ES2504166T3 - Vacuna de estreptococo del grupo B - Google Patents

Abstract

Una composición inmunogénica que comprende: a. uno o más antígenos de polipéptido GBS, y b. antígenos de sacárido GBS de GBS serotipos Ia, Ib y III, donde la composición comprende GBS80 o un fragmento inmunogénica del mismo.

Description

VACUNA DE ESTREPTOCOCO DEL GRUPO B

Campo técnico

Esta invención se refiere a polisacáridos de la bacteria Streptococcus agalactiae (GBS) y a su uso en inmunización.

Técnica anterior

Una vez pensada para infectar solamente a vacas, la bacteria gran positiva Streptococcus agalactiae (o “estreptococo del grupo B”, abreviado “GBS”, (Ref. 1), es ahora conocida por causar enfermedad seria, bacteremia y meningitis, en individuos inmunocomprometidos y en neonatos. Hay dos tipos de infección neonatal. La primera (aparición temprana, normalmente después de 5 días del nacimiento) se manifiesta por bacteremia y neumonía. Se contrae verticalmente cuando un bebé pasa a través del canal del parto. GBS coloniza la vagina de aproximadamente 25% de mujeres jóvenes, y aproximadamente 1% de los bebés nacidos por medio de un parto vaginal en madres colonizadas estarán infectados. La mortalidad es entre 50-70%. La segunda es una meningitis que ocurre de 10 a 60 días después del nacimiento. Si a las mujeres embarazadas se les vacuna con cápsula del tipo III de manera que los bebés estén pasivamente inmunizados, la incidencia de la meningitis de aparición tardías se reduce pero no se elimina por completo.

La “B” en “GBS” se refiere a la clasificación Lancefield, que se basa en la antigenicidad de un carbohidrato que es soluble en ácido diluido y se llama el carbohidrato C. Lancefield identificó 13 tipos de carbohidrato C, designados A a O, que podían identificarse serológicamente. Los organismos que más comúnmente infectan a los humanos se encuentran en los grupos A, B, D y G. En el grupo B, las cepas pueden dividirse en al menos 9 serotipos (Ia, Ib, Ia/c, II, III, IV, V, VI, VII y VIII) en base a la estructura de su cápsula de polisacárido. En el pasado, los serotipos Ia, Ib, II y III eran igualmente prevalentes en el parto vaginal normal y sepsis de aparición temprana en recién nacidos. Sin embargo, GBS del tipo V ha aparecido como una causa importante de infección GBS en los Estados Unidos de América, y cepas de tipos VI y VIII han llegado a ser prevalentes entre las mujeres japonesas.

Se ha publicado la secuencia del genoma de una cepa 2603 V/R serotipo V (Ref. 2) y se han identificado varios polipéptidos para su uso en antígenos de vacunas (Ref. 3). Sin embargo, las vacunas actualmente en ensayos clínicos se basan en antígenos de polisacárido. Sufren de especificidad de serotipo y mala inmunogenicidad, de manera que hay necesidad de vacunas efectivas contra infección de S. agalactiae.

Es un objeto de la invención proporcionar más y mejores vacunas GBS.

Divulgación de la invención

Los inventores se han dado cuenta de que las vacunas basadas en sacárido pueden mejorarse usándolas en combinación con antígenos de polipéptido, y viceversa, de manera que el polipéptido y el sacárido pueden contribuir individualmente a la respuesta inmunológica en un receptor. La combinación es particularmente ventajosa cuando el sacárido y el polipéptido son de diferentes serotipos GBS.

Los antígenos combinados pueden estar presentes como una combinación simple donde los antígenos separados de sacárido y polipéptido se administran juntos, o pueden estar presentes como una combinación conjugada, donde los antígenos de sacárido y polipéptido se unen entre sí covalentemente.

De este modo, la invención proporciona una composición inmunogénica que comprende (i) uno o más antígenos de polipéptido GBS y (ii) uno o más antígenos de sacárido GBS. El polipéptido y el polisacárido pueden estar ventajosamente unidos entre sí covalentemente para formar un conjugado.

Entre ellos, los antígenos combinados de polipéptido y sacárido preferentemente cubren dos o más serotipos de GBS (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más serotipos). Los serotipos de los antígenos de polipéptido y sacárido pueden o no sobreponerse. Por ejemplo, el polipéptido puede proteger contra serogrupo II o V, mientras que el sacárido protege contra los serogrupos Ia, Ib o II. Las combinaciones preferentes protegen contra los siguientes grupos de serotipos: (1) serotipos Ia y Ib, (2) serotipos Ia y II, (3) serotipos Ia y III, (4) serotipos Ia y IV, (5) serotipos Ia y V, (6) serotipos Ia y VI, (7) serotipos Ia y VII, (8) serotipos Ia y VIII, (9) serotipos Ib y II, (10) serotipos Ia y III, (11) serotipos Ia y IV, (12) serotipos Ia y V, (13) serotipos Ia y VI, (14) serotipos Ia y VII, (15) serotipos Ia y VIII, (16) serotipos II y III, (17) serotipos II y IV, (18) serotipos II y V, (19) serotipos II y VI, (20) serotipos II y VII, (21) serotipos II y VIII, (22) serotipos III y IV, (23) serotipos III y V, (24) serotipos III y VI, (25) serotipos III y VII, (26) serotipos III y VIII, (27) serotipos IV y V, (28) serotipos IV y VI, (29) serotipos IV y VII, (30) serotipos IV y VIII, (31) serotipos V y VI, (32) serotipos V y VII, (33) serotipos V y VIII, (34) serotipos VI y VII, (35) serotipos VI y VIII y (36) serotipos VII y VIII.

Aún más preferentemente, las combinaciones protegen contra los siguientes grupos de serotipos: (1) serotipos Ia y II, (2) serotipos Ia y V, (3) serotipos Ib y II, (4) serotipos Ib y V, (5) serotipos III y II y (6) serotipos III y

V. Más preferentemente, las combinaciones protegen contra serotipos III y V.

La protección contra serotipos II y V se proporciona preferentemente por antígenos de polipéptido. La protección contra serotipos Ia, Ib y/o II pueden ser de antígenos de polipéptido o sacárido.

Preferentemente, la composición inmunogénica comprende uno o más antígenos de serogrupo V o fragmentos de los mismos seleccionados del grupo de antígeno consistente en GBS 80, GBS 91, GBS 104, GBS 147, GBS 173, GBS 276, GBS 305, GBS 313, GBS 322, GBS 328, GBS 330, GBS 338, GBS 358, GBS 361, GBS 404, GBS 656, GBS 690 y GBS 691. Preferentemente, la composición comprende una composición de al menos dos de estos antígenos de GBS o fragmentos de los mismos.

En una realización, la composición inmunogénica comprende un antígeno de sacárido GBS y al menos dos antígenos de polipéptido GBS o fragmentos de los mismos, donde dicho antígeno de sacárido GBS comprende un sacárido seleccionado de GBS serotipo Ia, Ib y III, y donde dichos antígenos de polipéptido GBS comprenden una combinación de al menos dos polipéptidos o un fragmentos de los mismos seleccionados del grupo de antígeno consistente en GBS 80, GBS 91, GBS 104, GBS 147, GBS 173, GBS 276, GBS 305, GBS 313, GBS 322, GBS 328, GBS 330, GBS 338, GBS 358, GBS 361, GBS 404, GBS 656, GBS 690 y GBS 691.

Preferentemente, la combinación comprende GBS 80 o un fragmento del mismo. En una realización, los antígenos de polipéptido GBS comprenden una combinación de dos antígenos GBS o fragmentos de los mismos seleccionados del grupo de antígeno consistente en (1) GBS 80 y GBS 91, (2) GBS 80 y GBS 104, (3) GBS 80 y GBS 147, (4) GBS 80 y GBS 173, (5) GBS 80 y GBS 276, (6) GBS 80 y GBS 305, (7) GBS 80 y GBS 313, (8) GBS 80 y GBS 322, (9) GBS 80 y GBS 328, (10) GBS 80 y GBS 330, (11) GBS 80 y GBS 338, (12) GBS 80 y GBS 358,

(13) GBS 80 y GBS 361, (14) GBS 80 y GBS 404, , (15) GBS 80 y GBS 656, (16) GBS 80 y GBS 690 y (17) GBS 80 y GBS 691.

Aún más preferentemente, la combinación se selecciona del grupo de antígeno consistente en (1) GBS 80 y GBS 338, (2) GBS 80 y GBS 361, (3) GBS 80 y GBS 305, (4) GBS 80 y GBS 328, (5) GBS 80 y GBS 690, (6) GBS 80 y GBS 691 y (7) GBS 80 y GBS 147. Incluso más preferentemente, la combinación comprende GBS 80 y GBS

691.

En una realización, la composición comprende una combinación de al menos tres antígenos de polipéptido GBS. Preferentemente, esta combinación comprende GBS 80 y GBS 691.

Preferentemente, la combinación inmunogénica comprende además un polipéptido GBS o un fragmento del mismo de serogrupo II.

El antígeno de polipéptido

El polipéptido es preferentemente: (a) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido seleccionad del grupo consistente en SEQ IDs 2-10966 con número par de Ref. 3; (b) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido que tiene identidad secuencial con una secuencia de aminoácido de (a); o (c) un polipéptido que comprende un fragmento de una secuencia de aminoácido de (a).

En (a), las SEQ IDs preferentes son aquellas que codifican GBS1 a GBS689 (véase Tabla IV de referencia 3).

En (b), el grado de identidad secuencial puede variar dependiendo de la secuencia de aminoácido (a) en cuestión, pero es preferentemente superior a 50% (por ejemplo, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% o superior). Los polipéptidos en (b) incluyen homólogos, ortólogos, variantes alélicas y mutantes funcionales de (a). Típicamente, se considera que el 50% de identidad o más entres dos proteínas es una indicación de equivalencia funcional. La identidad entre proteínas se determina preferentemente mediante la búsqueda de homología con el algoritmo Smith-Waterman como lo implementa el programa MPSRCH (Oxford Molecular), usando una búsqueda de huecos afines con parámetros penalización por hueco abierto = 12 y penalización por extensión de hueco = 1.

En (c), la longitud del fragmento puede variar dependiendo de la secuencia de aminoácido (a) en cuestión, pero el fragmento tiene preferentemente 7 aminoácidos consecutivos de las secuencias de (a) por ejemplo 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 o más. Preferentemente, el fragmento comprende uno o más epítopes de la secuencia. Otros fragmentos preferentes son los péptidos de señal de terminal N de SEQ ID s 110966 de Ref. 3, SEQ IDs 1-10966 de Ref. 3 sin sus péptidos de señal de terminal N y SEQ IDs 1-10966 de Ref. 3 donde se eliminan hasta 10 residuos de aminoácido (eto es, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 residuos) de la terminal N y/o la terminal C, por ejemplo, el residuo de aminoácido de terminal N puede eliminarse.

Los polipéptidos, por supuesto, pueden prepararse mediante varios métodos (por ejemplo, expresión recombinante, purificación de GBS, síntesis química, etc.) y de varias formas (por ejemplo, nativos, fusiones, glicosilados, no glicosilados, etc.). Preferentemente se preparan en forma sustancialmente pura (esto es,

sustancialmente libres de otras proteínas del estreptococo o de célula huésped) o en forma sustancialmente aislada.

Los antígenos de polipéptido preferentes son: GBS 80, GBS 91, GBS 104, GBS 147, GBS 173, GBS 276, GBS 305, GBS 313, GBS 322, GBS 328, GBS 330, GBS 338, GBS 358, GBS 361, GBS 404, GBS 656, GBS 690 y GBS 691, incluyendo polipéptidos que tienen secuencias de aminoácido con identidad secuencial con las mismas, etc.

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 80 en la Ref. 3 son SEQ ID 8779 y SEQ ID 8780. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 1 y 2:

SEQ ID NO. 1

SEQ ID NO. 2

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 91 en la Ref. 3 son SEQ ID 8937 y SEQ ID 8938. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 3 y 4:

SEQ ID NO. 3

SEQ ID NO. 4

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 104 en la Ref. 3 son SEQ ID 8777 y SEQ ID 8778. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 5 y 6:

SEQ ID NO. 5

SEQ ID NO. 6

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 147 en la Ref. 3 son SEQ ID 8525 y SEQ ID 8526. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 7 y 8:

SEQ ID NO. 7

SEQ ID NO. 8

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 173 en la Ref. 3 son SEQ ID 8787 y SEQ ID 8788. 45 Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 9 y 10:

SEQ ID NO. 9

SEQ ID NO. 10

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 276 en la Ref. 3 son SEQ ID 8941 y SEQ ID 8942. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 11 y 12:

SEQ ID NO. 11

SEQ ID NO. 12

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 305 en la Ref. 3 son SEQ ID 207 y SEQ ID 208. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 13 y 14:

SEQ ID NO. 13

SEQ ID NO. 14

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 313 en la Ref. 3 son SEQ ID 4089 y SEQ ID 4090.25 Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 15 y 16:

SEQ ID NO. 15

SEQ ID NO. 16

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 322 en la Ref. 3 son SEQ ID 8539 y SEQ ID 8540. 45 Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 17 y 18:

SEQ ID NO. 17

SEQ ID NO. 18

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 328 en la Ref. 3 son SEQ ID 6015 y SEQ ID 6016. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 19 y 20:

SEQ ID NO. 19

35 SEQ ID NO. 20

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 330 en la Ref. 3 son SEQ ID 8791 y SEQ ID 8792. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 21 y 22:

SEQ ID NO. 21

SEQ ID NO. 22

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 338 en la Ref. 3 son SEQ ID 8637 y SEQ ID 8638. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 23 y 24:

SEQ ID NO. 23

SEQ ID NO. 24

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 358 en la Ref. 3 son SEQ ID 3183 y SEQ ID 3184. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 25 y 26:

SEQ ID NO. 25

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 361 en la Ref. 3 son SEQ ID 8769 y SEQ ID 8770. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 27 y 28:

35 SEQ ID NO. 27

SEQ ID NO. 28

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 404 en la Ref. 3 son SEQ ID 8799 y SEQ ID 8800. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 29 y 30:

SEQ ID NO. 29

SEQ ID NO. 30

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 656 en la Ref. 3 son SEQ ID 9323 y SEQ ID 9324. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 31 y 32:

SEQ ID NO. 31

SEQ ID NO. 32

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 690 en la Ref. 3 son SEQ ID 9965 y SEQ ID 9966. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 33 y 34:

SEQ ID NO. 33

SEQ ID NO. 34

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 691 en la Ref. 3 son SEQ ID 3691 y SEQ ID 3692. 55 Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 35 y 36:

SEQ ID NO. 35

SEQ ID NO. 36

Otros antígenos de polipéptido preferentes incluyen: GBS4 (SEQ ID 2 de Ref. 3); GBS22 (SEQ ID 8584 de Ref. 3); y GBS85 (SEQ ID 216 de Ref. 3), incluyendo polipéptidos que tienen secuencias de aminoácido con identidad secuencial con las mismas, etc.

El polipéptido preferentemente no es una proteína C (alfa o beta o epsilon) o una proteína R (Rib).

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 4 en la Ref. 3 son SEQ ID 1 y SEQ ID 2. Estas 15 secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 37 y 38:

SEQ ID NO. 37

25 SEQ ID NO. 38

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 22 en la Ref. 3 son SEQ ID 8583 y SEQ ID 8584. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 39 y 40:

SEQ ID NO. 39

SEQ ID NO. 40

Las secuencias de nucleótido y aminoácido de GBS 85 en la Ref. 3 son SEQ ID 215 y SEQ ID 216. Estas secuencias se exponen más abajo como SEQ ID NOS 41 y 42:

SEQ ID NO. 41

SEQ ID NO. 42

Los polipéptidos GBS de la invención pueden estar presentes en la composición como polipéptidos individuales separados. Sin embargo, es preferente que dos o más (esto es, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20) de los antígenos se expresen como una cadena sencilla de polipéptido (un polipéptido “híbrido”). Los polipéptidos híbridos ofrecen dos ventajas principales: primero, un polipéptido que puede ser inestable

o expresarse pobremente por sí solo puede ayudarse añadiendo un compañero híbrido adecuado que supere el problema; segundo, la fabricación comercial se simplifica ya que solamente necesita emplearse una expresión y purificación con el fin de producir dos polipéptidos que sean antigénicamente útiles.

El polipéptido híbrido puede comprender dos o más secuencias de polipéptido del primer grupo antígeno. Por consiguiente, la invención incluye una composición que comprende una primera secuencia de aminoácido y una segunda secuencia de aminoácido, donde dicha primera y segunda secuencia de aminoácido se seleccionad de un antígeno GBS o un fragmento del mismo. Preferentemente, la primera y segunda secuencia de aminoácido en el polipéptido híbrido comprenden epítopes diferentes.

El polipéptido híbrido puede comprender una o más secuencias de polipéptido de diferentes serotipos GBS. Por consiguiente, la invención incluye una composición que comprende una primera secuencia de aminoácido y una segunda secuencia de aminoácido, dicha primera secuencia de aminoácido y dicha segunda secuencia de aminoácido seleccionadas de un serotipo GBS seleccionado del grupo consistente en serotipos Ia, Ib, Ia/c, II, III, IV, V, VI; VII y VIII. La primera y segunda secuencia de aminoácido pueden ser del mismo serotipo GBS o pueden ser de diferentes serotipos GBS. Preferentemente, la primera y segunda secuencia de aminoácido se seleccionan de un serotipo GBS seleccionad del grupo consistente en serotipos II y V. Más preferentemente, al menos uno de la primera y segunda secuencia de aminoácido es de GBS serotipo V. preferentemente, la primera y segunda secuencia de aminoácido en el polipéptido híbrido comprenden epítopes diferentes.

En una realización, el polipéptido híbrido comprende uno o más antígenos GBS de serotipo V. preferentemente, el polipéptido híbrido comprende una primera secuencia de aminoácido y una segunda secuencia de aminoácido, dicha primera secuencia de aminoácido y dicha segunda secuencia de aminoácido comprendiendo un antígenos GBS o un fragmento del mismo seleccionado del grupo consistente en GBS 80, GBS 91, GBS 104, GBS 147, GBS 173, GBS 276, GBS 305, GBS 313, GBS 322, GBS 328, GBS 330, GBS 338, GBS 358, GBS 361, GBS 404, GBS 656, GBS 690 y GBS 691. Preferentemente, el antígeno GBS o fragmento del mismo se selecciona del grupo consistente en GBS 80 y GBS 691. Preferentemente, la primera y segunda secuencia de aminoácido en el polipéptido híbrido comprenden epítopes diferentes.

Los híbridos que consisten en secuencias de aminoácido de dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nuevo o diez antígenos GBS son preferentes. En particular, híbridos consistentes en secuencias de aminoácido de dos, tres, cuatro o cinco antígenos GBS son preferentes.

Pueden mezclarse diferentes polipéptidos híbridos juntos en una única formulación. En tales combinaciones, un antígeno GBS puede estar presente en más de un polipéptido híbrido y/o como un polipéptido no híbrido. Sin embargo, es preferente que un antígeno esté presente bien como un híbrido o como un no híbrido, pero no como ambos.

Preferentemente, el antígeno GBS en uno de los polipéptidos híbridos es GBS 80 o un fragmento del mismo. Por consiguiente, ejemplos de híbridos de dos antígenos para uso en la invención pueden comprender: (1) GBS 80 y GBS 91, (2) GBS 80 y GBS 104, (3) GBS 80 y GBS 147, (4) GBS 80 y GBS 173, (5) GBS 80 y GBS 276,

(6) GBS 80 y GBS 305, (7) GBS 80 y GBS 313, (8) GBS 80 y GBS 322, (9) GBS 80 y GBS 328, (10) GBS 80 y GBS 330, (11) GBS 80 y GBS 338, (12) GBS 80 y GBS 358, (13) GBS 80 y GBS 361, (14) GBS 80 y GBS 404, (15) GBS 80 y GBS 656, (16) GBS 80 y GBS 690 y (17) GBS 80 y GBS 691. Preferentemente, un híbrido de dos antígenos para su uso en la invención comprende GBS 80 y GBS 691.

Los polipéptidos híbridos pueden estar representados por la fórmula NH2-A-{-Z-L-}n-B-COOH, donde: X es una secuencia de aminoácido de un antígeno GBS o un fragmento del mismo; L es una secuencia de aminoácido enlazadora opcional; A es una secuencia de aminoácido de terminal N opcional; B es una secuencia de aminoácido de terminal C opcional; y n es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ó 15.

Si una fracción –X-tiene una secuencia peptídica líder en su forma de tipo salvaje, puede incluirse u omitirse en la proteína híbrida. En algunas realizaciones, los péptidos líderes ser eliminarán excepto la fracción –Xsituada en la terminal N de la proteína híbrida, esto es, el péptido líder de X1 se mantendrá, pero los péptidos líderes de X2… Xn se omitirán. Esto es equivalente a eliminar todos los péptidos líderes y usar el péptido líder de X1 como fracción –A-.

Para cada caso n de {-X-L-}, la secuencia de aminoácido enlazadora –L-puede estar presente o ausente. Por ejemplo, cuando –n=2 el híbrido puede ser NH2-X1-L1-X2-L2-COOH, NH2-X1-X2-COOH, NH2-X1-L1-X2-COOH, NH2-X1-X2-L2-COOH, etc. La secuencia o secuencias de aminoácido enlazadoras –L-serán típicamente cortas (por ejemplo, 20 o menos aminoácidos, esto es, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Los ejemplos comprenden secuencias peptídicas cortas que facilitan la clonación, enlazadores poli-glicina (esto es, que comprenden Glin donde n = 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más), y etiquetas de histidina (esto es, Hisn donde n= 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más). Otras secuencias de aminoácido enlazadoras adecuadas serán aparentes para aquellos expertos en la técnica. Un enlazador útil es GSGGGG (SEQ ID 1), con el dipéptido Gli-Ser formado de un sitio de restricción BamHI, ayudando así a la clonación y manipulación, y el tetrapéptido (Gli)4 siendo un enlazador poli-glicina típico.

-A-es una secuencia de aminoácido de terminal N opcional. Ésta será típicamente corta (por ejemplo, 40 o menos aminoácidos, esto es, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Los ejemplos incluyen secuencias líderes para dirigir el tráfico de proteínas, o secuencias peptídicas cortas que facilitan la clonación o purificación (por ejemplo, etiquetas de histidina, esto es Hisn donde n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más). Otras secuencias de aminoácido de terminal N adecuadas serán aparentes para aquellos expertos en la técnica. Si X1 carece de su propia metionina de terminal N, -A-es preferentemente un oligopéptido (por ejemplo, con 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 aminoácidos) que proporciona una metionina de terminal A.

-B-es una secuencia de aminoácido de terminal C opcional. Ésta será típicamente corta (por ejemplo, 40 o menos aminoácidos, esto es, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Los ejemplos incluyen secuencias para dirigir el tráfico de proteínas, secuencias peptídicas cortas que facilitan la clonación o purificación (por ejemplo, que comprenden etiquetas de histidina, esto es Hisn donde n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más), o secuencias que mejoran la estabilidad de las proteínas. Otras secuencias de aminoácido de terminal C adecuadas serán aparentes para aquellos expertos en la técnica.

Más preferentemente, n es 2 ó 3.

El antígeno de sacárido

El antígeno de sacárido es generalmente el polisacárido capsular de un GBS o un derivado del mismo. Los derivados adecuados incluyen oligosacárido (por ejemplo, de 3 a 150, preferentemente de 8 a 100 unidades de monosacárido), fragmentos del polisacárido (por ejemplo, refs. 12 a 16), sacáridos de-acetilados (Ref. 16), sacáridos N-acrilados (16), sacáridos con grupos de aldehído terminal, etc.

El sacárido se conjuga preferentemente con una molécula transportadora para mejorar la inmunogenicidad (por ejemplo, véase refs. 4 a 23 etc.). En algunas realizaciones de la invención el sacárido GBS se conjuga con una proteína GBS como se ha definido anteriormente, dando de este modo una combinación polipéptido/sacárido de la invención en una única molécula. En otras realizaciones el sacárido GBS se conjuga con una proteína no GBS, en cuyo caso el conjugado se combinará con una proteína GBS separada para dar una combinación polipéptido/sacárido de la invención.

Los polipéptidos transportadora no GBS incluyen toxoide tetánico, la proteína de la membrana exterior de

N. meningitidis (24), péptidos sintéticos (25, 26), proteínas de choque térmico (27, 28), proteínas pertussis (29, 30), proteína D de H. influenzae (31), citoquinas (32), linfoquinas (32), hormonas (32) factores del crecimiento (32), toxina A o B de C. difficile (33), proteínas de absorción de hierro (34), etc. Las proteínas transportadoras preferentes son el toxoide de difteria CRM197 (35) y toxoide tetánico.

El sacárido y el polipéptido se unen covalentemente. Esto puede implicar un enlace covalente directo entre el sacárido y el polipéptido, o puede usarse una unión indirecta por medo de un enlazador o espaciador (por ejemplo, por medio de un enlazador B-propionamida (16), etc.). Puede usarse cualquier química de conjugación adecuada (por ejemplo aminación reductora (21), etc.). La unión se hace preferentemente por medio de un sacárido terminal en el polisacárido.

Una única molécula transportadora puede transportar antígenos de sacárido de un único tipo (por ejemplo, sacárido derivados de un único serotipo GBS) o puede transportar múltiples antígenos diferentes (por ejemplo, sacáridos derivados de múltiples serotipos GBS, todos conjugados con el mismo transportador).

Los sacáridos pueden prepararse, por supuesto, de varias maneras (por ejemplo, purificación del sacárido de GBS, síntesis química, etc.), de varios tamaños (por ejemplo, de longitud completa, fragmentados, etc.) o pueden derivatizarse para unirse a transportadores. Preferentemente se prepararn en forma sustancialmente pura (esto es, sustancialmente libres de otros sacáridos de estreptococo) o en forma sustancialmente aislada. Los procesos para preparar polisacáridos capsulares de GBS son bien conocidos en la técnica (por ejemplo, refs. 36 a 39) y procesos para preparar oligosacáridos de polisacáridos son también conocidos (por ejemplo, hidrólisis, sonicación, tratamiento enzimático, tratamiento con una base seguido de nitrosación, etc. (12 a 16)).

Como una alternativa a usar un antígeno de sacárido en combinaciones no conjugadas, puede usarse un mimético peptídico del polisacárido capsular GBS (por ejemplo, 40). Los péptidos adecuados pueden seleccionarse mediante técnica tales como expresión en fago usando anticuerpos anti-sacáridos protectores. Como una alternativa más, puede usarse un anticuerpo anti-idiotópico en lugar de un antígeno sacárido (por ejemplo, ref. 41).

Programas de sensibilización/refuerzo

Las combinaciones de polipéptido/sacárido de la invención pueden darse como dosis únicas o como parte de un programa de sensibilización/refuerzo. En un programa de sensibilización/refuerzo, las combinaciones pueden usarse como la dosis de sensibilización, la dosis o dosis de refuerzo, o ambas.

Si se usa una combinación para sensibilización y refuerzo, es preferente usar la misma combinación en ambos momentos. Si se usa una combinación para solamente uno de sensibilización y refuerzo, es preferente que la otra dosis use el polipéptido o sacárido en el que se basa la combinación. De este modo la invención proporciona un programa de sensibilización-refuerzo donde (i) uno de los antígenos de sacárido y polipéptido se usa para sensibilizar una respuesta inmune y una combinación se usa para reforzar la respuesta, o (ii) antígenos combinados de sacárido y polipéptido se usan para sensibilizar una respuesta inmune pero solamente uno se usa para reforzar la respuesta.

Varios ritmos para sensibilización y refuerzo son adecuados para su uso con la invención. En una realización, se da una dosis de sensibilización a un niño y se le da un refuerzo a un adolescente (13-18 años) o adulto joven (19-25 años). En otra realización, se da una dosis de sensibilización a un adolescente o adulto joven y se da un refuerzo durante el embarazo. En otra realización, se da una dosis de sensibilización a una mujer que intenta quedarse embarazada y se le da un refuerzo durante el embarazo.

Composiciones farmacéuticas inmunogénicas

Las combinaciones de polipéptido/sacárido se formulan como composiciones inmunogénicas, y más preferentemente como composiciones adecuadas para su uso como una vacuna en humanos (por ejemplo, niños o adultos). Las vacunas de la invención pueden ser profilácticas (esto es, para prevenir la infección) o terapéuticas (esto es, para tratar la enfermedad después de la infección), pero típicamente serán profilácticas. Por consiguiente, la invención incluye un método para tratamiento terapéutico o profiláctico de infección GBS en un animal susceptible de infección GBS que comprende la administración a dicho animal de una cantidad terapéutica o profiláctica de las composiciones inmunogénicas de la invención.

La composición de la invención es preferentemente estéril.

La composición de la invención es preferentemente libre de pirógenos.

La composición de la invención generalmente tiene un pH de entra 6,0 y 7,0, más preferentemente entre 6,3 y 6,9, por ejemplo, 6,6±0,2. La composición está preferentemente amortiguada en este pH.

Otros componentes adecuados para administración humana se desvelan en la referencia 42.

Las vacunas de la invención pueden administrarse junto con otros agentes inmunoreguladores. En particular, las composiciones normalmente incluirán un adyuvante. Más adyuvantes preferentes incluyen, aunque no se limitan a, uno o más de los siguientes expuestos más abajo:

A. Composiciones que contienen minerales

Las composiciones que contienen minerales adecuadas para su uso como adyuvantes en la invención incluyen sales minerales, tales como sales de aluminio y sales de calcio. La invención incluye sales minerales tale como hidróxidos (por ejemplo, oxihidróxidos), fosfatos (por ejemplo, hidroxifosfatos, ortofosfatos), sulfatos, etc., {por ejemplo, véase capítulos 8 y 9 de ref. 43}), o mezclas de diferentes compuestos minerales con el compuesto tomando cualquier forma adecuada (por ejemplo, gel, cristalina, amorfa, etc.), y siendo preferente la adsorción. Las composiciones que contienen minerales también pueden formularse como una partícula de sal de metal. Véase ref.

44.

B. Emulsiones en aceite

Las composiciones de emulsiones en aceite adecuadas para su uso como adyuvantes en la invención incluyen emulsiones de escualeno-agua, tal como MF59 (5% Escualeno, 0,5% Tween 80 y 0,5% Span 85, formulado en partículas de submicrón usando un microfluidizador). Véase ref. 45.

Adyuvante de Freund completo (AFC) y adyuvante de Freund incompleto (AFI) pueden también usarse

como adyuvantes en la invención.

C. Formulaciones de saponina

Las formulaciones de saponina también pueden usarse como adyuvantes en la invención. Las saponinas son un grupo heterólogo de glicósidos de esterol y glicósidos de triterpenoide que se encuentran en la corteza, hojas, tallos, raíces e incluso flores de una amplia variedad de especies de plantas. Las saponinas de la corteza del árbol Quillaja saponaria Molina se ha estudiado mucho como adyuvantes. La saponina también puede obtenerse en el mercado de Smilax ornata (zarzaparrilla), Gypsophilla paniculata (velo de novia) y Saponaria officianalis (raíz de jabón). Las formulaciones adyuvantes de saponina incluyen formulaciones purificadas, tales como QS21, así como formulaciones lípidas, tales como ISCOMs.

Las composiciones de saponina se han purificado usando Cromatografía de Capa Fina de Alto Rendimiento (HP-LC) y Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento de Fase Inversa (RP-HPLC). Se han identificado las fracciones purificadas específicas que usan estas técnicas, incluyendo QS7, QS17, QS18, QS21, QH-A, QH-B y QH-

C. Preferentemente, la saponina es QS21. Un método para la producción de QS21 se desvela en la patente de Estados Unidos Nº 5.057.540. Las formulaciones de saponina pueden también comprender un esterol, tal como colesterol (véase WO 96/33739).

Las combinaciones de saponinas y colesteroles pueden usarse para formar partículas únicas llamadas Complejos Inmunoestimuladores (ISCOMs). Los ISCOMs típicamente también incluyen un fosfolípido tal como fosfatidiletanolamina o fosfatidilcolina. Cualquier saponina conocida puede usarse en ISCOMs. Preferentemente, el ISCOM incluye uno o más de Quil A, QHA y QHC. Los ISCOMs se describen además en EP 0 109 942, WO 96/11711 y WO 96/33739. Opcionalmente, los ISCOMs pueden estar libres de detergente adicional. Véase ref. 46.

Puede encontrarse un análisis del desarrollo de adyuvantes basados en saponina en la ref. 47.

C. Virosomas y Partículas de Tipo Virus (PTVs)

Los virosomas o partículas de tipo virus (PTVs) también pueden usarse como adyuvantes en la invención. Estas estructuras generalmente contienen una o más proteínas de un virus opcionalmente combinado o formulado con un fosfolípido. Son generalmente no patogénicos, no replicantes y generalmente no contienen ningún genoma viral nativo. Las proteínas virales pueden producirse recombinantemente o aislarse de virus completos. Estas proteínas virales para su uso en virosomas o PTVs incluyen proteínas derivadas de virus de influenza (tales como HA o NA), virus de hepatitis B (tales como proteínas núcleos o cápsides), virus de heptatis E, virus de sarampión, virus Sindbis, rotavirus, virus de enfermedad de pies y boca, retrovirus, virus de Norwalk, virus de papiloma humano, ViH, fagos de ARN, Qβ-fago, fr-fago, fago AP205 y Ty (tal como proteína TY p1 de retrotransposón). Los PTVs se analizan además en WO 03/024480, WO 03/024481 y Refs. 48, 49, 50 y 51. Los virosomas se analizan además, por ejemplo, en Ref. 52.

D. Derivados Bacterianos y Microbianos

Los adyuvantes adecuados para su uso en la invención incluyen derivados bacterianos o microbianos tales como:

(1) Derivados no tóxicos de lipopolisacárido enterobacteriano (LPS)

Tales derivados incluyen Monofosforil lípido A (MPL) y MPL 3-O-deacilatdo (3dMPL). 3dMPL es una mezcla de monofosforil lípido A 3 De-O-acilado con 4, 5 ó 6 cadenas aciladas. Una forma de “partícula pequeña” preferente de monofosforil lípido A 3 De-O-acilado desvela en EP 0 689 454. Tales “partículas pequeñas” de 3dMPL son lo suficientemente pequeñas para ser filtrarse estériles a través de una membrana de 0,22 micrones (véase EP 0 689 454). Otros derivados LPS no tóxicos incluyen miméticos de monofosforil lípido A, tales como derivados de fosfato de aminoalquil glucosaminida, por ejemplo, RC-529. Véase Ref. 53.

(2) Derivados de Lípido A

Los derivados de lípido A incluyen derivados de lípido A de Escherichia coli tales como OM-174. OM-174 se describe por ejemplo en Ref. 54 y 55.

(3) Oligonucleótidos inmunoestimuladores

Los oligonucleótidos inmunoestimuladores adecuados para su uso como adyuvantes en la invención incluyen secuencias de nucleótido que contienen una unidad CpG (una secuencia que contienen una citosina no metilada seguida de guanosina y unidos por un enlace de fosfato). El ARN bacteriano de doble hélice o los oligonucleótidos que contienen secuencias palindrómicas o poli(dG) también han demostrado ser inmunoestimuladoras.

Los CpGs pueden incluir modificaciones/análogos de nucleótidos tales como modificaciones de fosforotioato y pueden ser de doble hélice o de único hélice. Opcionalmente, la guanosina puede sustituirse por un

análogo tal como 2’-deoxi-7-deazaguanosina. Véase ref. 56, WO 02/26757 y WO 99/62923 para ejemplos como posibles sustituciones de análogos. El efecto adyuvante de oligonucleótidos CpG se analiza además en las Refs. 57, 58, WO 98/40100, Patente de Estados Unidos Nº 6.207.646, Patente de Estados Unidos Nº 6.239.116 y Patente de Estados Unidos Nº 6.429.199.

La secuencia CpG puede dirigirse a TLR9, tal como la unidad GTCGTT o TTCGTT. Véase ref. 59. La secuencia CpG puede ser específica para inducir una respuesta inmune Th1, tal como CpG-A ODN o puede ser más específica para inducir una respuesta de célula B, tal como CpG-B ODN. CpG-A y CpG-B ODNs se analizan en las refs. 60, 61 y WO 01/95935. Preferentemente, CpG es un CpG-A ODN. Preferentemente, el oligonucleótido de CpG se construye para que el extremo 5’ sea accesible para el reconocimiento de receptor. Opcionalmente, dos secuencias de oligonucleótido de CpG pueden unirse a sus extremos 3’ para formar “inmunómeros”. Véase, por ejemplo, refs. 62, 63, 64 y WO 03/035836.

(4) Toxinas ADP-ribosilantes y derivados destoxificados de las mismas

Las toxinas ADP ribosilantes bacterianas y sus derivados purificados pueden usarse como adyuvantes en la invención. Preferentemente, la proteína se deriva de E. coli (enterotoxina termolábil "TL" de E. coli), cólera (“CT”) o tosferina (“PT”). El uso de toxinas ADP ribosilantes purificadas como adyuvantes de mucosa se describe en WO 95/17211 y como adyuvantes parenterales en WO 98/42375. Preferentemente, el adyuvante es un mutante de TL purificado tal como LT-K63 y LT-R72 y LT-G192. El uso de toxinas ADP ribosilantes y derivados purificados de las mismas, particularmente LT-K63 y LT-R72, como adyuvantes pueden encontrarse en las referencias 65,66, 67, 68, 69, 70, 71 y 72, cada una de ella específicamente incorporada como referencia en el presente documento en su totalidad. La referencia numérica para las sustituciones de aminoácidos se basa preferentemente en los alineamientos de las subunidades A y B de las toxinas ADP ribosilantes expuestas en Domenighini et al., Mol. Microbiol (1995) 15(6):1165-1167.

E. Inmunomoduladores humanos

Los inmunomoduladores humanos adecuados para su uso como adyuvantes en la invención incluyen citocinas, tales como interleucinas (por ejemplo IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, etc.), interferones (por ejemplo interferón-γ), factor estimulante de colonias de macrófagos y factor de necrosis tumoral.

F. Bioadhesivos y mucoadhesivos

En la invención también pueden usarse como adyuvantes bioadhesivos y mucoadhesivos. Los bioadhesivos adecuados incluyen microesferas de ácido hialurónico esterificado (Ref. 73) o mucoadhesivos tales como derivados reticulados del poli(ácido acrílico), poli(alcohol vinílico), polivinilpirrolidona, polisacáridos y carboximetilcelulosa. El quitosano y sus derivados también pueden usarse como adyuvantes en la invención. Por ejemplo, ref. 74.

G. Micropartículas

En la invención también pueden usarse como adyuvantes micropartículas. Se prefieren micropartículas (es decir una partícula con un diámetro de ∼100 nm a ∼150 µm, más preferentemente con un diámetro de ∼200 nm a∼30 µm y más preferentemente con un diámetro de ∼500 nm a ∼10 µm) formadas con materiales que son biodegradables y no tóxicos (por ejemplo un poli(α-hidroxiácido), un poli(ácido hidroxibutírico), un poliortoéster, un polianhídrido, una policaprolactona, etc.),con poli(láctida-co-glicólico), opcionalmente tratadas para tener una superficie cargada negativamente (por ejemplo, con SDS) o una superficie cargada positivamente (por ejemplo, con un detergente catiónico, tal como CTAB)

H. Liposomas

Ejemplos de formulaciones adecuadas con liposomas para su uso como adyuvantes se describen en la Patente de Estados Unidos Nº 6.090.406, Patente de Estados Unidos Nº 5.916.588 y EP 0 626.169.

I. Formulaciones de éter polioxietileno y éster polioxietileno

Los adyuvantes adecuados para su uso en la invención incluyen éter polioxietileno y éster de polioxietileno. Ref. 75. Tales formulaciones incluyen además surfactantes de éster polioxietileno sorbitan en combinación con un octoxinol (Ref. 765) así como surfactantes de éter o éster de polioxietileno alquilo en combinación con al menos otro surfactante no-iónico tal como octoxinol (Ref. 77). Los éteres de polioxietileno preferentes se seleccionan del siguiente grupo: polioxietileno-9-lauril éter (laureth 9), polioxietileno-9-esteoril éter, polioxietileno-8-esteoril éter, polioxietileno-4-lauril éter, polioxietileno-35-lauril éter y polioxietileno-23-lauril éter.

J. Polifosfaceno (PCPP)

Las formulaciones de PCPP se describen, por ejemplo, en Ref. 78 y 79.

K. Péptido de muramil

Ejemplos de péptidos de muramil adecuados para su uso como adyuvantes en la invención incluyen Nacetil-muramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil-normuramil-L-alanil-D-isoglutamina (nor-MDP) y Nacetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1’,2’-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamina MTP-PE).

L. Compuestos de imidazoquinolona

Ejemplos de imidazoquinolona adecuados para su uso como adyuvantes en la invención incluyend Imiquamod y sus homólogos, descritos además en la Ref. 80 y 81. La invención puede también comprender combinaciones de aspectos de uno o más adyuvantes identificados anteriormente. Por ejemplo, las siguientes composiciones adyuvantes pueden usarse en la invención:

(1)

una saponina y una emulsión de aceite en agua (ref. 82);

(2)

una saponina (por ejemplo, QS21) + un derivados LPS no tóxico (por ejemplo, 3dMPL) (véase WO 94/00153);

(3)

una saponina (por ejemplo, QS21) + un derivados LPS no tóxico (por ejemplo, 3dMPL) + un colesterol;

(4)

una saponina (por ejemplo, QS21) + 3dMPL + IL-12 (opcionalmente + un esterol) (Ref. 83);

(5)

SAF, que contiene 10% Escualeno, 0,4% Tween 80, 5% polímero de bloque plurónico L121, y thr-MPD, bien microfluidizado en una emulsión de submicrón o sometido a vórtice para generar una emulsión de mayor tamaño de partícula.

(6)

Sistema adyuvante Ribi™ (RAS), (Ribi Immunochem) que contiene 2% Escualeno, 0,2% Tween 80 y uno o más componentes de pared celular bacteriana del grupo consistente en monofosforilípido A (MPL), dimicolato de trehalos (TDM) y esqueleto de pared celular (EPC), preferentemente MPL + EPC (Detox™); y

(7)

una o más sales minerales (tales como una sal de aluminio) + un derivado no tóxico de LPS (tal como 3dMPL).

Las sales de aluminio y MF59 son adyuvantes preferentes para inmunización parenteral. Las toxinas bacterianas mutantes son adyuvantes de mucosa preferentes.

La composición puede incluir un antibiótico.

Los polipéptidos y sacáridos de GBS en las composiciones de la invención estarán presente en “cantidades inmunológicamente efectivas”, esto es, la administración de la cantidad a un individuo, bien en una única dosis o como parte de una serie, es efectiva para el tratamiento o prevención de enfermedad. Esta cantidad varía dependiendo de la salud y la condición física del individuo a tratar, edad, el grupo taxonómico del individuo a tratar (por ejemplo, primate no humano, primate, etc.), la capacidad del sistema inmune del individuo para sintetizar anticuerpos, el grado de protección deseado, la formulación de la vacuna, la evaluación de la situación médica por parte del doctor que la esté tratando y otros factores relevantes. Se espera que la cantidad corresponda a un rango relativamente amplio que puede determinarse por medio de ensayos rutinarios.

Típicamente, las composiciones de la invención se preparan como inyectables. La administración directa de las composiciones generalmente será parenteral (por ejemplo, mediante inyección, bien subcutáneamente, intraperitonealmente, intravenosamente o intramuscularmente, o administrase al espacio intersticial de un tejido) o de la mucosa (por ejemplo, oral o intranasal [85, 86]. Las composiciones también pueden administrase a una lesión. La invención proporciona jeringas que contienen una composición de la invención.

Una vez formuladas, las composiciones de la invención pueden administrarse directamente al sujeto. Los sujetos a ser tratados pueden ser animales; en particular, pueden tratarse sujetos humanos. Las vacunas son particularmente útiles para vacunar niños y adolescentes, y más particularmente mujeres.

Así como los polipéptidos y sacáridos de GBS, la composición de la invención puede además comprender antígenos. Por ejemplo, la composición puede comprender uno o más de los siguientes antígenos: -antígenos de Helicobacter pylori tales como CagA [87 a 90], VacA [91, 92], NAP [93, 94, 95], HopX (por ejemplo, 96], HopY [por ejemplo, 96] y/o ureasa. -un antígeno sacárido de N. meningitidis serogrupo A, C, W135 y/o Y, tal como el oligosacárido desvelado en la ref. 97 del serogrupo C [véase también ref. 98] o el oligosacárido de la ref. 99. -un antígeno sacárido de Streptococcus pneumoniae [por ejemplo 100, 101, 102]. -un antígeno de virus de hepatitis A, tal como virus inactivado [por ejemplo 103, 104]. -un antígeno de virus de hepatitis B, tales como los antígenos de superficie y/o núcleo [por ejemplo 104, 105]. -un antígeno de Bordetella pertussis, tal como pertussis holotoxina (PT) y hemaglutinina filamentosa (FH) de B. pertussis, opcionalmente también en combinación con pertactina y/o aglutinógenos 2 y 3 [por ejemplo, refs. 106 y 107]. -un antígeno de difteria, tal como un toxoide de difteria [por ejemplo, capítulo 3 de ref. 108], por ejemplo el mutante

CRM197 [por ejemplo 109]. -un antígeno de tétanos, tal como un toxoide de tétanos [por ejemplo, capítulo 4 de ref. 128]. -un antígeno sacárido de Haemophilus influenzae B [por ejemplo 98]. -un antígeno de virus de hepatitis C [por ejemplo 110]. -un antígeno de N. gonorrhoeae [por ejemplo 111, 112, 113, 114]. -un antígeno de Chlamydia pneumoniae [por ejemplo refs. 115 a 121]. -un antígeno de Chlamydia trachomatis [por ejemplo 122]. -un antígeno de Porphyromonas gingivalis [por ejemplo 123]. -polio antígenos [por ejemplo 124, 125] tales como OPV o preferentemente IPV. -antígenos de rabia [por ejemplo 126] tales como virus inactivado liofilizado [por ejemplo 127, RabAvert™]. -antígenos de sarampión, paperas y/o rubeola [por ejemplo, capítulos 9, 10 y 11 de ref. 128]. -antígeno(s) de influenza [por ejemplo capítulo 19 de ref. 128], tales como hemaglutinina y/o proteínas de superficie de neuraminidasa. -un antígeno de Moraxella catarrhalis [por ejemplo. 129]. -un antígeno de Streptococcus pyogenes (estreptococo grupo A) [por ejemplo 3, 130, 131]. -un antígeno de Staphylococcus aureus [por ejemplo 132]. -un antígeno de Bacillus anthracis [por ejemplo 133, 134, 135]. -un antígeno de un virus en la familia flaviviridae (género flavivirus), tal como virus de fiebre amarilla, virus de encefalitis japonesa, cuatro serotipos de virus de Dengue, virus de encefalitis transmitida por garrapata, virus del Nilo Occidental. -un antígeno pestivirus, tal como virus clásico de fiebre porcina, virus de diarrea viral bovina y/o virus de enfermedad de la frontera. -un antígeno parvovirus, por ejemplo de parvovirus B19. -una proteína de prión (por ejemplo, la proteína de prión CJD) -una proteína amiloide, tal como un péptido beta [136] -un antígeno de cáncer, tales como los enumerados en la Tabla 1 de ref. 137 o en las tablas 3 y 4 de ref. 138.

La composición puede comprender uno o más de estos antígenos adicionales.

Los antígenos tóxicos de proteína pueden purificarse donde sea necesario (por ejemplo, purificación de toxina pertussis mediante medios químicos y/o genéticos [107]).

Cuando se incluye un antígeno de difteria en la composición es también preferente incluir antígeno de tétanos y antígenos de pertussis. Similarmente, cuando se incluye un antígeno de tétanos es también preferente incluir antígenos de difteria y pertussis. Similarmente, cuando se incluye un antígeno de pertussis es también preferente incluir antígenos de difteria y tétanos. Las combinaciones DTP son por lo tanto preferentes. Los antígenos sacáridos están preferentemente en forma de conjugados. Las proteínas transportadoras para los conjugados son las mismas que las descritas anteriormente para conjugación de sacárido GBS, con CRM197 siendo preferente.

Los antígenos en la composición estarán típicamente presentes en una concentración de al menos 1 µg/ml cada no. En general, la concentración de cualquier antígeno dado será suficiente para obtener una respuesta inmune contra ese antígeno.

Como alternativa al uso de antígenos de proteína en la composición de la invención, puede usarse ácido nucleico que codifica el antígeno. Los componentes de proteína de las composiciones de la invención pueden de este modo sustituirse por ácido nucleico (preferentemente ADN, por ejemplo, en forma de un plásmido) que codifica la proteína.

Métodos para tratar pacientes

La invención proporciona combinaciones de polipéptido/sacáridos de la invención para su uso como medicamentos. El medicamento es preferentemente capaz de provocar una respuesta inmune en un animal (esto es, es una composición inmunogénica) y es más preferentemente una vacuna.

La invención también proporciona un método para provocar una respuesta inmune en un paciente, comprendiendo la administración a un paciente de una composición de la invención. La respuesta inmune es preferentemente protectora contra enfermedad de estreptococo, y puede comprender una respuesta inmune humoral y/o una respuesta inmune celular.

La invención también proporciona el uso de combinación polipéptido/sacárido de la invención en la fabricación de un medicamento para obtener una respuesta inmune en un paciente. El medicamento es preferentemente una composición inmunogénica (por ejemplo, una vacuna). El medicamento es preferentemente para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad causada por GBS (por ejemplo, meningitis, sepsis, corioamnionitis).

La invención también proporciona un kit que comprende un primer componente que comprende las

composiciones inmunogénicas de la invención. El kit puede además incluir un segundo componente que comprende uno o más de los siguientes: instrucciones, jeringa u otro dispositivo de entrega, adyuvante o solución de formulación farmacéuticamente aceptable.

La invención también proporciona un dispositivo de administración pre-rellenado con las composiciones inmunogénicas de la invención.

La invención también proporciona un método para provocar una respuesta inmune en un mamífero que comprende la etapa de administrar una cantidad efectiva de una composición de la invención. La respuesta inmune es preferentemente protectora y preferentemente implica anticuerpos yo inmunidad mediada por células. El método puede provocar una respuesta de refuerzo.

Proceso de fabricación

La invención proporciona un proceso para la preparación de una composición de la invención, que comprende la etapa de mezclar (i) uno o más antígenos de polipéptido GBS con (ii) uno o más antígenos de sacárido GBS.

El proceso puede comprender la etapa de unir covalentemente el polipéptido GBS con el sacárido GBS con el fin de formar un conjugado.

Definiciones

Los términos “que comprende” significan “que incluyen” así como “que consisten”, por ejemplo, una composición “que comprende” X puede consistir exclusivamente n X o puede incluir algo adiconal, por ejemplo X +

Y.

El término “aproximadamente” en relación con un valor numérico x significa, por ejemplo, x±10%.

La palabra “sustancialmente” no excluye “completamente”, por ejemplo, una composición que está “sustancialmente libre” de Y puede no estar completamente libre de Y. Donde sea necesario, la palabra “sustancialmente” puede omitirse de la definición de la invención.

Modos para realizar la invención

El serotipo III de GBS crece en caldo Todd-Hewitt como se describe en la referencia 36 y su polisacárido capsular se purifica. El polisacárido se despolimeriza, clasifica y purifica como se describe en la referencia 14 para dar antígeno de oligosacárido. Se usa procedimientos similares para preparar polisacáridos capsulares de otros serotipos GBS.

El oligosacárido se mezcla con o se conjuga covalentemente (directamente o por medio de un enlazador) con proteína purificada de serotipo V. Preferentemente, la proteína comprende un antígeno GBS o un fragmento del mismo seleccionado del grupo consistente en GBS 80, GBS 91, GBS 104, GBS 147, GBS 173, GBS 276, GBS 305, GBS 313, GBS 322, GBS 328, GBS 330, GBS 338, GBS 358, GBS 361, GBS 404, GBS 656, GBS 690 y GBS 691.

REFERENCIAS

[1] Schuchat (1999) Lancet 353 (9146):51-6.

[2] Tettelin et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 10.1073/pnas. 182380799.

[3] Solicitud de patente internacional WO02/34771

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<130> 002441.00084

<140> PCT/US03/29167

<141> 2003-09-15

<160> 42

35 <170> PatentIn version 3.1

<210> 1

<211> 1662

<212> ADN

<213> group B streptococcus

<400> 1

65 <210> 2

<211> 554

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Strain 80

<400> 2

<210> 3 55 <211> 1629

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 3

<211> 543

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 4

<210> 5

<211> 2670

15

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 5

25

35

45

55

<210> 6

<211> 890

<212> PRT 55 <213> group B streptococcus

<400> 6

45

<210> 7 <211> 3699 <212> DNA <213> group B streptococcus <400> 7

55

<210> 8

<211> 1233 45 <212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 8

<210> 9

<211> 2040

<212> DNA

<213> group B streptococcus 65 <400> 9

<210> 10

<211> 680

<212> PRT

15

<213> group B streptococcus

<400> 10

25

35

45

55

<210> 11

5

<211> 3402

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 11’ .

15

25

35

45

55

<210> 12

<211> 1134

5

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 12

15

25

35

45

55

<210> 13

<211> 1365

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 13

45 <210> 14

<211> 455

<212> PRT 55 <213> group B streptococcus

<400> 14

<210> 15

<211> 1020

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 15

<210> 16

<211> 340

<212> PRT

<213> group B streptococcus

45 <400> 16

<210> 17

<211> 1376

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 17

<210> 18

<211> 432

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 18

<210> 19

<211> 2070

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 19

<210> 20

<211> 690

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 20

<210> 21

<211> 1500

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 21

<210> 22

<211> 500

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (240)..(240)

<223> X is Asn or His

<400> 22

<210> 23

<211> 720

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 23

<210> 24

<211> 240

<212> PRT

<213> group B streptococcus

55 <400> 24

<210> 25

<211> 870

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 25

45

<210> 26 <211> 290 <212> PRT <213> group B streptococcus <400> 26

55

<210> 27

<211> 2193

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 27

<210> 28

<211> 731

15

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 28

25

35

45

55

<210> 29

<211> 900

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 29

<210> 30

<211> 300

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<210> 31

<211> 783

<212> DNA

<213> group B streptococcus

25 <400> 31

<210> 32

<211> 261

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 32

<210> 33

<211> 1242

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 33

55 <210> 34

<211> 414

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 34

<210> 35

<211> 930

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 35

45

<210> 36 <211> 310 <212> PRT <213> group B streptococcus <400> 36

55

<210> 37

<211> 576

<212> DNA

<213> group B streptococcus

55 <400> 37

<210> 38

<211> 192

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 38

<210> 39

<211> 924

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 39

<210> 40

<211> 307

<212> PRT

<213> group B streptococcus

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (281)..(281) 45 <223> X is Lys or Glu

<400> 40

<210> 41

<211> 1134

<212> DNA

<213> group B streptococcus

<400> 41

25

35

45

55

<210> 42

<211> 378 45 <212> PRT

<213> group B streptococcus

<400> 42

Claims (14)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una composición inmunogénica que comprende:

   a.

   uno o más antígenos de polipéptido GBS, y

   b.

   antígenos de sacárido GBS de GBS serotipos Ia, Ib y III, donde la composición comprende GBS80 o un fragmento inmunogénica del mismo.

2. 2.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 1, donde dichos antígenos de polipéptido GBS comprenden un polipéptido GBS o un fragmento inmunogénico del mismo del serogrupo II.

3. 3.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 1, donde dichos antígenos de polipéptido GBS comprenden una combinación de dos antígenos GBS o fragmentos de los mismos seleccionados del grupo consistente en (1) GBS 80 y GBS 91, (2) GBS 80 y GBS 104, (3) GBS 80 y GBS 147, (4) GBS 80 y GBS 173, (5) GBS 80 y GBS 276,

   (6) GBS 80 y GBS 305, (7) GBS 80 y GBS 313, (8) GBS 80 y GBS 322, (9) GBS 80 y GBS 328, (10) GBS 80 y GBS 330, (11) GBS 80 y GBS 338, (12) GBS 80 y GBS 358, (13) GBS 80 y GBS 361, (14) GBS 80 y GBS 404, (15) GBS 80 y GBS 656, (16) GBS 80 y GBS 690 y (17) GBS 80 y GBS 691.

4. 4.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 3, donde dicha combinación se selecciona del grupo consistente en (1) GBS 80 y GBS 338, (2) GBS 80 y GBS 361, (3) GBS 80 y GBS 305, (4) GBS 80 y GBS 328, (5) GBS 80 y GBS 690, (6) GBS 80 y GBS 691 y (7) GBS 80 y GBS 147.

5. 5.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 3, donde dicha combinación comprende GBS 80 y GBS 691.

6. 6.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 1, donde dicha composición comprende una combinación de al menos tres antígenos de polipéptido GBS.

7. 7.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 6, donde dicha combinación comprende GBS 80 y GBS 691.

8. 8.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 1, donde al menos un antígeno de polipéptido GBS está covalentemente unido al antígeno de sacárido GBS.

9. 9.

   La composición inmunogénica de la reivindicación 1, donde dicho antígeno de sacárido GBS está covalentemente unido a una proteína transportadora.

10. 10.

    La composición inmunogénica de la reivindicación 9, donde dicha proteína transportadora se selecciona del grupo consistente en toxoide tetánico, la proteína de la membrana exterior de N. meningitidis, proteína de choque térmico, proteína pertussis, proteína D de H. influenzae y toxina A o B de C. difficile.

11. 11.

    La composición inmunogénica de la reivindicación 10, donde dicha proteína transportadora se selecciona del grupo consistente en toxoide tetánico y toxoide de difteria.

12. 12.

    La composición inmunogénica de la reivindicación 11, donde dicha proteína transportadora es un toxoide de difteria.

13. 13.

    La composición inmunogénica de la reivindicación 12, donde dicha toxoide de difteria es CRM197.

14. 14.

    La composición inmunogénica de la reivindicación 1 para su uso en la provocación de una respuesta inmune.