DE69127020T2

DE69127020T2 - Milchproteinhydrolysate und Zusammensetzungen zur Verwendung als Haar- und Hautbehandlungsmittel

Info

Publication number: DE69127020T2
Application number: DE69127020T
Authority: DE
Inventors: Yasuo Fukuwatari; Seiji Kawaura; Takesi Kitazawa; Masanobu Nojiri; Mamoru Tomita
Original assignee: Iwase Cosfa Co Ltd; Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Iwase Cosfa Co Ltd; Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 1990-05-18
Filing date: 1991-05-15
Publication date: 1998-01-29
Anticipated expiration: 2011-05-16
Also published as: EP0457565A3; EP0457565B1; US5314873A; DE69127020D1; EP0457565A2

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Gebiet der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft Milcheiweißhydrolysat, das keine Antigenität für das Milcheiweiß besitzt, die Vermehrung menschlicher Hautzellen aktiviert und wirksam ist bei der Behandlung von Haar und Haut, und das Haar- und Hautschäden verhindern bzw. reparieren kann. Die vorliegende Erfindung betrifft auch eine Zusammensetzung für die Behandlung von Haar und Haut, wie zum Beispiel kosmetische, medizinische und nichtmedizinische Produkte (im folgenden werden diese Produkte als Kosmetika und dergleichen bezeichnet), die aus Milcheiweißhydrolysat bestehen oder dieses als Wirkstoff enthalten.

Erläuterung des zugrundeliegenden Standes der Technik

Bis jetzt wurden Milcheiweiß und das Hydrolysat desselben in Kosmetika und dergleichen verwendet.
Die Japanische offenlegungsschrift Nr. 57(1982)-209210 offenbart beispielsweise die Verwendung von Aminosäuren, Hydrochloriden von Aminosäuren, Laugensalzen von Aminosäuren und Peptiden einschließlich aus Milcheiweiß gewonnenen Peptiden als Mittel zur Erhöhung der Löslichkeit von Bis-(2-pyridylthio-1-oxid)-zink, einem antibakteriellen Mittel gegen Schuppen.
Die in japanischer Sprache veröffentlichte Japanische Offenlegungsschrift Nr. 58-500664 (entsprechend der Internationalen Anmeldung Nr. WO82/03008; PCT/AU82/00022) offenbart die Verwendung von Polypeptid oder Protein einschließlich Casein als vorbeugendes Mittel gegen Zahnkaries.
Die Japanische Offenlegungsschrift Nr. 59(1984)-152317 offenbart die Verwendung von Casein, Caseinhydrolysat oder einer Mischung derselben als Stabilisator einer Mutanase-Lösung zur Herstellung eines vorbeugenden Mittels gegen Zahnkaries.
Die Japanische Offenlegungsschrift Nr. 63(1988)-57515 offenbart ein Bademittel, das Makadamiaöl sowie ein Peptid und/oder eine Aminosäure enthält, die durch Hydrolyse von Milcheiweiß gewonnen werden können.
Die Japanische Offenlegungsschrift Nr. 60(1985)-258102 offenbart eine Zusammensetzung zur Behandlung von Haar und Haut, die Proteinhydrolysat als Mittel zum Schutz von Haar und Haut enthält, wobei das Molekulargewicht des Hydrolysats auf einen Bereich von 500 bis 5000 eingestellt wird, um die Löslichkeit des Hydrolysats zu verbessern.
Die Japanische Offenlegungsschrift Nr. 62(1987)-185100 offenbart eine Zusammensetzung zur Behandlung von Haar und Haut, die Polypeptid als Mittel zum Schutz von Haar und Haut sowie einen Emulgator oder Emulsionsstabilisator für die Zusammensetzung enthält, wobei das Molekulargewicht auf einen Wert unter 26000 eingestellt wird, um die Klebrigkeit von Casein zu minimieren.
Die Japanische Offenlegungsschrift Nr. 64(1989)-11 offenbart ein Verfahren zur Herstellung einer Fraktion von Proteinhydrolysat, die als Bestandteil kosmetischer Produkte verwendet werden soll, wobei das Molekulargewicht des Hydrolysats auf einen Bereich von 2000 bis 200000 eingestellt wird, um Probleme der Ausfällung und/oder Trübung in einer wäßrigen Lösung des Hydrolysats auszuschalten.
Die Japanische Offenlegungsschrift Nr. l(1989)-269499 offenbart ein Verfahren zur Herstellung des von Casein stammenden Peptids zur Verwendung als Haar- und Hautbehandlungsmittel, wobei das Casein mit Trypsin und Subtilisin hydrolysiert wird, um in effizienter Weise Peptide mit einem Molekulargewicht im Bereich von 300 bis 3000 zu gewinnen, so daß die Löslichkeit der Peptide und deren Fähigkeit zur Chelatbildung, die Stabilität der Peptidlösung, die Fähigkeit zur Aufnahme durch die Haare, die Affinität zu Haar und Haut, die Schutzeigenschaften und Anfeuchtungseigenschaften verbessert werden können, wobei jedoch die Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung der Peptide auf menschlichen Hautzellen nicht bewiesen ist.
Die Zugabe von Peptiden zu Zusammensetzungen für die Behandlung von Haar und Haut in diesen Veröffentlichungen hat in erster Linie den Zweck, auf Haar und Haut die konditionierenden Effekte des Hydrolysats zu erzielen, beispielsweise seine anfeuchtenden, adsorbierenden, filmbildenden und/oder schützenden Eigenschaften.
Der obengenannte Stand der Technik konnte jedoch die Wirksamkeit von Peptid nicht beweisen, sondern ging lediglich von Gerüchten und unbewiesenen Vermutungen aus. Außerdem gab es das Problem, daß Produkte, die aus Milcheiweiß gewonnenes Peptid enthalten, manchmal zu Allergieproblemenführen können.
Einige der Erfinder der vorliegenden Anmeldung haben zuvor eine Erfindung gemacht, die Hydrolysat von Milcheiweiß und ein Verfahren zur Herstellung desselben betrifft, mit dem Zweck, die Löslichkeit von Milcheiweiß zu erhöhen, die Aufschließbarkeit von Milcheiweiß zu erhöhen, Lebensmittelallergien zu verhindern bzw. zu behandeln, Patienten mit Störungen im Stoffwechsel von aromatischen Aminosäuren zu behandeln bzw. zu ernähren, und eine Patentanmeldung für diese Erfindung wurde von einem der Rechtsnachfolger der vorliegenden Erfindung in Japan eingereicht (Japanische Patentanmeldung Nr. 63(1988)-291090; Anmeldedatum: 19. November 1988; im folgenden wird diese Anmeldung als Vorveröffentlichung bezeichnet). Die Erfinder der vorliegenden Anmeldung haben die Beschaffenheit des Hydrolysats der Vorveröffentlichung gründlich untersucht und dabei festgestellt, daß Milcheiweißhydrolysat mit folgenden Eigenschaften als Haar- und Hautbehandlungsmittel oder als Bestandteil von Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen verwendet werden kann: (a) das Hydrolysat ist eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton; (b) 90 Gew.-% oder mehr von aromatischen Aminosäuren in der Mischung sind freie aromatische Aminosäuren; (c) die Mischung hat die Eigenschaft, die Vermehrung menschlicher Hautzellen zu aktivieren; und (d) die Mischung hat keine Antigenität für das Milcheiweiß.
Mit anderen Worten, die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben festgestellt, daß im Falle der Hydrolysierung von Milcheiweiß mit zwei oder mehr Enzymen mit einer bestimmten Zerfallsgeschwindigkeit das resultierende Hydrolysat, das eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton enthält, und bei dem 90 Gew.-% oder mehr von aromatischen Aminosäuren in der Mischung freie Aminosäuren sind, die Vermehrung menschlicher Hautzellen überraschenderweise aktivieren kann und, neben anderen Eigenschaften als Haar- und Hautbehandlungsmittel, keine Antigenität für das ursprüngliche Milcheiweiß besitzt.
Es wurde auch festgestellt, daß eine spezifische Fraktion von Milcheiweißhydrolysat mit folgenden Eigenschaften als Haar- und Hautbehandlungsmittel oder als Bestandteil von Zusammensetzungen zur Behandlung von Haar und Haut verwendet werden kann: (a) das Hydrolysat ist eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton; (b) der prozentuale Anteil aromatischer Aminosäuren an den insgesamt in der Fraktion enthaltenen Aminosäuren ist weniger als 5 Gew.-%; (c) die Mischung aktiviert die Vermehrung menschlicher Hautzellen; und (d) die Mischung hat keine Antigenität für Milcheiweiß.
Mit anderen Worten, die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben festgestellt, daß Peptide mit der Eigenschaft zur Aktivierung der Vermehrung menschlicher Hautzellen in einer spezifischen Fraktion des Milcheiweißhydrolysats enthalten sind, wobei die Fraktion eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton ist, die in der Mischung enthaltenen aromatischen Aminosäuren weniger als 5 Gew.-% der insgesamt in der Mischung enthaltenen Aminosäuren ausmachen, die Peptide keine Antigenität für das ursprüngliche Milcheiweiß besitzen und andere Eigenschaften aufweisen, die für ein Haar- und Hautbehandlungsmittel wünschenswert sind.
Die vorliegende Erfindung basiert auf diesen Entdeckungen.

Aufgaben der Erfindung

Es ist daher eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Milcheiweißhydrolysat sowie eine Fraktion des Hydrolysats oder seiner Salze mit der Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung menschlicher Hautzellen bereitzustellen.
Es ist eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Milcheiweißhydrolysat sowie eine Fraktion des Hydrolysats oder seiner Salze ohne Antigenität für das Milcheiweiß bereitzustellen.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Milcheiweißhydrolysat bestehend aus einer Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton und Aminosäuren, wobei 90 Gew.-% oder mehr von den aromatischen Aminosäuren in der Mischung freie Aminosäuren sind.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung einer Fraktion von Milcheiweißhydrolysat bestehend aus einer Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton, wobei in dieser Mischung aromatische Aminosäuren weniger als 5 Gew.-% der insgesamt in der Fraktion enthaltenen Aminosäuren ausmachen.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Gemäß einer Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung wird Milcheiweißhydrolysat oder dessen Salze, bestehend aus einer Mischung von Peptiden, die die Vermehrung menschlicher Hautzellen aktivieren, durch enzymatische Hydrolyse von Milcheiweiß in einer höheren Ausbeute bereitgestellt. Die in der Mischung enthaltenen Peptide haben ein Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton und besitzen im wesentlichen keine Antigenität für das ursprüngliche Milcheiweiß, und 90 Gew.-% der in der Mischung enthaltenen aromatischen Aminosäuren sind freie aromatische Aminosäuren.
Gemäß einer anderen Ausgestaltung der Erfindung wird eine Fraktion umfassend eine Mischung von Peptiden, die die Vermehrung menschlicher Hautzellen aktivieren kann, durch Fraktionierung des Milcheiweißhydrolysats oder von dessen Salzen in einer höheren Ausbeute bereitgestellt. Die in der Fraktion enthaltenen Peptide haben ein Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton und besitzen im wesentlichen keine Antigenität für das ursprüngliche Milcheiweiß, und die in der Fraktion enthaltenen aromatischen Aminosäuren machen 5 Gew.-% der insgesamt darin enthaltenen Aminosäuren aus.
Eine Ausführungsform der vorliegenden Erfindung stellt somit ein Milcheiweißhydrolysat mit den folgenden chemischen, biochemischen und physiologischen Eigenschaften bereit:
(a) das Hydrolysat ist eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton und Aminosäuren;
(b) von den aromatischen Aminosäuren sind 90 Gew.-% oder mehr als freie Aminosäuren in dem Hydrolysat enthalten;
(c) das Hydrolysat hat die Eigenschaft, die Vermehrung menschlicher Hautzellen zu aktivieren, so daß das Hydrolysat mehr als Rinderplazenta-Extrakt ein Maß für die vermehrungsaktivierende Eigenschaft bietet, und zwar nach dem Testverfahren, bei dem die Menge des in menschliche Epithelzellen aufgenommenen, mit ³H markierten Thymidins und die Menge an Fibroblasten mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler gemessen wird; und
(d) bei dem Hydrolysat läßt sich keine Antigenität für das Milcheiweiß feststellen, wenn die Antigenität mit dem ELISA-Hemmtest gemessen wird.
In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Fraktion eines Milcheiweißhydrolysats bereit, die gewonnen wurde durch Fraktionierung des obigen Milcheiweißhydrolysats, wobei die Fraktion die folgenden chemischen, biochemischen und physiologischen Eigenschaften besitzt:
(a) die Fraktion ist eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton;
(b) das Verhältnis von aromatischen Aminosäuren zu den in der Fraktion enthaltenen Aminosäuren insgesamt beträgt weniger als 5 Gew.-%;
(c) die Fraktion hat die Eigenschaft, die Vermehrung menschlicher Hautzellen zu aktivieren, so daß die Fraktion mehr als Rinderplazenta-Extrakt ein Maß für die vermehrungsaktivierende Eigenschaft bietet, und zwar nach dem Testverfahren, bei dem die Menge des in menschliche Epithelzellen aufgenommenen, mit ³H markierten Thymidins und die Menge an Fibroblasten mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler gemessen wird; und
(d) bei der Fraktion läßt sich keine Antigenität gegen Milcheiweiß feststellen, wenn die Antigenität mit dem ELISA-Hemmtest gemessen wird.
In anderen Ausführungsformen werden die obigen Zusammensetzungen zur Verwendung bei der Behandlung von Haar und Haut bereitgestellt.
In noch anderen Ausführungsformen betrifft die Erfindung die Verwendung der obigen Zusammensetzungen bei der kosmetischen Behandlung von Haar, Haut und Kopfhaut.
In noch anderen Ausführungsformen betrifft die Erfindung die Verwendung der obigen Zusammensetzungen bei der Herstellung von Zusammensetzungen für die kosmetische und therapeutische Behandlung von Haar, Haut und Kopfhaut.

AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Alle auf dem Markt vertriebenen Milcheiweiße, wie zum Beispiel Casein oder seine Fraktionen (z.B. α&sub3;-Casein, β-Casein, γ-Casein und K-Casein) sowie Molkeneiweiß oder seine Fraktionen (Z.B. α-Laktoalbumin und β-Laktoglobulin) und eine Mischung derselben können als Quelle für das Hydrolysat verwendet werden (im folgenden werden sie als Milcheiweiße bezeichnet). Sie werden als wäßrige Lösung in einer entsprechenden Konzentration, z.B. zwischen 5 und 20 %, einer enzymatischen Hydrolyse unterzogen.
Die für die Hydrolyse zu verwendenden Enzyme unterliegen keiner Beschränkung, und es können beispielsweise Trypsin, Chymotrypsin, Subtilisin, Elastase, Papain, Pepsin, Thermolysin, prolinspezifische Protease, Carboxypeptidase Y, Pankreatin und andere Proteasen verwendet werden, die produziert werden von Mikroorganismen der Gattung Streptococcus, Aspergillus, Streptomyces, Rhizopus und Milchsäurebakterien oder einem Extrakt von Milchsäurebakterien. Der Extrakt von Milchsäurebakterien kann beispielsweise hergestellt werden nach einem Verfahren, das offenbart ist in der geprüften Japanischen Patentanmeldung Nr. 48(1973)-43878, in einer Menge von 20000 Einheiten pro Gramm. Vorzugsweise sollten zwei oder mehr verschiedene Arten von Enzymen in Kombination verwendet werden, beispielsweise eine Kombination von Endopeptidase und Exopeptidase, oder eine Kombination von Pankreatin, Exopeptidase und einer oder mehreren anderen Proteasen.
Im allgemeinen können ein oder mehrere Enzyme in einer Menge von 3000-5000 Einheiten pro Gramm des Proteins verwendet werden, doch ist die Menge nicht auf diesen Bereich begrenzt. Wenn zwei oder mehr Enzyme verwendet werden sollen, können sie der Proteinlösung in einer Mischung zugesetzt werden, oder alternativ werden sie einzeln zugesetzt in entsprechenden Abständen für die schrittweise Hydrolyse durch die verschiedenen Enzyme.
Die Hydrolyse kann bei einer Temperatur zwischen 40 und 55ºC durchgeführt werden, und der pH-Wert der Proteinlösung wird - auf einen Wert eingestellt, der näher bei den optimalen pH- Werten der zu verwendenden Enzyme liegt und eine Denatunerung der Proteine ausschalten dürfte. Vorzugsweise wird die enzymatische Hydrolyse durchgeführt, während der pH-Wert der Lösung mindestens eine Stunde ab Beginn der Hydrolyse aufrechterhalten wird.
Nach einem entsprechenden Reaktionszeitraum werden die Enzyme durch Erhitzen deaktiviert, und ggf. wird das resultierende Reaktionsgemisch abgekühlt, gefiltert, demineralisiert, konzentriert und/oder getrocknet, um das Hydrolysat in flüssiger oder pulveriger Form zu erhalten.
Das resultierende Hydrolysat aktiviert die Vermehrung menschlicher Hautzellen und verliert im wesentlichen die Antigenität für das Milcheiweiß, und des weiteren werden 90 Gew.-% oder mehr von den in dem Hydrolysat enthaltenen aromatischen Aminosäuren zu freien Aminosäuren umgewandelt. Das Hydrolysat hat dabei ein Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton.
Das resultierende Hydrolysat kann einer Fraktionierung unterzogen werden, beispielsweise einer Gelfiltration oder Hydrophobchromatographie, um eine Fraktion zu erhalten, bei der der Gehalt an aromatischen Aminosäuren weniger als 5 Gew.-% der Aminosäuren insgesamt beträgt. Die in der Fraktion ent haltenen Peptide haben ein Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton, besitzen im wesentlichen keine Antigenität für das ursprüngliche Milcheiweiß und aktivieren die Vermehrung menschlicher Hautzellen. Eine wäßrige Lösung des resultierenden Hydrolysats wird beispielsweise in eine Säule gegossen, die gefüllt ist mit einem Gel, das als Ausschlußgrenze ein Molekulargewicht von weniger als 10000 Dalton besitzt, vorzugsweise weniger als 1000 Dalton, noch mehr bevorzugt mit einem Gel, das aromatische Aminosäuren adsorbieren kann und hydrophobe Seitenketten aufweist, wie zum Beispiel Carboxyl-, Butyl- oder Phenylgruppen, oder hydrophobe Stellen (beispielsweise Sephadex G-10, G-15 und G-25 von Pharmacia, Sephacryl S-100 von Parmacia, TOYOPEARL HW-40 von Tosoh und dergleichen), dann mit einer 0-15%igen Ethanollösung eluiert, um seine Adsorptionsfähigkeit für aromatische Aminosäuren zu erhöhen. Die Fraktionierung erfolgt auf der Basis einer Extinktion bei 280 nm.
Je nach dem verwendeten Gel lassen sich 4 oder 3 Elutionsmaxima feststellen, wobei das 1. Elutionsmaximum im letzteren Fall dem 1. und 2. Elutionsmaximum im ersteren Fall entspricht (nachfolgend bezeichnet als Elutionsmaxima A und B), und das 2. und 3. Elutionsmaximum im letzteren Fall dem 3. und 4. Elutionsmaximum im ersteren Fall entspricht (nachfolgend bezeichnet als Elutionsmaxima C und D). In beiden Fällen sind die Elutionsmaxima C und D nicht geeignet für die Herstellung der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen für die Behandlung von Haar und Haut, da sie reich sind an aromatischen Aminosäuren und nicht ohne weiteres löslich sind in Wasser. Eine Fraktion bestehend aus den Elutionsmaxima A und/oder B wird daher in der anderen Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung verwendet. Die Fraktion kann kondensiert und/oder getrocknet werden, um die konzentrierte Lösung bzw. das Pulver der Fraktion zu erhalten.
Das resultierende Hydrolysat bzw. die resultierende Fraktion kann zugesetzt werden, um in herkömmlicher Weise Kosmetika herzustellen; so wird beispielsweise das Hydrolysat in Wasser gelöst, und die resultierende Lösung wird dann mit anderen Bestandteilen des Kosmetikums gemischt, die darin emulgiert oder suspendiert sind. Das Hydrolysat ist leicht löslich in Wasser in einer Konzentration bis zu 20%, und die Löslichkeit vermindert sich mit zunehmender Konzentration.
Die Salze des Hydrolysats oder seine Fraktionen können organische oder anorganische Salze sein, soweit sie bei der Herstellung von medizinischen, nichtmedizinischen und kosmetischen Produkten verwendbar sind.
Bei Bedarf können Emulgatoren, Duftstoffe und andere Komponenten, die als Bestandteile der medizinischen, nichtmedizinischen und kosmetischen Produkte verwendbar sind, dem Hydrolysat, den Fraktionen oder Salzen desselben zugesetzt werden, soweit sie mit diesen kompatibel sind.
Im folgenden werden einige erläuternde Tests beschrieben. Die Ergebnisse von bestimmten Tests sind in tabellarischer Form in den beigefügten Zeichnungen aufgeführt, die die Tabellen 1-12 umfassen.

[TEST 1]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der physikalischchemischen Beschaffenheit der Milcheiweißhydrolysate.

(1) HERSTELLUNG VON MILCHEIWEISSHYDROLYSATEN

(1-1) CASEINHYDROLYSAT

Es wurde eine Lösung hergestellt, die einen Extrakt von Milchsäurebakterien, von Aspergillus stammende Protease und Pankreatin im selben Verhältnis in Aktivitätseinheiten enthielt. Einer 10%igen wäßrigen Caseinlösung (pH=8,0) wurde die resultierende Enzymlösung in 3000 Aktivitätseinheiten/g des Proteins zugesetzt. Die resultierende Mischung wurde bei 50ºC einer Hydrolysereaktion unterzogen. Während der Hydrolyse wurde die Zerfallsgeschwindigkeit von Casein in regelmäßigen Abständen durch Formoltitration gemessen. Jedesmal, wenn die Zerfallsgeschwindigkeit von Casein in der Mischung 21, 32 und 41 % erreichte, wurde ein Teil der Mischung herausgenommen und 5 Minuten auf 90ºC erhitzt, um die Enzyme zu deaktivieren. Nach der Deaktivierung wurde jeder Teil der Mischung gefiltert, bis der Niederschlag vollständig entfernt war, dann wurde jedes der resultierenden Filtrate lyophilisiert, um auf diese Weise 3 Arten von Testproben A, B und C zu erhalten.

(1-2) MOLKENEIWEISSHYDROLYSAT

Eine 10%ige wäßrige Molkeneiweißlösung (pH=7,0) wurde in der gleichen Weise wie in (1-1) hydrolysiert, um auf diese Weise zwei Arten von Testproben (lyophilisiertes Molkeneiweißhydrolysat) zu erhalten, nämlich D (Zerfallsgeschwindigkeit 30%) und E (Zerfallsgeschwindigkeit 41%).

(2) ANALYSE VON AMINOSÄUREN

Der Gehalt an Aminosäuren und freien aromatischen Aminosäuren in jeder der Proben A-E wurde mit einem automatischen Analysegerät für Aminosäuren gemessen (im folgenden wird der Gehalt an Aminosäuren insgesamt abgekürzt mit WA, der Gehalt an aromatischen Aminosäuren insgesamt wird abgekürzt mit Ar, und der Gehalt an freien aromatischen Aminosäuren wird abgekürzt mit FAr). Dann wurden das Verhältnis Ar/WA, das Verhältnis FAr/WA und der Prozentsatz von FAr/Ar errechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 dargestellt zusammen mit den jeweiligen Zerfallsgeschwindigkeiten.
Wie aus Tabelle 1 hervorgeht, nahmen die Verhältnisse von FAr/Ar mit zunehmender Zerfallsgeschwindigkeit zu. Außerdem ist zu sehen, daß der Prozentsatz von FAr/AR bei den Proben C und E größer ist als 90%.
Zu Vergleichszwecken wurde eine Kontrollprobe (Probe F) von Caseinhydrolysat mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 1000 Dalton gemäß Beispiel 1 der Japanischen Offenlegungsschrift Nr. 1(1989)-269499 (im folgenden abgekürzt als JUPAG 1-269499) hergestellt, und der Prozentsatz von FAr/Ar war bei der Kontrollprobe F weniger als 90 Gew.-%.

(3) MESSUNG DES MOLEKULARGEWICHTS

Das Molekulargewicht der oben in Punkt (1) hergestellten Proben C und E wurde mit einer Säule vom Typ Sephadex G-25 und einer Elutionslösung von 0,5 N Essigsäure gemessen. Es wurde festgestellt, daß das Molekulargewicht der Proben C und E weniger als 1000 Dalton betrug, da die 1. Fraktion der Proben C und E später eluiert wurde als Oxytocin (Molekulargewicht 1000 Dalton), das als Referenz verwendet wurde.

[TEST 2]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der Antigenität der Proben A-E und der Kontroliprobe F durch den ELISA-Hemmtest
Platten mit jeweils 96 Mulden (vertrieben von Nunc) wurden mit Caseineiweiß oder mit Molkeneiweiß bestrichen und anschließend gewaschen, um nichtfixierte Eiweiße zu entfernen. Andererseits wurde Kaninchen-Anticasein-Antiserum und Kaninchen-Antimolkeneiweiß-Antiserum mit jeder der entsprechenden Proben A-E und der Kontrollprobe F umgesetzt, um eine Antigen-Antikörper-Reaktion zu beobachten. Die resultierenden Reaktionsmischungen wurden jeweils in Mulden gegossen, die mit den entsprechenden Proteinen bestrichen worden waren, damit es zu einer Reaktion zwischen den fixierten Proteinen und den entsprechenden Kaninchen-Antiseren kommen konnte, die in den jeweiligen Reaktionsmischungen verblieben waren, und dann wurde gewaschen, um nichtfixierte Stoffe zu entfernen. Mit alkalischer Phosphatase markierter Antikaninchen-IgG- Antikörper von Ziegen (vertrieben von Zymed Laboratories) wurde in die jeweiligen Mulden gegossen, um ihn an dem Kaninchenantiserum zu fixieren, das an die fixierten Proteine fixiert war, und dann wurde gewaschen, um unfixierten markierten Antikörper zu entfernen. Natrium-p-nitrophenylphosphat, bei dem es sich um das Substrat für dieses Enzym handelt, wurde in jede Mulde gegeben, damit es 30 Minuten lang zu einer Enzymreaktion kommen konnte. Die Enzymreaktion wurde beendet durch Zugabe von 5 N Natriumhydroxid in jede Mulde, und dann wurden die Reaktionsprodukte in jeder Mulde mit einem Mikroplatten-Lesegerät (450 nm) gemessen (siehe Journal of the Medical Society of Toho University, Vol 35, Nr. 6, Seite 509-516, 1989). Als Ergebnis wurde festgestellt, daß die Antigenität der Hydrolysatproben mit zunehmendem Verhältnis FAr/Ar geringer wird. Insbesondere betrug die Antigenität der Probe A (Verhältnis FAr/Ar 31%) und der Probe B (Verhältnis FAr/Ar 57%) 1/400 bzw. 1/30000 der von Casein, und die Antigenität der Probe C (Verhältnis FAr/Ar über 90%) war nahezu verschwunden. Dementsprechend war auch die Antigenität der Probe E (Verhältnis FAr/Ar über 90%) verschwunden. Die Antigenität der Kontrollprobe F (Verhältnis FAr/Ar unter 90%) blieb offensichtlich bei 1/320.

[TEST 3]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der Fähigkeit von Milcheiweißhydrolysat zur Aktivierung der Vermehrung von menschlichen Hautzellen.
Vergleichstests wurden an der in Test 1 hergestellten Probe C, handelsüblicher Rinderplazentaextrakt (vertrieben von Boettger, Deutschland), und der gemäß Beispiel 1 von JUPAG 1-269499 hergestellten. Probe F in folgender Weise durchgeführt.
Menschliche Epithelzellen und Fibroblasten wurden jeweils nach dem herkömmlichen Verfahren in modifiziertem KGM- Nährboden und in modifiziertem KGM-Nährboden mit 2% fötalem Rinderserum inkubiert. Die resultierenden Nährböden wurden in zwölf Teile geteilt, denen jeweils die Probe C, Rinderplazentaextrakt und Probe F in einem Verhältnis von 0 (Kontrolle), 1, 10 und 100 µg/ml zugesetzt wurden. Nach einer Inkubation von 2-3 Tagen wurde der jeweiligen Nährlösung mit ³H markiertes Thymidin zugesetzt, dann weitere 2-3 Stunden inkubiert, und dann wurde die von den Zellen aufgenommene Menge an ³H mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler gemessen.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt.
Wie aus Tabelle 2 ersichtlich ist, zeigt die Probe C eine beachtliche Wirkung hinsichtlich der Aktivierung der Vermehrung von menschlichen Epithelzellen und Fibroblasten.
Im Gegensatz dazu steht die Wirkung von Rinderplazentaextrakt und Probe F in keinem Zusammenhang mit der zugesetzten Menge. Was jedoch die Wirksamkeit von Rinderplazentaextrakt auf Fibroblasten angeht, so zeigen die erzielten Werte offensichtlich eine negative Wirksamkeit.

[TEST 4]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der Wirkung von Zusammensetzungen zur Behandlung von Haar und Haut mit oder ohne Milcheiweißhydrolysat der vorliegenden Erfindung.

(1) HERSTELLUNG VON PROBEN

Sieben Testproben (Testproben Nr. 1-7) und sieben Kontrollproben (Kontrollproben A-G) von Zusammensetzungen zur Behandlung von Haar und Haut wurden mit den unten angegebenen Bestandteilen nach dem herkömmlichen Verfahren hergestellt. Es sei darauf hingewiesen, daß die Bestandteile der Testproben Nr. 1-7 jeweils denen von Beispiel Nr. 1-7 unten entsprechen, und daß diejenigen der Kontrollproben A-G den Testproben Nr. 1-7 entsprechen, wobei anstelle des Milcheiweißhydrolysats in den Testproben Nr. 1-7 Wasser verwendet wird. HAUTCREME EAU DE TOILETTE EAU DE COLOGNE HAUT SALBE HAARLOTION HAARSPÜLUNG HAAR-SHAMPOO

(2) VERFAHREN

(2-1) TESTS AN HAUTBEHANDLUNGSZUSAMMENSETZUNGEN

Es wurden fünf professionelle Testpersonen (20 bis 40 Jahre alt) ausgewählt, die offensichtlich eine rauhe Haut hatten. Nachdem sie die Innenseite ihres linken Armes mit handelsüblicher Toilettenseife gereinigt hatten, und sichergestellt hatten, daß keine Seifenreste zurückblieben, wurden 0,5 g der Testproben Nr. 1-4 und der entsprechenden Kontrollproben A-D an verschiedenen Stellen einer Größe von 30 mm x 15 mm aufgetragen und in die Haut eingerieben. Diese Behandlung wurde 4 Wochen lang einmal pro Tag durchgeführt, und einmal pro Woche wurden die folgenden Punkte anhand der folgenden Kriterien mit dem bloßen Auge und durch Fühlen bewertet:
Punkte: Vorbeugung gegen zunehmendes Rauhwerden der Haut
Erholung von der rauh gewordenen Haut
Glattheit der Haut
Regelmäßigkeit der Hautfalten und -runzeln
Elastizität der Haut
Weichheit der Haut
Hautschutz
Kriterien: deutlich besser als Kontrollgruppe +2
etwas besser als Kontrollgruppe +1
kein Unterschied 0
etwas schlechter als Kontrollgruppe -1
deutlich schlechter als Kontrollgruppe -2
Die Mittelwerte wurden anhand der Bewertung der jeweiligen Punkte errechnet.

(2-2) TESTS AN HAARBEHANDLUNGSZUSAMMENSETZUNGEN

Fünfzehn professionelle Testpersonen (20 bis 40 Jahre alt), die offensichtlich beschädigtes, trockenes und rauh gewordenes Haar hatten, wurden in drei Gruppen aufgeteilt, um die Proben Nr. 5 und E (Haarlotion, Gruppe 1), die Proben Nr. 6 und F (Haarspülung, Gruppe 2) und die Proben Nr. 7 und G (Haar-Shampoo, Gruppe 3) zu testen.
Im Falle der Gruppen 1 und 2 wurden jeweils 2 g der zugehörigen Proben (Haarlotion und Haarspülung) alle 4 Tage auf den beiden Seiten des Kopfes (Fläche von etwa 50 mm x 80 mm) auf die Haare aufgetragen und eingerieben, nachdem die Haare ausreichend mit handelsüblichem Shampoo gereinigt und gründlich mit Wasser gewaschen wurden, so daß kein Shampoo zurückblieb. Im Falle der Gruppe 2, bei der Proben einer Haarspülung getestet werden sollten, wurden die Haare nach dem Auftragen der Proben leicht mit Wasser gewaschen. Diese Behandlung wurde 10 mal wiederholt, und die Bewertung wurde alle 4 Tage vor der Behandlung vorgenommen.
Im Falle der Gruppe 3, an der Shampoo-Proben getestet werden sollten, wurden die Haare der Testpersonen auf den beiden Seiten des Kopfes mit den zugehörigen Test- und Kontrollproben getrennt gereinigt, ohne handelsübliches Shampoo zu verwenden, und dann wurde mit Wasser gewaschen, bis kein Shampoo mehr festzustellen war. Dieses Haarewaschen wurde 15 Tage lang einmal pro Tag durchgeführt. Die Bewertung wurde jeden Tag vor dem Waschen zu den folgenden Punkten anhand der folgenden Kriterien mit bloßem Auge und durch Fühlen vorgenommen.
Punkte: Erholung der beschädigten Haare
Vorbeugung gegen störrische und/oder sich spaltende
Haare
Weichheit der Haare
Glattheit nach der Haarpflege
Erholung von den trockenen und rauh gewordenen Haaren
Glanz der Haare
Kriterien: deutlich besser als Kontrollgruppe +2
etwas besser als Kontrollgruppe +1
kein Unterschied 0
etwas schlechter als Kontrollgruppe -1
deutlich schlechter als Kontrollgruppe -2
Die Mittelwerte wurden anhand der Bewertung der jeweiligen Punkte errechnet.

(3) ERGEBNISSE

Die Ergebnisse dieses Tests sind in Tabelle 3 und 4 dargestellt.
Es bestätigte sich, daß die Proben Nr. 1 und 2 im Vergleich zu den Kontrollproben A und B wirksam sind im Hinblick auf eine Erholung der rauh gewordenen Haut bei allen 5 Testpersonen, und wirksam sind im Hinblick auf eine Verbesserung der Elastizität der Haut bei 4 von den 5 Testpersonen.
Es bestätigte sich, daß Probe Nr. 3 im Vergleich zu Kontrollprobe C wirksam ist im Hinblick auf eine Erholung von rauh gewordener Haut, eine Verbesserung der Regelmäßigkeit der Hautfalten und -runzeln und eine Verbesserung der Glattheit der Haut bei 4 von den 5 Testpersonen.
Es bestätigte sich, daß Probe Nr. 4 im Vergleich zu Kontrollprobe D wirksam ist im Hinblick auf eine Erholung von rauh gewordener Haut bei allen 5 Testpersonen, und wirksam ist im Hinblick auf eine Verbesserung der Glattheit der Haut bei 4 von den 5 Testpersonen.
Es bestätigte sich, daß Probe Nr. 5 im Vergleich zu Kontrollprobe E wirksam ist im Hinblick auf eine Erholung von beschädigten Haaren und von trockenen und rauh gewordenen Haaren bei 4 von den 5 Testpersonen.
Es bestätigte sich, daß Probe Nr. 6 im Vergleich zu Kontrollprobe F wirksam ist im Hinblick auf eine Erholung von beschädigten Haaren und das Weicherwerden der Haare bei allen 5 Testpersonen, und wirksam ist im Hinblick auf eine Verbesserung der Glattheit nach der Haarpflege und eine Erholung von trockenen und rauh gewordenen Haaren bei 4 von den 5 Testpersonen.
Es bestätigte sich, daß Probe Nr. 7 im Vergleich zu Kontrollprobe G wirksam ist im Hinblick auf die Erholung von beschädigten Haaren, die Verbesserung der Glattheit nach der Haarpflege und die Erholung von trockenen und rauh gewordenen Haaren bei 4 von den 5 Testpersonen.
Damit war also erwiesen, daß die Zugabe des Milcheiweißhydrolysats der vorliegenden Erfindung zu verschiedenen Haar- und Hautbehandlungs zusammensetzungen äußerst wirksam ist

[TEST 5]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der bevorzugten Konzentration des Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen zuzusetzenden Milcheiweißhydrolysats

(1) HERSTELLUNG VON PROBEN

Testproben von Hautcreme und Haarlotion wurden mit den entsprechenden Bestandteilen gemäß Beispiel 1 und 5 (unten) hergestellt, nur daß hier der Prozentsatz des zuzusetzenden Milcheiweißhydrolysats in einem Bereich von 0,01-50 % verändert wurde, und daß der Prozentsatz des zuzusetzenden gereinigten Wassers verändert wurde, um die Veränderung des zuerst genannten Prozentsatzes auszugleichen. Kontrollproben von Hautcreme und Haarlotion, die kein Milcheiweißhydrolysat enthielten, wurden mit denselben Bestandteilen wie die Kontrollproben A und E von Test 4 (oben) hergestellt.

(2) VERFAHREN

Dieser Test wurde nach demselben Verfahren durchgeführt wie Test 4 oben, doch wurden die zu bewertenden Punkte wie folgt eingeschränkt:
im Zusammenhang mit Hautcreme:
Erholung von zunehmend rauherer Haut,
Vorbeugung gegen Rauhwerden der haut, und
Elastizität der Haut,
im Zusammenhang mit Haarlotion:
Erholung von beschgdigten Haaren
Vorbeugung gegen störrische und/oder sich spaltende Haare

(3) ERGEBNISSE

Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 dargestellt.
Im allgemeinen waren die Auswirkungen des Hydrolysats auf Hautcremes und Haarlotions deutlich festzustellen. Die Wirkungen verstärkten sich noch mit einer Erhöhung des Prozentsatzes des zugesetzten Hydrolysats bis auf 10 %, die Wirkungen erreichten das Maximum bei 10 - 20 %, und gingen wieder zurück bei 30 - 50 %.
Daher wurde festgestellt, daß der bevorzugte Prozentsatz des zuzusetzenden Milcheiweißhydrolysats weniger als 20 %, noch mehr bevorzugt zwischen 0,01 und 20 % beträgt.

[TEST 6]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung des bevorzugten Prozentsatzes des anderen Produkten mit Ausnahme der in Test 5 oben getesteten Produkte zuzusetzenden Hydrolysats.

(1) HERSTELLUNG VON PROBEN

Testproben von Eau de Toilette, Eau de Cologne, Hautsalbe, Haarspülung und Haar-Shampoo wurden mit den entsprechenden Bestandteilen gemäß Beispiel 2, 3, 4, 6 und 7 unten hergestellt, nur daß der Prozentsatz von Milcheiweißhydrolysat in einem Bereich von 0,01, 20 und 50 % verändert wurde, und daß der Prozentsatz von gereinigtem Wasser verändert wurde, um die Veränderung des zuerst genannten Prozentsatzes auszugleichen. Kontrollproben der entsprechenden Produkte ohne Milcheiweißhydrolysat wurden ebenfalls hergestellt mit denselben Bestandteilen wie in den Kontroliproben B, C, D, F und G von Test 4 oben.

(2) VERFAHREN

Das Verfahren war das gleiche wie in Test 5 unten.

(3) ERGEBNISSE

Die Ergebnisse dieses Tests sind in Tabelle 6 dargestellt.
Wie aus Tabelle 6 hervorgeht, bestätigte es sich, daß der bevorzugte Prozentsatz des Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen zuzusetzenden Milcheiweißhydrolysats 0,01 bis 20 % beträgt.
Im folgenden wird lediglich als Referenz ein typisches Verfahren zur Hydrolyse von Milcheiweiß beschrieben.
In einer gewissen Menge Wasser wurden 200 g handelsübliches Casein gelöst, um eine 10%ige wäßrige Caseinlösung herzustellen. Der pH-Wert der resultierenden Lösung wurde mit einer 10%igen wäßrigen Natriumhydroxidlösung auf 8,0 eingestellt. Nach der Sterilisierung bei 90ºC für 10 Minuten wurde die resultierende Lösung auf 45ºC abgekühlt, der Lösung wurden 10 g Pankreatin F (von Amano Pharmaceutical Co., Ltd.), 2 g Protease N AMANO (von Amano Pharmaceutical Co., Ltd.) und 4 g des Extrakts von Milchsäurebakterien zugesetzt, und das resultierende Gemisch wurde 24 Stunden bei 45ºC hydrolysiert.
Das resultierende Gemisch wurde 5 Minuten auf 90ºC erhitzt, um die Enzyme zu deaktivieren, und dann wurde das Gemisch gefiltert, bis kein Niederschlag mehr festzustellen war. Das resultierende Filtrat wurde lyophilisiert, um auf diese Weise etwa 165 g pulveriges Caseinhydrolysat zu erhalten.
Es bestätigte sich, daß der Prozentsatz von FAr/Ar des resultierenden Caseinhydrolysats 90,5 Gew.-% betrug, daß die Antigenität des Caseins im wesentlichen beseitigt war, daß das Molekulargewicht der Peptide in dem Caseinhydrolysat weniger als 1000 Dalton betrug, und daß die Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung menschlicher Hautzellen in einem ähnlichen Ausmaß nach denselben Verfahren wie in Test 1, 2 und 3 oben festzustellen war.

[REFERENZVERFAHREN 2]

In einer gewissen Menge Wasser wurden 200 g handelsübliches Molkeneiweißpulver gelöst, um eine 8%ige wäßrige Molkeneiweißlösung herzustellen. Der pH-Wert der resultierenden Lösung wurde mit einer 5%igen wäßrigen Natriumhydroxidlösung auf 7,5 eingestellt. Die resultierende Lösung wurde mit einem Filtersystem sterilisiert, dann wurde die Temperatur der Lösung auf 45ºC eingestellt. Während der pH-Wert der Lösung mit einer 5%igen wäßrigen Natriumhydroxidlösung auf 7,5 gehalten wurde, wurde 15 Stunden lang eine Hydrolyse der Lösung unter Zugabe von Pankreatin F (von Amano Pharmaceutical Co., Ltd.), und zwar 6 mal jeweils 2 g in Abständen von 30 Minuten, durchgeführt, und die resultierende Lösung wurde weiter hydrolysiert unter Zugabe von 2,0 g Actinase AS (von Kaken Seiyaku) für 5 Stunden bei der gleichen Temperatur. Die resultierende Lösung wurde 5 Minuten auf 90ºC erhitzt, um die Enzyme zu deaktivieren, und dann gefiltert. Das Filtrat wurde dann lyophilisiert, so daß man etwa 160 g pulveriges Molkeneiweißhydrolysat erhielt
Es bestätigte sich, daß der Prozentsatz von FAr/Ar des resultierenden Molkeneiweißhydrolysats 90,4 Gew.-% betrug, daß die Antigenität des Molkeneiweiß im wesentlichen beseitigt war, daß das Molekulargewicht der Peptide in dem Hydrolysat weniger als 1000 Dalton betrug, und daß die Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung menschlicher Hautzellen in einem ähnlichen Ausmaß nach denselben Verfahren wie in Test 1, 2 und 3 oben festgestellt wurde.
Im folgenden werden nun einige Ausführungsformen von Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen, die Milcheiweißhydrolysat enthalten, zum besseren Verständnis der vorliegenden Erfindung beschrieben. Da die Zusammensetzungen nach dem herkömmlichen Verfahren hergestellt wurden, ist die Liste der Bestandteile für diese Ausführungsformen ausreichend.

Beispiel 1

Hautcreme wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.

HAUTCREME

Stearinsäure 15,0 (%)
Cetylalkohol 2,0
Squalane 3,0
2-Octyldodecylmyristat 5,0
Glycerin 10,0
1,3-Butylenglycol 4,0
Polyoxyethylen (20)-sorbitan- monostearat 3,0
Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 1 5,0
gereinigtes Wasser 53,0

Beispiel 2

Eau de Toilette wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Propylenglycol 10,0 (%)
Oleylalkohol 0,1
mit Polyoxyethylen(60) hydriertes
Rizinusöl 1,5
Ethylalkohol 5,0
Milcheiweißhydrolysat nach
Referenzverfahren 1 3,5
gereinigtes Wasser 79,9

Beispiel 3

Eau de Cologne wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Natriumhyaluronat 0,1 (%)
Plazentaextrakt 1,5
Glycerin 1,0
Milcheiweißhydrglysat nach Referenzverfahren 2 4,0
gereinigtes Wasser 93,4

Beispiel 4

Hautsalbe wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
weißes Petrolatum 25,0 (%)
Hartparaffin 5,0
Cetostearylalkohol 2,0
Propylenglycol 10,0
Polyoxyethylenpolyoxypropylenglycolether 3,0
Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 1 5,0
gereinigtes Wasser 50,0

Beispiel 5

Haarlotion wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Cetylalkohol 1,5 (%)
2-Hexyldecanol 1,0
1,3-Butylenglycol 3,0
Hydroxyethylencellulosehydroxypropyltrimethylammoniumchloridethyl 0,2
Polyoxyethylenstearylether 1,0
Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 2 4,0
gereinigtes Wasser 89,3

Beispiel 6

Haarspülung wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Dialkyldimethylammoniumchloridlösung 2,0 (%)
Cetylalkohol 1,0
Polyoxyethylenstearylether 1,0 1,3-Butylenglycol 3,0
Hydroxyethylencellulosehydroxypropyltrimethylammoniumchloridethyl 0,2
Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 1 4,5
gereinigtes Wasser 88,3

Beispiel 7

Haar-Shampoo wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Triethanolaminlaurylsulfatlösung 15,0 (%)
1,3-Butylenglycol 2,0
Ethylenglycolmonostearat 1,5
Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 2 5,0
gereinigtes Wasser 76,5
Im folgenden werden nun einige Tests an der Fraktion von Milcheiweißhydrolysat beschrieben.

[TEST 7]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der physikalischchemischen Beschaffenheit der Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat.
(1) HERSTELLUNG VON FRAKTIONEN VON MILCHEIWEISSHYDROLYSAT

(1-1) FRAKTIONEN VON CASEINHYDROLYSAT

Caseinhydrolysat wurde hergestellt nach dem gleichen Verfahren wie bei dem Referenzverfahren 1 oben.
In einer gewissen Menge Wasser wurden 16 g des resultierenden pulverigen Caseinhydrolysats gelöst, um eine 20%ige wäßrige Caseinhydrolysatlösung herzustellen. Die resultierende Hydrolysatlösung wurde in eine mit Sephadex G-10 gefüllte Säule (10 x 12 cm) gegossen, dann mit deionisiertem Wasser mit einer strömungsgeschwindigkeit von 10 ml/min eluiert. Das Eluat wurde fraktioniert auf der Basis einer Absorption bei 280 nm in das 1.1 2., 3. und 4. Elutionsmaximum. Die jeweiligen Fraktionen wurden lyophilisiert, um auf diese Weise etwa 8,7 g, etwa 4,9 g, etwa 1,6 g und etwa 0,3 g der pulverigen Fraktionen A - D zu erhalten.

(1-2) FRAKTIONEN VON MOLKENEIWEISSHYDROLYSAT

Molkeneiweißhydrolysat wurde hergestellt nach dem gleichen Verfahren wie bei dem Referenzverfahren 2 oben.
In einer gewissen Menge Wasser wurden 100 g des hydrolysierten Molkeneiweiß gelöst, um eine 10%ige wäßrige Molkeneiweißhydrolysatlösung herzustellen, die resultierende Lösung wurde in eine mit Sephadex G-10 gefüllte Säule (37 x 15 cm) gegossen, dann mit deionisiertem Wasser mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 200 ml/min eluiert. Das Eluat wurde fraktioniert auf der Basis einer Absorption bei 280 nm in das 1., 2., 3. und 4. Elutionsmaximum. Die jeweiligen Fraktionen wurden lyophilisiert, um auf diese Weise etwa 54 g, etwa 33 g, etwa 8 g und etwa 1,5 g der pulverigen Fraktionen von Molkeneiweißhydrolysat E - H zu erhalten.

(2) ANALYSE VON AMINOSÄUREN

Der Gehalt an Aminosäuren in jeder der Fraktionen A - H wurde mit einem automatischen Analysegerät für Aminosäuren gemessen, und das Verhältnis von Ar/WA wurde dann daraus errechnet.
Die Ergebnisse der Analyse sind in Tabelle 7 dargestellt.
Wie aus Tabelle 7 ersichtlich ist, betrug der Prozentsatz von Ar/WA in den Fraktionen A, B, E und F weniger als 5 Gew.-%, und andererseits betrug der Prozentsatz von Ar/WA in den Fraktionen C, D, G und H sogar mehr als 40 Gew.-%, während die Löslichkeit nur 2 % betrug. Der Prozentsatz von Ar/WA bei Caseinpeptid mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 1000 Dalton, das nach Beispiel 1 von JUPAG 1-269499 (Kontrollbeispiel) hergestellt worden war, betrug mehr als 5 Gew.-%.

(3) MESSUNG DES MOLEKULARGEWICHTS

Das Molekulargewicht der Fraktionen A und E wurde gemessen mit einer Säule vom Typ Sephadex G-25 und einer 0,5 M Essigsäurelösung als Elutionsflüssigkeit. Als Ergebnis wurde das 1. Elutionsmaximum der Fraktionen A und E nach Oxytocin (Molekulargewicht = 1000 Dalton) eluiert, das als Referenzsubstanz verwendet wurde, so daß für das Molekulargewicht der Fraktionen A - D und E - H ein Wert von weniger als 1000 Dalton bestätigt wurde.

[TEST 8]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der Antigenität der Fraktionen A, B, E und F der in Test 7 hergestellten Mucheiweißhydrolysate nach dem ELISA-Hemmtest.
Das Verfahren des ELISA-Hemmtests war das gleiche wie bei Test 2 oben.
Als Ergebnis wurde festgestellt, daß die Antigenität der Fraktionen A, B, E und F auf 1/10&sup5; der Antigenität der entsprechenden Milcheiweiße gesenkt worden war. Aus diesen Ergebnissen wurde geschlossen, daß die Antigenität der Fraktionen A, B, E und F im wesentlichen beseitigt war.

[TEST 9]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung menschlicher Hautzellen bei den Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat.
Die Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung von itienschlichen Hautzellen bei den in Test 7 hergestellten Fraktionen A, B, bei handelsüblichem Rinderplazentaextrakt (vertrieben von Boettger, Deutschland) und bei Probe I gemäß Beispiel 1 von JUPAG 1-269499 wurde nach dem gleichen Verfahren wie in Test 3 oben getestet.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 8 dargestellt.
Wie aus Tabelle 8 ersichtlich ist, zeigten die Fraktionen A und B eine deutliche Wirkung im Hinblick auf die Aktivierung der Vermehrung von menschlichen Hautzellen und Fibroblasten.
Wenngleich die Wirkung von Probe 1 auf menschliche Hautzellen mit der zugesetzten Menge davon zu korrelieren schien, war die Wirkung der Zugabe von 1 µg/ml negativ (vergleiche die Wirkung der zugegebenen Mengen von 0 und 1 µg/ml). Die Wirkung von Rinderplazentaextrakt auf menschliche Hautzellen und die Wirkung der Kontrollprobe 1 auf menschliche Fibroblasten korrelierten nicht mit den zugesetzten Mengen. Was die Wirkung von Rinderplazentaextrakt auf menschliche Fibroblasten angeht, so zeigten die erzielten Werte offensichtlich eine negative Wirkung. Ähnliche Ergebnisse wurden bei den Fraktionen E und F erzielt.

[TEST 10]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der Wirkungen von Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen mit oder ohne Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat der vorliegenden Erfindung.

(1) HERSTELLUNG VON PROBEN

Vierzehn Testproben (Testprobe Nr. 8 - 21) und sieben Kontrollproben (Kontrollprobe Nr. J - P) von Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen wurden mit den nachfolgend aufgeführten Bestandteilen nach dem herkömmlichen Verfahren hergestellt. Es sei darauf hingewiesen, daß die Bestandteile der Testproben Nr. 8 - 21 denen von Beispiel Nr. 8 - 14 unten entsprechen, so daß zwei aufeinanderfolgende Testproben, d.h. die Testprobenpaare 8 und 9, 10 und 11, 12 und 13, 14 und 15, 16 und 17, 18 und 19 sowie 20 und 21 den Beispielen Nr. 8 - 14 entsprechen. Die Bestandteile der Kontrollproben J - P entsprechen ebenfalls den Paaren der Testprobe Nr. 8 - 21, wobei Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat in den entsprechenden Testproben Nr. 8 - 21 durch Wasser ersetzt wurden. HAUTCREME EAU DE TOILETTE EAU DE COLOGNE HAUTSALBE HAARLOTION HAARSPÜLUNG HAAR-SHAMPOO

(2) VERFAHREN

(2-1) TESTS AN HAUTBEHANDLUNGSZUSAMMENSETZUNGEN

Es wurden fünf professionelle Testpersonen (20 bis 40 Jahre alt) ausgewählt, die offensichtlich rauh gewordene Haut hatten. Nachdem sie die Innenseite des linken und rechten Arms mit handelsüblicher Toilettenseife gereinigt hatten, und sichergestellt hatten, daß keine Seife zurückblieb, wurden 0,5 g der Testproben Nr. 8 - 11 und der entsprechenden Kontrollproben J und K auf den linken Arm aufgetragen und an verschiedenen Stellen einer Größe von 30 mm x 15 mm in die Haut eingerieben, und 0,5 g der Testproben Nr. 12 - 15 und der entsprechenden Kontrollproben L und M wurden auf den rechten Arm aufgetragen und an verschiedenen Stellen einer Größe von 30 mm x 15 mm in die Haut eingerieben. Diese Behandlung wurde 4 Wochen lang einmal pro Tag durchgeführt, und einmal pro Woche wurde anhand der folgenden Punkte nach den folgenden Kriterien mit dem bloßen Auge und durch Fühlen eine Bewertung vorgenommen.
Punkte: Vorbeugung gegen zunehmendes Rauhwerden der Haut
Erholung von rauh gewordener Haut
Glattheit der Haut
Regelmäßigkeit der Hautfalten und -runzeln
Elastizität der Haut
Weichheit der Haut
Hautschutz
Kriterien: deutlich besser als Kontrollgruppe +2
etwas besser als Kontrollgruppe +1
kein Unterschied 0
etwas schlechter als Kontrollgruppe -1
deutlich schlechter als Kontrollgruppe -2
Die Mittelwerte wurden anhand der Bewertung der jeweiligen Punkte errechnet.

(2-2) TESTS AN HAARBEHANDLUNGSZUSAMMENSETZUNGEN

Dreißig professionelle Testpersonen (20 bis 40 Jahre alt), die offensichtlich beschädigte, trockene und rauh gewordene Haare hatten, wurden in 6 Gruppen aufgeteilt, jeweils bestehend aus 5 Testpersonen für die Tests an den Proben Nr. 16 und N (Gruppe 4, Haarlotion), an den Proben Nr. 17 und N (Gruppe 5, Haarlotion), an den Proben Nr. 18 und O (Gruppe 6, Haarspülung), an den Proben Nr. 19 und O (Gruppe 7, Haarspülung), an den Proben Nr. 20 und P (Gruppe 8, Haar-Shampoo) und an den Proben Nr. 21 und P (Gruppe 9, Haar-Shampoo).
Im Falle der Gruppen 4 - 7 wurden 2 g der jeweiligen Proben alle 4 Tage auf beiden Seiten des Kopfes (Fläche von etwa 50 mm x 80 mm) aufgetragen und eingerieben, nachdem die Haare ausreichend mit handelsüblichem Shampoo gereinigt und gründlich mit Wasser gewaschen wurden, damit kein Shampoo zurückblieb. Im Falle der Gruppen 6 und 7, an denen Proben der Haarspülung getestet werden sollten, wurden die Haare der Testpersonen nach dem Auftragen der jeweiligen Proben leicht mit Wasser gewaschen. Diese Behandlung wurde 10 mal wiederholt, und die Bewertung wurde alle 4 Tage vor der Behandlung vorgenommen.
Im Falle der Gruppen 8 und 9, an denen Proben von Haar- Shampoo getestet werden sollten, wurden die Haare der Testpersonen auf den beiden Seiten des Kopfes mit den jeweiligen Test- und Kontrollproben getrennt gereinigt, ohne handelsübliches Shampoo zu verwenden, und dann mit Wasser gewaschen, bis kein Shampoo mehr festzustellen war. Dieses Haarewaschen erfolgte 15 Tage hintereinander einmal pro Tag, und die Bewertung wurde jeden Tag vor dem Waschen für die folgenden Punkte anhand der folgenden Kriterien mit dem bloßen Auge und durch Fühlen vorgenommen.
Punkte: Erholung von beschädigten Haaren
Vorbeugung gegen störrische und/oder sich spaltende
Haare
Weichheit der Haare
Glattheit nach der Haarpflege
Erholung von trockenen und rauhen Haaren
Glanz der Haare
Kriterien: deutlich besser als Kontrollgruppe +2
etwas besser als Kontrollgruppe +1
kein Unterschied 0
etwas schlechter als Kontrollgruppe -1
deutlich schlechter als Kontrollgruppe -2
Die Mittelwerte wurden anhand der Bewertung der jeweiligen Punkte errechnet.

(3) ERGEBNISSE

Die Ergebnisse dieses Tests sind in Tabelle 9 und 10 dargestellt.
Es bestätigte sich in bezug auf die Hautbehandlungszusammen setzungen, daß Testproben, denen Fraktion A oder E zugegeben worden war, wirksam waren für eine Erholung von rauh gewordener Haut und eine Verbesserung der Elastizität, und Testproben, denen Fraktion B oder F zugegeben worden war, wirksam waren für eine Erholung von rauh gewordener Haut.
In bezug auf die Haarbehandlungszusammensetzungen waren Testproben, denen Fraktion A oder E zugegeben worden war, wirksam fur eine Erholung von beschädigten Haaren und eine Verbesserung der Glattheit nach der Haarpflege, und Testproben, denen Fraktion B oder F zugegeben worden war, waren wirksam für eine Erholung von beschädigtem Haar.
Es zeigte sich daher, daß die Zugabe der Fraktionen des Milcheiweißhydrolysats der vorliegenden Erfindung zu verschiedenen Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen deutlich wirksam ist.

[TEST 11]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung der bevorzugten Konzentration der Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen zuzusetzenden Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat.

(1) HERSTELLUNG VON PROBEN

Testproben von Hautcreme und Haarlotion wurden mit den entsprechenden Bestandteilen wie in Beispiel 8, 9, 16 und 17 (unten) hergestellt, nur daß der Prozentsatz der zuzusetzenden Fraktion von Milcheiweißhydrolysat in dem Bereich von 0,01 - 50 % verändert wurde, und daß der Prozentsatz von zuzusetzendem gereinigtem Wasser verändert wurde, um die Veränderung des zuerst genannten Prozentsatzes auszugleichen. Kontrollproben von Hautcreme und Haarlotion ohne Fraktion von Milcheiweißhydrolysat wurden hergestellt mit den gleichen Bestandteilen wie in den Kontrollproben J und N von Test 10 (oben).

(2) VERFAHREN

Dieser Test wurde nach demselben Verfahren durchgeführt wie in Test 10 oben, doch waren die Punkte für die Bewertung auf die folgenden Punkte begrenzt:
bei Hautcreme:
Erholung von rauh gewordener Haut,
bei Haarlotion:
Erholung von beschädigten Haaren

(3) ERGEBNISSE

Die Ergebnisse sind in Tabelle 11 dargestellt.
Im allgemeinen waren die Wirkungen der Hydrolysatfraktion bei Hautcremes und Haarlotions deutlich festzustellen. Mit einer Zunahme des Prozentsatzes der zugegebenen Hydrolysatfraktion bis auf 5 % nahm die Wirkung noch zu, erreichte ihr Maximum bei 5 - 20 % und ging bei 30 - 50 % wieder zurück. Der Prozentsatz der zugegebenen Hydrolysatfraktionen beträgt vorzugsweise weniger als 20 %, mehr bevorzugt 0,01 - 20 %.

[TEST 12]

Zweck dieses Tests ist die Bestimmung des bevorzugten Prozentsatzes der Hydrolysatfraktionen, die anderen Produkten mit Ausnahme der in Test 11 oben getesteten zuzusetzen sind.

(1) HERSTELLUNG VON PROBEN

Testproben von Eau de Toilette, Eau de Cologne, Hautsalbe, Haarspülung und Haar-Shampoo wurden mit den entsprechenden Bestandteilen wie in Beispiel 10 - 15 bzw. 18 - 21 (unten) hergestellt, nur daß der Prozentsatz der Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat im Bereich von 0,01,, 1,0, 20, 30 und 50 % verändert wurde, und daß der Prozentsatz von gereinigtem Wasser verändert wurde, um die Veränderung des zuerst genannten Prozentsatzes auszugleichen. Kontrollproben der entsprechenden Produkte ohne Milcheiweißhydrolysat wurden ebenfalls hergestellt mit denselben Bestandteilen wie in den Proben K, L, M, O und P von Test 10 oben.

(2) VERFAHREN

Das Verfahren war das gleiche wie in Test 11 oben.

(3) ERGEBNISSE

Die Ergebnisse dieses Tests sind in Tabelle 12 dargestellt.
Wie aus Tabelle 12 ersichtlich ist, bestätigte es sich, daß der bevorzugte Prozentsatz der Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen zuzusetzenden Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat 0,01-20 % beträgt.
Im folgenden wird nun ein typisches Verfahren zur Herstellung von Fraktionen von Milcheiweißhydrolysat als Referenz beschrieben.

[REFERENZVERFAHREN 3]

In einer bestimmten Menge Wasser wurden 200 g handelsübliches Casein gelöst, um eine 10%ige wäßrige Caseinlösung herzustellen, und der pH-Wert der resultierenden Lösung wurde mit einer 10%igen wäßrigen Natriumhydroxidlösung auf 8,0 eingestellt. Nach dem Sterilisieren bei 90ºC für 10 Minuten wurde die resultierende Lösung auf 45ºC abgekühlt, dann wurden der Lösung 10 g Pankreatin F (von Amano Pharmaceutical Co., Ltd.), 2 g Protease N AMANO (von Amano Pharmaceutical Co., Ltd.) und 4 g des Extrakts von Milchsäurebakterien zugesetzt, das resultierende Gemisch wurde bei 45ºC 24 Stunden hydrolysiert. Nach der enzymatischen Hydrolyse wurde die Lösung 5 Minuten auf 90ºC erhitzt, um die Enzyme zu deaktivieren, und die resultierende Lösung wurde dann filtriert, um den Niederschlag zu entfernen. Das resultierende Filtrat wurde lyophilisiert, so daß man 165 g pulveriges Caseinhydrolysat erhielt.
Es bestätigte sich nach den gleichen Verfahren wie in Test 7, 8 und 9 oben, daß der Prozentsatz von FAr/Ar des resultierenden Caseinhydrolysats 90,5 Gew.-% betrug, und daß die Antigenität des Caseins im wesentlichen beseitigt war.
In einer bestimmten Menge Wasser wurden 16 g des resultierenden Milcheiweißhydrolysats gelöst, um eine 20%ige wäßrige Caseinhydrolysatlösung herzustellen, die resultierende Lösung wurde in eine Säule vom Typ Sephadex G-10 (10 x 12 cm) gegossen, dann mit deionisiertem Wasser mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 10 ml/min eluiert. Das resultierende Eluat wurde fraktioniert auf der Basis einer Absorption bei 280 nm in das 1., 2., 3. und 4. Elutionsmaximum. Die jeweiligen Fraktionen wurden lyophilisiert, so daß man etwa 8,7 g, etwa 4,9 g, etwa 1,6 g und etwa 0,3 g pulverige Fraktionen von Caseinhydrolysat (Fraktionen A - D) erhielt.
In einer bestimmten Menge von deionisiertem Wasser wurden 200 g handelsübliches Molkeneiweißpulver gelöst, um eine 8%ige wäßrige Caseinlösung herzustellen, die resultierende Lösung wurde mit einem Filtersystem sterilisiert, und die Temperatur der Lösung wurde dann auf 45ºC eingestellt. Während der pH- Wert der Lösung mit einer 5%igen wäßrigen Natriumhydroxidlösung auf 7,5 gehalten wurde, wurde die Lösung 15 Stunden unter Zugabe von Pankreatin F (von Amano Pharmaceutical Co., Ltd.) von 6 mal 2 g in Abständen von 30 Minuten hydrolysiert, dann wurde die resultierende Lösung weiter hydrolysiert durch Zugabe von 2,0 Actinase AS (von Kaken Seiyaku) für 5 Stunden bei der gleichen Temperatur. Die resultierende Lösung wurde 5 Minuten auf 90ºC erhitzt, um die Enzyme zu deaktivieren, dann filtriert, um den Niederschlag zu entfernen, und das resultierende Filtrat wurde lyophilisiert, so daß man etwa 160 g Molkeneiweißhydrolysatpulver erhielt.
Es bestätigte sich nach den gleichen Verfahren wie in Test 7, 8 und 9 oben, daß der Prozentsatz von FAr/Ar des resultierenden Molkeneiweißhydrolysats 90,4 % betrug, und daß das Molkeneiweiß im wesentlichen keine Antigenität mehr hatte.
In einer bestimmten Menge Wasser wurden 100 g des resultierenden Molkeneiweißhydrolysats gelöst, um eine 10%ige wäßrige Molkeneiweißhydrolysatlösung herzustellen, die resultierende Lösung wurde in eine Säule vom Typ Sephadex G-10 (37 x 15 cm) gegossen, und dann mit deionisiertem Wasser mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 200 ml/min eluiert. Das resultierende Eluat wurde fraktioniert auf der Basis einer Absorption bei 280 nm in das 1., 2., 3. und 4. Elutionsmaximum. Die jeweiligen Fraktionen wurden lyophilisiert, so daß man etwa 54 g, etwa 33 g, etwa 8 g und etwa 1,5 g der pulverigen Fraktionen von Molkeneiweißhydrolysat (Fraktionen E - H) erhielt.
Im folgenden werden nun einige Ausführungsformen von Haar- und Hautbehandlungszusammensetzungen, die eine Fraktion von Milcheiweißhydrolysat enthalten, zum besseren Verständnis der vorliegenden Erfindung beschrieben. Da die Zusammensetzungen nach dem herkömmlichen Verfahren hergestellt wurden, genügt es bei diesen Ausführungsformen, die einzelnen Bestandteile aufzuführen.

Beispiel 8

Hautcreme wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Stearinsäure 15,0 (%)
Cetylalkohol 2,0
Squalane 3,0
2-Octyldodecylmyristat 5,0
Glycerin 10,0
1,3-Butylenglycol 4,0
Polyoxyethylen(20)-sorbitanmonostearat 3,0
Fraktion A von Referenzverfahren 3 5,0
gereinigtes Wasser 53,0

Beispiel 9

Hautcreme wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Stearinsäure 15,0 (%)
Cetylalkohol 2,0
Squalane 3,0
2-Octyldodecylmyristat 5,0
Glycerin 10,0
1,3-Butylenglycol 4,0
Polyoxyethylen(20)-sorbitan-
monostearat 3,0
Fraktion B von Referenzverfahren 3 5,0
gereinigtes Wasser 53,0

Beispiel 10

Eau de Toilette wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Propylenglycol 10,0 (%)
Oleylalkohol 0,1
mit Polyoxyethylen(60) hydriertes
Rizinusöl 1,5
Ethylalkohol 5,0
Fraktion A von Milcheiweißhydrolysat
nach Referenzverfahren 3 3,5
gereinigtes Wasser 79,9

Beispiel 11

Eau de Toilette wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Propylenglycol 10,0 (%)
Oleylalkohol 0,1
mit Polyoxyethylen(60) hydriertes Rizinusöl 1,5
Ethylalkohol 5,0
Fraktion B von Milöheiweißhydrolysat
nach Referenzverfahren 3 3,5
gereinigtes Wasser 79,9

Beispiel 12

Eau de Cologne wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Natriumhyaluronat 0,1 (%)
Plazentaextrakt 1,5
Glycerin 1,0
Fraktion E von Milcheiweißhydrolysat,
nach Referenzverfahren 4 4,0
gereinigtes Wasser 93,4

Beispiel 13

Eau de Cologne wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Natriumhyaluronat 0,1 (%)
Plazentaextrakt 1,5
Glycerin 1,0
Fraktion F von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 4 4,0
gereinigtes Wasser 93,4

Beispiel 14

Hautsalbe wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
weißes Petrolatum 25,0 (%)
Hartparaffin 5,0
Cetostearylalkohol 2,0
Propylenglycol 10,0
Polyoxyethylen-polyoxypropylenglycolether 3,0
Fraktion A von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 3 5,0
gereinigtes Wasser 50,0

Beispiel 15

Hautsalbe wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
weißes Petrolatum 25,0 (%)
Hartparaffin 5,0
Cetostearylalkohol 2,0
Propylenglycol 10,0
Polyoxyethylen-polyoxypropylenglycolether 3,0
Fraktion B von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 3 5,0
gereinigtes Wasser 50,0

Beispiel 16

Haarlotion wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Cetylalkohol 1,5 (%)
2-Hexyldecanol 1,0
1,3-Butylenglycol 3,0
Hydroxyethylencellulose-hydroxypropyltrimethyl-ammoniumchlorid-ethyl 0,2
Polyoxyethylenstearylether 1,0
Fraktion E von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 4 4,0
gereinigtes Wasser 89,3

Beispiel 17

Haarlotion wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Cetylalkohol 1,5 (%)
2-Hexyldecanol 1,0
1,3-Butylenglycol 3,0
Hydroxyethylencellulose-hydroxypropyltrimethyl-ammoniumchlorid-ethyl 0,2
Polyoxyethylenstearylether 1,0
Fraktion F von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 4 4,0
gereinigtes Wasser 89,3

Beispiel 18

Haarspülung wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Dialkyldimethylammoniumchloridlösung 2,0 (%)
Cetylalkohol 1,0
Polyoxyethylenstearylether 1,0
1,3-Butylenglycol 3,0
Hydroxyethylencellulose-hydroxypropyltrimethyl-ammoniumchlorid-ethyl 0,2
Fraktion A von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 3 4,5
gereinigtes Wasser 88,3

Beispiel 19

Haarspülung wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Dialkyldimethylammoniumchloridlösung 2,0 (%)
Cetylalkohol 1,0
Polyoxyethylenstearylether 1,0
1,3-Butylenglycol 3,0
Hydroxyethylencellulose-hydroxypropyltrimethyl-ammoniumchlorid-ethyl 0,2
Fraktion B von Milcheiweißhydrolysat
nach Referenzverfahren 3 4,5
gereinigtes Wasser 88,3

Beispiel 20

Haar-Shampoo wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Triethanolaminlaurylsulfatlösung 15,0 (%)
1,3-Butylenglycol 2,0
Ethylenglycolmonostearat 1,5
Fraktion E von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 4 5,0
gereinigtes Wasser 76,5

Beispiel 21

Haar-Shampoo wurde hergestellt nach dem herkömmlichen Verfahren mit den folgenden Bestandteilen.
Triethanolaminlaurylsulfatlösung 15,0 (%)
1,3-Butylenglycol 2,0
Ethylenglycolmonostearat 1,5
Fraktion F von Milcheiweißhydrolysat nach Referenzverfahren 4 5,0
gereinigtes Wasser 76,5

WIRKUNGEN DER ERFINDUNG

Die Wirkungen der vorliegenden Erfindung sind wie folgt:
1) Das Milcheiweißhydrolysat mit der Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung menschlicher Hautzellen und ohne Antigenität für das Milcheiweiß kann in einer höheren Ausbeute bereitgestellt werden.
2) Die Fraktion von Milcheiweißhydrolysat mit der Fähigkeit zur Aktivierung der Vermehrung menschlicher Hautzellen und ohne Antigenität für das Milcheiweiß kann in einer höheren Ausbeute bereitgestellt werden.
3) Es können Haarbehandlungszusammensetzungen mit zuverlässiger Wirkung im Sinne einer Vorbeugung gegen oder einer Erholung von beschädigten Haaren, einer Verbesserung der Weichheit der Haare, der Glattheit nach der Haarpflege, des Glanzes der Haare und der Erholung von trockenen und rauh gewordenen Haaren bereitgestellt werden.
4) Es können Hautbehandlungszusammensetzungen mit zuverlässiger Wirkung im Sinne einer Vorbeugung gegen oder einer Erholung von rauh gewordener Haut, einer Verbesserung der Glattheit der Haut, einer Verbesserung der Regelmäßigkeit der Hautfalten und -runzeln, einer Verbesserung der Elastizität der Haut, einer Verbesserung der Weichheit der Haut und des Hautschutzes bereitgestellt werden.

Claims

1. Milcheiweißhydrolysat mit den folgenden chemischen, biochemischen und physiologischen Eigenschaften:

(a) das Hydrolysat ist eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton und Aminosäuren;

(b) von den aromatischen Aminosäuren sind 90 Gew.-% oder mehr als freie Aminosäuren in dem Hydrolysat enthalten;

(c) das Hydrolysat hat die Eigenschaft, die Vermehrung menschlicher Hautzellen zu aktivieren, so daß das Hydrolysat mehr als Rinderplazenta-Extrakt ein Maß für die vermehrungsaktivierende Eigenschaft bietet, und zwar nach dem Testverfahren, bei dem die Menge des in menschliche Epithelzellen aufgenommenen, mit ³H markierten Thymidins und die Menge an Fibroblasten mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler gemessen wird; und

(d) bei dem Hydrolysat läßt sich keine Antigenität für das Milcheiweiß feststellen, wenn die Antigenität mit dem ELISA-Hemmtest gemessen wird.

2. Fraktion des Milcheiweißhydrolysats, die gewonnen wurde durch Fraktionierung des Milcheiweißhydrolysats nach Anspruch 1, wobei die Fraktion die folgenden chemischen, biochemischen und physiologischen Eigenschaften besitzt:

(a) die Fraktion ist eine Mischung von Peptiden mit einem Molekulargewicht von weniger als 1000 Dalton;

(b) das Verhältnis von aromatischen Aminosäuren zu den in der Fraktion enthaltenen Aminosäuren insgesamt beträgt weniger als 5 Gew.-%;

(c) die Fraktion hat die Eigenschaft, die Vermehrung menschlicher Hautzellen zu aktivieren, so daß die Fraktion mehr als Rinderplazenta-Extrakt ein Maß für die vermehrungsaktivierende Eigenschaft bietet, und zwar nach dem Testverfahren, bei dem die Menge des in menschliche Epithelzellen aufgenommenen, mit ³H markierten Thymidins und die Menge an Fibroblasten mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler gemessen wird; und

(d) bei der Fraktion läßt sich keine Antigenität gegen Milcheiweiß feststellen, wenn die Antigenität mit dem ELISA-Hemmtest gemessen wird.

3. Zusammensetzung zur Behandlung von Haar und Haut, die als Wirkstoff das Hydrolysat nach Anspruch 1 oder die Fraktion nach Anspruch 2 und/oder Salze derselben enthält.

4. Verwendung des Hydrolysats nach Anspruch 1 oder der Fraktion nach Anspruch 2 bei der kosmetischen Behandlung von Haar, Haut und Kopfhaut.

5. Verwendung des Hydrolysats nach Anspruch 1 oder der Fraktion nach Anspruch 2 bei der Herstellung von Zusammensetzungen für die kosmetische und therapeutische Behandlung von Haar, Haut und Kopfhaut.