CZ20012529A3 - Nový amidinobenzylamidový derivát a jeho pouľití jako inhibitoru thrombinu - Google Patents

Description

Tento vynález se týká nových farmaceuticky užitečných sloučenin, obzvláště sloučenin, které jsou kompetitivními inhibitory trypsinu podobných serinproteas, obzvláště thrombinu, nebo jejich prekurzorů léčiv, jejich použiti jako léčiv, farmaceutických přípravků je obsahujících a syntetických postupů jejich výroby.

Dosavadní stav techniky

Srážení krve je klíčovým procesem zahrnutým jak v hemostázi (tj. prevence ztrát krve z poškozené cévy), tak v trombóze (tj. tvorba krevní sraženiny v cévě, někdy vedoucí k jejímu uzavření).

Koagulace je výsledkem komplexních sérií enzymatických reakcí. Jedním z konečných kroků v této řadě reakcí je konverze proenzymu prothrombinu na aktivní enzym rhrombin.

thrombinu je známo, že v koagulaci hraje ústřední rolí. Aktivuje destičky, což vede k jejich agregaci, přeměňuje fibrinogen na monomery fibrinu, které spontánně polymerují na fibrinové polymery a aktivuje faktor XIII, který naopak spojuje polymery do sítí, aby se vytvořil nerozpustný fibrin. Thrombin navíc aktivuje faktor V a faktor VIII, což vede k pozitivní zpětné vazbě při tvorbě thrombinu z prothrombinu.

Č.j.

Diky inhibici agregace destiček a tvorby a zesiťov.áni fibrinu lze u účinných inhibitorů thrombinu očekávat, že budou vykazovat antitrombotickou aktivitu. Navíc by se dalo očekávat, že antitrombotická aktivita by mohla být posílena účinnou inhibici mechanismu positivní · zpětné vazby.

Dále je známo, že podávání prekurzorů léčiv inhibitorů thrombinu může poskytnout zlepšení

a) jistých farmakokinetických vlastností po podání těchto inhibitorů a

b) prevalence jistých vedlejších účinků spojených těmito inhibitory.

Dosavadní poznatky

Počáteční vývoj inhibitorů thrombinu o nízké molekulární hmotnosti je popsán Cleassonem v Blood Coagul. Fibrinol., 5, 411 (1994).

Blombáck a kol., (v J. Clin. Lab. Invest., 2 4, suppl. 107, 59, (1969)) popsal inhibitory thrombinu založené na sekvenci aminokyselin umístěné okolo místa štěpení A-alfa řetězce fibrinogenu. Z diskutovaných sekvencí aminokyselin tito autoři navrhli jako nejúčinnější inhibitor tripeptidovou sekvenci Phe-Val-Arg (P9-P2-PL, dále označovaná jako sekvence P3-P2-P1).

Inhibitory thrombinu založené na dipetidylových derivátech s alfa,omega-aminoalkylguanidinem v pozici PÍ jsou známy z US patentu č. 4 346 078 a mezinárodní patentové přihlášky WO 93/11152. Byly také popsány podobné, •* e · • · · · • ····· · 9 «·9 • · ···· · ♦

Λ · · · ♦ w v » V9 9 strukturně příbuzné dipeptidylové deriváty. Například mezinárodní patentová přihláška WO 94/29336 popisuje sloučeniny, které například mají v pozici PÍ například aminomethylbenzamidiny, cyklické aminoalkylamidiny a cyklické aminoalkylguanidiny (mezinárodní patentová přihláška WO 97/23499 popisuje prekurzory léčiv jistých z těchto sloučenin), evropská patentová přihláška 0 648 780 popisuje sloučeniny, které mají v pozici PÍ například cyklické aminoalkylguanidiny.

Inhibitory thrombinu založené na peptidylových derivátech, které mají v pozici PÍ také cyklické aminoalkylguanidiny (např. buď 3- nebo 4-aminomethyl-l-amidinopiperidin) jsou známy z evropských patentových přihlášek 0 468 231, 0 559 046 a 0 641 779.

Inhibitory thrombinu založené na tripeptidylových derivátech s argininaldehydem v pozici PÍ byly poprvé popsány v evropské patentové přihlášce 0 185 390.

V nedávné době byly popsány peptidylové deriváty založené na argininaldehydu modifikované v pozici P3. Například mezinárodní patentová přihláška WO 93/18060 popisuje hydroxykyseliny, evropská patentová přihláška [přesná citace] 0 526 877 des-aminokyseliny a evropská patentová přihláška 0 542 525 o-methylmandlové kyseliny v pozicí P3.

Jsou také známy inhibitory serin proteas (např. thrombinu) založené na elektrofilních ketonech v pozici Pl. Například evropská patentová přihláška 0 195 212 popisuje alfa-ketoestery a amidy, evropská patentová přihláška 0 362 002 fluoralkylamidketony, evropská patentová přihláška O 364 344 alfa,beta,delta-triketosloučeniny a evropská patentová přihláška 0 530 167 alfa-alkoxyketonové deriváty argininu v pozici Pl.

Jiné strukturně odlišné inhibitory trypsinu podobných serinproteas založené na'derivátech kyseliny borité na C-konci argininu a jejich isothiouroniových analozích jsou známy z evropské patentové přihlášky 0 293 881.

V nedávné době byly zveřejněny inhibitory thrombinu založené na peptidylových derivátech v evropské patentové přihlášce 0 669 317 a mezinárodních patentových přihláškách WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/03374, WO 96/25426, WO 96/31504, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 98/06740 a WO 97/49404.

Přetrvává však potřeba účinných inhibitorů trypsinu podobných serinproteas jako je thrombin. Existuje obzvláštní potřeba sloučenin, které jsou jak. orálně biologicky dostupné, tak selektivní při inhibici thrombinu ve srovnání s jinými serinproteasami. U sloučenin, které vykazují kompetitivní inhibiční aktivitu vůči thrombinu lze očekávat, že budou obzvláště užitečné jako antikoagulancia a tedy užitečné při terapeutickém léčení trombózy a souvisejících poruch.

Podstata vynálezu

Podle tohoto vynálezu se poskytuje sloučenina obecného vzorce I ve

R¹ představuje substituent N(R⁵)R⁶ nebo S(O)_mR⁷'

R² a R³ nezávisle představují případný substituent zvolený z atomu halogenu, alkylové skupiny s 1 až atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku (kteréžto posledně uvedené 2 skupiny jsou případně substituovány atomem halogenu,

Y představuje alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, případně substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, methylenem, =0 nebo hydroxyskupinou;

R⁴ představuje atom vodíku, OH, 0R^8a, C(O)OR^8b nebo

R^8c,

R⁵ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (případně substituovanou atomem halogenu) nebo, dohromady s R⁶ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R^s napojeny, představuje 3- až 7-členný kruh obsahující atom dusíku, kterýžto kruh případně zahrnuje atom kyslíku a/nebo je případně substituován skupinou =0;

R⁶ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy • · · · v « ·· · · · • · · · · ·« · · ··· ··· · * · · ·· ·«··«· · · · « · · · • ····«··· .···· ·· · · · · · · ··. · uhlíku (případně substituovanou atomem halogenu),

C(0) R⁹ nebo, dohromady s R⁵ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ napojeny, představuje a 3- až 7-členný kruh obsahující atom dusíku, kterýžto kruh případně zahrnuje atom kyslíku a/nebo je případně substituován skupinou =0, nebo skupina N(R⁵)R⁶ představuje strukturní fragment la,

R^oa představuje jeden nebo více případných substituentů zvolených z atomu halogenu, alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku a alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku (kteréžto posledně uvedené dvě skupiny jsou případně substituovány atomem halogenu);

X představuje CH nebo N;

m představuje O, 1 nebo 2;

R' představuje atom vodíku, NH₂ nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

R^Bd a R^8b nezávisle představují alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, alkylfenyl s 1 až 32 atomy uhlíku v alkylové části nebo aryl se 6 až 10 atomy uhlíku, nebo R^Sa představuje C (R^10a) (R^10b) OC (0) R¹¹, C(R^10a) (R^10b) N (H) C (O) OR¹² nebo C (R^10a) (R^10b) OC (0) N(H)R¹²;

R^6c představuje C (R^10a) (R^10b) 0C (0) R¹¹, C (R^10a) (R^10b) N (H)C(0)OR¹² nebo C (R^10a) (R^10b) 0C (0) N (H) R¹²;

R^10a a

R¹²

R⁹

Het¹ • . · · · · · ·· ·· · · • ««·««··· • · · · · · ·· 4 « «· · · *

R^10b nezávisle představují, při každém výskytu, atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, představuje, při každém výskytu, aryl se 6 až 10 atomy uhlíku, OR¹² nebo alkylovou skupinu s 1 až 7 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO₂H a arylu se 6 až 10 atomy uhlíku);

představuje, při každém výskytu, arylse 6 až 10 atomy uhlíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO₂H.a arylu se 6 až 10 atomy uhlíku);

představuje alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, Het¹, aryl se 6 až 10 atomy uhlíku nebo alkylovou skupinu substituovanou arylem se 6 až 10 atomy uhlíku; a představuje 4- až 12-členný heterocyklický kruh, který obsahuje jeden nebo více heteroatomů zvolených z atomu kyslíku, dusíku a/nebo síry a kterýžto kruh může být zcela nasycený, částečně nasycený nebo aromatický a/nebo případně monocyklický, bicyklický a/nebo kondenzovaný na benzenové jádro, kde každá arylová/fenylová skupina a skupina Het¹ uvedená výše je případně substituována jedním nebo více atomy halogenu, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a/nebo alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku (kteréžto posledně jmenované dvě skupiny jsou samy o sobě

- 8 • · ·· ·· · · · • «· ·· ·· · · »·· ··· ·««« · · · • ····· · · ··· · · • ········ «··· ·· ·· · · ·· ··· případně substituovány jedním nebo více atomy halogenu) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, za předpokladu, že

a) když m představuje 1 nebo 2, pak R⁷ nepředstavuje atom vodíku, a

b) když m představuje 0, pak R⁷ nepředstavuje NH₂, kteréžto sloučeniny se zde dále označují jako sloučeniny podle tohoto vynálezu.

Farmaceuticky přijatelné soli zahrnují adični soli s anorganickou kyselinou (např. halogenovodíkovou) a s organickou kyselinou (např. kyselinou octovou, methansulfonovou nebo trifluoroctovou).

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou vykazovat tautomerii. Všechny tautomerní formy a jejich směsi jsou zahrnuty do rozsahu předloženého vynálezu. Jednotlivé tautomerní formy sloučenin podle tohoto vynálezu, které mohou být zmíněny, zahrnují sloučeniny spojené s polohou dvojné vazby v amidinové funkční skupině ve sloučenině obecného vzorce las polohou substituentu R⁴, když tento substituent nepředstavuje atom vodíku.

Sloučeniny obecného vzorce I také obsahují alespoň dva asymetrickéh atomy uhlíku a mohou tedy vykazovat optickou isomerii a/nebo diastereoisomerii. Všechny diastereoisomery mohou být rozštěpeny použitím obvyklých postupů, např. chromatografií nebo frakční krystalizací.

Různé stereoisomery mohou být isolovány rozštěpením racemické nebo jiné směsi sloučeniny použitím obvyklých postupů, např. frakčni krystalizace nebo HPLC.

Alternativně mohou být požadované optické isomery připraveny reakcí příslušných opticky aktivních výchozích materiálů za podmínek, které nezpůsobí racemisaci nebo epimerisaci, nebo derivatisací, například homochirální kyselinou následovanou separací· diastereoisomerních derivátů obvyklými prostředky (např. HPLC, chromatografií na oxidu křemičitém). Všechny stereoisomery jsou zahrnuty do rozsahu vynálezu.

Jak je zde používán, zahrnuje pojem aryl fenyl, naftyl apod.

Alkylové skupiny, které mohou být představovány R², R³, R⁵, R⁶, R^6a, R⁷, R^8a, R^8b, R⁹, R^10a, R^10b, R¹¹ a R²² a jimiž mohou být Y a arylové/fenylové skupiny a skupina Ret¹ substituovány, alkoxylové skupiny, které mohou být představovány R², R³ a R^8a, a jimiž mohou být substituovány arylové/fenylové skupiny a skupina Het¹, alyklová část alkylfenylové nebo alkylarylové skupiny, ktreá může představovat R^8a, R^8b, R⁹, R¹¹ a R¹², a alkylenové skupiny, kteroé mohou představovat Y, mohou, kde je dostatečný počet atomů uhlíku, být lineární nebo rozvětvené, nasycené nebo nenasycené, cyklické, acyklické nebo částečně cyklické/acyklické a/nebo mohou být případně přerušeny atomem kyslíku. Odborník v oboru zjistí, že když alkylové skupiny, které mohou být představovány R², R³, R³, R⁶, R^6a, R⁷, R^8a, R^8b, R⁹, R^10a, R^10b, R¹¹ a R¹² a jimiž mohou být Y a arylové/fenylové skupiny a skupina Het¹ substituovány jsou cyklické a přerušené atomem kyslíku., ' mohou pak představovat heterocykly obsahující atom kyslíku,

- 10 • · · * ·· ·· ♦·· • · « « « ·· · ···· • · · · ·· ·» r • ····« ·· ♦ » ·· · • ······*· ···· ·· ·· ·« ··v·· jako je tetrahydrofuranyl nebo (kde je to příhodné) tetrahydropyranyl.

Atomy halogenu, které mohou být představovány R\ R³ a R^6a, a jimiž mohou být substituovány skupiny r2, r3, R³, R^, R^^a a arylové/fenylové skupiny a skupina Het¹, zahrnují fluor, chlor, brom a jod.

Zkratky jsou uvedeny na konci tohoto popisu.

Když R⁵ a R⁶, dohromady s atomem dusíku, na nějž jsou připojeny, představují 3- až 7-členný kruh obsahující atom dusíku (pyrrolidin), kterýžto kruh případně zahrnuje atom kyslíku a/nebo je substituován skupinou -O_r je kruh výhodně substituován na atomu uhlíku, který je k atomu dusíku v poloze α. K odstranění pochybnosti, atom dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny ja atom dusíku, který musí být přítomen v kruhu.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu, které mohou být zmíněny, zahrnují ty sloučeniny, ve kterých:

R~ a R³ nezávisle představují případný substituent zvolený z atomu halogenu nebo alkylové skupiny s až 4 atomy uhlíku (případně substituované halogenu);

R⁵ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo, dohromady s R⁶ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představuje a 3- až 7-členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0;

• · ·«· » · · · • · · ♦ · · ·· ·· · · ···

R^b představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,.C (0) R⁹ nebo, dohromady s R⁵ a atom em dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představuje a 3- až 7-členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0;

když R⁴ představuje 0R^8a nebo C(O)OR^8b, R^Sa a R^8b nezávisle představují, při každém výskytu, alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části nebo arylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku, kteréžto poslední dvě uvedené skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více atomy halogenu,· alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a/nebo alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku groups;

R⁹ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku; a ' všechny ostatní substituenty mají jinak význam definovaný zde výše.

Další sloučeniny podle tohoto vynálezu, které mohou být zmíněny, zahrnují sloučeniny, ve kterých R⁴ nepředstavuje R^8c.

Výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují sloučeniny, ve kterých:

R², pokud je přítomen, představuje lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhliku

- 12 (obě z nich jsou případně substituovány atomem halogenu), nebo atom halogenu (např. chlor);

R³ buď není přítomen nebo, pokud je přítomen, představuje lineární nebo, rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo atom halogenu;

R⁵ představuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo, dohromady s R⁶ a atomem dusíku, na nějž R⁵ a R⁶ jsou připojeny, představuje 4- až β-členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0;

R° představuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, C(0)-alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části nebo, dohromady s R⁵ a atomem dusíku, na nějž R⁵ a R⁶ jsou připojeny, představuje 4- až β-členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0;

R' představuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

Y představuje 0¾ nebo (CH2)₂.

Když R⁴ představuje 0R^8a, výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu sloučeniny, ve kterých R^8a představuje lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cyklickou alkylovou skupinu se 4 nebo 5 atomy uhlíku (kteréžto posledně uvedené dvě skupiny jsou případně přerušeny atomem kyslíku), nebo fenyl nebo alkylfenylovou ··« · · · · « · · • ····· ·· ··· · · • ········ ······ ···· ····· skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku v alkylové části (např. benzyl) (kteréžto poslední dvě uvedené skupiny jsou případně substituovány jak je uvedeno zde výše), nebo R^8a představuje CH2OC(O)R¹¹, kde R^u představuje fenyl, lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto poslední uvedená skupina je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO2H a fenylu) , nebo OR¹² (kde R¹² představuje fenyl nebo lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto poslední uvedená skupina je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO₂H a fenylu)).

Když R⁴ představuje C (0) 0R^8b, · zahrnuj i výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu sloučeniny, ve kterých R^8b představuje lineární nebo rozvětvenou alkylfenylovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku v alkylové části nebo fenyl (kteréžto poslední dvě uvedené skupiny jsou substituovány jak je uvedeno zde výše).

Výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují sloučeniny, ve kterých je R¹ připojen na fenylový kruh v poloze 3 vzhledem ke skupině -CH(OH)-, na niž je fenylový kruh rovněž připojen. Případný substituent R² je výhodně připojen na fenylový kruh v polze 5 vzhledem ke skupině -CH(OH)-, na niž je fenylový kruh rovněž připojen.

Když skupina N(R⁵)R⁶ představuje strukturní fragment la, je tento fragment výhodně nesubstituován.

Výhodnější sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují sloučeniny, ve kterých:

R^- představuje N(R⁵)R⁶, • · · · ·· · · ·« ·· · · · · · · · · • ····· ·· ··· · · • · · ·· · · · · ···♦ ·· ·· · · ·· «·· je-li přítomen, chlor, výhodně v polze 2

R^J buď není přítomen nebo, představuje methyl nebo vzhledem ke skupině -CH₂-, na niž je fenylový kruh rovněž připojen,

R^8a představuje lineární nebo rozvětvenou lakylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku (přépadně přerušenou atomem kyslíku) nebo cyklickou alkylovou skupinu se 4 nebo 5 atomy uhlíku přerušenou atomem kyslíku,

R“ představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo, dohromady s R⁶ nebo atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představuje 5 nebo 6 členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0,

R’^J představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, C(0)-alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v lakylové části nebo, dohromady s R⁵ nebo atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představuje 5 nebo 6 členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0,

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém fragment

je v S konfiguraci jsou výhodné.

Vlnovky na vazbách ve výše uvedeném fragmentu označuji polohy vazen na fragmentu.

Výhodné sloučeniny obecného vzorce I zahrnují sloučeniny z příkladů uvedených zde dále.

Příprava

Podle tohoto vynálezu je také poskytnut způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I, který zahrnuje:

i) kondenzaci sloučeniny obecného vzorce

II, kterém

OH

II

R¹ a R² mají význam zde definovaný výše,

O • · ve kterém

Y, R³ a R⁴ mají význam zde definovaný výše, například za přítomnosti kondenzačního činidla (např., EDC, DCC, HBTU, HATU, TBTU PyBOP nebo oxalylchloridu v DMF), příhodné báze (např. pyridinu, 2,4,6-trimethylpyridinu, 2,4,6-kollidinu, DMAP, TEA nebo DIPEA) a vhodného organického rozpouštědla (např. dichlormethanu, acetonitrilu nebo DMF), ií) kondenzaci sloučeniny obecného vzorce IV,

R¹, R² a Y mají význam zde definovaný výše, se sloučeninou obecného vzorce V,

• · • · ve kterém

R^J a R⁴ mají význam zde definovaný výše, například za přítomnosti kondenzačního činidla (např. oxalylchloridu v DMF, PyBOP, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP nebo TBTU) ,· příhodné báze (např. pyridinu, 2,4,6-trimethylpyridinu, DMAP, TEA, 2,4,β-kollidinu nebo DIPEA) a vhodného organického rozpouštědla (např. dichlormethanu, acetonitrilu nebo DMF).

(iii) pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje OH nebo 0R^8a, reakci sloučeniny obecného vzorce

VI

VI ve kterém

R^l, R², Y a R³ mají význam definovaný zde výše, se sloučeninou obecného vzorce VII

H₂NOR^a

VII

-ve kterém

- 18 R^a představuje atom vodíku nebo R^8a a R^8a má význam definovaný zde výše, například při teplotě od 40 do 60 °C za přítomnosti vhodné báze (např. TEA) a příhodného organického rozpouštědla (např. THF, CH₃CN, DMF nebo DMSO) případně při předchozím zpracování sloučeniny obecného vzorce VII plynným chlorovodíkem, za přítomnosti nižšího alkylakoholu (např. alkylalkoholu s 1 až 6 atomů uhlíku) (např. ethanolu) při teplotě například 0 °C, k vytvoření sloučeniny obecného

Vili

R^c představuje nižší alkyl (např. alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku), jako je ethyl, a

R¹, R², Y a R³ mají význam definovaný zde výše, kterážto sloučenina může být v případě potřeby isolována, iv) pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje OH nebo 0R^8a, reakci sloučeniny odpovídající sloučenině obecného vzorce I, ve kterém namísto R⁴ je přítomna • · *· ·· ·« · * ♦ · · · ♦ · · »«·» • · t · « 9 « V «« ’ ··« ·· · · 3 · · » • ·*<>»··· ······ «9 ·» « « _ev· chránící skupina C(O)OR^bl, kde R^bl představuje skupinu jako je 2-trimethylsilyl, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylfenyl (např. benzyl), se sloučeninou obecného vzorce VII jak je definována zde výše, například za reakčních podmínek podobných reakčním podmínkám zde výše popsaným pro přípravu sloučenin obecného vzorce I (krok iii)) (odborník v oboru zjistí, že v takové reakci dvojitě chráněný (tj . C(O)OR^bl a 0R^a) amidinový derivát může v některých případech být pokud je to žádoucí isolován a skupina C(O)OR^bl poté odstraněna obvyklými postupy),

v) pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje C(O)OR^8b, reakci sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje atom vodíku, se sloučeninou obecného vzorce IX

L¹-C(O)OR^8b IX ve kterém

L¹ představuje vhodnou odstupující skupinu, jako je atom halogenu nebo p-nitrofenoxyskupina a

R^5t> má význam definovaný zde výše, například při teplotě 0°C za přítomnosti vhodné báze (např. hydroxidu sodného) a příhodného organického rozpouštědla (např. THF) a/nebo vody, ví) pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje 0R^8a, reakci sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje OH, se sloučeninou obecného vzorce

IXA

L¹-R^8a ve kterém

IXA

R^8a má význam definovaný zde výše, například při teplotě od 0°C do tepltoy zpětného toku, případně za přítomnosti příhodného rozpouštědla (např. DCM, THF, MeCN nebo DMF) a vhodné báze (např. Et₃N nebo pyridinu), vii) pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje R^8c, kde R^8c představuje C (R^10a) (R^10b) OC (0) R¹¹ nebo C (R^10a) (R^10b) OC (0) Ν (H) R¹², reakci odpovídající sloučeniny

ve kterém,

R¹, R², Y, R³, R^10a a R^10bmají význam definovaný zde výše, se sloučeninou obecného vzorce IXC

L^XC (0) R¹³

IXC ve kterém

R¹³ představuje R¹¹ nebo N(H)R¹² a

L¹, R¹¹ a R¹² mají význam definovaný zde výše, například za podmínek zde výše popsaných (krok způsobu vi) ) , viii) pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje R^8c, reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce.I, ve kterém R⁴ představuje atom vodíku, se sloučeninou obecného vzorce IXD

L¹C (R^10a) (R^10b)R¹⁴ IXD ve kterém

R^w představuje OC(O)R¹¹, N(H)C(O)OR¹² nebo

OC(O)N(H)R¹² a

L¹, R^10a, R^10b, R¹¹ a R¹² mají význam definovaný zde výše, například za podmínek zde výše popsaných (krok způsobu vi) ) , ix) pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R¹ zahrnuje skupinu S(0) nebo S(0)2, oxidaci odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R¹ zahrnuje skupinu S, za přítomnosti příhodného množství vho.dného oxidačního čxnidla (např. mCPBA nebo peroxymonosulfonatu draselného) a příhodného organického rozpouštědla (např. CH2C12, • · · · ·· · · ·· • ♦ ♦ · ♦ ·· · · · · ··· ···· ·· • · · · · · · · ·«· · • ······· ····♦· · * · · ·· · methanolu, vody nebo jejich směsí (např. methanol/voda)).

Sloučeniny obecného vzorce II jsou dostupné za použití známých a/nebo ovyklých postupů.

Například sloučeniny obecného vzorce II se mohou připravit reakci aldehydu obecného vzorce X ve kterém

R¹ a R² mají význam definovaný zde výše,

a) sloučeninou obecného vzorce XI

RCN

XI ve kterém

R představuje atom vodíku nebo (CH3)₃Si, například při teplotě místnosti (např. při teplotě pod 100 °C) za přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (např. chloroformu nebo methylenchloridu) a, pokud je to žádoucí, za přítomnosti vhodné báze (např. TEA) a/nebo vhodného katalyzátorového systému (např. benzylamoniumchloridu nebo jodidu zinečnatého), následovanou hydrolýzou za podmínek odborníkovi v oboru dobře známých (např. jak je zde dále popsáno), • 4 • ·

• · • · ·

b) NaCN nebo KCN, například za přítomnosti HaHSCh a vody následovanou hydrolýzou,

c) chloroformem, například za zvýšené teploty (např. teploty vyšší než teplota místnosti ale nižší než 100 °C) za přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (např. chloroformu) a, pokud je to nezbytné, za přítomnosti vhodného katalyzátorového systému (např. benzylamoniumchloridu), následovanou hydrolýzou,

d) sloučeninou obecného vzorce XII

XII ve kterém představuje Mg nebo Li, následovanou oxidačním štěpením (např. ozonolýzou nebo oxidačním štěpením katalyžovaným osmiem nebo rutheniem) za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy nebo

e) tris(methylthio)methanem za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy, následovanou hydrolýzou za přítomnosti např. HgO a HBF₄.

Enantiomerní formy sloučenin obecného vzorce II (tj. těch sloučenin, které mají různé konfigurace substituentů na atomu uhlíku v poloze a vzhledem ke skupině CCtH) se mohou rozštěpit enantiospecifickým derivátisačním krokem. Toho se může dosáhnout například enzymatickýmprocesem. Takové enzymatické procesy zahrnují například • * • · transesterifikaci skupiny OH v poloze a při teplotě od teploty místnosti do teploty zpětného toku (např. od 45 do 55 °C) za přítomnosti vhodného enzymu (např. Lipase PS Amano), příslušného esteru (např. vynylacetatu) a vhodného rozpouštědla (např. methyl-terc.-butyletheru). Derivatisovaný isomer se poté může oddělit od nezreagovaného isomeru obvyklými separačními postupy (např. chromatografií).

Skupiny přidané ke sloučeninám obecného vzorce II v takovém derivatisačním kroku se mohou odstranit buď před jakýmikoli dalšími reakcemi nebo při jakémkoli dalším kroku při syntéze sloučenin obecného vzorce I. Další skupiny se mohou odstranit za použití obvyklých postupů (např. pro estery na skupině OH v poloze a, hydrolýzou za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy (např. při teplotě od teploty místnosti do teploty zpětného toku za přítomnosti vhodné báze (např. NaOH) a příhodného rozpouštědla (např. MeOH, vody nebo jejich směsi))).

Sloučeniny obecného vzorce III se mohou připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XIII

H-N

OH ve kterém má význam definovaný zde výše u sloučeniny obecného vzorce V, jak je definován zde výše, například za takových podmínek, jako jsou podmínky popsané

- 25 • · ·· · · ·· ·· · • ·· · · ·· · · ··· • · · · · · · ··· • · · · · · ·· ··· · · • · ··· · ·· · • ··· · · ·· tt · · ··· zde výše pro syntézu sloučenin obecného vzorce I (viz např. kroky způsobu i) a ii)).

Sloučeniny obecného vzorce IV jsou snadno dostupné za použiti známých postupů. Například sloučeniny obecného vzorce IV se mohou připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce II, jak je zde definována výše, se sloučeninou obecného vzorce XIII, jak je zde definována výše, například za pomínek, jako jsou podmínky popsané zde výše pro syntézu sloučenin obecného vzorce I (viz např. kroky způsobu i) a ii)).

Sloučeniny obecného vzorce V jsou známy z literatury a/nebo se mohou připravit za použití obvyklých postupů. Například sloučeniny obecného vzorce V se mohou

připravit	redukcí sloučeniny obecného vzorce XIV
	R3	XIV
		X^X r4
		nh2
ve kterém

R^J a R⁴ mají význam definovaný zde výše, za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy.

Sloučeniny obecného vzorce VI se mohou připravit podle postupů kondenzace peptidů, například způsobem analogickým postupům popsaným zde výše pro sloučeniny obecného vzorce I (viz např. kroky způsobu i) a' ii)). Pokud je to žádoucí, sloučeniny obecného vzorce VIII se mohou připravit tímto způsobem.

• · ·· · ♦ t· 00

0000 0000 · • 0 0 0 0 0 00 000 0 · • · 0 0 0 0 000 ···· ·· 00 00 00 000

Sloučeniny obecného vzorce IXB se mohou připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R⁴ představuje atom vodíku s přebytkem sloučeniny obecného vzorce IVA

R^10aC (0) R^10b

XIVA ve kterém

R^1Ca a R^10b mají význam definovaný zde výše, například za podmínek, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy.

Sloučeniny obecného vzorce X jsou komerčně dostupné, jsou známy z literatury nebo jsou dostupné za použití známých a/nebo standardních postupů.

připravit

Například sloučeniny obecného vzorce X se mohou redukcí sloučeniny obecného vzorce XV

XV ve kterém a R² ma j í význam definovaný zde výše, za přítomnosti vhodného redukčního činidla (např. DIBAL-H).

Alternativně se sloučeniny obecného vzorce X

- 27 - .

·· ·* ·· «· ·· ···· · · · · · · ·· · · · · · · · • · · · · · ····· · ·♦·· ·· ·· ·· ·· ··· mohou připravit oxidací sloučeniny obecného vzorce XVI ve kterém

XVI

R¹ a R² mají význam definovaný zde výše, za přítomnosti vhodného oxidačního činidla (např. pyridiniumchlorchromatu nebo kombinace DMSO a oxalylchloridu).

Sloučeniny obecných vzorců II, IV, VI, VIII, X, XV a XVI, ve kterých R¹ zahrnuje skupinu S(0) nebo S(0}2, se mohou připravit oxidací odpovídající sloučeniny obecného vzorce II, IV, VI, VIII, X, XV a XVI (jak je příhodno), ve kterých R¹ zahrnuje skupinu S, například jak je popsáno zde výše.

Sloučeniny obecných vzorců VII, IX, IXA, IXC, IXD, XI, XII, XIII, XIV, XIVA, XV a XVI a jejich deriváty jsou buď komerčně dostupné, nebo známé v literatuře nebo se mohou získat analogicky podle způsobů zde popsaných nebo obvyklými syntetickými způsoby, podle standardních postupů ze snadno dostupných výchozích materiálů za použití příhodných činidel a reakčních podmínek (např. jak je zde popsáno dále).

Substituenty na aromatickém a/nebo nearomatickém, karbocyklickém a heterocyklickém kruhu (kruzích) ve sloučeninách obecných vzorců I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, IXA, IXB, IXC, IXD, X, XIII, XIV, XV a XVI mohou být zavedeny a/nebo převedeny za použití postupů

- ..

♦ ♦ 99 fct »

9 9 9 ···* β · · • · · 9 · « · · · · • · · · · f « φ · · · « « • · ··· · ·· · ···· ·· · t <· ·· €·· odborníkovi v oboru dobře známých. Například nitroskupina může být redukována na aminoskupinu, aminoskupina může být alkylována nebo acylována k získání alkylaminoskupiny a/nebo acylaminoskupiny, aminoskupina se může převést na pyrroloskupinu (kondenzací s 2,5-dimethoxytetrahydrofuranem za přítomnosti katalzátoru, jako je oxid fosforečný), aminoskupina se může převést (diazotací) na halogenskupinu nebo (např. reakcí s 1,4- nebo 1,5-dialkylovou sloučeninou nebo β nebo γ haiogenesterem) na kruh obsahující atom dusíku (případně substituovaný skupinou =0), jod se můžé převést na heterocykly obsahující atom dusíku (např. imidazolyl a piperidinyl, zpracováním s imidazolem nebo pipridinem za Buchwaldových podmínek), hydroxyskupina může být alkylována k získání alkoxyskupíny, alkoxyskupina může být hydrolyzována k získání hydroxyskupiny, alkeny mohou být hydrogenovány na alkany, atomy halogenu mohou být hydrogenovány na atom vodíku atd. V tomto ohledu se sloučeniny obecného vzorce XV, ve kterém R¹ představuje N(CH3)2 a R² představuje chlor nebo methyl, mohou získat z komerčně dostupných jod-chlor nebo jod-methyl disubstituovaných methylesteru kyseliny benzoové za použití aminace katalyzované paladiem, jak například popsal Wolfe a kol., Tetrahedon Lett., 38, 6367 (1997), následuje buď redukční aminace (například za použití HCHO a redukčního činidla jako je Na(CN)BH3 nebo kombinace oxidu platiničitého a vodíku) nebo alkylací (například za použití Mel a příslušné báze) výsledného anilinu. Sloučeniny obecného vzorce XV, ve kterém R¹ představuje -S(0)mCH3 (ve kterém m má význam definovaný zde výše) a R² představuje chlor nebo methyl, se mohou získat z výsledného anilinu popsaného výše (nebo z odpovídající kyseliny benzoové) diazotací, následovanou zpracováním diazoniové soli s ethylxanthatem draselným a poté hydrolýzou meziproduktu k získání odpovídajícího thiofenolu, jak například popsal Tarbell a kol.

- 29 ’······· ··· • * · · · · * . Λ « , * ····· ·φ Φ·« · · • ·«······ ······ ·· ·· ·· · · · v Organic Synthesis, souhrnný díl III, str. 809 až 811 (1955). Výsledný thiofenol se může alkylovat (například za použiti příslušného alkyljodidu za přítomnosti vhodné báze v EtOH) a poté' (pokud je to nezbytné) oxidovat k vytvoření sulfonu nebo sulfoxidu (například za použití mCPBA v CH2CI2 nebo peroxymonosulfonatu draselného ve směsi methano/voda).

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být. isolovány z jejich reakčních směsí použitím obvyklých postupů.

Odborník v oboru zjistí, že v postupech popsaných výše mohou funkční skupiny meziproduktů vyžadovat ochranu chránícími skupinami.

Funkční skupiny, které je žádoucí chránit, zahrnují hydroxyskupinu, aminoskupinu, aldehydovou skupinu, kyselinu 2-hydroxykarboxylovou a karboxylovou kyselinu. Vhodné chránící skupiny pro hydroxyskupinu zahrnují trialkylsiiylovou nebo diaralkylsilylovou skupinu (např. terč.-butyldimethylsilyl, terč.-butyldifenylsilyl nebo trimethylsilyl) a tetrahydropyranyl. Vhodné chránící skupiny pro karboxylovou kyseliny zahrnují alkylester s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylestery. Vhodné chránící skupiny pro aminoskupinu a amidinoskupinu zahrnují terč.-butyloxykarbonyl, benzyloxykarbonyl nebo 2-trimethylsilylethoxykarbonyl (Teoc). Atomy dusíku mohou být také chráněny hydroxy- nebo alkoxyskupinou a mohou být chráněny buď na jednom nebo na dvou místech. Aldehydy mohou být chráněny jako acetaly reakcí s např. ethylenglykolem.

2-Hydroxykarboxylové kyseliny mohou být chráněny kondenzací např. s acetonem.

Zavedení a odstraněni chránících skupin na funkční skupiny může probíhat před nebo po kondenzaci nebo

- 3Q.···· ·· ·· · · »· «·· po jakékoli jiné reakci ve výše zmíněných schématech.

Chránící skupiny mohou být odstraněny v souladu s postupy, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy a jak je zde dále popsáno.

Odborník v oboru zjistí, že k získání sloučenin obecného vzorce I alternativním a, při určitých příležitostech, vhodnějším způsobem, mohou být jednotlivé krcky postupu zde výše zmíněné prováděny v odlišném pořadí a/nebo mohou být jednotlivé reakce prováděny v jiných stadiích celkového postupu (tj. substituenty mohou být ve spojitosti s určitou reakcí přidávány k a/nebo chemické přeměny prováděny na jiných meziproduktech než jsou zde výše zmíněny). To může negovat nebo nutně vyžadovat potřebu chránících skupin.

Například je obzvláště pravda s ohledem na syntézu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R¹ nepředstavuje atom vodíku. V tomto případě skupiny OH, 0R^8a, C(0)^0R8b a/nebo R^8c mohou být zavedeny v časnějším stadiu celkové syntézy za použití kroků způsobu popsaných zde výše (viz např. kroky způsobu iii) až viii)). Dále skupina OH kyseliny mandlové sloučenin obecných vzorců II a IV může vyžadovat chránění před kroky kondenzace popsanými zde výše.

Tudíž řád a typ zahrnuté chemické reakce bude diktovat potřebu a typ chránících skupin stejně jako pořadí kroků k uskutečnění syntézy.

Použití chránících skupin je plně popsáno v Protective Groups in Organic Chemistry, kterou vydal J. W. F. McOmie, Plenům Press (1973) a Protective Groups in

Organic Synthesis”,

vydání, T. W.

Greene a P.

G. M.

Wutz, Wiley-Interscience (1991).

Chráněné deriváty sloučenin obecného vzorce I mohou být chemicky převedeny na sloučeniny obecného vzorce I použitím standardních postupů odstranění chránících skupin (např. hydrogenace). Odborník v oboru zjistí, že jisté sloučeniny obecného vzorce I mohou být považovány za chráněné deriváty jiných sloučenin obecného vzorce I.

Lékařské a farmaceutické použití

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou mít farmakologickou aktivitu jako takové. Sloučeniny podle tohoto vynálezu, které mohou mít takovou aktivitu, zahrnují sloučeniny, ve kterých R⁴ je atom vodíku, výčet tím však není omezen.

Další sloučeniny obecného vzorce I (včetně sloučenin, u kterých R⁴ není atom vodíku) nicméně nemusejí mít farmakologickou aktivitu, ale mohou být podány parenterálně nebo orálně a poté v těle metabolizovány k vytvoření sloučenin obecného vzorce I, které jsou farmakologicky aktivní (včetně odpovídajících sloučenin, ve kterých R⁴ je atom vodíku, výčet tím však není omezen). Takové sloučeniny (které rovněž zahrnují loučeniny, které mohou mít určitou farmakologickou aktivitu, ale tato aktivita je zřetelně nižší než aktivita aktivních sloučenin na něž se metabolizuji) mohou být tedy popsány jako prekurzory léčiva aktivních sloučenin.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy užitečné, protože mají farmakologickou aktivitu a/nebc> jsou metabolizovány v těle po orálním nebo parenterálním podání .-, • ·· · ♦ ·· · • · · · · · ·

k vytvoření sloučenin, které mají farmakologickou aktivitu..

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy indikovány jako farmaceutika.

Podle dalšího aspektu tohoto vynálezu jsou tedy poskytnuty sloučeniny podle tohoto vynálezu pro použití jako farmaceutika.

Obzvláště jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu mocnými inhibitory thrombinu buď jako takové nebo (v případě prekurzorů léčiv) po podání, například jak je ukázáno v testech popsaných níže.

Do pojmu prekurzor léčiva inhibitoru thrombinu se zahrnují sloučeniny, které tvoří inhibitor thrombinu, v experimentálně detekovatelném množství a v předem určený čas (např. okolo 1 hodiny) po orálním nebo'parenterálním podání.

U sloučenin podle předloženého vynálezu se tedy předpokládá, že budou užitečné při těch stavech, kde je vyžadována inhibice thrombinu.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou tedy indikovány při léčení·a/nebo profylaxi trombózy a hyperkoagulability v krvi a tkáních živočichů včetně člověka.

Je známo, že hyperkoagulabilita může vést k tromboembolickým onemocněním. Stavy spojené s hyperkoagulabilitou a tromboembolickými nemocemi, které mohou být zmíněny, zahrnují dědičnou nebo získanou aktivovanou resistenci na protein C, jako je mutace faktoru V (faktor V Leiden), a dědičné nebo získané deficience

- 33 _f. ..

• · · · • · · • · · · • · • · · · · · • · • ' * « · • · · · · · · ·· ·· ·· « · « antithrombinu III, proteinu C, proteinu S a kofaktoru heparinu II. Jiné stavy, o nichž je známo, že jsou spojeny s hyperkoagulabilitou a tromboembolickým onemocněním zahrnují cirkulující antifosfolipidové protilátky (Lupus antikoagulant), homocysteinemii, heprainem navozenou, trombocytopenii a poruchy fibrinolýzy. Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou tedy indikovány pro terapeutické a/nebo profylaktické použití při těchto stavech.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou dále indikovány při léčení stavů, kde se vyskytují nežádoucí nadměrné hladiny thrombinu bez známek hyperkoagulability, například při neurodegenerativních onemocnění jako je Alzheimerova nemoc.

Obzvláštní chorobné stavy, které mohou být zmíněny, zahrnují terapeutické a/nebo profylaktické podávání při venózní trombóze a plicní embolii, arteriální trombóze (např. infarktu myokardu, nestabilní angíně, mrtvici založené na trombóze a periferní arteriální trombóze) a systemické embolii, obyčejně z atria během arteriální fibrilace nebo z levé komory po transmurálním infarktu myokardu.

U sloučenin podle předloženého vynálezu se navíc očekává, že budou užitečné při profylaxi reokluze (tj. trombózy) po trombolýze, perkutánní transluminální angioplastice (PTA) a zavedení koronárního bypassu, prevenci retrombózy po mikrochirurgických zákrocích a zákrocích na cévách obecně.

Další indikace zahrnují terapeutické a/nebo profylaktické použití při diseminované intravaskulární koagulaci způsobené bakteriemi, mnohočetným traumatem, * · ·· ·· ·· ·· · ♦ ·· · ♦ ·· · · ··· · ♦ · · · · · · · φ • ·······* ···· ·· ·· ·· ·· ··· intoxikaci nebo jakýmkoli jiným mechanismem, antikoagulačni léčbě, kdy je krev v kontaktu s cizími povrchy v těle, jako jsou cévní štěpy, cévní stenty, cévní katetry, mechanické a biologické prostetické chlopně nebo jakýkoli jiné .prostředek zdravotnické techniky a při antikoagulačni léčbě, kdy je krev v kontaktu s prostředky zdravotnické techniky mimo tělo, jako při kardiovaskulárním chirurgickém zákroku při použití mimotělního oběhu nebo při hemodialýze.

Vedle jeho účinků na proces koagulace je o thrombinu známo, že aktivuje velký počet buněk (jako jsou neutrofily, fibroblasty, endoteliální buňky a buňky hladkých svalů). Sloučeniny podle předloženého vynálezu tedy mohou být užitečné pro terapeutické a/nebo profylaktické použití při idiopatickém syndromu dechové tísně a při syndromu dechové tísně dospělých, plicní fibróze po léčení ozářením nebo chemoterapií, septickém šoku, septikémii, zánětlivých odpovědích, které zahrnují, čímž ovšem jejich výčet není omezen, edém aktuní nebo chronickou atherosklerózu, jako je choroba srdečních arterií, choroba mozkových arterií, choroba periferních arterií, poškození po reperfuzi a restenóza po perkutánní transluminální angioplastice (PTA).

Sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují trypsin a/nebo thrombin mohou také být užitečné při léčbě pankreatitidy.

Podle dalšího aspektu předloženého vynálezu je poskytnut způsob léčení stavu, kde je vyžadována inhibice thrombinu, kterýžto způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle předloženého vynálezu osobě trpící takovým stavem nebo osobě na něj citlivé.

-..

• · · · • · · • · · · ·

Sloučeniny podle předloženého vynálezu budou normálně podávány orálně, intravenózně, subkutánně, bukálně, rektálně, dermálně, nasálně, tracheálně, bronchiálně, jakoukoli jinou parenterální cestou nebo cestou inhalace, ve mě farmaceutických přípravků zahrnujících aktivní sloučeninu buď jako volnou bázi nebo farmaceuticky přijatelnou netoxickou adiční sůl s organickou nebo anorganickou kyselinou ve farmaceuticky přijatelné dávkovači mě. V závislosti na poruše a pacientovi, který má být léčen a cestě podání, mohou být přípravky podávány v různých dávkách.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také kombinovány a/nebo podávány společně s jakoukoli antitrombotickou látkou s odlišným mechanismem účinku, jako jsou protidestičkové látky kyselina acetylosalicylová, tiklopidin, klopidrogel, inhibitory receptorů thromboxanu a/nebo inhibitory syntetasy thromboxanu, antagonísté receptorů fibrinogenu, mimetika prostacyklinu a inhibitory fosfodiestera-sy a antagonísté ADP-recepzoru (P₂T) .

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být dále kombinovány a/nebo podávány společně s trombolytiky, jako jsou aktivátor tkáňového plasminogenu (přirozený, rekombinantní nebo modifikovaný), streptokináza, urokináza, prourokináza, anisoylovaný aktivační komplex plasminogen-streptokináza (APSAC), aktivátory plasminogenu ze zvířecích slinných žláz apod., při léčení trombotických nemocí, obzvláště infarktu myokardu.

Podle dalšího aspektu předloženého vynálezu je tedy poskytnut farmaceutický přípravek zahrnující sloučeninu podle tohoto vynálezu ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvanciem, ředidlem nebo nosičem.

-..

···· · · · · • · · · · · · • · · · · · · . » • · · · · · ♦··· ·· ··

Vhodné denní dávky sloučenin podle tohoto vynálezu při terapeutickém použití u lidí jsou okolo 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti při perorálním podání a 0,001 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti při parenterálním podání.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mají tu výhodu, že mohou být účinnější, méně toxické, déle působící, mohou mít širší pole účinnosti, mohou být silněji působící, mohou vést k méně nežádoucím vedlejším účinkům, mohou být snadněji absorbovány než sloučeniny dosud v oboru známé, nebo je mohou předčít jinými užitečnými farmakologickými, fyzikálními nebo chemickými.vlastnostmi.

Biologické testy

Test A

Stanovení thrombinového srážecího času (TT)

Roztok inhibitoru (25 μΐ) se 3 minuty inkubuje s plasmou (25 μΐ). Potom se přidá lidský thrombin (T 6769, Sigma Chem Co) v pufrovaném roztoku, pH 7,4 (25 μΐ) a čas srážení se měří, na automatickém přístroji (KC 10, Amelung) .

Čas srážení (TT) se vyjádří jako absolutní hodnoty (sekundy) stejně jako poměr TT bez inhibitoru (TT₀) k TT s inhibitorem (TTi) . Posledně uvedené poměry (rozmezí 1 až 0) se vynesou proti koncentraci inhibitoru (převeden logaritmicky) a srovná se s sigmoidálními křivkami dávkaodpověď podle rovnice y = a/[l+ (x/lC₅₀)^s]

-..

kde a = maximální rozmezí, tj. 1, s = sklon křivky dávkaodpověď a IC50 = koncentrace inhibitoru, která zdvojnásobuje čas srážení. Výpočty se provedou na PC za použití softwarového programu GraFit Version 3, přičemž rovnice se nastaví na: start v 0, úplný konec = 1 (Erathicus Software, Robin Leatherbarrow, Imperiál College of Science, Londýn, UK) .

Test B

Stanovení inhibice thrombinu pomoci chromogenního robotizovaného stanovení

Síla inhibice thrombinu se měří pomocí metody chromogenního substrátu v robotizovaném mikroplotnovém přístroji Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Švýcarsko), za použití mikrotitrážních poloobjemových ploten s 96 jamkami (Costar, Cambridge, MA USA, Cat. No 3690). Zásobní roztoky testované látky v DMSO (72 μΐ), 1 mmol/litr se sériově naředí 1:3 (24 + 48 μΐ) DMSO, aby se získaly různé koncentrace, které se jako vzorky při stanovení analyzují. 2 μΐ testovacího vzorku se naředí 124 μΐ pufru pro stanovení a přidá se 12 μΐ roztoku chromogenního substrátu (S-2366, Chromogenix, Molndal, Švédsko) v pufru pro stanovení a konečně 12 μΐ roztoku alfa-thrombinu (lidský alfa-thrombin, Sigma.Chemica1 Co.) oba v pufru pro stanovení a vzorky se zamíchají. Konečné koncentrace stanovení byly: testovaná látka 0,00068 až 13,3 pmol/litr, S-2366 0,30 mmol/litr, alfa-thrombin 0,020 NIHU/ml. Ve srovnání se slepým roztokem bez inhibitoru se pro vypočítání procenta inhibice testovaných vzorků použije zvýšení lineární absorbance během 40 minut inkubace při 37 °C. Robotická hodnota IC₅₀, odpovídající koncentraci r· *<t ·· <<

· ··· ···· · · · _β ♦ · · ···· · · .

• ······· ··« » « * · ···· · -·. ···· ·· .· .. .J.

inhibitoru, která způsobí 50% inhibici aktivity thrombinu, se vypočítá z křivky log dávky proti % inhibice.

Test C

Stanovení inhibiční konstanty K_± pro lidský thrombin

Stanovení K£ se provedou za použití metody chromogenního substrátu provedené při 37 °C na centrifugálním anylyzátoru Cobas Bio (Roche, Basilej, Švýcarsko). Zbytková enzymová aktivita po inkubaci lidského alfa-thrombinu s různými koncentracemi testované sloučeniny se-stanoví při 3 různých koncentracíxh substrátu a měří se jako změna optické absorbance při 405 nm.

Roztok testovaných sloučenin (100 μΐ, normálně, v pufru nebo fyziologickém roztoku obsahujícím BSA 10 g/litr) se smíchají s 200 μΐ lidského alfa-thrombinu (Sigma Chemical Co.) v pufru pro stanovení (0,05 mol/litr Tris-HCl pH 7,4, iontová' síla 0,15 upravená pomocí NaCl) obsahujícím BSA (10 g/litr) a analyzuje se jako vzorky v přístroji Cobas Bio. K 320 μΐ substrátu S-2238 (Chromogenix AB, Mólndal, Švédsko) v pufru pro stanovení se přidá 60 μΐ vzorku spolu-s 20 μΐ vody a monitoruje se změna absorbance (změna A/min). Konečné koncentrace S-2238 byly 16, 24 a 50 pmol/litr a thrombinu 0,125 NIHU/ml.

K sestrojení Dixonových křivek, tj. diagramů koncentrace inhibitoru proti 1/(změna A/min), se použije míra reakce v rovnovážném stavu. Pro reversibilní, kompetitivni inhibitory, datové body pro různé koncentrace substrátů typicky tvoří přímé čáry, které se kříží při x = ~K-: .

• ♦ ·* ·· • ·· * · · -· · • « · · · ·« • · · · · · · · • ' · · · · · ···· ·· ·· _M

Test D.

Stanoveni času aktivovaného částečného tromboplastinu (APTT)

APTT se stanoví ve shromážděné lidské plasmě ošetřené citrátem pomocí činidla PTT Automated 5 vyrobeným firmou Stago. K plasmě se přidají inhibitory (10 μΐ roztoku inhibitoru na 90 μΐ plasmy) a inkubuje se 3 minuty s činidlem APTT, potom se přidá 100 μΐ roztoku chloridu vápenatého (0,025M) a APTT se stanoví ve směsi použitím anylyzátoru koagulace KC10 (Amelung) podle pokynů výrobce činidla.

Čas srážení se vyjádří jako absolutní hodnoty (sekundy) stejně jako poměr APTT bez inhibitoru (APTT₀) k APTT s inhibitorem (TTi) . Posledně uvedené poměry (rozmezí 1 až 0) se vynesou proti koncentraci inhibitoru (převeden logaritmicky) a srovná se s sigmoidálními křivkami dávka-odpověď podle rovnice y = a/[l+ (x/IC₅₀)^s] kde a = maximální rozmezí, tj. 1, s = sklon křivky dávkaodpověď a IC₅₀ = koncentrace inhibitoru, která zdvojnásobuje čas srážení. Výpočty se provedou na PC za použití softwarového programu GraFit Version 3, přičemž rovnice se nastaví na: start v 0, úplný konec = 1 (Erathicus Software, Robin Leatherbarrow, Imperiál College of Science, Londýn, UK) .

IC₅₀ APTT je definována jako koncentrace inhibitoru v lidské plasmě, která zdvojnásobí čas aktivovaného částečného tromboplastinu.

Test E

Stanoveni thrombinového času ex vivo

Inhibice thrombinu po orálním podání sloučenin obecného-vzorce I a Ia rozpuštěných ve směsi ethanol:Solutol™: voda (5:5:90) se vyšetří na krysách při vědomi, které se 1 nebo .2 dny před experimentem vybaví katetrem pro odebírání vzorků krve z krkavice. V den experimentu se ve stanovených časech po podání sloučeniny odeberou vzorky krve do plastických zkumavek obsahujících 1 díl roztoku citrátu sodného (0,13 mol na litr) a 9 dílů krve. Zkumavky se odstředí, aby se získala plasma chudá na destičky. Plasma se použije ke stanovení thrombinového času jak je popsáno níže.

100 μΐ citrátem ošetřené krysí plasmy se naředí 100 μΐ 0,9% roztoku chloridu sodného a přidáním lidského thrombinu (T 6769, Sigma Chem. Co., USA) ve 100 μΐ pufrového roztoku, pH 7,4, se započne koagulace. Čas srážení se měří v automatickém přístroji (KC 10, Amelung, Německo).

Tam, kde se podává prekurzor léčiva sloučeniny obecného vzorce I, odhadnou se koncentrace příslušného aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I v krysí plasmě pomocí standardních křivek vztahujících thrombinový čas ve shromážděné citrátem ošetřené krysí plasmě ke známým koncentracím odpovídajícího aktivního inhibitoru thrombinu rozpuštěného v roztoku chloridu sodného.

Plocha pod křivkou po orálním a/nebo parenterálním podání odpovídajícího prekurzoru léčiva obecného vzorce Ia se vypočítá (AUCpď)’ za použití • ·

trapezoidálniho pravidla a extrapolace dat k nekonečnu, přičemž se vychází z odhadu plasmatických koncentrací aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I (což předpokládá, že prodloužení thrombinového času je zapříčiněno výše zmíněnou sloučeninou).

Biologická dostupnost aktivního inhibitoru obecného vzorce I po orálním nebo parenterálním podání prekurzoru léčiva obecného vzorce Ia se vypočítá jak je uvedeno níže:

[(AUCpd/dávka)/(AUCaktivní,parenterální/dávka]xlOO kde AUCaktivní,parenterální představuje AUC získanou po parenterálním podání odpovídajícího aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I krysám při vědomí, jak je popsáno výše.

Test F

Stanovení thrombinového času v moči ex vivo

Množství aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzoce 1, které se vyloučí do moči po orálním nebo parenterálním podání sloučenin podle tohoto vynálezu, rozpuštěné ve směsi ethanol: Solutol™: voda (5:5:90) se odhadne stanovením thrombinového času v moči ex vivo (za předpokladu, že prodloužení thrombinového času je zapříčiněno výše zmíněnou sloučeninou).

Krysy při vědomí se na 24 hodin po orálním podání sloučenin podle tohoto vynálezu umístí do metabolických klecí, které umožní oddělené sbírání moči a .:.. ..* *.· ·· ·· ’·· výkalů. Thrombinový čas se stanoví z nasbírané moči, jak je popsáno níže.

Shromážděná normální lidská citrátem ošetřená . plasma (100 μΐ) se 1 minutu inkubuje s koncentrovanou krysí močí nebo s jejími roztoky ve fyziologickém roztoku. Koagulace plasmy se potom zahájí podáním lidského thrombinu (T 6769, Sigma Chem. Co.) v pufrovaném roztoku (pH 7,4, 100 pl). Čas srážení se měří v automatickém přístroji (KC 10, Amelung).

Koncentrace aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I v krysí moči se odhadnou za použití standardních křivek vztahujících thrombinový čas ve shromážděné normální citrátem ošetřené lidské plasmě ke známým koncentracím výše zmíněného aktivního inhibitoru thrombinu rozpuštěnému v koncentrované krysí moči (nebo jejích roztocích ve fyziologickém roztoku). Násobením celkové tvorby moči u krysy za období 24 hodin odhadnutou střední koncentrací výše zmíněného aktivního inhibitoru v moči se může vypočítat množství aktivního inhibitoru vyloučeného do moči (AMOUNTpd).

Biologická dostupnost aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I po orálním nebo parenterálním podání prekurzoru léčiva se vypočítá jak je uvedeno níže:

[(AMOUNTpd/dávka)/(AMOUNTaktivní,parenterální/dávka]x100 kde AMOUNTaktivní,parenterální představuje množství vyloučené do moči po parenterálním podání odpovídajícího aktivního inhibitoru thrombinu obecného vzorce I krysám při vědomí, jak je popsáno výše.

Test G

Metabolická aktivace sloučenin prekurzorů léčiv in vitro

Sloučeniny prekurzorů léčiv obecného vzorce I se inkubuji při teplotě 37 °C s jaterními mikrosomy nebo β frakcemi supernatantu při 10 000 g (s odkazem na rychlost odstředivky) (tj. frakce s9) připravenými z homogenátu lidských nebo krysích jater. Celková koncentrace proteinu v inkubacích je 1 nebo 3 mg/ml rozpuštěno v 0,05 mol/litr pufru TRIS (pH 7,4) a za přítomnosti kofaktorů NADH (2,5 mmol/litr) a NADPH (0,8 mmol/litr). Celková objem inkubátu je 1,2 ml. Počáteční koncentrace prekurzorů léčiva jsou 5 nebo 10 pimol/litr. Vzorky se odebírají z inkubátu v pravidelných intervalech více než 60 minut po započetí inkubací. Vzorky (25 μΐίύτύ) inkubátu se smísí se stejným množstvím lidské nebo krysí plasmy a příslušným množstvím thrombinu a na koagulometru (KC 10, Amelung) se změří čas srážení (tj. thrombinová čas). Množství aktivního vytvořeného inhibitoru thrombinu se stanoví za použití standardních křivek týkajících se thrombinového času ve shromážděné lidské nebo krysí plasmě ošetřené citrátem na známé koncentrace odpovídajícího aktivního inhibitoru thrombinu.

Množství aktivního inhibitoru thrombinu se alternativně nebo spolu s výše uvedenými způsoby stanoví za použití LC-MS.

Příklady provedeni vynálezu

Vynález je ilustrován pomocí následuj icích příkladů. Aminokyseliny Pro a Aze jsou definovány jako Sisomery, pokud není specifikováno jinak. Příklady se ······ ·· · · získají jako diastereoisomery, pokud není specifikováno jinak.

Příklad 1

Ph(3-N (Me)₂)-(R)- nebo -(S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3-N(Me)₂)-CHO

Směs Ph (3-N (Me) 2-CH2OH (1,9 g; 12,6 mmol) a MnO? (8,8 g; 100 mmol) v CH2CI2 se míchá při teplotě místnosti

2,5 dne. Směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrát se odpaří. Surový produkt se bleskově chromatografuje na silikagelu za použití směsi isopropylether:trimethylpentan (7:3) jako eluentu. Výtěžek 0,93 g (50 %).

^-NMŘ (400 MHz; CDC1₃) : δ 9,89 (s, 1H) , 7,37 (m, 1H) , 7,17-7,25 (m, 2H), 7,05 (m, 1H), 2,98 (s; 6H).

(ií) Ph(3-N(Me)2) ~(R, S)CH(OsiMe₃) CN

TMS-CN (0,75 ml; 6,0 mmol) se po kapkách přidá ke směsi Ph (3N (Me) ₂)-CHO (0,9 g; 6,0 mmol; z kroku (i), uvedeného výše) a Et₃N (0,08 ml; 6,0 mmol) v CH2CI2 (15 ml). Reakční směs se míchá při teplotě- místnosti 24 hodin. Další Et₃N (0,08 ml; 6,1 mmol) a TMS-CN (0,75 ml; 6,0 mmol) se přidají a mícháni pokračuje dalších 24 hodin. Reakční směs se odpaří , čímž se získá 1,35 g (90 % ) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

²H-NMR (400 MHz; CDCI3) : δ 7,27 (t, 1H) , 6, 78-6, 84 (m, 2H) ,

6,74 (dd, 1H), 5,47 (s, 1H), 3,00 (s, 6H).

··· * · · · · τ :

• ····· ·· ··· · · • * ···· · · · (iii) Ph(3-N(Me)2)-(R, S)CH(OH)-C(O)Orf”’

Směs Ph(3-N(Me)₂)-(R,S)CH(OsiMe₃) CN (1,35 g; 5,43 mmol; z kroku (ii) uvedeného výše) a HCI (20 ml; konc.) se míchá při teplotě místnosti 10 minut a poté při teplotě od 90 do 100 °C (v olejové lázni) 3 hodiny. Reakční směs se odpaří a přidá se voda. Kyselá vodná vrstva se promyje Et₂O a a vloží se na kationtoměničovou pryskyřici (IR-120, 10-15 g; kationtoměnič se předem připraví suspendováním v roztoku NaOH (2M)) a poté se suspenze vlije do sloupce. Kationto měnič se následně promyje HCI (2M; 2 x 50 ml), vodou (2 x 50 ml) a poté vodou až je hodnota pH v neutrální oblasti a produkt se eluuje NH₄OH/vodný (1M). Výsledná vodná vrstva se odpaří a lyofilizuje, čímž se získá 0,78 g (74 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS: (Μ - 1) 194 m/z ^XH-NMR (500 MHz; CD3OD) : δ 7,15 (t, 1H), 6,94 (s, 1H) , 6,84 (d, 1H), 6,69 (dd, 1H), 4,85 (s, 1H), 2,92 (s, 6H).

(iv) Ph(3-N(Me)₂)-(R)- nebo - (S) CH (OH)-C (O) OH x HCI

Enantiomery Ph(3-N(Me)₂) ~{R, S)CH(OH)-C(O)OH (krok (iii) uvedený výše) se rozštěpí preparativní HPLC za použití Chiralcel™ OD jako stacionární fáze asměsi n-heptan:2-propanol:kyselina mravenčí (80:20:1) jako mobilní fáze. Enantiomer, který se eluuje poslední se odpaří a lyofilizuje, poté se znovu rozpustí ve vodě a přidají se 3 ekv. 1M HCI. Roztok se lyofilizuje k získání hydrochloridové soli, což poskytne [a]_D ²⁰ -63,7 (c = 1,0, MeOH). Přebytek enantiomeru je 97 % podle stanovení analytickou chirální HPLC.

··♦ · · ·· · ··· ···· ·· · _# ····· ·· ··· · * Λ · ···· ♦·· ·«·· *· ·* ’· (v) Ph(3-N(Me)₂)-(R)- nebo -(S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

DIPEA (1,03 ml; 6,15 mmol) se přidá při teplotě 0 °C ke směsi Ph(3N(Me)₂) -(R)- nebo -(S) CH(OH)-C(O)OH x HC1 (0,36 g; 1,54 mmol; oddělený/isolovaný produkt z kroku (iv) uvedeného výše), H-Aze-Pab(Z) x 2 HC1 (0,743 g; 1,69 mmol; viz mezinárodní patentová přihláška WO 97/02284) a TBTU (0,543 g; 1,69 mmol) v DMF (10 ml). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 4 dny, vlije se do vody (400 ml) a hodnota pH se upraví na 10 přidáním vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje EtOAc a poté se organická vrstva promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a vodným roztokem chlorodu sodnéhp, vysuší (síran sodný) a odpaří. Surový produkt se vyčistí bleskovou chromatografii na silikagelu za použití směsi CH₂Cl₂:MeOH (95:5) jako eluentu. Produkt se dále čistí preparativní HPLC k získání 203 mg (24 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS: (M + 1) 544; (Μ - 1) 542 m/z ^-NMR (400 MHz; CDC1₃) : Ó 8,20 (t, 1H), 7,75 (d, 2H) , 7,43 (d, 2H), 7,18-7,38 (m, 6H), 6,61-6,72 (m, 3H) , 5,20 (s_r 2H), 4,88 (s, 1H), 4,84 (dd, 1H), 4,36-4,52 (m, 2H), 4_r03 (m, 1H), 3,63 (m, 1H.) , 2,93 (s, 6H) , 2,54 (m, 1H) , 2,30 (m, 1H) .

(vi) Ph(3-N(Me)₂) -(R)- nebo -(S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Směs Ph(3-N(Me)z)-(R)- nebo -(S)CH(OH)-C(O)-AzePab (Z) (112 mg; 0,206 mmol; z kroku (v) uvedeného výše),

HOAc (0,41 ml)' a Pd/C 10% v EtOH (7 ml) se hydrogenuje při atmosférickém tlaku a teplotě místnosti 3 hodiny. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrát se • · φ · · · · ·· · · ·· · · • « φ · · · · · φ φ φ φ φ φ ·· φφφ

odpaří	• · φφφ··· · ,····· ·· ·· ·· ··· a lyofilizuje (2x), čímž se získá 90 mg (93 %)
bílých	krystalů.
LC-MS:	(M + 1) 410; (Μ - 1) 408 m/z
1H-NMR	(500 MHz; CD3OD): δ 7,74 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,21
(t, 1H)	, 6,85 (s, 1H), 6,73-6,77 (m, 2H), 5,11 (s, 1H),

4,77 (dd, 1Η), 4,52(dd, 2Η) , 4,30 (m, 1Η) , 3,92 (m, 1Η) , 2,92 (s, 6H), 2,46 (m, 1H), 2,27 (m, 1H).

^1JC-NMR (125 MHz; CDCI3) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) δ 173,3, 171,9, 167,0.

Přiklad 2

Ph(3-N(Me)₂)-ÍR) - nebo -(S)CH(OH)-CO-Aze-Pab(OMe) (i) 4-(Amino, methoxyiminomethyl)benzylazid

Směs hydrochloridu O-methylhydroxylaminu (10,5 g; 125 mmol), triethylaminu (56 ml) a methanolu (200 ml) se přidá k hydrochloridu ethylimidatobenzylazidu (22,5 g; 110 mmol; připraví se podle postupu popsaého ve WO 94129336) v diethyletheru. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 3 až 4 dny. Většina methanolu se odpaří ve vakuu a nahradí se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vodným roztokem HOAc (1,5%; pH 4), vodným roztokem hydrogeuhličitanu sodného a vysuší se (síran sodný) . Výsledný roztok se naředí ethylacetátem na obj em 500 ml a 25 ml naředěného roztoku se odpaří ke stanovení výtěžku. Celkový výtěžek je okolo 20 g.

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 7,66 (d, 2H) , 7,36 (d, 2H) , 4,37 (s, 2H), 3,83 (s, 3H).

• · ···· ···· . Σ

.............. ;

* · .··· ·· · .. .........

•(ii) H-Pab(OMe)

Oxid platiny (200 mg) se přidá k roztoku 4-(amino, methoxyiminomethyl)benzylazidu (10 g; 0,049 mol; z kroku (i) uvedeného výše) ve 200 ml ethanolu. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 8 hodin, zfiltruje přes rozsivkovou zeminu™ a odpaří. Surový produkt se použije přímo v následujícím kroku.

^-NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 7,60 (d, 2H) , 7,37 (d, 2H) , 3,81 (s, is 3H), 3,80 (s, 2H).

(ii) Boc-Aze-Pab(OMe)

DIPEA (17,5 ml; 105 mmol) se přidá k ledově studenému roztoku Boc-Aze-OH (9,7 g; 48 mmol; viz mezinárodní patentová přihláška WO 97/02284) a H-Pab(OMe) (9,4 g; 52 mmol; z kroku (ii) uvedeného výše) a TBTU (18,5 g; 58 mmol) v DMF (100 ml) a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Výsledná směs se vlije do vody (50 ml), hodnota pH se upraví na asi 9 a směs se extrahuje 3-krát EtOAc. Spojená organická vrstva se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší (síran sodný) a odpaří. Surový produkt se vyčistí bleskovou chromatografií (silikagel; EtOAc). Výtěžek je 11,9 g (69 %).

H-NMR	(400	MHz; CDC13) : δ 7,60	(d,	2H); 7,31 (d, 2H)	; 4,78
(b, 2H)	; 4,	69 (t, 1H); 4,50	(b,	2H)	; 3,92	(s+m,	4H) ;	3 , 79
(m, 1H)	; 2,	46 (b, 2H); 2,04	(s,	3H)

(iv) Aze-Pab(OMe) 2xHCl .z.. ...........

Roztok Boc-Aze-Pab(OMe) (9,4 g; 26 mmol; z kroku (iii) uvedeného výše) v EtOAc (250 ml) se nasytí plynným chlorovodíkem. K výsledné emulsi se přidá EtOH (absolutní; 125 ml) a směs se na 10 minut vystaví působení ultrazvuku. EtOAc se přidává až se roztok zakalí, načež brzy vykrystžaluje produkt pojmenovaný v pod,záhlaví. Výtěžek 6,7 g (77 %) ·

LC-MS: (M + 1) 263 (m/z)

X-NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 7,74 (d, 2H) ; 7,58 (d, 2H) ; 5,13 (t, 1H); 4,57 (m, 2H); 4,15 (m, 2H); 3,97 (s+m, 4H); 2,87 (m, 1H); 2,57 (m, 1H).

^1JC-NMR (75 MHz; CDCI3) : (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) δ 168,9; 168,8; 161,9.

(v) Ph(3-N (Me)₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(OMe)

Směs Ph(3-N(Me)₂) -(R)- nebo -(S)CH(OH)-C(O)OH x

HC1 (118 mg; 0,51 mmol; viz příklad 1 (iv) uvedený výše) a HATU (2 i4 mg; 0,56 mmol) v DMF (3 ml) se míchá při teplotě 0 °C 1,5 hodiny. Η-Aze-Pab(OMe) 2x HC1 (189 mg, 0,56 mmol; z kroku (iv) uvedeného výše), 2,4,6-trimethylpyridin (0,3 ml, 2,25 mmol) ^a DMF (3 ml) se smísí odděleně před tím, než se po kapkách přidají k první směsi o teplotě 0 °C. Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C 3 hodiny, vloží se do chladničky na 3 dny a odpaří. Surový produkt se vyčistí preparativní HPLC k získání 140 mg (62 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS: (M + 1) 440; (Μ - 1) 438 m/z • · .··· ·· ·· ·· ·· ’· ¹H-NMR (500 MHz; CD₃OD) : σ 8,60 (t,lH), 7,61 (d, 2H) , 7,37 (d, 2H), 7,22 (t, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,77 (d, 2H) , 5,08 (s, 1H) , 4,75 (dd, 1H) , 4,46 (dd, 2H) , 4,26 (m, 1H)', 3,90 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 2,94 (s, 6H), 2,44 (m, 1H), 2,26 (m, 1H) .

^1JC-NMR (125 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku) 0 173,3, 171,8, 154,9.

Příklad 3

Ph (3-SMe) - (R) - nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab x TFA (i) Ph (3-SMe) - (R, S) CH (OTMS) CN

K roztoku Ph(3-SMe)-CHO (19,8 g, 130 mmol) a Znl₂ (2,1 g, 6,50 mmol) v CH2CI2 (450 ml) při teplotě 0 °C pod atmosférou dusíku se přidá po kapkách trimethylsilylkyanid (14,2 g, 143 mmol). Po celonočním míchání při teplotě 25 °C se organická směs zalije vodou (4.50 ml) . Organická vrstva se oddělí a promyje nasyceným roztokem chloridu sodného (300 ml), vysuší (síran sodný), zfiltruje a odpaří ve vakuu k získání 32,0 g (98 % surový) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako oranžového oleje, který se použije bez čištění.

²Η NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 7,20-7,41 (m, 4H), 5,50 (s, 1H) ,

2,51 (s, 3H) , 0,23 (s, 9H) .

(ii) Ph(3-SMe)-(R,S)CH(OH)C(O)OH

Roztok Ph (3-SMe)-(R,S)CH (OTMS) CN (32,0 g, 13 0

......* · · · . . · · · · ·· ··· · · a · »··· · · ·

.... .. ·· ·· ·· ··· mmol; viz krok (i) uvedený výše) v koncentrované kyselině chlorovodíkové (250 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku

2,5 hodiny. Směs se alkalizuje 6N NaOH (450 ml) a promyje se Et₂O (3 x 300 ml) k odstranění organických nečistot.

Vodná vrstva se okyselí 6N HC1 (150 ml) a extrahuje EtOAc (4 x 500 ml). Spojené extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání 22,6 g (90 % surový výtěžek) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako oranžového oleje, který při stání krystaluje na žlutohnědou tuhou látku.

⁴Η NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,20-7,40 (m, 4H) , 5,12 (s, 1H) , 2,50 (s, 3H) . .

(iii) Ph (3-SMe) - (R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (a) a Ph(3-SMe)-(S) nebo -(R)CH(OAc)C(O)OH (b)

Směs Ph(3-SMe)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (2,0 g, 10,1 mmol; viz krok (ii) uvedený výše), Lipase PS Amano (1,0 g), vinylacetat (5,0 ml) a MTBE (5,0 ml) se zahřívají na teplotu 45 °C 24 hodin. Reakční směs se zfíltruje a filtrační koláč se promyje EtOAc (100 ml). Filtrát se odpaří ve vakuu a chromatografuje na silikagelu,· přičemž se eluuje směsí CHC13:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (6:3:1), k získání 630 mg, (32 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako žlutého oleje a 850 mg (35 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako hnědé tuhé látky.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):· ²H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,38 (s, 1H) , 7,10-7,25 (m, 3H) , 5,08 (s, 1H), 2,40 (s, 3H).

	- 52 -	9»	99 ··
		9 9	• . 9 9 ***· «
		9 9	999 9 9 ·· 999
		9 9999	• 9 9 9 < 9
13C NMR	(75 MHz; CD3OD) : δ 178,4,	142,6,	140,2, 130,0,
127,3,	126,4, 125,2, 75,5, 15,8.
Analýza	HPLC: 98,9 % , 96,0 % ee
[a]D 25 =	-119,8° (c = 1,0, MeOH)

CI-MS : (M+l ) 199 m/z

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlavi (b):

NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,62 (s, 1H), 7,32-7,44 (m, 3H) , 5,82 (s, 1H),.2,62 (s, 3H), 2,30 (s, 3H)‘.

(iv) Boc-Aze-Pab x HCOOH

Ammoniumformiat (3,0 g; 50 mmol) a Pd/C (5%; 1,0

g)' se přidají k roztoku Boc-Aze-Pab (Z) (4,7 g; 10 mmol; viz mezinárodní patentová přihláška WO 94/29336) v 50 ml MeOH. Přidá se kyselina maravenčí (1,0 g; 22 mmol) a směs se míchá 30 minut. Reakční směs se zfiltruje přes Hyflo a roztok se odpaří. Surový produkt se suspenduje v CH2CI2 (50 ml), zfiltruje a promyje dalším CH2CI2. Celkový tuhý materiál se vysuší a použije v následujícím kroku bez dalšího čištění.

(v) Boc-Aze-Pab(Teoc)

Teoc p-nitrofenylkarbonat (3,5 g; 12,3 mmol) se přidá k roztoku Boc-Aze-Pab x HCOOH (3,7 g; 10 mmol; viz krok (iv) uvedený výše) v THF (100 ml), načež se během 2 minut přidá roztok uhličitanu draselného (1,8 g; 13 mmol) ve vodě (20 ml). Výsledný roztok se míchá 3 dny, odpařá a odparek se vyjme EtOAc (150 ml) a NaOH (vodný; 0,5M; 50 ml). Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného • ···«» ·· ··· · » • · · · · · · · · «··· · · «· *· · · *·· (2 x 50 ml), vysuší (síran sodný) a odpaří. Surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (silikagel; methylenchlorid:aceton; 4:1). Výtěžek 4,6 g (96 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDC1₃) : δ 7,86 (d, 2H) , 7,39 (d, 2H) , 4,72 (bt, 1H), 4,7-4.,5 {br, 2H), 3,93 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 2:48 (br, 2H), 1,43 (s, 9H) , 0,09 (s, 9H).

(ví) H-Aze-Pab (Teoc). x HC1

Roztok Boc-Aze-Pab(Teoc) (4,6 g; 9,6 mmol; viz krok (v) uvedený výše) v methylenchloridu (150 ml) se nasytí suchým chlorovodíkem. Roztok se udržuje při teplotě místnosti 10 minut v uzavřené lahvi, načež se odpaří. Výtěžek 4,2 g (97 %).

^XH-NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 7,80 (d, 2H) , 7,60 (d, 2H) , 5,10 (m, 1H) , 4,60 (bs, 2H) , 4,15 (m, 1H) , 3,97 (q, 1H) , 2,86 (m, 1H), 2,57 (m, 1H), 0,11 (s, 9H) .

(vii.j Ph(3-SMe)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Směs Ph(3-SMe)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (300 mg,

1,51 mmol; viz krok (iii) (a) uvedenýo výše), H-Aze-Pab- (Teoc) (627 mg, 1,06 mmol; viz krok (vi) uvedenýo výše), TBTU (632 mg, 1,66 mmol) a DIPEA (391 mg, 3,03 mmol) v DMF (8,0 ml) se míchá při teplotě 0 °C a poté při teplotě 25 °C přes noc. Reakční směs se zalije vodou (50 ml) a extrahuje EtOAc (3 x 50 ml). Spojené extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CH₂Cl₂:MeOH (9:1), k získání 150 mg (18 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

- 54 • 3 · · · · · · * * * • « · C · · · · ···· • ··· ·· ·· · · · · * « · ···· · · · ···· · 9 ·· *♦ · · ···

NMR (300 MHz; CD₃OD): δ 7,74-7,86 (m, 2H), 7,10-7,45 (m, 6H), 5,10-5,15 (m, 2H) , 4,70-4,81 (m, 1H), 3, 90-4, 44 (m, 6H), 2,50 (s, 3H), 2,10-2,32 (m, 2H), 1,02-1,18 (m, 2H), 0, 10 (s, 9H) .

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 557 m/z (viii) Ph (3-SMe) - (R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA

Směs Ph (3-SMe)'-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(Teoc) (80 mg, 0,19 mmol; viz krok (vii) uvedený výše) a TFA (2,0 ml) v CH d2Cl₂ (2 ml) se míchá při teplotě 0. °C 3 hodiny. Roztok se odpaří ve vakuu a odparek se rozpustí ve voděr a lyofilizuje k získání 90 mg (87 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS: (M+ 1) 413; (M-l) 411 m/z ^:H NMR (400 MHz; CD₃OD; směs rotamerů): δ 7,74 (m, 2H),

7,52 (m, 2H) , 7,38-7,13 (m, 4H), 5,2-5,0 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,62-3,94 (m, 4H), 2,68, 2,49 (2m, 1H), 2,28, 2,14 (2m, 1H) , 2,45' (s, 3H) .

¹³C NMR (100 MHz): δ 185,0, 172,8, 171,8, 167,0.

Příklad 4

Ph (3-502Me)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Ph(3-502Me)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH

Směs Ph(3-SMe)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (890 mg, ··· · · · · ·· · « «···· · * · ♦ · · · • · · · · · ··· ··&· ·· · · 9 9 9 · 9 9 9

4,49 mmol; viz příklad 3(iii) (a) uvedený výše) a Oxone⁵ (8,3 g, 13,5 mmol.) v MeOH (40 ml) a vodě (25 ml) se míchají při teplotě 0 °C a poté při teplotě 25 °C přes noc. Tuhé látky se zfiltrují a promyjí EtOAc (200 ml). Filtrát se odpaří ve vakuu, naředí vodou (50 ml) a poté extrahuje EtOAc (4 x 60 ml). Spojené organické extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a poté odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHC1₃:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (6:3:1), k získání 150 mg (15 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

^XH NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 8,10 (s, 1H), 7,80-7,88 (m, 2H) ,

7,55 (t, J=7,5Hz, 1H), 5,02 (s, 1H), 3,10 (s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz; CD₃OD) : δ 178,4, 145,6, 142,2, 133,2,

130,3, 127,4, 126,2, 75,5, 42,4.

Analýza HPLC: 94,8 % , > 99 % ee [oc]_D ²⁵ = -86, 2 ° (c = 1,0, MeOH)

ΑΡΙ-MS: (Μ - 1) 229 m/z (ii) Ph(3-SO₂Me)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Směs Ph(3-SO₂Me)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (400 mg, 1,74 mmol; viz krok (i) uvedený výše), Η-Aze-Pab(Teoc) (720 mg, 1,91 mmol; viz příklad 3(ví) uvedený výše), PyBOP (99S mg, 1,91 mmol) a 2,4,6-kolidin (463 mg, 3,83 mmol) v DMF (10 ml) se míchají při teplotě 0 °C a poté při teplotě 25 °C přes noc. Směs se zalije vodou (50 ml) a extrahuje se EtOAc (3 x S0 ml). Spojené extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a poté odpaří ve vakuu. Odparek se • * · ···· » · » * ····· ·· · · ♦ » » • ········ • ··· a· ·· «φ ·» ·· chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsi CHCl₃:MeOH (15:1), k získání 570 mg (57 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

²H NMR (300 MHz; CD₃3OD) : δ 7,58-8,10 (m, 6H) , 7,40-7,50 (m, 2H), 5,32 (s, 1H), 5,25 (s, 1H), 4,70-4,81 (m, 1H), 3,97-4,54 (m, 6H), 3,20 (s, 3H), 2,10-2,82 (m, 2H), 1,021,18 (m, 2H) , 0,10 (s, 9H) .

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 589 m/z (iii) Ph(3-SO₂Me) -(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA

Ke studenému roztoku Ph(3-502Me)-(R) nebo

-(S)CH(OH)C(O)-AzePab(Teoc) (6S mg, 0,11 mmol; viz krok (ií) uvedený výše) v methylenchloridu (0,5 ml) se přidá. TFA (3 ml) a roztok se míchá 100 minut. Výsledný roztok se odpaří, přidá se voda a vodný roztok se lyofilizuje, čímž se získá 60 mg (96 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS: (M + 1) 445; (Μ - 1) 443 m/z

Ý NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ. 8,10-7,45 (m, 8H) , 5,34, 5,25 (2m, 1H), 4,81 (m, 1H), 4,62-3,93 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 2,70, 2-, 54 (m, 1H) , 2,28, 2,17 (m, 1H) .

^:'C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100 MHz): δ 172,2, 171,7,' 167,0, 161,0.

Příklad 5

Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S-CH(OH)C(O)-Aze-Pab x ΤΓΑ

- 57 • ·······» (i) Ph(3-Cl, 5-NOZ)-(R,S~CH(OTMS)CN

K roztoku 3-chlor-5-nitrobenzaldehydu (24,1 g, 0,13 mol) v CH₂CI₂ (1,0 litru) se přidá Znl₂ (2,1 g, 6,5 mmol). Výsledná suspenze se ochladí na teplotu 0 °C a během 5 minut se přidá trimethylsilylkyanid (13,9 g 0,14 mol). Roztok se míchá při teplotě 0 °C 3 hodiny, ohřeje se na teplotu 25 °C a 18 hodin se.míchá. Reakční směs se naředí vodou a organické fáze se oddělí, vysuší (síran sodný), zfiltrují a poté odpaří ve vakuu k získání 36,8 g (99 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako oleje.

NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 8,21-8,29 (m, 2H), 7,83 (s, 1H) , 5,59 (s, 1H), 0,36 (s, 9H).

(ii) Ph(3-Cl, 5-NO₂)-(R,S)CH(OH)C(O)OH

Roztok Ph(3-Cl, 5-NO2) (R, S)CH(OTMS)CN (59,0 g, 0,209 mol; viz krok (i) uvedený výše) v koncentrované HC1 (600 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Roztok se ochladí a odpaří ve vakuu na objem 500 ml. Kyselý roztok se extrahuje Et₂O (4 x), organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného (2 x), vysuší (síran sodný), zfiltrují a poté odpaří ve vakuu k získání 48,4 g (93 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako tuhé látky, které se použije bez dalšího čištění.

³H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 8,33 (m, 1H) , 8,23 (m, 1H) , 7,94 (m, s 1H), 5,34 (s, 1H).

(iii) Ph(3-Cl, 5-NO₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O) OH (a) a Ph(3-Cl, 5-NO₂)-(S) nebo -(R)CH(OAc)C(O)OH (b) • · to· ♦ ♦ · · · *» * • · » · * «· · ♦ to· to ··· ♦ · · · · ·♦ • 9 · · · * · ♦ · · * «* • · «··· to ·♦

Směs Ph(3-Cl, 5-NO₂) - (R, S) CH(OH) C (Ο*)’θΗ‘(17,’í g,*’

73,84 mmol; viz krok (ii) uvedený výše) a Lipase PS Amano (8,5 g) ve vinylacetatu (300 ml) a MTBE (300 ml) se míchá při teplotě 55 °C 24 hodin. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrační koláč se promyje Et₂O.

Filtrát se odpaří ve vakuu a poté bleskově chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHC1₃: CH₃CN : TFA (180:20:1), k získání 7,1 g (42 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako tuhé látky a 10,7 g (52 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako tuhé látky.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):

²H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 8,33 (s, 1H), 8,22 (s, 1H) , 7,95 (s, 1H), 20 5,34 (s, 1H).

^ljC NMR (75 MHz; CD₃OD) : δ 174,6, 150,2, 145,2, 136,3,

133,8, 124,1, 121,1, 72,7. .

ΑΡΙ-MS: (Μ - 1) 230 m/z [a]_D ²⁵= -101,2° (c = 1,0, MeOH)

Analýza HPLC: 99,6 % , 99 %a ee

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (b):

NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 8,32 (m, 1H) , 8,28 (m, 1H) , 7,96 (m, 1H), 6,10 (s, 1H), 2,21 (s, 3H).

(iv). Ph(3-Cl, 5-NH₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O) OH

Směs Ph(3-Cl, 5-NO₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O) OH (3,9 g, 16,8 mmol; viz krok (iii)(a) uvedený výše) a oxid platiničitý (0,4 g) v EtOH (200 ml) při teplotě 40 °C se • · · · ♦ · míchá 4 hodiny pod atmosférou vodíku. Směs φ ·· « * · · * • » · ♦ » · ♦

4 · · · · · 4 • « · · · · » ·· 4 « ·· ·<· se zfiltruje přes podložku z rbzsivkové zeminy a filtrační koláč se promyje EtOH. Filtrát se odpaří ve vakuu k získáni 3,5 g (okolo 100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako křehké pěny, která se použije bez dalšího čištění.

⁴H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 6,77 (m, 1H), 6,71 (m, 1H), 6,57 (m, 1H) , 4,78 (s, 1H) .

(v) Ph(3-Cl, 5-NHMe)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)OH

Způsob A:

Směs Ph(3-Cl, 5-NH₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O) OH (3,5 g, 16,8 mmol; viz krok (iv) uvedený výše) a formaldehyd (1,8 ml of 37 % hmotnostních ve vodě, 23,9 mmol) v EtOH (400 ml) se míchá při teplotě 25 °C 18 hodin. Roztok se odpaří ve vakuu k získání křehké pěny, která se spoj s oxidem platiničitým (0,35 g) v EtOH (400 ml) a 48 hodin se míchá pod atmosférou vodíku. Směs se zfiltruje přes podložku z rozsivkové zeminy a filtrační koláč se promyje EtOH. Organické fáze se odpaří ve vakuu a bleskově chromatografuji na silikagelu, přičemž se eluují směsí CHC1₃:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (14:5:1), k získání 1,0 g (28 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako křehké pěny. Sloučeniny pojmenovaná v podzáhlaví se získá promytím odpovídající amonné soli přes podložku Amberlite^e CG-50 směsí CH₃CN:MeOH (3:1).

Způsob B:

Směs Ph(3-Cl, 5-NH₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (0) OH (8,67 g, 43,0 mmol; viz krok (iv.) • « · • · · · • · • · 9 · · · uvedený • · •« • ♦· •« · ♦ methyl(500 ml) a MeOH (100 ml) jodid (6,10 g, 43,0 mmol) v CH₃CN se zahřívá na teplotu 50 °C 24 hodin. Roztok se odpaří ve vakuu a bleskově chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCI3:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (14:5:1), k získání 2,9 g (31 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako tuhé látky. Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se získá promytim odpovídající amonné, soli přes podložku Amberlite® CG-50 směsí CH₃CN:MeOH (3:1).

²H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 6,68 (m, 1H) , 6,61 (m, 1H) , 6,50 (m, 1H), 4,98 (s, 1H), 2,75 (s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz; CD3OD) : δ 176, 8, 153, 4, 144,1, 136,7, 116,3, 113,2, 111,0, 74,7, 31,3.

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 216 m/z

Analýza HPLC: 97,2 % , 97,9 % ee [a]_D ^:5-81,6 ⁰ (c = 1,0, MeOH) (vi) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)OH

Roztok Ph(3-Cl, 5-NHMe)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (1,0 g, 4,64 mmol; viz krok (v) uvedený výše) v MeOH (100 ml) se zpracuje 4 díly anhydridu kyseliny octové (40,47 g, 4,64 mmol v každém dílu) během 72 hodin. Roztok se alkalizuje 2N NaOH, míchá 3 hodiny, neutralizuje 2N HCI a poté odpaří ve vakuu. Blesková chromatografie (2 x) na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCI3:MeOH: NH₃ (vodná, nasycená) (6:3:1), poskytne 0,83 g (69 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako křehké pěny. Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví se získá promytim odpovídající amonné soli přes podložku Amberlite® CG-50 směsí CH₃CN:MeOH (3:1).

1H NMR	(300	MHz;	CD3OD) : δ 7,54 (s	, IH),	7,35 (s, 2H), 5,19
(s, IH)	, s	3,26	(s, 3H), 1,88 (s,	3H) .
13C NMR	(75	MHz;	CD33OD) : δ 175, 3,	172,8,	146,8, 145,2,
136,2,	128,	0, 12	17,5, 125,4, 73, 2,	37,6,	22,5.
API-MS:	(M	+ 1)	258 m/z

Analýza HPLC: 98,5%, 97,4% ee [a]_D ²⁵ = -97,5 0 (c = 1,0, MeOH) (vii) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab-

-(Teoc)

Ke směsi Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (0,34 g, 1,32 mmol; viz krok (ví) uvedený výše) a H-Aze-Pab(Teoc) (0,52 g, 1,39 mmol; viz příklad 3(ví) uvedený výše) v DMF (15 ml) při teplotě 0 °C se přidá kollidin (0,35 g, 2,90 mmol) a PyBOP (0,75 g, 1,45 mmol). Roztok se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny, ohřeje se na teplotu 25 °C a 2 hodiny se míchá, poté se odpaří ve vakuu. Blesková chromatografie (2 x) na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHC13:EtOH (95:5), poskytne 0,36 g (44 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako křehké pěny.

¹H NMR (300 MHz; CD₃OD, směs rotamerů): δ 7,78 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,25-7,55 (m, 5H), 5,25 a 4,78 (2m, IH), 5,22 a 5,15 (2s, IH), 3,93-4,56 (m, 6H), 3,23 (s, 3H), 2,12-2,78 (m, 2H), 1,87 (s, 3H), 1,04-1,11 (m, IH), 0,06 (s, 9H).

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 616 m/z (viii) Ph(3-C1,

5-NMeAc)-(R) nebo

-(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab

TFA

Roztok Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (73 mg, 0,12 mmol; viz krok (vii) uvedený výše) v TFA (5,0 ml) se míchá při teplotě místnosti 80 minut, načež se výsledný roztok se odpaří do sucha. Zbývající tuhé látky se rozpustí ve vodě a roztok se lyofilízuje, čímž se získá 70 mg (98 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako pěny.

LC-MS	: (M	+ 1 )	472	m/z
M NMR	(400	MHz;	D20)	: δ 7,74 (dd, 2H)	, 7,	55-7,	10 (m, SH),
5,36,	5,20	(2s,	1H) ,	5,23, 4,88 (2m,	1H) ,	4,60	-4,05 (m,
4H) , 3	,38,	3,20	(2s,	3H), 2,80, 2,60	(2m,	1H) ,	2,38-2,20
(m, 1,	5H) ,	1,87	(2,5H).

¹³C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100

MHz): δ 173,9, 173,3, 172,6, 166,5, 163,3.

Příklad 6

Ph(3-Cl, 5-Nme₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (0)-Aze-Pab 2-xTFA (i) 3-Chlor-S-N,N-dimethylaminobenzylalkohol

K roztoku 3-chlor-5-nitrobenzylalkoholu (12,5 g,

66,6 mmol) v EtOH (750 ml) se přidá oxid platiničitý (1,25 g). Výsledná suspenze se probublává vodíkem 3 hodiny. Přidá se roztok formaldehydu (37 % hmotnostních ve vodě, 97 ml,

1,3 mol) a směs se míchá pod atmosférou vodíku 18 hodin. Roztok se zfiltruje přes podložku z rozsivkové zeminy a ··· ···· · · · • ····· · · · · · · · • ········ • · « · · · · · · · ·· ·♦· odpaří ve vakuu k získání surového produktu. Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje směsí Hex:EtOAc (7:3), poskytne 8,2 g (66 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako oleje.

^XH NMR (300 MHz; CDC1): δ 6,67 (s, 1H), 6,55-6,63 (m, 2H), 4,58 (d, 2H, J = 7 Hz), 2,96 (s, 6H), 1,74 (t, 1H, J = 7 Hz) .

CI-MS: (Μ + I) 185 m/z (ii) 3-Chlor-5-N, N dimethylaminobenzaldehyd

K roztoku DMSO (7,58 g, 97,0 mmol) v CH₂C1₂ (100 ml) při teplotě -78 °C se přidá oxalylchlorid (6,16 g, 48,5 mmol) během 10 minut. Po dalších 15 minutách při teplotě -78°C se během 15 minut přidá roztok 3-chlor-5N,N-dimethylaminobenzylalkoholu (8,18 g, 44,1 mmol; viz krok (i) uvedený výše) v CH2CI2 (100 ml). Výsledný roztok se míchá při teplotě -78 °C 1 hodinu, než se přidá DIPEA (28,5 g,

220,5 mmol). Roztok se ohřeje na teplotu 25 °C a míchá se 18 hodin, než se odpaří ve vakuu k získání surového produktu. Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje směsí Hex:EtOAc (5:1), poskytne 7,50 g (93 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako žluté tuhé látky.

X NMR (300 'MHz; CDC1₃) : δ 9,88 (s, 1H) , 7,15 (m, 1H) , 7,05 (m, 1H), 6,87 (m, 1H), 3,04 (s, 6H).

(iii) Ph'(3-Cl, 5-Nme₂) - (R, S) CH (OTMS) CN

K roztoku 3-chlor-5-N,N dimethylaminobenzald ehydu • · (7,5 g,

40,8 mmol; viz krok (ií) • · «· · * ·· ·· • · · · · ♦ · ···· • · · · · · · ·· • · · · · · ·· ···· • · · · · · ·· ·*···« ·· · · · · · uvedený výše) v CH₂C1₂ (300 ml) se přidá Znl₂ (0,65 g, 2,04 mmol). Výsledná suspenze se ochladí na teplotu 0 °C a během 5 minut se přidá trimethylsilylkyanid (4,5 g, 44,9 mmol). Roztpk se míchá při teplotě 0 °C 1 hodinu, než se ohřeje na teplotu 25 °C a 2 hodiny se míchá. Výsledná smě se naředí vodou a organické fáze se oddělí, vysuší (síran sodný), zfiltrují a poté odpaří ve vakuu k získání 11,7 g (100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi jako oleje.

NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 6,75 (m, 1H) , 6,60-6,68 (m, 2H) ,

5,39 (s, 1H), 2,97 (s, 6H), 0,28 (s, 9H).

(iv) Ph(3-Cl, 5-NMse₂)-(R, S)CH(OH)C(O)OH

Ph(3-Cl, 5-Nme₂)-(R, S)CH(OTMS)CN (11,7 g, 41,4 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) se rozpustí v koncentrované HC1 (300 ml) a zahřívá se na teplotu zpětného toku 1,5 hodiny. Roztok se ochladí a odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve vodě, neutralizuje hydrogenuhličitanem sodným a odpaří ve vakuu. Směs organických látek a solí se suspenduje v MeOH, zfiltruje a poté odpaří k získání surového produktu. Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHC1₃:MeOH:konc. NH₄OH (vodný) (6:3:1), poskytne 9,0 g (95 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlavi jako tuhé látky.

NMR (300 MHz; ČD₃OD) : δ 6,77-6, 82 (m, 2H), 6,58 (m, 1H) ,

4,80 (s, 1H), 2,94 (s, 6H) .

(v) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)~(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)OH (a) a Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(S) nebo -(R)CH(OAc)C(O)OH (b) • · · · · φ ·· · ·· • ·· · · · · · ···« • · * · · ·· ·· ».

• · · · · · · · · · ·· ».

• ·······«!

Směs Ph(3-Cl, 5-NMe₂-(R, S) Ch’(Oh’c (O) OH ”(1,0*g;

viz krok (iv) uvedený výše) a Lipase PS Amano (0,5 g) ve vinylacetatu (10 ml) a MTBE (10 ml) se míchá při teplotě 45 °C 48 hodin. Reakční směs se zfíltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrační koláč se promyje MeOH. Filtrát se odpaří ve vakuu a bleskově chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje sihěsí CHC1₃: MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (6:3:1), k získání 0,40 g (40 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako křehké pěny a 0,45 g (38 %) slopučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako křehké pěny. Sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví (a) se může dále vyčisti krystalizací z CH2CI2 a MeOH.

• Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):

^XH NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 6,81 (m, 1H) , 6,74 (m, 1H), 6,57 (m, 1H), 4,98 (s, 1H), 2,87 (s, 6H).

¹³C NMR (75 MHz; CD₃OD) : δ 180,0, 152,9, 144,8, 135,6,

116,1, 112,2, 110,9, 76, 9, 40, 5.

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 230 m/z

Analýza HPLC: 98,5 %, 97,9 % ee [a]_D ²⁵ = -73, 5 ° (c = 0,5, DMSO)

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (b):

NMR (300 MHz; CD3OD) : δ 6, 77-6, 83 (m, 2H) , 6,64 (m, 1H) ,

5,67 (s, 1H), 2,94 (s, 6H), 2,14 (s, 3H).

(v) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo - (S) CH (OH.) C (O)-AzePab(Teoc) • · · · · ·> ··· a • · « · · · ♦ ·· ··· • · · · ····· a • ···«·»· · » · · · • · t · · · · ··

Ke směsi Ph(3-Cl, 5-NMe₂) - (R)* nebo -*(S)*CH (OH) -”* C(O)OH (0,11 g, 0,48' mmol; viz krok (v) (a) uvedený výše) a H-Aze-Pab(Teoc) (0,20 g, 0,53 mmol, viz příklad 3(vi)) v DMF (15 ml) při teplotě 0 °C se přidá DIPEA (0,12 g, 0,96 mmol) a TBTU (0,17 g, 0,53 mmol). Roztok se míchá při teplotě 0 °C 2'hodiny, ohřeje se na teplotu 25 °C a míchá se 18 hodin, poté se odpaří ve vakuu. Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje gradientem CH₂Cl₂:MeOH (od 100:0 do 95:5), poskytne 0,25 g sloučeniny pojmenované v podzáhlaví, která se podrobí druhé bleskové chromatografii na silikagelu, přičemž se eluuje směsí EtOAc:MeOH (30:1) k získání 0,22 g (78 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako křehké pěny.

¹H NMR (300 MHz; CD₃OD, směs rotamerů): δ 7,78 (d, 2H, J =

Hz), 7,42 (d, 2H, J = 9 Hz), 6,62-6,75 (m, 3H), 5,14 a

4,78 (2m, 1H), 5,07 (m, 1H), 4,15-4,57 (m, 4H), 3,94-4,12 (m, 2H), 2,96 (s, 6H), 2,05-2,75 (m, 2H), 1,04-1,13 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 588 m/z (vii) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab

2xTFA

K ledově studenému roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-AzePab(Teoc) (84 mg, 0,14 mmol; viz krok (vi) uvedeny výše) se přidá TFA (4 ml) a výsledný roztok se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny. Roztok se odpaří k získání odparku, který se rozpustí ve vodě a poté se lyofilizuje. Tím se získá 78 mg (81 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílého prášku.

« · * t · · ♦ <· · • ···«·«· · · · · >

• ·»♦··«·* ···· ·· *c ·« ·* ···

LC-MS: (Μ - 1) 442 m/z ^XH NMR (400 MHz; CD₃OD; směs rotamerů): δ 7,78-7,49 (m, 4H), 6,94-6,79 (m, 4H), 5,15, 5,08 (m, 1H) , 5,20, 4,79 (2m, 1H), 4,51 (část AB spektra ABX; 2H) , 4,41-3,95 (m, 2H),

2,98 (s, 6H), 2,69, 2,52 (2m, 1H), 2,28, 2,14 (2m, 1H).

¹³C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100 MHz): δ 172,5, 171,7, 166,9, 161,0, 160,7.

Přiklad 7

Ph(3-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3-NO2)-(R) nebo -(S) CH(OH)C(O)OH (a) a Ph(3-NO₂)-(S) nebo (R) CH (OAc) ,C (O) OH (b)

Směs Ph (3-NO₂)-(R, S)CH(OH)C(O)OH (25 g, 126 mmol), Lipase PS Amano (12,5 g) , vinylacetat (150 ml)^! a MTBE (375 ml) se zahřívá n a teplotu 45 °C 24 hodin.. Reakční směs se zfíltruje a filtrační koláč se promyje EtOAc (500 ml). Filtrát se se odpaří ve vakuu a chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCI3:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (6:3:1), k získání 9,0 g, (36 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako žlutého oleje a 6,5 g (21 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako hnědé tuhé látky.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):

³H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 8,34 (s, 1H) , 8,25 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 5,30 (s, 1H).

- 68 ·· ·· ·· ·· ·· · • ·· · · ·♦ · · ··· ··· ·«·· ·· · • ····· ·· ··· · · • ······· .· ···· ·· ·· ·· ·· ···

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlavi (b):

³H NMR (300 MHz; CD₃ OD): δ 8,34 (s, 1H), 8,25 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 5,82 (s, 1H), 2,20 (s, 3H).

(ii) Ph(3-NH₂) - (R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH

Směs Ph(3-NO₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (8,0 g,

40,6 mmol; viz krok (i)(a) uvedený výše) a 10 % paladium na uhlí (800 mg) v MeOH (200 ml) se přes noc míchá při teplotě 25 °C pod jednou atmosférou vodíku. Směs se zfiltruje přes podložku z rozsivkové zeminy, přičemž se promývá EtOAc (250 ml). Filtrát se odpaří ve vakuu k získání 7,0 g (100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi jako bílé pěny.

³H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,0-7.12 (m, 1H), 6, 75-6,90 (m,

2H), 6,60-6,70 (m, 1H), 4,80 (s, 1H).

(iii) Ph(3-NHMe)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)OH

Směs 'Ph (3-NH₂) - (R) nebo - (S) CH (OH) C (O) OH (2,9 g,

17,3 mmol; viz krok (ii) uvedený výše) a methyljodidu (2,95 g, 20,8 mmol) v MeOH (50 ml) se přes noc zahřívá na teplotu 55 °C. Reakční směs se odpaří ve vakuu a chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHC1₃:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (6:3:1), k získání 616 mg (20 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi jako hnědého oleje.

³H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,00-7,12 (m, 1H) , 6, 70-6, 80 (m, 2H), s 6,50-6,55 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 2,80 (s, 3H) .

• · · ·

Směs Ph(3-NHMe)- (R) nebo - (S)CH(OH)C(O)OH (540 mg, 2,99 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) a anhydridu kyseliny octové (612 mg, 5,98 mmol) vn MeOH (15 ml) se •míchá při teplotě 25 °C pod atmosférou dusíku přes noc.

Směs se odpaří ve vakuu a chromatografujé na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHC1₃: MeOH:konc. NH₄OH (vodný) (6:3:1),. k získání 380 mg (57 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé pěny.

²H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,51-7,60 (m, 1H) , 7,38-7,-49 (m, 2H), 7,5-7,25 (m, 1H), 5,04 (s, 1H), 3,22 (s, 3H), 1,85 (s, 3H) .

¹³C NMR (75 MHz; CD₃OD) : δ 178,2, 173, 6, 145, 8, 142,8,

131,5, 127,8, 126,5, 126,2, 75,5, 37,8, 22,5.

Analýza HPLC: 95,7 % , 95,3 % ee [ot]_D ²⁵ = -4,32 ⁰ (c = 0,5, MeOH)

CI-MS: (M + 1) 224 m/z (v) Ph(3-NMeAc)-(R) nebo -(,S~CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Směs Ph(3-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (301 mg, 1,35 mmol; viz krok (iv) uvedený výše), Η-Aze-Pab(Teoc) (560 mg, 1,48 mmol, viz Příklad 3(vi) uvedený výše), PyBOP (774 mg, 1,48 mmol) a 2,4,6-kolidinu (360 mg, 2,97 mmoZL) v DMF (10 ml) se míchá při teplotě 0 °C a poté při teplotě 25 °C přes noc. Směs se zalije vodou (50 ml) a extrahuje EtOAc (3x 50 ml). Spojené organické extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu. Odparek se chromá— tografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCl₃:MeOH • ····· ·· ··· · · • · ···· ··· ···· ·· ·· ·· ·· ··· (9:1), k získání 175 mg (23 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako, bílé tuhé látky.

NMR (CD₃OD) : δ 7,82-7,90 (m, 2H) , 7,20-7,50 (m, 6H) ,

5,32 (s, 1H), 5,25 (s, 1H) , 4,70-4,81 (m, 1Ή) ,’ 3, 97-4,54 (m, 6H), 3,20 (s, 3H) , 2,10-2,82 (m, 2H), 1,85 (s, 3H), 1,02-1,18 (m, 2H), 0,10 (s, 9H).

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 582 m/z (ví) Ph(3-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc

Směs Ph(3-NMeAc)-(R,S~CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (65 mg, 0,11 mmol; viz krok (v) uvedený výše) a TFA (2,0 ml) v CH2CI2 (2 ml) se míchá při teplotě 0 °C 3 hodiny. Roztok se odpaří ve vakuu při teplotě místností a odparek se vyčistí za použití preparativní HPLC (CH3CN:O,1 M NH₄0Ac, gradient: 0 až 50 % CH3CN) a příslušné frakcese odpaří. Produkt se rozpustí ve směsi voda/HOAc a lyofilizuje se k' získání 55 mg (100 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS: (M+l) 438; (M-l) 436 m/z ^ΛΗ NMR (400 MHz; D₂O; směs rotamerů) : δ 7,74 (m, 3H) , 7,617,20 (m, 5H) , 5,36, 5,24 (2m, 1H) , 4,84 (m, 1H) , 4,58-3,94 (m, 4H), 3,42-3,08 (m, 3H), 2,80, 2,57 (2m, 1H), 2,36-1,98 (m, 4Η) , 1,84 (s, 3Η) .

^1!C NMR (100 MHz): δ 174,2, 173,1, 172,7, 166,7.

Příklad 8

Ί\ ·· ·· ·· ···· * • · · · · ·· · · ··· ··· «····· · • ····· ·· ··· · · • · · · · · ** Μ

Ph(3-NMe₂, 5-CF₃)-(R) nebo - (S*) CH (OH) C (*Ó)-Aze-Pab x TFA (i) Ph(3-NO₂, 5-CF₃)CH₂OH

Komplex Bor-tetrahydrofuran (170 ml 1M v THF, 170 mmol) se během 1 hodiny po kapkách přidá k roztoku Ph(3NO₂, 5-CF₃)CO₂H (10,0 g, 42,6 mmol) v THF (50 ml) ochlazenému na teplotu 0 °C pod atmosférou dusíku. Roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 4 hodiny. Roztok se zalije pomalým přidáni vody, vlije se do EtOAc (200 ml) a poté se postupně promyje vodou (150 ml) a roztokem chloridu sodného (150 ml). Organická fáze se vysuší (síran sodný), zfitltruje a odpaří ve vakuu k získání 6,9 g (73 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako oanžového oleje.

^:H NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 8,44 (s, 1H), 8,46 (s, 1H) , 8,01 (s, 1H), 4,92 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,10 (široký s, 1H) .

(ii) Ph(3-NO₂, S-CF₃)-CHO

Oxalylchlorid (3,0 ml, 34 mmol) se po kapkách přidá k roztoku DMSO (4,86 ml, 68,6 mmol) v 70 ml suchého CH₂C1₂ ochlazeného na teplotu -78 °C pod atmosférou dusíku. Po 15 minutách při teplotě -78 °C se po kapkách přidá Ph(3-NO₂, 5-CF₃)CH₂OH (6,9 g, 31 mmol; viz krok (i) uvedený výše) v 75 ml CH₂C1₂ se přidá po kapkách během 30 minut . Po 45 minutách při teplotě -78 °C se během 20 minut přidá DIPEA (27,2 ml, 156 mmol). Roztok se míchá při teplotě -78 °C další 1 hodinu, za kteoužto dobu se roztok nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 15 hodin. Roztok se postupně promyje 1M HCI (2x 150 ml), roztokem chloridu sodného (150 ml), vysuší (síran sodný), zfiltruje a

- 72 ·· ·« ·’ ·’ ·· · • ·· · · ·· ♦ · ··· •i;····· · · · • ····· ·· ··· · · • · ♦·♦··· ·

99 9 9 9 9 9 9 9 0 9 9 9 9 odpaří ve vakuu k získání 6,9 g (99 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako oranžového oleje.

^ΧΗ NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 10,19 (s, 1H) , 8,94 (s, 1H) ,

8,76 (s, 1H) , 8,51 (s, 1H) .

(iii) Ph(3-NO₂, 5-CF₃) - (R, S) CH (OTMS) CN

K roztoku Ph (3-NO₂, 5-CF₃) -CHO (6,52 g, 29,7 mmol; z kroku (ii) uvedeného výše) ve 220 ml CH₂C1₂ se přidá Znl₂ (474 mg, 1,49 mmol). Roztok se probublává dusíkem a ochladí na teplotu 0 °C. Během 10 minut se přidá trimethylsilylkyanid (3,25 g, 32,7 mmol), načež se roztek míchá 2 hodiny. Roztok se poté ohřeje na teplotu místnosti a míchá se dalších 5,5 hodiny, načež se reakční směs zalije vodou (250 ml). Organická fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje CH₂C1₂ (125 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší (Síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání 9,1 g (96 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako oranžového oleje.

²Η NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 8,64 (s, 1H) , 8,58 (s, 1H) , 8,23 (s, 1H), 6,14 (s, 1H), 0,80 (s, 9H).

(iv) Ph(3-NO₂, 5-CF₃) - (R, S) CH (OH) C (0) OH

Ph(3-NO₂, 5-CF₃) - (R, S) CH (OTMS) CN (9,1 g, 29 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) se rozpustí v koncentrované kyselině chlorovodíkové (83 ml, 1000 mmol) a zahřívá se na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Roztok se naředí vodou (200 ml) a extrahuje Et₂O (3 x 150 ml). Spojené organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného (200 ml), vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání

- 73 hnědého oleje. Surový produkt se bleskově chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsi CHC1₃:MeOH:NH3 (vodná, nasycená) (14:5:1). Výsledná bílá tuhá látka se suspenduje v Et₂O a přidá se 2M HC1 (100 ml). Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje Et₂O (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří k získání 5,9 g (78 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako hnědé tuhé látky.

³H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 8,65 (s, 1H), 8,47 (s, 1H) , 8,23 (s, 1H), 5,43 (s, 1H).

(v) Ph(3-NH₂, 5-CF₂) (R, S) CH (OH) C (O) OH

K roztoku Ph(3~NO₂, 5-CF₃) - (R, S) CH (OH) C (0) OH (5,9 g, 22 mmol; viz krok (ív) uvedený výše) v absolutním EtOH (350 ml) se přidá oxid platiničitý (590 mg). Roztok se 5 hodin probublává vodíkem, načež se směs zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a poté se odpaří ve vakuu k získání 5, 8 g (100 %) sloučeniny pojmenované v.podzáhlaví jako oranžového oleje.

NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,00 (s, 2H) , 6,86 (s, 1H) , 5,06 (s, 1H).

(ví) Ph(3-NMe₂, 5-CF₃) - (R, S) CH (OH) C (O) OH

K roztoku Ph(3-NH₂, 5-CF₃) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (5,27 g, 22,4 mmol; viz (v) uvedený výše) rozpustí v absolutním EtOH (250 ml ) se přidá 37% vodný roztok formaldehydu (54 ml, 720 mmol). Přidá se oxid platiničitý (520 mg) a roztok se probublává vodíkem. Po 22 hodinách mícháni pod atmosférou vodíku se roztok zfiltruje přes

- 74 rozsivkovou zeminu a odpaří ve vakuu. Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCI3:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (6:3:1), poskytne 2,7 g (46 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

^XH NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,10 (s, 1H) , 7,07 (s, 1H) , 6,80 (s, 1H), 4,88 (s, 1H), 2,98 (s, 6H).

(vii) Ph(3-NMe₂, 5-CF₃) - (R) nebo - (S) CH (OH) C (O) OH (a) a

Ph (3-NMe₂) (5-CF₃) - (S) nebo -(R)CH(OAc)C(0)OH (b)

Směs Ph(3-NMe₂, 5-CF₃) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (2,7 g, 10 mmol; viz krok (vi) uvedený výše), Lipase PS Amano (1,4 g), vinylacetatu (56 ml) a MTBE (120 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku 1 den. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrační koláč se promyje Et₂O.·· Filtrát se odpaří ve vakuu a podrobí se bleskové chromatografii na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCl₃:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (14:5:1), k získání 727 mg (27 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako bílé tuhé látky a 1,53 g (49 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako bílé tuhé látky. Amonná sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) se prožene přes podložku Amberlite® CG-50 směsí CH₃CN:MeOH (3:1) jako eluentem k získání sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako bílé tuhé látky.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):

^XH NMR (300 MHz; CD₃OD): δ 7,03-7,09 (m, 2H), 6,79 (s, 1H),

4,95 (s, 1H), 2,88 (s, 6H) .

• · · · · · · ·· · ······«······ • · ···· · · · ¹³C NMR (75 MHz; CD₃OD) : δ 180,2, 152,9, 146,0, 133, 0 (q, J = 32,2 Hz), 125,2 (t, J = 284,0 Hz), 116,3, 113,4, 109,3, 77,4, 41,4.

Analýza HPLC: 98,8 %, > 99 % ee [cx]_D ²⁵ = -59, 5 ⁰ (c = 1,0, MeOH) ΑΡΙ-MS: (M + 1) 264 m/z

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (b):

³H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,12 (s, 1H) , 7,09 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,73 (s, 1H), 3,00 (s, 6H), 2,14 (s, 3H).

(vili) Ph(3-NMe₂, 5-CF₃)-(R) nebo - (S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab-(Teoc)

Ke směsi Ph(3-NMe₂, 5-CF₃)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (290 mg,· 1,10 mmol; viz krok (vii) (a) uvedený výše) a Η-Aze-Pab(Teoc) (436 mg, 1,16 mmol, viz příklad 3(vi)) se přidá 10 ml suchého DMF. Roztok se ochladí na teplotu 0 °C, načež se přidá PyBOP (630 mg, 1,21 mmol) a koilidin (295 mg, 2,42 mmol). Roztok se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě 0 °C 2 hodiny a při teplotě místnost 15 hodin. Směs se odpaří a podrobí bleskové chromatografií na silikagelu, přičemž se eluuje směsí EtOAc:EtOH (20:T), k získání 383 mg (56 %') sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

³H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,76-7,83 (d, J = 8,0 Hz, 2H) , 7,387,44 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,12 (m, 2H), 6,86-6,87 (m,

1H), 5,15-5,17 (m, 1H), 4,75-4,81 (m, 1H), 3, 98-4,56 (m, 6H), 3,00 (s, 6H), 2,48-2,58 (m, 1H), 2,24-2,33 (m, 1H) , 1,03-1,13 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).

···· Φ· 9 9 ·· · · ···

ΑΡΙ-MS: (M+l) 622 m/z.

(ix) Ph(3-NMe₂, 5-CF₃) - (R) nebo - (S) CH (OH) C (0)-Aze-Pab x TFA

K ledově studenému roztoku Ph(3-NMe₂, 5-CF₃)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)Aze-Pab(Teoc) (87 mg, 0,14 mmol; viz krok (viii) uvedený výše) v methylenchloridu se přidá TFA (4 ml) a směs se míchá při teplotě 0 °C 100 minut. Výsledný roztok se odpaří do sucha, čímž se získá odparek, který se rozpustí ve směsi voda/CH₃CN a poté lyofilizuje, čímž se získá 81 mg (80 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílého prášku.

LC-MS: (M+ 1) 478;	(M-l)	476	m/z
2H NMR (400 MHz; CD3OD; í	směs	rotamerů):	δ 7,78-7,50	(m,
4H), 7,09-7,04 (m,	2H) ,	6,92	(široký s	, 1H), 5,21,	5, 17
(2s, 1H), 4,80 (m,	1H) ,	4,52	(část AB	spektra ABX;	2H) ,
4,41-3,95 (m, 2H),	3,00	(s,	3H), 2,70,	2,52 (2m, 1H) , 2,30,
2,15 (2m, 1H) .

ⁱ³C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100 MHz): δ 172, 6, 171,.7, 167,0, 161, 5, 161,2.

Příklad 9

Ph(3-Cl, 5-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-5-Ph(3-Cl,5-NO₂)-2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-diox olan ·· ·· ·· ·· · · · ♦ ·· · · ·· · ♦ *·· ··· · ♦ · · · · · • ····· · · ··· · · • ········

K roztoku Ph (3-C1, 5-ΝΟ₂)*-(R* S) CH (OH) C (0*)*0Η**(18,8 g, 81,2 mmol; viz příklad 5(11) .uvedený výše) v acetonu (300 ml) se přidá monohydrát kyseliny p-toluensulfonové (750 mg, 3,94 mmol) a 2,2-dimethoxypropan (75 ml, 514 mmol). Roztok se 6 h zahřívá na teplotu zpětného toku a odpaří se ve vakuu. Odparek se rozpustí v EtOAc (200 ml) a poté se promyje vodou (100 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (150 ml) a roztokem chloridu sodného (150 ml). Organická fáze se vysuší (síran sodný), zfiltruje a odpaří k získání a hnědé tuhé látky, která se bleskově chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí Hex:EtOAc (7:3). Výsledná tuhá látka se dále čistí rekrystalizací ze směsi EtOAc/Hex(1:10) k získání 14,7 g (67 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

^XH NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 8,29 (m, 1H) , 8,24 (m, 1H) , 7,86 (m, 1H), 5,45 (s, 1H),.1,78 (s, 3H), 1,72 (s, 3H).

(ii) (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NH₂)-2,2-dimethyl-4-oxo-l, 3-dioxolan

K roztoku (R, S)-5-Ph (3-^Cl, 5-NO₂)-2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolanu (14,7 g, 54,1 mmol; viz krok (i) uvedený výše) v EtOH (400 ml) se přidá oxid platiničitý (1,5 g). Suspense se míchá pod jednou atmosférou vodíku 27 hodin při teplotě místnosti. Suspense se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrační koláč se promyje EtOH. Filtrát se odpaří ve vakuu k získání žlutého oleje, který se bleskově chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsi Hex:EtOAc (4:1) k získání 6,5 g (50 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako žlutého oleje.

²H NMR (300 MHz; CDC1₃) : δ 6,76 (m, 1H) , 6,56 (m, 2H) , 5,18 (s, 1H), 3,74 (široký s, 2H), 1,64 (s, 3H), 1,68 (s, 3H) .

(iii) (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-(l-pyrrolidinyl-2-on))-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolan

K roztoku (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NH₂)-2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolanu (6,5 g, 26,9 mmol; viz krok (ii) uvedený výše) v DMF (100 ml) se přidá ethyl-[4-brombutyrat] (10,5 g,

53,8 mmol) a Et3N (5,4 g, 53,8 mmol). Roztok se zahřívá na teplotu 95 °C 21 hodin pod atmosférou argonu. Reakční směs se odpaří a poté se rozpustí v EtOAc (200 ml), čímž se získá roztok, který se promyje vodou (150 ml) a roztokem chloridu sodného (150 ml). Organická fáze se vysuší (síran sodný), zfíltruje a odpaří k získání 9,6 g oranžového oleje. Surový materiál se rozpustí v p-xylenu.(250 ml) a zahřívá se na teplotu zpětného toku. Po 3 dnech se směs odpaří na oranžový olej a bleskově se chromatografuje na · silikagelu, přičemž se eluuje směsí EtOAc:Hexan (1:1), k získání 4,5 g (54 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví compound jako žluté tuhé látky.

³H NMR (340 MHz; CDC1₃) : δ 7,74 (m, 1H), 7,69 (m, 1H) , 7,26 (m, 1H), 5,38 (s, 1H), 3,80-3, 93 (m, 2H) , 2, 60-2:68 (t, J =

7,5 Hz, 2H), 2,15-2,25 (m, 2H), 1,77 (s, 3H) , 1,70 (s, 3H) .

(iv) Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R,S)CH(OH)C(0)OH

K roztoku (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-(l-pyrrolidinyl-2-on))-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolanu (4,5 g, 14,5 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) v THF (300 ml) se přidá IN NaOH (145 ml). Roztok se míchá 30 minut, načež se výsledný roztok zčásti odpaří ve vakuu. Roztok se okyselí 2N HC1 a ··· ···· ·· · • ····· · · · · · · · • ········ ···· ·· ·· ·· ·· ··· extrahuje EtOAc (2 x 150 ml). Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného (200 ml), vysuší (síran sodný), zfiltruje a odpaří k získáni 3,2 g (82. %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

^:H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,81 (m, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 5,15 (s, 1H), 3,89-3,96 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,572,65 (t, J = 7,5 Hz, 2H) , 2,12-2,22 (m, 2H) .

(v) Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(S) nebo -(R)-CH(OAc)C(O)OH (b) a Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrotidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (a)

Směs Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R,S)CH(OH)C(0)OH (3,2 g, 11,9 mmol; viz krok (iv) uvedený výše) a Lipase PS Amano (1,6 g) ve vinylacetatu (65 ml) a MTBE (130 ml) se míchá při teplotě 55 °C 24 hodin. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrační koláč se promyje postupně THF a poté MeOH. Filtrát se odpaří ve vakuu a bleskově chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCI3:MeOH:NH₃ (vodná, nasycená) (14:5:1), k získáni 1,3 g (33 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako bílé tuhé látky. Navíc se získá 800 mg (20 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a)'. Tento materiál se rozpustí ve vodě (40 ml), okyselí IN HC1 a extrahuje EtOAc (2 x 50 ml). Organická fáze se vysuší (síran sodný), zfiltruje a odpaří k získání sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako bílé tuhé látky, v důsledku nízké optické čistoty se sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví (b) znovu podrobí výše uvedeným podmínkám enzymatického štěpení (0,5 g Lipase PS Amano; 35 ml vinylacetat; 60 ml MTBE; 55 °C; 24 h). Isolace a čištění • · · · · · ·· ··· · · « ········ ···· ·· ·· ·· ·· ··· podle výše uvedeného postupu poskytne 470 mg sloučeniny pojmenované v podzáhlavi (a) jako bílé tuhé látky.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlavi (a):

^:H NMR (300 MHz; CD₃OD) : δ 7,80 (m, 1H), 7,59 (m, 1H) , 7,29 (m, 1H), 5,15 (s, 1H), 3,88-3,92 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,572,62 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 2,11-2,21 (m, 2H) , ¹³C NMR (75 MHz; CD₃OD) : δ 179,7, 177,8, 146, 1, 144,4, 137,9, 126, 3, 123, 5, 120,2, 75, 9, 52, 7, 36, 0, 21,2.

API-MS : (Μ + 1 ) 270 m/z

Analýza HPLC: 95,3 % , 96,5 % ee [a]_D ²⁵ -64,5 ⁰ (c = 1,0, MeOH) (vi) Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R)- nebo (S)-CH(OH)-

C(O)-AzePab(Teoc)

Ke směsi Ph(3-Cl, 5-(1-pyrrolidin-2-on))-(R)nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (250 mg, 0,927 mmol; z kroku (v) (a) uvedeného výše) a H-Aze-Pab(Teoc) (367 mg, 0,973 mmol, viz přiklad 3(ví)) v DMF (9 ml) při teplotě 0 °C se přidá PyBop (531 mg, 1,02 mmol) a kolidin (250 mg, 2,04 mmol). Roztok se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě 0·°C 2 hodiny a poté se ohřívá na teplotu místnosti 15 hodin. Směs se odpaří a podrobí bleskové chromatografií na silikagelu, přičemž se eluuje směsí EtOAc:EtOH (20:1), následuje promytí sloupce EtOH k získání bílé tuhé látky. Další blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje CHCl₃:EtOH (9:1), poskytne 420 mg (72 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi jako bílé tuhé látky.

Přiklad 10

Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-5-Ph(3-NO2) - 2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolan

Směs kyseliny m-nitromandlové (6,0 g, 30,4 mmol),

2,2-dimethoxypropanu (15,1 ml), monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové (0,29 g, 1,52 mmol) a acetonu (60 ml) se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Směs se odpaří ve vakuu a surový produkt se rozpustí v EtOAc. Organická fáze se promyje postupně nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší (síran hořečnatý) a poté odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí Heptan/EtOAc (80/20 až 70/30), k získání 5,7 g (79 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví. (Surový produkt se obtížně rozpouští v malém množství EtOAc, a proto se vložení na chromatografický sloupec dosáíhne za použití silikagelu, na nějž se produkt adsorbuje.)

FAB-MS: (M+l) 238 m/z

M NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,36 (široký s, 1H) , 8,22 (dd, 1H), 7,84 (dd, 1H), 7,60 (dd, 1H), 5,44 (s, 1H), 1,76 (s,

3H), 171 (s, 3H).

(ii) (R,S)-5-Ph (3-NH₂)-2,2-dimethyl-4-oxo-l, 3-dioxolan

Směs (R,S)-5-Ph(3-NO₂)-2,2-dimethyl-4-oxo-l, 3-dioxolan (3,1 g, 13,1 mmol; viz krok (i) uvedený výše), Pd/C, 5 % (1,7 g) a HOAc (0,75 ml, 13,1 mmol) v EtOH (250 ml) se

99 t · • · • a · « ♦

• ·

999 • ·« · míchá pod atmosférou vodíku 4 hodiny. Směs se zfiltruje přes podložku z rozsivkové zeminy a filtrační koláč se promyje EtOH. Filtrát se odpaří ve vakuu a vytvořená bezbarvá tuhá látka se rozdělí mezi EtOAc a nasycený vodný roztoke hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze se extrahuje EtOAc a spojené organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší (síran sodný) a odpaří ve vakuu k získání 2,3 g (85 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS : (Μ + 1 ) 208 m/z ²H NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 7,16 (dd, 1H) , 6,84 (dd, 1H) ,

6,76 (široký s, 1H), 6,67 (dd, 1H), 5,30 (s, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,65 (s, 3H).

(iii) (R,S)-5-Ph(3-NH(CH₂) ₃C (O) OEt)-2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolan

Směs (R, S) -5-Ph (3-NH₂) -2,2-dimethyl-4-oxo-l, 3-dioxolanu (1,63 g, 7,87 mmol; viz krok (ii) uvedený výše), ethyl-[4-brombutyratu] (3,4 ml, 23,6 mmol) a Et₃N (3,3 ml,

23,6 mmol) v CH₂C1₂ se zahřívá na teplotu zpětného toku přes noc. Přidají se další množství ethyl-[4-brombutyratu] (2,3 ml, 15,7 mmol) a Et₃N (2,2 ml, 15,7 mmol) a směs se zahřívá na teplotu zpětného toku další noc. Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se rozdělí mezi EtOAc a vodu. Vodná fáze se extrahuje EtOAc a spojené organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší (síran sodný) a poté odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí heptan:EtOAc (90:10 až 80:20), k získání 2,1 g (84 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

0' • · • » • >

		• ·	• · ·	• »
	• · · · · ·		4 « * ·	• » · · ·
FAB-MS : (M + 1 ) 322 m/z
XH NMR (400 MHz; CDC13) : δ 7,17	(dd,	IH)	, 6,77	(široký d,
IH) , 6,66 (široký s, IH) , 6,59	(dd,	IH)	, 5,30	(s, IH), 4,12
(q, 2H), 3,16 (t, 2H), 2,40 (t	, 2H),	1,	93 (m,	2H), 1,70 (s,

3H), 1, 64 (s, 3H), 1,24 (t, 2H).

(iv) (R,S)-5-Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-2,2-dimethyl-4oxo-1,3-dioxolan

Roztok (R,S)-5-Ph(3-NH(CH₂) ₃C(O)OEt)-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolanu (2,2 g, 6,85 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) v toluenu (15 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku dvě noci. Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se podrobí bleskové chromatografii, přičemž se eluuje směsí heptan:EtOAc (80:20 až 60:40), k získání 1,4 g (74 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

³H NMR (400 MHz; CDC1₃) : Ó 7,78 (široký s, IH) , 7,60 (široký d, IH) , 7,38 (dd, IH), 7,23 (široký d, IH) , 5,40 (s, IH), 3,85 (m, 2H), 2,59 (t, 2H), 2,14 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 1,65 (s, 3H).

(v) Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R,S)CH(OH)C(0)OH

Směs (R,S)-5-Ph(3-(l-pyrrolidin-2-on))-2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolanu (1,4 g, 5,1 mmol; viz krok (iv) uvedený výše) a 1M NaOH (10 ml) v THF (15 ml) se silně míchá přes noc při teplotě místnosti. THF se odpaří a vodná fáze se promyje jednou CH2CI2 a poté se odpaří ve vakuu. Odparek se vyčistí za použití preparativní RPLC (CH₃CN:O,1M

HOAc

získáni 0,94 g (79 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi.

LC-MS: (M + 1) 236; (Μ - 1) 234 m/z ²H NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 7,64 (široký s, 1H) , 7,59 (široký d, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,28 (široký d, 1H), 5,10 (s, 1H), 3,92 (t, 2H), 2,58 (t, 2H), 2,16 (m, 2H).

(ví) Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(R,S)CH(OH)C(O)OH

Enantiomery Ph(3-(l-pyrrolidin-2-on))-(R,S)CH(OH)C(0)OH (0,94 g, 4,0 mmol; viz krok (v) výše) se rozštěpí preparativní HPLC za použití Chiralpak™ AD jako stacionární fáze a směsi heptan:2-propanol: acetonitril:kyselina mravenčí (160:30:10:1) jako mobilní fáze. Enantiomer, který se eluuje první se odpaří ve vakuu k získání 0,37 g (39 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi, což poskytne 98,6% ee a [oc]_D ²⁵ = -90,9 ⁰ (c = 1,0, MeOH) .

(vii) Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)Aze-Pab(Teoc)

PyBop (365 mg, 0,70 mmol), následovaný DIPEA (0,5 ml, 2,8 mmol) se přidají ke chlazenému (-20 °C) roztoku Ph(3-(l-pyrrolídin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (150 mg, 0,64 mmol; viz krok (ví) uvedený výše) a HAze-Pab(Teoc) (264 mg, 0,70 mmo, viz příklad 3(ví) uvedený výše) v DMF (8 ml). Směs se pomalu, nechá dosáhnout teploty místnosti a míchá se přes noc. DMF se odpaří ve vakuu a odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CH₂Cl₂:MeOH (95:5), k získání 310 mg (82 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi.

• e>

LC-MS: (M + 1) 594; (Μ - 1) 592 m/z ^:H NMR (400 MHz; CDCI3; směs rotamerů): δ 8,09 (široký dd,

1H), 7,66 (široký d, 2H), 7,47	(širo	ký d,	1H), 7,34 (dd,
1H), 7,25 (široký d, 2H), 7,12	(d, 1H), 5,	02 (s, 1H), 4,83
(dd, 1H), 4,43 (d, 2H), 4,25 (t	, 2H)	, 4,17	(m, 1H), 3,82
(m, 3H), 3,65 (m, 1H), 3,10 (m,	1H) ,	2,55	(dd, 2H), 2,50
(m, 1H), 2,38 (m, 1H), 2,13 (m,	2H) ,	1, 10	(t, 2H), 0,05 (s,
9H) .
(viii) Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on)	)-(R)	nebo	-(S)CH(OH)C (0) -

Aze-Pab x HOAc

Směs Ph(3-(l-pyrrolidin-2-on))-(Ř) nebo -(S)CH(OH)C(O)-AzePab(Teoc) (70 mg, 0,12 mmol; viz krok (vii) uvedený výše) a TFA (2,0 ml) v CH2CI2 (2 ml) se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny. Roztok se odpaří ve vakuu a odparek se vyčistí za použití preparativní HPLC (CH₃CN:0,l M NH₄0Ac (gradient: 0 až 50 % CH3CN)). Příslušné frakce se odpaří a výsledný produkt rozpustí ve směsi voda/HOAc a lyofilizuje k získání 52 mg (87 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS : (M+l) 450 m/z (m, 3H),

1H) , 4,80 (m, 1H), 4,07

-2,08 (m, ¹³C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100 MHz): δ 176,0, 172,4, 171,8, 167,0.

CD3OD; směs rotamerů): δ 7,72

7,42-7,20 (m, 2H), 5,22-5,12 (m, (m,

3H)

4,50

3, 90

Příklad 11

Ph(3-(1-Pyrrolidin))-(R)- nebo -(S)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab x 2 TFA (i) (R,S)-5-Ph(3-(1-Pyrrolidin))-2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolan

Směs (R,S)-5-Ph (3-NH₂)-2; 2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolanu (450 mg, 2,17 mmol; viz příklad 10 (ii) uvedený výše), 1,4-dibrombutanu (0,30 ml, 3,26 mmol) a Cs₂CO₃ (2,1 g, 6,5 mmol) v acetonu se zahřívá na teplotu zpětného toku . 3 dny. Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se rozdělí mezi CH₂C1₂ a vodu. Vodná fáze se extrahuje 0Η₂01₂ a spojené organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší (síran sodný) a poté odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí heptan:EtOAc (100:0 až 90:10), k získání 140 mg (25 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS: (M + 1) 413; (Μ - 1) 411 m/z, ^XH NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,23 (dd, 1H) , 6,74 (d, 1H) , 6,61 (široký s, 1H), 6,55 (široký d, 1H), S,35 (s, 1Η), 3,29 (m, 4H), 2,00 (m, 4H), 1,72 (s, 3H), 1,66 (s, 3H).

(ii) Ph(3-(1-Pyrrolidin))-(R,S)CH(OH)C(O)OH x HC1

Směs (R,S)-5-Ph(3-(1-pyrrolidin))-2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolanu (640 mg, 2,45 mmol; viz krok (i) uvedený výše) a 1M NaOH (10 ml) v THF (10 ml) se silně míchá přes noc při teplotě místnosti. THF se odpaří a vodná fáze se

Λ · ·· · · · ♦ · · * • ·· · · «« · * ··· «·* ···· ·· · • t · · · · .·* ·*· · · • * ♦ ··· · * · • · · · · · ·· ·* · · · · · jedenkrát promyje CH₂C1₂ a poté se odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CH₂C1₂ :MeOH:NH₂OH (6:3:1). Produkt se dvakrát lyofilizuje k výměně solí, nmapřed za použití směsi voda/HOAc a poté za použití směsi voda/2M HC1. Tím se získá 0,62 g (98 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS: (M + 1) 222; (Μ - 1) 220 m/z ³H NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 7,40 (m, 1H) , 7,20-7,55 (m, 3H),

5,28 (s, 1H), 3,80 (m, 4H), 2,30 (m, 4H).

(iii) Ph(3-(1-Pyrrolidin))-(R,S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)

PyBop (355 mg, 0,68 mmol) a poté kolidin- (0,4 ml,

3,35 mmol) se přidají k chlazenému (-20 °C) roztoku

Ph(3-(1-pyrrolidin))-(R,S)CH(OH)C(O)OH) (160 mg, 0,62 mmol; viz krok (ii) uvedený výše) a Η-Aze-Pab(Teoc) 2x HC1 (307 mg, 0,68 mmol, viz příklad 3(ví) uvedený výše) v DMF (8 ml). Reakční směs se pomalu nechá dosáhnout teploty místnosti a míchá se přes noc. DMF se odpaří a surový produkt se rozdělí mezi EtOAc a vodu. Vodná fáze se extrahuje EtOAc a organická fáze se vysuší (síran sodný) a odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí ΟΗ₂01₂:ΜβΟΗ (95:5) k získání 50 mg (14 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

LC-MS: (M + 1) 580; (Μ - 1) 578 m/z, ³H NMR (400 MHz; CDC1₃; směs rotamerů): δ 7,82 (m, 2H), 7,46-7,30 (m, 2H) , 7,18-7,08 (m, 1H), 6, 70-6, 45 (m, 3H) , 5,12-5,00 (m, 1H) , 4,75 (m, 1H) , 4,45 (m, 2H) , 4,23 (im, 2H), 4,1-3,85 (m, 2H), 3,22 (m, 4H), 2, 69-2,34 (m, 1H) , 2,25-2,11 (2m, 1H), 1,07 (m, 2H), 0,08 (s, s 9H).

• · • ·

Μ · ·

(iv) Ph(3-(1-Pyrrolidin)) -(R,S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab 2xTFA

Směs Ph (3-(1-pyrrolidin) ) - (R, S) CH (OH.) C (O) -AzePab (Teoc) (100 mg, 0,17 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) a TFA (2,0 ml) v CH2CI2 (2 ml) se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny. Roztok se odpaří vevakuu k získání odparku, který se rozpustí ve vodě a lyofilizuje k získání 70 mg (58 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS: (M + 1) 580 m/z, ^XH NMR (400 MHz; CD3OD; směs rotamerů): δ 7,75 (m, 2H),

7,50 (m, 2H) , 7,15 (m, 1H) , 6,75-6, 50 (m, . 3H) , 5,14, 5,08 (2s, 1H) , 4,76 (m, 1H) , 4,60-4,42 (m, 2H) , 4,28 (m, 1H) ·, 4,11-3,87 (m, 2H), 3,26 (m, 4H), 2,75-2,40 (m, 1H) , 2,26, 2,13 (2m, 1H), 1,89 (m, 4H).

^1JC NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100 MHz): δ 173,8, 173,3, 171,8, 167,0.

Příklad 12

Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S')CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (OMe)

K roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)~(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-AzePab(Teoc) (92 mg,.0,16 mmol; viz příklad 6 (ví) uvedený výše) v THF (6 ml) se přidá D-methylhydroxylamin (78 mg, 0,92 mmol) k získání směsi, která se míchá přes noc při teplotě 60 °C. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a β · · · · · ♦ » · · • ····· ·· » · · · · / 4 »·♦··*·* ?·«·· · Φ Φ · ♦ · *·· výsledná tuhá látka se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje EtOAc. Příslušné frakce se odpaří, čímž se. získá sloučenina pojmenovaná v podzáhlaví (82 mg, 85 %) jako.bílá tuhá látka.

³H NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,0 (bt, 1H) , 7,57 (b, 1H.) , 7,50

(d,	2H) ,	7,33	(d, 2H),	6, 64	(m, 2H),	6, 51	(s,	1H) ,	4,90
(dd,	1H) ,	, 4,82	(s, 1H),	, 4,51	(část AB	spektra	ABX,	2H) ,
4,16	(m,	2H) ,	4,07 (m,	1H) ,	3,97 (s,	3H) ,	3, 65	(m,	1H) ,
2,97	(s,	SH) ,	2,70 (m,	1H) ,	2,40 (m,	1H) ,	0, 99	(m,	2H) ,
0, 03	(s,	12H) .

LC-MS: (M + 1) 618 m/z.

(ii) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O)-Aze-Pab (OMe)

Roztok Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)Aze-Pab(Teoc)(OMe) (78 mg, 0,13 mmol, viz krok (i) uvedený výše) v TFA (3 ml) se míchá při teplotě 0 °Č 2 hodiny.

Roztok se za studená odpaří ve vakuu a výsledná tuhá látka se chromatografuje preparativní HPLC (CH₃CN:0,l M octan amonný (40:60)). Příslušné frakce se částečně odpaří.

Odparek se lyofilizuje (CH₃CN:voda) 3-krát, čímž se získá 40 mg (30 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví. Čistota 99,4 Q,

O ^JH NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 7,59 (d, 2H) , 7,32 (d, 2H), 6,72

(s,	2H) ,	6,66 (m, 1H) , 5,05 (s,.	1H) ,	4,84	(s, 4H),	4,76
(dd,	1H)	, 4,44 (část AB spektra	ABX,	2H) ,	4,30 (m,	1H) ,
4,00	(m,	1H), 3,82 (s, 3H), 2,93	(s,	6H) ,	2,49 (m,	1H) ,
2,39	(m,·	1H) .

¹³C NMR

ΦΦ · · · ·♦ · « φφ · Φ ··· φ φ · · *· · φ φ φ Φ * · · ·· • φ φ · ·· φφφφ · Φ ♦ · · ♦ «· «♦ »· • · φ

(karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100

MHz): δ 172,7, 171,8, 171,7, 158,7.

LC-MS : (M+l) 474 m/z

Příklad 13

Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-Et) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(O-Et)

K roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (40 mg, 0,07 mmol, viz přiklad 6 (vi) uvedený výše) v THF (3 ml) se přidá O-ethylhydroxylamin x HC1 (40 mg, 0,41 mmol) a roztok se míchá při teplotě 60 °C přes noc. Roztok se odpaří a výsledný materiál se vyčistí preparativní HPLC (CH3CN:0,l M octan amonný (60:40)). Příslušné frakce se zčásti odpaří a odparek se extrahuje EtOAc (3 x). Organická vrstva se promyje vodou a odpaří ve vakuu, čímž se získá 16 mg (37 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

H NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,00 (b, 1H) , 7,58 (b, 1H), 7,49

(d, 2H), 7,32 (d, 2H) , 1H), 4,90 (dd, 1H), 4, ABX, 2H), 4,25-4,15 (m 2,97 (s, 6H), 2,69 (m, 0,99 (t. 2H)., 0,05 (s,	6,65 (s, 1H) , 6,63 (s, 1H) , 6,51 82 (s, 1H), 4,50 (část AB spektra , SH), 4,06 (m, 1H), 3,65 (q, 1H), 1H), 2,39 (m, 1H), 1,34 (t, 3H), 9H) .
LC-MS: (M+ 1) 633 m/z.

5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-Et) · · ·

Κ roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(O-Et) (16 mg, 0,03 mmol, viz krok (i) uvedený výše) v methylenchloridu (0,5 ml) se přidá TFA (1 ml) a směs se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny. Výsledná směs se odpaří ve vakuu k získání a tuhého odparku, který se rozpustí ve směsi voda/CH₃CN a lyofilizuje se dvakrát, čímž se získá 14 mg (92 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví. Čistota 94,4 %.

3h	NM	R (4 00 MHz; CD3OD) : δ 8,	73 (bt, 1H), 7,66	(d,	2H) ,
7,	53	(d, 2H), 6,73 (s, 2H),	6,67 (s, 2H),5,07	(s	, 2H),
4,	78	(dd, 1H), 4,51 (část AB	spektra ABX, 2H),	4,	32 (m,
1H	) ,	4,16 (m, 1H), 4,04 (m,	1H), 2,94 (s, 6H),	2,	50 (m,
1H	) ,	2,29 (m, 1H), 1,39 (t,	3H) .

ⁱ³C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100

MHz): δ 172,7, 171,7, 160,6, 152,0.

LC-MS: (M+l) 489 m/z.

Příklad 14

Ph(3-Cl, 5-NM.e₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(O-n-Pr) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(O-n-Pr)

K roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (40 mg, 0,07 mmol; viz příklad 6 (vi) uvedený výše) v THF (5 ml) se přidá O-n-propylhydroxylamin x HC1 (46 mg, 0,41 mmol) a roztok se míchá při teplotě 60 °C přes noc. Roztok se odpaří do sucha a odparek se vyčistí za použiti preparativní HPLC (CH₃CN:0,l M octan amonný (60:40)). Příslušná frakce se částečně odpaří a vodný roztok se extrahuje EtOAc (3 x). Organická vrstva se promyje vodou, vysuší (síran sodný) a odpaří k získání 16 mg (36 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

²H NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,00 (bt, 1H) , 7,58 (bs, 1H) ,

7,48	(d, 2H),	7,32	(d,	2H) ,	6, 65	(s,	1H) ,	6,63 (s, 1H),
6, 51	(s, 1H),	4,89	(dd,	1H) ,	, 4,82	(s,	1H) ,	, 4,50 (část A
spektra ABX,	2H) , z	1,16	(dd,	1H) ,	4,11	(t,	1H), 4,06 (m,
1H) ,	3,65 (q,	1H) ,	2,96	(s,	6H) ,	2, 68	(m,	1H), 2,39 (m,
1H) ,	1,75 (m,	2H) ,	0,98	(t,	SH) ,	0,05	(s,	9H) .

LC-MS : (M+l) 647 m/z.

(ii) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-n-Pr)

TFA (2 ml) se přidá k ledově studenému roztoku

Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(O-n-Pr) (16 mg, 0,02 mmol; viz krok (i) uvedený výše) v methylenchloridu (0,5 ml) a výsledná směs se za studená míchá 2 hodiny. Výsledný roztok se odpaří ve vakuu k získání tuhého odparku, který se rozpustí ve směsi voda/CH₃CN a lyofilizuje se. Produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (EtOAc:MeOH (9:1)). Příslušné frakce se odpaří k získání 14 mg (92 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví. Čistota 98 %.

^TH NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,71 (bt, 1H), 7,65 (d, 2H) ,

7,50 (d, 2H), 6,73 (m, 2H), 6,67 (s, 1H), 5,07 (s, 1H),

4,78 (dd, 1H) , 4,50 (část AB spektra* ABX, 2H) , 4,32 (m, • · • · ··· · · · · · · · • ······· ··· · · • · · · ♦ · · * ···· ·· · · ♦ ♦ · · *

1H), 4,06	(m, 3H),	2, 94	(s,	6H), 2,49 (m, 1H); 2,29 (m,
1H), 1,80	(m, 2H),	1,03	(m,	3H) .
LC-MS: (M	+ 1) 503	m/z.

Přiklad 15

Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-i-Pr) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze

Pab(Teoc)-(O-i-Pr)

O-Isopropylhydroxylamin x HCl (46 mg, 0,41 mmol) se přidá k roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (40 mg, 0,07 mmol; viz příklad 6 (vi) uvedený výše) v THF (3 ml) a výsledná směs se míchá při teplotě 60 °C přes noc. Výsledný roztok se odpaří a surový produkt se vyčistí za použití preparativní HPLC (CH3CN:O,1M octan amonný (60:40)). Příslušné frakce se částečně odpaří a poté extrahují EtOAc (3 x). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší (síran sodný) a odpaří k získání 16 mg (36 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

^:H NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,00 (b, 1H) , 7,57 (s, 1H) , 7,50 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 6,65 (s, 1H) , 6,63 (s, 1H) , 6,5L (s,

1H), 4,90 (dd, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,58-4,40 (m, 3H), 4,17 (m, 3H), 4,07 (m, 1H) , 3,65 (m, 1H) , 2,97 (s, 2H) , 2,69 (m,

1H), 2,39 (m, 1H), 1,31 (d, 6H), 1,00 (m, 2H) , 0,05 (s,

9H) .

LC-MS : (M + 1) 647 m/z.

(ii) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab94 (O-i-Pr)

Ledově studený roztok Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo

-(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc)(O-i-Pr) (16 mg, 0,02 mmol; viz krok (i) uvedený výše) v TFA (1,5 ml) se za studená míchá 2 hodiny. Výsledný roztok se odpaří ve vakuu předtím, než se přidá směs voda/CH₃CN a roztok se lyofilizuje. Surový produkt se vyčistí za použití bleskové chromatografie (EtOAc:MeOH (9:1)). Příslušné frakce se poté odpaří k získání 14 mg (92 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví. Čistota (HPLC) 96 %.

^:H NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,73 (bt, 1H) , 7,66 (d, 2H) ,

7,50	(d,	2H), 6,73 (d, 2H),	6,67 (t, 1H) ,	5,08	(s, 1H),
4,78	(dd,	1H), 4,51 (část AB	spektra ABX,	2H) ,	4,4-4,3 (m,
2H) ,	4,02	(m, 1H), 2,95 (s,	6H) , 2,51 (m,	1H) ,	2,30 (m,
1H) ,	1, 39	(d, 6H) .

LC-MS: (M+l) 503 m/z.

Příklad 16

Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (O-CH₂-CH₂-O-CH3) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(O-CH2-CH2-O-CH3)

Roztok 0-(2-methoxy)ethylhydroxylaminu a HOAc (23,3 μΐ) v THF (2 ml) se přidá k roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)~ - (R) nebo - (S) CH (OH) C (0)-Aze-Pab (Teoc) (40 mg, 0,07 mmol; viz příklad 6 (vi) uvedený výše) v THF (1 ml) a směs se míchá při teplotě 60 °C 3,5 dne. Výsledný roztok se odpaří

···· ·· ·· ·· ·· ··· do sucha a surový produkt se vyčistí za použití preparativní HPLC (CH₃CN:O,1 M octan amonný (60:40)). Příslušné frakce se částečně odpaří a extrahují EtOAc (3 x). Spojené organické vrstvy se promyji vodou, vysuší (síran sodný) a poté odpaří do sucha k získání 20 mg (44 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi.

^XH NMR (400 MHz; CDC1₃) : δ 8,00 (bt. 1H) , 7,71 (b, 1H) ,

7,48 (d, 2H)	, 7,32 (d,	2H) ,	6,65 (s,	1H) , 6,63 (	s, 1H),
6,51 (s, 1H)	, 4,	89 (dd,	1H)	, 4,81 (s,	1H), 4,49	(část AB
spektra ABX,	2H)	, 4,29	(m,	2H), 4,14	(m, 2H), 4,	07 (m, 2H) ,

3,74-3,60 (m, 3H), 3,42 (s, 3H), 2,96 (s, 6H), 2,68 (m,

1H) , 2,39 (m, 1H) , 1,79. (b, 2H) , 0, 97 (m, 1H) , 0,02 (s,

9H) .

LC-MS : (M+l) 663 m/z.

(ií) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-CH2-CH2-OCH3)

TFA (2 ml, 26 mmol) se přidá k ledově studenému roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo - (S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (O-CH2-CH2-O-CH3) (20 mg, 0,03 mmol; z kroku (i) uvedeného výše) v methylenchloridu . (0,5 ml) a výsledná směs se za studená míchá 2 a půl hodiny. Výsledný roztok se odpaří do sucha a surový produkt se vyčistí bleskovou chromatografií (EtOAc:MeOH (9:1)). Příslušné frakce se odpaří k získání odparku, k němuž se přidá směs voda/CH₃CN. Výsledný roztok se lyofilizuje přes noc k získání 13 mg (65 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví. Čistota (HPLC) 96 %.

- 96 • ········ •··· ·· ·· ·· »t ··· ³H NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 8,69 (bt, 1H) , 7,65 (d, 2H) ,

7, 49	(d, 2H),	6,73 (d, 2H) ,	6, 67	(t, 1H),	5,07	(s, 2H),
4,78	(dd, 1H)	, 4,51 (část AB	spektra ABX,	2H) ,	4,32 (m,
1H) ,	4,22 (m,	2H), 4,03. (m,	1H) ,	3,72 (m,	2H) ,	3,41 (s,
3H) ,	2,94 (s,	6H), 2,48 (m,	1H) ,	2,29 (m,	1H) .

¹³C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100 MHz; CD3OD) : δ 172,7, 171,8, 171,7, 159, 3, 152,0.

LC-MS: (M + 1) 519 m/z.

Příklad 17

Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(O-THP) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (O-THP)

Roztok O-(tetrahydropyran-2-yl)-hydroxylaminu (51 mg, 0,44 mmol) a HOAc (25 μΐ) v THF (1 ml) se přidá k roztoku Ph(3-Cl, 5-NMe₂)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (43 mg, 0,07 mmol; viz přiklad 6 (vi) uvedený výše) v THF (2 ml)-a výsledná směs se míchá při teplotě 60 °C 22 hodin a poté při teplotě místnosti přes noc. Výsledný roztok se odpaří a surový produkt se vyčistí preparativní HPLC (CH₃CN:0,l M octan amonný (60:40)). Příslušné frakce se částečně odpaří a vodný odparek extrahuje EtOAc (3 x) . Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší (síran, sodný) a poté odpaří k získání 26 mg (52 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlavi.

³H NMR (400 MHz; CDCI3) : δ 8,00 (bt, 1H) , 7,61 (b, 1H) _r 7,52 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 6,66 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), ··· · · · · ·· • · · · · · ·· ··· · • ··· · · ·· · · · · ···

6, 51	(s, 1H),	5,30 (m,	1H), 4,90	(dd,	1H)	, 4,82 (s, 1H)
4,50	(část AB	spektra	ABX, 2H),	4,17	(m,	2H), 4,07 (m,
3, 95	(m, 1H),	3, 66 (m,	2H) , 2,97	(s,	6H) ,	2,69 (m, 1H),
2,39	(m, 1H),	2,00-1,5	5 (m, 7H),	0, 98	(m,	2H), 0,04 (s,
9H) .
LC-MS	: (M+l)	689 m/z	•
(ii)	Ph (3-C1,	5-NMě2) -	(R) nebo -	(S)CH	(OH) 1	C(0)-Aze-Pab-

(Ο-ΤΗΡ) >

Fluorid na Amberlyst® A-26 (140 mg) se přidá k roztoku Ph(3Cl, 5-NMe2)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc)(O-THP) (34 mg, 0,05 mmol; viz krok (i) uvedený výše) v CH₃CN (3 ml) a-směs nechá stát při teplotě 60 °C přes noc. Po ochlazení se pryskyřice odstraní filtrací a poté promyje mnoha díly CH₃CN a EtOH (95 %) . Spojené organické fáze se odpaří k získání surového produktu, který se vyčistí preparativní HPLC (CH₃CN:0,l M octan amonný (50:50)). Příslušné frakce se odpaří, rozpustí ve směsi. voda/CH₃CN a poté lyofilizují k získání 18 mg (60 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

;H NMR (	400 MHz; CD3D) :	δ 7,	62 (d, 2H	), 7,	32 (d	, 2H)	, 6,
(s,	2H) ,	6,66 (s, 1H) ,	5,15	(m, 1H),	5, 05	(s,	1H) ,	4,ΊΊ
(dd,	1H)	, 4,44 (část AB	spe	ktra ABX,	2H) ,	4,29	(m,	1H) „
3,95	(m,	2H), 3,57 (m,	1H) ,	2,93 (s,	6H) ,	2,48	(m,	1H) ,
2,27	(m,	1H) , 1, 94 (m,	2H) ,	1,82 (m,	1H) ,	1, 75	(m,	1H) ,
1, 61	(m,	3H) .

¹²C NMR (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku; 100 MHz; CD₃OD): δ 172,7, 171,5, 154,7, 152,0.

LC-MS: (Μ + 1) 545 m/z.

Přiklad 18

Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) x

TFA (i) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(OMe)

Směs Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)Aze-Pab(Teoc) (38 mg, 0,06 mmol, viz příklad 5 (vii) uvedený výše) a O-methylhydroxylaminu (62 mg, 0,74 mmol) v THF (3 ml) se zahřívá na teplotu 60 °C 30 hodin, načež- se rozpouštědlo odpaří a reakční směs se vyčistí preparativníHPLC (CH₃CN:O,1M octan amonný 50:50). Příslušná frakce se částečně odpaří a vodný odparek se extrahuje EtOAc (3x).

S-pojené organické fáze se vysuší (síran sodný) a odpaří ve vakuu, čímž se získá 22 mg (50 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

⁴H NMR (600 MHz; CDC1₃)': δ 7,81 (široký, 1H) , 7,55 (široký,

1H), 7,45 (d, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,18 (široký, 1H), 7,09 (široký, 1H) , 4,89 (s, 1H) , 4,86 (dd, 1H) , 4,46 (část A.B spektra ABX, 2H) , 4,11 (m, 2H) , 3-,92 (s, 3H) , 3,67 (široký, 1H), 3,22 (široký, 3H), 2,68 (široký, 1H), 2,41 (m, 1H) ,

1,87 (široký, 2H), 1,71 (m, 4H), 0,95 (m, 2H) , -0,02 (s,

9H) .

(ii) Ph(3-Cl,, 5-NMeAc)-(R) nebo - (S) CH (OH) C (O)-Aze-Pab-(OMe) x TFA

Roztok Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) nebo - (S)CH(OH) C (0) 99 * ♦ · · ·» · * * · '· • · « · · ·· · · · · · • · · · · · ♦ · · · · · · • · ··*··· · ·«·« ·· ♦· ·» 99 999

Aze-Pab(Teoc)(OMe) (22 mg, 0,03 mmol, viz krok (i) uvedený výše) v TFA (3 ml) se udržuje při teplotě místnosti 1 hodinu, načež se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Tuhý odparek se rozpustí ve vodě a roztok se lyofilizuje přes noc, čímž se získá 20 mg (76%) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

²H NMR (400 MHz; D₂O) (komplexní v důsledku rotamerie): δ

8,79 (bt	, 1H), 7	,67	(t,	2H), 7,51	(d, 2H), 7	,46 (d, 2H),
7,17 (s,	ih:	) , 5,	35	(s,	IH), 5,20	(s+m, IH),	4,88 (dd, IH),
4,55 (m,	ih:	4,	40	(m,	IH), 4,11	(m, 2H), 3,	98 (2xs, 3H),
3,38 (s,	1H	) , 3,	19	(2s,	2H), 2,80	(m, 0,5H),	2,60 (m,
0,5H), 2	,28	(m,	2H)	, 1,	88 (s, 2H)	•
13C NMR (	;ioo	MHz,	CE	>30D)	(karbonyl	ové a/nebo	amidinové atomy
uhlíku):	δ	174,0	; 1	73,3	; 172,6; 1	72,5; 163,4	; 163,0.
LC-MS: (	M+l	) 502	m/	z.

Příklad 19

Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) x TFA (i) Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-AzePab (Teoc)(OMe)

O-Methylhydroxylamin x HCl (42 mg, 0,50 mmol) se přidá k roztoku Ph(3-(l-pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg, 0,08 mmol; viz příklad 10 (vii) uvedený výše) v THF (3 ml) a směs se míchá přes noc při teplotě 60 °C. Rozpouštědlo se odpaří a odparek rozdělí mezi vodu a EtOAc. Vodná fáze se extrahuje EtOAc a spojené organické fáze se vysuší (síran sodný) a poté odpaří ve

- 100* · « «»·· ·« · • · 9 · · ♦ « · · · » * ' • ·♦·*«*·· ···· ·· ♦ · 99 ·· ♦·· vakuu k získáni okolo 52 mg (okolo 100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako tuhé látky, která se použije bez dalšího čistění.

LC-MS : (M+l) 624; (Μ - 1) 622 m/z.

(ii) Ph(3-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(0)-AzePab (OMe) x TFA

Směs Ph(3-(l-pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(OMe) (53 mg, 0,08 mmol; viz krok (i) uvedený výše) a TFA (2,0 ml) v CH2CI2 (1 ml) se míchá při teplotě místnosti 4 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří a odparek rozdělí mezi vodu a EtOAc.. Vodná fáze se extrahuje EtOAc a spojené organické fáze se vysuší (síran sodný) a poté odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CH₂C12:MeOH (98:2 až 95:5) k získání 22 mg (44 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS: (M + 1) 480; (Μ - 1) 478 m/z.

NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,76-7,63 (m, 3H), 7,59-7,50. (m, 3H), 7,44-7,20 (m, 2H), 5,20-5,14 (m, 1H), 4,61-4,02 (m, 4H), 3,97-3,87 (m, 5H), 2,74-2,44 (m, 3H), 2,34-2,09 (m, 3H) .

Příklad 20

Ph(3-Cl, 5-pyrrolo)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab (i) (R,S)-5-Ph(3—Cl, 5-pyrrolo)-2,2-dimethyl-4-oxo-l, 3-dioxolan

- 101 • ·· · e · · · · «·· ·· · · · · · · · · • ····· · · ··· · · • ········ ······ ·« «· ·* ···

K roztoku (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NH₂) -2,2-dimethyl-4-oxo-1,3-dioxolanu (6,0 g, 24,8 mmol; viz přiklad 9 (ii) uvedený výše) a oxidu fosforečného (3,5 g, 24,8 mmol) v suchém toluenu (50 ml) se po kapkách přidá 2,5-dimethoxytetrahydrofuran (4,9 g, 37,3 mmol). Reakční směs se zahřívá na teplotu zpětného toku 30 minut a poté se nechá ochladit na teplotu místnosti. Reakční směs se zalije 2N NaOH (10 ml), přenese se do dělicí nálevky a vodná fáze se oddělí a extrahuje toluenem (100 ml). Spojené organická fáze se následně promyjí roztokem chloridu sodného (20 ml), vysuší (síran hořečnatý), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání světle oranžového oleje (5,0 g). Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje 0Η₂01₂ poskytne

2,8 g (39 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako žluté tuhé látky.

³H NMR (300 MHz, CD₃OD) : δ 7,28-7,42 (m, 3H), 7,18 (t, J = 2,1 Hz, 2H) , 6,38 (t, J = 2,1 Hz, 2H) , 5,40 (s, 1H) , 1,72 (d, J = 8,2 Hz, 6H).

(ii) Ph(3-Cl, 5-pyrrolo)-(R,S)CH(OH)C(0)OH

K roztoku (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-pyrrolo)-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolanu (3,1 g, 10,7 mmol; viz krok (i) uvedený výše) v THF (40 ml) při teplotě místnosti se přidá 3N NaOH (36 ml, 107,3 mmol) spolu s tetrabuťylamoniumbromidem (0,35 g, 1,07 mmol). Reakční směs se poté míchá při teplotě místnosti další 2 hodiny. Reakční směs se odpaří ve vakuu k odstranění THF. Zbývající vodná fáze se ochladí na teplotu 0 °C a okyselí se na hodnotu pH 2 pomocí koncentrované HC1 a extrahuje se EtOAc (2 x 150 ml) . Spojené organické fáze s-e promyjí roztokem chloridu

- 102••••••«••«••A • ····♦··· ···· ·· ·* ♦ · ·· ··· sodného, vysuší (síran hořečnatý), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání oranžové pěny. Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCI3:MeOH:koncentrovaný hydroxid amonný (85:15:5), poskytne the amonnou sůl sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky (2,0 g). Následné okyselení pomocí 2N HC1 na hodnotu pH 1, následované extrakcí EtOAc, odpařením ve vakuu a vysušení poskytne 1,8 g (68 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

²H NMR (300 MHz, CD₃OD) : δ 7,52 (s, 1H), 7,46 (s, 1H) , 7,36 (s, 1Η), 7,22 (t, J = 3 Hz, 2H), 6,32 (t, J = 3 Hz, 2Η),

5,4 (s, 1H).

(iii) Ph(3-Cl, 5-pyrrolo)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (a) a Ph.(3-Cl, 5-pyrrolo) - (S) nebo - (R) CH (OAc) C (O) OH (b)

Směs Ph(3-Cl, 5-pyrrolo)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (1,8 g, 7,3 mmol; viz krok (ii) uvedený výše), Lipase PS „Amano (1,0 g), vinylacetat (5,0 ml) a MTBE (5,0 ml) se zahřívají na teplotu 45 °C 24 hodin. Reakční směs se zfiltruje a filtrační koláč se promyje EtOAc (100 ml). Filtrát se odpaří ve vakuu a chromatografuje na křemičitanu, přičemž se eluuje směsí CHCl₃:HOAc (95:5) k získání 710 mg (38 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako bílé tuhé látky a 910 mg (42 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako krémově zbarvené tuhé látky.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):

²H NMR (300 MHz, CD₃OD) : δ 7,54 (s, 1H) , 7,47 (s, 1H) , L,36 (s, 1H), 7,19 (d, J = 3 Hz, 2H), 6,30 (d, J = 3 Hz, 2H>, 5,21 (s, 1H).

- 103 • · · · ··· · · » • ····· · * ··· · · • ······· · ···· · · ·· · · ·· ··· ¹³C NMR (75 MHz, CD₃OD) : δ 175,2, 142,9, 136.1, 124,4, 120,3, 119,9, 117,3, 112,0, 73,2.

Analýza HPLC: 98,3 %, 98,0 % ee.' [a]n³ = -99 (c = 1,0, methanol)

ΑΡΙ-MS: (M + 1) 252 m/z.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (b):

³H NMR (-300 MHz, CD₃OD) : δ 7,52 (s, 1H) , 7:46 (s, 1H) , 7,38 (s, 1H), 7,20 (široký s, 2H), 6,30 (široký s, 2H), 5,22 (s, 1H), 1,98 (s, 3H).

(iv) Ph(3-Ol, 5-pyrrolo)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Směs Ph(3-Cl, 5-pyrrolo)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)OH (285 mg, 1,14 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) , HAze-Pab(Teoc) (470 mg, 1,25 mmol), PyBOP (650 mg, 1,25 mmol) a 2,4,6-kolidinu (0,33 ml, 2,49 mmol) v DMF (14 ml) se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny a poté při teplotě 25 °C 30 minut. Réakčni směs se zalije vodou (50 ml) a extrahuje se EtOAc (3 x 50 ml). Spojené extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu. Blesková chromatografie (2x) na silikagelu, přičemž se eluuje směsí EtOAc, poskytne 180 mg (26 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé tuhé látky.

³H NMR (300 MHz, CD₃OD) : δ 7,74-7,86 (m, 2H) , 7,14-7,58 (m, 7H), 6,28 (široký s, 2H), 5,14-5,28 (m, 2H), 4,76-4,82 (m,

- 104 9 9 · · 99 ·· 99

ΙΗ), 3,92-4,58 (m, 7H), 2,40-2,68 · 9 999· ··· '9 99999 ·· 9·· ·9

9 9999···

9··· 99 99 · 9 9« 999 (m, 2H), 2,10-2,38 (m,

2H), 1,02-1,16 (m, 2H), 0,09 (s, 9H).

APl-MS: (M + 1) 610 m/z.

(v) Ph(3-Cl, 5-pyrrolo)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab

K roztoku Ph(3-Cl, 5-pyrrolo)-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (38 mg, 0,06 mmol; viz krok (iv) uvedený výše) v acetonitrilu se přidá na polymer navázaný ion fluoridu (Amberlyst® A-26) (170 mg) a směs se zahřívá na teplotu 60 °C přes noc, následuje zahřívání na teplotu 70 °C po dobu 4 hodin. Výsledná směs se zfiltruje, polymer se promyje acetonitrilem, ethanolem a THF a roztok se odpaří ve vakuu. Surový produkt se dvakrát vyčistí za použití preparativní HPLC (CH₃CN- : 0,1 M octan amonný, 40:60 nebo CH₃CN : 0,1 M octan amonný, 30:70). Příslušné frakce se lyofilizují (3 χ) , čímž se získá 8 mg (28 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

²H NMR (400 MHz, CD₃OD) : δ 7,77 (m, 2H) , 7,61-7,48 (m, 3H) ,

7,40	(d,	1H) ,	7,26	(m, 2H),	6, 33	(m, 2H), 5,30 (d, 1H)
4, 68-	4,25	(m,	2H) ,	4,09 (m,	1H) ,	2,60 (m, 1H), 2,35 (m
1H) ,	1, 94	(s,	3H) .
LC-MS	: (M	+ 1)	466	m/z.

Příklad 21

Ph(3-Cl, 5-(l-Pyrrolidin-2-on)··) - (R) nebo - (S) CH (OH) C (O)Aze-Pab(O-n-Pr)

- 105 • · · · · · ·· • ·· · · ·· · • · · · · · · • ····· · · · • · · · · · • · · · · ♦ · · · · (i) Ph(3-Cl, 5-(l-Pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)-

K roztoku Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on)) -(R)

0,064 mol; viz v THF (3 ml)

0,38 mmol) a se přidá 0-n-proroztok se zahřívá

Roztok se odpaří ve vakuu a příklad 9 (ví) uvedený výše) pylhydroxylamin xHCl (43 mg, na teplotu 60 °C 4,5 hodiny, výsledný surový materiál se vyčistí bleskovou chromatografií (silikagel, EtOAc:MeOH, 9:1). Příslušné frakce se odpaří, čímž se získá 43 podzáhlaví.

mg (98 %) sloučeniny pojmenované v

NMR (400 MHz; CD₃OD) : δ 7,75 (2s, 1H) , 7,59 (široký,

1H) ,	7, 43	(d,	2H), 7,23	(m,	3H) ,	5, 18	(široký,	1H)	, 4	, 50
4, 30	(m,	3H) ,	4,20-4,05	(m,	5H) ,	3, 99	(t, 3H),	3,8	4 (	m,
2H) ,	2,55	(t,	2H), 2,28	(m,	1H) ,	2,12.	(m, 2H)	, i,	71	(m,
2H) ,	0, 99	(m,	4H), 0,02	(s,	9H) .
(íi)	Ph (3	-ci,	5- (1-Pyrrolid:	ín-2-	on))-(	R) nebo	-(S)	CH (	OH)

C(0)-Aze-Pab(O-n-Pr)

K ledově studenému roztoku Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R) nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-n-Pr)(Teoc) (43 mg, 0,063 mmol; z kroku (i) uvedeného výše) v methylenchloridu (0,5 ml) se přidá TFA (2,5 ml) a roztok se míchá při teplotě 0 °C 100 minut, načež se roztok odpaří ve vakuu a výsledný surový materiál se vyčistí za použití preparativní HPLC (CH₃CN:0,lM octan amonný, 30:70). Příslušné frakce se shromáždí a lyofilizují, čímž se získá 23 mg (68 %). Čistota 99,9 %.

LC-MS (M + 1) 542 m/z.

- 106¹H NMR (400 MHz; CD₃OD) (komplexní v důsledku rotamerie): δ

7,75	(široký,	1H) ,	7,57	(m, 2,5H)	, 7,49 (s	, 0,5H), 7,36-
7,22	(m, 3H),	5,16	(s,	1H), 4,78	(dd, 1H),	4,48-4,32 (m,
3H) ,	4,17 (m,	1H) ,	3,97	(m, 2H),	3,86 (m,	2H), 2,55 (t,
3H) ,	2,52 (m,	0,5H)	, 2,	28 (m, 0,5	H), 2,13	(m, 3H) , 1,71
(m,	2H) , 0,98	(m, 2	H) .

Příklad 22

Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R)- nebo - (S) CH (OH) C (O) Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R)- nebo (S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(OMe)

Ke směsi Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R)nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (80 mg, 0,13 mmol; viz příklad 9 (ví) uvedený výše) v THF (6 ml) se přidá O-methylhydroxylamin x HCI (64 mg, 0,77 mmol). Směs se míchá při teplotě 60 °C 5 hodin a poté se odpaří. Odparek se chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí ethylacetát:methanol (9:1) k získání 75 mg surového produktu. Surový produkt se dále čistí za použití preparativní HPLC (CH₃CN:0,l M octan amonný, 60:40).

Příslušné frakce se odpaří. CH₃CN se odpaří ve vakuu. Vodná fáze se extrahuje EtOAc (3 x). Spojené ethylacetatové fáze se promyjí roztokem chloridu sodného, poté se vysuší (síran sodný) a odpaří, čímž se získá 65,8 mg· (78 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví.

²H NMR (400 MHz; CDC1₃) δ 7,97-7,90 (m, 1H) , 7,60-7,55 (m,

2H), 7,46 (d, 2H), 7,29 (d, 2H), 7,13 (s,lH), 4,95-4,81 (m,

			- 107-
				• ♦	• · · ·	• ·	• ·	•
				•	• · · ·	• ·	•	• ·
					. · · · · · ·	• ·	« ·	• ·
				•	• · ·	• ·	•	• ·
				• · · »	• · · ·	• ·	• ·	• ♦ ·
2H), 4,55-4,30	(m,	3H) ,	4,18-4,09	(m,	3H), 3,	95	(S,	3H) ,
3,87-3,75 (m,	3H) ,	2, 69	-2,55 (m,	3H),	2,45-2,	34	(m,	1H) ,
2,20-2,10 (m,	2H) ,	2,00	(široký,	1H) ,	1,01-0,	92	(m,	2H) ,
0, 00 (s, 9H) .

(ii) Ph(3-Cl,

5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R) - nebo -(S)CH(OH)-

C-(0)-Aze-Pab(OMe)

K ledově studenému roztoku Ph(3-Cl, 5-(l-pyrrolidin-2-on))-(R)- nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc)(OMe) (55,9 mg, 0,08 mmol; z kroku (i) uvedeného výše) v methylenchloridu (0,5 ml) se přidá TFA (3,0 ml).- Roztok se míchá při teplotě 0 °C 130 minut, načež se roztok odpaří ve vakuu a výsledný surový materiál se vyčistí za použití preparativní HPLC (CH₃CN: 0,lM octan amonný, 30:70). Příslušné frakce se shromáždí a lyofilizují (2 x), čímž se získá 38 mg (87 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví.

LC-MS (M + 1) 514 m/z.

^TH NMR (400 MHz; CD₃OD) δ 7,75 (s, 1H) , 7,62-7,47 (m, 3H) , 7,36-7,21 (m, 3H), 5,19-5,10 (m, 1H), 4, 48-3, 93 (m, 4H) , 3,89-3,79 (m, 5H), 2,72-2,45 (m, 3H), 2,33-2,06 (m, 3H) .

Příklad 23

Ph(3-Cl, 5-NMe(3-methylbutanoyl))-(R)- nebo - (S) CH (OH) C (O) Aze-Pab(OMe) (i) (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NHMe)-2,2-dimethyl-4-oxo-l, 3-dioxolan

Směs (R, S)-5-Ph (3-C1, 5-NH₂)-2,2-dimethyl-4-oxo- 108• · · · · · • · · · · · • · · · · · · • · · · · · • · · · · * mmol; viz příklad 9 (ii) (0,81 ml 37% (hmotnostně) • · ·· • · · · • · · • ·· · • · • · · · ··

-1,3-dioxolanu (3,0 g, 12,4 uvedený výše), formaldehydu roztoku ve vodě),

9,9 mmol) a oxidu platiničitého (330 mg) v EtOAc (100 ml) se míchá pod atmosférou vodíku 5 hodin při teplotě 25 °C. Směs se zfiltruje přes podložku z rozsiv.kové zeminy a filtrační koláč se promyje EtOAc (200 ml).

Organické fáze se odpaří ve vakuu a bleskově chromatografují na silikagelu, přičemž se eluuje směsí EtOAc:Hex (1:4) k získání 1,63 g (52 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako žlutého oleje.

^:H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,75 (s, 1H) , 6,54 (s, 2H) , 5,25 (s, 1H), 3,90 (široký s, 1H), 2,80 (s, 3H), 1,68 (s,’3H), 1, 64 (s, 3H) .

(ii) (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NMe(3-methylbutanoyl))-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolan

K roztoku (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NHMe)-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolanu (945 mg, 3,70 mmol; viz krok (i) uvedený výše) a triethylaminu (560 mg, 5,54 mmol) v acetonu (20 ml) při teplotě 0 °C se po kapkách přidá isovaleryLchlorid (623 mg, 5,17 mmol). Směs se míchá 0,5 hodiny a rozdělí se mezi EtOAc (3 x 30 ml) a vodu (30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodným roztokem hydrogen— uhličitanu sodného (30 ml), vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání 1,35 g (>100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako žlutého oleje, který se použije přímo bez čištění.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,50 (s, 1H) , 7,20 (s, 2H) , 5_X38 (s, 1H), 3,28 (s, 3H), 1,90-2,22 (m, 3H), 1,70 (s, 3H)_r

1,68 (s, 3H), 0,70-0,92 (m, 6H).

- 109- (iii) Ph(3-Cl, 5-NMe(3-methylbutanoyl))-(R,S)CH(OH)C(O)OH

Směs (R,S)-5-Ph(3-C1, S-hTMe(3-methylbutanoyl))-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3-dioxolanu (1,35 g, 3,97 mmol; viz krok (ii) uvedený výše) a NaOH (1,60 g, 39,7 mmol) v MeOH (20 ml) se míchá 1 hodinu při teplotě 25 °C. Směs se odpaří ve vakuu a odparek se naředí vodou (30 ml), okyselí 2N HC1 (20 ml) a extrahuje se EtOAc (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání 1,0 g (100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví žlutého oleje, který se použije přímo bez čištění.

NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,55 (s, IH) , 7,34 (s, 2H), 5,21 (s, IH), 3,23 (s, 3H), 1,90-2,10 (m, 3H), 0,70-0,92 (m, 6H) .

(v) Ph(3-Cl, 5-NMe(3-methylbutanoyl))-(R)- nebo -(S)CH-(OH)C(O)OH (a) a Ph(3-Cl, 5-NMe(3-methylbutanoyl))-(S)nebo -(R)-CH(OAc)C(O)OH (b)

Směs Ph(3-Cl, 5-NMe(3-methylbutanoyl))-(R,S)CH(OH)C(O)OH (1,0 g, 3,34 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) a Lipase PS Amano (510 mg) ve vinylacetatu (25 ml) a MTBE (25 ml) se zahřívá na teplotu 55 °C 14 hodin. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrační koláč se promyje MeOH (200 ml). Filtrát se odpaří ve vakuu a chromatografuje se na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHC1₃: MeOH:koncentrovaný NH₄OH (6,5:3,0:0,5) k získání 285 mg amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako křehké pěny a 370 mg (32 %) amonné soli sloučeniny

- 110 ··»··· *· »· · pojmenované v podzáhlaví (b) jako bílé pěny. Amonná sůl sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) se vyjme EtOAc (25 ml) a neutralizuje 2M HCl v Et₂O (0,60 ml). Přidá se voda (25 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje EtOAc (2 2x5 ml) a organické extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání 230 mg (23 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako křehké bílé pěny.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,55 (s, 1H), 7,34 (s, 1H) , 7,30 (s, 1H), 5,21 (s, 1H), 3,23 (s, 3H), 1,90-2,10 (m, 3H), 0,70-0,92 (m, 6H).

¹³C NMR (75 MHz, CD₃OD) δ 175,4, 175,0, 146, 6, 145,2, 136,2,

128,1,	127,4,	125,6,	73,6, 44,0, 37,7, 27,4, 22,8
Analýza	HPLC:	96,0 %	, > 99 % ee.
[aL·25 =	-85,1	° (c =	0,5, MeOH)..
API-MS	(M + 1)	= 300	m/z.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (b):

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,55 (s, 1H) , 7,34 (s, 1H) , 7,30 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 3,23 (s, 3H), 2,11 (s, 3H) , 1,90-

2,10 (m, 3H), 0,70-0,92 (m, 6H).

(v) Ph(3-Cl, 5-NMe (3-methylbutanoyl) ) - (R) - nebo -(S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)

- 111 • · • · · ··· · * · · · · • ··»·« «· · · w · · • ·····♦♦· •··· ·· ·· ·· ·· *·

Ke směsi Ph(3-Cl, 5-NMe(3-methyibutanoyl))-(R)nebo -(S)-CH(OH)C(O)OH (119 mg, 0,40 mmol; viz krok (iv) uvedený výše) a H-Aze-Pab(OMe) 2 x HC1 (146 mg, 0,44 mmol; viz příklad 2(iv) uvedený výše) v DMF (5 ml) se přidá PyBOP kolidin (168 mg, 1,39 mmol). Roztok teplotě 0 °C pod atmosférou dusíku.

(227 mg, 0,44 mmol) a se míchá 3 hodiny při

Směs se rozdělí nmezi

EtOAc (3 x 30 ml) a vodu (30 ml), vysuší (síran sodný), zfiltruje a odpaří ve vakuu. Blesková eluuje směsí chromatografie na silikagelu, přičemž se CHCl₃:MeOH (15:1), poskytne 125 mg (58 %) pojmenované v záhlaví jako křehké bílé pěny.

^:H NMR (300 MHz, CD₃OD, směs rotamerů) sloučeniny

7,42-7,54 (m,

1H) ,

3H) ,

3,90-4,20 (m,

3,22 (m, (m, 2H), 0,80-0,94 (m,

ΆΡΙ-MS (M + 1) = 545 m/z.

Příklad 24

Ph(3-Cl, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl))-(R)- nebo -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) (i) (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl))-2,2-dxmethyl-4-oxo-l,3-dioxolan

K roztoku (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NHMe)-2,2-dimethyl-4-oxo-l,3—dioxolanu (945 mg, 3,70 mmol; viz příklad 23 (i) uvedený výše) a triethylaminu (635 mg, 5,86 mmol) v acetonu (20 ml) při teplotě 0 °C se po kapkách přidá cyklopentankarbonylchlorid (776 mg, 5,86 mmol). Směs se míchá 1 hodinu

- 112·* · * · · ·» · ♦ * • ·· · « ·· * ···« ··· '·»» · ♦ *

C · · · η · · · · · 4 · • · · · ♦ · Λ · · • 1 · · · · 6 · ··. ί · ··?

a rozdělí se mezi EtOAc (3 x 30 ml) a vodu (30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml), vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání 1,58 g (>100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako žlutého oleje, který se použije přímo bez čištění.

^bH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,50 (s, 1H), 7,20 (s, 2H), 5,38 (s, 1H), 3,28 (s, 3H), 2,50-2,60 (m, 1H), 1,70 (s, 3H),

1,68 (s, 3H), 1,40-1,90 (m, 8H).

(ii) Ph(3-Cl, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl))-(R,S)CH(OH) C(0)OH

Směs (R,S)-5-Ph(3-C1, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl )) -2, 2-dimethyl-4-oxo-l, 3-dioxolanu (1,58 g, 5,07 mmcl; viz krok (i) uvedený výše) a NaOH (2,03 g, 50,7 mmol) v MeOH (25 ml) se míchá 1 hodinu při teplotě 25 °C. Směs se odpaří ve vakuu, naředí vodou (30 ml) a okyselí 2N HC1 (20 ml). Vodná vrstva se extrahuje EtOAc (3 x 50 ml), spojené organické extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří ve vakuu k získání 1,17 g (100 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví jako bílé pěny, která se použije přímo bez čištění.

NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,55 (s, 1H) , 7,32 (s, 2H) , 5,20 (s, 1H), 3,20 (s, 3H), 2,50-2,62 (m, 1H), 1,40-1,80 (m, 8H) (ii) Ph(3-Cl, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl))-(R)- nebo -(S) CH(OH)C(0)OH (a) a Ph(3-Cl, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl) )-(S)~ nebo -(R)CH(OAc)C(O)OH (b)

Směs Ph(3-Cl, 5-NMe(cyclopentylkarbonyl)) (R, S) ··· ♦ · · · · · ·

V ····· ·· A · · · * • · ···· · · · f M ·< t ·· ·· '* · ·»·

CH(OH)C(O)OH (1,17 g, 3,75 mmol; viz krok (ii) uvedený výše) a Lipase PS Amano (600 mg) ve vinylacetatu (25 ml) a MTBE (25 ml) se zahřívá na teplotu 55 °C 14 hodin. Reakční směs se zfiltruje přes rozsivkovou zeminu a filtrační koláč se promyje MeOH (100 ml). Filtrát se odpaří ve vakuu a chromatografuje na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCI3:MeOH: koncentrovaný NH4OH (6,5:3,0:0,5) k získání 336 mg amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako křehké pěny a 557 mg (50 %) amonné soli sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (b) jako bílé pěny. /Amonná sůl sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) se vyjme EtOAc (25 ml) a neutralizuje 2M HC1 v Et₂O (0,70 ml). Přidá se voda (25 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje EtOAc (2 2x5 ml) a organické extrakty se vysuší (síran sodný), zfiltrují a odpaří k získání 290 mg (29 %) sloučeniny pojmenované v podzáhlaví (a) jako křehké bílé pěny.

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (a):

³H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,55 (s, 1H) , 7,32 (s, 2H) , 5,20 (s, 1H), 3,20 (s, 3H), 2,50-2,62 (m, 1H), 1,40-1,80 (m, 8H) .

¹³C NMR (75 MHz, CD₃OD) δ 178,8, 175,1, 146, 5, 144, 9, 136,2, 128,2, 127,5, 125,7, 73,0, 43,4, 38,0, 32,2, 27,3.

Analýza HPLC: 91,9 % , >99 % ee.

[a] _D ²⁵ = -77,9° (c = 1,0, MeOH) .

CI-MS (M+l) = 312 m/z.

- 114• · · · · · * • ·· · < · · · • · · * · · · • * »« ♦ · · · · • · · * · · · ·· · 9 · · 9 9 9

Pro sloučeninu pojmenovanou v podzáhlaví (b):

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7,55 (s, 1H) , 7,40 (s, 1H) , 7,34 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 3,20 (s, 3H), 2,50-2,62 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 1, 40-1,80 (m, 8H) .

(v) Ph(3-Cl, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl))-(R)- nebo (S)CH-(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)

Ke směsi Ph(3-Cl, 5-NMe(cyklopentylkarbonyl )) (R, S ) CH (OH) C (O) OH (120 mg, 0,39 mmol; viz krok (iii) uvedený výše) a HAze-Pab(OMe) 2 x HC1 (142 mg, 0,42 mmol; viz příklad 2(iv) uvedený výše) v DMF (5 ml) se přidá PyBOP (220 mg, 0,42 mmol) a kolidin (161 mg, 1,35 mmol). Roztok se míchá 6 hodin při teplotě 0 °C pod atmosférou dusíku.

Směs se rozdělí mezi EtOAc (3 x 30 ml) a vodu (30 ml), vysuší (síran sodný), zfíltruje a odpaří ve vakuu. Blesková chromatografie na silikagelu, přičemž se eluuje směsí CHCl₃:MeOH (15:1), následovaná chromatografií směsí EtOAc:EtOH (20:1), poskytne 85 mg (40 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako křehké bílé pěny.

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD, směs rotamerů) δ 7,60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,42-7,54 (m, 1H), 7,20-7,50 (m, 4H), 5,20 a 5,14 (s, 1H) , 4,724,81 (m, 1H), 4,30-4,48 (m, 3H), 3,90-4,20 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,22 (s, 3H), 2,46-2,72 (m, 2H), 2,102,36 (m, 1H), 1,40-1,80 (m, 8H).

ΑΡΙ-MS (M+l) = 556 m/z.

Příklad 25

Sloučeniny pojmenované v záhlaví příkladů 1, 3

- 115 • ·· · • e ·· • · · · · ·· • · • · · · · · až po zkoušení v testu A uvedeném, výše vykázaly hodnotu IC₅₀ TT menši než 0,5 μΜ.

Příklad 26

Sloučeniny pojmenované v záhlaví příkladů 2, 12,

13, 15, 18, 19 a 21 po zkoušení v testu E uvedeném výše vykázaly orální a/nebo parenterální biologickou dostupnost u krys jako odpovídající aktivní inhibitor (volný amidin).

Příklad 27

Sloučeniny pojmenované v záhlaví příkladů 2, 12 až 19 a 21 po zkoušení v testu G uvedeném výše vykázaly tvorbu odpovídajícího aktivního inhibitoru (volný amidin).

Zkratky

Ac = acyl

AcOH = kyselina octová

API = ionizace při atmosférickém tlaku (ve vztahu k MS)

Aze = azetidin-2-karboxylat

AzeOH = kyselina azetidin-2-karboxylová

Bzl = benzyl

Cl = chemická ionizace (ve vztahu k MS)

DIPEA = diisopropylethylamin

- 116·· · 0 ·» ·♦ ·♦ · · · · 0*0*·<·· • 0 · · · · ·· · ⁴ • 0 0 0 0 0 0 0 ··· 1 * • 0 0 0000*·

0 0 0 «0 · · · · · * ♦

DMAP = Ν,N-dimethylaminopyridin

DMF = dimethylformamid

DMSO = dimethylsulfoxid

EDC = 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid

Et = ethyl ether = diethylether

EtOAc = ethylacetát

EtOH = ethanol

HATU = 0-(azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorfosfát

HBTU = [N,N,N',N'-tetramethyl-0-(benzotríazol-l-yl)uroniumhexafluorfosfát]

HCI = kyselina chlorovodíková

Hex = hexany

HOAc = kyselina octová

HPLC - kapalinová chromatografie s vysokým rozlišením

LC = kapalinová chromatografie

Me = methyl

• · • r

MeOH = methanol

MS = hmotová spektrometrie

Pab = para-amidinobenzylamino

H-Pab = para-amidinobenzylamin

PyBOP = (benzotriazol-lyl)tripyrrolidinofosfonium

RPLC = preparativní vysokoúčinná kapalinová chromatografie s reverzní fází

TBTU = [N,N,N',N'-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uronium tetrafluorborat]

TEA = triethylamin

Teoc = 2-(trimethylsilyl)ethoxykarbonyl

TFA = kyselina trifluoroctová

THF = tetrahydrofuran

THP = tetrahydropyranyl

TLC = chromatografie na tenké vrstvě

TMSCN = trimethylsilylkyanid

Z = benzyloxykarbonyl

Předpony n, s, i a terč, mají své obvyklé významy: normální, sekundární, iso a terciární.

Claims (27)

1. Sloučenina obecného vzorce I

   O kterém nh₂

   R¹ představuje substituent N(R⁵)R⁶ nebo S(O)_mR^7,

   R² a R² nezávisle představují případný substituent zvolený z atomu halogenu, alkylové skupiny s 1 až

   4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku (kteréžto posledně uvedené 2 skupiny jsou případně substituovány atomem halogenu,

   Y představuje alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, případně substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, methylenem, =0 nebo hydroxyskupinou;

   R* představuje atom vodíku, OH, 0R^8a, C(O)OR^8b nebo

   R^8c,

   R⁵ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (případně substituovanou atomem halogenu) nebo, dohromady s R⁶ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ napojeny, představuje 3- až 7-členný

   11P·- ·· ·· ·« «» » ♦ ·♦ · Ť * · · · ··· • · * ···» · « · • ·«··· · · ··· « · • · · * f> * · » · ···· «· ·· ·· · · ··· kruh obsahující atom dusíku, kterýžto kruh případně zahrnuje atom kyslíku a/nebo je případně substituován skupinou =0;

   R° představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (případně substituovanou atomem halogenu) , C(O)R⁹ nebo, dohromady s R⁵ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ napojeny, představuje a 3- až 7-členný kruh obsahující atom dusíku, kterýžto kruh případně zahrnuje atom kyslíku a/nebo je případně substituován skupinou =0, nebo skupina N(R⁵)R⁶ představuje strukturní fragment Ia,

   Ia

   R^oa představuje jeden nebo více případných substituentů zvolených z atomu halogenu, alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku a alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku (kteréžto posledně uvedené dvě skupiny jsou případně substituovány atomem halogenu);

   X představuje CH nebo N;

   m představuje 0, 1 nebo 2;

   R' představuje atom vodíku, NH₂ nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

   R'“ a R nezávisle představují alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku·, alkylfenyl s 1 až 32 atomy uhlíku v alkylové části nebo aryl se 6 až 10 atomy uhlíku, nebp R^8a představuje C(R^10a) (R^10b) 0C (0) R¹¹, r^8c

   R^10a a

   Rⁿ

   R¹²

   R⁹

   Het¹ • ···«· · · · « * * · • β ·♦···· · ·«·« ·« ·· ·· · * ···

   C(R^10a)-(R^10b)N(H)C(O)OR¹² nebo C (R^10a) (R^10b) OC (O) N(H)R¹²;

   představuje C (R^10a) (R^10b) OC (O) R¹¹, C (R^10a) (R^10b) N (H) C(O)OR¹² nebo C(R^10a) (R^10b) OC (O) N (H) R¹²;

   R^10b nezávisle představuji, při každém výskytu, atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 a z 4 atomy uhlíku, představuje, při každém výskytu, aryl se 6 až 10 atomy uhlíku, OR¹² nebo alkylovou skupinu s 1 až 7 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO₂H a arylu se 6 až 10 atomy uhlíku);

   představuje, při každém výskytu, aryl”se 6 'až 10 atomy uhlíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto posledně uvedená skupina je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO₂H a arylu se 6 až 10 atomy uhlíku) představuje alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, Het¹, aryl se 6 až 10 atomy uhlíku nebo alkylovou skupinu substituovanou arylem se 6 až 10 atomy uhlíku; a představuje 4- až 12-členný heterocyklický kruh, který obsahuje jeden nebo více heteroatomů zvolených z atomu kyslíku, dusíku a/nebo síry a kterýžto kruh může být zcela nasycený, částečně nasycený nebo aromatický a/nebo případně monocyklický, bicyklický a/nebo kondenzovaný na • · • · benzenové jádro,

   121 - • * 9 9 • « · ·

   9 9 9 • · 9 9 • ·

   9 · · · ♦ · kde každá arylová/fenylová skupina a skupina Het¹ uvedená výše je případně substituována jedním nebo více atomy halogenu, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a/nebo alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku (kteréžto posledně jmenované dvě skupiny jsou samy o sobě případně substituovány jedním nebo více atomy halogenu) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, za předpokladu, že

   a) když m představuje 1 nebo 2, pak R⁷ nepředstavuje atom vodíku, a

   b) když m představuje 0, pak R⁷ nepředstavuje NH₂.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1, ve které když R^{4 5} a R⁶ dohromady s atomem dusíku, na nějž jsou připojeny, představují
3. 3- až 7-členný kruh substituovaný skupinou =0, kterýžto kruh je substituovaný na atomu uhlíku, který je vzhledem k atomu dusíku v poloze a.

   3. Sloučenina podle nároku 1 nebo nároku 2, ve které R², pokud je přítomen, představuje lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinu s 1 až 4 atomyuhlíku (kteréžto posledně dvě uvedené skupiny jsou případně substituovány atomem halogenu) nebo atom halogenu.
4. 4. Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích nároků, ve které R³ buď není přítomen nebo, pokud je přítomen, představuje lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo atom halogenu.

   - 122• · • · • Λ
5. 5. Sloučenina podle nároku 4, ve které R³, pokud je pří tomen, představuje methylovou skupinu nebo atom chloru.
6. 6. Sloučenina podle nároku 4 nebo nároku 5, ve které substituent (pokud je přítomen) je v poloze 2 vzhledem ke skupině -CH₂-, na niž je fenylový kruh také připojen.
7. 7. Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích nároků, ve které R¹ představuje N(R⁵)R⁶.
8. 8. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3 až 7, ve které R⁵ představuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo, spolu s R⁶ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představují

   3- až 7-členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0.
9. 9. Sloučenina podle nároku 8, ve které R⁵ představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo, spolu s R⁶ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představuje

   5- nebo β-členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou -0.
10. 10. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3 až 9, ve které R⁶ představuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, C(0)-alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části nebo, spolu s R⁵ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představuje 4- až 6-členný kruh obsahující atom dusíku., případně substituovaný skupinou =0.
11. 11. Sloučenina podle nároku 10, ve které R⁶ představuje methyl, C(0)-alkylovou skupinu s 1 až . 6 atomy uhlíku

    - 123 • · ·· ·· · · « · * · ··«· · ·· · · · · · · • ····· · « · · a • · · · · · « • · ·· · · * · »· v alkylové části nebo, spolu s R⁵ a atomem dusíku, na nějž jsou R⁵ a R⁶ připojeny, představuje 5- nebo β-členný kruh obsahující atom dusíku, případně substituovaný skupinou =0.
12. 12. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 nebo 3 až 6, ve které. R⁷ představuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.
13. 13. Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích nároků, ve které R¹ je připojen na fenylový kruh v poloze 3 vzhledem ke skupině -CH(OH)-, na niž je fenylový kruh rovněž připojen.
14. 14. Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích nároků, ve které R² je připojen na fenylový kruh v poloze 5 vzhledem ke-skupině -CH(OH)-, na niž je fenylový kruh rovněž připojen.
15. 15. Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích nároků, ve které R⁴ když ' představuje 0R^8a, pak R^8a představuje lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cyklickou alkylovou skupinu se 4 nebo 5 atomy uhlíku (kteréžto posledně uvedené dvě skupiny jsou případně přerušeny atomem kyslíku), nebo fenyl nebo alkylfenylovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku v alkylové části (kteréžto poslední dvě uvedené skupiny jsou případně substituovány podle nároku 1), nebo R^8a představuje CH2OC (O) R¹¹, kde R¹¹ představuje fenyl, lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto poslední uvedená skupina je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO₂H a fenylu) , nebo OR¹² (kde R¹² předsta.vuje fenyl nebo lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (kterážto posLedni

    - 12|.• · · · ·« uvedená skupina'je případně substituována substituentem zvoleným z OH, CO₂H a fenylu)).
16. 16Sloučenina podle kteréhokoli z předchozích nároků 1 až 14, ve které když R⁴ představuje C(O)OR^8b, pak R^8b představuje lineární nebo rozvětvenou alkylfenylovou skupinu s 1 nebo 2 atomy uhlíku v alkylové části nebo fenyl (kteréžto poslední dvě uvedené skupiny jsou substituovány podle nároku 1) . .
17. 17. Sloučenina obecného vzorce I podle kteréhokoli z předchozích nároků, ve které fragment je v S konfiguraci.
18. 18. Sloučenina obecného vzorce I podle kteréhokoli z předchozích nároků, ve které fragment q je v R konfiguraci.

    HO

    R¹
19. 19. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až

    18, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, ve směsi s farmaceuticky přijatelnou pomocnou látkou, ředidlem nebo nosičem.

    - 125·· · · · ♦ · · · · · • · · · · «· · · ··· • ····· ·· «.·· · · • · · · · · ·· · • · · · · · · · · · · · · · ·
20. 20. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 18, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití jako léčiva.
21. 21. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 18, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použiti při léčení stavu, kde je vyžadována inhibice thrombinu.
22. 22. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 18, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití při léčení trombózy.
23. 23. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 18, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, pro použití jako antikoagulancia.
24. 24. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 18, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, jako aktivní složka pro výrobu léčiva pro léčeni stavu, kde je vyžadována inhibice thrombinu.
25. 25. Použití podle nároku 24, kde stavem je trombóza.
26. 26. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 18, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, jako aktivní složky pro výrobu antikoagulancia.
27. 27. Způsob léčení stavu, při kterém je žádoucí inhibice thrombinu, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 18, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, osobě trpící takovým stavem nebo na takový stav náchylné.