometvleeni-10.11-metvleenidioksi-20fR.SVkamptotekiini (Yhdiste 1) :Y: 20 :' ·.. (A) 3,4-metyleenidioksiasetanilidi · · · * · ·

Kaupallisesti saatavaan 3,4-metyleenidioksianiliiniin (17,0 g, 124 mmol) ja natriumkarbonaattiin (15,5 g, 136 mmol) kloroformissa (90 ml) 5°C:ssa lisätään • · · ; 25 sekoittaen tipoittain asetyylikloridia (8,8 g, 124 mmol). Reaktio saa lämmetä huoneenlämpötilaan, ja sekoittamista jatketaan noin 18 tuntia. Reaktioseos M· v : pestään kahdesti noin 50 mlilla 1N HCI:ää, ja orgaaninen kerros kuivataan • · § v : (MgSOJ, ja liuotin poistetaan, jolloin saadaan ruskeaa kiinteää ainetta. Uudel- : ' i leenkiteytetään vedestä käsitellen aktiivihiilellä, jolloin saadaan 3,4-metyleeni- 30 dioksiasetanilidia (9,4 g, 42,1 % teoreettisesta) vaaleanruskeana kiinteänä aineena.

I I «

Alkuaineanalyysi: (C9H9N03)

< I

24 104373 % C % H % N Saatu: 60,34 5,04 7,79

Laskettu: 60,33 5,06 7,82 5 (B) 2'-asetyyliamino-4',5'-metyleenidioksi-2-klooriasetofenoni

Seokseen, jossa on sinkkikloridia (24,3 g, 178,3 mmol) ja klooriasetyylikloridia (16,1 ml, 202,1 mmol) nitrometaanissa (85 ml), typen alla, huoneenlämpötilassa, lisätään sekoittaen tipoittain 3,4-metyleenidioksiasetanilidia (8,96 g, 10 50,0 mmol) nitrometaanissa (15 ml). Sitten tätä seosta sekoitetaan refluksoi- den 1,5 tunnin ajan, annetaan jäähtyä huoneenlämpötilaan, kaadetaan jäihin, uutetaan metyleenikloridilla, joka sitten poistetaan haihduttamalla, jolloin saadaan ruskeaa kiinteää ainetta. Tämä kiinteä aine uudelleenkiteytetään etyyli-asetaatti/heksaani-seoksesta (sisältäen aktiivihiilikäsittelyn), jolloin saadaan 15 2'-asetyyliamino-4,,5'-metyleenidioksi-2-kloori-asetofenoni (831,3 mg, 6,5 % teoreettisesta) keltaisina kiteinä.

1H-NMR (CDCI3):ö 8,45 (s, 1 H); 7,2 (s, 1 H); 6,09 (s, 2H); 4,65 (s, 2H); 2,25 (s, 3H).

:V: 20 (C) 3,4-metyleenidioksipivaloyylianilidi

• I

:. '. Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 (A) menetelmällä paitsi, että asetyyliklo- ridin sijasta käytetään ekvivalenttia 2,2-dimetyylipropanoyylikloridimäärää.

• · « · · • M « · · · •V ; 25 (D) 2,-pivaloyyliamino-4,,5,-metyleenidioksi-2-kiooriasetofenoni ··» v : Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1(B) menetelmällä paitsi, että 3,4-mety- • · « • · · * leenidioksiasetanilidin sijasta käytetään ekvivalenttia 3,4-metyleenidioksi- pivaloyylianilidimäärää.

30 I I I « · « «Il 25 104373 (E) 2,-amino-4',5'-metyleenidioksi-2-klooriasetofenoni 2'-asetyyliamino-4',5,-metyleenidioksi-2-klooriasetofenoniin (0,9 g, 3,53 mmol) tai ekvivalenttiin määrään 2'-pivaloyyliamino-4',5'-metyleenidioksi-2-kloori-5 asetofenonia etanolissa (60 ml) noin 5°C:ssa lisätään tipoittain konsentroitua HCI:ää (12,5 ml, 149,7 mmol). Sitten reaktioseosta kuumennetaan refluksoiden noin tunnin ajan, kaadetaan sitten 2N NaOH/jäähän (80 ml/60 g) ja pestään etyyliasetaatilla (3 x 70 ml). Orgaaniset osat yhdistetään ja pestään suolaliuoksella (50 ml), kuivataan (vedetön natriumsulfaatti) ja konsentroidaan tyhjössä, 10 jolloin saadaan vihertävänkeltaista kiinteää ainetta. Tämä kiinteä aine uudel-leenkiteytetään etyyliasetaatti/heksaanista, käsitellään aktiivihiilellä, jolloin saadaan 2'-amino-4',5'-metyleenidioksi-2-klooriasetofenoni (0,39 g, 52 % teoreettisesta).

Alkuaineanalyysi: (C9H8N03CI)

15 %C % H % N

Saatu: 50,66 3,80 6,47

Laskettu: 50,60 3,77 6,56 (F) SXR.SH.S-diokso-^-etyyli-ff-hydroksi-ZH.SH&H-e-oksopyranoJpy.^-f]]- :V: 20 A6,8-tetrahydroindolitsiini ja S'iSJ-I.S-diokso-iS'-etyyli-S'-hydroksi^'H.S'H.e'H-e- oksopyrano)[3',4'-f]] A6,8-tetrahydroindolitsiini (kaavan III mukaiset yhdisteet) • · f · · • · « Nämä yhdisteet, joita kutsutaan tämän jälkeen nimillä "trisyklinen ketoni (R,S)" • · ja "trisyklinen ketoni (S)", vastaavasti, tai yhteisesti nimellä "kaavan III mukai- • · · : 25 nen yhdiste", valmistetaan menetelmällä, jonka Wani et ai. kuvaa patenttijul kaisussa '512. Huomaa, että myös vastaava R-enantiomeeri voidaan valmistaa «1« v : patenttijulkaisun'512 menetelmällä.

• · • · · » » ·": (G) 7-kloorimetyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini :··: 30 :' ': Noudattaen kamptotekiiniIle patenttijulkaisussa '512 kuvattua yleistä menetel- :; mää 4',5'-metyleenidioksi-2-klooriasetofenonia sekoitetaan refluksoituvassa • · · tolueenissa (50 ml) trisyklisen ketonin (R,S) (256,3 mg, 0,97 mmol) kanssa 26 104373

Dean-Stark-loukun alla puolen tunnin ajan. Sitten reaktio jäähdytetään, ja kiinteä aine suodatetaan ja pestään tolueenilla ja etanolilla, jolloin saadaan 7-kloorimetyyli-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini (408,5 mg, 68,8 %).

5 1H 300 NMR (DMSO-d6): δ 7,72 (s, 1 H); 7,55 (s, 1 H); 7,2 (s, 1 H); 6,34 (s, 2H); 5,42 (s, 2H); 5,32 (s, 2H); 5,24 (s, 2H); 1,85 (m, 2H); 0,88 (t, 3H).

Nominaalinen massaspektri M+1:

Laskettu: 441

Saatu: 441 10 (H) 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini

Sekoitettuun seokseen, jossa on 7-kloorimetyyli-10,11-metyleenidioksi-(R,S)-kamptotekiinia (0,11 g, 0,25 mmol) ja kaliumkarbonaattia (346 mg, 0,5 mmol) 15 dimetyyliformamidissa (DMF) (1 ml), lisätään dimetyyliamiinia (6,1 ml, 0,5 mmol) 3,73-mg/ml liuoksen muodossa tetrahydrofuraanissa noin 5°C:ssa. Reaktioseos suljetaan turvallisesti, annetaan lämmetä huoneenlämpötilaan, sekoitetaan noin 15 tuntia, ja suodatetaan sitten kiinteän aineen poistamiseksi. Suodos konsentroidaan haihduttamalla tyhjössä, ja tulokseksi saatu kiinteä : V; 20 aine trituroidaan asetonitriilillä ja suodatetaan. Suodos konsentroidaan haih- j ' duttamalla tyhjössä, jolloin saadaan paksu jäännös. Jäännös liuotetaan pie- · nimpään mahdolliseen määrään kloroformia, ja kromatografoidaan 30 g:lla « flash-laatuista silikageeliä eluoiden peräkkäisillä erillä, jotka ovat 250 ml etyy- • · V·: liasetaattia, sen jälkeen 250 ml 9:1 etyyliasetaatti/isopropanolia, lopuksi 250 ml • · · v : 25 4:1 etyyliasetaatti/isopropanolia. Kerättiin fraktioita ja seurattiin TLC.IIä (5 % metanoli/etyyliasetaatti) ja visualisoitiin UV-lampulla. Sopivat fraktiot yhdistet- • · · : tiin, konsentroitiin ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 7-dimetyyliaminomety- • · · * leeni-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini (6,0 mg, 4,7 %). Tämä

*!"i yhdiste karakterisoitiin asetaattisuolanaan. sp. >250°C

30 Alkuaineanalyysi: (C24H23N303.C2H402)

:*j': %C % H % N

Saatu: 61,64 5,17 8,73 I f f

Laskettu: 61,29 5,34 8,25 27 104373 (I) Avoin E-rengasmuoto

Osan (H) yhdiste käsitellään ekvivalenttimäärällä natriumhydroksidia vastaavan avoimen E-rengasmuodon muodostamiseksi. Viimeksi mainitun käsittely 5 suolahapon ekvivalentilla määrällä sulkee E-renkaan ja muodostaa uudelleen osan (H) yhdisteen.

Esimerkki 2 10 7-dimetvvliaminometvleeni-10.11-metvleenidioksi-20(SVkamptotekiini (Yhdiste 2) (A) 7-kloorimetyyli-10,11-metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini

15 Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menettelytavalla, paitsi että osassa (G) käytetään trisyklisen ketonin (R,S) sijasta trisyklisen ketonin (S) ekvivalenttia määrää, sp. >250°C

«V: 20 (B) 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini • < • · Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 osan (H) menettelytavalla paitsi, että 7-kloorimetyyli-10,11-metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinin sijasta käytetään • · :Λ: esimerkin 2 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-metyleeni-

Ml : 25 dioksi-20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää,

sp. >250°C

• tt ';* * Nominaalinen massaspektri M+T.

*·* * Laskettu: 450

Saatu: 450 30 «·« • a · i i 28 104373

Esimerkki 3 7-dimetwliaminometvleeni-10.11 -etvleenidioksi-20(R. SVkamptotekiini (Yhdiste 3) 5 (A) 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menettelytavalla, paitsi että osissa (A) ja (C) käytetään 3,4-metyleenidioksianiliinin sijasta 3,4-etyleenidioksianiliinin 10 ekvivalenttia määrää.

High Resolution-massaspektri M+1:

Laskettu: 455,1009

Saatu: 455,1005 15 (B) 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 osan (H) menettelytavalla paitsi, että 7-kloorimetyyli-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

: V: 20 High Resolution-massaspektri M+1: • *·· Laskettu: 464,1821

Saatu: 464,1833 « • · · ···« • ·

Esimerkki 4 :X: 25 7-dimetwliaminometvleeni-10.11 -etvleenidioksi-20( S1-kamptotekiini ··· v : (Yhdiste 4) • · · • · · • · ♦ ‘:**** (A) 7-kloorimetyyli-10,11-etyIeenidioksi-20(S)-kamptotekiini ·"·: 30 Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menettelytavalla, paitsi että osissa (A) ;'": ja (C) käytetään 3,4-metyleenidioksianiliinin sijasta 3,4-etyleenidioksianiliinin 29 104373 ekvivalenttia määrää, ja osassa (G) käytetään trisykiisen ketonin (R,S) sijasta trisyklisen ketonin (S) ekvivalenttia määrää.

High Resolution-massaspektri M+1:

Laskettu: 455,1009 5 Saatu: 455,1000 (B) 7-dimetyyliaminometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 osan (H) menettelytavalla paitsi, että 10 7-kloorimetyyli-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää. High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 464,1821

Saatu: 464,1811 15

Esimerkki 5 7-morfolinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(R.SVkamptotekiini (Yhdiste 5) o;.· 20 :’*·· Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että * · v.·' dimetyyliamiinin sijasta käytetään morfoliinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloori- metyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimer- • · kin 3 osan (B) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi- ··· v : 25 20(R,S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

High Resolution-massaspektri: ··· v : Laskettu: 506,1942 • · · v : Saatu: 506,1925 • « « · · « · at r a i « « 30 104373

Esimerkki 6 7-morfolinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(S)-kamptotekiini (Yhdiste 6) 5 Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että dimetyyliamiinin sijasta käytetään morfoliinin ekvivalenttia määrääjä 7-kloori-metyyli-10,11 -metyleenidioksi- 20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimerkin 4 osan (B) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

10 High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 506,1942

Saatu: 506,1929

Esimerkki 7 15 7-pvrrolidinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(R.S1-kamptotekiini (Yhdiste 7) Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että dimetyyliamiinin sijasta käytetään pyrrolidiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloori-: ]:': 20 metyyli-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimer- \ ··· kin 3 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi- v.: 20(R,S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

High Resolution-massaspektri: \*·: Laskettu: 490,1978 :7: 25 Saatu: 490,1988 ··· v : Esimerkki 8 • 9 · • · · • · · *:**« 7-piperidinometvleeni-10.11-metvleenidioksi-20(R.S)-kamptotekiini (Yhdiste 8) 30 Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että ; *": dimetyyliamiinin sijasta käytetään piperidiinin ekvivalenttia määrää.

Nominaalinen massaspektri M+1: ai 104373

Laskettu: 490

Saatu: 490 1H-300 NMR (DMSO-d6): δ 7,95 (s, 1H); 7,62 (s, 1H); 7,29 (s, 1H); 6,35 (s, 2H); 5,49 (s, 2H); 5,41 (s, 2H); 4,85 (leveä s, 2H); 1,9-0,7 (m, 11 H).

5

Esimerkki 9 7-piperidinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(R.S)-kamptotekiini (Yhdiste 91 10 Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että dimetyyliamiinin sijasta käytetään piperidiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kIoori-metyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimerkin 3 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

15 High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 504,2127

Saatu: 504,2129

Esimerkki 10 20 • « « ]; ' 7-(4-metwlipiperatsinometvleeni1-10,11 -etvleenidioksi-20(R. S)-kamPtotekiini 4 · . (Yhdiste 10) • · 4 4 · · • · • · · Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että • · · 25 dimetyyliamiinin sijasta käytetään 4-metyylipiperatsiinin ekvivalenttia määrää ja • · · 7-kloorimetyyli-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimerkin 3 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidi- • · · oksi-20(R,S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

’ . High Resolution-massaspektri: f 30 Laskettu: 519,2236

Saatu: 519,2246 •« · • · · • · · · · « · « · • · ·

Esimerkki 11 32 104373 ! 7-(4-metwlipiperatsinonnetvleenfl-10.11-etvleenidioksi-20(S1-kamptotekiini (Yhdiste 11) 5

Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että dimetyyliamiinin sijasta käytetään 4-metyylipiperatsiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloorimetyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimerkin 4 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidi-10 oksi-20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää, sp. 261 - 264°C

Nominaalinen massaspektri M+1:

Laskettu: 519

Saatu: 519 15

Esimerkki 12 7-dietwliaminometvleeni-10.11 -metvleenidioksi-20(S)-kamptotekiini (Yhdiste 121 20 • · · ’ Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menettelytavalla, paitsi että dimetyyli- • · · \ . amiinin sijasta käytetään dietyyliamiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloorimetyyli- • · · 10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimerkin 2 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11 -metyleenidioksi-20(S)- • · · .·;*! 25 kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

• · ·

High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 478,1978 « · ·

Saatu: 478,1963 • · · * · « I · • · · • · « · · « » « · 33 104373

Esimerkki 13 7-dietvvliaminometvleeni-10.11 -etvleenidioksi-20( R. S)-kamptotekiini (Yhdiste 13) 5 Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että di-metyyliamiinin sijasta käytetään dietyyliamiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloori-metyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimerkin 3 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-10 20(R,S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 492,2134

Saatu: 492,2140 15 Esimerkki 14 7-dietvvliaminometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(S)-kamptotekiini (Yhdiste 14) Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että di-20 metyyliamiinin sijasta käytetään dietyyliamiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloori-

• I I

' metyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimer- • 1 \ . kin 4 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11 -etyleenidioksi- · · ' 20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

*"1. High Resolution-massaspektri: .·;·[ 25 Laskettu: 492,2134

Saatu: 492,2122 ·«# • « · • · « • · · • · t • · * ·

I I

< · « · · • « 1 « 1 « » * f I 1 34 104373

Esimerkki 15 7-N-metvvlietanoliaminometvleeni-10.11-metvleenidioksi-20(R.S)-kamptotekiini (Yhdiste 15) 5 Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että di-metyyliamiinin sijasta käytetään N-metyylietanoliamiinin ekvivalenttia määrää. High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 480,1771 10 Saatu: 480,1776

Esimerkki 16 7-N-metwlietanoliaminometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(R.S1-kamptotekiini 15 (Yhdiste 161 Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että di- metyyliamiinin sijasta käytetään N-metyylietanoliamiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloorimetyyli-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käyte- . . 20 tään esimerkin 3 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11- • · * • · · ' etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

I · » \ . High Resolution-massaspektri: * I Laskettu: 494,1927 T5. Saatu: 494,1929 • ·· ···’ 25 9 9 9

Esimerkki 17 ··· • · 1 • « · 7-dietanoliaminometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(R.SVkamptotekiini \ (Yhdiste 171 30 111«· I « Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että

I I I

’ · ‘ * dimetyyliamiinin sijasta käytetään dietanoliamiinin ekvivalenttia määrää ja r * '··* 7-kloorimetyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään 104373 35 esimerkin 3 osa n (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidi-oksi-20(R,S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää.

High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 524,2024 5 Saatu: 524,2026

Esimerkki 18 7-dietanoliaminometvleeni-10.11 -etvleenidioksi-20(S)-kamptotekiini 10 (Yhdiste 181 Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että dimetyyliamiinin sijasta käytetään dietanoliamiinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloorimetyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään 15 esimerkin 4 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11 -etyleenidi-oksi-20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää, sp. 230 - 233°C.

Nominaalinen massaspektri M+1:

Laskettu: 524 . . 20 Saatu: 524 «Il • · · « · • » • · . Esimerkki 19 I « « > · · • V « • · a m 7-atsetidinometvleeni-10.11 -metvleenidioksi-20(R.S1-kamptotekiini V.; 25 (Yhdiste 191 • » · Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että t · · dimetyyliamiinin sijasta käytetään atsetidiinin ekvivalenttia määrää, sp. >250°C.

! 30 Nominaalinen massaspektri M+1: I « . Laskettu: 462 : Saatu: 462 t « 4 « « 4 « f < <

Esimerkki 20 104373 36 7-atsetidinometvleeni-10.11-metvleenidioksi-20fsVkamptotekiini (Yhdiste 20) 5 Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menettelytavalla paitsi, että osassa (G) käytetään trisyklisen ketonin (R,S) sijasta trisyklisen ketonin (S) ekvivalenttia määrää ja osassa (H) käytetään dimetyyliamiinin sijasta atsetidiinin ekvivalenttia määrää.

High Resolution-massaspektri: 10 Laskettu: 462,1665

Saatu: 462,1667

Esimerkki 21 15 7-tiomorfolinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(S)-kamptotekiini (Yhdiste 21) Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että dimetyyliamiinin sijasta käytetään tiomorfoliinin ekvivalenttia määrää ja 7-kloori-metyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimer-20 kin 4 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-:Y: 20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää, sp. 249 - 252°C.

:Y: Nominaalinen massaspektri M+1:

Laskettu: 522 Y-l 25 Saatu: 522 • · · • · · * t

Esimerkki 22

IM

• · f • · · • · · v : 7-atsetidinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(S1-kamptotekiini (Yhdiste 221 :··: 30 ':": Käytetään samaa menettelytapaa kuin esimerkin 1 osassa (H) paitsi, että di- metyyliamiinin sijasta käytetään atsetidiinin ekvivalenttia määrääjä 7-kloori-metyyli-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiinin sijasta käytetään esimer-

M

104373 37 kin 4 osan (A) mukaisesti valmistetun 7-kloorimetyyli-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinin ekvivalenttia määrää, sp. 208 - 210°C (hajoaa)

Low Resolution-massaspektri: 476,2 (elektronisuihku).

5

Esimerkki 23 7-(4-metvvlipiperatsinometvleeni-10.11 -metvleenidioksi-20(SVkamptotekiini (Yhdiste 231 10 Tämä yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menettelytavalla paitsi, että osassa (G) käytetään trisyklisen ketonin (R.S) sijasta trisyklisen ketonin (S) ekvivalenttia määrää ja osassa (H) käytetään dimetyyliamiinin sijasta 4-metyylipiperatsiinin ekvivalenttia määrää.

15 High Resolution-massaspektri:

Laskettu: 505,2083

Saatu: 505,2087

Esimerkki 24 20 7-trifluoriasetamidometvleeni-10.11 -etvleenidioksi-20( Sl-kamototekiini : (Yhdiste 24) • · • I « • fl · • · (A) 2,-amino-4',5'-metyleenidioksi-2-trifluoriasetamidoasetofenoni V! 25 • ·« : Trifluoriasetamidia (227 mg, 2 mmol) lisätään liuokseen, jossa on cesiumkar- bonaattia (1,63 g, 5 mmol) vedettömässä asetonitriilissä (15 ml) huoneenläm- I·· v : Potilassa typen alla. Sitten lisätään 2'-amino-4',5'-metyleenidioksi-2-klooriase- • · · ’ tofenonia,jaseossijoitetaan30minajaksietukäteenkuumennettuunöljyhau- ':'': 30 teeseen, joka on säädetty 90°C:seen. Reaktioseos jäähdytetään huoneenläm- ·" " potilaan ja kaadetaan suoraan silikageelikerrokseen (15 g), joka on sintteröi- dyssä lasisuppilossa. Silikageeli pestään kahdesti EtOAc:llä, ja haihtuvat ai-:'": nekset yhdistetyistä pesuista poistetaan tyhjössä. Jäännöksen triturointiin 104373 38 käytetään dietyylieetteriä, jolloin saadaan vaaleanoranssia kiinteää ainetta, joka kerätään suodattamalla ja kuivataan tyhjössä.

(498 mg, 86 %). Sp. = 219 - 220°C.

1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 4,44 (d, 2H); 5,96 (S, 2H); 5,96 (S, 2H); 6,35 5 (S, 1 H); 7,21 (S, 1 H); 7,40 (bs, 2H); 9,59 (t, 1 H).

Nominaalinen massa MH+ (m/z):

Laskettu: 291

Saatu: 291 10 (B) ^-amino-^.S'-etyleenidioksi^-trifluoriasetamidoasetofenoni Tämä yhdiste valmistetaan samalla menetelmällä kuin edellä paitsi, että 2'-amino-4',5'-metyleenidioksi-2-klooriasetofenonin sijasta käytetään 2'-amino-4',5'-etyyleenidioksi-2-klooriasetofenonin ekvivalenttia määrää. Eristetään 15 vihreää kiinteää ainetta 74-% saannolla. Sp. = 154 - 155°C.

1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 4,08 (m, 2H); 4,13 (m, 2H); 4,60 (d, 2H); 6,0 (bs, 2H); 6,08 (s, 1 H); 7,04 (s, 1 H); 7,60 (t, 1 H).

Nominaalinen massa MH+ (m/z):

Laskettu: 305 20 Saatu: 305 • · t · · • · (Cl 10.11-etvleenidioksi-7-trifluoriasetamidometvleeni-20(S)-kamptotekiini • · • · · • · 2,-amino-4,,5’-etyleenidioksi-2-trifluoriasetamidoasetofenonia (71 mg, • · 25 0,234 mmol), trisyklistä ketonia (S) (61 mg, 0,234 mmol) ja vedetöntä tolueenia • ·· v : (2,0 ml) yhdistetään 60°C:ssa typen alla. Lisätään katalyyttinen määrä sekä jääetikkaa että p-tolueenisulfonihappomonohydraattia ennen reaktiolämpötilan ·♦* : kohottamista refluksointilämpötilaan. Reaktiota refluksoidaan 16 tunnin ajan ja • ♦ · v* : jäähdytetään sitten ympäristön lämpötilaan. Vihertävänkeltaista kiinteää ainet- ': *': 30 ta kerätään suodattamalla, pestään etanolilla ja dietyylieetterillä, ja kuivataan ': ’': tyhjössä. (101 mg, 84 %) Sp. = 249°C.

« < « * t « i i

I I I

,Q 104373 39 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 0,91 (t, 3H); 1,91 (m, 2H); 4,40 (S, 4H); 4,83 (d, 2H); 5,39 (S, 2H); 5,41 (S, 2H); 6,48 (S, 1H); 7,22 (S, 1H); 7,58 (S, 1H); 7,77 (S, 1H); 10,20 (t, 1H).

Nominaalinen massa MH+ (m/z): 5 Laskettu: 532

Saatu: 532

Esimerkki 25 10 7-trifluoriasetamidometvleeni-10,11 -metvleenidioksi-20(S)-kamptotekiini (Yhdiste 25) Tämä yhdiste valmistetaan edellä olevan esimerkin 24 menetelmällä paitsi, että 2'-amino-4',5'-etyleenidioksi-2-trifluoriasetamidoasetofenonin sijasta käyte-15 tään 2'-amino-4',5'-metyleenidioksi-2-tnfluoriasetamidofenonin ekvivalenttia määrää. Eristetään vihertävänkeltaista kiinteää ainetta 15-% saannolla, sp. = 238°C (hajoaa).

’H-NMR (DMSO-d6): δ 0,91 (t, 3H); 1,95 (m, 2H); 4,92 (s, 2H); 5,38 (s, 2H); 5,40 (s, 2H); 6,28 (s, 2H); 6,49 (s, 1H); 7,13 (s, 1H); 7,58 (s, 1H); 7,78 (s, 1H); 20 10,21 (t, 1H).

: V: Nominaalinen massa MH+ (m/z): j '·« Laskettu: 518

Saatu: 518 • · · 25 Esimerkki 26 • · » • » » • · · 7-aminometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(S)-kamptotekiinidihvdrokloridi ··« v : (Yhdiste 26) · · m m · • · · 30 7-trifluoriasetamidometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiiniä (65 mg, 0,12 mmol) kuumennetaan 20 min ajan avoimessa astiassa 105°C:seen 2N suolahapon vesiliuoksessa (1,2 ml). Haihtuvat aineet poiste-:"'; taan tyhjössä, ja jäännös trituroidaan etyyliasetaatilla ja kerätään suodattamal- •» t 40 104373 la. Kirkkaankeltainen kiinteä aine pestään etyyliasetaatilla (3 ml), etanolilla (2 ml) ja dietyylieetterillä (2 ml) ja kuivataan tyhjössä, jolloin saadaan 62 mg (100%). sp. >300°C.

1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 0,90 (t, 3H); 1,95 (m, 2H); 4,41 (s, 4H); 4,61 5 (d, 2H); 5,40 (s, 2H); 5,45 (s, 2H); 7,24 (s, 1 H); 7,60 (s, 1 H); 7,81 (s, 1 H); 8,40 (bs, 2H).

Nominaalinen massa MH+ (m/z):

Laskettu: 436

Saatu: 436 10

Esimerkki 27 7-aminometvleeni-10.11 -metvleenidioksi-20(S1-kamptotekiinidi-hvdrokloridi (Yhdiste 271 15 Tämä yhdiste valmistetaan edellä olevan esimerkin 26 menetelmällä paitsi, että 7-trifluoriasetamidometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinin sijasta käytetään 7-trifluoriasetamidometyleeni-10,11 -metyleenidioksi-20(S)- kamptotekiinin ekvivalenttia määrää. Eristetään kullankeltaista kiinteää ainetta 20 kvantitatiivisella saannolla. Sp. = 270°C (hajoaa).

: V: 1H-NMR (DMSO-d6): δ 0,90 (t, 3H); 1,9 (m, 2H); 4,6 (m, 2H); 5,4 (s, 2H); 5,5 i\. (s, 2H); 6,3 (s, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,6 (s, 1 H); 7,9 (s, 1H); 8,4 (bs, 2H).

:V: Nominaalinen massa MH+(m/z): *:· Laskettu: 422 • · · · 25 Saatu: 422 • · · « · · • · ·

Esimerkki 28 • · * • · · • · · • · · v : 7-tert-butvvlioksikarbonvvlip|peratsinonnetvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(S1- ·:·! 30 kamptotekiini (Yhdiste 281 (S)-(-)-10,11-etyleenidioksi-7-kloorimetyylikamptotekiinin (35,8 mg, 78,7 x 10*3 , ". mmol) liuokseen -50°C:ssa lisättiin tipoittain tert-butyyli-1 -piperatsiinikarboksy- I I f 104373 41 laattia (34,6 mg, 186 x 10'3 mmol) Ν,Ν-dimetyyliformamidissa (DMF) (0,45 ml). Tummanruskeaa reaktioseosta sekoitettiin -50°C:ssa 10 min ajan, annettiin lämmetä 0°C:seen. Lisättiin vielä tert-butyyli-1-piperatsiinikarboksylaattia (8 mg, 43 x 10'3 mmol) DMF:ssä (0,2 ml), ja seos sai lämmetä ypäristön lämpö-5 tilaan. Seosta sekoitettiin vielä 90 min, ja liuotin poistettiin kiertohaihduttimella, jolloin saatiin raakatuote ruskeana jäännöksenä. Puhdistettiin silikageelikroma-tografialla (eluoiden 100-% etyyliasetaatilla), jolloin saatiin 20,7 mg (saanto 58 %) tuotetta vaaleankeltaisena kiinteänä aineena.

1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1,04 (t, 3H, J=7); 1,45 (s, 9H); 1,87 (m, 2H); 2,46 10 (s, 4H); 3,41 (s, 4H); 3,94 (s, 2H); 4,43 (s, 4H); 5,29 (s, 2H); 5,30 (s, 1H, J=16); 5,75 (s, 1H, J=16); 7,59 (s, 1H); 7,65 (s, 1H); 7,73 (s, 1H).

Nominaalinen massaspektri MH+ (m/z): 605.

Esimerkki 29 15 7-piperatsinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(S)-kamptotekiini trifluorietikka-happosuola (Yhdiste 29) 7-tert-butyylioksikarbonyylipiperatsinometyyli-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamp- 20 totekiinin (16,7 mg, 27,6 x 10 3 mmol) liuokseen kuivassa CH2CI2:ssa (5,0 ml) 0°C:ssa lisättiin trifluorietikkahappoa (0,5 ml). Tummankeltainen liuos sai läm- Y metä ympäristön lämpötilaan, ja sekoitettiin 14 tunnin ajan. Seos konsentroitiin ' Y kiertohaihduttimella, ja jäännös puhdistettiin käänteisfaasi-HPLC:llä (Rainin • · · ***:. Dynamax 60A-kolonni, eluoiden 49:10:2,5:1 vesi/asetonitriili/THF/trifluori- • · · 25 etikkahapolla), jolloin saatiin tärkeimmän UV-aktiivisen huipun (tarkkailu • « · ’ 254 nm:llä) konsentroinnin ja lyofilisoinnin jälkeen 21,7 mg tuotetta keltaisena ... höytymäisenä jauheena.

’:!/ 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 0,88 (t, M, J=7); 1,87 (m, 2H); 2,60-2,80 ’ (m, 4H); 3,00-3,20 (bs, 4H); 5,29 (s, 2H); 5,41 (s, 2H); 6,5 (bs, 1H); 7,25 (s, ':; 30 1 H); 7,56 (s, 1 H); 7,80 (S, 1 H), 8,50 (bs, 2H).

« « f 4 ( ' Nominaalinen massaspektri (M+1): 505.

:sp.: 315°C (hajoaa) • 4 4 « « I t 42 104373

Esimerkki 30 7-fa.a.a-trifluori-m-tolwlibiperatsinometvleeni-10.11-etvleenidioksi-20(SV kamptotekiini ^Yhdiste 30) 5 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiinin (5,2 mg, 11,4 x 10'3 mmol) liuos vedettömässä DMSO.ssa (200 μΙ) lisättiin tipoittain 0°C:ssa olevaan liuokseen, jossa oli 1-(a,a,a-trifluori-m-tolyyli)piperatsiinia (10 μΙ, 53 x 10'3 mmol) vedettömässä tolueenissa (500 μΙ). Tummanruskeaa seosta sekoi-10 tettiin 0°C:ssa 90 min ajan, ja annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan. Liuotin poistettiin kiertohaihduttimella, ja pumpattiin edelleen suurtyhjössä, jolloin jäljelle jäi raakatuote, joka puhdistettiin silikageelikromatografialla (eluoiden 100-% etyyliasetaatilla ja sen jälkeen 6:5:1 etyyliasetaatti/kloroformi/metano-lilla), jolloin saatiin 3,7 mg (saanto 50 %) tuotetta vaaleankeltaisena kiinteänä 15 jäännöksenä.

fH-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ 0,90 (t, 3H, J=7); 1,95 (q, 2H, J=7); 2,60-2,70 (m, 4H); 3,20-3,30 (m, 4H); 4,10 (s, 2H); 4,50 (s, 4H); 5,30 (s, 2H); 5,45 (s, 2H); 6,55 (s, 1 H); 7,40 (t, 1 H, J=7); 7,60 (s, 1 H); 7,85 (s, 1 H).

Nominaalinen massaspektri (M+1): 649.

20

Esimerkki 31 «· I · · • v.: 7-( 2-metoksifenwlipiperatsino1metvleeni-10.11 -etvleenidioksi-20( Sl-kamotote- kiini (Yhdiste 31) · • · · ·. *: 25 * · : Liuokseen, jossa oli 2-metoksifenyylipiperatsiinia (17,9 μΙ, 102 x 10·3 mmol) vedettömässä tolueenissa (1 ml) 0°C:ssa, lisättiin liuos, jossa oli 7-kloori- 9 · · ' metyyli-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiiniä (10 mg, 22 x 10"3 mmol) • « · '·] ’ DMSO.ssa (200 μΙ). Tummaa seosta sekoitettiin 0°C:ssa 10 min ajan, ja annet- < ';: 30 tiin lämmetä ympäristön lämpötilaan ja sekoitettiin 3 tuntia. Reaktioseos kon sentroitiin kiertohaihduttimella, ja jäännösliuotin poistettiin pumppaamalla suur- « tyhjössä, jolloin saatiin raakatuote. Puhdistettiin silikageelikromatografialla " (eluoiden 1:1 heksaani/etyyliasetaatilla, sen jälkeen 6:5:1 etyyliasetaatti/kloro- 43 104373 formi/metanolilla), jolloin saatiin 3,4 mg (saanto 25 %) tuotetta keltaisena kiinteänä aineena.: 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ 1,05 (t, 3H, J=7); 1,90 (m, 2H); 2,75 (bs, 4H); 3,10 (bs, 4H); 3,75 (s, 1H); 3,85 (s, 3H); 4,01 (bs, 2H); 5,35 (s, 1H); 5,30 (d, 5 1H, J=18); 5,35 (s, 1H); 5,75 (d, 1H, J=18); 6,80-7,00 (m, 4H); 7,60 (s, 1H); 7,65(5,1 H); 7,75 (s, 1H).

Nominaalinen massaspektri (M+1):

Laskettu: 611

Saatu: 611.

10

Esimerkki 32 7-fenwlipiperatsinometvleeni-10.11 -etvleenidioksi-20(SVkamptotekiini (Yhdiste 32) 15

Liuokseen, jossa oli fenyylipiperatsiinia (15,6 pl, 102 x 1Q·3 mmol) vedettömässä tolueenissa (1 ml) 0°C:ssa, lisättiin liuos, jossa oli 7-kloorimetyyli-10,11-etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiiniä (10,6 mg, 22 x 10'3 mmol) DMSO.ssa (300 μΙ). Tummaa seosta sekoitettiin 0°C:ssa 10 min ajan, ja annettiin lämmetä 20 ympäristön lämpötilaan ja sekoitettiin 3 tuntia. Seos konsentroitiin kiertohaih-;:: duttimella, ja jäännösliuotinta poistettiin edelleen pumppaamalla suurtyhjössä, : '1· jolloin saatiin raakatuote tummana jäännöksenä. Puhdistettiin silikageelikroma- * · tografialla (eluoiden 1:1 heksaani/etyyliasetaatilla, sen jälkeen 6:5:1 etyyliase-taatti/kloroformi/metanolilla), jolloin saatiin 3,6 mg (saanto 30 %) tuotetta kel- • · · '· ” 25 täisenä kiinteänä aineena.

• · · : 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ 1,00 (t, 3H, J=7); 1,90 (m, 2H); 2,75 (bs, 4H); ... 3,20 (bs, 4H); 3,75 (s, 1H); 4,05 (s, 2H); 4,45 (bs, 4H); 5,35 (s, 2H); 5,30 (d, ' 1H, J=18); 5,35 (s, 2H); 5,75 (d, 1H); 6,80-7,00 (m, 3H); 7,20-7,35 (m, 2H); • · · ’ 7,60 (s, 1 H); 7,65 (s, 1 H); 7,80 (s, 1 H).

':: 30 Nominaalinen massaspektri (M+1): 581.

» I 1 I I I I « « » 4 < « 44 104373

Esimerkki 33 2,-amino-4l.5l-metvleenidioksi-2-dimetvvliaminoasetofenoni 5 2,-asetyyliamino-4,,5'-metyleenidioksi-2-klooriasetofenoni, joka on valmistettu esimerkin 1 osassa (B), saatetaan reagoimaan dimetyyliamiiniylimäärän kanssa samanlaisissa olosuhteissa kuin esimerkin 1 osassa (H) esitetään, jolloin saadaan 2'-asetyyliamino-4',5'-metyleenidioksi-2-dimetyyliaminoasetofenoni, josta puolestaan poistetaan suojaus esimerkin 1 osan (E) menetelmällä, jolloin 10 saadaan 2'-amino-4',5'-metyleenidioksi-2-dimetyyliaminoasetofenoni. Nominaalinen massaspektri M+1:

Laskettu: 223

Saatu: 223 15 Esimerkit 34 - 38

Seuraavat kaavan I mukaiset yhdisteet valmistetaan menetelmätavalla, joka esitetään kaaviossa I, IA tai IB esimerkeille 1-32 analogisella tavalla käyttäen kaavojen II, III, IV ja V mukaisia sopivia välituoteyhdisteitä.

20

. I I

= 34 7-(metyyli-2-metoksietyyliaminometyleeni)-10,11 -metyleenidioksi-20(R,S)- '·· kamptotekiini, « · 35 7-sykloheksyyliaminometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(R)-kamptotekii- • · · ···: ni, * · 25 36 7-(2-butenyyli)aminometyleeni-10,11-metyleenidioksi-20(R,S)-kamptote- kiini, 37 7-sykloheksyylimetyyliaminometyleeni-10,11-etyleenidioksi-20(R)- • · * kamptotekiini ja • · · *\ ’ 38 7-tiatsolidinometyleeni-10, H-metyleenidioksi-20 (R, S)-kamptotekiini.

30 «· 4 · f • · · » I I I · f · • « *

Esimerkki 39 45 104373

Farmaseuttiset formulaatiot 5 (A) Transdermaalinen järjestelmä

Valmistusaineet Määrä

Aktiivinen yhdiste 600,0 mg

Silikonineste 450,0 mg 10 Kolloidinen piidioksidi 25,0 mg

Silikonineste ja aktiivinen yhdiste sekoitetaan yhteen, ja kolloidinen piidioksidi saatetaan reagoimaan viskositeetin lisäämiseksi. Sitten materiaali annostellaan kuumalla suljettavalla polymeerilaminaatilla, joka koostuu seuraavista: 15 irrotettavasta polyesterisuojakerroksesta, ihokontaktitarrasta, joka koostuu silikoni- tai akryylipolymeereistä, kontrollimembraanista, joka on polyolefiinia (esimerkiksi polyeteeniä), polyvinyyliasetaattia tai polyuretaania, ja läpäisemättömästä taustamembraanista, joka koostuu polyesterimultilaminaatista. Kuvattu järjestelmä on 10-cm2 laastari.

20 * f :: : (B) Oraalinen tabletti I · « · · ’··' Valmistusaineet Määrä • ’ ~~ • · ·

Aktiivinen yhdiste 200,0 mg 25 Tärkkelys 20,0 mg • « « *·1 ’ Magnesiumstearaatti 1,0 mg ··· • · ·

Aktiivinen yhdiste ja tärkkelys granuloidaan veden kanssa ja kuivataan. Mag- • » · *. nesiumstearaatti lisätään kuivattuihin rakeisiin, ja seos sekoitetaan läpikotai- « ' : 30 sin. Sekoitettu seos puristetaan tabletiksi.

I I I » I · « « 1 f ( t

• I

I I I

46 104373 (C) Peräpuikko

Valmistusaineet Määrä

Aktiivinen yhdiste 150,0 mg 5 Teobromiininatriumsalisylaatti 250,0 mg

Witepsol S55 1725,0 mg

Ei-aktiiviset valmistusaineet sekoitetaan ja sulatetaan. Sitten aktiivinen yhdiste jaetaan sulatettuun seokseen ja annetaan jäähtyä.

10 (D) Injektio

Valmistusaineet Määrä

Aktiivinen yhdiste 20,0 mg 15 Puskurointiaineet tarpeen mukaan

Propyleeniglykoli 0,4

Injektioon tarkoitettua vettä 0,6 ml

Aktiivinen yhdiste ja puskurointiaineet liuotetaan propyleeniglykoliin noin 20 50°C:ssa. Sitten lisätään sekoittaen injektioon tarkoitettu vesi, ja tulokseksi « \:: saatu liuos suodatetaan, täytetään ampulliin, suljetaan ja steriloidaan autokla- i '· voimalla.

• · III « · · • · ···: (E) Kapseli « · * ·· 25 • · · • · ·

Valmistusaineet Määrä

Aktiivinen yhdiste 200,0 mg • · ·

Laktoosi 450,0 mg • · ’ Magnesiumstearaatti 5,0 mg 30 ' ’ Hienojakoinen aktiivinen yhdiste sekoitetaan laktoosin ja stearaatin kanssa ja :T: pakataan gelatiinikapseliin.

« «f I · » ·

III

Claims (7)

47 104373

1. Menetelmä valmistaa farmaseuttisesti käyttökelpoisia 7-aminosubstituoituja 5 10,11-metyleenidioksi- tai 10,11-etyleenidioksi-kamptotekiinijohdannaisia, joilla on kaava (I) .nrV (CH,)n | N—/ ίο ™ AV HO \ jossa 15. on kokonaisluku 1 tai 2; ja i) R1 ja R2 ovat toisistaan riippumatta vety, C1_6-alkyyli tai hydroksi-C^-alkyyli; ii) R1 on vety ja R2 on -COR3, 20 jossa R3 on trifluori-C^-alkyyli; tai * · I I I f · « I i " iii) R1 ja R2 otettuna yhdessä yhdistävän typen kanssa muodostavat atsetidii- nin, pyrrolidiinin, piperidiinin, morfoliinin, tiomorfoliinin tai piperatsiinin, joka • · · ••S1' piperatsiini on mahdollisesti N-substituoitu alemmalla alkyylillä, fenyyli, joka i · * *:./ 25 fenyyli voi olla substituoitu trifluori-C1_6-alkyyli- tai C^-alkoksiryhmällä; tai • · « -COR5, jossa R5 on C^-alkoksi •»· «Il ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja tai solvaatteja, tunnettu siitä, · · että 30 a) saatetaan kaavan (IV) mukainen yhdiste •«« ? · · « · · i « I i I t 48 104373 /0ΥΥτ\ (CH2)„ N ^/° (IV) A_/ HO \ jossa X on halogeeni, reagoimaan kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa 10 HNR1R2 (V) jossa R1 ja R2 tarkoittaa samaa kuin kaavan (I) mukaisessa yhdisteessä; tai 15 b) saatetaan kaavan (Ila) mukainen yhdiste (ch2)„ I nh2 20 <IIa) jossa R1 ja R2 tarkoittaa samaa kuin kaavan (I) mukaisessa yhdisteessä, rea- 4 i '·· goimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa • · a • · m « · _ ··· Γ \ a ···'· I N ——/r 25 °\\ y~~s • · · / \ (III) ^Λ/° :T: ho © • · · • I · *\ 1 ja tarvittaessa ja/tai haluttaessa saatetaan näin saatu yhdiste yhteen tai 30 useampaan lisäreaktioon, joita ovat « i) muunnetaan saatu kaavan (I) mukainen yhdiste tai sen suola tai suojattu :T: johdos toiseksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi, edullisesti alkyloimalla tai pelkistämällä ja/tai 104373 49 ii) minkä tahansa suojaavan ryhmän poistaminen ja/tai iii) kaavan (I) mukaisen yhdisteen tai sen suolan muuntaminen sen fysiologisesti hyväksyttäväksi suolaksi tai solvaatiksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 7-(4-metyylipiperat- siinometyleeni)-10,11 -etyleenidioksi-20(R,S)-kamptotekiini, tunnettu siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 7-(4-metyylipiperat-10 siinometyleeni-10,11 -etyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, tunnettu siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita.

4. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 7-(4-metyyli-piperatsiinometyleeni)-10,11-metyleenidioksi-20(S)-kamptotekiini, tunnettu 15 siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita.

5. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (a) reaktio suoritetaan liuotinsysteemissä ylimäärän kaavan (V) mukaisen yhdisteen läsnäollessa. 20 t « · j;v

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se lisäksi t « käsittää vaiheen, jossa saatu kaavan (I) mukainen yhdiste tai sen farmaseutti- • » · ' V sesti hyväksyttävää suolaa tai solvaattia sekoitetaan farmaseuttisesti hyväksyt- ··· tävän kantajan kanssa. « · · 25 • · · • · ·

7. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava (I) ja jolla on R-konfi- * · · guraatio. • · · « • « t I I • · · < « « 1 · · « · • · • · so 104373