DE2063027A1

DE2063027A1 - Salt of a basic amino acid of 5 6,7,8 tetrahydrofolic acid

Info

Publication number: DE2063027A1
Application number: DE19702063027
Authority: DE
Inventors: Masuo Tokio Imai Kazuo Ohmiya Saitama Ito Nonki Tokio Murakami, (Japan)
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1969-12-26
Filing date: 1970-12-22
Publication date: 1971-07-01
Also published as: FR2081399A1

Description

Salz einer basischen Aminosäure der 5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolsäure Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Salse basischer Aminosäuren der 5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolsäure (nachfolgend wird die Säure als "THFA" abgekürzt)e THFA wird durch die Formel dargestellt und ist ein amphoteres Material in Bezug auf die chemische Struktur und wird als ein aktiver Typ der Folsäure in vivo bezeichnet, THFA ist ein wichtiges Material, welches Beiträge zu den in vivo Funktionen liefert, wie eine homopoetische Aktivität und Leberschutzaktivität.Basic Amino Acid Salt of 5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolic Acid The present invention relates to salts of basic amino acids of 5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid (hereinafter the acid is abbreviated as "THFA") e THFA is represented by the formula and is an amphoteric material in terms of chemical structure and referred to as an active type of folic acid in vivo, THFA is an important material which contributes to in vivo functions such as homopoietic activity and liver protective activity.

THFA kann in Wasser aufgelöst werden, aber ihre wässerige Lösung ist sehr unstabil und THFA ist bisher nicht in reinen Kristallen isoliert werden Bisher mußte zur Herstellung einer In jektionslösung von THFA dies experimentell durchgeführt werden, um ctie Eingenschaft einer TIIFA haltigen Lösung einzustellen z.B. die TlIFA als Reaktionsprodukt mit einem Alkali oder dergleichen enthält. Dies ist jedoch vom Reinheitsstandpunkt aus als Medikament unerwünscht und stellt einen beträchtlichen Mangel für die gewerbliche Auswertung dar, Als Salz der THFA ist nur das Sulfat in reinen Kristallen isoliert worden. Eine wässerige Lösung des Salzes ist jedoch als Injektionslösung ungeeignet, da die Azidität der wässerigen Lösung zu stark ist.THFA can be dissolved in water, but its aqueous solution is very unstable and THFA has not yet been isolated in pure crystals had to do this experimentally to produce an injection solution from THFA in order to cease the properties of a solution containing TIIFA, e.g. the TlIFA as a reaction product with an alkali or the like. However, from a purity standpoint, this is undesirable as a medicament and represents a considerable deficiency for commercial exploitation, as the salt of the THFA only the sulfate has been isolated in pure crystals. An aqueous solution of the However, salt is unsuitable as a solution for injection because of the acidity of the aqueous Solution is too strong.

Auf Grund dieser technologischen Tatsachen ist es sehr wünschenswert, THFA in einer solchen Form zu isolieren, aus der eine Injektionslösung leicht hergestellt werden kann, dies bedeutet aus einer Form, die stabil ist und in Wasser leicht löslich ist, Eine Aufgabe dieser Erfindung ist es, ein Salz der basischen Aminosäure der THFA zur Verfügung zu stellen, welches stabil, leicht in Wasser löslich und sehr leicht zu einer Injektionslösung verarbeitet werden kann, Als Ergebnis von verschiedenen Untersuchungen ist gefunden worden, daß das Salz einer basischen Aminosäure der THFA, hergestellt durch die Umsetzung von THFA und 2 Molen einer basischen Aminosäure, unerwartet stabil und leicht löslich in Wasser ist, Das Salz ist recht wirtschaftlich zur Herstellung von Zubereitungen verwertbar, besonders für Injektionslösungen und genügt der vorstehend genannten Anforderung, Zur Herstellung des Salzes einer basischen Aminosäure der THFA dieser Erfindung wird rohes THFA durch katalytische Reduktion von Folsäure hergestellt (vergl. Biochem. Prep. 7, 89 - 92 (1960)), in einem Reaktionslösungsmittel suspendiertb Eine wässerige Lösung, die mehr als 2 Äquivalene einer basischen Aminosäure enthält, wird zu der Suspension zugefügt, vorzugsweise in einem Stickstoff6asstrom, Die Isolierung des gewünschten Materials aus der Reaktionslösung wird durch Zugabe eines organischen Lösungsmittels durchgeführt, in dem das gewünschte Material schwer löslich oder unlöslich ist und wobei das organische Lösungsmittel mit Wasser genügend mischbar ist, wie Äthanol, Aceton, Dioxan und dergleichen. Hierdurch wird das gewünschte Material abgeschieden und die so gebildeten Niederschläge werden in bekannter Weiseswie Filtration oder durch zentrifugale Abtrennung, gewonnen, Das so erhaltene gewünschte Material besitzt eine genügende Reinheit und kann als Rohmaterial zur Herstellung von Zubereitungen verwendet werden. Zusätzlich wurde durch Untersuchungen mittels Papierchromatographie sichergestellt, daß das gewünschte Material als einzige Verbindung vorliegt, Als basische Aminosäure, dia bei dieser Erfindung verwendet werden kann, sei zur Verdeutlichung genannt L-Arginin, L-Ornithin und L-Lysin, Als Reaktionslösungsmittel können Wasser, Wasser enthaltende Alkohole und dergleichen verwendet werden. Es wird bevorzugt, darin gelöste Luft vorher zu entfernen oder ein Reduktionsmittel, wie ein Sulfit, zu dem Reaktionslösungsmittel zugegeben, bevor es für die Reaktion benutzt wird.Based on these technological facts, it is very desirable Isolate THFA in such a form from which a solution for injection is easily made can be, this means from a form that is stable and easily soluble in water is, An object of this invention is to provide a salt of the basic amino acid of the THFA available, which is stable, easily soluble in water and very can be easily processed into a solution for injection, As a result of various Investigations have been found that the salt of a basic amino acid of the THFA, made by reacting THFA and 2 moles of a basic amino acid, is unexpectedly stable and easily soluble in water, the salt is quite economical can be used for the production of preparations, especially for injection solutions and meets the above requirement, for the production of the salt of a basic Amino acid of the THFA of this invention becomes crude THFA by catalytic reduction of folic acid (see Biochem. Prep. 7, 89-92 (1960)), in a reaction solvent suspendedb An aqueous solution containing more than 2 equivalents of a basic amino acid is added to the suspension, preferably in a nitrogen gas stream, The isolation of the desired material from the reaction solution is carried out by adding an organic solvent in which the desired Material is sparingly soluble or insoluble and where the organic solvent is sufficiently miscible with water, such as ethanol, acetone, dioxane and the like. Through this the desired material will be deposited and the precipitates thus formed will be obtained in a known manner such as filtration or by centrifugal separation, The desired material thus obtained has sufficient purity and can be used as Raw material to be used in the manufacture of preparations. Additionally was ensured by investigations by means of paper chromatography that the desired Material is present as the only compound, As a basic amino acid, dia in this one Invention can be used, may be mentioned for clarification L-arginine, L-ornithine and L-lysine, as the reaction solvent can be water, water-containing alcohols and the like can be used. It is preferred to previously add air dissolved therein or remove a reducing agent, such as a sulfite, to the reaction solvent added before it is used for the reaction.

Nachfolgend werden Beispiele zur Verdeutlichung der Erfindung angegeben.Examples are given below to illustrate the invention.

Beispiel 1 In 20 ml vom Sauerstoff befreiten Wasser wurde 4,81 g rohe 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure, die nach einem bekannten Verfahren hergestellt war, suspendiert. Unter Rühren der Suspension und unter Einleiten von Stickstoff wurde eine Lösung von 3,48 g L-Arginin in 20 ml vom Sauerstoff befreiten Wasser langsam zu der Suspension gefügt, wobei die Reaktionsproduktlösung eine leicht gelbe transparente Lösung ergibt. Wenn die Lösung weiter für etwa 20 Minuten gerührt wurde und dann 100 ml Äthanol zu der Reaktionsproduktlösung zugefügt wurde, wurde ein öliges Material erhalten. 5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolsäure. L-Arginin wurde als leicht gelbes Pulver niedergeschlagen, wenn 50 ml Äthanol zu dem öligen Material zugefügt wurde. Das Pulver wurde durch Filtration unter Druck in Stickstoffatmosphäre abgetrennt, ES wurde 8,2 g des Produktes mit einem Schmelzpunkt von 195 -197°C unter Zersetung nach dem Trocknen erhalten. Example 1 In 20 ml of deoxygenated water, 4.81 g crude 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid produced by a known method was suspended. While stirring the suspension and while passing in nitrogen became a solution of 3.48 g of L-arginine in 20 ml of deoxygenated water slowly added to the suspension, the reaction product solution being a light yellow results in a transparent solution. When the solution was further stirred for about 20 minutes and then add 100 ml of ethanol was added to the reaction product solution, an oily material was obtained. 5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid. L-arginine was precipitated as a light yellow powder when adding 50 ml of ethanol to the oily material was added. The powder was purified by filtration under pressure in a nitrogen atmosphere separated, it was 8.2 g of the product with a melting point of 195-197 ° C under Decomposition obtained after drying.

Elementaranalyse als C31 H51 N15 O10' H2O: Berechnet: C 44,87%, H 6,6, N 25,32% Gefunden: C45,08%, H6,47%, N 25,12% Das Produkt besitzt eine Ultraviolettabsorption bei a max bei 297 mu und a min bei 243 mu, welche mit der Ultraviolettabsorption der 5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolsäure übereinstimmt.Elemental analysis as C31 H51 N15 O10 'H2O: Calculated: C 44.87%, H. 6.6, N 25.32% Found: C45.08%, H6.47%, N 25.12% The product has ultraviolet absorption at a max at 297 mu and a min at 243 mu, which is with the ultraviolet absorption which corresponds to 5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid.

Beispiel 2 purch Wiederholen des gleichen Verfahrens, wie im Beispiel 1 beschrieben, jedoch unter Verwendung von 2,92 g L-Lysin anstelle von L-Arginin wurde 5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolsäure. L-Lysin in fast quantitativer Ausbeute erhalten. Example 2 purch Repeat the same procedure as in the example 1, but using 2.92 g of L-lysine instead of L-arginine became 5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid. L-lysine obtained in almost quantitative yield.

Schmelzpunkt: 189 - 191° C (unter Zersetzung) Elementaranalyse als C31 H51 N11 O10' H2O: Berechnet: C 48,12%, H 7,16%, N 19g9lfo Gefunden: $C48,36%, H 6,95%, N 20,21% Beispiel 3 In 20 ml vom Sauerstoff befreiten Wasser wurde 4S96 g 5,-Methyl-5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolsäure. Dihydrat suspendierts wobei unter Rühren der Suspension Stickstoff eingeleitet wurde0 Hierbei wurde langsam eine Lösung von 3,4 g L-Arginin in 20 ml vom Sauerstoff befreiten Wasser zu der Suspension gefügt, wobei eine leicht gelbe transparente Lösung erhalten wurde. Wenn die Reaktionsproduktlösung für 20 Minuten weitergerührt und dann 100 ml Äthanol zu der Reaktionsproduktlösung zugefügt wurde, wurde ein öliges Material erhaltenr Wenn 50 ml Äthanol zu dem öligen Material zugefügt wurde, wurde 5-methyl-5, 6, 7, 9-tetrahydrofolsäure,l-Arginin als leicht gelbes Pulver abgeschieden. Das Pulver wurde durch Filtration unter Druck in einem Stickstoffstrom abgetrennt und getrocknete Es wurde 8,3 g es Produktes mit einem Schmelzpunkt von 127 - 1300 G (unter Zersetzung) erhalten.Melting point: 189 - 191 ° C (with decomposition) Elemental analysis as C31 H51 N11 O10 'H2O: Calculated: C 48.12%, H 7.16%, N 19g9lfo Found: $ C48.36%, H 6.95%, N 20.21% Example 3 4S96 was added to 20 ml of deoxygenated water g 5, -Methyl-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid. Suspended dihydrate with stirring nitrogen was passed into the suspension 0 A solution of 3.4 g of L-arginine in 20 ml of Oxygen freed water to the Suspension added, a slightly yellow transparent solution was obtained. if the reaction product solution was further stirred for 20 minutes and then 100 ml of ethanol was added to the reaction product solution, an oily material was obtained When 50 ml of ethanol was added to the oily material, 5-methyl-5, 6, 7, 9-tetrahydrofolic acid, l-arginine deposited as a light yellow powder. The powder was separated by filtration under pressure in a nitrogen stream and dried It was 8.3 g of product with a melting point of 127 - 1300 G (with decomposition) obtain.

Elementaranalyse als C32 H53 H15 O10' 2 H2O: Berechnet: C45,55%, H6,8%, N24,90% Gefunden: C45,93%, H6,67%, N 25,18% Das Produkt besitzt eine Ultraviolettab@@orption bei a max bei 290 mu und a min bei 245 mu, welche mit der Ultraviolettabsorption der 5-methyl-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolsäure übereinstimmt, Beispiel 4 Wenn 4,96 g 5-methyl-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolsäure-Dihydrat mit 2,64 g L-Ornithin umgestzt wureen und war in der gleichen Weise wie im Beispiel 3 beschrochen, wurde 5-Methyl-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolsäure. L-Ornithin fast quantitativ erhalten.Elemental analysis as C32 H53 H15 O10 '2 H2O: Calculated: C45.55%, H6.8%, N24.90% Found: C45.93%, H6.67%, N 25.18% The product has an ultraviolet absorption at a max at 290 mu and a min at 245 mu, which is with the ultraviolet absorption of 5-methyl-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid, Example 4 When 4.96 g 5-methyl-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid dihydrate was reacted with 2.64 g of L-ornithine and was described in the same way as in Example 3, 5-methyl-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid. L-ornithine obtained almost quantitatively.

Schmelzpunkt: 149-155" C (unter Zersetzung), Elementaranalyse als C30 H49 H11 O10' 2 H2O: Berechnet: C47,42%, H7,03%, N20,28% Gefunden: C47,72%, H 7,03%, N20,50%Melting point: 149-155 "C (with decomposition), elemental analysis as C30 H49 H11 O10 '2 H2O: Calculated: C47.42%, H7.03%, N20.28% Found: C47.72%, H. 7.03%, N20.50%

Claims

Claims: @@). 0 Salt of a basic amino acid of 5, 6, 7, 8-tetrahydrofolic acid with the formula 2.) Salt of a basic amino acid according to claim 1, which contains L-arginine as the basic amino acid.

3,) Salt of a basic amino acid according to claim 1, werin as basic Amino acid L-lysine is contained, 4.) Salt of a basic amino acid according to claim 1, which contains L-ornithine as the basic amino acid.

5,) Use of a salt of a basic amino acid liter of 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid according to one of claims 1 to 4 as an active ingredient for the preparation of aqueous injection solutions for the treatment of humans and animals.

6.) Use of a salt of a basic amino acid of 5, 6, 7, 8-Tetrahydrofolic acid according to one of Claims 1 to IF as an active ingredient for production of pharmaceutical preparations with homopoetic and liver protective activity for the treatment of humans and animals.