ES2905912T3 - Dominios variables de inmunoglobulina de unión a albúmina sérica mejorados - Google Patents

Abstract

Dominio variable individual de inmunoglobulina de unión a la albúmina sérica que tiene: (a) una CDR1 de acuerdo con Abm que se elige de las siguientes secuencias: GFTFSTGEMA (SEQ ID NO: 8) y GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13) y que es preferiblemente GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y (b) una CDR2 de acuerdo con Abm que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTY (SEQ ID NO: 9) y VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y que es preferiblemente VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y (c) una CDR3 de acuerdo con Abm que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15); en donde dicho dominio variable individual de inmunoglobulina tiene no más de 7, tal como no más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 diferencias de aminoácidos en las regiones armazón en comparación con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, sin tener en cuenta ninguna mutación en la(s) posición(es) 11, 89, 110 o 112 según Kabat que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente; en el que: - el resto de aminoácido en la posición 11 se elige preferiblemente de L o V; y - el resto de aminoácido en la posición 89 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, V o L; y - el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q; y - el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q; de modo que (i) la posición 89 es T; o (ii) la posición 89 es L y la posición 11 es V; o (iii) la posición 89 es L y la posición 110 es K o Q; o (iv) la posición 89 es L y la posición 112 es K o Q; o (v) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (vi) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q; o (vii) la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (viii) la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q; y en donde dicho dominio variable individual de inmunoglobulina tiene menor unión por anticuerpos preexistentes presentes en el suero de pacientes con LES en comparación con la SEQ ID NO: 1.

Description

DESCRIPCIÓN

Dominios variables de inmunoglobulina de unión a albúmina sérica mejorados

La presente invención se refiere a dominios variables individuales de inmunoglobulina mejorados (también denominados en el presente documento "ISV" o "ISVD"), y en particular a dominios variables individuales de inmunoglobulina de cadena pesada mejorados, que se unen a albúmina sérica, así como a proteínas, polipéptidos y otras construcciones, compuestos, moléculas o entidades químicas que comprenden dichos ligantes de albúmina sérica mejorados como se definen en las reivindicaciones.

Los ISVD de unión a albúmina sérica mejoradas como se definen en las reivindicaciones también se denominan en el presente documento "ligantes de albúmina sérica de la invención", "ligantes de albúmina de la invención" o "ligantes de albúmina sérica" o "ligantes de albúmina". Además, las proteínas, polipéptidos y otras construcciones, compuestos, moléculas o entidades químicas como se definen en las reivindicaciones que comprenden al menos un ligante de albúmina sérica de la invención también se denominan en el presente documento "compuestos de la invención" o "polipéptidos de la invención".

Preferiblemente, los polipéptidos de la invención son proteínas de fusión.

En la presente solicitud, los restos/posiciones de aminoácidos en un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina se indicarán con la numeración según Kabat. Por motivos de conveniencia, la Figura 1 proporciona una tabla que indica algunas de las posiciones de los aminoácidos a las que se hará referencia específicamente en el presente documento y su numeración de acuerdo con algunos sistemas de numeración alternativos (tales como Aho e IMGT. Nota: a menos que se indique explícitamente lo contrario, para la presente descripción y reivindicaciones, la numeración de Kabat es decisiva; otros sistemas de numeración se dan solo como referencia). Con respecto a las CDR, como es bien conocido en la técnica, hay múltiples convenios para definir y describir las CDR de un fragmento VH o VHH, tales como la definición de Kabat (que se basa en la variabilidad de secuencia y es la más usada habitualmente) y la definición de Chothia (que se basa en la ubicación de las regiones de bucle estructural). Se hace referencia, por ejemplo, al sitio web http://www.bioinf.org.uk/abs/. Para los fines de la presente memoria descriptiva y las reivindicaciones, aunque también se pueden mencionar las CDR según Kabat, las CDR se definen más preferiblemente basándose en la definición de Abm (que se basa en el software de modelización de anticuerpos AbM de Oxford Molecular), ya que este se considera que es un compromiso óptimo entre las definiciones de Kabat y Chothia. Se hace referencia de nuevo al sitio web http://www.bioinf.org.uk/abs/).

Los ISVD que se pueden unir a la albúmina sérica y sus usos son bien conocidos en la técnica, por ejemplo, de los documentos WO 2004/041865, WO 2006/122787, EP 2139918, WO 2011/006915, WO 2012/175400 y WO 2014/111550, que describen las ISVD que se unen a albúmina sérica y su uso para extender la semivida en suero (como se define en estas solicitudes) de compuestos, restos y entidades terapéuticas.

La presente invención tiene como objetivo proporcionar ligantes de albúmina sérica mejorados, en particular en comparación con los ligantes de albúmina sérica descritos en los documentos WO 2011/006915 y WO 2014/111550. En la siguiente Tabla A se dan ejemplos representativos de ligantes de albúmina sérica conocidos de estas dos solicitudes PCT como "Referencia A" a "Referencia D", respectivamente. En la Figura 2 se da una alineación de estas secuencias de referencia. Las (combinaciones de) CDR de estos compuestos de referencia (de acuerdo con los convenios de Kabat y Abm, respectivamente) se indican en la Tabla B.

Más en particular, la invención tiene como objetivo proporcionar ISVD de unión a albúmina sérica mejorados que son variantes de los ISVD de unión a albúmina sérica mencionados en la Tabla A y que tienen una unión reducida por factores de interferencia (generalmente denominados "anticuerpos preexistentes") que pueden estar presente en los sueros de algunos sujetos humanos sanos así como de pacientes. Se hace referencia a los documentos WO 12/175741, WO 2013/024059 y también, por ejemplo, a Holland et al. (J. Clin. Immunol. 2013, 33 (7): 1192-203), así como a la solicitud PCT no prepublicada en tramitación con la presente PCT/EP2015/060643 por el cesionario presentada el 13 de mayo de 2015 y titulada "Dominios variables de inmunoglobulina mejorados" (publicada el 19 de noviembre, 2015 como W^o 2015/173325).

Tabla B: CDR de los compuestos de referencia A a D (según Kabat y Abm)

Como se define en las reivindicaciones, los ligantes de albúmina sérica de la invención preferiblemente tienen las mismas combinaciones de CDR (es decir, CDR1, CDR2 y CDR3) como están presentes en una de las Referencias A, B, C o D, y lo más preferiblemente tienen la misma combinación de CDR que está presente en la Referencia C o Referencia D (que tienen las mismas CDR).

De los ligantes de albúmina sérica indicados en la Tabla A, el ligante de SEQ ID NO: 4 tiene una extensión de alanina C-terminal, es decir, un resto de alanina en el extremo C-terminal de la secuencia de ISVD (a veces también denominado "posición 114") en comparación con la secuencia C-terminal habitual VTVSS (SEQ ID NO: 113, como está presente en los ligantes de SEQ ID NO: 1 a 3). Como se describe en el documento WO 12/175741 (pero también, por ejemplo, en el documento WO 2013/024059), esta extensión de alanina C-terminal puede prevenir la unión de los llamados "anticuerpos preexistentes" (que se supone que son IgG) a un epítopo putativo que está situado en la región C-terminal del ISV. Se supone que este epítopo incluye, entre otros restos, los restos de aminoácidos expuestos en la superficie de la secuencia C-terminal VTVSS, así como el resto de aminoácido en la posición 14 (y los restos de aminoácidos próximos/cercanos al mismo en la secuencia de aminoácidos, tales como las posiciones 11, 13 y 15) y también puede comprender el resto de aminoácido en la posición 83 (y los restos de aminoácido próximos/cercanos al mismo en la secuencia de aminoácidos, tales como las posiciones 82, 82a, 82b y 84) y/o el resto de aminoácido en la posición 108 (y los restos de aminoácidos próximos/cercanos al mismo en la secuencia de aminoácidos, tal como la posición 107).

Sin embargo, aunque la presencia de dicha alanina C-terminal (o una extensión C-terminal en general) puede reducir en gran medida (y en muchos casos incluso esencialmente prevenir por completo) la unión de los "anticuerpos preexistentes" que se pueden encontrar en los sueros de una variedad de sujetos (tanto sujetos sanos como pacientes), se ha encontrado que los sueros de algunos sujetos (tal como los sueros de pacientes con algunas enfermedades inmunitarias como el LES) pueden contener anticuerpos preexistentes que pueden unirse a la región C-terminal de un ISV (cuando dicha región está expuesta) incluso cuando el ISV contiene dicha alanina C-terminal (o más generalmente, dicha extensión C-terminal). Se hace referencia de nuevo a la solicitud PCT en tramitación con la presente no prepublicada PCT/EP2015/060643 por el cesionario presentada el 13 de mayo de 2015 y titulada "Dominios variables de inmunoglobulina mejorados".

Por consiguiente, un objetivo específico de la invención es proporcionar ligantes de albúmina sérica que sean variantes mejoradas de los ISVD que se unen a albúmina sérica indicadas en la Tabla A y que tengan unión reducida por los denominados "anticuerpos preexistentes", y en particular del tipo descrito en PCT/EP2015/060643 (es decir, aquellos anticuerpos preexistentes que se pueden unir a una región C-terminal expuesta de un ISV incluso en presencia de una extensión C-terminal).

En general, la invención logra este objetivo proporcionando ISV que se unen a albúmina sérica que son variantes de la secuencia de SEQ ID NO: 1 como se define en las reivindicaciones que comprenden los siguientes restos de aminoácidos (es decir, mutaciones en comparación con las secuencias de SEQ ID NO: 1):

- 89T; o

- 89L en combinación con 11V; o

- 89L en combinación con 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 112K o 112Q; o

- 89L en combinación con 11V y 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 11V y 112K o 112Q; o

- 11V en combinación con 110K o 110Q; o

- 11V en combinación con 112K o 112Q.

En un aspecto específico, en los ligantes de suero de la invención:

- el resto de aminoácido en la posición 11 se elige preferiblemente de L o V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, V o L; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q; y

- el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q; tal como (i) la posición 89 es T; o (ii) la posición 110 es K o Q; o (iii) la posición 112 es K o Q; o (iv) la posición 89 es L y la posición 11 es V; o (v) la posición 89 es L y la posición 110 es K o Q; o (vi) la posición 89 es L y la posición 112 es K o Q; o (vi) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (vii) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q; o (viii) la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (ix) la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q.

De las secuencias de aminoácidos proporcionadas por la invención, las secuencias de aminoácidos en las que la posición 89 es T o en las que la posición 11 es V y la posición 89 es L (opcionalmente en combinación adecuada con una mutación 110K o 110Q y/o una mutación 112K o 112Q, y en particular en combinación con una mutación 110K o 110Q) son particularmente preferidas. Incluso más preferidas son las secuencias de aminoácidos en las que la posición 11 es V y la posición 89 es L, opcionalmente con una mutación 110K o 110Q.

Las secuencias de aminoácidos de la invención preferiblemente se unen a albúmina sérica (humana) con una afinidad mejor que 100 nM, preferiblemente mejor que 50 nM. Por ejemplo, los ligantes de albúmina de la invención que son variantes de la Referencia A o la Referencia B, respectivamente, pueden tener una afinidad por la albúmina sérica (humana) que es aproximadamente la misma que la descrita para la Referencia A o la Referencia B, respectivamente, en el documento WO 2011/006915; y de manera similar, los ligantes de albúmina de la invención que son variantes de la Referencia C y/o la Referencia D, respectivamente, pueden tener una afinidad por la albúmina sérica (humana) que es aproximadamente la misma que la descrita para la Referencia C y/o la Referencia D, respectivamente, en el documento WO 2014/111550 (midiéndose la afinidad como se describe en los documentos WO 2011/006915 o WO 2014/111550, respectivamente).

Además, los ligantes de albúmina proporcionados por la invención y los compuestos y polipéptidos que los comprenden (como se describe con más detalle en el presente documento) preferiblemente tienen una semivida (definida como t1/2 beta) en el hombre que es más de 1 hora, preferiblemente más de 2 horas, más preferiblemente de más de 6 horas, tal como de más de 12 horas, y por ejemplo de aproximadamente un día, dos días, una semana, dos semanas y hasta la semivida de la albúmina sérica en el hombre (estimada que es de aproximadamente 19 días), aunque este último puede ser menos crítico.

Por ejemplo, los ligantes de albúmina de la invención que son variantes de la Referencia A o la Referencia B, respectivamente, pueden tener una semivida en el hombre que es comparable a (y preferiblemente aproximadamente la misma que) la semivida de la Referencia A o la Referencia B , respectivamente (véase nuevamente el documento WO 2011/006915); y de manera similar, los ligantes de albúmina de la invención que son variantes de la Referencia C y/o la Referencia D, respectivamente, pueden tener una semivida en el hombre que es comparable a (y preferiblemente aproximadamente la misma que) la semivida de la Referencia C y/o Referencia D, respectivamente (véase de nuevo el documento WO 2014/111550).

Además, un compuesto o polipéptido de la invención que comprende un ligante de albúmina que es una variante de la Referencia A o la Referencia B, respectivamente, puede tener una semivida en el hombre que es comparable a (y preferiblemente aproximadamente la misma que) la semivida del mismo compuesto o polipéptido pero con Referencia A o Referencia B, respectivamente, en lugar del ligante de albúmina de la invención; y de manera similar, un compuesto o polipéptido de la invención que comprende un ligante de albúmina que es una variante de la Referencia C o la Referencia D, respectivamente, puede tener una semivida en el hombre que es comparable a (y preferiblemente aproximadamente la misma que ) la semivida del mismo compuesto o polipéptido pero con Referencia C o Referencia D, respectivamente.

La Tabla C indica algunas posibles combinaciones no limitantes de los restos de aminoácidos que pueden estar presentes en las posiciones 11, 89, 110 y 112 en los ligantes de albúmina sérica de la invención. Las combinaciones que son particularmente preferidas se indican en negrita y las combinaciones más preferidas se indican en negrita/subrayado.

Tabla C: Posibles combinaciones de aminoácidos en las posiciones 11,89, 110 y 112

Los ligantes de albúmina sérica de la invención son como se definen por las reivindicaciones, es decir, tienen CDR que son como se definen por las reivindicaciones y tienen un número limitado de "diferencias de aminoácidos" (como se describe en el presente documento) con la secuencia de SEQ ID NO: 1 como se define en las reivindicaciones. Los ligantes de albúmina sérica de la descripción preferiblemente comprenden las siguientes CDR (según el convenio de Kabat):

- una CDR1 (según Kabat) que se elige de las siguientes secuencias: TGEMA (SEQ ID NO: 5) y TSSML (SEQ ID NO: 10) y que es preferiblemente TSSML (SEQ ID NO: 10); y

- una CDR2 (según Kabat) que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTYYADSVKG (SEQ ID NO: 6) y VIHQSGTPTYYADSVKG (SEQ ID NO:11) y que es preferiblemente VIHQSGTPTYYADSVKG (SEQ ID NO: 11); y - una CDR3 (según Kabat) que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15). Más preferiblemente, las CDR son como sigue (de nuevo dadas según el convenio de Kabat): la CDR1 es TSSML (SEQ ID NO: 10); la CDR2 es VIHQSGTPTYYADSVKG (SEQ ID NO: 11) y la CDR3 es FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15). Lo más preferiblemente, la CDR1 es TSSML (SEQ ID NO: 10); la CDR2 es VIHQSGTPTYYADSVKG (SEQ ID NO: 11) y la CDR3 es FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15)

En las reivindicaciones, las CDR se dan de acuerdo con el convenio de Abm, de modo que los ligantes de albúmina sérica de la invención comprenden las siguientes CDR:

- una CDR1 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: GFTFSTGEMA (SEQ ID NO: 8) y GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13) y que es preferiblemente GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTY (SEQ ID NO: 9) y VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y que es preferiblemente VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15).

Preferiblemente, las CDR son como sigue de acuerdo con el convenio de Abm: la CDR1 es GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13), la CDR2 es VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y la CDR3 es FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15). Lo más preferiblemente, la CDR1 es GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13), la CDR2 es VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y la CDR3 es FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15).

Un ligante de albúmina sérica de la invención preferiblemente también tiene:

- no más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 "diferencias de aminoácidos" (como se define en el presente documento, y sin tener en cuenta ninguna de las mutaciones indicadas antes en las posiciones 11,89, 110 o 112 que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente) con la secuencia de SEQ ID NO: 1 (en la que dichas diferencias de aminoácidos, si están presentes, pueden estar presentes en las regiones armazón y/o las CDR, pero preferiblemente están presentes solo en las regiones armazón y no en las CDR).

Cuando se trata del grado de identidad de secuencia con respecto a la SEQ ID NO: 1, y/o el número y tipo de "diferencias de aminoácidos" que pueden estar presentes en un ligante (es decir, en comparación con la SEQ ID NO: 1), hay que indicar, cuando se dice que (i) una secuencia de aminoácidos de la invención tiene un grado de identidad de secuencia con la secuencia de SEQ ID NO: 1, de al menos 85%, preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95% (en el que las CDR, cualquier extensión C-terminal que pueda estar presente, así como las mutaciones en las posiciones 11, 89, 110 y/o 112 requeridas por el aspecto específico implicado, no se tienen en cuenta para determinar el grado de identidad de secuencia); y/o cuando se dice que (ii) una secuencia de aminoácidos de la invención no tiene más de 7, preferiblemente no más de 5, tal como solo 3, 2 o 1 "diferencias de aminoácidos" con la secuencia de SEQ ID NO: 1 (de nuevo, sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente y sin tener en cuenta las mutaciones en las posiciones 11, 89, 110 y/o 112 requeridas por el aspecto específico implicado), entonces esto también incluye secuencias que no tienen diferencias de aminoácidos con la secuencia de SEQ ID NO: 1, aparte de las mutaciones en las posiciones 11,89, 110 y/o 112 requeridas por el aspecto específico implicado) y cualquier extensión C-terminal que puede estar presente.

Por lo tanto, en un aspecto específico de la invención, los ligantes de albúmina de la invención pueden tener una identidad de secuencia de 100% con la SEQ ID NO: 1, respectivamente y según corresponda (incluidas las CDR, pero sin tener en cuenta la o las mutaciones o la combinación de mutaciones en las posiciones 11, 89, 110 y/o 112 descritas en el presente documento y cualquier extensión C-terminal que puede estar presente) y/o pueden no tener diferencias de aminoácidos con la SEQ ID NO: 1, respectivamente y según corresponda (es decir, distintas de la o las mutaciones o la combinación de mutaciones en las posiciones 11, 89, 110 y/o 112 descritas en el presente documento y cualquier extensión C-terminal que pueda estar presente).

Cuando está presente cualquier diferencia de aminoácidos (es decir, además de cualquier extensión C-terminal y las mutaciones en las posiciones 11, 89, 110 y/o 112 que son requeridas por el aspecto específico de la invención implicada), estas diferencias de aminoácidos están presentes solo en las regiones armazón (como se define por el convenio de Abm, es decir, no en las CDR como se define según el convenio de Abm), es decir, de modo que los ligantes de albúmina de la invención tienen la misma combinación de CDR (definidas según el convenio de Abm) que están presentes en la SEQ ID NO: 1.

Los ligantes de albúmina sérica de la invención, cuando están presentes en y/o forman el extremo C-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención (o cuando tienen un extremo C-terminal "expuesto" en una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción en el que están presentes, mediante lo cual generalmente se quiere decir que el extremo C-terminal del ISV no está asociado o conectado a un dominio constante (tal como un dominio CHI); se hace referencia de nuevo al documento WO 12/175741 y PCT/EP2015/06043) preferiblemente también tienen una extensión C-terminal de la fórmula (X)ⁿ, en la que n es de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4 o 5 (y preferiblemente 1 o 2, tal como 1); y cada X es un resto de aminoácido (preferiblemente de origen natural) que se elige independientemente de los restos de aminoácidos de origen natural (aunque según un aspecto preferido, no comprende ningún resto de cisteína), y preferiblemente se elige independientemente del grupo que consiste en alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) o isoleucina (I).

De acuerdo con algunos ejemplos preferidos, pero no limitantes de dichas extensiones C-terminales X⁽ⁿ⁾, X y n pueden ser como sigue:

(a) n = 1 y X = Ala;

(b) n = 2 y cada X = Ala;

(c) n = 3 y cada X = Ala;

(d) n = 2 y al menos un X = Ala (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile); (e) n = 3 y al menos un X = Ala (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile); (f) n = 3 y al menos dos X = Ala (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile); (g) n = 1 y X = Gly;

(h) n = 2 y cada X = Gly;

(i) n = 3 y cada X = Gly;

(j) n = 2 y al menos un X = Gly (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile); (k) n = 3 y al menos un X = Gly (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile); (l) n = 3 y al menos dos X = Gly (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile); (m) n = 2 y cada X = Ala o Gly;

(n) n = 3 y cada X = Ala o Gly;

(o) n = 3 y al menos un X = Ala o Gly (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile); o

(p) n = 3 y al menos dos X = Ala o Gly (eligiéndose el o los restos de aminoácidos X restantes independientemente de cualquier aminoácido de origen natural pero preferiblemente eligiéndose independientemente de Val, Leu y/o Ile);

siendo particularmente preferidos los aspectos (a), (b), (c), (g), (h), (i), (m) y (n), siendo preferidos los aspectos en los que n =1 o 2 y siendo particularmente preferidos los aspectos en los que n = 1.

También debe indicarse que, preferiblemente, cualquier extensión C-terminal presente en un ligante de albúmina sérica de la invención no contiene un resto de cisteína (libre) (a menos que dicho resto de cisteína se use o esté destinado a la funcionalización adicional, por ejemplo, para pegilación).

Algunos ejemplos específicos, pero no limitantes de extensiones C-terminales útiles son las siguientes secuencias de aminoácidos: A, AA, AAA, G, GG, GGG, AG, GA, AAG, AGG, AGA, GGA, GAA o GAG.

Cuando los ligantes de albúmina sérica de la invención contienen mutaciones en las posiciones 110 o 112 (opcionalmente en combinación con mutaciones en la posición 11 y/o 89 como se describe en el presente documento), los restos de aminoácidos C-terminales de la región armazón 4 (empezando desde la posición 109) pueden ser como sigue: (i) si no hay presente extensión C-terminal: VTVKS ^{( S e Q i D} NO: 101), VTVQS (SEQ ID NO: 102), VKVSS (SEQ ID ^{N o :} 103) o VQVSS (SEQ ID NO: 104); o (ii) si hay presente una extensión C-terminal: VTVKSX⁽ⁿ⁾ (SEQ ID NO: 105), VTVQSX(n) (SEQ ID NO: 106), VKVSSX(n) (SEQ ID NO: 107) o VQVSSX⁽ⁿ⁾ (SEQ ID NO: 108), tal como VTVKSA (SEQ ID NO: 109), VTVQSA (SEQ ID NO: 110), VKVSSA (SEQ ID NO: 111) o VQVSSA (SEQ ID NO: 112). Cuando los ligantes de albúmina sérica de la invención no contienen mutaciones en las posiciones 110 o 112 (sino solo mutaciones en la posición 11 y/o 89 como se describe en el presente documento), los restos de aminoácidos C-terminales de la región armazón 4 (empezando desde la posición 109) normalmente serán o bien: (i) cuando no hay presente extensión C-terminal: VTVSS (SEQ ID NO: 113) (como en la secuencia de SEQ ID NO: 3); o (ii) cuando hay presente una extensión C-terminal: VTVSSX^{(n) ( S e Q} ID NO: 114) tal como VTVSSA (SEQ ID NO: 115) (como en la secuencia de SEQ ID NO: 4). En estas secuencias C-terminales, X y n son como se definen en el presente documento para las extensiones C-terminales.

Además, cuando un aglutinante de albúmina sérica de la invención está presente y/o forma el extremo N-terminal de un compuesto o polipéptidos de la invención, entonces el aglutinante de albúmina sérica preferiblemente tiene un D en la posición 1 (es decir, una mutación E1D en comparación con las secuencias dadas en las SEQ ID NO: 1 a 4 y 16 a 99).

Además, en general, cuando un compuesto o polipéptido de la invención tiene un ISVD de cadena pesada en su extremo C-terminal (que puede ser un ligante de albúmina sérica de la invención pero, por ejemplo, también un ISVD que se une a un agente terapéutico), entonces dicho ISVD C-terminal (y por extensión, el compuesto o polipéptido de la invención) preferiblemente tiene una extensión C-terminal X(n) como se describe en el presente documento. De manera similar, cuando un compuesto o polipéptido de la invención tiene un ISVD de cadena pesada en su extremo N-terminal (que puede ser un ligante de albúmina sérica de la invención pero, por ejemplo, también un ISVD que se une a una diana terapéutica), entonces dicho ISVD N-terminal (y por extensión, el compuesto o polipéptido de la invención) preferiblemente tiene un D en la posición 1.

Además, preferiblemente, cuando un compuesto o polipéptido de la invención contiene uno o más de otros ISVD además del ligante o ligantes de albúmina de la invención (cuyos otros ISVD pueden ser por ejemplo uno o más ISVD contra una diana terapéutica), entonces preferiblemente todos los ISVD presentes en dicho compuesto o polipéptido contienen dentro de su secuencia una o más mutaciones de la región armazón que reducen la unión por los anticuerpos preexistentes. En particular, cuando estos otros ISVD son nanocuerpos o anticuerpos de dominio (individual), es decir, consisten esencialmente en y/o derivan de un dominio VH, pueden contener (una combinación adecuada de) restos/mutaciones de aminoácidos en las posiciones 11, 89, 110 y/o 112 que son como se describen en el documento PCT/EP2015/060643 y/o que son como se describen esencialmente en el documento PCT/EP2015/060643 y/o como se describen en el presente documento para los ligantes de albúmina de la invención.

Como se ha mencionado, las secuencias de aminoácidos proporcionadas por la invención son proteínas que pueden unirse y que pueden, en particular, unirse específicamente (como se describe en el presente documento), a albúmina sérica humana. Por lo tanto, se pueden usar como unidades de unión o dominios de unión para la unión a albúmina sérica (humana), por ejemplo para conferir un aumento en la semivida (como se define en el presente documento) a compuestos, restos o entidades terapéuticas. Para el uso de dominios de unión a albúmina sérica para aumentar la semivida de compuestos, motivos o entidades terapéuticas, se hace referencia en general a los documentos WO 2004/041865, WO 2006/122787, EP 2 139 918, WO 2011/006915, WO 2012/175400 y/o WO 2014/111550. Los ligantes de albúmina de la invención en general se pueden usar de la misma manera y para los mismos propósitos que los ligantes de albúmina sérica descritos en estas referencias.

Algunos ejemplos preferidos pero no limitantes de ISV de la invención se dan en las SEQ ID NO: 16 a 99, y cada una de estas secuencias forma un aspecto adicional de la invención (al igual que proteínas, polipéptidos u otros compuestos o construcciones que comprenden una de estas secuencias). De estos:

- las SEQ ID NO: 16 a 29 son ejemplos de variantes de la secuencia de SEQ ID NO: 1. Estas secuencias tienen una CDR1 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 5; una CDR2 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 6; y una CDR3 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 7;

- las SEQ ID NO: 30 a 43 son ejemplos de variantes de la secuencia de SEQ ID NO: 1 con una alanina C-terminal (un ejemplo preferido pero no limitante de una extensión C-terminal como se describe en el presente documento). Estas secuencias tienen una CDR1 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 5; una CDR2 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 6; y una CDR3 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 7;

- las SEQ ID NO: 44 a 57 son ejemplos de variantes de la secuencia de SEQ ID NO: 2. Estas secuencias tienen una CDR1 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 10; una CDR2 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 11; y una CDR3 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 12;

- las SEQ ID NO: 58 a 71 son ejemplos de variantes de la secuencia de SEQ ID NO: 2 con una alanina C-terminal (un ejemplo preferido pero no limitante de una extensión C-terminal como se describe en el presente documento). Estas secuencias tienen una CDR1 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 10; una CDR2 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 11; y una CDR3 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 12;

- las SEQ ID NO: 72 a 85 son ejemplos de variantes de la secuencia de SEQ ID NO: 3. Estas secuencias tienen una CDR1 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 10; una CDR2 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 11; y una CDR3 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 15;

- las SEQ ID NO: 86 a 99 a 54 son ejemplos de variantes de la secuencia de SEQ ID NO: 4 (que es la SEQ ID NO: 3 con una extensión de alanina C-terminal). Estas secuencias tienen una CDR1 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 10; una CDR2 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 11; y una CDR3 (definida según Kabat) que es la secuencia de SEQ ID NO: 15.

De estas variantes, las secuencias de SEQ ID NO: 72 a 85 (cuando no se requiere una extensión C-terminal) y las secuencias de SEQ ID NO: 86 a 99 (cuando se requiere una extensión C-terminal) son las más preferidas.

Por lo tanto, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina que tiene:

- una CDR1 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: GFTFSTGEMA (SEQ ID NO: 8) y GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13) y que es preferiblemente GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTY (SEQ ID NO: 9) y VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y que es preferiblemente VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15);

y que tiene:

- no más de 7, tal como no más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 "diferencias de aminoácidos", sin tener en cuenta ninguna de las mutaciones indicadas antes en la(s) posición(es) 11, 89, 110 o 112 según Kabat que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que pueda estar presente, con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en el que dichas diferencias de aminoácidos, si están presentes, están presentes solo en las regiones armazón y no en las CDR;

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo C-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención):

- una extensión C-terminal (X)ⁿ, en la que n es de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4 o 5 (y preferiblemente 1 o 2, tal como 1); y cada X es un resto de aminoácido (preferiblemente de origen natural) que se elige independientemente, y preferiblemente se elige independientemente del grupo que consiste en alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) o isoleucina (I);

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo N-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención) una mutación de D y/o E1D en la posición 1; en el que:

- el resto de aminoácido en la posición 11 se elige preferiblemente de L o V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, V o L; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q; y

- el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q;

de modo que (i) la posición 89 es T; o (ii) la posición 89 es L y la posición 11 es V; o (iii) la posición 89 es L y la posición 110 es K o Q; o (iv) la posición 89 es L y la posición 112 es K o Q; o (v) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (vi) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q; o (vii) la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (vii) la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q,

en donde dicho dominio variable individual de inmunoglobulina tiene unión reducida por los anticuerpos preexistentes presentes en el suero de pacientes con LES en comparación con SEQ ID NO: 1.

En un aspecto específico, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina que tiene: - una CDR1 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: GFTFSTGEMA (SEQ ID NO: 8) y GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13) y que es preferiblemente GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTY (SEQ ID NO: 9) y VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y que es preferiblemente VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15);

y que tiene:

- no más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 "diferencias de aminoácidos", sin tener en cuenta ninguna de las mutaciones indicadas antes en la(s) posición(es) 11, 89, 110 o 112 que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que pueda estar presente, con la secuencia de SEQ ID NO: 1, en el que dichas diferencias de aminoácidos, si están presentes están presentes solo en las regiones armazón y no en las CDR;

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo C-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención):

- una extensión C-terminal (X)ⁿ, en la que n es de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4 o 5 (y preferiblemente 1 o 2, tal como 1); y cada X es un resto de aminoácido (preferiblemente de origen natural) que se elige independientemente, y preferiblemente se elige independientemente del grupo que consiste en alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) o isoleucina (I);

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo N-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención) una mutación de D y/o E1D en la posición 1; cuyo dominio variable individual de inmunoglobulina comprende los siguientes restos de aminoácidos (es decir, mutaciones en comparación con la secuencia de SEQ ID NO: 1) en las posiciones mencionadas (numeración según Kabat):

- 89T; o

- 89L en combinación con 11V; o

- 89L en combinación con 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 112K o 112Q; o

- 89L en combinación con 11V y 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 11V y 112K o 112Q; o

- 11V en combinación con 110K o 110Q; o

- 11V en combinación con 112K o 112Q,

en donde dicho dominio variable individual de inmunoglobulina tiene unión reducida por anticuerpos preexistentes en suero de pacientes con LES en comparación con la SEQ ID NO: 1.

En particular, los ligantes de albúmina sérica de la invención preferiblemente no tienen más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 "diferencias de aminoácidos" , sin tener en cuenta ninguna de las mutaciones indicadas antes en la(s) posición(es) 11, 89, 110 o 112 que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente, con la secuencia de SEQ ID NO: 1, en los que dichas diferencias de aminoácidos, si están presentes, están presentes solo en las regiones armazón y no en las CDR.

Como se ha mencionado, en la invención, las secuencias de aminoácidos en las que la posición 89 es T o en las que la posición 11 es V y la posición 89 es L (opcionalmente en combinación adecuada con una mutación 110K o 110Q y/o una mutación 112K o 112Q, y en particular en combinación con una mutación 110K o 110Q) son particularmente preferidas. Son incluso más preferidas las secuencias de aminoácidos en las que la posición 11 es V y la posición 89 es L, opcionalmente con una mutación 110K o 110Q.

Por lo tanto, en un aspecto preferido, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina como se reivindica, que tiene:

- una CDR1 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: GFTFSTGEMA (SEQ ID NO: 8) y GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13) y que es preferiblemente GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTY (SEQ ID NO: 9) y VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y que es preferiblemente VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15);

y que tiene:

- no más de 7, tal como no más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 "diferencias de aminoácidos", sin tener en cuenta ninguna de las mutaciones indicadas antes en la(s) posición(es) 11, 89, 110 o 112 que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente, con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en el que dichas diferencias de aminoácidos, si están presentes, están presentes solo en las regiones armazón y no en las CDR;

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo C-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención):

- una extensión C-terminal (X)ⁿ, en la que n es de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4 o 5 (y preferiblemente 1 o 2, tal como 1); y cada X es un resto de aminoácido (preferiblemente de origen natural) que se elige independientemente, y preferiblemente se elige independientemente del grupo que consiste en alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) o isoleucina (I);

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo N-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención) una mutación de D y/o E1D en la posición 1; en el que:

- el resto de aminoácido en la posición 11 se elige preferiblemente de L o V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 es T; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q (y es preferiblemente T); y

- el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q (y en preferiblemente S).

En otro aspecto preferido, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina como se reivindica, que tiene:

- una CDR1 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: GFTFSTGEMA (SEQ ID NO: 8) y GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13) y que es preferiblemente GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTY (SEQ ID NO: 9) y VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y que es preferiblemente VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15);

- no más de 7, tal como no más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 "diferencias de aminoácidos" (como se define en el presente documento, y sin tener en cuenta ninguna de las mutaciones indicadas antes en la(s) posición(es) 11, 89, 110 o 112 que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente) con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 (en el que dichas diferencias de aminoácidos, si están presentes, pueden estar presentes en las regiones armazón y/o las CDR pero preferiblemente están presentes solo en las regiones armazón y no en las CDR);

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo C-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención):

- una extensión C-terminal (X)ⁿ, en la que n es de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4 o 5 (y preferiblemente 1 o 2, tal como 1); y cada X es un resto de aminoácido (preferiblemente de origen natural) que se elige independientemente, y preferiblemente se elige independientemente del grupo que consiste en alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) o isoleucina (I);

y que opcionalmente tiene (en particular, cuando el ISVD está presente en y/o forma el extremo N-terminal de un compuesto o polipéptido de la invención) una mutación de D y/o E1D en la posición 1; en el que:

- el resto de aminoácido en la posición 11 es V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 es L; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q; y

- el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q.

En un aspecto específico, pero no limitante, los ligantes de albúmina sérica de la invención tienen:

- una CDR1 (según Abm) que es GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 (según Abm) que es VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 (según Abm) que se elige de las siguientes secuencias: FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15).

y más en particular:

- una CDR1 (según Abm) que es GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 (según Abm) que es VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 (según Abm) que es FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15).

En un aspecto específico, pero no limitante, los ligantes de albúmina sérica de la invención comprenden los siguientes restos de aminoácidos (es decir, mutaciones en comparación con la secuencia de SEQ ID NO: 1) en las posiciones mencionadas (numeración según Kabat):

- 11V en combinación con 89L; o

- 11V en combinación con 110K o 110Q;

- 11V en combinación con 112K o 112Q;

- 11V en combinación con 89L y 110K o 110Q; o

- 11V en combinación con 89L y 112K o 112Q;

y tienen las CDR y tienen un grado general de identidad de secuencia con las secuencias de referencia que son como se definen por las reivindicaciones.

En otro aspecto específico, pero no limitante, los ligantes de albúmina sérica de la invención comprenden los siguientes restos de aminoácidos (es decir, mutaciones en comparación con la secuencia de SEQ ID NO: 1) en las posiciones mencionadas (numeración según Kabat):

- 89L en combinación con 11V; o

- 89L en combinación con 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 112K o 112Q; o

- 89L en combinación con 11V y 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 11V y 112K o 112Q;

y tienen las CDR y tienen un grado general de identidad de secuencia con las secuencias de referencia que son como se definen por las reivindicaciones.

En otro aspecto específico, pero no limitante, los ligantes de albúmina sérica de la invención comprenden los siguientes restos de aminoácidos (es decir, mutaciones en comparación con la secuencia de SEQ ID NO: 1) en las posiciones mencionadas (numeración según Kabat):

- 110K o 110Q en combinación con 11V; o

- 110K o 110Q en combinación con 89L; o

- 110K o 110Q en combinación con 11V y 89L;

y tienen las CDR y tienen un grado general de identidad de secuencia con las secuencias de referencia que son como se definen por las reivindicaciones.

En otro aspecto específico, pero no limitante, los ligantes de albúmina sérica de la invención comprenden los siguientes restos de aminoácidos (es decir, mutaciones en comparación con la secuencia de SEQ ID NO: 1) en las posiciones mencionadas (numeración según Kabat):

- 112K o 112Q en combinación con 11V; o

- 112K o 112Q en combinación con 89L; o

- 112K o 112Q en combinación con 11V y 89L;

y tienen las CDR y tienen un grado general de identidad de secuencia con las secuencias de referencia que son como se definen por las reivindicaciones.

En otro aspecto específico, pero no limitante, los ligantes de albúmina sérica de la invención comprenden los siguientes restos de aminoácidos (es decir, mutaciones en comparación con las secuencias de SEQ ID NO: 1) en las posiciones mencionadas (numeración según Kabat):

- 89T;

y tienen las CDR y tienen un grado general de identidad de secuencia con las secuencias de referencia que son como se definen por las reivindicaciones.

En otro aspecto específico, pero no limitante, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina que tiene una secuencia de aminoácidos que se elige de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 16 a 99.

En otro aspecto específico, pero no limitante, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina que tiene una secuencia de aminoácidos que se elige de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 44 a 99.

En otro aspecto específico, pero no limitante, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina que tiene una secuencia de aminoácidos que es una de las siguientes secuencias: SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID N0:90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98 o SEQ ID NO: 99.

En otro aspecto específico, pero no limitante, la invención se refiere a un dominio variable individual de inmunoglobulina que tiene una secuencia de aminoácidos que es una de las siguientes secuencias: SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 78 o SEQ ID NO: 92, y preferiblemente la SEQ ID NO: 78 o SEQ ID NO: 92.

La invención también se refiere a proteínas, polipéptidos y otras construcciones, moléculas o entidades químicas que comprenden o consisten esencialmente en (uno o más de) los ligantes de albúmina sérica de la invención como se define en las reivindicaciones; a métodos para expresar/producir los dominios variables de inmunoglobulina de cadena pesada mejorados de la invención y/o para expresar/producir proteínas, polipéptidos y otras construcciones, moléculas o entidades químicas que comprenden los mismos; a composiciones y productos (tales como composiciones y productos farmacéuticos) que comprenden los dominios variables de inmunoglobulina de cadena pesada mejorados de la invención y/o proteínas, polipéptidos y otras construcciones, moléculas o entidades químicas que los comprenden; a la secuencia de nucleótidos y los ácidos nucleicos que codifican los dominios variables de inmunoglobulina de cadena pesada mejorados de la invención y/o que codifican proteínas o polipéptidos que los comprenden; y a usos (y en particular usos terapéuticos, profilácticos y de diagnóstico) de los dominios variables de inmunoglobulina de cadena pesada mejorados de la invención y de proteínas, polipéptidos y otras construcciones, moléculas o entidades químicas que los comprenden.

En la presente memoria descriptiva:

- la expresión "dominio variable individual de inmunoglobulina" (también denominado "ISV" o ISVD") se usa en general para referirse a dominios variables de inmunoglobulina (que pueden ser dominios de cadena pesada o de cadena ligera, incluyendo los dominios VH, VHH o VL) que pueden formar un sitio de unión al antígeno funcional sin interacción con otro dominio variable (p. ej., sin una interacción VH/VL como se requiere entre los dominios VH y VL del anticuerpo monoclonal convencional de 4 cadenas). Los ejemplos de ISVD estarán claros para el experto en la técnica y, por ejemplo, incluyen nanocuerpos (que incluyen un VHH, un VHH humanizado y/o un VH camelizado tal como los VH humanos camelizados), dominios IgNAR, anticuerpos (dominio único) (tales como dAb™) que son dominios VH o que derivan de un dominio VH y anticuerpos (dominio único) (tales como dAb™) que son dominios VL o que derivan de un dominio VL. A menos que se mencione explícitamente lo contrario en el presente documento, en general se prefieren los ISVD que se basan y/o derivan de dominios variables de cadena pesada (tales como dominios VH o VHH). Lo más preferiblemente, a menos que se indique explícitamente lo contrario en el presente documento, un ISVD será un nanocuerpo.

- el término "nanocuerpo" generalmente es como se define en los documentos WO 2008/020079 o WO 2009/138519, y por lo tanto en un aspecto específico en general indica un VHH, un VHH humanizado o un VH camelizado (tal como un VH humano camelizado) o en general una secuencia VHH optimizada (tal como, p. ej., optimizada para la estabilidad química y/o solubilidad, solapamiento máximo con regiones armazón humanas conocidas y expresión máxima). Hay que indicar que los términos nanocuerpo o nanocuerpos son marcas comerciales registradas de Ablynx N.V. y, por lo tanto, también pueden denominarse Nanobody® y/o Nanobodies®);

- En general, a menos que se indique lo contrario en el presente documento, los ISVD, nanocuerpos, polipéptidos, proteínas y otros compuestos y construcciones a los que se hace referencia en el presente documento estarán destinados al uso en la profilaxis o el tratamiento de enfermedades o trastornos en el hombre (y/u opcionalmente también en animales de sangre caliente y en particular mamíferos). Por lo tanto, en general, los ISVD, nanocuerpos, polipéptidos, proteínas y otros compuestos y construcciones descritos en el presente documento son preferiblemente tales que se pueden usar como, y/o pueden ser adecuadamente parte de, un fármaco (biológico) u otro compuesto farmacéutica o terapéuticamente activo y/o de un producto o composición farmacéutica. Dicho fármaco, compuesto o producto es preferiblemente tal que es adecuado para la administración a un ser humano, p. ej. para la profilaxis o el tratamiento de un sujeto que necesite dicha profilaxis o tratamiento o, por ejemplo, como parte de un ensayo clínico. Como se describe adicionalmente en el presente documento, para este propósito, dicho fármaco o compuesto puede contener otros motivos, entidades o unidades de unión además de los ISVD proporcionados por la invención (que, como también se describe en el presente documento, pueden ser, por ejemplo, uno o más de otros motivos terapéuticos adicionales y/o uno o más motivos que influyen en las propiedades farmacocinéticas o farmacodinámicas del producto biológico basado en ISVD o basado en nanocuerpos, tal como su semivida). Los ejemplos adecuados de dichos motivos adicionales terapéuticos o de otro tipo estarán claros para el experto y, por ejemplo, en general pueden incluir cualquier proteína, polipéptido u otro dominio de unión o unidad de unión terapéuticamente activo, así como, por ejemplo, modificaciones tales como las descritas en las páginas 149 a 152 del documento WO 2009/138159. Un producto biológico basado en ISVD o un producto biológico basado en nanocuerpos es preferiblemente un medicamento o está destinado al uso como un medicamento (que incluye profilaxis y diagnóstico) y para este propósito contiene preferiblemente al menos un ISVD contra una diana terapéuticamente relevante (tal como por ejemplo RANK- L, vWF, IgE, RSV, CXCR4, IL-23 u otras interleuquinas, etc.). Para algunos ejemplos específicos pero no limitantes de dichos productos biológicos basados en nanocuerpos o basados en ISVD, se hace referencia a los Ejemplos 8 a 18 y también, por ejemplo, a las diversas aplicaciones de Ablynx NV (tales como por ejemplo y sin limitación documentos WO 2004/062551, WO 2006/122825, WO 2008/020079 y ^{W o} 2009/068627), así como por ejemplo (y sin limitación) a solicitudes tales como WO 2006/038027, WO 2006/059108, WO 2007/063308, WO 2007/063311, WO 2007/066016 y WO 2007/085814. Además, como se describe con más detalle en el presente documento, el motivo adicional puede ser un ISVD o nanocuerpo como se describe en el presente documento dirigido contra una proteína del suero (humano) tal como la albúmina sérica (humana), y dicho ISVD o nanocuerpo también puede encontrar usos terapéuticos, en particular en y/o para extender la semivida de los ligantes de TNF descritos en el presente documento. Se hace referencia, por ejemplo, a los documentos WO 2004/041865, WO 2006/122787 y WO 2012/175400, que describen en general el uso de nanocuerpos que se unen a albúmina sérica para prolongar la semivida. Además, en la presente memoria descriptiva, a menos que se mencione explícitamente lo contrario en el presente documento, todos los términos mencionados en el presente documento tienen el significado dado en el documento WO 2009/138519 (o en la técnica anterior citada en WO 2009/138519) o WO 2008/020079 (o en la técnica anterior citada en WO 2008/020079). Además, cuando un método o técnica no se describe específicamente en el presente documento, se puede llevar a cabo como se describe en el documento WO 2009/138519 (o en la técnica anterior citada en ^{W o} 2009/138519) o WO 2008/020079 (o en la técnica anterior citada en WO 2008/020079). Además, como se describe en el presente documento, cualquier producto farmacéutico o composición que comprende cualquier ISVD o compuesto de la invención también puede comprender uno o más componentes adicionales conocidos per se para usar en productos o composiciones farmacéuticas (es decir, dependiendo de la forma farmacéutica prevista) y/o para ejemplo, uno o más de otros compuestos o principios activos previstos para uso terapéutico (es decir, para proporcionar un producto de combinación).

Además, cuando se usan en la presente memoria descriptiva o en las reivindicaciones, los siguientes términos tienen el mismo significado que se da en, y/o cuando sea aplicable se pueden determinar de la manera descrita en las páginas 62-75 del documento WO 2009/138519: "agonista", "antagonista", "agonista inverso", "resto de aminoácido no polar no cargado", "resto de aminoácido polar no cargado", "resto de aminoácido polar, cargado", "identidad de secuencia", "exactamente iguat' y "diferencia de aminoácidos" (cuando se refiere a una comparación de secuencias de dos secuencias de aminoácidos), "(en) (forma) esencialmente aislada", "dominio", "dominio de unión", "determinante antigénico", "epítopo", "contra" o "dirigido contra" (un antígeno), "especificidad' y "semivida". Además, los términos "modulación" y "modular", "sitio de interacción", "específico para", "bloqueo cruzado", "bloqueado cruzado" y "bloqueamiento cruzado" y "esencialmente independiente del pH son como se definen en (y/o se pueden determinar como se describe en) las páginas 74-79 del documento WO 2010/130832 de Ablynx NV. Además, cuando se hace referencia a una construcción, compuesto, proteína o polipéptido de la invención, términos como "monovalente", "bivalente" (o "multivalente"), "biespecífico" (o "multiespecífico") y "biparatópico" (o "multiparatópico") pueden tener el significado dado en los documentos ^{W o} 2009/138519, WO 2010/130832 o WO 2008/020079.

El término "semivida" como se usa aquí en relación con un ISVD, nanocuerpo, producto biológico basado en ISVD, producto biológico basado en nanocuerpo o cualquier otra secuencia de aminoácidos, compuesto o polipéptido mencionado en el presente documento, se puede definir en general como se describe en el párrafo o) en la página 57 del documento WO 2008/020079 y como se menciona en el mismo se refiere al tiempo necesario para que la concentración en el suero de la secuencia de aminoácidos, compuesto o polipéptido se reduzca en 50%, in vivo, por ejemplo debido a la degradación de la secuencia o compuesto y/o aclaramiento o secuestro de la secuencia o compuesto por mecanismos naturales. La semivida in vivo de una secuencia de aminoácidos, compuesto o polipéptido de la invención se puede determinar de cualquier manera conocida, tal como por análisis farmacocinético. Las técnicas adecuadas estarán claras para el experto en la técnica y, por ejemplo, pueden ser en general como se describe en el párrafo o) en la página 57 del documento WO 2008/020079. Como se menciona también en el párrafo o) en la página 57 del documento WO 2008/020079, la semivida se puede expresar usando parámetros tales como t1 /2-alfa, t1/2-beta y el área bajo la curva (AUC). En relación con esto, debe indicarse que el término "semivida", como se usa en el presente documento se refiere en particular a la semivida t1/2-beta o terminal (en la que el t1/2-alfa y/o el AUC o ambos pueden mantenerse fuera de las consideraciones). Se hace referencia, por ejemplo, a la Parte Experimental a continuación, así como a los manuales estándar, tales como Kenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists y Peters et al., Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996). También se hace referencia a "Pharmacokinetics", M Gibaldi y D Perron, publicado por Marcel Dekker, 2a edición Rev. (1982). De manera similar, las expresiones "aumento en la semivida" o "semivida mayor" también son como se definen en el párrafo o) en la página 57 del documento WO 2008/020079 y en particular se refieren a un aumento en el t1/2-beta, ya sea con o sin un aumento en el t1/2-alfa y/o el AUC o ambos.

Cuando un término no se define específicamente en el presente documento, tiene su significado habitual en la técnica, que estará claro para el experto en la técnica. Se hace referencia, por ejemplo, a los manuales estándar, tales como Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2a Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); F. Ausubel et al., eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987); Lewin, "Genes II", John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985); Old et al., "Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering", 2a edición, University of California Press, Berkeley, CA (1981); Roitt et al., "Immunology" (6a. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001); Roitt et al., Roitt's Essential Immunology, 10a Ed. Blackwell Publishing, UK (2001); y Janeway et al., "Immunobiology" (6a Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005), así como a la técnica anterior general citada en los mismos.

Además, como ya se indicó en el presente documento, los restos de aminoácidos de un nanocuerpo se numeran de acuerdo con la numeración general para los VH proporcionada por Kabat et al. ("Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publicación N° 91), como se aplica a los dominios VHH de camélidos en el artículo de Riechmann y Muyldermans, J. Immunol. Methods 23 de junio de 2000; 240 (1-2): 185-195; o mencionado en el presente documento. De acuerdo con esta numeración, la FR1 de un nanocuerpo comprende los restos de aminoácidos en las posiciones 1-30, la CDR1 de un nanocuerpo comprende los restos de aminoácidos en las posiciones 31-35, la FR2 de un nanocuerpo comprende los aminoácidos en las posiciones 36-49, la CDR2 de un nanocuerpo comprende los restos de aminoácidos en las posiciones 50-65, la FR3 de un nanocuerpo comprende los restos de aminoácidos en las posiciones 66-94, la CDR3 de un nanocuerpo comprende los restos de aminoácidos en las posiciones 95-102, y la FR4 de un nanocuerpo comprende los restos de aminoácidos en las posiciones 103-113. [En relación con esto, hay que indicar que, como es bien conocido en la técnica para los dominios VH y para los dominios VHH, el número total de restos de aminoácidos en cada una de las CDR puede variar y puede no corresponder al número total de restos de aminoácidos indicados por la numeración de Kabat (es decir, una o más posiciones de acuerdo con la numeración de Kabat pueden no estar ocupadas en la secuencia real, o la secuencia real puede contener más restos de aminoácidos que el número permitido por la numeración de Kabat). Esto significa que, en general, la numeración según Kabat puede corresponder o no a la numeración real de los restos de aminoácidos en la secuencia real. Sin embargo, en general se puede decir que, de acuerdo con la numeración de Kabat e independientemente del número de restos de aminoácidos en las CDR, la posición 1 de acuerdo con la numeración de Kabat corresponde al inicio de FR1 y viceversa, la posición 36 de acuerdo con la numeración de Kabat corresponde al inicio de FR2 y viceversa, la posición 66 de acuerdo con la numeración de Kabat corresponde al inicio de FR3 y viceversa, y la posición 103 de acuerdo con la numeración de Kabat corresponde al inicio de FR4 y viceversa].

Métodos alternativos para numerar los restos de aminoácidos de los dominios VH, cuyos métodos también se pueden aplicar de manera análoga a los dominios VHH de camélidos y a nanocuerpos, son el método descrito por Chothia et al. (Nature 342, 877-883 (1989)), la denominada "definición de AbM" y la denominada "definición de contacto". Sin embargo, en la presente descripción, aspectos y figuras, se seguirá la numeración según Kabat como se aplica a los dominios VHH por Riechmann y Muyldermans, a menos que se indique lo contrario.

También hay que indicar que las figuras, cualquier lista de secuencias y la parte experimental/ejemplos solo se dan para ilustrar más la invención y no deben interpretarse o considerarse como limitantes del alcance de la invención y/o de las reivindicaciones adjuntas de ninguna manera, a menos que se indique explícitamente lo contrario en el presente documento.

Como se describe además en el presente documento, los ligantes de albúmina sérica de la invención se pueden usar con ventaja como un motivo, unidad de unión o pareja de fusión con el fin de aumentar la semivida de motivos terapéuticos tales como polipéptidos, proteínas, compuestos (que incluyen, sin limitación, moléculas pequeñas) u otras entidades terapéuticas.

Por lo tanto, en otro aspecto, la invención proporciona polipéptidos, proteínas, construcciones, compuestos u otras entidades químicas que comprenden o consisten esencialmente en un ligante de albúmina sérica de la invención y una o más secuencias de aminoácidos, dominios (de unión), unidades de unión u otros restos o entidades químicas. En particular, la invención proporciona polipéptidos, proteínas, construcciones, compuestos u otras entidades químicas que comprenden un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más (tal como uno o dos) restos terapéuticos (que pueden ser iguales o diferentes, y pueden por ejemplo, estar dirigidos contra la misma diana o diferentes dianas, y cuando se dirigen a la misma diana, se pueden dirigir hacia el mismo o diferentes epítopos, partes, dominios o subunidades de dicha diana), conectados adecuadamente entre sí, ya sea directamente o a través de uno o más conectores o espaciadores adecuados. Dichos polipéptidos, proteínas o construcciones pueden ser, por ejemplo, y sin limitación, una proteína de fusión, como se describe adicionalmente en el presente documento.

La descripción se refiere además a usos terapéuticos de dichos polipéptidos, proteínas, construcciones o compuestos y a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos polipéptidos, proteínas, construcciones o compuestos.

En un aspecto, el al menos un motivo terapéutico comprende o consiste esencialmente en una proteína, polipéptido, compuesto, factor u otra entidad terapéutica. En una realización preferida, el motivo terapéutico se dirige contra un antígeno o diana deseado, es capaz de unirse a un antígeno deseado (y en particular es capaz de unirse específicamente a un antígeno deseado) y/o es capaz de interaccionar con una diana deseada. En otra realización, el al menos un motivo terapéutico comprende o consiste esencialmente en una proteína o polipéptido terapéutico. En una realización adicional, el al menos un motivo terapéutico comprende o consiste esencialmente en un dominio de unión o unidad de unión, tal como una inmunoglobulina o secuencia de inmunoglobulina (que incluye, pero no se limita a un fragmento de una inmunoglobulina), tal como un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo (que incluye, pero no se limita a un fragmento ScFv), o de otro armazón de proteína adecuado, tal como dominios de proteína A (tales como Affibodies™), tendamistat, fibronectina, lipocalina, CTLA-4, receptores de células T, repeticiones de anquirina diseñadas, avímeros y dominios PDZ (Binz et al., Nat. Biotech 2005, Vol 23:1257) y restos de unión basados en ADN o ARN que incluyen, pero no se limitan a aptámeros de ADN o ARN (Ulrich et al., Comb Chem High Throughput Screen 20069 (8):619-32).

En otro aspecto más, el al menos un motivo terapéutico comprende o consiste esencialmente en un dominio variable de anticuerpo, tal como un dominio variable de cadena pesada o un dominio variable de cadena ligera.

En un aspecto preferido, el al menos un motivo terapéutico comprende o consiste esencialmente en al menos un dominio variable individual de inmunoglobulina, tal como un anticuerpo de dominios, anticuerpo de dominio único, "dAb" o nanocuerpo (tal como un VHH, un VHH humanizado o un VH camelizado) o un dominio IgNAR.

En una realización específica, el al menos un motivo terapéutico comprende o consiste esencialmente en al menos un nanocuerpo monovalente o una construcción de nanocuerpo bivalente, multivalente, biespecífico o multiespecífico.

Los polipéptidos, proteínas (de fusión), construcciones o compuestos que comprenden un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más restos terapéuticos en general se pueden (preparar y usar) como se describe en la técnica anterior citada anteriormente (tal como los documentos WO 04/041865 y WO 06/122787), pero con un ligante de albúmina sérica de la invención en lugar de los restos que aumentan la semivida descritos en dicha técnica anterior.

Los polipéptidos, proteínas (de fusión), construcciones o compuestos que comprenden un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más motivos terapéuticos tendrán generalmente y preferiblemente una semivida aumentada, en comparación con el motivo o motivos terapéuticos por sí mismos.

En general, las construcciones o proteínas de fusión descritas en el presente documento preferiblemente tienen una semivida que es al menos 1,5 veces, preferiblemente al menos 2 veces, tal como al menos 5 veces, por ejemplo al menos 10 veces o más de 20 veces, mayor que la semivida del motivo terapéutico correspondiente por sí mismo (medida en el hombre o en un animal adecuado, tal como un ratón o un macaco cangrejero).

Además, preferiblemente, cualquier proteína de fusión o construcción tiene una semivida en el hombre que aumenta en más de 1 hora, preferiblemente más de 2 horas, más preferiblemente en más de 6 horas, tal como en más de 12 horas, en comparación con la semivida del motivo terapéutico correspondiente por sí mismo.

Además, preferiblemente, cualquier proteína de fusión o construcción tiene una semivida (definida como t1/2 beta) en el hombre que es de más de 1 hora, preferiblemente más de 2 horas, más preferiblemente de más de 6 horas, tal como de más de 12 horas, y por ejemplo de aproximadamente un día, dos días, una semana, dos semanas y hasta la semivida de la albúmina sérica en el hombre (estimada en aproximadamente 19 días), aunque esta última puede ser menos crítica.

La semivida se puede definir en general como el tiempo que tarda la concentración del polipéptido en el suero en reducirse en 50%, in vivo, por ejemplo, debido a la degradación del ligando y/o el aclaramiento o secuestro del ligando por mecanismos naturales. En particular, la semivida puede ser como se define en el documento WO 2009/068627.

Los métodos para el análisis farmacocinético y la determinación de la semivida son familiares para los expertos en la técnica. Se pueden encontrar detalles en Kenneth, A et al.: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists y en Peters et al., Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996). También se hace referencia a "Pharmacokinetics", M Gibaldi y D Perron, publicado por Marcel Dekker, 2a edición revisada (1982).

Como se mencionó, en un aspecto, se puede usar un ligante de albúmina sérica de la invención para aumentar la semivida de (uno o más) dominios variables individuales de inmunoglobulina, tales como anticuerpos de dominios anticuerpos de dominio único, "dAb", VHH o nanocuerpos (tales como los VHH, VHH humanizados o VH camelizados, tales como VH humanos camelizados).

Por lo tanto, una realización de la invención se refiere a un polipéptido, construcción o proteína de fusión que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y una o más (tal como una o dos) secuencias de dominio variable individual de inmunoglobulina, que están adecuadamente unidas entre sí, ya sea directamente u opcionalmente a través de uno o más conectores o espaciadores adecuados. Como se menciona en el presente documento, cada uno de dichos dominios variables individuales de inmunoglobulina presentes en dicho polipéptido, construcción o proteína de fusión puede ser independientemente un anticuerpo de dominios, anticuerpo de dominio único, "dAb" o nanocuerpo (tal como un VHH, VHH humanizado o VH camelizado, tal como como un VH humano camelizado); y de acuerdo con un aspecto específico pero no limitante, al menos uno (y hasta todos) de estos dominios variables individuales de inmunoglobulina comprende dos o tres puentes disulfuro.

Como se mencionó, cuando el polipéptido, la construcción de proteína de fusión tiene un ISVD de cadena pesada en su extremo C-terminal (cuyo IVSD puede ser un ligante de albúmina sérica de la invención o un ISVD contra una diana terapéutica, tal como un nanocuerpo contra un diana), entonces el (ISVD presente en el extremo C-terminal del) polipéptido, construcción de proteína de fusión tiene preferiblemente una extensión C-terminal en su extremo C-terminal. De nuevo, dicha extensión C-terminal será de fórmula (X)ⁿ, en la que n es de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4 o 5 (y preferiblemente 1 o 2, tal como 1); y cada X es un resto de aminoácido (preferiblemente de origen natural) que se elige independientemente de restos de aminoácidos de origen natural (aunque según un aspecto preferido, no comprende ningún resto de cisteína), y preferiblemente se elige independientemente del grupo que consiste en alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) o isoleucina (I).

Como se mencionó, cuando el polipéptido, construcción de proteína de fusión tiene una ISVD de cadena pesada en su extremo N-terminal (cuyo IVSD puede ser un ligante de albúmina sérica de la invención o un ISVD contra una diana terapéutica, tal como un nanocuerpo contra una diana terapéutica), entonces el (ISVD presente en el extremo C-terminal de) polipéptido, construcción de proteína de fusión tiene preferiblemente una mutación de D o E1D en la posición 1..

Por lo tanto, en otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto que:

- comprende o consiste esencialmente en al menos un (y preferiblemente solo uno) ligante de albúmina sérica de la invención y al menos un (tal como un, dos o tres) motivo o entidad terapéutica (en la que dicho ligante de albúmina sérica y el uno o más motivos o entidades terapéuticas están adecuadamente conectados, opcionalmente por uno o más conectores adecuados);

- tiene un ISVD de cadena pesada en su extremo C-terminal, en el que el ISVD en el extremo C-terminal tiene una extensión C-terminal (X)ⁿ (como se describe adicionalmente en el presente documento);

- cuya proteína, polipéptido u otro compuesto también puede tener un ISVD de cadena pesada en su extremo N-terminal, en cuyo caso dicho extremo N-terminal de ISVD preferiblemente tiene un D o una E1D en la posición 1. Además, en un aspecto preferido, cuando además del ligante de albúmina sérica de la invención, están presentes uno o más ISVD distintos (es decir, cuando uno o más de las motivos terapéuticos presentes son ISVD), entonces (uno o más o todos de) dichos ISVD “terapéuticos” preferiblemente también tienen (una combinación de) restos/mutaciones de aminoácidos que reducen la unión por anticuerpos preexistentes. Cuando los ISVD son ISVD de cadena pesada, entonces estas mutaciones en particular pueden ser, como se describe en el documento PCT/EP2015/060643, (una combinación adecuada de) una o más mutaciones en las posiciones 11, 89, 110 y 112 que pueden ser esencialmente el mismo tipo de mutaciones (o combinación de mutaciones) como se describe en el presente documento para los ligantes de albúmina sérica de la invención. Preferiblemente, si dicho otro ISVD está presente en el extremo C-terminal, entonces al menos dicho ISVD terapéutico comprende dichas mutaciones en las posiciones 11, 89, 110 y/o 112 (es decir, además de una extensión C-terminal como se describe en el presente documento).

De acuerdo con un aspecto específico, todos los motivos terapéuticos presentes en la construcción, proteína de fusión o polipéptido son ISVD (es decir, ISVD contra una diana terapéutica), y en particular ISVD de cadena pesada, y más en particular nanocuerpos (p. ej., nanocuerpos contra una diana terapéutica).

Por ejemplo, y sin limitación, una construcción, proteína de fusión o polipéptido que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención puede comprender:

- una copia de un ligante de albúmina sérica de la invención y un ISVD (y preferiblemente nanocuerpo) contra una diana terapéutica; o

- una copia de un ligante de albúmina sérica de la invención y dos ISVD (y preferiblemente dos nanocuerpos) contra una diana terapéutica (cuyos ISVD pueden ser iguales o diferentes y cuando son diferentes pueden estar dirigidos contra la misma diana, contra diferentes epítopos en la misma diana o contra diferentes dianas terapéuticas); o - una copia de un ligante de albúmina sérica de la invención y tres ISVD (y preferiblemente tres nanocuerpos) contra una diana terapéutica (cuyos ISVD pueden ser iguales o diferentes y cuando son diferentes pueden estar dirigidos contra la misma diana, contra diferentes epítopos en la misma diana o contra diferentes dianas terapéuticas). Algunos ejemplos no limitantes de construcciones, proteínas de fusión o polipéptidos de la invención se pueden representar esquemáticamente de la siguiente manera, en la que "[Alb]" representa un ligante de albúmina sérica de la invención, "[motivo terapéutico 1]" y "[motivo terapéutico 2]" representan los motivos terapéuticos (que, como se mencionó, pueden ser cada uno independientemente un dominio variable individual de inmunoglobulina), "-" representa un conector adecuado (el cual es opcional; ejemplos adecuados son conectores 9GS y 35GS) y el extremo N está en el lado izquierdo y el extremo C está en el lado derecho:

[Alb] -[motivo terapéutico 1]

[motivo terapéutico 1] -[Alb]-X⁽ⁿ⁾

[Alb] -[motivo terapéutico 1] -[motivo terapéutico 1]

[motivo terapéutico 1] -[motivo terapéutico 1] -[Alb]-X⁽ⁿ⁾

[motivo terapéutico 1] -[Alb] -[motivo terapéutico 1]

[Alb] -[motivo terapéutico 1] -[motivo terapéutico 2]

[motivo terapéutico 1] -[motivo terapéutico 2] -[Alb]-X⁽ⁿ⁾

[motivo terapéutico 1] -[Alb] -[motivo terapéutico 2]

Cuando los restos terapéuticos son ISVD (y preferiblemente nanocuerpos) contra una diana terapéutica, las construcciones, proteínas de fusión o polipéptidos de la invención preferidos pero no limitantes se pueden representar esquemáticamente como sigue, en los que "[Alb]" representa un ligante de albúmina sérica de la invención, "[ISVD 1 terapéutico]" y "[ISVD 2 terapéutico]" representan ISVD contra una diana terapéutica (cuyos ISVD pueden ser iguales o diferentes y cuando son diferentes pueden estar dirigidos contra la misma diana, contra diferentes epítopos en la mismo diana o contra diferentes dianas terapéuticas), "-" representa un conector adecuado (que es opcional), X(n) representa una extensión C-terminal como se describe en el presente documento, y el extremo N está en el lado izquierdo y el extremo C está en el lado derecho:

[Alb] -[ISVD 1 terapéutico] -X⁽ⁿ⁾

[ISVD 1 terapéutico] -[Alb]-X⁽ⁿ⁾

[Alb] -[ISVD 1 terapéutico] -[ISVD 1 terapéutico] -X⁽ⁿ⁾

[ISVD 1 terapéutico] -[ISVD 1 terapéutico] -[Alb]-X⁽ⁿ⁾

[ISVD 1 terapéutico] -[Alb] -[ISVD 1 terapéutico] -X⁽ⁿ⁾

[Alb] -[ISVD 1 terapéutico] -[ISVD 2 terapéutico] -X⁽ⁿ⁾

[ISVD 1 terapéutico] -[ISVD 2 terapéutico] -[Alb]-X⁽ⁿ⁾

[ISVD 1 terapéutico] -[Alb] -[ISVD 2 terapéutico] -X⁽ⁿ⁾

Por lo tanto, en otro aspecto, la invención se refiere a una construcción de nanocuerpos multiespecífica (y en particular biespecífica) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y al menos otro nanocuerpo (tal como uno o dos de otros nanocuerpos, que pueden ser iguales o diferente), en el que dicho al menos otro nanocuerpo se dirige preferiblemente contra una diana deseada (que es preferiblemente una diana terapéutica) y/u otro nanocuerpo que es útil o adecuado para fines terapéuticos, profilácticos y/o de diagnóstico. De nuevo, el ligante de albúmina sérica de la invención y los otros nanocuerpos se pueden unir adecuadamente entre sí, ya sea directamente u opcionalmente a través de uno o más conectores o espaciadores adecuados.

Para una descripción general de polipéptidos multivalentes y multiespecíficos que contienen uno o más nanocuerpos y su preparación, también se hace referencia a Conrath et al., J. Biol. Chem, Vol. 276, 10. 7346-7350, 2001; Muyldermans, Reviews in Molecular Biotechnology 74 (2001), 277-302; así como, por ejemplo, WO 96/34103, WO 99/23221, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 o WO 2009/068627.

Algunos otros ejemplos de algún polipéptido multiespecífico y/o multivalente específico de la invención se pueden encontrar en las solicitudes de Ablynx N.V. mencionadas en el presente documento. En particular, para una descripción general de construcciones multivalentes y multiespecíficas que comprenden al menos un nanocuerpo contra una proteína sérica para aumentar la semivida, de ácidos nucleicos que codifican las mismas, de composiciones que las comprenden, de la preparación de lo mencionado anteriormente, y de usos de lo mencionado anteriormente, se hace referencia a las solicitudes internacionales WO 04/041865 y WO 06/122787 mencionadas anteriormente (los ligantes de albúmina sérica de la invención descrita en el presente documento en general se pueden usar de manera análoga a los nanocuerpos que prolongan la semivida descritos en las mismas, tales como Alb-8), así como a la descripción general y ejemplos específicos de dichas construcciones dadas, por ejemplo, en los documentos WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 o WO 2009/068627.

En un aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales (p. ej. nanocuerpos o anticuerpos de dominio (único) que comprenden o derivan de un dominio VH), en los que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- el resto de aminoácido en la posición 11 se elige preferiblemente de L o V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, V o L; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q; y

- el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q;

de modo que (i) la posición 89 es T; o (ii) la posición 89 es L y la posición 11 es V; o (iii) la posición 89 es L y la posición 110 es K o Q; o (iv) la posición 89 es L y la posición 112 es K o Q; o (v) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (vi) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q; o (vii) la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o (vii) la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q.

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- 89T; o

- 89L en combinación con 11V; o

- 89L en combinación con 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 112K o 112Q; o

- 89L en combinación con 11V y 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 11V y 112K o 112Q; o

- 11V en combinación con 110K o 110Q; o

- 11V en combinación con 112K o 112Q.

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- el resto de aminoácido en la posición 11 se elige preferiblemente de L o V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 es T; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q (y es preferiblemente T); y

- el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q (y en preferiblemente S).

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- el resto de aminoácido en la posición 11 es V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 es L; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q; y - el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q. En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- 11V en combinación con 89L; o

- 11V en combinación con 110K o 110Q;

- 11V en combinación con 112K o 112Q;

- 11V en combinación con 89L y 110K o 110Q; o

- 11V en combinación con 89L y 112K o 112Q.

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- 89L en combinación con 11V; o

- 89L en combinación con 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 112K o 112Q; o

- 89L en combinación con 11V y 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 11V y 112K o 112Q.

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- 110K o 110Q en combinación con 11V; o

- 110K o 110Q en combinación con 89L; o

- 110K o 110Q en combinación con 11V y 89L.

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos los siguientes restos de aminoácidos:

- 112K o 112Q en combinación con 11V; o

- 112K o 112Q en combinación con 89L; o

- 112K o 112Q en combinación con 11V y 89L.

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos una T en la posición 89.

En otro aspecto, la invención se refiere a una proteína, polipéptido u otro compuesto o construcción (y preferiblemente una proteína de fusión) que comprende un ligante de albúmina sérica de la invención y uno o más ISVD de cadena pesada adicionales, en el que dicho ligante de albúmina sérica y dicho uno o más ISVD de cadena pesada adicionales contienen todos una V en la posición 11 y una L en la posición 89.

De nuevo, todos estos polipéptidos contienen preferiblemente una extensión C-terminal X(n) (como se describe en el presente documento) y un D en la posición 1, y como se describe adicionalmente en el presente documento pueden contener un ISVD que se une a la albúmina sérica. También tienen una semivida que es como se describe con más detalle en el presente documento.

La invención también se refiere a secuencias de nucleótidos o ácidos nucleicos que codifican los ligantes de albúmina, compuestos o polipéptidos de la invención. La invención incluye además construcciones genéticas que incluyen las secuencias de nucleótidos o ácidos nucleicos anteriores y uno o más elementos para construcciones genéticas conocidas per se. La construcción genética puede estar en forma de plásmido o vector. De nuevo, dichas construcciones pueden ser en general como se describe en las solicitudes de patente publicadas de Ablynx N.V., tales como, por ejemplo, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 o WO 2009/068627.

La invención también se refiere a hospedantes o células hospedantes que contienen dichas secuencias de nucleótidos o ácidos nucleicos, y/o que expresan (o son capaces de expresar) los ligantes de albúmina, compuestos o polipéptidos de la invención. De nuevo, dichas células hospedantes pueden ser en general como se describe en las solicitudes de patente publicadas de Ablynx N.V., tales como, por ejemplo, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 o WO 2009/068627.

La invención también se refiere a un método para preparar un ligante de albúmina, compuesto o polipéptido de la invención, cuyo método comprende cultivar o mantener una célula hospedante como se describe en el presente documento en condiciones tales que dicha célula hospedante produce o expresa un ligante de albúmina, compuesto o polipéptido de la invención, y opcionalmente comprende además aislar el ligante de albúmina, compuesto o polipéptido de la invención así producido. De nuevo, dichos métodos se pueden llevar a cabo como se describe en general en las solicitudes de patente publicadas de Ablynx N.V., tales como, por ejemplo, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 o WO 2009/068627.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto o polipéptido de la invención, y opcionalmente al menos un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Dichas preparaciones, vehículos, excipientes y diluyentes pueden ser en general como se describe en las solicitudes de patente publicadas de Ablynx NV, tales como por ejemplo WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 o WO 2009/068627.

Sin embargo, puesto que los compuestos o polipéptidos de la invención tienen una semivida mayor, preferiblemente se administran a la circulación. Así pues, se pueden administrar de cualquier manera adecuada que permita que el compuesto o polipéptido de la invención entre en la circulación, tal como por vía intravenosa, por inyección o infusión, o de cualquier otra manera adecuada (incluida la administración oral, administración subcutánea, administración intramuscular, administración a través de la piel, administración intranasal, administración a través de los pulmones, etc.). Los métodos y vías de administración adecuados estarán claros para el experto, de nuevo, por ejemplo, también a partir de la enseñanza de las solicitudes de patente publicadas de Ablynx NV, tales como, por ejemplo, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 o WO 2009/068627.

Por lo tanto, en otro aspecto, la invención se refiere a un compuesto o polipéptido como se define en las reivindicaciones para usar en un método para la prevención y/o tratamiento de al menos una enfermedad o trastorno que se puede prevenir o tratar mediante el uso de dicho compuesto o polipéptido de la invención, cuyo método comprende administrar, a un sujeto que lo necesite, una cantidad farmacéuticamente activa de dicho compuesto o polipéptido de la invención, y/o de una composición farmacéutica que lo comprenda. Las enfermedades y trastornos que se pueden prevenir o tratar mediante el uso de un compuesto o polipéptido de la invención como se define en las reivindicaciones serán en general los mismos que las enfermedades y trastornos que se pueden prevenir o tratar mediante el uso del motivo o motivos terapéuticos que está/están presentes en el compuesto o polipéptido de la invención.

En el contexto de la presente invención, la expresión "prevención y/o tratamiento" no solo comprende prevenir y/o tratar la enfermedad, sino que también comprende en general prevenir la aparición de la enfermedad, retardar o revertir el progreso de la enfermedad, prevenir o ralentizar la aparición de uno o más síntomas asociados con la enfermedad, reducir y/o aliviar uno o más síntomas asociados con la enfermedad, reducir la gravedad y/o la duración de la enfermedad y/o cualquier síntoma asociado con la misma y/o prevenir un aumento adicional de la gravedad de la enfermedad y/o de cualquier síntoma asociado con la misma, previniendo, reduciendo o revertiendo cualquier daño fisiológico causado por la enfermedad y, en general, cualquier acción farmacológica que sea beneficiosa para el paciente que está siendo tratado.

El sujeto para tratar puede ser cualquier animal de sangre caliente, pero es en particular un mamífero, y más en particular un ser humano. Como estará claro para el experto, el sujeto para tratar será en particular una persona que padezca o esté en riesgo de padecer las enfermedades y trastornos mencionados en el presente documento.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto o polipéptido como se define en las reivindicaciones para usar en un método para inmunoterapia, y en particular para inmunoterapia pasiva, cuyo método comprende administrar, a un sujeto que padece o está en riesgo de padecer las enfermedades y trastornos mencionados en el presente documento, una cantidad farmacéuticamente activa de dicho compuesto o polipéptido de la invención, y/o de una composición farmacéutica que lo comprende.

El compuesto o polipéptido de la invención y/o las composiciones que lo comprenden se pueden administrar de acuerdo con una pauta de tratamiento que sea adecuada para prevenir y/o tratar la enfermedad o trastorno que se va a prevenir o tratar. El médico en general podrá determinar una pauta de tratamiento adecuada, dependiendo de factores tales como la enfermedad o trastorno que se va a prevenir o tratar, la gravedad de la enfermedad que se va a tratar y/o la gravedad de sus síntomas, el polipéptido específico de la invención que se va a usar, la vía de administración específica y la formulación o composición farmacéutica que se va a usar, la edad, sexo, peso, dieta, estado general del paciente y factores similares bien conocidos por el médico.

En general, la pauta de tratamiento comprenderá la administración de uno o más compuestos o polipéptidos de la invención, o de una o más composiciones que los comprenden, en una o más cantidades o dosis farmacéuticamente eficaces. El médico puede determinar la(s) cantidad(es) o dosis específicas para administrar, de nuevo basándose en los factores citados anteriormente.

En general, para la prevención y/o el tratamiento de las enfermedades y trastornos mencionados en el presente documento y dependiendo de la enfermedad o trastorno específico a tratar, la potencia y/o la semivida de los compuestos o polipéptidos de la invención para usar, la vía de administración específica y la formulación o composición farmacéutica específica usadas, los compuestos o polipéptidos de la invención en general se administrarán en una cantidad entre 1 gramo y 0,01 microgramos por kg de peso corporal por día, preferiblemente entre 0,1 gramos y 0,1 microgramos por kg de cuerpo peso por día, tal como aproximadamente 1, 10, 100 o 1000 microgramos por kg de peso corporal por día, ya sea de forma continua (p. ej., por infusión), como una sola dosis diaria o como múltiples dosis divididas durante el día. El médico en general podrá determinar una dosis diaria adecuada, dependiendo de los factores mencionados en el presente documento. También quedará claro que en casos específicos el médico puede optar por desviarse de estas cantidades, por ejemplo, basándose en los factores citados anteriormente y su criterio de experto. En general, se puede obtener cierta orientación sobre las cantidades a administrar a partir de las cantidades administradas habitualmente para anticuerpos convencionales comparables o fragmentos de anticuerpos contra la misma diana administrados esencialmente por la misma vía, teniendo en cuenta, sin embargo, las diferencias en afinidad/avidez, eficacia, biodistribución, semivida y factores similares bien conocidos por el experto en la materia.

Además, puesto que los compuestos de la invención contienen un ligante de albúmina sérica que prolonga la semivida de la invención, no es necesario administrarlos esencialmente de forma continua (p. ej., por infusión), sino que se pueden administrar a intervalos adecuados (que determinará el experto). Por ejemplo, se pueden administrar (con una dosis adecuada) una vez cada dos días, una vez cada cuatro días, una vez a la semana, una vez cada dos semanas y en algunos casos una vez cada cuatro semanas o incluso con menos frecuencia, por ejemplo por inyección o infusión.

Un aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto o polipéptido de la invención en donde dicha composición está destinada a la administración en un intervalo entre una vez por semana y una vez cada 4 semanas, y en particular entre una vez cada 7 días y una vez cada 21 días, tal como una vez cada 7 días o 14 días.

Normalmente, en el método anterior, se usará un único polipéptido de la invención. Sin embargo, también se pueden usar en combinación dos o más polipéptidos de la invención.

Los polipéptidos de la invención también se pueden usar en combinación con uno o más compuestos o principios farmacéuticamente activos adicionales, es decir, como un régimen de tratamiento combinado, que puede conducir o no a un efecto sinérgico. De nuevo, el médico podrá seleccionar dichos compuestos o principios adicionales, así como un régimen de tratamiento combinado adecuado, basándose en los factores citados anteriormente y su criterio experto.

En particular, los polipéptidos de la invención se pueden usar en combinación con otros compuestos o principios farmacéuticamente activos que se usan o pueden usar para la prevención y/o tratamiento de enfermedades y trastornos que se pueden prevenir o tratar con las proteínas de fusión o construcciones de la invención, y como resultado de lo cual se puede obtener o no un efecto sinérgico.

La eficacia de la pauta de tratamiento usado de acuerdo con la invención se puede determinar y/o seguir de cualquier manera conocida per se para la enfermedad o trastorno implicado, como quedará claro para el médico. El médico también podrá, cuando sea apropiado y o caso por caso, cambiar o modificar una pauta de tratamiento particular, para lograr así el efecto terapéutico deseado, evitar, limitar o reducir los efectos secundarios no deseados, y/o para lograr un equilibrio apropiado entre lograr el efecto terapéutico deseado por un lado y evitar, limitar o reducir los efectos secundarios no deseados por otro lado.

En general, se seguirá la pauta de tratamiento hasta que se logre el efecto terapéutico deseado y/o mientras se mantenga el efecto terapéutico deseado. De nuevo, esto puede ser determinado por el médico.

El sujeto que se va a tratar puede ser cualquier animal de sangre caliente, en particular un mamífero, y más en particular un ser humano. Como estará claro para el experto, el sujeto para tratar será, en particular, una persona que padece o está en riesgo de padecer las enfermedades y trastornos mencionados en el presente documento. La invención se describirá ahora con más detalle por medio de los siguientes aspectos, ejemplos y figuras preferidos no limitantes, en los que:

- La Figura 1 es una tabla que indica algunas de las posiciones de los aminoácidos a las que se hará referencia específicamente en el presente documento y su numeración de acuerdo con algunos sistemas de numeración alternativos (tales como Aho e IMGT);

- La figura 2 muestra una alineación de las secuencias de referencia a las que se hace referencia en el presente documento.

- La Figura 3 indica las secuencias de aminoácidos a las que se hace referencia en el presente documento;

- La Figura 4 muestra dos gráficos correspondientes de puntos de datos obtenidos en el Ejemplo 1 cuando se ensayó en 96 muestras de suero de sujetos humanos sanos la unión a la Referencia A y dos variantes representativas de la Referencia A según la invención (es decir, [Referencia A L11V V89L alanina C-terminal] y [Referencia A L11V V89L T110K alanina C-terminal], respectivamente). Cada punto representa el nivel de unión de una de las 96 muestras ensayadas. Los puntos de datos que se muestran en el panel de la derecha y en el panel de la izquierda son los mismos; en el panel de la derecha, los puntos de datos medidos con cada muestra individual para cada uno de los tres compuestos ensayados (es decir, Ref. A; Ref. A L11V V89L 114A; y Ref. A L11V V89L T110K 114A) están conectados por medio de una recta (como resultado, la declinación de la recta da una indicación de la extensión en que se reduce la unión por anticuerpos preexistentes cuando se introducen las mutaciones de la invención y la alanina C-terminal);

- La Figura 5 es una tabla que indica los datos de unión (3 columnas que dan niveles de unión de PreAb normalizados (UR a 700) y 3 columnas que dan el porcentaje de reducción en la unión de PreAb en comparación con el compuesto de referencia usado, respectivamente) de los puntos de datos compilados en la Figura 4;

- La Figura 6 muestra dos gráficos correspondientes de puntos de datos obtenidos en el Ejemplo 2 cuando se ensayó en 96 muestras de suero de sujetos humanos sanos la unión a la Referencia B y dos variantes representativas de la Referencia B de acuerdo con la invención (es decir, [Referencia B L11V V89L alanina C-terminal] y [Referencia B L11V V89L T110K alanina C-terminal], respectivamente). Cada punto representa el nivel de unión de una de las 96 muestras ensayadas. Los puntos de datos que se muestran en el panel de la derecha y en el panel de la izquierda son los mismos; en el panel de la derecha, los puntos de datos medidos con cada muestra individual para cada uno de los tres compuestos ensayados (es decir, Ref. B; Ref. B L11V V89L 114A; y Ref. B L11V V89L T110K 114A) están conectados por medio de una recta (como resultado, la declinación de la recta da una indicación de la extensión en que se reduce la unión por anticuerpos preexistentes cuando se introducen las mutaciones de la invención y la alanina C-terminal);

- La Figura 7 es una tabla que indica los datos de unión (3 columnas que dan niveles de unión de PreAb normalizados (UR a 700) y 2 columnas que dan el porcentaje de reducción en la unión de PreAb en comparación con el compuesto de referencia usado, respectivamente) de los puntos de datos compilados en la Figura 6;

- La Figura 8 muestra dos gráficos correspondientes de puntos de datos obtenidos en el Ejemplo 3 cuando se ensayó en 96 muestras de suero (66 de sujetos humanos sanos y 30 de sujetos que se supone que contienen anticuerpos preexistentes que pueden unirse en presencia de una alanina C-terminal, incluyendo 13 muestras de pacientes con LES) la unión a la Referencia C, la Referencia D y dos variantes representativas de la Referencia D de acuerdo con la invención (es decir, [Referencia D L11V V89L] y [Referencia D L11V V89L T110K], respectivamente). Cada punto representa el nivel de unión para una de las 96 muestras ensayadas. Los puntos de datos que se muestran en el panel de la derecha y en el panel de la izquierda son los mismos; en el panel de la derecha, los puntos de datos medidos con cada muestra individual para cada uno de los cuatro compuestos ensayados (es decir, Ref. C; Ref. D; Ref. D L11V V89L; y Ref. D L11V V89L T110K) están conectados por medio de una recta (como resultado, la declinación de la recta da una indicación de la extensión en que se reduce la unión de anticuerpos preexistentes cuando se introducen las mutaciones de la invención y la alanina C-terminal);

- La Figura 9 muestra un gráfico de los puntos de datos obtenidos para cuatro de las muestras de LES que se ensayaron en el Ejemplo 3. Los puntos de datos medidos para una muestra individual (es decir, "SLE 25", "SLE 37", "SLE39" y "SLE41", respectivamente) están conectados por medio de rectas (como resultado, la declinación de cada recta da una indicación de la extensión en que la unión por anticuerpos preexistentes se reduce en cada muestra cuando se introducen las mutaciones de la invención);

- La Figura 10 es una tabla que indica los datos de unión (4 columnas que dan niveles de unión de PreAb normalizados (UR a 700) y 3 columnas que dan el porcentaje de reducción en la unión de PreAb en comparación con los compuestos de referencia usados, respectivamente) de los puntos de datos compilados en la Figura 8.

Parte experimental

Las muestras humanas usadas en la parte experimental a continuación se obtuvieron de fuentes comerciales o de voluntarios humanos (después de obtener todos los consentimientos y aprobaciones requeridas) y se usaron de acuerdo con los requisitos legales y reglamentarios aplicables (incluyendo, pero no limitado a los relacionados con el secreto médico y la privacidad del paciente)

En los ejemplos siguientes, a menos que se indique explícitamente lo contrario, la unión de anticuerpos preexistentes que están presentes en las muestras usadas (es decir, de voluntarios sanos, pacientes con artritis reumatoide (AR) y pacientes con LES) a los nanocuerpos ensayados se determinó usando ProteOn como sigue:

Los nanocuerpos se capturaron en albúmina sérica o mediante un marcador FLAG3 usando anti-FLAG M2 monoclonal.

En caso de unión de anticuerpos preexistentes en nanocuerpos capturados en albúmina sérica humana (HSA), se evaluó usando el ProteOn XPR36 (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Se usó PBS/Tween (solución salina tamponada con fosfato, pH 7,4, Tween20 al 0,005%) como tampón de análisis y los experimentos se realizaron a 25°C. Los carriles de ligandos de un chip sensor GLC ProteOn se activaron con EDC/NHS (caudal 30 pl/min) y se inyectó HSA a 10 pg/ml en tampón de acetato ProteOn pH 4,5 (caudal 100 pl/min) para dar niveles de inmovilización de aproximadamente 3200 UR. Después de la inmovilización, las superficies se desactivaron con etanolamina HCl (caudal 30 pl/min). Se inyectaron nanocuerpos durante 2 minutos a 45 pl/min sobre la superficie de HSA para dar un nivel de captura de nanocuerpos de aproximadamente 200 UR. Las muestras que contenían anticuerpos preexistentes se centrifugaron durante 2 minutos a 14.000 rpm y el líquido sobrenadante se diluyó 1:10 en PBS-Tween20 (0,005%) antes de inyectarlo durante 2 minutos a 45 pl/min seguido de una etapa posterior de disociación de 400 segundos. Después de cada ciclo (es decir, antes de una nueva captura de nanocuerpos y etapa de inyección de muestra de sangre) las superficies de HSA se regeneraron con una inyección de 2 minutos de HCl (100 mM) a 45 pl/min. El procesamiento del sensograma y el análisis de datos se realizaron con ProteOn Manager 3.1.0 (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Se obtuvieron sensogramas que mostraban la unión de anticuerpos preexistente después de una doble referencia restando 1) la disociación de nanocuerpo-HSA y 2) la unión no específica al carril del ligando de referencia. Los niveles de unión de anticuerpos preexistentes se determinaron estableciendo los puntos de notificación a 125 segundos (5 segundos después del final de la asociación). Se calculó el porcentaje de reducción en la unión de anticuerpos preexistentes en relación con los niveles de unión a los 125 segundos de un nanocuerpo de referencia.

En caso de unión de anticuerpos preexistentes en nanocuerpos marcados con FLAG capturados en anti-FLAG monoclonal M2 (Sigma), se evaluó usando el ProteOn XPR36 (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Se usó PBS/Tween (solución salina tamponada con fosfato, pH 7,4, Tween20 al 0,005%) como tampón de análisis y los experimentos se llevaron a cabo a 25°C. Los carriles de ligandos de un chip sensor GLC ProteOn se activaron con EDC/NHS (caudal 30 pl/min) y se inyectó mAb anti-FLAG M2 a 10 pg/ml en tampón de acetato ProteOn pH 4,5 (caudal 100 pl/min) para dar niveles de inmovilización de aproximadamente 4000 UR. Después de la inmovilización, las superficies se desactivaron con etanolamina-HCl (caudal 30 pl/min). Se inyectaron nanocuerpos durante 2 minutos a 45 pl/min sobre la superficie del anti-FLAG M2 para dar un nivel de captura de nanocuerpos de aproximadamente 100 UR. Para reducir la unión no específica de las muestras de sangre a la superficie del anti-FLAG M2, se añadieron 3xpéptido FLAG 100 nM (Sigma) a las muestras de sangre. Las muestras que contenían anticuerpos preexistentes se centrifugaron durante 2 minutos a 14.000 rpm y el líquido sobrenadante se diluyó 1:10 en PBS-Tween20 (0,005%) antes de inyectarlo durante 2 minutos a 45 pl/min seguido de una etapa posterior de disociación de 600 segundos. Después de cada ciclo (es decir, antes de una nueva captura de nanocuerpos y etapa de inyección de muestra de sangre) las superficies anti-FLAG M2 se regeneraron con una inyección de 10 segundos de glicina pH 1,5 (10 mM) a 150 pl/min. El procesamiento del sensograma y el análisis de datos se realizaron con ProteOn Manager 3.1.0 (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Se obtuvieron sensogramas que muestran la unión de anticuerpos preexistente después de una doble referencia restando 1) disociación nanocuerpo-anti-FLAG M2 y 2) unión no específica al carril del ligando de referencia. Los niveles de unión de anticuerpos preexistentes se determinaron estableciendo los puntos de notificación a 125 segundos (5 segundos después del final de la asociación). Se calculó el porcentaje de reducción en la unión de anticuerpos preexistentes en relación con los niveles de unión a los 125 segundos de un nanocuerpo de referencia.

Ejemplo 1: La introducción de las mutaciones de la invención en la Referencia A (SEQ ID NO: 1) conduce a una reducción en la unión por anticuerpos preexistentes.

La Referencia A (SEQ ID NO: 1) y dos ejemplos representativos de las variantes mejoradas de la Referencia A que llevan las mutaciones de acuerdo con la invención (SEQ ID NO: 37 y 38, ambas con extensión de alanina y ensayadas con un marcador HIS6-FLAG3 N-terminal, véase la SEQ ID NO: 100) se ensayaron en la unión de anticuerpos preexistentes que están presentes en las muestras de 96 muestras de suero de voluntarios humanos sanos. Los compuestos se capturaron usando el marcador FLAG y se midió la unión usando ProteOn de acuerdo con el protocolo dado en el preámbulo de esta parte experimental.

Los resultados se muestran en la Figura 4. La Figura 5 indica los resultados para cada una de las muestras que forman uno de los puntos de datos en la Figura 4.

Se puede ver que para la mayoría de las 96 muestras ensayadas, la introducción de las mutaciones de acuerdo con la invención conduce a una reducción en la unión de anticuerpos preexistentes, siendo el grado de reducción en general dependiente del nivel al que los anticuerpos preexistentes en cada muestra eran capaces de unirse a la Referencia A.

Ejemplo 2: La introducción de las mutaciones de la invención en la Referencia B (SEQ ID NO: 2) conduce a una reducción en la unión por anticuerpos preexistentes.

La Referencia B (SEQ ID NO: 2) y dos ejemplos representativos de las variantes mejoradas de la Referencia B que llevan las mutaciones de acuerdo con la invención (SEQ ID NO: 65 y 66, ambas con extensión de alanina y ensayadas con un marcador HIS6-FLAG3 N-terminal, véase la SEQ ID NO: 100) se ensayaron en la unión de anticuerpos preexistentes que están presentes en las muestras de 96 muestras de suero de voluntarios humanos sanos. Los compuestos se capturaron usando el marcador FLAG y la unión se midió usando ProteOn de acuerdo con el protocolo dado en el preámbulo de esta parte experimental.

Los resultados se muestran en la Figura 6. La Figura 7 indica los resultados para cada una de las muestras que forman uno de los puntos de datos en la Figura 6.

De forma similar al ejemplo 1, se puede ver que para la mayoría de las 96 muestras ensayadas, la introducción de las mutaciones de acuerdo con la invención conduce a una reducción en la unión de anticuerpos preexistentes, siendo el grado de reducción en general dependiente del nivel al que la los anticuerpos preexistentes en cada muestra eran capaces de unirse a la Referencia B.

Ejemplo 3: La introducción de las mutaciones de la invención en la Referencia C (SEQ ID NO: 3) y la Referencia D (SEQ ID NO: 4) conduce a una reducción en la unión por anticuerpos preexistentes.

La Referencia C (SEQ ID NO: 3), Referencia D (SEQ ID NO: 4) y dos ejemplos representativos de las variantes mejoradas de la Referencia C y la Referencia D que llevan las mutaciones de acuerdo con la invención (SEQ ID NO: 93 y 94, ambas con una extensión de alanina como está presente en la Referencia D y ensayadas con un marcador HIS6-FLAG3 N-terminal, véase la SEQ ID NO: 100) se ensayaron en la unión de anticuerpos preexistentes que están presentes en las muestras de 66 muestras de suero de voluntarios humanos y 30 muestras que se supone que contienen anticuerpos preexistentes capaces de unirse incluso cuando está presente una alanina C-terminal (de las cuales 13 eran de pacientes con LES). Los compuestos se capturaron en albúmina sérica humana y se midió la unión usando ProteOn de acuerdo con el protocolo dado en el preámbulo de esta parte experimental.

Los resultados se muestran en la Figura 8. En la Figura 9, se dan detalles para 4 muestras representativas de LES. La Figura 10 indica los resultados para cada una de las muestras que forman uno de los puntos de datos en la Figura 8.

De forma similar a los ejemplos 1 y 2, se puede ver que para la mayoría de las 96 muestras ensayadas, la introducción de las mutaciones según la invención para la gran mayoría de las muestras conduce a una reducción en la unión de anticuerpos preexistentes, con el grado de reducción en general dependiendo del nivel al que los anticuerpos preexistentes en cada muestra eran capaces de unirse a la Referencia C o la Referencia D.

Claims (21)

REIVINDICACIONES

1. Dominio variable individual de inmunoglobulina de unión a la albúmina sérica que tiene:

(a) una CDR1 de acuerdo con Abm que se elige de las siguientes secuencias: GFTFSTGEMA (SEQ ID NO: 8) y GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13) y que es preferiblemente GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

(b) una CDR2 de acuerdo con Abm que se elige de las siguientes secuencias: SISSSGATTY (SEQ ID NO: 9) y VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14) y que es preferiblemente VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

(c) una CDR3 de acuerdo con Abm que se elige de las siguientes secuencias: PRHPQGGVTFDY (SEQ ID NO: 7), FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) y FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es lo más preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15);

en donde dicho dominio variable individual de inmunoglobulina tiene

no más de 7, tal como no más de 5, preferiblemente no más de 3, tal como solo 3, 2 o 1 diferencias de aminoácidos en las regiones armazón en comparación con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, sin tener en cuenta ninguna mutación en la(s) posición(es) 11, 89, 110 o 112 según Kabat que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente;

en el que:

- el resto de aminoácido en la posición 11 se elige preferiblemente de L o V; y

- el resto de aminoácido en la posición 89 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, V o L; y

- el resto de aminoácido en la posición 110 se elige preferiblemente de forma adecuada de T, K o Q; y - el resto de aminoácido en la posición 112 se elige preferiblemente de forma adecuada de S, K o Q; de modo que

(i) la posición 89 es T; o

(ii) la posición 89 es L y la posición 11 es V; o

(iii) la posición 89 es L y la posición 110 es K o Q; o

(iv) la posición 89 es L y la posición 112 es K o Q; o

(v) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o

(vi) la posición 89 es L y la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q; o

(vii) la posición 11 es V y la posición 110 es K o Q; o

(viii) la posición 11 es V y la posición 112 es K o Q; y

en donde dicho dominio variable individual de inmunoglobulina tiene menor unión por anticuerpos preexistentes presentes en el suero de pacientes con LES en comparación con la SEQ ID NO: 1.

2. Dominio variable individual de inmunoglobulina según la reivindicación 1, que tiene una extensión C-terminal (X)^n, en la que n es de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4 o 5 (y preferiblemente 1 o 2, tal como 1); y cada X es un resto de aminoácido (preferiblemente de origen natural) que se elige independientemente, y preferiblemente se elige independientemente del grupo que consiste en alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) o isoleucina (I).

3. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, que tiene una mutación de D y/o E1D en la posición 1.

4. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que tiene:

- una CDR1 según Abm que es GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 según Abm que es VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 según Abm que se elige de las siguientes secuencias: FPSTHGKFDY (SEQ ID NO: 12) o FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15) y que es preferiblemente FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15).

5. Dominio variable individual de inmunoglobulina según la reivindicación 4, que tiene:

- una CDR1 según Abm que es GFTFDTSSML (SEQ ID NO: 13); y

- una CDR2 según Abm que es VIHQSGTPTY (SEQ ID NO: 14); y

- una CDR3 según Abm que es FPSSRMKFDY (SEQ ID NO: 15).

6. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que tiene:

- no más de 5 diferencias de aminoácidos en las regiones armazón en comparación con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, sin tener en cuenta ninguna de las mutaciones en la(s) posición(es) 11,89, 110 o 112 que pueden estar presentes y sin tener en cuenta ninguna extensión C-terminal que puede estar presente.

7. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende los siguientes restos de aminoácidos:

- 11V en combinación con 89L; o

- 11V en combinación con 110K o 110Q;

- 11V en combinación con 112K o 112Q;

- 11V en combinación con 89L y 110K o 110Q; o

- 11V en combinación con 89L y 112K o 112Q.

8. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende los siguientes restos de aminoácidos:

- 89L en combinación con 11V; o

- 89L en combinación con 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 112K o 112Q; o

- 89L en combinación con 11V y 110K o 110Q; o

- 89L en combinación con 11V y 112K o 112Q.

9. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende los siguientes restos de aminoácidos:

- 110K o 110Q en combinación con 11V; o

- 110K o 110Q en combinación con 89L; o

- 110K o 110Q en combinación con 11V y 89L.

10. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende los siguientes restos de aminoácidos:

- 112K o 112Q en combinación con 11V; o

- 112K o 112Q en combinación con 89L; o

- 112K o 112Q en combinación con 11V y 89L.

11. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende los siguientes restos de aminoácidos:

- 89T.

12. Dominio variable individual de inmunoglobulina según la reivindicación 1, que tiene una secuencia de aminoácidos que se elige de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 16 a 99.

13. Dominio variable individual de inmunoglobulina según la reivindicación 12, que tiene una secuencia de aminoácidos que se elige de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 44 a 99.

14. Dominio variable individual de inmunoglobulina según la reivindicación 13, que tiene una secuencia de aminoácidos que es una de las siguientes secuencias: SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ D NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98 o SEQ ID NO: 99.

15. Dominio variable individual de inmunoglobulina según la reivindicación 13, que tiene una secuencia de aminoácidos que es una de las siguientes secuencias: SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 78 o SEQ ID NO: 92, y preferiblemente SEQ ID NO: 78 o SEQ ID NO: 92.

16. Proteína, polipéptido, construcción, molécula o entidad química que comprende uno o más dominios variables individuales de inmunoglobulinas según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

17. Ácido nucleico que codifica el dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 -15 y/o la proteína o polipéptido según la reivindicación 16.

18. Hospedante no humano o célula hospedante que contiene el ácido nucleico según la reivindicación 17, y/o que expresa el dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1-15, o el polipéptido según la reivindicación 16.

19. Métodos para preparar el dominio variable de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 -15 y/o el polipéptido según la reivindicación 16, que comprende cultivar o mantener la célula hospedante según la reivindicación 18 en condiciones tales que dicha célula hospedante produce o expresa el dominio variable de inmunoglobulina o polipéptido y opcionalmente aislar el dominio variable de inmunoglobulina o polipéptido así producido.

20. Composición o producto que comprende el dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1-15 y/o la proteína, polipéptido, construcción, molécula o entidad química según la reivindicación 16.

21. Dominio variable individual de inmunoglobulina según cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o proteína, polipéptido, construcción, molécula o entidad química según la reivindicación 16 para usar en terapia.