DE10002892A1 - Peptide des Autoantigens Aktin und ihre Verwendung, insbesondere für die Diagnostik der Autoimmunen Hepatitis Typ 1 - Google Patents
Peptide des Autoantigens Aktin und ihre Verwendung, insbesondere für die Diagnostik der Autoimmunen Hepatitis Typ 1Info
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Abstract
Die Erfindung betrifft immundominante Peptide des Aktins, die von Antikörpern in biologischen Flüssigkeiten erkannt werden, insbesondere von Antikörpern, die in Körperflüssigkeiten von Patienten auftreten, die an Autoimmuner Hepatitis (AIH) Typ I erkrankt sind. Anwendungsgebiete der Erfindung sind die Medizin und die pharmazeutische Industrie. DOLLAR A Die Aufgabe der Erfindung bestand darin, spezifische Peptide des Aktins und ihre Folgeprodukte zu finden und so bereitzustellen, daß sie für die Diagnostik von AIH Typ 1 besonders gut geeignet sind. DOLLAR A Die erfindungsgemäßen Peptide umfassen 10 bis 20 Aminosäuren, vorzugsweise 15 Aminosäuren. Sie sind entweder ganz oder teilweise oder als Variante einer der folgenden Peptide aufgebaut: DOLLAR A SEQ ID Nr. 1 KDLYANTVLSGGTTM DOLLAR A SEQ ID Nr. 2 HTVPIYEGYALPHAI DOLLAR A SEQ ID Nr. 3 NPKANREKMTQIMFE DOLLAR A SEQ ID Nr. 4 AGRDLTDYLMKILTE DOLLAR A SEQ ID Nr. 5 KILTERGYSFTTTAE DOLLAR A SEQ ID Nr. 6 GNERFRCPEALFQPS DOLLAR A SEQ ID Nr. 7 APPERKYSVWIGGSI DOLLAR A SEQ ID Nr. 8 TFQQMWISKQEYDES DOLLAR A SEQ ID Nr. 9 EYDESGPSIVHRKCF. DOLLAR A Bevorzugt sind die Peptide der SEQ ID Nr. 1 und das Peptide der DOLLAR A SEQ ID Nr. 2.
Description
Die Erfindung betrifft immundominante Peptide des Aktins, die von Antikörpern in
biologischen Flüssigkeiten erkannt werden, insbesondere von Antikörpern, die in
Körperflüssigkeiten von Patienten auftreten, die an Autoimmuner Hepatitis (AIH) Typ I
erkrankt sind. Anwendungsgebiete der Erfindung sind die Medizin und die pharmazeutische
Industrie.
Zu den autoimmunen Lebererkrankungen zählt man vor allem die autoimmunen
Verlaufsformen der chronisch aktiven Hepatitis (AI-CAH), auch Autoimmune Hepatitis (AIH)
genannt, sowie die primäre biliäre Zirrhose (PBC) und die Immuncholangopathie, die als
Überlappungssyndrom zwischen AI-CAH und PBC anzusehen ist.
Die Autoimmunhepatitiden, welche strikt von virusinduzierten Verlaufsformen unterschieden
werden müssen, sind relativ seltene Erkrankungen, die jedoch durch eine verbesserte
serologische Diagnostik immer häufiger erkannt werden. Durch den Verlust der Selbsttoleranz
kommt es zu Autoimmunreaktionen, die sich hauptsächlich gegen die Hepatozyten richten.
Neben allgemeinen diagnostischen Hinweisen wie Hepatosplenomegalie,
Hypergammaglobulinämie und Hyperproteinämie ist für diese Erkrankung eine Prädominanz
des weiblichen Geschlechts (70-90%) und ein Ansprechen auf eine immunsuppressive
Therapie, welche die AIH als Autoimmunerkrankung charakterisieren, kennzeichnend (1).
Aus klinischer Sicht ist die AIH eine chronisch nekrotisierend-inflammatorische Erkrankung
der Leber mit einer raschen Progredienz. Eine Früherkennung der Erkrankung zur Vermeidung
einer Leberzirrhose ist deshalb sehr wichtig (2).
Serologisch und klinisch unterteilt man die AIH in drei Subgruppen, die insbesondere durch
das Auftreten von nicht organspezifischen Autoantikörpern charakterisiert sind (3):
Typ 1: Antikörper gegen Zellkernantigene (ANA) mit einer Häufigkeit von bis zu 65% und gegen glatte Muskulatur (SMA) mit einer Häufigkeit von 40-50% (4),
Typ 2: Antikörper gegen ein mikrosomales Antigen der Leber und der Niere (LKM-1),
Typ 3: Antikörper gegen ein lösliches zytoplasmatisches Antigen der Leberzellen (SLA).
Typ 1: Antikörper gegen Zellkernantigene (ANA) mit einer Häufigkeit von bis zu 65% und gegen glatte Muskulatur (SMA) mit einer Häufigkeit von 40-50% (4),
Typ 2: Antikörper gegen ein mikrosomales Antigen der Leber und der Niere (LKM-1),
Typ 3: Antikörper gegen ein lösliches zytoplasmatisches Antigen der Leberzellen (SLA).
Aktin (fibrilläres F-Aktin und globuläres G-Aktin) ist ein bekanntes Autoantigen, gegen das
viele Patienten mit AIH Typ 1 Antikörper entwickeln. Es ist sowohl antigene Zielstruktur der
Autoantikörper gegen glatte Muskulatur (SMA) als auch von anti-neutrophilen
zytoplasmatischen Antikörpern (ANCA) und besteht aus 375 Aminosäuren (5).
Nach dem Stand der Technik wurden anti-SMA-Antikörper bisher nur mit immunologischen
Nachweisverfahren, wie z. B. indirekter Immunfluoreszenz (IFT) und Immunoblot, bei denen
entweder native Antigenpräparationen (Aktin) oder rekombinante Antigene an eine feste Phase
immobilisiert wurden, detektiert.
Die rekombinanten Targetantigene werden üblicherweise in pro- und eukariontischen
Wirtszellen exprimiert. Mit Hilfe dieser biologischen Expressionssysteme ist es jedoch nur sehr
schwer möglich, kleine Peptide ohne Fusionspartner, der oft auch zur Aufreinigung des
rekombinanten Antigens notwendig ist, zu exprimieren. Gerade diese Fusionsproteine
maskieren aber häufig aufgrund ihrer Größe und Konformation die für die
Antikörpererkennung notwendigen Epitope der immundominanten Struktur, so daß eine
ausreichende Sensitivität des rekombinanten Antigens oft nicht gegeben ist.
Andererseits wird nicht selten durch die antigene Struktur das Fusionsprotein sterisch
abgeschirmt, was die ohnehin relativ aufwendige Präparation des Antigens aus seiner
biologischen Matrix (Wirtszelle) erschwert oder gänzlich verhindert.
Im rekombinanten Antigen auch nach dessen Aufreinigung verbleibende Wirtskomponenten
wirken sich oft nachteilig auf die Spezifität eines Testsystems aus.
Nicht zuletzt ist zum Betreiben biologischer Expressionsyssteme ein nicht unerheblicher
sicherheitstechnischer, finanzieller und zeitlicher Aufwand erforderlich.
Die Präparation nativer Antigene aus Zell- oder Gewebepräparationen liefert hingegen zudem
meist hinsichtlich Ausbeute und Zusammensetzung schwer reproduzierbare Chargen und ist
fast immer mit einem hohen Reinigungsaufwand verbunden.
Der Einsatz vollsynthetischer Peptide, welche die immundominanten Bereiche des Aktins
repräsentieren, würde durch vollautomatisierte Peptidsynthese bekanntermaßen eine schnelle
und kostengünstige Bereitstellung von Antigenen höchster Reinheit ermöglichen.
Die erwähnten Nachteile bei der Bereitstellung nativer oder rekombinanter Antigene
berücksichtigend, bestand nun die Aufgabe der Erfindung darin, spezifische Peptide des Aktins
und ihre Folgeprodukte zu finden und so bereitzustellen, daß sie für die Diagnostik von AIH
Typ 1 besonders gut geeignet sind.
Die Erfindung betrifft immundominante Peptide des Aktins, die von Antikörpern in
biologischen Flüssigkeiten erkannt werden, insbesondere von Antikörpern, die in
Körperflüssigkeiten von Patienten auftreten, die an Autoimmuner Hepatitis (AIH) Typ 1
erkrankt sind.
Überraschend zeigte sich, daß Peptide des Autoantigens Aktin, die aus 10 bis 20 Aminosäuren
bestehen, immundominant sind und die Autoantikörper binden können, die bei Autoimmuner
Hepatitis Typ 1 vorkommen. Bevorzugt handelt es sich um Peptide, die 12 bis 17
Aminosäuren, vorzugsweise 15 Aminosäuren, aufweisen sowie ihre Mutanten und Varianten,
nämlich mit einer an einer oder mehreren beliebigen Stellen durch Austausch von
Aminosäuren geänderten Struktur und/oder mit einer an einer oder mehreren Stellen durch
Entfernen von Aminosäuren geänderten Struktur. Diese Peptide zeigen überraschend eine hohe
Frequenz positiver Reaktionen auf Antikörper der AIH Typ 1.
Als besonders geeignet haben sich die folgenden Peptide erwiesen:
Ein Peptid mit den Aminosäuren der Positionen 161-175 des Aktins mit der
SEQ ID Nr. 1 HTVPIYEGYALPHAI
und ein Peptid mit den Aminosäuren der Positionen 291-305 des Aktins mit der
SEQ ID Nr. 2 KDLYANTVLSGGTTM,
sowie ihre Mutanten und Varianten.
Ein Peptid mit den Aminosäuren der Positionen 161-175 des Aktins mit der
SEQ ID Nr. 1 HTVPIYEGYALPHAI
und ein Peptid mit den Aminosäuren der Positionen 291-305 des Aktins mit der
SEQ ID Nr. 2 KDLYANTVLSGGTTM,
sowie ihre Mutanten und Varianten.
Die Frequenz positiver Reaktionen von AIH Typ 1-Seren ist unerwartet hoch. Sie liegt bei
dem Peptid der SEQ ID Nr. 1 bei 43% und beim Peptid der Sequenz ID Nr. 2 bei 57%.
Erstmals wurden lineare, immundominante Epitope auf dem Aktinmolekül bei Patienten mit
AIH Typ 1 charakterisiert, wobei festgestellt wurde, daß die Epitope auf der Proteinoberfläche
sowohl des G- als auch des F-Aktins lokalisiert sind.
Für die Durchführung der Erfindung sind weiterhin folgende Peptide geeignet:
SEQ ID Nr. 3 NPKANREKMTQIMFE
(Positionen 111-125)
SEQ ID Nr. 4 AGRDLTDYLMKILTE
(Positionen 181-195)
SEQ ID Nr. 5 KILTERGYSFTTTAE
(Positionen 191-205)
SEQ ID Nr. 6 GNERFRCPEALFQPS
(Positionen 251-265)
SEQ ID Nr. 7 APPERKYSVWIGGSI
(Positionen 331-345)
SEQ ID Nr. 8 TFQQMWISKQEYDES
(Positionen 351-365)
SEQ ID Nr. 9 EYDESGPSIVHRKCF
(Positionen 361-375).
SEQ ID Nr. 3 NPKANREKMTQIMFE
(Positionen 111-125)
SEQ ID Nr. 4 AGRDLTDYLMKILTE
(Positionen 181-195)
SEQ ID Nr. 5 KILTERGYSFTTTAE
(Positionen 191-205)
SEQ ID Nr. 6 GNERFRCPEALFQPS
(Positionen 251-265)
SEQ ID Nr. 7 APPERKYSVWIGGSI
(Positionen 331-345)
SEQ ID Nr. 8 TFQQMWISKQEYDES
(Positionen 351-365)
SEQ ID Nr. 9 EYDESGPSIVHRKCF
(Positionen 361-375).
Die Synthese der Peptide erfolgt nach an sich bekannten Verfahren entweder durch chemische
Verknüpfung von Aminosäuren oder gentechnisch (6).
Mittels ELISA "Enzym-linked immunsorbent assay" wurden Spezifität und Aktivität der
Peptide bestimmt.
Mit den erfindungsgemäßen Peptiden kann eine Diagnose auf AIH Typ 1 mit hoher
Wahrscheinlichkeit gestellt werden.
Die Erfindung betrifft außerdem Antikörper, die gegen immundominante Epitope des Aktins
gerichtet sind, und die dadurch gekennzeichnet sind, daß sie ein Peptid oder mehrere der oben
genannten Peptide erkennen, vorzugsweise das Peptid der SEQ ID Nr. 1 und/oder das Peptid
der SEQ ID Nr. 2, deren Mutanten und Varianten.
Die Antikörper werden nach an sich bekannten Techniken hergestellt, wie z. B. durch
- - Immunisierung von Kleinsäugern oder Immunisierung von Milzzellen in vitro mit den erfindungsgemäßen Peptiden,
- - Isolierung der Milzzellen und Fusionierung mit Krebszellen zu Hybridomzellen; Selektion positiver Klone
- - Isolierung der Antikörper.
Eingesetzt werden die Antikörper sowohl in verschiedenen immunologischen Testsystemen, in
unterschiedlichen ELISA-Testsystemen, in der Durchflußcytometrie und im Western Blotting-
Verfahren.
Weiterhin betrifft die Erfindung Anti-Idiotyp-Antikörper, welche gegen einen Antikörper, der
die erfindungsgemäßen Peptide erkennt, gebildet werden, und welche auf spezifische Art die
Autoantikörper der AIH Typ 1 in biologischen Flüssigkeiten erkennen. Ihre Herstellung erfolgt
ebenfalls nach an sich bekannten Verfahren durch Immunisierung mit den entsprechenden
Autoantikörpern.
Gegenstand der Erfindung sind außerdem zum einen antigene Kompositionen, die ein Peptid
oder mehrere erfindungsgemäße Peptide enthalten und mit den Autoantikörpern, wie sie bei
AIH Typ 1 vorkommen, spezifisch reagieren, bevorzugt enthalten sie das Peptid der SEQ ID
Nr. 1 und/oder der SEQ ID Nr. 2, bzw. deren Mutanten und Varianten. In einer bevorzugten
Ausführungsvariante der Erfindung sind die antigenen Kompositionen an ein Trägermaterial
gekoppelt, wie z. B. Polystyren, chemisch aktiviertes Polystyren, aktivierte Sepharosen,
Zellulosen und ähnliche Materialien, die die Antigenität noch verbessern können.
Zum anderen sind Gegenstand der Erfindung auch immunogene Kompositionen, die die
erfindungsgemäßen Peptide enthalten, bevorzugt die Peptide der SEQ ID Nr. 1 und/oder der
SEQ ID Nr. 2, ihre Mutanten oder Varianten ggf in Verbindung mit einem Trägermaterial oder
einem anderen Autoantigen, vorzugsweise DNA. Sie induzieren die Produktion der
Antikörper, die fähig sind, Autoantigene bei AIH Typ 1 zu erkennen.
Zur Bestimmung von Anti-AIH Typ 1-Antikörpern in biologischen Flüssigkeiten wird eine
biologische Flüssigkeit mit mindestens einem Peptid oder einer Verbindung dieser Peptide mit
einem Trägermolekül oder auch einem antiidiotypischen Antikörper unter an sich üblichen
Bedingungen, die eine Antigen-Antikörper-Reaktion zulassen, in Kontakt gebracht.
Anschließend wird der Nachweis der Antigen-Antikörper-Reaktion oder einer Antikörper-Anti-
Idiotyp-Antikörper-Reaktion durch an sich bekannte physikalische oder chemische Methoden
durchgeführt.
Desweiteren wird erfindungsgemäß ein Testkit zur Bestimmung von Anti-AIH Typ 1-
Antikörpern in biologischen Flüssigkeiten zur Verfügung gestellt.
Er ist dadurch gekennzeichnet, daß er mindestens ein Peptid oder eine Verbindung dieses
Peptids gemäß der Ansprüche 1-3 mit einem Trägermolekül oder auch einem Anti-Idiotyp-
Antikörper adsorptiv oder kovalent an eine feste Phase gebunden, aufweist, vorzugsweise die
Peptide der SEQ ID No. 1 und/oder 2.
Des weiteren enthält er
Waschlösung,
Proben-Verdünnungspuffer,
Konjugat-Verdünnungspuffer,
einen markierten anti-Species-Immunglobulin-Antikörper,
ein markerspezifisches Nachweissystem, vorzugsweise ein Enzymsubstrat
eine Stopplösung.
Waschlösung,
Proben-Verdünnungspuffer,
Konjugat-Verdünnungspuffer,
einen markierten anti-Species-Immunglobulin-Antikörper,
ein markerspezifisches Nachweissystem, vorzugsweise ein Enzymsubstrat
eine Stopplösung.
Durch das erfindungsgemäße Verfahren und den Testkit lassen sich
Krankheitsnachweis sowie -verlaufbeurteilungen schnell und relativ einfach durchführen.
Die Erfindung ist witerhin nicht nur auf den Nachweis der AIH Typ 1 beschränkt, sondern
darüber hinaus für Therapiekontrolle (Monitoring) sowie zur Herstellung von
pharmazeutischen Zubereitungen gegen AIH Typ 1 geeignet.
Damit betrifft die Erfindung auch pharmazeutische Mittel, die die erfindungsgemäßen Peptide,
ggf. mit an sich üblichen pharmazeutischen Hilfs- und Trägerstoffen enthalten, oder in einer
Ausführungsvariante auch als Vakzine zur Erzeugung von Toleranzmechanismen dienen
können.
Die Erfindung soll nachfolgend an Ausführungsbeispielen näher erläutert werden.
Die Peptide wurden mit Hilfe der simultanen multiplen Peptidsynthese (6) an einem
Automaten PSSM-8 der Fa. Shimadzu, Japan, unter Verwendung der Fmoc/But-Strategie nach
Sheppard (7) hergestellt. Die Kupplungen wurden an einem polymeren Träger Tentagel S
Trityl Harz, (RAPP Polymere, Tübingen) Beladung: 0,20 mMol/g Harz durchgeführt.
Die Peptide enthalten C-terminal eine COOH-Gruppe.
Die Abspaltung aller Schutzgruppen wurde mit Trifluoressigsäure(TFA)/Wasser (95 : 5) 2 h,
Raumtemperatur unter Zusatz von 3% Triisopropylsilan bzw. TFA/Thioanisol/Thiokresol
(95 : 2,5 : 2,5) in 3 h bei Raumtemperatur unter Zusatz von 3% Triisopropylsilan, danach mit
Zusatz von 10% Trimethylchlorsilan (1 h) durchgeführt. Präparative HPLC: Anlage LC-8A mit
UV-Vis-Detektor SPD-6A, Trennsäule: Vydac 218 TP 101522 (10-15 µm, 250 × 22 mm),
Laufmittel: A = 0,05% TFA in Wasser, B = 0,05% TFA in 80% Acetonitril/Wasser; Fluß: 10,0
-15,0 ml/min, isokratisch oder mit einem flachen Gradienten.
Die Analyse erfolgte mit Hilfe eines Flugzeitmassenspektrometers (MALDI-TOF) MALDI I der
Fa. Shimadzu.
Beladung: Die Peptide wurden mit 1 µg/ml in 0,1 M Carbonatpuffer pH = 9,5 mit 100 µl/well
bei 4°C über Nacht auf eine Polystyren-Mikrotiterplatte (100 µl/well) beladen, anschließend
wird mit Waschpuffer (PBS, 0,1% Tween 20, 0,01% Thiomersal) einmal mit 250 µl/well
gewaschen, dann mit 150 µl/well für 2 h bei Raumtemperatur (RT) blockiert (2%
Rinderserumalbumin in PBS) und schließlich dreimal wie oben gewaschen. Die feste Phase
wird 3-16 h getrocknet, und die Mikroteststreifen in Aluminiumfolie eingeschweißt.
Durchführung: 100 µl Serumverdünnung (in 1% RSA, 0,3 M NaCl, 0,1% Tween 20, 0,02%
Natriumazid in 0,01 M Phosphatpuffer) werden 1 h bei RT inkubiert, danach folgen drei
Waschschritte mit Waschpuffer (je 250 µl/well). Zum Nachweis der gebundenen Antikörper
erfolgt eine Inkubation mit einem anti-human-Immunglobulin G-Peroxidase-Konjugat für 30
min. bei RT (100 µl/well), worauf sich abermals drei Waschschritte (s. o.) anschließen. Die
Visualisierung des Testes erfolgt durch eine gebrauchsfertige Substratlösung (3,3',5,5'-
Tetramethylbenzidin), die 10 min. bei RT inkubiert wird (100 µl/well). Durch Zugabe von 100
µl Stoplösung (1 N Schwefelsäure) wird die Reaktion beendet, worauf die Absorption bei 450
nm gemessen wird. Die Auswertung erfolgt üblicherweise anhand eines mitgeführten
Standardserums unter Verwendung eines rechnergekoppelten Plattenreaders.
(1) Meyer zum Büschenfelde, K. H.: Schweiz. Med. Wschr. 117 (1987) 1065-1075
(2) Van den Berg, A. P.: Scan. J. Gastroent. 33 (1998) 66-69
(3) Desmet, V. J., M. Gerber, J. H. Hoofnagle, M. Manns, P. J. Scheuer: Hepatology 19 (1994) 1513-1520
(4) Renger, F. G.: Lebererkrankungen mit Immunpathogenese in: N. Sönnichsen, E. Apostoloff (Hrsg.) Autoimmunkrankheiten. Gustav Fischer Verlag, Jena, Stuttgart, 2. Aufl. 1992: 355- 377
(5) Orth, T., Gerken, G, Kellner, R., Meyer zum Büschenfelde, K. H., Mayet, W. J.: J. Hepatol. 26 (1997) 37-47
(6) Schnorrenberg, G., Gerhardt, H.: Tetrahedron, 45, (1989) 7759
(7) E. Atherton und R. C. Sheppard, "Solid phase peptide synthesis - a practical approach" IRL Press, Oxford, 1989
(2) Van den Berg, A. P.: Scan. J. Gastroent. 33 (1998) 66-69
(3) Desmet, V. J., M. Gerber, J. H. Hoofnagle, M. Manns, P. J. Scheuer: Hepatology 19 (1994) 1513-1520
(4) Renger, F. G.: Lebererkrankungen mit Immunpathogenese in: N. Sönnichsen, E. Apostoloff (Hrsg.) Autoimmunkrankheiten. Gustav Fischer Verlag, Jena, Stuttgart, 2. Aufl. 1992: 355- 377
(5) Orth, T., Gerken, G, Kellner, R., Meyer zum Büschenfelde, K. H., Mayet, W. J.: J. Hepatol. 26 (1997) 37-47
(6) Schnorrenberg, G., Gerhardt, H.: Tetrahedron, 45, (1989) 7759
(7) E. Atherton und R. C. Sheppard, "Solid phase peptide synthesis - a practical approach" IRL Press, Oxford, 1989
Claims (15)
1. Immundominante Peptide des Autoantigens Aktin umfassend 10 bis 20 Aminosäuren, die
Autoantikörper binden können, die bei Autoimmuner Hepatitis (AIH) Typ I vorkommen.
2. Peptide nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie 12 bis 17 Aminosäuren,
vorzugsweise 15 Aminosäuren aufweisen.
3. Peptide nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie entweder ganz oder
teilweise oder als Variante einer der folgenden Peptide aufgebaut sind
SEQ ID Nr. 1 KDLYANTVLSGGTTM
SEQ ID Nr. 2 HTVPIYEGYALPHAI
SEQ ID Nr. 3 NPKANREKMTQIMFE
SEQ ID Nr. 4 AGRDLTDYLMKILTE
SEQ ID Nr. 5 KILTERGYSFTTTAE
SEQ ID Nr. 6 GNERFRCPEALFQPS
SEQ ID Nr. 7 APPERKYSVWIGGSI
SEQ ID Nr. 8 TFQQMWISKQEYDES
SEQ ID Nr. 9 EYDESGPSIVHRKCF.
SEQ ID Nr. 1 KDLYANTVLSGGTTM
SEQ ID Nr. 2 HTVPIYEGYALPHAI
SEQ ID Nr. 3 NPKANREKMTQIMFE
SEQ ID Nr. 4 AGRDLTDYLMKILTE
SEQ ID Nr. 5 KILTERGYSFTTTAE
SEQ ID Nr. 6 GNERFRCPEALFQPS
SEQ ID Nr. 7 APPERKYSVWIGGSI
SEQ ID Nr. 8 TFQQMWISKQEYDES
SEQ ID Nr. 9 EYDESGPSIVHRKCF.
4. Peptide nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß sie entweder ganz oder
teilweise oder als Variante einer der folgenden Peptide aufgebaut sind
SEQ ID Nr. 1 KDLYANTVLSGGTTM
SEQ ID Nr. 2 HTVPIYEGYALPHAI.
SEQ ID Nr. 1 KDLYANTVLSGGTTM
SEQ ID Nr. 2 HTVPIYEGYALPHAI.
5. Antikörper, die gegen immundominante Epitope des Aktins geerichtet sind, dadurch
gekennzeichnet, daß sie ein Peptid oder mehrere Peptide der Ansprüche 1 bis 4 erkennen.
6. Antikörper nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß sie das Peptid der SEQ ID Nr. 1
und/oder das Peptid der SEQ ID Nr. 2, deren Mutanten und Varianten erkennen.
7. Anti-Idiotyp-Antikörper, welche gegen einen Antikörper gemäß Anspruch 5 oder 6
gebildet werden, dadurch gekennzeichnet, daß sie auf spezifische Art die Autoantikörper
von AIH Typ I erkennen.
8. Verwendung von einem oder mehreren Peptiden gemäß Ansprüchen 1 bis 4 in antigenen
Kompositionen, die dadurch charakterisiert sind, daß sie mit den Autoantikörpern, wie sie
bei AIH Typ I vorkommen, spezifisch reagieren.
9. Verwendung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die antigenen
Kompositionen ein Peptid und/oder mehrere Peptide der SEQ ID Nr. 1 bis 9 enthalten.
10. Verwendung nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, daß die antigenen
Kompositionen das Peptid der SEQ ID Nr. 1 und/oder der SEQ ID Nr. 2 enthalten.
11. Verwendung von einem oder mehreren Peptiden gemäß Ansprüchen 1 bis 4 zur
Bestimmung von Anti-AIH Typ I-Antikörpern in biologischen Flüssigkeiten, dadurch
gekennzeichnet, daß man biologische Flüssigkeiten mit mindestens einem Peptid oder
einer Verbindung dieser Peptide mit einem Trägermolekül oder auch einem
antiidiotypischen Antikörper unter an sich üblichen Bedingungen, die eine Antigen-
Antikörper-Reaktion zulassen, in Kontakt bringt, und daß man den Nachweis der Antigen-
Antikörper-Reaktion oder einer Antikörper-Anti-Idiotyp-Antikörper-Reaktion durch
physikalische oder chemische Methoden führt.
12. Testkit zur Bestimmung von Anti-AH Tvp I-Antikörpern in biologischen Flüssigkeiten,
dadurch gekennzeichnet, daß er mindestens ein Peptid oder eine Verbindung dieses Peptids
gemäß der Ansprüche 1-4 mit einem Trägermolekül oder auch einem Anti-Idiotyp-
Antikörper adsorptiv oder kovalent an eine feste Phase gebunden, aufweist, vorzugsweise
die Peptide der SEQ ID No. 1 und/oder 2.
13. Testkit nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß er
Waschlösung,
Proben-Verdünnungspuffer,
Konjugat-Verdünnungspuffer,
einen markierten anti-Species-Immunglobulin-Antikörper,
ein markerspezifisches Nachweissystem, vorzugsweise ein Enzymsubstrat, und
eine Stopplösung enthält.
Waschlösung,
Proben-Verdünnungspuffer,
Konjugat-Verdünnungspuffer,
einen markierten anti-Species-Immunglobulin-Antikörper,
ein markerspezifisches Nachweissystem, vorzugsweise ein Enzymsubstrat, und
eine Stopplösung enthält.
13. Verwendung der Peptide gemäß Anspruch 1-4 zur Herstellung von pharmazeutischen
Zusammensetzungen gegen AIH Typ I.
14. Verwendung der Peptide gemäß Anspruch 1-4 als Vakzine zur Erzeugung von
Toleranzmechanismen.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10002892A DE10002892A1 (de) | 1999-01-12 | 2000-01-11 | Peptide des Autoantigens Aktin und ihre Verwendung, insbesondere für die Diagnostik der Autoimmunen Hepatitis Typ 1 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19901503 | 1999-01-12 | ||
| DE10002892A DE10002892A1 (de) | 1999-01-12 | 2000-01-11 | Peptide des Autoantigens Aktin und ihre Verwendung, insbesondere für die Diagnostik der Autoimmunen Hepatitis Typ 1 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE10002892A1 true DE10002892A1 (de) | 2000-11-23 |
Family
ID=7894437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE10002892A Withdrawn DE10002892A1 (de) | 1999-01-12 | 2000-01-11 | Peptide des Autoantigens Aktin und ihre Verwendung, insbesondere für die Diagnostik der Autoimmunen Hepatitis Typ 1 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE10002892A1 (de) |
-
2000
- 2000-01-11 DE DE10002892A patent/DE10002892A1/de not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8139 | Disposal/non-payment of the annual fee |