CZ289556B6

CZ289556B6 - Dialkylethery obsahující koncové karboxyskupiny nebo tetrazolové skupiny a farmaceutická kompozice obsahující tyto dialkylethery jako účinnou látku

Info

Publication number: CZ289556B6
Application number: CZ19972922A
Authority: CZ
Inventors: Charles Larry Bisgaier; Paul Leroy Creger; Alan Robert Saltiel; Sherrie Rae Tafuri
Original assignee: Warner-Lambert Company
Priority date: 1995-03-24
Filing date: 1996-02-05
Publication date: 2002-02-13
Also published as: HK1009438A1; US5750569A; MX9707198A; DK0820428T3; CA2215233A1; UA46020C2; SK282897B6; ATE192732T1; JPH11502532A; EE9700375A; FI973713A0; NO974397L; ES2148733T3; PT820428E; HUP9801825A2; NO307878B1; CZ292297A3; JP3885115B2; NO974397D0; SK128697A3

Abstract

e en se t²k dialkylether maj c ch koncov karboxyskupiny nebo tetrazolov skupiny, sni uj c ch Lp(a), triglyceridy a zvy uj c ch hladinu HDL-cholesterolu tak, e jsou pou iteln p°i l en vaskul rn ch onemocn n a neinzulinov dependentn ho diabetes mellitus a farmaceutick kompozice obsahuj c tyto dialkylethery jako · innou slo ku.\

Description

Dialkylethery obsahující koncové karboxyskupiny nebo tetrazolové skupiny a farmaceutická kompozice obsahující tyto dialkylethery jako účinnou látku

Oblast techniky

Vynález se týká dialkyletherů, majících koncové karboxyskupiny nebo tetrazolové skupiny, a farmaceutické kompozice, obsahující tyto sloučeniny, kterou lze použít při snižování určitých plazmových lipidů v těle zvířat včetně Lp(a), triglyceridů, VLDL-cholesterolu a LDLcholesterolu a zvyšování hladin dalších lipidů, například HDL-cholesterolu. Sloučeniny jsou účinné při prevenci a léčení vaskulámích onemocnění a cukrovky, například zvýšením inzulínové senzitivity.

Dosavadní stav techniky

Vaskulámí onemocnění, například koronární srdeční onemocnění, mrtvice, restenóza a periferní vaskulámí onemocnění, si v celosvětovém měřítku zachovávají vedoucí postavení v počtu úmrtí a případů, končících invaliditou. Jen v USA umírá každý rok přibližně 1,5 miliónu lidí na infarkt myokardu, který způsobuje městnavé poškození srdce. I když je pravda, že stravovací návyky a životní styl mohou urychlit nástup vaskulámích onemocnění, významným faktorem pro vývoj vaskulámího onemocnění, končícího trvalou invaliditou nebo smrtí, je geneticky daná predispozice způsobující dyslipidemii. „Dyslipidemií“ se rozumí abnormální hladiny lipoproteinů v krevní plazmě.

Vážnými rizikovými faktory, které jsou spojovány se zvýšeným rizikem vzniku vaskulámích onemocnění, jsou, mimo jiné, dyslipidemie vysokých hladin nízkohustotního lipoproteinů (LDL) a nízkých hladin vysokohustotních lipoproteinů (HDL). Poměr HDL-cholesterolu ke LDLcholesterolu je často používán k posouzení možného rizika vzniku vaskulámího onemocnění. Vzhledem ktomu, že je žádoucí vysoký poměr HDL/LDL, jsou sloučeniny, které tento poměr zvyšují buď snížením LDL nebo zvýšením HDL, případně obojím způsobem, vysoce žádané a přínosné. Nedávné studie ukázaly škodlivost vysokých hladin modifikované formy LDL, označované jako lipoprotein(a), ,,Lp(a)“.

Zdá se, že Lp(a) je nežádoucí, protože zvýšené hladiny Lp(a) jsou spojovány s vývojem aterosklerózy, koronárního srdečního onemocnění, infarktu myokardu, mrtvice, cerebrálního infarktu a restenózy po provedení balonové angioplastiky. Ve skutečnosti se zdá, že Lp(a) je vynikajícím faktorem pro předpověď vzniku mrtvice. Vysoké koncentrace cholesterolu ve formě Lp(a) jsou tedy jedním z nej důležitějších rizikových faktorů pro vznik srdečních onemocnění s následkem smrti.

Nyní se zjistilo, že určité ethery jsou účinné při snižování koncentrací Lp(a) v plazmě. Vynález tedy poskytuje způsob snižování úrovní Lp(a) v plazmě, který zahrnuje podání dialkanového etheru nebo jeho esteru, tyto typy sloučenin nebyly doposud používány pro léčení vaskulámího onemocnění. Patent US 3 320 079 například popisuje 3,3'-oxybis(2,2-dimethyklpropionovou kyselinu) jako plastifikační činidlo. Patent US 3 930 024 zase popisuje řadu alkandiolů jako činidel pro snížení triglyceridů v séru. Patent US 3 674 836 popisuje fenoxy-alkanové kyseliny jako činidla pro redukci triglyceridů. patent US 4 711 896 popisuje určité α,ω-dikarboxylové kyseliny jako činidla pro snižování koncentrace lipidů.

Cílem vynálezu je tedy poskytnout řadu dialkyletherů substituovaných karboxyskupinou, které jsou účinné při snižování koncentrace Lp(a) v plazmě, dalším cílem vynálezu je poskytnout farmaceutické formulace obsahující tyto sloučeniny a způsob léčení vaskulámích onemocnění za použití těchto sloučenin.

-1 CZ 289556 B6

Podstata vynálezu

Jak již bylo uvedeno, vynález poskytuje nové chemické entity, charakterizované jako dialkylethery substituované karboxyskupinou nebo tetrazolovou skupinou a jejich soli a estery, vynález poskytuje zejména dialkylethery obecného vzorce I

YΪ ‘XíCHPrO-KaPrX²¹¹

R, R, ve kterém n a m nezávisle znamenají celé číslo od 2 do 9;

Ri, R₂, R3 a R» nezávisle znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku; a R] a R₂společně s uhlíkem, na který jsou navázány, a R₃ a R> společně s uhlíkem, na který jsou navázány, mohou tvořit karbocyklický kruh mající 3 až 6 atomů uhlíku;

Yi a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu, aldehydovou skupinu, tetrazolovou skupinu a COOR5, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, přičemž alkylová skupina, alkenylová skupina a alkinylová skupina mohou být substituovány jednou nebo dvěma skupinami, zvolenými z halogenoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku a fenylové skupiny.

Výhodné sloučeniny podle vynálezu mají výše uvedený obecný vzorec I, ve kterém n a m znamenají stejné celé číslo od 2 do 9 a R_b R₂, R₃ a R4 znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

Dalšími výhodnými sloučeninami jsou sloučeniny, ve kterých Y, a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu nebo COOR5, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

Nej výhodnějšími sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce

ve kterém n a m nezávisle znamenají celé číslo od 2 do 5, v ideálním případě 4 nebo 5.

Zvláště výhodnou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce

HO OH

-2CZ 289556 B6

Vynález rovněž poskytuje farmaceuticky přijatelné soli kyselin podle vynálezu.

Další provedení vynálezu představují farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu obecného vzorce I společně s farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidlem nebo masťovým základem.

Farmaceutická kompozice podle vynálezu lze použít při léčení vaskulámích onemocnění, jako je například koronární srdeční onemocnění, mrtvice, resteróza a periferní vaskulámí onemocnění. Vynález poskytuje způsob snížení Lp(a), plazmových triglyceridů, vysokohustotního lipoproteinového (VLDL) cholesterolu, nízkohustotního lipoproteinového (LDL) cholesterolu a apolipproteinu B. Vynález dále poskytuje způsob zvýšení plazmového vysokohustotního lipoproteinového (HDL) cholesterolu, apolipoproteinu A-I a apolipoproteinu E, a stejně tak způsob léčení a prevence neinzulinově-dependentního diabetes mellitus, jehož podstata spočívá ve zvýšení inzulínové senzitivity podáním sloučeniny obecného vzorce I.

Sloučeniny podle vynálezu budou označeny jako alkanové kyseliny a estery. Například sloučenina obecného vzorce

bude nazvána jako kyselina pentanová, konkrétněji jako kyselina 2-methyl-2-n-propyl-5-(3methyl-3-hydroxykarbonyl)pentoxypentenová. jak již bylo uvedeno výše, výhodnými sloučeninami jsou ty sloučeniny, ve kterých n a m v obecném vzorci I znamenají stejné celé číslo a Ri, R₂, R₃ a R₄ znamenají stejné alkylové skupiny. Pokud jak Y] tak Y₂ znamená karboxylovou skupinu, potom budou tyto sloučeniny označeny jako oxybisalkanové kyseliny. Výhodnou sloučeninu obecného vzorce

HO OH

ve kterém n a m znamenají 4, lze například nazvat jako 6,6'-oxybis(2,2-dimethylhexanovou kyselinu).

V obecném vzorci I jsou Rj, R₂, R₃ a R4 definovány tak, že mohou znamenat „alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku“. Tento výraz zahrnuje methylovou skupinu, ethylovou skupinu, izopropylovou skupinu, terč, butylovou skupinu, n-hexylovou skupinu a 2-methylpentylovou skupinu. Tato alkylová skupina může být substituována halogenoskupinou, hydroxyskupinou, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku a fenylovou skupinou. Výraz „halogenoskupina“, jak je zde použit, zahrnuje atom chloru, atom bromu a atom jodu. Výraz „alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku“, jak je zde použit, znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku navázanou přes atom kyslíku, například ethoxyskupinu, izopropoxyskupinu, n-hexyloxyskupinu apod. Typickými substituovanými alkylovými skupinami jsou chlormethylová skupina, 3-hydroxyhexylová skupina, 4-fenylbutylová skupina, 2-jodpentylová skupina, izopropoxymethylová skupina, apod.

Ri, R₂, R₃ a R4 mohou rovněž znamenat alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku a substituovanou alkenylovou skupinu a alkinylovu skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku a substituovanou alkinylovou skupinu. Typickými skupinami jsou například vinylová skupina, 2-propenylová

-3CZ 289556 B6 skupina, 3-chlor-4-hexenylová skupina, 2-fenyl-3-pentenylová skupina, ethinylová skupina, 2-methoxyethinylová skupina, 2-bromethinylová skupina, 6-fenyl-3-hexinylová skupina apod.

Ri a R₂ mohou v kombinaci s atomem uhlíku, na kterém jsou navázány, tvořit karbocyklický kruh, například cyklopropylový kruh, cyklobutylový kruh, cyklohexylový kruh a cyklopentylový kruh. Podobně R₃ a R4 mohou společně s atomem uhlíku, na kterém jsou navázány, tvořit karbocyklický kruh se 3 až 6 atomy uhlíku, například cyklopropylový, cyklohexylový apod.

Yi a Y₂ mohou v obecném vzorci I nezávisle znamenat COOR₅ skupinu, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu nebo alkinylovu skupinu nebo substituovanou alkylovou skupinu, substituovanou alkenylovou skupinu nebo substituovanou alkinylovou skupinu. Tyto skupiny jsou ilustrovány výše v souvislosti s R_b R₂, R₃ a R4.

Sloučeniny podle vynálezu, které mají alespoň jednu karboxylovou kyselinovou skupinu (tj. Yi nebo Y₂ znamená COOH), snadno tvoří farmaceuticky přijatelné soli uvedením do reakce s organickou nebo anorganickou bází, typickými pro tyto účely běžně používanými bázemi jsou hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný, triethylamin, pyridin, amoniak, apod.

Typickými sloučeninami podle vynálezu jsou níže jmenované sloučeniny obecného vzorce ^γχ _Λ

Rj R₂ ^r ₃ ^R<

-4CZ 289556 B6

Μ X

1 COOH |

COOH

n X o o o ϋ

CHO

X o o o

% z 1 O o o

X ϋ o o o

I COOEt I

I CHO I

COOH

CHO

o X o

I CHO 1

I COOH I

COOH

♦ X t o o o

COOH

I COOH 1

COOH |

COOethyl |

»-4 r4 O N m M U Φ U

COOH

1 COOH

λ X υ o o o

1 COOH

I COOH

1 COOH

* «ΰ z 1 8 Q

1 COOH

1 COOEt

| tetrazolyl

H000

CHO

o X o

1 COOH

COOH

♦ X 1 o o Q

COOH

COOH |

4 z n w M 1 o o υ

CHO |

COOn-hexyl |

tetrazolyl |

COOH

* κ

I methyl

| ethyl

i-4 Λ 4J Φ X 0 M Ό •K 1 CM

| methyl

| ethyl

| n-butyl

CM X u o X

n-propyl |

<1

methyl

r-4 >» Λ 4J Φ E

ethyl |

n-hexyl

n-propyl |

ethyl

CM X o H4

1 CM X o o m X O

methyl |

ethyl |

fenylmethyl [

η

1 methyl

| ethyl

| methyl

| ethyl

| n-butyl

JM o o X

| n-propyl |

methyl

»—i £ 4J Φ E

ethyl |

i-4 CL 0 M CU 0 N •r4

n-hexyl

n-propyl |

ethyl

n X O M CQ

1 CM X υ o n X u

methyl |

ethyl |

CM X u »—1 O

Οί X

[ methyl

| methyl

| izopropyl

| methyl 1

| methyl

1 ethyl

| methyl

M X CJ o X

| n-propyl |

0

r*4 >1 £ 44 Φ E

methyl |

izopropyl |

n-hexyl

i.zobutyl |

methyl

n X u c-4 U

n-pentyl |

methyl |

ethyl |

£

1 methyl

| methyl

1 ethyl

^4 X Q* o M CU U O »-4 X u

1 methyl

1 ethyl

| ethyl

CM X o o X

| n-propyl j

r4 £ 4J Φ E iH 0 Φ Ή

methyl |

ethyl |

n-hexyl

r4 >1 4J 3 £ O N •H

methyl

n X O o X

n-pentyl |

methyl |

ethyl |

e

CO

V

«θ'

V

tn

ď)

un

KD

KO

r-

Γ-

03

cn

CD

o

C

CM

r>

v

*3*

xr

^3*

CM

co

v

m

0)

-5CZ 289556 B6

Sloučeniny podle vynálezu se připravují za použití metodologie, která je oblasti organické chemie známá. U typických syntéz se alkylhalogenid, substituovaný karboxyskupinou, uvede do reakce s alkoholem, substituovaným karboxyskupinou, v přítomnosti báze, což povede ke kondenzaci a vzniku sloučeniny podle vynálezu. Po syntézu se zpravidla se používají 5 karboxyestery, které poskytnou sloučeniny podle vynálezu, ve kterých jak Y] tak Y₂ znamenají COOR5. Prosté zmýdelnění převede v případě potřeby jednu nebo obě esterové skupiny na volnou kyselinu. Níže uvedené reakční schéma ilustruje výše zmíněnou kondenzační reakci:

^Y1 Y (CH₂) -halo + HO- (CH₂) ² ^R! ^R2 R₃ ^R4

Výraz „-halo“ označuje například atom bromu, atom chloru a atom jodu a Y] a Y₂ znamenají výhodně COOR_S, nicméně reakce bude probíhat stejně dobře, pokud budou Y] a Y₂ nezávisle znamenat tetrazolylovou skupinu nebo CHO. Popsaná reakce se zpravidla provádí tak, že se nejprve uvede do reakce alkanol a přibližně ekvimolámí množství báze, například hybridu sodného, nebo kovového sodíku, zpravidla v inaktivním organickém rozpouštědle, například 15 benzenu, toluenu, xylenu, tetrahydrofuranu, apod. Tímto způsobem se připraví oxidová forma alkanolu, která se následně nechá snadno zreagovat a ekvimolámím množstvím alkylhalogenidu za vzniku sloučeniny podle vynálezu. Reakce je zpravidla v podstatě ukončena během přibližně 2 až 10 hodin, pokud se provádí za zvýšené teploty, tj. teploty přibližně 50 °C až 120 °C. Sloučenina podle vynálezu se snadno izoluje prostým odstraněním reakčního rozpouštědla, například odpařením. Získaný produkt se může, pokud je to potřeba, dále čistit běžnými metodami, například kiystalizací z rozpouštědel, jakými jsou například ethylacetát, benzen, hexan apod., nebo chromatografícky, například přes silikagel.

Alternativní metodou pro přípravu sloučenin podle vynálezu je uvedení dialkyletheru 25 substituovaného halogenoskupinou, do reakce s α,α-dísubstituovanou kyselinou octovou nebo esterem, ethanalem nebo methyltetrazolem. Tuto reakci ilustruje následující reakční schéma:

halo— (CHj) —O— (CHJ —halo /\ R, R₂

Y. \

R, R₂ (CHj) — o— (CH₂) —halo

HC /\ v /‘i \

/C-ÍCHJ— 0R, Rj

Výše popsaný způsob se výhodně používá pro přípravu sloučenin podle vynálezu, ve kterých jsou

R] a R₂ stejné jako R₃ resp. R4 a ve kterých jsou Yi a Y₂ stejné, takovém případě se diaalkylether, subtituovaný halogenoskupinou, uvede do reakce se 2 ekvivalenty, nebo větším množstvím, derivátu kyseliny octové nebo tetrazolem, například sloučeninou

-6CZ 289556 B6

CHj CHj

Reakce se zpravidla provádí v rozpouštědle, jakým je například tetrahydrofuran, dioxan, diethyletheru, a v přítomnosti báze, například hydridu sodného, kovového sodíku, butyllithia. Reakce je zpravidla ukončena přibližně během 2 až 10 hodin, pokud se provádí při teplotě 0 °C až 50 °C. produkt, tj. sloučenina podle vynálezu, se snadno izoluje odstraněním reakčního rozpouštědla, přičemž jeho další čištění lze v případě potřeby provádět běžnými metodami včetně chromatografie a kiystalizace.

Kolikrát může být pro eliminování nežádoucích vedlejších reakcí žádoucí chránit některé reakční skupiny s odtržitelnými organickými radikály, hydroxyskupiny a volné karboxyskupiny lze například derivatizovat radikály, které eliminují jejich schopnost zasáhnout do chemických reakcí, které probíhají, přičemž tento radikál lze snadno odstranit, pokud je žádoucí regenerovat volnou hydroxyskupinu nebo karboxyskupinu. Typické ochranné skupiny pro karboxyskupinu a hydroxyskupinu a způsoby jejich navázání a následného odtržení jsou plně popsány Greenem a Wirtsem v „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. ed., John Wiley & Sons, lne., New York, NY, 1991. Hydroxyskupiyn se například snadno chrání převedením na o-benzylovou skupinu, kterou lze v případě potřeby snadno štěpit hydrogenolýzou. Karboxyskupiny se zpravidla převádějí na estery, například para-nitrobenzylestery nebo 2,2,2-trichloroethylestery. Tyto esterové skupiny jsou v případě potřeby snadno hydrolyzovatelné za vzniku volné karboxylové skupiny.

Jak bylo zmíněno výše, karboxylové kyseliny podle vynálezu snadno tvoří soli uvedením do reakce s anorganickou nebo organickou bází. Výhodnými solemi jsou anorganické soli připravené reakcí s bázemi, jakými jsou na příklad hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý, apod. Typickými organickými bázemi jsou například triethylamin, pyridin, methylamin, apod.

Následující podrobné příklady provedení vynálezu si dávají za cíl dále ilustrovat syntézu sloučenin podle vynálezu. Je třeba uvést, že tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen přiloženými patentovými nároky.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

6,6'-Oxybis(2,2-dimethylhexanová kyselina)

Do míchaného roztoku hydridu sodného (28 g 60 % dispergovaného v minerálním oleji, 700 mmol) v 600 ml suchého tetrahydrofuranu, obsahujícího 61 g (600 mmol) diizopropylaminu, se přidalo 52,9 g (600 mmol) kyseliny izobutyrové. reakční směs se míchala 30 minut při 24 °C a následně ochladila na 0 °C v ledovo-acetonové lázni. Do studeného roztoku se přidalo 286 ml 2,1M roztoku n-butyl-lithia (600 mmol) a směs se míchala 1 hodinu při 0 °C. Do studené míchané reakční směsi se po kapkách v průběhu 15 minut přidalo 59,7 g (297 mmol) 4,4'-dichlorbutyletheru. Směs se ohřála na 24 °C a míchala dalších 48 hodin, reakční směs se dále naředila přidáním 600 ml vody. Vodná vrstva se separovala, promyla 200 ml diethyletheru

-7CZ 289556 B6 a následně okyselila na pH 5,0 (kongo červeň) přidáním přibližně 150 ml 6N kyseliny chlorovodíkové. Vodný kyselinový roztok se třikrát extrahoval 300 ml podíly diethyletheru. Etherové extrakty se sloučily, promyly solankou, sušily nad MgSO₄ a po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku poskytly produkt ve formě oleje. Získaný olej se destiloval při 160 °C a tlaku přibližně 400 Pa a poskytl 66,7 g 6,6'-oxybis(2,2-dimethylhexanové kyseliny), t.t. 49 až 51 °C.

Elementární analýza (pro C]₆H3o0₅) vypočteno: nalezeno:

63,47

63,75

H 9,88 10,00.

Příklady 2 až 9

Způsobem, obecně popsaným v příkladu 1 se připravily následující sloučeniny:

7,7'-oxybis(2,2-dimethylheptanová kyselina), 5,5 '-oxybis(2,2-dimethylpentanová kyselina), 4,4 '-oxybis(2,2-dimethylbutanová kyselina),

8,8 ’-oxybis(2,2-dimethyloktanová kyselina), ethyl 2,2-dimethyl-5-(4-methyl-4-ethoxykarbonylpentyloxy)pentanoát, ethyl 2,2-dimethyl-6-(5-methyl-5-ethoxykarbonylhexyloxy)hexanoát, methyl 2,2-dimethyl-8-(7-methyl-7-methoxykarbonyloktyloxy)oktanoát a kyselina 7-(4-methyl-4-hydroxykarbonylpentyloxy)-2,2-dimethylheptanová.

Jak již bylo zmíněno výše, dialkylethery podle vynálezu jsou použitelné při léčení a prevenci vaskulámích onemocnění, jako je například koronární srdeční onemocnění, mrtvice, restenóza a periferní vaskulámí onemocnění, díky jejich schopnosti snižovat koncentrace lipoproteinu bohatého na triglycerid, například nízkohustotního lipoproteinového (LDL) cholesterolu v plazmě a zvyšovat koncentrace plazmového vysokohustotního lipoproteinového (HDL) cholesterolu. Sloučeniny podle vynálezu jsou účinné zejména při snižování Lp(a) a stejně tak při zvyšování HDL-cholesterolu.

Schopnost dialkyletherových derivátů obecného vzorce I snižovat hladinu Ap.(a) a zvyšovat hladinu HDL-cholesterolu, se stanovila v in vivo studiích, běžně používaných odborníky v daném oboru. Studie na krysách se prováděly podle následujícího protokolu.

Z laboratoří Charles River Laboratories se získali samečci Sprague-Dawleyovy krysy (100 g až 200 g), kteří se umístili po 3 až čtyřech zvířatech do klecí a dle chuti krmili krysím žrádlem Purina a vodou. V klecích se udržovala pokojová teplota a světelný režim, při kterém se po dvanácti hodinách střídalo světlo a tma, přičemž cyklus zahajovalo světlo v 6 hodin ráno. Krysám se denně mezi 6. a 9. hodinou ranní podávaly prostřednictvím žaludeční sondy testované sloučeniny, rozpuštěné nebo suspendované v 0,2 % činidle Tween-20 a 1,5 % karboxymethylcelulózovém (ve vodě) vehikulu nebo pouze ve vehikulu. Jako referenční činidlo pro všechny studie se použily vehikulum v objemu, reprezentujícím 0,25 % tělesné hmotnosti, a gemfibrozil (100 mg/kg/den). Testované sloučeniny se podávaly 7 až 14 dní v dávce dosahující až 100 mg/kg/den. Krysy se bez předchozího půstu znecitlivěly inhalací etheru, zvážily, provedl se u nich srdeční odběr krve a podrobily se hepatikotomii, pomocí které se stanovila hmotnost jater jednotlivých zvířat, odebraná krev se převedla do kyvet vakutejneru, obsahujících EDTA, s cílem izolovat krevní plazmu. Krev opic Cynomolgus se odebrala přímo do kyvet vakutejneru s cílem izolovat krevní sérum a plazmu.

Samečky opic Cynomolgus (macaca fascicularis) poskytly Charles River Laboratories (Wilmington, MA) a individuálně se umístili do klece a krmili denní dietou, tvořenou

-8CZ 289556 B6 normálními opičími sušenkami (Ralston Purina, St. Louis, MO) a ovocem (1 banán a 12 vinných hroznů). Opice se umístily do omezovačů pohybu pro základní primáty (Primáte Products, Woodside, CA) a byl jim zaveden vaskulámí vstupní port (Norfolk Medical Products, Skokie, II) pro získání krevních vzorků. Účinky sloučeniny z příkladu 1 se studovaly v režimu rostoucích dávek. V průběhu tří týdnů se získaly od opic, upevněných ve fixačních křeslech, přes vaskulámí porty tři předstudijní bazální krevní vzorky. Při studiích sloučeniny z příkladu 1 se opice fixovaly v křeslech a denně mezi 5. až 7. hodinou ranní jim byla orálním způsobem pomocí žaludeční sondy podávána dávka obsahující 3 mg/kg (1. týden), 10 mg/kg (2. týden) a 30 mg/kg (3. týden) sloučeniny z příkladu 1, suspendované v 0,2 % povrchově aktivním činidle Tween20 plus 1,5% karboxycelulózovém vehikulu. V průběhu studijní periody se zvířatům každý týden a to vždy 24 hodin po aplikaci dávky a nalačno odebraly krevní vzorky. Další krevní vzorky odebrané nalačno se získaly jeden týden po ukončení aplikací sloučeniny z příkladu 1. Konzumace potravy a chováni pozorovaných zvířat bylo v průběhu celé studijní periody normální.

Vzorky opičí plazmy se udržovaly na ledu, rozdělily na podíly odpovídající množině kyvet mikrofugy, rychle zmrazily a skladovaly při -70 °C. Vzorky séra se před provedením níže popsané analýzy, která měla určit přítomnost specifických enzymů nebo albuminu v krevním séru, skladovaly při 4 °C.

Analýza vzorků

Triglyceridy se určily za použití komerčně dostupné sady (Trigli-cinct2, Sclavo, Siena, Italy, nebo Triglyceride G, Wako Pure Chemical Industries, Ltd; Osak, Japan). Celkový obsah cholesterolů v plazmě se určil enzymeticky způsobem, popsaným Allainem a kol. v Clin. Chem., 20:470-474 (1974). Celkové profily cholesterolových lipoproteinů v plazmě se určily postsloupcovou vysoko výkonnou gelovou chromatografií (HPGC) analýzou na Superose 6 v reálném čase (on-line) na Rainin HPLC (viz Kieft a kol., J. Lipid Res., 32:859-866 (1991)). Lipoproteinový cholesterol se určil z celkově stanoveného cholesterolu a procentní plošné distribuce cholesterolu, stanovené pomocí HPGC.

Apolipoprotein A-I a E se v celé plazmě kvantifikovaly pomocí raketové imunoelektroforézy metodou Laurella a kol., Methods Enzymol, 73:339-369(1981) za použití protilátek, vypěstovaných v těle králíka proti krysímu apo A-I, v těle kozy proti apo E (získáno od DrPatrick so, LSU Medical Center, Shreveport, LA). Vzorky plazmy se před imunoelektroforézou naředily 4 M močovinou, 1 % Tritonem X-100, 12 mM Tricinem, 40 m Trisem, 0,6 mM laktátem vápenatým, 0,01 % azidem sodným, pH 8,2 60 minut při 52 °C a inkubovaly. Pro stanovení apolipoproteinů v lineárním rozmezí se provedla příslušná rozředění krysí plazmy. Imunoelektroforéza se převáděla na GelBond fólii (Cat 53748, FMC Bioproducts, Rockland, ME) zpravidla obsahující buď 4 % králičí anti-krysí apo A-I nebo 2 % kozí anti-krysí apo E antisérum v 1 % agaróze, 2 % polyethylenglykolu 6000 ve 24 nM Tricinu, 80 mM Trisu a 1,2 mM laktátu vápenatém, výška rakety se určila na gelech zabarvených amidovou černí. Při vyhodnocování dat představovala hladina apolipoproteinů v plazmě, odebrané zvířatům kontrolních skupin, na stupnici hodnocení 100.

Krysí apo B se hodnotila v mikrotitrových plotnách s malými modifikacemi, popsanými Rifaiem a kol. v Clin. Chem., 32:957—961 (1980), tj. metodou používající protilátky myšího apo B, vypěstované v těle ovcí, která reaguje s krysím apo-B. Vzorky plazmy získané od pokusných zvířat (5 μΐ, 10 μΐ, 20 μΐ, a 30 μΐ) nebo shromážděného krysího plazmového standardu (0 μΐ až 50 μΐ) se sloučily s 2 M močoviny, 10 % ovčího anti-myšího apo B séra, 1,6 % polyethylenglykolu 8000 (konečné koncentrace) v celkovém objemu 200 μΐ fosfátem pufrovaného solného roztoku. Po určení turbidity (OD = 340 nm) následovala celonoční inkubace při pokojové teplotě za použití 96 jamkového absorbačního spektrofotometru Titertek Multiscan MCC(340MKII (Flow Laboratories). Pro stanovení apo B v lineárním rozmezí testu se použila vhodná rozředění krysí plazmy (zpravidla 10 μΐ). Při vyhodnocení dat se hladina apo B v plazmě zvířat, ošetřených

-9CZ 289556 B6 účinnou látkou, porovnala s hladinou, získanou od kontrolních zvířat, která pro účely experimentu tvořila na stupnici hodnocení 100.

Lp(a) hladiny u opic se hodnotily pomocí komerčně dostupné Lp(a) ELISA sady (Apo-Tek Lp(a) Elisa Test Systém, Organon Teknika, Biotechnology Research Institute), vyvinuté pro detekci lidského Lp(a). Lp(a) se kvantifikuje sendvičovou technikou, ve které se apo(a), zachycená anti-apo(a) (potaženými mikrotitrovými plotnami), stanovila díky spojení sapo B pomocí rozpuštěné enzymaticky navázané protilátky. Standardní křivky, sestrojené pro lidskou plazmu a plazmu opice cynomolgus, mohly být použity pro kvantifikování Lp(a) opice cynomolgus. V jednom testu se pro každý vzorek plazmy opic cynomolgus, který byl pouze jednou rozmražený, provedla vždy tři stanovení Lp(a) hodnoty.

U krys krmených žrádlem se provedlo srovnání potenciálních účinků gemfibrozilu s potenciálními účinky sloučeniny z příkladu 1 na celou řadu lipidových parametrů. Tato data reprezentují data shromážděná z několika samostatných jednotlivých studií a jedné dvoutýdenní studie (N = 8 krys/skupinu). Data pro každou studii se normalizovala vzhledem k hodnotám, získaným pro krysy každé skupiny ošetřené vehikulem. Gemfíbrozil (100 mg/kg/den) neměl žádný vliv na apo A-I plazmy, jejíž hladina se většinou při aplikaci vyšších dávek sloučeniny z příkladu 1 zvýšila. Apo E se při aplikaci gemfibrozilu zvýšila pouze mírně, ale podstatně se zvýšila při aplikaci sloučeniny z příkladu 1, přičemž toto zvýšení odpovídalo velikosti dávky. Tato data byla zřejmější při jednotýdenních studiích (první týden, N = 30; druhý týden N = 8) a neodráží tedy podstatnější zvýšení apo E v plazmě, které bylo možné pozorovat při dvoutýdenní aplikaci gemfibrozilu. Jak gemfíbrozil, tak sloučenina z příkladu 1 podstatným způsobem redukují apo B. Tyto apolipoproteinové změny lze rovněž hodnotit jakou poměry apo E ku apo B nebo apo A-I ku apo B. parametry pro plazmové lipidy včetně celkové hladiny cholesterolu, lipoproteinového cholesterolu a triglyceridů, jsou sloučeninou z příkladu 1 rovněž příznivě ovlivněny (obrázek 2). Celková hladina cholesterolu v plazmě se aplikací 100 mg/kg gemfibrozilu mírně snížila, zatímco aplikace sloučeniny z příkladu 1 tuto hladinu zvýšila dávkově dependentním způsobem. Tento vliv se odrazil zejména na zvýšení HDL-cholesterolu. Jak gemfíbrozil, tak sloučenina z příkladu 1 redukovaly VLDL- a LDL-cholesterol. Tyto účinky lze hodnotit jako poměr HDL-cholesterol ku VLDL- a LDL-cholesterolu, zatímco 100 mg gemfibrozilu zvýší tento poměr na podobnou hladinu jako 10 mg sloučeniny z příkladu 1 (lx až 2x), vyšší hladiny (30 mg až 100 mg) sloučeniny z příkladu 1 dále zvyšují tento poměr a toto zvýšení, získané při nejvyšších koncentracích dosahuje až osmi- a devítinásobku. Jak gemfíbrozil, tak sloučenina z příkladu 1 redukují triglyceridy v plazmě.

Pro charakterizaci lipoproteinových cholesterolových profilů u krys (obrázek 3) a opic cynomolgus ošetřených sloučeninou z příkladu 1 (obrázek 4) se použila vysokovýkonná gelová chromatografie (HPGC). Obrázek 3 znázorňuje lipoproteinové cholesterolové profily krys (8/skupinu) ošetřené samotným vehikulem, 100 mg/kg/den gemfibrozilu nebo 1, 3, 10, 30 nebo 100 mg/kg/den sloučeniny z příkladu 1 po dobu dvou týdnů. Pro každou kiysu se charakterizoval vždy jeden profil. Všechny profily se vynesly ve stejném měřítku a profil první krysy kontrolní skupiny (vytečkovaný profil) se pro srovnání předřadil před profily krys testované skupiny. Profily skupiny ošetřené 100 mg/kg/den gemfibrozilu byly podobné profilům skupiny ošetřené 3 až 10 mg/kg/den sloučeniny z příkladu 1. Při předepsaných dávkách sloučeniny z příkladu 1 se účinky na lipoproteinový cholesterol dále zvyšovaly včetně redukce VLDL- a LDL-cholesterolu a zvýšení HDL-cholesterolu.

HPGC se rovněž použila pro charakterizaci lipoproteinových cholesterolových profilů pro tři samce opice cynomolgus, před ošetřením, v průběhu ošetření a po ošetření sloučeninou z příkladu 1. Zvířata se předem zvolila tak, aby reprezentovala zvířata s vysokým průměrným nebo nízkým poměrem LDL- ku HDL-cholesterolu. Tři bazální profily pro každou opici byly v podstatě identické a proto se zprůměrovaly a použily pro sestrojení bazálního profilu. Jednotýdenní ošetřování 3 mg/kg/den sloučeninou z příkladu 1 nemělo žádný vliv na lipoproteinové cholesterolové profily. Nicméně ošetření 10 mg/kg/den sloučeninou z příkladu 1

-10CZ 289556 B6 v průběhu druhého týdne a 30 mg/kg/den v průběhu třetího týdne progresivně snížilo VLDL·-, LDL- a HDL-cholesterol, který se začal u dvou ze tří opic po jednotýdenním průplachu opět vracet ke kontrolním hladinám. U primátů tvoří Lp(a) cholesterol stoupající výběžek na LDL píku. S postupujícím ošetřením se LDL pík stává symetričtější, což pravděpodobně odráží snížení Lp(a). Lp(a) se měřil přímo pomocí měřicího vybavení ELISA (obrázek 5). Přímá Lp(a) kvalifikace demonstruje dávkově dependentní redukci Lp(a) hladin, dosahující 62 %, 83 % a 89% redukci (78 + 8% průměr) při 30mg/kg dávky sloučeniny z příkladu 1, nezávisle na bazálních hladinách tří pokusných opic (obrázek 5). Po jednotýdenním průplachu Lp(a) dosáhl zpět hladiny před ošetřením, nebo ji dokonce překročil.

Na rozdíl od krys, u kterých se hladina HDL značně zvýšila v průběhu ošetřování sloučeninou z příkladu 1, způsobila tato sloučenina u opice cynomolgus snížení HDL-cholesterolu, redukce HDL u opice cynomolgus se může odrazit na vysoké hladině cholesterolesterového transferového proteinu (CETP) v těchto druzích. Krysí plazma má pouze malou nebo vůbec žádnou CETP aktivitu. Vysoké úrovně CETP mohou tedy urychlovat rychlost transferu HDL-cholesterolu kLDL a LDL prekurzorům, což má za následek snížení hladin HDL-cholesterolu. Analýza hladin CETP aktivity u králíků a řady různých primátů ukazuje, že hladiny CETP v plazmě uopic cynomolgus jsou podstatně vyšší (lOx až 12x) než u lidí (obrázek 6). Takže se dá očekávat, že ošetření lidí sloučeninou podle vynálezu zahrnuje snížení VLDL, LDL a Lp(a)cholesterolu a zvýšení HDL-cholesterolu.

Obrázky 1 až 6 ukazují výsledky biologického hodnocení sloučenin podle vynálezu. Výsledky jsou uváděny pro výhodnou sloučeninu z příkladu 1. Obrázek 1 ukazuje strukturu výhodné sloučeniny z příkladu 1 a označuje ji jako „PD 72953“, což je označení, pod kterým je uvedena i na některých dalších obrázcích, referenčním činidlem je gemfibrozil, někdy též označovaný jako „CI-719“.

Obrázek 2 ukazuje účinky sloučeniny z příkladu 1, pokud se podá krysám krmeným krysím žrádlem. Po dobu sedmi dní se samečkům Sprague-Dawleyovy krysy denně mezi 6. a 9. hodinou ranní orálně aplikovaly vehikulum tvořené karboxymethylcelulózou a povrchově aktivním činidlem Tween, genfibrozil, nebo sloučenina z příkladu 1 v naznačených koncentracích. Při jednom experimentu se jako kontrolní skupina použila skupina, tvořená osmi krysami, a po dobu čtrnácti dní se jedné skupině, tvořené osmi krysami, podával gemfibrozil a osmi krysám jednotlivých testovaných skupin se podávalo 1, 3, 10, 30 a 100 mg/kg/den sloučeniny z příkladu 1. Zvířata se nechala nažrat a napít dle chuti a přibližně 12 hodin po podání poslední dávky se utratila inhalací etheru, celková hladina cholesterolu a triglyceridů se stanovila enzymaticky, Lipoproteinové profily se určily pomocí kvantitativní vysokovýkonné gelové chromatografie (HPGC). HPGC píkové (viz například obrázek 3) plochy plus hodnota celkové koncentrace cholesterolu v plazmě se použily pro stanovení cholesterolu v lipoproteinových frakcích. Apolipoproteiny A-I a E se určily pomocí imunoelektroforézy. Apolipoprotein B se určil za použití imunoturbidometrické metody. U čtrnáctidenního experimentu se jako indikace aktivity peroxisomatického enzymu stanovila aktivita hepatické kamitinové acyltransferázy. Tuto metodologii popsal Krause a kol. v Pharmacol, Res., 29:345-357 (1994). Tato data ukazují, že sloučenina z příkladu 1 způsobuje dávkovaně dependentní zvýšení zmíněné aktivity, přičemž aktivace je podobná jako v případě 100 mg/kg/den dávky gemfíbrozilu. Údaj reprezentuje průměrnou hodnotu ± SEM pro hodnoty stanovené s ohledem na kontrolní skupinu, získanou z devíti samostatných experimentů.

Pokud jde o obrázek 2, krysy se ošetřily výše popsaným způsobem. Plazma se podrobila HPGC, která určila distribuci cholesterolu mezi lipoproteiny. Všechny profily pro jednotlivé skupiny osmi krys se vynesly ve stejném měřítku. Před profily testovaných skupin osmy krys je vždy předřazen jeden referenční profil pro krysu z kontrolní skupiny.

HPGC se použila pro analyzování lipoproteinových cholesterolových profilů v 10 μΐ plazmy, získané od tří opic cynomolgus (opice 90 až 98, 90 až 122, 90 až 182) před ošetřením a následně

-11 CZ 289556 B6 po jednotýdenním průplachu sloučeninou z příkladu 1. V průběhu periody týdenního ošetření, kdy se postupně zvyšovala dávka se denně mezi 5. a 6. hodinou ranní podávala na lačno orální žaludeční sonda účinné složky ve vehikulu, tvořeném karboxymethylcelulózou a povrchově aktivním činidlem Tween. Před aplikací dávky se odebrala zvířatům na lačno krev. Zvířata se krmila 20 normálními opičími sušenkami, 12 hrozny a 1 banánem denně. Vzhledem ktomu, že profily tří bazálních vzorků pro každou opici byly v podstatě identické, se tyto profily zprůměrovaly a vytvořil se reprezentativní profil. Je třeba zmínit, že spolu s probíhajícím ošetřením, které postupně redukuje Lp(a), se redukuje LDL pík a stává se symetričtějším.

Lp(a) hodnoty se stanovily pomocí komerčně dostupné testovací sady ELISA. Vzorky plazmy z každého odběru krve se rozdělily na malé alikvotní objemy (100 μΐ) a zmrazily při -70 °C. Lp(a) pro všechny vzorky plazmy se stanovily ve stejném testu. Data, která ukazuje obrázek 5, reprezentují absolutní (horní část obrázku) a relativní vztažené k bazálním (spodní část obrázku) Lp(a) hladiny tří opic, znázorněné na obrázku 4.

Aktivita transferového proteinu cholesterylesteru (CETP), jak ukazuje obrázek 6, se určila pro celou řadu primátů a pro krmením krmené a cholesterolem krmené králíky. CETP aktivita se určovala v celé plazmě stanovením rychlosti transferu fluorescenčního syntetického cholesterylesterového analogu, obsaženého v mikroemulzích, způsobem, který popsal Bigsgaier a kol. v Lipid Res., 34:1 625-1 634 (1993).

Pro srovnání relativní účinnosti sloučeniny z příkladu 1 s dalšími sloučeninami podle vynálezu se provedl jednotýdenní experiment na žrádlem krmených krysách. Samcům Sprague-Dawleyovy krysy se sedm dní, vždy mezi 6. a 9. hodinou ranní orálně podávaly karboxymethylcelulózové vehikulum, obsahující Tween, nebo sloučeniny podle vynálezu, naznačené na obrázku 7 (struktury viz diagram na obrázku) v dávce 30 mg/kg/den. Zvířata se nechala nažrat a napít dle libosti a přibližně 12 hodin po aplikaci poslední dávky se utratila inhalováním etheru. Triglyceridy v plazmě, celkové koncentrace cholesterolu v plazmě, distribuce cholesterolu mezi lipoproteiny a apolipoproteiny se určily již popsaným způsobem.

Obrázek 7 uvádí výsledky výše popsaného testu, tento obrázek ukazuje, že výhodná sloučenina z příkladu 1 prudce snižuje triglyceridy v plazmě a VLDL cholesterol a zvyšuje HDL cholesterol.

Ukázalo se, že dialkyethery rovněž zvyšují inzulínovou senzitivitu a jako takové jsou použitelné pro zvýšení využití glukózy u diabetických zvířat a pro ošetření cukrovky, zejména neinzulinově dependentního diabetes mellitus. Sloučeniny podle vynálezu se hodnotily standardním testem, používajícím 3T3-L1 adipocyty, které jsou zvláště citlivé na inzulín, tj. spotřeba cukru může být náhle aktivována inzulínem patnáctinásobně až dvacetinásobně. Metodologie použitá pro test je podrobněji popsána Frostem a kol. v J. Biol. Chem.. 260:2 646-2 652 (1985).

Konkrétněji se 3T3-L1 fíbroblastové buňky získaly ze sbírky Američan Type Culture Collection (ATCC), Rockville, MD). Buňky se nechaly růst až vytvořily shluk a následně se diferenciovaly do adipocytů. V den 0 se shluk buněk ošetřil 167 mm inzulínu, 0,25 μΜ dexamethasonu a 0,5 mM methylizobutylmethylxanthinu v 10 % fetálním bovinním séru (FBS), obsahujícím DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium). O dva dny později se médium změnilo na DMEM, obsahující 167 nm inzulínu a 10 % FBS. Médium se následně vyměnilo za 10 % DMEM a měnilo každý další den až do sklizně, testované sloučeniny, rozpuštěné v dimethylsulfoxidu, se inkubovaly v médiu v den 0 a doplnily s každou změnou média. Rozdíl se stanovil vizualizací kapiček tuku shromážděných v buňkách. Transport glukózy se měřil kvantifikací zabudování [¹⁴C]deoxyglukózy do diferenciovaných buněk v devátém dni za použití metodologie, popsané Sandoukem a kol. v Endocrinology. 133:352-359 (1993).

Obrázek 8 ukazuje výsledky buněčného vývoje reprezentativních sloučenin podle vynálezu. Transport glukózy, který se hodnotil při bazálních hladinách, naznačuje expresi glukózového transportéru Glut 1 v těchto pěstovaných adipocytech. jako referenční sloučenina se použil

-12CZ 289556 B6 troglitazon, sloučenina, která je klinicky vyvinuta jako činidlo, zvyšující využití glukózy u zvířat a lidí (plně popsáno v příkladu 2 patentu US 4 572 912), a která produkuje 70% zvýšení transportu glukózy v těchto buňkách při dávce 5 μΜ. Tato aktivita troglitazonu je předzvěstí jeho jak z příkladu 1, tak z příkladu 2 produkovaly podstatné zvýšení transportní aktivity glukózy, přičemž sloučenina z příkladu 2 způsobuje dvojnásobnou stimulaci. Sloučeniny podle vynálezu se hodnotily při dávce 100 μΜ.

Jak je patrné z předcházejících údajů, dialkylethery podle vynálezu jsou účinné pokud jde 10 o snižování Lp(a), triglyceridů, apolipoproteinu B, VLDL-cholesterolu a LDL-cholesterolu.

Sloučeniny podle vynálezu rovněž zvyšují apolipoproein A-I, apolipoprotein E, HDLcholesterol a HDL/(VLDL + LDL) poměr. Sloučeniny jako takové jsou použitelné při léčení a prevenci před vaskulámím onemocněním a neinzulinově dependentním diabetes mellitus. Dalším provedením tohoto vynálezu je způsob léčení a prevence před vaskulámím onemocněním 15 a diabetes, který zahrnuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I. „Účinným množstvím“ se rozumí dávka, potřebná pro léčení nebo prevenci proti vaskulámímu onemocnění nebo diabetes savce. Sloučeniny jsou zpravidla podávány v dávce přibližně 50 mg/den až 5 000 mg/den, běžněji přibližně 50 až 2 000 mg/den. Běžně používaným dávkovacím režimem bude přibližně 50 mg až 300 mg podávaných jednou až čtyřikrát denně. Stejné dávkovači hladiny 20 se budou používat pro léčení a prevenci před vaskulámím onemocněním a rovněž pro specifické snížení hladin Lp(a) v plazmě a zvýšení HDL-cholesterolu v plazmě a pro léčení a prevenci před diabetes.

Další provedení vynálezu představují farmaceutické formulace, obsahující sloučeninu obecného 25 vzorce I společně s farmaceuticky přijatelným masťovým základem, nosičem nebo ředidlem.

Sloučeniny lze formulovat pro běžné orální nebo parenterální podání, přičemž orální způsob podání je výhodnější. Typickými farmaceutickými nosiči a masťovými základy, používanými v orálních formulacích jsou například laktóza; sacharóza; škroby, například kukuřičný škrob a bramborový škrob; deriváty celulózy, například methylcelulóza a ethylcelulóza; želatiny; 30 mastek; oleje, například rostlinné oleje, sezamový olej, olej ze semen bavlníku; a glykoly, například polyethylenglykol. Orální přídavky budou mít zpravidla formu tablet, kapslí, emulzí, roztoků, apod. Rovněž lze použít formulace s řízeným uvolňováním, například využívající polymemí metrici nebo osmotické čerpadlo apod. Typické formulace budou obsahovat přibližně 5 % hmotn. až 95 % hmotn. dialkyletheru, podaného spolu s masťovým základem nebo nosičem. 35 Do formulace lze zabudovat ochucovadla, například příchuť třešní nebo pomeranče.

Pro parenterální podání, tj. pro běžný intramuskulámí a intravenózní způsob aplikace mohou být sloučeniny formulovány spolu s ředidly, například izotonickým solným roztokem, 5 % vodným roztokem glukózy, apod. Sloučeniny mohou být rovněž formulovány s vosky a gely ve formě 40 čípků. Sloučeniny podle vynálezu jsou rovněž vhodné pro transdermální aplikaci a mohou být formulovány spolu s penetračními činidly, apod. ve formě náplastí. Následující příklad dále ilustruje typické formulace podle vynálezu.

Příklad 10

-13CZ 289556 B6

Složky se dokonale promíchaly a získanou homogenní směsí se naplnily #4 tvrdé želatinové kapsle. Každá kapsle se naplnila 200 mg směsi a obsahovala 100 mg účinného dialkyletheru. Kapsle se podávaly dospělé osobě rychlostí denně jedna až tři kapsle pro snížení Lp(a) v plazmě.

Příklad 11

Přísada_______________________________________________. _______________Množství kyselina 2,2-dimethyl-6-(6-methyl-6--ethoxykarbonylheptyloxy)hexanová 3000 g Laktóza 750g

Kukuřičný škrob 300g

Želatina 120g

Voda1000g

Stearát hořečnatý 20g

Dialkylether, laktóza a 150 g kukuřičného škrobu se smísilo s roztokem želatiny ve vodě. Mokré granule se přesily, vysušily a opět přesily, vysušené granule se smísily se stearátem hořečnatým a zbývajícím kukuřičným škrobem a směs se slisovala do 698 mg tablet za použití 15/32 (0,469 cm) palcových standardních konkávních lisovníků. Každá tableta obsahovala 500 mg dialkyletheru.

Příklad 12

Přísada	Množství
6,6'-oxybis(2,2-dimethylhexanová kyselina)	4,0 g
Polyoxyethylensorbitanmonostearát	0,1 cm³
Nátrium karboxvmethylcelulóza	0.3 e
Komplexní křemičitan hlinitohořečnatý	0,5 g
Cukr	10 g
Glycerin	2 cm³
Benzoát sodný	0,5 g
Citrát sodný	0,2 g
Schválené červené barvivo	1 mg
Třešňová příchuť	0,02 cm³
Destilovaná voda	100 cm³

Jako polyethylensorbitanmonstearát lze použít například produkty polysorbát 60 nebo Tween 60. Komplexní křemičitan hlinitohořečnatý je gelotvomé činidlo. Lze použít například produkt Veegum H.V. Tato látka se hydratuje přes noc 10 cm³ destilované vody. Z polyethylensorbitanmonstearátu, třešňové příchuti, 30 cm³ destilované vody a dialkyl etheru se připraví směs, která se vede skrz homogenizér. Za intenzivního míchání se přidají cukr, glycerin, citrát sodný, benzoát sodný a natrium-karboxymethylcelulóza a následně hydratovaný komplexní křemičitan hlinitohořečnatý a roztok červeného barviva ve 2 cm³ vody. Výsledná suspenze se homogenizuje, okyselí na pH 5,0 přidáním kyseliny citrónové a naředí do konečného objemu 100 cm³destilovanou vodou. 55 cm³ orální dávková jednotka této suspenze obsahuje 200 mg dialkyletheru. Pokud je to žádoucí, lze červené barvivo a třešňovou příchuť vynechat nebo nahradit jiným barvivém a ochucovadlem.

Výhodným provedením vynálezu je použití dialkyl etherů při prevenci a léčení neinzulinově dependentního diabetes mellitus a stavů, které tomuto onemocnění předcházejí.

Neinzulinově dependentní diabetes mellitus (NIDDM) nebo jinak označovaný diabetes typu lije forma diabetes mellitus, která se vyskytuje převážně u dospělých jedinců, u kterých je pro použití

-14CZ 289556 B6 dostupná odpovídající produkce inzulínu a u kterého existuje defekt v inzulínem mediovaném využití s metabolismem glukózy v periferních tkáních. Vyvinutý NIDDM se vyznačuje třemi hlavním abnormalitami metabolizmu: rezistencí k inzulínem mediovanému použití glukózy, narušením stravou mediované inzulínové sekrece a nadprodukcí glukózy v játrech.

Lidé, u kterých se aktuálně vyvíjí NIDDM, se zdá, že se tak děje proto, že jejich B-buňky nakonec přestanou udržovat rezistenci. Mechanizmus zodpovědný za poškození funkce B-buněk nebyl doposud identifikován, ale může souviset s chronickými poškozeními na B-buňkách, způsobenými periferní inzulínovou rezistencí a/nebo účinky hyperglykémie. Poškození B-buněk se může rovněž vyskytovat jako independentní inherentní defekt u „prediabetických“ jedinců.

NIDDM se často vyvíjí u určitých rizikových skupin populace, přičemž jednou takovou skupinou jsou jedinci s PCOS (polycystický vaječníkový syndrom). PCOS je nejběžnějším endokrinovým onemocněním u žen v reprodukčním věku. Tento syndrom je charakterizován hyperandrogenizmem a nepravidelnou gonadotropinovou sekrecí produkující oligo- nebo anovulaci.

PCOS je spojen s hlubokou inzulínovou rezistencí, která vede k podstatné hyperinzulinémii. V důsledku této inzulínové rezistence hrozí u PCOS žen zvýšené riziko možnosti vývoje NIDDM. Hirsutizmus, akné a plešatost, které jsou běžně zjišťovány u PCOS žen, jsou klinickými známkami hyperandrogenizmu. Menstruační poruchy a neplodnost jsou důsledkem dyfunkce vaječníku související s nepravidelnou gonadotropinovou sekrecí. Nadbytek androgenu, způsobený pravděpodobně eventuální konverzí androgenů na estrogen, hraje rovněž důležitou roli při porušení uvolňování gonadotropinu u PCOS.

NIDDM se rovněž vyvíjí u jedinců rizikové skupiny populace trpící GDM (těhotenský diabetes mellitus). Těhotenství je normálně spojeno s postupnou rezistencí na inzulínem mediované použití glukózy. Je faktem, že neinzultovaná senzitivita je nižší spíš v pozdějším stadiu těhotenství. Dá se předpokládat, že inzulínová rezistence je z velké části zprostředkována účinky cirkulujících hormonů, například placentálního laktogenu, progesteronu a kortisolu, které se vyvíjejí v průběhu těhotenství. Z pohledu inzulínové rezistence se citlivost pankreatických B-buněk ke glukóze zpravidla zvyšuje skoro až třikrát v pozdějším stadiu těhotenství a úkolem odezvy je minimalizovat účinky inzulínové rezistence na hladiny cirkulující glukózy. Těhotenství tedy poskytuje hlavní „stres-test“ kapacity B-buněk kompenzovat inzulínovou rezistenci.

Další populací, která je považována za rizikovou, pokud jde o vývoj NIDDM, jsou osoby se Syndromem X; osoby s aperinzulinémií jako průvodním jevem; osoby s inzulínovou rezistencí, vyznačující se haperinzulinémií a poruchou odezvy na exofenní inzulín; a osoby s abnormálním inzulínem a/nebo výskytem glukózových poruch spojených s přebytkem cirkulujících glukokortikoidů, růstového hormonu, katecholaminů, glukagonu, parathyroidového hormonu a dalšími inzulínově rezistentními podmínkami.

Selhání léčení NIDDM může mít za následek úmrtí v důsledku kardiovaskulární poruchy a dalších diabetických komplikací včetně retinopatie, nefropatie a periferální neuropatie. Dlouhodobé léčení NIDDM zahrnuje program, jehož úkolem je napomáhat ve snižování krevního cukru v kombinaci s dietou a cvičením, Alternativně léčení NIDDM zahrnuje podávání orálních hypoglykemických činidel, například sulfonylmočovin samotných nebo v kombinaci s inzulínovými injekcemi.

Ve všech případech by bylo tedy žádoucí vyvinout způsob léčení rizikových skupin populace osob trpících PCOS a GDM, který by zabránil nebo oddálil nástup NIDDM, čímž by přinesl úlevu, zvýšil kvalitu života, zabránil akutním a dlouhodobým komplikacím, snížil úmrtnost a redukoval léčení doprovázejících onemocnění populace, u nichž existuje riziko vzniku NIDDM. Způsoby použití sloučenin podle vynálezu při ošetřování rizikových skupin populace, trpících například PCOS a GDM, jehož cílem je zabránit nebo zpomalit nástup NIDDM, výše jmenované požadavky splňují.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Derivát dialkyletheru obecného vzorce

YY

XfCHp-O-tCHp^-Z ²(X),

R_x Rj*3 ve kterém n a m nezávisle znamenají celé číslo od 2 do 9;

Ri, R₂, R₃ a R4 nezávisle znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku; a Ri a R₂společně s uhlíkem, na který jsou navázány, a R₃ a R» společně s uhlíkem, na kterých jsou navázány, mohou tvořit karbocyklický kruh mající 3 až 6 atomů uhlíku;

YiaY₂ nezávisle znamenají COOH, CHO, tetrazolovou skupinu a COOR5, ve které R₅znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, přičemž alkylová skupina, alkenylová skupina aalkinylová skupina mohou být substituovány jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z atomů halogenu, hydroskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku a fenylové skupiny; a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
2. Derivát dialkyletheru podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém R_b R₂, R₃ a R4 znamenají jednotlivě alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.
3. Derivát dialkyetheru podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém Yi a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu nebo COOR5, kde má R₅ stejný význam definovaný v nároku 1.
4. Derivát dialkyletheru podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém Y] a Y₂ nezávisle znamenají karboxylovou skupinu nebo COOR₅, ve které R₅ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.
5. Derivát dialkyletheru podle nároku 4 obecného vzorce I, ve kterém Rj, R₂, R₃ a R> znamenají jednotlivě stejnou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a Yj i Y₂ znamená karboxylovou skupinu.
6. Derivát dialkyletheru podle nároku 5 obecného vzorce I, ve kterém R_b R₂, R₃ a R4 znamenají methylovou skupinu.
7. Derivát dialkyletheru podle nároku 6 obecného vzorce I, ve kterém jsou n a m stejná celá čísla od 2 do 9.
8. Derivát dialkyletheru podle nároku 6 obecného vzorce I, ve kterém jak n, tak m znamená 4.
9. Derivát dialkyletheru podle nároku 8, kterým je kyselina 6,6'-oxybis(2,2-dimethylhexanová).

-16CZ 289556 B6
10. Derivát dialkyletheru podle nároku 7 obecného vzorce I, ve kterém se n a m zvolí ze 2, 3, 5 nebo 6.
11. Derivát dialkyletheru podle nároku 10, kterým je kyselina 5,5 '-oxybis(2,2-dimethylpentanová), kyselina 4,4 '-oxybis(2,2-dimethylbutanová), kyselina 8,8'-oxybis(2,2-dimethyloktanová).
12. Derivát dialkyletheru podle nároku 3 obecného vzorce I, ve kterém jak Yi tak Y₂ znamená COOR5, kde má R₅ význam definovaný v nároku 1.
13. Derivát dialkyletheru podle nároku 12 obecného vzorce I, ve kterém R₅ znamená methylovou skupinu.
14. Derivát dialkyletheru podle nároku 13, kterým je methyl-2,2-dimethyl-8-(7-methyl-7methoxykarbonyloktyloxy)oktanoát.
15. Derivát dialkyletheru podle nároku 12 obecného vzorce I, ve kterém R₅ znamená ethylovou skupinu.
16. Derivát dialkyletheru podle nároku 15, kterým je ethyl-2,2-dimethyl-5-(4-methyl-4ethoxykarbonylhexyloxy)hexanoát.
17. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje jako účinnou složku sloučeninu obecného vzorce I podle nároku 1 společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem, nosičem nebo masťovým základem.
18. Farmaceutická kompozice podle nároku 17, vyznačená tím, že obsahuje jako účinnou složkou sloučeninu podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém Y, a Y₂ znamenají nezávisle COOH nebo COOR₅, ve kterém R₅ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.
19. Farmaceutická kompozice podle nároku 18, vyznačená tím, že obsahuje jako účinnou složku sloučeninu podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém R_t, R₂, R₃ a R, znamenají methylovou skupinu.
20. Farmaceutická kompozice podle nároku 19, vyznačená tím, že obsahuje jako účinnou složku sloučeninu podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém n a m jsou identické a znamenají celá čísla od 2 do 9.
21. Farmaceutická kompozice podle nároku 20, v y z n a č e n á t í m, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém n a m znamenají 4.
22. Farmaceutická kompozice podle nároku 21, vyznačená tím, že obsahuje 6,6 '-oxybis)2,2-dimethylhexanovou kyselinu).
23 výkresů