DK161915B - Fremgangsmaade til paavisning af malign formering - Google Patents

Description

j DK 161915B

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til påvis- i ning af malign formering, f.eks. tumorøse sygdomme, inklusive leukæmi.

5

Det er velkendt, at det væsentlige for en vellykket behandling af maligne, tumorøse sygdomme er diagnose deraf på et meget tidligt stadium. Omfattende forskning er blevet udført i den senere tid til udvikling af sådanne diagnostiske metoder.

10 Disse metoder er i almindelighed baseret på måling af koncen- j trationen eller ændringen i koncentrationen af visse specifikke proteiner, f.eks. en2ym i blodet. Disse metoder har imidlertid begrænset anvendelsesområde og kræver længere tid og er dyre.

Hidtil er ikke beskrevet nogen fremgangsmåde, der kunne være I1 generelt anvendelig til diagnose af tumorøse sygdomme.

Den foreliggende opfindelse tilsigter derfor at tilvejebringe en enkel og hurtig metode til påvisning af tumorøse sygdomme, eventuelt på et meget tidligt stadium deraf.

20

Opfindelsen er baseret på den erkendelse, at i prøver af blod -serum, legemsvæsker, celleagglomerater og vævspræparater fremstillet på passende måde under fysiologiske betingelser, kan j der iagttages karakteristiske proteinfilamenter ved optiske 25 metoder. Disse filamenter er karakteristiske ved den såkaldte "terminaleffekt", dvs. at i det mikroskopiske billede strækker enderne af filamenterne sig i hvert tilfælde på den kortest mulige måde henimod et punkt på et andet filament forudsat, at prøven stammer fra et sundt organ. Hvis prøven stammer 30 fra et tumorøst organ, er "terminaleffekten" ikke karakteristisk, dvs. at filamentsystemet, som er karakteristisk for den sunde tilstand, ikke forekommer overhovedet eller filamenterne møder kun hinanden delvis.

35 De karakteristiske træk ved terminaleffekten der er nævnt ovenfor, og dannelsen deraf forklares nedenfor med blodserum som eksempel. Det er imidlertid klart, at ved fremstilling i t 2 2

DK 161915B

2 af præparater af prøver af andre legemsvæsker, celleagglome-rater eller væv vil udseendet af terminaleffekten være det samme.

5

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at blodserum, legemsvæske, celleagglomerater eller vævspræparater tørres ved en reguleret temperatur, fortrinsvis 20 - 50°C, hvorefter den patologiske forandring påvises med mikroskop på grundlag af mangel eller delvis mangel på intracellulær kon- 10 takt mellem de karakteristiske proteinfilamenter.

I det følgende er opfindelsen beskrevet nærmere ved hjælp af tegningen, hvor 1 5 fig. 1 er et fotografi af tørret blodserum taget med elektronmikroskop, fig. 2 er et fotografi af et blodserumpræparat af. en sund patient taget med elektronmikroskop, 20 fig. 3 er et fotografi af et blodserumpræparat af en tumorøs patient taget med elektronmikroskop, fig. 4 er et fotografi af filamentstrukturen af et blodserum-25 præparat fra en sund patient, fig. 5 er et fotografi af filamentstrukturen af et blodserumpræparat fra en tumorøs patient, 30 fig. 6 er et udsnit af et fotografi af et blodserumpræparat fra en sund patient, der viser terminaleffekten, fig. 7 er et fotografi af et Ascites-væskepræparat fra et sundt behandlet organ, og 35 fig. 8 er et fotografi af et Ascites-væskepræparat fra et tumorøst organ.

DK 161915 B

3 Når blod taget fra en vene får lov at sedimentere, og serumet derefter dryppes på et mikroskopglas, fås et karakteristisk i billede efter tørring under milde betingelser. Fig. 1 viser 5 interessante dannelser, filamenter i det krakelerede præparat.

Det har vist sig, at billedet af blodsera af hhv. sunde og tumorøse organismer er principielt forskellige forskellige efter tørring. Fig. 2 viser det tørrede blodserumpræparat fra en sund patient, medens fig. 3 viser det samme fra en 10 patient, der lider af en malign tumor. Spalterne, der er vist på fotografierne, dannes altid langs filamenterne. Når det øvre lag af præparatet fjernes, fås filamentstrukturerne ifølge fig. 4 og 5. Fig. 4 viser klart, at filamenterne er i tæt kontakt med hinanden, dvs. terminaleffekten, der er vist mere 15 detaljeret på fig. 6, forekom. Fig. 5 viser ingen terminaleffekt, og der blev ikke dannet nogen filamenter. Strukturen refererer utvetydigt til tilstedeværelse af maligne processer.

Lignende billeder kan fås ved undersøgelse af præparater af 20

Ascites-væske i stedet for blodserumpræparater. Fig. 7 og 8 viser billedet af disse præparater fra hhv. en sund og en tumorøs organisme.

Det kan ses klart af fig. 7, at i tilfældet med sunde celler 2 5 blev der dannet intercellulær kontakt med filamenterne, og de karakteristiske spaltninger forekom langs disse. Fig. 8 viser manglen på terminaleffekt, dvs. tilstedeværelsen af maligne processer i organismen.

30

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen blev udarbejdet pa grundlag af de førnævnte erfaringer. Fremgangsmåden omfatter optisk undersøgelse af blodserum, legemsvæske, celleagglomerat eller vævspræparater, der er blevet tørret fortrinsvis under fysiologiske betingelser, og den patologiske ændring bevises på 3 5 basis af i det mindste delvis mangel på termina1effekt.

4 DK 161915B

Præparaterne kan fås ved fremstilling under regulerede betingelser, da fremgangsmåden kan standardiseres på denne måde, og de forskellige prøver lettere kan sammenlignes.

Hvis det drejer sig om undersøgelse af blodprøver, er den 5 foretrukne fremgangsmåde som følger:

Der tages frisk blod, og blodserumet fremstilles hensigtsmæssigt ved sedimentering eller centrifugering og derefter dryppes serumet på en passende bærer. Et godt præparat kan fås ved 2o anvendelse af en dråbe med et rumfang på 1 til 20 ul eller ca. samme mængde fordeles på et mikroskopgl'as.

Tørring af væsken udføres i almindelighed ved reguleret temperatur, fortrinsvis ved 20 til 50°C ved at opretholde konstant 25 fugtighedsindhold og tryk. Tørringen kan opnås ved anvendelse af vacuum, men det foretrækkes at arbejde ved atmosfæretryk. Tørring kan også udføres ved at fryse til det kritiske punkt, hvor vandet i prøven udskiller sig i mikrokrystallinsk form, og spalterne vil igen følge filamenterne.

20

Undersøgelse og bedømmelse af præparaterne sker på basis af terminaleffekten. Organismen kan betragtes som sund, hvis terminaleffekten kan findes i hele prøven. Hvis terminaleffekten mangler, selvom det kun er delvis, refererer fænomenet 25 til maligne processer.

Bedømmelse sker visuelt som den mest enkle måde, men det er også muligt at anvende specielt apparatur og fremgangsmåder, der kan lette identifikationen. Processer som disse indbefatter 30 Urbancsek-algoritme-metoden, Fourier-omdannelsesalgoritmen, fremgangsmåden med lukkede kurver, tælling af de sort/hvid/sort eller omvendte omdannelser eller enhver kombination deraf.

Det skal imidlertid forstås, at bedømmelsesmåden ikke er begrænset på nogen måde til ovennævnte, og valget af bedømmelses-3g metode udgør ikke nogen del af beskyttelsesomfanget.

Den diagnostiske metode ifølge opfindelsen blev kontrolleret ved prøver udført på mere end 1000 patienter og viste sig at være effektiv med en meget god nøjagtighed til bestemmelse af tumorøse tilstande af forskellig type. Fremgangsmåden er

O

DK 161915 B

5 meget fordelagtig, da den er meget hurtig, og den kan således i anvendes til screeninger, til påfølgende terapier samt til eftersøgning af antitumor-forbindelser til hurtig in vitro- screening af virkningen af forsøgsmaterialer.

5

Eksempel

En gruppe bestående af 1164 patienter blev undersøgt ved frem-gangsmåden ifølge opfindelsen. Under prøverne blev resultaterne, der fremkom af billederne af tørret blodserum sammenlignet med kliniske histologiske diagnoser. Ved bedømmelsen blev der dannet 3 undergrupper, som vist i tabel II.

Den første gruppe bestod af patienter, der blev bevist at have malign tumor ifølge histologisk undersøgelse. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen (MTA) udviste malignitet i 358 af de 383 tilfælde (94%). Nedenstående tabel I viser fordelingen af forskellige maligne sygdomme inden for denne gruppe.

20

TABEL I

Malign sygdom Antal tilfælde 25 Leukæmi 74

Maligne lymphomer 93

Hoved- og halscancer 9

Lungekræft 17

Maligne brystneoplasmer 41 3q Maligne neoplasmer af fordøjelsesorganer 48

Maligne neoplasmer af kvindelige kønsorganer 12

Maligne neoplasmer af mandlige kønsorganer 56 i

Hjernetumor 7

Neoplasmer af urinvejssystemet 20 ; 35 Epithelioma 6

O

DK 161915 B

6

Den anden gruppe tjente som kontrol og bestod af sunde patienter under 25 år. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen fandt at 230 af de 242 i gruppen var sunde (95%). - 5

Den trejde gruppe bestod af patienter med en alder mellem 25 og 85, som ikke led af tumorøs sygdom ifølge histologisk undersøgelse, men havde anden sygdom, såsom hepatitis, lungebetændelse, hypertoni, diabetes, godartet tumor, osv. MTA

viste 376 tilfælde som negative ud af ialt 539 (70%). I denne 10 .

gruppe har klinisk diagnose som nævnt ikke pavist malign tumorøs sygdom, men muligheden kunne ikke udelukkes.

En opsummering af ovennævnte prøve er vist i nedenstående tabel II.

15

TABEL_II

Gruppe Samlet antal- MTA. MTA MTA

patienter + - total %

Histologisk påviste tumorøse patienter 383 358 25 94 25 Sunde kontrolgrupper (under 25 år) 242 12 230 95

Blandet gruppe (ingen klinisk påvist cancer, men kan ikke 3Q udelukkes) 539 163 376 70

Det antages på basis af resultaterne fremkommet ved de første to grupper, at MTA påviser de maligne processer på deres meget 35 tidlige stadium, især når der ikke er nogen alvorlige symptomer, og malign tumor ikke kan påvises eller kun i visse tilfælde ved andre kliniske metoder. Af patienterne i den "blandede gruppe", der blev påvist at være positive ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, blev 7 senere påvist at

Claims (3)

1. Fremgangsmåde til påvisning af malign formering, f.eks. tumorøse sygdomme, inklusive leukæmi, kendetegnet ved, at blodserum, legemsvæske, celleagglomerater eller vævs-10 præparater tørres ved en reguleret temperatur, fortrinsvis 20 - 500C, hvorefter den patologiske forandring påvises med mikroskop på grundlag af mangel eller delvis mangel på intracel-lulær kontakt mellem de karakteristiske proteinfilamenter.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved anvendelse af tørret blodserum.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved anvendelse af tørret Ascites-væske. 20 25 j 30 j 35