DE2202613C3

DE2202613C3 - Verfahren zur Herstellung von Peptiden

Info

Publication number: DE2202613C3
Application number: DE2202613A
Authority: DE
Inventors: Rolf Dipl.Chem. Dr. 6000 Frankfurt Geiger; Wolfgang Dipl.-Chem. Dr. 6239 Langenhain Koenig; Hans Dipl.-Chem. Dr. 6232 Bad Soden Wissmann
Original assignee: Farbwerke Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1972-01-20
Filing date: 1972-01-20
Publication date: 1974-06-20
Also published as: DE2202613B2; US3872074A; DE2202613A1

Description

V— N —CH-C

O \ H

If I ;

O \ (III)

(H) ■ν — cn — c — In — ch — c

-CK-C —O —R

in der V eine in der Peptidchemie übliche Aminoschutzgruppe oder den Pyroglutamylrest, Y einen niederen Alkylresl. der gegebenenfalls verzweigt und/oder durch erforderlichenfalls zweckmäßig ₍₅ geschützte OH-. NH,- SH_r COOH-. CONH₂, Guanidino-. Aryl-. Imidazoyl- oder Indolyireste substituiert sein kann, bedeutet, wobei die Gruppe — NH — CHY — auch den Pyrrolidinyl-Rest bedeuten kann. R einen Di-. Tri-.

in der Y und der — NH — CHY-Rest die obige Bedeutung haben und m₂ für die Zahlen 0 bis größenordnungsmäßig 500 steht und W eine Hydroxygruppe. O-AIkyl. O-Aralkyl, eine gegebenenfalls durch Alkyl. Aralkyl oder Aryl substituierte Aminogruppe oder einen ester- oder amidartig gebundenen polymeren Träger bedeutet in Gegenwart einer heterocyclischen Verbindung als Katalysator, wobei man aus dem erhaltenen geschützten Peptid der Formel IV

Y OHY O

! i: I , f

N — CH — C — N - CH - C-

(IVi

gegebenenfalls die Schutzgruppen ganz oder *eilweise in an sich bekannter Weise abspaltet, d u durch gekennzeichnet daß man eine Verbindung der alluemeinen Formel I

N OH

III

in der X die Gruppen ( O. C - S oder N bedei .t und in der X und N Glieder eines gegebenen!affs an einen Ben/olkern anelherleii und oder 1 oder 2 weitere Heteroatome enthaltenden ^s bis ftühe«lrigtfn. gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ringes sind und deren pK-Wert /wischen '.⁷ und 4,2 liegt, der in 0.5 m Lösung im I o^ungsiwtteigemisch Diäthylenglykoldimeihvkilhct W.isser im Verhältnis 6 4 bei 30 C gemessen wird, /.uset/t.

/ur Herstellung von Peptiden wcrucn oft mit gutem rfolg die stark aktivierten Lster von N-Acvlaminosatircn. wie / B N-H>dro\>succinimid- (J Amer. (hem Soc 86 I 1964]. S iXVJi. I Hydro\ybcn/otna/oi-li'hcm Ber iui j iv^Ti; j. S ⁷XS|oder 3-H>tiii>\y-4-ovo-3.4-dihydroben/olria/ineNter (Cliem Ber Ill3 [1970]. S 2< >U| verwendet Diese stark aktivierten f-ster lassen sich jedoch nicht in allen lallen kristallin und m da gcfordericn Reinheit hersleJlcn. Audi sind sie reiativ unbeständig und können oft nicht lange gelagert werden Bessere Kristallisatioiiscigciischaftcn und juch größere Stabilität haben negativ substituierte Phcnjlester. wie/. B. p-Niirophcn>fester (C hem u. lud IO<5.S. ^ni.^AS-TnchlorphcioteMer (IIcIv Chim Acta 46 fl963]. S 1609). Pemaclilorphenylesler (Roc/niki C'hem. ^5 f 1961 j. S 15Vi| oder auch Z/i-Dichlor-l-nr.ro-pheinlesicr fAust J ('hem I !96K]. S 4T-¹I Dic-c f-.s'ler h.iben |edi>cli den Nachteil, daß bei der Svnlhcsc »terisch gehinderter Peptide die Reaktionsgeschwindigkeit stark zurückgeht und daraus oft tagelange Reaktionszer en resultieren. In extremen Fällen kommt es zu keiner Peptidbildung

Schon seit längerer Zeit wurde versucht, durch Zusätze verschiedener Art die etwas reaktu-nslrägen F.sier /u katalysieren. So wurden z.B. Imidazo! (Angew. Chpm. 74 [1962], S. 904. 75 [1963]. S. 2(Wi. 2-H>droxypyridm. 1.2,4-Tria/oI oder Pyrazolderivate MProc Chcm. Soc 1963. S 266: Rec. Trav. chim Pavs-Bas 84 [1965]. S. 213) /ur Esterkatalyse herange/ igen

/war verlief bis auf Imidazol bei den genannten Katalysatoren die Aminolyse der aktivierten Fster ohne Racemisierung, doch die Reaktionsgeschwindigkeit konnte nicht so erhöht werden, daß sich auch stark sterisch gehinderte Peptide glatt bilden.

Fs h.indeit sich hier also um schwache Katalysatoren, deren Wirkung schon von polaren, basischen Lösungsmitteln wie / B Dimetnylformamid erreicht wird Das hat /ur Folge, daß sie gerade in den bei der Synthese höherer Peptide meist verwendeten Lösungsmitteln keine weitere ReaktionsbescMcumgung mehr bewirken

Line Verbesserung brachte die Katalyse mit 2-Hvdro\vpvridiⁿ-Natriumsal/ (deutsche Offen Iegungsschnft 2 031 S26l Schon nach einer knappen Stunde kann man auch bei slerisch gehinderten Peptiden guie '\usneuieii ei/icicn !Jas N'uiiiunisii!/ lic-v Γ-Hydrovypuidius hat jedoch den Nachteil, daß es stark b.iMsch reagiert und bei den empfindlichen Peptidmolekulen Racemisierung bewirken k.inn Sn Xonnlc an JJjnd eine* g^chromalographisdici) Racemisicrungstests tatsächlich gefunden werden, daß das Nairiumsal/ des 2-Ilydroxypyridin.s raccmisiercnd wirkt

Fs wurde nun gefunden, daß die Aminolysc der aktivierten Ester vom Phcnylestertyp durch Zugabe saurei hi;terocycli.schcr N-Hydroxyvcrbindtingen mit einem pK-Wcrl /wischen 3.7 und 4.2 extrem beschleunigt wrd. so daß Peptidsynthcsen. die sonst tapehinge Ke.iktions/eilen benoiigen. in wenigen Minuten beendet sind

Der Vergleich der Halbwertszeiten bei der Synthese von Z-Val-cyclohexylamid aus molaren Mengen Z-VaI-ONp und Cyclohexylamin unter Zusatz der verschiedenen N-Hydroxyvert-ndungen mit den pK-Werten dieser Verbindungen zeigt die vom pK-Wert abhängige katalylische Wirkung der N-Hy droxyverbindungen besonders gut (s. Tab. 1, experimenteller Teil).

Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstellung von Peptiden durch Umsetzung einer geschützten Aminosäure oder eines geschützten Peptids der Formel II

(Η— Y O \ H

Ii I! ί

-(N-CH-C-J-N-

V-(N-CH-C-J-N-CH-C-O-R

in der V eine in der Peptidchemie übliche Aminoschutzgruppe oder den Pyroglutamylrest. Y einen niederen Alkylrest, der gegebenenfalls verzweigt und oder durch erforderlichenfalls zweckmäßig eeschützte Oli -, NH,-, SH, COOH-. CONH,.

Guanidino-. Aryl-, imidazoyl- oder Indolylresie substituiert sein kann, bedeutet, wobei die Gruppe — NH-CHY- 'dixc.h den Pyrrolidinyl-Rest bedeuten kann, R einen Di-, Tri-, Tetra- cder Pentachlorphenyl-. einen Nitrophenyl- oder einen Chlor-niircphenyi-rest darstellt und Pi₁ fur eine Zahl von etwa 0 bis 10 slehu mit gegebenenfalls geschützten Aminosäuren oder Pepiiden der allgemeinen Formel III

HY O (H Y O \ (III)

Ii Ii I ι it

H — N — CH — C —(Ν — CH — C - J„, VV

in der Y und der — NH — CHY-Rest die obige Be deutung haben un> % Tür die Zahlen 0 bis größencrdnun^smäßig 500 steht und VV eine Hydroxysruppe. O-A!kyl, O-Aralkyl, c ι gegebenenfalls durch Alkyl-. Aralkyl oder Aryl substituierte Aminogruppe oder einen ester- oder aniidartig gebundenen polymeren Trager bedeutet in Gegenwar' einer heterocyclischen Verbindung als K " Usalor, wobei man aus dem erhaltenen geschulten Pepud der Formel IV

V — N -~ CH — C b- N — CH — C — N

CH -C-N-CH

(iV)

gegebenenfalls die Schutzgruppen ganz oder teilweise in an sich bekannter Weise abspaltet, das d. 'lurch gekennzeichnet ist, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel I

/X

is

N-- OH

(I)

in der X die Gruppen C ~- O, C =■ S oder N -· bedeutet und in derX und N Gliedereines gegebenenfalls an einen Benzolkern arellierten und cder 1 oder 2 weitere Heteroatome enthaltenden 5- b's 6gliedrigcn gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ringes sind und deren pK-Wert /wischen 1,7 und 4.2 üesU. der in 0,5-ni Lösung in Lösungsmiltelgemisch Diathylcnglykoldimethylälher/Wasser im Verhältnis 6:4 bei 30 C gemessen wird, zusetzt.

Der pK-Werl der Zusatzstoffe ist entscheidend Fur d;is Gelingen des eriindungsgemäßen Verfahrens. Die ,iK -Messung ist. wie im experimentellen Teil beschrieben, durchzuführen. Ist der pK-Wert der Verbindun-{.· ti der I-ormel I in dum genannten System höher (wie beim N-Hydroxypipcridin) oder tiefer (wie beim l-H>droxy-6-nilro-ben/olrid/iiI). so sinkt die kalahtisclie Wirkung siark ab

Man arbeilet im allgemeinen mit Mengen von 0.1 bis etwa I Äquivalent N-Hydrnxjverbindung, kann jedoch auch geringere oder größere Mengen ein-SC I/'„'Π.

Zur Katalyse geeignete Verbindungen sind unter anderem l-Hydroxybcn/otria/olc. wie /. B. I-Hydroxy-5,6-dimeth\,lbcnzoiriazol. 1 -Hydroxy-5-methyl - ben/otria/ol. 1 - Hydroxy -(j- methyl - ben/otn azol. I ■ Hydroxy - 5-nicthoxy-bcn/otriazol. I-H>droxy-4-melhyl-benzotria/ol. I -Hydro\> -6-brcinben/.olria/ol. 1 - Hydrox} - 6 - uhlor - heii/niria/ol. 1 - Hydn» \y ■> - chlor · bi-n/otria/ol. cyclische Hy droxamsäurcn. wie 7. U. Pyridone l-Ify(inixy-2-|)vri-

40

50 don, l-Hydroxy-4 melhyl-2 pyridon (USA.-Patentschrift 2 540 218». 1-Hydroxy-4,6-dimethy 1-2-pyridon. l-HydroÄy-3Aö-tnmethyl-2-pyridon (belgische Patentschrift 73K 288). 'l-Hydroxy-3.5-dichior-4.6-dimethyI-2-pyridon. N-Hydroxysuccinimid oder 1-Hjdroxy - 2 - oxo - 2.3 - dihydroindole wie i - Hydroxy-6-chIor-2-oxo-2.3-dihydro-indol (J. Amer. ehem. Sue. 7S. S. 222. [1956]. cyclische Hydroxamsäuren mit Stickstoff als Heteroatom im Ring, wiez. B. 3-Hydrox}-4-oxo-3,4-dih}drochinazoün. 3-Hydroxy-2-methy!- 4 - oxo - 3.4 - dihydrochinazo^n. 3 - Hydroxy - 4 - oxo-3.4-dihydro-1.2.3-benzotriazin. 3-Hydroxy-4-oxo-2 - phenyl - 3.4 - dihydrochinazohn (J. Chem Soc. 1960. S. 2157 bis 2160). cyclische Hydioxamsäuren mit Sauerstoff oder Schwefel als Heteroatom im Ring, wie z. B. geeignet .substituierte 4-Hydroxy-3,4-dih} dro-3-oxo-I.4.2-beniOoxazine und 4-Hydroxy-3.4-dihydro-3-oxo-l,4.2-benzothia/ine, o<ler cyclische Ihiohydroxamsäuren. wie 7. B. 3-Hydrox>-4-meth\l-2.3-dihydro-th'azoI-2-thion können ebenfalls verwendet werdpn.

Als Suhstituenlen der Verbindungen der Forme! I kommen Alkyl- oder Aikoxv-resle mit 1 bis 2 C Atomen. Halogenatome, insbesondere Chlor, in I rage

Die Aminokomponcnle 111 kann entweder fm oder als SaI/ von MineraK/iiirf-n h/u. >j:irki_>n .wj.r schwachen organischen S..uren wie / B ploluolsulfcnsaure. TiiHunressigsäure oder hssigsaiire eingesei/i werden. liegt Sal/bildung mit starken Sauren voi. muÜ /ur 1 reise!/ung der Ammogruppc eine tertiäre organische Base wie Triethylamin oder N-Äthylmorpholin zugesetzt werden. Auch ein Zusatz, eines Salzes dieser N-Hydroxyvcrbmdungen. wie /. B das l-Hydroxybcn/otria/oi-Nalriuni-Sal/ ist möglich Hierbei wird gleich/eilig die/vminogruppc freigcset/l i\a-Sal/-Bildung) ui^u die zur Katalyse notwendige 1-Hvdioxyvcrbindung der Formel I gebildet

Als Schutzgruppe V kommen die in der Peptidchemie "cbrauchlichen N Schiitzgruppen 111 f-rage (νμ| Schröder-I.iibke. The Peptides. New York

und London, 10&5,·66). Bevorzugt verwendet man Aralkyloxycarbonyi- wie z. B. Benzyioxycarbonyl- oder tert.-Alkyloxycarbonyl- wie z. B. tert.-Butyloxycarbonyl-Resle.

Die OH-Funktion bei Serin, Threonin oder Tyrosin > kann ungeschützt bleiben. Sie kann aber auch durch geeignete Gruppen, wie z. B. tert.-Butyl- oder Benzylgruppen geschützt werden.

Zur Herstellung von Cystein- und Cystinpeptiden muß die SH-Funktion des Cysteins durch die in der Peptidchemie gebräuchlichen SH-Schuizgruppen geschürzt werden, oder man führt die Reaktion an symmetrischen oder asymmetrische i"vstinpeptiden durcn. die dann gegebeneijfal'-i zn ^ysteinpeptiden reduziert werden können. ,

W bedeutet in der Carboy.v' Il iiiiponentc der allgemeinen Formel III auch e>:~n polymeren Träger, uer ester- oder amidartig , it der Carboxylgruppe verbunden ist. Als geeignete Po'..mere kommen in Frage ein mit 1 bis 2% Divinyiben/ol v-rtiet/ies Polystyrol. >evernetzte Phenol-Formaldeh}dkondensationsprodukte.vernetztePhenoläther-Formaldehvdkondensationspiodukte. mit chemisch gebundenem Polystyrol beschichtete Kunsis'offoberflächen. Polyben/ylh: -/c oder phenv !substituiert" Glasoberflachen. Als geeig- ^ nete Hait^ruppen sinü ,. B. möglich: HalogenmethvJ-. Haiogenaceiy¹- oder Aminobenzhydryigruppen.

Die Kondensation wird zweckmäßig in Lösung ■-mitteln, wie beispielsweise Dimethylformamid. P methvlac· .amid. IetramethyiharnstofT oder Ph ι ithorsaurt· tns-dimetlv.! mid. gegebenenfalls unlei /(!•■at/ von is Wasssri durchgeführt Die Periktionstemperatur i..^ vorteilhaft r>ei O bis 40 C . bevorzugt bei Raumtemperatur.

Die Aufarbeit'ing gestaltet ich 'inäach. da ehe ;s erftndungsgcmä' n N-H}droxyverbi:dungen der allgemeinen Formei !. wie I-Hydroxvben/oiria/ol oder "* Hvdroxw-oxo-M-dihydrtschrpa'oli· sieh nit Γ ltnuiii- oder Kaliumbicarbona* oder mit Sod.,-losung voll, tandig ausschüttc'ui lassen Andere \ er- ^₀ bindungen. wie/. B. I Hvtroxy-2-pvridon oder 3-H\- rfi.>xv-4-iiitthv!-2.3-d!h\d^r«'-thi:i/i>l-2-tli!i->n i.^cr sich bereit in Wasser .nd lassen sich da<hirc .' ..rs leicht emfenen. Aus schwer Ir. »lich/M !Yptidi!» ·. iten kann man aueli nvt Isopropanol. Alkohol. Vk- tn I. ^ Tetrahydrofuran oder heißem Wasser die N-Hvdroxvve-bmdungen extrahieren Die bei der I mset/unn entstehenden Phei „'haben ähnliche !.ossmg .'igenschaften wie die N indroxvverbindungen ur 1 werden in der Regel zusammen mit diesen entfcnt .,.

Die weitere Reinigung erfolg' in πΗ'-c'ior Weise rvi niederen Per'iden / B ilurch VencilimL· /wischen einer organischen und enu-r wjßn:vi l'".ist\ diiii.ii l'mfal' .i oiLr I mkristailisicreri ai ίιίπ jieeigiie-ifn L os.ingsrnitiei. oder duuh ' "nro.nai ' 'phic. ζ Β. « an > Sephadex IH-Jd" Uernel/ies. teilweise vcnithcrlcs Dcxtran-Gcl> in einem orgiirnschen Lostitigsmiilcl oder einem organisch-wäßrigen Lösungsmiitelgemisch. gegebenenfalls auch als N ertcilungschromutographie in nur teilweise mischbaren Lösungsmittel- <«. Komponenten

Bcihöhere-n Pcpiidenoder Protein, n kanne«vorteil haft sein, die Reinigung crsl n;ic'i Abspaltung der Schutzgruppen viv/imchmen. 7. B. durch isoi'icl· trische Fällung. Kristallisation. Gcgcnslromveüct lung, Verteilunii^chromiitographie. Gclchromalographicoderpriipai.un. i lcktrophorcse

DieAbspaltiiügilei Schut/gruppcn h..ngt von dcri-n Natur ab und muß die Stabilität der Reaktionsprodukte der allgemeinen Formel III bzw. der diesen Verbindungen zugrunde liegenden Peptide berücksichtigen. Sie erfolgt in der aus der Pepüdchemie bekannten Weise (s. Schröder-Lübke, loc. cit.l.

Bei N-Acyl-peptid-aktiv estern bewirkt der Zusatz von N-Hydroxyverbindungen der allgemeinen Forme! I keine Steigerung der Racemisierung, wie an Hand des Racernisierungstestes, bekannt aus Cbem. Ber. 103 (1970), S. 788, im experimentellen Teil gezeigt wird (s. Tab. 2, experimenteller Teil). Sowohl beim Nitrophenyl- als auch beim Trichlorphenylester war in diesem Racemisierungstest mit und öhre Zusatz von N-Hydroxyverbindungen keine Racemisierung zu sehen. Anders verhielt "sich dagegen der Pentachiorphenylester, der ein zu etwa 80% racemisiertes ι ripeptid lieferte. Durch Zusatz von i-Hydroxybenzotna7öl konnte dieser starke Racemisierungsgrad um 26 auf 54% gesenkt werden. Bei Zusatz von 2-fiydroxvpvridin-Natriumsalz, war -"ie schon erwähnt, der umgekehrte Lffekt zu se-nen: Die Racemisierung wurde noch verstärkt.

Durch den Zusatz der erfindungsgcmaßen N-Hvdroxyverbindungen der allgemeinen Formel I kann ϊ'.λώ die sterische Hinderung, die manche Umsetzung mit aktivierten Estern scheitern läßt, übei«.:iden. so z.B. bei der Umsetzung von Nps-Isoleucinaktivestern mit H-rys(Trii-Ser-Lcu-OH. Die i:msel/un_;j von Nps-tle-OTcp mit H-C ys(Trt)-Ser-Leu-Oi: in Dimethyifonnamid läßt sich nicht zu Lnde verfolgen Nach 5 Wochen wurde der Versu.h abgebrochen, ü.i sich bereit* neben Endprodukt und Ausgangsmatenai mehrer. Zersetzungsprodukte dünnschichtchromat·» graphisch nachweisen ließen. Wurde dagegen /. H ! -HydroKvbenzotriazol, 3-Hydroxy-4-oxo- 3.4 dihydrochinazolin oder l-Hydrox>-2-pynüon /uge.setz; war die Reaktion schon nach 15 bis 20 Stunden bc endet (s Tab 3, experimenteller leili.

Die enorme katalytisch^ Kraft dieser N-Hydrovv verbindungen laßt sicti auch in der Festkorperpcpt:.; kondensation-methode r.utzb. r machen. Zum B-. spiel kann man narH ! Amer. (. hem Soc. W (I%6i S. 295?. aus N-gesci .i/ten Aminosäuren unu einem Poly-4-h>droxy-?-nitro-st>rol-harz die entspiechenden unlöslichen Ester herstellen, die dann mit löslie hen Aminoverbindungen /u den entsprechenden \nnden oder Peptiden reagieren. Durch Anwendung eier erfindungsrvmai'.en N Hydroxyverbindungen lassen sieh die Reaktionszeiten stark verkürzen. Auch Hei der abgewandelten Merriiield-} esikorper-Methmle. bei «ier lift N-geschül/tc Aminosäureaktivest-r wk- / H. Nitroph-nyiester eingesetzt verden. -„rhohen die erl!ni:uiiiiSf.'e^rn.ii>eii /umi/a -ir. \.;^Sv.;'. ν ^;",^! ·. ..■;!.·,.: /„■η ur Reaktionszeit

der;ule die Steigerung dei Ausbeute ist bei der I-'estkiiipermclhoue Γμγ den 1-rfolj! derartiger Synihoti'n ausschlaggebend.

Bei der Synthese eines sterisch stark gehinderten Pcntapeptids aus der Sequenz, der Insulin-A-Kette zeigt sich der Vorteil des erlinuungsgemäßcn Zusatzstoffes (V^l. Beispiel 16). Damit wurde erstmals eine Methode gefunden, durch welche die bei der Festkörpersynthese besonders hervortretende stetische Hinderung überwunden werden kann

Das neue Verfahren ist nicht nur bei kleineren Peptiden von Vorteil. Auch große Peptide, wie d:.s Ν¹'". N^lM-""-Bis-Boc-Insulin I Hoppe-Sehers / physiol Chern 3*2 |I97I]. S 7l. ein kompliziertes

·» in

^vvsii/e:·

Peptid aus 51 Aminosäuren, lassen »ich in wenigen Minuten glatt mit N-Acylaminosiitire und \-A*}lpeptidiiktivestcni /M den entsprechenden N"^r" '-N-An! aminosäure bzw. N'"^H-N-Acylpeptid-N^tA". \ "^/w Bis-Boc-Insulincn umscl/cn

Verbindunger der allgemeinen Formel 111 könnt·!! auch Proteine sein, derer» freie Aminogruppen gjn/ oder teilweise mit den Verbindungen der allgemeinen formel Il rcaineren I :i extrem .nt'uris'i. .-n j -' · kettsverhaltniv;en bewahrt sich / H *ilSnt>.* ·> mei In !formamid *ehr jriit i»c<u'ni'i I· /.B. (»elatme. die Ir-Iw öse i^kl'' ". -.·' Serumalbumin oder f ivm

N.ich Abspaltung tk-r Sih.,i. iruppc ReaklMnsprodiikle.nl»· VcrSinduntYndc· ι forme! H mit N ' N "·' Bi-M··* ln-i' . biologischer Wirkung ■■ ■.•τ.ιη-fi-rtt pin \ mi" Ί und tmmtJT'liipischr ι ,(.ί-ps..ti.n'■··> Herstellung neuer InMi'iti Ζυπι·νιΐιιη<νη sind P.eaktionsproduktr jij* VerNnilirven _tt ·· ,;., meinen formel Π mn Proteinen Κ··ητνη i\ci ··· τ < fall«· nach \bspal"jng der Sihut/urrpprn /·ιγ \ ■,■ . gung ion Anligenen ceyenuhcr d--n .Ιι·%«·η WrM dunecn der 1 <>frr.cl Il /ujrn:ni! lii-ir«n.i< π \nitr. Stiuren ntier Pepli-'cn «iistuTi

Als B.iusieinedir n.nh «1i-m it'ndunesL'cm.ilki \i· fahren hcrtriMellUn Ptpitde kommen jllc ir n.iiu>'·« v<irkf>mmc-nden i'eptid.-n jn/ütrefft/nden \nif» ·^ ■ rcn in ihrer ι - oder i'-l <^irm ir. I i.ilh \»i.·. .lit ^

· crtun v. h.··. A\^\\ ii .Iu f-ir

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\ rt.hr ι ι-! · kimn·./ itcn iiu

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ton .-Aminovi 'innere nur -vnthetisih -iithc \min«<s.iufcn. / M 3 4-tii'*x>-· -phefv.i.iünni
l.eh

D.is criir.dun<-'sjin.ifti torieilhalt ί'κ 1.ι«η·'.·η Rt

tieltn t .ilkn erf«'fiJtfli(..i w.i?:r, Λι-r.i.n .:i' a Miridlcn hcr.iht't mI/I ί)ιο .·>·' / H il^ hv%.*ii \i>rfcil fur die Nifuphen^lesieniethiHli »In- i'i. Πΐ'.·ι>( · vrwcn.idcn Piptuii.i»n«lenvifii>rsfT-t·^ d.ir-tel!i

\ "Γ .!ll»m r- t 'kr miiii.uii !et H₄r»tillunt l'epiidcn bedeulel d.f*. t:f ru! .' v»s:i-rr Λ· tr'. cintn Λίθινη 1 .-rt^hrm .i.i Λ. n. .·. ι /nUi diirLh.'w-sei/t·.· Men ε.· .uiVror-t ntli·. h · irK *- w·erden k..i;ir.

I » -1 (ernc ein ticv<»ndcrer V-iru-Ί <se^ iriind Vcrf.ihrer» .i.iR die Kaiif-.M. icmalicn N M>dri»xvverbindunct.!i \os ,iliem in lief» obcnsrenanntcn »I.iff. poiaren I «»viingsmrtitin >.<»il /in <«cituni: kommt, die Aeecn ihrer i.'ulen I ··- •.uncseipenschaiien allein tür tirr S*mhe«-c höherer Peptide in I rag»· kommen

i)ie nach diesem Verfahren hergesicllien IVptide können nach Abspaltung der S(.iiitiyuitip|n.ii .tiiherapeuticj Vcruendun.i» tinden oder als Zwischenprodukte /ur Hersiclluns anderer therapeutisch wertvoller Pcp'idc. wie/. H Oxytocin. V.isopressin. (iluc.tgor. Sccrctin. ACTH, rhyrncafcilonin. (jastnn. TRH. LR " .· Icr Insulin ein£«et/l werden.

In der Beschreibung und in den Beispielen werden die Aminosäuren nach den international gültigen Regeln abcekiir/t. Außerdem werden folgende Abküf/ungen verwendet

Hoc - tcrt.-Butyloxvcarbonyl-

Z Bcn/yloxycarbonyl-Spo-Xitrs'phrnvFsulfenyi-

OBu'	ten -Butylcstci
OMe	- Melhylestcr
OB/1	=■ Bcn/yhster
ONp	p-Nitrophcnyleslcr
Olcp	- 2.4,5-Trtchlnrphenybstcr
O Pep	l'entacltftirplienyk'Ster
OSu	* N'-Hydrotysuccinirtiidestcr
In	- Triiyl-
Hu	UTl BiHvI
Μ'· ι	*■1 4 I)im< lh.« ν η n.-f'.·- ν**
• H \	ι ι. !ulic \\ i»T«i

i f-ι

I)₁- ii.-t I (.rim <··«/-ιΐ Κ· «ti r s»iiiItcM· n'ii / Vi'ii ¹IIhIJtI-ImH' ■,,- m.'i.ifer Vleni!if) / V .|l '■ t\p ,mit ( i.l)<h-A«l.i:nin uiilrr /js.il/ *ei siliuMtfii f \ Hv-irox · ■ ,-''mikI rriiii η uttl dir M¹Ii₁Hi Ciftkeil *ift-r · ;.ilbweris/fH v-irn pk Wc'' .'er N II* drotv .ι 'hin

l I esllcaun,: dr> H.dbwct*/. ii

I o>fiM<|i iilohtxv'amm

(» s fiMol p- Nnrnphenol und
ί.ΐ) γΛ1(»; \-Hvdro\\tcrbindune
pi- ml (*<mrthvlf"rmamid

II IHnMuI ρ S'itropheni»!
pr.« nit f'imethvlf.'fmamid

I «i«.une Mt I.OnMoI \-llvdrt*i\«crhindung
pro ml f>imcth^!formamid

Die I V-Kurven (Bereich '^· His M'niidcr Losungen I. II und IH werden mitfinandc »erblichen um die günstige Wellenlänge fu; die Messung des p- Nitrophenols herauszufinden Bei dieser Wellenlange wird die l'xtinktion gemessen Zu dem von I osung ! erhaltenen Wert werden >0°« dc» I
einer I o-unc von InMnI ZVaI-ONp und
Triethylamin pro ml I osungsmiHel hc der οίχ-π ccwahlten Wellenlänge addiert Hie Summe dieser beiden 5 xtinMioncn repräsentiert die ' xtinktion hei der sieh .i'e H.ilfte des Z V.il-ONp mit dem f vcfohex>lamm umgcsct/t hai

DjC l'V-Kurtcn wurden an anem ßcckpiann IK ΙΑ« Apparat bei 2! ( gemcvicn i?ie Subs.«an/cn waren m Dimciin(formamid

hl Messung der f

Zur kindischen Messung der llalhwcris/en i, ₇ wird eine I osung vors I nMoI Z-VaI-ONp. I nMol ί vclohexylamin und 1 nMol N-Mvdroxv\crhindung pro ml E ONiingsmitfel bei der unter a) bestimmten Wcllenl^njic gcntessen. Die Zeit, in ovt die unfcr ai fcsigeiegtc I xtinktionshohe erreicht wird, entspricht der Halbwertszeit der Reaktion.

c) Messung der pK-Werte in 0.5-m Lösung

iDiathvlcnelykoIdimcthylhiher Wasser wie 6:4)

bei 30 C

0.5 ηMo! werden in einer Mischung aus 6 ml DiäthyfcngiykoIdirnclhyläthcr.ZJmlO,! n-NaOH und i J mi Wasser gelöst und im Thermostat auf 30 C erwärmt. Mittels einer Einstab-Glaselektrode wird potentiometrisch der pH-Wert gemessen. Nach der Näherunasformel pH - pK = I ε « I - « ist für ,z = 03 : pK = pH.

Der i'bt-n gemessen, p'l V<en Me ι it ji> ■ Jen ph, Wen dieser Verbindung dar

dl !jbelle '

Vergleich der H<j|r**cr^f*/cr<.·'· x-i der Synthese *■ η ■ / Vdl-cyclnhcxylamjd au* molaren Menzel /VdI-ONp und ' yclohctv'amin m-i den pK-V. eru-n

N-Hvdrn«)Verbindungen

'ihn / ijvj i/

N ll.ii >ii

t-il.'ifi'nv 4 m<ib>!-6-is«>pr< >j>«i-

I 4-dihvdnn.hin.t/nlin
^l-M»dr«>x>-4-'m»-V4-dihvdrox*·

!-M»dr<>xv-14/» trirneihyf-

4.1 ! 4 H.

in 4/iy

I-Hj'ifxy-4 rneth>l-2 pyrtdon

'-Hvdrnxv-4-meihyl-2.'-dihydroxy-

ih «/'»i-2-thinn
I-Hvlroxv ' <-dtihl«»r-4/»-dimcthyl-

2-pvridiMi 4.0S

I-Hydf»xv -2-<n'> 2.1-dihydr·'

'M.hl'irindi'1 4.0^s

I ssigsaurc </um Vergleich ι 4.0^J.

S-H/droxv^tittintrnid 4.04

14«

1.' 1.« 4.0 1/

4.(P 2 I

-mdrmy •'-rffCihvl-bcn/i'tna/of , 4.0Γ 2.X

• flydrnxy-6-mcthi-xy-bcn/oina/ol 14.Of) 2.0 .(·

-If .druKj-i-metrOxy-ben/oirrazo! j 4.'X) ; 3.<i

! 4.00 3.0

'-1.4-dihjfdro- |

1.2 '-bcn/iitria/in 4.00

I-Hydroxy-6-brom beii/otrsa/o! 1.91

I-Hyrfroiy 6-thIor bcn/ot(i:i/ol _t 3.90

i-Hydraxy-S-chlor-ben/olria/ol '.X¹/

1 -1 Iydroxy-6-tnfluorrncthyiben/otna/ol . 3.~2

NMydroxy-S/j-dichior
ben/oiria/ol . . . . . j '.7

i-Hydroxy-ft-nnro-bcn/otnazol. > 3.5i sehr

Beispiel 2

Gaschromalographischer Racemisicrunsstest nach F- Wcyeand et al (Chcm. Ber. 99 [I966J.^WS. 1451 bis 1460: Chcm. Ber. 103 [!97O]. S. 788 bis 79gji

1. Herstellung der Ausgangsproduktc a) HBr-H-Phe-ONp

4^2 g Z-Phe-ONp werden in 10 ml Eisessig suspendiert. Dazu gibt man IO ml ges. HBr/Eisessig und rührt 1 Stunde bei Raumtemperatur. Danach fällt

18.0

8.0

10.6

n.y

Δλ*> Hjdrobrof lid mit \icl Äther aus „.id w.iM.'it gut mit Äther nach Ausbeute 3.5 g. Schmp 21(» bis

biHHr H Phc-OPcp

■V47 g Z Phc-OPcp werden analog fa behandelt Ausbeute 4.1 g. Schmp 205 C unter /erset/ung

O HBr · H Phe OTcp

J-^p / Phe OKp werden .m.il.ij: I j heh.iiidei" >·.ι·-Ν.ϋΐν 4.Γ c Svhmp Γ2ιΐ ι unte^r /erset/unj

di HiK 1 eu Pile ONp

.*-Wf> Bin. leu Oll lH.d werden in 1ssil\-n:i· gel >si Dli f -.-vigcMer wird m.t N.uriuni-ull.it iietr^ik net. eingeengt und 'jif Rucksta.id am H'.xl-v.iku.i:' jfeT'itknet D'*^f Rückstand wird in 2·'nil .ibM'luum fetrah^drufur.in geli'st und die ' >»*>iinμ ant I" ι

iL-kuhlt 1 nter Ruhren IaKl nun η up bei I in ic 1.2 TiI N-\thvlmi'rphi'iiii und · ^hlieiVrii! eine 1 iisung ·<ίι '.2"i: < iiU'rameisei's.iuteis.'bui\!· ester in wenig kaltem relr.ihvdr.'tur.in /tir-plen Vlan rührt K) Minuten bei 10 t ^ht a.tnn '.'^; _t HBi II Phe ONp/u und l.illi langs.-m eine I "«unt: v-in 1.2 ml V^thvlnvrph.'lin in ^; ■ v. ! leti.>ri\dr> > furan /iilropfcn. Man l'iit γηκΙι ! stunde bei 0 ( und I Stunde bei Rai'.ntempcratui n.u in uhren. N.iuiii *<·πί "viedcsthlag ab. engt da- I iliral ein und verrei'M den Rückstand mit Isoprtipaiiol Ausbeute '."*" c Schmp 150 bis 152 ( Nach I mkuNtallis.ition au-Isiipropanol Ausbeute '.1Og. Schmp I^S2 bis I^s« (. [■ι] '2.2 It - I. m nimethvlacelamidi

el Bot 1 eu Phe Ol'ep

Aus 1.97 jj But leu O||
morphohn und I.Hg IhIf
wurde analog Id das gemischte Atihwlnd hernest-lit. das analog Id mit 0> g HBr Il Phe OfVp und 0.9' ml N-Alhylmorpholin umgesel/i wuuie Ausbc'ite 1.15 g. Schmp 14> bis I4⁷ ~( Nach I mkristalli nation .ms Isopropanol Ausbeute 2.11 g. Sthnip Id' bis IM C f.i] - 29 1 (, I. in linnetlnlaee! am»! ι

fl Hoc I en Phe OI cp

Aus 2,3g Boc Leu Oll IM_:O. 1.1 ml N-AtInI-morphohn und 1.17 gChIoramcisensaiireiNobut)lestcr wurde analog Id das gemischte Anhydrid hergesielfi. das analog Id mit .'.6 g HBr Ii Phe OI ep und 1.1 ml N-Athylmorpholin umgesetzt wurde Ausbeute 3."* f. Schmp 143 bis 145 C NaJi l'mkrist.illisation aus Isopropanol: Ausbeute '.2g. Schmp !^O bi-IM C. [a] - 4S.4 U I. in Dimcthvlaect.imid)

Il Allgemeine Vorschrift /ur Hersiclliinc

von Boc Leu Phe VaI OBu' au= den Boc Leu Phe-Aktivestern

Zu einer Lösung von 105 ms (0.5 inMoi) HCI-H VaI OBu¹ in 2.5 mi 0.2-m N-Athylmorpholin Dimethylacetamid-Lösung gibt man den katalysierenden Zusatz (l-Hydroxybenzoiria/ol oder 2-Hydroxy-pyridin-Natriumsalz) und 0.5 inMol des entsprechenden Boc Leu - Phe-Aktivesters (250 ma Boc Leu Phe-ONp, 313 mg Boc Leu Phe O Pep. 279 mg Boc Leu-Phe OTcpj. Man laßt die in Tabelle 2 angegebene Zeit stehen, verdünnt mit 50 ml Essigesier,schüttelt die Essigesterlösung mit NaHCO₃-Lösung, KHSO^-Lösung, NalICO.,-1 ösung und

NaCI-Lösung aus. trocknet mit Natriumsulfat und engt ein.

Der Rückstand wird analog Chcm. üer. 103 (1970). S. 788 bis 79X und Chcm. Ikr. 0') (!966). S. 1451 bis 1460 partinlliydrolysicrt, irifluoracetylicrt und gaschromaloguphieri. Die Ergebnisse der gnschromatographischcn Rnamisierungsermilllung sind in 'Iabcllc 2 zusammcngcfii(.H.

III Tabelle 2

Raccinisicrungsuntcrsiichungcn bei der Synthese von Hoc Leu PIk- VaI OBu' aus Hot Leu Phc-Aktivuslcrn und Il VaI OBu¹ unter dem 1 influß von Acylierungskatalysalorcii

: Λι]ιιι* Kciiklitifi- ' .I)-PIlC j k.il.ih I /cn ι V.il

! silliif ι ^;

ONp
ONp

O'Tcp
OTcp

O Pep
O Pep

O Pep
OTcp

2-Hydroxy- j
pyridm-Na I

!-Hydroxy- j
bcn/olria/ol ι

1-Hydroxyben/otria/ol

2-Hydroxy- ι
pyndin-Na

l-llydioxybcn/otria/ol

I 70 Std ι

1.0 i I SId !

! i

1.0 I 5 Mm ·

3.7",,

o.i

1.0

¹ 5 Mm '

ι ;

I ι

j 70 Sid ι

j 1 SuI I

5 Mm. 1

¹ 70SId 1.0 ^l 1 SId

1.0

5Mm ' 27«,,

1.0 , 10 Mm. j

ι !

I 2-lly.lroxy-
^! pyridm j

j 2-Hydmxy- 1
j bcnzotria/ol

3-f lydroxy-4-oxo-3,4-dihydrochma/olin
3-IIydroxy- j 1.0 , 10 Mm. ■ , 2-mcthyl- !
J 4-oxo- ! i

3.4-dihydro- i i

china/olin
1-Hydroxy-2-pyndon

40".. 40",.

4 S

1.0 ' 10 Min. i

Beispiel 3

Synthese von Nps Hc-Cys(Trt) Scr Leu OH a) Herstellung der Nps-Ilc-aktivcster

Molare Mengen Nps-Isoleucin und Tnchlorphenol bzw. N-Hydroxysuccinimid werden in Essigeslcr bei 0⁰C mit einem leichten Überschuß Dicyclohcxyli.arbodnmid (DCQ umgesetzt. Man läßt t Stunde bei C'C, dann 3 Stunden bei Raumtemperatur rühren, saug= den Niederschlag ab und engt das Filtrat ein. De;" Hackstand wird aus Isopropanol umknstallisicrt.

Nps lic Olcp. Schmp. ¹JS bis «7 C". Nps lic OSu. Schmp 105 bis IOK C.

b) Nps lic Cvsllrtl Scr Leu OH

2.9 g (5 ir.Mol) Il C'ys(Tri) Scr Leu OH II,O (hergestellt nach Cliem Her. 103 [1970], S. 2039) und 815 mg (5mMol) t-llydrosy-5 Λ-dimcthyl-ncn/otriazol werden in 25 ml Dimethylformamid gelöst. Da/u cibt man 2.32 g (5mMoll Nps lic OTcp und IaIJt 15 Stunden bti Raumti-mper.itur stehen (Ν.κΐι dieser /eit konnu ti is Ausgangstripepiid nnhl mehr dtmnsithifhromat^crapliisth n.icliJi-vAK-sen werdt-ni i)..s Dimethvl!;irmamid wird im V akuum abdestilhcrt und der Rückstand mit N.ilMumhic.irrn'ndtlosiinjz verrieben Der Nicdi schlag wird abgesaugt und d.is liltrat MTwnrfen Dir Niederschlag wird im I ssigester gelost und mit KlISO₄I i>s.un« und W.isscr ausgeschüttelt, mit Natrium- ll.it gelroc'.net und eingeengt Der Rückstand wird mit ^;\ther verrieben Das Produkt ist .lmorph Ausbeute '.(> g lN2"n). [</]■ -- 23.5 Ii - I. in Dimethvlacctamid)

c) I'iiinn.schichichromatogr.iphi'iiHr t'bcrpriifüii}! ili-r Synthcs'· von Nps lic (ysilrti Scr 1 en OH

aus Nps lic OKp b/w Nps lie OSu

und II (ysi 1 Mi Sei 1 eu OH

unter Verwendung verschiedener

N-Hydriuyvcrhindungcn als Katalysator

/u einer Losung von 116.1 mg (0.2
H ( yslTrtl Scr [ eu OH H..O in 2 ml Dimethylformamid gibt man 0.2 inMoI der N-Hyiiroxvvefbmdung und 111 mg (0.22 mMoll Nps lic OUp b/w 8⁽λ2 mg 10.24 inVlölI Nps He < ?Su In verschiedenen Zcitdbst.inden wird em I ropfen ti-.-r Reaklionslosunp auf cmc Dünnschicht-Kicseliiclplatie (Merck. «Kiesclgel V 2^4<i| .lufiieirapcn Man l.iHt in einer Mischung Mcthylcr.^hlori.l Metii.inol wie S 2 lauten und cntwicke't mit Nmhydrin In der iabclle * sind die I rcebnisse dieser I ntcrsiichuni.· /usammengef.iBt

dl IaK-IIe ?

Synthese von Nps He CvsifrtJ Scr leu OH aus Nps lic OTcp b/w Nps He OSu und

H ( ys(Trt) Scr Leu OH unter Verwendung verschiedener N-Hydroxyvcrbindungen als Katalvsatorcn

OTcp OTcp OTcp

Is Ilvdrowv !biruiiing	L	3-Hydro.xy-4-oxo3.4-di-	*¹ ndc tief* Kr.ιϊ ι.τ**
	hydrochinazolin	nach 5 Wochen
	—	abgebrochen.
	1 -Hydroxybenzotriazol	da noch keine
	3-Hydroxy-4-oxo-3^4-di-	vollständige
	hydrochinazolin	Umsetzung
	3-Hydroxy-2-methyl-	festzustellen
4-oxo-3,4-dihydro-	war.
chinazoiiü	desgl.

desgl.
etwa 15 Std.
etwa 15 Sld.

etwa 7 Tage

IMcr

ΟΊ ep

OTcp

OTcp
OTcp

OTcp

N-llylroxwclhinilunj;

3-Hydr .»xy-4-oxo-2-phenyl-3,4-dihydrochinazolin

UHyiJr(>xy-5.6-dimethylbcn/oiria/ol

l-Hydroxy-2-pyr:d»>n
I-Hydroxy-4-methyl-2-pyndon

1-Hydroxy-2.4-dimet hy I-i 2-pyrid' η

t iulc der

etwa 7 Tage

etwa 20 SuI

etwa 2^ Sid.
c'wa 2< Std

etwa 4 Tage

H e ι s ρ . c ! 4

Synthese von / Pin· V.il OMe

a) Mil einem Äquivalent
1-Hydroxyben/oin.i/oI und / Phe OPep

/u einer lösung von 0.92 ρ (3.5 mMol) HC⁴I H VaI OMc. 072 ml N-Athylmorpholin und 675mg (5 mMoll 1-Hydioxybcn/otiia^o! in 10ml Dimethylformamid gibt man 2.⁷5 ρ (5 mMol) Z Phc OPcp. Man rührt 5 Minuten ?pgt im Hochvakuum z\n, verteilt den Rückstand /wischen 1 ssi.iicstcr und 2 n-Sodalnsung. ichütlclt Imal mit Y.! ISO₄-I ösung, 3mal mil 2 n-Sodalösung und Imal mit Wasser aus, trockne] mil Natriumsulfai. engt ein und vcrrciHi den Rückstand mit Pctroläthcr. \usbcuic 2.0.Sg. Schmp. 99 bis 104 C. Nach Umkrislallisation aus kssigester Pctrohilhcr: Ausbeute 1.7 h (X^o). Scnmp. 112 bis 114 C

b) Mit 0.1 Äquivalent
1 Hydroxyben/otria/ol und Z Phc OTtD

/u einer l.ösurm von 0.9"! «, (5,5 τιVlölI HClH VaI OMc. 0.72 ml N-/Uhylmorphohn und 67.5 mg (0.5 mMol) l-Hydroxybcn/otnazol in 10 ml Dimethylformamid gibt man 2,4 <z (5 mMol) 7 Phc OTcp. Man rührt 5 Minuten und arbeitet wie bei a) auf. Ausbeute 1.66 g (Sl¹O). Schmp. 11_ bis 114 C.

c) Mit einem Äquivalent l-Hydroxyben/otria/of-Nalriumsalz und Z Phe ONp

/u einer Lösung von 0^Q2 g (5.5 mMol) Hi 1 - H-VaI OMc ίηΊθ ml Dimethylformamid gibt man 865 mg {5,5 mMol) 1-Hydroxybcn/otria/ol-Nairiumsalz und 2.1 g (5 mMol) Z Phc ONp. Man rührt 5 Minuten und arbeitet w.e bei Versuch a) auf. Ausbeute 1,65 g (80%). Schmp i 16 C.

Beispiel 5

VaI OMe
0.92 ε (5.5 mMol)

Synthese von Z VaI

Zu einer Lösung von .. ...

HCI · H-VaI OMe in !0 ml Dimethylformamid gibt man 865 mg (5,5 mMol) i-Hydroxybenzo'riazol-Natriiimsalz und 1,87 g (5 mMol) Z-VaI-ONp. Man rührt 5 Minuten und arbeitet wie bei Beispiel 4a auf. Ausbeute 1,66 g (91%), Schmp. 108 bis 110^rC.

Beispiel 6

Synthese von
Z- Leu Glu(OBu') Asn(Mbh) Tyr(Bu')- OH

(Sequenz aus der liisulin-A-Kette)
I. Z Leu GIu(OBu¹) Asn(Mbh)-Tyr(Bu^!)-OH

Zu einer Lösung von 1.53 ^ (2 mMol) H GIu(OBu')-Asn(Mbh)-Tyr(Bu')-OH und 270 mg 1-Hvdrfixybc!i7oiri:i7ol (2 mMol) in 5 ml Dimethylformamid gibt man 1.5 g Z Leu OPcp (2.2 mMol). IaI¹I 10 Minuten stehen und engt im Hochvakuum ein. Der kucksland svud mit 2 n-Sodalösung verrieben. Die Sod.ilösung wird abdekantiert und der Rückstand mit Wasser verrieben. Nun wird abgesaugt und das I'iltergtu /wischen eine- 2.5%igen KHS0₄-Lösung und I-ssigester verteilt Die ^ssigeslerlösung wird getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther Petrolather (1:1) verrieben und abgesaugt. Ausbeute 1.8 g (89%). Schmp. 174 bis 176 C.

Diese Verbindung ist dünnschiehtchromatograplnsch identisch mit einer Probe, die analog mit Z I cu OSu hergestellt worden war. Die Reaktionszeit war 24 Stunden und die Ausbeute 84%

Zum gleichen I.rgcbnis gelangt man hei Verwendung von

a) 3-1 I\dro\\-4-oxo-3.4-dihydrochinazo'nn
bi i-Hydroxyö/vdimcihyl-bcn/otriazol oder
>:) von 1-1 Iydroxy-pyridon an Stelle des oben verwendeten 1-1 Iydroxyben/otria/ols.

11 I lerstellung der Ausgangssubslan/
II CtIu(OBu¹I Asn(Mbh) TyT(Bu¹) OH

al / AsniMbh) Tyr(Bu') OH

KKIg Z /vsn(Mbh) Tyr(Bu') OMc (0,138 Moll (Chem. Bcr. 103. [1970]. S. 2041 bis 2051) werden in 770 ml Dioxan und Γ00 ml Bei 37 C läßt man langsam

138 ml In-NaOH /utropfcn (i'hymolphthalein als Indikator). Nach beendeter Reaktion säuert man mit 300 ml 2 n-Zitronensäurc an. Das ausfallende Produkt wird abgesaugt und mit Wasser gewaschen. ^i₁ Aus Methanol Wasser wird umgcfällt. Ausbeute 88 c (90%). Schmp. 212 bis 213 C. [Vj = 4 7 '■> (r - f. in Dimethylformamid).

b) H Asn(Mbh) Tyr(Bu') OH

Durch eine Lösung von 87,5 g (0.123 Mol) Z Asn(Mbh) Tyr(Bu') OH in Eisessig, der etwas Pd(OH)₁, BaSO^-Katalysator zugesetzt" wird, leitet man so lange Wasserstoff, bis keine CO₂-Enlwicklung feststellbar ist. Man engt ein und verreibt den Rück-

<;<; stand gründlich mit gesättigter Natriumacctat-Lösung. Man saugt ab. trocknet über P₂O₅ und fällt aus Tetrahydrofuran Pctroläthcr um. Ausbeute 63.5 g (90%). Schmp. 207 bis 209'C. [.<] = +11,1 (<· = f. in F-.isessig).

c)Z GiU(OBu¹V-ASn(MbIiI-TVr(Bu')-OH

Zu einer Lösung von 63 g (0.109 Mol) H Asn(Mhh)-Tyr(Bu^l) OH in 250 ml Dimethylformamid gibt man bei Raumtemperatur 47.4 g ί.ς (0.109 Mol) Z-GIu(0Bu')-0Su und läßt 20 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Danach wird die Substanz mit Wasser ausgefällt über P₂O₅ getrocknet und aus Fssigester· Pctrolather umgclalll. Ausbeute

einer Mischung au··
J₀ Wasser suspendiert.

2 202 6

75.5 g (77%), Schilp. 166 bis 170" C O]₀ = +1.8 (r - J. in Diinethylformamid).

ά) Η CHu(OBu¹) AsnfMbh)-Tyr(Bu')-OH 74,7 g 183.3 mMoi)

Z GIu(OBu'* Asn(Mbh)-Tyr(Bu^l)-OH

werden in einer Mischung aus 400 ml Eisessig und 4öO mi Methanol geiost -nd wie bsi b) katalytisch hydriert und aufgearbeitet. Zur Reinigung wird die Substanz einmal mtt Wasser aufgekocht, abgesaugt und getrocknet. Durch Aufkochen mit Essigester kann die Substanz noch weiter sereinigt werden. Ausbeute 53.4 g (S4"_o(, Schmp. ~22! bis 223 C, [V] = +33.1" (c= 1. in Eisessig). is

Beispiel 7

Synthese '.on Z Gm GH Leu VaI NH,

«Sequenz aib> Secretini -"'

at Z Leu VaI NH₂

/ti cinei !..»suns von i»g HBr H VaI NH^ |66 mVfoi) in 'M^!mi Dimethylformamid gibt man .:> <W! μ l-Hydpvxvhen/oiria/o-!. 8.6 ml N-.-vthyimorpholin und H).H g (hOmVfol) Z Leu O Pep. Man fuhrt IO Minuten bei Raumtemperatur und eng? anschließend im Hoch-akuum ein Der Rückstand wird nacheinanJer mit 2 n-Sod.iU»sung_ Ά.ι-.μ.·γ ;<.-2.5'..iger KHS<V-L:>sunt: und Wasser verrührt, abgesaugt und hei >fi C iiner E*-O_; getrocknet. 21.3 g'm.S-.,ι

Zum «!eichen Fraehnis Eelansi man bei Verwe Ausbeute 2L8 g (90% L Schmp. IK4 bis 186'C [τ] - - 12.8* Xc = L in Dimethy!acetamid).

d) HCI - H-Gly-Lcu-Val-NH,

20.0 g (47_r6mMoI) Z-GIy-Leu-VaI-NH, «erden wie bei b) in 2Öö ml einer Methanol Dimethylformamid-Mischung {1:1} katalytisch hydriert und aufgearbeitet. Die Substanz ist etwas hygroskopisch und wird zur Reinigung <ius Methanoi Äther urageialit. Getrocknet wird über P, O^ und Paraffinschnitzel. Ausbeute 13.5 g {83%). Schmp. 209 bis 2ϊ ϊ C.

ei Z-GIn- GIy -Leu-VaI-NH,

Zu einer Losuna von 3.23 s ÜOmMo!} HCI - H GIy Leu · Vaf-NH₂. 1.3 πιΓ N-Äthyimorphohn und 135 g (10 rnMoI) 1-Hvdroxybenzoinazoi in 20 ml Dimethylformamid gibt man 4 g (10 mMoll 7. Gin ONp und läßt 10 Minuten stehen. F- fallt eine Gallerte aus Mit Äther wird \erdurir.i jrd die jUNtiefaüene Substanz abgesaugt. Nun -%.rd kurz vu·- trocknct unt! mit 2 n-So«ij'ösung ver.uhri Μιϊ Y\j%-sc·. Ki 1><^-Losung und Wasser wird gewesenen. über ?'-<». getrocknet <md mit ί ssigester aufi:ek.n.h; M,in υ·-" jui Raumi-.jiperatu'' abkühlen, saugt jh un i wiiNchi mit I ssjgesier und Pem-.1^ther nach Β-·ι —ti bis >(l t wird über P₂O. und Paraihn-i-him/d λ·- lpicknel \usbeute 5 s<9! <,(. Stnmp 242 His 244 ( f ■] 25.2 ;· - ! in i wesNigi.

Z'im üleichen f rsrebn-s L'ebnet man ix-, \'crw .1 .:iijil·

bi !-ί hdri'W-5 i'-dimelhv; ncn/.'lfi.:/··: .>.kr ei ·ι·η i-iivdri>\.-p>riiinn an Steile a.- .·'... .crwendeiert ι -H\drnx>lvn/«»

al .Mhdrox.\,-4-!-.\<>-\4-diindrochina/oiin.

b) l-Hyd.'i-\--5 (i-dimethyi-bt-n/otri.i/o! .-Jci

c) von I-Hvdrov.-pvpJon an Steile des <·Κ.·η *.·;-wendeten 1 -Hydro», ybcn/otn.i/ols

bi i[( I Ii I en \al Mi

Zu einer Suspension \.n Γ: u i^~^H n\ii^;i Z !-.-u V ii \H m ciT't' MiMhun-j .als ¹I*" rv DiniL'ihvlf>)r:n.imiit 'in·: j Hi ti-, I Mrth.in··' :<·· "..· Pii<>Hi. Ü.iS( >.-K.it.iK>ati' ! nt.' RiIi-, η :.·■·.' man durch it:-jsi- K₍..ikti>-;:>i:ii>.«.hi.ri_r. .-. ;-i%·'" wobei durch Zutrop'i-r ■■ π ' '< m< t'i.ir.i-liNv hi < ί I' Losiintr mit Hilf-.· cne* \it'.-'r!f.ji. t« r'l ^s -·'"' ''' ' · wird N.ichdem k'.-in«· H< I Ι··»ιπ·.· nn-h· :iJ-t, ·■ men \K\ro vnni .icr k ii.iK-ii.'f .Η-ί-ν · , ■' n·' .' -Filtr.it cinL'L\.n_' O^r K \i< ■> >! ;:u⁽ vi ■ 1 - · '■' ·

bc ti ti I s 4 l" 11 "11 .1 s. Ί -τι r ' ·» κ.. ' 4i. 1 ■ > ■ ■ l'i.rr. ,1. -.-.,pi: ■ i. ■ · - 11 . '

15.4 μΐ*~Η rnVlnli Μ< I il Inr \ .ti '.U tur.i ■ mit 7.5? ml N- Sthvlni.trphi'lin unil " ·*>■ -i I (K,it.·» ·, bi-n/otri.i/i'l in I "!U tn! l'nm-tlnli τ-η.κτ-.ϋ λ J '»· D.i/ii eibt nun ?Z ^:> t Z < »l\ '¹Up ..ii'· \!·«<■,·» r sieben um! ι·π·μ im ll«i_thv ·!> ιίιιι ι·ιη ί). < U >,. .ι · .ι wird mit Γ η Scnl.il·".unt' *l?i . ^fHii .i*il. viii ·ι .·> ' mit Wasser jrvtt.tsiher. %l in ;··ηΚπι·ι ·ί(ν· ( · ι ι,

k.'Chl ll.11)11 !ΠΙ' ί -.SiJi-StC¹ !·.' /■!' Ui-I''. · > '<>■

.1Us L" ι'ιν.Ι'ιΐιιι in I' I' I ι'ι ι ■ ·.· · » · ι ■ B t . s ρ . c . s if VtU. / ί'^Γ ' il'.- t ,··. *. I !

j] / IL- t. . Mi

44 ^ c κ 1 Moli Z !'. '»lLf un.i : · .· .< M. I. H< I ii <.l* Ml wcfik-r , -.-.-Ti · τ··· '< .·

un.i i ·" m' \ \thvin·. r;it' ·ϊιπ in '«' ->r "!«mti' .'MiUPi -!It¹CiIiit iin«J de Rü k '.:Γ.! :;ι' '. ■ rr

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2 202

23 g(62 inMoIJ Z Pro-O^p,SJ ml N-äthyknorpholin und 1.5 g (9,4 mMoI) 3-Hydroxy-4-oxG-3.4-dihydrochinazclin. Man riihn 15 Miauten und engt anschlieBend am Hochvakuum ein. Der Rückstand wird mit Essigester aufgenommen und gekühlt. Es fällt ein Niederschlag aus, der abgesaust und nacheinander mit Natriumbicarboaai-Lösung, 2 n-HC! und Wasser verrieben wird. Nun wird getrocknet und zur weiteren Reinigung gut mit Essigester verrieben, abgesaugt und getrocknet. Ausbeute 20,7 2 (80%). Schmp. !82 bis 1&4'"C, [«]_o = -63,2* (r = I. Methanol).

Zum gleichen Ergebnis gelangt man bei Verwendung von

a) I-Hydroxy-it-methyl-Z-pvridon, '■

b) I-Hydroxy-o-melhoxy-benzotriazoI oder

c) l-Hydroxy-5-methyi-berizotriazol an Stelle des oben \ erwende'.en Chinazolin-derivates.

Beisniti 9

Synthese von

Z Asp(OBu') Phc VaI Gin-Trpleu He Asn ThriBu¹) ΟΒιτ"

1 Herstellung der Ausgangssubstan/

CH₃COOHH Phe-Val GIn-Γφ Leu lie Asn Thr(Bu'i OBu'

a)Z Asn TImBu¹I Obu^!

42>-g (161 rnMoii Z Asn OH, 43 g (161 mMul! öliger Hf.'J H ThriBu'· OBu' (gewonnen durch katalytische Hydrierung von / ThX(Bj¹I OBu' unt.-r Zugabe von methan<->lischer H( I bei einen pH ν ein <i. 5I und Il.⁷5j. (161 mvfoJ) 1-Hydroxvhr-r/otri.t/u! wurden >n '2* ml Dimethylformamid gelost. D i/u iiib· rv.·, ~"^: ni N'-^lhyl'norph >lm und bei 0 (.' eine kaho na von 35.45 g r)ic>f!<»hexyl.":trh!-diimid in s> m\ f.irmamid. Mar, lail: I S'undc bei 0 C u_;.t! 1 Stunde bei Raumtemperatur rühren, sauir den Niederschlag ab und engt das I-ilir.it im Hochvakuum ein l>cr Rüvkst.iPd «ird /"vr-chcn ί $~ψ:^ι.ϊ und NaH(C),-Losung verteilt Πύ· oipiniv/hc Ph.i-ic v.ird mn 2,5"..ige KHSO₄-I..isuiig. i.-es N:!li(O. I osunp und vVasscr au'.pcstl'üiifi·. m 1 N:;tr!:jin>uif.n i'··! rock net und eingeengt Mit IVtr»»!at^t.·: wird ια· neben und abgesaugt Aii^ncuiL· fiS,)· _f. Schmp I d hi- Ii^ C" Aus ί ssigestcr iVtroKifhcr -v1rdun1K.riM.11-lisiert Ausbeute *2.4 g ((SK"·.». Si.hmp '"¹Ob)., i;.¹ < [ I "7.6 (< l.'Vk'h.innij

b| IK I

' hriHu". <

/u einet !.«lMini; v>n -^¹/¹)' i'J^.T i->M· ίι Z Asn ThrlBu'l < »H.j im '«Νμι,Ι Vfflii.iüi.i ,-il·.; .i:.M etwas Pd(OHl, BaSO,-kataiys.il.>r Cuter |{·.1·.π leitet man durch diosc Rcaktionsmisciiunj; V.'as-.i •olT. wobei durch Zutropfen von l-n mclhunolischct falxsiiurcmit HiirecincsAuloti'rators pH 4,5 gcluilicn •ird Nachdem keine HC'l-Lösimg mehr aufgcM.itii-•icn wird, wird der Katalysator abgesaugt und das Fillrut eingccngl. Ler Rückstand wird in AtIu r ;vI>ni fön wenig Unlöslichem filtriert und über Nacht in den Kisschrank gestellt

Anderntags wird der ausgefallene Niei.lnM.hIai· ibgesaugt und mit Äther gewaschen. Ausbeute ^q V(<^s μ (95,6%), Schmp. IiO bis 11V C, W = -2.6'^J(r = 1, Methnnol).

C₁₆H₃₂N₃O₅Cl (382):

Berechnet ... C 5032. H 8,45, N 1 ?,0i%: gefunden .... C 50,0, H 9,0, N 10,9%.

c\ Z-IIe-Asn-Thr(Bu^l) OBu'

Zu einer Lösung von 21,8g (82 mMolj Z-Oe- OH. 313 g (82 mMoij

HCl ■ H-Asn -Thr<Bu¹)- OBu'.

11,Ig 1-Hydroxybenzotriazol und 10,7 ml N-Äthylmorpholin in 150 ml Dimethylformamid gibt man bei

0 C eine kalte Lösung von 18,1 g Dicyclohexvlcarbodiimid in 70 ml Dimethylformamid. Man VaQi

1 Stunde bei 0°C und 1 Stunde bei Raunwmperalur rühren. saugt den Niederschlag ab und er.gt das Filtrat ein. iV.an arbeitet wie bei a) auf. Das resuliü·- rende Produkt wird in 150 mi I.ssigester gelöst, von Unlöslichem fillnert und in 750 ml PetrolätheF eingerührt. Ausbeute 42,37g (S7°_n), Schrnp. 144 bis !46 C. [.ij --- 2O5-(c - !.Methane!).

'\.H₄^N₄()_H (591,75):

Berechnet ...C 60,82, ίί 8.15. N9.46"«: gefunden .... C" 60.9, HM \9.2%

d)HCIH He Asn 'lhr(Bu') OBu¹

'.ν6ί!6\2ηιΜοΙ|Ζ He Asn Tbr(Bu') OBu'werden vMi· bri b) in Methanol katalytisch hydriert. I>:j Substanz i£i atherloslich und ergib! am Hochv.-.kuun· cm ,:m"rphes Produkt. Ausbeute 33.2 e ( tji»·*.,?. [.il - 5.9 ic !. Methanuli.

C^H₁₁CiN₄O, (495ΛΓΙ

!{.rechnet . . C 5^.37. H «.76. N 11.31" .; f'c^funden . . . C 53.0 H 9,0. N ld»"..

l/ Leu ile \sn IhriBu't Ohu^:

/u ^.ill ί iiSUrii; ν>·Γι '6.4 i? ifi! H r"\1uii

/ I ou OH 1O.6 j!(i)l S in Moli

ÜCi Il Ik \sn IhrtBu¹) OHu'

SM₁: l-ilyilri'xybcn/ftria/ol und ><.iml \-\thvl nii>rp'~oiin in !50 ml Diinclhyifoimamul gibt m ι;· fx-i 0( csne kalte Losung \on 13.6 μ l)icvcli>hi-i\'-L.irbodiimid in 60 ml I )imcthylfiirm.imid Man Ι.ι.ίι I Stiirnk· '"ei 0 C und i Stunde bei Raupikmpcratui i!ihr.:i um) .irhi'ili't Wi. ht'i :ii .iiii Du Snbvt.m/ uLir.l ni.t l\iri'l ltner vernebln und abc.iuirt \ushcutc ·').'■ ■! Sciiiup. \ΤΊ bis! 7(i ( \'j_s I ssijcsicr l'clrol .iihn w.rd amgcfalit. Aus'ciiv 1"".^s j r<f.', ι. Schmp i ^?'< b;> I"(, ''.[,I U'i, I Mcthm..!l

C-,,,ΙΙ,,Ν,Ο,, (705.9):

BcTcchnct .. C 61.26. II «.42. N 0.92 Ό. !/•-■fi'-ulcn . . C 61,4. H S.7. N 9.9-,.

fi IK I H Leu Ik- Asn ThrlBu'l O¹Ju'

35 2 μ (50 niMol) 7 Leu He Asn Ihr(Bu') OBu' wcdcn wie bei b) katalytisch in Mctham·¹ hydriert Die Siihst.u" kristallisiert beim Vcrrcihk-ü . t ΛιΙκτ

2 202

Ausbeute 28,5 g (94%), Schmp. 192 bis 193C Zers [«]i = -17,9° (c = 1, Methanol).

C₂₈H₃-ClN₅O₇ (608.2):

Berechnet ... C 55,26. H 8,96. N 11,51%: s

gefunden C 55,3, H 9,0, N 11,4%.

g) Z-Trp- Leu- Ile-Asn -ThT(Bu¹)- OBu' Zu einer Lösung von 26,2 g (43,1 mMoi) HCI - H-Leu-IIe-Asn-ThriBu't-OBu',

14,6 g (43,ImMoIj Z-Trp-OR 5,82 g I-Hydroxybenzotriazol und 5,6 ml N-Äthylmorpholin in 150 ml Dimethylformamid gibt man bei OC eine kalte Lösung von 9,5 g Dicyclohexylcarbodiimid in 60 m; ι s Dimethylformamid. Man läßt I Stunde bei 0^c C und 1 Stunde bei Raumtemperatur rühren, saugt vom Niederschlag ab und en^t das Filirat ein. Der Rückstand wird mit NaHCO₃-Lösuna verrieben und abgesaugt und getrocknet. Aus Isopropanol ward umkristallisier?. Ausbeute 33.8 g (88%), Schmp. 228 bis 229 C,[«]* = -39,5 (r =\ Methanol).

C₄^H₆₉N-,Oj₀ (892.1):

Berechnet . . C 63.28. H 7,79, N 10.99%: 2^

gefunden C 63,0, H 7,8, N 10,7%.

h) HCI-H-rrp-Leu -Ile-Asn-ThrfBuM-OBu¹ 31,2 g (35 mMolJ

Z-Trp-Leu-He-Asn-ThrtBu¹)-OBu¹

werden in 200 ml Dimethylformamid Methanol (1:1) wie bei b) katalytisch hydriert. Der Rückstand wird mit Äther verrieben. Ausbeute 27.2 κ (98%). Schmp. 215 C Zers. [α]; = -28.0 lc = I.Methanol).

Eine Probe wurde aus Methanol Äther umeefällt: Schmp. 217 C. Zers, [</] = -28,4 Ic = 1. Methanol -l).

Cj₉H₆₄N₇O₈CI (794,45):

Berechnet ... C" 58.97.
gefunden .... C 57,2.

H 8,12, N 12,34%; H 8.2, N 11.8%.

\O

i)Z Phe Va! OH

10.7 g Z Phe VaI OMe werden in 200 ml Dioxan Wasser (68:2) gelost. Mit insgesamt 27 ml 1 n-NaOH wird gegen Thymolphlhalein titriert. Mit 2 n-Ht 1 wird neutralisiert und die Lösung eingeengt. Der Ruckstand wird zwischen Issigester und 2 n-HCl verteilt. Die Essigesterphase wird mn Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther verrieben und abgesaugt. Ausbeute 9.45 g (92%). Schmp. 148 bis 149 V.

Aui ! ssigcsicr Peiro!;:!her ·λ:γι1 umgeHi!!¹. Ausbeute 9.2 g. Schmp. 14« bis 150 C. M - 8.8 (t - 1. Methanol).

Γ₂₂Η₂,,Ν₂Ο,(398.5ι.

Berechnet ... C 66,32_r H 6.58. N 7,02%:

gefunden .... C 66,6, II 6,7. N 7.2%. (..·

k)Z Phc VaI Gin OBu¹

Zu einer Lösung von 8.0 μ (2OmMoI) Z Phe VaI OH, 4,8 g HCI-H-GIn OBu¹. 2.7 g l-Hydroxybt-nzotriazol und 2,6 ml N-Äthylmorpholin <>< in 40 ml Dimethylformamid gibt man bei 0 C eine kalte Lösung von 4,2 g Dicyclohexylcarbodiimid Man läßt I Stunde bei 0 C und I Stunde bei Raumtemperatur rühren, saugt vom Niederschlag ab und engt das Fi! trat ein. Der Rückstand wird mit NaHCO₃-Lösung verrieben, abgesaugt und mit Wasser gewaschen. Ausbeute 11,65 g (100%). Schmp. 219 bis 221°C Zers. [«]',· = -35,7 (c = 1, Methanol).

C₃₁H₄₂N₄O₇ (582,7):

Berechnet ... C 63,91, H 7.27. N 9,60%;
gefunden C 64,2_: H 7,7, N 9,7%.

1) Z-Phe-Val-Gln-OH

11,1g (19mMol) Z-Phe-Val-Gln-OBu¹ werden in 30 ml Trifluoressigsäure ge'l'äst. Nach 30 Minuten bei R.admtemperatur wird eingeengt und aer Rückstand mit Äther verrl· η und abgesaugt. Das Produkt wird zur weiteren Reinigung mit Essigester aufgekocht, mit Petroläther versc* abgesaugt und getrocknet. Ausbeute 8,45 g (85%), Schmp. 225 bis 227° C, [α]ί? -- - 10,7° (c=l, Dimethylacetamid).

C₂₇H₃₄N₄O₇ (526.6):

Berechnet ... C 61.59. H 6,51. N 10,64%;
gefunden C 61.6, H 6.7. N 10,4%.

m)Z-Phe-Val-Gln-Trp Leu Ik Asn Thr(Bu'hOBu'

Zu einer Lösung von 7»5 υ (1OmMoI) HCl-H-Trp-Leu-Ile^Asii Ihn!-j¹) OBu' und 5,27 g tlO.nMOi) Z-Phe Va! (Hn OH in 100 ml Dimethylformamid gibt man 1.3 ml N-Athylmorpho-Iin, 1.35 g l-Hydroxyben/.otriazol und bei OC unter Rühren eine kalte Lösung von 2.2 g Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml Dimethylformamid. Man läßt 1 Stunde bei 0 C und ! Stunde bei Raumtemperatur rühren. Der Niederschlag wird abgesaugt und das Filirat eingeengt. Der Rückstand wird mit NaHCO₃-Lösung verrieben und abgesaugt. Der Fiiterrückstand wird mit 1 1 Äthanol aufgekocht. Schwerlöslicher Rückstand 5,6 g. Schmp. 253 bis 255 C Zers., [a] — — 15,3 (c = 1. Dimeihylacetamid). Aus dem Alkohol kristallisierten noch 2,8 1 aus: Schmp. 251 bis 254 C Zers., Gesamtausbeute 8.4 g (66,5%).

C^H₉₅N_nO₁₄ (1266.6):

Berechnet ... C 62,6. 117.56. N 12.16%:
gefunden .... C 62.2. H 7.9. N 11.9%.

nj CH₃COOH · H Phe VaI CHn Trp
Leu He Asn Thr(Bu') OBu¹

Durch eine Lösune von 7.6 g (6 mMol) Z Phe VaI Gin Trp Leu lie Asn Fnr(Bu') OBu¹ in 250 ml Eisessig, der etwas Pd(OH)₂ BuSO₄-K;-talysator zugesetzt wird, leitet man so lange Wasserstoff, bis sich kein CO₂ mehr entwickelt. Der Katalysator Min' :ihm<«:iiint d:i<; Filtrat eingeengt und der Rückstand mit Äther verrieben. Ausbeute 7,4 g, Schmp. IM"' bis 250 C /ers. Das Produkt uird mit Issigester ausgekocht und kalt abgesaugt. Ausbeute 6.78 j.· 19V',,!. Schmp 24S bis 251 C /ers.

II. Z-Asp(OBu')- Phc-Val-Gln-Trp-Lcu
Ile-Asn Thr(Bu') OBu¹

Zu einer Suspension von 6.32 g (5,3 mMol)

CH₃COOH-H Phc VaI GIn Trp

Leu Ile-Asn Thr(Bu') OBu¹

in 150 ml Dimethylformamid gibt man 0,86 g (5.3 mMol) 3-1 lydroxy-4-oxo-3.4-dihydrochinazolin und 2,66 g (5.3 mMoli Z Asp(OBu') OTcp. Nach

Tt

5 Minuten Rühren wird eingeengt und der Rückstand mit 2 n-Sodalösung verrieben, abgesaugt und mit Wasser gewaschen. Der Filterrückstand wird mit Methanol ausgekocht. Schwerlöslicher Röckstand: 5,3 2, Schmp. 246 bis 248^CC Zers.; aus dem Filtrai: OJg, Schmp. 244 bis 246°C Zers., [«]? = -15.0 , (c = 1, Dimethylacetamid). Gesarntausbeute 5.8 2 (76,4%).

C₇^H₁₀₈N₁₂O₁₇ (1437.7»:

Berechnet ... C 61,8. H 7.57. N 11,69%; gefunden C 61.1. H 7,6. N 1 L7%.

Zum gleichen Ergebnis gelangt man bei Verwendung von

a) I-Hydroxy-^methyl^-pyrido.

b) l-Hydroxy-o-inethox^-binEO;-" :zol oder

c) 1 -Hydroxy-5-methyi-;ien/r*^r...zol

an Stelle des oben verwi 'r_ten Chinazolin-deriwiies.

Bespiel 10

Synthese von Z Phe Va! OMe

2g nach J. Amer. Cheir Soc. 90 /1966). S 2953 j, hergestellten Z-Phenylalanin-poIy-4-hydroxy-3-"itr< >ί tyrolharzes (enthüll 3 mVlol Z-Phenylalanin) werden in 5 ml Dimethyl!"~ mamid suspendiert und mit 162 ms C mMol) 3-Hydrox\-4-oxo-3.4-dihydrochinazolin. 168 mg (ImMoI) HCl · Ii \al ()Me ;;nJ _; 0.13 ml N-Äthvlinorpholin versetzt. Man laßt 15 V ι·ι-•en rüh-en. saugt ab. wäscht mit Dimethyl!' 1 r,._;iiiid nach, engt das Filtr.il ein und \ertc!It den Rückstand zwischen 'Xsigester nd Natriumbiearbonatlosung. Die L-ssig /phase wire mit 2η-Η(Ί. Natrium- ?- bicarbonatlosung und Wass:■· g Auschen. mit Natriumsulfat getrocknet u: J c, --et Jt. Der Rückstand wird mit Petroi ither verrieben, a 'gesaugt und getrocknet. Ausbeute 390 m_fr (95"„). Schmp '·\* C.

i Il

40,iig ί IO :ζΜο1) Tnacomatriprpt J-tril) .et.it hergestellt nach Z. Njturforseh. 2ib ii9(S9. , -J-'9. werden in LS ml 90 iges Dimethylformamid inn 26 πι,- (6OmMo¹I Z I"\r ONp in Anwes. heil \on 1.35 mg (ΙΟμΜοΙι '-Hvdro.\yben/otr:a/o! um .-setzt Nach 15 Minute · illt man mit Äther u"d filtriert den Niederschlag ah. Nach Waschen mit Äther und Meth)lenchlorid erhalt man 36 mg Rc.iktionsprodukt Tvrosingehalt laut Aminosjurvan.iiw¹. '.I Moll

R₁ ".⁷2 :r. r. Kuiar,;:! i';,r;J r, ί'-,ρ..!^- Vv.,ssui (306 2024). PapieahroiTutogiap! .iu^teitcnd R. des 1 riacontapepti'Js 0 22

Beispiel 12

N'"" (Boc Leu PlKi V^x;.V^hl< Bis B-. !;- ■■■

120 rκ· Boi_rInsiilMi i20 /\!.>li ,iülsi :., . , lloppe-Si-vler-. Z pin .n>l (hem ^ ιΐ·ί"!· ■ worden in ¹RiI Ππιι.-ΙίηΚ'ίΠΐ.ϋΐΊι. init ,'■ :■ ;· i¹· :· M.<li Bo₁ I en I¹Iu- (»I cp un.l ^Λ " m.u < ."'· '¹ I ■ !ydioNvlunzotn.<:> < i-rs_t-vi Mn. ·υ!ν· ■' \ι , ι I ¹Vi R.ι um ten¹ · -r.iiur. I li'i rni \i. .: ','■': u ■ ■ ■■ ί Niederschlag ab und wäscht ihn mit Äther. Au- beute 117 mg

Aminosäureanalyse:

Eerechnet ... Leu 7, Phe 4;

gefunden Leu 6,9S, Phe 3.96.

Wanderungsstrecke in der Papierelektrophoi ese bei pH 2,2- 0.76 ^Insulin (BoC₂-InSuUn: 0,84 · Insulin).

Nach Abspaltung der Schutzgruppen durch e'nstundiges Behandeln mit Trifluoressigsäure und i-üllen mit Äther wandert die Verbindung in der Papierelektrophorese wie Insulin. Die Reaktionszeil ohne Zusatz von 1-HydroxybenzotriazoI beträgt 3 Stunde!! und fuhrt teilweise zur Ouervernetzung.

Zum gleichen Ergebnis gelangt man bei Verwendung von

aJ l-Hydroxy^methyW-pyridon, bj l-Hydroxy-6-methoxy-benzotna/ol oder c} l-Hydroxy-5-methyl-henzüiri;i'>!

an Stelle des
iriazois.

>ben verwendeten l-H>Jr(>\\-h.

13

Beispiel

.Ala Tvr Ser Met CjIu(OBu 1-Phe Arg Trp City OH 41LC)

Hi
5.36 ι: (4

H T\r Scr Met (ÜulüBu'i 'His Phe Ar- Trp CiIv ί)Μ·4Η_;ίι.

hergestellt nach Liebigs Ann (hem 12(> iiMfv S. 1S3. werden in 50 ml Dimeihylfurmamiu n l.S4g l5m\l<'Ii Uoc ; AIa Olcp in Anweser.hi.-v«.n 54Π mir '4 m\l(>li l-Hydroxv-ben/oiria/i»! «.ji. gesct/i Nach 1¹^ Minuten fallt man mit I si^c-st.· A'thcr <!: Ii 5.65 g (94'·' ·. ruhe/u cbromaioerapliis reines Ro.iktionsprtuiukt aus. das /ur \ι·|]^νΐ! Ri'ii guny aus 200 rni 6(»",.ii.'Cs Meihano! umkfNt.illiNhwin) Ausbeute 4.92 g (Sl°i.|. Pie Verbindung ist m der n.njh Iiu·. eil. ebne Zusatz von l-lhdn'\\ben/ tri.izi.l crhaiienen itL-ntisch. die Rc.ikd->:i-/cit wtüi jt*i!<>(_h \oii 20 Stunden auf 15 Minuten .lhgt-kiir/i.

I -c 1 ν ρ i e! 14

I r>psiii-K.iihkrcin-Inhihitnr

^li0 mi: 1 r\psin-K illikrein-Inhibiiiir aus Knuicrorganen is i !•.•ppv.-S.-vler^ /. Physiol ( ίκτπ. 350 [14641. S ι5'Ιι werden in ? ml D'meth\lformamid suspendiert. D;i/ugibt man ^ς''mg Buc I.tii l'lu- OTcp und 13 mg l-(h<if< "ivhen/otria/ol. Nun ;jihi ri..in unter Rihrcn U.isser /u (insgesamt 0.51 mb his alles gelost ist \Tjii rühr! imch 1 ■> Minuten, aui im lliuh- \.ik':ii··· i/i 11 und \trrcibt den Rückstand mil .<.b^ol'.iteni fctr.ilnJ fur.in Der Niederschlag wird .1¹^- L't-s.u,;: end ri.tr. xkiicl Nusbeute 110 mg.

■'"'■ ~ ".'.' (Ilt Siihsf.mz werden in 2 mi frilTν ;. ..-ι. y.·' 'si M.in |.,|(| Mt Vlinuten hei K.111:1 ■, .-"r -uh ; :·ΐί.·ΐ «.in und vcrti^-|lt djn Ruck-; · .', •ti.. . «ν ..... 1 ninl Aihei. vi-rruhrt <!κ· w.il<i _: 'liit -·Α·:ι .rliti- W. X^- (Acetatloimi 11:. ■ '! KU Ί \:i i-(.'!l|i· Sf> nv,-

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23

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2 202 6

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2 202

ausgeschüttelt, mit Natriumsulfat getrocknet und eingeengt Ausbeute 61,1 g öl.

Das Ol wird in Essigcslcr gelost und ifbcr Cnie Säule aus 185 g basischem AI₂O, (W nc Im. Ak'.iv-Mufe I"I Chromatographien Das I igeslerelu.il wird eingeengt. Ausbeute 55,8 g.

Das obi*". gewonnene ΓΤΙ wird in 25(¹HiI eine. Mischung aus Dioxan/Wasser (8 2) gelost und mit wenig rhymolphthaleh versetzt. Nun wird mit einer I n-NaOll si) hinge titriert, bi' die 1 .-sung fiir l.tngire Zeil HI.it· Me-iht Vcrbr.iiich |7«>ml In-Nn)H \n-Ich' eHeml wird mit k IfSO₄-I osun^ neiilralis'iTt lind du U '-.iktmnsmischung eingeengt Der Racks'and H'ird nun in Wasser gelost Mit t ssil'cMci wird über schichtet, und bei i !»-kühlung wird mn 2¹"¹ H-SO₄ •uf pH ? bis } angesäuert und uul gcruhn I >ie ' sstg- «•tcrphase· wird abgetrennt, einmal mit VV isser gefc ischer, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt Der Rickstand wird in Alhcr gelost und bis /ur l>asisih'.n Kcaktioi. mn C vclohexvl.imin vcrsei/t Man sti-llt nun in I is. saugt ib wascht mit ^;\i1u-i und Irocknct

Ausbeute S^ 6g (71.8",I. Schmp I¹JX bis 2<Kι ι

/ur weiteren Reinigung win «lic Siibstan/ in IfK) ml Methanol gelöst und in I.5 ml Ath'cr cii.geruhit Und abgekühlt Nach I Stunde wird abgesaugt Atisheuti· 4SS _μ |W„|. Sdimp 204 ' bis 2(1S ( . (.ι) · Γ.4 ι· I. Methanol)

M Z ViI (Hu(OBu'* CiIn(MbIIl mi

6<2g ISI mMoli des nail ("hem B/r im ll'>7()). S 20'K lic· gestellten

/ VaI ciliKOHii'i CdnlMbhi

in etwa 4(H) ml Diuxan Wasser (H . 2i suspension und mil In-NaOH gegen Ihjmolphtiialein als Indikator titriert Nachdem die I nsung längere Zeit Mau bleibt, wird mit KHSO,, lösung angesäuert lind der Niederschlag abgesaugt Das liltcigut wird til!' A-elori aufgekocht, ahgesaugt und aus Dimethyl· iormamiil Wasser umgcTalil Ausbeute 5Vg (02"..l Schmp :Ui bis 2IS C

Fk-rcchna ( 63.72. 116.85. N 7.0V,,.
gefunden CdW H 7.1. NS I".,

clH VaI (Uu(OBuM (Mn(MhIiI OII

Durch cmc Suspension von 52 g (f>5.'mMol) Z VaI OiU(OBu¹J GIn(MbH) OH und etwas PlI BüSOj-Katalysalor in 50OmI Fisessig leitet man so lange Wasserstoff, bis kein CO₂ mehr entweicht. Der Katalysator wird dann abgesaugt und das 1 iltrat eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther verrieben

■ts und abgesaugt Der Niederschlag wird mit eier gesättigten Niitriumacctütlösung etwa 5 Stunden gerührt, abgesaugt und getrocknet. Zum Schluü wird noch mit Methanol auspekocht. Ausbeute 2" u(62.6"ol Schmp. 226 bis 228 ι. . \,_t]i> = >■ 9.0 (< = I. hscssig).

C WlUN₄O,, (656.8):

Berechnet ... C62.20. 117,35. NS.5.V«. gefunden Γ f. 1.4. II".?. N S <" .

d' Hoc Ca He V.il dlulOIUii dlniMhhi OH

^Ί..'{! ',2OmMoIi HiK diy lic (Hl < Il \ werde:, Ki O ( /wischen KXi ml ^thcr und 4(»nil Jn Zitn> nensaure v^rühri Ι^κ .ithensi-he !'hase »lrd .ihgi trenni. mit Wasser gew.is.heri. mit Natriumsulfat getrocknet und i'itmceng! Ausbeute 4^g Dl Zu einer L osiing von V^ c der oben ecwonncncn i)ligt-n Su^ stan/'Hot (ilv lie Ol Il in '5 ml I .nuihvl.n.vtaiPKi gibt man 2.(>')g ^-Hydrow 4 nv> '4-ilihvdto 1 2. 'be'n.v'tiia/in und hei (' C 2. (· ■· Di. ,ι>1κ·\\ί i..irbndiimid Man IaIJi I Stunde bei I' ι uiui ' Numle bei R.i'imtempe'raiur rühren Dir .iiisvi-f.illeru Nudcrschlag wird abgesaugt und mil wcriij- D mithU acetamid gew.isihen /u den I ilitat gibt man nun 5.H^ μ fein /i-rrieberivs

Il VaI (iltKOHu'l t ,In(Ml I,ι Oll

und ruhrt S Stunden bei I'aiimlcmpti.itur D »bei fallt ein dicker Niederschlag aus Man '.illt .,licr Nacht stehen uiid HiIIt anderntags mit Vm .ni W .ism.t die Suhstan/ vollständig aus Du· .ιικμιΤ.ιΠκ Substanz wird ahgi'saugt. mit Wasset gewaschen tin·! mtl .'()(· ml Äthanol aufgekocht Man i.ilJt ,ml tiaiiir.tomper.itur . abkühlen und saugt ah Mti Mkohoi witd gut gc waschen Ausbeute (v^g |,Hl.l°.i Sehmp '>» bi^ TSs_1-I,,]'- 2.10 l· I Dimethvl.uu.in-id'

11-..VO₁,	I¹'. .	η	Il	7	.(V	N	wir
Berechnet	(	M 1.00	Il	(	Hu	N
gelunden	(	Ci. ('.	al			( I	In (
el Il	CiK	Hf V

(Hl

2(Kl mg Bot (il> lie VaI (iliuOHn'i MMi Oll und (l.s nil Anisiil werden in > m\ I iifluoressigsaun· gelo.st und IO Minuten im RücklluU gekocht Vnsehhe fJcnd wirel eingeengt, und der Rückstand mti ΛιΙκτ verrieben. Nun wird abgesaugt und der Rückstand in Wasser geiost Die wniJrrgc Losung wrnl mit »Ambcrlitc 5R 45« (Acetatform) verrührt, bis pi I 3 bis4 erreicht ist. Der Austauscher wird abgesaugt und das FiJtraf mit Aktivkohle geklärt Die klare wäßrige Losung wird gefriergetrocknet Ausbeute 50 mg. [.i]v 75 C (<· - 0.25. Wasser). Dünnschichtchromatographisc.li e-ir.heitlich. Λ mi η osä iircaiialy.se s lab 4

IV. Tabelle4

Vergleich der Aminosäurcanalvscn und physikalischen Daten des nach den Methoden I. Il und III hcraeslellten

H CiIy lic VaI GIu Gin OH

(c = 0,25, Wasser)

Zersetzungspunkt

Nach I (Vcstkörpcrmcthodc

mit S-IIydroxy^-oxn-.l.'l-di-

hvirochinazolin)

-7I,5°C
ab 240⁰C

Nach Il ([-cstkorpornicthodc

wie bei I. ni'r ohne

Katalysator)

-39,4'C
ab I65°C

Nach III (konventionelle Methode)

-75.0°C

ab 255' C

DS'C'hroiivilognunm

I^;ortset/ung

! mil '-HwIf(M)■■> ciui-l4.cli

Niicli I' llc-lkorp

«■ic he ι I nur <·Ιιικ· Κ.ιΙ.ιΙν-.ιΐΊΓΐ

|72Sid .bei IUi t ι

I/ic in IaIvII«.· 4 aufgezeigten I rgebnisse /eigen deutlich Jic f'Hcflegcnhcil des crlindungsgeiruUen Verfahrens auch hei der 1 csikorpcni'cil'odi.· Ni.it Ii der fccrkonimlttlicn Methode tmici Verwendung \on Inchlorphcn ν !estern .'line /iisat/der erlindtingsgemaUcn Katalysatoren w.ir es mehl möglich, ein .null nur annähernd einheitliches Material /π hekonimen

Herstellung von einigen Katalysatoren '•f Iydnnv-4-mcfIiyl ^J

line I osurig ion lH5g (2 VJnIl (. hlor.iccti'n in ml Mclhyleticlilurid wird mit U)O ml W.issei uherschichtet iki H) his "0 ί «crtlc.i unter Kuhren 320.Sg (2 MoIi (jit,(MSSK pnrtu.nsM.cise eirtge- tr.ificn VLin rühr» noth ;'Stunden hei Ranmtcmpcralur nach trennt die Schichten, tvasiht die organische Phase n*>ch einmal mit ιWiml Wasser, trocknet mit Natriumsulfat und dcstilii.vt Kp ¹>1 his ¹J¹J (. (Ü.05 lorr. Ausbeute Wp

hl ^-Thioxo-ivota-'J-thia-i-octanonoxirn

/u einer I osung v<m S6(lg Hydroxylaminhydrochlnnd in 41X1 mi Methanol gihi man 65/» g Natrium acetal und \l~>e. des nach a) gewonnenen 5-Ilmuo- #»-tua-4-lhia-2-oclanons Nach iXstundigem Rühren bei Raumtemperatur wird das I ostirtgsmittel im V;ikuu 1 entfernt, der Rückstand mit Wasser versetzt, mit Mcthylcncrilfind extrahiert, die oig-inischc Phase mit Natriumsulfat getrocknet und iom Losung*-

einheitlich und identisch j mil HI

Chi 2.6 (ilv I.Ο \.ι! D.') lie 0X7

II! IkoMvcntinridlc
McMliiuli!)

3 Flecken, davon einer
idcntiscit mit IiI

CiUi 2.74
Clv 1.(1
VaI 0.445
lic il."

einheitlich

CUi 2.2
Clv IO
\.il ο.¹'
lie Ο.¹»

ι«, mittel 'vfreit IX. Rückstand λιπΙ in Dusnpropyliilhe. aufgenommen Duri.li \hkuhlcn I issen sah daraus in nchieren I raktioneii insgesamt 101 μ des i vorn Schmelzpunkt l · C ι

el ¹I hdroxv-4-metlni-\ i-dili\dro-thia/ol-2-thion

/u einer I osung von I0J.-.1 l· ViOl; in 2(X) ml Was ser tropft man unter Kuhlen und gutem Rühren innerhall· von 15 Minuten 12¹V' u des i..ich h) gewonnenen Oxiins. gelöst in VlOm! Mctlnlenchlorid. riihrt noch

js 5Minuicn naih. fugt noch ^00 nil Wasser zu. 'rennt die Schichten, schüttjlt <lie w.iHrue Phase zweimal fit ie !IH) nil He*«an aus uflo säuert schließlich mit »on/entricrter Sal/s.mrc .mi pi I 2 an Man fahrt I Stunde im I isb.n! n.nh. saum den Niederschlag gut

jo ab und wascht ihn noth /wemi.il gründlich nut ic 300ml Wasser Ausbeute i»l.*g Schmp '»Ό ( Weitere 12 g des gleichen Produktes lassen sich durch I xtraklioii der w ißrigcn I «»sung :J:i Vlethvlenchlorid gewinnen

Beispiel I*
I flydr«n%-4f'-«limellivl· \*-Ji« h'or-2-pvridon

Man lo'.i 20g I-H>dro\\-4''dimethyl-2-p\rido.i

4* in einer Vfischung aus TSmI konzentrierter Salzsäure und M)ml Wasser und leitet bei IU bis 15 f 21.6c Chlor ein. rohr! noch f Stunde nach, saugt aS. wascht mit Wasser und trocknet im Vakuum Ausbeute 22.¹> g.

Schmp 213 ( I mknstalhsieren aus Acetonitril er-

4* höht den Schmelzpunkt auf 216 C

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung von Peptiden durch Umsetzung einer geschützten Aminosäure oder eines geschützten Peptids der Formel II

Tetra- oder PentachlorphenyK einen Nitrophenyl- oder einen Chlor-nitrophenyl-rest darstellt and W₁ für eine Zahl von etwa 0 bis IO steht mit gegebenenfalls geschützten Aminosäuren oder Peptiden der allgemeinen Formel III