ES2627960T3 - Péptido derivado de lactoferrina humana para su uso como agente de enmascaramiento de antígenos - Google Patents
Péptido derivado de lactoferrina humana para su uso como agente de enmascaramiento de antígenos Download PDFInfo
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Abstract
Péptido derivado de lactoferrina humana para su uso como un agente de enmascaramiento de antígenos en la producción de una composición farmacéutica para la administración de una sustancia activa biológica en un organismo mamífero, donde la sustancia activa biológica es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por el organismo mamífero, donde la composición farmacéutica comprende un agregado supramolecular de la sustancia activa biológica y el péptido derivado de lactoferrina humana, con el efecto de que después de la administración de la composición farmacéutica al organismo mamífero, no hay o solo hay una inducción disminuida de la respuesta inmunitaria no deseada contra la sustancia activa biológica, por el cual el péptido derivado de lactoferrina humana es un péptido con una longitud de 19 a 30 aminoácidos e incluye una secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR o una secuencia que es al menos el 90 % homóloga a la secuencia SEQ ID NO: 1 y por el cual la sustancia activa biológica está seleccionada del grupo de proteínas activas biológicas o péptidos activos biológicos, antisueros o anticuerpos policlonales o monoclonales, donde una respuesta inmunitaria no deseada por un organismo mamífero se define como la respuesta del sistema inmunitario por la producción de anticuerpos contra una sustancia activa biológica que se administra a un organismo mamífero con el fin de ejercer un efecto terapéutico beneficioso deseado que es diferente de una respuesta inmunitaria o en el que la respuesta inmunitaria es un efecto secundario no deseado.
Description
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DESCRIPCION
Peptido derivado de lactoferrina humana para su uso como agente de enmascaramiento de antigenos Antecedentes tecnicos
Conocimiento general sobre la inmunoglobulina G: La inmunoglobulina G (IgG) son moleculas de anticuerpo. IgG es la inmunoglobulina mas abundante y se distribuye aproximadamente de manera igual en sangre y en fluidos tisulares, constituyendo la porcion principal de inmunoglobulinas sericas en animales mairnferos y en seres humanos. Las moleculas de IgG son sintetizadas y secretadas por linfocitos B plasmaticos.
Los anticuerpos IgG estan implicados predominantemente en la respuesta inmunitaria secundaria. La presencia de IgG espedfica se corresponde generalmente con la maduracion de la respuesta a anticuerpos. IgG es el unico isotipo de anticuerpo que puede pasar a traves de la placenta humana, proporcionando asf proteccion al feto en el utero. Junto con la IgA secretada en la leche materna, la IgG residual absorbida a traves de la placenta proporciona al recien nacido inmunidad humoral antes de que se desarrolle su propio sistema inmunitario.
La IgG puede unirse a muchos tipos de patogenos, por ejemplo virus, bacterias y hongos, y protege al cuerpo contra ellos mediante aglutinacion e inmovilizacion, activacion de complemento (via clasica), opsonizacion para fagocitosis y/o neutralizacion de sus toxinas. Tambien desempena una funcion importante en la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC).
Las IgG de mamffero que generan respuestas inmunitarias estan fuertemente conectadas con otras y cascadas de respuesta inmunitaria y vfas de senalizacion. De esta manera los motivos y receptores de haptenos o inmunogenos, y familias de receptores, se correlacionan y regulan en muchas formas conocidas y desconocidas en individuos mamfferos, individualmente.
Es por esto que cualquier agente biologicamente activo introducido como un agente terapeutico puede introducir respuesta inmunitaria, deseada y no deseada, incluso despues de muchas dosificaciones individuales.
El documento WO 2007/048599 describe sistemas de administracion de farmacos en partfculas basados en un vehfculo polimerico, caracterizados por que al menos una sustancia senal para el transporte a traves de una barrera biologica y al menos un principio activo estan incluidos, no mostrando el vehfculo, la sustancia senal y principio activo enlaces covalentes entre sf. La sustancia senal es lactoferrina o un peptido derivado de la lactoferrina.
En una realizacion particularmente preferida, un peptido senal esta seleccionado del grupo de peptidos que tiene una secuencia de aminoacidos
KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR (SEQ ID NO: 3 en el documento WO 2007/048599), CFQWQRNMRKVRGPPVSC (SEQ ID NO: 4 en el documento WO 2007/048599),
FQWQRNMRKVRGPPVS (SEQ ID NO: 5 en el documento WO 2007/048599),
FQWQRNMRKVR (SEQ ID NO: 6 en el documento WO 2007/048599),
KCRRWQWRMKKLGAPSITCVRR (SEQ ID NO: 29 en el documento WO 2007/048599) y CRRWQWRMKKLGAPSITC (SEQ ID NO: 30 en el documento WO 2007/048599) o un derivado de las mismas.
En una realizacion preferida, los peptidos penetradores de celulas del documento WO 2007/048599 comprenden una secuencia de aminoacidos como se muestra en el documento WO 2007/048599 en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 29 o SEQ ID NO: 30 o una secuencia correspondiente con una identidad de al menos el 40 %, preferentemente de al menos el 50 %, particularmente preferentemente con una identidad superior al 75 % o mejor superior al 90 %.
El documento WO 2007/076904A1 describe un peptido que tiene una secuencia de aminoacidos que comprende al menos 8 aminoacidos consecutivos de la protema lactoferrina humana o de la protema lactoferrina bovina, por el cual el peptido es adecuado para actuar de peptido penetrador de celulas. Muchos de los peptidos mencionados en los documentos WO 2007/076904A1 y WO 2007/048599 son identicos.
El peptido penetrador de celulas mas prometedor en el documento WO 2007/076904A1 con los mejores efectos en los ejemplos es KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR (SEQ ID NO: 3 en el documento WO 2007/076904A1, SEQ ID NO: 1 en el presente documento).
Los peptidos penetradores de celulas derivados de lactoferrina pretenden permitir el transporte de moleculas de carga, que son principios activos tales como ADN, ARN, peptidos o antfgenos para vacunacion, que pueden ser
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ingeridos por via oral, a traves de las membranas biologicas y as^ permitir una captacion eficiente de estas moleculas en el organismo humano o animal.
Problema y solucion
Cuando una sustancia activa biologica que se administra a un organismo mairnfero con el fin de curar una enfermedad induce una respuesta inmunitaria no deseada, esto puede volverse un serio problema, cuando la misma sustancia activa biologica tenga que administrarse mas adelante a ese cierto organismo una vez mas.
Era un objetivo de la presente invencion encontrar un agente de enmascaramiento de antfgenos que pudiera usarse como un adyuvante o como un excipiente en la produccion de una composicion farmaceutica para la administracion de una sustancia activa biologica en un organismo mamnfero, donde la sustancia activa biologica es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por el organismo mamffero, con el efecto de que despues de la administracion de la composicion farmaceutica al organismo mamffero, no haya o solo haya una induccion disminuida de la respuesta inmunitaria no deseada contra la sustancia activa biologica.
El problema se resuelve por
un peptido derivado de lactoferrina humana para su uso como un agente de enmascaramiento de antfgenos en la produccion de una composicion farmaceutica para la administracion de una sustancia activa biologica en un organismo mamffero, donde la sustancia activa biologica es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por el organismo mamffero, donde la composicion farmaceutica comprende un agregado supramolecular de la sustancia activa biologica y el peptido derivado de lactoferrina humana,
con el efecto de que despues de la administracion de la composicion farmaceutica al organismo mamffero, no hay o solo hay una induccion disminuida de la respuesta inmunitaria no deseada contra la sustancia activa biologica,
por el cual peptido derivado de lactoferrina humana es un peptido con una longitud de 19 a 30 aminoacidos e incluye una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1 KcFqWQRNMRKVRGPPVSCIKR o una secuencia que es al menos el 90 % homologa a la secuencia SEQ ID NO: 1 y
por el cual la sustancia activa biologica esta seleccionada del grupo de protemas activas biologicas o peptidos activos biologicos, antisueros o anticuerpos policlonales o monoclonales,
donde una respuesta inmunitaria no deseada por un organismo mamffero se define como la respuesta del sistema inmunitario por la produccion de anticuerpos contra una sustancia activa biologica que se administra a un organismo mamffero con el fin de ejercer un efecto terapeutico beneficioso deseado que es diferente de una respuesta inmunitaria o en el que la respuesta inmunitaria es un efecto secundario no deseado.
Detalles de la invencion
La invencion se refiere a
un peptido derivado de lactoferrina humana para su uso como un agente de enmascaramiento de antfgenos en la produccion de una composicion farmaceutica para la administracion de una sustancia activa biologica en un organismo mamffero, donde la sustancia activa biologica es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por el organismo mamffero, donde la composicion farmaceutica comprende un agregado supramolecular de la sustancia activa biologica y el peptido derivado de lactoferrina humana,
con el efecto de que despues de la administracion de la composicion farmaceutica al organismo mamffero, no hay o solo hay una induccion disminuida de la respuesta inmunitaria no deseada contra la sustancia activa biologica,
por el cual el peptido derivado de lactoferrina humana es un peptido con una longitud de 19 a 30 aminoacidos e incluye una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR o una secuencia que es al menos el 90 % homologa a la secuencia SEQ ID NO: 1 y
por el cual la sustancia activa biologica esta seleccionada del grupo de protemas activas biologicas o peptidos activos biologicos, antisueros o anticuerpos policlonales o monoclonales,
donde una respuesta inmunitaria no deseada por un organismo mamffero se define como la respuesta del sistema inmunitario por la produccion de anticuerpos contra una sustancia activa biologica que se administra a un organismo mamffero con el fin de ejercer un efecto terapeutico beneficioso deseado que es diferente de una respuesta inmunitaria o en el que la respuesta inmunitaria es un efecto secundario no deseado.
Como el peptido derivado de lactoferrina humana se deriva de lactoferrina humana, no es inmunogenico para el sistema inmunogenico humano.
Sorprendentemente, el peptido derivado de lactoferrina humana no es, o solo a un menor grado, inmunogenico para el sistema inmunogenico de animales mamfferos, preferiblemente para animales de produccion o para animales
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domesticos, como, por ejemplo, cerdos, ovejas, vacas o perros usados como especies modelo en el desarrollo de farmacos, aunque las secuencias no estan geneticamente conservadas. As^ los beneficios de la presente invencion no estan limitados a la aplicacion en el hombre, sino que tambien pueden aplicarse a aplicaciones veterinarias y al desarrollo de terapias humanas usando modelos animales.
Peptido derivado de lactoferrina humana
El peptido derivado de lactoferrina humana es un peptido con longitud de 19 a 30 aminoacidos.
El peptido derivado de lactoferrina humana es un peptido con una longitud de 19 a 30 aminoacidos e incluye una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR o una secuencia que es al menos el 90, 95 o el 98 % homologa a la secuencia SEQ ID NO: 1.
El peptido derivado de lactoferrina humana es un peptido con una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR o una secuencia que es al menos el 90, 95 o el 98 % homologa a esa secuencia.
Lo mas preferentemente, el peptido derivado de lactoferrina humana es al menos el 90, 95 o el 98 % homologo a la secuencia SEQ ID NO: 1 y donde los restos de cistema en las posiciones 2 y 19 estan presentes. Preferentemente, los restos de cistema estan presentes en forma oxidada, formando un puente Cys-Cys interno.
Puede incluirse cualquier modificacion qmmica estandar adicional usada en la smtesis de peptidos GMP tal como N- acetilacion, acilacion, metilacion, bencilacion, C-amidacion, esterificacion, esteres globales del extremo C, modificaciones de aminoacidos isostericos y aminoacidos no naturales tales como tiofenilo-alanina o cicloprolina- alanina o cualquier otra sustitucion de aminoacido con esqueleto de amida, ester o eter.
Sin embargo, se prefiere que, excepto por la formacion del puente Cys-Cys interno, el peptido derivado de lactoferrina humana no muestre modificaciones qmmicas adicionales.
Sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por un organismo mamifero
Una sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por un organismo mairnfero normalmente esta comprendida o contenida en una forma farmaceutica o en una preparacion farmaceutica.
Las sustancias biologicas activas que pretenden ser usadas para inducir una respuesta inmunitaria deseada por el organismo mai^ero, por ejemplo la mayona de las vacunas, no estan bajo el alcance de la definicion "respuesta inmunitaria no deseada".
La sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por el organismo marnffero esta seleccionada del grupo de protemas biologicas activas o peptidos biologicos activos, antisueros, anticuerpos policlonales o monoclonales. Tambien se deben nombrar protemas recombinantes que proporcionan otros "receptores solubles" o "aglutinantes de receptores solubles" o protemas recombinantes modificadas como entidades (PEG)-iladas de polietilenglicol, ademas de agentes terapeuticos con el riesgo de inmunogenicidad como efecto secundario no deseado que incluyen moleculas pequenas donde tal riesgo es conocido o es potencialmente relevante como antibioticos, farmacos peptidos y peptidomimeticos.
La sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria a IgG no deseada puede estar comprendida en una muestra de sangre que se transfunde a un organismo mam^era.
La sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria IgG no deseada esta comprendida en o sobre la superficie de un organo que es trasplantado a un organismo mam^era.
Respuesta inmunitaria no deseada
Una respuesta inmunitaria no deseada por el organismo mamffero es la respuesta del sistema inmunitario por la produccion de anticuerpos contra una sustancia activa biologica que se administra a un organismo mamffero con el fin de ejercer un efecto terapeutico benefico deseado que sea diferente de una respuesta inmunitaria o en el que la respuesta inmunitaria sea un efecto secundario no deseado.
La respuesta inmunitaria no deseada puede ser una respuesta inmunitaria IgG (prevaleciente).
La respuesta inmunitaria no deseada puede ser una respuesta inmunitaria IgE (prevaleciente).
Aunque la respuesta inmunitaria no deseada puede no producir efectos secundarios no deseados en la primera administracion de esa forma farmaceutica o en una preparacion farmaceutica que comprende o que contiene la sustancia activa biologica que es capaz de inducir la respuesta inmunitaria no deseada, la respuesta inmunitaria no deseada puede producir efectos secundarios no deseados cuando la preparacion farmaceutica que comprende o que contiene la sustancia activa biologica que es capaz de inducir la respuesta inmunitaria no deseada (IgG o IgE)
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se administra o tiene que administrate una segunda vez u otra vez o varias veces o durante un periodo de tiempo. En este caso, por ejemplo, los niveles de IgG existentes en el plasma pueden inactivar parcial o completamente la sustancia activa biologica y reducir su efecto terapeutico deseado. En algunos casos, la inactivacion parcial o completa de la sustancia activa biologica tambien puede ir de la mano de irritaciones, fiebre u otros efectos secundarios no deseados. Estos efectos secundarios pueden ser inducidos inespedficamente por la presencia de los agregados o precipitados de anticuerpos IgG con la sustancia activa biologica.
Ejemplos tfpicos de una sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria IgG no deseada por un organismo mairnfero son, por ejemplo: Antisueros anti-veneno contra el veneno de animales venenosos. Por ejemplo, serpientes, insectos, aranas o ciertas especies de medusas, donde los antisueros se producen por animales, normalmente por caballos, donde los antisueros pretenden curar un ser humano que haya tenido contacto con ese veneno. Despues de la primera administracion de ese antisuero, el ser humano individual normalmente desarrolla una respuesta inmunitaria IgG prevaleciente no deseada contra las protemas de caballo, principalmente anticuerpos IgG de caballo comprendidos en ese antisuero.
Se conoce bien el caso de antisueros anti-veneno de serpiente espedficos producidos por caballos, que cuando se administran a un humano que ha sido mordido por ciertas especies de serpiente con el fin de curar los efectos graves del veneno de serpiente. Despues de la primera administracion del antisuero anti-veneno de serpiente, la persona individual puede ser curada por la inactivacion del veneno, pero puede desarrollar una respuesta inmunitaria IgG no deseada contra las protemas de caballo, principalmente los anticuerpos IgG de caballo comprendidos en ese suero. Cuando la misma persona es mas tarde mordida por la misma u otra serpiente, tratarla con antisueros anti- veneno de serpiente de caballo nuevamente puede ser peligroso debido al nivel presente de anticuerpos IgG desarrollados contra las protemas de suero de caballo.
Se conocen tambien terapias inmunomoduladoras de smdromes mielodisplasicos de bajo riesgo humano donde se emplean globulinas anti-linfocitos/anti-timo-linfocitos. En estas terapias, globulinas con anticuerpos dirigidos contra celulas inmunogenicas humanas que se producen en conejos o en caballos se administran al paciente humano durante un cierto periodo de tiempo. Tambien en este caso existe el peligro de una respuesta inmunitaria IgG no deseada contra las protemas de conejo o de caballo, principalmente anticuerpos IgG de caballo, comprendidas en esas fracciones de globulina. Esta respuesta inmunitaria IgG no deseada puede influir negativamente en la terapia presente o una repetida.
Se conoce ademas la aplicacion de preparaciones farmaceuticas que comprenden o que contienen anticuerpos monoclonales producidos contra epitopes en celulas cancerosas.
Otros casos en los que la supresion de una respuesta inmunitaria IgG no deseada en el sentido de la invencion puede ser beneficiosa puede ser el campo de la transferencia de sangre, donde pueden producirse incompatibilidades entre la sangre transfundida y el sistema inmunitario del paciente en el sentido de respuesta inmunitaria IgG no deseada.
Otro caso donde la supresion de una respuesta inmunitaria IgG no deseada en el sentido de la invencion puede ser beneficiosa puede ser el campo de la transferencia de organos, donde pueden producirse inmunocompatibilidades entre el organo transferido, sea el rinon, dgado, pulmon o corazon entre otros ejemplos, y el sistema inmunitario del paciente en el sentido de respuesta inmunitaria IgG no deseada, y asf puede al menos parcialmente promover reacciones de repulsion o de rechazo.
La sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria IgG no deseada por el organismo mamffero puede entonces comprender protemas o peptidos farmacologicos o biologicos activos, especialmente protemas o peptidos que no son nativos para el organismo mamffero al que se administran.
No nativas puede significar que las protemas o peptidos biologicos activos se originan tanto de otra especie, preferentemente de otra especie de mamffero, en comparacion con las especies a las que se administran, o de la misma especie o de origen semisintetico.
No nativas puede significar o que las protemas o peptidos biologicamente activos fueron modificados de una manera que los hace detectables por la respuesta inmunitaria IgG del organismo mamffero al que se pretenden administrar.
El organismo mamffero preferido al que la sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria IgG no deseada puede administrarse es Homo sapiens.
Por ejemplo, una protema que se origina de cierto organismo marnffero puede volverse detectable por la respuesta inmunitaria IgG de ese organismo mamffero cuando se haya producido por un organismo microbiano recombinante.
Por ejemplo, una protema glucosilada que se origina de un organismo de fuente eucariota, pero que se produjo en un organismo procariota recombinante, normalmente carecera de la glucosilacion. Asf, la protema recombinante puede volverse detectable por la respuesta IgG de ese organismo mamffero de fuente original cuando se administra de nuevo al organismo en forma de una preparacion farmaceutica.
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Los efectos secundarios en relacion con una respuesta inmunitaria IgE no deseada son muy conocidos, por ejemplo, como alergias, anafilaxia o incluso como choque anafilactico.
La sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria IgG o IgE no deseada por el organismo mairnfero puede comprender preparaciones que comprendan o consisten en antisueros o anticuerpos policlonales o monoclonales o protemas recombinantes que proporcionan otros "receptores solubles" o "aglutinantes de receptores solubles" o protemas recombinantes modificadas tales como entidades polietilenglicol(PEG)iladas de polietilenglicol, truncadas o geneticamente modificadas, ademas de agentes terapeuticos con el riesgo de inmunogenicidad como efectos secundarios no deseados o cnticos o letales tales como anafilaxia y choque anafilactico que incluyen moleculas pequenas tales como antibioticos, anestesicos donde tal riesgo es conocido, ademas de cualquier compuesto biologicamente activo donde la inmunogenicidad sea potencialmente relevante que incluyen farmacos peptidos y peptidomimeticos, factores de crecimiento o de necrosis, o mezclas tales como fracciones de fluidos corporales tales como factores de sangre o cultivos celulares.
Ademas, el efecto inmunomodulador del fragmento de lactoferrina humana podna usarse para efectos de enmascaramiento de antfgenos con el fin de manipular los posibles agentes inductores de la respuesta inmunitaria en el campo de alergia. Por ejemplo, la asociacion del fragmento de lactoferrina humana con polen, polen de cesped, protemas de la leche, melitina, protemas de huevo, etc., podna manipular la reaccion alergica de un organismo humano contra estos epitopes y antfgenos.
Composicion farmaceutica
El peptido derivado de lactoferrina humana puede usarse como un agente de enmascaramiento de antfgenos en la produccion de una composicion farmaceutica para la administracion de una sustancia activa biologica a un organismo mam^era.
Una composicion farmaceutica puede ser una forma farmaceutica o preferentemente forma farmaceutica de multiples partmulas, seleccionada preferentemente de pellas, granulos, minicomprimidos, comprimidos o capsulas u otras formas farmaceuticas. La composicion farmaceutica tambien puede incluir composiciones farmaceuticas veterinarias.
La composicion farmaceutica que comprende el peptido derivado de lactoferrina humana y la sustancia activa biologica puede comprender excipientes adicionales, que son conocidos por el experto como utiles en la formulacion de formas farmaceuticas. Excipientes tfpicos son antioxidantes, abrillantadores, aglutinantes, diluyentes, cargas, agentes saborizantes, auxiliares de flujo, fragancias, deslizantes, agentes promotores de la penetracion, pigmentos, plastificantes, polfmeros, agentes formadores de poros, disolventes o estabilizadores.
La composicion farmaceutica puede comprender, puede comprender esencialmente o puede contener hasta el 80, hasta el 50, hasta el 25, hasta el 10% en peso de cualquier excipiente farmaceutico, por ejemplo, excipientes adicionales que son conocidos por el experto como utiles en la formulacion de formas farmaceuticas.
Agregado supramolecular
Lo mas preferentemente, el peptido derivado de lactoferrina humana y la sustancia activa biologica forman un agregado supramolecular, que tambien puede llamarse un complejo o un conjugado, en el que el peptido derivado de lactoferrina humana y la sustancia activa biologica no estan unidos covalentemente entre st En este caso, el agregado supramolecular se mantiene unido, por ejemplo, por fuerzas ionicas o por fuerzas de van-der-Waals.
Estos agregados supramoleculares pueden prepararse de manera muy ventajosa anadiendo al compuesto biologico activo en una disolucion o suspension de medio acuoso o de proceso el peptido derivado de lactoferrina humana. Esta disolucion tiene que ser mezclada suavemente durante un tiempo corto, preferentemente durante hasta 2 minutos, o incubarse durante hasta 1 hora, hasta 2 horas o mas.
Aparte del peptido derivado de lactoferrina humana y la sustancia activa biologica, el agregado supramolecular puede comprender o contener adicionalmente un vehmulo, por ejemplo un polfmero de vehmulo tal como un polfmero dendntico.
Tambien es posible, pero menos preferido, que el peptido derivado de lactoferrina humana y la sustancia activa biologica formen un agregado supramolecular en el que el peptido derivado de lactoferrina humana y la sustancia activa biologica esta covalentemente unidos entre sf. En este caso, el agregado supramolecular puede formarse por una reaccion qmmica de grupos reactivos en el peptido derivado de lactoferrina humana con grupos reactivos en la sustancia activa biologica. Pueden usarse moleculas conectoras reactivas qmmicas adicionales alternativas para conectar las moleculas.
Preferentemente, los agregados supramoleculares pueden comprender, pueden comprender esencialmente o pueden contener al menos el 20 %, al menos el 50 % en peso, al menos el 80 %, al menos el 90 % en peso o el 100 % de peptido derivado de lactoferrina humana y la sustancia activa biologica. El agregado supramolecular puede ser una parte de una composicion farmaceutica que puede comprender excipientes adicionales.
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Preferentemente, la composicion farmaceutica puede comprender, puede comprender esencialmente o puede contener al menos el 20, al menos el 50, al menos el 75, al menos el 90% en peso o el 100% del agregado supramolecular.
Proceso para la preparacion de una composicion farmaceutica
La invenciones tambien se refiere a un proceso para la preparacion de una composicion farmaceutica como se define en el presente documento mezclando el peptido derivado de lactoferrina humana y el agente biologicamente activo bajo condiciones nativas, incubando la mezcla para permitir la formacion (covalente o no covalente) de un agregado supramolecular y anadiendo la mezcla a la composicion farmaceutica.
En la realizacion mas simple la composicion farmaceutica puede ser identica a dicha mezcla, que significa que la composicion farmaceutica final esencialmente solo contiene el peptido derivado de lactoferrina humana y el agente biologicamente activo. Sin embargo, en muchos casos, puede ser ventajoso o apropiado anadir excipientes farmaceuticos adicionales para formar la composicion farmaceutica (final).
Condiciones nativas debe significar condiciones bajo las cuales se mantienen la actividad biologica del peptido derivado de lactoferrina humana y el agente biologicamente activo. Una condicion nativa puede ser, por ejemplo, la mezcla del peptido derivado de lactoferrina humana y el agente biologicamente activo en una disolucion de tampon acuosa, por ejemplo, solucion salina tamponada con fosfato, pH 7,4, o en solucion fisiologica de cloruro de sodio.
Incubar la mezcla para permitir la formacion de agregados supramoleculares debe significar tiempo suficiente para permitir la agregacion del peptido derivado de lactoferrina humana y el agente biologicamente activo. Normalmente, pueden ser suficientes la mezcla e incubacion durante hasta 2 minutos a temperatura ambiente. Sin embargo, incubar durante hasta 1 hora, hasta 2 horas o mas puede ser adecuado tambien. Temperaturas adecuadas para la formacion de agregados supramoleculares pueden estar en el intervalo de 0 a 37 °C, preferiblemente 4 a 30 °C, puede ser adecuada temperatura ambiente de aproximadamente 18 a 28 °C.
Ejemplos
Ejemplo 1: Acoplamiento no covalente de fragmento de lactoferrina humana (hLf) con lisado bacteriano Material:
Lisado bacteriano de Escherichia coli, fragmento de lactoferrina humana, SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR Solucion salina tamponada con fosfato, pH = 7,4 (Ph. Eur.): Se disolvieron 5,97 g de fosfato hidrogenofosfato de disodio dihidratado (que se corresponde con 4,76 g de hidrogenofosfato de disodio), 0,38 g de hidrogenofosfato de potasio y 16 g de cloruro de sodio en 1,8 l de agua destilada. Despues, la disolucion transparente preparada se suministro en un matraz volumetrico de 2 l, se lleno hasta la marca de calibracion con agua destilada y posteriormente se homogeneizo. Entonces, el pH se ajusto a 7,43 a 23,2 °C usando 3 ml de HCl 1 N antes de cargar la solucion final en botellas de PE.
Dispositivo:
Malvern Zetasizer Nano ZS90; Parametros de tamano: Material: Protema RI: 1,45, Absorcion: 0,00, Dispersante: Agua 25 °C: 0,8872 cP RI: 1,330; 37 °C: 0,6864 cP RI: 1,330, Celda: DTS 1060C: Celda zeta desechable transparente
Medicion: 3 series automaticas, metodo de colocacion: busqueda de posicion optima, seleccion de atencion automatica, modelo de analisis: proposito general
Parametros zeta: Constante dielectrica: 78,5 a 25 °C y 74,4 a 37 °C, Modelo: Smoluchowski, valor F(KA): 1,5, medicion: 3 series automaticas Seleccion de atencion automatica
Preparacion de muestras
Oxidacion de peptidos: El peptido se disolvio a una concentracion inferior a 1 mM (2,75 mg/ml) en solucion salina tamponada con fosfato (pBs), pH 7,4 (Ph. Eur.), por ejemplo, 5 mg en 10 ml (=0,5 mg/ml). La disolucion se purgo con oxfgeno puro durante 5 minutos a 37 °C. Incubar durante 2 horas a 37 °C.
Para la dilucion del lisado bacteriano se diluyeron 1 ml de lisado de celulas bacterianas hasta 10 ml con PBS, pH 7,4 (Ph. Eur.).
La union al lisado partfculas se logro anadiendo 1 ml de lisado bacteriano (= 1,2 mg de E. coli) con 0,097714286 mg de hLF.
Se anadieron 20 pl de 0,5 mg/ml de disolucion de peptido a 1 ml de la vacuna previamente diluida (0,12 mg/ml) y se incubaron 2 horas bajo agitacion lenta, 100-150 rpm, a 4 °C, previniendose cualquier formacion de espuma.
Tabla 1: Muestras analizadas y su composicion
- MUESTRA
- SONICACION SUSPENSION DE LISADO BACTERIANO DISOLUCION DE FRAGMENTO HLF OXIDADO
- Lisado bacteriano 1:10
- No 5 ml 0,12 mg/ml -
- Lisado bacteriano 4:10
- 1 min, sonda sonicadora 5 ml 0,12 mg/ml -
- Lisado bacteriano 1:10 + 1 min de sonda ultrasonica
- No 5 ml 0,48 mg/ml -
- Lisado bacteriano 4:10 + 1 min de sonda ultrasonica
- 1 min, sonda sonicadora 5 ml 0,48 mg/ml -
- hLF
- No - 1,5 ml 0,5 mg/ml
- hLF + 2 min de bano ultrasonico
- 2 min, bano sonicador - 1,5 ml 0,5 mg/ml
- Lisado bacteriano 1:10 + hLF
- Pre-sonicado como antes 5 ml 0,12 mg/ml 200 |jl 0,5 mg/ml
- Lisado bacteriano 1:10 + hLF 2 min de bano ultrasonico
- Pre-sonicado como antes + 2 min de bano de sonicacion despues de union de hLF 5 ml 0,12 mg/ml 200 jl 0,5 mg/ml
- Lisado bacteriano 4:10 + hLF
- Pre-sonicado como antes 5 ml 0,48 mg/ml 200 jl 0,5 mg/ml
- Lisado bacteriano 4:10 + hLF 2 min de bano ultrasonico
- Pre-sonicado como antes + 2 min de bano de sonicacion despues de union de hLF 5 ml 0,48 mg/ml 200 jl 0,5 mg/ml
Descubrimientos
Potencial zeta (Figura 1)
5 Se mostro que el lisado de E. coli es una suspension que consiste en partfculas de superficie cargadas negativamente. El fragmento de peptido hLF, incluso si se observa la formacion de agregados, muestra una carga positiva total, y la adicion del segundo al primero produce una variacion de las propiedades de la superficie del lisado.
Tamano de particula (Figura 2)
10 La figura "tamano de partfcula" muestra los promedios
Los datos de tamano de partfcula muestran los descubrimientos:
• Es probable que se produzca agregacion en todos los casos: vacuna sola, fragmento hLF solo y la combinacion de los mismos.
• Estos fenomenos de agregacion condujeron a tamanos de partfcula mas grandes
15 • Puede producirse agregacion y sedimentacion, invertida por medio de sonicacion y/o agitacion adecuada.
Ejemplo 2: Inmunodulacion del sistema inmunitario de rata mediante tratamiento con antfgeno, fragmento de lactoferrina humana y combinacion de antfgeno y fragmento de lactoferrina humana
Material
Lisado bacteriano: Klebsiella pneumoniae CECT 141; 12.000 millones de bacterias/ml (diez veces la 20 concentracion final), formulacion no glicerinada estandar, sin fenol
Fragmento hLF, SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR forma oxidada, como producto liofilizado; dosificado en viales de 50 mg cada uno, en viales de 25 ml, para ser reconstituidos y usados como disolucion madre durante la longitud del ensayo. Una vez reconstituido, mantener refrigerado (4 °C)
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Solucion salina tamponada con fosfato (PBS) Esterilizar mediante cualquier procedimiento adecuado y almacenar en un recipiente adecuado cuando no se use inmediatamente despues de la elaboracion. Considerar su almacenamiento a 4 °C durante periodos de tiempo mas largos.
Procedimientos
Se realizo la reconstitucion de la disolucion madre de hLF por reconstitucion del fragmento hLF de 50 mg en un vial mediante la adicion de 20 ml de PBS. Se aseguro una reconstitucion completa adecuada hasta una disolucion libre de partfculas clara homogenea. El vial se agito suavemente mediante inversion repetida del vial cerrado. El resultado fue la disolucion madre de hLF para el ensayo: concentracion nominal 2.5 mg/ml.
La dilucion de hLF para el ensayo en animales se realizo diariamente. Para esto, se transfirio 1 ml de la disolucion madre de hLF reconstituida a un nuevo vial de 25 ml, seguido de adicion de 21,5 ml de PBS y mezcla cuidadosa por inversiones repetidas del vial cerrado para evitar la formacion de espuma. El resultado fue la dilucion madre diaria, concentracion nominal 0,1 mg/ml.
Formulacion "A+B"
Se transfirieron 4,5 ml de la dilucion de hLF diaria a un vial adecuado (capacidad de 5 ml o mas), seguido de adicion de 0,5 ml de 12.000 millones de bacterias/ml de lisado bacteriano y mezcla cuidadosa por inversiones repetidas del vial cerrado para evitar la formacion de espuma. El resultado fueron 5 ml de la vacuna A+B, 1200 millones de bacterias/ml, 0,1 mg de fragmento hLF/ml, asegurando la relacion 12:1.
Formulacion "B"
Se transfirieron 4,5 ml de la dilucion de hLF diaria a un vial adecuado (capacidad de 5 ml o mas), seguido de adicion de 0,5 ml de PBS y mezcla cuidadosa por inversiones repetidas del vial cerrado y evitar la formacion de espuma. El resultado fueron 5 ml de una disolucion de fragmento hLF de 0,1 mg/ml.
Formulacion "A"
Se transfirieron 0,5 ml del lisado bacteriano (12.000 millones de bacterias/ml) a un vial adecuado (5 ml de capacidad o mas), seguido de adicion de 4,5 ml de PBS, y mezcla cuidadosa por inversiones repetidas del vial cerrado y evitar
la formacion de espuma. El resultado fueron 5 ml de lisado bacteriano, 1200 millones de bacterias/ml (lisado
bacteriano "A").
Dosis y administracion de los tratamientos:
Administracion de "A+B"
Administracion de 0,5 ml de "A+B" a cada una de las tres ratas del grupo A+B (i.p.).
Administracion de 0,5 ml de "A+B" a cada una de las tres ratas del grupo a+p (via intragastrica).
Administracion de "B"
Administracion de 0,5 ml de B a cada una de las ratas del grupo B. (i.p.).
Administracion de 0,5 ml de B a cada una de las tres ratas del grupo p (via intragastrica).
Administracion de "A"
Administracion de 0,5 ml de la vacuna A a cada una de tres ratas del grupo A.
Administracion de 0,5 ml de la vacuna A a cada una de las tres ratas del grupo a.
Tratamiento de animales
Se usaron lisados orales de Klebsiella pneumoniae CECT 141 como modelo para un inoculo que induce la respuesta inmunologica a IgG en ratas como organismos modelo cuando se administra por via intragastrica o intraperitoneal. Se uso el peptido derivado de lactoferrina humana con la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR para formar conjugados con los lisados de Klebsiella pneumoniae CECT 141 de la siguiente manera:
Se usaron seis grupos de tres ratas
a. Grupo A: Se administrara Lisado bacteriano (Formulacion "A") por via intraperitoneal
b. Grupo B: Se administrara Fragmento hLf (Formulacion "B") por via intraperitoneal
c. Grupo C: Se administrara Conjugado (Formulacion "A+B") por via intraperitoneal
d. Grupo a: Se administrara Formulacion "A" por via intragastrica
e. Grupo p: Se administrara Formulacion "B" por via intragastrica
f. Grupo 6: Se administrara Formulacion "A+B" por via intragastrica 5 Duracion de la prueba: 4 semanas (28 dfas)
Patron de aplicacion de producto
Tabla 2: Tratamiento de grupos de ratas y cantidad
- Dfa
- A B A+B Control
- 0
- 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml sin dosis
- 7
- 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml sin dosis
- 14
- 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml sin dosis
- 21
- 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml sin dosis
Parametros y programa de muestreo
10 El parametro a medir es IgG total. El metodo se realizara por ELISA. El programa de muestreo para todos los grupos sera el siguiente (Tabla 3):
Tabla 3: Se tomanan muestras de sangre por el siguiente esquema
- Dfa
- Observacion
- 0
- Antes de administrar la dosis
- 6
- 13
- 20
- 27
- Sacrificio
Descubrimientos
15 Variacion en los niveles de IgG con el tiempo.
Grupo de control (Figura 3)
En los animales del grupo de control, los niveles de IgG se mantendran constantes durante el tiempo sin diferencias estadfsticamente significativas observadas entre los diversos momentos estudiados.
Grupo con lactoferrina humana (hLf, formulacion "B") (Figura 4):
20 El tratamiento con lactoferrina humana no parece inducir ningun efecto sobre los niveles de IgG con el tiempo, sin diferencias estadfsticamente significativas observadas entre los niveles de IgG de las ratas que reciben tratamiento con hLf en ninguno de los momentos del estudio independientemente del modo de administracion.
Grupo tratado con extracto bacteriano (formulacion "A") (Figura 5):
En los animales que recibieron tratamiento intraperitoneal con extracto bacteriano, los presentes inventores 25 observaron que los niveles de IgG tendfan a aumentar significativamente con el tiempo. Ademas, debe observarse que los niveles de IgG aumentan con el numero de dosis de extracto bacteriano, que significa que el efecto de este tratamiento es acumulativo, explicando el aumento de los niveles de IgG con el tiempo. El mismo comportamiento se observa en animales tratados por via intragastrica con extracto bacteriano. Estos resultados son muy importantes debido a que indican que el efecto del extracto bacteriano sobre los niveles de IgG es independiente del modo de 30 administracion.
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Grupo tratado con extracto bacteriano + hLf (Figura 6)
En cuanto a los animales que recibieron tratamiento con extracto bacteriano + hLf, deben observarse dos hechos basicos. Primero de todos, los presentes inventores pueden observar que la IgG no vana significativamente de los niveles detectados en el grupo de control, independientemente del modo de administracion usado. Por otra parte, los niveles de IgG detectados en cada momento del estudio no alcanzan los niveles esperados basandose en el efecto del extracto bacteriano ya sea con administracion intraperitoneal o intragastrica.
Analisis comparativo de los niveles de IgG entre los diversos grupos
Administracion intraperitoneal
Grupo de control frente a de extracto bacteriano:
Cuando los presentes inventores comparan los niveles de IgG del grupo de control con aquellos encontrados en el grupo que recibio tratamiento con extracto bacteriano, los presentes inventores observan un aumento estadfsticamente significativo en el segundo grupo a partir del 6° dfa despues de la primera administracion del lisado bacteriano (p<0,001). Estas diferencias se mantienen en todo momento hasta completar el estudio el dfa 27.
Grupo de control frente a grupo de hLf:
Con administracion intraperitoneal, los presentes inventores no observaron una diferencia estadfsticamente significativa (p>0,05) entre los niveles de IgG de las ratas que recibieron tratamiento con hLF y aquellos encontrados en el grupo de control en ninguno de los momentos del estudio.
Grupo de control frente a grupo de hLf + extracto bacteriano:
Los presentes inventores no observaron una diferencia estadfsticamente significativa (p>0,05) entre los niveles de IgG de las ratas que recibieron tratamiento conjugado con hLF + lisado bacteriano y aquellos encontrados en el grupo de control en ninguno de los momentos del estudio.
Grupo de extracto bacteriano frente a grupo de HLf:
Los niveles de IgG encontrados en las ratas que recibieron tratamiento con el extracto bacteriano solo fueron significativamente mas altos (p<0,001) que los niveles de IgG encontrados en los animales que recibieron tratamiento con hLF solo a partir de los primeros dfas (6d) hasta la conclusion del estudio en el dfa 27 despues de la primera administracion.
Grupo de extracto bacteriano frente a grupo de hLf + extracto bacteriano:
Los niveles de IgG encontrados en las ratas que recibieron tratamiento con el extracto bacteriano solo son significativamente mas altos (p<0,001) que los niveles de IgG encontrados en los animales que recibieron tratamiento combinado con hLF y extracto bacteriano en todos los momentos del estudio despues de la primera administracion.
Grupo de hLf frente a grupo de hLf + extracto bacteriano:
No se encontraron diferencias estadfsticamente significativas (p>0,005) entre los niveles de IgG de las ratas que recibieron tratamiento con hLf y aquellos detectados en los animales que recibieron tratamiento combinado con hLf + extracto bacteriano. Esto sugiere que debe haber un efecto protector de hLf que enmascara el efecto del tratamiento con extracto bacteriano.
Administracion intragastrica
Cuando los diversos tratamientos se administran por via intragastrica, los resultados son similares a aquellos descritos en la administracion intraperitoneal; sin embargo, los presentes inventores encontraron algunas pequenas diferencias entre ambos modos de administracion. En este caso, las diferencias con respecto a los niveles de IgG detectados en los animales tratados con el extracto bacteriano y el resto de los grupos (ctrl, hLf, hLf+extracto) empiezan a ser estadfsticamente significativas (p<0,001) a partir del dfa 13 despues del inicio del tratamiento en lugar del dfa 6, como ocurrio cuando se uso el modo de administracion intraperitoneal, es decir, parece haber un ligero retraso en la respuesta inmunitaria en la administracion intragastrica. Por otra parte, los presentes inventores observan diferencias significativas el dfa 6 del estudio entre el grupo de animales que recibieron tratamiento con hLf y el grupo de animales que recibieron tratamiento con hLf+extracto, con niveles de IgG superiores en el grupo de hLf.
Ejemplo 2
Se mezclaron juntas 3 clases diferentes de protemas naturalmente glucosiladas derivadas de cultivo celular y de sangre en un tampon de electrolitos estandar nativo, es decir, fisiologicamente similar con la concentracion mostrada
en la tabla con el mismo 22 mero de los peptidos de lactoferrina humana descritos anteriormente (usando la secuencia SEQ ID NO: 1 KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR).
Una medicion inmediata del cambio en la cinetica de difusion con un microscopio confocal de correlacion en el tiempo estandar usando marcas fluorescentes mostro, incluso por la baja concentracion (hLf 94 nM en HBS, 0,1 % 5 de BSA, IgG1 130 nM), la facilidad de formulacion para las tres clases de compuestos por la union moderada no espedfica del fragmento a los ejemplos de clases de protemas terapeuticas que incluyen la clase de compuestos del Ejemplo 1.
La columna f1 muestra sin optimizacion del experimento el cambio de una cinetica de difusion aparente acumulada en los canales del fragmento de hLf. La protema I es albumina, una fraccion de protema de sangre, conocida en su 10 version humana recombinante o como producto sangumeo, la protema II es un anticuerpo IgG selectivo. Ambas de fuentes comerciales. hLf como la referencia se mueve como "libre" en el elemento de volumen del foco del microscopio mientras que aproximadamente del 4 % o 15 %, respectivamente, del fragmento se unen no espedficamente y se mueve mas lento. Indicando que un agregado supramolecular del fragmento hLf es materializado en la formulacion de muestra.
13
- TauT1(us) A1=T/(1-T) TauT 2(us) A2= T/(1-T) TauD1 (us) f1(%) TauD2(us) N(#) s=z0/w0 CPS
- hlf-BSA
- 2,91491 0,185 1 0 35 85 244 1,4704 4,96004 7442
- hlf-IgG
- 2,91491 0,185 1 0 33 96 382 0,6862 4,96004 3072
- hlf-pep
- 2,91491 0,185 1 0 33 99 1419 0,5912 4,96004 2963
5
10
15
20
25
Lista de Figuras
Figura 1: Diametro de partfculas medido con zetasizer Figura 2: Potencial zeta de partfculas medido con zetasizer Figura 3: Nivel de IgG en grupo de control
Figura 4: Nivel de IgG en grupos tratados con la Formulacion "B" (hLf)
Figura 5: Nivel de IgG en grupos tratados con la Formulacion "A" (lisados bacterianos)
Figura 6: Nivel de IgG en grupos tratados con la Formulacion "A+B" (lisados bacterianos + hLf)
LISTADO DE SECUENCIAS <110> Evonik Rohm GmbH
<120> Peptido derivado de lactoferrina humana para su uso como agente de enmascaramiento de antigenos <130> 201000285 <160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens
<400> 1
Lys Cys Phe Gin Trp Gin Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro 15 10 15
Val Ser Cys lie Lys Arg 20
Claims (10)
- 510152025303540REIVINDICACIONES1. Peptido derivado de lactoferrina humana para su uso como un agente de enmascaramiento de antigenos en la produccion de una composicion farmaceutica para la administracion de una sustancia activa biologica en un organismo mai^ero, donde la sustancia activa biologica es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada por el organismo mairnfero, donde la composicion farmaceutica comprende un agregado supramolecular de la sustancia activa biologica y el peptido derivado de lactoferrina humana, con el efecto de que despues de la administracion de la composicion farmaceutica al organismo mai^ero, no hay o solo hay una induccion disminuida de la respuesta inmunitaria no deseada contra la sustancia activa biologica,por el cual el peptido derivado de lactoferrina humana es un peptido con una longitud de 19 a 30 aminoacidos e incluye una secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1 KCfQwQRNMRKVRGPPVSCIKR o una secuencia que es al menos el 90 % homologa a la secuencia SEQ ID NO: 1 ypor el cual la sustancia activa biologica esta seleccionada del grupo de protemas activas biologicas o peptidos activos biologicos, antisueros o anticuerpos policlonales o monoclonales,donde una respuesta inmunitaria no deseada por un organismo mai^ero se define como la respuesta del sistema inmunitario por la produccion de anticuerpos contra una sustancia activa biologica que se administra a un organismo marnffero con el fin de ejercer un efecto terapeutico beneficioso deseado que es diferente de una respuesta inmunitaria o en el que la respuesta inmunitaria es un efecto secundario no deseado.
- 2. Peptido derivado de lactoferrina humana segun la reivindicacion 1, donde el peptido es un peptido con la secuencia de aminoacidos segun SEQ ID NO: 1 o una secuencia que es al menos el 90 % homologa a la secuencia.
- 3. Peptido derivado de lactoferrina humana segun la reivindicacion 2, donde la secuencia es al menos el 90 % homologa a la secuencia SEQ: ID1 y donde los restos de cistema estan presentes en las posiciones 2 y 19.
- 4. Peptido derivado de lactoferrina humana segun una o mas de las reivindicaciones 1 a 3, donde la respuesta inmunitaria no deseada es una respuesta inmunitaria IgG.
- 5. Peptido derivado de lactoferrina humana segun una o mas de las reivindicaciones 1 a 3, donde la respuesta inmunitaria no deseada es una respuesta inmunitaria IgE.
- 6. Peptido derivado de lactoferrina humana segun una o mas de las reivindicaciones 1 a 5, donde la sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada esta comprendida en una muestra de sangre que se transfunde al organismo mam^era.
- 7. Peptido derivado de lactoferrina humana segun una o mas de las reivindicaciones 1 a 6, donde la sustancia activa biologica que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria no deseada esta comprendida en o sobre la superficie de un organo que se trasplanta al organismo mam^era.
- 8. Peptido derivado de lactoferrina humana segun una o mas de las reivindicaciones 1 a 7, donde la sustancia activa biologica y el peptido derivado de lactoferrina humana no estan covalentemente unidos entre sf en el agregado supramolecular.
- 9. Peptido derivado de lactoferrina humana segun una o mas de las reivindicaciones 1 a 7, donde la sustancia activa biologica y el peptido derivado de lactoferrina humana estan covalentemente unidos entre sf en el agregado supramolecular.
- 10. Proceso para la preparacion de una composicion farmaceutica como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, mezclando peptido derivado de lactoferrina humana y el agente biologicamente activo bajo condiciones nativas, incubando la mezcla para permitir la formacion de un agregado supramolecular y anadiendo la mezcla a la composicion farmaceutica final.
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