CN1961894B

CN1961894B - 一种新的复方药物组合物及其制备方法和用途

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Publication number: CN1961894B
Application number: CN2005100450678A
Authority: CN
Inventors: 黄振华
Original assignee: Shandong Xuanzhu Pharma Co Ltd
Current assignee: Haian Su Fu Technology Transfer Center Co ltd
Priority date: 2005-11-10
Filing date: 2005-11-10
Publication date: 2012-03-21
Anticipated expiration: 2025-11-10
Also published as: CN1961894A

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种新的复方药物组合物及其制备方法和用途，主要由虫草菌丝体50～2000份或其提取物0.2～40份、苦参素10～500份制成，还可以加入黄芪10～5000份或以多糖为主要有效成分的提取物黄芪多糖0.1～100份或以皂苷为主要有效成分的提取物黄芪总皂苷0.1～100份；该药物组合物可以以原药材或提取物投料制成各种药学上可接受的剂型，优选注射剂和口服制剂；具有抗肿瘤、抗肝损害、解毒、抗菌和增强机体免疫力等作用。

Description

一种新的复方药物组合物及其制备方法和用途

【技术领域】

本发明属于医药技术领域，涉及一种由虫草菌丝体或其提取物、苦参素制成的药物组合物，或者由虫草菌丝体或其提取物、苦参素和黄芪或其提取物制成的药物组合物，及其制备方法和用途。

【背景技术】

癌症是一类严重威胁人类生命和健康的疾病。据统计数据显示，我国每年新发现的癌症病人约100万左右，在全球每年夺去大约600万人生命，并把1000万人置于死亡边缘，随着人类生存环境的日益恶化，癌症的发生率呈逐年上升趋势。世界卫生组织预测21世纪癌症将成为人类的“第一杀手”。目前现代医学对癌症的治疗主要是手术治疗配合放、化疗，手术虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝癌细胞的再生与繁殖；放、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝肾、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以进一步治疗。而中医治疗癌症有悠久的历史，形成了自己独特的理论体系和治疗法则。近年来经过广大医疗工作者的工作已证实中医药治疗癌症具有突出的作用，特别是对癌症手术后的康复以及对放化疗的增效减毒方面发挥了重要的作用。

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.寄生在蝙蝠娥科昆虫上的子座及幼虫尸体的复合体。性甘，平。归肺、肾经。具有补肺益肾，止血，化痰之功效。用于久咳虚喘，劳嗽呵血，阳痿遗精，腰膝酸痛。是一种名贵的中药材，近年来报道其具有调节免疫、抗肿瘤、保肝、护肾、降低血糖等多种药理作用。含有18种氨基酸、甘露醇、多种维生素和其它多种人体必需的营养物质，其主要活性成分为多糖，多糖是由甘露糖、虫草素、腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、岩藻糖组成的多聚糖。由于生长地理的特殊要求以及严格的寄生性，造成冬虫夏草资源极其稀少，加之采收的不易使得野生冬虫夏草资源本来就十分缺乏。再加上近几年无序的滥采滥挖使虫草资源面临崩溃。近年来，国内外专家在通过对野生虫草菌丝体的分离，提取出虫草真菌单体，并以它为基础利用深层发酵等生物工程方法，提取出人工发酵的虫草菌丝体。虫草菌丝体是冬虫夏草的有效替代品，据科学家分析检验，它具有与虫草相同的功能：入肺、肝、肾经，具有补肺、益肾、强肝、益气、滋补、保健的效果，无毒副作用，能提高人体的免疫功能还能抗疲劳，分解肌肉中的疲劳物质，耐疲劳、提高运动能力的作用。

苦参素为氧化苦参碱与极少量氧化槐果碱的混合碱，是从豆科槐属植物苦参(sophora flarescen Ait.)的干燥根中提取分离而得到的白色粉末，已收载入国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第16册363页(国家药典委员会编)，其中规定含氧化苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O₂)不得少于98.0％。苦参素为肿瘤及肝病辅助用药，对多种肿瘤细胞有抑制或杀伤作用，且毒副作用小，并能提高免疫力，是理想的抗癌药物。苦参素的结构式如下：

苦参素

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。甘，温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌之功效，主要用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白病，糖尿病。主要含有黄芪多糖、黄芪总皂苷、黄酮类、生物碱、葡萄糖醛酸及微量元素硒等成分。现药理试验表明黄芪可促进免疫功能，主要有效成分为多糖和皂苷，能显著增加血液中的白细胞总数，促进中性粒细胞及巨噬细胞的吞噬和杀菌能力，能明显促进细胞免疫，促进PHA、ConA及商陆素(PWM)等引起的淋巴细胞转化，提高恶性肿瘤病人淋巴细胞引起的大鼠局部移植物抗宿主反应。黄芪多糖能显著增强小鼠巨噬细胞功能，促进IgM形成，提高PFC的溶血能力，黄芪多糖还能显著延长氢化可的松耗竭的小鼠游泳时间，增加其肾上腺的重量，对小鼠数种缺氧模型均具显著改善作用；能使正常及虚弱小鼠抗寒生存时间延长；对辐射后小鼠的体重、血细胞数及细胞结构有明显保护作用。

目前利用虫草菌丝体、苦参素、黄芪的相互作用、配伍组方用于抗肿瘤的应用还未见报道。

【发明内容】

为了满足临床需要，本发明提供了一种新的主要用于抗肿瘤的药物组合物，并提供了其制备方法。

本发明药物组合物主要由虫草菌丝体和苦参素制成，其重量份数为：虫草菌丝体50～2000份、苦参素10～500份；优选份数为虫草菌丝体200～1000份、苦参素20～150份；最佳份数为虫草菌丝体400份、苦参素60份。

上述药物组合物的制备方法为：将虫草菌丝体用适宜的溶剂和方法经过提取加工得到其提取物。适宜的溶剂是指中药提取常用的溶剂，优选水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中药提取的一般方法，如浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

各原料药的具体提取方法如下：

虫草菌丝体的提取加工工艺如下：

取虫草菌丝体培养物，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，浓缩至相对密度1.10～1.15，加乙醇使含醇量达60％，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，加适量水使溶解，滤过，加乙醇使含醇量达85％，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，80％乙醇洗涤，真空干燥，即得。

通过本工艺制备的虫草菌丝体提取物中多糖的含量不低于50％，得率为0.5～2％。

除采用上述方法外，还可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法：

方法一：取虫草菌丝体，100℃提取三次，第一次加水10倍量，二、三次加水8倍量，每次2小时，

合并提取液，滤过，滤液加乙醇使含醇量达65％，冷藏静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加乙醇使含醇量达85％，冷藏静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味后，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。

通过本工艺制备的虫草菌丝体提取物中多糖的含量不低于35％，得率为4～9％。

方法二：取虫草菌丝体，100℃提取二次，第一次加水10倍量，第二次加水8倍量，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液过大孔树脂，收集流出液，加乙醇使含醇量达65％，冷藏静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加乙醇使含醇量达85％，冷藏静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味后，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。

通过本工艺制备的虫草菌丝体提取物中多糖的含量不低于40％，得率为2～6％。

上述药物组合物也可由虫草菌丝体提取物代替虫草菌丝体药材投料，按照提取物相对于药材的得率计算，组合物原料药的重量份数为：虫草菌丝体提取物0.2～40份、苦参素10～500份；优选份数为虫草菌丝体提取物1～20份、苦参素20～150份；最佳份数为虫草菌丝体提取物2～10份、苦参素60份。其中虫草菌丝体提取物的主要有效成分为多糖类，最好不低于30％。

为达到更好的抗肿瘤效果，本发明药物组合物的原料药中还可加入黄芪制成，如以药材投料其重量份数为：虫草菌丝体50～2000份、苦参素10～500份、黄芪10～5000份；优选份数为虫草菌丝体200～1000份、苦参素20～150份、黄芪50～2000份；最佳份数为虫草菌丝体400份、苦参素60份、黄芪100份。

上述药物组合物中虫草菌丝体、黄芪可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到其提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一临床上或药学上可接受的剂型。“单独提取”是指，虫草菌丝体、黄芪每一味药材分别通过不同的工艺单独提取得到提取物，再将各提取物混合得到总提取物。“混合提取”是指，虫草菌丝体、黄芪两味药材一起提取得到总提取物。

上述组合物中，虫草菌丝体的“单独提取”方法可参照前述方法制备。

上述组合物中，因为黄芪多糖和黄芪总皂苷均有抗肿瘤活性，所以黄芪的“单独提取”方法因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分别如下：

本发明组合物中以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物(简称黄芪总皂苷)的制备工艺如下：取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷提取物得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，黄芪甲苷含量不低于2.0％。

除采用上述方法外，也可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法：

方法一：取黄芪，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为60％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～5％，总皂苷含量不低于30％，黄芪甲苷含量不低于1％。

方法二：取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理1次使含乙醇量为60％，冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，并减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，总皂苷含量为不低于40％，黄芪甲苷含量不低于1％。

本发明组合物中以多糖为主要有效成分的黄芪提取物(简称黄芪多糖)的制备工艺如下：取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物中黄芪总多糖的含量不低于50％，提取物得率为0.5～2％。

方法一：取黄芪药材，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.23，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，收集沉淀，真空干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，黄芪多糖含量不低于40％。

方法二：取黄芪药材，加10倍量80％乙醇提取4小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液合并，过滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，过滤，滤液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～4％，黄芪多糖含量不低于35％。

上述药物组合物的原料药中，可用虫草菌丝体提取物、黄芪提取物分别代替虫草菌丝体和黄芪投料制得，按照提取物相对于药材的得率计算，可以有以下两种不同配比，其重量份数分别为：

配比1：虫草菌丝体提取物0.2～40份、苦参素10～500份、黄芪多糖0.1～100份；优选份数为虫草菌丝体提取物1～20份、苦参素20～150份、黄芪多糖0.2～40份；最佳份数为虫草菌丝体提取物2～10份、苦参素60份、黄芪多糖0.5～2份。

配比2：虫草菌丝体提取物0.2～40份、苦参素10～500份、黄芪总皂苷0.1～100份；优选份数为虫草菌丝体提取物1～20份、苦参素20～150份、黄芪总皂苷0.2～40份；最佳份数为虫草菌丝体提取物2～ 10份、苦参素60份、黄芪总皂苷0.5～2份。

上述配比中，虫草菌丝体提取物中含多糖最好不低于30％；黄芪多糖含量最好不低于50％，黄芪总皂苷含量最好不低于50％，其中的黄芪甲苷含量不低于2.0％。虫草菌丝体提取物、黄芪总皂苷和黄芪多糖均可按照前述方法制得。

上述药物组合物，可以制成任一临床上或药学上可接受的剂型，如注射剂、口服常释剂型、缓释控释剂型、颗粒剂、丸剂、口服液体剂、滴眼剂、滴鼻剂、滴耳剂、吸入剂、栓剂、软膏剂等。本发明药物组合物优选剂型为注射剂和口服制剂。

本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

本发明在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入吐温-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸纳、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。

上述药物组合物，具有抗肿瘤、抗肝损害、解毒、抗菌和增强机体免疫力等作用。

本发明的优点在于：

1.提供了一种新的抗癌中药复方，满足了临床急需。

2.对本发明药物组合物进行了药理学研究，结果表明本发明组合物对放疗具有明显的增效作用；对化疗具有减毒和增效的作用，增效率可达56％；可明显延长腹水癌U₁₄小鼠的生存天数，且其作用与单用虫草菌丝体、苦参素和黄芪相比效果极为显著(p＜0.01)，表明虫草菌丝体、苦参素以及虫草菌丝体、苦参素和黄芪两种组合物均有协同增效的作用，提高了病人的生存质量。

3.通过本发明组合物不同配比对小鼠S₁₈₀肿瘤生长抑制作用的药效学研究，筛选出了本发明组合物的优选配比。

4.对本发明组合物提取物主要有效成分的含量分别进行了限定，便于控制产品的质量。

5.对本发明组合物进行了急性毒性试验，结果表明本发明组合物毒性小，安全范围大。

6.对本发明药物组合物进行的稳定性试验结果表明各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全。

7.虫草菌丝体、苦参素和黄芪临床用药疗效确切，合并用药后用药量减少，具有广阔的应用前景。

以下试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括本发明药物组合物的药效学试验。以下试验例中虫草菌丝体根据实施例1制得虫草菌丝体提取物，黄芪根据实施例2制得黄芪总皂苷和黄芪多糖。虫草菌丝体提取物、苦参素组合物简称CK组。虫草菌丝体提取物、苦参素、黄芪多糖组合物简称CKH ₁组，虫草菌丝体提取物、苦参素、黄芪总皂苷组合物简称CKH ₂组。

试验例1 药效学试验-虫草菌丝体、苦参素和黄芪合并用药对小鼠S ₁₈₀ 肿瘤生长抑制作用

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)

黄芪总皂苷组：黄芪总皂苷注射液，自制，2ml:相当于黄芪药材1g。

黄芪多糖组：黄芪多糖注射液，自制，2ml:相当于黄芪药材1g。

虫草菌丝体组：虫草菌丝体注射液2ml：相当于虫草菌丝体药材4g。

苦参素组：自制，2ml∶0.2g

组合物组：

CKH₁组：自制(处方和制备方法参见实施例4水针剂处方2的制备)；

CKH₂组：自制(处方和制备方法参见实施例4水针剂处方3的制备)；

受试动物健康小鼠230只，体重16～20g，雌雄各半，每组10只。

瘤株小鼠S₁₈₀

表1 组合物对小鼠S₁₈₀肿瘤生长抑制作用(x±s，n＝10)

注：与生理盐水对照组相比^*p＜0.05，^**p＜0.01；与黄芪总皂苷组相比^ap＜0.01；与黄芪多糖组相比^bp＜0.01；与虫草菌丝体组相比，^cp＜0.01；与苦参素组相比，^dp＜0.01。

试验方法取接种传代小鼠S₁₈₀，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S₁₈₀瘤匀浆液，再以生理盐水 1∶3稀释，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小时称重，小鼠每日灌胃给药一次，给药容积相同(0.5ml/只)，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，于EM50电子天平称取瘤重，并计算抑瘤率。

试验结果及结论由表1结果可以看出，各供试品组与生理盐水对照组相比对小鼠S₁₈₀瘤体均有显著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)；CKH₁(虫草菌丝体提取物+苦参素+黄芪多糖)组、CKH₂(虫草菌丝体提取物+苦参素+黄芪总皂苷)组与黄芪总皂苷组、黄芪多糖组、虫草菌丝体组和苦参素组相比，差别极显著(p＜0.01)，提示三药合用有协同增效的作用。结果表明，当组合物的原料重量配比为虫草菌丝体(2g～10g)+苦参素(0.2g～1.5g)+黄芪(0.5g～20g)时均能起到较好的抑瘤效果，其中以虫草菌丝体4g+苦参素0.6g+黄芪1g时效果最好。

试验例 2虫草菌丝体和苦参素合并用药对腹水癌U14小鼠生命延长率的影响

受试动物健康小鼠，60只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为6组，每组10只。

瘤株小鼠腹水癌U₁₄

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)

虫草菌丝体组：虫草菌丝体提取物注射液2ml：相当于虫草菌丝体药材4g。

苦参素组：自制，2ml∶0.2g。

组合物组：CK组：规格：2ml，源自实施例4水针剂处方1，分为低、中、高三个剂量组。

试验方法小鼠腹腔接种腹水癌U₁₄瘤株菌悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.5ml/只)。接种次日，小鼠随机分组，称量体重，按表2腹腔注射给药，每日1次，连续10天。此后观察小鼠的死亡时间，结果用平均存活天数和生命延长率表示【生命延长率＝(试验组平均生存天数-对照组平均生存天数)/对照组平均生存天数×100％】。

表2 虫草菌丝体和苦参素合并用药对腹水癌U₁₄小鼠生命延长率

的影响(平均值±标准偏差，n＝10)

注：与生理盐水对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001；与虫草菌丝体组相比较：^ap＜0.05，^bp＜0.01；与苦参素组相比较：^cp＜0.05，^dp＜0.01。

试验结果及结论试验结果见表2。与生理盐水注射液对照组相比较，CK注射液中、高剂量组可极显著延长U₁₄小鼠的生存天数(p＜0.01，p＜0.001)，CK注射液低剂量组、虫草菌丝体注射液组、苦参素注射液组可明显延长U₁₄小鼠的生存天数(p＜0.05)。CK注射液低剂量组与虫草菌丝体注射液组、苦参素注射液组相比较，腹水癌U₁₄小鼠生命延长率显著增加(p＜0.05)；CK注射液中、高剂量组与虫草菌丝体注射液组、苦参素注射液组相比较，腹水癌U₁₄小鼠生命延长率极显著增加(p＜0.01)。提示，虫草菌丝体和苦参素合并用药具有协同增效作用，在抑制肿瘤、延长肿瘤患者存活时间方面有显著作用。

试验例3 虫草菌丝体、苦参素合并用药对放疗的增效作用

受试动物健康小鼠，50只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为5组，每组10只。

瘤株小鼠S₁₈₀肉瘤。

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)

试验方法每只小鼠左前肢腋下皮下接种S₁₈₀瘤株细胞悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.2ml/只)，24h时称量体重。接种次日，随机分组，除空白对照组外，其余各组均在接种后第3天、第6天用⁶⁰Co全身照射，照射剂量为0.05Gy/min。接种次日，小鼠按表3腹腔注射给药，每天1次，连续10天。每天称量体重，观察荷瘤鼠体重变化。末次给药后24h，称量体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称取瘤体重量，计算肿瘤抑制率和增效率【增效率＝(放疗组平均瘤重-放疗与CK注射液联合治疗组平均瘤重)/放疗组平均瘤重×100％】。

表3 虫草菌丝体、苦参素合并用药对放疗的增效作用(平均值±标准偏差，n＝10)

与空白对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001；

与⁶⁰Co照射组相比较：^#p＜0.05，^##p＜0.01。

试验结果及结论试验结果见表3。与空白对照组相比较，⁶⁰Co照射对小鼠S₁₈₀肉瘤有显著的抑制作用(p＜0.05)；⁶⁰Co照射与低、中、高剂量CK注射液联合治疗对小鼠S₁₈₀肉瘤有极显著的抑制作用(p＜0.01，p＜0.001)。与⁶⁰Co照射组相比较，⁶⁰Co照射与低剂量CK注射液联合治疗对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用显著增强(p＜0.05)，⁶⁰Co照射与中、高剂量CK注射液联合治疗对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用极显著增强(p＜0.01)。试验结果表明，CK注射液可以显著增强⁶⁰Co照射的放疗疗效，提示，虫草菌丝体、苦参素合并用药具有增强放疗疗效的作用。

试验例4 虫草菌丝体、苦参素和黄芪合并用药对化疗(Cy)的增效和减毒作用

受试动物健康小鼠，80只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为8组，每组10只。

瘤株小鼠S₁₈₀肉瘤。

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)；

注射用环磷酰胺(阳性对照)：市购，100mg，上海华联制药有限公司；

组合物组：CKH₁组：规格：2ml，源自实施例4水针剂处方2，分为低、中、高三个剂量组；CKH₂组：规格：2ml，源自实施例4水针剂处方3，分为低、中、高三个剂量组。

试验方法每只小鼠左前肢腋下皮下接种S₁₈₀瘤株细胞悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.2ml/只)。接种次日，小鼠随机分组，称量体重，按表4腹腔注射给药，隔日1次，连续10天。每天称量体重，观察荷瘤鼠体重变化。末次给药后24h，称量体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称取瘤体重量，计算肿瘤抑制率和增效率【增效率＝(化疗组平均瘤重-化疗与CKH₁或CKH₂注射液联合用药组平均瘤重)/化疗组平均瘤重×100％】。

表4 虫草菌丝体、苦参素和黄芪合并用药对化疗的增效和减毒作用

(平均值±标准偏差，n＝10)

注：与空白对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001；与注射用环磷酰胺组相比较：^#p＜0.05，^##p＜0.01。

试验结果及结论试验结果见表4。

(1)对化疗的增效作用：与空白对照组相比较，低剂量注射用环磷酰胺单独用药对小鼠S₁₈₀肉瘤有显著的抑制作用(p＜0.05)；注射用环磷酰胺与低、中、高剂量CKH₁、CKH₂注射液联合用药对小鼠S₁₈₀ 肉瘤有极显著的抑制作用(p＜0.01，p＜0.001)。与环磷酰胺组相比较，注射用环磷酰胺与低剂量CKH₁、CKH₂注射液联合用药对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用显著增强(p＜0.05)，注射用环磷酰胺与中、高剂量CKH₁、CKH₂注射液联合用药对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用极显著增强(p＜0.01)。试验结果表明，CKH₁、CKH₂注射液可以显著增强环磷酰胺的疗效，提示，虫草菌丝体、苦参素和黄芪三者合并用药具有增强化疗疗效的作用。

(2)对化疗的减毒作用：与空白对照组相比较，注射用环磷酰胺单独用药时，小鼠的外周白细胞数、胸腺指数、脾指数均极显著降低(p＜0.01)。与注射用环磷酰胺组相比较，注射用环磷酰胺与CKH₁、CKH₂ 注射液联合用药时，CKH₁、CKH₂注射液低剂量可以显著抑制小鼠外周白细胞数、胸腺指数、脾指数的降低(p＜0.05)，CKH₁、CKH₂注射液中、高剂量可以极显著抑制小鼠外周白细胞数、胸腺指数、脾指数的降低(p＜0.01)。试验结果表明，CKH₁、CKH₂注射液可以显著降低环磷酰胺的毒性，提示，虫草菌丝体、苦参素和黄芪三者合并用药具有降低化疗毒性的作用。

试验例5 小鼠注射给药急性毒性试验

(1)试验方法

供试品：CK注射液，规格2ml，来源于实施例4处方1；CKH₁注射液，规格2ml，来源于实施例4处方2；CKH₂注射液，规格2ml，来源于实施例4处方3。

受试动物：小鼠，每组雌雄各60只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。

给药途径：静脉注射、腹腔注射。

观察专案：死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。

(2)试验结果

按照急性毒性试验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行日最大给药量试验。给药剂量：尾静脉注射0.1ml/10g，腹腔注射0.1ml/10g，一日1次。

死亡数：未出现死亡。

一般状态：未见异常变化。

体重：于给药前1天，给药日，给药后2、4、6、8、10、12、14天测量；未见异常变化。

剖检：心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。

(3)结论

本实验中未出现死亡，CK、CKH₁和CKH₂注射液对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量为0.1ml/10g，相当于60kg体重人日最大用量6ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。

试验例6 组合物注射液稳定性试验

供试品：CK注射液，规格2ml，来源于实施例5处方1；CKH₁注射液，规格2ml，来源于实施例4处方2；CKH₂注射液，规格2ml，来源于实施例4处方3。

考察项目：性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量；并在加速试验6个月和长期试验期末增加无菌和热原检查。

1、影响因素试验

强光照射试验：取供试品，置照度为4500Lx的光照箱内放置10天。

高温试验：取供试品，分别置于40℃、60℃条件下放置10天。

低温试验：取供试品，在4℃冰箱中放置10天。

上述试验，分别于第5、10天取样测定。比较性状后测试各项指标，并将结果与0天比较。

结果：光照4500Lx条件下放置10天，除有关物质略有升高外，其它各项指标均无明显变化。高温60℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。高温40℃、低温4℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。

2、加速试验

方法：置温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在试验期间分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在6个月末增加无菌和热原检查。

结果：温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，除有关物质略有增加，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化，加速试验6个月末，热原、无菌检查均符合规定。

3、长期试验

方法：置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在18个月末增加无菌和热原检查。

结果：温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月，各项指标均无明显变化，长期试验18个月末，热原、无菌检查均符合规定。

结论：由上述考察结果得出结论，各项试验中，CK注射液、CKH₁注射液和CKH₂注射液均比较稳定。

综上所述，本发明提供的虫草菌丝体与苦参素或黄芪、虫草菌丝体与苦参素组合物具有协同增效作用，明显优于黄芪、虫草菌丝体或苦参素单独给药的药效。对CK注射液、CKH₁注射液和CKH₂注射液进行的稳定性试验结果表明，本发明提供的组合物制成的注射剂的各项指标均比较稳定，可以用于放大生产。

【具体实施方式】

以下通过实施例来进一步阐述本发明药物组合物的制备方法，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。

以下实施例3～11中的虫草菌丝体提取物和黄芪多糖、黄芪总皂苷来源于实施例1、2中虫草菌丝体提取物和黄芪多糖、黄芪总皂苷三批提取物中的第二批。

实施例1 虫草菌丝体提取物的制备

取虫草菌丝体培养物40kg，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，浓缩至相对密度1.10～1.15，加乙醇使含醇量达60％，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，加适量水使溶解，滤过，加乙醇使含醇量达85％，冷藏静置24小时，滤过，收集滤饼，80％乙醇洗涤，真空干燥，即得。

按上述工艺再分别制备三批提取物，提取物得率和含量见下表5。

虫草菌丝体提取物的含量测定

对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖5.0mg置于25ml容量瓶中加蒸馏水定容，摇匀，即得对照品溶液。

供试品溶液的制备取本品10mg，置于50ml容量瓶中定容，摇匀，即得。

标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.25、0.75、1.25、2.0、2.5ml各置于10ml具塞试管中，各加入蒽酮试剂(称取2g蒽酮加入100ml乙酸乙酯在水浴中加入至溶)0.5ml和3.0ml浓硫酸立即在混匀器上混匀，放置冷却至室温。以蒸馏水同法作空白，在630nm处测吸收度。以对照品溶液浓度为横坐标，以吸收度作纵坐标，计算回归方程。

测定法精密吸取供试品溶液2ml置10ml量瓶中用蒸馏水定容，摇匀，再精密吸取1ml按上述标准曲线条件下测定，即得。

虫草菌丝体提取物的鉴别

(1)取本品约50mg，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。

(2)取本品约50mg，加水2ml溶解后，加5％d-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。

表5 三批虫草菌丝体提取物得率和含量测定结果

实施例2 黄芪提取物的制备

黄芪总皂苷的制备

取黄芪40kg，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材1g，冷藏放置12小时，滤过，滤液减压浓缩、真空干燥，即得。

分别制得三批黄芪总皂苷，提取物得率和含量结果见下表6。

黄芪总皂苷鉴别试验

鉴别试验一取本品0.01g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120 目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。

鉴别试验二取本品0.01g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，凉干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。

黄芪总皂苷含量测定

总皂苷的含量测定

对照品溶液的制备精密称取于105℃干燥至恒重的黄芪甲苷对照品约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芪甲苷干品0.1mg)。

供试品溶液的制备取本品0.1g，精密称定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次10ml，弃去水液，正丁醇至水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，置25ml纳氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鲜配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，在538nm波长处测定吸光度，计算，即得。

黄芪甲苷的含量测定

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。

对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密称取本品0.04g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。

表6 三批黄芪总皂苷含量、黄芪甲苷含量和得率

黄芪多糖的制备

取黄芪药材30kg，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。

分别制得三批黄芪多糖，提取物得率和含量结果见下表7。

黄芪多糖含量测定

标准溶液的制备称取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。

标准曲线绘制精密量取标准溶液0.1ml～0.6ml共6份，分别置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，铝片0.3g，碳酸氢钠0.15g，混合蒸馏，收集182℃馏分，配制成5％水溶液)1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温，另以2.0ml水同上平行操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸收值，计算回归方程。

测定方法取黄芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法自“加水至2.0ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算多糖的含量。

黄芪多糖的鉴别

(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。

(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。

表7 三批黄芪多糖含量和得率

实施例3 本发明组合物粉针剂的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体药材4kg)

苦参素 600g

聚山梨酯80 50g

甘露醇 200g

无菌注射用水加至2000ml

共制备 1000支

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体药材4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪药材1kg)

聚山梨酯80 50g

甘露醇 200g

无菌注射用水加至2000ml

共制备 1000支

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体药材4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪药材1kg)

聚山梨酯80 50g

甘露醇 200g

无菌注射用水加至2000ml

共制备 1000支

制备工艺：

1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的中药提取物，加热搅拌溶解完全。苦参素加配液量30％注射用水搅拌溶解。合并上述溶液，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.22um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥4小时。

9)冻干结束，压塞，轧盖。

10)成品全检，包装入库。

实施例4 本发明组合物水针剂的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

聚山梨酯80 50g

注射用水加至4000ml

共制备 2000支

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

注射用水加至4000ml

共制备 2000支

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

注射用水加至4000ml

共制备 2000支

制备工艺：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的中药提取物，加热搅拌溶解完全。苦参素加配液量30％注射用水搅拌溶解。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。

9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。

10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。

11)灯检，成品全检，包装入库。

实施例5 本发明组合物输液的制备

氯化钠输液：

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

聚山梨酯80 50g

氯化钠 900g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

氯化钠 900g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

氯化钠 900g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

制备工艺：

1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的中药提取物，加热搅拌溶解完全。苦参素、氯化钠加配液量30％注射用水搅拌溶解。合并上述溶液，补加注射用水至全量。

3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

5)经0.45um的微孔滤膜精滤。

6)检查溶液的澄明度，半成品化验。

7)灌装于100ml的输液瓶中。

8)115℃热压灭菌30分钟。

9)灯检，成品全检，包装入库。

葡萄糖输液：

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

聚山梨酯80 50g

葡萄糖 5000g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

葡萄糖 5000g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

葡萄糖 5000g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

制备工艺：

2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的中药提取物，加热搅拌溶解完全。苦参素、葡萄糖加配液量30％注射用水搅拌溶解。合并上述溶液，补加注射用水至全量。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例6 本发明组合物片剂的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

淀粉 120.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.5g

羧甲淀粉钠 7.0g

共制备 2000片

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

淀粉 120.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.5g

羧甲淀粉钠 7.0g

共制备 2000片

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

淀粉 120.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.5g

羧甲淀粉钠 7.0g

共制备 2000片

制备工艺：

1)将中药提取物、苦参素粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将中药提取物、苦参素、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按化验结果确定片重压片。

10)成品全检，包装入库。

实施例7 本发明组合物胶囊剂的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

淀粉 80.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.0g

共制备 2000粒

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

淀粉 80.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.0g

共制备 2000粒

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

淀粉 80.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.0g

共制备 2000粒

制备工艺：

1)将中药提取物、苦参素粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的装量装入胶囊。

10)成品全检，包装入库。

实施例8 本发明组合物颗粒剂的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

糖粉 1000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液适量

共制备 1000包

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

糖粉 1000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液适量

共制备 1000包

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

糖粉 1000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液适量

共制备 1000包

制备工艺：

1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将中药提取物、苦参素粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将中药提取物、苦参素与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

4)过20目筛制颗粒。

5)颗粒在60℃的条件下烘干。

6)干颗粒过18目筛整粒。

7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。

8)包装，成品全检，包装入库。

实施例9 本发明组金物软胶囊剂的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

大豆油 500.0g

大豆磷脂 50g

蜂蜡 50g

共制备 2000粒

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

大豆油 500.0g

大豆磷脂 50g

蜂蜡 50g

共制备 2000粒

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

大豆油 500.0g

大豆磷脂 50g

蜂蜡 50g

共制备 2000粒

制备工艺：

将中药提取物、苦参素分别粉碎过100目筛，将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，加入中药提取物、苦参素研匀，压制成软胶囊即可。

实施例10 本发明组合物滴丸剂的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

聚乙二醇6000 600g

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

聚乙二醇6000 600g

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

聚乙二醇6000 600g

制备工艺：

将聚乙二醇6000在水浴中加热熔融，待全部熔融后加入中药提取物、苦参素，搅拌溶解，60目筛过滤，保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。

实施例11 本发明组合物口服液的制备

处方：

处方1

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

聚山梨酯80 50g

苯甲酸钠 15g

甜菊甙 10g

水加至10000ml

共制备 1000支

处方2

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪多糖 15.6g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

苯甲酸钠 15g

甜菊甙 10g

水加至10000ml

共制备 1000支

处方3

虫草菌丝体提取物 34.8g(相当于虫草菌丝体4kg)

苦参素 600g

黄芪总皂苷 9.8g(相当于黄芪1kg)

聚山梨酯80 50g

苯甲酸钠 15g

甜菊甙 10g

水加至10000ml

共制备 1000支

制备工艺：

1)先将聚山梨酯80用配液量40％的水溶解完全，再将中药提取物加入加热搅拌溶解完全。苦参素加配液量30％水加热后溶解完全。

2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量10％的水溶解完全。

3)合并上述溶液，补加水至全量。

4)过0.8um的微孔滤膜过滤。

5)半成品化验。

6)灌装。成品全检，包装入库。

Claims

1.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，该组合物主要由下列重量份的原料药制成：虫草菌丝体提取物与苦参素的重量比为：10∶1、10∶3、4∶3、20∶1、20∶3、8∶3、50∶1或50∶3；其中所述的虫草菌丝体提取物中多糖类不低于30％。

2.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，该组合物由下列重量份的原料药制成：虫草菌丝体提取物、苦参素与黄芪多糖的重量比为20∶2∶5、10∶3∶5、4∶3∶40、40∶2∶5、20∶3∶5、8∶3∶40、100∶2∶5、50∶3∶5或20∶3∶40；或者为：虫草菌丝体提取物、苦参素与黄芪总皂苷的重量比为20∶2∶5、10∶3∶5、4∶3∶40、40∶2∶5、20∶3∶5、8∶3∶40、100∶2∶5、50∶3∶5或20∶3∶40；其中所述的虫草菌丝体提取物中多糖类不低于30％；所述的黄芪多糖含量不低于50％；所述的黄芪总皂苷的含量不低于50％、黄芪总皂苷中黄芪甲苷含量不低于2.0％。

3.如权利要求1、2所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。

4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于该组合物制成注射剂或口服制剂。