ES2922481T3 - Formulación farmacéutica liofilizada y su uso - Google Patents
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Abstract
Una formulación farmacéutica en forma liofilizada, que comprende una cantidad farmacológicamente efectiva de interferón beta-1a como ingrediente activo, disacáridos como agente de carga y un tensioactivo no iónico. Después de la reconstitución, la composición se puede administrar por vía intravenosa. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Formulación farmacéutica liofilizada y su uso
Campo de la invención
La presente invención se refiere a una formulación farmacéutica liofilizada de interferón beta-1a y a usos de la formulación.
Antecedentes de la invención
El interferón beta-1a es un agonista del interferón beta 1 con la capacidad de regular CD73 por incremento, una molécula que produce adenosina antiinflamatoria, que mejora la función de la barrera endotelial y conduce a la prevención de fuga vascular, el episodio fisiopatológico predominante en SDRA. La fuga vascular en SDRA permite exudación plasmática en el espacio alveolar conduciendo a una hipoxemia potencialmente mortal. El interferón beta-1a tiene el potencial de reducir el impacto del SDRA al reducir la fuga vascular, pero no se limita a este ejemplo.
Al igual que con todos los productos farmacéuticos basados en proteínas, un obstáculo importante que debe superarse en el uso del interferón beta (IFN-beta) como agente terapéutico es la pérdida de utilidad farmacéutica que puede resultar de su inestabilidad en formulaciones farmacéuticas. Las inestabilidades físicas que amenazan la actividad polipeptídica y la eficacia en las formulaciones farmacéuticas incluyen desnaturalización y formación de agregados insolubles, mientras que las inestabilidades químicas incluyen, por ejemplo, hidrólisis, oxidación y desamidación. Se sabe que algunos de estos cambios conducen a la pérdida o reducción de la bioactividad farmacéutica de la proteína de interés. Cuando se administran pequeñas cantidades de péptidos hormonales, también es decisivo garantizar que el paciente reciba la dosificación correcta. Debido al alto contenido de restos de aminoácidos lipófilos en IFN-beta, se adhiere a las superficies del recipiente y forma agregados, dando como resultado pérdidas de ingrediente farmacéutico activo.
Otro requisito, especialmente para los productos farmacológicos para uso en el tratamiento de SDRA, es que el producto farmacológico tiene que estar disponible en caso de emergencia. Por consiguiente, existe la necesidad de formulaciones farmacéuticas liofilizadas estables que comprendan IFN-beta 1a que tengan un período de validez prolongado y que conserven su utilidad farmacéutica, y especialmente si están criodesecadas, lo que requiere un control cuidadoso de la dosificación y la estabilidad con respecto a su uso durante la administración. Estos requisitos son necesarios para compuestos administrados por vía intravenosa, ya que el paciente queda expuesto al fármaco instantáneamente.
La técnica anterior presenta formulaciones farmacéuticas que comprenden interferón beta, tal como en las publicaciones de patente EP 02720799, WO2012/071366 y WO02/080976. La formulación presentada en la publicación de patente EP 02720799 comprende dextrosa sola o una combinación de dextrosa y manitol como agente estabilizante de la formulación. La publicación de patente WO2012/071366 desvela una composición farmacéutica acuosa que comprende interferón beta, en donde se usa una combinación de fenol y sacarosa para estabilizar la composición de interferón beta. La publicación de patente WO02/080976 desvela interferón beta-1b en una solución que comprende un tampón para mantener el pH en el intervalo de 3,0-5,0 y un agente de tonicidad no iónico para hacer que la composición sea isotónica.
Sumario de la invención
El objeto de la invención es proporcionar una formulación farmacéutica estable en una forma liofilizada que comprende interferón beta-1a.
Especialmente, un objeto de la presente invención es proporcionar una formulación farmacéutica en forma liofilizada que comprende interferón beta-1a, que permita una buena recuperación del interferón beta-1a tras su reconstitución.
Además, un objeto de la presente invención es proporcionar una formulación farmacéutica para la prevención y el tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales en seres humanos mediante administración intravenosa. Especialmente, el objeto de la presente invención es proporcionar una formulación farmacéutica para uso como tratamiento para prevenir la fuga vascular en pacientes que tienen síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), pero no se limita a esta afección.
Para conseguir, entre otros, los objetos presentados anteriormente, la invención se caracteriza por lo que se presenta en las reivindicaciones independientes adjuntas.
Una formulación farmacéutica representativa de acuerdo con la invención se caracteriza en la reivindicación 1.
De acuerdo con la invención, el interferón beta-1a puede formularse como un liofilizado, que puede reconstituirse para dar una solución acuosa con cantidades farmacológicamente eficaces y correctas de interferón beta-1a para
administración a un paciente. Por tanto, la invención también proporciona una composición farmacéutica acuosa obtenida por reconstitución de una formulación liofilizada.
Las composiciones acuosas de la invención con cantidades farmacológicamente eficaces de interferón beta-1a son particularmente adecuadas para administración intravenosa.
Además, la invención se refiere a un dispositivo de administración que incluye la composición farmacéutica acuosa de la invención.
Además, la invención se refiere a una jeringa prellenada que incluye la composición farmacéutica acuosa de la invención.
Además, la invención se refiere a una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención para uso en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales en seres humanos.
Más específicamente, la invención se refiere a una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención para uso en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales en seres humanos con administración intravenosa, en donde el interferón beta-1a se administra al paciente a 2,0 15 |jg/dosis.
Además, la invención se refiere a una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención para uso en la prevención de fuga vascular en síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) y otras afecciones traumáticas.
Además, la invención se refiere a una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención para uso en la prevención y/o tratamiento de lesión de isquemia-reperfusión en cirugía vascular o cardíaca y trasplante de órganos, o para uso en preacondicionamiento antes de cirugía vascular o cardíaca mayor y trasplante de órganos.
Además, la invención se refiere a una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención para uso en la prevención y/o tratamiento de pancreatitis aguda y lesión renal aguda.
Una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención también es adecuada para uso en infecciones virales graves que amenazan la vida tales como EBOLA, SROM, gripe tal como gripe aviar y otras afecciones similares que conducen a un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) y disfunción de órganos centrales.
Además, la invención se refiere a una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención para uso en la prevención y/o tratamiento de FMO. Además, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención es adecuada para uso en neumonía bacteriana severa y sepsis que conducen a un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) y fallo multiorgánico (FMO).
Breve descripción de los dibujos
Figuras 1-4 muestran SDS-PAGE no reductora de liofilizados de INF-beta 1a reconstituidos. Véase el estudio de formulación A de la parte experimental,
Figura 5 muestra la cuantificación de INF-beta 1a tras la reconstitución de los liofilizados. Véase el estudio de formulación A de la parte experimental,
Figura 6 muestra el desarrollo del área de pico relativa de picos hidrófilos que representan el aumento de especies de INF-beta 1a oxidadas durante el almacenamiento a 40 °C durante el estudio de estabilidad del estudio de formulación A.
Figura 7 muestra el desarrollo del área de pico relativa de picos hidrófobos que representan el aumento de especies de INF-beta 1a que indican un cambio en el plegamiento proteico durante el almacenamiento a 40 °C. Véase el estudio de formulación A de la parte experimental.
Figura 8 muestra SDS-PAGE no reductora de liofilizados reconstituidos de formulaciones tras almacenamiento a 40 °C durante 12 semanas. Véase el estudio de formulación A.
Figura 9 muestra SDS-PAGE reductora de liofilizados reconstituidos de formulaciones tras almacenamiento a 40 °C durante 12 semanas. Véase el estudio de formulación A.
Figura 10 muestra la pérdida de INF-beta 1a debido a adsorción sobre superficies de diferentes materiales. Véase la última parte del estudio de formulación A.
Figura 11 muestra la recuperación de INF-beta 1a durante la transferencia de muestras de un vial a otro. Véase el estudio de formulación B.
Figura 12 muestra la recuperación de INF-beta 1a tras el contacto repetido con el tapón. Véase el estudio de formulación B.
Figura 13 muestra la adquisición de datos digitales del ensayo de lio. de acuerdo con el estudio de criodesecación. Figura 14 muestra una sección transversal vertical de liofilizado. Véase el estudio de criodesecación.
Figura 15 muestra una imagen de luz transmitida desde el lado del borde del liofilizado. Véase el estudio de criodesecación.
Figuras 16-20 muestran la recopilación de los resultados del estudio de estabilidad.
Figura 21 muestra el gráfico de concentración de MxA del estudio de bioeficacia.
Descripción detallada de la invención
Términos y definiciones
En la presente solicitud, las expresiones "interferón beta-1a", "INF-beta 1a" e "INF-p1a" son intercambiables y se usan como sinónimos.
La expresión "cantidad farmacológicamente eficaz" pretende incluir cualquier cantidad de interferón beta-1a que sea suficiente para provocar un estado terapéutico deseado.
Se entenderá que los términos "tratamiento" o "tratar" incluyen curación completa de una enfermedad así como mejora o alivio de dicha enfermedad.
Se entenderá que el término "prevención" incluye prevención completa, profilaxis, así como reducción del riesgo del individuo de enfermar con dicha enfermedad o trastorno.
El término "paciente" o "individuo" se refiere a un ser humano.
El término "liofilizar", con respecto a formulaciones farmacéuticas de la invención, pretende referirse al criodesecado de una solución acuosa de la formulación. El término "liofilizado" se refiere al producto de liofilización. El término "reconstitución" se refiere a la disolución del liofilizado para conseguir una solución acuosa.
El término administración "intravenosa" o 'IV' se refiere a administración en los vasos sanguíneos o linfáticos.
Realizaciones de la invención
La presente invención se refiere a una formulación farmacéutica de interferón beta-1a con mayor estabilidad y una recuperación sustancialmente completa de interferón beta-1a tras su reconstitución. Una formulación farmacéutica en forma liofilizada de acuerdo con la invención comprende al menos una cantidad farmacológicamente eficaz de interferón beta-1a como ingrediente activo, disacárido o disacáridos como agente de volumen, y un tensioactivo no iónico.
Se ha observado que la combinación de disacáridos como agente de volumen y tensioactivo no iónico, tal como polisorbato o polietilenglicol (PEG), es necesaria para la recuperación sustancialmente completa del interferón betala tras el criodesecado y la reconstitución y para estabilizar el interferón beta-1a frente a la degradación en estado criodesecado durante el almacenamiento. La formulación liofilizada de acuerdo con la invención es estable a una temperatura de 2-8 °C durante al menos 24 meses, preferentemente al menos 30 meses e incluso más preferentemente un período de 36 meses. También se ha observado que el interferón beta-1a de la formulación liofilizada conserva su actividad incluso almacenado a temperatura ambiente (25-30 °C ± 2 °C). Por consiguiente, la formulación liofilizada de acuerdo con la invención tiene una estabilidad durante el almacenamiento a temperatura ambiente de al menos seis meses, preferentemente al menos 12 meses y más preferentemente incluso un período de 24 meses.
Se usan tensioactivos no iónicos, tales como polisorbato o polietilenglicol (PEG), para prevenir la adsorción superficial y como estabilizantes frente a la agregación proteica. El tensioactivo es especialmente necesario para prevenir la pérdida de INF-beta 1a durante la criodesecación y la reconstitución. Puede obtenerse una recuperación sustancialmente completa de INF-beta 1a tras la criodesecación y la reconstitución usando polisorbato o PEG como tensioactivo. Tras la reconstitución del liofilizado, la recuperación del contenido de interferón beta-1a puede ser superior al 85 %, preferentemente superior al 90 % e incluso más preferentemente del 95 %. La recuperación sustancialmente completa tras la reconstitución es importante ya que una sola dosis intravenosa de interferón beta-1a administrada en el paciente es escasa y, por tanto, es decisivo garantizar que el paciente reciba la dosificación correcta.
De acuerdo con una realización de la invención, un tensioactivo no iónico puede ser polisorbato o PEG. De acuerdo con una realización preferente de la invención, el tensioactivo es polisorbato. El polisorbato puede ser polisorbato 20, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 80 o cualquier otro polisorbato. En una realización preferente de la invención, el polisorbato puede ser polisorbato 20, también denominado Tween 20. De acuerdo con una realización de la invención, la formulación liofilizada comprende 0,9-2 % en peso, preferentemente 1-1,5 % en peso, y más preferentemente 1,1-1,3 % en peso de un tensioactivo, tal como polisorbato o PEG/vial, basado en el peso total de la formulación liofilizada.
En la presente solicitud, las cantidades de los componentes de la formulación se presentan por vial; un solo vial incluye una sola dosis de la formulación farmacéutica de la invención en forma liofilizada.
En la invención, los disacáridos se seleccionan entre trehalosa y una combinación de trehalosa y sacarosa. Se ha observado que la trehalosa dihidratada es el agente de volumen más adecuado para proporcionar volumen a la formulación y para la estabilización de INF-beta 1a frente a la degradación en el estado criodesecado durante el almacenamiento. De acuerdo con una realización preferente, se usa trehalosa dihidratada como agente de volumen. De acuerdo con una realización de la invención, la formulación liofilizada comprende 50-80 % en peso, preferentemente 60-75 % en peso, y más preferentemente 63-67 % en peso de disacáridos/vial, basado en el peso total de la formulación liofilizada.
De acuerdo con una realización preferente de la invención, la formulación liofilizada comprende una cantidad farmacológicamente eficaz de interferón beta-1a como ingrediente activo, disacáridos como agente de volumen, un tensioactivo no iónico, un agente de tamponamiento para mantener un pH de aproximadamente 5,5 a 7,5 tras la reconstitución del liofilizado y, preferentemente, un antioxidante.
De acuerdo con una realización de la invención, la formulación liofilizada comprende además un agente de tamponamiento adecuado para mantener un pH de 6,0 a 7,5, preferentemente de aproximadamente 6,0 a 7,0 y más preferentemente de aproximadamente 6,3 a 6,7 tras la reconstitución del liofilizado. Un agente de tamponamiento de la formulación de acuerdo con la invención puede seleccionarse entre un grupo que comprende fosfato disódico dihidratado, dihidrogenofosfato sódico dihidratado, citrato trisódico dihidratado o combinación de los mismos. Los agentes de tamponamiento en la formulación pueden seleccionarse basándose en el pH objetivo, y puede variarse la combinación y la proporción de los agentes individuales.
De acuerdo con una realización de la invención, la formulación liofilizada comprende además un antioxidante. De acuerdo con una realización preferente de la invención, la formulación liofilizada comprende metionina como antioxidante para proteger la formulación frente a la oxidación. La metionina puede ser DL-metionina o L-metionina. De acuerdo con una realización de la invención, la metionina ya puede estar incluida en la sustancia farmacológica de interferón beta-1a.
De acuerdo con una realización de la invención, una formulación farmacéutica en forma liofilizada comprende
- al menos una cantidad farmacológicamente eficaz de interferón beta-1a como ingrediente activo,
- 0,5 a 1,0 mg/vial, preferentemente 0,6 a 0,8 mg/vial de un tensioactivo no iónico, tal como polisorbato o PEG, - 30 a 50 mg/vial, preferentemente 35 a 40 mg/vial de trehalosa dihidratada,
- 15 a 28 mg/vial, preferentemente 18 a 22 mg/vial de una combinación de los agentes de tamponamiento, y - 0,1 a 0,3 mg/vial, preferentemente 0,17 a 0,23 mg/vial de antioxidante.
La formulación de acuerdo con la invención comprende una cantidad farmacológicamente eficaz de interferón beta-1a. El interferón beta-1a es preferentemente interferón beta-1a humano recombinante. Por IFN-beta-1a producido de forma recombinante se entiende IFN-beta 1a que tiene una actividad biológica comparable con la del IFN-beta 1a nativo maduro y que se ha preparado mediante técnicas de ADN recombinante. De acuerdo con una realización de la invención, la sustancia farmacológica de interferón beta-1a puede contener agregados insolubles y la sustancia farmacológica se purifica para retirar estos agregados insolubles existentes antes de componer la formulación. De acuerdo con una realización preferente de la invención, un 95-100 % del IFN-beta 1a estará en una forma monomérica para proporcionar la actividad biológica del interferón beta-1a y una buena solubilidad durante la reconstitución. La actividad biológica (potencia) del interferón beta-1a debería ser superior a 150 MUI/mg (MUI = millones de unidades internacionales). De acuerdo con la invención, la formulación de acuerdo con la invención comprende interferón-beta 1a que tiene una actividad biológica de al menos 150 MUI/mg como ingrediente activo en una cantidad de 2,0-15 |jg en forma de dosificación intravenosa individual.
En las formulaciones incluidas en la invención, la cantidad de interferón beta-1a en forma de dosificación intravenosa individual varía preferentemente entre aproximadamente 2,0 jg y 15 jg . Puede administrarse al paciente una cantidad de interferón beta-1a superior a 15 jg en una forma de dosificación intravenosa individual, tal como 15-20 jg o incluso hasta 25 jg , pero se ha observado un aumento notable de los efectos secundarios. Una cantidad de interferón beta-1a inferior a 2,0 jg en una forma de dosificación intravenosa individual no es suficiente para proporcionar efectos observables. De acuerdo con una realización de la invención, la cantidad de interferón beta-1a en una forma de dosificación intravenosa individual es aproximadamente 10 jg . Por tanto, la actividad biológica del interferón beta-1a puede estar generalmente en el intervalo de 1,5-3,4 MUI/10 jg de forma de dosificación.
El contenido de humedad residual de la formulación liofilizada de acuerdo con la invención puede ser no superior al 5 % en peso para promover la estabilidad durante el almacenamiento de la formulación liofilizada. De acuerdo con una realización, el contenido de humedad residual está en el intervalo de aproximadamente 1-5 % y preferentemente aproximadamente 1-4 % en peso. Para conseguir el límite requerido para el contenido de agua residual libre sin desnaturalización de la proteína, hay que optimizar el ciclo de liofilización. De acuerdo con una realización de la invención, se ha observado que un ciclo de criodesecación de aproximadamente 30-35 horas, preferentemente
aproximadamente 31 horas es óptimo para la formulación de la invención, como se presenta en la parte experimental.
De acuerdo con una realización de la invención, la formulación liofilizada comprende
- interferón beta-1a como ingrediente activo,
- trehalosa dihidratada como agente de volumen,
- fosfato disódico dihidratado, dihidrogenofosfato sódico dihidratado, citrato trisódico dihidratado y cualquier combinación de los mismos como agente de tamponamiento,
- polisorbato o polietilenglicol como tensioactivo, y
- metionina como antioxidante.
Más específicamente, la formulación liofilizada de acuerdo con una realización preferente comprende
- interferón beta-1a humano recombinante, como ingrediente activo,
- trehalosa dihidratada como agente de volumen,
- una combinación de fosfato disódico dihidratado, dihidrogenofosfato sódico dihidratado y citrato trisódico dihidratado como agente de tamponamiento,
- polisorbato 20 como tensioactivo, y
- metionina como antioxidante.
Generalmente, la formulación liofilizada de acuerdo con la invención se prepara a partir de una solución acuosa que tiene un pH de 6,0-7,5 y que comprende una cantidad farmacológicamente eficaz de interferón beta-1a como ingrediente activo, disacáridos como agente de volumen, y un tensioactivo no iónico. En una realización preferente de la invención, la formulación liofilizada de acuerdo con la invención se prepara a partir de una solución acuosa que tiene un a pH de 6,0-7,5, preferentemente de 6,0 a 7,0, y que comprende
- una cantidad farmacológicamente eficaz de interferón beta-1a humano recombinante, como ingrediente activo, - trehalosa dihidratada como agente de volumen,
- polisorbato o PEG como tensioactivo,
- fosfato disódico dihidratado, dihidrogenofosfato sódico dihidratado, citrato trisódico dihidratado y cualquier combinación de los mismos como agente de tamponamiento, y
- metionina como antioxidante.
De acuerdo con una realización de la invención, la formulación liofilizada de acuerdo con la invención se prepara a partir de una solución acuosa que comprende 0,05-0,15 % (p/v) de polisorbato o PEG, preferentemente polisorbato, y 2-6 % (p/v) de trehalosa dihidratada o sacarosa. De acuerdo con una realización preferente de la invención, la formulación liofilizada se prepara a partir de una solución acuosa que comprende aproximadamente un 0,1 % (p/v) de polisorbato o PEG, preferentemente polisorbato, y aproximadamente un 5 % (p/v) de trehalosa dihidratada.
Un método para preparar un liofilizado de acuerdo con la invención comprende las etapas de preparar una solución acuosa que comprende al menos interferón beta-1a como ingrediente activo, disacárido como agente de volumen y un tensioactivo no iónico tal como polisorbato o PEG, y liofilizar la solución acuosa. Los liofilizadores, que realizan la liofilización descrita anteriormente, están disponibles en el mercado y son fácilmente operables por los expertos en la materia. El proceso de liofilización comprende generalmente tres etapas: congelación, secado primario y secado secundario, como se describe más detalladamente en la parte experimental. Generalmente, una solución acuosa se liofiliza en viales, en donde cada vial contiene una dosis unitaria de la formulación de interferón beta-1a de la presente invención. Por consiguiente, un liofilizado dentro de un vial es una forma de dosificación individual de acuerdo con la invención. La presente formulación de acuerdo con la invención proporciona la formación del agregado soluble durante la criodesecación.
Los recipientes, tales como viales, que contienen una formulación liofilizada, son preferentemente de material esterilizable e inerte. Los materiales adecuados son, por ejemplo, polipropileno, copolímeros de olefinas cíclicas, vidrio estándar de tipo I y vidrio siliconado de tipo I. Preferentemente, se usan viales de vidrio siliconado de tipo I como material de envasado para evitar la pérdida inicial de interferón beta-1a. La absorción de INF-beta 1a puede prevenirse mediante la siliconación de una superficie interior de la superficie de vidrio. De acuerdo con una realización preferente de la invención, una superficie interior del recipiente, tal como el vial, está siliconada para evitar la pérdida inicial de INF-beta 1a tras la criodesecación. El uso de polisorbato como tensioactivo también puede proteger la proteína frente a la adsorción en superficies de vidrio siliconadas. Antes de administrar un liofilizado a un paciente, debería reconstituirse con un reconstituyente acuoso. Esta etapa permite que el interferón beta-1a y otros componentes del liofilizado se redisuelvan para dar una composición farmacéutica acuosa que es adecuada para inyección intravenosa a un paciente. Generalmente, para reconstituir los liofilizados se usa agua para inyección. Generalmente, el volumen de la composición acuosa reconstituida está entre 0,9 y 1,1 ml, preferentemente 1 ml.
El interferón beta-1a está presente en una concentración de 2 pg/ml a 15 pg/ml en la composición acuosa reconstituida. La composición acuosa reconstituida, de acuerdo con una realización de la invención, comprende además
- 0,5-1,0 mg/ml, preferentemente 0,6-0,8 mg/ml de polisorbato o PEG como tensioactivo,
- 30-50 mg/ml, preferentemente 35-40 mg/ml de trehalosa como agente de volumen,
- 15 a 28 mg/ml, preferentemente 18 a 22 mg/ml de una combinación de agentes de tamponamiento, combinación que comprende fosfato disódico dihidratado, dihidrogenofosfato sódico dihidratado y citrato trisódico dihidratado, y - 0,1-0,3 mg/ml, preferentemente 0,17 a 0,23 mg/ml de metionina como antioxidante,
y el pH de dicha composición acuosa está entre 6,0 y 7,5, preferentemente entre 6,0 y 7,0.
Cuando la formulación de interferón beta-1a se usa para administración a un ser humano, la isotonicidad de la solución acuosa también es una consideración. Por tanto, en una realización de la invención, la solución acuosa para administración intravenosa proporcionará una isotonicidad igual, o similar, a la del suero o fluidos corporales del paciente. La osmolalidad de la composición acuosa reconstituida puede estar en el intervalo de 250 a 350 mOsmol/kg.
Una composición farmacéutica acuosa de la invención puede administrarse a un paciente. De acuerdo con una realización preferente de la invención, la composición farmacéutica acuosa es adecuada para administración intravenosa. La administración será generalmente mediante una jeringa. Por tanto, la invención también proporciona un dispositivo de administración y jeringa prellenada que incluye una composición farmacéutica acuosa de la invención. De acuerdo con una realización preferente de la invención, una superficie interior del dispositivo de administración o la jeringa prellenada está siliconada para prevenir la absorción de INF-beta 1a en la superficie del dispositivo de administración o jeringa prellenada y, por tanto, la invención proporciona una dosificación precisa de interferón beta-1a cuando se administra por vía intravenosa a un paciente. Los materiales adecuados son los mismos que los mencionados previamente como material de los viales. Generalmente, los liofilizados se reconstituyeron usando una jeringa de 1 ml. Una dosificación precisa del interferón beta-1a en el paciente puede conseguirse usando la combinación de la formulación de acuerdo con la invención y el dispositivo de administración o jeringa siliconados. La pérdida observada de interferón beta-1a durante la reconstitución y administración al paciente es solo de aproximadamente 1 pg/dosis, preferentemente inferior a 1 pg/dosis. Por consiguiente, la invención proporciona un método para administrar interferón beta-1 a al paciente de modo que la pérdida de interferón beta-1a sea como máximo de 1 pg/dosis.
Los pacientes recibirán una cantidad eficaz de interferón beta-1a como ingrediente activo principal, es decir, una cantidad suficiente para tratar, mejorar o prevenir la enfermedad o trastorno en cuestión. La cantidad y concentración eficaces óptimas de interferón beta-1a para cualquier sujeto particular dependerá de diversos factores, que incluyen la edad, tamaño, salud y/o sexo del paciente, la naturaleza y alcance de la afección, y también de cualquier terapia posible adicional administrada en combinación con el interferón beta-1a. La cantidad eficaz administrada para una situación dada puede determinarse según el criterio de un profesional médico. Para los fines de la presente invención, el interferón beta-1a puede administrarse al paciente en dosis de 2-15 pg/dosis para uso en la prevención y/o tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales con administración intravenosa. De acuerdo con una realización de la invención, el interferón beta-1a puede administrarse al paciente, por ejemplo, a 7,5-12,5 pg/dosis para uso en la prevención y/o tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales en pacientes adultos con administración intravenosa. De acuerdo con otra realización de la invención, el interferón beta-1a puede administrarse a 2,0 12,5 pg/dosis para uso en la prevención y/o tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales en pacientes con administración intravenosa, por ejemplo, si un paciente es un niño. Por consiguiente, la invención también se refiere a un método para administrar una cantidad farmacológicamente eficaz de interferón beta-1a a un paciente que comprende una etapa de administrar al paciente una composición farmacéutica acuosa de la invención. La invención también se refiere al uso de un dispositivo de administración o jeringa prellenada para la administración de interferón beta a un paciente a una dosis precisa.
La formulación de la invención puede usarse para tratar una variedad de enfermedades vasculares-endoteliales en seres humanos. CD73, una ectoenzima endotelial, que puede producir adenosina local, es una molécula clave para mantener la barrera endotelial y la función pulmonar. El interferón-beta aumenta la expresión de CD73, dando como resultado un aumento de la adenosina local. Se sabe que muchas afecciones inflamatorias dan como resultado la pérdida de CD73 de las superficies de células endoteliales inflamadas/lesionadas, reduciendo de ese modo el contenido de adenosina disponible. En la bibliografía se conocen bien las propiedades antiinflamatorias de la adenosina y cualquier afección que se sepa que resulta de la pérdida del efecto local de la adenosina se beneficiará de la regulación por incremento de la expresión de CD73. Si se necesita ayuda permanente, la regulación por incremento de CD73 debería basarse en síntesis de novo.
Por consiguiente, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención es adecuada para uso en la prevención y/o tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales en seres humanos. Más específicamente, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención es adecuada para uso en la prevención y/o tratamiento de enfermedades vasculares-endoteliales en pacientes con administración intravenosa, en donde se administra interferón beta-1a al paciente a 2,0-15 pg/dosis. De acuerdo con una realización de la invención, se administra interferón beta-1a al paciente a 7,5-12,5 pg/dosis o a 2.0-12,5 pg/dosis.
De acuerdo con una realización de la invención, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa
de acuerdo con la invención es adecuada para uso en la prevención y/o tratamiento de fuga vascular en síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) y otras afecciones traumáticas.
De acuerdo con otra realización de la invención, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención es adecuada para uso en la prevención y/o tratamiento de lesión de isquemia-reperfusión en cirugía vascular o cardíaca y trasplante de órganos, o para uso en preacondicionamiento antes de cirugía vascular o cardíaca mayor y trasplante de órganos. Además, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención es adecuada para uso en la prevención y/o tratamiento de lesión de isquemia-reperfusión en infarto de miocardio y apoplejía.
De acuerdo con otra realización de la invención, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención es adecuada para uso en la prevención y/o tratamiento de pancreatitis aguda y lesión renal aguda, pero no se limita a estos ejemplos.
Una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención también es adecuada para uso en infecciones virales graves que amenazan la vida tales como EBOLA, SROM, gripe tal como gripe aviar y otras afecciones similares que conducen a un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) y disfunción de órganos centrales.
Además, una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa de acuerdo con la invención es adecuada para uso en neumonía bacteriana severa y sepsis que conducen a un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) y fallo multiorgánico (FMO). De acuerdo con una realización de la invención, en la prevención y/o tratamiento de FMO se usa una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa.
Un método para tratar a un paciente comprende al menos las siguientes etapas
- proporcionar una formulación liofilizada de acuerdo con la invención,
- reconstituir la formulación liofilizada, y
- administrar la composición acuosa reconstituida a un paciente.
En una de las realizaciones del método para tratar a un paciente, descrita en el presente documento, el paciente tiene una enfermedad vascular-endotelial o cualquier otra afección descrita en la presente solicitud. La administración de IFN-beta 1a debería comenzar en cuanto sea posible tras el diagnóstico de la enfermedad y debería continuar como mínimo seis días con una administración diaria de la dosis deseada. De acuerdo con una realización de la invención, se administra diariamente a un paciente al menos una dosis que comprende interferón beta-1a en una cantidad de 2,0-15 |jg, y la administración debería continuar al menos seis días.
PARTE EXPERIMENTAL
La invención se describe con más detalle en los siguientes experimentos. La parte experimental de la presente solicitud se divide en diferentes partes. La primera parte, "estudio de formulación A", se centra en comparar diferentes excipientes para la estabilización de INF-beta 1a. Los estudios de estabilidad se ocuparon de la composición de la solución de lio. para garantizar la estabilidad de INF-beta 1a durante 4 semanas a 40 °C en estado criodesecado. La segunda parte, "estudio de formulación B", se basa en los resultados del estudio de formulación A, y las formulaciones seleccionadas se incluyeron en un estudio adicional para determinar la proporción eficaz de los excipientes. La tercera parte, "estudio de criodesecación", se centra en un ciclo de lio. adecuado para las formulaciones de acuerdo con la presente invención. La cuarta parte, "estudio de estabilidad", investiga la compatibilidad de la formulación liofilizada de acuerdo con la invención con dispositivo y jeringa de API prellenada usados en la reconstitución y aplicación clínica. La quinta parte, "estudio de bioeficacia", determina la eficacia del producto liofilizado de interferón beta-1a.
1. ESTUDIO DE FORMULACIÓN A
Se analizaron las diferentes formulaciones con respecto a la recuperación de interferón beta-1a tras reconstitución y la formación de agregados solubles durante la criodesecación. Las formulaciones se formaron basándose en un estudio de viabilidad. Además, las muestras se almacenaron a 40 °C durante 12 semanas y el contenido de interferón beta-1a se analizó en puntos temporales fijos para identificar las formulaciones más estables durante el almacenamiento.
Formulación de la solución de liofilización de INF beta-1a
La sustancia farmacológica de INF beta-1a (proporcionada por Rentschler Biotechnologie GmbH) se purificó para retirar los agregados insolubles existentes mediante centrifugación (10 min, 4000 rpm) y filtración estéril (0,2 jm ) antes de iniciar la composición. La concentración de interferón beta-1a resultante se midió por espectroscopía UV (280 nm; espectrómetro UV Carry 50, Varian), y produjo 285 jg/m l tras tres procedimientos de purificación diferentes. El cálculo de la concentración de INF beta-1a se basó en el coeficiente de extinción (1,351 m l*jg '1*cm'1).
Los excipientes se añadieron al tampón citrato usado como formulación líquida de acuerdo con la concentración objetivo correspondiente. La Tabla 1 enumera diferentes formulaciones que se utilizaron. Los agentes de volumen se seleccionaron entre las clases químicas de disacáridos, aminoácidos y alditoles y dos de ellos (sacarosa y manitol) se combinaron adicionalmente. Todos los excipientes se combinaron adicionalmente con Tween 20. Estas soluciones de reserva se mezclaron con la sustancia farmacológica de INF beta-1a purificado en una proporción para lograr una concentración de INF-beta 1a de 30 |jg/ml.
Tabla 1. Diferentes formulaciones de solución de lio. de INF beta-1a. Los valores son % /v de la solución de lio.
Tras filtración estéril, se llenó 1 ml de la solución de lio. correspondiente en viales de tipo I de vidrio 10R.
Liofilización
Los viales llenados se cargaron en el criodesecador y se protegieron frente a la radiación térmica. El ciclo de criodesecación enumerado en la Tabla 2 se usó para la preparación de las muestras.
Tabla 2: Etapas del ciclo de criodesecación usado para preparar las muestras para el estudio de viabilidad y el estudio de estabilidad.
(continuación)
Reconstitución de liofilizados
Se añadió 1 ml de API (agua para inyección) a los liofilizados para reconstituirlos. T ras disolución completa, la solución se homogeneizó pipeteando tres veces arriba y abajo y se transfirió a un tubo de reacción. El contenido de interferón beta-1a se analizó tras reconstitución usando el método de RP-HPLC de acuerdo con procedimientos operativos del fabricante.
-
Todas las formulaciones sin Tween 20 produjeron solo una recuperación mínima del INF-beta 1a aplicado tras la reconstitución, solo un tercio de la cantidad objetivo. Las formulaciones que contenían Tween 20 mostraron una imagen completamente opuesta. La recuperación tras la reconstitución produjo la cantidad objetivo independientemente del excipiente usado. Por tanto, es evidente que se necesitan detergentes tales como Tween 20 o similares, que logran un aislamiento espacial de varias moléculas de INF-beta 1a, para evitar la pérdida de INF-beta 1a durante la criodesecación y reconstitución.
Paralelamente, se realizó un método de SDS-PAGE no reductora de acuerdo con procedimientos operativos del fabricante para los liofilizados reconstituidos. Para lograr condiciones no reductoras, el agente reductor se reemplazó por agua destilada. La carga por pocillo se mantuvo constante a 6 pg. No se realizó cuantificación. Las figuras 1 a 4 presentan los geles obtenidos. Los números blancos en las Figuras marcan las líneas mientras que los números negros indican el peso molecular.
Figura 1: Línea 1 9: marcador de PM; Línea 2 3: sacarosa al 5 %; Línea 4 5: trehalosa al 5 %; Línea 6 7: fosfato de arginina al 5 %; Línea 8: sustancia farmacológica; Línea 10: material de referencia.
Figura 2: Línea 1 2: glicina al 5 %; Línea 3 9: marcador de PM; Línea 4 5: manitol al 5 %; Línea 6 7: sacarosa al 2,5 % manitol al 2,5 %; Línea 8: sustancia farmacológica; Línea 10: material de referencia.
Figura 3: Línea 1 2: sacarosa al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 3 4: trehalosa al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 5 9: marcador de PM; Línea 6 7: fosfato de arginina al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 8: sustancia farmacológica; Línea 10: material de referencia.
Figura 4: Línea 1 6: marcador de PM; Línea 2 3: glicina al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 4 5: manitol al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 7 8: sacarosa al 2,5 % manitol al 2,5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 9: sustancia farmacológica; Línea 10: material de referencia.
El gel uno (véase la Figura 1) y el gel dos (Figura 2) se cargaron con las formulaciones que carecían de Tween 20. La intensidad de la banda de las muestras individuales difiere debido a la recuperación variable de INF-beta 1a (véase la Tabla 3). Las formulaciones en el gel uno (sacarosa, trehalosa y fosfato de arginina) presentan una banda débil, que
exhibe el peso molecular del INF-beta 1a dimérico, además de la banda principal del INF-beta 1a. Esta banda también apareció en la sustancia farmacológica (véase la línea 8 en la Figura 1). Por tanto, no se generaron agregados solubles adicionales en presencia de estos excipientes durante la criodesecación. Se observó una imagen similar en el gel dos. Las formulaciones con glicina y una mezcla de sacarosa y manitol exhiben solo bandas diméricas mínimas (véase la línea 1 2 y 6 7 en Figura 2). Sin embargo, eso podría atribuirse a la baja carga proteica en estas líneas debido a la escasa recuperación de INF-beta 1a. La formulación de manitol mostró una banda dimérica. Su intensidad es comparable con la de la sustancia farmacológica (véase la línea 4 5 en Figura 2). Por tanto, tampoco se generaron agregados solubles adicionales en presencia de estos excipientes durante la criodesecación.
El gel tres (véase la Figura 3) y el gel cuatro (véase la Figura 4) se cargaron con formulaciones que contenían Tween 20. La intensidad de banda de todas las muestras es constante debido a la recuperación completa de INF-beta 1a. Todas las formulaciones en el gel tres y el gel cuatro presentan bandas diméricas cuya intensidad es comparable con la banda dimérica de la sustancia farmacológica. Tampoco se generaron agregados solubles en estas formulaciones durante la criodesecación.
Estabilidad de liofilizados
Las formulaciones enumeradas en la Tabla 4 se prepararon basándose en los resultados del estudio de viabilidad de criodesecación anterior usando el mismo ciclo de criodesecación que anteriormente (descrito en Tabla 2).
Tabla 4: Diferentes formulaciones preparadas para el primer estudio de estabilidad. Los valores son % (p/v) de la solución de lio.
Sacarosa y trehalosa representan la clase de disacáridos, fosfato de arginina y glicina son aminoácidos de uso común y manitol es un excipiente de aplicación frecuente de la clase de alditoles. Las sustancias de estos grupos químicos pueden estabilizar proteínas dentro de la torta de lio. mediante enlaces de hidrógeno. Todas las formulaciones contenían Tween 20 o Tween 80. La concentración de metionina, que también está presente en la formulación líquida de INF-beta 1a, se mantuvo constante para mantener la protección frente a la oxidación.
Análisis RP-HPLC de INF-beta 1a durante el estudio de estabilidad a 40 °C
Durante el estudio de estabilidad se aplicaron los métodos de RP-HPLC y SDS-PAGE para el análisis de INF-beta 1a. El método de RP-HPLC permite la cuantificación de INF-beta 1a así como la determinación de productos de degradación incluyendo productos de oxidación, productos de agregación y cambios en el plegamiento proteico. Las muestras se analizaron tras la criodesecación y un período de almacenamiento de 2 semanas, 4 semanas, 8 semanas y 12 semanas a 40 °C.
La Figura 5 muestra la cuantificación de INF-beta 1a tras reconstitución de los liofilizados. La cuantificación se realizó basándose en el área de pico total incluyendo productos de degradación. Las líneas negras marcan el valor superior e inferior de la solución de lio. antes de la criodesecación representando el límite del 100 %.
El contenido de INF-beta 1a resoluble de la mayoría de las formulaciones varió en aproximadamente un 80 % de recuperación (pérdida de 6 |jg), directamente tras la criodesecación. La mejor recuperación se obtuvo con las formulaciones de sacarosa/Tween 20 y sacarosa/manitol/Tween 80 (aproximadamente un 90 % de recuperación). El grupo de formulaciones que incluye trehalosa/Tween 20, fosfato de arginina/Tween 20, glicina/Tween 20 y manitol/Tween 20 junto con la formulación de sacarosa/manitol/Tween 20 produjo la segunda mejor recuperación con un valor de aproximadamente un 80 %. La peor recuperación (inferior al 70 %) se obtuvo con las formulaciones de fosfato de arginina /Tween 80 y sacarosa/fosfato de arginina/Tween 20.
Tras almacenamiento a 40 °C durante 1 semana, la recuperación de las formulaciones individuales comenzó a diferir significativamente. La recuperación de la formulación de sacarosa/Tween 20 se mantuvo constante en un 90 %. Trehalosa/Tween 20 y glicina/Tween 20 también mostraron valores de recuperación comparables con su punto de partida. La recuperación las demás formulaciones disminuyó más o menos. La mayor pérdida se observó para la
formulación de fosfato de arginina/Tween 20 (aproximadamente un 50 %) y fosfato de arginina/Tween 80 (inferior al 40 %). Las demás formulaciones variaron en una recuperación de aproximadamente un 65 %.
La situación permaneció casi constante después de 2 semanas de almacenamiento. Nuevamente, las formulaciones de sacarosa/Tween 20 y trehalosa/Tween 20 mostraron una recuperación constante, solo que ahora la recuperación de la formulación de glicina/Tween 20 comenzó a disminuir (aproximadamente un 5 % en comparación con el punto temporal previo). La recuperación de las demás formulaciones disminuyó en aproximadamente un 10 %.
Tras almacenamiento a 40 °C durante 12 semanas, las formulaciones de sacarosa/Tween 20 y trehalosa/Tween 20 mostraron claramente la mejor recuperación a un valor todavía constante. Por tanto, en estas formulaciones no se observó pérdida de agente activo durante el almacenamiento durante un período de tiempo de 12 semanas a 40 °C. Las demás formulaciones exhibieron una disminución mayor o menor de INF-beta 1a recuperado.
La Figura 6 muestra el desarrollo del área de pico relativa de picos hidrófilos que representa el aumento de especies de INF-beta 1a oxidadas durante el almacenamiento a 40 °C. Las líneas negras marcan el límite superior e inferior del área de pico relativa de picos hidrófilos del cromatograma del material de referencia.
Al nivel del material de referencia, el área de pico relativa del INF-beta 1a oxidado permaneció constante en todas las formulaciones directamente tras la criodesecación. Por tanto, la etapa de preparación de criodesecación no indujo oxidación de INF-beta 1a.
Durante el almacenamiento, el área de pico relativa de estos productos de degradación aumenta más o menos dependiendo del excipiente presente. Tras almacenamiento a 40 °C durante 2 semanas, las formulaciones de fosfato de arginina/Tween 20, sacarosa/manitol/Tween 20, fosfato de arginina/Tween 80 y sacarosa/fosfato de arginina/Tween 20 mostraron un claro aumento del área de pico relativa (aproximadamente un 8 %). El área de pico hidrófilo relativa de las otras formulaciones permaneció constante. Tras un período de almacenamiento de 2 semanas, no se observó aumento adicional del área de pico relativa de especies oxidadas en ninguna de las formulaciones excepto para la formulación de sacarosa/manitol/Tween 80, que mostró un aumento constante del área de pico relativa de los productos de degradación hidrófilos hasta 8 semanas de almacenamiento a 40 °C. Esta imagen prevaleció hasta que se alcanzó el punto temporal de 12 semanas. Por tanto, puede suponerse que las formulaciones con sacarosa/Tween 20, trehalosa/Tween 20, glicina/Tween 20 y manitol/Tween 20 pueden proteger al INF-beta 1a frente a la oxidación hasta un período de almacenamiento de 12 semanas a 40 °C. Además, el principal efecto estabilizador frente a la oxidación se atribuye a la metionina presente. Pero dado que todas las formulaciones contenían la misma cantidad de metionina, parece que algunos excipientes aumentan el efecto estabilizador de la metionina.
La Figura 7 muestra el desarrollo del área de pico relativa de picos hidrófobos que representa el aumento de especies de INF-beta 1 a que indica un cambio en el plegamiento proteico durante el almacenamiento a 40 °C. Las líneas negras marcan el límite superior e inferior del área de pico relativa de picos hidrófobos del cromatograma del material de referencia.
Solo se observaron productos de degradación hidrófobos durante el estudio de estabilidad, que pueden atribuirse a especies de INF-beta 1a con un estado de plegamiento alterado. No se observó formación de agregados solubles en ninguna de las muestras. Por tanto, no es la agregación de INF-beta 1a la que representa el problema. Ninguna de las formulaciones mostró aumento de productos de degradación hidrófobos directamente tras la liofilización. Por tanto, la criodesecación sola no causó un cambio en el plegamiento de INF-beta 1a. Las dos formulaciones con sacarosa/Tween 20 y trehalosa/Tween 20 exhibieron el mejor efecto estabilizador frente a tales productos de degradación durante el almacenamiento. Las demás formulaciones mostraron un aumento mayor o menor de estos productos de degradación a lo largo del estudio de estabilidad de 12 semanas. Se observó un aumento considerable de productos de degradación hidrófobos en las formulaciones sacarosa/manitol/Tween 20 y sacarosa/manitol/Tween 80.
Los análisis de RP-HPLC revelaron que sacarosa y trehalosa son los excipientes más adecuados para la estabilización de INF-beta 1a en estado criodesecado.
Análisis de SDS-PAGE de INF-beta 1a durante el estudio de estabilidad a 40 °C
Los geles se obtuvieron con SDS-PAGE en cada punto temporal del estudio de estabilidad. Las condiciones no reducidas se mantuvieron en todos los puntos temporales, mientras que las condiciones reducidas solo se aplicaron en los puntos temporales de 8 semanas y 12 semanas. Tras 8 semanas, las formulaciones con fosfato de arginina/Tween 20 y fosfato de arginina/Tween 80 no se analizaron porque la recuperación de estas formulaciones no era satisfactoria según lo indicado por las mediciones de RP-HPLC.
No se produjeron cambios en el patrón de bandas en ninguna de las muestras en comparación con la sustancia farmacológica de INF-beta 1a o el material de referencia ni directamente después tras liofilización ni en las primeras 4 semanas de almacenamiento. Algunas muestras mostraron una banda dimérica más débil en un gel que en el gel siguiente, pero no se observó tendencia a aumentar la intensidad de la banda dimérica con la duración del
almacenamiento en curso. Tras almacenamiento a 40 °C durante 8 semanas, las formulaciones de manitol/Tween 20, sacarosa/manitol/Tween 20, sacarosa/fosfato de arginina/Tween 20 y sacarosa/manitol/Tween 80 mostraron un aumento en la banda dimérica en condiciones no reductoras. Las demás formulaciones no mostraron cambios en sus patrones de bandas. Tras almacenamiento durante 12 semanas a 40 °C, no se observaron cambios adicionales en el patrón de picos en ninguna de las formulaciones cuando se compararon con los patrones de picos tras almacenamiento a 40 °C durante 8 semanas.
La Figura 8 muestra SDS-PAGE no reductora de liofilizados reconstituidos de las formulaciones 1, 2, 4, 5, 7, 8 y 9 de la Tabla 4 tras almacenamiento a 40 °C durante 12 semanas. Los números blancos marcan las líneas mientras que los números negros indican el peso molecular. Línea 1 9: marcador de PM; Línea 2: sacarosa al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 3: trehalosa al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 4: Línea 5: glicina al 5 %+ Tween 20 al 0,1 %; Línea 5: manitol al 5 % Tween 20 al 1 %; Línea 6: sacarosa al 2,5 % manitol al 2,5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 7: sacarosa al 1 % fosfato de arginina al 4 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 8: sacarosa al 2,5 % manitol al 2.5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 10: sustancia farmacológica.
La Figura 9 muestra SDS-PAGE reductora de liofilizados reconstituidos de las formulaciones 1, 2, 4, 5, 7, 8 y 10 de la Tabla 4 tras almacenamiento a 40 °C durante 12 semanas. Los números blancos marcan las líneas mientras que los números negros indican el peso molecular. Línea 1 10: marcador de PM; Línea 2: sacarosa al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 3: trehalosa al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 4: Línea 5: glicina al 5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 5: manitol al 5 % Tween 20 al 1 %; Línea 6: sacarosa al 2,5 % manitol al 2,5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 7: sacarosa al 1 % fosfato de arginina al 4 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 8: sacarosa al 2,5 % manitol al 2.5 % Tween 20 al 0,1 %; Línea 9: sustancia farmacológica.
Todos los resultados de SDS-PAGE mostraron que los patrones de picos más estables de INF-beta 1a se obtuvieron con la formulación de trehalosa/Tween 20 y sacarosa/Tween 20.
Absorción sobre superficies de vidrio
El experimento tenía como objeto investigar la cantidad de adsorción de INF-beta 1a en su estado líquido sobre superficies de diferentes materiales. La elección de los materiales de los viales usados como material de envasado primario para productos criodesecados es limitada porque el material debe ser esterilizable e inerte. Basándose en estos requisitos previos, los siguientes materiales son adecuados: polipropileno (PP), copolímeros de olefina cíclica (COC), vidrio estándar de tipo 1 y vidrio siliconado de tipo 1. En algunos casos, el tratamiento térmico del vidrio de tipo 1 también muestra una influencia en el comportamiento de adsorción proteica sobre la superficie. Por tanto, en el siguiente experimento se usaron viales de vidrio sin tratar y viales de vidrio esterilizados térmicamente. La cantidad de adsorción se midió solo en presencia de Tween. Los resultados se ilustran en la Figura 10.
La recuperación de las muestras llenadas en viales de COC, viales de PP así como viales de vidrio siliconado de tipo 1 se mantuvo constante hasta el cuarto cambio de envase. Las muestras llenas en viales de vidrio de tipo 1 sin tratar y esterilizados térmicamente exhibieron una disminución de la recuperación de aproximadamente un 10 % (véase la Figura 10). Este experimento demuestra claramente que la adsorción de INF-beta 1a podría eliminarse con superficies más hidrófobas en presencia de Tween. Por tanto, se recomienda usar viales de vidrio siliconado de tipo 1 como material de envasado primario.
2. ESTUDIO DE FORMULACIÓN B
Este estudio de formulación se basa en los resultados del estudio de formulación A y las formulaciones seleccionadas se incluyeron en un estudio adicional para determinar la proporción eficaz de los excipientes.
Composición de la solución de lio. de INF-beta 1a
La sustancia farmacológica de INF-beta 1a (proporcionada por Rentschler Biotechnologie GmbH) se purificó mediante centrifugación (10 min, 4000 rpm) y filtración estéril (0,2 |jm) para retirar los agregados insolubles existentes antes de iniciar la composición. La concentración de INF-beta 1a resultante se midió por espectroscopía UV (280 nm; espectrómetro UV Carry 50, Varian). El cálculo de la concentración de INF-beta 1a se basó en el coeficiente de extinción (1,351 m l*jg '1*cm'1).
Los excipientes, así como los componentes tampón se disolvieron en API (agua para inyección) en la proporción correspondiente. En la Tabla 5 se enumeran diferentes formulaciones del estudio B. El contenido exacto de un vial de cada formulación se enumera en la Tabla 6. Se añadió sustancia farmacológica de INF-beta 1a purificado para lograr una concentración de INF-beta 1a de aproximadamente 24 jg/m l en la solución de lio. final. Finalmente, las diferentes soluciones de lio. se llenaron con API hasta el peso objetivo, que se calculó basándose en la densidad de las soluciones de lio.
T l . Dif r n f rm l i n r l i B. L v l r r r n n v l l i n li.
Tabla 6: Contenido exacto de un vial de cada formulación en m.
ras filtración estéril, se llenó 1 ml de la solución de lio. correspondiente en viales de tipo 1 de vidrio 10R siliconados. La densidad de las soluciones de lio. que contenían sacarosa al 5 % y trehalosa al 5 % fue 1,034 g/ml a 25 °C mientras que la densidad medida de las soluciones de lio. que contenían sacarosa al 7,5 % y trehalosa al 7,5 % fue 1,043 g/ml a 25 °C.
Liofilización
Los viales llenados se cargaron en el criodesecador y se protegieron frente a la radiación térmica. El ciclo de criodesecación enumerado en la Tabla 7 se usó para la preparación de las muestras.
Tabla 7: Eta as del ciclo de criodesecación usado.
(continuación)
Todos los liofilizados obtenidos mostraron un buen aspecto macroscópico sin defectos ni colapso.
Reconstitución de liofilizados
Se añadió 1 ml de API a los liofilizados para reconstituirlos. Tras disolución completa, la solución se homogeneizó pipeteando tres veces arriba y abajo y se transfirió a un vial de HPLC. El contenido de INF-beta 1a se determinó usando RP-HPLC. El método de RP-HPLC se realizó de acuerdo con procedimientos operativos del fabricante. Contenido de INF-beta 1a de las soluciones de lio. y liofilizados
El contenido de INF-beta 1a de las soluciones de lio. y los liofilizados reconstituidos se midió usando RP-HPLC directamente tras liofilización. La Tabla 8 muestra el contenido de INF-beta 1a de las soluciones de lio.
Tabla 8: Contenido^ de INF-beta 1a de las soluciones de lio. el contenido obetivo fue 24 /ml.
La recuperación de INF-beta 1 a tras la reconstitución de los liofilizados se determinó directamente tras criodesecación. Los resultados se enumeran en la Tabla 9. Todas las formulaciones mostraron recuperación completa de INF-beta 1a dentro de la desviación estándar de las soluciones de lio.
Tabla 9: Recu eración de INF-beta 1a tras reconstitución de los liofilizados directamente tras criodesecación
Contenido de agua residual de los liofilizados
Para promover una estabilidad de almacenamiento óptima de los liofilizados, el contenido de agua residual (aquí: solo libre, sin unir) de las tortas de lio. se midió mediante valoración de Karl Fischer. Los valores para el contenido de agua residual libre, determinados en los liofilizados directamente tras criodesecación, se enumeran en la Tabla 10. Todas las formulaciones contenían aproximadamente un 1 % de agua residual libre.
En la valoración de Karl Fisher, se transfirieron viales cerrados al horno (80 °C) del coulómetro de Karl Fischer, donde la aguja de inyección atravesó el tapón. El vapor de agua generado a 80 °C se transfirió directamente mediante la aguja de inyección a la cámara de valoración del coulómetro de Karl Fischer usando nitrógeno seco. El cálculo del contenido de agua residual se basó en el peso teórico de la torta de lio.
Tabla 10. Contenido de a ua libre de las formulaciones individuales tras criodesecación.
(continuación)
Adsorción de INF-beta 1a a viales de vidrio siliconado y a tapones
Para este estudio se usaron dos tipos de viales de vidrio siliconado de diferentes proveedores (Gerresheimer AG, Schott AG). Los viales de ambos proveedores se sometieron a ensayo con respecto a la adsorción de INF-beta 1a de una solución acuosa.
Se diluyó INF-beta 1a DS purificado a una concentración de 30 pg/ml con tampón citrato que contenía Tween 20. La concentración de Tween 20 se ajustó al 0,1 % (p/v). La solución se llenó en viales siliconados de diferentes fabricantes. Se tomaron muestras tras una breve incubación y la solución restante se transfirió a un nuevo vial del tipo correspondiente. Este procedimiento se repitió cuatro veces. El contenido de INF-beta 1a de las muestras se analizó mediante RP-HPLC. La Figura 11 muestra los resultados del estudio. La concentración de INF-beta 1a permanece constante durante las cuatro etapas de transferencia, independientemente del vial usado. Por tanto, la adsorción de INF-beta 1a a la superficie del vidrio puede despreciarse en ambos casos.
La adsorción de INF-beta 1a a los tapones (tapón de lio. de purgado único de 20 mm; West Pharmaceutical Services), se examinó al igual que la investigación con los viales de vidrio siliconado. La solución se llenó en viales siliconados, y los viales se cerraron usando dos tipos diferentes de tapones. Los viales cerrados se pusieron boca abajo para lograr un contacto directo del líquido con el tapón. Los viales se voltearon, tras una breve incubación, y se tomaron muestras. Este procedimiento se repitió cuatro veces. El contenido de INF-beta 1a de las muestras se analizó usando RP-HPLC. Los resultados se muestran en la Figura 12. La concentración de INF-beta 1a permanece constante tras el contacto repetido con ambos tapones. Por tanto, usando tapones siliconados, puede prevenirse la adsorción de INF-beta 1a a los tapones.
3. ESTUDIO DE CRIODESECACIÓN
En este estudio, se verificó la viabilidad del ciclo de criodesecación de aproximadamente 31 horas para la formulación de la solución de lio.
Formulación de la solución de lio.
La sustancia farmacológica de INF-beta 1a (proporcionada por Rentschler Biotechnologie GmbH) se purificó mediante centrifugación (10 min, 4000 rpm) y filtración estéril (0,2 pm) para retirar los agregados insolubles existentes antes de iniciar la composición. La concentración de INF-beta 1a resultante se midió por espectroscopia UV (280 nm). El cálculo de la concentración de INF-beta 1a se basó en el coeficiente de extinción (1,351 ml*pg_1*cm'1). Los excipientes, así como los componentes tampón se disolvieron en API en la proporción correspondiente (véase la Tabla 11). Se añadió sustancia farmacológica de INF-beta 1a purificado para lograr una concentración de INF-beta 1a de aproximadamente 17,5 pg/ml en la solución de lio. final. Finalmente, la solución de lio. se llenó con API hasta el peso objetivo, que se calculó basándose en la densidad de las soluciones de lio. (1,034 g/ml). Tras filtración estéril usando una membrana de PVDF hidrófila, se llenaron 0,725 ml 0,65 resp. de la solución de lio. en viales de tipo 1 de vidrio 2R siliconado a mano.
Tabla 11. Com osición de la solución de lio.
Ciclo de liofilización
La solución de lio. se criodesecó usando el ciclo de liofilización mostrado en la Tabla 12. Se compararon entre sí muestras con y sin recocido. Las muestras sin recocido se cargaron tras la etapa de recocido.
Tabla 12. Ciclo de liofilización. Tras la eta a 5 se car aron muestras sin recocido.
La Figura 13 muestra la adquisición de datos digitales de los principales parámetros de liofilización del ciclo de liofilización.
Los datos de temperatura de almacenamiento y presión de la cámara demuestran que las condiciones durante la liofilización cumplieron las especificaciones preestablecidas. La temperatura del producto siguió de cerca la temperatura de almacenamiento durante la congelación y el recocido, lo que indica condiciones bien definidas para el tratamiento térmico. El desarrollo de las temperaturas del producto de las muestras con y sin recocido fue comparable a lo largo de todo el proceso de criodesecación. El final del secado primario se indicó por un aumento de presión medido por el sensor de capacidad, que finalizó tras aproximadamente 4,2 horas de secado primario (sin rampa). Obtención de imágenes
Se rompieron viales de vidrio y se separaron los liofilizados de los fragmentos de vidrio. Se cortaron los liofilizados verticalmente usando una lanceta para obtener imágenes del interior del liofilizado. Se tomaron fotografías de la superficie superior, superficie inferior y superficie de corte de los liofilizados. Además, se tomaron imágenes de luz transmitida para identificar estructuras colapsadas del liofilizado sin destruirlo.
La sección transversal vertical de muestras con (derecha) y sin (izquierda) recocido en la Figura 14 no mostró signos de colapso. La estructura cristalina de ambas muestras era muy homogénea y compacta.
Ni la imagen de luz transmitida de muestras con recocido (izquierda) ni la imagen de luz transmitida de muestras sin recocido (derecha) en la Figura 15 revelaron signos de colapso.
Análisis térmico de los liofilizados
La Tabla 13 compara las temperaturas de transición vítrea de muestras con recocido y muestras sin recocido.
Tabla 13: Tem eraturas de transición vítrea de las muestras.
Los liofilizados con recocido exhibieron una transición vítrea, que fue aproximadamente 10 °C mayor que la de los liofilizados sin recocido. Una etapa de recocido aumenta la porosidad de las tortas de lio. Por tanto, el agua adsorbida
se retira más fácilmente durante el secado secundario. El agua residual disminuye la temperatura de transición vitrea, porque el agua como plastificante reduce las temperaturas de transición vítrea en general.
Ensayo de disolución
Se reconstituyeron liofilizados usando una jeringa de 1 ml. Se midió el tiempo requerido para la disolución completa del liofilizado. La Tabla 14 muestra los tiempos de disolución de los liofilizados con y sin recocido.
Tabla 14: Tiem os de disolución de liofilizados.
El comportamiento de reconstitución se optimizó claramente mediante la etapa de recocido. En promedio, el tiempo de disolución de las muestras con recocido fue aproximadamente 20 s más rápido en comparación con el de las muestras sin recocido.
Los parámetros de congelación y secado primario de este ciclo de lio. de 31 horas presentaron ajustes óptimos para la criodesecación de liofilizados de acuerdo con la presente invención.
4. ESTUDIO DE ESTABILIDAD
El estudio de estabilidad investiga la compatibilidad de la formulación liofilizada de acuerdo con el estudio de formulación B previo con el dispositivo y jeringa de API prellenada usados en reconstitución y aplicación clínica.
En el estudio de compatibilidad se usaron el dispositivo de transferencia MIXJECT™ y jeringas de API prellenadas para reconstitución del producto farmacológico liofilizado proporcionado en viales 2R. El estudio proporciona datos de la compatibilidad del producto farmacológico reconstituido con los viales, con el dispositivo de transferencia MIXJECT™ aplicado y jeringas de API prellenadas. La investigación de la estabilidad del producto farmacológico reconstituido se realizó tras 0 y 24 h de almacenamiento en el vial y tras 24 h de almacenamiento tanto en el vial como en la jeringa a temperatura ambiente (TA) sin protección frente a la luz. Además, se determinaron el volumen y la densidad de la solución de producto farmacológico para evaluar si existía pérdida de IFN beta-1a desde la reconstitución del producto farmacológico hasta la administración de la solución farmacológica desde la jeringa.
Los materiales de envasado primario se enumeran en la Tabla 15 y los materiales usados para reconstitución y uso clínico se describen en la Tabla 16.
Tabla 15. Sistema de cierre de reci ientes.
T l 1 . M ri l r l i m i ili .
Los datos de compatibilidad resultaron de los siguientes análisis: transparencia, color, partículas visibles, mapeo
peptídico, RP-HPLC, bioensayo, SE-HPLC, desamidación, valor de pH, osmolalidad, partículas no visibles a simple vista y la densidad y volumen del producto farmacológico reconstituido en diferentes puntos temporales. Los criterios de aceptación del producto farmacológico se enumeran en la Tabla 17.
T l 17: ri ri i n r n m i ili .
Las Tablas presentadas en las Figuras 16 a 18 muestran la recopilación de los resultados analíticos para almacenamiento a temperatura ambiente durante 0 horas y 24 horas en el vial y tras 24 horas en la jeringa y 24 horas adicionales en la jeringa (valor de 48 horas).
Como se muestra en las Tablas de las Figuras 16 a 18, los resultados del estudio de compatibilidad cumplieron con todos los criterios de aceptación. En el período de tiempo de almacenamiento se cumplieron los criterios de aceptación y los valores objetivo de transparencia, color y partículas visibles. La identidad del producto farmacológico se confirmó en comparación con el estándar de referencia correspondiente aplicando el mapeo peptídico. El perfil de elución correspondió al del estándar de referencia durante todo el período de almacenamiento. El contenido proteico del producto farmacológico analizado por RP-HPLC y la potencia analizada por bioensayo satisficieron los valores objetivo y los criterios de aceptación. Por análisis SE-HPLc se determinó que el área de pico relativa de agregados era < 0,8 % (por debajo del nivel informado). El grado de IFN beta-1a oxidado en el producto farmacológico alcanzó los valores objetivo durante todo el período de estudio tal como se determina por mapeo peptídico. Por análisis de desamidación se mostró que el grado de IFN beta-1a desamidado en el producto farmacológico aumentó del 41,2 % de área al 48,7 % de área. Los resultados de pH, osmolalidad satisficieron los valores objetivo. Los resultados de partículas no visibles a simple vista también satisficieron los criterios de aceptación.
En resumen, el estudio de compatibilidad muestra que la formulación liofilizada de acuerdo con la invención es estable hasta 48 h a temperatura ambiente (TA) en el material de envasado primario tras reconstitución con API y tras haber usado el dispositivo de transferencia MIXJECT™ y la jeringa de API prellenada hasta 24 h a temperatura ambiente en el material de envasado primario usado y hasta 24 h adicionales en la jeringa.
Determinación del volumen de la solución durante la reconstitución
La intención de medir el volumen de la solución durante las tres etapas diferentes de reconstitución fue determinar la
pérdida proteica [|jg] durante la aplicación clínica (pérdida desde la reconstitución del producto farmacológico hasta la administración de la solución desde la jeringa). La pérdida durante la reconstitución se determinó por medición de peso diferencial de los recipientes llenos y vacíos. Junto con el resultado de densidad de la solución, se calculó el volumen correspondiente. Estos resultados se resumen en las Tablas presentadas en las Figuras 19 y 20. La determinación del volumen y la densidad del producto farmacológico reconstituido se realizó con y sin el dispositivo de transferencia MIXJECT™.
La determinación del volumen de la solución durante la aplicación dio como resultado los siguientes valores: se administran 1,020 ml de API (densidad: 0,9981 g/ml) desde la jeringa prellenada. El volumen total de la solución de muestra tras reconstitución es 1,026 ml (densidad: 1,0266 g/ml). Se administran 1,011 ml (densidad: 1,0247 g/ml) del producto farmacológico reconstituido desde la jeringa sin usar el dispositivo de transferencia MIXJECT™ y se administran 0,989 ml (densidad: 1,0252 g/ml) cuando se usa el dispositivo de transferencia MIXJECT™. Junto con estos valores y los valores de contenido determinados, se determinó una pérdida de 1 jg de IFN beta-1a desde el momento de la reconstitución del producto farmacológico hasta la administración de la solución desde la jeringa.
5. ESTUDIO DE BIOEFICACIA
El objetivo de este estudio fue determinar la bioeficacia del producto liofilizado de interferón beta-1a, cuando se administra mediante inyección de bolo intravenoso durante al menos 28 días a monos cinomolgo y proporcionar datos que respalden el uso del producto liofilizado de interferón beta-1a en seres humanos. El diseño del estudio se presenta en la Tabla 18.
Tabla 18. c FP-1201, es decir, producto liofilizado de interferón beta-1a de acuerdo con la invención, se diluyó con 1,068 ml de agua para inyección para dar una concentración nominal de 12,6 jg de solución. Cada vial se diseñó r mini r r n mínim 1 m l 2 M I.
Como elemento de control se usó agua para inyección.
En este estudio se evaluaron los siguientes parámetros y puntos finales: actividad farmacodinámica de FP-1201 a diferentes dosis, signos clínicos, pesos corporales, cambios de peso corporal, oftalmología, electrocardiografía, temperaturas corporales, parámetros de patología clínica (hematología, coagulación, química clínica, y análisis de orina), análisis de inmunogenicidad, hallazgos de necropsia macroscópica, pesos de órganos, y exámenes de histopatología.
No hubo observaciones clínicas atribuidas al tratamiento.
No hubo hallazgos oftálmicos relacionados con el tratamiento y no hubo cambios en el electrocardiograma ni en la temperatura corporal.
No hubo cambios en la composición de la orina que se atribuyeran al tratamiento.
La proteína A resistente a mixovirus (MxA) es uno de los mejores marcadores de bioactividad de IFN beta y se ha usado ampliamente en entornos clínicos para detectar la eficacia del tratamiento con IFN-beta en pacientes con esclerosis múltiple. Por tanto, se siguieron los MxA en los animales tratados. Se indujeron concentraciones de MxA en todos los animales tratados con IFN beta-1 como se esperaba. Los tres niveles de dosis de IFN beta-1 indujeron varias veces la inducción de MxA de forma sensible a la dosis. Las concentraciones de MxA se mantuvieron altas del Día 6 al Día 16 seguido por una disminución gradual como se presenta en la Figura 21 (grupo 1 (rombo), grupo 2 (cuadrado), grupo 3 (triángulo) y grupo 4 (círculo)). Probablemente, esta disminución gradual se debe al desarrollo de anticuerpos neutralizantes de iFn beta-1 en estos animales. El desarrollo de anticuerpos neutralizantes frente a IFN-beta también se ha observado en seres humanos tras varios meses o años de tratamiento de esclerosis múltiple con IFN-beta. Los animales de control no mostraron inducción de MxA y los valores permanecieron en las concentraciones iniciales durante todo el período de tratamiento. Aunque las dosis mayores de IFN beta-1 indujeron niveles de expresión de MxA más elevados, también se observó una respuesta biológica clara usando la dosis menor.
No hubo cambios en el peso de los órganos ni hallazgos de necropsia o histopatología atribuidos al tratamiento.
En conclusión, la administración intravenosa diaria de FP-1201 (formulación de interferón beta-1a de acuerdo con la invención) a niveles de dosis de 0,25, 1,0 o 3,0 MUI/kg/día a monos cinomolgo durante 28 días se asoció a un aumento esperado de la inducción de MxA y se toleró bien. Se observaron cambios menores en los parámetros hematológicos y de química clínica y una mayor actividad de anticuerpos neutralizantes al finalizar el tratamiento, particularmente a 3,0 MUI/kg/día.
Claims (15)
1. Una formulación farmacéutica en forma liofilizada, que comprende interferón beta-1a como ingrediente activo en una cantidad de 2,0-15 |jg en una forma de dosificación intravenosa individual, disacáridos como agente de volumen, un tensioactivo no iónico y un agente de tamponamiento, en donde el disacárido se selecciona entre trehalosa dihidratada o una combinación de trehalosa dihidratada y sacarosa, y en donde el pH de la formulación tras reconstitución es 6,0-7,5, y el interferón beta-1a es interferón beta-1a producido de forma recombinante con una actividad biológica de al menos 150 MUI/mg.
2. La formulación de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha formulación comprende además un antioxidante.
3. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho disacárido es trehalosa dihidratada.
4. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho tensioactivo no iónico es polisorbato o polietilenglicol (p Eg ).
5. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha formulación comprende fosfato disódico dihidratado, dihidrogenofosfato sódico dihidratado, citrato trisódico dihidratado o combinación de los mismos como agente de tamponamiento.
6. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes 2 a 5, en donde dicho antioxidante es metionina.
7. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el contenido de humedad residual de dicha formulación liofilizada es no superior al 5 % en peso, preferentemente en el intervalo de 1-5 %.
8. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la formulación se prepara a partir de una solución acuosa que comprende
(i) interferón beta-1a humano recombinante como ingrediente activo,
(ii) trehalosa dihidratada como agente de volumen,
(iii) polisorbato o polietilenglicol como tensioactivo,
(iv) una combinación de fosfato disódico dihidratado, dihidrogenofosfato sódico dihidratado y citrato trisódico dihidratado como agente de tamponamiento, y
(v) metionina como antioxidante.
9. La formulación de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la solución acuosa comprende 0,05-0,15 % (p/v) de polisorbato o polietilenglicol, preferentemente polisorbato, y 2-6 % (p/v) de trehalosa dihidratada.
10. Una composición farmacéutica acuosa obtenida por reconstitución de una formulación liofilizada de cualquiera de las reivindicaciones precedentes 1 a 9.
11. La composición farmacéutica acuosa de la reivindicación 10 para administración intravenosa.
12. Un dispositivo de administración que incluye la composición farmacéutica acuosa de la reivindicación 10.
13. Una jeringa prellenada que incluye la composición farmacéutica acuosa de la reivindicación 10.
14. El dispositivo de administración de la reivindicación 12 o la jeringa prellenada de la reivindicación 13, en donde una superficie interior del dispositivo de administración o la jeringa prellenada está siliconada.
15. Una formulación liofilizada de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o una composición farmacéutica acuosa de la reivindicación 10 para uso en la prevención y/o tratamiento de la enfermedad o el trastorno seleccionado entre
- enfermedades vasculares-endoteliales,
- fuga vascular en síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS),
- lesión de isquemia-reperfusión en cirugía vascular o cardíaca y trasplante de órganos,
- preacondicionamiento isquémico antes de cirugía vascular o cardíaca mayor y trasplante de órganos,
- pancreatitis aguda o lesión renal aguda,
- fallo multiorgánico (FMO),
- infecciones virales, y
- neumonía bacteriana y sepsis.
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