ES2233599T3 - Tratamiento de ulceras diabeticas. - Google Patents

Abstract

El uso de un inhibidor de PDE5 de cGMP para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de úlceras diabéticas.

Description

Tratamiento de úlceras diabéticas.

Esta invención se refiere al uso de inhibidores de 3',5'-monofosfato de guanosina cíclico de tipo cinco (PDE5 de cGMP), incluyendo en particular al compuesto sildenafilo, para el tratamiento de úlceras diabéticas incluyendo en particular el tratamiento de úlceras dérmicas crónicas tales como úlceras del pie diabéticas.

La diabetes es una grave enfermedad crónica. La extensión global de diabetes en 1996 de 120 millones se predice que se más que duplicará a 250 millones en el año 2025 debido al aumento de la edad, obesidad, estilo de vida sedentario y esquemas de dieta cambiantes.

Aunque muchas complicaciones graves y costosas afectan a los individuos con diabetes, tales como enfermedades cardiacas, insuficiencia renal y ceguera, las complicaciones de los pies se llevan la mayor parte: el 40-70% de todas las amputaciones de extremidades inferiores están relacionadas con diabetes mellitus. Es más, el 85% de todas las amputaciones de extremidades inferiores relacionadas con la diabetes están precedidas de una úlcera del pie.

Los pacientes con diabetes mellitus se sabe que tienen un riesgo aumentado de desarrollar úlceras dérmicas crónicas tales como una úlcera en el pie con presencia de complicaciones establecidas a largo plazo de la enfermedad. La ulceración aparece como resultado de función nerviosa dañada (neuropatía) y/o en presencia de isquemia.

La isquemia tisular local es el factor contribuyente mayoritario de la ulceración diabética. De la misma manera que en la enfermedad de los vasos grandes, los pacientes con diabetes sufren un riesgo adicional para su perfusión dérmica por la implicación de las arterias no conductoras en el proceso de la aterosclerosis y, quizás más importante, por el daño de los mecanismos de control microcirculatorio, la llamada enfermedad de los vasos pequeños. En circunstancias normales, el flujo sanguíneo aumenta en respuesta a heridas para facilitar la curación. En presencia de enfermedad de los vasos pequeños (e isquemia) esta respuesta se suprime significativamente y esto, junto con la tendencia a la trombosis en la microcirculación durante un flujo reducido, es probablamente importante en la patogénesis de la úlcera.

La neuropatía es también una complicación importante de la diabetes mellitus, sin una terapia bien establecida para su tratamiento sintomático o para la prevención del declive progresivo de la función nerviosa. Las estimaciones de la extensión de la neuropatía en diabetes varían ampliamente (de 5 a 80%) debido a la amplia variedad de definiciones y descripciones clínicas de neuropatía. Sin embargo, se han registrado tasas de extensión del orden del 20% en estudios tanto de base hospitalaria como comunitaria en el Reino Unido.

El efecto de la neuropatía es complejo. Sin embargo, a la pérdida de información sensorial del pie contribuye indudablemente una presión anormal y prolongada sobre las zonas del pie (neuropatía sensorial). La neuropatía motora produce deformidad, aumentando además la carga de presión. En la neuropatía autónoma, la pérdida de renovación de las glandulas sudoríparas da como resultado una piel seca que se cuartea, permitiendo focos para la infección. La disfunción autónoma contribuye además a alterar la distribución del flujo sanguíneo microcirculatorio, dirigiendo el flujo sanguíneo a través de derivaciones y fuera de los capilares dérmicos nutritivos. Es la interacción de esos factores y el trauma en el pie lo que da como resultado la descomposición dérmica.

El mecanismo que conduce al daño nervioso en la diabetes no está aún resuelto, pero es casi con certeza multifactorial, estando implicadas predisposición genética, anormalidades metabólicas y vasculares y falta de perturbación de los factores de crecimiento. La respuesta del sistema nervioso periférico ante los ataques metabólicos recibidos en la diabetes no parece diferir entre la diabetes de tipo 1 y de tipo 2, sugiriendo la probabilidad de una respuesta clínica similar ante las terapias en las dos formas primarias de la enfermedad. Parece haber una serie de factores de susceptibilidad, desconocidos hasta ahora, para el desarrollo de la neuropatía, que operan en presencia de hiperglucemia.

La invención proporciona también el uso de un inhibidor de PDE5 de cGMP para la fabricación de una composición para el tratamiento de úlceras diabéticas.

La invención es de valor particular para tratar pacientes con ulceración del pie diabética.

Los inhibidores de PDE5 de cGMP adecuados para el uso según la presente invención incluyen:

las pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-onas descritas en el documento EP-A-0463745, las pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-onas descritas en el documento EP-A-0526004, las pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-onas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 93/06104, las pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-onas isoméricas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 93/07149, las quinazolin-4-onas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 93/12095, las pirido[3,2-d]pirimidin-4-onas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 94/05661, las purin-6-onas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 94/00453, las pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-onas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 98/49166, las pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-onas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 99/5433, las pirazolo[4,3-d]pirimidin-4-onas descritas en el documento EP-A-0995751, las pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-onas descritas en la publicación de solicitud de patente internacional WO 00/24745, las pirazolo[4,3-d]pirimidin-4-onas descritas en el documento EP-A-0995750, los compuestos descritos en la publicación de solicitud de patente internacional WO95/19978, los compuestos descritos en la publicación de solicitud de patente internacional WO 99/24433 y los compuestos descritos en la publicación de solicitud de patente internacional WO 93/07124.

Se debe entender que los contenidos de las publicaciones de solicitud de patente anteriores, y en particular las fórmulas generales y compuestos ilustrativos de éstas, se incorporan a la presente en su totalidad por referencia a éstas.

Los inhibidores de fosfodiesterasa de tipo V preferidos para el uso según la presente invención incluyen:

5-[2-etoxi-5-(4-metil-1-piperazinilsulfonil)fenil]-1-metil-3-n-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona(sildenafilo) también conocido como 1-[[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-4-etoxifenil]sulfonil]-4-metilpiperazina (véase el documento EP-A-0463756),

5-(2-etoxi-5-morfolinacetilfenil)-1-metil-3-n-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el documento EP-A-0526004),

3-etil-5-[5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)-2-n-propoxifenil]-2-(piridin-2-il)metil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el documento WO 98/49166),

3-etil-5-[5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)-2-(2-metoxietoxi)piridin-3-il]-2-(piridin-2-il)metil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el documento WO 99/5433),

(+)-3-etil-5-[5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)-2-(2-metoxi-1(R)-metiletoxi)piridin-3-il]-2-metil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona, también conocida como 3-etil-5-{5-[4-etilpiperazin-1-ilsulfonil]-2-([(1R)-2-metoxi-1-metiletil]oxi)piridin-3-il}-2-metil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el documento WO 99/
54333),

5-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-[2-metoxietil]-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona, también conocida como 1-{6-etoxi-5-[3-etil-6,7-dihidro-2-(2-metoxietil)-7-oxo-2H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il]-3-piridilsulfonil}-4-etilpiperazina (véase el ejemplo 1 a continuación),

5-[2-iso-butoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-(1-metilpiperidin-4-il)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el ejemplo 2 a continuación),

\text{++} 5-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-fenil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el ejemplo 3 a continuación),

5-(5-acetil-2-propoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-isopropil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el ejemplo 4 a continuación),

5-(5-acetil-2-butoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-etil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (véase el ejemplo 5 a continuación),

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahidro-2-metil-6-(3,4-metilendioxifenil)pirazino[2',1':6,1]pirido[3,4-b]indol-1,4-diona (IC-351), es decir, el compuesto de los ejemplos 78 y 95 de la publicación de solicitud de patente internacional WO 95/19978, así como el compuesto de los ejemplos 1, 3, 7 y 8,

2-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-il-1-sulfonil)fenil]-5-metil-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona (Vardenafil) también conocido como 1-[[3-(3,4-dihidro-5-metil-4-oxo-7-propilimidazo[5,1-f]astriazin-2-il)-4-etoxifenil]sulfonil]-4-etilpiperazina, es decir, el compuesto de los ejemplos 20, 19, 337 y 336 de la publicación de solicitud de patente internacional WO 99/2443, y

el compuesto del ejemplo 11 de la publicación de solicitud de patente internacional WO 93/07124 (EISAI), y

los compuestos 3 y 14 de Rotella, D.P., J. Med. Chem., 2000, 43, 1257.

Otros tipos de inhibidores de PDE5 de cGMP útiles junto con la presente invención incluyen: 4-bromo-5-(piridilmetilamino)-6-[3-(4-clorofenil)propoxi]-3(2H)piridazinona, sal monosódica del ácido 1-[4-[(1,3-benzodioxol-5-ilmetil)amino]-6-cloro-2-quinozolinil]-4-piperidincarboxílico, (+)-cis-5,6a,7,9,9,9a-hexahidro-2-[4-(trifluorometil)fenilmetil-5-metil-ciclopent-[4,5]imidazo[2,1-b]purin-4(3H)ona, furazlocilina, cis-2-hexil-5-metil-3,4,5,6a,7,8,9,9a-octahidrociclopent[4,5]-imidazo[2,1-b]purin-4-ona, 3-acetil-1-(2-clorobencil)-2-propilindol-6-carboxilato, 3-acetil-1-(2-clorobencil)-2-propilindol-6-carboxilato, 4-bromo-5-(3-piridilmetilamino)-6-(3-(4-clorofenil)propoxi)-3-(2H)piridazinona, 1-metil-5-(5-morfolinoacetil-2-n-propoxifenil)-3-n-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona, sal monosódica del ácido 1-[4-[(1,3-benzodioxol-5-ilmetil)amino]-6-cloro-2-quinazolinil]-4-piperidincarboxílico, Pharmaprojects nº 4516 (Glaxo Wellcome), Pharmaprojects nº 5051 (Bayer), Pharmaprojects nº 5064 (Kyowa Hakko, véase el documento WO 96/26940), Pharmaprojects nº 5069 (Schering Plough), GF-196960 (Glaxo Wellcome), E-8010 y E-4010 (Eisai), Bay-38-3045 y 38-9456 (Bayer) y Sch-51866.

La idoneidad de cualquier inhibidor de PDE5 de cGMP particular puede determinarse fácilmente mediante la evaluación de su potencia y selectividad utilizando los procedimientos de la bibliografía, seguida de la evaluación de su toxicidad, absorción, metabolismo, farmacocinética, etc. según la práctica farmacéutica estándar.

Preferiblemente, los inhibidores de PDE5 de cGMP tienen un IC50 para PDE5 inferior a 100 nM, más preferiblemente inferior a 50 nM, más preferiblemente todavía inferior a 10 nM.

Los valores de IC50 para los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden determinarse utilizando la metodología establecida en la bibliografía, por ejemplo como se describe en los documentos EP0463756-B1 y EP0526004-A1.

Preferiblemente, los inhibidores de PDE5 de cGMP utilizados en la invención son selectivos para la enzima PDE5. Preferiblemente son selectivos frente a PDE3, más preferiblemente frente a PDE3 y PDE4. Preferiblemente los inhibidores de PDE5 de cGMP de la invención tienen una relación de selectividad superior a 100, más preferiblemente superior a 300, frente a PDE3, y más preferiblemente frente a PDE3 y PDE4.

Las relaciones de selectividad pueden determinarse fácilmente por el experto en la técnica. Los valores de IC50 para la enzima PDE3 y PDE4 pueden determinarse utilizando la metodología establecida en la bibliografía, véase S.A. Ballard et al., Journal of Urology, 1998, vol. 159, páginas 2164-2171.

Preferiblemente, el inhibidor de PDE5 de cGMP es sildenafilo.

Los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden administrarse solos, pero en terapia humana, se administrarán generalmente mezclados con un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable con respecto a la vía de administración pretendida y a la práctica farmacéutica estándar.

Por ejemplo, los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden administrarse por vía oral, bucal o sublingual en forma de comprimidos, cápsulas, óvulos, elixires, soluciones o suspensiones, que pueden contener agentes aromatizantes o colorantes, para una administración de liberación inmediata, retardada, modificada o controlada.

Sorprendentemente, los inhibidores de PDE5 tratan las úlceras diabéticas sistémicamente. Consiguientemente, la administración oral es una vía preferida.

Dichos comprimidos pueden contener excipientes tales como celulosa microcristalina, lactosa, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato de calcio dibásico y glicina, disgregantes tales como almidón (preferiblemente almidón de maíz, de patata o de tapioca), glicolato de almidón de sodio, croscarmelosa de sodio y ciertos silicatos complejos, y ligantes de granulación tales como polivinilpirrolidina, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, sucrosa, gelatina y goma arábiga. Además, pueden incluirse agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico, behenato de glicerilo y talco.

También pueden emplearse composiciones sólidas de tipo similar como cargas de cápsulas de gelatina. Los excipientes preferidos a este respecto incluyen lactosa, almidón, una celulosa, azúcar de la leche o polietilenglicoles de alto peso molecular. Para las suspensiones acuosas y/o elixires, los inhibidores de PDE5 de cGMP de la invención pueden combinarse con diversos agentes edulcorantes o aromatizantes, material colorante o tintes, con agentes emulsionantes y/o de suspensión y con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol y glicerina, y combinaciones de éstos.

Los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden administrarse también por vía parenteral, por ejemplo por vía intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular o subcutánea, o pueden administrarse mediante técnicas de infusión. Para dicha administración parenteral se utilizan preferiblemente en forma de una solución acuosa estéril que puede contener otras sustancias, por ejemplo sales o glucosa suficiente para hacer la solución isotónica con la sangre. Las soluciones acuosas deben estar adecuadamente tamponadas (preferiblemente a un pH de 3 a 9), si es necesario. La preparación de las formulaciones parenterales adecuadas en condiciones estériles se realiza fácilmente mediante técnicas farmacéuticas estándares bien conocidas para los expertos en la técnica.

La dosificación del inhibidor de PDE5 de cGMP en dichas formulaciones dependerá de su potencia, pero puede esperarse que esté en el intervalo de 1 a 500 mg para la administración hasta tres veces al día. Para la administración oral y parenteral a pacientes humanos, el nivel de dosificación diario del inhibidor de PDE5 de cGMP será habitualmente de 5 a 500 mg (en dosis sencilla o divididas). En el caso de sildenafilo, la dosis preferida está en el intervalo de 10 a 100 mg (por ejemplo 10, 25, 50 y 100 mg), que puede administrarse una vez, dos veces o tres veces al día (preferiblemente una vez). Sin embargo, la dosis precisa será como determine el médico a cargo y dependerá de la edad y del peso del paciente y de la gravedad de los síntomas.

Así, por ejemplo, los comprimidos o cápsulas del inhibidor de PDE5 de cGMP pueden contener de 5 a 250 mg (por ejemplo de 10 a 100 mg) de compuesto activo para su administración sencilla o de dos o más a la vez, según sea apropiado. El médico determinará en cualquier caso la dosis real que será más adecuada para cualquier paciente individual y que variará con la edad, el peso y la respuesta del paciente particular. Las dosificaciones anteriores son ilustrativas del caso promedio. Puede haber, por supuesto, casos individuales en que se necesiten intervalos de dosificación mayores o menores y éstos están dentro del alcance de esta invención.

Los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden administrarse también por vía intranasal o por inhalación y se suministran convenientemente en forma de una presentación de inhalador de polvo seco o de pulverizador de aerosol de un envase presurizado, bomba, pulverizador o nebulizador con el uso de un impulsor adecuado, por ejemplo diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, un hidrofluoroalcano tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano o 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida. El envase presurizado, bomba, pulverizador o nebulizador puede contener una solución o suspensión del inhibidor de PDE5 de cGMP, por ejemplo, utilizando una mezcla de etanol y el impulsor como disolvente, que puede contener además un lubricante, por ejemplo trioletano de sorbitán. Las cápsulas y cartuchos (preparados, por ejemplo, de gelatina) para uso en un inhalador o insuflador pueden formularse para contener una mezcla de polvo del inhibidor de PDE5 de cGMP y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón.

Las formulaciones de aerosol o polvo seco se disponen preferiblemente de modo que cada cantidad de dosis medida o "ráfaga" contiene de 1 a 50 mg del inhibidor de PDE5 de cGMP, para suministro al paciente. La dosis global con un aerosol estará en el intervalo de 1 a 50 mg, que pueden administrarse en una dosis sencilla o, más frecuentemente, en dosis divididas a lo largo del día.

Como alternativa, los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden administrarse en forma de un supositorio o pesario.

El inhibidor de PDE5 de cGMP puede administrarse por vía tópica en forma de un gel, hidrogel, loción, solución, crema, ungüento o polvo. Los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden administrarse también por vía dérmica o transdérmica, por ejemplo mediante el uso de un parche dérmico.

Puesto que las úlceras diabéticas aparecen sobre la superficie de la piel, la administración tópica es una vía preferida de administración.

Para la administración tópica a la piel, los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden formularse como un ungüento adecuado que contiene el inhibidor suspendido o disuelto en, por ejemplo, una mezcla con uno o más de los siguientes: aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, propilenglicol, compuesto de polioxietileno-polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Como alternativa, pueden formularse como una loción o crema adecuada, suspenderse o disolverse en, por ejemplo, una mezcla de uno o más de los siguientes: aceite mineral, monoesterato de sorbitán, un polietilenglicol, parafina líquida, polisorbato 60, cera de ésteres cetílicos, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua.

Los inhibidores de PDE5 de cGMP pueden utilizarse también en combinación con una ciclodextrina. Las ciclodextrinas son conocidas por formar complejos de inclusión y de no inclusión con moléculas de fármaco. La formación de un complejo fármaco-ciclodextrina puede modificar las propiedades de solubilidad, velocidad de disolución, biodisponibilidad y/o estabilidad de una molécula de fármaco. Los complejos fármaco-ciclodextrina son útiles generalmente para la mayoría de las formas de dosificación y vías de administración. Como alternativa a la complejación directa con el fármaco, la ciclodextrina puede utilizarse también como aditivo auxiliar, por ejemplo como vehículo, diluyente o solubilizante. Las ciclodextrinas alfa, beta y gamma son las más habitualmente utilizadas y ejemplos adecuados se describen en los documentos WO-A-91/11172, WO-A-94/02518 y WO-A-98/55148.

Generalmente, en humanos, la administración oral de los inhibidores de PDE5 de cGMP es la vía preferida, siendo la más conveniente. En circunstancias en las que el receptor sufre un trastorno de deglución o alteraciones en la absorción de fármaco después de la administración oral, el fármaco puede administrarse por vía parenteral, sublingual o bucal.

Los inhibidores de PDE5 de cGMP de la invención pueden administrarse también en combinación con uno o más de los siguientes:

i)

Compuestos antagonistas de receptores \alpha-adrenérgicos, también conocidos como \alpha-adrenoceptores o \alpha-receptores o \alpha-bloqueantes. Los compuestos adecuados para uso en la presente incluyen: los receptores \alpha-adrenérgicos como se describen en la solicitud PCT WO 99/30697 publicada el 14 de junio de 1998, cuyas descripciones relativos a los receptores \alpha-adrenérgicos se incorporan a la presente como referencia e incluyen: \alpha_{1}-adrenoceptores o \alpha_{2}-adrenoceptores selectivos y adrenoceptores no selectivos; los \alpha_{1}-adrenoceptores adecuados incluyen: fentolamina, mesilato de fentolamina, trazodona, alfuzosina, indoramina, naftopidilo, tamsulosina, dapiprazol, fenoxibenzamina, idazoxano, efaraxano, yohimbina, alcaloides de rauwolfa, Recordati 15/2739, SNAP 1069, SNAP 5089, RS17053, SL 89.0591, doxazosina, terazosina, abanoquilo y prazosina; los \alpha_{2}-bloqueantes del documento US 6.037.346 (del 14 de marzo de 2000) dibenarnina, tolazolina, trimazosina y dibenarnina; receptores \alpha-adrenérgicos como se describen en las patentes de Estados Unidos: 4.188.390, 4.026.894, 3.511.836, 4.315.007, 3.527.761, 3.997.666, 2.503.059, 4.703.063, 3.381.009, 4.252.721 y 2.599.000, cada una de las cuales se incorpora a la presente como referencia; los \alpha_{2}-adrenoceptores incluyen: clonidina, papaverina, clorhidrato de papaverina, opcionalmente en presencia de un agente cariotónico tal como pirxamina;

ii)

Compuestos donantes de NO (agonistas de NO). Los compuestos donantes de NO adecuados para su uso en la presente incluyen nitratos orgánicos tales como mono-, di- o trinitratos o ésteres de nitrato orgánicos, incluyendo trinitrato de glicerilo (también conocido como nitroglicerina), 5-mononitrato de isosorbida, dinitrato de isosorbida, tetranitrato de pentaeritritol, tetranitrato de eritritilo, nitroprusiato de sodio (SNP), molsidomina de 3-morfolinosidnonimina, S-nitroso-N-acetilpenicilamina (SANP), S-nitroso-N-glutatión (SNO-GLU), N-hidroxi-L-arginina, nitrato de amilo, linsidomina, clorhidrato de linsidomina, S-nitroso-N-cisteína (SIN-1), diolatos de diazenio (NONOatos), 1,5-pentanodinitrato, L-argineno, ginseng, zizphi fructus, molsidomina, Re-2047, derivados nitrosilados de maxisilito tales como NMI-678-11 y NMI-937 como se describen en la solicitud PCT WO 0012075,

iii)

Agentes vasodilatadores. Los agentes vasodilatadores adecuados para su uso en la presente incluyen nimodepino, pinacidilo, ciclandelato, isoxsuprina, cloroprumazina, haloperidol, Rec 15/2739, trazodona, pentoxifilina,

iv)

agonistas de tromboxano A2,

v)

sustratos para la NO-sintasa, tales como L-arginina,

vi)

bloqueantes de los canales del calcio, tales como amlodipino,

vii)

agentes antiiflamatorios esteroideos o no esteroideos,

viii)

inhibidores de metaloproteasas de matriz (MMP), particularmente MMP-3, MMP-12 y MMP-13, y

ix)

inhibidores del activador de plasminógeno de tipo uroquinasa (uPA).

Los agentes particularmente preferidos para uso en combinación con los inhibidores de PDE5 de la invención para el tratamiento de heridas incluyen: inhibidores de MMP (particularmente inhibidores de MMP-13, MMP-12 y MMP-13), inhibidores de uPA y agentes vasodilatadores (particularmente pentoxifilina).

Se aprecia que todas las referencias de la presente a tratamiento incluyen tratamiento curativo, paliativo y profiláctico.

Los siguientes ejemplos de formulación son tan sólo ilustrativos y no se entiende que limiten el alcance de la invención. Ingrediente activo significa un inhibidor de PDE5 de cGMP.

Formulación 1

Se prepara un comprimido utilizando los siguientes ingredientes:

Se mezcla citrato de sildenafilo (50 mg) con celulosa (microcristalina), dióxido de silicio, ácido esteárico (pirógeno) y se comprime la mezcla para formar comprimidos.

Formulación 2

Puede prepararse una formulación intravenosa mediante combinación del ingrediente activo (100 mg) con solución salina isotónica (1000 ml).

Se ilustra la eficacia de los inhibidores de PDE5 de cGMP en el tratamiento de la neuropatía en pacientes humanos mediante el siguiente informe anecdótico.

El paciente era un diabético insulinodependiente que había sufrido disfunción eréctil y que desarrolló posteriormente una úlcera diabética en el pie. Durante el tratamiento de su disfunción eréctil con sildenafilo, se observó que su úlcera del pie, que había tenido durante aproximadamente dos años, se estaba curando. El paciente había pasado por diversos regímenes de tratamiento con resultados mínimos. Había visto a cirujanos vasculares, podólogos y había visitado clínicas de curación de heridas. Ultimamente, estuvo hospitalizado durante aproximadamente un mes con antibióticos IV y demás y había un riesgo muy real de que el paciente fuera a requerir una amputación por debajo de la rodilla. A veces, la úlcera parecía estar curándose, sólo para reaparecer, volviendo a su tamaño y profundidad pretratamiento. Después de empezar el tratamiento con sildenafilo para su disfunción eréctil, se observó que la úlcera estaba disminuyendo de tamaño. Se instruyó al paciente para que siguiera tomando 50 mg de sildenafilo una vez al día. Este tratamiento dio como resultado la completa curación de la úlcera diabética del pie en un mes. El paciente ha seguido este mismo tratamiento durante los pasados dos años sin reaparición.

Como apoyo adicional a la invención, se ha encontrado la presencia de la enzima PDE5 en el tejido de úlceras diabéticas. Las figuras 1, 2 y 3 muestran fotomicrografías de secciones de piel tomadas de úlceras diabéticas. Se realizó la inmunohistoquímica con cuerpo LIP-1. Las figuras son reproducciones en blanco y negro de fotomicrografías en color. Las áreas oscuras muestran la presencia de enzima PDE5.

La figura 1a muestra una fotomicrografía de sección de parafina de piel de una úlcera diabética crónica. Se tomó este tejido de un dedo del pie de un varón diabético de 54 años de edad con isquemia crónica y ulceración de la piel de dos semanas de duración. Esta sección se toma del extremo de la úlcera. El epitelio escamoso 1 hiperplásico pero intacto es negativo. La dermis subyacente contiene tejido de cicatrización maduro con vénulas pequeñas y grandes 2. Obsérvese la tinción oscura positiva de las células de músculo liso en la túnica media de las vénulas (original amplificado x10).

La figura 1b muestra una fotomicrografía de sección de parafina de piel. La sección se toma del borde entre la úlcera (izquierda) y el epitelio intacto (derecha). El epitelio escamoso hiperplásico pero intacto (derecha) y el exudado inflamatorio necrósico 3 es negativo. Obsérvese la tinción oscura positiva de las células de músculo liso en la túnica media de las vénulas 4 y de las células fusiformes en la base de la úlcera 5 (original amplificado x20).

La figura 2a muestra una fotomicrografía de sección de parafina de piel (como en 1a y 1b). La sección se toma de una zona intacta de la dermis adyacente a la úlcera y muestra una glándula sudorípara ecrina y los conductos. Obsérvese la tinción oscura positiva de las células fusiformes (células mioepiteliales) alrededor de la glándula sudorípara ecrina y conductos 6 con tinción negativa de las células epiteliales de la glándula 7 (original amplificado x20).

La figura 2b muestra una fotomicrografía de sección de parafina de piel (como en 1a y 1b). La sección se toma de la base de la úlcera curada en la que los fascículos del tejido de cicatrización reciente han reemplazado a las estructuras dérmicas normales. Obsérvese la tinción oscura positiva de algunas de las células fusiformes 8 (miofibroblastos) y de algunas estructuras vasculares (original amplificado x20).

La figura 3a muestra una fotomicrografía de sección de parafina de piel (resolución mayor que en 2b). La sección se toma de la base de la úlcera curada en la que los fascículos del tejido de cicatrización reciente han reemplazado a las estructuras dérmicas normales. Obsérvese la tinción oscura positiva de algunas de las células fusiformes 9 (miofibroblastos) y de algunos de los microvasos que tienen una túnica media estrecha 10 (original amplificado x40).

La figura 3b muestra una fotomicrografía de sección de parafina de piel (resolución mayor que en 3a). La sección se toma de la base de la úlcera curada en la que los fascículos del tejido de cicatrización reciente han reemplazado a las estructuras dérmicas normales. Obsérvese la tinción oscura positiva de algunas de las células fusiformes 11 (miofibroblastos) que se encontraron entre el colágeno acelular. En el citoplasma de algunas de estas células fusiformes la inmunolocalización tiene una distribución desigual. Obsérvese la tinción oscura positiva de las células de músculo liso en la túnica media de una arteriola pequeña 12 y la tinción negativa de las células endoteliales de revestimiento 13 (original amplificado x60).

La figura 3c muestra una fotomicrografía de sección de parafina de piel (mayor resolución que en 3a). La sección se toma de la base de la úlcera curada en un área de tejido de cicatrización celular relativamente reciente. Obsérvese la tinción oscura positiva de algunas de las células fusiformes 14 (miofibroblastos). En algunas de estas células fusiformes la inmunolocalización tiene una distribución desigual. Obsérvese la tinción oscura positiva de las células de músculo liso de la túnica media de la arteriola pequeña 15 (original amplificado x60).

Se proporciona la preparación de algunos inhibidores preferidos de PDE5 en los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1 2-(Metoxietil)-5-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

1

Se calentó a 120ºC en un matraz sellado durante 12 horas una mezcla del producto de la etapa i) siguiente (0,75 mmol), bis(trimetilsilil)amida de potasio (298 mg, 1,50 mmol) y acetato de etilo (73 \mul, 0,75 mmol) en etanol (10 ml). Se repartió la mezcla enfriada entre acetato de etilo y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y se separaron las capas. Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se evaporó a presión reducida. Se purificó el producto en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando diclorometano:metanol (98:2) como eluyente, proporcionando el compuesto del título, 164 mg. Encontrado: C 53,18, H 6,48, N 18,14, C_{23}H_{33}N_{7}O_{5}S\cdot0,20 C_{2}H_{5}CO_{2}CH_{3} necesita C 53,21, H 6,49, N 18,25%. \delta (CDCl_{3}): 1,04 (3H, t), 1,40 (3H, t), 1,58 (3H, t), 2,41 (2H, q), 2,57 (4H, m), 3,08 (2H, q), 3,14 (4H, m), 3,30 (3H, s), 3,92 (2H, t), 4,46 (2H, t), 4,75 (2H, q), 8,62 (1H, d), 9,04 (1H, d), 10,61 (1H, s), LRMS: m/z 520 (M+1)^{+}, pf: 161-162ºC.

Preparación de los materiales de partida a) Ácido piridin-2-amino-5-sulfónico

\vskip1.000000\baselineskip

2

Se añadió 2-aminopiridina (80 g, 0,85 mmol) en porciones durante 30 minutos a ácido sulfúrico fumante (320 g) y se calentó la solución resultante a 140ºC durante 4 horas. Después de enfriar, se vertió la reacción sobre hielo (200 g) y se agitó la mezcla en baño de hielo/sal durante otras 2 horas. Se filtró la suspensión resultante, se lavó el sólido con agua con hielo (200 ml) e IMS frío (200 ml) y se secó por succión proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido, 111,3 g, LRMS: m/z 175 (M+1)^{+}.

b) Ácido piridin-2-amino-3-bromo-5-sulfónico

\vskip1.000000\baselineskip

3

Se añadió gota a gota bromo (99 g, 0,62 mol) durante una hora a una solución caliente del producto de la etapa a) (108 g, 0,62 mmol) en agua (600 ml) manteniendo un reflujo constante. Después de completar la adición, se enfrió la reacción y se filtró la mezcla resultante. Se lavó el sólido con agua y se secó por succión proporcionando el compuesto del título, 53,4 g, \delta (DMSO-d_{6}, 300 MHz): 8,08 (1, s), 8,14 (1H, s), LRMS: m/z 253 (M)^{+}.

c) Cloruro de piridin-3-bromo-2-cloro-5-sulfonilo

\vskip1.000000\baselineskip

4

Se añadió gota a gota una solución de nitrito de sodio (7,6 g, 110,0 mmol) en agua (30 ml) a una solución enfriada con hielo del producto de la etapa b) (25,3 g, 100,0 mmol) en ácido clorhídrico acuoso (115 ml, 20%) manteniendo la temperatura por debajo de 6ºC. La reacción se agitó durante 30 minutos a 0ºC y durante una hora más a temperatura ambiente. Se evaporó la mezcla de reacción a presión reducida y se secó el residuo a vacío a 70ºC durante 72 horas. Se calentó a 125ºC una mezcla de este sólido, pentacloruro de fósforo (30,0 g, 144 mmol) y oxicloruro de fósforo (1 ml, 10,8 mmol) durante 3 horas y después se enfrió. Se vertió la mezcla de reacción sobre hielo (100 g) y el residuo resultante se filtró y se lavó con agua. Se disolvió el producto en diclorometano, se secó (MgSO_{4}) y se evaporó a presión reducida proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido amarillo, 26,58 g. \delta (CDCl_{3}, 300 MHz): 8,46 (1H, s), 8,92 (1H, s).

d) 3-Bromo-2-cloro-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridina

\vskip1.000000\baselineskip

5

Se añadió gota a gota una solución de 1-etilpiperazina (11,3 ml, 89,0 mmol) y trietilamina (12,5 ml, 89,0 mmol) en diclorometano (150 ml) a una solución enfriada con hielo del producto de la etapa c) (23,0 g, 79,0 mmol) en diclorometano (150 ml) y se agitó la reacción a 0ºC durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se purificó el aceite marrón residual por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando un gradiente de elución de diclorometano:metanol (99:1 a 97:3), proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido naranja, 14,5 g. \delta (CDCl_{3}, 300 MHz): 1,05 (3H, t), 2,42 (2H, q), 2,55 (4H, m), 3,12 (4H, m), 8,24 (1H, s), 8,67 (1H, s).

e) 3-Bromo-2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridina

\vskip1.000000\baselineskip

6

Se calentó a reflujo una mezcla del producto de la etapa d) (6,60 g, 17,9 mmol) y etóxido de sodio (6,09 g, 89,55 mmol) en etanol (100 ml) durante 18 horas, y después se enfrió. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida, se repartió el residuo entre agua (100 ml) y acetato de etilo (100 ml) y se separaron las capas. Se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo (2x100 ml), se secaron las soluciones orgánicas reunidas (MgSO_{4}) y se evaporaron a presión reducida proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido marrón, 6,41 g. Encontrado: C 41,27, H 5,33, N 11,11, C_{13}H_{20}BrN_{3}O_{3}S necesita C 41,35, H 5,28, N 10,99%. \delta (CDCl_{3}, 300 MHz): 1,06 (3H, t), 1,48 (3H, t), 2,42 (2H, q), 2,56 (4H, m), 3,09 (4H, m), 4,54 (2H, q), 8,10 (1H, s), 8,46 (1H, s), LRMS: m/z 378, 380 (M+1)^{+}.

f) Éster etílico del ácido piridin-2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)-3-carboxílico

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

Se calentó a 100ºC y 1,38 MPa una mezcla del producto de la etapa e) (6,40 g, 16,92 mmol), trietilamina (12 ml, 86,1 mmol) y tris(trifenilfosfina)paladio (0) en etanol (60 ml) en atmósfera de monóxido de carbono durante 18 horas, y después se enfrió. Se evaporó la mezcla de reacción a presión reducida y se purificó el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice, utilizando un gradiente de elución de diclorometano:metanol (100:0 a 97:3) proporcionando el compuesto del título en forma de un aceite naranja, 6,2 g. \delta (CDCl_{3}, 300 MHz): 1,02 (3H, t), 1,39 (3H, t), 1,45 (3H, t), 2,40 (2H, q), 2,54 (4H, m), 3,08 (4H, m), 4,38 (2H, q), 4,55 (2H, q), 8,37 (1H, s), 8,62 (1H, s), LRMS: m/z 372 (M+1)^{+}.

g) Ácido piridin-2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)-3-carboxílico

8

Se agitaron a temperatura ambiente una mezcla del producto de la etapa f) (4,96 g, 13,35 mmol) y una solución acuosa de hidróxido de sodio (25 ml, 2 N, 50,0 mmol) en etanol (25 ml) durante 2 horas. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida a la mitad de su volumen, se lavó con éter y se aciduló a pH 5 utilizando ácido clorhídrico 4 N. Se extrajo la solución acuosa con diclorometano (3 x 30 ml), se secaron los extractos orgánicos reunidos (MgSO_{4}) y se evaporaron a presión reducida proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color tostado, 4,02 g. \delta (DMSO-d_{6}, 300 MHz): 1,18 (3H, t), 1,37 (3H, t), 3,08 (2H, q), 3,17-3,35 (8H, m), 4,52 (2H, q), 8,30 (1H, s), 8,70 (1H, s).

h) 4-[2-Etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-ilcarboxamido]-1H-3-etilpirazol-5-carboxamida

9

Se añadió una solución de 4-amino-3-etil-1H-pirazol-5-carboxamida (documento WO 9849166) (9,2 g, 59,8 mmol) en N,N-dimetilformamida (60 ml) a una solución del producto de la etapa g) (21,7 g, 62,9 mmol), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (10,1 g, 66,0 mmol) y trietilamina (13,15 ml, 94,3 mmol) en diclorometano (240 ml). Se añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (13,26 g, 69,2 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 6 horas. Se eliminó el diclorometano o presión reducida, se vertió la solución restante sobre acetato de etilo (400 ml) y se lavó esta mezcla con una solución de bicarbonato de sodio (400 ml). El precipitado cristalino resultante se filtró, se lavó con acetato de etilo y se secó a vacío, proporcionando el compuesto del título en forma de un polvo blanco, 22 g. \delta (CDCl_{3}+ 1 gota de DMSO-d_{6}) 0,96 (3H, t), 1,18 (3H, t), 1,50 (3H, t), 2,25-2,56 (6H, m), 2,84 (2H, q), 3,00 (4H, m), 4,70 (2H, q), 5,60 (1H, s a), 6,78 (1H, s a), 8,56 (1H, d), 8,76 (1H, d), 10,59 (1H, s), 12,10-12,30 (1H, s), LRMS: m/z 480 (M+1)^{+}.

i) 2-Metoxietil-4-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-ilcarboxamido]-3-etilpirazol-5-carboxamida

10

Se añadió 1-bromo-2-metoxietano (1,72 mmol) a una solución del producto de la etapa h) (750 mg, 1,56mmol) y carbonato de cesio (1,12 g, 3,44 mmol) en N,N-dimetilformamida (15 ml) y se agitó la reacción a 60ºC durante 18 horas. Se repartió la mezcla enfriada entre agua y acetato de etilo y se separaron las capas. Se secó la capa orgánica (MgSO_{4}), se concentró a presión reducida y se destiló azeotrópicamente con tolueno proporcionando un sólido. Este producto se recristalizó con éter proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido blanco.

Ejemplo 2 5-[2-iso-Butoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-(1-metilpiperidin-4-il)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

\vskip1.000000\baselineskip

11

Se agitó a 130ºC una mezcla del producto de la etapa b) siguiente (90 mg, 0,156 mmol), bis(trimetilsilil)amida de potasio (156 mg, 0,78 mmol) y acetato de etilo (14 mg, 0,156 mmol) en isopropanol (12 ml) durante 6 horas en un matraz sellado. Se vertió la mezcla de reacción enfriada en una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (60 ml) y se extrajo con acetato de etilo (60 ml). Se secaron los extractos orgánicos reunidos (MgSO_{4}) y se evaporaron a presión reducida proporcionando una goma. Se purificó el producto en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando diclorometano:metanol:amoniaco 0,88 (92,6:6,6:0,6) proporcionando el compuesto del título en forma de una espuma beis, 36 mg. \delta (CDCl_{3}) 1,01 (3H, t), 1,12 (6H, d), 1,39 (3H, t), 1,94 (2H, m), 2,15 (2H, m), 2,22-2,44 (6H, m), 2,55 (6H, m), 3,02 (4H, m), 3,14 (4H, m), 4,22 (1H, m), 4,43 (2H, d), 8,60 (1H, d), 9,00 (1H, d), 10,54 (1H, s).

Preparación de materiales de partida a) 2-(1-terc-Butoxicarbonilpiperidin-4-il)-4-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-ilcarboxamido]-3-etilpirazol-5-carboxamida

12

Se añadió hidruro de sodio (64 mg, dispersión al 60% en aceite mineral, 1,6 mmol) a una solución del producto del ejemplo 1, etapa h) (1,46 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) y se agitó la solución durante 10 minutos. Se añadió 4-[(metilsulfonil)oxi]-1-piperidincarboxilato de terc-butilo (documento WO 9319059) (1,60 mmol) y se agitó la reacción a 60ºC durante 3 días. Se repartió la mezcla enfriada entre acetato de etilo y una solución acuosa de bicarbonato de sodio y se separaron las fases. Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo, se secaron las soluciones orgánicas reunidas (MgSO_{4}) y se evaporaron a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando diclorometano:metanol (98:2) como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de una espuma blanca, 310 mg. \delta (CDCl_{3}) 1,02 (3H, t), 1,23 (3H, t), 1,49 (9H, s), 1,57 (3H, m), 1,93 (2H, m), 2,16 (2H, m), 2,40 (2H, q), 2,54 (4H, m), 2,82-2,97 (4H, m), 3,10 (4H, m), 4,30 (3H, m), 4,79 (2H, q), 5,23 (1H, s), 6,65 (1H, s), 8,63 (1H, d), 8,82 (1H, d), 10,57 (1H, s).

b) 4-[2-Etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-ilcarboxamido]-3-etil-2-(1-metilpiperidin-4-il)pirazol-5-carboxamida

13

Se añadió ácido trifluoroacético (1,5 ml) a una solución del producto de la etapa a) anterior (320 mg, 0,48 mmol) en diclorometano (2 ml) y se agitó la solución a temperatura ambiente durante 2 horas y media. Se evaporó la mezcla de reacción a presión reducida y se trituró bien el residuo con éter y se secó a vacío, proporcionando un sólido blanco. Se añadió formaldehído (217 \mul, 37% acuoso, 2,90 mmol) a una solución de la amina intermedia en diclorometano (8 ml) y se agitó vigorosamente la solución durante 30 minutos. Se añadió ácido acético (88 \mul, 1,69 mmol), se agitó la solución durante otros 30 minutos, después se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (169 mg, 0,80 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 horas. Se vertió la mezcla de reacción sobre una solución acuosa de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo. Se secaron los extractos orgánicos reunidos (MgSO_{4}) y se evaporaron a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando diclorometano:metanol:amoniaco 0,88 (91,75:7,5:0,75) como eluyente, proporcionando el compuesto del título, 70 mg. \delta (CDCl_{3}), 1,02 (3H, t), 1,22 (3H, t), 1,58 (3H, t), 1,92 (2H, m), 2,14 (2H, m), 2,25-2,45 (7H, m), 2,54 (4H, m), 2,91 (2H, q), 2,99-3,16 (6H, m), 4,08 (1H, m), 4,78 (2H, q), 5,11 (1H, s a), 6,65 (1H, s a), 8,63 (1H, d), 8,83 (1H, d), 10,53 (1H, s).

Ejemplo 3 5-[2-Etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-fenil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

\vskip1.000000\baselineskip

14

\vskip1.000000\baselineskip

Se añadió piridina (0,1 ml, 1,08 mmol) a una mezcla del producto de la etapa a) siguiente (250 mg, 0,54 mmol), acetato de cobre (II) monohidratado (145 mg, 0,72 mmol), ácido bencenoborónico (132 mg, 1,08 mmol) y tamices moleculares de 4 \ring{A} (392 mg) en diclorometano (5 ml) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 4 días. Se filtró la mezcla de reacción y se evaporó el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando diclorometano:metanol:amoniaco 0,88 (97:3:0,5) como eluyente, y se trituró con éter:hexano. Se filtró el sólido resultante y se recristalizó con isopropanol:diclorometano proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido, 200 mg. \delta (CDCl_{3}) 1,02 (3H, t), 1,47 (3H, t), 1,60 (3H, t), 2,42 (2H, q), 2,58 (4H, m), 3,10 (2H, q), 3,17 (4H, m), 4,76 (2H, q), 7,40 (1H, m), 7,51 (2H, m), 7,80 (2H, d), 8,67 (1H, d), 9,16 (1H, s), 10,90 (1H, s), LRMS: m/z 538 (M+1)^{+}.

Preparación de materiales de partida a) 5-[2-Etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

\vskip1.000000\baselineskip

15

\vskip1.000000\baselineskip

Se añadió bis(trimetilsilil)amida de potasio (8,28 g, 41,6 mmol) a una solución del producto del ejemplo 1, etapa h) (10,0 g, 20,8 mmol) y acetato de etilo (2 ml, 20 mmol) en etanol (160 ml) y se calentó la mezcla de reacción a 120ºC durante 12 horas en un matraz sellado. Se evaporó la mezcla enfriada a presión reducida y se purificó el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando diclorometano:metanol:amoniaco 0,88 (95:5:0,5) como eluyente, proporcionando el compuesto del título, 3,75 g. \delta (CDCl_{3}) 1,03 (3H, t), 1,42 (3H, t), 1,60 (3H, t), 2,42 (2H, q), 2,58 (4H, m), 3,02 (2H, q), 3,16 (4H, m), 4,78 (2H, q), 8,66 (1H, d), 9,08 (1H, d), 11,00 (1H, s), 11,05-11,20 (1H, s a), LRMS: m/z 462 (M+1)^{+}.

Ejemplo 4 5-(5-Acetil-2-propoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-isopropil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

\vskip1.000000\baselineskip

16

\vskip1.000000\baselineskip

Se disolvió el producto de la etapa h) siguiente (0,23 mmol) en diclorometano (10 ml) y se añadió acetona (0,01 ml). Después de 30 minutos de agitación se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (0,51 mmol) y se continuó la agitación durante 14 horas. Se añadieron más acetona (0,01 ml) y triacetoxiborohidruro de sodio (0,51 mmol) y se continuó la agitación durante otras 4,5 horas. Quedó todavía material de partida, de modo que se añadieron más acetona (0,01 ml) y triacetoxiborohidruro de sodio (0,51 mmol) y se continuó la agitación durante otras 18 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con diclorometano, se lavó con una solución de bicarbonato de sodio y después salmuera, se secó (MgSO_{4}) y se concentró. La purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (elución con diclorometano/metanol/amoniaco 0,88 94:6:0,6) proporcionó el producto en forma de un sólido, p.f.: 162,8-163,6ºC. RMN-^{1}H (400 MHz, MeOD): \delta= 1,00 (d ap., 9H), 1,30 (t, 3H), 1,84 (q ap., 2H), 2,60 (s, 3H), 2,62-2,72 (m, 1H), 3,00-3,10 (q, 2H), 3,75 (t, 2H), 3,90 (t, 2H), 4,50 (t, 2H), 5,25 (t, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), LRMS (TSP-ion positivo) 439 (MH^{+}). Anal. encontrado C 61,92, H 6,84, N 18,70. Calc. para C_{23}H_{30}O_{3}N_{6}\cdot0,1CH_{2}Cl_{2}: C 62,07, H 6,81, N 18,80.

Preparación de materiales de partida a) Ácido 2-propoxi-5-yodonicotínico

\vskip1.000000\baselineskip

17

\vskip1.000000\baselineskip

Se añadieron N-yodosuccinamida (18,22 g, 0,08 mmol), ácido trifluoroacético (100 ml) y anhídrido trifluoroacético (25 ml) a ácido 2-propoxinicotínico (0,054 mmol). Se mantuvo a reflujo la mezcla durante 2,5 horas, se enfrió y se evaporaron los disolventes. Se extrajo el residuo con agua y acetato de etilo y se lavaron las fases orgánicas con agua (dos veces) y salmuera (dos veces), se secó (MgSO_{4}) y se concentró. Se redisolvió el residuo rojo en acetato de etilo, se lavó con una solución de tiosulfato de sodio (dos veces), agua (dos veces), salmuera (dos veces), se volvió a secar (MgSO_{4}) y se concentró proporcionando el producto deseado en forma de un sólido. RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta= 1,05 (t, 3H), 1,85-2,0 (m, 2H), 4,5 (t, 2H), 8,5 (s, 1H), 8,6 (s, 1H). Análisis: encontrado C 35,16, H 3,19, N 4,46. Calculado para C_{9}H_{10}INO_{3}: C 35,19, H 3,28, N 4,56%, LRMS (TSP): 529,5 (MH^{+}).

b) N-[3-(Aminocarbonil)-5-etil-1H-pirazol-4-il]-5-yodo-2-propoxinicotinamida

18

Se añadió cloruro de oxalilo (15,9 mmol) a una solución agitada del producto de la etapa a) (3,98 mmol) en diclorometano (20 ml) y 3 gotas de N,N-dimetilformamida. Después de 2,5 horas se evaporó el disolvente y se destiló azeotrópicamente el residuo 3 veces con diclorometano. Se resuspendió el residuo en diclorometano (4 ml) y se añadió a una mezcla agitada de 4-amino-3-etil-1H-pirazol-5-carboxamida (preparada como se describe en el documento WO 98/49166) (3,58 mmol) y trietilamina (7,97 mmol) en diclorometano (10 ml). Después de 1 hora, se evaporó el disolvente y se repartió el residuo entre acetato de etilo y agua. Se separó la fase orgánica y se lavó con HCl 2 N (dos veces), solución de bicarbonato de sodio (dos veces) y salmuera antes de secarse (MgSO_{4}) y concentrarse. Se trituró el producto con éter y se filtró proporcionando el producto del título en forma de un sólido. Se concentró el licor madre y se purificó por cromatografía en columna (elución con acetato de etilo al 80%:hexano) proporcionando más producto. RMN-^{1}H (300 MHz, d_{4}-MeOH): \delta= 1,0 (t, 3H), 1,25 (t, 3H), 1,85-2,0 (m, 2H), 2,8 (q, 2H), 4,5 (t, 2H), 8,5 (s, 1H), 8,6 (s, 1H), LRMS (TSP) 444 (MH^{+}).

c) 3-Yodo-1-azetidincarboxilato de terc-butilo

19

Se calentó a 100ºC una mezcla de 3-[(metilsulfonil)oxi]-1-azetidincarboxilato de terc-butilo (preparado como se describe en Synlett 1998, 379, 5,0 g, 19,9 mmol) y yoduro de potasio (16,5 g, 99,4 mmol) en N,N-dimetilformamida (25 ml) durante 42 horas. Se repartió la mezcla enfriada entre agua y acetato de etilo y se separaron las capas. Se secó la fase orgánica sobre MgSO_{4}, se concentró a presión reducida y se destiló azeotrópicamente el residuo con xileno. Se purificó el producto en bruto por cromatografía en columna ultrarrápida (diclorometano como eluyente) proporcionando el compuesto del título, 3,26 g. RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta= 1,43 (s, 9H), 4,28 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 4,62 (m, 2H), LRMS (TSP) 284 (MH)^{+}.

d) 3-(3-Aminocarbonil)-5-etil-4-{[(5-yodo-2-propoxi-3-piridinil)carbonil]amino}-1H-pirazol-1-il)-1-azetidincarboxilato de terc-butilo

20

Se añadió carbonato de cesio (3,59 mmol) a una solución agitada del producto de la etapa b) (1,79 mmol) y del producto de la etapa c) (2,15 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 ml) en atmósfera de nitrógeno. Se calentó la mezcla a 80ºC durante 24 horas. Se enfrió la mezcla y se extrajo del agua con acetato de etilo. Se secaron las fases orgánicas (MgSO_{4}) y se concentraron proporcionando un aceite marrón. La purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gradiente de elución de 100% de diclorometano a 90% de diclorometano/MeOH) proporcionó el producto del título. RMN-^{1}H (400 MHz, DMSO): \delta= 0,95 (t, 3H), 1,05 (t, 3H), 1,40 (s, 9H), 1,78-1,88 (m, 2H), 2,68 (q, 2H), 4,22-4,35 (m, 4H), 4,40 (t, 2H), 5,33 (t, 1H), 7,35 (s a, 1H), 7,52 (s a, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 10,10 (s, 1H), LRMS (TSP ion positivo) 373,2 (MH^{+}-BOC e I). Anal. encontrado: C 45,11, H 5,07, N 13,56, calc. para C_{23}H_{31}O_{5}N_{6}I\cdot0,2 DCM: C 45,28, H 5,14, N 13,66.

e) 3-[3-Etil-5-(5-yodo-2-propoxi-3-piridinil)-7-oxo-6,7-dihidro-2H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-2-il]-1-azetidincarboxilato de terc-butilo

21

Se disolvió el producto de la etapa d) (28,4 mmol) en n-propanol (200 ml), se añadieron acetato de etilo (6 ml) y terc-butóxido de potasio (28,4 mmol) y se calentó la mezcla resultante a reflujo durante 6 horas. Se añadió más terc-butóxido de potasio (14,2 mmol) y se calentó la mezcla durante otras 2 horas, después de lo cual se eliminó el disolvente a vacío. Se repartió el residuo entre agua (50 ml) y cloruro de metileno (100 ml) y se separó la fase orgánica. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (2 x 100 ml) y se secaron las fases orgánicas reunidas sobre MgSO_{4} y se redujeron a un sólido. La purificación por cromatografía en columna (elución con acetato de etilo) proporcionó el compuesto del título. RMN-^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,05 (t, 3H), 1,30 (t, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,87-1,96 (m, 2H), 3,00 (q, 2H), 4,34 (t, 2H), 4,49 (t, 2H), 4,60 (s a, 2H), 5,20 (t, 1H), 8,41 (d, 1H), 8,94 (s, 1H), 10,75 (s a, 1H), LRMS (TSP ion positivo) 598,1 (MNH_{4}^{+}), anal. encontrado C 47,54, H 5,02, N 14,09, calc. para C_{23}H_{29}O_{4}N_{6}I: C 47,60, H 5,04, N 14,48.

f) 3-(3-Etil-7-oxo-5-{2-propoxi-5-[(trimetilsilil)-etinil]-3-piridinil}-6,7-dihidro-2H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-2-il)-1-azetidincarboxilato de terc-butilo

22

Se suspendió el producto de la etapa e) (0,25 mmol) en trietilamina (2 ml) y trimetilsililacetona (0,39 mmol) y acetonitrilo (2 ml para ensayar y solubilizar los reactantes). Se añadieron Pd(PPh_{3})_{2}Cl_{2} (0,006 mmol) y yoduro cuproso (0,006 mmol) y se agitó la mezcla de reacción. Después de 1 hora, se añadió otra porción de trimetilsililacetileno (0,19 mmol) y se continuó la agitación durante 2 horas. Se evaporó el disolvente y se repartió el residuo entre acetato de etilo y agua. Se lavaron las fases orgánicas con salmuera, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron. La purificación por cromatografía ultrarrápida (gradiente de elución de 100% de diclorometano a 99% de diclorometano/metanol) proporcionó el compuesto del título. RMN-^{1}H (400 MHz, MeOD): \delta= 0,25 (s, 9H), 1,05 (t, 3H), 1,31 (t, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,87-1,96 (m, 2H), 3,00 (q, 2H), 4,33 (t, 2H), 4,52 (t, 2H), 4,54-4,80 (m, 2H), 5,18-5,25 (m, 1H), 8,32 (d, 1H), 8,74 (d, 1H), LRMS (TSP ion positivo) 569 (MNH_{4}^{+}) 452,0 (MH^{+}), anal. encontrado C 60,82, H 6,90, N 15,15, calc. para C_{28}H_{38}O_{4}N_{6}Si: C 61,07, H 6,95, N 15,26.

g) 3-[3-Etil-5-(5-etinil-2-propoxi-3-piridinil)-7-oxo-6,7-dihidro-2H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-2-il]-1-azetidincarboxilato de terc-butilo

23

Se añadió fluoruro de potasio (0,38 mmol) a una solución agitada del producto de la etapa f) (0,19 mmol) en N,N-dimetilformamida acuosa (2 ml de N,N-dimetilformamida/0,2 ml de agua) a 0ºC. Después de 10 minutos, se dejó calentar la reacción hasta temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo y se lavó con agua, ácido clorhídrico 1 N (3 veces) y salmuera. Se secó la capa orgánica (MgSO_{4}) y se concentró proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido. RMN-^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,05 (t, 3H), 1,30 (t, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,88-2,00 (m, 2H), 3,00 (q, 2H), 3,19 (s, 1H), 4,35 (t ap., 2H), 4,52 (t ap., 2H), 4,60-4,80 (s a, 2H), 5,22 (t, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 10,75 (s a, 1H), LRMS (TSP-ion positivo) 496 (MNH_{4}^{+}).

h) 5-(5-Acetil-2-propoxi-3-piridinil)-2-(3-azetidinil)-3-etil-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

24

El producto de la etapa g) (1,44 g, 3,0 mmol) en acetona (50 ml) y ácido sulfúrico (1 N, 3 ml) se trató con sulfato mercúrico (268 mg, 9,0 mmol) y se calentó a reflujo durante 6 horas. Se concentró la mezcla de reacción a aproximadamente 20 ml a vacío, se vertió sobre bicarbonato de sodio (acuoso saturado, 20 ml) y se extrajo con cloruro de metileno (6 x 20 ml). Se lavaron las fases reunidas orgánicas con salmuera (20 ml), se secaron sobre MgSO_{4}, y se concentraron a un aceite marrón que se suspendió en ácido trifluoroacético al 40% en cloruro de metileno (50 ml) y agua (1 ml) y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la evaporación a vacío, se purificó el residuo por cromatografía en columna (eluyendo con cloruro de metileno:metanol:amoniaco 0,88 95:5:1) proporcionando el compuesto del título en forma de una espuma blanca higroscópica (1,65 g), p.f.: 128,5-130,0ºC. RMN-^{1}H (400 MHz, MeOD): \delta= 1,00 (t, 3H), 1,30 (t, 3H), 1,79-1,90 (m, 2H), 2,60 (s, 3H), 3,00-3,10 (q, 2H), 4,50 (t, 2H), 4,60-4,70 (m, 4H), 5,65-5,78 (m, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), LRMS (TSP-ion positivo) 397 (MH^{+}).

Ejemplo 5 5-(5-Acetil-2-butoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-etil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

25

Se disolvieron el material de partida (120 mg, 0,28 mmol) y carbonato de cesio (274 mg, 0,84 mmol) en n-butanol (4 ml) y se calentó a 90ºC en atmósfera de nitrógeno con tamices moleculares durante 96 horas. Se repartió entonces la mezcla entre agua (10 ml) y diclorometano (10 ml). Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con más diclorometano (3 x 15 ml). Se secaron las capas orgánicas reunidas (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. Se purificó el producto en bruto por cromatografía en columna ultrarrápida (acetato de etilo:metanol:NH_{3} 0,88 95:5:0,5-90:10:1 como eluyentes), proporcionando el compuesto del título en forma de un vidrio incoloro (77 mg, 0,18 mmol), p.f.: 91,6-93,7ºC. RMN-^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta= 1,00-1,05 (m, 6H), 1,38 (t, 3H), 1,50-1,62 (m, 2H), 1,90-2,00 (m, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,63-2,70 (m, 2H), 3,02 (q, 2H), 3,75 (t, 2H), 3,90 (t, 2H), 4,68 (t, 2H), 5,10-5,20 (m, 1H), 8,84 (s, 1H), 9,23 (s, 1H), 10,63 (s a, 1H), LRMS (TSP-ion positivo) 439 (MH^{+}).

Anal. encontrado C 60,73, H 7,06, N 18,03, calc. para C_{23}H_{30}O_{3}N_{6}\cdot0,2 MeOH\cdot0,1 DIPE: C 60,88, H 7,26, N 17,90.

Preparación de materiales de partida 5-(5-Acetil-2-propoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-etil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona

26

Se añadió cianoborohidruro de sodio (92 mg, 1,47 mmol) a una solución agitada del producto del ejemplo 4, etapa h) (500 mg, 0,98 mmol) y acetato de sodio (161 mg, 1,96 mmol) en metanol (10 ml), en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Después de 1 hora, se vertió la mezcla sobre NaHCO_{3} (acuoso saturado, 20 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 15 ml). Se secaron las capas orgánicas reunidas (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. Se purificó el producto en bruto por cromatografía en columna ultrarrápida (acetato de etilo:metanol:NH_{3} 0,88 95:5:0,5-80:20:1 como eluyente) proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido blanco (140 mg, 0,33 mmol). RMN-^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta=0,97 (t, 3H), 1,03 (t, 3H), 1,30 (t, 3H), 2,82-2,97 (m, 2H), 2,58-2,65 (m, 5H), 2,98 (q, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,85 (dd, 2H), 4,58 (dd, 2H), 5,05-5,17 (m, 1H), 8,79 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 10,62 (s a, 1H), LRMS (TSP-ion positivo) 426 (MH^{+}).

Claims (4)

1. El uso de un inhibidor de PDE5 de cGMP para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de úlceras diabéticas.

2. Uso según se reivindica en la reivindicación 1, en el que las úlceras diabéticas son úlceras del pie.

3. Uso según se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el inhibidor de PDE5 de cGMP es 5-[2-etoxi-5-(4-metilpiperazin-1-ilsulfonil)-fenil]-1,6-dihidro-1-metil-3-propilpirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona.

4. Uso según se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el inhibidor de PDE5 de cGMP es 5-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-[2-metoxietil]-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona.