ES2561203T3 - Método y aparato de lectura - Google Patents
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Abstract
Un método para detectar la presencia y/o cantidad de un analito en una muestra mediante la obtención de una lectura a partir de una señal compuesta representada por una zona coloreada en un elemento de ensayo, obteniéndose el color como respuesta a un analito, comprendiendo el método proporcionar como dicho elemento de ensayo un sustrato de lectura en forma de una tira absorbente que tiene al menos una zona de respuesta y al menos un marcador en dicha zona de respuesta, provocando el marcador un cambio de color como una indicación de la presencia o ausencia de dicho analito; aplicar una muestra líquida, sangre o plasma que contiene un analito, en dicha tira, con lo que se hace migrar dicha muestra por fuerzas capilares a lo largo de la tira, y experimenta una reacción en ubicaciones predefinidas de dicha tira; iluminar la tira de ensayo; grabar una imagen de dicha tira; calcular un valor de saturación (S) de color para dicha imagen utilizando al menos dos gamas de longitud de onda; en donde el valor de S se calcula como**Fórmula** utilizando el sistema "Matiz, Saturación, Valor" (HSV); en donde MAX es el valor máximo de la intensidad para las al menos dos longitudes de onda grabadas, y MIN es el mínimo; y utilizar el valor de S para determinar un resultado del ensayo mediante la comparación de los valores de S con un valor umbral G seleccionado, y correlacionar el valor de S con una cantidad física; en donde las longitudes de onda se seleccionan de manera que una longitud de onda presenta un máximo de absorción para el marcador utilizado en el ensayo y las otras longitudes de onda presentan una absorción significativamente menor para el marcador.
Description
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DESCRIPCION
Metodo y aparato de lectura
La presente invencion se refiere a un metodo para obtener una lectura fiable a partir de una senal compuesta representada por una zona coloreada de un elemento de ensayo, obteniendose el color como respuesta a un analito.
Antecedentes de la invencion
Para muchas aplicaciones de diagnostico se utiliza el color o el cambio de color como indicacion de la presencia o ausencia de un analito en una muestra analltica biologica tal como sangre (suero, plasma, sangre entera), saliva, fluido lagrimal, orina, llquido cefalorraquldeo, sudor, etc.
En aplicaciones cercanas al paciente (denominadas en ingles "Point-of-Care", abreviado "PoC", literalmente "en el punto de cuidados"), donde es deseable obtener una lectura rapida de un analisis, es esencial que la lectura sea clara e inequlvoca. Existen muchas aplicaciones comercialmente disponibles que se basan en simples tiras de ensayo sobre las que se aplica una muestra, tras de lo cual la migracion de la muestra en la tira pone a los analitos en contacto con un reactivo, siendo la respuesta un color en el caso de una reaccion positiva, es decir, presencia del analito en cuestion.
En el documento US-7,560,288 (Home Diagnostics, Inc.) se describe un ejemplo de estos dispositivos de la tecnica anterior. Se reivindica que se trata de una tira multicapa de ensayo diagnostico sanitario mejorada, destinada a recibir un fluido heterogeneo, por ejemplo sangre entera, para determinar la presencia y/o cantidad de un presunto analito en el fluido gracias a facilitar un cambio de color de la tira que corresponde a la cantidad del analito en el fluido. La tira de ensayo mejorada comprende no mas de dos capas operativas y una membrana de reaccion que contiene un reactivo capaz de reaccionar con el analito de interes para producir un cambio medible en dicha membrana. Tambien comprende una capa superior de soporte que define una abertura receptora de muestra para recibir en ella la muestra de fluido, una o mas estructuras para dirigir la muestra que contiene el analito de interes a traves de al menos una parte de dicha membrana de reaccion, y una capa inferior de soporte que tiene una abertura para observar la reaccion.
No hace falta decir que la respuesta es mejor cuanto mas fiable, es decir, mas clara e inequlvoca. A veces, una prueba es de naturaleza binaria, como en el caso de una prueba de embarazo, donde solo puede darse un resultado positivo o uno negativo. Por el contrario, para pruebas tales como pruebas de alergia puede darse una gama de niveles de respuesta en funcion del nivel de concentracion de anticuerpos en el suero del paciente.
Un marcador comun para el uso en, por ejemplo, pruebas de alergia o autoinmunitarias es el llamado conjugado de oro, que comprende una partlcula coloidal de oro con un tamano del orden de nanometros, a la cual esta acoplada ("conjugada") una protelna (anticuerpo o antlgeno). El conjugado da lugar a cierta senal detectable cuando, durante el ensayo, se acopla al mismo el analito deseado.
Con algunas muestras en las que normalmente se obtiene una clara indicacion de color si hay una respuesta positiva, puede suceder a veces que otras especies presentes (con frecuencia los mismos alergenos) originan llneas grises que pueden ser diflciles de distinguir de llneas de color rosa. Esto "desdibuja" la verdadera senal. Por tanto, se pueden obtener resultados positivos falsos o negativos falsos, lo que naturalmente puede tener consecuencias si la prueba se utiliza para constituir la base de un regimen de tratamiento.
El artlculo "Cluster analysis and display of genome-wide expression patterns", por Eisen et al. en Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 95, 1998, pags. 14863-14868, describe la medicion de una matriz de ADN utilizando una muestra de referencia con una marca fluorescente y una muestra experimental con otra marca fluorescente de diferente longitud de onda, utilizando mas de una longitud de onda para la medicion. En particular, el calculo del cociente entre las senales a diferente longitud de onda se utiliza como uno de los pasos en el calculo matematico de los resultados. Por tanto, los resultados se basan en el cociente entre las senales de las muestras para cada celda de la matriz de ADN.
Compendio de la invencion
El objeto de la presente invencion es proporcionar un metodo y uso de un dispositivo en dicho metodo para proporcionar lectura fiable de sistemas anallticos del tipo discutido en el preambulo, es decir, que eliminen el problema de lecturas erroneas.
Este objeto se consigue en un primer aspecto con el metodo que se define en la reivindicacion 1.
En un segundo aspecto, la invencion proporciona un sistema de lectura como se define en la reivindicacion 7, que comprende un dispositivo de iluminacion capaz de proporcionar al menos luz de dos distintas longitudes de onda, un dispositivo de captura de imagen en color y una unidad de control para calcular un valor de saturacion (S) de color en imagenes grabadas por el dispositivo de captura de imagen en color.
La principal ventaja de la presente invencion es que no se necesita personal especializado o especialmente formado
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para realizar lecturas del ensayo.
El alcance adicional de aplicabilidad de la presente invencion sera evidente a partir de la descripcion detallada que se expone en lo que sigue y los dibujos adjuntos, que se ofrecen solamente a modo de ilustracion y por lo tanto no deben considerarse limitantes de la presente invencion, y en los cuales
la Figura 1 ilustra esquematicamente una primera realization de una configuration de lectura segun la invencion; la Figura 2 ilustra esquematicamente una segunda realizacion de una configuracion de lectura segun la invencion; la Figura 3 es un grafico de una comparacion entre dos "lectores visuales" experimentados; y la Figura 4 es un grafico de “Lector visual” frente a “Lector automatizado" segun la invencion.
Descripcion detallada de realizaciones preferidas
Primeramente se ofrecera un breve repaso de distintos sistemas de color (espacios de color).
El modelo de color RGB es un modelo aditivo en el que se combinan de distintas maneras rojo, verde y azul (utilizados frecuentemente en modelos de iluminacion aditiva) para reproducir otros colores. El nombre del modelo y su abreviatura RGB proviene de los nombres en ingles ("Red", "Green", "Blue") de los tres colores primarios, es decir, respectivamente rojo, verde y azul. Estos tres colores no deben confundirse con los pigmentos primarios de rojo, azul y amarillo, conocidos en el mundo artlstico como "colores primarios".
En si mismo, el modelo de color RGB no define que se entiende por "rojo", "verde" o "azul", y el resultado de mezclarlos no es exacto a menos que se defina la composition espectral exacta del rojo, verde y azul primarios.
El modelo HSV (siglas del ingles "Hue, Saturation, Value", es decir, "Matiz, Saturation, Valor"), tambien conocido como HSB ("Hue, Saturation, Brightness", es decir, "Matiz, Saturacion, Brillo"), define un espacio de color en terminos de tres componentes constitutivos:
Matiz, el tipo de color (por ejemplo, rojo, azul o amarillo): varla entre 0-360° (aunque se normaliza a 0-100% en algunas aplicaciones)
Saturacion, la "vitalidad" del color: varla entre 0-100%. Tambien denominada a veces "pureza", por analogla con las magnitudes colorimetricas de pureza de excitation y pureza colorimetrica. Cuanto menor sea la saturacion de un color, mas "grisura" habra y mas desvaldo parecera el color, por lo que es util definir la desaturacion como el inverso cualitativo de la saturacion.
Valor, el brillo del color: varla entre 0-100%.
El modelo HSV es una transformation no lineal del espacio de color RGB, y puede utilizarse en progresiones de color. Tengase en cuenta que HSV y HSB son lo mismo, pero HSL es distinto.
El espacio de color HSL, tambien denominado HLS o HSI, recibe su nombre de las siglas del ingles "Hue, Saturation, Lightness (tambien Luminance o Luminosity) / Intensity", es decir, "Matiz, Saturacion, Claridad (tambien Luminancia o Luminosidad) / Intensidad". Mientras que el modelo HSV (Matiz, Saturacion, Valor) se puede ver graficamente como un cono o piramide hexagonal de color, el modelo HSL se puede representar como un doble cono o doble piramide hexagonal, y tambien como una esfera. Ambos sistemas son deformaciones no lineales del cubo de color RGB.
La definition del modelo de color HSV no es independiente del dispositivo. El modelo HSV se define unicamente en relation con las intensidades RGB - sin definiciones flsicas de sus cromaticidades y punto blanco. Para una representation precisa e independiente del dispositivo, se debe usar el modelo CIE L*a*b u otro modelo de color basado en el metodo CIE.
En los distintos programas de software se suele presentar al usuario un modelo (HSV o HSL) de color basado en el matiz, en forma de un selector lineal o circular de matiz y una superficie bidimensional (por lo general un cuadrado o un triangulo), donde se puede elegir la saturacion y el valor o luminosidad para el matiz seleccionado. Con esta representacion, la diferencia entre HSV y HSL es irrelevante. Sin embargo, muchos programas tambien permiten seleccionar un color a traves de cursores lineales o campos de entrada numerica, y para ese tipo de control se utiliza habitualmente HSL o HSV (pero no ambos). Tradicionalmente es mas comun el HSV.
La presente invencion emplea la notion de saturacion de color, y se utiliza el modelo HSV para analizar una imagen. La invencion es aplicable en general al analisis de “manchas” coloreadas en tiras de ensayo, por ejemplo, y se pasa a describir en lo que sigue, ejemplificada por dos realizaciones.
La presente invencion tiene utilidad particular para los denominados dispositivos anallticos cercanos al paciente (denominados en ingles "Point-of-Care", abreviado "PoC", literalmente "en el punto de cuidados"), para la detection de alergias. Tales dispositivos anallticos consisten tlpicamente en una carcasa de plastico que tiene dispuesta en la misma una tira absorbente (porosa) que queda al descubierto a traves de una ventana de la carcasa. Se coloca en un pocillo para muestra una muestra llquida (por ejemplo, sangre, plasma o cualquier otro llquido adecuado), y se le hace migrar por fuerzas capilares a lo largo de la tira, donde se encuentra y reacciona con alergenos en ubicaciones
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predefinidas, por lo comun estrechas ilneas transversales que cruzan la tira. Tambien se provee un reactivo que provoca un cambio de color a fin de que la reaccion se haga visible.
Para determinar la posicion de la ventana se podrlan utilizar coordenadas fijas para dicha ventana. Sin embargo, esto plantea requisitos muy elevados en cuanto a la precision mecanica del dispositivo de lectura y del dispositivo analltico.
Como alternativa, y preferiblemente, se pueden utilizar metodos de tratamiento de imagen para localizar la posicion de la ventana.
En las Figuras, a elementos que son comunes a ambas realizaciones se les ha asignado el mismo numero de referencia.
En las Figuras 1 y 2 se representa una configuracion o aparato de deteccion para obtener una lectura de un dispositivo analltico segun la invencion, mostrando, cada una, una realizacion respectiva de ello.
El sistema de lectura, designado en general con el numero 10, comprende segun la primera realizacion de la invencion mostrada en la Figura 1 una o mas (se muestran dos) fuentes 12 de luz blanca, un sensor 14 de imagen, convenientemente una camara digital (aunque por supuesto tambien son posibles otros tipos de sensor de imagen), una unidad 16 de filtro que comprende al menos dos filtros seleccionables para distintas longitudes de onda. La unidad de filtro puede estar integrada en el sensor de imagen (la camara) o bien se puede disponer por separado. Tambien se muestra en la Figura 1 la tira 17 de ensayo con su zona 18 de deteccion.
En esta primera realizacion, se ilumina la zona 18 de deteccion de la tira de ensayo, como indican las flechas, y se hace pasar a traves de un filtro la luz reflejada desde la zona de deteccion, tambien indicada con flechas, y se graba la imagen resultante. Se graba una imagen por cada filtro utilizado, con el fin de obtener dos imagenes con diferente saturacion de color.
En la segunda realizacion del sistema 10 de lectura segun la invencion, mostrada en la Figura 2, no existe unidad de filtro. En su lugar se utilizan dos fuentes luminosas 21, 22 de diferente longitud de onda, y se graba una imagen por cada longitud de onda.
La eleccion de las longitudes de onda depende del marcador utilizado, y deberlan seleccionarse de manera que una longitud de onda A1 sea una que presente maxima absorcion por el marcador utilizado. La otra longitud de onda A2 (en el caso de dos marcadores) debe presentar una baja absorcion por el marcador, pero situarse relativamente cerca de la primera longitud de onda, convenientemente a no mas de 300 nm de la primera longitud de onda, es decir, A2 esta dentro del intervalo A1 ± 300 nm, preferiblemente a no mas de 100 nm de la primera longitud de onda, es decir, A 2 esta dentro del intervalo A1 ± 100 nm.
Para el tratamiento y evaluacion de la imagen grabada se provee una unidad de control, por ejemplo un ordenador personal o una unidad de control dedicada en forma de un microprocesador 19. La unidad de control esta programada para realizar un calculo de un valor de saturacion (S) de la imagen grabada.
En general, el metodo segun la invencion comprende grabar una o mas imagenes de la zona 18 de respuesta del dispositivo analltico 17. Despues se calcula un valor de saturacion (S) de color para dichas imagenes, utilizando al menos dos colores (longitudes de onda) distintos. Finalmente, se utiliza el valor de S para determinar un resultado del analisis.
Para evaluar las imagenes grabadas se puede utilizar un metodo basado en el sistema de color HSV, que se ha discutido mas arriba.
En particular, el valor de S viene dado por
MAX - MIN MIN
S =------------------= 1-----------
MAX MAX
utilizando el sistema HSV; en donde MAX es el valor maximo de la intensidad para las dos longitudes de onda grabadas, y MIN es el mlnimo.
En una realizacion especlfica del sistema de lectura, la formula para calcular S se puede simplificar a S = 1 - Verde/Rojo
Esto es posible en caso de que se sepa en que gama de matiz estaran las llneas de respuesta que contienen conjugado de oro y que tambien se sepa en que gama de matiz y saturacion estara el fondo.
En esta formula, "Verde" es el valor del canal verde en un sistema de color RGB y “Rojo" es el valor del canal rojo en ese sistema de color RGB.
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En particular, para que esta simplification sea valida, el matiz debe cumplir con el requisito de 300° < Matiz < 60°.
En un ensayo del tipo al que se refiere la presente invention pueden presentarse varias causas de error. Existen tres causas principales de error, a saber:
1) flujo insuficiente de plasma sobre la tira - valores pico mas bajos
2) flujo insuficiente de conjugado - valores pico mas bajos
3) lavado insatisfactorio - fondo mas alto
Estos fenomenos pueden adquirir, en particular, distinta magnitud a lo largo de la tira, es decir, daran lugar a un grado variable de reaction en las zonas con alergeno, originando as! una intensidad de color variable a lo largo de la tira.
Tambien pueden producirse en la direction del flujo sobre la tira bandas de colores interfirientes, lo que hara que el fondo sea demasiado alto. La causa de dichas bandas puede ser la presencia de conjugado que haya quedado en la matriz debido a un lavado insuficiente.
Sin embargo, todos estos posibles errores provocaran un descenso en los valores de color de las llneas de ensayo reales, lo que se puede utilizar ventajosamente.
En concreto, para abordar los susodichos posibles errores, cuando se ha determinado la position exacta de la ventana de la tira y se ha convertido la imagen a una imagen de saturation de color, se subdivide la imagen de la tira en la zona de respuesta en diversas sub-tiras. El numero de sub-tiras puede variar desde unas pocas hasta, por ejemplo, 20 o 30. Convenientemente, el numero de tiras es 5-25, mas preferiblemente 8-20, lo mas preferido 10-15. En una realization practica se han utilizado 13 tiras.
Para cada sub-tira se determinan valores pico para todas las llneas de alergeno del ensayo, junto con valores de fondo. Se calcula para cada llnea y banda la diferencia entre pico y fondo. Se comparan todas las sub-tiras y se elige como valor "verdadero" para esa llnea el valor mas alto de una llnea respectiva.
La invencion es aplicable a cualquier tipo de dispositivo analltico que proporcione una respuesta visible (coloreada). Preferiblemente, el dispositivo analltico comprende una tira de ensayo en la que una muestra puede migrar desde un punto de aplicacion de la muestra, pasando por una zona de reaccion, hasta una zona de detection en la cual la respuesta coloreada es visible como una mancha o una banda. Son posibles otros tipos de ensayo, siempre que den como resultado una entidad coloreada que pueda ser grabada como una imagen, o cuya saturacion de color se pueda medir.
En particular, se puede utilizar para evaluar la presencia o ausencia de un analito en una muestra analltica biologica tal como sangre (suero, plasma, sangre entera), saliva, fluido lagrimal, orina, llquido cefalorraquldeo, sudor, etc.
La invencion tambien es aplicable, por supuesto, a otros tipos de muestras, tales como soluciones de fermentation, mezclas de reaccion, etc. Sin embargo, la muestra es, en particular, un suero sin diluir o una muestra de sangre entera.
El marcador que se utiliza en el ensayo podrla ser en principio cualquier tipo de marcador que proporcione una respuesta coloreada. Preferiblemente, el marcador es un conjugado de oro. El marcador esta inmovilizado en una zona de deteccion de una tira reactiva y, cuando un analito migra a lo largo de la tira y entra en contacto con el marcador, se produce un cambio de color.
Ejemplos
En los ejemplos que siguen se empleo una configuration consistente en una camara Canon EOS 350D como sensor de imagen. Proporciono la iluminacion una lampara de diodo electroluminiscente (LED) Luxeon Star LXHL-LW3C que emite luz blanca. Se utilizaron dos filtros, uno que trabajaba a 530 nm y el otro a 610 nm (los filtros verde y rojo del sensor de imagen de la Canon 350D).
El dispositivo analltico fue un analisis PoC de alergia (ImmunoCAP Rapid Wheeze/Rhinitis Child).
Ejemplo 1
Se aplicaron en tiras de ensayo PoC una pluralidad de muestras procedentes de distintos pacientes con sospecha de padecer alergia al polen de abedul, y se generaron lecturas visuales.
Se entregaron las lecturas a un panel de personas (A, B, C, D) de prueba para su evaluation visual, y los resultados se exponen en la Tabla 1 a continuation.
Se analizaron las mismas tiras de ensayo con una configuracion segun la invencion, y el resultado fue una lectura inequlvoca. En la Tabla se ofrece el resultado como comparacion con las evaluaciones visuales.
Ejemplo 2
La Figura 3 es un grafico que muestra una comparacion entre dos "lectores visuales" experimentados que evaluan los mismos dispositivos analiticos, donde las lecturas se realizan en una escala de 0-12, y cada dispositivo tiene 12 manchas. La lectura del "Lector visual 1" se representa graficamente frente a la lectura del mismo dispositivo 5 analitico por el “Lector visual 2". Para presentar los valores visuales (numeros enteros), se ha anadido ruido para diseminar los valores, al objeto de mostrar la densidad de lectura en distintas zonas del diagrama. Esta figura ilustra claramente el grado de incertidumbre de las lecturas visuales, y evidencia la necesidad de metodos y medios para obtener lecturas mas consistentes con el fin de evitar interpretaciones erroneas.
Ejemplo 3
10 La Figura 4 es un grafico que muestra lecturas realizadas por el dispositivo segun la invencion representadas frente a lecturas realizadas por un “lector visual” experimentado.
La Tabla siguiente muestra promedios de aproximadamente 1.000 lecturas (de la Figura 3) de un lector visual y de un lector automatizado segun la invencion. La Tabla muestra el valor medio del Lector automatizado (LA) segun la invencion para cada una de las lecturas visuales (LV) con valores enteros de 0 a 11.
- LV
- 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
- LA
- 0,22 0,93 2,08 2,95 3,94 4,79 5,81 6,44 7,42 8,43 9,56 10,98
15
Esto indica que el metodo y el dispositivo segun la invencion son comparables a lectores visuales experimentados.
Claims (9)
- 5101520253035404550REIVINDICACIONES1. Un metodo para detectar la presencia y/o cantidad de un analito en una muestra mediante la obtencion de una lectura a partir de una senal compuesta representada por una zona coloreada en un elemento de ensayo, obteniendose el color como respuesta a un analito, comprendiendo el metodoproporcionar como dicho elemento de ensayo un sustrato de lectura en forma de una tira absorbente que tiene al menos una zona de respuesta y al menos un marcador en dicha zona de respuesta, provocando el marcador un cambio de color como una indication de la presencia o ausencia de dicho analito;aplicar una muestra llquida, sangre o plasma que contiene un analito, en dicha tira, con lo que se hace migrar dicha muestra por fuerzas capilares a lo largo de la tira, y experimenta una reaction en ubicaciones predefinidas de dicha tira;iluminar la tira de ensayo; grabar una imagen de dicha tira;calcular un valor de saturation (S) de color para dicha imagen utilizando al menos dos gamas de longitud de onda; en donde el valor de S se calcula comoMAX - MIN MINS =------------------= 1-----------MAX MAXutilizando el sistema "Matiz, Saturacion, Valor" (HSV); en donde MAX es el valor maximo de la intensidad para las al menos dos longitudes de onda grabadas, y MIN es el mlnimo; yutilizar el valor de S para determinar un resultado del ensayo mediante la comparacion de los valores de S con un valor umbral G seleccionado, y correlacionar el valor de S con una cantidad flsica; en dondelas longitudes de onda se seleccionan de manera que una longitud de onda presenta un maximo de absorcion para el marcador utilizado en el ensayo y las otras longitudes de onda presentan una absorcion significativamente menor para el marcador.
- 2. El metodo segun la reivindicacion 1, en donde se utilizan dos longitudes de onda.
- 3. El metodo segun la reivindicacion 1, en donde el marcador es un conjugado de oro.
- 4. El metodo segun la reivindicacion 3, en donde la imagen de la zona de respuesta se subdivide en un numero de sub-tiras.
- 5. El metodo segun la reivindicacion 4, en donde el numero de sub-tiras esta entre 20 y 30, convenientemente el numero de tiras es 5-25, mas preferiblemente 8-20, lo mas preferido 10-15.
- 6. El metodo segun la reivindicacion 3 o 4, en donde se determinan valores pico para cada sub-tira y para todas las respuestas junto con valores de fondo, se calcula la diferencia entre pico y fondo para cada respuesta y tira, y se comparan todas las sub-tiras y se elige como valor "verdadero" para esa respuesta el valor maximo para una respuesta respectiva.
- 7. Uso de un sistema (10) de lectura para un dispositivo analltico (17, 18) de alergia, cercano al paciente, con el fin de detectar la presencia y/o la cantidad de un analito segun el metodo de la reivindicacion 1 mediante el uso de cambio de color en un elemento de ensayo como una indicacion de la presencia o ausencia de un analito, comprendiendo el sistemaun dispositivo (12; 21,22) de iluminacion capaz de proporcionar al menos dos distintas longitudes de onda de luz; un dispositivo (14) de captura de imagen en color;una unidad (19) de control para calcular un valor de saturacion (S) de color en imagenes grabadas por el dispositivo de captura de imagen en color, estando adaptada la unidad de control para calcular el valor de S comoMAX - MIN MINS =------------------= 1-----------MAX MAXutilizando el sistema HSV; en donde MAX es el valor maximo de la intensidad para las al menos dos longitudes de onda grabadas, y MIN es el mlnimo.
- 8. El uso del sistema de lectura segun la reivindicacion 7, en donde el dispositivo de iluminacion comprende al menos dos fuentes luminosas (21, 22) que proporcionan luz de distinta longitud de onda.
- 9. El uso del sistema de lectura segun la reivindicacion 7, en donde el dispositivo de iluminacion comprende una fuente de luz blanca y al menos dos filtros para eliminar por filtrado longitudes de onda seleccionadas de una imagen.
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