DE69907963T2

DE69907963T2 - Heteroaromatische amide als inhibitoren von faktor xa

Info

Publication number: DE69907963T2
Application number: DE69907963T
Authority: DE
Inventors: Wade Douglas BEIGHT; Joyce Trelia CRAFT; Bernard Jeffry FRANCISKOVICH; Junior Theodore GOODSON; Edward Steven HALL; Kent David HERRON; Sajan Joseph; Joseph Valentine KLIMKOWSKI; Joseph John MASTERS; David Mendel; Guy Milot; Maria Marta PINEIRO-NUNEZ; Scott Jason SAWYER; Theodore Robert SHUMAN; Floyd Gerald SMITH; Louise Anne TEBBE; Marie Jennifer TINSLEY; Crayton Leonard WEIR; Howard James WIKEL; Kwong Ying YEE
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1998-12-23
Filing date: 1999-12-15
Publication date: 2004-05-19
Anticipated expiration: 2019-12-16
Also published as: EP1140905B1; JP2002533453A; ES2196917T3; DE69907963D1; AU2364600A; WO2000039117A1; CA2358095A1; ATE240316T1; EP1140905A1

Description

Die Erfindung beansprucht die Priorität der US Anmeldung 60/113 452 vom 23. Dezember 1998.
Die Erfindung betrifft antithrombotische, heteroaromatische Amide, die eine Aktivität als Inhibitoren des Faktors Xa zeigen und demnach als Antikoagulantien bei Säugern brauchbar sind. Insbesondere betrifft sie heteroaromatische Amide mit einer hohen Antikoagulansaktivität und einer antithrombotischen Aktivität. Daher betrifft die Erfindung neue Amide, die Inhibitoren des Faktors Xa sind, pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Amide als Wirkstoffe enthalten und die Verwendung der Amide als Antikoagulantien zur Herstellung eines Arzneimittels zur Prophylaxe und Behandlung von thromboembolischen Störungen, wie venöser Thrombose, Lungenembolie, arterieller Thrombose, insbesondere Myokardischämie, Myokardinfarkt und cerebraler Thrombose, allgemeinen Hyperkoagulationszustäden und lokalen Hyperkoagulationszustäden, wie nach einer Angioplastie und koronaren Bypass-Operationen, und von allgemeiner Gewebeverletzung, da diese mit dem Entzündungsprozeß zusammenhängt. Zusätzlich sind die heteroaromatischen Amide als Antikoagulantien bei in vitro Anwendungen brauchbar.
Der Vorgang der Blutgerinnung, die Thrombose, wird durch eine komplexe proteolytische Kaskade ausgelöst, die zur Bildung von Thrombin führt. Thrombin entfernt proteolytisch die Aktivierungspeptide von den Aα und Bβ-Ketten von Fibrinogen, das in Blutplasma löslich ist, was die Bildung von unlöslichem Fibrin auslöst. Die Bildung von Thrombin aus Prothrombin wird durch den Faktor Xa katalysiert.
Die Antikoagulation wird derzeit durch die Verabreichung von Heparinen und Kumarinen erreicht. Die parenterale pharmakologische Kontrolle der Koagulation und der Thrombose basiert auf der Hemmung von Thrombin durch die Verwendung der Heparine. Heparine wirken indirekt auf Thrombin durch die Beschleunigung der hemmenden Wirkung von endogenem Antithrombin III (der hauptsächliche physiologische Inhibitor von Thrombin). Da die Antihrombin III Spiegel im Plasma variieren können und da oberflächengebundenes Thrombin gegenüber diesem indirekten Mechanismus resistent zu sein scheint, können Heparine eine uneffektive Behandlung darstellen. Da man glaubt, daß Gerinnungstests mit Wirksamkeit und Sicherheit zusammenhängen, müssen die Heparinspiegel mit Gerinnungstests überwacht werden (insbesondere mit dem aktivierten partiellen Thromboplastinzeittest (APTT)). Kumarine verhindern die Bildung von Thrombin durch die Blockierung der posttranslationalen gamma-Carboxylierung bei der Synthese von Prothrombin und anderen Proteinen dieses Typs. Aufgrund ihres Wirkmechanismus kann die Wirkung von Kumarinen sich nur langsam entwickeln, nähmlich 6–24 Stunden nach der Verabreichung. Ferner sind sie keine selektiven Antikoagulantien. Kumarine erfordern ebenfalls die Überwachung mit Gerinnungstests (insbesondere dem Prothrombinzeittest (PT)).
Kürzlich ist das Interesse an kleinen, synthetischen Molekülen gewachsen, die eine potente direkte Hemmung von Thrombin und Faktor Xa zeigen. Siehe Joseph P. Vacca (Annette M. Doherty Sektionseditor), Annual Reports in Medicinal Chemistry (1998), 33, 81–90.
Die US 5 576 343 A (Nagahara et al.) beschreibt aromatische Amidinderivate, die eine hemmende Wirkung für den Faktor Xa zeigen.
Obwohl die Heparine und Kumarine wirksame Antikoagulantien sind, existiert ein Bedarf für Antikoagulantien, die selektiv auf den Faktor Xa oder Thrombin wirken und unabhängig von Antithrombin III sind, eine schnelle Hemmwirkung nach der Verabreichung, vorzugsweise einem oralen Weg, hervorrufen, und nicht mit der Lyse von Blutgerinnseln wechselwirken, wie dies zur Erhaltung der Hämostase erforderlich ist.
Die vorliegende Erfindung beruht auf der Erkenntnis, daß die erfindungsgemäßen Amide, wie sie im folgenden definiert sind, stärke Inhibitoren des Faktors Xa sind, die nach einer oralen Verabreichung eine hohe Bioverfügbarkeit aufweisen.
Gemäß der Erfindung wird demnach eine Verbindung der Formel I bereitgestellt
(oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon), worin
A³, A⁴, A⁵ und A⁶ zusammen mit den zwei Kohlenstoffen, an die sie gebunden sind, einen substituierten, heteroaromatischen Ring bilden, worin
(a) eines von A³, A⁴, A⁵ und A⁶ für N steht und die anderen jeweils für CR³, CR⁴, CR⁵ oder CR⁶ stehen, oder
(b) zwei nicht-benachbarte Reste von A³, A⁴, A⁵ und A⁶ jeweils für N stehen und jedes der anderen jeweils für CR³, CR⁴, CR⁵ oder CR⁶ steht, worin
jedes von R³, R⁴, R⁵ und R⁶ unabhängig für Wasserstoff oder Methyl steht, oder eines von R³, R⁴, R⁵ und R⁶ an einen Kohlenstoff gebunden ist, der nicht an ein N-Atom gebunden ist, für Chlor steht und die anderen für Wasserstoff stehen,
L¹ für -CO-NH- steht, so daß -L¹ -Q¹ für -CO-NH-Q¹ steht,
Q¹ für 2-Pyridinyl (das einen Methyl-, Methoxy-, Methylthio-, Fluor- oder Chlorsubstituenten an der Position 5 trägt), 3-Pyridinyl (das einen Methyl-, Fluor- oder Chlorsubstituenten an der Position 6 trägt), 2-Pyrimidinyl (das einen Methyl-, Fluor- oder Chlorsubstituenten an der Position 5 trägt), 3-Pyridazinyl (das einen Methyl-, Fluor- oder Chlorsubstituenten an der Position 6 trägt) oder 2-Benzothiazolyl (das einen Methyl-, Fluor-, Chlor- oder Bromsubstituenten an der Position 6 trägt) steht,
R² für -L²-Q² steht, worin -L²- für -NH-CO-, -NH-CO-X-, -NH-CO-O-X-, -NH-CO-NH-X- oder -NH-CH₂- steht und Q² für Q^2A, Q^2B, Q^2C, Q^2D, Q^2E oder Q^2F steht, worin X für eine Einfachbindung oder Methylen steht und die Bedeutungen für L² und Q² zusammen ausgewählt sind aus -NN-CO-X-Q^2A, -NH-CO-O-X-Q^2A, -NH-CO-NH-X-Q^2A -NH-CH₂-Q^2A, -NH-CO-X-Q^2B, -NH-CO-X-Q^2C, -NH-CO-X-Q^2D, -NH-CO-X-Q^2E und -NH-CO-X-Q^2F, worin
Q^2A steht für (L2, an das es gebunden ist, wird auch gezeigt)
worin
jedes von m und n unabhängig für 0 oder 1 steht und
R^2A für Wasserstoff, t-Butyl, Methansulfonyl, -CHR^YR^Z, -CHR^WR^X oder 4-Pyridinyl steht (das unsubstituiert ist oder einen Substituenten R^V an der Position 2 oder 3 trägt), worin
R^V für Methyl, Hydroxymethyl, (C₁-C₂)Alkoxycarbonyl, Cyano, Carbamoyl, Thiocarbamoyl oder N-Hydroxyamidino steht,
jedes von R^W und R^X unabhängig für Wasserstoff oder normales C₁-C₃Alkyl steht oder -CHR^WR^X für 2-Indanyl oder folgendes steht (wobei der Stickstoff an den es gebunden ist, gezeigt wird)
worin T für eine Einfachbindung oder Methylen steht. und U für Methylen, Ethylen, Oxy, -S(O)_q- (worin q für 0,1 oder 2 steht) oder Imino steht (das einen Methylsubstituenten tragen kann) oder T für Ethan-1,1-diyl steht und U für eine Einfachbindung oder Methylen steht,
R^y für Wasserstoff oder Methyl steht, und
R^z steht für Isopropyl, t-Butyl, C₃-C₆Cycloalkyl, Phenyl (das unsubstituiert ist oder einen oder mehrere Substituenten trägt, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, Methyl, Methoxy und Hydroxy), 4-Chinolinyl oder Heteroaryl (wobei Heteroaryl ein fünfgliedriger, aromatischer Ring ist, der ein bis vier Heteroatome umfaßt, ausgewählt aus Schwefel, Sauerstoff und Stickstoff oder ein sechsgliedriger aromatischer Ring ist, der ein bis drei Stickstoffatome umfaßt, worin das Heteroaryl an den Kohlenstoff gebunden ist und einen oder mehrere Methylsubstituenten am Kolenstoff oder am Stickstoff tragen kann),
Q^2B für 1-Piperazinyl steht, das an der Position 4 die Gruppe R^2A trägt (wie oben definiert),
Q^2C für 3,4-Didehydropiperidin-4-yl steht, das an der Position 1 die Gruppe R^2A trägt (wie oben definiert),
Q^2D für Cyclohexyl steht, das an der Position 4 die Gruppe -NR^sR^t trägt, worin jedes von R^s und R^t unabhägig für Wasserstoff oder Methyl steht oder R^s und R^t zusammen für Trimethylen oder Tetramethylen stehen,
Q^2E für 1-Piperidinyl steht, das an der Position 4 die Gruppe -NR^sR^t trägt (wie oben definiert), und
Q^2F für folgendes steht (wobei L² gezeigt ist, an das es gebunden ist)
worin R^o für Wasserstoff Halogen, C₁-C₄Alkyl, Hydroxy, C₁-C₄Alkoxy, Benzyloxy oder C₁-C₄Alkylthio steht und R^p für 1-Hydroxyethyl, 1-Hydroxy-1-methylethyl, 1-Methoxy-1-methylethyl, 4-Piperidinyl, 4-Pyridinyl, Dimethylaminosulfonyl oder -J-R^q steht, worin J für eine Einfachbindung, Methylen, Carbonyl, Oxy, -S(O)_q- (worin q für 0, 1 oder 2 steht) oder -NR^r- steht (worin R^r für Wasserstoff oder Methyl steht) und R^q für C₁-C₆Alkyl, Phenyl, 3-Pyridyl oder 4-Pyridyl steht.
Wie hierin verwendet, umfaßt der Ausdruck "eine Verbindung der Formel I" oder der Ausdruck "eine Verbindung der Erfindung" die Verbindung und jedes herkömmliche Prodrug hiervon, wie auch ein pharmazeutisch annehmbares Salz dieser Verbindung oder dieses Prodrugs.
Ein pharmazeutisch annehmbares Salz eines antithrombotischen Mittels der vorliegenden Erfindung umfaßt eines, worin ein Säureadditionssalz aus einer basischen Verbindung der Formel I und einer Säure hergestellt wird, die ein pharmazeutisch annehmbares Anion liefert, wie auch ein Salz, das aus einer sauren Verbindung der Formel I und einer Base hergestellt wird, die ein pharmazeutisch annehmbares Kation liefert. Daher liefert ein Salz einer oben bereitgestellten neuen Verbindung der Formel I, das mit einer Säure oder Base hergestellt wird, die ein pharmazeutisch annehmbares Gegenion liefert, einen bestimmten Aspekt der Endung. Beispiele für solche Säuren und Basen werden hierin später bereitgestellt.
Als zusätzlicher Aspekt der Erfindung wird eine pharmazeutische Formulierung geliefert, die eine neue Verbindung der Formel I (oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon) zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff enthält, wie dies in einer der Beschreibungen hierin bereitgestellt wird.
Zusätzlich wird die Verwendung einer den Faktor Xa hemmenden Verbindung der Formel I (oder eines Prodrugs oder Salzes hiervon), wie sie hierin beschrieben ist, als Wirkstoff zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Bereitstellung eines Antikoaglations- oder Antithromboseeffekts bereitgestellt.
Die vorliegende Erfindung liefert ferner die Verwendung einer Verbindung der Formel I mit einer der Definitionen hierin zur Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung des Faktors Xa bei einem Säuger.
Zusätzlich wird die Verwendung einer Faktor Xa hemmenden Verbindung der Formel I mit einer der Definitionen hierin zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer thromboembolischen Störung bereitgestellt.
Als weiteres Merkmal der Endung wird eine pharmazeutische Formulierung bereitgestellt, die ein Prodrug einer den Faktor Xa hemmenden Verbindung der Formel I (oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon), wie sie in einer der Beschreibungen hierin bereitgestellt wird, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff enthält.
In dieser Beschreibung werden die folgenden Definitionen verwendet, falls nichts anderes angegeben ist: Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom oder Iod. Alkyl, Alkoxy usw. stehen sowohl für gerade als auch verzweigte Gruppen, aber der Bezug auf einen einzelnen Rest, wie "Propyl", umfaßt nur den geradkettigen ("normalen") Rest, wobei ein verzweigtkettiges Isomer, wie "Isopropyl" spezifisch erwähnt wird.
Besondere Bedeutungen sind im folgenden nur zur Erläuterung für Reste, Substituenten und Bereiche angegeben und schließen nicht andere definierte Bedeutungen oder andere Bedeutungen innerhalb der für die Reste und Substituenten definierten Bereiche aus.
Für eine Alkylgruppe oder den Alkylteil einer Alkyl-enthaltenden Gruppe, wie beispielsweise Alkoxy, ist eine bestimmte Bedeutung für C₁-C₂Alkyl Methyl oder Ethyl und vor allein Methyl, für ein normales C₁-C₃Alkyl ist sie Methyl, Ethyl oder Propyl, für C₁-C₄Alkyl ist sie Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl oder t-Butyl und insbesondere Methyl, Isopropyl, Butyl oder t-Butyl, für C₁-C₆Alkyl ist sie Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Pentyl oder Hexyl und insbesondere Methyl, Butyl oder Hexyl. Eine bestimmte Bedeutung für C₃-C₆Cycloalkyl ist Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl oder Cyclohexyl. Eine besondere Bedeutung für Halogen ist Brom oder Chlor und insbesondere Chlor.
Eine bestimmte Bedeutung für Q¹ ist 5-Chlorpyridin-2-yl oder 6-Chlorpyridazin-3-yl. Eine besondere Bedeutung für R² ist (1-Isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino, (1-Cyclohexylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino, [1-(Tetrahydropyran-4-yl)piperidin-4-ylcarbonyl]amino oder [1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino. Eine besondere Gruppe an Bedeutungen für A³–A⁶ ist, daß A³ für N steht und jedes von A⁴–A⁶ für CR⁴–CR⁶ steht, worin jedes von R⁴–R⁶ für Wasserstoff steht oder R⁴ und R⁶ jeweils für Wasserstoff stehen und R⁵ für Chlor steht. Eine weitere Gruppe an Bedeutungen für A³–A⁶ ist, daß A⁶ für N steht und jedes von A³–A⁵ für CR³–CR⁵ steht, worin jedes von R³–R⁵ für Wasserstoff steht oder R³ und R⁴ jeweils für Wasserstoff stellen und R⁵ für Methyl steht.
Eine besondere Spezies ist eine, die im folgenden als Beispiel 6, 8, 14, 15 oder 17 aufgeführt ist.
Es ist ersichtlich, daß bestimmte Verbindungen der Formel I (oder Salze oder Prodrugs usw.) in isomeren Formen vorkommen und so isoliert werden können, einschließlich tautomerer Formen oder cis- oder trans-Isomeren, wie auch als optisch aktive razemische oder diastereomere Formen. Es ist auch verständlich, daß die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I in allen tautomeren Formen oder als Gemisch hiervon oder als Diastereomerengemisch wie auch in Form eines einzelnen Diastereomers umfaßt und daß die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I als Enantiomerengemisch wie auch in Form eines einzelnen Enantiomers umfaßt, wobei alle diese Gemische oder Formen eine hemmende Aktivität gegenüber dem Faktor Xa aufweisen, wobei es in der Technik bekannt ist, wie man bestimmte Formen herstellt oder isoliert und wie man die hemmenden Eigenschaften gegen den Faktor Xa durch Standardtests bestimmt, einschließlich der unten beschriebenen.
Zusätzlich kann eine Verbindung der Formel I (oder ein Salz oder Prodrug usw.) einen Polymorphismus zeigen oder kann ein Solvat mit Wasser oder einem organischen Lösemittel bilden. Die vorliegende Erfindung umfaßt alle solchen polymorphen Formen, jedes Solvat oder jedes Gemisch hiervon.
Ein Prodrug einer Verbindung der Formel I kann eines sein, das auf herkömmliche Weise mit einer funktionellen Gruppe der Verbindung gebildet wird, wie mit einer Amino-, Hydroxy- oder Carboxygruppe.
Eine Verbindung der Formel I kann durch Verfahren hergestellt werden, die in der Chemie zur Herstellung von strukturell analogen Verbindungen bekannt sind oder durch ein neues hierin beschriebenes Verfahren hergestellt werden. Ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I (oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon) und neue Zwischenprodukte zur Herstellung einer Verbindung der Formel I gemäß obiger Definition stellen weitere Merkmale der Erfindung dar und werden durch die folgenden Verfahren erläutert, worin die Bedeutungen der allgemeinen Reste wie oben definiert sind, falls nichts anderes angegeben ist. Es ist ersichtlich, daß es bevorzugt oder erforderlich ist, eine Verbindung der Formel I herzustellen, worin eine funktionelle Gruppe durch eine herkömmliche Schutzgruppe geschützt wird, und die Schutzgruppe anschließend unter Bildung der Verbindung der Formel I zu entfernen.
Daher wird ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I (oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon) bereitgestellt, wie sie in einer der obigen Beschreibungen bereitgestellt wird, das aus einem der in den Beispielen beschriebenen einschließlich den folgenden ausgewählt wird.

(A) Für eine Verbindung der Formel I, worin -L²-Q² für -NH-CO-Q², -NH-CO-X-Q², -NH-CO-O-X-Q² oder -NH-CO-NH-X-Q² steht, Acylierung eines Amins der Formel II
unter Verwendung einer entsprechenden Säure der Formel HO-CO-Q², HO-CO-X-Q², HO-CO-O-X-Q² oder HO-CO-NH-X-Q² oder eines aktivierten Derivats hiervon. Typische aktivierte Derivate umfassen die Säurehalogenide, aktivierten Ester, einschließlich 4-Nitrophenylester und die, die von Kupplungsreagenzien stammen, wie auch (wenn das Produkt ein Harnstoff ist) Isocyanate. Typische Verfahren umfassen die, die in Beispiel 2-B, Beispiel 3-B und Beispiel 9-A beschrieben sind.
(B) Für eine Verbindung der Formel I, worin -L²-Q² für -NH-CH₂-Q² steht, und (vorzugsweise) mindestens eines von A³ und A⁵ für N steht, Substitution der Gruppe Y^a einer Verbindung der Formel III
worin Y^a für eine herkömmliche Abgangsgruppe für eine nukleophile, aromatische Substitution steht, mit einem Amin der Formel NH₂-CH₂-Q². Wie hierin verwendet, ist eine Abgangsgruppe "Y^a" ein Rest, der in einer aromatischen (oder heteroaromatischen) nukleophilen Substitutionsreaktion verdrängt wird, beispielsweise eine Halogengruppe (wie Fluor oder Chlor), eine Alkoxygruppe (wie Methoxy), eine Sulfonatestergruppe (wie Methylsulfonyloxy, p-Toluylsulfonyloxy oder Trifluormethylsulfonyloxy) oder die reaktive Spezies durch die Behandlung eines Alkohols mit Triphenylphosphin, Diethylazodicarboxylat und Triethylamin (in einer Mitsunobu-Reaktion) entsteht. Die Substitution kann durch Erhitzen eines Gemisches der Reagenzien in einem polaren Lösemittel, beispielsweise in Ethanol in einem verschlossenen Röhrchen, wie dies beispielsweise in Beispiel 14-B beschrieben ist, oder in Pyridin am Rückfluß, wie dies in Beispiel 23-B beschrieben ist, ausgeführt werden.
(C) Acylierung eines Amins der Formel HN₂-Q¹ oder eines deprotonierten Derivats hiervon mit einer Säure der Formel IV oder einem aktivierten Derivat hiervon
Typische deprotonierte Derivate des Amins H₂N-Q¹ umfassen beispielsweise die, welche aus der Behandlung des Amins mit einem Organomagnesiumreagenz hiervorgehen, beispielsweise mit Allylmagnesiumbromid oder Methylmagnesiumbromid. Typische aktivierte Derivate umfassen die Säurehalogenide, aktivierten Ester, einschließlich 4-Nitrophenylester und die, die aus Kupplungsreagenzien entstehen. Ein typisches Verfahren ist beispielsweise eines, das ein Säurechlorid verwendet, wie dies in Beispiel 4 beschrieben ist.

Für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NN-CO-Q² steht, kann die aktivierte Säure ein (1,3]-Oxazin der Formel IVa sein
worin Q² beispielsweise für Q^2A, Q^2B, Q^2C, Q^2D, Q^2E oder Q^2F steht. Ein typisches Verfahren ist eines, wie es in Beispiel 21-H beschrieben ist.
Für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CH₂-Q² steht, kann die aktivierte Säure ein Anhydrid der Formel IVb sein
worin Q² für Q^2A steht. Ein typisches Verfahren ist das, welches in Beispiel 1-C beschrieben ist.

(D) für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CH₂-Q^2A steht, Alkylierung eines Amins der Formel II direkt mittels einer Verbindung der Formel Y-CH₂-Q^2A oder (vorzugsweise) indirekt durch reduktive Alkylierung mittels eines Aldehyds der Formel Q^2A-CHO. Bei der reduktiven Alkylierung des Zwischenproduktimins der Formel V oder eines Säureadditionssalzes hiervon (das einen weiteren Aspekt der vorliegenden Endung bereitstellt)
kann dies in situ gebildet werden und direkt reduziert werden, oder vor der Reduktion isoliert werden, wie dies in Beispiel 13-D beschrieben ist, wobei die Reduktion mittels eines Borantrimethylaminkomplexes in Eisessig hergestellt wird.
(E) Für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CO-O-X-Q^2A oder -NH-CO-NH-X-Q^2A steht, Acylierung eines Alkohols der Formel HO-X-Q^2A oder eines Amins der Formel NH₂-X-Q^2A mit einem aktivierten Derivat einer Säure der Formel VI
insbesondere dem entsprechenden Isocyanat oder 4-Nitrophenylester.
(F) für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CO-X-Q^2B steht, worin X für eine Einfachbindung steht, Acylierung eines Piperazins der Formel H-Q^2B an der Position 1 mittels eines aktivierten Derivats einer Säure der Formel VI, insbesondere des entsprechenden Isocyanats oder 4-Nitrophenylesters.
(G) Für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CO-X-Q^2B steht, worin X für Methylen steht, Alkylierung eines Piperazins der Formel H-Q^2B an der Position 1 unter Verwendung eines Alkylierungsmittels der Formel VII
worin Y für eine Abgangsgruppe steht.
(H) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für Methylsulfonyl steht, Substitution des Aminostickstoffs einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^2A für Wasserstoff steht mittels eines aktivierten Derivats der Methansulfonsäure, beispielsweise unter Verwendung von Methansulfonylchlorid in Gegenwart. einer zugegebenen Base.
(I) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für -CHR^yR^z oder -CHR^wR^x steht, Alkylierung des Aminostickstoffs einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^2A für Wasserstoff steht mittels eines Alkylierungsmittels der Formel Y-CHR^yR^z oder Y-CHR^wR^x oder vorzugsweise reduktive Alkylierung des Amins mittels einer Verbindung der Formel R^y-CO-R^z oder R^w-CO-R^x. Die direkte Alkylierung kann in einem polaren Lösemittel in Gegenwart einer Base vervollständigt werden. Die reduktive Alkylierung wird bequemerweise beispielsweise mittels Natriumcyanoborhydrid in Methanol/Essigsäure ausgeführt, wie dies in Beispiel 13-E beschrieben ist oder mittels Natriumtriacetoxyborhydrid in einem inerten Lösemittel, wie 1,2-Diclilorethan zusammen mit einem Überschuß der Carbonylverbindung und des Eisessigs, wie dies in Beispiel 6-C beschrieben ist.
(J) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht (das unsubstituiert ist oder einen Substituenten R^v an der Position 2 oder 3 trägt), Substitution des Aminostickstoffs einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^2A für Wasserstoff steht mittels eines entsprechenden Pyridinreagenzes, das an der Position 4 eine Abgangsgruppe Y trägt, beispielsweise mittels 4-Chlorpyridin in Ethanol, wie dies in Beispiel 18 beschrieben ist.
(K) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Fyridinyl steht, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht, Veresterung einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Carboxy steht.
(L) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Hydroxymethyl steht, Reduktion des Esters einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht.
(M) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Carbamoyl steht, Amidierung des Esters einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht.
(N) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Thiocarbamoyl steht, Zugabe von H₂S zum Nitril einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Cyano steht.
(O) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für N-Hydroxyamidino steht, Zugabe von HN₂OH zum Nitril einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Cyano steht. Die Addition kann direkt oder indirekt sein, wie über einen Imidatester oder durch Behandlung einer Verbindung, worin R^v für Thiocarbamoyl steht, mit Methyliodid unter Bildung eines Thioimidatesters und eine anschließende Behandlung mit Hydroxylamin.
(P) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Carboxy steht, Zersetzung des Esters einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht.
(Q) Für eine Verbindung der Formel I, worin -NR^sR^t nicht für Amino steht, Alkylierung einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin -NR^sR^t für Amino steht, mittels eines herkömmlichen Verfahrens. Wenn R^s und R^t zusammen für Trimethylen oder Tetramethylen stehen, ist ein difunktionelles Alkylierungsmittel, wie 1,3-Dibrompropan oder 1,4-Dibrombutan bevorzugt.
(R) Für eine Verbindung der Formel I, die -NR^sR^t trägt, reduktive Alkylierung von H-NR^sR^t mittels einer entsprechenden Verbindung, worin aber der Kohlenstoff der die -NR^sR^t Gruppe tragen muß, eine Oxogruppe trägt, beispielsweise mittels eines Verfahrens, das zu dem von Verfahren (I) oben ähnlich ist.
(S) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^p für 1-Hydroxy-1-methylethyl steht, Anbindung einer Methylgruppe an die Carbonylgruppe einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^p für Acetyl steht, mittels eines Organometallreagenzes, wie beispielsweise Methylmagnesiumbromid.
(T) Für eine Verbindung der Formel I, worin R^p für 1-Methoxy-1-methylethyl steht, Behandlung einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^p für 1-Hydroxy-1-methylethyl steht, mit Methanol und einem Säurekatalysator.

Wonach für jedes der obigen Verfahren, wenn eine funktionelle Gruppe mittels einer Schutzgruppe geschützt wird, die Schutzgruppe entfernt wird.
Wonach für jedes der obigen Verfahren, wenn ein pharmazeutisch annehmbares Salz einer Verbindung der Formel I erforderlich ist, es durch Umsetzung der basischen Form einer basischen Verbindung der Formel I mit einer Säure, die ein physiologisch annehmbares Gegenion liefert oder der sauren Form einer sauren Verbindung der Formel I mit einer Base, die ein physiologisch annehmbares Gegenion liefert oder durch jedes andere herkömmliche Verfahren erhalten wird.
Eine neue Zwischenprodukt- oder Ausgangsverbindung, wie beispielsweise eine neue Verbindung der Formel II, III, IV oder VI usw. liefert einen weiteren Aspekt der Erfindung. Die verschiedenen Ausgangsmaterialien können durch Verfahren, die in der Technik bekannte Verfahren zur Herstellung von strukturell analogen Verbindungen umfassen oder durch ein neues hierin beschriebenes Verfahren oder einem hierzu analogen Verfahren hergestellt werden.
Wie oben erwähnt kann eine Verbindung, die einer Verbindung der Formel I entspricht, worin aber eine funktionelle Gruppe geschützt ist, als Zwischenprodukt für eine Verbindung der Formel I dienen. Demnach liefern solche geschützten Zwischenprodukte für eine neue Verbindung der Formel I weitere Aspekte der Erfindung. Daher wird als ein bestimmter Aspekt der Erfindung eine Verbindung bereitgestellt, die einer wie oben definierten Verbindung der Formel I entspricht, worin R⁴ für Hydroxy steht, in der aber der entsprechende Substituent -OP^P anstelle von Hydroxy ist, worin P^P für eine Phenolschutzgruppe steht, die nicht C₁-C₄Alkyl oder Benzyl ist. Phenolschutzgruppen sind in der Technik gut bekannt und sind beispielsweise beschrieben in T. W. Greene und P. G. M. Wuts, "Protecting Groups in Organic Synthesis" (1991). Ferner kann P^P für ein funktionalisiertes Harz stehen, wie dies beispielsweise beschrieben ist in H. V. Meyers et al., Molecular Diversity, (1995), 1, 13–20.
Wie oben erwähnt, umfaßt die Erfindung pharmazeutisch annehmbare Salze der den Faktor Xa hemmenden Verbindungen, die durch die obige Formel I definiert sind. Eine basische Verbindung der Erfindung besitzt eine oder mehrere funktionelle Gruppen, die ausreichend basisch sind, um mit einer von mehreren anorganischen und organischen Säuren zu reagieren, die ein physiologisch annehmbares Gegenion liefern, um ein pharmazeutisch annehmbares Salz zu bilden. Säuren, die herkömmlich zur Bildung pharmazeutisch annehmbarer Säureadditionssalze verwendet werden, sind anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und dergleichen, wie auch organische Säuren, wie p-Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure, Oxalsäure, p-Brombenzolsulfonsäure, Kohlensäure, Bernsteinsäure, Citronensäure, Benzoesäure, Essigsäure und dergleichen. Beispiele für solche pharmazeutisch annehmbaren Salze sind daher Sulfat, Pyrosulfat, Bisulfat, Sulfit, Bisulfit, Phpsphat, Monohydrogenphosphat, Dihydrogenphosphat, Metaphosphat, Pyrophosphat, Chlorid, Bromid, Iodid, Acetat, Propionat, Decanoat, Caprylat, Acrylat, Formiat, Isobutyrat, Caproat, Heptanoat, Propiolat, Oxalat, Malonat, Succinat, Suberat, Sebacat, Fumarat, Maleat, Butin-1,4-dioat, Hexin-1,6-dioat, Benzoat, Chlorbenzoat, Methylbenzoat, Dinitrobenzoat, Hydroxybenzoat, Methoxybenzoat, Phthalat, Sulfonat, Xylolsulfonat, Phenylacetat, Phenylpropionat, Phenylbutyrat, Citrat, Lactat, γ-Hydroxybutyrat, Glycolat, Tartrat, Methansulfonat, Propansulfonat, Naphthalin-1-sulfonat, Naphthalin-2-sulfonat, Mandelat und dergleichen. Bevorzugte pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze umfassen die, die mit Mineralsäuren gebildet werden, wie Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure und Schwefelsäure.
Für eine Verbindung der Formel I, die einem säuren Rest aufweist, wie eine Carboxygruppe, kann ein pharmazeutisch annehmbares Salz mit einer Base hergestellt werden, die ein pharmazeutisch annehmbares Kation liefert, wobei dies Alkalimetallsalze (speziell Natrium und Kalium), Erdalkalimetallsalze (speziell Calcium und Magnesium), Aluminiumsalze und Ammoniumsalze, wie auch Salze umfaßt, die aus physiologisch annehmbaren organischen Basen stammen, wie Triethylamin, Morpholin, Piperidin und Triethanolamin.
Falls sie nicht im Handel erhältlich sind, können die erforderlichen Ausgangsmaterialien zur Herstellung einer Verbindung der Formel I durch Verfahren hergestellt werden, die aus Standardtechniken der organischen Chemie ausgewählt werden, einschließlich aromatischer und heteroaromatischer Substitution und Transformation, aus Techniken, die zur Synthese von bekannten, strukturell ähnlichen Verbindungen analog sind, und Techniken, die analog zu den oben beschriebenen Verfahren oder zu den in den Beispielen beschriebenen Verfahren analog sind. Es ist dem Fachmann bekannt, daß eine Vielzahl an Sequenzen zur Herstellung der Ausgangsmaterialien erhältlich ist.
Es sind ausgewählte Verfahren zur Substitution, Anbringung und Entfernung der Schutzgruppen in der Technik zur Herstellung einer Verbindung bekannt, wie einer der Formel II, III, IV oder VI, wie dies oben diskutiert ist.
Im allgemeinen wird eine erfindungsgemäße basische Verbindung am besten in Form eines Säureadditionssalzes isoliert. Ein Salz einer Verbindungen der Formel I, das mit einer der oben erwähnten Säuren gebildet wird, ist als pharmazeutisch annehmbares Salz zur Verabreichung der antithrombotischen Mittel und zur Herstellung einer Formulierung dieses Mittels brauchbar. Es können andere Säureadditionssalze hergestellt und zur Isolierung und Reinigung der Verbindungen verwendet werden.
Wie oben erwähnt werden die optisch aktiven Isomere und Diastereomere der Verbindungen der Formel I auch als Teil der Erfindung betrachtet. Solche optisch aktiven Isomere können aus ihren jeweiligen optisch aktiven Vorläufern durch die oben beschriebenen Verfahren oder durch die Auftrtrennung der razemischen Gemische hergestellt werden. Diese Auftrennung kann durch Derivatisierung mit einem chiralen Reagenz ausgeführt werden, gefolgt von einer Chromatographie oder durch wiederholte Kristallisation. Die Entfernung des chiralen Auxiliars durch Standardverfahren ergibt im wesentlichen optisch reine Isomere der Verbindungen der vorliegenden Erfindung oder ihrer Vorläufer, Weitere Details in Bezug auf Auftrennungen können von Jaques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley & Sons 1981 erhalten werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen dürften ohne deutliche Beeinflussung der natürlichen Gerinnselauflösungsfähigkeit des Körpers (die Verbindungen weisen eine geringe hemmende Wirkung auf die Fibrinolyse auf) den Faktor Xa selektiv gegenüber anderen Proteinasen und Nichtenzymproteinen hemmen, die in der Blutgerinnung beteiligt sind. Ferner dürfte eine Solche Selektivität die Verwendung mit thrombolytischen Mitteln erlauben, ohne die Thrombolyse und Fibrinolyse wesentlich zu beeinträchtigen.
Die Erfindung liefert in einem ihrer Aspekte die Verwendung einer Verbindung der Formel I zur Herstellung eines Arzneimitels zur Hemmung des Faktors Xa bei Säugern.
In einem weiteren ihrer Aspekte liefert die Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Formel I zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer thromboembolischen Störung.
Die Erfindung liefert in einem anderen ihrer Aspekte die Verwendung einer Verbindung der Formel I zur Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung der Koagulation bei einem Säuger.
Das Arzneimittel zur Hemmung des Faktors Xa, Gerinnungshemmung und thromboembolische Störung, die durch das vorliegende Verfahren beschrieben wird, umfaßt sowohl die medizinisch-therapeutische und/oder prophylaktische Behandlung, wie dies geeignet ist.
In einer weiteren Ausführungsform betrifft die Endung die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung eines Zustands bei m Menschen oder einem Tier, bei dem die Hemmung des Faktors Xa erforderlich ist. Die erfindungsgemäßen Verbindungen dürften bei Säugern, einschließlich dem Menschen, zur Behandlung oder Prophylaxe von Thrombose und Hyperkoagulabilität in Blut und Geweben brauchbar sein. Krankheitszustände, bei denen die Verbindungen eine potentielle Brauchbarkeit aufweisen, sind bei der Behandlung oder Prophylaxe von Thrombose und Hyperkoagulabilität in Blut und Geweben gegeben. Krankheitszustände, bei denen die Verbindungen eine potentielle Brauchbarkeit bei der Behandlung und/oder Prophylaxe haben, sind unter anderem venöse Thrombose und pulmonale Embolie, arterielle Thrombose, wie myokardiale Ischämie, Myokardinfarkt, instabile Angina, auf Thrombosen beruhender Schlaganfall und periphere arterielle Thrombose. Ferner haben die Verbindungen eine erwartete Brauchbarkeit bei der Behandlung oder Prophylaxe von arteriosklerotischen Störungen (Erkrankungen), wie koronarer arterieller Erkrankung, cerebraler arterieller Erkrankung und peripherer arterieller Erkrankung. Ferner dürften die Verbindungen zusammen mit Thrombolytika beim Myokardinfarkt brauchbar sein. Ferner haben die Verbindungen eine erwartete Brauchbarkeit bei der Prophylaxe einer Reokklusion nach einer Thrombolyse, einer perkutanen transluminalen Angioplastie (PTCA) und koronaren Bypassoperationen. Ferner haben die Verbindungen eine erwartete Brauchbarkeit bei der Prävention der Rethrombose nach einer Mikrooperation. Ferner haben die Verbindungen eine erwartete Brauchbarkeit bei der Antikoagulationsbehandlung in Zusammenhang mit künstlichen Organen, einschließlich Gelenksersatz und Herzklappen. Ferner haben die Verbindungen eine erwartete Brauchbarkeit bei der Antikoagulationsbehandlung bei einer Hämodialyse und disseminierter intravaskulärer Koagulation. Eine weitere erwartete Brauchbarkeit ist beim Waschen von Kathetern und mechanischen Vorrichtungen, die in Patienten in vivo verwendet wurden und als ein Antikoagulans zur Konservierung von Blut, Plasma und anderen Blutprodukten in vitro. Ferner haben die Verbindungen eine erwartete Brauchbarkeit bei anderen Krankheiten, bei denen die Blutgerinnung ein fundamentaler beitragender Prozeß oder eine Quelle einer sekundären Pathologie sein könnte, wie bei Krebs, einschließlich Metastasierung, entzündlichen Erkrankungen, einschließlich Arthritis, und Diabetes. Die Antikoagulationsverbindung wird oral, parenteral, beispielsweise durch intravenöse Infusion (iv), intramuskuläre Injektion (im) oder subkutan (sc) verabreicht.
Die bestimmte Dosis einer erfindungsgemäß verabreichten Verbindung zur Erlangung von therapeutischen und/oder prophylaktischen Wirkungen wird natürlich durch die bestimmten, den Fall umgebenden Umstände bestimmt, beispielsweise der verabreichten Verbindung, der Verabreichungsgeschwindigkeit, des Verabreichungswegs und des zu behandelnden Zustands.
Eine typische Tagesdosis für jede der obigen Anwendungen liegt zwischen etwa 0,01 mg/kg und etwa 1000 mg/kg. Der Dosisplan kann variieren, beispielsweise kann zur prophylaktischen Verwendung eine einzelne Tagesdosis verabreicht werden oder es können mehrere Dosen, wie drei- oder fünfmal täglich, geeignet sein. Bei kritischen Gesundheitszuständen wird eine erfindungsgemäße Verbindung durch i.v. Infusion mit einer Geschwindigkeit zwischen etwa 0,01 mg/kg/h und etwa 20 mg/kg/h und vorzugsweise zwischen etwa 0,1 mg/kg/h und etwa 5 mg/kg/h verabreicht.
Die Verwendung der Erfindung wird auch zusammen mit einem gerinnselauflösenden Mittel, beispielsweise Gewebsplasminogenaktivator (tPA), modifiziertem tPA, Streptokinase oder Urokinase durchgeführt. In Fällen, bei denen eine Gerinnselbildung aufgetreten ist und eine Arterie oder Vene entweder teilweise oder völlig blockiert ist, wird gewöhnloch ein gerinnselauflösendes Mittel verwendet. Eine erfindungsgemäße Verbindung kann vor oder zusammen mit dem Lysemittel oder anschließend an dessen Verwendung verabreicht werden, und wird ferner vorzugsweise zusammen mit Aspirin verabreicht, um das Wiederauftreten der Gerinnselbildung zu vermeiden.
Die Verwendung der Erfindung kann auch zusammen mit einem Blutplättchenglykoproteinrezeptor (IIb/IIa) Antagonisten durchgeführt werden, der die Blutplättchenaggregation hemmt. Eine erfindungsgemäße Verbindung kann vorher oder zusammen mit dem IIb/IIIa Antagonisten oder anschließend an dessen Verwendung verabreicht werden, um das Auftreten oder Wiederauftreten der Gerinnselbildung zu vermeiden.
Die Verwendung der Endung kann auch zusammen mit Aspirin durchgeführt werden. Eine erfindungsgemäße Verbindung kann vorher oder zusammen mit Aspirin oder anschließend an dessen Verwendung verabreicht werden, um das Auftreten oder das Wiederauftreten der Gerinnselbildung zu vermeiden. Wie oben erwähnt, wird vorzugsweise eine erfindungsgemäße Verbindung zusammen mit einem gerinnselauflösenden Mittel und Aspirin verabreicht.
Die Erfindung liefert auch eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung im oben beschriebenen therapeutischen Verfahren. Eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung umfaßt eine wirksame den Faktor Xa hemmende Menge einer Verbindung der Formel I zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, Hilfsstoff oder Verdünnungsmittel.
Der Wirkstoff umfaßt in solchen Formulierungen 0,1 bis 99,9 Gewichtsprozent der Formulierung. Mit "pharmazeutisch annehmbar" ist gemeint, daß der Träger, das Verdünnungsmittel oder der Hilfsstoff mit den anderen Bestandteilen der Formulierung kompatibel sein muß und für den Empfänger hiervon nicht schädlich sein darf.
Zur oralen Verabreichung wird die antithrombotische Verbindung in Gelatinekapseln oder Tabletten formuliert, die Hilfsstoffe enthalten können, wie Bindemittel, Gleitmittel, Zerfallshilfsmittel und dergleichen. Zur parenteralen Verabreichung wird das Antithrombotikum in einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel formuliert, beispielsweise physiologische Kochsalzlösung (0,9 Prozent), 5 Prozent Glucose, Ringerlösung und dergleichen.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann in Einheitsdosierungsformulierungen formuliert werden, die eine Dosis zwischen etwa 0,1 mg und etwa 1000 mg umfassen. Vorzugsweise liegt die Verbindung in Form eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes vor, wie beispielsweise dem Sulfatsalz, Acetatsalz oder Phosphatsalz. Ein Beispiel für eine Einheitsdosierungsformulierung umfaßt 5 mg einer erfindungsgemäßen Verbindung als pharmazeutisch annehmbares Salz in einer sterilen 10 ml Glasampulle. Ein weiteres Beispiel für eine Einheitsdosierungsformulierung umfaßt etwa 10 mg einer erfindungsgemäßen Verbindung als pharmazeutisch annehmbares Salz in 20 ml isotonischer Kochsalzlösung, die in einer sterilen Ampulle enthalten sind.
Die Verbindungen können auf eine Vielzahl an Arten verabreicht werden, einschließlich oral, rektal, transdermal, subkutan, intravenös, intramuskulär und intranasal. Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden vorzugsweise vor der Verabreichung formuliert.
Die vorliegenden pharmazeutischen Zusammensetzungen werden durch gut bekannte Verfahren und mit leicht verfügbaren Inhaltsstoffen hergestellt. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können unter Verwendung von in der Technik gut bekannten Verfahren so formuliert werden, daß sie eine schnelle, anhaltende oder verzögerte Freisetzung des Wirkstoffs nach der Verabreichung an den Patienten bereitstellen. Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen wird der Wirkstoff gewöhnlich mit einem Träger gemischt oder mit einem Träger verdünnt oder in einen Träger eingeschlossen, der in Form einer Kapsel, eines Sachets, eines Papiers oder eines anderen Behälters vorliegen kann. Wenn der Träger als Verdünnungsmittel dient, kann dies ein festes, halbfestes oder flüssiges Material sein, das als Vehikel, Hilfsstoff oder Medium für den Wirkstoff dient. Daher können die Zusammensetzungen vorliegen in Form von Tabletten, Pillen, Pulvern, Lonzetten, Sachets, Cachets, Elixieren, Suspensionen, Emulsionen, Lösungen, Sirupen, Aerosolen (als Feststoff oder in einem flüssigen Medium), Weich- und Hartgelatinekapseln, Zäpfchen, sterilen injizierbaren Lösungen, sterilen verpackten Pulvern und dergleichen.
Die folgenden Formulierungsbeispiele sind nur erläuternd und sollen den Schutzumfang der Erfindung in keiner Weise beschränken. "Wirkstoff" meint natürlich eine Verbindung gemäß Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat hiervon.
Formulierung 1
Hartgelatinekapseln werden unter Verwendung folgender Inhaltsstoffe hergestellt:

Menge (mg/Kapsel)

Wirkstoff 250

Stärke, getrocknet 200

Magnesiumstearat 10

Gesamt 460 mg
Formulierung 2
Eine Tablette wird unter Verwendung der folgenden Inhaltsstoffe hergestellt:

Menge (mg/Tablette)

Wirkstoff 250

mikrokristalline Cellulose 400

pyrogen hergestelltes Siliciumdioxid 10

Stearinsäure 5

Gesamt 665 mg
Die Bestandteile werden vermischt und unter Bildung von Tabletten gepreßt, wobei jede 665 mg wiegt.
Formulierung 3
Eine Aerosollösung, die die folgenden Bestandteile enthält, wird hergestellt:

Gewicht

Wirkstoff 0,25

Ethanol 25,75

Propellant 22 (Chlordifluormethan) 70,00

Gesamt 100,00
Der Wirkstoff wird mit Ethanol gemischt und das Gemisch wird zu einem Teil Propellant 22 gegeben, auf –30°C abgekühlt und in ein Abfüllgerät gegeben. Die erforderliche Menge wird anschließend in einen Edelstahlbehälter gefüllt und mit dem Rest des Propellants verdünnt. Die Ventileinheiten werden anschließend am Behälter angebracht.
Formulierung 4

Tabletten, die jeweils 60 mg des Wirkstoffs enthalten, werden folgendermaßen hergestellt:

Wirkstoff	60 mg
Stärke	45 mg
Mikrokristalline Cellulose	35 mg
Polyvinylpyrrolidon (als 10% Lösung in Wasser)	4 mg
Natriumcarboxymethylstärke	4,5 mg
Magnesiumstearat	0,5 mg
Talkum	1 mg
Gesamt	150 mg

Der Wirkstoff die Stärke und die Cellulose werden durch ein Nr. 45 Mesh U.S. Sieb gegeben und sorgfältig vermischt. Die wäßrige Lösung, die Polyvinylpyrrolidon enthält, wird mit dem entstehenden Pulver vermischt und das Gemisch wird anschließend durch ein Nr. 14 Mesh U.S. Sieb gegeben. Die so hergestellten Granula werden bei 50°C getrocknet und durch ein Nr. 18 Mesh U.S. Sieb gegeben. Die Natriumcarboxymethylstärke, das Magnesiumstearat und das Talkum werden, nachdem sie vorher durch ein Nr. 60 Mesh U.S. Sieb gegeben wurden, zu den Granula gegeben und nach dem Mischen in einer Tablettenmaschine unter Bildung von Tabletten gepreßt, die jeweils 150 mg wiegen.
Formulierung 5
Kapseln, die jeweils 80 mg des Wirkstoffs enthalten, werden folgendenmaßen hergestellt:

Wirkstoff 80 mg

Stärke 59 mg

Mikrokristalline Cellulose 59 mg

Magnesiumstearat 2 mg

Gesamt 200 mg
Der Wirkstoff, die Cellulose, die Stärke und das Magnesiumstearat werden gemischt, durch ein Nr. 45 Mesh U.S. Sieb gegeben und in Hartgelatinekapseln in 200 mg Mengen abgefüllt.
Formulierung 6
Zäpfchen, die jeweils 225 mg des Wirkstoffs enthalten, werden folgendermaßen hergestellt:

Wirkstoff 225 mg

Gesättigte Fettsäureglyceride 2000 mg

Gesamt 2225 mg
Der Wirkstoff wird durch ein Nr. 60 Mesh U.S. Sieb gegeben und in den gesättigten Fettsäureglyceriden suspendiert, die vorher bei möglichst geringer Hitze geschmolzen werden. Das Gemisch wird anschließend in eine Zäpfchenform mit einer nominalen Kapazität von 2 g gegossen und abgekühlt.
Formulierung 7
Suspensionen, die jeweils 50 mg des Wirkstoffs pro 5 ml Dosis enthalten, werden folgendermaßen hergestellt:

Wirkstoff 50 mg

Natriumcarboxymethylcellulose 50 mg

Sirup 1,25 ml

Benzoesäurelösung 0,10 ml

Geschmacksstoff q. v.

Farbstoff q. v.

Gereinigtes Wasser auf gesamt 5 ml
Der Wirkstoff wird durch ein Nr. 45 Mesh U.S. Sieb gegeben und mit Natriumcarboxymethylcellulose und Sirup vermischt, um eine glatte Paste zu erhalten. Die Benzoesäurelösung, der Geschmacksstoff und der Farbstoff werden mit einem Anteil Wasser vermischt, und unter Rühren zugegeben. Anschließend wird ausreichend Wasser zugegeben, um das erforderliche Volumen zu erhalten.
Formulierung 8
Eine intravenöse Formulierung kann folgendermaßen hergestellt werden:

Wirkstoff 100 mg

Isotonische Kochsalzlösung 1000 ml
Die Lösung der obigen Inhaltsstoffe wird im allgemeinen einem Patienten mit einer Geschwindigkeit von 1 ml pro Minute intravenös verabreicht.
Die Fähigkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen, ein effektiver und oral wirksamer Thrombininhibitor zu sein, wird in einem oder mehreren der folgenden Tests oder in anderen Standardtests evaluiert, die dem Fachmann bekannt sind.
Die Hemmung einer Serinprotease des humanen Blutgerinnungssystems oder des fibrinolytischen Systems wie auch von Trypsin durch eine erfindungsgemäße Verbindung wird in vitro für das entsprechende Enzym durch Messen der Inhibitorbindungsaffinität in einem Test gemessen, worin das Enzym ein bestimmtes chromogenes Substrat hydrolysiert, wie dies beispielsweise beschrieben ist. von G. F. Smith, D. Gifford-Moore, T. J. Craft, N. Chirgadze, K. J. Ruterbories, T. D. Lindstrom, J. H. Satterwhite, Efegatran: A New Cardiovascular Anticoagulant. New Anticoagulants for the Cardiovascular Patient, R. Pifarre, Herausgeber Hanley & Belfus Inc.: Philadelphia 1997, Seiten 265–300. Die Inhibitorbindungsaffinität wird als scheinbare Assoziationskonstante Kass gemessen, die die hypothetische Gleichgewichtskonstante für die Reaktion zwischen Enzym und der Testinhibitorverbindung (I) ist.
Bequemerweise werden die Enzymhemmkinetiken in Polystyrolplatten mit 96 Vertiefungen ausgeführt und die Reaktionsraten werden aus der Hydrolysegeschwindigkeit von geeigneten p-Nitroanilidsubstraten bei 405 nm mittels eines Thermomax Mikrotiterplattenphotometers von Molecular Devices (San Francisco, CA) bestimmt. Es wird dasselbe Protokoll für alle untersuchten Enzyme befolgt: 50 μl Puffer (0,03 M Tris, 0,15 M NaCl pH 7) in jeder Vertiefung, gefolgt von 25 μl Inhibitorlösung (in 100% Methanol oder in 50% V/V wässrigem Methanol) und 25 μl Enzymlösung, wobei innerhalb von 2 Minuten 150 μl wässrige Lösung des chromogenen Substrats (0,25 mg/ml) zugegeben werden, um die enzymatische Reaktion zu starten. Die Geschwindigkeit der Hydrolysereaktionen des chromogenen Substrats liefert eine lineare Beziehung mit den untersuchten Enzymen, so daß das freie Enzym in den Reaktionsgemischen quantifiziert werden kann. Die Daten werden direkt als Geschwindigkeiten durch das Softmaxprogramm unter Bereitstellung von Berechnungen des [freien Enzyms] bei fest-bindenden Kass Bestimmungen analysiert. Für die Bestimmung des scheinbaren Kass werden 1,34 nM des hummanen Faktors Xa zur Hydrolyse von 0,18 mM BzIle-Glu-Gly-Arg-pNA, 5,9 nM Hummanthrombin oder 1,4 nM Rindertrypsin zur Hydrolyse von 0,2 mM BzPhe-Val-Arg-pNA, 3,4 nM Hummanplasmin mit 0,5 mM HD-Val-Leu-Lys-pNA, 1,2 nM hummanes nt-PA mit 0,81 mM HD-Ile-Pro-Arg-pNA und 0,37 nM Urokinase mit 0,30 mM Pyro-gfsGlu-Gly-Arg-pNA verwendet.
Der Kass Wert wird für einen Bereich an Konzentrationen der Testverbindungen berechnet und der Mittelwert wird in Einheiten pro Liter pro Mol angegeben. Im allgemeinen zeigt eine den Faktor Xa hemmende Verbindung der Formel I der vorliegenden Erfindung, wie sie hierin beispielhaft dargestellt wird, einen Kass von 0,1 bis 0,5 × 10⁶ l/mol oder viel größer.
Der Faktor Xa Inhibitor sollte vorzugsweise die durch Urokinase, Gewebsplasminogenaktivator (t-PA) und Streptokinase ausgelöste Fibrinolyse schonen. Dies wäre für die therapeutische Verwendung solcher Mittel als Zusatz zu einer thrombolytischen Therapie mit Streptokinase, t-PA oder Urokinase wichtig und für die Verwendung solcher Mittel als endogene Fibrinolyse-schonende (in Hinblick auf t-PA und Urokinase) antithrombotische Mittel. Zusätzlich zur fehlenden Beeinflussung mit der Amidaseaktivität der fibrinolytischen Proteasen, kann ein Sparen am fibrinolytischen System durch die Verwendung von humanen Plasmagerinnseln und ihrer Lyse durch die jeweiligen fibrinolytischen Plasminogenaktivatoren untersucht werden.
Materialien
Hundeplasma wird von bewußt gemischt gekreuzten Jagdhunden (beider Geschlechts Butler Farms, Clyde, New York, USA) durch eine Venenpunktion in 3,8 Prozent Citrat erhalten. Das Fibrinogen wird aus frischem Hundeplasma präpariert und das humane Fibrinogen wird von humanem nicht abgelaufenem ACD Blut bei der Fraktion I-2 gemäß bekannter Verfahren und Spezifikationen präpariert. Smith, Biochem. J., 185, 1–11 (1980) und Smith et al., Biochemistry, 11, 2958–2967, (1972). Humanes Fibrinogen (98 Prozent rein/plasminfrei) stammt von American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. Die radioactive Markierung von Fibrinogen I-2 Präparationen wird wie vorher beschrieben durchgeführt. Smith et al., Biochemistry, 11, 2958–2967 (1972). Die Urokinase wird von Leo Pharmaceuticals, Denmark mit 2200 Ploug Einheiten/Gläschen bezogen. Die Streptokinase wird von Hoechst-Roussel Pharmaceuticals, Somerville, New Jersey bezogen.
Verfahren – Wirkungen auf die Lyse der humanen Plasmagerinnsel durch t-PA
Humane Plasmagerinnsel werden in Mikroteströhrchen durch die Zugabe von 50 μl Thrombin (73 NIH Einheiten/ml) zu 100 μl humanen Plasma gebildet, das 0,0229 μCi 125-Iod-markiertes Fibrinogen enthält. Die Gerinnselauflösung wird durch die Überschichtung der Gerinnsel mit 50 μl Urokinase oder Streptokinase (50, 100 oder 1000 Einheiten/ml) und einer Inkubation für 20 Stunden bei Raumtemperatur untersucht. Nach der Inkubation werden die Röhrchen in einer Beckman Microfuge zentrifugiert. 25 μl Überstand werden in ein Volumen von 1,0 ml 0,03 M Tris/0,15 M NaCl Puffer für die Gammazählung gegeben. Zählkontrollen mit 100% Lyse werden durch das Weglassen von Thrombin (und den Ersatz durch Puffer) erhalten. Die Inhibitoren des Faktors Xa werden auf die mögliche Wechselwirkung mit der Fibrinolyse getestet, indem man die Verbindungen in die Überschichtungslösungen in Konzentrationen von 1, 5 und 10 μg/ml einarbeitet. Grobe Annäherungen der HK₅₀ Werte werden durch lineare Extrapolationen von Datenpunkten zu einem Wert abgeschätzt, der 50 Prozent Lyse für diese bestimmte Konzentration des fibrinolytischen Mittels darstellen würde.
Antikoagulationsaktivität
Materialien
Hundeplasma und Rattenplasma werden von bewußt gemischt gekreuzten Jagdhunden (beider Geschlechts Butler Farms, Clyde, New York, USA) oder von anaesthesierten männlichen Sprague-Dawley Ratten (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, Indiana, USA) durch eine Venenpunktion in 3,8 Prozent Citrat erhalten. Das Fibrinogen wird von humanem nicht abgelaufenem ACD Blut bei der Fraktion I-2 gemäß vorheriger Verfahren und Spezifikationen präpariert. Smith, Biochem. J., 185, 1–11 (1980) und Smith et al., Biochemistry, 11, 2958–2967, (1972). Humanes Fibrinogen wird 98 Prozent rein/plasminfrei von American Diagnostica, Greenwich, Connecticut bezogen. Die Koagulationsreagentien ACTIN, Thromboplastin, Innovin und humanes Plasma werden von Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida erhalten. Rinderthrombin von Parke-Davis (Detroit, Michigan) wird für Koagulationstests im Plasma verwendet.
Verfahren
Antikoagulationsbestimmungen
Die Koagulationstestverfahren laufen wie vorher beschrieben. Smith et al., Thrombosis Research, 50, 163–174 (1988). Ein CoA-Screener-Koagulationsgerät (American LABor, Inc.) wird für alle Koagulationstestmessungen verwendet. Die Prothrombinzeit (PT) wird durch die Zugabe von 0,05 ml Kochsalzlösung und 0,05 ml Thromboplastin-C Reagenz oder rekombinantem Humangewebefaktorreagenz (Innovin) zu 0,05 ml Testplasma gemessen. Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (APTT) wird durch die Inkubation von 0,05 ml Testplasma mit 0,05 ml Actinreagenz für 120 Sekunden gefolgt von 0,05 ml CaCl₂ (0,02 M) gemessen. Die Thrombinzeit (TT) wird durch die Zugabe von 0,05 ml Kochsalzlösung und 0,05 ml Thrombin (10 NIH Einheiten/ml) zu 0,05 ml Testplasma gemessen. Die Verbindungen der Formel I werden zu Human- oder Tierplasma über einen weiten Konzentrationsbereich gegeben, um die Verlängerungswirkungen auf die APTT, PT und TT Tests zu bestimmen. Es werden lineare Extrapolationen durchgeführt, um die Konzentratioinen zu bestimmen, die zur Verdoppelung der Gerinnungszeit für jeden Test erforderlich sind.
Tiere
Männliche Sprague Dawley Ratten (350–425 g, Harlan Sprague Dawley Inc., Indianapolis, IN) werden mit Xylazin (20 mg/kg, s. c.) und Ketamin (120 mg/kg, s. c.) anaesthesiert und auf einem mit Wasser geheizten Kissen gehalten (37°C). Die Jugularvene wird kanüliert, um Infusionen zu ermöglichen.
Arterio-venöses Shuntmodell
Die linke Jugularvene und die rechte Arieria carotis werden mit 20 cm langen Polyethylen PE 60 Schläuchen kanüliert. Ein 6 cm langer zentraler Abschnitt eines größeren Schlauchs (PE 190) wird mit einem Baumwollfaden (5 cm) im Lumen zwischen den längeren Abschnitten per Reibung befestigt, um den arterio-venösen Shuntkreislauf zu vervollständigen. Das Blut zirkuliert für 15 Minuten durch den Shunt bevor der Faden sorgfältig entfernt und gewogen wird. Das Gewicht eines nassen Fadens wird vom Gesamtgewicht des Fadens und des Thrombus abgezogen (siehe J. R. Smith, Br. J. Pharmacol., 77: 29, 1982).
FeCl₃ Modell einer arteriellen Verletzung
Die Carotisarterien werden über eine ventrale cervikale Inzision entlang der Mittellinie isoliert. Ein Thermoelement wird unter jede Arterie plaziert und die Gefäßtemperatur wird kontinuierlich auf einem Bandschreiber aufgezeichnet. Ein Cuff eines Schlauchs (0,058 ID × 0,077 OD × 4 mm, Baxter Med. Grade Silicone), der längs aufgeschnitten ist, wird um jede Carotis direkt über dem Thermoelement plaziert. FeCl₃ Hexahydrat wird in Wasser gelöst und die Konzentration (20 Prozent) wird als tatsächliches Gewicht des isolierten FeCl₃ angegeben. Um die Arterie zu verletzen und eine Thrombose zu induzieren werden 2,85 μl in den Cuff pipettien, um die Arterie über der Thermoelementsonde zu benetzen. Die arterielle Okklusion wird durch einen rapiden Temperaturabfall angezeigt. Die Zeit bis zur Okklusion wird in Minuten angegeben und stellt die vergangene Zeit zwischen der Verabreichung des FeCl₃ und des rapiden Abfalls der Gefäßtemperatur dar (siehe K. D. Kurz, Thromb. Res. 60: 269, 1990).
Koagulationsparameter
Die Plasmathrombinzeit (TT) und die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (APTT) werden mit einem Fibrometer gemessen. Das Blut wird aus einem Jugularkatheter entnommen und in Spritzen gesammelt, die Natriumcitrat enthalten (3,8 Prozent, 1 Teil auf 9 Teile Blut). Um TT zu messen, wird Rattenplasma (0,1 ml) mit Kochsalzlösung (0,1 ml) und Rinderthrombin (0,1 ml, 30 E/ml in Tris-Puffer, Parke Davis) bei 37°C gemischt. Für die APTT werden Plasma (0,1 ml) und APTT Lösung (0,1 ml Organon Teknika) für 5 Minuten inkubiert (37°C) und CaCl₂ (0,1 ml, 0,025 M) wird zum Starten der Koagulation zugegeben. Die Tests werden doppelt ausgeführt und gemittelt.
Index der Bioverfügbarkeit
Die Bioverfügbarkeitsstudien können folgendermaßen ausgeführt werden. Die Verbindung werden als wässrige Lösungen männlichen Fischer Ratten intravenös (iv) mit 5 mg/kg über eine Schwanzveneninjektion und oral (po) an nüchterne Tiere mit 20 mg/kg Körpergewicht durch Füttern verabreicht. Man erhält serielle Blutproben nach 5, 30, 120 und 240 Minuten nach der intravenösen Verabreichung der Dosis und nach 1, 2, 4 und 6 Stunden nach einer oralen Dosierung. Das Plasma wird auf eine Arzneimittelkonzentration unter Verwendung eines HPLC Verfahrens analysiert, das C8 Bond Elute (Varion) Kartuschen für eine Probenvorbereitung und einen Methanol/30 nM Ammoniumacetatpuffer (pH 4) Gradienten umfaßt, der für jede Verbindung optimiert ist. Die prozentuale orale Bioverfügbarkeit wird durch die folgende Gleichung berechnet:
worin AUC die Fläche unter der Kurve ist, die aus dem Plasmaspiegel der Verbindung über den Zeitverlauf des Experiments nach einer oralen (AUC po) und intravenösen (AUC iv) Dosierung berechnet wird.
Verbindungen
Die Lösungen der Verbindungen werden täglich frisch in normaler Kochsalzlösung hergestellt und werden als Bolus injiziert oder 15 Minuten vor und während der experimentellen Pertubation infundiert, die im arteriovenösen Shuntmodell 15 min im im FeCl₃ Modell der arteriellen Verletzung und im spontanen Thrombolysemodell 60 min beträgt. Das Bolusinjektionsvolumen beträgt 1 ml/kg für i.v. und 5 ml/kg für p.o. und das Infusionsvolumen beträgt 3 ml/h.
Statistiken
Die Ergebnisse werden als Mittel ± SEM ausgedrückt. Es wird eine Einwegsanalyse der Varianz verwendet, um statistisch signifikante Unterschiede festzustellen und dann wird der Dunnett's Test angewendet, um zu bestimmen, welche Mittel unterschiedlich sind. Die Signifikanzgrenze für die Zurückweisung der Nullhypothese von gleichen Mittelwerten ist P < 0,05.
Tiere
Männliche Hunde (Beagles, 18 Monate – 2 Jahre, 12–13 kg, Marshall Farms, North Rose, New York 14516) läßt man über Nacht fasten und füttert sie mit zertifizierter Prescription Diet von Purina (Purina Mills, St. Louis, Missouri) 240 Minuten nach der Dosisverabreichung. Wasser ist frei verfügbar. Die Raumtemperatur wird zwischen 66-74°F gehalten, die Luftfeuchtigkeit beträgt 45–50 Prozent relative Luftfeuchte und es wird von G Uhr bis 18 Uhr beleuchtet.
Pharmakokinetisches Modell
Die Testverbindung wird unmittelbar vor der Dosierung formuliert, indem man sie in steriler 0,9 prozentiger Kochsalzlösung in einer 5 mg/ml Präparation auflöst. Den Hunden wird eine einzelne 2 mg/kg Dosis der Testverbindung durch orale Verabreichung gegeben. Blutproben (4,5 ml) werden aus der Vena cephalica 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 und 6 Stunden nach der Dosisverabreichung entnommen. Proben werden in citratisierten Vacutainerröhrchen gesammelt und vor der Reduzierung auf das Plasma durch Zentrifugation auf Eis gehalten. Die Plasmaproben werden durch HPLC MS analysiert. Die Plasmakonzentration der Testverbindung wird aufgezeichnet und zur Berechnung der pharmakokinetischen Parameter verwendet: Eliminationsgeschwindigkeitskonstante, Ke, totale Clearance, Clt Verteilungsvolumen, V_D, Zeit der maximalen Plasmakonzentration der Testverbindung, T_max, maximale Konzentration der Testverbindung von T_max, C_max, Plasmahalbwertszeit, t_0,5, die Fläche unter der Kurve, A.U.C, und den Teil der Testverbindung, der absorbiert wurde, F.
Hundemodell der Koronararterienthrombose
Die operative Vorbereitung und instrumentelle Ausstattung der Hunde erfolgt, wie dies in Jackson et al., Circulation, 82, 930–940 (1990) beschrieben wurde. Gemischt-gekreuzte Jagdhunde (6–7 Monate alt, beider Geschlechts, Butler Farms, Clyde, New York) werden mit Natriumpentobarbital (30 mg/kg intravenös, i.v.) anaesthesiert, intubiert und mit Raumluft beatmet. Das Differenzvolumen und die Atemgeschwindigkeit werden eingestellt, um die PO₂, PCO₂ und pH Werte des Bluts innerhalb der normalen Grenzen zu halten. Subdermale Nadelelektroden werden zur Aufzeichnung eines Leit II EKG eingeführt.
Die linke Jugularvene und die Arteria carotis communis werden durch einen mediolateralen Halsschnitt auf der linken Seite isoliert. Der arterielle Blutdruck (ABP) wird kontinuierlich mit einem vorkalibrierten Millar-Umwandler (Modell MPC-500, Millar Instruments, Houston, TX, USA) gemessen, der in die Arteria carotis eingeführt wurde. Die Jugularvene wird zur Blutprobenentnahme während des Experiments kanüliert. Zusätzlich werden die femoralen Venen beider Hinterbeine zur Verabreichung der Testverbindung kanüliert.
Es wird eine Thorakotomie auf der linken Seite im fünften intercostalen Raum durchgeführt und das Herz wird in einem perikardialen Drahtgestell aufgehängt. Es wird ein 1 bis 2 cm Segment der linken circumflexen Koronararterie (LCX) proximal zur ersten diagonalen ventrikulären Hauptverzweigung isoliert. Eine Anodenelektrode, die mit einer 26 Gauge Nadel versehen wurde (Teflon-beschichtet, silberbeschichteter 30 Gauge Kupferdraht), mit einer Länge von 3–4 mm wird in die LCX eingeführt und mit der Intimaoberfläche der Arterie in Kontakt gebracht (wird am Ende des Experiments bestätigt). Der stimulierende Kreislauf wird durch die Plazierung einer Kathode an einer subkutanen Stelle (s.c.) vervollständigt. Ein einstellbarer Plastikverschluß wird um die LCX über die Region der Elektrode plaziert. Eine vorkalibrierte elektromagnetische Flußsonde (Carolina Medical Electronics, King, NC, USA) wird um die LCX proximal zur Anode zum Messen des koronaren Blutflusses (CBF) plaziert. Der Verschluß wird zur Herstellung einer 40–50 prozentigen Hemmung der hyperämischen Blutflußreaktion eingestellt, die nach 10 Sekunden mechanischer Okklusion der LCX beobachtet wird. Alle hämodynamischen und EKG Messungen werden mit einem Datenaufnahmesystem (Modell M3000, Modular Instruments, Malvern, PA, USA) aufgezeichnet und analysiert.
Thrombusbildung und Verabreichungplan der Verbindung
Eine elektrolytische Verletzung der Intima der LCX wird durch Anlegen eines Gleichstroms (DC) von 100 μA an die Anode hergestellt. Der Strom wird für 60 Minuten aufrechterhalten und dann abgebrochen, ob das Gefäß verschlossen ist oder nicht. Die Thrombusbildung läuft spontan bis die LCX total verschlossen ist (bestimmt als Null CBF und Anstieg im S-T Segment). Die Verabreichung der Verbindung wird begonnen, nachdem der verschließende Thrombus für eine Stunde reifen konnte. Eine 2 Stunden dauernde Infusion der erfindungsgemäßen Verbindungen in Dosen von 0,5 und 1 mg/kg/Stunde wird gleichzeitig mit einer Infusion eines thrombolytischen Mittels begonnen (beispielsweise Gewebsplasminogenaktivator, Streptokinase, APSAC). Die Reperfusion wird für 3 Stunden nach einer Verabreichung der Testverbindung verfolgt. Eine Reokklusion der Koronararterien nach einer erfolgreichen Thrombolyse, die für mehr als 30 Minuten anhält, wird als Null CBF definiert.
Hämatologie und Bestimmung der Zielblutungszeit
Bestimmungen der gesamten Blutzellen, des Hämoglobins und der Hämotokritwerte werden in einer 40 μl Probe citratisierten (3,8 Prozent) Bluts (1 Teil Citrat : 9 Teile Blut) mit einem Hämatologienalysegerät bestimmt (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner, Mount View, CA, USA) Zahnfleischzielblutungszeiten werden mit einer Simplate II Blutungszeitvorrichtung bestimmt (Organon Teknika Durham, N. C., USA). Die Vorrichtung wird verwendet, um zwei horizontale Schnitte in das Zahnfleisch entweder des oberen oder des unteren Kiefers des Hundes zu machen. Jeder Schnitt ist 3 mm breit und 2 mm tief. Die Schnitte werden gemacht und es wird eine Stoppuhr zur Bestimmung verwendet, wie lange die Blutung dauert. Es wird ein Baumwolltupfer verwendet, um das Blut aufzusaugen, wenn es aus dem Schnitt sickert. Die Zielblutungszeit ist die Zeit vom Schnitt bis zur Beendigung der Blutung. Die Blutungszeiten werden direkt vor der Verabreichung der Testverbindung (0 min), 60 min bei der Infusion, bei Beendigung der Verabreichung der Testverbindung (120 min) und am Ende des Experiments bestimmt.
Alle Daten werden durch Einwegsanalyse der Varianz (ANOVA) gefolgt von einem Student-Neuman-Kuels post hoc T Test analysiert, um die Signifikanzgrenze zu bestimmen. Wiederholungs ANOVA Messungen werden zur Bestimmung der signifikanten Unterschiede zwischen den Zeitpunkten während der Experimente verwendet. Die Werte sind per Definition mindestens ab der Grenze von p < 0,05 statistisch unterschiedlich. Alle Werte sind Mittelwerte + SEM. Alle Untersuchungen werden gemäß den Richtlinien der American Physiological Society durchgeführt. Weitere Details, die die Verfahren betreffen, sind in Jackson et al., 1. Cardiovasc. Pharmacol., 21, 587–599 (1993) beschrieben.
Die folgenden Beispiele werden bereitgestellt, um die Erfindung weiter zu erläutern und sollen nicht als Beschränkung hiervon aufgefaßt werden.
Die in den Beispielen verwendeten Abkürzungen, Symbole und Ausdrücke haben die folgenden Bedeutungen:

Ac = Acetyl
aq = wäßrig
Bn oder Bzl = Benzyl
Boc = t-Butoxycarbonyl
Bu = Butyl
n-BuLi = Butyllithium
konz. = konzentriert
DMF = Dimethylformamid
DMSO = Dimethylsulfoxid
Äqu. = (molares) Äquivalent
Et = Ethyl
EtOAc = Ethylacetat
Et₃N = Triethylamin
Et₂O = Diethylether
EtOH = Ethanol
FTIR = Fouriertransformations IR
Hex = Hexan
HPLC = Hochleistungsflüssigchromatographie
HRMS = Hochauflösungsmassenspektrum
i-PrOH = Isopropanol
IR = Infrarotspektrum
LC-MS = Flüssigchromatographiemassenspektrum (mittels HPLC)
Me = Methyl
MeOH = Methanol
MS-ES (oder ES-MS) = Elektronenspraymassenspektrum
MS-FAB (oder FAB-MS) = Massenspektrum durch schnellen Atombeschuß
MS-FIA (oder FIA-MS) = Massenspektrum durch Flussinjektionsanalyse (flow injection)
MS-FD (oder FD-MS) = Felddesorptionsmassenspektrum
MS-IS (oder IS-MS) = Ionenspraymassenspektrum
NMR = Kernmagnetresonanz
Ph = Phenyl
i-Pr = Isopropyl
RPHPLC = Umkehrphasenhochleistungsflüssigchromatographie
RT (oder R_t) = Retentionszeit
ges. = gesättigt
SiO₂ = Silicagel
SCX = starker Kationenaustauscher (Harz)
TBS = tert-Butyldimethylsilyl
TFA = Trifluoressigsäure
THF = Tetrahydrofuran
TIPS = Triisopropylsilyl
TLC = Dünnschichtchromatographie
Tosyl = p-Toluolsulfonyl
Triflat = Salz der Trifluormethansulfonsäure

Falls nichts anderes angegeben ist, werden die pH Einstellungen und die Aufarbeitung mit wäßrigen Säure- oder Basenlösungen ausgeführt. ¹H-NMR zeigt an, daß ein zufriedenstellendes NMR Spektrum für die beschriebene Verbindung erhalten wurde. IR (oder FTIR) zeigt an, daß ein zufriedenstellendes Infrarotspektrum für die beschriebene Verbindung erhalten wurde.
Wegen Konsistenz und Klarheit werden mehrere Verbindungen als substituieirte Pyridincarboxamid- oder Pyrazincarboxamidderivate bezeichnet.
Beispiel 1 Herstellung von N-(6-Chlorpyridin-3-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)-piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
A. 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-methylamin
Es wird 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-methanol unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem folgenden, hergestellt: Eine Lösung von Methyl-N-(4-pyridinyl)isonipecotat (600 mg, 2,72 mmol) in Tetrahydrofuran wird zu einer Lösung aus Lithiumaluminiumhydrid (100 mg) in Tetrahydrofuran (14 ml) gegeben und auf 0°C gekühlt. Nach dem Verbrauch des Ausgangsmaterials (0,5–2 h) wird das Gemisch mit Wasser (0,10 ml) behandelt und 15% wäßriges Natriumhydroxid (0,10 ml ) und Wasser (0,30 ml) werden zugegeben. Nach 0,25 h wird das Gemisch für 0,25 h ultrabeschallt und dann in ein Gemisch auf Ethylacetat, Wasser, Natriumtartrat und Kaliumtartrat gegossen. Die wäßrige Phase wird zweimal mit Ethylacetat extrahiert und die vereinigten Extrakte werden getrocknet (Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum unter Bildung von 357 mg (68%) an 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-methanol, konzentriert, das ohne weitere Reinigung verwendet wird.
¹H NMR
Eine Lösung aus 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-methanol (5,87 g, 30,6 mmol), Phthalimid (4,59 g, 31,2 mmol) und Triphenylphosphin (8,10 g, 30,9 mmol) in 125 ml THF wird bei –5°C mit einer Lösung aus Diethylazodicarboxylat (5,38 g, 30,9 mmol) in THF (40 ml) behandelt. Nach 16 h wird das Gemisch in EtOAc und 1 N HCl gegos sen. Die wäßrige Phase wird mit EtOAc (2x) gewaschen, der pH wird durch die Zugabe von 5 N NaOH auf 12 eingestellt und mit EtOAc (3x) gewaschen. Die vereinigten organischen Extrakte werden getrocknet (K₂CO₃) und unter Bildung von 8,45 g (86%) konzentriert. Das rohe Material (5,47 g, 17,0 mmol) wird dann mit Hydrazinhydrat (3,5 ml, 60,0 mmol) in EtOH (50 ml) behandelt. Das Gemisch wird auf 75°C für 5 h erhitzt, abgekühlt, mit CH₂Cl₂ (100 ml) verdünnt und auf 0°C gekühlt. Der Feststoff wird durch Filtration entfernt und das Filtrat wird unter Bildung von 3,32 g der Titelverbindung konzentriert, die ohne weitere Reinigung verwendet. wird.
¹H NMR, IR
FD-MS, m/e 191 (m).
B. Ammonium-2-[[1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]-amino]pyridin-3-carboxylat
Ein Gemisch aus 2-Chlornicotinsäure (10,74 g, 67,5 mmol), 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-methylamin (8,60 g, 45,0 mmol) und Kaliumcarbonat (15,5 g, 112,6 mmol) in Dimethylformamid (90 ml) wird am Rückfluß erhitzt. Nach 16 h wird das Gemisch mit Methanol verdünnt, filtriert und konzentriert. Der Rückstand wird in Methanol gelöst, mit 1 N HCl in Ether angesäuert, am Rückfluß für 0,25 h erhitzt, abgekühlt und der Feststoff wird durch Filtration entfernt. Das Filtrat wird dann mit 2 M NH₃ in Methanol bis es leicht basisch ist, behandelt, mit THF behandelt und der entstehende Feststoff wird durch Filtration unter Bildung von 10,75 g der Titelverbindung gesammelt, die ohne weitere Reinigung verwendet wird.
¹H NMR IS-MS, m/e 313 (m + 1)
C. N-(6-Chlorpyridin-3-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamid
Eine Lösung aus Ammonium-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxylat (3,0 g, 9,12 mmol) in Dioxan (45 ml) wird mit Phosgen (1,9 M in Toluol, 9,50 ml, 18,2 mmol) behandelt und das entstehende Gemisch wird zum Rückfluß erhitzt. Nach 2 h wird das Gemisch unter Bildung des entsprechenden Azaistoinsäureanhydrids konzentriert, das ohne weitere Reinigung verwendet wird. Eine Lösung des rohen Anhydrids (300 mg, 0,648 mmol) in Tetrahydrofuran (2 ml) wird bei 0°C mit dem Magnesiumsalz von 2-Amino-5-chlorpyridin [2,60 mmol, frisch hergestellt durch Zugabe von Methyhnagnesiumbromid (3,0 M in THF, 0,865 ml, 2,60 mmol) zu 2-Amino-5-chlorpyridin (900 mg, 3,89 mmol) in THF (10 ml) bei 0°C] behandelt. Nach 17 h wird das Gemisch mit einer gesättigten Lösung Ammoniumchlorid behandelt und dann zwischen EtOAc und Wasser aufgeteilt. Die wäßrige Phase wird mit EtOAc (3x) gewaschen und die vereinigten Extrakte werden mit Wasser (1x) gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Der Rückstand wird durch RPHPLC unter Bildung von 29 mg (9%) der Titelverbindung als Hydrochloridsalz, gereinigt.
¹H NMR
IS-MS, m/e (m)
Analyse für C₂₂H₂₃ClN₆O × 2,0HCl × 1,8H₂O:
Berechnet: C 50,22, H 5,10, N 15,97. Gefunden: C 50,48, H 5,10, N 15,67.
Beispiel 2 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[[1-(4-pyridinyl)-piperidin-4-ylcarbonyl]amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid
A. 3-Aminopyridin-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-2-carboxamid
Ein (Parr) Druckapparat wird mit 3-Amino-2-chlorpyridin (500 mg, 3,89 mmol), 2-Amino-5-chlorpyridin (1,00 g, 7,78 mmol), Palladiumacetat (88 mg, 0,39 mmol), 1,3-Bis(diphenylphosphino)propan (483 mg, 1,17 mmol) und Triethylamin (590 mg, 5,84 mmol) befüllt. Das Gemisch wird unter eine Kohlenstoffmonoxidatmosphäre (4,1 bar) gegeben und bei 100°C erhitzt. Nach 72 h wird das Gemisch filtriert, konzentriert und der Rückstand wird durch Säulenchromatographie (SiO₂: 0 bis 5% EtOAc in Methylenchlorid) unter Bildung von 550 mg (57%) der Titelverbudung gereinigt.
¹H NMR, IR
IS-MS, m/e 249 (m)
Analyse für C₁₁H₉ClN₄O:
Berechnet: C 53,13, H 3,65, N 22,53. Gefunden: C 53,40, H 3,66, N 22,45.
B. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylcarbonyl]amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid
Es wird 3-Aminopyridin-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-2-carboxamid (5,73 g, 23,0 mmol) zu einer Lösung aus Pyridin (3,92 ml) und 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-ylcarbonylchlorid (24,2 mmol), hergestellt durch Zugabe von Oxalylchlorid [26,7 mmol] zu Natrium-1-(4-pyridinyl)piperidin-4-carboxylat [24,2 mmol] in Methylenchlorid gegeben. Nach 16 h wird das Gemisch zwischen gesättigtem Natriumbicarbonat und Methylenchlorid aufgeteilt. Die organische Phase wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, konzentriert und der Rückstand wird durch Säulenchromatographie (SiO₂, 5 bis 10% Methanol : Methylenchlorid) gefolgt von einer Umkristallisation aus EtOAc : Hexan und Behandlung mit Hydrochlorsäure unter Bildung von 842 mg (8%) der Titelverbindung, gereinigt.
¹H NMR, IR
Analyse für C₂₂H₂₁ClN₆O₂ × 1,75HCl:
Berechnet: C 52,77, H 4,57, N 16,78. Gefunden: C 52,93, H 4,63, N 16,74.
Beispiel 3 Herstellung von 3-[(4-tert-Butylbenzoyl)amino]-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrazin-2-carboxamid
A. 3-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrazin-2-carboxamid
Zu einer kalten (0°C) Lösung von 3-Aminopyrazin-2-carbonsäure (10 g, 72 mmol) in CH₂Cl₂ (250 ml) wird eine 2 M Lösung an Oxalylchlorid (43 ml, 86 mmol) in CH₂Cl₂ gefolgt von DMF (10 ml) tropfenweise gegeben. Das Kühlbad wird entfernt und die Reaktion wird für 2 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. Diese wird auf 0°C gekühlt und mit einer 0°C Lösung an 2-Amino-5-chlorpyridin (12 g, 94 mmol) und Pyridin (32 ml) in CH₂Cl₂ (200 ml) behandelt. Das Kühlbad wird entfernt und die Reaktion wird über Nacht bei Umgebungstemperatur gerührt. Das Gemisch wird zur Trockne im Vakuum konzentriert und der Rückstand wird mit MeOH gemischt. Der Feststoff wird unter Bildung von 15,6 g (87%) des Produkts filtriert.
¹H NMR
MS, m/e 249 (m)
Analyse für C₁₀H₈N₅O × 0,3H₂O:
Berechnet: C 47,09, H 3,40, N 27,46. Gefunden: C 47,38, H 3,24, N 27,14.
B. 3-[(4-tert-Butylbenzoyl)amino]-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrazin-2-carboxamid
Zu einem Gemisch des obigen 3-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrazin-2-carboxamids (255 mg, 1 mmol) in Pyridin (20 ml) wird 4-tert-Butylbenzoylchlorid (402 mg, 86 mmol) gegeben. Das Gemisch wird für 36 Stunden bei 55°C gerührt. Es wird auf Raumtemperatur abgekühlt und dann zur Trockne im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird mit CH₂Cl₂ gemischt und durch Radialchromatographie gereinigt, wobei 85 mg (21%) des Produkts erhalten werden.
¹H NMR
MS, m/e 410 (m + 1)
Analyse für C₂₁H₂₀ClN₅O₂:
Berechnet: C 61,54, H 4,92, N 17,09. Gefunden: C 61,84, H 5,09, N 17,32.
Beispiel 4 Herstellung von N-(6-Chlorbenzothiazol-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamid
Eine Lösung aus Ammonium-2-[[1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxylat (400 mg, 1,28 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) wird mit Thionylchlorid (0,112 ml, 1,54 mmol) behandelt und das Gemisch wird am Rückfluß erhitzt. Nach 3 h wird das Gemisch gekühlt und dann tropfenweise mit einer Lösung aus 2-Amino-6-chlorbenzothiazol (284 mg, 1,54 mmol) in Pyridin (5 ml) behandelt. Nach 1 h wird das Gemisch in Anwesenheit des Silicagels konzentriert. Der Rückstand wird durch Säulenchromatographie (SiO₂: 1 bis 4% [2 N Ammoniak in Methanol] : Chloroform) gefolgt von einer Umkristallisation aus Methanol unter Bildung von 68 mg (11%) der Titelverbindung, gereinigt.
¹H NMR
MS, m/e 480 (m + 1)
Analyse für C₂₄H₂₃ClN₆OS:
Berechnet: C 60,18, H 4,84, N 17,54. Gefunden: C 60,41, H 4,98, N 17,56.
Beispiel 5 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)-piperidin-4-ylcarbonyl]amino]pyridin-3-carboxamidhydrochlorid
A. 2-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyridin-3-carboxamidhydrochlorid
Zu einer gerührten Suspension aus 2-Aminonicotinsäure (26,9 g, 194 mmol) in Dichlormethan (120 ml) bei 0°C wird DMF (ein paar Tropfen), gefolgt von Oxalylchlorid (20 ml, 194 mmol) gegeben. Das Kühlbad wird entfernt und die Lösung kann für 60 min bei Raumtemperatur rühren. Diese Lösung wird dann mittels einer Spritze in eine gerührte Lösung aus 2-Amino-5-chlorpyridin (25 g, 194 mmol) und Pyridin (78 ml, 970 mmol) in Dichlormethan (100 ml) überführt. Nach dem Rühren über Nacht wird der Niederschlag filtriert und unter Bildung von 32,8 g eines Feststoffs getrocknet. Das rohe Produkt wird aus Ethanol mit aktivierter Kohle unter Bildung von 12,4 g (23 %) eines weißen Feststoffs umkristallisiert.
¹H NMR
IS-MS, m/e 249,0 (m + 1)
Analyse für C₁₁H₉N₄OCl × HCl:
Berechnet: C 46,33, H 3,54, N 19,65, Cl 24,87. Gefunden: C 46,64, H 3,42, N 19,63, Cl 25,23
B. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[(1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylcarbonyl]amino]pyridin-3-carboxamidhydrochlorid
Durch Verfahren, die im wesentlichen zu den in Beispiel 2-B beschriebenen äquivalent sind, wird N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylcarbonyl]amino]pyridin-3-carboxamidhydrochlorid (84 mg, 4 %) aus 2-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyridin-3-carboxamid und 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-carbonylchlorid hergestellt. Die Verbindung wird durch präparative RPHPLC (C18) unter Elution mit einem linearen Gradienten aus 90/10 bis 50/50 (0,01% HCl/Acetonitril) über 180 min gereinigt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 437,2 (m + 1)
Beispiel 6 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid
A. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-boc-piperidin-4-yl-carbonyl)amino]pyridin-2-carboxamid
Zu einer gerührten Lösung aus Boc-Isonipecotinsäure (15,4 g, 67 mmol) in THF (200 ml) wird Natriummethoxid (3,62 g, 67 mmol) gegeben. Nach dem Rühren für 1 h wird das Lösemittel im Vakuum entfernt und der trockene Rückstand wird in Dichlormethan (100 ml) suspendiert. Zu dieser rührenden Suspension werden wenige Tropfen DMF gefolgt von Oxalylchlorid (6,5 ml, 74 mmol) gegeben. Nach dem Rühren für 2 h werden die Lösemittel im Vakuum entfernt und der Rückstand wird auf ein Volumen von etwa 130 ml mit Dichlormethan verdünnt.
Eine Portion dieser Lösung (81 ml, 40 mmol) wird mittels einer Spritze zu einer gerührten Lösung aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-aminopyridin-2-carboxamid (6,7 g, 26,9 mmol), 4-Dimethylaminopyridin (0,49 g, 4 mmol) und N,N-Diisopropylethylamin (8,2 ml, 47,1 mmol) in Dichlormethan (200 ml) gegeben. Nach dem Rühren über Nacht wird das Lösemittel im Vakuum entfernt und der Rückstand wird zwischen Ethylacetnt und Wasser aufgeteilt. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird nacheinander mit 0,5 M Citronensäure (2x), Kochsalzlösung, gesättigtem wäßrigem Natriumbicarbonat (2x) und Kochsalzlösung gewaschen. Die Lösung wird dann mit MgSO₄ getrocknet, filtriert, im Vakuum konzentriert und der Rückstand wird über Silicagel unter Elution mit Dichlormethan, gefolgt von 10% Ethylacetat in Dichlormethan chromatographiert. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum unter Bildung von 8,69 g (72%) eines weißen Feststoffs konzentriert.
¹H NMR
IS-MS, m/e 460,4 (m + 1)
B. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(piperidin-4-ylcarbonyl)-amino]pyridin-2-carboxamidtrifluoracetat
Zu einer gerührten Lösung aus N-(5-Chlorpyridin-1-yl)-3-[1-Boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamid (8,5 g, 18,5 mmol) und Anisol (20 ml) in Dichlormethan (150 ml) wird TFA (150 ml) gegeben. nach dem Rühren für 1 h wird das Lösemittel im Vakuum entfert und der Rückstand wird in Diethylether unter kräftigem Rühren suspendiert. Nach 30 min wird der Feststoff filtriert, mehrere Male mit Diethylether gewaschen und dann im Vakuum unter Bildung von 8,53 g (97%) eines weißen Feststoffs getrocknet.
¹H NMR
IS-MS: m/e 360,2 (m + 1)
Analyse für C₁₇H₁₈ClN₅O₂:
Berechnet: C 47,52, H 3,97, N 14,43, F 12,92. Gefunden: C 47,81, H 3,98, N 14,36, F 12,76.
C. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid
Zu einer gerührten Suspension aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidtrifluoracetat (0,34 g, 0,72 mmol) in 1,2-Dichlorethan (10 ml) wird Aceton (10 ml) gefolgt von Essigsäure (0,7 ml, 2,88 mmol) und dann Natriumtriacetoxyborhydrid (0,61 g, 2,88 mmol) gegeben. Nach dem Rühren über Nacht wird die Lösung auf eine SCX Säule (vorgewaschen mit 5% Essigsäure in Methanol) gegeben und mit Methanol gewaschen. Das Produkt wird dann aus der Säule mit einer 2 N Lösung an Ammoniak in Methanol eluiert. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden im Vakuum konzentriert und die Verbindung wird durch präparative RPHPLC (C18) unter Elution mit einem linearen Gradienten aus 90/10 bis 50/50 (0,01% HCl/Acetonitril) über 180 min unter Bildung von 0,14 g (44%) eines weißen Feststoffs, gereinigt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 402,3 (m + 1)
Analyse für C₂₀H₂₄N₅O₂Cl × 1,0HCl × 1,5H₂O:
Berechnet: C 51,62, H 6,06, N 15,05, Cl 15,24. Gefunden: C 51,61, H 5,75, N 14,80, Cl 15,31.
Beispiel 7 Herstellung von N-(5-Methylpyridin-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)-piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem in Beispiel 1-C beschriebenen, wird das rohe Anhydrid (300 mg, 0,648 mmol) und 2-Amino-5-methylpyridin (280 mg, 2,60 mmol) unter Bildung von 64 mg (20%) der Titelverbindung als Hydrochloridsalz gebildet.
¹H NMR, IR
IS-MS, m/e 403 (m + 1)
Analyse für C₂₃H₂₆N₆O × 2,0HCl:
Berechnet: C 58,11, H 5,94, N 17,68. Gefunden: C 58,35, H 5,85, N 17,60.
Beispiel 8 Herstellung von N-(6-Chlorpyridazin-3-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem in Beispiel 1-C beschriebenen, werden das rohe Anhydrid (300 mg, 0,648 mmol) und 3-Amino-5-chlorpyridazin (335 mg, 2,60 mmol) unter Bildung von 46 mg (14 %) der Titelverbindung als Hydrochloridsalz hiervon erhalten.
¹H NMR
IS-MS, m/e 424 (m + 1)
Beispiel 9 Herstellung von N-(Benzothiazol-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem in Beispiel 1-C beschriebenen, werden das rohe Anhydrid (300 mg, 0,648 mmol) und 2-Aminobenzothiazol (390 mg, 2,60 mmol) unter Bildung von 70 mg (24%) der Titelverbindung als Hydrochloridsalz hiervon erhalten.
¹H NMR
IS-MS, m/e 445 (m + 1)
Analyse für C₂₄H₂₄N₆OS × 3,0HCl × 1,5H₂O:
Berechnet: C 49,78, H 5,19, N 14,51. Gefunden: C 49,63, H 4,76, N 14,22.
Beispiel 10 Herstellung von N-(6-Methylbenzothiazol-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem in Beispiel 1-C beschriebenen, werden das rohe Anhydrid (300 mg, 0,648 mmol) und 2-Amino-6-methylbenzothiazol (426 mg, 2,60 mmol) unter Bildung von 66 mg (19%) der Titelverbindung als Hydrochloridsalz hiervon erhalten.
¹H NMR
IS-MS, m/e 445 (m + 1)
Analyse für C₂₅H₂₆N₆OS × 3,0HCl × 1,0H₂O:
Berechnet: C 51,25, H 5,33, N 14,34. Gefunden: C 51,51, H 5,14, N 14,28.
Beispiel 11 Herstellung von N-(6-Brombenzothiazol-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem in Beispiel 1-C beschriebenen, werden das rohe Anhydrid (300 mg, 0,648 mmol) und 2-Amino-6-brombenzothiazol (595 mg, 2,60 mmol) unter Bildung von 8,0 mg (2%) der Titelverbindung als Hydrochloridsalz hiervon erhalten.
¹H NMR
IS-MS, m/e 524 (m + 1)
Beispiel 12 Herstellung von N-(5-Chlorpyrimidin-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem in Beispiel 1-C beschriebenen, werden das rohe Anhydrid (300 mg, 0,648 mmol) und 2-Amino-5-chlorpyrimidin (595 mg, 2,60 mmol) unter Bildung von 8,0 mg (2 %) der Titelverbindung als Hydrochloridsalz hiervon erhalten.
¹H NMR
IS-MS, m/e 524 (m + 1)
Beispiel 13 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyridin-2-carboxamid
A. 1-tert-Butoxycarbonylpiperidin-4-methanol
Eine Lösung aus 1-tert-Butoxycarbonylisonipecotinsäure (40 g, 0,17 mol) und N-Methylmorpholin (19 ml, 0,17 mol) in Tetrahydrofuran (900 ml) bei –10°C wird mit Ethylchlorformiat (17 ml, 0,17 mol) behandelt. Nach 0,5 h wird Natriumborhydrid in einer Portion zugegeben (19,8 g, 0,5 mol), gefolgt von der langsamen Zugabe von Me thanol. Nachdem die Gasentwicklung aufhört, wird das Gemisch konzentriert und der Rückstand wird mit 10% wäßriger Essigsäure verdünnt und zwischen Ethylacetat und Wasser aufgeteilt. Die wäßrige Phase wird mit EtOAc (2x) gewaschen und die vereinigten organischen Extrakte werden mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zu einem festen Rückstand konzentriert, der durch Säulenchromatographie (SiO₂ : 10 bis 50% EtOAc : Hexan) unter Bildung der Titelverbindung (33,8 g, 90%) als weißer Feststoff gereinigt wird.
¹H NMR
B. 1-tert-Butoxycarbonylpiperidin-4-carboxaldehyd
Eine Lösung aus Oxalylchlorid (6 ml, 70 mmol) in Dichlormethan (60 ml) wird bei –78°C tropfenweise mit Dimethylsulfoxid (10 ml, 0,14 mol) behandelt. Nach 15 Minuten wird 1-tert-Butoxycarbonylpiperidin-4-methanol (3,0 g, 14 mmol) als eine Lösung in Dichlormethan (35 ml) zugegeben. Das Gemisch wird bei –78°C für 1 h gerührt und dann wird Triethylamin (29 ml, 0,21 mol) tropfenweise zugegeben. Das Gemisch wird auf Umgebungstemperatur erwärmt und in eine gesättigte Ammoniumchloridlösung (200 ml) gegossen. Die organische Phase wird abgetrennt und die wäßrige Phase wird mit Dichlormethan (75 ml) gewaschen. Die organischen Phasen werden vereinigt und mit Kochsalzlösung (75 ml) gewaschen, dann mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und konzentriert. Der Rückstand wird in Ethylacetat-Hexan (1 : 1) rückgelöst und durch Florisil (100–200 Mesh) filtriert. Das entstehende Filtrat wird unter Bildung von 3,0 g (100%) des Titelaldehyds als gelbes Öl konzentriert, das ohne weitere Reinigung weiter verwendet wird.
¹H NMR
C. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-Boc-piperidin-4-yl-methylidin)amino]pyridin-2-carboxamid
Eine Lösung, die 1-tert-Butoxycarbonylpiperidin-4-carboxaldehyd (2,00 g, 9,38 mmol), 3-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyridin-2-carboxamid (2,33 g, 9,38 mmol) und Pyridinium-p-toluolsulfonat (236 mg, 0,94 mmol) in Benzol (100 ml) enthält, wird am Rückfluß unter azeotroper Entfernung des Wassers erhitzt. Nach 48 h wird das Gemisch konzentriert und der Rückstand wird durch Säulenchromatographie (SiO₂: Methylenchlorid) unter Bildung der Titelverbindung gereinigt, die mit 3-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyridin-2-carboxamid verunreinigt ist und ohne weitere Reinigung verwendet wird.
¹H NMR
IS-MS, m/e 444 (m)
D. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(piperidin-4-ylmethyl)-amino]pyridin-2-carboxamid
Eine Lösung die N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-boc-piperidin-4-ylmethylidin)-amino]pyridin-2-carboxamid (roh erhalten aus Teil C) und einen Borantrimethylaminkomplex (2,05 g, 28,14 mmol) in Eisessig enthält, wird am Rückfluß für 2 h erhitzt. Das Gemisch wird abgekühlt, konzentriert und der Rückstand wird in Methanol (100 ml) und 12 N HCl (10 ml) gelöst. Nach 24 h wird das Gemisch konzentriert, der Rückstand wird zwischen EtOAc und Wasser aufgeteilt und die organische Phase wird mit einer gesättigten Kaliumcarbonatlösung gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, konzentriert und der Rückstand wird durch Säulenchromatographie (SiO₂: 10% [2 N Ammoniak in Methanol] : Methylenchlorid) unter Bildung von 1,63 g (50%) der Titelverbindung gereinigt.
¹H NMR, IR
IS-MS, m/e 346 (m)
Analyse für C₁₇H₂₀ClN₅O:
Berechnet: C 59,04, H 5,83, N 20,25. Gefunden: C 58,76, H 5,84, N 20,05
E. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyridin-2-carboxamid
Eine Lösung aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[piperidin-4-yhnethyl)amino]pyridin-2-carboxamid (100 mg, 0,29 mmol), Aceton (1 ml) und wasserfreiem Magnesiumsulfat (500 mg) in 95 : 5 Methanol : Essigsäure (10 ml) wird mit Natriumcyanoborhydrid (73 mg, 1,16 mmol) behandelt. Nach 4 Tagen wird das Gemisch filtriert, konzentriert und der Rückstand wird durch Säulenchromatographie (SiO₂: 1 bis 20% Methanol : Methylenchlorid) unter Bildung von 100 mg (89%) der Titelverbindung gereinigt.
¹H NMR, IR
IS-MS, m/e 388 (m + 1)
Analyse für C₂₀H₂₆ClN₅O × 0,25H₂O:
Berechnet: C 61,22, H 6,81, N 17,25. Gefunden: C 61,35, H 6,46, N 17,20
Beispiel 14 Herstellung von 5-Chlor-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-3-carboxamidtetrahydrochlorid
A. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2,5-dichlorpyridin-3-carboxamid
Zu einer eiskalten Lösung aus 2-Amino-5-chlorpyridin (20 g, 95 mmol) in Dichlormethan (200 ml) und Pyridin (20 ml) wird tropfenweise 2,5-Dichlornicotinoylchlorid (11,58 g, 90 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wird auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt. Das Lösemittel wird eingedampft und der Rückstand wird zwischen Ethylacetat (500 ml) und Wasser (100 ml) aufgeteilt. Die wäßrige Phase wird mit Ethylacetat (3 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit Wasser (100 ml), gesättigter Citronensäurelösung (2 × 100 ml), gesättigtem Natriumbicarbonat (2 × 100 ml) und Wasser (200 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösemittel wird eingedampft. Der Rückstand wird mit Ether (100 ml) aufgeschlämmt und die nicht ganz weißen Feststoffe werden durch Filtration (24 g, 88%) gesammelt.
¹H NMR
FD-MS, m/e 302 (m + 1)
Analyse für C₁₁H₆Cl₃N₃O:
Berechnet: C 43,67, H 2,0, N 13,89. Gefunden: C 43,97, H 1,88, N 13,97
B. 5-Chlor-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-2-[[1-(4-pyridinyl)piperidin-4-yl]methyl]amino]pyridin-3-carboxamidtetrahydrochlorid
Eine Suspension aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2,5-dichlorpyridin-3-carboxamid (0,807 g, 2,68 mmol) und 1-(4-Pyridinyl)piperidin-4-methylamin (510 mg) in Ethylalkohol (5 ml) wird in einem verschlossenen Röhrchen für 24 Stunden erhitzt. Die Feststoffe werden filtriert und durch RPHLC gereinigt. Die das rohe Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und unter Bildung von 0,1 g eines nicht ganz weißen Feststoffs lyophilisiert.
¹H NMR
FD-MS, m/e 457,4 (m + 1)
Analyse für C₂₂H₂₂Cl₂N₆O × 4HCl × H₂O:
Berechnet: C 42,54, H 4,54, N 13,53. Gefunden: C 42,95, H 4,57, N 13,58
Beispiel 15 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[[1-(tetrahydropyran-4-yl)piperidin-4-ylcarbonyl]amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid
Durch Verfahren, die im wesentlichen äquivalent zu denen in Beispiel 6-C beschriebenen sind, wird N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-([1-(tetrahydropyran-4-yl)piperidin-4-ylcarbonyl]amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid (0,138 g, 34%) aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[[piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidtrifluoracetat und Tetrahydropyran-4-on hergestellt. Die Verbindung wird durch präparative RPHPLC (C18) unter Elution mit einem linearen Gradienten von 80/20 bis 50/50 (0,01% HCl/Acetonitril) über 180 min gereinigt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 444,2 (m + 1)
Analyse für C₂₂H₂₆N₅O₃Cl × 1,2HCl × 1,0H₂O:
Berechnet: C 52,25, H 5,82, N 13,85, Cl 15,42. Gefunden: C 52,18, H 5,48, N 13,97, Cl 15,27.
Beispiel 16 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[(1-cyclopentylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyridin-2-carboxamid
Unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens zu dem in Beispiel 13-E beschriebenen, ergeben N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(piperidin-4-ylmethyl)-amino]pyridin-2-carboxamid (100 mg, 0,29 mmol) und Cyclopentanon (122 mg, 1,45 mmol) 70 mg (58%) der Titelverbindung.
¹H NMR, IR
IS-MS, m/e 414 (m + 1)
Analyse für C₂₂H₂₈ClN₅O × 0,5H₂O:
Berechnet: C 62,47, H 6,91, N 16,56. Gefunden: C 62,95, H 6,69, N 16,07.
Beispiel 17 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-cyclohexylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid
Durch Verfahren, die im wesentlichen zu den in Beispiel 6-C beschriebenen äquivalent sind, wird N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-cyclohexylpiperidin-4-ylcarbonyh)-amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid (0,183 g, 46 %) aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidtrifluoracetat und Cyclohexanon hergestellt. Die Verbindung wird durch präparative RPHPLC (C18) unter Elution mit einem linearen Gradienten von 80/20 bis 50/50 (0,01% HCl/Acetonitril) über 180 min gereinigt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 442,2 (m + 1)
Analyse für C₂₃H₂₈N₅O₂Cl × 1,1HCl × 1,0H₂O:
Berechnet: C 55,24, H 6,27, N 14,01, Cl 14,89. Gefunden: C 55,04, N 6,01, N 13,89, Cl 14,59
Beispiel 18 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[[1-(4-pyridinyl)-piperidin-4-ylmethyl]amino]pyridin-2-carboxamid
Ein Druckröhrchen (Aldrich) wird mit N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(piperidin-4-ylmethyl)-amino]pyridin-2-carboxamid (500 mg, 1,45 mmol), 4-Chlorpyridinhydrochlorid (435 mg, 2,90 mmol), Triethylamin (293 mg, 2,90 mmol) und EtOH (5 ml) befällt, verschlossen und in ein 110°C Bad gegeben. Nach 16 h wird das Gemisch gekühlt, konzentriert und der Rückstand wird durch Säulenchromatographie (SiO₂: 5 bis 7,5% Methanol : Methylenchlorid ) unter Bildung von 100 mg (16%) der Titelverbindung chromatographiert.
¹H NMR, IR
IS-MS, m/e 423 (m + 1)
Analyse für C₂₂H₂₃ClN₆O:
Berechnet: C 62,48, H 5,48, N 19,87. Gefunden: C 61,94, H 5,52, N 19,71.
Beispiel 19 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isoamylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid
Durch Verfahren, die im wesentlichen zu den in Beispiel 6-C beschriebenen äquivalent sind, wird N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isoamylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidhydrochlorid (0,083 g, 21%) aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidtrifluoracetat und 3-Pentanon hergestellt. Die Verbindung wird durch präparative RPHPLC (C18) unter Elution mit einem linearen Gradienten von 80/20 bis 50/50 (0,01% HCl/Acetonitril) über 180 min gereinigt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 430,4 (m + 1)
Analyse für C₂₂H₂₈N₅O₂Cl × 1,0HCl × 0,2H₂O:
Berechnet: C 56,22, H 6,30, N 14,90, Cl 15,09. Gefunden: C 56,22, H 6,29, N 14,77, Cl 15,46.
Beispiel 20 Herstellung von 5-Chlor-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-2-((1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyridin-3-carboxamiddihydrochlorid
A.1-Isopropylpiperidin-4-carboxamid
Eine Lösung von 200 ml DMF, die 50,0 g Isonicotinamid und 60 ml an 2-Brompropan enthält, wird für 5,75 h am Rückfluß erhitzt. Ein weißer unlöslicher Feststoff wird aus dieser kalten Lösung unter Bildung von 64,9 g (65%) an 1-Isopropylpyridinium-4-carbomidbromid, m/e = 165, NMR, filtriert. Eine katalytische Reduktion dieses Salzes mit PtO₂ in MeOH ergibt 65,2 g (98%) des 1-Isopropylpiperidin-4-carboxamidhydrobromids, m/e = 171. Ein wäßrige Lösung dieses Salzes wird basisch gemacht, zur Trockne eingedampft und mit EtOAc unter Bildung von 39,7 g (90%) an 1-Isopropylpiperidin-4-carboxamid als freie Base extrahiert.
B. 1-Isopropylpiperidin-4-methylamin
Zu einer Suspension aus 10,0 g an LAH in 500 ml trockenem THF werden bei Raumtemperatur portionsweise 39,7 g an 1-Isopropylpiperidin-4-carboxamid gegeben und das Gemisch wird für 18 h am Rückfluß erhitzt. Das gekühlte Reaktionsgemisch wird mit 150 ml THF verdünnt und tropfenweise mit jeweils 10 ml H₂O und 10 ml an 5 N NaOH verdünnt. Das graue Gemisch wird für 18 h am Rückfluß erhitzt, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wird teilweise in Hexan unter Bildung von 25,5 g einer rohen gelben Flüßigkeit und 6,9 g Hexan als unlösliches Ausgangscarboxamid gelöst. Eine HPLC Reinigung der 25,5 g Flüßigkeit mit 20% MeOH-EtOAc/Silicagel ergibt 1-Isopropylpiperidin-4-methylamin (8,5 g, 28%).
NMR, m/e = 157.
C. 5-Chlor-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-2-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyridin-3-carboxamidhydrochlorid
Eine Suspension aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2,5-dichlorpyridin-3-carboxamid (0,607 g, 2,05 mmol) und 1-Isopropylpiperidin-4-methylamin (510 mg) in Acetonitril (5 ml) wird in einem verschlossenen Röhrchen für 24 h erhitzt. Die Feststoffe werden filtriert und durch RPHPLC gereinigt und die das reine Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und unter Bildung von 0,256 g eines hellbraunen Pulvers lyophilisiert.
¹H NMR
Fd-MS, m/e 422,1 (m + 1)
Beispiel 21 Herstellung von 4-[(4-t-Butylbenzoyl)amino]-N-(5-chlorpyridin-2-yl)pyridin-3-carboxamid
A. 4-(Boc-amino)pyridin
Zu einer gerührten Lösung aus 4-Aminopyridin (15 g, 159 mmol) und Triethylamin (24 ml, 175 mmol) in DMF (300 ml) wird Di-t-butyldicarbonat (38 g, 175 mmol) gegeben. Nach dem Rühren über Nacht wird das Lösemittel im Vakuum entfernt, der Rückstand wird in Ethylacetat (500 ml) gelöst und die Lösung wird mit gesättigtem, wäßrigem Natriumbicarbonat, Wasser und dann Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wird dann mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Volumen von etwa 100 ml konzentriert. Das Gemisch wird dann ultrabeschallt und der Niederschlag wird filtriert und im Vakuum unter Bildung von 9,52 g (31%) der Titelverbindung getrocknet. Zu der Mutterlauge werden etwa 50 g Silicagel gegeben und das Gemisch wird im Vakuum konzentriert. Die entstehende trockene Packung wird auf eine Silicagelsäule gegeben, die mit einer Lösung aus 50% Ethylacetat in Hexan präpariert wurde und mit 20% Ethylacetat in Dichlormethan eluiert, gefolgt von einem Stufengradienten von 50% Ethylacetat in Hexan bis Ethylacetat. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum unter Bildung von weiteren 16,16 g (52%) der Titelverbindung konzentriert.
¹H NMR
IS-MS, m/e 195,3 (m + 1).
B. 4-(Boc-amino)pyridin-3-carbonsäure
Zu einer gerührten Lösung von 4-(Boc-Amino)pyridin (1,027 g, 5,30 mmol) in THF bei –36°C (innere Temperatur) wird eine 1,7 M Lösung aus t-Butyllithium in Pentan (6,5 ml, 11 mmol) gegeben und die Zugabegeschwindigkeit wird so kontrolliert, daß die innere Temperatur unter –28°C gehalten wird. Nach einer zusätzlichen Stunde (die Temperatur wird zwischen –30°C und –50°C gehalten) wird Kohlendioxid (g) durch die Lösung geblasen und das Kühlbad wird entfernt. Nach etwa 15 min wird das Gemisch in Eiswasser gegossen und die wäßrige Phase wird mit Dichlormethan gewaschen. Der pH wird auf 4–5 mit Citronensäure eingestellt und der entstehende Niederschlag wird mit Dichlormethan und Methanol gewaschen und im Vakuum unter Bildung von 0,811 g (64%) eines nicht ganz weißen Feststoffs getrocknet.
¹H NMR
IS-MS, m/e 239,0 (m + 1)
Analyse für C₁₁H₁₄N₂O₄:
Berechnet: C 55,46, H 5,92, N 11,76. Gefunden: C 55,73, H 6,07, N 11,75.
C. Methyl-4-(Boc-amino)pyridin-3-carboxylat
Zu einer gerührten Suspension aus 4-(Boc-Amino)pyridin-3-carbonsäure (1,04 g, 4,37 mmol) in Methanol (3,5 ml) wird eine 2 M Lösung aus (Trimethylsilyl)diazomethan in Hexan (3,5 ml, 7 mmol) gegeben. Nach 15 min wird Essigsäure zugegeben und die Lösemittel werden in Vakuum entfernt. Der Rückstand wird über Silicagel unter Elution mit einem Stufengradienten von 20% Ethylacetat in Hexan bis 70% Ethylacetat in Hexan chromatographiert. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum unter Bildung von 0,894 g (81 %) eines weißen Feststoffs konzentriert.
¹H NMR
D. Methyl-4-aminopyridin-3-carboxylat
Methyl-4-(boc-amino)pyridin-3-carboxylat (2,38 g, 9,4 mmol) wird in TFA (20 ml) gelöst und die Lösung kann für 45 min rühren. Das Lösemittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand wird zwischen 25% Isopropanol in Chloroform und gesättigtem, wäßrigem Natriumbicarbonat aufgeteilt. Die Phasen werden getrennt und die wäßrige Phase wird wieder mit 25% Isopropanol in Chloroform extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte werden getrocknet (MgSO₄), filtrtert und im Vakuum unter Bildung eines Feststoffs konzentriert, der mit Diisopro pylether gewaschen wird und im Vakuum unter Bildung von 1,327 g (92%) eines nicht ganz weißen Feststoffs getrocknet wird.
¹H NMR
IS-MS, m/e 153,1 (m + 1)
Analyse für C₇H₈N₂O₂:
Berechnet: C 55,26, H 5,30, N 18,41. Gefunden: C 55,31, H 5,36, N 18,42.
E. Methyl-4-(4-t-butylbenzoyl)aminopyridin-3-carboxylat
Zu einer gerührten Suspension von Methyl-4-aminopyridin-3-carboxylat (0,161 g, 1,059 mmol), 4-Dimethylaminopyridin (0,017 g, 0,138 mmol) und N,N-Diisopropylethylamin (0,3 ml, 1,7 mmol) in Dichlormethan (5 ml) wird 4-t-Butylbenzoylchlorid (0,3 ml, 1,5 mmol) gegeben. Nach 2 h wird das Gemisch mit Ethylacetat und gesättigtem wäßrigem Natriumbicarbonat verdünnt. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird mit gesättigtem Natriumbicarbonat gewaschen, dann mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird in Diisopropylether unter kräftigem Rühren suspendiert und der Feststoff wird filtriert und im Vakuum unter Bildung von 0,257 g (78%) eines weißen Feststoffs getrocknet.
¹H NMR
IS-MS, m/e 313,0 (m + 1)
Analyse für C₁₈H₂₀N₂O₃:
Berechnet: C 69,21, H 6,45, N 8,97. Gefunden: C 69,43, H 6,37, N 9,15.
F. 4-(4-t-Butylbenzoyl)aminopyridin-3-carbonsäure
Zu einer gerührten Lösung aus Methyl-4-(4-t-butylbenzoyl)-aminopyridin-3-carboxylat (0,156 g, 0,5 mmol) in THF (4 ml) und Methanol (1 ml) wird eine wäßrige 1 M LiOH Lösung (0,6 ml, 0,6 mmol) gegeben. Nach 1 h wird das Lösemittel im Vakuum entfernt und der Rückstand wird zwischen Wasser und Diethylether aufgeteilt. Die wäßrige Phase wird abgetrennt und der pH wird mit Citronensäure auf 2–3 eingestellt. Der Niederschlag wird durch Filtration isoliert und mit Wasser, mit 25% Isopropanol in Chloroform und mit Diethylether gewaschen und im Vakuum unter Bildung von 0,138 g (92%) eines weißen Feststoffs getrocknet.
¹H NMR
IS-MS, m/e 299,1 (m + 1)
G. 2-(4-t-Butylphenyl)-4H-6-aza-3,1-benzoxazin-4-on
Zu einer gerührten Suspension aus 4-(4-t-Butylbenzoyl)-aminopyridin-3-carbonsäure (0,419 g, 1,4 mmol) in DMF (14 ml) wird 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodiimidhydrochlorid (0,374 g, 1,96 mmol) gegeben. Nach dem Rühren über Nacht wird das Lösemittel im Vakuum entfernt und der Rückstand wird über Silicagel unter Elution mit einem schrittweisen Gradienten von 20% Ethylacetat in Hexan bis 60% Ethylacetat in Hexan chromatographiert. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum unter Bildung von 0,326 g (66%) als weißer Feststoff konzentriert.
¹H NMR
FD-MS, m/e 280 (m + 1)
Analyse für C₁₇H₁₆N₂O₂:
Berechnet: C 72,84, H 5,75, N 9,99. Gefunden: C 72,54, H 5,78, N 10,11.
H. 4-[(4-t-Butylbenzoyl)amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-pyridin-3-carboxamid
Zu einer gerührten Lösung aus 2-Amino-5-chlorpyridin (0,11 g, 0,85 mmol) in THF (12 ml) wird bei 0°C eine 1 M Lösung aus Allylmagnesiumbromid in Diethylether (0,83 ml, 0,83 mmol) gegeben. Nach 20 min wird 2-[4-t-Butylphenyl]-4H-6-aza-3,1-benzoxazin-4-on (0,115 g, 0,41 mmol) zugegeben und das Kühlbad wird entfernt. Nach 2 h wird das Gemisch mit Ethylacetat verdünnt und drei Mal mit Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄), filtriert und im Vakuum konzentriert. Der Feststoff wird aus Diethylether umkristallisiert, dann mehrere Male mit Gemischen aus Ether/Hexan gewaschen und unter Bildung von 0,138 g (82%) an Maßgelben Nadeln getrocknet.
¹H NMR
IS-MS, m/e 409,5 (m + 1)
Analyse für C₂₂H₂₁N₄O₂Cl:
Berechnet: C 64,62, H 5,18, N 13,70. Gefunden: C 64,65, H 5,18, N 13,95.
Beispiel 22 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(1-isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3- carboxamiddihydrochlorid
A. Methyl-4-[(1-boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxylat
Mittels Verfahren, die im wesentlichen zu denen in Beispiel G-A beschriebenen äquivalent sind, wird Methyl-4-[(1-boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxylat (0,324 g, 84%) aus Methyl-1-boc-piperidin-4-ylcarbonylchlorid und Methyl-4-aminopyridin-3-carboxylat hergestellt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 364,1 (m + 1)
Analyse für C₁₈H₂₅N₃O₅:
Berechnet: C 59,49, H 6,93, N 11,56. Gefunden: C 59,95, H 7,01, N 11,49.
B. 4-[(1-Boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carbonsäure
Mittels Verfahren, die im wesentlichen zu denen in Beispiel 21-F beschriebenen äquivalent sind, wird 4-[(1-Boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carbonsäure (0,148 g, 69%) aus Methyl-4-[(1-boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxylat hergestellt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 350,4 (m + 1)
C. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(1-Boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamid
Mittels Verfahren, die im wesentlichen zu denen in Beispiel 21G und 21H beschriebenen äquivalent sind, wird N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(1-boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamid (0,360 g, 50% für 2 Schritte) aus 4-[(1-Boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carbonsäure und 5-Chlor-2-aminopyridin hergestellt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 460,4 (m + 1)
Analyse für C₂₂H₂₆ClN₅O₄:
Berechnet: C 57,45, H 5,70, N 15,23, Cl 7,71. Gefunden: C 57,15, H 5,78, N 14,88, Cl 8,09.
D. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamidtrifluoracetat
Mittels Verfahren, die im wesentlichen zu denen in Beispiel 6-B beschriebenen äquivalent sind, wird N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamidtrifluoracetat (53 mg, 71%) aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(1-Boc-piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamid hergestellt. ¹H NMR
IS-MS, m/e 360,1 (m + 1)
E. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(1-isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamidhydrochlorid
Mittels Verfahren, die im wesentlichen zu denen in Beispiel 6-C beschriebenen äquivalent sind, wird N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(1-isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamidhydrochlorid (0,219 g, 50%) aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-4-[(piperidin-4-ylcarbonyl)amino]pyridin-3-carboxamidtrifluoracetat und Aceton hergestellt. Die Verbindung wird durch präparative RHPLC (C18) unter Elution mit einem linearen Gradienten von 95/5 bis 60/40 (0,01% HCl/Acetonitril) über 200 min gereinigt. ¹H NMR
IS-MS, m/e 402,3 (m + 1)
Analyse für C₂₀H₂₄N₅O₂Cl × 2,4HCl × 3,6H₂O:
Berechnet: C 43,34, H 6,11, N 12,64, Cl 21,75. Gefunden: C 43,55, H 5,90, N 12,32, Cl 21,91.
Beispiel 23 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyridin-3-carboxamidtrihydrochlorid
A. 2-Chlor-N-(5-chlorpyridin-2-yl)nictionamid
Mittels Verfahren die im wesentlichen zu denen in Beispiel 14-A beschriebenen äquivalent sind, wird 2-Chlor-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-nictinamid aus 2-Amino-5-chlorpyridin und 2-Chlornicotinoylchlorid hergestellt.
B. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-2-[(1-isopropylpiperidin-4-yl)methylamino]pyridin-3-carboxamidhydrochlorid
Eine Lösung aus 0,57 g an 2-Chlor-N-(5-chlorpyridin-2-yl)nicotinamid in 7 ml Pyridin wird mit 0,64 g an 1-Isopropylpiperidin-4-methylamin behandelt und das Gemisch wird am Rückfluß für 68 h erhitzt. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt und dann mit 1 ml an 5 N NaOH behandelt und zur Trockne eingedampft. Der EtOH Extrakt wird durch Radialchromatographie (10% MeOH-CHCl₃, 1%NH₄OH) unter Bildung von 0,25 g der freien Base gereinigt. Das HCl Salz wird als ein amorpher Schaum (0,21 g, 19%) isoliert.
¹H NMR
IS-MS, m/e 388 (m + 1)
Analyse für C₂₀H₂₆ClN₅O × 3HCl × 1,75H₂O
Berechnet: C 45,42, H 6,19, N 13,24. Gefunden: C 45,64, H 5,97, N 12,85.
Beispiel 24 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]-6-methylpyridin-2-carboxamidhydrochlorid
A. 3-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-6-methylpyridin-2-carboxamid
Mittels Verfahren die im wesentlichen zu denen in Beispiel 2-A beschriebenen äquivalent sind, wird 3-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-6-methylpyridin-2-carboxamid (16 g, 46%) aus 3-Amino-2-chlor-6-methylpyridin und 2-Amino-5-chlorpyridin hergestellt.
¹H NMR
FIA-MS, m/e 263,1 (m + 1)
B. 3-[(1-tert-Butoxycarbonylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-6-methylpyridin-2-carboxamid
Mittels Verfahren die im wesentlichen zu denen in Beispiel 6-A beschriebenen äquivalent sind, wird 3-[(1-tert-Butoxycarbonylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-6-methylpyridin-2-carboxand (1,26 g, 93%) aus 3-Amino-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-6-methylpyridin-2-carboxamid (0,75 g, 2,85 mmol) und N-Boc-isonipecotinsäure hergestellt. Das rohe Produkt wird durch Chromatographie über Silicagel unter Elution mit einem schrittweisen Gradienten von 5–15% Ethylacetat in Dichlormethan gereinigt.
¹H NMR
IS-MS, m/e 474,1 (m + 1), 472,3 (m – 1)
Analyse für C₂₃H₂₈ClN₅O₄:
Berechnet: C 58,29, H 5,95, N 14,78. Gefunden: C 58,01, H 5,90, N 14,90.
C. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-6-methyl-3-[(4-piperidinyl-carbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidtrifluoracetat
Zu einer gerührten Lösung aus 3-[(1-tert-Butoxycarbonylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]-N-(5-chlorpyridin-2-yl)-6-methylpyridin-2-carboxamid (0,88 g, 1,86 mmol) und Anisol (1,0 ml) in Dichlormethan (40 ml) wird TFA (3,6 ml) gegeben. Nach dem Rühren für 4 h wird das Lösemittel im Vakuum entfernt und der Rückstand wird unter kräftigem Rühren in Diethylether suspendiert. Nach 30 min wird der Feststoff filtriert, mehrmals mit Diethylether gewaschen und im Vakuum unter Bildung eines weißen Feststoffs (0,90 g, 99%) getrocknet.
¹H NMR IS-MS, m/e 374,1 (m + 1), 372,1 (m – 1)
Analyse für C₁₈H₂₀ClN₅O₂ × 1,2C₂HF₃O₂ × 1,2H₂O:
Berechnet: C 46,03, H 4,47, N 13,16, F 12,85. Gefunden: C 46,21, H 4,08, N 12,97, F 12,36.
D. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino]-6-methylpyridin-2-carboxamidhydrochlorid
Zu einer gerührten Suspension aus N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-6-methyl-3-[(4-piperidinylcarbonyl)amino]pyridin-2-carboxamidtrifluoracetat (0,75 g, 1,54 mmol) in Methanol (11 ml) wird Aceton (11 ml), gefolgt von Essigsäure (0,45 ml, 7,86 mmol) und dann Natriumcyanohydrid (0,51 g, 7,7 mmol) gegeben. Nach dem Rühren über Nacht wird die Lösung mit einer gesättigten wäßrigen Ammoniumchloridlösung behandelt, konzentriert und zwischen Dichlormethan und gesättigtem wäßrigem Natriumbicarbonat aufgeteilt. Die organische Phase wird mit Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und konzentriert. Das rohe Produkt wird durch Chromatographie über Silicagel unter Elution mit einem schrittweisen Gradienten von 0–10% einer 2 M Lösung aus Ammoniak/Methanol in Dichlormethan gereinigt. Zu einer gerührten Lösung des gereinigten Produkts in Dichlormethan wird 1,0 N Chlorwasserstoffsäure in Diethylether gegeben, bis sich ein Niederschlag bildet. Das Gemisch wird unter Bildung von 0,28 g (40%) eines weißen Feststoffs filtriert.
¹H NMR
IS-MS, m/e 416,2 (m + 1), 414,2 (m – 1)
Analyse für C₂₁H₂₆ClN₅O₂ × 1,8HCl × 0,4H₂O:
Berechnet: C 51,60, H 5,90, N 14,33, Cl 20,31. Gefunden: C 51,88, H 5,73, N 14,25, Cl 20,54.
Beispiel 25 Herstellung von N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyrazin-2-carboxamid
A. 2-Chlor-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]-pyrazin
Ein Gemisch aus 2,3-Dichlorpyrazin (5,0 g, 32 mmol), 4-Aminomethyl-1-isopropylpiperidin (5,3 g, 34 mmol) und Pyridin (3 ml) in trockenem Toluol (50 ml) wird bei 60°C für 19 h erhitzt. Das abgekühlte Gemisch wird filtriert und das Filtrat wird eingedampft. Dieser Rückstand wird aus Ether unter Bildung von 6,0 g des rohen Produkts erneut filtriert. Eine Blitzsäulenreinigung mit 10% MeOH-CHCl₃, 1% NH₄OH ergibt 2,9 g (33%) des gewünschten Produkts.
B. N-(5-Chlorpyridin-2-yl)-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyrazin-2-carboxamid
Ein Carbonylierungsgemisch aus 2-Chlor-3-[(1-isopropylpiperidin-4-ylmethyl)amino]pyrazin (1,37 g, 5,10 mmol), 2-Amino-5-chlorpyridin (4,1 g 3,19 mmol), 1,3-Bis(diphenylphosphino)propan (1,3 g, 3,15 mmol), Palladiumacetat (0,24 g, 1,1 mmol) und Triethylamin (2,2 g, 21,7 mmol) in Acetonitril wird unter einer 54,4 bar Kohlenmonoxidatmosphäre bei 100°C für 72 h erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert und unter Bildung von 6,74 g eines rohen Produkts eingedampft. Nachdem es mittels NaOH basisch gemacht wurde, erfolgt eine Extraktion mit Ethylacetat und eine Eindampfung der organischen Phase und der Rückstand wird durch Blitzsäulenchromatographie über Silicagel unter Elution mit 2,5% MeOH-CHCl₃, 0,25% NH₄OH unter Bildung von 1,43 g (72%) des gewünschten Produkts gereinigt.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) d 10,40 (s, 1H), 8,59, (s, 1H), 8,28 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,30 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,70 (dd, J = 6,2 Hz, 1H), 3,45 (dd, J = 6,2 Hz, 2H), 2,96 (d, J = 2,7 Hz, 2H), 2,78 (m, 1H), 2,20 (m, 2H), 1,88 (s, 1H), 1,84 (s, 1H), 1,66 (m, 1H), 1,45 (m, 2H), 1,08 (d, J = 6,2 Hz, 6H). IS-MS, m/e = 389,3 (m + 1)
Analyse für C₁₉H₂₅ClN₆O × 0,25H₂O:
Berechnet. C 58,00, H 6,53, N 21,36. Gefunden: C 58,19, H 6,36, N 20,84.

Claims

Verbindung der Formel I
(oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon), worin A³, A⁴, A⁵ und A⁶ zusammen mit den zwei Kohlenstoffen, an die sie gebunden sind, einen substituierten, heteroaromatischen Ring bilden, worin (a) eines von A³, A⁴, A⁵ und A⁶ für N steht und die anderen jeweils für CR³, CR⁴, CR⁵ oder CR⁶ stehen, oder (b) zwei nicht-benachbarte Reste von A³, A⁴, A⁵ und A⁶ jeweils für N stehen und jedes der anderen jeweils für CR³, CR⁴, CR⁵ oder CR⁶ steht, worin jedes von R³, R⁴, R⁵ und R⁶ unabhängig für Wasserstoff oder Methyl steht, oder eines von R³, R⁴, R⁵ und R⁶ an einen Kohlenstoff gebunden ist, der nicht an ein N-Atom gebunden ist, für Chlor steht und die anderen für Wasserstoff stehen, L¹ für -CO-NH- steht, so daß -L¹ -Q¹ für -CO-NH-Q¹ steht, Q¹ für 2-Pyridinyl (das einen Methyl-, Methoxy-, Methylthio-, Fluor- oder Chlorsubstituenten an der Position 5 trägt), 3-Pyridinyl (das einen Methyl-, Fluor- oder Chlorsubstituenten an der Position 6 trägt), 2-Pyrimidinyl (das einen Methyl-, Fluro- oder Chlorsubstituenten an der Position 5 trägt), 3-Pyridazinyl (das einen Methyl-, Fluor- oder Chlorsubstituenten an der Position 6 trägt) oder 2-Benzothiazolyl (das einen Methyl-, Fluor-, Chlor- oder Bromsubstituenten an der Position 6 trägt) steht, R² für -L²-Q² steht, worin -L²- für -NH-CO-, -NH-CO-X-, -NH-CO-O-X-, -NH-CO-NH-X- oder -NH-CH₂- steht und Q² für Q^2A, Q^2B, Q^2C, Q^2D, Q^2E oder Q^2F steht, worin X für eine Einfachbindung oder Methylen steht und die Bedeutungen für L² und Q² zusammen ausgewählt sind aus -NH-CO-X-Q^2A, -NH-CO-O-X-Q^2A, -NH-CO-NH-X-Q^2A, -NH-CH₂-Q^2A, -NH-CO-X-Q^2B, -NH-CO-X-Q^2C, -NH-CO-X-Q^2D, -NH-CO-X-Q^2E und -NH-CO-X-Q^2F steht, worin Q^2A steht für (L2, an das es gebunden ist, wird auch gezeigt)
worin jedes von m und n unabhängig für 0 oder 1 steht und R^2A für Wasserstoff, t-Butyl, Methansulfonyl, -CHR^YR^Z, -CHR^WR^X oder 4-Pyridinyl steht (das unsubstituiert ist oder einen Substituenten R^V an der Position 2 oder 3 trägt), worin R^V für Methyl, Hydroxymethyl, (C₁-C₂)Alkoxycarbonyl, Cyano, Carbamoyl, Thiocarbamoyl oder N-Hydroxyamidino steht, jedes von R^W und R^X unabhängig für Wasserstoff oder normales C₁-C₃Alkyl steht oder -CHR^WR^X für 2-Indanyl oder folgendes steht (wobei der Stickstoff an den es gebunden ist, gezeigt wird)
worin T für eine Einfachbindung oder Methylen steht und U für Methylen, Ethylen, Oxy, -S(O)_q- (worin q für 0, 1 oder 2 steht) oder Imino steht (das einen Methylsubstituenten tragen kann) oder T für Ethan-1,1-diyl steht und U für eine Einfachbindung oder Methylen steht, R^y für Wasserstoff oder Methyl steht, und R^z steht für Isopropyl, t-Butyl, C₃-C₆Cycloalkyl, Phenyl (das unsubstituiert ist oder einen oder mehrere Substituenten trägt, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, Methyl, Methoxy und Hydroxy), 4-Chinolinyl oder Heteroayl (wobei Heteroaryl ein fünfgliedriger, aromatischer Ring ist, der ein bis vier Heteroatome umfaßt, ausgewählt aus Schwefel, Sauerstoff und Stickstoff oder ein sechsghedriger aromatischer Ring ist, der ein bis drei Stickstoffatome umfaßt, worin das Heteroaryl an den Kohlenstoff gebunden ist und einen oder mehrere Methylsubstituenten am Kohlenstoff oder am Stickstoff tragen kann), Q^2B für 1-Piperazinyl steht, das an der Position 4 die Gruppe R^2A trägt (wie oben definiert), Q^2C für 3,4-Didehydropiperidin-4-yl steht, das an der Position 1 die Gruppe R^2A trägt (wie oben definiert), Q^2D für Cyclohexyl steht, das an der Position 4 die Gruppe -NR^sR^t trägt, worin jedes von R^s und R^t unabhängig für Wasserstoff oder Methyl steht oder R^s und R^t zusammen für Trimethylen oder Tetramethylen stehen, Q^2E für 1-Piperidinyl steht, das an der Position 4 die Gruppe -NR^sR^t trägt (wie oben definiert), und Q^2F für folgendes steht (wobei L² gezeigt ist, an das es gebunden ist)
worin R^o für Wasserstoff, Halogen, C₁-C₄Alkyl, Hydroxy, C₁-C₄Alkoxy, Benzyloxy oder C₁-C₄Alkylthio steht und R^p für 1-Hydroxyethyl, 1-Hydroxy-1-methylethyl, 1-Methoxy-1-methylethyl, 4-Piperidinyl, 4-Pyridinyl, Dimethylaminosulfonyl oder -7-R^q steht, worin J für eine Einfachbindung, Methylen, Carbonyl, Oxy, -S(O)_q- (worin q für 0, 1 oder 2 steht) oder -NR^r- steht (worin R^r für Wasserstoff oder Methyl steht) und R^q für C₁-C₆Alkyl, Phenyl, 3-Pyridyl oder 4-Pyridyl steht.
Verbindung nach Anspruch 1, worin Halogen für Fluor, Chlor, Brom oder Iod steht, C₁-C₂Alkyl für Methyl oder Ethyl steht, normales C₁-C₃Alkyl für Methyl, Ethyl oder Propyl steht, C₁-C₄Alkyl für Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl oder t-Butyl steht, C₁-C₆Alkyl für Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Pentyl oder Hexyl steht, C₃-C₆Cycloalkyl für Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl oder Cyclohexyl steht.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, worin Q¹ für 5-Chlorpyridin-2-yl oder 6-Chlorpyridazin-3-yl steht.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1–3, worin R² für (1-Isopropylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino, (1-Cyclohexylpiperidin-4-ylcarbonyl)amino, [1-(Tetrahydropyran-4-yl)-piperidin-4-ylcarbonyl)amino oder [1-(4-Pyridinyl)-piperidin-4-ylmethyl)amino steht.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1–4, worin A³ für N steht und jedes von A⁴–A⁶ für CR⁴–CR⁶ steht, worin jedes von R⁴–R⁶ für Wasserstoff steht oder R⁴ und R⁶ jeweils für Wasserstoff stehen und R⁵ für Chlor steht.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1–4, worin A⁶ für N steht und jedes von A³–A⁵ für CR³–CR⁵ steht, worin jedes von R³–R⁵ für Wasserstoff steht und R³ und R⁴ jeweils für Wasserstoff stehen und R⁵für Methyl steht.
Pharmazeutisch annehmbares Salz einer Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1–6, das ein Säureadditionssalz ist, das aus einer basischen Verbindung der Formel I und einer Säure hergestellt wurde, die ein pharmazeutisch annehmbares Anion bereitstellt, oder ein Salz, das aus einer sauren Verbindung der Formel I und einer Base hergestellt wurde, die ein pharmazeutisch annehmbares Kation bereitstellt.
Pharmazeutische Formulierung, die zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff eine neue Verbindung der Formel I (oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon) nach einem der Ansprüche 1–7 enthält.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I (oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon) nach einer der obigen Beschreibungen, ausgewählt aus (A) für eine Verbindung der Formel I, worin -L²-Q² für -NH-CO-Q², -NH-CO-X-Q², -NH-CO-O-X-Q² oder -NH-CO-NH-X-Q² steht, Acylierung eines Amins der Formel II
unter Verwendung einer entsprechenden Säure der Formel HO-CO-Q², HO-CO-X-Q², HO-CO-O-X-Q²- oder HO-CO-NH-X-Q² oder eines aktivierten Derivats hiervon, (B) für eine Verbindung der Formel I, worin -L²-Q² für -NH-CH₂-Q² steht, Substitution der Gruppe Y^a einer Verbindung der Formel III
worin Y^a für eine herkömmliche Abgangsgruppe für eine nukleophile, aromatische Substitution steht, mit einem Amin der Formel NH₂-CH₂-Q², (C) Acylierung eines Amins der Formel HN₂-Q¹ oder eines deprotonierten Derivats hiervon mit einer Säure der Formel IV oder eines aktivierten Derivats hiervon
(D) für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CH₂-Q^2A steht, Alkylierung eines Amins der Formel II direkt mittels einer Verbindung der Formel Y-CH₂-Q^2A oder indirekt durch reduktive Alkylierung mittels eines Aldehyds der Formel Q^2A-CHO, (E) für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CO-O-X-Q^2A oder -NH-CO-NH-X-Q^2A steht, Acylierung eines Alkohols der Formel HO-X-Q^2A oder eines Amins der Formel NH₂-X-Q^2A mit einem aktivierten Derivat einer Säure der Formel VI
(F) für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CO-X-Q^2B steht, worin X für eine Einfachbindung steht, Acylierung eines Piperazins der Formel H-Q^2B an der Position 1 mittels eines aktivierten Derivats einer Säure der Formel VI, (G) für eine Verbindung der Formel I, worin R² für -NH-CO-X-Q^2B steht, worin X für Methylen steht, Alkylierung eines Piperazins der Formel H-Q^2B an der Position 1 unter Verwendung eines Alkylierungsmittels der Formel VII
worin Y für eine Abgangsgruppe steht, (H) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für Methylsulfonyl steht, Substitution des Aminostickstoffs einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^2A für Wasserstoff steht mittels eines aktivierten Derivats der Methansulfonsäure, (I) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für -CHR^yR^z oder -CHR^wR^x steht, Alkylierung des Aminostickstoffs einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^2A für Wasserstoff steht mittels eines Alkylierungsmittels der Formel Y-CHR^yR^z oder Y-CHR^wR^x oder reduktive Alkylierung des Amins mittels einer Verbindung der Formel R^y-CO-R^z oder R^w-CO-R^x, (J) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht (das unsubstituiert ist oder einen Substituenten R^v an der Position 2 oder 3 trägt), Substitution des Aminostickstoffs einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^2A für Wasserstoff steht mittels eines entsprechenden Pyridinreagenzes, das an der Position 4 eine Abgangsgruppe Y trägt, (K) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht, Veresterung einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Carboxy steht, (L) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Hydroxymethyl steht, Reduktion des Esters einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht, (M) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Carbamoyl steht, Amidierung des Esters einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht, (N) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Thiocarbamoyl steht, Zugabe von H₂S zum Nitril einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Cyano steht, (O) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für N-Hydroxyamidino steht, Zugabe von HN₂OH zum Nitril einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Cyano steht, (P) für eine Verbindung der Formel I, worin R^2A für 4-Pyridinyl steht, worin R^v für Carboxy steht, Zersetzung des Esters einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^v für Alkoxycarbonyl steht, (Q) für eine Verbindung der Formel I, worin -NR^sR^t nicht für Amino steht, Alkylierung einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin -NR^sR^t für Amino steht, mittels eines herkömmlichen Verfahrens, (R) für eine Verbindung der Formel I, die -NR^sR^t trägt, reduktive Alkylierung von H-NR^sR^t mittels einer entsprechenden Verbindung, worin aber der Kohlenstoff der die -NR^sR^t Gruppe tragen muß, eine Oxogruppe trägt, (S) für eine Verbindung der Formel I, worin R^p für 1-Hydroxy-1-methylethyl steht, Anbindung einer Methylgruppe an die Carbonylgruppe einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^p für Acetyl steht, mittels eines Organometallreagenzes, (T) für eine Verbindung der Formel I, worin R^p für 1-Methoxy-1-methylethyl steht, Behandlung einer entsprechenden Verbindung der Formel I, worin R^p für 1-Hydroxy-1-methylethyl steht, mit Methanol und einem Säurekatalysator, wonach für jedes der obigen Verfahren, wenn eine funktionelle Gruppe mittels einer Schutzgruppe geschützt wird, die Schutzgruppe entfernt wird, wonach für jedes der obigen Verfahren, wenn ein pharmazeutisch annehmbares Salz einer Verbindung der Formel I erforderlich ist, es durch Umsetzung der basischen Form einer basischen Verbindung der Formel I mit einer Säure, die ein physiologisch annehmbares Gegenion liefert oder der sauren Form einer sauren Verbindung der Formel I mit einer Base, die ein physiologisch annehmbares Gegenion liefert oder durch jedes andere herkömmliche Verfahren erhalten wird, und worin, falls nichts anderes angegeben ist, A³–A⁶, L¹, Q¹ und R² die in Anspruch 1 definierten Bedeutungen haben.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung des Faktors Xa bei einem Säuger.