ES2728137B2 - Lactose detection kit and detection procedure by applying it - Google Patents
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Description
DESCRIPCIÓNDESCRIPTION
Kit de detección de lactosa y procedimiento de detección mediante aplicación del mismoLactose detection kit and detection procedure by applying it
Campo técnico de la invenciónTechnical field of the invention
La presente invención corresponde al campo técnico de los test de detección de lactosa, en concreto a un kit de detección en superficies, aguas y alimentos y, el procedimiento de realización del mismo.The present invention corresponds to the technical field of lactose detection tests, specifically to a detection kit for surfaces, water and food, and the procedure for carrying it out.
Antecedentes de la InvenciónBackground of the Invention
La lactosa es un azúcar formado por la unión de una molécula de glucosa y otra de galactosa. Se encuentra presente, en distintas proporciones, en todas las leches de los mamíferos (vaca, cabra, oveja) y, por tanto, en muchos alimentos preparados, derivados y aditivos.Lactose is a sugar formed by the union of a glucose molecule and another of galactose. It is present, in different proportions, in all milk of mammals (cow, goat, sheep) and, therefore, in many prepared foods, derivatives and additives.
La intolerancia a la lactosa es un trastorno digestivo causado por la deficiencia en el intestino delgado de una enzima denominada lactasa, que es la encargada del desdoblamiento de la lactosa en los dos azúcares simples que la componen. Cuando no se produce esta conversión se genera una malabsorción de la lactosa, provocando diversos síntomas como dolor abdominal, distensión, diarrea, estreñimiento y/o vómitos.Lactose intolerance is a digestive disorder caused by a deficiency in the small intestine of an enzyme called lactase, which is responsible for the breakdown of lactose into the two simple sugars that make it up. When this conversion does not occur, lactose malabsorption is generated, causing various symptoms such as abdominal pain, bloating, diarrhea, constipation and / or vomiting.
Las personas diagnosticadas con intolerancia a la lactosa deben seguir una dieta libre de lactosa o de bajo contenido en lactosa (en función del grado de intolerancia), motivo por el cual y, en base al dictamen científico de la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA), sobre los contenidos máximos de lactosa en la intolerancia a la lactosa y la galactosemia, la Agencia Española de Consumo, Seguridad Alimentaria y Nutrición (AECOSAN) ha adoptado orientaciones de contenido en lactosa para las denominaciones "Sin Lactosa” (Productos con un contenido inferior de lactosa del 0,01%) y "Bajo contenido en lactosa” (Productos con un contenido inferior de lactosa del 1%).People diagnosed with lactose intolerance should follow a lactose-free or low-lactose diet (depending on the degree of intolerance), which is why, and based on the scientific opinion of the European Food Safety Authority (EFSA) ), on the maximum levels of lactose in lactose intolerance and galactosemia, the Spanish Agency for Consumption, Food Safety and Nutrition (AECOSAN) has adopted guidelines for lactose content for the names "Lactose Free" (Products with a content lower lactose of 0.01%) and "Low lactose content" (Products with a lower lactose content of 1%).
En la actualidad por tanto, existe una necesidad de comprobación de los niveles de contenido en lactosa, tanto para los alimentos como para las superficies en los que se trata los mismos y las aguas de limpieza de dichas superficies. Currently, therefore, there is a need to check the levels of lactose content, both for food and for the surfaces in which they are treated and the cleaning water of said surfaces.
Estas comprobaciones deben resultar lo más rápidas posible, para entorpecer lo mínimo el proceso productivo y, no deben resultar muy costosas, para que el precio no resulte un impedimento en la realización de estas comprobaciones por parte de las empresas.These checks should be as fast as possible, to hinder the production process as little as possible, and should not be very expensive, so that the price does not become an impediment to undertaking these checks by companies.
En el estado de la técnica existen kits que permiten detectar proteínas de la leche a través de métodos relativamente rápidos como ELISA. Esta gran familia de análisis está relacionada con mostrar la contaminación de productos que contienen leche, pero no tiene nada que ver con la detección de lactosa, pues en estos kits se busca evitar una reacción alérgica respecto a las proteínas de la leche, que pueden estar presentes en productos con o sin lactosa, mientras que en la detección de la lactosa se busca evitar los síntomas consecuencia de la intolerancia a este azúcar compuesto.In the state of the art there are kits that allow detecting milk proteins through relatively fast methods such as ELISA. This large family of analyzes is related to showing the contamination of products that contain milk, but it has nothing to do with the detection of lactose, since these kits seek to avoid an allergic reaction to milk proteins, which may be present in products with or without lactose, while the detection of lactose seeks to avoid symptoms resulting from intolerance to this compound sugar.
Existen distintas alternativas en el mercado respecto a la detección de lactosa en superficies, aguas y alimentos, como por ejemplo los biosensores y el método enzimático.There are different alternatives on the market regarding the detection of lactose in surfaces, water and food, such as biosensors and the enzymatic method.
Así pues, la detección de lactosa mediante biosensores resulta fácil de usar y consigue la especificidad de detección de la lactosa respecto a otros azúcares que puede tener la muestra. No obstante, presenta como inconvenientes principales el precio de los equipos y consumibles y el límite de detección, que se sitúa por encima de las 100 ppm que es el límite actualmente fijado por la legislación.Thus, lactose detection by biosensors is easy to use and achieves the detection specificity of lactose with respect to other sugars that the sample may have. However, it has as main drawbacks the price of equipment and consumables and the detection limit, which is above 100 ppm, which is the limit currently set by legislation.
Por otra parte, el método enzimático se basa en la rotura enzimática de la lactosa para analizar uno de los dos azúcares que la forman, la galactosa. Es un método eficaz para la cuantificación exacta de la cantidad de lactosa que tiene una muestra, no obstante presenta dificultad en la manipulación, en los ajustes de calibración, en las limitaciones que supone el trabajo con enzimas (hay que conservar a temperaturas de congelación y refrigeración) y en la necesidad de disponer de un espectrofotómetro, que presenta un precio elevado que no pueden permitirse todas las empresas.On the other hand, the enzymatic method is based on the enzymatic breakdown of lactose to analyze one of the two sugars that make it up, galactose. It is an effective method for the exact quantification of the amount of lactose in a sample, although it presents difficulties in handling, in the calibration adjustments, in the limitations of working with enzymes (it must be kept at freezing temperatures and refrigeration) and the need to have a spectrophotometer, which has a high price that not all companies can afford.
Pueden mencionarse los siguientes documentos del estado de la técnica RU2396560C1, CN106706798A, CN107315053A, CN10523216A, CN107462660A, CN106645132A, JP2008170428A, JPS5651663A y ES2361733.The following state of the art documents RU2396560C1, CN106706798A, CN107315053A, CN10523216A, CN107462660A, CN106645132A, JP2008170428A, JPS5651663A and ES2361733 can be mentioned.
El documento de referencia RU2396560C1, define un método de identificación de hidratos de carbono, que implica la determinación del contenido de glucosa, lactosa, galactosa, fructosa y tagatosa a través de cromatografía en capa fina en placas Sordfil. Reference document RU2396560C1, defines a carbohydrate identification method, which involves the determination of glucose, lactose, galactose, fructose and tagatose content through thin layer chromatography on Sordfil plates.
Las placas se pre-saturan con una solución de dihidrofosfato de sodio (NaH2PO4) 0,5 mol/dm3 y luego se secan. A continuación, se usa una microjeringa para recoger 0,001 cm3 de solución de carbohidrato que luego se deposita en la línea de partida en la placa cromatográfica, se seca en aire y se baja a un disolvente. El disolvente utilizado es una mezcla de acetona, alcohol isopropílico y una solución de ácido láctico. La separación cromatográfica tarda de 80 a 90 minutos. Cuando el solvente alcanza el límite de elución, la placa se seca nuevamente a temperatura ambiente hasta la evaporación completa del solvente.The plates are pre-saturated with a 0.5 mol / dm3 sodium dihydrophosphate (NaH2PO4) solution and then dried. Next, a microsyringe is used to collect 0.001 cm3 of carbohydrate solution, which is then deposited in the starting line on the chromatographic plate, dried in air and lowered into a solvent. The solvent used is a mixture of acetone, isopropyl alcohol, and a lactic acid solution. Chromatographic separation takes 80 to 90 minutes. When the solvent reaches the elution limit, the plate is dried again at room temperature until complete evaporation of the solvent.
En este documento, se utilizan dos ejemplos para demostrar que el método propuesto es mejor que otro método de cromatografía, pero la comparación la realizan con distintas condiciones, pues para la comprobación del método anterior utilizan una matriz alimentaria real, en concreto un yogurt, a la que aplican un proceso de cromatografía de capa fina con distintos reactivos de impregnación de placa, solventes, solución de revelado..., mientras que en la comprobación del método propuesto en el documento utilizan una mezcla pura de laboratorio de distintos carbohidratos. De este modo, no se está realizando ambos métodos con igualdad de condiciones, dado que el comportamiento de una matriz real no es el mismo que el de una matriz de laboratorio, pues existen múltiples componentes en la matriz que pueden influir en el resultado final.In this document, two examples are used to demonstrate that the proposed method is better than another chromatography method, but the comparison is made with different conditions, since for the verification of the previous method they use a real food matrix, specifically a yogurt, at they apply a thin layer chromatography process with different plate impregnation reagents, solvents, developer solution ..., while in the verification of the method proposed in the document they use a pure laboratory mixture of different carbohydrates. Thus, both methods are not being carried out with equal conditions, since the behavior of a real matrix is not the same as that of a laboratory matrix, since there are multiple components in the matrix that can influence the final result.
Además, en este documento se pretende identificar la presencia de carbohidratos en una muestra, pero en ningún momento se determina el límite de detección del método. Es decir, no se indica cuál es el valor mínimo de las sustancias que es posible detectar con este método, de manera que en caso de no detectarse la lactosa, puede ser que no exista en la muestra o bien que exista en una cantidad que no resulta detectada por este método y sin embargo se encuentre por encima de las 100ppm en la muestra inicial. Es por tanto un procedimiento que no permite la detección de presencia o ausencia de los carbohidratos en una concentración determinada, por lo que no resulta válido para el objeto de esta invención, que es poder determinar que la cantidad de lactosa de una muestra es inferior o superior al valor mínimo permitido para poder considerar un alimento "sin lactosa” o "con bajo contenido en lactosa”.Furthermore, this document aims to identify the presence of carbohydrates in a sample, but at no time is the detection limit of the method determined. In other words, the minimum value of the substances that can be detected with this method is not indicated, so that if lactose is not detected, it may not exist in the sample or it may exist in a quantity that is not it is detected by this method and yet it is above 100ppm in the initial sample. It is therefore a procedure that does not allow the detection of the presence or absence of carbohydrates in a certain concentration, so it is not valid for the purpose of this invention, which is to be able to determine that the amount of lactose in a sample is lower or higher than the minimum value allowed to consider a food "lactose free" or "low lactose content".
Así mismo, un dato extraído del documento, como es la cantidad de muestra utilizada de 1 microlitros, indica que está trabajando con concentraciones de carbohidratos superiores a las 100ppm que actualmente marcan el límite en la legislación. Likewise, a data extracted from the document, such as the amount of sample used of 1 microliters, indicates that it is working with carbohydrate concentrations higher than 100ppm that currently mark the limit in the legislation.
Además, al tratar de separar todos los carbohidratos, la longitud que recorre la muestra en las tiras de visualización es elevada, suponiendo tiempos que oscilan entre 80 y 90 minutos, excesivos en la práctica, pues reducen la productividad.Furthermore, when trying to separate all carbohydrates, the length of the sample in the display strips is high, assuming times ranging from 80 to 90 minutes, excessive in practice, since they reduce productivity.
En este método además dado que se presenta para mezclas ideales de laboratorio, no propone un pretratamiento de la muestra consistente en la extracción de la lactosa de la muestra por disolución, mediante precipitación de proteínas y péptidos. Resulta además un método que se dilata excesivamente en el tiempo, debido al secado a temperatura ambiente. Esto además resta estandarización al método, dado que cada analista puede considerar una placa seca tras un tiempo distinto de secado.In this method, also given that it is presented for ideal laboratory mixtures, it does not propose a pre-treatment of the sample consisting of the extraction of lactose from the sample by dissolution, by means of protein and peptide precipitation. It is also a method that expands excessively over time, due to drying at room temperature. This also reduces standardization of the method, since each analyst can consider a dry plate after a different drying time.
Otro inconveniente es que utiliza reactivos de manipulación complicada, por ser corrosivos, cancerígenos o nocivos. Además, se adapta más a un método de laboratorio en el que hay que ajustar parámetros, impregnar placas... y no a un kit rápido que pueda utilizarse por cualquier empresa, en laboratorios sin grandes requisitos de instalaciones y maquinaria, para conocer estos parámetros de un modo rápido y sencillo.Another drawback is that it uses reagents of complicated manipulation, for being corrosive, carcinogenic or harmful. In addition, it is more adapted to a laboratory method in which you have to adjust parameters, impregnate plates ... and not to a quick kit that can be used by any company, in laboratories without great requirements of facilities and machinery, to know these parameters quickly and easily.
El documento de referencia CN106706798A define un método para determinar el contenido de lactosa que implica disolver la muestra que se va a medir en agua desionizada por ultrasonidos para obtener una solución mixta que se transfiere a un matraz volumétrico y se centrifuga. Se repite el proceso de disolución y transferencia y se reemplaza la muestra con un estándar de lactosa para obtener una solución estándar, utilizando cromatografía líquida para obtener el tiempo de retención y área pico de cada sustancia.Reference document CN106706798A defines a method for determining the lactose content that involves dissolving the sample to be measured in deionized water by ultrasound to obtain a mixed solution that is transferred to a volumetric flask and centrifuged. The dissolution and transfer process is repeated and the sample is replaced with a lactose standard to obtain a standard solution, using liquid chromatography to obtain the retention time and peak area of each substance.
La cromatografía líquida para la separación de los carbohidratos se muestra efectiva para un amplio rango de muestras, sin embargo existen limitaciones importantes para darle uso en la industria alimentaria. Por un lado el nivel de aparatos/maquinaria necesarios para llevarla a cabo (aplicación de ultrasonidos, ordenador dedicado, columna de cromatografía, centrífuga, etc...), suponen un gran inconveniente dado que más de un 90% del tejido empresarial alimentario son pequeñas y medianas empresas y muy pocas pueden permitirse el uso de este tipo de técnicas. Por otro lado el nivel técnico del personal requerido para poder llevar a cabo esta técnica, una vez más la mayoría de empresas no se lo pueden permitir. Y por último, se precisa un elevado número de muestras a analizar para que un laboratorio pudiera plantearse establecer una técnica de este tipo. Liquid chromatography for the separation of carbohydrates is effective for a wide range of samples, however there are important limitations to use it in the food industry. On the one hand, the level of devices / machinery necessary to carry it out (ultrasound application, dedicated computer, chromatography column, centrifuge, etc ...), represent a major drawback since more than 90% of the food business fabric is small and medium-sized companies and very few can afford the use of these techniques. On the other hand, the technical level of personnel required to carry out this technique, once again most companies cannot afford it. And finally, a high number of samples to be analyzed is required for a laboratory to consider establishing such a technique.
Esta patente, además, está orientada a detectar lactosa en alimentación animal (principalmente a lechones), siendo los límites de sensibilidad completamente distintos que en alimentación humana. El pretratamiento que debe realizarse a la muestra, mediante ultrasonidos, centrífuga... complica el instrumental.This patent, moreover, is aimed at detecting lactose in animal feed (mainly piglets), the limits of sensitivity being completely different than in human feeding. The pretreatment to be performed on the sample, using ultrasound, a centrifuge ... complicates the instruments.
El documento de referencia CN107315053A, define un método de análisis de nuevo mediante cromatografía líquida para detectar la cantidad apropiada de galactosa, glucosa, lactulosa, sacarosa y estándar de referencia de lactosa.Reference document CN107315053A, defines a method of analysis again by liquid chromatography to detect the appropriate amount of galactose, glucose, lactulose, sucrose and lactose reference standard.
Presenta por tanto las mismas limitaciones técnicas, de personal, etc..., que el documento anterior. Aunque en este caso el documento plantea un sistema de atomización para la detección de sustancias al final de la cromatografía líquida y está enfocado al control de la calidad de la lactosa y la investigación de sustancias relacionadas.It therefore presents the same technical, personnel, etc. limitations as the previous document. Although in this case the document proposes an atomization system for the detection of substances at the end of liquid chromatography and is focused on the quality control of lactose and the investigation of related substances.
El documento de referencia CN105723216A, determina un método de detección y cuantificación de galacto-oligosacáridos en una muestra que implica hacer reaccionar una muestra que comprende galacto-oligosacáridos y dextrina con reactivo de derivatización, derivatizar dextrina y galacto-oligosacáridos en la muestra y separar el componente galactooligosacárido en la muestra por cromatografía líquida de alta resolución usando fase reversa 30C columna de cromatografía.Reference document CN105723216A, determines a method of detection and quantification of galacto-oligosaccharides in a sample that involves reacting a sample comprising galacto-oligosaccharides and dextrin with derivatization reagent, derivatizing dextrin and galacto-oligosaccharides in the sample and separating the galactooligosaccharide component in the sample by high-performance liquid chromatography using reverse phase 30C chromatography column.
De nuevo el método presenta las mismas limitaciones técnicas, de personal, etc... y en este caso aún más debido a que se utiliza HPLC, que es una técnica aún más avanzada que la cromatografía líquida, LC). Esta patente busca la detección de dos compuestos (galactooligosacáridos) distintos a la lactosa, aunque uno es un derivado de la misma.Again, the method has the same technical, personnel, etc. limitations, and in this case, even more so because HPLC is used, which is an even more advanced technique than liquid chromatography, LC). This patent seeks the detection of two compounds (galactooligosaccharides) other than lactose, although one is a derivative of it.
El documento de referencia CN107462660A, plantea una cromatografía de intercambio iónico que presenta las mismas limitaciones que en los casos anteriores. Este documento se centra en la detección de galacto-oligosacáridos en alimentos para niños y leche en polvo.Reference document CN107462660A, proposes an ion exchange chromatography that presents the same limitations as in the previous cases. This document focuses on the detection of galacto-oligosaccharides in baby food and milk powder.
El documento de referencia CN106645132A utiliza un método enzimático que descompone la lactosa en sus monosacáridos para medir la galactosa por método cromogénico (con una serie de reactivos se consigue que la presencia de galactosa dé color). Está completamente orientado a muestras humanas y se trata de un tipo de métodos que suelen ser totalmente cualitativos, es decir que valoran la presencia/ausencia, pero resulta difícil hacer un ajuste de cambio de color para valorar la existencia de una concentración determinada. Reference document CN106645132A uses an enzymatic method that breaks down lactose into its monosaccharides to measure galactose by chromogenic method (with a series of reagents the presence of galactose is achieved to give color). It is completely oriented to human samples and it is a type of methods that are usually totally qualitative, that is, they assess the presence / absence, but it is difficult to make a color change adjustment to assess the existence of a certain concentration.
El documento de referencia JP2008170428A realiza una mejora de la técnica de cromatografía líquida de alta eficacia para la detección de trazas de azúcares y alcoholes derivados de los mismos. La mejora consiste en introducir un detector UV al final de la columna de cromatografía y benzoilar los azúcares/alcoholes para que absorban en UV (por sí solos no lo hacen). Presenta las mismas limitaciones técnicas, personal, etc... que en los documentos anteriores.Reference document JP2008170428A performs an improvement in the high-performance liquid chromatography technique for the detection of traces of sugars and alcohols derived therefrom. The improvement consists of introducing a UV detector at the end of the chromatography column and benzoylating the sugars / alcohols so that they absorb in UV (by themselves they do not). It presents the same technical, personal, etc. limitations as in the previous documents.
El documento de referencia JPS5651663A se refiere a un método para analizar azúcares, cualitativa y cuantitativamente mediante cromatografía de capa fina o de papel, principalmente en muestras humanas (aunque también nombra los alimentos) y la aplicación de rayos ultravioleta tras la pulverización de la disolución. Resulta un método que no está planteado como un kit rápido de análisis y de fácil uso para gente que no tenga expresamente una elevada experiencia en cromatografía de capa fina.Reference document JPS5651663A refers to a method to analyze sugars, qualitatively and quantitatively by means of thin layer chromatography or paper, mainly in human samples (although it also names food) and the application of ultraviolet rays after spraying the solution. It is a method that is not intended as a quick analysis kit and easy to use for people who do not have expressly high experience in thin layer chromatography.
Finalmente, el documento de referencia ES2361733 es un sistema de separación industrial de distintos componentes basándose en el uso en serie de distintas columnas empaquetadas. No se trata en ningún momento de obtener un kit de detección rápida de la lactosa que pueda utilizarse por empresas alimentarias.Finally, reference document ES2361733 is an industrial separation system for different components based on the serial use of different packed columns. At no time is it a question of obtaining a lactose rapid detection kit that can be used by food companies.
No existe por tanto en el estado de la técnica un proceso que pueda plantear la detección de la lactosa en superficies, aguas y alimentos mediante un ensayo rápido y sencillo que pueda presentarse como un kit rápido de detección, apto para la aplicación por cualquier empresa del sector, sin que sea necesaria la especialización de los operarios.Therefore, there is no process in the state of the art that can propose the detection of lactose in surfaces, water and food by means of a quick and simple test that can be presented as a rapid detection kit, suitable for application by any company in the sector, without requiring operator specialization.
Descripción de la invenciónDescription of the Invention
El Kit de detección de lactosa, en superficies, aguas y alimentos, sobre una muestra obtenida de los mismos que aquí se propone comprende una solución de extracción de la lactosa de la muestra, donde dicha solución de extracción está contenida en un recipiente de extracción y presenta una cantidad de lactosa comprendida entre 0 y 50 mg/l.The lactose detection kit, on surfaces, water and food, on a sample obtained from them proposed here comprises an extraction solution for lactose from the sample, where said extraction solution is contained in an extraction container and it has an amount of lactose between 0 and 50 mg / l.
Esta solución de extracción tiene 3 funciones principales que son extraer la lactosa de la muestra por disolución en fase acuosa, precipitar y aglutinar las proteínas y péptidos de pequeño tamaño que pueda contener la muestra para evitar interferencias en partes posteriores, y ajustar la sensibilidad del kit a una concentración determinada en función del contenido de lactosa de la muestra y la dilución aplicada a la misma, a través de la adición de una pequeña cantidad de lactosa.This extraction solution has 3 main functions, which are to extract lactose from the sample by dissolving in aqueous phase, precipitating and agglutinating the proteins and small peptides that the sample may contain to avoid interferences in later parts, and adjusting the sensitivity of the kit at a certain concentration depending on the lactose content of the sample and the dilution applied to it, through the addition of a small amount of lactose.
Esta cantidad de lactosa que se aporta a la muestra permite aumentar la sensibilidad del método, consiguiendo detectar cantidades muy reducidas que permitan conocer la existencia de lactosa a partir de los niveles determinados por la legislación, que exceden de lo permitido en alimentos que se puedan considerar libres de lactosa. Sin este aporte, sería imposible la detección de lactosa en las cantidades de trabajo utilizadas con esta técnica, dado que la muestra está diluida y no se permitiría la detección.This amount of lactose that is contributed to the sample allows to increase the sensitivity of the method, managing to detect very small amounts that allow to know the existence of lactose from the levels determined by the legislation, which exceed what is allowed in foods that can be considered lactose free. Without this contribution, it would be impossible to detect lactose in the working quantities used with this technique, since the sample is diluted and detection would not be allowed.
El kit comprende además una solución de separación y una cámara de separación hermética para la colocación de la misma, donde la solución de separación está formada por una mezcla que contiene al menos un disolvente apto para la separación de azúcares.The kit also includes a separation solution and an airtight separation chamber for its placement, where the separation solution is made up of a mixture containing at least one solvent suitable for the separation of sugars.
Así mismo comprende una tira de separación de la lactosa respecto a otros compuestos solubles en la muestra, mediante cromatografía.It also includes a strip for separating lactose from other soluble compounds in the sample, by chromatography.
La solución de separación ayuda a separar la lactosa de otros componentes de la muestra y concentrarla en una zona muy determinada de la tira de separación, en forma de banda.The separation solution helps to separate the lactose from other components of the sample and concentrate it in a very specific area of the separation strip, in the form of a band.
El kit presenta además un primer recipiente de contención con una primera solución de visualización y al menos un segundo recipiente de contención con una segunda solución de visualización. La primera solución está formada por al menos P-anisaldehido y la segunda solución está formada por una mezcla de ácido sulfúrico y etanol absoluto.The kit also features a first containment container with a first display solution and at least a second containment container with a second display solution. The first solution is made up of at least P-anisaldehyde and the second solution is made up of a mixture of sulfuric acid and absolute ethanol.
Se aporta igualmente un pulverizador para el mezclado de la primera y la segunda soluciones de visualización.A sprayer is also provided for mixing the first and second display solutions.
Así pues, la mezcla de ambas soluciones de visualización tiene la función de agente de revelado de las tiras de separación, de manera que permite visualizar distintas manchas correspondientes a los distintos compuestos de la muestra analizada. Debido a la inestabilidad de la mezcla, se presentan como dos soluciones por separado que se mezclan justo en el momento previo a su uso.Thus, the mixture of both visualization solutions has the function of developing agent of the separation strips, so that it allows to visualize different spots corresponding to the different compounds of the analyzed sample. Due to the instability of the mixture, they are presented as two separate solutions that are mixed just before use.
Finalmente, el kit presenta un patrón de lactosa formado por una mezcla de agua destilada, lactosa en una proporción mayor a 15ppm y un conservante. Finally, the kit presents a lactose standard formed by a mixture of distilled water, lactose in a proportion greater than 15ppm and a preservative.
Este patrón tiene una primera función principal consistente en el control de calidad interno en cada uno de los ensayos. Así pues, el uso del patrón de lactosa permite asegurar que las fases de separación y visualización se han realizado de forma adecuada, eliminando de este modo la obtención de falsos negativos.This pattern has a first main function consisting of internal quality control in each of the tests. Thus, the use of the lactose standard ensures that the separation and visualization phases have been carried out adequately, thus eliminating the obtaining of false negatives.
Así mismo, el patrón presenta una segunda función principal que reside en que facilita la visualización de los resultados, dado que la mancha que deja el patrón en la tira de separación, permite saber exactamente la altura a la que debe aparecer la mancha de lactosa de la muestra en caso de que contenga lactosa. Existen factores como la humedad, la temperatura, la propia muestra... que pueden hacer variar ligeramente la altura final de las manchas, por lo que el patrón de lactosa permite centrar en cada caso cuál debe ser el valor a obtener en caso de la existencia de lactosa.Likewise, the pattern has a second main function that resides in that it facilitates the visualization of the results, since the stain that the pattern leaves on the separation strip, allows to know exactly the height at which the the sample in case it contains lactose. There are factors such as humidity, temperature, the sample itself ... that can slightly vary the final height of the stains, so the lactose pattern allows focusing in each case on the value to be obtained in case of existence of lactose.
En esta memoria se propone a su vez un procedimiento de detección de lactosa, en superficies, aguas y alimentos, mediante la aplicación de un kit de detección como el definido previamente.In this report, a lactose detection procedure is proposed, in surfaces, water and food, by applying a detection kit as previously defined.
Así pues, la primera fase es la obtención de una muestra y la homogeneización de la misma.Thus, the first phase is obtaining a sample and homogenizing it.
La segunda fase está formada por la introducción de la solución de separación en el interior de la cámara de separación y cierre hermético de la misma durante un tiempo comprendido entre 15 y 30min. Es importante colocar la solución de separación en el interior de la cámara de separación durante un tiempo previamente a su uso, para que la mezcla de disolventes de la fase líquida sature la fase gaseosa de la cámara.The second phase is formed by introducing the separation solution inside the separation chamber and sealing it for a period of between 15 and 30 min. It is important to place the separation solution inside the separation chamber for a time prior to use, so that the solvent mixture in the liquid phase saturates the gas phase in the chamber.
A continuación, la tercera fase consiste en la colocación de una cantidad de 5 ^l del resultado de la obtención y homogeneización de la muestra, en una tira de separación, en la primera marca indicativa de la línea de colocación de la muestra.Then the third phase consists of placing a quantity of 5 ^ l of the result of obtaining and homogenizing the sample, on a separation strip, at the first mark indicative of the sample placement line.
Igualmente, como una cuarta fase, se realiza la colocación de una cantidad de 5 ^l del patrón de lactosa, en la misma tira de separación, en la segunda marca indicativa de la línea de colocación de la muestra.Likewise, as a fourth phase, an amount of 5 ^ l of the lactose standard is placed, on the same separation strip, at the second mark indicative of the sample placement line.
La quinta fase consiste en un primer secado de la tira de separación a una temperatura comprendida entre 90 y 115°, durante un tiempo comprendido entre 30s y 10min. The fifth phase consists of a first drying of the separation strip at a temperature between 90 and 115 °, for a time between 30s and 10min.
A continuación, se realiza la sexta fase de introducción de la tira de separación en el interior de la cámara de separación y cerrado de la misma de nuevo, durante un tiempo comprendido entre 20 y 30 min, donde la tira de separación queda dispuesta con un ángulo de inclinación y orientada tal que el primer lateral está en una posición inferior respecto al segundo lateral.Subsequently, the sixth phase of introducing the separation strip into the separation chamber and closing it again, for a period of between 20 and 30 min, is carried out, where the separation strip is arranged with a angle of inclination and oriented such that the first lateral is in a lower position with respect to the second lateral.
Dicha tira de separación debe someterse a continuación a una séptima fase formada por un segundo secado a una temperatura comprendida entre 90 y 115°, durante un tiempo comprendido entre 30s y 10min;Said separation strip must then undergo a seventh phase formed by a second drying at a temperature of between 90 and 115 °, for a time of between 30s and 10min;
La octava fase es la introducción del total de la segunda solución de visualización contenida en el segundo recipiente de contención, en un pulverizador y, seguidamente introducción de 0,1 ml del total de la primera solución de visualización contenida en el primer recipiente de contención, sobre la anterior en el mismo pulverizador y, agitado de la mezcla.The eighth phase is the introduction of the total of the second visualization solution contained in the second containment container, in a sprayer, and then the introduction of 0.1 ml of the total of the first visualization solution contained in the first containment container, on the previous one in the same sprayer and, shaking the mixture.
Una vez preparada la mezcla de ambas primera y segunda soluciones de visualización, se lleva a cabo la pulverización de forma uniforme de la tira de separación con la misma.Once the mixture of both first and second visualization solutions has been prepared, the separation strip is sprayed uniformly with it.
Finalmente, se realiza una fase de revelado de la tira de separación durante un tiempo comprendido entre 5 y 15 min, a una temperatura de entre 100 y 120° y, una última fase de interpretación de los resultados.Finally, a development phase of the separation strip is carried out for a time between 5 and 15 min, at a temperature of between 100 and 120 ° and, a last phase of interpretation of the results.
Con el kit de detección de lactosa y el procedimiento de detección mediante aplicación del mismo que aquí se propone se obtiene una mejora significativa del estado de la técnica.With the lactose detection kit and the detection procedure by applying it proposed here, a significant improvement in the state of the art is obtained.
Esto es así pues se consigue un modo de detección de la lactosa tanto en alimentos como en aguas y superficies, rápido y de fácil uso, que permite la presentación del mismo en un kit que puede ser utilizado por personas que no precisan de una especialización para ello.This is so because a quick and easy-to-use lactose detection mode is obtained both in food and in waters and surfaces, which allows its presentation in a kit that can be used by people who do not require a specialization to it.
Con este kit es posible realizar un control de la eficacia de la limpieza en superficies de trabajo y sistemas CIP, es decir, sistemas de limpieza in situ, sin desmontar equipos ni tuberías, además de validar la cadena de producción por análisis de semielaborados y producto terminado y liberar producto terminado. With this kit it is possible to carry out a control of the cleaning efficiency on work surfaces and CIP systems, that is, cleaning systems in place, without disassembling equipment or pipes, in addition to validating the production chain by analysis of semi-finished products and finished and release finished product.
Este kit se fundamenta en los principios de la cromatografía de capa fina para la separación y detección de lactosa en superficies, aguas y alimentos. Además de extraer la lactosa de la matriz de análisis, separa la misma de otros componentes solubles y visualiza la presencia o ausencia de la lactosa en la muestra.This kit is based on the principles of thin layer chromatography for the separation and detection of lactose on surfaces, water and food. In addition to extracting lactose from the analysis matrix, it separates it from other soluble components and visualizes the presence or absence of lactose in the sample.
Gracias a la aplicación de una solución de extracción, es posible ajustar la sensibilidad del kit a una concentración determinada de lactosa, mediante la adición de una pequeña cantidad de la misma. De este modo, dado que en la actualidad el valor mínimo permitido para poder considerar una muestra "sin lactosa” es de 100ppm según la legislación, el kit se ajusta a estos valores, pero si el valor mínimo variara, el kit se prepararía con una sensibilidad apropiada para el nuevo valor.Thanks to the application of an extraction solution, it is possible to adjust the sensitivity of the kit to a certain concentration of lactose, by adding a small amount of it. Thus, given that currently the minimum value allowed to be able to consider a "lactose-free" sample is 100 ppm according to the legislation, the kit adjusts to these values, but if the minimum value were to vary, the kit would be prepared with a appropriate sensitivity for the new value.
De este modo el kit propuesto y el procedimiento de aplicación del mismo consiguen no sólo la detección de la existencia o no de lactosa, sino que además y como ventaja significativa, consigue la identificación de la cantidad de lactosa con un punto de corte claro al límite legal, que actualmente es 100ppm, para poder nombrar un producto "sin lactosa”.In this way, the proposed kit and its application procedure achieve not only the detection of the existence or not of lactose, but also, and as a significant advantage, it achieves the identification of the amount of lactose with a clear cut-off point at the limit. legal, which is currently 100ppm, to be able to name a "lactose-free" product.
En la aplicación del kit para la detección de la lactosa, se realiza un secado controlado y a elevadas temperaturas, mediante un calentador, horno o similar, de manera que por un lado se consigue una mayor rapidez de realización del proceso y por otro se logra una estandarización del secado a unas mismas condiciones de realización, lo que repercute posteriormente en los resultados obtenidos.In the application of the kit for the detection of lactose, a controlled drying is carried out at high temperatures, by means of a heater, oven or the like, so that on the one hand a faster speed of carrying out the process is achieved and on the other a standardization of drying under the same conditions of performance, which subsequently affects the results obtained.
En lo referente a la velocidad del proceso de separación, mediante este kit se separa la posible cantidad de lactosa existente en la muestra y no se actúa sobre el resto de sustancias, por lo que el proceso de separación es más rápido y tiene una duración de unos 25-30 minutos, frente a los 80-90 minutos de otros procesos.Regarding the speed of the separation process, this kit separates the possible amount of lactose in the sample and does not act on the other substances, so the separation process is faster and lasts for about 25-30 minutes, compared to 80-90 minutes for other processes.
Además, el kit presenta todos los elementos que se precisan para la detección de la lactosa, no siendo ninguno de ellos un material nocivo que deba manipularse con extrema precaución, por lo que es un kit sencillo que puede ser utilizado por personal que no necesariamente deba tener una especial cualificación para ello.In addition, the kit presents all the elements that are required for the detection of lactose, none of them being a harmful material that must be handled with extreme caution, making it a simple kit that can be used by personnel who do not necessarily need to have a special qualification for it.
Los elementos que contiene no suponen un coste muy elevado, por lo que este kit resulta accesible para todas las empresas que precisen de una detección de presencia de lactosa y pueden aplicarlo ellos mismos, sin necesidad de recurrir a empresas externas, por lo que se consigue un coste reducido y mayor rapidez.The elements it contains do not represent a very high cost, making this kit accessible to all companies that require lactose presence detection and They can apply it themselves, without the need to resort to external companies, so a lower cost and faster are achieved.
Además, el proceso se realiza siguiendo unas pautas sobre los elementos aportados en el kit, sin necesidad de impregnar y/o cortar placas, preparar reactivos, ajustar parámetros como la dilución..., por lo que resulta más sencillo y apto para poder aplicarlo en la propia empresa, sin necesidad de mandar las muestras a un laboratorio.In addition, the process is carried out following guidelines on the elements provided in the kit, without the need to impregnate and / or cut plates, prepare reagents, adjust parameters such as dilution ..., making it easier and more suitable for application. in-house, without the need to send samples to a laboratory.
Por tanto, es un kit muy efectivo, apto para aplicarse en condiciones dispares de temperatura y humedad, según el lugar en que se emplee, pues la aplicación del patrón de lactosa aporta la medida en cada caso en concreto según las condiciones ambientales y concretas de la medición. Esto resulta una ventaja relevante respecto al método de cromatografía de capa fina estándar, dado que el tener que mantener siempre unas mismas condiciones ambientales resulta una importante limitación.Therefore, it is a very effective kit, suitable to be applied in disparate conditions of temperature and humidity, depending on the place where it is used, since the application of the lactose standard provides the measure in each specific case according to the environmental and concrete conditions of the measurement. This is a relevant advantage over the standard thin layer chromatography method, since having to always maintain the same environmental conditions is an important limitation.
Así mismo es capaz de detectar la presencia o ausencia de lactosa con la necesaria sensibilidad para determinar si la cantidad existente está en una proporción que supera un límite legislativo.It is also capable of detecting the presence or absence of lactose with the necessary sensitivity to determine if the existing quantity is in a proportion that exceeds a legislative limit.
Breve descripción de los dibujosBrief description of the drawings
Con objeto de ayudar a una mejor comprensión de las características del invento, de acuerdo con un ejemplo preferente de realización práctica del mismo, se aporta como parte integrante de dicha descripción, una serie de dibujos donde, con carácter ilustrativo y no limitativo, se ha representado lo siguiente:In order to help a better understanding of the characteristics of the invention, in accordance with a preferred example of its practical embodiment, a series of drawings is provided as an integral part of said description, where, by way of illustration and not limitation, represented the following:
La Figura 1.- Muestra una vista en planta de una tira de separación de la lactosa, para un modo de realización preferente de la invención.Figure 1.- Shows a plan view of a lactose separation strip, for a preferred embodiment of the invention.
Las Figuras 2.1 a 2.4.- Muestra una vista en planta de tiras de separación de la lactosa en las que los resultados obtenidos respectivamente, han sido positivo, negativo, y dos posibles caso de no válido, para un modo de realización preferente de la invención.Figures 2.1 to 2.4.- Shows a plan view of lactose separation strips in which the results obtained, respectively, have been positive, negative, and two possible cases of invalid, for a preferred embodiment of the invention. .
La Figura 3.1 y 3.2.- Muestra unas vistas en alzado y perfil de la cámara de separación en la fase de introducción de la tira de separación en el interior de una tira de separación de la lactosa, para un modo de realización preferente de la invención. Figure 3.1 and 3.2.- Shows elevation and profile views of the separation chamber in the phase of introducing the separation strip inside a lactose separation strip, for a preferred embodiment of the invention. .
La Figura 4.- Muestra un diagrama de bloques del procedimiento de detección de lactosa, en superficies, aguas y alimentos, mediante un kit como el definido, para un modo de realización preferente de la invención.Figure 4.- Shows a block diagram of the lactose detection procedure, on surfaces, water and food, using a kit as defined, for a preferred embodiment of the invention.
Descripción detallada de un modo de realización preferente de la invenciónDetailed description of a preferred embodiment of the invention
A la vista de las figuras aportadas, puede observarse cómo en un modo de realización preferente de la invención, el kit de detección de lactosa, en superficies, aguas y alimentos, sobre una muestra obtenida de los mismos que aquí se presenta, comprende varios elementos que se detallan a continuación.In view of the figures provided, it can be seen how in a preferred embodiment of the invention, the lactose detection kit, on surfaces, water and food, on a sample obtained from them presented here, comprises several elements detailed below.
Así pues, comprende una solución de extracción de la lactosa de la muestra, donde dicha solución de extracción está contenida en un recipiente de extracción y presenta una cantidad de lactosa comprendida entre 0 y 50 mg/l. En función de la dilución utilizada y del tipo de muestra es necesario aportar una mayor o menor cantidad de lactosa, pues si presenta 100ppm, al diluirse la cantidad disminuye y es más difícil de detectar, ya que puede situarse por debajo de la cantidad mínima necesaria para la visualización posterior en la tira de separación (19), por lo que el aporte de lactosa de la solución de extracción permite que sí sea posible la detección.Thus, it comprises a lactose extraction solution from the sample, where said extraction solution is contained in an extraction container and has an amount of lactose between 0 and 50 mg / l. Depending on the dilution used and the type of sample, it is necessary to provide a greater or lesser amount of lactose, because if it presents 100ppm, when diluted the amount decreases and is more difficult to detect, since it can be below the minimum amount necessary for subsequent visualization on the separation strip (19), so that the lactose contribution of the extraction solution allows detection to be possible.
En este modo de realización preferente de la invención, se realiza una dilución de 1/5, por lo que si el producto presentara una cantidad menor o igual a las 100ppm de lactosa, la muestra diluida presentaría 20ppm. Así pues, la solución de extracción va a presentar en este caso 20mg/l de lactosa, para que la concentración en la muestra ascienda a 40ppm en caso de que realmente exista presencia de lactosa, y este valor ya es detectable mediante este método de detección.In this preferred embodiment of the invention, a 1/5 dilution is made, so if the product had a quantity less than or equal to 100ppm of lactose, the diluted sample would have 20ppm. Thus, the extraction solution will present in this case 20mg / l of lactose, so that the concentration in the sample rises to 40ppm in the event that there is actually lactose present, and this value is already detectable by this detection method. .
En este modo de realización preferente de la invención, se considera que la muestra a analizar proviene de un alimento. Así pues, la solución de extracción comprende además de la lactosa, agua destilada, un conservante formado por ácido benzoico y un reactivo de desproteinización formado por acetato de zinc, tungstato de sodio, ácido sulfúrico, ácido tricloroacético, ácido perclórico, éter o acetona.In this preferred embodiment of the invention, it is considered that the sample to be analyzed comes from a food. Thus, the extraction solution comprises, in addition to lactose, distilled water, a preservative made up of benzoic acid and a deproteinization reagent made up of zinc acetate, sodium tungstate, sulfuric acid, trichloroacetic acid, perchloric acid, ether or acetone.
En este modo de realización preferente de la invención, el reactivo de desproteinización utilizado es acetato de zinc. In this preferred embodiment of the invention, the deproteinization reagent used is zinc acetate.
El kit de detección comprende también una solución de separación (17) y una cámara de separación (18) hermética para la colocación de la misma. Esta solución de separación (17) está formada por una mezcla que contiene al menos un disolvente apto para la separación de azúcares.The detection kit also includes a separation solution (17) and a hermetic separation chamber (18) for placing it. This separation solution (17) is made up of a mixture containing at least one solvent suitable for the separation of sugars.
En este modo de realización preferente de la invención, la solución de separación (17) está formada por un disolvente que en concreto es acetona y comprende además agua destilada.In this preferred embodiment of the invention, the separation solution (17) is formed by a solvent, which is specifically acetone and further comprises distilled water.
En otros modos de realización, el disolvente puede estar formado por acetato de etilo, isopropanol, N-Butanol, tampón de fosfato, metanol, cloroformo, hidróxido de amonio, ácido acético y/o N-propanol.In other embodiments, the solvent can be formed by ethyl acetate, isopropanol, N-Butanol, phosphate buffer, methanol, chloroform, ammonium hydroxide, acetic acid and / or N-propanol.
Como se muestra en la Figura 1, este kit cuenta además con una tira de separación (19) de la lactosa respecto a otros compuestos solubles en la muestra, mediante cromatografía. Esta tira de separación (19) presenta forma rectangular con un primer y segundo laterales (19.1, 19.2) opuestos de menor longitud.As shown in Figure 1, this kit also has a separation strip (19) for lactose with respect to other soluble compounds in the sample, by chromatography. This separation strip (19) has a rectangular shape with opposite first and second sides (19.1, 19.2) of shorter length.
De forma paralela a ambos primer y segundo laterales (19.1, 19.2) presenta una primera línea (20) de colocación de la muestra próxima al primer lateral (19.1) y una segunda línea (21) de fin de la subida de la solución de separación (17), próxima al segundo lateral (19.2).Parallel to both the first and second sides (19.1, 19.2), it presents a first line (20) for placing the sample next to the first side (19.1) and a second line (21) for the end of the rise of the separation solution. (17), next to the second lateral (19.2).
En este modo de realización preferente de la invención, la tira de separación (19) de la lactosa está compuesta por un cromatofolio de gel de sílice 60, pero en otros modos de realización puede estar compuesta de celulosa, de kieselguhr, o de una combinación de gel de sílice y kieselguhr.In this preferred embodiment of the invention, the lactose separation strip (19) is composed of a silica gel chromatofolium 60, but in other embodiments it may be composed of cellulose, kieselguhr, or a combination of silica gel and kieselguhr.
Así mismo, en este modo de realización preferente de la invención, la tira de separación (19) de la lactosa presenta una impregnación de acetato de sodio, pero en otros modos de realización en los que la composición de la tira de separación sea diferente, puede presentar una impregnación en borato de sodio, ácido bórico o bisulfito de sodio.Likewise, in this preferred embodiment of the invention, the lactose separation strip (19) has an impregnation of sodium acetate, but in other embodiments in which the composition of the separation strip is different, it may have an impregnation in sodium borate, boric acid or sodium bisulfite.
Como puede observarse en la Figura 1, la tira de separación (19) de la lactosa presenta sobre la primera línea (20) de colocación de la muestra, una primera y una segunda marcas (22, 23) indicativas del lugar de colocación de la muestra y del patrón de lactosa, respectivamente, donde ambas primera y segunda marcas (22, 23) indicativas están separadas entre sí.As can be seen in Figure 1, the lactose separation strip (19) has on the first line (20) for sample placement, first and second marks (22, 23) indicative of the place of placement of the sample. sample and lactose standard, respectively, where both first and second indicative marks (22, 23) are separated from each other.
El kit de detección comprende un primer recipiente de contención con una primera solución de visualización y al menos un segundo recipiente de contención con una segunda solución de visualización.The detection kit comprises a first containment container with a first visualization solution and at least a second containment container with a second visualization solution.
La primera solución está formada al menos por P-anisaldehido, siendo en este modo de realización formada únicamente por P-anisaldehido y, la segunda solución está formada por una mezcla de ácido sulfúrico y etanol absoluto.The first solution is formed by at least P-anisaldehyde, being in this embodiment only formed by P-anisaldehyde and, the second solution is formed by a mixture of sulfuric acid and absolute ethanol.
Así pues, en este modo de realización preferente de la invención, el primer recipiente de contención de la primera solución de visualización comprende una cantidad entre 2 y 3 ml de la misma, siendo en este caso de 2,5ml y, el segundo recipiente de contención de la segunda solución comprende una mezcla de 1,8ml de etanol absoluto y 0,1ml de ácido sulfúrico.Thus, in this preferred embodiment of the invention, the first containment container of the first visualization solution comprises a quantity of between 2 and 3 ml thereof, in this case being 2.5 ml and the second container of Containment of the second solution comprises a mixture of 1.8ml of absolute ethanol and 0.1ml of sulfuric acid.
En este modo de realización preferente de la invención el kit de detección comprende un primer recipiente de contención y 25 segundos recipientes de contención, para que resulte válido para realizar 25 test de detección. En otros modos de realización, el kit puede contener otras cantidades distintas, válidas para un número diferente de test de detección.In this preferred embodiment of the invention, the detection kit comprises a first containment container and 25 second containment containers, so that it is valid for carrying out 25 detection tests. In other embodiments, the kit may contain other different quantities, valid for a different number of detection tests.
El kit comprende además un pulverizador para el mezclado de la primera y la segunda soluciones de visualización y un patrón de lactosa formado por una mezcla de agua destilada, lactosa en una proporción mayor a 15ppm y un conservante. En este modo de realización preferente de la invención se considera un patrón de lactosa con una concentración de 100ppm de la misma.The kit also includes a sprayer for mixing the first and second display solutions and a lactose standard consisting of a mixture of distilled water, lactose in a proportion greater than 15ppm and a preservative. In this preferred embodiment of the invention a lactose standard with a concentration of 100ppm thereof is considered.
En este modo de realización preferente de la invención, el conservante del patrón de lactosa está formado por ácido benzoico.In this preferred embodiment of the invention, the lactose standard preservative is formed by benzoic acid.
En esta memoria se propone así mismo, un procedimiento de detección de lactosa, en superficies, aguas y alimentos, mediante la aplicación de un kit de detección como el definido previamente. In this report, a lactose detection procedure is also proposed, on surfaces, water and food, by applying a detection kit as previously defined.
Este procedimiento presenta una primera fase consistente en la obtención y homogeneización (1) de una muestra.This procedure presents a first phase consisting of obtaining and homogenizing (1) a sample.
En este modo de realización preferente de la invención, en el que se ha considerado que la detección de lactosa de realiza sobre un alimento, dicha fase de obtención y homogeneización (1) de la muestra comprende una primera etapa de removido o triturado (2) del alimento.In this preferred embodiment of the invention, in which it has been considered that the detection of lactose is carried out on a food, said phase of obtaining and homogenizing (1) the sample comprises a first stage of stirring or grinding (2) of food.
Así mismo, dicha primera fase comprende una segunda etapa de introducción (3) de una porción de la muestra en un recipiente de extracción que contiene una solución de extracción para agitar luego el recipiente hasta obtener la homogeneización del conjunto y, una tercera etapa de filtrado (4) del conjunto homogeneizado anterior, mediante un papel del filtro. Para ello la porción de la muestra que se debe utilizar es de entre 0,5 y 1g, por tratarse de un alimento sólido (AS). En este modo de realización tomamos 0,5g.Likewise, said first phase comprises a second stage of introducing (3) a portion of the sample into an extraction container containing an extraction solution to then shake the container until the whole is homogenized, and a third filtering stage (4) of the previous homogenized set, using a filter paper. For this, the portion of the sample to be used is between 0.5 and 1g, since it is a solid food (AS). In this embodiment, we take 0.5g.
En otro modo de realización preferente de la invención, en el que el producto a analizar sea un alimento líquido (AL) o semilíquido, la segunda y tercera etapas son iguales que para el caso de alimentos sólidos (AS), y la porción de muestra a utilizar es de 2ml.In another preferred embodiment of the invention, in which the product to be analyzed is a liquid (AL) or semi-liquid food, the second and third stages are the same as for solid food (AS), and the sample portion to use is 2ml.
En otro modo de realización, en el que el producto a analizar sea una superficie (S), la fase de obtención y homogeneización (1) de la muestra comprende una primera etapa de toma de un hisopo (5.1), humedecido (5.2) del mismo con solución de extracción y frotado (5.3) de un área de la superficie a testar equivalente a 5cm2 y, una segunda y tercera etapas iguales a los casos anteriores, siendo la porción de muestra a utilizar un extremo del hisopo.In another embodiment, in which the product to be analyzed is a surface (S), the sample obtaining and homogenization phase (1) comprises a first step of taking a swab (5.1), moistened (5.2) from the same with extraction solution and rubbing (5.3) of an area of the surface to be tested equivalent to 5cm2 and, a second and third stages equal to the previous cases, being the sample portion to use one end of the swab.
En otro modo de realización preferente, en el que el producto a analizar sea aguas (A) de limpieza, la fase de obtención y homogeneización (1) de la muestra comprende una primera etapa de toma de una cantidad directa (6) de las mismas y una segunda y tercera etapas iguales a los casos anteriores, siendo la porción de muestra 2ml.In another preferred embodiment, in which the product to be analyzed is cleaning water (A), the sample obtaining and homogenization phase (1) comprises a first stage of taking a direct quantity (6) of the same and a second and third stages equal to the previous cases, the sample portion being 2ml.
La segunda fase consiste en la introducción (7) de la solución de separación (17) en el interior de la cámara de separación (18) y cierre hermético de la misma durante un tiempo comprendido entre 15 y 30min. En este modo de realización preferente de la invención, se mantiene un tiempo de 20min. The second phase consists of introducing (7) the separation solution (17) into the separation chamber (18) and sealing it for a period of between 15 and 30min. In this preferred embodiment of the invention, a time of 20min is maintained.
A continuación, se realiza una tercera fase de colocación (8) de una cantidad de 5 ^l del resultado de la obtención y homogeneización de la muestra, en una tira de separación (19), en la primera marca (22) indicativa del lugar de colocación de la muestra, seguida de una cuarta fase de colocación (9) de una cantidad de 5 ^l del patrón de lactosa, en la misma tira de separación (19), en la segunda marca (23) indicativa del lugar de colocación del patrón de lactosa.Next, a third phase is carried out (8) of a quantity of 5 ^ l of the result of obtaining and homogenizing the sample, on a separation strip (19), in the first mark (22) indicative of the place of sample placement, followed by a fourth stage of placement (9) of a quantity of 5 ^ l of the lactose standard, on the same separation strip (19), at the second mark (23) indicating the place of placement of the lactose standard.
La quinta fase consiste en un primer secado (10) de la tira de separación (19) a una temperatura comprendida entre 90 y 115°, durante un tiempo comprendido entre 30s y 10min. En este modo de realización preferente de la invención, el secado se realiza mediante un calentador a una temperatura de 100°C, durante 45s.The fifth phase consists of a first drying (10) of the separation strip (19) at a temperature between 90 and 115 °, for a time between 30s and 10min. In this preferred embodiment of the invention, drying is carried out by means of a heater at a temperature of 100 ° C, for 45s.
Y, una vez seca la tira de separación (19) con las muestras, de realiza la sexta fase de introducción (11) de la misma en el interior de la cámara de separación (18) y cerrado de la cámara de nuevo, durante un tiempo comprendido entre 20 y 30 min. La tira de separación (19) se debe situar tal y como se muestra en las Figuras 3.1 y 3.2, con un ángulo de inclinación y orientada tal que el primer lateral (19.1) está en una posición inferior respecto al segundo lateral (19.2). En este modo de realización preferente de la invención, la tira de separación se mantiene en el interior de la cámara de separación un tiempo de 26min.And, once the separation strip (19) has been dried with the samples, the sixth phase of introducing it (11) into the separation chamber (18) and closing the chamber again, during a time between 20 and 30 min. The separation strip (19) must be positioned as shown in Figures 3.1 and 3.2, with an angle of inclination and oriented such that the first side (19.1) is in a lower position with respect to the second side (19.2). In this preferred embodiment of the invention, the separation strip is kept inside the separation chamber for a time of 26min.
En esta fase, se produce la ascensión de la solución de separación (17) por la tira de separación (19), hasta la segunda línea (21) de fin de la subida de la solución de separación (17).In this phase, the separation solution (17) rises up through the separation strip (19), up to the second line (21) at the end of the separation solution rise (17).
A continuación, la séptima fase consiste en un segundo secado (12) a una temperatura comprendida entre 90 y 115°, durante un tiempo comprendido entre 30s y 10min. En este modo de realización preferente de la invención, el secado se realiza mediante un calentador a una temperatura de 100°C, durante 6min.Then, the seventh phase consists of a second drying (12) at a temperature between 90 and 115 °, for a time between 30s and 10min. In this preferred embodiment of the invention, drying is carried out by means of a heater at a temperature of 100 ° C, for 6 min.
Con la tira de separación (19) ya seca, se realiza una octava fase de introducción (13) del total de la segunda solución de visualización contenida en el segundo recipiente de contención, en un pulverizador y seguidamente introducción de 0,1 ml del total de la primera solución de visualización contenida en el primer recipiente de contención, sobre la anterior en el mismo pulverizador y, agitado de la mezcla. With the separation strip (19) already dry, an eighth phase of introduction (13) of the total of the second visualization solution contained in the second containment container is carried out, in a sprayer and then introduction of 0.1 ml of the total of the first visualization solution contained in the first containment container, over the previous one in the same sprayer and, shaking the mixture.
En este modo de realización preferente de la invención, la cantidad de la segunda solución de visualización contenida en el segundo recipiente de contención se ha indicado que es una mezcla de 1,8ml de etanol absoluto y 0,1ml de ácido sulfúrico. Esta cantidad aportada es la necesaria para la realización de un test. Así mismo, a esta segunda solución, una vez se introduce en el pulverizador, se le añade 0,1ml de P-anisaldehido, que se toma con una pipeta del total de primera solución de visualización contenida en el primer recipiente.In this preferred embodiment of the invention, the amount of the second visualization solution contained in the second containment container has been indicated to be a mixture of 1.8ml of absolute ethanol and 0.1ml of sulfuric acid. This amount contributed is the amount necessary to carry out a test. Likewise, to this second solution, once it is introduced into the sprayer, 0.1 ml of P-anisaldehyde is added, which is taken with a pipette of the total of the first visualization solution contained in the first container.
Con esta mezcla de soluciones de visualización, se realiza la novena fase de pulverización (14) de forma uniforme de la tira de separación (19) con la mezcla de la primera y la segunda soluciones de visualización.With this mixture of visualization solutions, the ninth phase of spraying (14) is carried out uniformly of the separation strip (19) with the mixture of the first and second visualization solutions.
La tira de separación (19) se pulveriza hasta que queda empapada y se procede a una undécima fase de revelado (15) de la tira de separación durante un tiempo comprendido entre 5 y 15 min, a una temperatura de entre 100 y 120°. En este modo de realización preferente de la invención, el revelado tiene lugar durante 10min, a una temperatura de 110°C.The separation strip (19) is sprayed until it is soaked and an eleventh development phase (15) of the separation strip is carried out for a time between 5 and 15 min, at a temperature of between 100 and 120 °. In this preferred embodiment of the invention, the development takes place for 10 min, at a temperature of 110 ° C.
Dado que en la tira de separación (19) siempre se deposita muestra y patrón de lactosa, la mancha de lactosa (24) que aparece en la tira de separación (19) como consecuencia del patrón de lactosa, va a mostrar la altura a la que debe aparecer una banda (25) parecida para la muestra, en el caso en que esta sí presente lactosa en una proporción igual o superior al límite de la legislación, en este caso 100ppm.Since lactose sample and pattern are always deposited on the separation strip (19), the lactose stain (24) that appears on the separation strip (19) as a consequence of the lactose pattern, will show the height at that a similar band (25) should appear for the sample, in the event that it does present lactose in a proportion equal to or greater than the limit of the legislation, in this case 100ppm.
La última fase es la de interpretación (16) de los resultados.The last phase is the interpretation (16) of the results.
Así pues, puede ocurrir que el resultado obtenido de una muestra sea el que aparece en la Figura 2.1. En este caso, como puede observarse, en dicha Figura 2.1, en la vertical de la muestra aparece una banda (25) a la misma altura que la mancha de lactosa (24) correspondiente al patrón de lactosa, por lo que el resultado obtenido es positivo y puede afirmarse que la muestra contiene una concentración igual o superior a 100ppm de lactosa.Thus, it may happen that the result obtained from a sample is the one shown in Figure 2.1. In this case, as can be seen, in said Figure 2.1, in the vertical of the sample, a band (25) appears at the same height as the lactose stain (24) corresponding to the lactose pattern, so the result obtained is positive and it can be affirmed that the sample contains a concentration equal to or greater than 100ppm of lactose.
El resto de manchas (26) que aparece sobre la vertical correspondiente a la muestra, representan a los distintos carbohidratos de la muestra analizada.The rest of the spots (26) that appear on the vertical corresponding to the sample, represent the different carbohydrates of the analyzed sample.
Puede ocurrir igualmente que el resultado obtenido sea el que aparece en la Figura 2.2, en cuyo caso, se observa que en la vertical de la muestra no aparece ninguna banda a la misma altura que la mancha de lactosa (24) correspondiente al patrón de lactosa, por lo que puede afirmarse que no existe en la muestra una concentración de lactosa que alcance las 100ppm.It may also happen that the result obtained is that shown in Figure 2.2, in which case, it is observed that in the vertical of the sample no band appears at the same height as the lactose stain (24) corresponding to the lactose standard, so it can be stated that there is no lactose concentration in the sample that reaches 100ppm.
Así mismo, pueden ocurrir otros dos casos representados en las Figuras 2.3 y 2.4. En ambas Figuras se observa que existe una ausencia de manchas en la vertical del patrón de lactosa, que en la Figura 2.4 además se suma a una ausencia de manchas también en la vertical de la muestra. En ambos casos el resultado no es válido, pues significa que el test no se ha desarrollado de forma adecuada y por tanto debe ser invalidado este resultado.Likewise, two other cases represented in Figures 2.3 and 2.4 may occur. In both Figures it is observed that there is an absence of spots on the vertical of the lactose pattern, which in Figure 2.4 also adds to an absence of spots also on the vertical of the sample. In both cases the result is not valid, since it means that the test has not been carried out properly and therefore this result should be invalidated.
La forma de realización descrita constituye únicamente un ejemplo de la presente invención, por tanto, los detalles, términos y frases específicos utilizados en la presente memoria no se han de considerar como limitativos, sino que han de entenderse únicamente como una base para las reivindicaciones y como una base representativa que proporcione una descripción comprensible así como la información suficiente al experto en la materia para aplicar la presente invención. The described embodiment constitutes only an example of the present invention, therefore, the specific details, terms and phrases used herein are not to be considered as limiting, but are to be understood only as a basis for claims and as a representative basis that provides an understandable description as well as sufficient information to the person skilled in the art to apply the present invention.
Claims (1)
Priority Applications (2)
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| ES201830387A ES2728137B2 (en) | 2018-04-20 | 2018-04-20 | Lactose detection kit and detection procedure by applying it |
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201830387A ES2728137B2 (en) | 2018-04-20 | 2018-04-20 | Lactose detection kit and detection procedure by applying it |
Publications (2)
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ID=68235031
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| ES201830387A Active ES2728137B2 (en) | 2018-04-20 | 2018-04-20 | Lactose detection kit and detection procedure by applying it |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| BA2A | Patent application published |
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