EA042576B1 - Анти-il-5 антитела - Google Patents

Description

Перекрестная ссылка на связанные заявки

Заявка на данный патент испрашивает приоритет по предварительной заявки США № 62/438502, поданной 23 декабря 2016 г., раскрытие которой включено в настоящее описание ссылкой во всей полноте.

Перечень последовательностей

Изобретение включает перечень последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и настоящим полностью включен ссылкой. Указанная копия ASCII, созданная 30 ноября 2017 года, называется 102085.000906_sl.txt и имеет размер 93529 байт.

Область техники, к которой относится изобретение

В настоящем документе раскрыты новые молекулы антител, которые иммуноспецифично связывают IL-5, и применения раскрытых антител.

Предшествующий уровень техники

Интерлейкин-5 (IL-5) представляет собой цитокин Т-хелперов 2 (Th2), который вызывает пролиферацию и дифференцировку как В-клеток, так и эозинофилов. В В-клетках IL-5 также увеличивает секрецию иммуноглобулинов. IL-5 является ключевым модулятором эозинофилов, где он также регулирует созревание, миграцию в ткани, выживание и предотвращение апоптоза.

Посредством двух отдельных мотивов IL5 связывается со своим специфическим рецептором (IL5Ra) и сигнальным рецептором, общей β-цепью (вс) для интерлейкина-3 (IL-3) и гранулоцитарномакрофагального колониестимулирующего фактора (GMCSF). Сообщалось, что аффинность IL-5 к IL5Ra находится в средне-низком диапазоне нМ (0,2-100 нМ); она смещается в диапазон средних пМ (~100 пМ) в присутствии вс. IL5-R специфически связывается с IL-5, который затем рекрутирует вс на IL-5R.

Терапевтический потенциал направленного воздействия на интерлейкин-5 (IL-5) был продемонстрирован в результате обширной проверки в литературных данных и недавними положительными данными III фазы клинического исследования для реслизумаба и меполизумаба.

Сущность изобретения

В настоящем документе раскрыты молекулы антител человека, которые иммуноспецифично связываются с IL-5 человека с равновесной константой аффинности (KD), равной по меньшей мере около 40 пМ, определенной поверхностным плазмонным резонансом.

Также предлагаются молекулы антитела, включающие CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, SEQ ID NO: 8, CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 66, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, 42 или 45 и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15,48, 51, 54, 57, 60 или 63.

Раскрытые молекулы антитела могут включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 и вариабельную области легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64 или 67, где вариабельность (т.е. по меньшей мере 90, 95 , 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности) имеет место за пределами последовательности CDR.

Описанные молекулы антитела могут включать тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99, или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18 или 20 и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65 или 68, где вариабельность (т.е. по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности) имеет место за пределами последовательности CDR.

Также представлены молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие раскрытые молекулы антител, векторы, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты, и клетки, трансформированные для экспрессии раскрытых молекул антител.

Также раскрыты фармацевтические композиции, содержащие любую из молекул антител, раскрытых в данном документе.

Настоящее изобретение также относится к способам лечения объекта, имеющего эозинофильную астму, синдром гиперэозинофилии, полипы носа с эозинофильной вовлечением, эозинофильный гранулематоз с поливаскулитом, атопический дерматит или эозинофильный эзофагит, включающий введение объекту терапевтически эффективного количества любого из описанных в данном документе молекул антител или содержащих их фармацевтических композиций, для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным поражением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

- 1 042576

Также предлагается применение эффективного количества любого из описанных в данном документе молекул антител, или содержащих их фармацевтических композиций, при лечении эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным вовлечением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

Кроме того, предлагается применение любой из описанных в данном документе молекул антител, или содержащих их фармацевтических композиций, в производстве лекарственного средства, предназначенного для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильной вовлечением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

Краткое описание чертежей

Краткое описание, а также последующее подробное описание далее понимаются при чтении в сочетании с прилагаемыми чертежами. С целью иллюстрации раскрытых молекул антител, способов и применений на чертежах показаны примерные воплощения молекул антител, способов и применений; однако молекулы, способы и применения антител не ограничиваются раскрытыми конкретными воплощениями.

Фиг. 1 иллюстрирует анализ TF-1.6G4, показывающий, что вариант антитела 3А5.001 (в формате IgG4) сохраняет эффективность, эквивалентную исходному антителу 3А5 (в формате IgG1).

Фиг. 2 иллюстрирует анализ TF-1.6G4, показывающий, что вариант антитела 3А5.040 сохраняет эффективность, эквивалентную исходному антителу 3А5.001.

Фиг. 3 представляет собой графическую матрицу, показывающую положение и идентичность различных единичных аминокислотных замен, которые были сгенерированы в 3А5.040 VH CDR, при выравнивании с исходной последовательностью 3А5.040 VH (верхняя последовательность). Рамки содержат остатки, которые были обозначены как остатки CDR согласно номенклатуре AbM. В дополнение к остаткам CDR были сделаны варианты с номерами остатков по Kabat 93 и 94 (рядом с CDR3 НС), как описано в примере Функциональное тестирование и характеризация антител. Различные последовательности, приведенные на этой фигуре, представлены в SEQ ID NO: 73.

Фиг. 4 представляет собой графическую матрицу, показывающую положение и идентичность различных единичных аминокислотных замен, которые были сгенерированы для CDR 3A5.040 VL, выровненные с исходной последовательностью 3А5.040 VL (верхняя последовательность). Рамки содержат остатки, которые были обозначены как остатки CDR согласно номенклатуре AbM. Различные последовательности, приведенные на этой фигуре, представлены в SEQ ID NO: 74.

Фиг. 5 иллюстрирует примерные консенсусные последовательности CDR легкой цепи, выровненные с последовательностью 3А5.040 VL (верхняя последовательность). Варианты 3А5.040 VL CDR с одной аминокислотной заменой, которые показали потенциальные улучшения в соответствии с критериями включения, описанными в примерах (отношение kd варианта к kd 3A5.040>1,5) и (отношение уровня экспрессии варианта к уровню экспрессии 3А5.040>0,5) были включены в консенсусные последовательности. Определения и нумерация CDR соответствуют номенклатуре AbM и Kabat соответственно. Рамками указаны положения CDR. Различные последовательности, приведенные на этой фигуре, представлены в SEQ ID NO: 75.

Фиг. 6 иллюстрирует мультиконцентрационный кинетический анализ Biacore связывания антитела 3А5.046 с рекомбинантным IL-5 человека при 2,5, 1,25, 0,625, 0,313 и 0,156 мкг/мл. Сенсограммы показывают снижение концентрации IL-5 с порядка 2,5 мкг/мл IL-5 на верхней кривой до 0,156 мкг/мл IL-5 на нижней кривой.

Фиг. 7А и фиг. 7В иллюстрируют пролиферацию клеток TF-1.6G4 в ответ на IL-5 и эффективность ингибирования пролиферации, управляемой IL-5, с помощью 3А5.046. 3А5.046 был более сильным ингибитором IL-5 человека (фиг. 7А) и IL-5 яванского макака (фиг. 7В), чем меполизумаб.

Фиг. 8А и фиг. 8В показан пример ELISA, разработанного с использованием антитела 3А5 и контрольного захватывающего антитела (R & D Systems). ELISA был способен обнаружить рекомбинантный IL-5 (фиг. 8А) и IL-5, полученный из CD3/CD28/IL-33, активированных первичных Т-клеток человека от 3 доноров (фиг. 8В). Фиг. 8В верхняя панель: донор 1, фиг. 8В средняя панель: донор 3; фиг. 8В нижняя панель: донор 4.

Фиг. 9 иллюстрирует результаты эксперимента, в котором CD34+ клетки пуповинной крови дифференцировались в фенотипически зрелые эозинофилы с использованием IL-5 и других цитокинов, как описано в примерах. Антитело 3А5.046 было более сильным, чем меполизумаб, при ингибировании индуцированной IL-5 дифференцировки эозинофилов.

Фиг. 10А, фиг. 10В, фиг. 10С, фиг. 10D и фиг. 10Е иллюстрируют результаты анализа перекрестной реактивности Biacore антитела 3А5.046, связывающегося с IL-5 человека (фиг. 10A), IL-5 яванского макака (фиг. 10В), IL-5 мыши (фиг. 10С), IL-5 крысы (фиг. 10D) и IL-5 морской свинки (фиг. 10Е). Сенсограммы с двойными ссылками показаны для связывания с цитокинами в концентрации 1 мкг/мл или 10 мкг/мл.

Фиг. 11А, фиг. 11В, фиг. 11С и фиг. 11D иллюстрируют результаты специфичности анализа Biacore

- 2 042576 для антитела 3А5.046. Сенсограммы с двойными ссылками показаны для связывания с цитокинами при 10 мкг/мл (фиг. 11А и фиг. 11В) или 1 мкг/мл (фиг. 11С и фиг. 11D).

Фиг. 12 иллюстрирует результаты провокационной пробы Ascaris suum (A. suum в модели эозинофилии дыхательных путей у яванского макака. На 2-й день наблюдалось существенное различие в количестве эозинофилов в легких (BALF) при сравнении животных, обработанных 3А5.046, и животных, получавших носитель (плацебо) (р<0,01; тест Манна-Уитни).

Фиг. 13А и фиг. 13В иллюстрируют ответ эозинофилов в крови в течение 10 дней после провокационной пробы A. suum у яванского макака, которых предварительно обрабатывали 3А5.046 или контрольным антителом с сопоставимым изотипом (плацебо) за неделю до провокационной пробы A. suum (фиг. 13А). Фиг. 13В иллюстрирует дополнительные детали подсчета эозинофилов в крови у животных, получавших антитело 3А5.046, до 45 дней после провокационной пробы (52 дня после введения дозы). Количество эозинофилов оставалось ниже исходного уровня в течение по меньшей мере 45 дней после провокационной пробы после однократного приема 3А5.046 за неделю до провокационной пробы.

На фиг. 14 показаны уровни эозинофилов BALF в крысиной модели knock-in (KI) с IL-5 человека в ответ на провокационную пробу Alternaria alternata. Эта модель может быть использована для проверки эффективности антитела против IL-5 для модуляции количества эозинофилов BALF после провокационной пробы Alternaria.

Подробное описание иллюстративных воплощений

Описанные молекулы антител, способы и применения могут быть поняты более легко при ссылке на следующее подробное описание в сочетании с сопровождающими фигурами, которые составляют часть данного описания. Следует понимать, что раскрытые молекулы антител, способы и применения не ограничиваются конкретными молекулами антител, способами и применениями, описанными и/или показанными в данном документе, и что терминология, используемая в данном документе, предназначена для описания конкретных воплощений только в качестве примера и не предназначена для ограничения заявленных молекул антител, способов и применений.

Если специально не указано иное, любое описание относительно возможного механизма или способа действия или причины улучшения предназначено только для иллюстрации, и раскрытые молекулы, способы и применения антител не должны быть ограничены правильностью или неправильностью любого такого предложенного механизма или способа действия или причины для улучшения.

По всему тексту описания относятся к молекулам антител и способам применения указанных молекул антител. В тех случаях, когда раскрытие описывает или заявляет признак или воплощение, связанные с молекулой антитела, такой признак или воплощение в равной степени применимы к способам применения указанной молекулы антитела. Аналогичным образом, когда в описании описывается или заявляется признак или воплощение, связанные со способом применения молекулы антитела, такой признак или воплощение в равной степени применимы к молекуле антитела.

Если диапазон числовых значений приведен или установлен в данном документе, то этот диапазон включает его конечные точки и все отдельные целые числа и дроби в пределах диапазона, а также включает каждый из более узких диапазонов, образованных всеми возможными комбинациями этих конечных точек и внутренних целых чисел и дробей для формирования подгрупп большей группы значений в пределах указанного диапазона в той же степени, как если бы каждый из этих более узких диапазонов был явно указан. Когда диапазон числовых значений указан в данном документе как превышающий заявленное значение, диапазон, тем не менее, конечен и ограничен на своем верхнем конце значением, которое действует в контексте изобретения, как описано в данном документе. Если диапазон числовых значений указан в данном документе как меньший, чем указанное значение, диапазон, тем не менее, ограничен на своем нижнем конце ненулевым значением. Не предполагается, что объем изобретения ограничен конкретными значениями, указанными при определении диапазона. Все диапазоны включаются и комбинируются.

Ссылка на конкретное числовое значение включает, по меньшей мере, это конкретное значение, если контекст явно не предписывает иное.

Когда значения выражены в виде аппроксимаций с использованием предшествующего около, будет понятно, что конкретное значение образует другой воплощение. Термин около при использовании в отношении числовых диапазонов, предельных значений или конкретных значений используется для обозначения того, что приведенные значения могут отличаться на величину до 10% от указанного значения. Таким образом, термин около используется для охвата отклонений ±10% или менее, отклонений ±5% или менее, отклонений ±1% или менее, отклонений ±0,5% или менее или отклонений ±0,1% или менее указанного значения.

Следует отметить, что некоторые признаки раскрытых молекул антител, способов и применений, которые, для ясности, описаны в настоящее описание в контексте отдельных воплощений, также могут быть представлены в комбинации в одном воплощении. И наоборот, различные признаки раскрытых молекул антител, способов и применений, которые для краткости описаны в контексте одного воплощения, также могут быть предоставлены отдельно или в любой субкомбинации.

- 3 042576

При использовании в данном документе терминов в единственном числе они также включают в себя множественное число.

Различные термины, относящиеся к аспектам описания, используются в описании и формуле изобретения. Такие термины должны иметь свое обычное значение в данной области, если не указано иное. Другие конкретно определенные термины должны толковаться в соответствии с определениями, представленными в настоящем документе.

Термин включающий предназначен для включения, но без обязательного ограничения, примеров, охватывающих термины состоящий по существу из и состоящий из; аналогично, термин состоящий по существу из предназначен для включения, но без обязательного ограничения, примеров, охватываемых термином состоящий из.

Термин молекула антитела имеет значение в широком смысле и включает полноразмерные молекулы иммуноглобулинов и антигенсвязывающие фрагменты.

Иммуноглобулины могут быть отнесены к пяти основным классам, а именно: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелой цепи. IgA и IgG дополнительно подразделяются на изотипы IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Легкие цепи антител любого вида позвоночных могут быть отнесены к одному из двух четко различимых типов, а именно каппа (κ) и лямбда (λ), на основе аминокислотных последовательностей их постоянных доменов.

Антигенсвязывающий фрагмент относится к части молекулы иммуноглобулина, которая сохраняет антигенсвязывающие свойства родительского полноразмерного антитела (т.е. его антигенсвязывающий фрагмент). Типичные антигенсвязывающие фрагменты могут иметь: области, определяющие комплементарность тяжелой цепи (HCDR) 1, 2 и/или 3; области, определяющие комплементарность легкой цепи (LCDR) 1, 2 и/или 3; вариабельную область тяжелой цепи (VH); вариабельную область легкой цепи (VL); и их комбинации. Антигенсвязывающие фрагменты включают: Fab-фрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, константного домена легкой цепи (CL) и константного домена тяжелой цепи 1 (СН1); фрагмент F(ab)₂, двухвалентный фрагмент, содержащий два фрагмента Fab, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и СН1; фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела; и фрагмент доменного антитела (dAb) (Ward et al., Nature 341: 544- 546, 1989), который состоит из домена VH или домена VL. Домены VH и VL могут быть сконструированы и связаны вместе через синтетический линкер для образования различных типов конструкций одноцепочечных антител, где домены VH/VL спариваются внутримолекулярно или межмолекулярно в тех случаях, когда домены VH и VL экспрессируются отдельным одноцепочечным антителом конструкции для образования моновалентного сайта связывания антигена, такого как одноцепочечный Fv (scFv) или диатело, описанное, например, в публикации международного патента № WO1998/44001, WO1988/01649, WO1994/13804 и WO1992/01047. Эти фрагменты антител получают с использованием методов, хорошо известных специалистам в данной области техники, и фрагменты проверяют на пригодность таким же образом, как и полноразмерные антитела.

Выражение иммуноспецифически связывается относится к способности раскрытых молекул антител преимущественно связываться с его мишенью (IL-5, в случае молекул анти-Ш-5 антител) без преимущественного связывания других молекул в образце, содержащем смешанную популяцию молекул. Молекулы антител, которые иммуноспецифически связывают IL-5, по существу не содержат других антител, обладающих различной антигенной специфичностью (например, антитело против IL-5 по существу не содержит антител, которые специфически связывают антигены, отличные от IL-5). Однако молекулы антител, которые иммуноспецифически связывают IL-5, могут иметь перекрестную реактивность с другими антигенами, такими как ортологи IL-5 человека, в том числе IL-5 Macaca flavicularis (яванского макака). Молекулы антител, раскрытые в данном документе, способны иммуноспецифически связывать как природно-продуцированный IL-5 человека, так и IL-5, который рекомбинантно продуцируется в клетках млекопитающих или прокариот.

Вариабельные области антитела состоят из четырех каркасных областей, прерываемых тремя антигенсвязывающими сайтами. Сайты связывания антигена задают с использованием различных определений: (i) Области определения комплементарности (CDR), три в VH (HCDR1, HCDR2, HCDR3) и три в VL (LCDR1, LCDR2, LCDR3), на основании вариабельности последовательности (Wu and Kabat J Exp Med 132: 211-50, 1970; Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991); и (ii) Гипервариабельные области (HVR или HV), три в VH (H1, H2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3), которым относят те области вариабельных доменов антител, которые являются гипервариабельными по структуре, как определено Chothia и Lesk (Chothia and Lesk Mol Biol 196: 901-17, 1987). Определение CDR AbM также широко используется; это компромисс между схемами нумерации Kabat и Chothia и назван так, потому что он использовался программным обеспечением Oxford Molecular для моделирования антител AbM (Rees, AR, Searle, SMJ, Henry, AHand Pedersen, JT (1996) In Sternberg M.J.E. (ed.), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172). Другие определения включают IMGT-CDR (Lefranc et al., Dev Comparat Immunol 27: 55-77, 2003) и использование остатков, определяющих специфичность (SDRU) (Almagro Mol Recognit 17: 132-43, 2004). Международная база данных ImMunoGeneTics (IMGT) (http://www_imgt_org) обеспе

- 4 042576 чивает стандартизированную нумерацию и определение антигенсвязывающих сайтов. Соответствие между CDR, HV и границами IMGT описано в Lefranc et al., Dev Comparat Immunol. 27: 55-77, 2003.

Каркас или каркасные последовательности представляют собой остальные последовательности вариабельной области, отличные от тех, которые определены как антигенсвязывающие участки. Поскольку сайты связывания антигена могут быть определены различными терминами, как описано выше, точная аминокислотная последовательность каркаса зависит от того, как был определен сайт связывания антигена. Человеческое антитело, полностью человеческое антитело и подобные термины относятся к антителу, имеющему вариабельные области тяжелой и легкой цепи, в которых как каркас, так и сайты связывания антигена получены из последовательностей человеческого происхождения. Если антитело содержит константную область, константная область также происходит от последовательностей человеческого происхождения. Человеческое антитело содержит вариабельные области тяжелой и/или легкой цепи, которые получены из последовательностей человеческого происхождения, если вариабельные области антитела получены из системы, в которой используются гены человеческого иммуноглобулина зародышевой линии или перегруппированные иммуноглобулины. Такие системы включают библиотеки генов иммуноглобулинов человека, презентируемые на фаге, и трансгенных животных, отличных от человека, таких как мышь, несущие локусы иммуноглобулина человека, как описано в данном документе. Человеческое антитело может содержать аминокислотные различия по сравнению с последовательностями человеческой зародышевой линии или перестроенных иммуноглобулинов, например, вследствие естественных соматических мутаций или преднамеренного введения замен в вариабельный домен (каркас и сайты связывания антигена) или константный домен. Как правило, человеческое антитело идентично, по меньшей мере, на около 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% по аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линией человека или перестроенным геном иммуноглобулина. В некоторых случаях человеческое антитело может содержать консенсусные каркасные последовательности, полученные из анализа каркасных последовательностей человека, например, как описано в Knappik et al., J Mol Biol 296: 57-86, 2000, или синтетический HCDR3, включенный в библиотеки генов человеческих иммуноглобулинов, презентируемых на фаге, как описано, например, в Shi et al., J Mol Biol 397: 385-96, 2010 и межд. пат. публ. № WO2009/085462. Антитела, в которых сайты связывания антигена происходят из вида, не являющегося человеком, не включены в определение человеческого антитела.

Человеческие антитела, полученные из последовательностей иммуноглобулина человека, могут быть получены с использованием систем, таких как фаговый дисплей, включающий синтетические CDR, и/или синтетические каркасы, или могут быть подвергнуты мутагенезу in vitro для улучшения свойств антител в вариабельных областях или константных областях или в обоих, что приводит к антителам, которые в природе не существуют в репертуаре человеческих антител зародышевой линии in vivo.

Рекомбинантное антитело включает все антитела, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными способами, такими как: антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомные гены иммуноглобулинов человека или гибридомы приготовленные из них (описанные ниже); антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированной для экспрессии антитела; антитела, выделенные из библиотеки рекомбинантных комбинаторных антител; и антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими способами, которые включают сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулина человека с другими последовательностями ДНК, или антитела, которые генерируются in vitro с использованием обмена Fab-плечей.

Моноклональное антитело относится к популяции молекул антител одного молекулярного состава. Композиция моноклонального антитела проявляет одну специфичность связывания и аффинность к конкретному эпитопу или, в случае биспецифического моноклонального антитела, специфичность двойного связывания к двум отдельным эпитопам. Таким образом, моноклональное антитело относится к популяции антител с одним аминокислотным составом в каждой тяжелой и каждой легкой цепях, за исключением возможных хорошо известных изменений, таких как удаление С-концевого лизина из тяжелой цепи антитела. Моноклональные антитела могут иметь гетерогенное гликозилирование в популяции антител. Моноклональное антитело может быть моноспецифичным или полиспецифичным, или моновалентным, бивалентным или поливалентным. Биспецифическое антитело включено в термин моноклональное антитело.

Эпитоп относится к части антигена, с которой антитело специфически связывается. Эпитопы обычно состоят из химически активных (таких как полярные, неполярные или гидрофобные) поверхностных группировок групп, таких как боковые цепи аминокислот или полисахаридов, и могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Эпитоп может состоять из смежных и/или смежных аминокислот, которые образуют конформационную пространственную единицу. Для непрерывного эпитопа аминокислоты из разных частей линейной последовательности антигена находятся в непосредственной близости в 3-мерном пространстве посредством сворачивания молекулы белка.

Вариант относится к полипептиду или полинуклеотиду, который отличается от эталонного поли

- 5 042576 пептида или эталонного полинуклеотида одной или несколькими модификациями, например, заменой, вставкой или делецией. Используемый в данном документе термин мутация предназначен для обозначения одной или нескольких преднамеренных замен, которые сделаны в полипептиде или полинуклеотиде.

В данном описании на 90% идентичен включает по меньшей мере на 90% идентичен, 91% идентичен, 92% идентичны, 93% идентичен, 94% идентичен, на 95% идентичен, 96% идентичен, 97% идентичен, 98% идентичен, 99% идентичен или 100% идентичен эталонному элементу (например, биологической последовательности). В текущем описании термин % идентичен используется для описания ряда последовательностей. Следует понимать, что термин % идентичен означает, что при сравнении двух последовательностей в указанной области две последовательности имеют указанное количество идентичных остатков в одном и том же положении. Уровень идентичности может быть определен с использованием CLUSTAL W с параметрами по умолчанию.

Термины лечить, лечение и тому подобные термины относятся как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам, и включают уменьшение тяжести и/или частоты симптомов, устранение симптомов и/или основной причины симптомов, уменьшение частоты или вероятность появления симптомов и/или их первопричины, улучшение или устранение повреждений, вызванных, прямо или косвенно, эозинофильной астмой, гиперэозинофильным синдромом, полипозом носа с эозинофильным поражением, эозинофильным гранулематозом с полиангиитом, атопическим дерматитом или эозинофильным эзофагитом. Лечение также включает продление выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью объекта, не получающего лечение. Объекты, подлежащие лечению, включают тех, у кого есть состояние или расстройство, а также тех, кто склонен иметь это состояние или расстройство, или тех, у кого необходимо предотвратить состояние или расстройство.

При использовании в данном описании термин введение объекту и подобные термины указывают на процедуру, с помощью которой раскрытые молекулы антитела или композиции, содержащие их, инъецируют в тело пациента таким образом, что целевые клетки, ткани или сегменты организма объекта связываются с раскрытыми молекулами антител.

Выражение терапевтически эффективное количество относится к количеству молекул антител, как описано в данном документе, эффективным для достижения конкретного биологического или терапевтического результата, таких как, без ограничения указанным, биологические или терапевтические результаты, раскрытые, описанные, или приведенные в качестве примеров в данном описании. Терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и масса индивидуума и способность композиции вызывать желаемый ответ у объекта. Типичные показатели количества терапевтического эффекта включают, например, улучшение самочувствия пациента, уменьшение симптомов заболевания, остановку или замедление прогрессирования симптомов заболевания и/или отсутствие симптомов заболевания.

Следующие сокращения используются в данном документе: Alternaria alternata (Alternaria), Ascaris suum (A. suum); область, определяющая комплементарность (CDR); тяжелая цепь (НС); легкая цепь (LC); вариабельная область тяжелой цепи (VH); вариабельная область легкой цепи (VL); поверхностный плазмонный резонанс (SPR).

Молекулы антител.

Раскрытое в данном документе, являются молекулами антител человека, которые иммуноспецифично связываются с IL-5 человека. Молекулы человеческого антитела могут иммуноспецифически связываться с IL-5 человека с равновесной константой аффинности (KD), по меньшей мере, около 40 пМ, что определено поверхностным плазмонным резонансом (SPR). Используемый в данном документе термин по меньшей мере около 40 пМ означает, что раскрытые антитела иммуноспецифически связывают IL-5 человека с KD, меньшим или равным около 40 пМ. Например, раскрытые антитела могут иммуноспецифично связывать IL-5 человека с KD, равным около 40, около 30, около 20, около 10 или менее чем 10 пМ.

Описанные молекулы человеческого антитела могут включать CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, консенсусную CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, консенсусную CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и консенсусную CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.

Консенсусная CDR1, легкой цепи включает аминокислотную последовательность GX1X2X3X4X5X6KX7X8Y (SEQ ID NO: 1), в которой:

X₁ представляет собой G или K;

Х₂ представляет собой N или D;

Х₃ представляет собой N или Н;

Х₄ представляет собой I или А;

Х₅ представляет собой G или D;

- 6 042576

Х₆ представляет собой S или K;

Х₇ представляет собой N или Н; и

Х₈ представляет собой V или А.

В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGNNIGSKNVY (SEQ ID NO: 5). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GKNNIGSKNVY (SEQ ID NO: 21). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGDNIGSKNVY (SEQ ID NO: 24). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGNHIGSKNVY (SEQ ID NO: 27). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGNNAGSKNVY (SEQ ID NO: 30). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGNNIDSKNVY (SEQ ID NO: 66). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGNNIGKKNVY (SEQ ID NO: 33). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGNNIGSKHVY (SEQ ID NO: 36). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR1 легкой цепи может включать GGNNIGSKNAY (SEQ ID NO: 39).

Аминокислотная последовательность CDR2 легкой цепи включает DDX8X9RPS (SEQ ID NO: 2), в которой:

X₈ представляет собой S или L; и

Х₉ представляет собой D или S.

В некоторых воплощениях, аминокислотная последовательность CDR2 легкой цепи может включать DDSDRPS (SEQ ID NO: 7). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR2 легкой цепи может включать DDLDRPS (SEQ ID NO: 42). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR2 легкой цепи может включать DDSSRPS (SEQ ID NO: 45).

Аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи содержит QVWX₁₀SSSDX11VX₁₂ (SEQ ID NO: 3), в которой:

Х₁₀ представляет собой D или L;

Х_п представляет собой Н, S, Y или D; и

X₁₂ представляет собой V, А или W.

В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи может включать QVWDSSSDHVV (SEQ ID NO: 15). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи может включать QVWLSSSDHVV (SEQ ID NO: 48). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи может включать QVWDSSSDSVV (SEQ ID NO: 51). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи может включать QVWDSSSDYVV (SEQ ID NO: 54). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи может включать QVWDSSSDDVV (SEQ ID NO: 57). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи может включать QVWDSSSDHVA (SEQ ID NO: 60). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность CDR3 легкой цепи может включать QVWDSSSDHVW (SEQ ID NO: 63).

Описанные молекулы человеческого антитела могут включать CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 66, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, 42 или 45 и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, 48, 51, 54, 57, 60 или 63. Типичные молекулы антител содержат CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 и

a) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

b) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

c) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

d) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

e) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи,

- 7 042576 включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

f) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

g) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

h) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

i) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

j) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

k) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

l) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48;

m) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;

n) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54;

o) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;

p) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; или

q) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;

где положение аминокислотных остатков CDR определяется в соответствии с AbM.

Описанные молекулы антитела могут включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99, или 100% идентична аминокислотной последовательности, SEQ ID NO: 16 и вариабельную области легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64 или 67, где вариабельность (т.е. по меньшей мере 90, 95 , 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности) имеет место за пределами последовательности CDR. Типичные молекулы антител представлены в табл. 1 и табл. 15.

- 8 042576

Таблица 1

Сводная информация о цепи/доменном составе антител

ID Антитела	Белок VH / (SEQ ID)	Белок VL / (SEQ ID)	Белок НС / (SEQ ID)	Белок LC / (SEQ ID)
ЗА5	ЗА5 VH (SEQ ID NO: 10)	3A5 VL (SEQ ID NO: 11)	3A5 HC (SEQ ID NO: 12)	3A5 LC (SEQ ID NO: 13)
ЗА5.001	3A5 VH (SEQ ID NO: 10)	3A5 VL (SEQ ID NO: 11)	3A5.001 HC (SEQ ID NO: 14)	3A5 LC (SEQ ID NO: 13)
ЗА5.040	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL (SEQ ID NO: 17)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC (SEQ ID NO: 19)
ЗА5.046	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL (SEQ ID NO: 17)	3A5.046 HC (SEQ ID NO: 20)	3A5.040 LC (SEQ ID NO: 19)
3A5.063	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + G25K (SEQ ID NO: 22)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + G25K (SEQ ID NO: 23)
ЗА5.070	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + N26D (SEQ ID NO: 25)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + N26D (SEQ ID NO: 26)
ЗА5.082	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + N27H (SEQ ID NO: 28)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + N27H (SEQ ID NO: 29)
ЗА5.084	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + I28A (SEQ ID NO: 31)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + I28A (SEQ ID NO: 32)
ЗА5.097	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + G29D (SEQ ID NO: 67)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + G29D (SEQ ID NO: 68)
ЗА5.107	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + S30K (SEQ ID NO: 34)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + S30K (SEQ ID NO: 35)

- 9 042576

ЗА5.125	ЗА5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + N32H (SEQ ID NO: 37)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + N32H (SEQ ID NO: 38)
ЗА5.127	3A5.040VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + V33A (SEQ ID NO: 40)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + V33A (SEQ ID NO: 41)
ЗА5.161	3A5.040VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + S52L (SEQ ID NO: 43)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + S52L (SEQ ID NO: 44)
ЗА5.169	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + D53S (SEQ ID NO: 46)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + D53S (SEQ ID NO: 47)
3A5.232	3A5.040VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + D92L (SEQ ID NO: 49)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + D92L (SEQ ID NO: 50)
ЗА5.276*	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + H95bS (SEQ ID NO: 52)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + H95bS (SEQ ID NO: 53)
ЗА5.278*	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + H95bY (SEQ ID NO: 55)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + H95bY (SEQ ID NO: 56)
ЗА5.279*	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + H95bD (SEQ ID NO: 58)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + H95bD (SEQ ID NO: 59)
ЗА5.294	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040 VL + V97A (SEQ ID NO: 61)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + V97A (SEQ ID NO: 62)
3A5.302	3A5.040 VH (SEQ ID NO: 16)	3A5.040VL + V97W (SEQ ID NO: 64)	3A5.040 HC (SEQ ID NO: 18)	3A5.040 LC + V97W (SEQ ID NO: 65)

* Строчная буква b в каждой из этих последовательностей относится к нумерации Kabat для положения CDR. Нумерация по Kabat допускает CDR переменного размера, используя буквенно-цифровую нумерацию для обозначения вставок аминокислот в определенных положениях. В этих последовательностях CDR присутствовали дополнительные аминокислоты, которые были пронумерованы как положения 95а и 95b (соответствующие положениям Kabat 95A и 95В соответственно). Так, например, для антитела 3А5.276 H95bS указывает на мутацию гистидина (Н) в серии (S) в положении 95В в соответствии с числом Kabat относительно цепи VL 3A5.040. Поэтому в данном документе используется строчная запись, чтобы отличить число Kabat, отдельно от мутации в указанном положении Kabat.

В некоторых воплощениях, раскрытые молекулы антитела могут включать вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99, или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 и

a) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17;

b) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22;

c) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25;

d) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28;

e) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 31;

f) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ

- 10 042576

ID NO: 34;

g) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37;

h) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40;

i) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43;

j) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46;

k) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49;

l) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52;

m) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55;

n) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 58;

o) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 61;

p) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 64; или

q) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 67, где вариабельность (т.е. идентичность, по меньшей мере, на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) имеет место вне последовательности CDR.

Описанные молекулы антитела могут включать одну или несколько мутаций, делеций или вставок, в каркасных и/или константных областях. В некоторых воплощениях молекула антитела IgG4 может содержать мутацию S228P. S228 расположена в шарнирной области молекулы антитела IgG4. Мутация серина (S) на пролин (Р) служит для стабилизации шарнира IgG4 и предотвращения обмена Fabплечами in vitro и in vivo. В некоторых воплощениях молекулы антитела могут включать одну или несколько модификаций, которые увеличивают время полувыведения молекул антител in vivo. Например, в некоторых воплощениях антитело может содержать мутацию M252Y, мутацию S254T и мутацию Т256Е (в совокупности называемые мутацией YTE). М252, S254 и Т256 расположены в домене СН2 тяжелой цепи. Мутация этих остатков на тирозин (Y), треонин (Т) и глутамат (Е), соответственно, защищает молекулы антител от лизосомальной деградации, тем самым увеличивая период полувыведения в сыворотке молекул антител. На основании примера других антител предполагается, что введение мутации YTE в антитело против IL-5 может обеспечить достаточное продление периода полувыведения в сыворотке, чтобы обеспечить режимы введения с интервалами между дозами 3 месяца или более. В некоторых воплощениях молекулы антитела могут включать делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи. Удаление С-концевого остатка лизина тяжелой цепи снижает гетерогенность молекул антител при продуцировании клетками млекопитающих. В некоторых воплощениях молекулы антител могут включать комбинацию мутаций, делеций или вставок. Например, в некоторых аспектах раскрытые молекулы антитела могут включать мутацию S228P и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи. Раскрытые антитела, содержащие последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 18, например, содержат мутацию S228P и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи. В некоторых аспектах раскрытая молекула антитела может содержать мутацию S228P, мутацию M252Y, мутацию S254T, мутацию Т256Е и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи. Например, антитело 3А5.046, которое содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 20, содержит мутацию S228P, мутацию M252Y, мутацию S254T, мутацию Т256Е и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи.

Молекула антитела может содержать константную область тяжелой цепи IgG1 или IgG4 и константную область легкой цепи лямбда. В некоторых воплощениях молекула антитела включает константную область тяжелой цепи IgG1 и константную область легкой цепи лямбда (например, антитело

- 11 042576

3А5). В некоторых воплощениях молекула антитела включает константную область тяжелой цепи IgG4 и константную область легкой цепи лямбда.

Описанные молекулы антитела могут включать тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99, или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18 или 20 и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65 или 68, где вариабельность (т.е. идентичность по меньшей мере 90%) имеет место за пределами последовательности CDR. Типичные молекулы антител представлены в табл. 1 и табл. 15. В некоторых воплощениях молекулы антитела могут включать тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18 и

a) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19;

b) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23;

c) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26;

d) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 29;

e) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32;

f) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35;

g) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 38;

h) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 41;

i) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44;

j) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47;

k) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 50;

l) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 53;

m) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56;

n) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 59;

о) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 62;

р) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 65; или

q) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 68, где вариабельность (т.е. идентичность, по меньшей мере, на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) имеет место вне последовательности CDR.

Описанные молекулы антитела могут включать тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99, или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19 где вариабельность (т.е. идентичность, по меньшей мере, на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) имеет место вне последовательности CDR.

В некоторых воплощениях молекулы антитела являются полными молекулами антител длиной (с или без удаления С-концевого остатка лизина тяжелой цепи). В других воплощениях молекулы антитела представляют собой антигенсвязывающие фрагменты. Подходящие фрагменты, связывающие антитела, включают, без ограничения указанным, фрагмент Fab, фрагмент Fab2 или одноцепочечное антитело.

Молекулы антител могут иметь одно или несколько из следующих свойств:

а) связываться с IL-5 человека с равновесной константой аффинности (KD), равной по меньшей мере около 40 пМ, определенной по поверхностным плазмонным резонансом;

b) уменьшать связывание IL-5 с рецептором IL-5;

- 12 042576

c) иметь период полувыведения в сыворотке по меньшей мере около 20 дней; или

d) связывать IL-5 человека и яванского макака, но не IL-5 мыши, крысы или морской свинки.

Также предлагаются фармацевтические композиции, содержащие любую из раскрытых молекул антител.

Также предлагаются молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие любые из раскрытых молекул антител и векторы, содержащие раскрытые молекулы нуклеиновых кислот.

Также предлагаются клетки, трансформированные для экспрессии любой из раскрытых молекул антител.

Способы и применения

Описанные молекулы антител или фармацевтические композиции, содержащие их, могут быть использованы для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным поражением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита и эозинофильного эзофагита. Любые характеристики молекулы антитела, раскрытые в данном документе, в равной степени применимы к антителам, используемым в раскрытых способах и применениях.

Раскрытое в данном документе представляет собой способы лечения объекта, имеющего эозинофильную астму, синдром гиперэозинофилии, полипоз носа с эозинофильной вовлечением, эозинофильный гранулематоз с поливаскулитом, атопический дерматит или эозинофильный эзофагит, включающие введение объекту терапевтически эффективного количества любой из молекул антител, описанные или фармацевтические композиции, содержащие его, для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным поражением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

Также предлагается применение эффективного количества любой из описанных молекул антител, или содержащих их фармацевтических композиций, при лечении эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным вовлечением, эозинофильного гранулематоза с поливаскулитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

Кроме того, предлагается применение любой из описанных молекул антител, или фармацевтических композиций, содержащих их, в производстве лекарственного средства, предназначенного для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным вовлечением, эозинофильного гранулематоза с с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

Примеры

Следующие примеры приведены для дальнейшего описания некоторых из воплощений, раскрытых в данном документе. Примеры предназначены для иллюстрации, а не для ограничения раскрытых воплощений.

Получение антител против IL-5 человека.

Антитела против IL-5 человека были получены из трансгенных крыс (ОМТ) с клонированными в их геномы человеческими V-генами, которые продуцируют антитела с человеческими V-доменами и крысиными Fc-доменами. Вкратце, трансгенных крыс генетически иммунизировали ДНК, кодирующей IL-5, четыре раза в течение 21 дня (в дни 0, 7, 14, 21) и стимулировали рекомбинантным IL-5 человека на 28 день протокола иммунизации. Титры сывороточных антител определяли в дни 0 и 38 протокола иммунизации с помощью анализа ELISA с использованием рекомбинантного IL-5 человека. Вкратце, сыворотки от каждого животного разводили в PBS 1% BSA и тестировали с использованием планшетов ELISA, покрытых 1 мкг/мл IL-5 человека или BSA в качестве контроля. Конъюгат козьего антитела против крысиных IgG с R-фикоэритрином (SouthernBiotech, № 3030-09) использовали в качестве вторичного антитела в концентрации 10 мкг/мл. Конкретные животные были выбраны для слияния гибридом на основе этих сывороточных титров.

Для получения гибридом, которые продуцируют моноклональные антитела к IL-5 человека, спленоциты и/или клетки лимфатических узлов от иммунизированных животных выделяли и объединяли с клетками P3X63Ag8.653 несекретирующей мышиной миеломы (АТСС, CRL-1580). Клетки высевали при около 1x105 клеток/мл в планшеты для микротитрования с плоским дном с последующей двухнедельной инкубацией в селективной среде, которая включала 10% фетальной клональной сыворотки и 1 х HAT (Sigma). Гибридомы размножали путем последовательных пассажей через четыре смены среды в 96луночных планшетах (96-луночные стадии 1-4), затем во флаконах Т25 и, наконец, Т75.

Надосадочные жидкости гибридомных клонов анализировали во время процесса размножения гибридом, первоначально в ELISA на цельных клетках с использованием клеток, трансфицированных GPIзаякоренным IL-5 человека, а затем ELISA с использованием теста ELISA на рекомбинантный IL-5 человека (последний как описано выше). Гибридомы, которые пережили процесс масштабирования до стадии Т75 и которые давали сигналы связывания выше заданного порога в обоих из этих анализов, были заморожены в виде клеточных гранул для клонирования и секвенирования Ig v-доменов. После этих стадий скрининга приблизительно 20 гибридом, продуцирующих химерные IgG, отобрали для клонирования.

Человеческие v-домены из кандидатных химерных IgG выделяли путем получения кДНК из клеточных осадков гибридом, ПЦР-амплификации v-областей, субклонирования и секвенирования ДНК. В

- 13 042576 результате секвенирования этих гибридом было получено около 35 комбинаций тяжелых и легких цепей. Все антитела клонировали в экспрессирующий вектор для млекопитающих и транзиторно трансфицировали в клетки HEK-293. Антитела очищали с использованием стандартных протоколов очистки с протеином А.

Функциональное тестирование и характеризация антител.

Отдельные антитела в формате человеческого IgG1 сначала анализировали на специфичность в ELISA с IL-5 человека. Вкратце, антитела разводили в PBS 0,1% BSA и тестировали с использованием планшетов для ELISA, покрытых 1 мкг/мл IL-5 человека или нерелевантного контрольного белка. Антитело против IgG, конъюгированное с пероксидазой хрена, использовали в качестве вторичного антитела.

Антитела, которые показали иммуноспецифическое связывание с IL-5 человека были ранжированы по активности в анализе IL-5-зависимой пролиферации Т-клеток человека с помощью человеческих клеток TF-1.6G4 (производные от линии эритролейкозных клеток человека TF-1). Клеточную линию TF1.6G4 субклонировали и отбирали для усиления поверхностной экспрессии IL-5R и последовательного пролиферативного ответа на IL-5 человека. Клеточную линию TF-1.6G4 поддерживали в культуре в соответствии со стандартными условиями, используемыми для линии эритролейкозных клеток человека TF-1 (ATCC: CRL-2003). Вкратце, разведения каждого антитела инкубировали в присутствии 45 пМ IL-5 человека и 5х10⁴ клеток TF-1.6G4 на лунку в течение 48 ч и определяли пролиферацию клеток с использованием CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability. Assay (Promega, Висконсин). Все кривые пролиферации и ингибирования были построены с использованием трех- или четырехпараметрической модели доза-ответ в программном обеспечении GraphPad Prism 6 (версия 6.04). Табл. 2 суммирует эти результаты.

Таблица 2

Сводка данных скрининга и характеризации первоначальной тестовой панели в формате IgG1

Тестируемое антитело	IC50 (пМ) в TF1,6G4	Равновесная аффинность (Kd)	ингибирует связывание с IL-5Ra	Специфичность, подтвержденная с помощью ELISA
ЗА5	35,07	36 пМ	Да	Да
1АЗ	55,5	18 пМ	Да	Да
2В4	56,75	42 пМ	Да	Да
6G10	72,34	61 пМ	Да	Да
1Е8	72,45	28 пМ	Да	Да
3G4	80,92	41 пМ	Да	Да
6С9	81,89	41 пМ	Да	Да
5Н1	86,42	36 пМ	Да	Да
1Н10	93,26	18 пМ	Да	Да
5Н11	109,3	36 пМ	Нет	Да
5G9	184,4	52 пМ	Да	Да
1В2	214,4	45 пМ	Да	Да

В табл. 2 результаты тестов ранжированы в порядке эффективности анализа на TF1.6G4. Первоначальная тестовая панель была выбрана на основе активности, аффинности, ингибирования IL-5R и последовательностей (иммуногенность и проявляющая способность).

Для определения аффинности тестируемых антител к рекомбинантному IL-5 человека и их активности при ингибировании связывания IL-5Ra с IL-5 человека были использованы анализы Biacore. Табл. 2 суммирует эти результаты. Аффинность связывания тестируемых антител с IL-5 человека (KD; фиг. 6) определяли с помощью системы Biacore T200 (GE Healthcare), покрывая сенсорный чип Biacore Series S Sensor Chip Protein A (GE Healthcare) выбранным очищенным антителом IgG с уровнем захвата 75 RU, затем вводили рекомбинантный IL-5 человека со скоростью 60 мкл/мин в 7-стадийном диапазоне двукратного серийного разведения, начиная с 1 мкг/мл. Все эксперименты проводили с использованием буфера HBS-EP+ (GE Healthcare). Полученные сенсограммы имели двойной контроль (значения тестируемой проточной ячейки вычитали из значений проточной ячейки контроля (поверхность с протеином А без антитела), а также пустого буфера). Константы связывания определяли путем подгонки модели связывания Ленгмюра 1:1 к сенсограммам с двойным контролем.

Для того, чтобы определить, ингибирует ли каждое тестируемое антитело связывание IL-5 с IL5Ra, использовали либо систему Biacore T200, либо систему Biacore 3000 (GE Healthcare). Чип датчика Biacore CM5 сначала дериватизировали с помощью набора для захвата Fab (GE Healthcare) в соответствии с инструкциями производителя на двух соседних (тестируемая и контрольная) проточных ячейках. Эту поверхность использовали для захвата каждого очищенного тестируемого антитела IgG на одной

- 14 042576 тестируемой проточной ячейке. Затем через тестовую и контрольную проточные ячейки вводили рекомбинантный IL-5 человека в концентрации 5 мкг/мл или пустой буфер для насыщения поверхности тестируемой проточной ячейки и контроля неспецифической ассоциации IL-5, соответственно. Вторую инъекцию очищенного тестируемого антитела IgG в концентрации 10 мкг/мл или пустого буфера выполняли на тестируемой проточной ячейке для блокирования свободных сайтов связывания IL-5 и контроля диссоциации тестируемого антитела IgG от антитела, захватывающего Fab, соответственно.

Последующие инъекции IL-5Ra-Fc (R & D Systems) в концентрации 5 или 20 мкг/мл или пустого буфера через обе проточные ячейки использовали для определения блокирует ли тестируемое антитело IgG, взаимодействие между IL-5 и IL-5Ra или для контроля диссоциации антитела IgG от антитела захвата Fab во время этой стадии. Антитела, которые ингибировали связывание IL-5 с IL-5R, демонстрировали заметно сниженный сигнал при инъекции IL-5R (табл. 2). Способ тройного вычитания контроля использовали для анализа данных, как описано выше. Все данные были экспортированы из оценочного программного обеспечения Biacore и вычтены в программном обеспечении Excel (Microsoft). Все эксперименты проводили с использованием буфера HBS-EP+ (GE Healthcare).

На основании этих результатов была выбрана меньшая панель тестируемых антител (3А5, 2В4 и 5Н11 в табл. 2). Антитела были переформатированы в человеческий IgG4 и протестированы в тех же анализах. IgG4-Bepcra антитела 3А5 (первоначально IgG1) была обозначена как 3А5.001. Было продемонстрировано, что это полностью человеческое антитело обладает эффективностью, эквивалентной исходному тесту 3А5 в формате IgGl (фиг. 1).

Вариант антитела 3А5.001 (обозначенный 3А5.040) получали с конкретными аминокислотными заменами (VH: S[68]T, N[82A]S; VL: S[2]Y, I[3]V, Y[92]D, где остатки в квадратных скобках представляют положения Kabat), введенные в области V-домена для удаления спрогнозированных Т-клеточных эпитопов. Было продемонстрировано, что в анализе с TF-1.6G4 антитело 3А5.040 обладает активностью, эквивалентной его родительскому антителу 3А5.001 (фиг. 2).

Сканирование CDR антитела 3А5.040.

Получение вариантов антитела 3А5.040 - варианты антитела 3А5.040 с одной мутацией были сделаны путем замены одной из группы из девяти репрезентативных аминокислот -A, S, L, Y, D, Q, K, Н, W- в каждом аминокислотном положении в CDR1 легкой цепи (CDR-L1), CDR2 легкой цепи (CDR-L2), CDR1 тяжелой цепи (CDR-H1) и CDR2 тяжелой цепи (CDR-H2) (определенных по номенклатуре AbM). Варианты антител также были созданы путем замены одной из группы из десяти репрезентативных аминокислот-А, S, L, Y, D, Q, K, Н, W, Р- в каждом аминокислотном положении CDR в CDR3 легкой цепи (CDR-L3), CDR3 тяжелой цепи (CDR-H3) и в положениях Kabat 93 и 94 в вариабельной области тяжелой цепи. Полный список всех созданных вариантов одного мутантного антитела показан на фиг. 3 (вариабельная тяжелая цепь) и фиг. 4 (вариабельная легкая цепь), соответственно.

Конструирование векторов экспрессии антител - варианты вариабельной. области были получены с помощью обратной трансляции аминокислотных последовательностей в ДНК-последовательности, которые впоследствии были синтезированы de novo путем сборки синтетических олигонуклеотидов. Варианты вариабельной тяжелой цепи (VH) субклонировали в экспрессирующий вектор для млекопитающих, содержащий константную область человека, для получения полноразмерных тяжелых цепей антител человека (домены СН1, шарнирные, СН2 и СН3 тяжелой цепи человеческого IgG4). Сходным образом варианты вариабельной легкой цепи (VL) субклонировали в экспрессирующий вектор для млекопитающих, содержащий константную область легкой цепи лямбда человека, для получения полноразмерных лямбдацепей антител.

Экспрессия вариантов антител - антитела были получены путем совместной трансфекции отдельных экспрессирующих векторов, кодирующих тяжелые цепи и легкие цепи антитела в клетках EXPI293® (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния). Каждая цепь с одной мутацией была спарена с родительской цепью для экспрессии белка в системе EXPI293®. Для каждых 20 мл трансфекции требовалось 3,6x107 клеток в 20 мл среды для экспрессии EXPI293®. За день до трансфекции клетки высевали с плотностью 0,9x106 жизнеспособных клеток/мл и инкубировали в течение ночи при 37°С в увлажненной атмосфере с 8% CO₂ в воздухе на орбитальном шейкере, вращающемся со скоростью 200 об/мин. В день трансфекции количество клеток и их жизнеспособность определяли с использованием автоматического счетчика клеток. Использовали только культуры с>98% жизнеспособных клеток. Для каждых 20 мл трансфекции липид-ДНК-комплексы готовили путем разбавления 10 мкг ДНК тяжелой цепи и 10 мкг ДНК легкой цепи в среде со сниженным количеством сыворотки OPTI-MEM® I (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) (кат. № 31985-062) до общего объема 1,0 мл. 54 мкл реагента EXPIFECTAMINE® 293 (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) разводили в среде OPTI-MEM® I до общего объема 1,0 мл. Оба флакона осторожно перемешивали и инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре. После инкубации разбавленную ДНК смешивали с разведенным реагентом EXPIFECTAMINE® 293 и смесью ДНК-реагент EXPIFECTAMINE® 293 и инкубировали еще 20 мин при комнатной температуре для образования комплексов ДНК-реагент EXPIFECTAMINE® 293. После инкубации 2 мл комплекса ДНК-реагент EXPIFECTAMINE® 293 добавляли в каждую биореакторную пробирку емкостью 50 мл (ТРР Techno Plastic

- 15 042576

Products AG). 2 мл среды OPTI-MEM® I (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) добавляли в пробирку с отрицательным контролем вместо комплекса ДНК-реагент EXPIFECTAMINE® 293. Клетки инкубировали в инкубаторе при 37°С с увлажненной атмосферой с 8% СО₂ в воздухе на орбитальном шейкере, вращающемся со скоростью 200 об/мин. Приблизительно через 16-18 ч после трансфекции в каждый биореактор добавляли 100 мкл усилителя трансфекции EXPIFECTAMINE® 293 Transfection Enhancer 1 и 1,0 мл усилителя трансфекции EXPIFECTAMINE® 293 Transfection Enhancer 2. Надосадочные жидкости собирали через около 48 ч после трансфекции.

Очистка вариантов антител - каждый вариант антитела экспрессировали в клетках EXPI293® либо в 20, либо в 100 мл клеточной культуры. Культуры центрифугировали в 50 мл пробирках типа Falcon при 3000 g в течение 20 мин и надосадочные жидкости фильтровали с использованием фильтра 0,22 мкм. Надосадочные жидкости очищали с использованием робота Gilson ASPEC GX274. Вкратце, картриджи SPE (Agilent, 12131014), заполненные 1,2 мл смолой с протеином A MABSELECT SURE® (GE Healthcare), предварительно уравновешивали 3 объемами колонки 1X PBS. Надосадочную жидкость пропускали через колонки с последующей промывкой 4 мл 1X PBS. Каждую колонку промывали 9 мл 1 М лимонной кислоты, рН 2,9. Антитела элюировали 2 мл 0,1 М лимонной кислоты, рН 2,9. Антитела обессоливали в S0rensens PBS (5 мМ KH₂PO₄, 3 мМ Na₂HPO42Н₂О, 145,4 мМ NaCl (рН ~5,8)) с использованием колонок PD-10 (GE Healthcare).

Определение титра вариантного антитела 3А5.040 в надосадочной жидкости с помощью Biacore надосадочную жидкость, содержащую антитела из экспрессии в клетках EXPI293® анализировали с использованием чипа Protein A series S на Biacore Т200 для того, чтобы определить их титр и ранжировать их по отношению к родительскому антителу 3А5.040. Каждый образец надосадочной жидкости разбавляли рабочим буфером (1xHBS-EP+, 350 мМ NaCl) и переносили инъекцией со скоростью 60 мкл/мин в проточную ячейку (FC) 2. Результирующий уровень захвата в единицах ответа (RU) измеряли на FC 2-1 путем вычитания точки отчета через 5 с после начала цикла из точки отчета через 5 с после введения. Поверхность регенерировали путем впрыскивания 50 мМ NaOH в течение 12 с при скорости потока 60 мкл/мин на FC 1 и 2 каждые 4 цикла. После каждой регенерации поверхность и сенсограмму стабилизировали в течение 120 с путем введения рабочего буфера. Из-за большого количества антител, которые были подвергнуты скринингу таким образом, было проведено множество прогонов партий.

Уровни захвата (в единицах ответа Biacore RU), полученные для каждого образца надосадочной жидкости были скорректированы путем умножения значения, полученного для каждой инъекции 30 сек на коэффициент разбавления надосадочной жидкости, что позволяет сравнить уровни захвата между надосадочными жидкостями разбавленными в разной степени среди разных экспериментальных прогонов. Относительный уровень экспрессии антител (титр) каждого мутанта сравнивали с надосадочной жидкостью, специфичной для партии 3А5.040 (табл. 3) с использованием следующей формулы:

(скорректированный RU эталонного 3А5.040 для 30-секундной инъекции/скорректированный RU вариантного антитела для 30-секундной инъекции) х100 = пропорциональный титр родительского антитела (% титра 3А5.040)

Формула 1

Вариантные антитела с более высоким титром, чем родительское антитело 3А5.040 имели значение % титра 3А5.040>100%, а антитела с более низким титром, имеют значение <100%. Это позволило идентифицировать вариантные антитела, которые могли бы иметь улучшенную экспрессию по сравнению с родительским антителом 3А5.040. Титры некоторых вариантов не определяли анализом Biacore образцов надосадочных жидкостей, но экспрессировали и очищали, как указано выше, и их очищенные выходы определяли спектрофотометрическим анализом (А₂₈₀), а затем сравнивали с родительским антителом 3А5.040 (табл. 5).

Определение IL-5-связывающей кинетики вариантного антитела 3А5.040 с помощью Biacore - надосадочную жидкость, содержащую антитела из экспрессии в клетках EXPI293® или очищенные антитела анализировали с использованием чипа Protein A series S в системе Biacore T200 (GE Healthcare), определяли их аффинность связывания с рекомбинантным IL-5 человека и ранжировали их по отношению к родительскому антителу 3А5.040.

Каждое антитело разводили в рабочем буфере (1xHBS-EP+, 350 мМ NaCl), и захватывали при 60 мкл/мин до около 50 RU на FC 2. Затем поверхность и сенсограмму стабилизировали в течение 120 с путем введения рабочего буфера. Рекомбинантный IL-5 человека в концентрации 5 мкг/мл или рабочий буфер вводили в FC 1 и 2 со скоростью потока 60 мкл/мин в течение 70 с. IL-5 давали возможность диссоциировать в рабочем буфере в течение 300 с. Поверхность регенерировали путем впрыскивания 50 мМ NaOH в течение 12 с при скорости потока 60 мкл/мин в FC 1 и 2. Буфер вводили для дальнейшего дрейфа при очистке в течение 60 с при скорости потока 60 мкл/мин на FC 1 и 2. Поверхность стабилизировали в течение 300 с с помощью проточного буфера над FC 1 и 2. Надосадочную жидкость, содержащую родительское антитело 3А5.040 и которое было трансфецировано каждой партией, прогоняли примерно каждые 25 циклов в течение каждого прогона. Очищенный образец 3А5.040 и изотипического контрольного IgG4 лямбда прогоняли с каждой партией для измерения вариативности результатов между анализами.

- 16 042576

Из-за большого количества антител, которые были подвергнуты скринингу таким образом, было проведено множество прогонов партий.

Данные имели двойной контроль (проточная ячейка 2 вычиталась из проточной ячейки 1 и пустого буфера) и сенсограммы подгонялись к модели связывания Ленгмюра 1:1 с помощью программного обеспечения Biacore Evaluation. Значение kd (скорость диссоциации) рассчитывали для каждого образца надосадочной жидкости 3А5.040 на протяжении всего цикла, и они были усреднены для получения эталонного kd, за исключением прогона 2.1, в котором был только один образец надосадочной жидкости 3А5.040 (табл. 3 и 6-11). Рассчитанное значение kd для каждого антитела надосадочной жидкости сравнивали со средним эталонным kd 3A5.040 по следующей формуле:

(эталонное kd 3A5.040/kd вариантного антитела) х100 = пропорциональное kd родительского антитела (% 3А5.040 kd)

Формула 2

Вариантные антитела с более низким kd (более медленная скорость диссоциации), чем родительское антитело 3А5.040, имели значение % 3А5.040 kd>100%, а антитела с более высоким kd (более быстрой скоростью диссоциации) имели значение <100%. Это позволило идентифицировать вариантные антитела, которые могли бы улучшить кинетику связывания с IL-5 и, следовательно, улучшить функцию по сравнению с родительским антителом, 3А5.040. Для вариантов, в которых был получен только очищенный белок (Табл. 6), кинетический анализ Biacore проводили в трех повторах, как указано выше, с использованием этих очищенных антител, а средние значения из каждого анализа в трех повторах использовали для выполнения расчета пропорционального kd, как указано выше (табл. 4 и 8-11).

Таблица 3

Определение титра антитела-варианта 3А5.040 в надосадочной жидкости и кинетики связывания с IL-5 с помощью Biacore

№ прогона	ID Антитела	Номер параллельного анализа	Аминокислотная замена	Уровень захвата	ка (1/Мс)	kd (1/с)	KD (М)	Rmax (RU)	% ЗА5,040 kd	% титра ЗА5,040
1.1	ЗА5.040	1	Дикий тип	51,6	7,20Е+05	1Д5Е-04	1,60Е-10	16,3
1.1	ЗА5.040	2	Дикий тип	51,6	7,27Е+05	8,96Е-05	1,23Е-10	16,6
1.1	ЗА5.040	3	Дикий тип	51,8	7Д8Е+05	9,21Е-05	1,28Е-10	16,7
1.1	ЗА5.040	4	Дикий тип	52	6,96Е+05	9,95Е-05	1,43Е-10	16,8
1.1	ЗА5.040	Среднее	Дикий тип	51,75	7,15Е+05	9,91Е-05	1,39Е-10	16,6	100	100
1.1	Изотип IgG4			54,4	N/A	N/A	N/A	0,7	N/A	N/A
1.1	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	56,4	7Д7Е+05	1,06Е-04	1,48Е-10	17,8	93,0
1.1	3A5.304		VHG26A	54,6	7,41Е+05	7,73Е-05	1,04Е-10	17,1	128	49
1.1	3A5.305		VHG26S	53,1	7,36Е+05	1,09Е-04	1,48Е-10	16,7	91	59
1.1	3A5.306		VHG26L	49,1	7,49Е+05	8,74Е-05	1Д7Е-10	15,6	ИЗ	15
1.1	3A5.308		VHG26D	52,5	6,75Е+05	8,57Е-05	1,27Е-10	16,4	116	61
1.1	3A5.309		VHG26Q	55,1	7,47Е+05	9,23Е-05	1,24Е-10	17,4	107	86
1.1	3A5.310		VHG26K	51,8	7,36Е+05	1,01Е-04	1,37Е-10	16,4	98	100
1.1	3A5.311		VHG26H	50,9	7,60Е+05	1Д1Е-04	1,46Е-10	16,3	89	85
1.1	3A5.312		VHG26W	56,1	8,54Е+05	1,21Е-04	1,41Е-10	18	82	107
1.1	3A5.313		VHG27A	54,5	6,97Е+05	1Д7Е-04	1,68Е-10	17,3	85	99
1.1	3A5.314		VHG27S	50,9	7Д6Е+05	9,81Е-05	1,37Е-10	16,2	101	95
1.1	3A5.315		VHG27L	54,3	7,01Е+05	1,31Е-04	1,87Е-10	17,1	76	118
1.1	3A5.316		VHG27Y	56	6,66Е+05	8,56Е-04	1,29Е-09	16,9	12	80
1.1	3A5.317		VHG27D	57,4	6,56Е+05	1Д6Е-04	1,76Е-10	17,8	85	73
1.1	3A5.318		VHG27Q	55,2	7,31Е+05	1,49Е-04	2,04Е-10	17,4	67	82
1.1	3A5.319		VHG27K	54,8	7,70Е+05	2,04Е-04	2,65Е-10	17,5	49	95
1.1	3A5.320		VHG27H	54,4	7Д2Е+05	2,43Е-04	3,42Е-10	16,9	41	71

- 17 042576

1.1	3A5.322		VHS28A	58	7,49E+05	l,05E-04	l,41E-10	18	94	62
1.1	3A5.323		VHS28L	53,8	7,18E+05	9,30E-05	l,30E-10	17	107	70
1.1	3A5.324		VHS28Y	54,8	8,13E+05	8,60E-05	l,06E-10	17	115	51
1.1	3A5.325		VHS28D	54,9	6,03E+05	9,16E-05	l,52E-10	17	108	68
1.1	3A5.326		VHS28Q	56,9	6,78E+05	9,97E-05	l,47E-10	17,7	99	77
1.1	3A5.327		VHS28K	53,7	7,22E+05	l,15E-04	l,59E-10	16,9	86	84
1.1	3A5.328		VHS28H	54	7,82E+05	l,23E-04	l,57E-10	16,9	81	71
1.1	3A5.329		VHS28W	55	8,33E+05	l,36E-04	l,63E-10	17	73	41
1.1	3A5.330		VHI29A	56,3	6,54E+05	l,69E-04	2,58E-10	16,8	59	30
1.1	3A5.331		VHI29S	53,3	5,87E+05	2,04E-04	3,48E-10	15,7	49	28
1.1	3A5.332		VHI29L	55,3	8,26E+05	l,16E-04	l,41E-10	17,5	85	75
1.1	3A5.333		VHI29Y	55,4	5,44E+05	9,31E-04	l,71E-09	15,7	11	24
1.1	3A5.334		VHI29D	52,8	3,53E+06	5,37E-03	l,52E-09	H,9	2	21
1.1	3A5.336		VHI29K	53,7	6,17E+05	6,75E-04	l,10E-09	14,8	15	29
1.1	3A5.338		VHI29W	56,6	l,31E+06	2,34E-03	l,78E-09	14,9	4	38
1.1	3A5.340		VHS30L	48,7	6,51E+05	l,47E-04	2,25E-10	15,6	67	153
1.1	3A5.341		VHS30Y	54,3	7,54E+05	l,37E-04	l,82E-10	17,3	72	103
1.1	3A5.342		VHS30D	54,9	6,17E+05	l,23E-04	2,OOE-10	17,4	81	103
1.1	3A5.347		VHN31A	53,8	7,53E+05	6,75E-04	8,97E-10	17,3	15	118
1.1	3A5.348		VHN31S	54,6	7,82E+05	5,03E-04	6,44E-10	17,7	20	107
1.1	3A5.350		VHN31Y	56,2	9,01E+05	8,80E-04	9,76E-10	17,6	11	NE
1.1	3A5.351		VHN31D	59,8	6,40E+05	2,03E-04	3,17E-10	19,2	49	75
1.1	3A5.352		VHN31Q	54,8	6,93E+05	4,21E-04	6,07E-10	17,7	24	156
1.1	3A5.353		VHN31K	55,5	6,85E+05	7,54E-04	l,10E-09	17,7	13	170
1.1	3A5.354		VHN31H	53,7	7,63E+05	l,32E-04	l,73E-10	17,5	75	143
1.1	3A5.356		VHG32A	52,3	5,25E+05	3,02E-04	5,76E-10	16,4	33	179
1.1	3A5.357		VHG32S	49,2	6,02E+05	l,23E-03	2,04E-09	15,3	8	153
1.1	3A5.495		VHS94K	55	6,76E+05	2,91E-04	4,31E-10	17,6	34	127
1.1	3A5.497		VHS94W	56,8	l,67E+06	2,92E-03	l,75E-09	12,5	3	38
1.1	3A5.498		VHS94P	55,5	4,45E+05	l,17E-04	2,63E-10	16	85	17
1.1	3A5.500		VHL95S	2,7					NE	NE
1.1	3A5.504		VHL95K	51,7	l,53E+06	3,12E-03	2,03E-09	11,3		67
1.1	3A5.505		VHL95H	52,9	5,59E+05	6,66E-04	l,19E-09	16,3	15	88
1.1	3A5.507		VHL95P	54,7					NB	40
1.1	3A5.509		VHG96S	54,4	5,94E+05	l,92E-04	3,23E-10	17	52	88
1.1	3A5.510		VHG96L	54	4,11E+O6	7,90E-03	l,92E-09	8,5	1	63
1.1	3A5.513		VHG96Q	54,8	4,45E+05	5,13E-04	l,15E-09	16,5	19	64
1.1	3A5.514		VHG96K	54,9	5,14E+06	6,84E-03	1,33E-O9	H,4	1	147
1.1	3A5.515		VHG96H	53,2	4,37E+05	l,20E-03	2,74E-09	15,3	8	117
1.1	3A5.516		VHG96W	53	l,31E+06	l,40E-02	l,07E-08	6,7	1	55
1.1	3A5.517		VHG96P	47,8	l,35E+05	5,04E-04	3,73E-09	H,7	20	15
1.1	3A5.518		VHN97A	52	5,35E+05	l,72E-04	3,21E-10	16,3	58	95
1.1	3A5.520		VHN97L	54,5	4,73E+05	1,11E-O4	2,35E-10	16	89	96
1.1	3A5.521		VHN97Y	54,7	5,05E+05	3,34E-04	6,62E-10	16,1	30	75
1.1	3A5.523		VHN97Q	53,7	5,06E+05	9,79E-05	l,94E-10	16,6	101	127
1.1	3A5.524		VHN97K	52,5	2,89E+05	l,37E-04	4,75E-10	15,1	72	167
1.1	3A5.525		VHN97H	53,1	4Д1Е+05	2,14E-04	5,20E-10	15	46	113
1.1	3A5.526		VHN97W	53,7	5,28E+05	5,26E-04	9,95E-10	15,5	19	56
1.1	3A5.527		VHN97P	55,1	4,21E+05	4,38E-04	l,04E-09	15,5	23	68
1.1	3A5.528		VHW98A	57,6	7,26E+05	l,87E-04	2,57E-10	18,4	53	114
1.1	3A5.529		VHW98S	53,9	6,23E+05	2,36E-04	3,78E-10	16,8	42	83
1.1	3A5.530		VHW98L	54,3	3,38E+05	l,72E-04	5,08E-10	14,9	58	38

- 18 042576

1.1	3A5.531		VHW98Y	56,3	7Д5Е+05	1Д2Е-04	1,56Е-10	18,1	88	143
1.1	3A5.532		VHW98D	56,4	2Д7Е+05	8,87Е-05	4,09Е-10	14,6	112	42
1.1	3A5.533		VHW98Q	53,8	5Д1Е+05	1,54Е-04	3,08Е-10	15,8	64	51
1.1	3A5.534		VHW98K	53,4	3,46Е+05	8,25Е-04	2,38Е-09	И,5	12	73
1.1	3A5.535		VHW98H	53,8	6ДЗЕ+05	1,45Е-04	2,37Е-10	17	68	81
1.1	3A5.536		VHW98P	56,1	9,97Е+04	8Д7Е-04	8,20Е-09	14,2	12	31
1.1	3A5.537		VH F99A	54,2	1,54Е+05	4,90Е-04	ЗД8Е-09	13,7	20	37
1.1	3A5.538		VH F99S	53,3	1Д8Е+05	1,02Е-03	8,67Е-09	9,9	10	40
1.1	3A5.539		VH F99L	54,2	7Д5Е+05	1Д5Е-04	1,63Е-10	16,7	86	55
1.1	3A5.540		VHF99Y	55,6	5,27Е+05	9ДЗЕ-05	1,73Е-10	14,9	109	41
1.1	3A5.541		VH F99D	53,9	1,46Е+05	1Д1Е-02	7,56Е-08	4,4	1	32
1.1	3A5.542		VHF99Q	53,8	9,93Е+04	1,00Е-03	1,01Е-08	13	10	35
1.1	3A5.543		VH F99K	54,6					NB	38
1.1	3A5.544		VHF99H	54,8	2Д5Е+05	9,50Е-05	4,64Е-10	14,5	104	41
1.1	3A5.545		VH F99W	54,5	5,35Е+04	4,09Е-04	7,66Е-09	6	24	29
1.1	3A5.546		VHF99P	53,1					NB	43
1.1	3A5.547		VH D101A	55,6	1,68Е+05	1,40Е-04	8,37Е-10	14,7	71	69
1.1	3A5.548		VHD101S	55,2	2,38Е+05	1Д1Е-04	4,67Е-10	15,3	89	78
1.1	3A5.549		VH D101L	53,6	5,94Е+05	4,76Е-04	8,01Е-10	16,3	21	43
1.1	3A5.551		VHD101Q	54,5	5,93Е+05	2Д9Е-04	3,69Е-10	17,1	45	78
1.2	3A5.040	1	Дикий тип	50,3	7,40Е+05	1,ЗЗЕ-04	1,80Е-10	16,3
1.2	3A5.040	2	Дикий тип	50,3	7Д4Е+05	8,22Е-05	1Д5Е-10	16,1
1.2	3A5.040		Дикий тип	50	7,28Е+05	1,01Е-04	1,39Е-10	16,1
1.2	3A5.040	4	Дикий тип	50,2	7,32Е+05	1Д0Е-04	1,50Е-10	16,2
1.2	3A5.040	5	Дикий тип	50,1	7,27Е+05	9,36Е-05	1,29Е-10	16,1
1.2	3A5.040	Среднее	Дикий тип	50,2	7,28Е+05	1,04Е-04	1,43Е-10	16,2	100	100
1.2	Изотип IgG4			50,8	N/A	N/A	N/A	0	N/A
1.2	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	52,6	7,35Е+05	1Д1Е-04	1,51Е-10	16,6	94
1.2	3A5.553		VHD101H	51,9	4,41Е+05	1,63Е-04	3,69Е-10	15,5	64	66
1.2	ЗА5.555		VHD101P	51,3	7,54Е+03	8,00Е-04	1,06Е-07	23,6	13	39
1.2	ЗА5.556		VH_Y102A	50,6	6,60Е+05	8,94Е-05	1,35Е-10	16,4	116	106
1.2	ЗА5.557		VH_Y102S	53,5	6,85Е+05	1Д1Е-04	1,61Е-10	17,2	94	135
1.2	ЗА5.558		VH_Y102L	53,2	7,40Е+05	1Д4Е-04	1,54Е-10	16,8	91	51
1.2	ЗА5.559		VHY102D	52,8	7,03Е+05	1,41Е-04	2,01Е-10	16,7	74	51
1.2	ЗА5.560		VHY102Q	52,6	7Д4Е+05	1,08Е-04	1,51Е-10	16,9	96	87
1.2	ЗА5.561		VHY102K	55,9	7,23Е+05	8,01Е-05	1Д1Е-10	17,7	130	90
1.2	ЗА5.562		VHY102H	50,4	7,22Е+05	1,00Е-04	1,39Е-10	16,4	104	132
1.2	3A5.563		VHY102W	50,9	7,51Е+05	1Д6Е-04	1,54Е-10	16,8	90	117
1.2	ЗА5.564		VH_Y102P	53	6,44Е+05	1,29Е-04	2,01Е-10	15	81	32
2.1	ЗА5.040	1	Дикий тип	68,5	7ДЗЕ+05	1Д6Е-04	1,63Е-10	22,6
2.1	ЗА5.040	Среднее	Дикий тип	68,5	7ДЗЕ+05	1,16Е-04	1,63Е-10	22,6	100	100
2.1	Изотип IgG4			60,7	N/A	N/A	N/A	1,6	N/A
2.1	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	75,6	7,37Е+05	1,05Е-04	1,42Е-10	24,3	110
2.1	ЗА5.048		VLG24A	69	7Д6Е+05	9Д8Е-05	1,28Е-10	22,7	126	104
2.1	ЗА5.049		VLG24S	72,5	6,98Е+05	1,03Е-04	1,47Е-10	23,7	ИЗ	104
2.1	ЗА5.050		VLG24L	73,8	6,79Е+05	8ДЗЕ-05	1,20Е-10	23,9	143	103
2.1	ЗА5.051		VLG24Y	61,7	6,40Е+05	1Д2Е-04	1,75Е-10	20,3	104	91
2.1	ЗА5.052		VLG24D	66,7	7Д6Е+05	9,71Е-05	1,36Е-10	21,9	119	104

- 19 042576

2.1	3A5.053		VLG24Q	72,6	6,99Е+05	9,84Е-05	1,41Е-10	23,6	118	95
2.1	3A5.054		VLG24K	74,2	7Д2Е+05	9,59Е-05	1,35Е-10	24,1	121	98
2.1	3A5.055		VLG24H	60,9	6,90Е+05	9Д7Е-05	1,ЗЗЕ-10	20,2	126	99
2.1	3A5.056		VLG24W	64,4	6,41Е+05	8,06Е-05	1,26Е-10	21Д	144	111
2.1	3A5.057		VLG25A	69,9	7,04Е+05	8,75Е-05	1,24Е-10	22,9	133	109
2.1	3A5.059		VLG25L	63,1	7Д6Е+05	1,04Е-04	1,45Е-10	21	112	83
2.1	3A5.060		VLG25Y	67,7	7Д5Е+05	8,55Е-05	1,21Е-10	22,2	136	96
2.1	3A5.061		VLG25D	71,9	7,26Е+05	1Д1Е-04	1,53Е-10	23,4	105	94
2.1	3A5.062		VLG25Q	73,2	6,52Е+05	9,24Е-05	1,42Е-10	23,5	126	94
2.1	3A5.064		VLG25H	60,4	6,90Е+05	9,21Е-05	1,ЗЗЕ-10	20,1	126	108
2.1	3A5.065		VLG25W	70,8	7,37Е+05	8,97Е-05	1,22Е-10	23,1	129	81
2.1	3A5.066		VL_N26A	76,8	7,27Е+05	8,75Е-05	1,20Е-10	24,7	133	77
2.1	3A5.069		VLN26Y	71,2	6,79Е+05	8,73Е-05	1,28Е-10	22,9	133	100
2.1	3A5.070		VLN26D	62,7	7,22Е+05	7,87Е-05	1,09Е-10	20,7	147	95
2.1	3A5.071		VLN26Q	67,4	7Д5Е+05	1,08Е-04	1,53Е-10	22	107	95
2.1	3A5.072		VLN26K	69,7	7,04Е+05	1Д7Е-04	1,66Е-10	22,7	99	99
2.1	3A5.073		VLN26H	74,8	7Д5Е+05	1Д1Е-04	1,55Е-10	24	105	95
2.1	3A5.074		VLN26W	62,6	6,41Е+05	9,82Е-05	1,53Е-10	20,3	118	87
2.1	3A5.075		VL_N27A	62,7	6,55Е+05	9,29Е-05	1,42Е-10	20,7	125	120
2.1	3A5.076		VL_N27S	71,7	7,04Е+05	1,09Е-04	1,55Е-10	23,2	106	93
2.1	3A5.077		VL_N27L	71,7	6,73Е+05	8,98Е-05	1,ЗЗЕ-10	23,4	129	102
2.1	3A5.078		VL_N27Y	61,5	6Д6Е+05	1,02Е-04	1,65Е-10	20,3	114	103
2.1	3A5.080		VLN27Q	68,3	6,52Е+05	1,07Е-04	1,64Е-10	22,1	108	91
2.1	3A5.081		VL_N27K	71,5	6,89Е+05	8,84Е-05	1,28Е-10	23,2	131	96
2.1	3A5.082		VLN27H	74,7	7,06Е+05	7,85Е-05	1,11Е-10	24,1	148	90
2.1	3A5.084		VLI28A	62,1	6,71Е+05	6,20Е-05	9,24Е-11	20,3	187	91
2.1	3A5.085		VLI28S	91,9	6,37Е+05	1Д6Е-04	1,82Е-10	31,3	100	47
2.1	3A5.086		VLI28L	81,5	6,02Е+05	1,04Е-04	1,73Е-10	27,2	112	62
2.1	3A5.087		VLI28Y	73,1	7Д7Е+05	8,52Е-05	1,20Е-10	23,8	136	93
2.1	3A5.088		VLI28D	80,3	5,56Е+05	9,83Е-05	1,77Е-10	27,9	118	40
2.1	3A5.089		VLI28Q	79,8	5,80Е+05	1,03Е-04	1,77Е-10	27,8	ИЗ	54
2.1	3A5.093		VLG29A	68,4	5,42Е+05	1Д0Е-04	2,04Е-10	22,6	105	59
2.1	3A5.094		VL_G29S	67,6	6,98Е+05	9,31Е-05	1,ЗЗЕ-10	21,9	119	93
2.2	3A5.040	1	Дикий тип	52,4	7,77Е+05	1,05Е-04	1,35Е-10	17,9
2.2	3A5.040	2	Дикий тип	52,7	7,89Е+05	1,09Е-04	1,38Е-10	17,9
2.2	3A5.040	3	Дикий тип	52,7	7,72Е+05	1,37Е-04	1,77Е-10	18,1
2.2	3A5.040	Среднее	Дикий тип	52,6	7,79Е+05	1Д7Е-04	1,50Е-10	17,9	100	100
2.2	Изотип IgG4			56,6	N/A	N/A	N/A	0,5	N/A
2.2	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	54,9	7,93Е+05	1,06Е-04	1,ЗЗЕ-10	18,7	110
2.2	ЗА5.095		VL_G29L	55,4	7Д7Е+05	9,08Е-05	1,27Е-10	18,7	122	75
2.2	ЗА5.096		VLG29Y	56,7	6,92Е+05	1,ЗЗЕ-04	1,92Е-10	19,2	83	58
2.2	ЗА5.097		VLG29D	56,2	7,31Е+05	7Д9Е-05	9,84Е-11	18,7	154	85
2.2	ЗА5.099		VLG29K	49,9	7Д8Е+05	9,08Е-05	1,26Е-10	17,2	122	71
2.2	ЗА5.100		VLG29H	52	7,38Е+05	8,65Е-05	1Д7Е-10	17,7	128	100
2.2	ЗА5.101		VLG29W	55,8	7,59Е+05	9,40Е-05	1,24Е-10	18,7	118	114
2.2	ЗА5.102		VL_S30A	56,3	6,85Е+05	1,09Е-04	1,58Е-10	18,7	102	84
2.2	ЗА5.1ОЗ		VLS30L	49,5	7,87Е+05	9,94Е-05	1,26Е-10	16,9	112	126
2.2	ЗА5.104		VL_S30Y	54,7	8Д7Е+05	1,08Е-04	1,ЗЗЕ-10	18,5	103	93
2.2	ЗА5.105		VLS30D	56,4	8,20Е+05	8,91Е-05	1,09Е-10	18,8	125	119
2.2	ЗА5.106		VL_S30Q	58,3	7,22Е+05	9Д0Е-05	1,26Е-10	19,7	122	78

- 20 042576

2.2	3A5.107		VLS30K	50,6	7,85Е+05	7,34Е-05	9,34Е-11	17,3	151	102
2.2	3A5.113		VLK31Y	53,8	8,35Е+05	8,73Е-05	1,05Е-10	18,4	127	99
2.2	3A5.114		VLK31D	54,5	4,89Е+05	4,73Е-04	9,65Е-10	17,9	23	105
2.2	3A5.115		VLK31Q	57,9	4,65Е+05	4,60Е-04	9,91Е-10	19	24	85
2.2	3A5.116		VLK31H	49,5	5,52Е+05	2,46Е-04	4,46Е-10	16,7	45	104
2.2	3A5.117		VLK31W	52,7	5,34Е+05	1,ЗЗЕ-04	2,49Е-10	17,7	83	125
2.2	3A5.118		VL_N32A	55,8	5,07Е+05	6,39Е-04	1,26Е-09	18,3	17	67
2.2	3A5.121		VL_N32Y	56,1	9,57Е+05	9,68Е-05	1,01Е-10	19,1	115	91
2.2	3A5.122		VLN32D	49,8	5,68Е+05	1,25Е-04	2,20Е-10	15,8	89	115
2.2	3A5.123		VL N32Q	53,9	8,85Е+05	1,25Е-04	1,41Е-10	18,6	89	102
2.2	3A5.125		VLN32H	56,4	9,01Е+05	7,73Е-05	8,58Е-11	19,2	144	90
2.2	3A5.126		VL_N32W	56,6	6,35Е+05	9,26Е-05	1,46Е-10	18,8	120	79
2.2	3A5.127		VLV33A	49,1	7Д5Е+05	8,05Е-05	1,13Е-10	16,6	138	74
2.2	3A5.128		VLV33S	51,5	2,85Е+05	9,65Е-05	3,38Е-10	13,7	115	126
2.2	3A5.130		VLV33Y	56,1	7,41Е+05	9,16Е-05	1,24Е-10	19	121	68
2.2	3A5.131		VLV33D	52,4	7,40Е+05	9,67Е-05	1,31Е-10	19,3	115	40
2.2	3A5.132		VLV33Q	48,7	6,61Е+05	1,38Е-04	2,09Е-10	16,7	80	50
2.2	3A5.135		VLV33W	48,4	5,26Е+05	1,04Е-04	1,99Е-10	18,8	107	24
2.2	3A5.137		VL_Y34S	48,3	6,96Е+05	9,88Е-05	1,42Е-10	19	112	32
2.2	3A5.138		VLY34L	49,4	5,94Е+05	2,16Е-04	3,64Е-10	16,6	51	56
2.2	3A5.139		VLY34D	52,8	4,63Е+05	4,90Е-04	1,06Е-09	13,1	23	68
2.2	3A5.140		VLY34Q	54,4	7,01Е+05	5,40Е-04	7,71Е-10	18,2	21	55
2.2	3A5.141		VLY34K	56	8Д6Е+05	3,72Е-04	4,56Е-10	18,8	30	64
2.2	3A5.142		VLY34H	48,8	6,71Е+05	5,00Е-04	7,46Е-10	16,3	22	82
2.2	3A5.143		VLY34W	53,5	6,98Е+05	2Д9Е-03	ЗДЗЕ-09	9,7	5	58
2.2	3A5.165		VLS52K	52,6	5,32Е+05	9, ЗОЕ-04	1,75Е-09	16,6	12	167
2.2	3A5.168		VLD53A	57,2	1,20Е+06	2,04Е-03	1,71Е-09	17,1	5	51
2.2	3A5.172		VLD53Q	50,3	7ДЗЕ+05	1,08Е-04	1,51Е-10	17,1	103	97
2.2	3A5.174		VLD53H	53	7,45Е+05	1,23Е-04	1,65Е-10	17,7	90	120
2.2	3A5.186		VLP55S	55,8	7,97Е+05	1,08Е-04	1,35Е-10	18,6	103	108
2.2	3A5.199		VLS56K	57,3	7,71Е+05	1,18Е-04	1,54Е-10	18,8	94	104
2.2	3A5.201		VLS56W	49,6	7,41Е+05	1,24Е-04	1,67Е-10	17,1	90	92
2.2	3A5.210		VLQ89P	53,5	3,80Е+05	4,78Е-04	1,26Е-09	18	25	72
2.2	3A5.211		VL_V90A	55,7	7,65Е+05	1,06Е-04	1,39Е-10	18,8	105	78
3.1	3A5.040	1	Дикий тип	53,3	7,72Е+05	1,32Е-04	1,71Е-10	18,2
3.1	3A5.040	2	Дикий тип	53,4	7,76Е+05	1Д5Е-04	1,48Е-10	18,1
3.1	3A5.040	3	Дикий тип	53,3	7,73Е+05	1,03Е-04	1,34Е-10	18,1
3.1	3A5.040	4	Дикий тип	54	7,69Е+05	1,14Е-04	1,49Е-10	18,5
3.1	3A5.040	5	Дикий тип	53,8	7,84Е+05	1,20Е-04	1,53Е-10	18,4
3.1	3A5.040	Среднее	Дикий тип	53,6	7,75Е+05	1,17Е-04	1,51Е-10	18,2	100	100
3.1	Изотип IgG4			56	N/A	N/A	N/A	0,7	N/A
3.1	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	52,5	8,07Е+05	1,40Е-04	1,74Е-10	17,9	83
3.1	3A5.213		VLV90L	53,7	7,49Е+05	1,55Е-04	2,06Е-10	18,2	75	58
3.1	ЗА5.214		VL_V90Y	54	6,50Е+05	2,92Е-04	4,49Е-10	18	40	85
3.1	ЗА5.215		VLV90D	52,9	5,54Е+05	4Д9Е-04	7,56Е-10	19,9	28	27
3.1	ЗА5.216		VLV90Q	48,6	5,93Е+05	1,88Е-04	3,18Е-10	16,3	62	74
3.1	ЗА5.217		VLV90K	44,3	6,34Е+05	8, ЗОЕ-05	1,31Е-10	17	141	48
3.1	ЗА5.218		VLV90H	47,5	5,90Е+05	2,99Е-04	5,07Е-10	17,6	39	60
3.1	ЗА5.219		VL_V90W	53,4	5,69Е+05	6,64Е-04	1,17Е-09	17,9	18	77
3,1	ЗА5.220		VLV90P	47,7	2,72Е+05	7,61Е-03	2,79Е-08	1,7	2	76

- 21 042576

3.1	3A5.221		VLW91A	51,8	3,05E+05	7,08E-03	2,32E-08	2,4	2	79
3.1	3A5.223		VLW91L	53,6	2,59E+06	2,55E-02	9,83E-09	7,7	0	98
3.1	3A5.224		VL_W91Y	45,1	8,82E+05	9,03E-04	l,02E-09	15,8	13	64
3.1	3A5.226		VLW91Q	51,1	5,38E+06	3,79E-02	7,05E-09	6,8	0	75
3.1	3A5.227		VLW91K	51,8					NB	71
3.1	3A5.228		VLW91H	50,9	l,53E+06	7,24E-03	4,74E-09	9	2	62
3.1	3A5.229		VLW91P	39,4	4,02E+05	7,40E-03	l,84E-08	1,4	2	36
3.1	3A5.23O		VLD92A	51,2	5,63E+05	9,94E-05	l,77E-10	16,5	118	113
3.1	3A5.231		VLD92S	53,2	7,67E+05	9,46E-05	l,23E-10	17,5	124	113
3.1	3A5.232		VLD92L	54,3	9,17E+05	7,59E-05	8,27E-11	18	154	130
3.1	3A5.233		VLD92Y	47,7	1,11E+O6	Ι,ΙΟΕ-04	9,92E-11	16,4	106	72
3.1	3A5.234		VL_D92Q	50,9	5,25E+05	l,39E-04	2,64E-10	15,7	84	194
3.1	3A5.235		VLD92K	54,7	7,63E+05	8,84E-05	l,16E-10	18	132	92
3.1	3A5.236		VLD92H	54,3	7,93E+05	l,09E-04	l,37E-10	17,6	107	122
3.1	3A5.237		VLD92W	0,5					NE	NE
3.1	3A5.238		VL_D92P	46,8	5,21E+05	l,43E-04	2,75E-10	16,1	82	63
3.1	3A5.239		VL_S93A	52,2	ЗД2Е+06	3,65E-03	1Д7Е-09	15,9	3	112
3.1	3A5.240		VLS93L	54,8	2,39E+07	2,45E-01	l,03E-08	6,5	0	124
3.1	3A5.241		VLS93Y	50,1	6,20E+05	7,48E-03	l,21E-08	2	2	118
3.1	3A5.242		VLS93D	51,6	5,18E+05	l,68E-02	3,25E-08	2,9	1	73
3.1	3A5.243		VLS93Q	54,4	l,90E+06	l,51E-02	7,95E-09	8,2	1	111
3.1	3A5.244		VL_S93K	55,5					NB	162
3.1	3A5.245		VLS93H	49,7	2,92E+06	2,23E-02	7,64E-09	7,3	1	133
3.1	3A5.246		VLS93W	52,8	3,27E+05	4,33E-03	l,33E-08	0,8	3	115
3.1	3A5.247		VLS93P	53,8	6,94E+05	5,33E-02	7,68E-08	1,7	0	112
3.1	3A5.248		VL_S94A	56,1	8,15E+05	l,22E-04	l,50E-10	19,1	96	101
		_____________
3.1	3A5.249		VLS94L	49,7	7,81E+05	5,00E-04	6,41E-10	17,1	23	90
3.1	3A5.253		VL_S94K	53	6,74E+05	l,48E-04	2,20E-10	17,9	79	109
3.1	3A5.254		VLS94H	53,7	6,24E+05	l,51E-04	2,42E-10	18,1	77	104
3.1	3A5.256		VLS94P	49,7	6,97E+05	l,27E-04	l,82E-10	16,7	92	139
3.1	3A5.257		VL_S95A	52,1	7,34E+05	1Д9Е-04	l,62E-10	17,7	98	99
3.1	3A5.258		VLS95L	54	7,73E+05	1ДЗЕ-04	l,47E-10	18,3	104	99
3.1	3A5.259		VLS95Y	55,7	8,35E+05	l,07E-04	l,28E-10	18,7	109	83
3.1	3A5.260		VLS95D	49,2	6,07E+05	l,25E-04	2,07E-10	16,5	94	109
3.1	3A5.261		VL_S95Q	48,6	7,87E+05	9Д9Е-05	1Д7Е-10	17,8	127	62
3.1	3A5.262		VLS95K	53,1	7,99E+05	l,01E-04	l,26E-10	18,2	116	118
3.1	3A5.263		VLS95H	55,4	7,83E+05	1,00E-04	l,28E-10	18,7	117	101
3.1	3A5.264		VLS95W	49	7,95E+05	l,27E-04	l,60E-10	16,5	92	87
3.1	3A5.265		VL_S95P	52,7	6,45E+05	5,55E-03	8,61E-09	7,1	2	147
3.1	3A5.266		VL_D95aA	53,7	5,78E+06	8,07E-03	l,40E-09	10,4	1	109
3.1	3A5.267		VL_D95aS	55,3	4,53E+05	l,21E-03	2,68E-09	16,7	10	101
3.1	3A5.268		VL_D95aL	48,5	9,19E+06	l,35E-02	l,47E-09	8,7	1	71
3.1	3A5.269		VL_D95aY	51,8	l,77E+06	6,74E-03	3,80E-09	8	2	95
3.1	3A5.270		VL_D95aQ	53,6	5,26E+06	7Д1Е-03	l,35E-09	H,4	2	110
3.1	3A5.271		VL_D95aK	53,8	3,92E+05	3,83E-02	9,77E-08	2	0	70
3.1	3A5.272		VL_D95aH	49,7	2,56E+06	4,90E-03	l,92E-09	10,1	2	188
3.1	3A5.273		VL_D95aW	53,1	l,27E+06	l,47E-02	1Д5Е-08	7,1	1	94
3.1	3A5.274		VL_D95aP	54,6	1Д7Е+06	3,05E-03	2,61E-09	9,8	4	150
3.1	3A5.276		VL_H95bS	52,1	8,47E+05	7,33E-05	8,66E-11	19,6	160	61
3.1	3A5.281		VL_H95bK	45,5	7,08E+05	9,58E-05	l,35E-10	16,3	122	64
3.1	3A5.307		VHG26Y	48,1	8,73E+05	l,02E-04	1Д7Е-10	18,3	115	60
3.1	3A5.321		VHG27W	55	7,64E+05	5,59E-04	7,31E-10	18,4	21	97

- 22 042576

3.1	3A5.335		VHI29Q	37,9	5,64E+05	3,90E-04	6,92E-10	14,9	30	37
3.1	3A5.343		VHS30Q	51,9	7,55E+05	l,06E-04	l,40E-10	17,7	110	121
3.1	3A5.344		VHS30K	53,9	7,41E+05	l,39E-04	l,88E-10	18	84	156
3.1	3A5.345		VHS30H	54,8	7,34E+05	l,46E-04	l,99E-10	18,7	80	77
3.1	3A5.349		VHN31L	47,1	7,69E+05	7ДЗЕ-04	9,27E-10	16,3	16	69
3.1	3A5.355		VHN31W	45,3	8,52E+05	4,80E-04	5,63E-10	17,3	24	59
3.1	3A5.359		VH_G32Y	53,7	3,28E+06	4,30E-03	l,31E-09	15,5	3	90
3.1	3A5.360		VHG32D	54,2	l,05E+06	6,78E-03	6,44E-09	8Д	2	105
3.1	3A5.361		VHG32Q	49,5	3,98E+06	6,22E-03	l,56E-09	H,8	2	133
3.1	3A5.362		VHG32K	52,6	6,07E+05	2,20E-03	3,62E-09	7,6	5	171
3.1	3A5.363		VHG32H	55,4	l,81E+06	3,01E-03	l,66E-09	15,3	4	114
3.1	3A5.364		VH_G32W	52,3	l,46E+07	l,27E-02	8,65E-10	13,5	1	66
3.1	3A5.365		VHG33A	48,7	6,97E+05	9,24E-05	l,33E-10	16,6	127	116
3.1	3A5.366		VHG33S	53	8,56E+05	2,68E-03	ЗД4Е-09	8,3	4	117
3.1	3A5.367		VHG33L	54,2	8,03E+05	3,05E-04	3,79E-10	17,9	38	82
3.1	3A5.368		VHG33Y	55,4	3,97E+06	4,08E-03	l,03E-09	13,4	3	107
3.2	3A5.040	1	Дикий тип	54,7	6,75E+05	9,46E-05	l,40E-10	19
3.2	3A5.040	2	Дикий тип	55,2	6,82E+05	7,26E-05	l,07E-10	19
3.2	3A5.040	3	Дикий тип	55,7	7Д7Е+05	9,30E-05	l,30E-10	19,3
3.2	3A5.040	4	Дикий тип	55,3	7,08E+05	8,82E-05	l,25E-10	19,1
3.2	3A5.040	5	Дикий тип	55,2	6,95E+05	l,05E-04	l,51E-10	19,2
3.2	3A5.040	Среднее	Дикий тип	55,2	6,95E+05	9,07E-05	l,31E-10	19,1	100	100
3.2	Изотип IgG4			55,8	N/A	N/A	N/A	0	N/A
3.2	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	54,5	7Д2Е+05	8,25E-05	1Д6Е-10	l,85E+01	110
3.2	3A5.369		VHG33D	52,4	9,85E+05	2,46E-03	2,50E-09	9,4	4	277
3.2	3A5.370		VHG33Q	54,5	5,33E+05	l,07E-03	2,00E-09	17,2	8	279
3.2	3A5.371		VHG33K	58,5	2,08E+06	2,02E-03	9,72E-10	14,1	4	350
3.2	3A5.372		VHG33H	51,5	l,45E+06	2,67E-03	l,83E-09	14,4		273
3.2	3A5.373		VHG33W	52,4	6,71E+05	l,32E-03	l,96E-09	15,9	7	172
3.2	3A5.374		VHY34A	56,4	5,91E+05	l,27E-04	2Д6Е-10	19,2	71	162
3.2	3A5.375		VHY34S	56,4	6,23E+05	l,24E-04	2,OOE-10	19,1	73	159
3.2	3A5.376		VHY34L	50	5,79E+05	l,60E-04	2,77E-10	17,2	57	160
3.2	3A5.377		VHY34D	54,7	5,40E+05	6,04E-04	1Д2Е-09	18,1	15	103
3.2	3A5.378		VHY34Q	54,4	5,98E+05	l,51E-04	2,53E-10	18,5	60	165
3.2	3A5.379		VHY34K	56,6	6Д7Е+05	4,91E-04	7,96E-10	19,1	18	407
3.2	3A5.38O		VHY34H	49,8	6,40E+05	7,06E-04	1Д0Е-09	16,7	13	223
3.2	3A5.382		VHY35A	52,8	2,48E+05	2,46E-03	9,91E-09	0,9	4	289
3.2	3A5.383		VHY35S	55,8	3,34E+05	8,50E-03	2,54E-08	1,9	1	129
3.2	3A5.384		VHY35L	57	5,98E+05	l,42E-03	2,37E-09	17,5	6	190
3.2	3A5.385		VHY35D	48,5	2,75E+06	6ДЗЕ-ОЗ	2,23E-09	8,1	1	87
3.2	3A5.386		VHY35Q	51,8	1Д8Е+07	2,72E-01	2,31E-08	5,4	0	127
3.2	3A5.387		VHY35K	56,2					NB	382
3.2	3A5.388		VHY35H	58	3,40E+05	9,25E-03	2,72E-08	3,3	1	195
3.2	3A5.389		VHY35W	50	3,65E+06	5,41E-03	l,48E-09	8,8	2	225
3.2	3A5.390		VH_W35aA	47	6,84E+05	l,74E-03	2,55E-09	15,4	5	37
3.2	3A5.392		VH_W35aL	55	4,59E+05	1Д4Е-03	2,49E-09	17,1	8	100
3.2	3A5.393		VH_W35aY	49,1	6,34E+05	l,87E-04	2,94E-10	16,7	49	104
3.2	3A5.394		VH_W35aD	0,7					NE	NE
3.2	3A5.395		VH_W35aQ	50,4	5,46E+05	8,47E-04	l,55E-09	18,8	11	34
3.2	3A5.397		VH_W35aH	39,6	5Д7Е+05	2,44E-04	4,82E-10	15,8	37	53

- 23 042576

3.2	3A5.399		VH_S35bL	46	1,08Е+05	2,86E-04	2,64E-09	14Д	32	39
3.2	3A5.400		VH_S35bY	51,7	4,43E+05	7,06E-03	l,59E-08	1,8	1	88
3.2	3A5.402		VH_S35bQ	38,8	l,84E+05	5Д5Е-04	2,80E-09	13,6	18	45
3.2	3A5.404		VH_S35bH	48,8	6Д8Е+05	l,88E-03	3,05E-09	13,3	5	75
3.2	3A5.405		VH_S35bW	49,6	2,93E+05	7Д9Е-03	2,45E-08	0,7	1	50
3.2	3A5.406		VHY50A	50,6	4,79E+05	5,88E-04	l,23E-09	16Д	15	268
3.2	3A5.407		VHY50S	56,1	4,95E+05	3,64E-04	7,34E-10	17,5	25	327
3.2	3A5.408		VHY50L	57	4,31E+05	3,22E-04	7,46E-10	17,3	28	122
3.2	3A5.409		VHY50D	56,9	7,63E+05	l,45E-03	l,90E-09	16	6	169
3.2	3A5.410		VHY50Q	50,9	5,95E+05	3,69E-04	6,20E-10	17Д	25	241
3.2	3A5.411		VHY5OK	53,5	5,51E+05	4,47E-04	8Д1Е-10	17,5	20	135
3.2	3A5.412		VHY50H	55,5	6,72E+05	7,88E-04	1Д7Е-09	18,2	12	300
3.2	3A5.413		VHY50W	57,2	6,67E+05	l,61E-03	2,41E-09	16,9	6	131
3.2	3A5.414		VHI51A	51,9	7,29E+05	1ДЗЕ-04	l,56E-10	17,7	80	244
3.2	3A5.415		VHI51S	54,2	7,38E+05	1Д5Е-04	l,56E-10	18,6	79	130
3.2	3A5.416		VHI51L	54,6	6,62E+05	l,39E-04	2Д0Е-10	19	65	87
3.2	3A5.417		VHI51Y	57,2	5,42E+05	7,77E-03	l,43E-08	7,9	1	106
3.2	3A5.418		VHI51D	40,4	5Д5Е+05	6,36E-04	l,23E-09	15,8	14	48
3.2	3A5.419		VHI51Q	51,6	6,26E+05	5,02E-04	8,01E-10	17,7	18	95
3.2	3A5.420		VHI51K	53,3	7,42E+05	1Д6Е-03	l,57E-09	17,3	8	124
3.2	3A5.421		VHI51H	54,1	7,46E+06	8,34E-03	1Д2Е-09	13,4	1	93
3.2	3A5.422		VHI51W	49,7	ЗД8Е+05	3,31E-03	l,04E-08	0,9	3	139
3.2	3A5.423		VHY52A	54,9	l,49E+07	l,08E-02	7,23E-10	H,8	1	304
3.2	3A5.424		VHY52S	57,3	6,79E+05	l,29E-03	l,89E-09	H,7	7	325
3.2	3A5.425		VHY52L	59,4	l,90E+06	8,83E-03	4,66E-09	ЮД	1	209
3.2	3A5.426		VHY52D	51,7					NB	333
3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2	3A5.427 3A5.428 3A5.429 3A5.430 3A5.431 3A5.432 3A5.433 3A5.434 3A5.435 3A5.436 3A5.437 3A5.438 3A5.439 3A5.440 3A5.441 3A5.442 3A5.443 3A5.444 3A5.445 3A5.446 3A5.447		VHY52Q VHY52K VHY52H VHY52W VHY53A VHY53S VHY53L VHY53D VHY53Q VHY53K VHY53H VHY53W VHS54A VHS54L VHS54Y VHS54D VHS54Q VHS54K VHS54H VHS54W VHG55A	55,5 58,4 61,5 48,6 53 55 57,3 50,8 53,4 56,7 57 49,2 53,1 53,4 55 51,4 54 55,6 57,5 46,7 45,7	l,86E+06 5,62E+05 6,79E+05 6,79E+05 6,94E+05 6,02E+05 4,80E+05 6,27E+05 6Д7Е+05 6,71E+05 6,91E+05 6,98E+05 9Д7Е+06 l,57E+06 8,06E+05 6,04E+05 2,65E+06 7Д0Е+05 7,24E+05 6,76E+05	8,86E-03 2,91E-04 l,26E-03 5,21E-04 l,57E-04 4,43E-04 5,94E-04 4,41E-04 9,61E-04 l,91E-04 2,35E-04 l,54E-04 8,95E-03 2Д7Е-03 2,02E-03 l,07E-03 3,55E-03 4,59E-04 8,68E-04 l,05E-04	4,76E-09 5Д7Е-10 l,86E-09 7,67E-10 2,26E-10 7,36E-10 l,24E-09 7,03E-10 l,56E-09 2,85E-10 3,40E-10 2,20E-10 9,76E-10 l,38E-09 2,50E-09 l,77E-09 l,34E-09 6,46E-10 l,20E-09 l,55E-10	9,2 20,6 15,9 17,9 18,8 19Д 16,6 17,9 18Д 19Д 16,8 18Д 13,6 16,5 14,4 17,6 15,5 19,3 14,8 17Д	1 NB 31 7 17 58 20 15 21 9 47 39 59 1 4 4 8 20 10 86	264 348 286 102 249 226 102 182 206 232 206 152 112 158 92 200 150 201 97 112 68
3.2	3A5.448		VHG55S	48,4	7,30E+05	l,24E-04	l,70E-10	18	73	72
3.2	3A5.449		VHG55L	47,7	6Д4Е+05	6,30E-04	l,03E-09	17,7	14	66
3.2	3A5.450		VHG55Y	38,6	6,88E+05	7,06E-04	l,03E-09	14,2	13	49
4,1	3A5.040	1	Дикий тип	82,7	l,00E+06	1Д6Е-04	1Д6Е-10	24,9

- 24 042576

4.1	3A5.040	2	Дикий тип	82,7	1,02Е+06	1,07Е-04	1,04Е-10	25,1
4.1	3A5.040	3	Дикий тип	85,2	1,03Е+06	1Д2Е-04	1,09Е-10	25,1
4.1	3A5.040	4	Дикий тип	85,1	1,01Е+06	1,06Е-04	1,05Е-10	25,3
4.1	3A5.040	5	Дикий тип	83,5	9,91Е+05	9,29Е-05	9,37Е-11	25,3
4.1	3A5.040	Среднее	Дикий тип	83,84	1,01Е+06	1,07Е-04	1,06Е-10	25,14	100	100
4.1	Изотип IgG4			61,4	N/A	N/A	N/A	0	N/A
4.1	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	84,2	1,06Е+06	1,09Е-04	1, ОЗЕ-10	23,8	98
4.1	3A5.133		VLV33K	52,7	7,83Е+05	1,34Е-04	1,71Е-10	15,9	80	15
4.1	ЗА5.222		VL_W91S	62,8	1,38Е+06	2,85Е-03	2,06Е-09	12,5	4	14
4.1	3A5.391		VH_W35aS	68,4	6,35Е+05	1Д9Е-03	1,87Е-09	15,6	9	22
4.1	3A5.396		VH_W35aK	65,9	7,21Е+05	2,08Е-03	2,88Е-09	9,4	5	26
4.1	ЗА5.401		VH_S35bD	53,1	5,96Е+05	1Д9Е-04	2,01Е-10	14,5	90	16
4.1	ЗА5.4ОЗ		VH_S35bK	53,1	1,83Е+05	1,23Е-02	6,68Е-08	2,8	1	12
4.1	ЗА5.275		VL_H95bA	69,7	5,47Е+05	1,62Е-04	2,95Е-10	18	66	24
4.1	ЗА5.282		VL_H95bW	77,5	7Д8Е+05	1,07Е-04	1,49Е-10	21,1	100	152
4.1	3A5.283		VL_H95bP	63,4	5,90Е+05	4,22Е-02	7Д5Е-08	3,6	0	154
4.1	ЗА5.285		VL_V96S	74,4	9,02Е+05	2,01Е-04	2,23Е-10	19,9	53	21
4.1	ЗА5.287		VLV96Y	92,4	7,ЗЗЕ+06	1,50Е-03	2,05Е-10	17,6	7	62
4.1	ЗА5.288		VLV96D	68,8	7,32Е+05	1, ЗОЕ-ОЗ	1,78Е-09	16,8	8	9,5
4.1	ЗА5.289		VLV96Q	77,1	1,62Е+06	6,54Е-04	4, ОЗЕ-10	20,4	16	25
4.1	ЗА5.290		VLV96K	64,6	8,08Е+05	2,32Е-03	2,87Е-09	13,1	5	15
4.1	ЗА5.291		VLV96H	5,2					NB	45
4.1	ЗА5.292		VLV96W	66,4	3,83Е+07	2,01Е-02	5,26Е-10	10,6	1	19
4.1	3A5.293		VLV96P	81,5	8,54Е+05	5,22Е-04	6Д1Е-10	23,4	20	106
4.1	ЗА5.110		VLK31A	74	7,01Е+05	1,86Е-04	2,65Е-10	21,1	58	122
4.1	ЗА5.111		VLK31S	79,2	7Д0Е+05	1,36Е-04	1,92Е-10	23,6	79	109
4.1	ЗА5.112		VLK31L	79,9	6,30Е+05	3,91Е-04	6,21Е-10	22,3	27	125
4.1	3A5.134		VLV33H	5,8					NB	52
4.1	3A5.136		VLY34A	59,9	1,05Е+06	3,45Е-04	3,28Е-10	17,2	31	170
4.1	ЗА5.206		VLQ89D	71,6	5,68Е+05	8,76Е-05	1,54Е-10	18,6	122	12
4.1	ЗА5.225		VLW91D	114,2	6,31Е+05	1,05Е-02	1,66Е-08	3,7	1	74
4.1	ЗА5.250		VL_S94Y	74,6	8Д4Е+05	3,48Е-04	4,27Е-10	20,3	31	147
4.1	ЗА5.252		VLS94Q	63,4	8,25Е+05	1,65Е-04	2,00Е-10	18	65	136
4.2	ЗА5.040	1	Дикий тип	50,4	6,96Е+05	1,03Е-04	1,48Е-10	16,2
4.2	ЗА5.040	2	Дикий тип	50,5	7Д0Е+05	1,06Е-04	1,49Е-10	16
4.2	ЗА5.040	Среднее	Дикий тип	50,4	7,03Е+05	1,05Е-04	1,49Е-10	16,1	100	100
4.2	Изотип IgG4			52,5	N/A	N/A	N/A		N/A
4.2	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	48,7	7,21Е+05	6,63Е-05	9,20Е-11	16,5	150
4.2	ЗА5.451		VHG55D	33,1	4,54Е+05	2,50Е-04	5,50Е-10	9,9	42	39
4.2	ЗА5.452		VHG55Q	37,2	6,09Е+05	1,94Е-04	ЗД8Е-10	И,7	54	42
4.2	3A5.453		VHG55K	43,8	5,49Е+05	2,07Е-04	3,76Е-10	12,4	50	51
4.2	ЗА5.454		VHG55H	38,2	5,92Е+05	1,81Е-04	3,05Е-10	И,7	58	41
4.2	ЗА5.455		VHG55W	31,2	6J7E+05	6,65Е-04	1,08Е-09	10	16	33
4.2	ЗА5.456		VHS56A	49,7	6,44Е+05	1Д8Е-04	1,84Е-10	15,5	89	104
4.2	ЗА5.457		VHS56L	51,1	5,49Е+05	8,63Е-05	1,57Е-10	15,6	121	101
4.2	ЗА5.458		VHS56Y	47,6	5,44Е+05	1,92Е-04	3,53Е-10	14,2	54	85
4.2	ЗА5.459		VHS56D	49	5,05Е+05	4,57Е-04	9,06Е-10	15	23	84
4.2	ЗА5.460		VHS56Q	50,2	5,90Е+05	9,69Е-05	1,64Е-10	15,8	108	106
4.2	ЗА5.461		VHS56K	52,9	6Д1Е+05	7,84Е-05	1,28Е-10	16,6	133	119

- 25 042576

4.2	3A5.463		VHS56W	47,7	4,72E+05	2,85E-04	6,03E-10	13,9	37	98
4.2	3A5.464		VHT57A	50	7,50E+05	l,26E-04	l,67E-10	16,1	83	104
4.2	3A5.465		VHT57S	48,5	7,29E+05	l,26E-04	l,73E-10	15,6	83	69
4.2	3A5.467		VHT57Y	44	7,66E+05	9,50E-05	l,24E-10	13,8	110	49
4.2	3A5.468		VHT57D	42,5	7,02E+05	9,89E-05	l,41E-10	14	106	46
4.2	3A5.469		VHT57Q	45,1	7,24E+05	l,07E-04	l,48E-10	14,2	98	58
4.2	3A5.470		VHT57K	46,5	7,28E+05	l,21E-04	l,66E-10	14,6	86	61
4.2	3A5.471		VHT57H	43,8	7,34E+05	l,09E-04	l,49E-10	13,9	96	50
4.2	3A5.472		VHT57W	39,2	7,57E+05	l,34E-04	l,77E-10	13,3	78	40
4.2	3A5.473		VHY58A	48,1	l,56E+06	2,86E-03	l,83E-09	13	4	95
4.2	3A5.474		VHY58S	50,7	2,76E+06	3,84E-03	l,39E-09	13,7	3	101
4.2	3A5.475		VHY58L	48,6	5,58E+06	5,88E-03	l,05E-09	8,3	2	70
4.2	3A5.476		VHY58D	42,4	l,89E+07	l,68E-02	8,88E-10	7,3	1	47
4.2	3A5.477		VHY58Q	46,6	6,62E+05	1,33E-O3	2,02E-09	13,9	8	75
4.2	3A5.478		VHY58K	49,2	5,75E+05	1,31E-O3	2,28E-09	14,6	8	102
4.2	3A5.479		VHY58H	50,6	6,68E+05	5,75E-04	8,62E-10	15,8	18	91
4.2	3A5.480		VHY58W	48,1	6,58E+05	5,53E-04	8,41E-10	14,7	19	79
4.2	3A5.481		VHA93S	45,3	7Д8Е+05	9,31E-05	1,3OE-1O	13,9	112	58
4.2	3A5.482		VHA93L	13	2,55E+05	2,02E-04	7,90E-10	5,2	52	17
4.2	3A5.484		VHA93D	0,5					NE	NE
4.2	3A5.485		VHA93Q	40,4	6,48E+05	1,00E-04	l,54E-10	12,7	105	44
4.2	3A5.486		VHA93K	17					NE	NE
4.2	3A5.487		VHA93H	28,8					NE	NE
4.2	3A5.489		VHA93P	6,5					NE	NE
4.2	3A5.491		VHS94L	37,4	5,33E+05	8,11E-O4	l,52E-09	12,5	13	40
4.2	3A5.492		VH_S94Y	30,3	3,27E+05	Ι,ΙΟΕ-ОЗ	3,37E-09	9,7	10	30
4.2	3A5.493		VHS94D	4,6					NE	NE
4.2	3A5.494		VHS94Q	42	6,74E+05	6,37E-04	9,45E-10	13,6	16	49
4.2	3A5.496		VHS94H	47,1	2,19E+06	4,62E-03	2,11E-O9	6,5	2	72
4.2	3A5.501		VHL95Y	49	4,17E+06	5,88E-03	l,41E-09	12,4	2	96
4.2	3A5.502		VHL95D	21,2					NB	22
4.2	3A5.506		VHL95W	46,4	6,20E+06	7,36E-03	l,19E-09	8,4	1	68
4.2	3A5.511		VHG96Y	45,5					NB	59
4.2	3A5.519		VH_N97S	48	5,61E+05	2,27E-04	4,04E-10	14,9	46	80
4.2	3A5.552		VHD101K	47,1	6,10E+05	3,63E-04	5,95E-10	14,6	29	67
4.2	3A5.358		VH_G32L	48,4	2,01E+06	3,83E-O3	l,91E-09	12,3	3	75
4.2	3A5.381		VHY34W	42,4	7,09E+05	2,18E-04	3,07E-10	14	48	47
4.2	3A5.398		VH_S35bA	47	6,82E+05	l,02E-04	1,5OE-1O	14,7	102	88
4.2	3A5.488		VHA93W	14,2					NB	17
4.2	3A5.490		VHS94A	49,6	6,78E+05	8,70E-05	l,28E-10	15,1	120	104
4.2	3A5.499		VHL95A	43,4	3,09E+06	7,48E-03	2,42E-09	10,4	1	51
4.2	3A5.508		VH_G96A	47,1	5,77E+05	l,25E-04	2Д7Е-10	14,8	84	75
4.2	3A5.522		VH_N97D	49	l,00E+06	l,92E-04	l,91E-10	15,5	54	91
4.2	3A5.554		VHD101W	32,7	1,38E+O5	6,18E-04	4,47E-09	8,3	17	33
4.2	3A5.144		VLD50A	47,1	5,29E+05	l,67E-04	ЗД5Е-10	14,5	63	77
4.2	3A5.145		VLD50S	48,2	5,74E+05	l,05E-04	1,83E-1O	15,1	100	90
4.2	3A5.146		VLD50L	48	5,92E+05	2,59E-04	4,38E-10	15	40	86
4.2	3A5.147		VLD50Y	48	5,36E+05	l,95E-04	3,63E-10	15	54	78
4.2	3A5.148		VLD50Q	47	5,99E+05	l,93E-04	3,22E-10	15	54	70
4.2	3A5.149		VLD50K	45,8	6,00E+05	l,61E-04	2,68E-10	13,2	65	74
4.2	3A5.150		VLD50H	48,2	4,07E+05	l,68E-04	4Д4Е-10	14,3	62	95
4.2	3A5.151		VLD50W	48	5,36E+05	2,35E-04	4,38E-10	15	44	74

- 26 042576

4.2	3A5.152		VLD51A	47	6,34Е+05	1,34Е-04	2Д1Е-10	14,6	78	88
4.2	3A5.153		VLD51S	46,1	8,53Е+05	1,60Е-04	1,87Е-10	14,1	65	72
4.2	3A5.154		VLD51L	47,8	6,22Е+05	1,63Е-04	2,63Е-10	14,3	64	83
4.2	3A5.155		VLD51Y	48,1	6Д4Е+05	1,78Е-04	2,90Е-10	13,7	59	75
4.2	3A5.156		VLD51Q	47,8	6,48Е+05	1Д5Е-04	1,77Е-10	15	91	85
4.2	3A5.157		VLD51K	45,2	5,85Е+05	1,20Е-04	2,05Е-10	13,2	87	68
4.2	3A5.158		VL_D51H	48,3	6Д5Е+05	1,82Е-04	2,95Е-10	14,7	57	86
4.2	3A5.159		VLD51W	45,7	4,93Е+05	1,96Е-04	3,98Е-10	14,1	53	57
4.2	3A5.160		VLS52A	47,7	6,61Е+05	1Д1Е-04	1,68Е-10	15,2	94	80
4.2	3A5.161		VLS52L	47,8	6,87Е+05	5,74Е-05	8,36Е-П	15	182	106
4.2	3A5.162		VLS52Y	49	7,26Е+05	9,91Е-05	1,36Е-10	15,8	105	114
5.1	3A5.040	1	Дикий тип	49,9	6,56Е+05	1,22Е-04	1,86Е-10	14,5
5.1	3A5.040	2	Дикий тип	48,5	6,43Е+05	1Д2Е-04	1,75Е-10	14,4
5.1	3A5.040		Дикий тип	48,1	6,67Е+05	1,25Е-04	1,87Е-10	13,7
5.1	3A5.040	4	Дикий тип	50,4	6,63Е+05	1Д7Е-04	1,77Е-10	14,4
5.1	3A5.040	Среднее	Дикий тип	49,2	6,57Е+05	1,19Е-04	1,81Е-10	14,3	100	100
5.1	Изотип IgG4			51,2	N/A	N/A	N/A	0,1	N/A
5.1	ЗА5.040 (Очищенное)		Дикий тип	48,9	7Д7Е+05	1,08Е-04	1,53Е-10	15,6	ПО
5.1	3A5.337		VHI29H	48,1	4,79Е+05	1Д2Е-03	2,34Е-09	13,7	и	24
5.1	3A5.339		VHS30A	50,7	6,79Е+05	1Д2Е-04	1,65Е-10	16,3	106	6
5.1	3A5.346		VHS30W	53,4	6,42Е+05	1,32Е-04	2,06Е-10	16,7	90	69
5.1	ЗА5.058		VLG25S	47,6	6,93Е+05	1,08Е-04	1,56Е-10	15,7	ПО	43
5.1	ЗА5.090		VLI28K	49,1	5,73Е+05	1,04Е-04	1,81Е-10	16,2	114	51
5.1	ЗА5.092		VLI28W	47	6ДЗЕ+05	1, ЗОЕ-04	2Д2Е-10	15,5	92	35
5.1	ЗА5.212		VL_V90S	46,1	5,71Е+05	ЗД1Е-04	5,45Е-10	14,6	38	4,8
5.1	ЗА5.251		VLS94D	52,9	2,77Е+05	4,98Е-04	1,79Е-09	15,5	24	7
5.1	ЗА5.255		VL_S94W	48,5	5,54Е+05	2,86Е-04	5Д6Е-10	14,7	42	19
5.1	ЗА5.299		VLV97Q	48,5	5,86Е+05	9,90Е-05	1,69Е-10	15,5	120	71
5.1	ЗА5.462		VHS56H	50	6,35Е+05	1Д6Е-04	1,83Е-10	15,9	103	41
5.1	ЗА5.466		VHT57L	44,9	6,39Е+05	1,02Е-04	1,59Е-10	14,2	117	14
5.1	3A5.483		VHA93Y	38,2					NB	8
5.1	ЗА5.5ОЗ		VHL95Q	48,5	4Д4Е+05	6Д8Е-04	1,53Е-09	14,4	19	18
5.1	3A5.163		VLS52D	49,3	6,65Е+05	1,01Е-04	1,52Е-10	16,4	118	177
5.1	ЗА5.164		VLS52Q	49,6	6,57Е+05	1Д7Е-04	1,78Е-10	15,8	102	9,8
5.1	ЗА5.166		VLS52H	51,6	6,71Е+05	Ι,ΠΕ-04	1,66Е-10	16,9	107	167
5.1	ЗА5.167		VLS52W	52,3	7Д9Е+05	Ι,ΠΕ-04	1,55Е-10	17,2	107	166
5.1	ЗА5.169		VLD53S	50,6	6,38Е+05	6,35Е-05	9,97Е-11	16,5	187	151
5.1	ЗА5.170		VLD53L	48,8	6,87Е+05	9,50Е-05	1,38Е-10	15,8	125	143
5.1	ЗА5.171		VLD53Y	51	6,79Е+05	1,09Е-04	1,60Е-10	16,1	109	208
5.1	3A5.173		VLD53K	52,6	6,35Е+05	1,09Е-04	1,71Е-10	16,7	109	175
5.1	ЗА5.175		VLD53W	50	5,88Е+05	9,74Е-05	1,66Е-10	15,7	122	178
5.1	ЗА5.176		VLR54A	50,4	6,51Е+05	9,75Е-05	1,50Е-10	16,8	122	138
5.1	ЗА5.177		VLR54S	50,1	6,45Е+05	Ι,ΠΕ-04	1,72Е-10	16,8	107	131
5.1	ЗА5.178		VLR54L	51,5	6,60Е+05	1,01Е-04	1,53Е-10	17	118	135
5.1	ЗА5.179		VLR54Y	49,2	6,66Е+05	1,24Е-04	1,86Е-10	16,4	96	138
5.1	ЗА5.180		VLR54D	49,5	6,79Е+05	9,89Е-05	1,46Е-10	16,6	120	128
5.1	ЗА5.181		VLR54Q	51,3	6,58Е+05	9,55Е-05	1,45Е-10	17	125	148
5.1	ЗА5.182		VLR54K	51,5	6,50Е+05	1Д7Е-04	1,79Е-10	17	102	165
5.1	3A5.183		VLR54H	49,1	6,47Е+05	8,44Е-05	1, ЗОЕ-10	16,3	141	137
5.1	ЗА5.184		VLR54W	50	6Д4Е+05	1,22Е-04	1,99Е-10	15,8	98	7,5

- 27 042576

5.1	ЗА5.185		VLP55A	51,9	6,87E+05	l,34E-04	l,95E-10	16,5	89	8,9
5.1	ЗА5.187		VLP55L	49,6	7,00E+05	9,58E-05	l,37E-10	16,3	124	153
5.1	ЗА5.188		VLP55Y	49,2	6,61E+05	1Д9Е-04	l,80E-10	16,4	100	127
5.1	ЗА5.189		VLP55D	51,1	6,48E+05	9,21E-05	l,42E-10	16,7	129	155
5.1	ЗА5.190		VLP55Q	48,8	6,55E+05	l,08E-04	l,64E-10	16,4	110	151
5.1	ЗА5.191		VLP55K	49,3	6,38E+05	l,05E-04	l,64E-10	16,3	113	137
5.1	ЗА5.192		VLP55H	51,5	6,51E+05	l,16E-04	l,78E-10	16,7	103	176
5.1	3A5.193		VLP55W	51,5	6,41E+05	8,80E-05	l,37E-10	16,8	135	160
5.1	ЗА5.194		VLS56A	49,8	6,41E+05	l,06E-04	l,65E-10	16,1	112	143
5.1	ЗА5.195		VLS56L	49,6	6,85E+05	l,06E-04	l,54E-10	16,3	112	131
5.1	ЗА5.196		VLS56Y	50,2	6,89E+05	1Д4Е-04	l,66E-10	16,5	104	123
5.1	ЗА5.197		VLS56D	50,1	6,87E+05	1Д9Е-04	l,73E-10	16,5	100	153
5.1	ЗА5.198		VLS56Q	49,6	6,86E+05	8,85E-05	l,29E-10	16,4	134	131
5.1	ЗА5.200		VLS56H	49,3	6,83E+05	1Д5Е-04	l,68E-10	16,3	103	138
5.1	ЗА5.207		VLQ89K	49,9	6,84E+05	l,27E-04	l,86E-10	16,4	94	136
5.1	ЗА5.209		VLQ89W	48,6	5,57E+05	l,27E-04	2,28E-10	15,7	94	72
5.1	ЗА5.278		VL_H95bY	49,9	7,65E+05	7,90E-05	l,03E-10	16,3	151	139
5.1	ЗА5.279		VL_H95bD	49,6	7,01E+05	7,84E-05	1Д2Е-10	16,5	152	210
5.1	ЗА5.280		VL_H95bQ	50,3	7,47E+05	l,51E-04	2,02E-10	16,6	79	133
5.1	ЗА5.284		VL_V96A	48,2	7,24E+05	l,88E-04	2,60E-10	15,9	63	65
5.1	ЗА5.286		VLV96L	48,4	6,50E+05	l,94E-04	2,98E-10	15,9	61	79
5.1	ЗА5.294		VLV97A	48,6	6,27E+05	7,68E-05	l,23E-10	16	155	133
5.1	ЗА5.295		VL_V97S	48,6	6Д2Е+05	l,07E-04	l,74E-10	15,9	111	110
5.1	ЗА5.296		VLV97L	48	6,71E+05	9,60E-05	l,43E-10	15,9	124	95
5.1	ЗА5.297		VLV97Y	48,4	6,72E+05	l,07E-04	l,60E-10	16,2	111	90
5.1	ЗА5.298		VLV97D	47,7	5,94E+05	l,30E-04	2Д8Е-10	15,8	92	96
5.1	3A5.300		VLV97K	50,1	5,88E+05	1Д8Е-04	2,01E-10	15,8	101	4,7
5.1	3A5.301		VLV97H	49,4	6,34E+05	8,79E-05	l,39E-10	16,1	135	168
5.1	3A5.063		VL_G25K	49	6,90E+05	7,21E-05	l,05E-10	16,2	165	90
5.1	ЗА5.067		VL_N26S	49	6,52E+05	1Д0Е-04	l,69E-10	16	108	162
5.1	3A5.083		VL_N27W	49,6	6,03E+05	l,29E-04	2Д4Е-10	16,4	92	148
5.1	ЗА5.091		VLI28H	47,7	5,71E+05	l,30E-04	2,27E-10	15,7	92	75
5.1	ЗА5.098		VLG29Q	49,7	6,53E+05	l,05E-04	l,61E-10	16,2	113	139
5.1	ЗА5.108		VLS30H	49,4	6,95E+05	l,02E-04	l,46E-10	16,2	117	145
5.1	ЗА5.109		VL_S30W	48	6,77E+05	l,35E-04	2,00E-10	15,5	88	112
5.1	ЗА5.119		VL_N32S	48,6	8,35E+05	l,08E-04	l,29E-10	16,3	110	98
5.1	ЗА5.120		VL_N32L	49,2	8,72E+05	l,03E-04	1Д8Е-10	16,4	116	119
5.1	ЗА5.129		VLV33L	48,8	5,80E+05	l,42E-04	2,45E-10	15,8	84	99
5.1	ЗА5.277		VL_H95bL	50,4	6,79E+05	l,40E-04	2,06E-10	16,6	85	180
5.1	3A5.302		VLV97W	47,7	7Д8Е+05	7,59E-05	l,06E-10	15,9	157	73
5.1	3A5.303		VLV97P	48,7	6,99E+05	l,21E-04	l,73E-10	16,2	98	21

Эта таблица содержит сводку рассчитанных кинетических данных и данных титров для каждого тестируемого антитела надосадочной жидкости. Вариантные антитела с более низким значением kd (более медленная скорость диссоциации), чем у исходного антитела 3А5.040, имеют значение % 3А5.040 kd>100%, а антитела с более высоким значением kd (более быстрой скоростью диссоциации) - значение <100%. Вариантные антитела с более высоким титром, чем родительское антитело 3А5.040, имеют значение %3А5.040>100%, а антитела с более низким титром-значение <100%. N/A, Не применимо. NB, нет связывания. NE, нет экспрессии.

- 28 042576

Таблица 4

Определение кинетики связывания IL-5 очищенным антителом- вариантом 3А5.040 с помощью Biacore

№ прогона	ID Антитела	Параллельные анализы	Аминокислотная замена	Уровень захвата	ka (1/Mc)	kd (1/c)	KD (M)	Rmax (RU)	% 3A5,040 kd
6	ЗА5.040 (партия 6)	1	Дикий тип	48,6	l,44E+06	2,32E-04	l,61E-10	16
6	ЗА5.040 (партия 6)	2	Дикий тип	49,4	l,44E+06	2Д4Е-04	l,48E-10	15,7
6	ЗА5.040 (партия 6)	3	Дикий тип	49,2	l,36E+06	2,61E-04	l,93E-10	16
6	ЗА5.040 (партия 6)	4	Дикий тип	49,2	l,36E+06	2,46E-04	l,80E-10	16
6	ЗА5.040 (партия 6)	5	Дикий тип	49,3	l,47E+06	2,52E-04	l,71E-10	16,1
6	ЗА5.040 (партия 6)	6	Дикий тип	49,2	l,45E+06	2ДЗЕ-04	l,47E-10	16
6	ЗА5.040 (партия 6)	7	Дикий тип	49,2	l,41E+06	2,29E-04	l,63E-10	16,1
6	ЗА5.040 (партия 6)	8	Дикий тип	50,9	l,40E+06	2,45E-04	l,75E-10	16,8
6	ЗА5.040 (партия 6)	Среднее	Дикий тип	49,3	l,42E+06	2,37E-04	l,67E-10	16,1	100
6	IgG4 изо	1		48,8	N/A	N/A	N/A	0
6	IgG4 изо	2		48,9	N/A	N/A	N/A	0
6	IgG4 изо	3		48,8	N/A	N/A	N/A	0
6	Изотип IgG4	Среднее		49,8	N/A	N/A	N/A	0	N/A
6	ЗА5.040 (Очищенное)	1	Дикий тип	49,6	l,43E+06	2,39E-04	l,68E-10	16,1
6	ЗА5.040 (Очищенное)	2	Дикий тип	49,8	l,48E+06	2,85E-04	l,93E-10	16,2
6	ЗА5.040 (Очищенное)	3	Дикий тип	49,7	l,45E+06	2,32E-04	l,60E-10	16,1
6	ЗА5.040 (Очищенное)	Среднее	Дикий тип	49,7	l,45E+06	2,52E-04	l,74E-10	16,1	94
6	3A5.237	1	VL_D92W	47,9	l,57E+06	2,67E-04	l,70E-10	15,5
6	3A5.237	2	VLD92W	48,7	l,55E+06	2,58E-04	l,66E-10	15,6
6	3A5.237	3	VLD92W	48,5	l,52E+06	2Д2Е-04	l,40E-10	15,7
6	3A5.237	Среднее	VLD92W	48,3	l,55E+06	2,46E-04	l,59E-10	15,6	96
6	ЗА5.161	1	VLS52L	49,4	l,47E+06	2,62E-04	l,78E-10	16,2
6	ЗА5.161	2	VLS52L	49,9	l,43E+06	2,41E-04	l,69E-10	16,2
6	ЗА5.161	3	VLS52L	49,9	l,40E+06	2Д9Е-04	l,57E-10	16,4
6	ЗА5.161	Среднее	VLS52L	49,7	l,43E+06	2,41E-04	l,68E-10	16,2	99
6	ЗА5.169	1	VL_D53S	48,9	l,23E+06	2,43E-04	l,98E-10	15,6
6	ЗА5.169	2	VLD53S	49,5	l,26E+06	2,44E-04	l,93E-10	15,9
6	ЗА5.169	3	VLD53S	49,7	l,23E+06	2,46E-04	l,99E-10	16,1
6	ЗА5.169	Среднее	VLD53S	49,3	l,24E+06	2,44E-04	l,97E-10	15,8	97
6	3A5.183	1	VLR54H	47,9	l,44E+06	2,32E-04	l,61E-10	15,6
6	3A5.183	2	VLR54H	48,2	l,44E+06	2,50E-04	l,74E-10	15,8
6	3A5.183	3	VLR54H	48,4	l,39E+06	2,04E-04	l,47E-10	15,8
6	ЗА5Л83	Среднее	VL R54H	48,1	l,42E+06	2,29E-04	l,61E-10	15,7	104
6	3A5.193	1	VLP55W	48,5	l,32E+06	2,32E-04	l,76E-10	15,7
6	3A5.193	2	VLP55W	48,3	l,34E+06	2,51E-04	l,88E-10	15,3
6	3A5.193	3	VLP55W	48,7	l,29E+06	2,57E-04	l,99E-10	15,6
6	3A5.193	Среднее	VLP55W	48,5	l,32E+06	2,47E-04	l,88E-10	15,5	96
6	ЗА5.198	1	VLS56Q	49,1	l,42E+06	2,43E-04	l,71E-10	16
6	ЗА5.198	2	VLS56Q	49	l,49E+06	2,90E-04	l,95E-10	15,7
6	ЗА5.198	3	VLS56Q	49,3	l,42E+06	2,38E-04	l,68E-10	15,9
6	ЗА5.198	Среднее	VLS56Q	49,1	l,44E+06	2,57E-04	l,78E-10	15,8	92
6	ЗА5.278	1	VL_H95bY	48,3	l,55E+06	2,53E-04	l,63E-10	15,9
6	ЗА5.278	2	VL_H95bY	48,2	l,62E+06	2,43E-04	l,49E-10	15,7
6	ЗА5.278	3	VL_H95bY	48,5	l,57E+06	2Д4Е-04	l,36E-10	15,8
6	ЗА5.278	Среднее	VL H95bY	48,3	l,58E+06	2,37E-04	l,49E-10	15,8	100
6	ЗА5.279	1	VL_H95bD	50	l,58E+06	2,50E-04	l,58E-10	16,3
6	ЗА5.279	2	VL_H95bD	49,7	l,61E+06	2,42E-04	l,50E-10	16,1
6	ЗА5.279	3	VL_H95bD	50	l,61E+06	2,43E-04	l,51E-10	16,4

- 29 042576

6	3A5.279	Среднее	VL H95bD	49,9	1,60Е+06	2,45E-04	l,53E-10	16,2	97
6	3A5.294	1	VLV97A	49,1	l,31E+06	2,54E-04	l,94E-10	15,9
6	3A5.294	2	VLV97A	48,6	l,31E+06	2,13E-04	l,62E-10	15,7
6	3A5.294	3	VLV97A	48,6	l,37E+06	2,15E-04	l,57E-10	15,6
6	3A5.294	Среднее	VL V97A	48,7	l,33E+06	2,27E-04	l,71E-10	15,7	104
6	3A5.301	1	VLV97H	48,4	l,51E+06	2,76E-04	l,83E-10	15,8
6	3A5.301	2	VLV97H	48,1	l,58E+06	l,06E-04	6,71E-11	15,6
6	3A5.301	3	VLV97H	47,8	l,60E+06	2,45E-04	l,53E-10	15,4
6	3A5.301	Среднее	VLV97H	48,1	l,56E+06	2,09E-04	l,34E-10	15,6	114
6	3A5.063	1	VLG25K	48	l,37E+06	2,61E-04	l,90E-10	15,7
6	3A5.063	2	VLG25K	48,1	l,36E+06	2,70E-04	l,99E-10	15,5
6	3A5.063	3	VLG25K	47,8	l,42E+06	2,50E-04	l,76E-10	15,3
6	3A5.063	Среднее	VL G25K	47,9	l,38E+06	2,60E-04	l,88E-10	15,5	91
6	3A5.302	1	VLV97W	48,9	l,65E+06	2,35E-04	l,42E-10	16
6	3A5.302	2	VLV97W	48,9	l,69E+06	2,35E-04	l,39E-10	15,8
6	3A5.302	3	VLV97W	48,5	l,66E+06	2,40E-04	l,45E-10	15,7
6	3A5.302	Среднее	VL V97W	48,7	l,67E+06	2,37E-04	L42E-10	15,8	100
6	3A5.202	1	VLQ89A	48,9	l,09E+06	2,49E-04	2,29E-10	15,8
6	3A5.202	2	VLQ89A	48,7	l,07E+06	l,89E-04	l,77E-10	15,6
6	3A5.202	3	VLQ89A	48,8	l,09E+06	2,44E-04	2,25E-10	15,7
6	3A5.202	Среднее	VLQ89A	48,8	l,08E+06	2,27E-04	2,10E-10	15,7	104
6	3A5.203	1	VLQ89S	49	l,28E+06	2,82E-04	2,20E-10	15,9
6	3A5.203	2	VLQ89S	48,6	l,28E+06	2,26E-04	l,76E-10	15,6
6	3A5.203	3	VLQ89S	48,9	l,27E+06	2,36E-04	l,86E-10	15,7
6	3A5.203	Среднее	VLQ89S	48,8	l,28E+06	2,48E-04	L94E-10	15,7	96
6	3A5.204	1	VLQ89L	49,9	5,01E+05	2,20E-04	4,38E-10	14,4
6	3A5.204	2	VLQ89L	49,9	5,02E+05	l,88E-04	3,74E-10	14,2

- 30 042576

Таблица 5

Выход экспрессии очищенного белка для выбранных антител-вариантов 3А5.040

№ прогона	ID Антитела	Аминокислотная замена	% выхода очищенного антитела относительно родительского ЗА5.040
6	ЗА5.040	Родительская последовательность	100
6	3A5.237	VLD92W	89
6	ЗА5.161	VLS52L	160
6	ЗА5.169	VL D53S	173
6	3A5.183	VL R54H	172
6	3A5.193	VLP55W	187
6	ЗА5.198	VLS56Q	205
6	ЗА5.278	VL H95bY	210
6	ЗА5.279	VL H95bD	143
6	ЗА5.294	VLV97A	140
6	3A5.301	VLV97H	151
6	3A5.063	VL_G25K	110
6	3A5.302	VL V97W	156
6	ЗА5.202	VL_Q89A	64
6	ЗА5.2ОЗ	VL_Q89S	129
6	ЗА5.204	VL_Q89L	61
6	ЗА5.205	VL_Q89Y	41
6	ЗА5.208	VL Q89H	54
6	ЗА5.550	VHD101Y	88
6	ЗА5.512	VH G96D	72
6	ЗА5.124	VLN32K	128
7	ЗА5.040	Родительская последовательность	100
7	ЗА5.068	VLN26L	96
7	ЗА5.079	VL_N27D	99

Таблица 6

Матрица сканирования VH CDR1

VH CDR1
26 G	27 G	28 S	29 I	30 S	31 N	32 G	33 G	34 Y	35 Y	35А W	35В S
0,5 1,3	1 0,8	0,6 0,9	0,3 0,6	0,1 1,1	1,2 0,1	1,8 0,3	1,2 1,3	1,6 0,7	2,9 0	0,4 0,1	0,9 1
0,6 0,9	1 1		0,3 0,5		1,1 0,2	1,5 0,1	1,2 0	1,6 0,7	1,3 0	0,2 0,1
0,2 1,1	1,2 0,8	0,7 1,1	0,8 0,9	1,5 0,7	0,7 0,2	0,8 0	0,8 0,4	1,6 0,6	1,9 0,1	1 0,1	0,4 0,3
0,6 1,1	0,8 0,1	0,5 1,2	0,2 0,1	1 0,7	0,6 0,1	0,9 0	1,1 0		1 0,5	0,9 0
0,6 1,2	0,7 0,9	0,7 1,1	0,2 0	1 0,8	0,8 0,5	1,1 о	2,8 0	1 0,2	0,9 0	NE NE	0,2 0,9
0,9 1,1	0,8 0,7	0,8 1	0,4 0,3	1,2 1,1	1,6 0,2	1,3 0,1	2,8 0,1	1,7 0,6	1,3 0	0,3 0,1	0,5 0,2
1 1	1 0,5	0,8 0,9	0,3 0,1	1,6 0,8	1,7 0,1	1,7 0	3,5 0	4,1 0,2	3,8 NB	0,3 0,1	0,1 0
0,9 0,9	0,7 0,4	0,7 0,8	0,2 0,1	0,8 0,8	1,4 0,8	1,1 о	2,7 0	2,2 0,1	2 0	0,5 0,4	0,8 0
1,1 0,8	1 0,2	0,4 0,7	0,4 0	0,7 0,9	0,6 0,2	0,7 0	1,7 0,1	0,5 0,5	2,3 0		0,5 0

и kd

VH CDR1 для вариантов

SC А S

D Q К н W Р

Сводка различий в титре антитела-варианта 3А5.040 (определение

AbM). Нумерация аминокислот по Kabat и аминокислоты родительского 3А5.040 приведены в верхнем ряду. Мутированные остатки указаны в левом столбце. Крайнее левое значение в каждой ячейке является пропорциональным титром каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040 (>1=более высокий титр, <1=более низкий титр), в то время как правое значение является пропорциональным kd (>1=более низкое kd, <1=более высокое kd) каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040. Несделанные варианты отмечены серым цветом. NB, отсутствие связывания. NE, отсутствие экспрессии (Последова- 31 042576 тельность VH CDR1 раскрыта как остатки 26-37 из SEQ ID NO: 73).

Таблица 7

Матрица сканирования VH CDR2

SC	VHCDR2
50 Y	51 I	52 Y	53 Y	54 S	55 G	56 S	57 Т	58 Y
А	2,7 0,2	2,4 0,8	3 0	2,5 0,2	1,1 0,6	0,7 0,9	1 0,9	1 0,8	1 0
S L	3,3 0,2 1,2 0,3	1,3 0,8 0,9 0,7	3,3 0,1 2,1 0	2,3 0,6 1 0,2	1,6 0	0,7 0,7 0,7 0,1	1 1,2	0,7 0,8 ОД 1,2	1 0 0,7 0
Y D	1,7 0,1	1,1 о 0,5 0,1	3,3 NB	1,8 0,2	0,9 0 2 0	0,5 0,1 0,4 0,4	0,9 0,5 0,8 0,2	0,5 1,1 0,5 1,1	0,5 0
Q	2,4 0,2	1 0,2	2,6 0	2,1 0,2	1,5 0,1	0,4 0,5	1,1 1,1	0,6 1	0,8 0,1
К	1,4 0,2	1,2 0,1	3,5 NB	2,3 0,1	2 0	0,5 0,5	1,2 1,3	0,6 0,9	1 0,1
н	3 0,1	0,9 0	2,9 0,3	2,1 0,5	1 0,2	0,4 0,6	0,4 1	0,5 1	0,9 0,2
W	1,3 0,1	1,4 0	1 ОД	1,5 0,4	1,1 0,1	0,3 0,2	1 0,4	0,4 0,8	0,8 0,2
Р

Сводка различий в титре антитела-варианта 3А5.040 и kd для вариантов CDR2 VH (определение AbM). Нумерация аминокислот по Kabat и исходные аминокислоты 3А5.040 приведены в верхнем ряду. Мутированные остатки указаны в левом столбце. Крайнее левое значение в каждой ячейке является пропорциональным титром каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040 (>1=более высокий титр, <1=более низкий титр), в то время как правое значение является пропорциональным kd (>1=более низкое kd, <1=более высокое kd) каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040. Несделанные варианты отмечены серым цветом. NB, отсутствие связывания. NE, отсутствие экспрессии (Последовательность VH CDR2 раскрыта как остатки 52-60 из SEQ ID NO: 73).

Таблица 8

Матрица сканирования VH CDR3

			VH CDR3
	93	94	95	96	97	98	99	101	102
SC	А	S	L	G	N	W	F	D	Y
А		1 1,2	0,5 0	0,8 0,8	1 0,6	1,1 0,5	0,4 0,2	0,7 0,7	1,1 1,2
S	0,6 1,1		NE NE	0,9 0,5	0,8 0,5	0,8 0,4	0,4 0,1	0,8 0,9	1,4 0,9
L	0,2 0,5	0,4 0,1		0,6 0	1 0,9	0,4 0,6	0,6 0,9	0,4 0,2	0,5 0,9
Y	0,1 NB	0,3 0,1	1 0	0,6 NB	0,8 0,3	1,4 0,9	0,4 1,1	0,9 0,5
D	NE NE	NE NE	0,2 NB	0,7 0	0,9 0,5	0,4 1,1	0,3 0		0,5 0,7
Q	0,4 1	0,5 0,2	0,2 0,2	0,6 0,2	1,3 1	0,5 0,6	0,4 0,1	0,8 0,5	0,9 1
К	0,2 NB	1,3 0,3	0,7 0	1,5 0	1,7 0,7	0,7 0,1	0,4 NB	0,7 0,3	0,9 1,3
н	0,3 NB	0,7 0	0,9 0,1	1,2 0,1	1,1 0,5	0,8 0,7	0,4 1	0,7 0,6	1,3 1
W	0,2 NB	0,4 0,0	0,7 0	0,6 0	0,6 0,2		0,3 0,2	0,3 0,2	1,2 0,9
Р	0,1 NB	0,2 0,8	0,4 NB	0,2 0,2	0,7 0,2	0,3 0,1	0,4 NB	0,4 0,1	0,3 0,8

Сводка различий в титре антитела-варианта 3А5.040 и kd для вариантов CDR3 VH (определение AbM) и аминокислотных положений по Kabat 93 и 94. Нумерация аминокислот по Kabat и исходные аминокислоты 3А5.040 приведены в верхнем ряду. Мутированные остатки указаны в левом столбце. Крайнее левое значение в каждой ячейке является пропорциональным титром каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040 (>1=более высокий титр, <1=более низкий титр), в то время как правое значение является пропорциональным kd (>1=более низкое kd, <1=более высокое kd) каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040. Несделанные варианты отмечены серым цветом. NB, отсутствие связывания. NE, отсутствие экспрессии. (Последовательность VH CDR3 раскрыта как остатки 98-106 из SEQ ID NO: 73).

Таблица 9

Матрица сканирования VL CDR1

VL CDR1
24	25	26	27	28	29	30	31	32	33	34
G	G	N	N	I	G	S	к	N	V	Y
1 1,3	1,1 1,3	0,8 1,3	1,2 1,2	0,9 1,9	0,6 1,1	0,8 1,1	1,2 0,6	0,7 0,2	0,7 1,5	1,7 0,3
1 1,1	0,4 1,1	1,6 1,1	0,9 1,1	0,5 1	0,9 1,2		1,1 0,8	1 1,1	1,3 1,2	0,3 1,2
1 1,4	0,8 1,1	1 1	1 1,3	0,6 1,1	0,8 1,3	1,3 1,2	1,3 0,3	1,2 1,2	1 0,8	0,6 0,5
0,9 1	1 1,4	1 1,3	1 1,1	0,9 1,4	0,6 0,9	0,9 1,1	1 1,3	0,9 1,2	0,7 1,3
1 1,2	0,9 1	1 1,5	1 1	0,4 1,2	0,9 1,6	1,2 1,3	1,1 0,2	1,2 0,9	0,4 1,2	0,7 0,2
1 1,2	0,9 1,3	1 1,1	0,9 1,1	0,5 1,1	1,4 1,1	0,8 1,3	0,9 0,3	1 0,9	0,5 0,8	0,6 0,2
1 1,2	0,9 1,7	1 1	1 1,3	0,5 1,1	0,7 1,3	1 1,6		1,3 I	0,1 1	0,6 0,3
1 1,3	1,1 1,3	1 1	0,9 1,5	0,8 0,9	1 1,4	1,5 1,2	1 0,5	0,9 1,5	0,5 NB	0,8 0,2
1,1 1,4	0,8 1,3	0,9 1,2	1,5 0,9	0,4 0,9	1,1 1,2	1,1 0,9	1,3 0,9	0,8 1,3	0,2 1,1	0,6 0,1

Сводка различий в титре антитела-варианта 3А5.040 и kd для вариантов CDR1 VL (определение AbM). Нумерация аминокислот по Kabat и исходные аминокислоты 3А5.040 приведены в верхнем ряду. Мутированные остатки указаны в левом столбце. Крайнее левое значение в каждой ячейке является про

- 32 042576 порциональным титром каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040 (>1=более высокий титр, <1=более низкий титр), в то время как правое значение является пропорциональным kd (>1=более низкое kd, <1=более высокое kd) каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040. Несделанные варианты отмечены серым цветом. NB, отсутствие связывания. NE, отсутствие экспрессии. (Последовательность VL CDR1 раскрыта как остатки 23-33 из SEQ ID NO: 74).

Таблица 10

Матрица сканирования VL CDR2

	VLCDR2
	50	51	52	53	54	55	56
SC	D	D	S	D	R	Р	S
А	0,8 0,6	0,9 0,8	0,8 0,9	0,5 0,1	1,4 1,2	0,1 0,9	1,4 1,1
S	0,9 1	0,7 0,7		1,5 1,9	1,3 1,1	1,1 1
L	0,9 0,4	0,8 0,6	1,1 1,8	1,4 1,3	1,4 1,2	1,5 1,2	1,3 1,1
Y	0,8 0,5	0,8 0,6	1,1 1,1	2,1 1,1	1,4 1,0	1,3 1	1,2 1
D			1,8 1,2		1,3 1,2	1,6 1,3	1,5 1
Q	0,7 0,5	0,9 0,9	0,1 1	1 1	1,5 1,2	1,5 1,1	1,3 1,3
к	0,7 0,6	0,7 0,9	1,7 0,1	1,8 1,1	1,7 1,0	1,4 1,1	1 0,9
н	1 0,6	0,9 0,6	1,7 1,1	1,2 0,9	1,4 1,4	1,8 1	1,4 1
W	0,7 0,4	0,6 0,5	1,7 1,1	1,8 1,2	ο,ι 1,0	1,6 1,4	0,9 0,9
Р

Сводка различий в титре антитела-варианта 3А5.040 и kd для вариантов VL CDR2 (определение AbM). Нумерация аминокислот по Kabat и исходные аминокислоты 3А5.040 приведены в верхнем ряду. Мутированные остатки указаны в левом столбце. Крайнее левое значение в каждой ячейке является пропорциональным титром каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040 (>1=более высокий титр, <1=более низкий титр), в то время как правое значение является пропорциональным kd (>1=более низкое kd, <1=более высокое kd) каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040. Несделанные варианты отмечены серым цветом. NB, отсутствие связывания. NE, отсутствие экспрессии (Последовательность VL CDR2 раскрыта как остатки 49-55 из SEQ ID NO: 74).

Таблица 11

Матрица сканирования VL CDR3

VL CDR3

SC	89 Q	90 V	91 W	92 D	93 S	94 S	95 S	95А D	95В Н	96 V	97 V
А	0,6 1	0,8 1	0,8 0	1,1 1,2	1,1 о	1 1	1 1	1,1 0	0,2 0,7	0,7 0,6	1,3 1,5
S	1,3 1	0 0,4	1 0	1,1 1,2				1 0,1	0,6 1,6	0,2 0,5	1,1 1,1
L	0,6 1,2	0,6 0,8	1 0	1,3 1,5	1,2 0	0,9 0,2	1 1	0,7 0	1,8 0,9	0,8 0,6	1 1,2
Y	0,4 1	0,9 0,4	0,6 0,1	0,7 1,1	1,2 0	1,5 0,3	0,8 1,1	1 0	1,4 1,5	0,6 0,1	0,9 1,1
D	0,1 1,2	0,3 0,3	0,7 0		0,7 0	0,1 0,2	1,1 0,9		2,1 1,5	0,1 0,1	1 0,9
Q		0,8 0,6	0,8 0	1,9 0,8	1,1 о	1,4 0,6	0,6 1,3	1,1 0	1,3 0,8	0,3 0,2	0,7 1,2
К	1,4 0,9	0,5 1,4	0,7 NB	0,9 1,3	1,6 NB	1,1 0,8	1,2 1,2	0,7 0	0,6 1,2	0,2 0	0 1
Н	0,5 0,9	0,6 0,4	0,6 0	1,2 1,1	1,3 0	1 0,8	1 1,2	1,9 0		0,5 NB	1,7 1,4
W	0,7 0,9	0,8 0,2		NE NE	1,2 0	0,2 0,4	0,9 0,9	0,9 0	1,5 1	0,2 0	0,7 1,6
Р	0,7 0,2	0,8 0	0,4 0	0,6 0,8	1,1 о	1,4 0,9	1,5 0	1,5 0	1,5 0	1,1 0,2	0,2 1

Сводка различий в титре антитела-варианта 3А5.040 и kd для вариантов CDR3 VL (определение AbM). Нумерация аминокислот по Kabat и исходные аминокислоты 3А5.040 приведены в верхнем ряду. Мутированные остатки указаны в левом столбце. Крайнее левое значение в каждой ячейке является пропорциональным титром каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040 (>1=более высокий титр, <1=более низкий титр), в то время как правое значение является пропорциональным kd (>1=более низкое kd, <1=более высокое kd) каждого варианта по сравнению с родительским 3А5.040. Несделанные варианты отмечены серым цветом. NB, отсутствие связывания. NE, отсутствие экспрессии. (Последовательность VL CDR3 раскрыта как остатки 88-98 из SEQ ID NO: 74).

Создание экспрессирующего вектора.

Нуклеотидная последовательность может влиять на экспрессию гена и последующий уровень экспрессии белка. Исследовали несколько различных нуклеотидных последовательностей на предмет оптимальной экспрессии 3А5.046. Эти последовательности приведены в следующей таблице:

Таблица 12

Нуклеотидная последовательность

Название гена	SEQIDNo:
ЗА5.046 VH	SEQ ID NO	69
ЗА5.046 VL	SEQ ID NO	71
константная область ЗА5.046 НС	SEQ ID NO	70
константная область ЗА5.046 LC	SEQIDNO: 72

- 33 042576

Измерение аффинности антитела 3А5.046 к рекомбинантному IL-5 человека с помощью SPR.

Аффинность антител 3А5.046 к рекомбинантному IL-5 человека была определена с использованием системы Biacore T200 (GE Healthcare). Вкратце, коммерческое мышиное антитело против IgG человека (Thermo Scientific) было присоединено к двум смежным (контрольной и тестовой) проточным ячейкам на чипе Biacore CM5 (GE Healthcare) в соответствии с рекомендациями производителя. Антитело 3А5.046 было захвачено при низкой плотности (около 125 RU) на поверхности тестируемой проточной ячейки, и разведения рекомбинантного IL-5 человека или пустого буфера были инъецированы через тестовую и контрольную проточную ячейку со скоростью 30 мкл/мин (фиг. 6, табл. 13).

Полученные сенсограммы имели двойной контроль (значения тестовой проточной ячейки вычитались из значений проточной ячейки контроля (поверхность, связанная с анти-IgG человека без покрытого антитела), а также пустого буфера). Вычтенные сенсограммы из инъекций IL-5 человека при 2,5, 1,25, 0,625, 0,313 и 0,156 мкг/мл были подогнаны к модели связывания Ленгмюра 1:1 с использованием программного обеспечения Biacore Evaluation для определения констант связывания из анализов в двух повторах (табл. 13).

Таблица 13

Кинетические константы из мультиконцентрационного кинетического анализа Biacore связывания антитела 3А5.046 с рекомбинантным IL-5 человека при 2,5, 1,25, 0,625, 0,313 и 0,156 мкг/мл

Антитело	Эксперимент	ка (1/Мс)	kd (1/с)	KD (пМ)	Chi2 (RU2)
ЗА5.046	Повтор 1	8Д6Е+05	1,58Е-05	19,4	0,0269
	Повтор 2	8,49Е+05	1,84Е-05	21,7	0,0296

Эти результаты показывают, что антитело 3А5.046 имеет высокую аффинность к рекомбинантному IL-5 человека.

Активность 3А5.046 по сравнению с меполизумабом в анализе пролиферации клеточной линии TF1.6G4 3А5.046 и меполизумаб использовали в анализе пролиферации клеточной линии TF-1.6G4. 3А5.046 и меполизумаб ингибировали пролиферацию, вызванную IL-5 человека, со средним IC₅₀-13,8 пМ и 534 пМ, соответственно (см. табл. 14 и фиг. 7А). Оба антитела продемонстрировали ингибирование IL-5 яванского макака на клеточной линии TF1.6G4 (фиг. 7В), со средним IC₅₀ для 3А5.046, равным 43,8 пМ, и для меполизумаба, равным 584 пМ.

Таблица 14

Антитело	Агонист	Количество наблюдений	среднее (пМ)	ст. откл.
Меполизумаб	IL-5 яванского макака	4	584,0982	129,9019
	IL-5 человека	4	534,2803	150,2546
ЗА5.046	IL-5 яванского макака	8	43,80916	12,62095
	IL-5 человека	8	13,83667	4,219783

Обнаружение нативного IL5 из первичных клеток с помощью ELISA с использованием анти-IL-5 антител по изобретению.

Антитело 3А5 было использовано в качестве захватывающего реагента в сэндвич-ELISA. В сочетании с коммерчески доступным детектирующим антителом (TRFk5R; R & D systems, # МАВ405) может быть проведена количественная оценка уровней рекомбинантного IL-5 в образцах буфера с добавкой определяемого вещества (фиг. 8). Затем этот способ был применен для обнаружения нативного IL-5, секретируемого первичными клетками. Стимулировали CD4+ Т-клетки от четырех доноров для секреции IL-5. Уровни IL-5 затем определяли с использованием сэндвич-ELISA с антителом 3А5 в качестве реагента для захвата. Три из четырех донорских Т-клеток ответили на стимуляцию Т-клеток и имели определяемые уровни IL-5 в надосадочной жидкости клеточной культуры (фиг. 8). Аналогичные исследования были выполнены с IL-5 человека, секретируемом первичными человеческими донорскими CD4+ Тклетками, с использованием антитела 3А5.046 в качестве агента захвата, и полученные результаты соответствовали результатам, полученным с антителом 3А5 (данные не показаны).

Ингибирование анти-IL-5 антителом дифференцировки эозинофилов.

Анализ на выживание с использованием CD34+ клеток пуповинной крови был использован для оценки способности анти-IL-5 антител ингибировать IL-5 зависимую дифференцировку клетокпредшественников костного мозга в эозинофилы и оценки способности анти-IL-5 антител ингибировать фенотипически зрелую выживаемость эозинофилов. В контрольных клетках, обработанных IL-5, фенотипически зрелые эозинофилы были преобладающей популяцией на 28 день (фиг. 9, заштрихованная область на графике). Антитело 3А5.046 способно ингибировать дифференцировку CD34+ клеток пупо

- 34 042576 винной крови, инкубированных с IL-5 в течение 28 дней, в эозинофилы. Антитело 3А5.046 было более сильным ингибитором IL-5-опосредованной дифференцировки эозинофилов, чем меполизумаб (фиг. 9).

Рентгеноструктурный анализ.

Молекулярную структуру комплекса между Fab антитела 3А5.046 и рекомбинантным IL-5 человека исследовали с помощью рентгеновской кристаллографии. Чтобы подготовиться к экспериментам с рентгеновской кристаллографией, 3А5.046 гидролизовали папаином, который расщепляет интактное антитело в шарнирной области, разделяя домены Fc и Fab. Fab 3А5.046 очищали стандартной аффинной хроматографией с протеином А и включали в комплекс с рекомбинантным негликозилированным IL-5 человека. Комплекс 3А5.046 Fab: IL-5 человека очищали для экспериментов по кристаллизации с использованием стандартной эксклюзионной хроматографии. Комплекс использовали в варьирующих концентрациях в коммерчески доступных скринингах кристаллизации белков типа sparse matrix (разреженная матрица) для широкого отбора условий кристаллизации. Оптимизации любых условий попадания, которые обеспечивают кристаллы комплекса из скринингов кристаллизации белков типа sparse matrix (разреженная матрица), проводили для улучшения морфологии кристалла и дифракции кристалла по мере необходимости.

Кристаллы комплекса 3А5.046 Fab: IL-5 человека, собирали, быстро замораживали в жидком азоте и транспортировали к синхротронному комплексу для дифракционных тестов и сбора данных. Кристаллическое дифракционное тестирование выполняли на синхротроне, который создает высокоэнергетические рентгеновские микропучки для получения дифракции высокого разрешения. Таким образом получали данные дифракции рентгеновских лучей на кристаллах комплекса 3А5.046 Fab: IL-5 человека. Исходная структурная модель комплекса может быть получена с использованием стандартных методов молекулярного замещения с опубликованными молекулярными структурами IL-5 и Fab в качестве матриц. Окончательная структура комплекса Fab и IL-5 человека 3 А5.046 может быть получена путем итеративного уточнения модели структуры до тех пор, пока ошибки подгонки не станут лучше, чем 30% (конечный R_free равен 0,3), а параметры химической связи (например, распределение длин и углов связей, стереохимия и водородные связи) не будут находиться в допустимых пределах.

Характеризация связывания антитела 3А5.046 с IL-5 из модельных видов, отличных от человека.

Антитело 3А5.046 было проверено с помощью анализа Biacore с использованием системы Т200 (GE Healthcare) на предмет связывания с рекомбинантными цитокинами IL-5 человека, IL-5 крысы, IL-5 мыши и IL-5 морской свинки. Эта панель нечеловеческих IL-5 была выбрана для представления основных видов животных моделей, используемых при доклинической разработке. Изотипное контрольное антитело (IgG4) и антитело 3А5.046 иммобилизовали на проточных ячейках 1 и 2 чипа СМ5 серии S (GE Healthcare), соответственно, с использованием стандартных способов аминного сочетания. Цитокины разбавляли до 1 и 10 μг/мл в рабочем буфере HBS-EP+ (GE Healthcare) и впрыскивали через проточные ячейки 1 и 2. Инъекции только буфера через проточные ячейки 1 и 2 были включены для двойного контроля. Анализ данных проводился с использованием оценочного программного обеспечения Biacore T200. Полученные сенсограммы имели двойной контроль (значения тестируемой проточной ячейки вычитались из значений контрольной проточной ячейки, а также пустого буфера).

Было обнаружено, что антитело 3А5.046 связывается с IL-5 человека и IL-5 яванского макака, но не с IL-5 мыши, IL-5 крысы или IL-5 морской свинки (фиг. 10А и 10Е). Это указывало на то, что 3А5.046 можно использовать в доклинических моделях с яванским макаком.

Антитело 3А5.046 не связывается с другими человеческими цитокинами, близко родственными с IL-5.

Антитело 3А5.046 было проверено с помощью анализа Biacore с использованием системы Т200 (GE Healthcare) на предмет связывания с рекомбинантными человеческими цитокинами IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (GM-CSF), макрофагальным колониестимулирующим фактором (M-CSF) и гормоном роста (GH). Эта репрезентативная группа близкородственных человеческих цитокинов была выбрана на основании их структурного и функционального сходства с IL-5 человека. Контрольное изотипическое антитело (IgG4) и антитело 3А5.046 были иммобилизованы на проточных ячейках 1 и 2 чипа СМ5 серии S (GE Healthcare), соответственно, с использованием стандартных способов аминного сочетания. Цитокины разбавляли до 1 и 10 μг/мл в рабочем буфере HBS-EP+ (GE Healthcare) и инъецировали через проточные ячейки 1 и 2. Инъекции только буфера через проточные ячейки 1 и 2 были включены для двойного контроля. Анализ данных проводился с использованием оценочного программного обеспечения Biacore T200. Полученные сенсограммы имели двойной контроль (значения тестируемой проточной ячейки вычитались из значений контрольной проточной ячейки, а также пустого буфера).

Было обнаружено, что антитело 3А5.046 связывается только с IL-5 человека, но не с человеческими цитокинами IL-2, IL-3, IL-4, GM-CSF, M-CSF, или GH (фиг. 11А и 11D), демонстрируя, таким образом, высокую специфичность 3А5.046 к IL-5 человека.

Оценка антител 3А5.046 на модели эозинофилии дыхательных путей яванского макака, индуцированной Ascaris suum.

- 35 042576

Антитело 3А5.046 тестировали с использованием модели острой эозинофилии дыхательных путей у яванского макака с Ascaris suum, как описано в Hart, Т.к., et al., Preclinical efficacy and safety of mepolizumab (SB-240563), a humanized monoclonal antibody to IL-5, in cynomolgus monkeys. J Allergy Clin Immunol, 2001. 108(2): p. 250-7.

Шестнадцать самок яванского макака, которые были ранее сенсибилизированы к Ascaris suum, оценивали по уровню остаточной чувствительности с помощью интрадермальной контрольной провокационной пробы A. suum. Четырнадцать из этих животных были отобраны для участия в исследовании на основании ответа на провокационную пробу, кожных волдырей, и рандомизированы на две группы по n=7 на группу. Через две недели после внутрикожного тестирования кожной сыворотки были взяты исходные образцы крови и жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF) (день 8). Приблизительно через 24 ч после сбора исходной пробы животных обрабатывали либо плацебо (содержащим водный буфер рН 6,3 с 200 мМ аргинином и 25 мМ гистидином), либо антителом 3А5,046 (10 мг/кг внутривенно, в водном буфере рН 6,3 с 200 мМ аргинином и 25 мМ гистидина) в виде слепого исследования (день 7). Через одну неделю после лечения плацебо или антителом выполняли вторую внутрикожную инъекцию А. suum и всем животным давали инъекцию A. suum путем доставки равного количества экстракта A. suum (Greer Laboratories Inc .; 5 мг/мл в стерильной воде) через небулайзер PARI LC (день 0). Диаметр кожных волдырей измеряли через 15 мин после провокационной пробы. Через два дня после ингаляционной провокационной пробы А. suum были взяты образцы крови и BALF. Дополнительные образцы крови для гематологических конечных точек и PK-анализа собирали еженедельно, начиная с 10-го дня и до 45-го дня.

Существенных различий в реакции кожных волдырей между первой и второй интрадермальными провокационными пробами A. suum обнаружено не было. У всех животных было выявлено увеличение эозинофилов в BALF в результате провокационной пробы A. suum, но у животных, получавших антитело 3А5.046, это увеличение было незначительным. В BALF у животных, получавших антитело 3А5.046, эозинофилов было значительно меньше чем через 48 ч после провокационной пробы A. suum у животных, получавших плацебо (р<0,01; тест Манна-Уитни; фиг. 12).

Провокационная проба A. suum также приводила к значительному увеличению эозинофилов в крови по сравнению с исходным уровнем у животных, получавших плацебо, до 10-го дня после провокационной пробы (фиг. 13А). Обработка антителом 3А5.046 приводила к значительному снижению уровня эозинофилов в крови до уровней ниже исходного уровня (фиг. 13А), и это снижение количества эозинофилов в крови сохранялось в течение, по меньшей мере, 52 дней после начальной дозы (фиг. 13В).

Таким образом, обработка с помощью 3А5.046 значительно снизила индуцированную A. suum эозинофилию дыхательных путей через 48 ч после провокационной пробы, и значительно уменьшила количество эозинофилов в крови, ниже базовых уровней, в течение по меньшей мере 52 дней после однократного внутривенного (IV) дозы 10 мг/кг.

Исследование функции антител в модели эозинофилии дыхательных путей на крысах с гуманизированным IL-5.

Alternaria alternata (Alternaria) является грибным аллергеном, который, как известно, вызывает астму у людей и может привести к эозинофилии и астма-подобным симптомам у грызунов. При провокационной пробе Alternaria, у knock-in крыс с гуманизированным IL-5 (животные, у которых крысиный IL-5 был заменен IL-5 человека), наблюдается повышенный уровень эозинофилов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF) из легких (фиг. 14).

Одиночную интратрахеальную инстилляцию суспензии Alternaria вводили гуманизированным крысам IL-5, и образцы крови и BALF отбирали через 2, 3 или 4 дня после введения Alternaria. Обычно в этой модели эозинофилы значительно повышены в образцах BALF и могут быть либо увеличены, либо неизмены в образцах крови.

Тестовые антитела вводили до индукции эозинофилии с помощью Alternaria и оценивали по их способности снижать количество эозинофилов в BALF и крови.

Специалисты в данной области техники будет очевидно, что многочисленные изменения и модификации могут быть сделаны к предпочтительным воплощениям настоящего изобретения, и что такие изменения и модификации могут быть сделаны без отхода от сущности настоящего изобретения. Поэтому предполагается, что прилагаемая формула изобретения охватывает все такие эквивалентные варианты, которые соответствуют истинному духу и объему изобретения.

Раскрытия каждого патента, патентной заявки и публикации, цитируемые или описанные в этом документе, настоящим включены в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

- 36 042576

Таблица 15

Последовательности

Белковая цепь	Последовательность	Белковая цепь	Последовательность
Консенсус LCDR1	GX1X2X3X4X5X6KX7X8Y SEQ ID NO: 1
Консенсус LCDR2	DDX8X9RPS SEQ ID NO: 2
Консенсус LCDR3	QVWX10SSSDX11VX12 SEQ ID NO: 3
Антитело ЗА5
ЗА5 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
ЗА5 HCDR2	YIYYSGSIY SEQ ID NO: 6	3A5 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
ЗА5 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5 LCDR3	QVWYSSSDHVV SEQ ID NO: 9
ЗА5 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCASL GNWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 10
ЗА5 VL	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHDD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWYSSSDHWFGG GTKLTVLG SEQ ID NO: 11
ЗА5 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCASL GNWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDY FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTQIYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 12
ЗА5 LC	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHDD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWYSSSDHWFGG GTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWK ADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEG STVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 13
Антитело ЗА5.001
ЗА5.001 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.001 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
ЗА5.001 HCDR2	YIYYSGSIY	3A5.001 LCDR2	DDSDRPS

- 37 042576

	SEQ ID NO: 6		SEQ ID NO: 7
3A5.001 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.001 LCDR3	QVWYSSSDHVV SEQ ID NO: 9
3A5.001 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCASL GNWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 10
3A5.001 VL	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHDD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWYSSSDHWFGG GTKLTVLG SEQ ID NO: 11
3A5.001 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSIYYNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCASL GNWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS SVVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSIYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 14
3A5.001 LC	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHDD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWYSSSDHWFGG GTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWK ADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEG STVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 13
Антитело 3A5.040
3A5.040 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.040 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.040 HCDR2	YIYYSGSIY SEQ ID NO: 6	3A5.040 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.040 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.040 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.040 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.040 VL	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 17
3A5.040 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSIYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG

- 38 042576

	NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.040 LC	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 19
Антитело 3A5.046
3A5.046 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.046 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.046 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.046 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.046 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.046 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.046 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.046 VL	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 17
3A5.046 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLYITR EPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 20
3A5.046 LC	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 19
Антитело 3A5.063
3A5.063 HCDR1	GGSISNGGYYWS	3A5.063 LCDR1	GKNNIGSKNVY

- 39 042576

	SEQ ID NO: 4		SEQ ID NO: 21
3A5.063 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.063 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.063 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.063 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.063 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.063 VL G25K	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGKNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 22
3A5.063 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.063 LC G25K	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGKNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 23
Антитело 3A5.070
3A5.070 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.070 LCDR1	GGDNIGSKNVY SEQ ID NO: 24
3A5.070 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.070 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.070 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.070 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.070 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.070 VL N26D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGDNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG

- 40 042576

	SEQ ID NO: 25
3A5.070 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
ЗА5.070 LC N26D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGDNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 26
Антитело ЗА5.082
ЗА5.082 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.082 LCDR1	GGNHIGSKNVY SEQ ID NO: 27
ЗА5.082 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.082 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
ЗА5.082 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.082 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
ЗА5.082 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.082 VL N27H	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNHIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 28
3A5.082 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.082 LC N27H	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNHIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS

- 41 042576

	SEQ ID NO: 29
Антитело ЗА5.084
ЗА5.084 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.084 LCDR1	GGNNAGSKNVY SEQ ID NO: 30
ЗА5.084 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.084 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
ЗА5.084 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.084 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
ЗА5.084 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.084 VL I28A	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNAGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVH DDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVF GGGTKLTVLG SEQ ID NO: 31
3A5.084 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.084 LC I28A	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNAGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVH DDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVF GGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA WKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVT HEGSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 32
Антитело 3 A5.107
3A5.107 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.107 LCDR1	GGNNIGKKNVY SEQ ID NO: 33
3A5.107 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.107 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.107 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.107 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.107 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16

- 42 042576

3A5.107 VL S30K	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGKKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 34
3A5.107 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.107 LC S30K	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGKKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 35
Антитело 3A5.125
3A5.125 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.I25 LCDR1	GGNNIGSKHVY SEQ ID NO: 36
3A5.125 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.125 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.125 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.I25 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.125 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.125 VL N32H	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKHVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 37
3A5.125 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.125 LC	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKHVYWYQQKPGQAPVLVVHD

- 43 042576

N32H	DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 38
Антитело ЗА5.127
ЗА5.127 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.127 LCDR1	GGNNIGSKNAY SEQ ID NO: 39
ЗА5.127 HCDR2	YIYYSGSIY SEQ ID NO: 6	3A5.127 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
ЗА5.127 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.127 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
ЗА5.127 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.127 VL V33A	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNAYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 40
3A5.127 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.127 LC V33A	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNAYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 41
Антитело 3 A5.161
3A5.161 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.161 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.161 HCDR2	YIYYSGSIY SEQ ID NO: 6	3A5.161 LCDR2	DDLDRPS SEQ ID NO: 42
3A5.161 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.161 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.161 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI

-44042576

	GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.161 VL S52L	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DLDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVF GGGTKLTVLG SEQ ID NO: 43
3A5.161 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS SVVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.161 LC S52L	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DLDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVF GGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA WKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVT HEGSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 44
Антитело 3 A5.169
3A5.169 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.169 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.169 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.169 LCDR2	DDSSRPS SEQ ID NO: 45
3A5.169 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.169 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.169 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.169 VL D53S	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSSRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 46
3A5.169 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS SVVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

-45042576

	FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQIDNO: 18
3A5.169 LC D53S	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSSRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 47
Антитело 3A5.232
3A5.232HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.232 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.232HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.232 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.232HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.232 LCDR3	QVWLSSSDHVV SEQ ID NO: 48
3A5.232 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQIDNO: 16
3A5.232 VL D92L	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWLSSSDHWFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 49
3A5.232HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQIDNO: 18
3A5.232 LC D92L	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWLSSSDHWFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 50
Антитело 3A5.276
3A5.276 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.276 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.276 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.276 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7

- 46 042576

3A5.276 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.276 LCDR3	QVWDSSSDSW SEQ ID NO: 51
3A5.276 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.276 VL H95bS	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDSWFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 52
3A5.276 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.276 LC H95bS	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDSWFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 53
Антитело 3A5.278
3A5.278 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.278 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.278 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.278 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.278 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.278 LCDR3	QVWDSSSDYVV SEQ ID NO: 54
3A5.278 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.278 VL H95bY	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDYVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 55
3A5.278 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN

- 47 042576

	VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.278 LC H95bY	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDYVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 56
Антитело 3A5.279
3A5.279 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.279 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.279 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.279 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.279 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.279 LCDR3	QVWDSSSDDW SEQ ID NO: 57
3A5.279 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.279 VL H95bD	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDDVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 58
3A5.279 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.279 LC H95bD	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDDVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 59
Антитело 3A5.294
3A5.294 HCDR1	GGSISNGGYYWS	3A5.294 LCDR1	GGNNIGSKNVY

- 48 042576

	SEQ ID NO: 4		SEQ ID NO: 5
3A5.294 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.294 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.294 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.294 LCDR3	QVWDSSSDHVA SEQ ID NO: 60
3A5.294 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.294 VL V97A	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVAFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 61
3A5.294 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS S VVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.294 LC V97A	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVAFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 62
Антитело 3 A5.3 02
3A5.302 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.302 LCDR1	GGNNIGSKNVY SEQ ID NO: 5
3A5.302 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.302 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.302 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.302 LCDR3	QVWDSSSDHVW SEQ ID NO: 63
3A5.302 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.302 VL V97W	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVWF GGGTKLTVLG SEQ ID NO: 64

- 49 042576

3A5.302 НС	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLS SVVTVPS S SLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.302 LC V97W	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVWF GGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA WKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVT HEGSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 65
ЗА5.097
ЗА5.097 HCDR1	GGSISNGGYYWS SEQ ID NO: 4	3A5.097 LCDR1	GGNNIDSKNVY SEQ ID NO: 66
3A5.097 HCDR2	YIYYSGSTY SEQ ID NO: 6	3A5.097 LCDR2	DDSDRPS SEQ ID NO: 7
3A5.097 HCDR3	LGNWFDY SEQ ID NO: 8	3A5.097 LCDR3	QVWDSSSDHW SEQ ID NO: 15
3A5.097 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 16
3A5.097 VL G29D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIDSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLG SEQ ID NO: 67
3A5.097 HC	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNGGYYWSWIRQHPGKGLEWI GYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLG NWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG SEQ ID NO: 18
3A5.097 LC G29D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIDSKNVYWYQQKPGQAPVLVVHD DSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVWDSSSDHVVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS

- 50 042576

	SEQ ID NO: 68
ЗА5.046 VH nucleotide Последовательност ь (synthetic)	CAGGTGCAGCTGCAGGAATCTGGCCCTGGCCTGGTCAAGCCCAGCCA GACCCTGAGCCTGACCTGTACCGTGTCCGGCGGCAGCATCAGCAACGG CGGCTACTACTGGTCCTGGATCAGACAGCACCCCGGCAAGGGCCTGG AATGGATCGGCTACATCTACTACAGCGGCAGCACCTACTACAACCCCA GCCTGAAGTCCAGAGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAG TTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACAGCCGCCGACACCGCCGTGTAC TACTGCGCCAGCCTGGGCAATTGGTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACC CTCGTGACAGTGTCCTCA SEQ ID NO: 69
Нуклеотидная последовательност ь константной области ЗА5.046 НС человека (синтетическая)	GCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCTTGTAGCAGA AGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAAGACTA CTTCCCCGAGCCCGTCACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAG CGGCGTGCACACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAG CCTGAGCAGCGTGGTGACAGTGCCCTCCAGCAGCCTGGGCACCAAGA CCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGCGGGTGGAATCTAAGTACGGCCCACCCTGCCCCCCCTGCCCTGCC CCTGAATTTCTGGGCGGACCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCA AGGACACCCTGTATATCACTCGGGAGCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGG TGGACGTGTCCCAGGAAGATCCCGAGGTCCAGTTCAATTGGTACGTGG ACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACA GTTCAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCA GGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAAGTCTCCAACAAGG GCCTGCCCAGCTCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAG CCCCGCGAGCCTCAGGTGTACACACTGCCCCCCAGCCAGGAAGAGAT GACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAAGGCTTCTACCC CAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACA ACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCC TGTACTCCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAAGGCAAC GTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACC CAGAAGTCCCTGAGCCTGAGCCTGGGC SEQ ID NO: 70
Нуклеотидная последовательност b3A5.046VL (синтетическая)	AGCTACGTGCTGACCCAGCCTCCTAGCGTGTCCGTGGCCCCTGGCCAG ACCGCCAGAATCACCTGTGGCGGCAACAACATCGGCAGCAAGAACGT GTACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCGTGCTGGTGGTGCA CGACGACAGCGACAGACCCAGCGGCATCCCCGAGCGGTTCAGCGGCA GCAACAGCGGCAATACCGCCACCCTGACCATCAGCCGGGTGGAAGTG GGCGACGAGGCCGACTACAGCTGCCAGGTCTGGGACAGCAGCAGCGA CCACGTGGTGTTCGGCGGAGGCACCAAGCTGACCGTCCTAGGT SEQ ID NO: 71
Нуклеотидная последовательност ь константной области ЗА5.046 LC человека (синтетическая)	CAGCCCAAGGCCGCTCCCAGCGTGACCCTGTTCCCCCCAAGCAGCGAG GAACTGCAGGCCAACAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCAGCGACTTC TACCCTGGGGCCGTGACCGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCTGTG AAGGCCGGCGTGGAAACCACCACCCCCTCCAAGCAGAGCAACAACAA ATACGCCGCCAGCAGCTACCTGTCCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAGTC CCACCGGTCCTACAGCTGCCAGGTGACACACGAGGGCAGCACCGTGG AAAAGACCGTGGCCCCCACCGAGTGCAGC SEQ ID NO: 72

Воплощения.

Следующий список воплощений предназначен для дополнения, а не для искажения или замены предыдущих описаний.

Воплощение 1. Молекула человеческого антитела, которая иммуноспецифически связывается с IL-5 человека с равновесной константой аффинности (KD), равной по меньшей мере около 40 пМ, которая определена поверхностным плазмонным резонансом.

Воплощение 2. Молекула антитела человека, которая иммуноспецифически связывается с IL-5 человека, причем молекула антитела включает: CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 66, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, 42 или 45, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, 48, 51, 54, 57, 60 или 63.

Воплощение 3. Молекула антитела по воплощению 1 или 2, где молекула антитела включает CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и

a) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

- 51 042576

b) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

c) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

d) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

e) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

f) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

g) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

h) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

i) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

j) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

k) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

l) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48;

m) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;

n) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54;

о) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;

p) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; или

q) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;

где положение аминокислотных остатков CDR определяется в соответствии с AbM.

Воплощение 4. Молекула антитела по воплощению 3, где молекула антитела включает CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.

Воплощение 5. Молекула антитела по любому из предыдущих воплощений, где молекула антитела включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 и

a) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17;

- 52 042576

b) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22;

c) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25;

d) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28;

e) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 31;

f) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 34;

g) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37;

h) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40;

i) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43;

j) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46;

k) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49;

l) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52;

m) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55;

n) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 58;

о) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 61;

р) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 64; или

q) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 67.

Воплощение 6. Молекула антитела по любому из предыдущих воплощений, где молекула антитела включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 и вариабельную области легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17.

Воплощение 7. Молекула антитела по любому из предыдущих воплощений, где молекула антитела включает:

a) мутацию S228P;

b) мутацию M252Y, мутацию S254T и мутацию Т256Е;

c) делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи; или

d) любую комбинацию а-с.

Воплощение 8. Молекула антитела по воплощению 7, где молекула антитела включает мутацию S228P и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи.

- 53 042576

Воплощение 9. Молекула антитела по воплощению 7, где молекула антитела включает мутацию S228P, мутацию M252Y, мутацию S254T, мутацию Т256Е и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи.

Воплощение 10. Молекула антитела по любому из предыдущих воплощений, где молекула антитела включает константную область тяжелой цепи IgG4 и константную область легкой цепи лямбда.

Воплощение 11. Молекула антитела по любому из предыдущих воплощений, где молекула антитела включает тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая идентична, по меньшей мере, на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18 и

a) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19;

b) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23;

c) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26;

d) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 29;

e) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32;

f) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35;

g) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 38;

h) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 41;

i) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44;

j) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47;

k) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 50;

l) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 53;

m) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56;

n) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 59;

о) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 62;

р) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 65; или

q) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 68.

Воплощение 12. Молекула антитела по любому из воплощений 1-10, где молекула антитела включает тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%. идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной кислотная последовательность SEQ ID NO: 19.

Воплощение 13. Молекула антитела по воплощению 2 или воплощению 3, где молекула антитела представляет собой Fab-фрагмент, Pab2-фрагмент или одноцепочечное антитело.

Воплощение 14. Молекула антитела по любому из предыдущих воплощений, где молекула антитела обладает одним или несколькими из следующих свойств:

a) уменьшает связывание IL-5 с рецептором IL-5;

b) имеет период полувыведения в сыворотке по меньшей мере около 20 дней; или

c) связывает IL-5 человека и яванского макака, но не IL-5 мыши, крысы или морской свинки.

Воплощение 15. Молекула антитела по воплощению 2, где молекула антитела связывается с IL-5 человека с равновесной константой аффинности (KD), по меньшей мере, около 40 пМ, определенной поверхностным плазмонным резонансом.

Воплощение 16. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела по любому из воплощений 1-15.

Воплощение 17. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу антитела по любому из воплощений 1-15.

Воплощение 18. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по воплощению 17.

-

Claims (21)

1. Воплощение 19. Клетка, трансформированная для экспрессии молекулы антитела по любому из воплощений 1-15.

   Воплощение 20. Способ лечения объекта, страдающего эозинофильной астмой, гиперэозинофильным синдромом, полипозом носа с эозинофильным поражением, эозинофильным гранулематозом с полиангиитом, атопическим дерматитом или эозинофильным эзофагитом, включающий введение объекту терапевтически эффективного количества молекулы антитела по любому из воплощений 1-15 или фармацевтической композиции по воплощению 16 для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным поражением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

   Воплощение 21. Применение эффективного количества молекулы антитела по любому из воплощений 1-15 или фармацевтической композиции по воплощению 16 для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным поражением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

   Воплощение 22. Применение молекулы антитела по любому из воплощений 1-15 или фармацевтической композиции по воплощению 16 при изготовлении лекарственного средства для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным поражением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

   ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Молекула антитела человека, которая иммуноспецифически связывается с IL-5 человека, причем молекула антитела включает: CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 66, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, 42 или 45, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, 48, 51, 54, 57, 60 или 63.
2. 2. Молекула антитела по п.1, отличающаяся тем, что молекула антитела включает CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и

   a) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   b) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   c) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   d) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   e) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   f) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   g) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   h) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   i) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   j) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   - 55 042576

   k) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;

   l) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48;

   m) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;

   n) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54;

   о) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;

   p) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; или

   q) CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;

   где положение аминокислотных остатков CDR определяется в соответствии с AbM.
3. 3. Молекула антитела по п.2, отличающаяся тем, что молекула антитела включает CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
4. 4. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что молекула антитела включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 и

   a) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17;

   b) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22;

   c) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25;

   d) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28;

   e) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97%, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 31;

   f) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 34;

   g) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37;

   h) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40;

   i) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43;

   j) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46;

   - 56 042576

   к) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49;

   l) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52;

   m) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55;

   n) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 58;

   о) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 61;

   р) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 64; или

   q) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 67.
5. 5. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что молекула антитела включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 и вариабельную области легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17.
6. 6. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что молекула антитела включает:

   a) мутацию S228P;

   b) мутацию M252Y, мутацию S254T и мутацию Т256Е;

   c) делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи; или д. любую комбинацию а-с.
7. 7. Молекула антитела по п.6, отличающаяся тем, что молекула антитела включает мутацию S228P и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи.
8. 8. Молекула антитела по п.6, отличающаяся тем, что молекула антитела включает мутацию S228P, мутацию M252Y, мутацию S254T, мутацию Т256Е и делецию С-концевого остатка лизина тяжелой цепи.
9. 9. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что молекула антитела включает константную область тяжелой цепи IgG4 и константную область легкой цепи лямбда.
10. 10. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что молекула антитела включает тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18 и

    а) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19;

    b) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23;

    c) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26;

    d) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 29;

    e) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32;

    f) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35;

    g) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 38;

    h) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 41;

    i) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44;

    j) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47;

    - 57 042576

    к) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 50;

    l) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 53;

    m) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56;

    n) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 59;

    о) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 62;

    р) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 65; или

    q) легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 68.
11. 11. Молекула антитела по любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что молекула антитела включает тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%. идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична аминокислотной кислотная последовательность SEQ ID NO: 19.
12. 12. Молекула антитела по п.1 или 2, отличающаяся тем, что молекула антитела представляет собой Fab-фрагмент, Fab2-фрагмент или одноцепочечное антитело.
13. 13. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что молекула антитела обладает одним или несколькими из следующих свойств:

    a) уменьшает связывание IL-5 с рецептором IL-5;

    b) имеет период полужизни в сыворотке по меньшей мере около 20 дней; или

    c) связывает IL-5 человека и яванского макака, но не IL-5 мыши, крысы или морской свинки.
14. 14. Молекула антитела по п.1, отличающаяся тем, что молекула антитела связывается с IL-5 человека с равновесной константой аффинности (K_D), равной по меньшей мере около 40 пМ, которая определена поверхностным плазмонным резонансом.
15. 15. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела по любому из пп.1-14.
16. 16. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу антитела по любому из пп.1-14.
17. 17. Вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п.16.
18. 18. Клетка, трансформированная для экспрессии молекулы антитела по любому из пп.1-14, содержащая вектор по п.17 или молекулу нуклеиновой кислоты по п.16.
19. 19. Способ лечения субъекта, страдающего эозинофильной астмой, гиперэозинофильным синдромом, полипозом носа с эозинофильным поражением, эозинофильным гранулематозом с полиангиитом, атопическим дерматитом или эозинофильным эзофагитом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества молекулы антитела по любому из пп.1-14 или фармацевтической композиции по п.15 для лечения эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным поражением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.
20. 20. Применение эффективного количества молекулы антитела по любому из пп.1-14 или фармацевтической композиции по п.15 при лечении эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным вовлечением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.
21. 21. Применение молекулы антитела по любому из пп.1-14 или фармацевтической композиции по п.15 при изготовлении лекарственного средства при лечении эозинофильной астмы, гиперэозинофильного синдрома, полипоза носа с эозинофильным вовлечением, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом, атопического дерматита или эозинофильного эзофагита.

    -