ES2841373T3 - Preparación biológicamente activa que comprende microcontenedores para proteger plantas contra plagas y método para su producción - Google Patents

Abstract

Un método para producir un agente biológicamente activo para la protección de los cultivos contra plagas de insectos, que comprende las etapas de - proporcionar microcontenedores, en donde dichos microcontenedores se producen a partir de microcápsulas que tienen una cubierta de material polimérico y un núcleo de disolvente orgánico, seguido por el calentamiento de dichas microcápsulas hasta 300°C para causar una perforación de la cubierta de la microcápsula y la formación de orificios en la misma como resultado de la acción de la presión de vapor de disolvente, en donde una dimensión de dichos orificios de la cubierta de microcápsula es ajustable mis medios de la selección de una proporción de los componentes del material polimérico para dicha cubierta y la variación de dicha presión de vapor de disolvente; - introducir una suspensión biológicamente activa que comprende esporas fúngicas y una fase líquida en dichos microcontenedores, - decantar la fase líquida y - secar dichos microcontenedores que contienen esporas fúngicas.

Description

DESCRIPCIÓN

Preparación biológicamente activa que comprende microcontenedores para proteger plantas contra plagas y método para su producción

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a la protección de los cultivos del campo contra las plagas de insectos y puede ser útil en la industria, la investigación científica, la agricultura, la horticultura y la silvicultura. En particular, la invención propuesta ofrece un método para la protección de los cultivos contra las plagas de insectos por medio del tratamiento de los cultivos para protegerlos con un agente biológicamente activo, en donde un insecticida se coloca en un microcontenedor protector. La invención también ofrece el agente biológicamente activo indicado anteriormente y un microcontenedor además de los métodos de producción y fabricación de los mismos.

Antecedentes de la técnica

El uso a gran escala de plaguicidas tiene una serie de desventajas fundamentales. Las principales desventajas incluyen el crecimiento de la población de plagas de insectos difícil de matar y la contaminación del ambiente. Además, una lucha a largo plazo con las langostas demuestra que los insecticidas tienden a asegurar solo una reducción temporal de las poblaciones de plagas de insectos y la mitigación de los daños relacionados con las plagas en los cultivos dentro de las zonas de uso de agentes insecticidas. Pero, en general, los insecticidas de este tipo que se utilizan casi no pueden controlar radicalmente la dinámica prolongada del crecimiento de la población de plagas de insectos. Por el contrario, los tratamientos insecticidas a gran escala causan mucho daño a la situación ambiental como resultado de la eliminación de las poblaciones enemigas naturales y las epizootias naturales y, así, aumenta el período de reproducción masiva de plagas en varios años. Uno de los métodos para la supresión de los fitófagos nocivos es un método de protección microbiológica.

Las formulaciones basadas en microorganismos entomopatogénicos son bien conocidas de la técnica anterior y se utilizan ampliamente en todo el mundo para controlar las poblaciones de langostas. A diferencia de los insecticidas químicos resistentes que causan un daño irreparable a los sistemas ecológicos y prohibidos en virtud de las leyes nacionales para su uso dentro de las zonas de conservación del agua y la naturaleza silvestre, los insecticidas biológicos se relacionan con agentes que no dañan las zonas recreativas y de conservación del agua, seguros para animales de sangre caliente, incluidos los seres humanos y pueden utilizarse en ubicaciones donde se crean productos alimenticios ambientalmente puros.

Los problemas indicados anteriormente se describen ampliamente en numerosas publicaciones tales como J. “Agrochemistry”, 2010, n. °12, pág. 24-28, “ The effect of fillers upon biological effectiveness of a biomass of conidia entomopatogenic fungus Beauveria bassiana used against the locusts under conditions existing in Kazakhstan’’ por V.Ju. Ktukov at al.; trabajo publicado por Lomer C.J., Bateman R.P., Johnson D.L, Lagewald J., Thomas M. Biological control of locusts and grasshoppers // Annu. Rev. Entomol. 2001. V. 46. P. 667-702, y por Charnley A.K., Collins S.A. Entomopathogenic fungi and their role in pest control // Environmental and microbial relationships. The Mycota: A comprehensive treatise on fungi as experimental systems for basic and applied research / Eds. CP. Kubicek, K. Esser e I.S. Druzhinina. Springer, 2007. P. 159-187; trabajo publicado por Lachininsky A.V., Sergeeva M.G., Chil debayev M. K, Chernyakhovsky M. E., Lockwood J.A., Kambulin V.E., Gaplarova F.A. “ The locusts of Kazakhstan, Middle Asia and ad-jacent territories", Larami: MAPA y University of Wyoming, 2002. 387 páginas.

Sin embargo, el uso de microorganismos entomopatogénicos contra poblaciones de langostas se enfrenta a una serie de problemas relacionados con el efecto inestable que producen. En primer lugar, dichos problemas están asociados con factores limitantes del clima árido de este tipo tales como la radiación solar, la temperatura alta y la humedad baja del aire. Se ha sabido que, en el caso de exposición directa a la luz solar, los condios fúngicos tienden a perder su viabilidad en varias horas y una pérdida de viabilidad de este tipo deriva en una disminución sustancial de la eficacia de los agentes biológicos micoinsecticidas. Este punto en particular se aborda en las siguientes publicaciones: Gromovykh T. M. “The entomopathogenic fungi in the protection of forests", Novisibirsk: Nauka, 1982., Inglis G.D., Johnson D.L, Goettel M.S. “Effects of temperature and sunlight on mycosis (Beauveria bassiana) (Hyphomycetes: Sympodulosporae) of grasshoppers under field conditions" // Environ. Entomol 1997. V. 26. P. 400­ 409, Braga G.U.L Flint S.D., Messias C.L., Anderson A.J., Roberts D.W. Effect of UV-B on conidia and germlings of the entomopathogenic hyphomycete Metarhizium anisopiiae // Mycol. Res. 2001. V. 105. N.° 7. P. 874-882, Braga G.U.L, Flint S.D., Miller CD., Anderson A.J., Roberts D.W. Variability in response to UV-B among species and strains of Metarhizium isolated from sites at latitudes from 61 °N to 54°S // J. Invertebr. Pathol. 2001. V. 78 P. 98-108, Wraight S.P., Inglis G.D., Goettel M.S. Fungi / / Field manual of techniques in invertebrate pathology. Application and evaluation of pathogens for control of insects and other invertebrate pests. Springer, 2007. P. 223-248.

Por lo tanto, la búsqueda de rellenos protectores para microorganismos entomopatogénicos parece ser un tema de actualidad. En varias investigaciones se demuestra que los rellenos prometedores de este tipo son arcillas, humates, carbón activado, dióxido de titanio, óxido de zinc, decolorantes fluorescentes (Tinopal LPW, Blankophor BSU), aceites vegetales y minerales, melaza, leche deshidratada, albúmina de huevo y algunos otros. Por ejemplo, véanse las siguientes publicaciones: Inglis G.D., Goettel M.S., Johnson D.L Influence of ultraviolet light protectants on persistence of the entomopathogenic fungus Beau-verla bassiana / / Biol. Contr. 1995. V 5. N. ° 4. P. 581-590, Edgington S., Segura H., de La Rosa W., Williams T. Photoprotection of Beauveria bassiana: testing simple formulations for control of the coffee berry borer // Int. J. Pest Manag. 2000. V. 46. N.° 3. . P. 169-176; Kassa A. Development and testing of mycoinsecticides based on submerged spores and aerial conidia of the ento­ mopathogenic fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae (Deuteromycotina: Hyphomycetes) for control of locusts, grasshoppers and storage pests. Doctoral diss. Gottingen: Georg-August-University, 2003. 170 p.; Inglis G.D., Goettel M.S., Eriandson M.A., Weaver D.K. Grasshoppers and locusts / / Field manual of techniques in invertebrate pathology. Application and evaluation of pathogens for control of insects and other invertebrate pests. Springer, 2007. P. 627-654.

Estos protectores pueden diferir en cuanto a su eficacia dependiendo de los tipos de micromicetos, sujetos objetivo y su hábitat.

Tal y como se mostró en las fuentes publicadas de la técnica anterior referenciadas anteriormente, en cuanto al control de la población de langostas, un grupo más prometedor de la multitud existente de organismos entomopatogénicos incluye hongos de las especies anamórficas Metarhizium y Beauveria. Como resultado del trabajo de investigación, se crearon y aplicaron con éxito dos preparados basados en el hongo Metarhizium anisopliae var. acridum con los nombres comerciales Green Muscle® (República de Sudáfrica) y Green Guard® (Australia). Estos preparados mostraron una eficacia biológica alta (85 - 95%) contra las langostas migratorias, las langostas del desierto, las langostas marroquíes y los saltamontes. Sobre la base de B. Bassiana, se habían creado dos agentes experimentales contra las langostas en Estados Unidos con los nombres comerciales Mycocide GH® y Mycotrol®. K. Sin embargo, las pruebas de los agentes de este tipo que se realizaron en los territorios de la antigua URSS mostraron su eficacia baja en condiciones climáticas de las repúblicas de la antigua URSS. El análisis de estos agentes mostró que son extremadamente sensibles a la radiación UV, la temperatura y la humedad del ambiente circundante. Los métodos sugeridos para el tratamiento contra las plagas de las tierras agrícolas con los agentes mencionados anteriormente como componentes de suspensiones de aceite-agua con rellenos tales como humate, arcilla, melaza y algunos otros rellenos ampliamente utilizados no contribuyen mucho a los resultados de tratamiento y, simultáneamente, bloquean la posibilidad de utilizar los agentes de este tipo en caso de pulverización de volumen ultra pequeño.

La presente invención está dirigida al desarrollo adicional de rellenos protectores para los microorganismos entomopatogénicos, en donde el desarrollo indicado anteriormente está destinado a realizarse de una manera bastante diferente sin paralelo en la técnica anterior. La solución técnica que se sugiere en la presente invención permite minimizar el efecto adverso producido por parte de los factores negativos sobre la viabilidad del agente activo de insecticidas biológicos, en particular sobre la viabilidad de los microorganismos entomopatogénicos, mejorar las propiedades comerciales y de consumo de los agentes biológicamente activos en caso de su uso masivo, ampliar el campo de uso de insecticidas biológicos hasta la pulverización de volumen ultra pequeño.

El secado (incluido la liofilización) de hongos en microplacas de 96 pocillos o en tubos capilares de vidrio se conoce a partir de la técnica anterior, véase p. ej., Khursheed A. Malik: “A miniaturized method for freeze-drying of microorganisms in glass capillary tubes”, Journal of Microbiological Methods, 1995, páginas 75-82. Del mismo modo, Monica Acuna Jiménez et al.: “Microencapsulated Formulation Based in Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae for the Control of the Tomate Fruitworm, Heliothis virescens ('Fabriciusj”, XV Congreso Nacional de Biotecnología y Bioingeniería, Cancún México, 23-26 de junio de 2013, página 1 describe las esporas fúngicas Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae, las cuales se encapsulan en una matriz, se extraen y secan o se secan por pulverización para obtener un polvo.

La publicación internacional WO 90/02655 describe microcontenedores que se preparan a partir de microcápsulas con una cubierta polimérica y un núcleo de disolvente orgánico, los cuales se calientan para causar perforación de la microcápsula como resultado de la presión de vapor del disolvente. Se dice que las cápsulas tienen de 5 a 30 micrómetros de diámetro. La presente invención, como se define en las reivindicaciones, difiere de dicha técnica anterior, entre otros aspectos, en que los microcontenedores que comprenden una suspensión biológicamente activa que comprende esporas fúngicas se preparan de manera diferente, como se define específicamente en la reivindicación 1.

Descripción de la invención

La presente invención se expone en las reivindicaciones anejas. Las realizaciones de la descripción las cuales no están dentro del alcance de las reivindicaciones se proporcionan únicamente con fines ilustrativos y no forman parte de la presente invención. La presente invención ofrece un método para producir un agente biológicamente activo, al introducir una suspensión biológicamente activa que comprende esporas fúngicas y una fase líquida en microcontenedores, producida por el calentamiento de ciertas microcápsulas, decantar subsiguientemente la fase líquida y secar dichos microcontenedores que contienen esporas fúngicas.

Como material fúngico, pueden utilizarse hongos entomopatogénicos, en particular hongos entomopatogénicos seleccionados del grupo que consiste en la especie fúngica Beauveria bassiana, Pandora neoaphidis, Entomophaga maimaiga, Metharhizium anisopliae var. acridium y Metharhizium anisopliae var. anisopliae y, más preferiblemente, hongos entomopatogénicos de especies fúngicas Metharhizium anisopliae var. acridium.

El microcontenedor indicado anteriormente puede recibir de 1 a 100 esporas fúngicas. Además, la presente invención está dirigida a un agente biológicamente activo para la protección del cultivo contra plagas de insectos y enfermedades de las plantas, el cual es producido por el método indicado anteriormente. El microcontenedor para implementar el método indicado anteriormente, implica microcápsulas con una cubierta de material polimérico y un núcleo de disolvente orgánico. Entonces, dichas microcápsulas se calientan hasta 300°C para causar una perforación de la cubierta de la microcápsula y la formación de orificios en la misma como resultado de la acción de la presión de vapor de disolvente, en donde una dimensión de dichos orificios de la cubierta de la microcápsula es ajustable mis medios de una proporción de los componentes del material polimérico para dicha cubierta y al variar dicha presión de vapor del disolvente.

En el método mencionado anteriormente para fabricar un microcontenedor, las microcápsulas pueden producirse de una dimensión que oscila entre 5 y 500 pm.

La tiourea se puede utilizar como dicho material polimérico.

El grosor de la cubierta se selecciona de modo que esté dentro de un intervalo de 0,05 a 5 pm.

La dimensión de dichos orificios es ajustable hasta un diámetro de, al menos, 5 pm.

El agente biológicamente activo puede activarse en un medio acuoso y aplicarse a cultivos que deben protegerse.

La presente invención se apoya en la idea básica de utilizar un microcontenedor con “propiedades programables” como relleno protector para bioinsecticida, estando el microcontenedor hecho de polímero sintético conformado como un receptáculo hueco que tiene, al menos, un orificio para recibir esporas fúngicas. Un microcontenedor de este tipo tiene las siguientes ventajas sobre los rellenos conocidos:

1. La dispersión: la dimensión del microcontenedor oscila entre 1 y 500 pm. Puede preajustarse en la producción del microcontenedor. No es necesario lijar el relleno protector. Versatilidad para varios tipos de esporas fúngicas.

2. El diámetro de los orificios que se deben hacer en la cubierta del relleno protector se puede ajustar en la producción del microcontenedor para recibir esporas de varias dimensiones. Versatilidad para varios tipos de esporas fúngicas.

3. El polímero no reactivo de la cubierta del relleno protector, el cual es favorable para las esporas fúngicas y el ambiente circundante.

4. El polímero biodegradable de la cubierta del relleno protector, el cual ayuda a mantener la seguridad ambiental.

5. El polímero de la cubierta del relleno protector ofrece protección contra la radiación solar.

6. El polímero de la cubierta del relleno protector no cambia prácticamente sus propiedades dentro del intervalo de temperatura de -20°C a 50°C y las propiedades de los microcontenedores no están sujetas a cambios en las mismas condiciones.

7. El polímero de relleno protector es insoluble en agua y no se infla.

Un microcontenedor, utilizado en la presente invención protege completamente el bioinsecticida contenido en el mismo contra la radiación UV nociva, mantiene el nivel de humedad necesario en el interior para asegurar la existencia de microorganismos, protege los microorganismos de temperaturas altas, tiene un tiempo de funcionamiento prolongado y preestablecido y ofrece buenas propiedades “pegajosas”. La dimensión del microcontenedor puede acordarse con los principales fabricantes de equipos para la pulverización de volumen ultra pequeño.

La pulverización de volumen ultra pequeño es una especie de pulverización de gota pequeña con plaguicida (es decir, al menos el 80% del agente plaguicida se pulveriza en forma de gotas de tamaño de 50 a 150 pm) para cubrir una superficie que debe tratarse, en donde el consumo nominal del plaguicida es de hasta 5,0 litros por hectárea. La pulverización de volumen ultra pequeño proporciona una penetración debida del agente plaguicida en el espacio interfila de las zonas de plantación densas, una cobertura muy densa de plantas, incluida una porción más baja de hojas y, así, permite reducir el consumo de un agente que se pulveriza en, al menos, un 20-30%, en comparación con otras técnicas de pulverización.

El uso de insecticidas químicos está limitado o prohibido en virtud de las leyes nacionales en las zonas de conservación de agua y naturaleza silvestre donde se produce el crecimiento de las poblaciones de langostas. Por lo tanto, proporcionar un agente biológicamente activo fundamentalmente novedoso y seguro permite aumentar enormemente las zonas a tratar y, como resultado, presentar oportunamente ataques letales de plagas muy peligrosas en tierras agrícolas.

A diferencia de lo que se conoce de la técnica anterior, la presente invención establece una nueva tendencia de desarrollo de protectores de relleno para insecticidas biológicos. Sugiere poner un agente bioinsecticida dentro de un microcontenedor de modo que dicho agente pueda protegerse eficazmente de los efectos ambientales adversos y adicionalmente pueda liberarse de manera controlada del microcontenedor. La solución técnica que se sugiere en la presente invención permite lograr lo siguiente:

1. Una disminución de 3,8-4,2 veces en la exposición de esporas fúngicas a la radiación UV debido a la colocación de dichas esporas fúngicas dentro de un microcontenedor para mantenerlas en el interior como un componente almacenado temporalmente, no como una mezcla con un relleno o un revestimiento sobre un relleno. En este último caso, hay un efecto menos intenso de la radiación UV, por ejemplo, en la solución de aceite-agua, debido a una menor tasa de evaporación, mientras que en el primer caso hay una protección del conidio fúngico por la pared de microcontenedor de la radiación solar y, así, proporciona las condiciones más favorables para la existencia de conidios fúngicos.

2. Una mitigación del efecto producido por la temperatura alta, p. ej., en una superficie de suelo o plantas. Tal y como se muestra anteriormente, varios autores que se refieren a los conidios de hongos entomopatogénicos como ejemplo demuestran que un aumento de temperatura mata a dichos conidios antes de que se produzca el efecto deseado. La colocación del agente bioinsecticida dentro de un microcontenedor es similar a colocar el mismo en una botella de termo y una opción de este tipo es capaz de prevenir el sobrecalentamiento del agente activo. Mientras se utiliza un microcontenedor, una temperatura externa que oscila entre 60-70°C no es crítica para los microorganismos y la eliminación de conidios germinados de hongos en una superficie del microcontenedor no es igual de crítica para la eficacia del tratamiento por el agente.

3. Una mitigación del efecto producido por la humedad. Cuando el sol es altamente activo y las condiciones circundantes son muy calientes, se produce una evaporación intensiva de la humedad necesaria para la existencia normal de los bioinsecticidas. Como resultado del secado excesivo, los conidios fúngicos realizan una transición a la fase de inactiva de espora con una pérdida de propiedades bioinsecticidas. En cuanto a los conidios fúngicos conservados dentro de un microcontenedor después de empaparse en un líquido, tal y como se sugiere en la presente invención, la solución técnica reivindicada prevé condiciones perfectas para el crecimiento de microorganismos dentro del microcontenedor y para una liberación controlable de microesporas fúngicas que llegan a una superficie del microcontenedor. Cuando las plagas de insectos entran en contacto con una superficie de microcontenedor, se infectan con esporas de hongos entomopatógenos. Debido a la tasa de liberación preestablecida responsable de la administración de conidios fúngicos a la superficie del microcontenedor, un agente biológicamente activo según la presente invención, a diferencia de los agentes insecticidas comúnmente utilizados conocidos de la técnica anterior, ofrece un efecto prolongado que dura varios días, mientras que los insecticidas químicos y biológicos conocidos permanecen activos solo durante varias horas o, en el mejor de los casos, durante las primeras 24 horas después del tratamiento con insecticidas. Esta característica en particular permite utilizar los agentes biológicos novedosos sin observación estricta de los límites de tiempo para el tratamiento.

4. Una mejora de las propiedades adhesivas de los agentes biológicamente activos para la protección de cultivos contra plagas de insectos mediante la impartición de propiedades especiales a las paredes de los microcontenedores. Así, las pruebas de laboratorio muestran que esta forma preparativa particular es mucho más resistente al viento y a la humedad en comparación con las formas preparativas comúnmente utilizadas. Cuando se aplica a una superficie de suelo o planta que se está tratando, el agente novedoso no se cae, sino que se adhiere de manera fiable a la superficie y, en caso de ser ingerido por una plaga de insectos, tiende a causar esporas fúngicas para crecer dentro del cuerpo de la plaga de insectos.

5. Un mayor peso de un agente biológicamente activo para la protección del cultivo contra las plagas de insectos en comparación con el peso de una sustancia activa de dicho agente (p. ej., conidios fúngicas), hace posible evitar el efecto “niebla” sobre la zona expuesta al tratamiento aéreo y preestablecer la dimensión necesaria del microcontenedor (que oscila entre 5 y 500 pm), lo cual asegura un beneficio innegable cuando se trata de utilizar el agente novedoso para la técnica de pulverización de volumen ultra pequeño, sobre la base de un consumo mínimo de un líquido, ya que puede ser particularmente necesario en condiciones climáticas áridas y desérticas.

6. No utilizar la tecnología comúnmente aplicada de la producción de masa de conidias por medio de la técnica de cultivo en dos fases, cuando se realiza primero el cultivo sumergido durante varios días, seguido de la aplicación de inóculo en un vehículo de superficie para la producción de biomasa fúngica durante varias semanas. Los métodos sugeridos por la presente invención permiten no utilizar más el cultivo sumergido que requiere grandes zonas, energía sustancial y el consumo de mano de obra.

Los métodos según la presente invención hacen posible cargar masa de conidias del hongo de un reactor (un termentador) directamente en un microcontenedor y, así, conduce a un aumento significativo de la concentración de sustancia activa dentro del microcontenedor en comparación con la concentración inicial de sustancia activa en una disolución.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra receptáculos huecos llenos con disolvente orgánico, es decir, microcápsulas. Las microcápsulas de este tipo están fabricadas de material tiourea y se utiliza xileno como dicho disolvente orgánico. En esta figura se indican los diámetros de las microcápsulas (14,53 pm, 81,48 pm y 122,73 pm).

Las Figuras 2-3 muestran receptáculos huecos que tienen, al menos, un orificio, es decir, microcontenedores para recibir un líquido. El agua se utiliza como dicho líquido.

La Figura 4 muestra los microcontenedores en una fase líquida con una ampliación de 100 veces. El diámetro del microcontenedor (157,09 pm) y el diámetro del orificio (40,40 pm) se indican en esta figura particular.

Las Figuras 5-6 muestran los microcontenedores que comprenden conidia fúngica con una ampliación de 400 veces. La Figura 5 muestra un diámetro de orificio de microcontenedor (44,30 pm) y diámetros de conidias fúngicas (4,59 pm y 4,21 pm). La Figura 6 utiliza flechas para marcar conidias fúngicas.

La Figura 7 muestra microcontenedores que comprenden conidias fúngicas (se muestran con flechas) colocados en una fase líquida que comprende conidias fúngicas.

La Figura 8 muestra un microcontenedor con un orificio.

La Figura 9 muestra esporas de hongos entonopatogénicos en una fase líquida. El diámetro de la espora es de 3,5 a 5 pm. Los diámetros de las esporas (3,65 pm, 3,89 pm y 4,65 pm) se indican en esta figura particular.

La Figura 10 muestra microcontenedores que comprenden conidias fúngicas colocados en una fase líquida.

La Figura 11 muestra un gráfico que representa la mortalidad de las larvas de langosta en caso de utilizar un agente micoinsecticida proporcionado en diversas formas preparativas. Se utilizaron formas preparativas para el tratamiento plaguicida de plagas de insectos en sitios con sombra.

La Figura 12 muestra un gráfico que representa la mortalidad de las larvas de langosta en caso de utilizar un agente micoinsecticida proporcionado en diversas formas preparativas. Se utilizaron formas preparativas para el tratamiento plaguicida de plagas de insectos en sitios abiertos.

La Figura 13 muestra un gráfico que representa la mortalidad de las larvas de langosta en caso de utilizar un agente micoinsecticida proporcionado en diversas formas preparativas. Se utilizaron formas preparativas para el tratamiento de un producto alimenticio en sitios con sombra.

La Figura 14 muestra un gráfico que representa la mortalidad de las larvas de langosta en caso de utilizar un agente micoinsecticida proporcionado en diversas formas preparativas. Se utilizaron formas preparativas para el tratamiento de un producto alimenticio en sitios abiertos.

La Figura 15 muestra un gráfico que representa la mortalidad de las larvas de langosta en caso de utilizar un agente micoinsecticida proporcionado en diversas formas preparativas. Se utilizaron formas preparativas para el tratamiento del suelo antes de poblarse realmente con plagas de insectos.

La Figura 16 muestra un gráfico que representa la mortalidad de las larvas de langosta en caso de utilizar un agente micoinsecticida proporcionado en diversas formas preparativas. Se utilizaron formas preparativas para el tratamiento del suelo, el cual se conservó en tratamiento durante un cierto tiempo antes de poblarse realmente con plagas de insectos.

Realizaciones de la invención reivindicada

Tal y como se menciona anteriormente, una base de la invención reivindicada proporciona un método fundamentalmente nuevo para la producción de un agente biológicamente activo para la protección del cultivo contra las plagas de insectos, en donde una sustancia activa del agente biológicamente activo se coloca dentro de un microcontenedor.

Por lo tanto, un medio clave para la realización del método novedoso identificado anteriormente para la producción de un agente biológicamente activo para la protección de los cultivos contra las plagas de insectos incluye microcontenedores y se encuentra descrito un método para la fabricación de los microcontenedores de este tipo, una base de dicho método para la fabricación de microcontenedores es la utilización de la técnica de microencapsulación con el fin de hacer microcápsulas especiales que pueden ser útiles a una cierta temperatura para la fabricación de microcontenedores debido a la perforación de una cubierta de microcápsula para formar orificios que se extienden aunque dicha cubierta.

La técnica anterior conoce métodos para la producción de una microcápsula que comprende una solución de insecticidas piretroides y organofosfóricos en un disolvente orgánico y también métodos para la producción de una microcápsula que comprende solo un disolvente orgánico. Según los métodos mencionados anteriormente conocidos de la técnica anterior, una solución de insecticida o un disolvente orgánico se mezcla con el isocianato polifuncional, en donde dicho insecticida se agita hasta que se prepara una solución homogénea, luego, se añade a la solución acuosa polietilenglicol o alcohol polivinílico con agitación a 4700 rpm y 70 °C durante 18 horas para producir un producto objetivo (ref., por ejemplo, la patente de GB 2214080, IPC A01 N 25/28, 1989). Sin embargo, se considera que el método de este tipo no es lo suficientemente eficaz para que consuma mano de obra. Además, estos métodos conocidos para fabricar microcápsulas requieren el uso de compuestos orgánicos tóxicos. La técnica anterior también conoce métodos para la producción de microcápsulas para contener agentes útiles para matar insectos domésticos.

Los métodos conocidos de este tipo se basan en la preparación de una composición que comprende microcápsulas que contienen un núcleo de un material insecticida activo, en donde la disolución de clorpirifos en disolvente orgánico se utiliza como dicho material insecticida activo o un método de producir una microcápsula que contiene freón. Sin embargo, se utiliza una disolución insecticida en el primer caso, mientras que el último caso se dirige a hacer una cubierta delgada la cual es completamente plegable cuando una microcápsula se calienta.

Se encuentra descrito un método simplificado para hacer un disolvente microencapsulado debido a un tiempo de síntesis más corto y para hacer una cubierta de la microcápsula que no se puede plegar completamente cuando se calienta.

El método mencionado anteriormente según la presente invención es realizable ya que la producción de una microcápsula, la cual se basa en preparar una suspensión acuosa que comprende microcápsulas que tienen un núcleo de disolvente orgánico rodeado por una cubierta de material polimérico, incluye la etapa de agregar poliisocianato al disolvente orgánico para formar microcápsulas, seguido de la agitación de la disolución resultante en un medio de dispersión acuosa que comprende un 0,5% de alcohol polivinílico en agua destilada durante 5-20 minutos hasta la preparación de una microemulsión que comprende partículas de 5-500 pm de dimensión y seguido adicionalmente de la adición continua de 10% de disolución acuosa de polietileno-poliamina a una velocidad de agitación más lenta para formar una cubierta de microcápsula; en donde una proporción de poliisocianato disuelto en la disolución encapsulada y polietileno-poliamina que se disuelve en el medio de dispersión acuosa es 1:1.

Los siguientes productos químicos se utilizan para la síntesis de microcápsulas:

Xileno (cumple con las especificaciones técnicas TU 6-09-3825-88 rev. 1.2)

Líquido incoloro; la proporción de peso de una sustancia activa es, al menos, de 99,3% de peso; la densidad a 20°C es de 0,876-0,880 g/cm3; el intervalo de temperatura de destilación a 101 325 Pa (760 torr) para destilar, al menos, un 95% de volumen del preparado es de 143-145°C; el número de bromo expresado en g de bromo por cada 100 g del preparado no es superior a 0,05; el nivel de purificación según la escala de referencia no es superior a 0,15; el nivel de contenido de grasa no es superior a 10.

El acetato de butilo es líquido transparente incoloro que tiene olor característico (GOST 22300-76), contenido en peso de la sustancia activa, al menos, 98,3% de peso; el contenido en peso de las sustancias no volátiles no es superior a 0,002% de peso; el contenido en peso de los ácidos (equivalente al ácido acético) no es superior a 0,005% de peso; el contenido en peso del agua no es superior a 0,1% de peso.

Polietileno poliamina (PEPA) cumple con las especificaciones técnicas TU 2413-357-00203447-99. Líquido transparente marrón; la proporción de peso del nitrógeno total es 30; no hay iones de cloro; el contenido en peso de las impurezas minerales es 0,2; el contenido en peso de la fracción destilada bajo presión residual de 1,3 kPa (10 mmHg) dentro de los límites de temperatura:

0,75°C no más que 1 traza,

0,75°C a 200°C no más de 23,0;

el contenido en peso de los residuos en ebullición estable sobre 200°C oscila entre 65 y 75; el contenido en peso de los grupos de aminoácidos terciarios oscila entre 5 y 9; el contenido en peso del agua no es superior a 2; el contenido en peso del nitrógeno titulado por ácido es del 19,5-22,0%%; la curabilidad no es superior a 1,5 horas.

El poliisocianato es líquido viscoso de color marrón rojizo con una temperatura de cristalización inferior a 10°C; tebullición = 400°C; d204 - 1,22-1,25; tevaporación = 185°C.

El alcohol polivinílico (que cumple con las especificaciones técnicas TU 6-09-4004-67) es un material termoplástico de estructura microcristalina, el peso molar es 10000-50000; transición de vidrio = 57°C, la densidad 1,29 g/cm3, tdescomposición = 220-235°C (sin fusión), disoluble en agua caliente, resistente a aceites y grasas; diluible en ácidos y álcali.

Hay dos fases de la producción de microcontenedores. La primera fase incluye la producción de microcápsulas que comprenden un disolvente orgánico con un método conocido y, luego, las microcápsulas de este tipo se utilizan para la producción de microcontenedores en la segunda fase.

Ejemplo 1. Producción de microcápsulas

Componentes que deben preparase:

1. Disolución (1) de poliisocianato en xileno (o en butilacetato) con una concentración del 10% - 200 g 2. Disolución (2) de alcohol polivinílico en agua destilada con la concentración de 0,5% - 600 ml 3. Agua destilada que se utilizará para la dilución de la reserva resultante - 200 ml 4. Poliisocianato - 20 g 5. Disolución (3) de polietilenopoliamina en agua con la concentración de 10% - 15 ml Primera fase. Producción de emulsión de disolución de poliisocianato y cubiertas primarias de microcápsulas.

1. El poliisocianato se disuelve en la disolución (1).

2. La disolución (2) se vierte en un reactor emulsionante, luego, se agita con un agitador a una velocidad media y se realiza una retención durante 5 minutos.

3. Se dirige un chorro delgado de la disolución (1) al reactor emulsionante.

4. La velocidad de agitación del agitador aumenta hasta que se producen gotas de emulsión de la dimensión requerida (el control de la mezcla se realiza mediante un sistema de muestreo con análisis microscópico de las muestras así obtenidas), dicha mezcla se conserva adicionalmente en estas condiciones durante, al menos, 7 minutos hasta que las imágenes microscópicas comienzan a mostrar una estabilidad completa durante el análisis.

5. La disolución (3) se añade adicionalmente (durante 20 minutos) a la mezcla producida tal y como se ha descrito anteriormente.

6. La velocidad de agitación del agitador se reduce al 25% de su velocidad de agitación máxima y la mezcla que se está agitando se conserva durante, al menos, 10 minutos.

Segunda fase. Producción de cubiertas de microcápsulas.

7. La agitación se detiene y la mezcla resultante se vierte en el reactor receptor que contiene 200 ml de agua.

Luego, se vuelve a realizar la agitación lenta con control del proceso para evitar la formación de depósitos y, posteriormente, la reserva así producida (Figura 1) se descarga en un tanque de almacenamiento. Con el fin de producir cantidades más grandes de microcápsulas, la primera fase se realiza muchas veces de manera cíclica con la descarga de un producto resultante al reactor receptor, en donde se añaden 200 ml de agua cada vez que finaliza cada ciclo de producción de la primera fase.

Ejemplo 2. Fabricación de microcontenedores

Con la decantación y filtración por vacío, se elimina una fase acuosa de la suspensión producida. Luego, las microcápsulas húmedas se secan a 55-75°C en condiciones de flujo de secado adecuadas para obtener un peso constante.

Las microcápsulas secas se colocan en un horno que funciona a 200-300°C para conservarse en estas condiciones térmicas particulares con agitación periódica hasta ganar un peso constante. Como resultado, se elimina un disolvente de las microcápsulas y, así, se perfora (por medio de la penetración de un vapor de disolvente) su cubierta y se forman microcontenedores (Figuras 2, 3, 4 y 8).

Se define una dimensión de orificios perforados en el microcontenedor mediante la penetración de vapor de disolvente desde el interior de las microcápsulas esféricas mediante los siguientes parámetros interdependientes:

1. Resistencia de la cubierta de la microcápsula la cual se define mediante el grosor de la cubierta y el diámetro de la microcápsula y también las características de la resistencia del material de la cubierta, es decir, la composición química de un polímero.

2. Presión de vapor saturada de un disolvente contenido dentro de la microcápsula y una tasa de aumento de presión de vapor saturado durante el calentamiento de la microcápsula.

En caso de tener un diámetro de microcápsula idéntico y un grosor de cubierta idéntico, es necesario tener una presión alta de vapor saturado de disolvente y un calentamiento lento de la microcápsula con el fin de producir orificios relativamente pequeños en la cubierta. Los orificios más grandes en la cubierta requieren una presión más baja de vapor saturado de disolvente y un calentamiento lento de la microcápsula.

El mismo tipo de polímero (p. ej., material de poliurea) se puede utilizar para la cubierta, pero los componentes del polímero de este tipo pueden variar. Cualquier otro polímero es adecuado también. Como resultado, es posible variar el valor de la presión de vapor saturado y el valor de una tasa de aumento de la presión de vapor saturado durante el calentamiento de la microcápsula con el fin de hacer la dimensión deseada de los orificios.

Si las microcápsulas hechas de poliurea con una cierta composición tienen un diámetro de 50 pm y un grosor de cubierta de 0,5 pm y cuando se utiliza xileno como disolvente, el calentamiento de dichas microcápsulas de temperatura ambiente a 240°C durante 5 minutos hace orificios de 5 pm en diámetro, mientras que el mismo calentamiento durante 30 minutos hace orificios de 15 pm en diámetro.

La alteración de la composición de la poliurea únicamente deriva en la realización de orificios con bastantes otros diámetros al final de las operaciones de calentamiento mencionadas anteriormente. Asimismo, el uso de otros valores de grosor de la cubierta produce orificios de diferentes dimensiones. Una dimensión de orificios también depende de los tipos de polímero y disolvente que se utilizarán.

Por lo tanto, en cuanto a la producción de microcontenedores, el diámetro de los orificios se define con antelación sobre la base de las propiedades iniciales de las microcápsulas que se deben producir, tales como la resistencia de la cubierta de la microcápsula y la presión de vapor saturada, es decir, durante la síntesis de las microcápsulas cuando dicho diámetro está presente después de haber sido calculado. Adicionalmente, un requisito previo es la preselección del diámetro del orificio que un orificio no puede ser mayor que el diámetro de la microcápsula y también que la perforación de orificios con un diámetro menor que el de las esporas fúngicas no tiene sentido. Es inútil tener un microcontenedor cuyo diámetro es más pequeño que el diámetro de las esporas fúngicas.

Ejemplo 3. Producción de un agente biológicamente activo

Se vierte 1 litro de una suspensión biológicamente activa provista en forma de esporas fúngicas y una fase líquida en un recipiente de 2 litros (Figura 9) con un agitador de pala hélice capaz de funcionar a una velocidad de 300-700 rpm.

Adicionalmente, se añaden pequeñas porciones de microcontenedores de 50 g al recipiente mencionado anteriormente y se agita una masa resultante durante un período de 40- 60 minutos. El punto final de añadir esporas fúngicas a los microcontenedores se detecta mediante el método de turbidez cuando se alcanza una densidad óptica constante en las muestras de fase líquida tomadas. En las Figuras 5, 6, 7 y 10 se muestran los microcontenedores que contienen esporas fúngicas colocadas adentro.

La siguiente etapa es eliminar mediante decantación y filtración por vacío la fase líquida de la suspensión producida que comprende microcontenedores, luego, los microcontenedores húmedos que contienen esporas fúngicas se someten al secado a 25-45°C en condiciones adecuadas de flujo de secado hasta que obtengan un peso constante.

Ejemplo 4. Pruebas comparativas de agentes microinsecticidas contra las langostas proporcionadas en diversas formas preparativas

Un objetivo de estas pruebas es evaluar una dinámica de la mortalidad de los grupos de langostas infectadas con infección fúngica, según las formas preparativas de micoinsecticidas de agentes contra las langostas.

Los estudios se realizaron con las siguientes formas preparativas basadas en conidia Beauveria bassiana (Balsamo-Crivelli) Vuillemin:

1. Suspensión acuosa.

2. Suspensión de aceite.

3. Microcontenedor novedoso que contiene la conidia mencionada anteriormente.

Los sujetos expuestos a los estudios de este tipo fueron larvas de langostas de diferentes edades e imago de langosta asiática y langosta italiana. Para el control se utilizaron larvas de langosta no tratadas.

Para los estudios se utilizaron las siguientes técnicas de tratamiento:

1. Aplicar una disolución directamente sobre el sujeto insecto mediante un pulverizador manual.

2. Tratamiento de los productos alimenticios.

3. Tratamiento del suelo.

Metodología experimental

La carga de infección se creó de modo que se pudo alcanzar un nivel de 7*1012 conidias por hectárea.

Para los experimentos, se utilizaron jaulas cerradas por malla fina con dimensiones de 100x100x100 cm en sitios abiertos y con sombra. Con el fin de reducir las cantidades de conidias fúngicas transportadas por el viento, las jaulas de este tipo se separaron mediante una partición de separación a prueba de viento. Cada jaula contenía 20 insectos. Condiciones climáticas: la temperatura promedio del aire fue de 23-25°C con un nivel máximo de 36°C, la temperatura del suelo fue de 45°C, la humedad fue de 49-56%, la velocidad del viento osciló entre 5 y 15 m/s. La duración del período de observación fue de 30 días.

1. Tratamiento de los sujetos insectos

El análisis de la mortalidad de las larvas de langosta como resultado de la utilización de diversas formas preparativas demuestra los siguientes resultados:

Sitios con sombra

Para todas las formas preparativas, la mortalidad de los sujetos insectos fue de 80-100% en el día 25-27 de experimentación (Figura 11). Cabe mencionar a este respecto que una emulsión acuosa de bioinsecticida, en comparación con una suspensión de aceite y una suspensión que comprende microcontenedores, es menos eficaz en el transcurso del tiempo. Así, se mató al 40% de los sujetos insectos el día 14-16 como resultado del uso de la suspensión acuosa, mientras que en el caso del tratamiento con suspensión de aceite y suspensión que comprenden los microcontenedores se logró el mismo efecto letal el día 8-9 (Figura 11).

Sitios abiertos

En condiciones de intensa radiación solar, la eficacia de la suspensión acuosa que transporta el bioinsecticida se redujo en más de dos veces y la mortalidad de los sujetos insectos no fue superior al 40-45% el día 25 de experimentación (Figura 12). La explicación más probable de este efecto es que durante las primeras 10-16 horas el hongo no penetró dentro del cuerpo del insecto, ya que las conidias fúngicas murieron por la intensa radiación solar. El segundo factor probable que causa una menor eficacia es que, en vista de las malas propiedades adhesivas, las partículas fúngicas (gotas de disolución) tienden a caer del cuerpo del sujeto insecto y dejan vivo al insecto. En caso de utilizar suspensiones de aceite, la eficacia del micoinsecticida se redujo, en promedio, al nivel de mortalidad del 60-70% (Figura 12). Dicho resultado se refiere a las propiedades del aceite que protege el insecticida de la radiación solar y del secado y mejora las propiedades adhesivas. Los resultados de las pruebas obtenidas son totalmente coherentes con los resultados de experimentos anteriores (Krukov V. Ju., Lednev G. R., Levchenko M. V., Jaroslavtseva O. N., Makarov E. N., Bimagambetov E. Zh., Duysembekov B. A., Glupov V. V., “The influence of fillers on biological effective-ness of conidial biomass of entomopathogenic fungus Beauveria bassiana used under the locust situation of Kazakhstan" J. Agroquímica, 2010, N.° 12, pág. 24-28.

En caso de utilizar una forma preparativa proporcionada como una suspensión que comprende microcontenedores, en comparación con la experimentación realizada en sitios con sombra, no se observaron diferencias fundamentales.

La mortalidad de los sujetos insectos en el día 25 del experimento fue de un 85-100% (Figura 12) debido a la protección fiable del microorganismo que se conserva en el microcontenedor apartado de la radiación solar y del secado, y también debido a las propiedades adhesivas altas de las paredes del microcontenedor que permiten que un microcontenedor de este tipo se una de forma fiable dentro del cuerpo del sujeto insecto.

2. Tratamiento de los productos alimenticios

El tratamiento se realizó mediante un pulverizador manual según las siguientes opciones:

• tratamiento inmediatamente antes de colocar el producto alimenticio en la jaula con sujetos insectos;

• tratamiento del producto alimenticio, seguido de secado durante varias horas en condiciones naturales.

En comparación con la opción de tratamiento que comprende la pulverización del agente micoinsecticida directamente en los sujetos insectos, una tendencia común es una disminución de la mortalidad de insectos tratados en un 15-20%.

Sitios con sombra

Al comparar la eficacia de las tres opciones preparativas probadas, cabe mencionar que existe una tendencia general de reducir la mortalidad de insectos tratados en un 5-10% para suspensiones y en un 25% para disoluciones acuosas en caso de tratar el producto alimenticio justo antes de colocar en la jaula con sujetos insectos, en contraposición al tratamiento directo de insectos sometidos a pruebas. En caso de secado de los productos alimenticios, la eficacia de una disolución acuosa se reduce en más de dos veces, lo que estipula un nivel de mortalidad no superior al 40-50% (Figura 13) en comparación con la opción de tratamiento directo del sujeto insecto. La causa es que las gotículas de la disolución tienden a caer de las hojas utilizadas como producto alimenticio para los insectos y eventualmente se secan. En el caso de utilizar la suspensión de aceite y la emulsión que comprende microcontenedores, la eficacia de los productos alimenticios tratados no se reduce fuertemente y la eficacia de la reducción de este tipo es aproximadamente del 10% (Figura 13).

Sitios abiertos

La eficacia de las dos primeras formas preparativas se reduce notablemente en comparación con la experimentación en sitios con sombra. La razón más probable para ello es una mayor actividad solar y una mayor temperatura que ayuda a secar rápidamente las gotículas de la disolución. Si durante las varias horas iniciales un agente bioinsecticida no penetra dentro del insecto junto con el producto alimenticio tratado o no se conserva dentro del cuerpo del insecto, una acción insecticida de dicho agente se detiene ya que se seca. La mortalidad de insectos es del 40-55% para suspensiones de aceite y aproximadamente del 30% para las acuosas (Figura 14). No hay efectos notables producidos por la mayor temperatura y la radiación UV más fuerte sobre una suspensión que comprende microcontenedores y la mortalidad de los insectos es del 75-80% (Figura 14).

3. Tratamiento del suelo

Para la experimentación, se utilizó la siguiente técnica:

• tratamiento directo de sujetos insectos justo antes de colocarlos en la jaula;

• tratamiento del suelo, retención durante 36 horas en el sitio experimental, seguido de la colocación de las langostas en jaulas.

A su vez, el tratamiento del suelo contempla principalmente una forma de contacto de propagación de la infección. Por lo tanto, un período de acción eficaz del agente es particularmente crucial.

Tratamiento directo antes de infestar con insectos

La disolución acuosa permanece activa durante varias horas, mientras que la disminución de la tasa de eficacia depende directamente de la temperatura del suelo. El nivel máximo de mortalidad de los sujetos langostas fue aproximadamente del 30% (Figura 15). La emulsión de aceite demuestra un mejor nivel de mortalidad que asciende al 50% (Figura 15). La emulsión que comprende microcontenedores presenta propiedades insecticidas estables, de modo que la mortalidad de los sujetos langosta fue del 70-75% (Figura 15).

Tratamiento del suelo con agente conservado

En cuanto al tratamiento de la disolución acuosa del agente insecticida, prácticamente no se registró ninguna eficacia. Fue prácticamente letal para una pequeña cantidad de sujetos insectos y no se alcanzó ningún pico epidemiológico (Figura 16).

Las emulsiones de aceite que se utilizaron en sitios abiertos resultaron ser ineficaces debido al secado de la disolución. Cuando se utiliza en lugares con sombra, una parte de la disolución permanece activa y capaz de infectar a los sujetos langosta. Como resultado, el nivel de mortalidad fue del 30-35% (Figura 16). En caso de utilizar una emulsión que comprende microcontenedores, la eficacia del agente que se está probando permanece prácticamente sin cambios. La razón de este fenómeno es que las paredes del microcontenedor protegen de manera fiable a los microorganismos de la influencia nociva de factores negativos y un líquido atrapado dentro del microcontenedor no bloquea un crecimiento de microorganismos y su paso a través de orificios de dimensión predefinida a una superficie del microcontenedor. En caso de eliminación de una capa superficial, se sustituye la capa eliminada por una capa nueva y altamente activa. El nivel de mortalidad de los sujetos langosta en caso de utilizar una emulsión compuesta de microcontenedores es bastante alto y asciende al 70-75% (Figura 16).

Conclusiones

La prueba de tres formas preparativas de agente bioinsecticida demuestra que una forma preparativa la cual es más resistente a efectos ambientales desfavorables es una emulsión que comprende microcontenedores. Tiene una larga exposición que permite su uso como barrera para luchar contra las plagas de langosta. El intervalo amplio de temperaturas y la resistencia a la radiación UV proporcionan la posibilidad de uso en varias zonas climáticas.

Aplicabilidad industrial

Los métodos, las tecnologías y los materiales actuales también ofrecen una posibilidad real de concreción de los temas novedosos descritos anteriormente. Los ejemplos mencionados anteriormente apoyan dicha conclusión. La aplicabilidad industrial de los temas novedosos mencionados anteriormente se considerará indisputable por aquellos expertos en el campo de la protección de los cultivos contra las plagas de insectos y que se desempeñan tanto en investigación científica como en agricultura, horticultura y silvicultura.

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un método para producir un agente biológicamente activo para la protección de los cultivos contra plagas de insectos, que comprende las etapas de

- proporcionar microcontenedores, en donde dichos microcontenedores se producen a partir de microcápsulas que tienen una cubierta de material polimérico y un núcleo de disolvente orgánico, seguido por el calentamiento de dichas microcápsulas hasta 300°C para causar una perforación de la cubierta de la microcápsula y la formación de orificios en la misma como resultado de la acción de la presión de vapor de disolvente, en donde una dimensión de dichos orificios de la cubierta de microcápsula es ajustable mis medios de la selección de una proporción de los componentes del material polimérico para dicha cubierta y la variación de dicha presión de vapor de disolvente;

- introducir una suspensión biológicamente activa que comprende esporas fúngicas y una fase líquida en dichos microcontenedores,

- decantar la fase líquida y

- secar dichos microcontenedores que contienen esporas fúngicas.

2. El método de la reivindicación 1, en donde los hongos entomopatogénicos se utilizan como hongos para las esporas fúngicas de este tipo.

3. El método de la reivindicación 2, donde dicho hongo entomopatogénico utilizado se selecciona del grupo de hongos entomopatogénicos, que consiste en las especies fúngicas Beauveria bassiana, Pandora neoaphidis, Entomophaga maimaiga, Metharhizium anisopliae var. acridium y Metharhizium anisopliae var. anisopliae.

4. El método de la reivindicación 2, en donde dicho hongo entomopatogénico es la especie Metharhizium anisopliae var. acridium de hongo entomopatogénico.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde 1 a 100 de las esporas fúngicas se introducen en el microcontenedor.

6. El método de las reivindicaciones 1 -5, en donde las microcápsulas se producen para ser de una dimensión que oscila entre 5 y 500 pm.

7. Los métodos de las reivindicaciones 1-5, en donde la tiourea se utiliza como dicho material polimérico.

8. El método de las reivindicaciones 1 -5, en donde el grosor de la cubierta se selecciona de modo que esté dentro de un intervalo de 0,05 a 5 pm.

9. El método de las reivindicaciones 1-5, en donde una dimensión de dichos orificios es ajustable hasta un diámetro de, al menos, 5 pm.

10. Un agente biológicamente activo para la protección de los cultivos contra plagas de insectos y enfermedades de las plantas producido mediante un método de las reivindicaciones 1-9.