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CN1893980A - 与白蛋白样物质相连的新glp－1类似物 - Google Patents

与白蛋白样物质相连的新glp－1类似物 Download PDF

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CN1893980A CNA2004800377411A CN200480037741A CN1893980A CN 1893980 A CN1893980 A CN 1893980A CN A2004800377411 A CNA2004800377411 A CN A2004800377411A CN 200480037741 A CN200480037741 A CN 200480037741A CN 1893980 A CN1893980 A CN 1893980A
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Abstract

本发明涉及具有式(I)结构的化合物：GLP－1激动剂－L－RR－延迟蛋白(I)，其中GLP－1激动剂是为人GLP－1受体激动剂的多肽，L是连接所述GLP－1激动剂的氨基酸侧链与RR的接头，RR是已经与延迟蛋白的氨基酸残基形成共价键的反应性残基的剩余部分，且延迟蛋白是一种具有至少5kDa摩尔重量、在人血浆中具有至少24小时血浆半衰期的蛋白，并且所述的延迟蛋白通过非哺乳动物生物体合成或合成性合成。

Description

与白蛋白样物质相连的新GLP-1类似物
发明领域
本发明涉及新颖的GLP-1化合物、包含这些化合物的药物组合物以及所述化合物用于治疗与糖尿病相关的疾病的用途。
发明背景
糖尿病是一种利用葡萄糖的能力部分或完全丧失的代谢障碍。所有人中约5％患有糖尿病并且该障碍接近流行性比例。自从20世纪20年代引进胰岛素以来，人们持续努力以改善对糖尿病的治疗。
一种预期在糖尿病治疗中将变得十分重要的肽是胰高血糖素样肽-1(GLP-1)。人GLP-1是源于尤其在远端回肠、胰腺和脑中的L-细胞中合成的前胰高血糖素原的37个氨基酸残基肽。GLP-1是一种在葡萄糖代谢和胃肠分泌以及新陈代谢中具有调节功能的重要的胃肠激素。GLP-1以葡萄糖依赖方式刺激胰岛素分泌、刺激胰岛素生物合成、促进β-细胞救援(cell rescue)、减少胰高血糖素分泌、胃排空和食物摄取。人GLP-1水解为GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)-酰胺，两者都是促胰岛素肽。可用一个简单的体系来描述该肽的片段和类似物。因此，例如，[Gly8]GLP-1(7-37)指通过用甘氨酸取代位置8中天然出现的氨基酸残基(丙氨酸)在形式上源于GLP-1(7-37)的GLP-1(7-37)类似物。类似地，(Nε34-十四烷酰)[Lys34]GLP-1(7-37)指其中在位置34的Lys残基的ε-氨基已经十四烷酰化的GLP-1(7-37)。PCT公开WO 98/08871和WO 99/43706公开了GLP-1类似物的具有亲脂性取代基的稳定衍生物。这些GLP-1类似物的稳定衍生物与相应的GLP-1类似物相比具有延长的作用曲线(profile)。
在最近十年里已从毒蜥蜴(钝尾毒蜥(Heloderma suspectum)和珠毒蜥(Heloderma horridum))的毒液中分离出许多肽。Exendin-4是一种从钝尾毒蜥毒液中分离的39个氨基酸残基肽，并且该肽与GLP-1(7-37)在重叠区具有52％的同源性。Exendin-4是一种有效的GLP-1受体激动剂，已经显示当将其注射入狗时该受体激动剂能刺激胰岛素释放并随之降低血糖水平。exendin-4(1-39)、其某些片段、其类似物及其衍生物是有效的促胰岛素试剂。最重要的是exendin-4(1-39)、其促胰岛素片段、其促胰岛素类似物及其促胰岛素衍生物。
包括exendin化合物的一系列GLP-1化合物已经得以合成和研究，特别是研究了其血浆半衰期。低血浆半衰期可能是由于对肽酶(主要是二肽基氨肽酶IV)的化学稳定性及肾清除率引起的。然而，促胰岛素肽的这些变体迄今还未显示出超过对每日一次施用给患者的产物足够的延长效果。需要第二代GLP-1化合物，所述的这种化合物可以每周只施用于患者一次或以更少的频率施用。
US 6,329,336公开了将高活性的GLP-1肽注射入血浆中，在血浆中该肽将与血液组分如血清白蛋白发生化学反应。
WO 02/46227公开了GLP-1化合物和人血清白蛋白的融合蛋白。
WO 2003/103572公开了GLP-1类似物和血液组分的缀合物。
本发明的一个目的是提供包括连接至在人血浆中具有长半衰期的蛋白的exendin肽的GLP-1类似物，从而便于对患者进行每周一次的治疗。提供较小倾向聚集的GLP-1肽也是本发明的目的，聚集是与胰高血糖素样肽相关的熟知问题。较小倾向聚集有利于经济的生产过程以及能使得该化合物能通过医疗输注泵施用。
定义
在本说明书中，下面术语具有表明的意义：
如在此使用的术语“多肽”和“肽”指由至少五个经肽键连接的组成氨基酸组成的化合物。组成氨基酸可来自由遗传密码编码的氨基酸并且它们可以是不是由遗传密码编码的天然氨基酸以及合成氨基酸。不由遗传密码编码的天然氨基酸是如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、鸟氨酸、磷酸丝氨酸、D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通过化学合成制造的氨基酸，即由遗传密码编码的氨基酸的D-异构体例如D-丙氨酸和D-亮氨酸、Aib(α-氨基异丁酸)、Abu(α-氨基丁酸)、Tle(叔丁基甘氨酸)、β-丙氨酸、3-氨甲基苯甲酸、邻氨基苯甲酸。
如此处使用的涉及多肽的术语“类似物”指经修饰的肽，其中所述的肽的一个或多个氨基酸残基已经由其它氨基酸残基置换和/或其中一个或多个氨基酸残基已经从该肽中删除和/或其中一个或多个氨基酸残基已经从肽中删除和或其中一个或多个氨基酸残基已经加入至该肽。这种氨基酸残基的添加或缺失可在肽的N-末端和/或在肽的C-末端发生。常用一种简单的体系描述类似物：例如[Arg34]GLP-1(7-37)Lys指GLP-1(7-37)类似物，其中在位置34的天然出现的赖氨酸已经用精氨酸取代并且其中一个赖氨酸已经添加至末端氨基酸残基，即添加至Gly37。其旋光异构体未经说明的所有氨基酸可理解为指L-异构体。
如此处使用的有关肽的术语“衍生物”指经化学修饰的肽或其类似物，其中至少一个取代基不存在于未经修饰的肽或其类似物中，即已经经共价修饰的肽。通常的修饰是酰胺、碳水化合物、烷基、酰基、酯类等。GLP-1(7-37)衍生物的实例是Nε26-((4S)-4-(十六酰氨基)-丁酰基)[Arg34，Lys26]GLP-1-(7-37)。
如此处使用的术语“GLP-1激动剂”指在包含人GLP-1受体的合适培养基中刺激cAMP的形成的化合物。GLP-1激动剂的效力按下面描述的通过从剂量-反应曲线计算EC50值来测定。
将表达克隆的人GLP-1受体的幼仓鼠肾(BHK)细胞(BHK-467-12A)在加入了100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素、5％胎牛血清和0.5mg/mL遗传霉素G-418(Life Technologies)的DMEM培养基中生长。在磷酸盐缓冲盐水中洗涤该细胞两次并用依地酸收集。在缓冲液1(20mM HEPES-Na，10mM EDTA，pH 7.4)中用Ultraturrax匀浆而从该细胞制备质膜。于4℃将匀浆以48,000xg离心15分钟。通过匀化使沉淀悬浮于缓冲液2(20mM HEPES-Na，0.1mM EDTA，pH 7.4)中，随后将其于4℃以48,000xg离心15分钟。将洗涤步骤再次重复一次。最终的沉淀悬浮于缓冲液2中并立即将其用于测试或于-80℃存储。
通过测量作为对促胰岛素试剂刺激的反应的环腺苷酸(cAMP)进行功能受体检测法。通过AlphaScreenTM cAMP试剂盒(Perkin ElmerLife Sciences)定量形成的cAMP。在总体积为50μL的缓冲液3(50mM Tris-HCl，5mM HEPES，10mM MgCl2，pH7.4)中在half-area 96孔微量滴定板中进行温育，所述缓冲液3中添加以下物质：1mM ATP、1μM GTP、0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、0.01％Tween-20、0.1％BSA、6μg膜制剂、15μg/mL受体微珠、用6nM生物素基-cAMP预温育的20μg/mL供体微珠。在缓冲液3中溶解和稀释将要进行激动剂活性检测的化合物。为每个试验新鲜制备GTP。于室温在黑暗中缓慢振荡地温育板3小时，随后将其在FusionTM仪器(Perkin ElmerLife Sciences)中计数。绘制各个化合物的浓度-反应曲线并用Prismv.4.0(GraphPad，Carlsbad，CA)用4-参数对数模型估计EC50值。
如此处使用的术语“GLP-1肽”指GLP-1(7-37)(SEQ ID No2)、GLP-1(7-37)类似物、GLP-1(7-37)衍生物或GLP-1(7-37)类似物的衍生物。在一个实施方案中GLP-1肽是一种促胰岛素试剂。
如此处使用的术语“exendin-4肽”指exendin-4(1-39)(SEQ IDNo3)、exendin-4(1-39)类似物、exendin-4(1-39)衍生物或exendin-4(1-39)类似物的衍生物。在一个实施方案中exendin-4肽是一种促胰岛素试剂。
如此处使用的涉及多肽的术语“DPP-IV保护的”指一种多肽，该多肽已经经化学修饰以便使所述化合物能抵抗血浆肽酶二肽基氨肽酶-4(DPP-IV)。已知血浆中的DPP-IV酶涉及多种肽激素如GLP-1、GLP-2、Exendin-4等的降解。因此，正做出相当的努力去开发易受DPP-IV介导的水解作用影响的多肽的类似物和衍生物以便减小DPP-IV降解率。在一个实施方案中，DPP-IV保护的肽比GLP-1(7-37)或Exendin-4(1-39)更耐受DPP-IV。
肽对二肽基氨肽酶IV降解的抗性可通过下面的降解检测法测定：
在100μL的0.1M pH 7.4的三乙胺-HCl缓冲液中于37℃将肽的等分样品(5nmol)与相当于5mU酶活性的1μL纯化二肽基氨肽酶IV温育10-180分钟。通过加入5μL10％的三氟乙酸终止酶反应，并使用HPLC分析法分离和定量肽降解产物。用于实施该分析的一种方法是：根据Siegel等，Regul.Pept.1999；79：93-102和Mentlein等，Eur.J.Biochem.1993；214：829-35，将混合物上样至Vydac C18widepore(30nm小孔，5μm微粒)250×4.6mm柱上并以1ml/分钟流速用0.1％三氟乙酸中的乙腈的线性阶式梯度(0％的乙腈3分钟，0-24％的乙腈17分钟，24-48％的乙腈1分钟)洗脱。肽和其降解产物可通过它们在220nm(肽键)或280nm(芳香族氨基酸)的吸光度监测，并通过将它们与那些标品相关的峰面积积分而定量。在导致少于10％的肽被水解的温育时间估计二肽基氨肽酶IV对肽的水解率。
如此处使用的术语“C1-6-烷基”指具有1-6个碳原子的饱和的、支链、直链或环状烃基团。代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、正己基、异己基、环己烷等。
如此处使用的术语“可药用”指适合于正常的药学应用，即在患者中不产生不良事件等。
如此处使用的术语“赋形剂”指通常加入至药物组合物的化学化合物，例如缓冲剂、张度剂、防腐剂等。
如此处使用的术语“有效量”指与不治疗相比足以有效治疗患者的剂量。
如此处使用的术语“药物组合物”指包含活性化合物或其盐与药物赋形剂如缓冲剂、防腐剂和任选地张度调节剂和/或稳定剂一起的产品。因而药物组合物在本领域也称为药物制剂。
如此处使用的术语“疾病的治疗”指管理和照顾已经发生疾病、病症或障碍的患者。治疗的目的是对抗疾病、病症或障碍。治疗包括施用活性化合物以消除或控制疾病、病症或障碍以及减轻与疾病、病症或障碍相关的症状或并发症。
发明描述
在一方面本发明涉及具有式(I)结构的化合物：
GLP-1激动剂-L-RR-延迟蛋白(I)
其中
GLP-1激动剂是为人GLP-1受体激动剂的多肽，
L是连接所述GLP-1激动剂的氨基酸侧链或所述GLP-1激动剂的C末端氨基酸残基与RR的接头，
RR是已经与延迟蛋白的氨基酸残基形成共价键的反应性残基的剩余部分，而
延迟蛋白(protraction protein)是具有至少5kDa摩尔重量、在人血浆中具有至少24小时血浆半衰期的蛋白，并且所述的延迟蛋白通过非哺乳动物生物体合成或合成性合成。
通过下面图解阐明包含于式(I)的化合物：
Figure A20048003774100171
在本发明的一个实施方案中延迟蛋白是重组人血清白蛋白(SEQID NO1)。
在本发明的另一个实施方案中延迟蛋白是人血清白蛋白变体。
在本发明的另一个实施方案中当与人血清白蛋白对铜和镍的相应的结合亲和力相比时所述人血清白蛋白变体对铜和镍的结合亲和力降低。
在本发明的另一个实施方案中延迟蛋白是人血清白蛋白的N-末端片段或其类似物。
在本发明的另一个实施方案中延迟蛋白是包含Asp-Ala-His-LysN-末端序列的修饰的人血清白蛋白变体。
在本发明的另一个实施方案中延迟蛋白在三个N-末端氨基酸残基Asp-Ala-His之中包含至少一处缺失。
在本发明的另一个实施方案中延迟蛋白包含N-末端延伸，例如Glu-3，Ala-2Glu-1，Phe0-HSA(1-585)或其N-末端片段。
在本发明的另一个实施方案中人血清白蛋白(HSA)变体选自HSA(2-585)、HSA(3-585)、HSA(4-585)、Asp-Ala-HSA(4-585)、Xaa3-HSA(1-585)及其N-末端片段，其中所述的Xaa3是已取代在天然HSA中占据位置3的His残基的氨基酸残基。
重组人血清白蛋白变体可从New Century Pharma购得，其名为Albagen。Albagen是HSA(2-585)，并且由于单个N-末端缺失引起的改变的金属结合特性，Albagen是低变应原性的。
在本发明的另一个实施方案中，所述的延迟蛋白包含60-200个氨基酸残基如100-150个氨基酸残基的氨基酸序列，并且所述的氨基酸序列与SEQ ID NO1的片段相同或与有一处或两处氨基酸置换和/或缺失的SEQ ID NO1的片段相同。
在本发明的另一个实施方案中，延迟蛋白是免疫球蛋白的Fc部分、其类似物或片段。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂与GLP-1(7-37)(SEQID NO 2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID NO3)有至少50％的氨基酸同源性。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂与GLP-1(7-37)(SEQID NO 2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID NO 3)具有至少80％的氨基酸同源性。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂包含式(II)的氨基酸序列：
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46
式(II)(SEQ ID No：4)
其中
Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、β-羟基-组氨酸、高组氨酸、Nα-乙酰基-组氨酸、α-氟甲基-组氨酸、α-甲基-组氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；
Xaa8是Ala、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Lys、Aib、(1-氨基环丙基)羧酸、(1-氨基环丁基)羧酸、(1-氨基环戊基)羧酸、(1-氨基环己基)羧酸、(1-氨基环庚基)羧酸或(1-氨基环辛基)羧酸；
Xaa16是Val或Leu；
Xaa18是Ser、Lys或Arg；
Xaa19是Tyr或Gln。
Xaa20是Leu或Met；
Xaa22是Gly、Glu或Aib；
Xaa23是Gln、Glu、Lys或Arg；
Xaa25是Ala或Val；
Xaa26是Lys、Glu或Arg；
Xaa27是Glu或Leu；
Xaa30是Ala、Glu或Arg；
Xaa33是Val或Lys；
Xaa34是Lys、Glu、Asn或Arg；
Xaa35是Gly或Aib；
Xaa36是Arg、Gly或Lys；
Xaa37是Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、酰胺或不存在；
Xaa38是Lys、Ser、酰胺或不存在。
Xaa39是Ser、Lys、酰胺或不存在；
Xaa40是Gly、酰胺或不存在；
Xaa41是Ala、酰胺或不存在；
Xaa42是Pro、酰胺或不存在；
Xaa43是Pro、酰胺或不存在；
Xaa44是Pro、酰胺或不存在；
Xaa45是Ser、酰胺或不存在；
Xaa46是酰胺或不存在；
条件是如果Xaa38、Xaa39、Xaa40、Xaa41、Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45或Xaa46不存在，则下游每个氨基酸残基也不存在。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂包含式(III)的氨基酸序列：
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38
式(III)(SEQ ID No：5)
其中
Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、β-羟基-组氨酸、高组氨酸、Nα-乙酰基-组氨酸、α-氟甲基-组氨酸、α-甲基-组氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；
Xaa8是Ala、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Lys、Aib、(1-氨基环丙基)羧酸、(1-氨基环丁基)羧酸、(1-氨基环戊基)羧酸或(1-氨基环己基)羧酸、(1-氨基环庚基)羧酸或(1-氨基环辛基)羧酸；
Xaa18是Ser、Lys或Arg；
Xaa22是Gly、Glu或Aib；
Xaa23是Gln、Glu、Lys或Arg；
Xaa26是Lys、Glu或Arg；
Xaa30是Ala、Glu或Arg；
Xaa34是Lys、Glu或Arg；
Xaa35是Gly或Aib；
Xaa36是Arg或Lys；
Xaa37是Gly、Ala、Glu或Lys；
Xaa38是Lys、酰胺或不存在。
在本发明的另一个实施方案中，所述的GLP-1激动剂是二肽基氨肽酶IV保护的。在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂被DPP-IV的水解率低于采用此处公开的DPP-IV水解检测法测得的GLP-1(7-37)的水解率。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂是一种位置8类似物，即相对于GLP-1(7-37)序列(SEQ ID No：2)的位置8的丙氨酸残基已经由另一个氨基酸残基取代。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂在相对于GLP-1(7-37)序列(SEQ ID No：2)的位置8处包含Aib残基。
在本发明的另一个实施方案中，在GLP-1肽位置7(N-末端)处的氨基酸残基选自D-组氨酸、脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、β-羟基-组氨酸、高组氨酸、Nα-乙酰基-组氨酸、α-氟甲基-组氨酸、α-甲基-组氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸和4-吡啶基丙氨酸。
在本发明的另一个实施方案中，与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，GLP-1激动剂包含不多于12个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
在本发明的另一个实施方案中，与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，GLP-1激动剂包含不多于6个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
在本发明的另一个实施方案中，与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，GLP-1激动剂包含不多于4个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂包含不多于4个不是由遗传密码编码的氨基酸残基。
在本发明的另一个实施方案中，与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，GLP-1激动剂包含不多于2个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂选自[Arg34]GLP-1(7-37)、[Arg26、34]GLP-1(7-37)Lys、[Lys36Arg26、34]GLP-1(7-36)、[Aib8、22、35]GLP-1(7-37)、[Aib8，35]GLP-1(7-37)、[Aib8，22]GLP-1(7-37)、[Aib8，22，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Arg26]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg26]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Arg26]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Arg34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Arg34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Ala37]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Ala37]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Ala37]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Lys37]GLP-1(7-37)、[Aib8，35Lys37]GLP-1(7-37)和[Aib8，22Lys37]GLP-1(7-37)。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂是Exendin-4(1-39)(SEQ ID No.3)。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂是ZP-10，即[Ser38Lys39]Exendin-4(1-39)LysLysLysLysLys-酰胺(SEQ ID No.4)。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂通过在相对于氨基酸序列SEQ ID No：2(GLP-1(7-37))的位置23、26、34、36或38(对应于相对于氨基酸序列SEQ ID No：3(Exendin-4(1-39))的位置17、20、28、30或32)处的氨基酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂通过C末端氨基酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂通过选自精氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的氨基酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
在本发明的另一个实施方案中，GLP-1激动剂通过半胱氨酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
在本发明的另一个实施方案中，接头L选自二价连接化学基团
酰胺：-C(O)-NR-，其中R是氢或C1-6-烷基，
胺：-NR-，其中R是氢或C1-6-烷基，
硫醚：-S-、-S-(CH2)2-SO2-或
Figure A20048003774100231
醚：-O-，
尿烷：-N(R1)-CO-N(R2)-，其中R1和R2独立地是氢或C1-6-烷基，
氨基甲酸酯：-O-CO-N(R)-，其中R是氢或C1-6-烷基，
肼：
Figure A20048003774100232
其中R是氢或C1-6-烷基，
肟：-O-N＝C(-R)-，其中R是氢或C1-6-烷基，
唑烷或噻唑烷：
Figure A20048003774100233
R＝H或CH3，X＝S或O
                      和
Figure A20048003774100234
在本发明的另一个实施方案中，通式(I)化合物选自
GLP-1激动剂-C(＝O)CH2O(CH2)2O(CH2)2-RR-延迟蛋白、
GLP-1激动剂-C(＝O)(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白、
GLP-1激动剂-S(＝O)2(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白、
GLP-1激动剂-CH2(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白、
GLP-1激动剂-C(＝O)O(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白，
其中n是0-10的整数，并且m是0-100的整数。
在本发明的另一个实施方案中，通式(I)化合物选自
GLP-1激动剂-L-NC(＝O)CH2-延迟蛋白中的半胱氨酸残基中的硫、
GLP-1激动剂-L-S(＝O)2(CH2)2-延迟蛋白中的半胱氨酸残基中的硫、
GLP-1激动剂-L-NC(＝O)CH2-延迟蛋白中的半胱氨酸残基中的硫，和
Figure A20048003774100241
在本发明的另一个实施方案中，通式(I)化合物选自S-γ34-(1-{2-[2-(2-([D-Ala8，Lys37]-GLP-1-(7-37)酰胺-Nε37-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)
Albagen
Figure A20048003774100242
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Aib8，22，25，Lys37]-GLP-1-(7-37)酰胺-Nε37-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
和
S-γ34-((1-{2-[2-(2-([Aib8，Arg26，34，Glu22，23，30]-GLP-1-(7-37))Lys酰胺-Nε-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
Figure A20048003774100251
本发明化合物可通过经典的肽合成如用t-Boc或Fmoc化学的固相肽合成法或其它经很好地确立了的技术而制备，见例如Green和Wuts，“Protecting Groups in Organic Synthesis”，John Wiley & Sons，1999。当促胰岛素试剂是包含非天然氨基酸残基的肽时这些方法是优选的。
当促胰岛素试剂是只包含由遗传密码编码的氨基酸残基的多肽时，该多肽也可通过这样的方法生产：包括在合适的营养培养基中于允许肽表达的条件下培养含有编码多肽的DNA序列并能表达多肽的宿主细胞，之后从培养物中回收产生的肽并然后将其衍生为式(I)化合物。
用于培养该细胞的培养基可以是任何适于培育宿主细胞的常规培养基，如包含适当添加物的基本培养基或复合培养基。合适的培养基可从商业供应厂商获得或可根据公开的处方(如在美国模式培养物保藏所的目录中)制备。细胞产生的肽然后可通过常规方法从培养基回收，包括通过离心或过滤从培养基中分离宿主细胞。对于胞外产物，取决于考虑的多肽的类型，上清液的蛋白质成分可通过过滤、柱层析或沉淀，如微滤、超滤、等电沉淀，用多种色谱方法的纯化，如离子交换色谱、疏水作用色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等分离。对于胞内或胞质产物，将从培养基中分离的细胞破裂或透化并经提取以回收产物多肽或其前体。
编码治疗多肽的DNA序列可适当地为基因组或cDNA起源，可以例如根据标准技术(见，例如Sambrook，J，Fritsch，EF和Maniatis，T，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，New York，1989)通过制备基因组或cDNA文库并用合成寡核苷酸探针通过杂交筛选编码全长或部分肽的DNA序列而获得。编码多肽的DNA序列也可通过建立的标准方法，如由Beaucage和Caruthers描述的phosphoamidite方法(Tetrahedron Letters22(1981)，1859-1869)或由Matthes等描述的方法(EMBO Journal3(1984)，801-805)而合成制备。该DNA序列也可使用特异性引物通过聚合酶链式反应制备，例如按在US4,683,202或Saiki等，Science239(1988年)，487-491中描述的。
该DNA序列可插入至任何可方便地接受重组DNA操作的载体中，并且载体的选择通常会取决于其将被引入的宿主细胞。因此，该载体可以是自主复制载体，即作为染色体外的实体存在的载体，该载体的复制不依赖于染色体复制，如质粒。备选地，该载体可以是一种当将其引入宿主细胞时整合进宿主细胞基因组并与其已经整合入的染色体一起复制的载体。
该载体优选地是一种表达载体，其中编码多肽的DNA序列可操作地连接至DNA转录所需的额外片段如启动子上。启动子可以是在选择的宿主细胞中显示转录活性的任何DNA序列，并可源自编码与宿主细胞同源或异源的蛋白质的基因。用于在多种宿主细胞中指导编码本发明肽的DNA的转录的合适启动子的实例在本领域是熟知的，参见例如Sambrook等，如前所述。
如果需要，也可将编码多肽的DNA序列可操作地连接至合适的终止子、多腺苷酸化信号、转录增强子序列和翻译增强子序列。本发明的重组载体可进一步包含使该载体能在考虑的宿主细胞中复制的DNA序列。
载体还可包含选择标记，如其产物弥补宿主细胞中的缺陷的基因或赋予对药物如氨苄青霉素、卡那霉素、四环素、氯霉素、新霉素、潮霉素或甲氨蝶呤的抗性的基因。为了大规模生产，选择标记优选地不是抗生素抗性，例如当载体用于大规模生产时优选地切除载体中的抗生素抗性基因。用于从载体中去除抗生素抗性基因的方法为本领域已知，见例如US 6,358,705，将其在这里通过引用作为参考。
为了指导本发明母体肽进入宿主细胞的分泌路径，可在重组载体中提供分泌信号序列(也称为前导序列、前原序列或前序列)。在正确的阅读框内将分泌信号序列连接至编码肽的DNA序列上。分泌信号序列通常位于编码肽的DNA序列的5′端。分泌信号序列可以是通常与该肽相关的分泌信号序列或可以是来自编码另一种分泌性蛋白质的基因。
用于分别连接编码本发明肽的DNA序列、启动子和任选终止子和/或分泌信号序列并将它们插入至含有复制所需信息的合适载体的方法对本领域技术人员是熟知的(参考，例如Sambrook等，如前所述)。
引入DNA序列或重组载体的宿主细胞可以是能产生本发明肽的任何细胞并包括细菌、酵母、真菌和高等真核细胞。本领域熟知并使用的合适宿主细胞的实例是但不限于大肠杆菌(E.coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或哺乳动物BHK或CHO细胞系。
根据本发明，含有化合物的药物组合物可通过常规技术制备，例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences，1985或在Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995中描述的技术。
本发明的一个目的是提供包含以约0.1mg/ml-约25mg/ml浓度存在的根据本发明的化合物的药物制剂，并且其中所述制剂具有2.0-10.0的pH。该制剂可进一步包含缓冲系统、防腐剂、等渗剂、螯合剂、稳定剂和表面活性剂。在本发明的一个实施方案中，药物制剂是含水制剂，即包含水的制剂。这种制剂通常是溶液或混悬液。在本发明的进一步实施方案中，该药物制剂是含水溶液。将术语“含水制剂”定义为包含至少50％w/w水的制剂。同样，将术语“含水溶液”定义为包含至少50％w/w水的溶液，并且将术语“含水混悬液”定义为包含至少50％w/w水的混悬液。
在另一个实施方案中，该药物制剂是一种冻干的制剂，医师或患者在使用前向其中加入溶剂和/或稀释剂。
在另一个实施方案中，该药物制剂是一种现成使用而不需任何预先溶解的干燥制剂(例如冻干或喷雾干燥)。
在进一步方面，本发明涉及包含根据本发明的化合物的含水溶液和缓冲剂的药物制剂，其中所述化合物以0.1mg/ml或更高的浓度存在，并且其中所述的制剂具有约2.0-约10.0的pH。
在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约7.0-约9.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约3.0-约7.0。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约5.0-约7.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约7.5-约9.0。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约7.5-约8.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约6.0-约7.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约6.0-约7.0。
在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH为约3.0-约9.0，并且所述的pH是距本发明化合物的等电点pH至少2.0pH单位。
在本发明的进一步实施方案中，缓冲剂选自醋酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、双甘氨肽、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠和三(羟甲基)-氨基甲烷、N，N-二(羟乙基)甘氨酸、两性离子缓冲剂(tricine)、苹果酸、琥珀酸盐、马来酸、延胡索酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。这些特定的缓冲剂的每一种构成本发明备选的实施方案。
在本发明的进一步实施方案中，制剂进一步包含可药用防腐剂。在本发明的进一步实施方案中，防腐剂选自苯酚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2-苯乙醇、苯甲醇、三氯叔丁醇和硫柳汞、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪脲、双氯苯双胍己烷、脱氢醋酸钠、氯甲酚、对羟苯甲酸乙酯、苄索氯铵、chlorphenesine(3-对氯苯氧基丙烷-1，2-二醇)或其混合物。在本发明的进一步实施方案中，防腐剂以0.1mg/ml-20mg/ml浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，防腐剂以0.1mg/ml-5mg/ml浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，防腐剂以5mg/ml-10mg/ml浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，防腐剂以10mg/ml-20mg/ml浓度存在。这些特定的防腐剂的每一种构成本发明备选实施方案。在药物组合物中防腐剂的使用是技术人员熟知的。为方便起见，将Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995作为参考。
在本发明的进一步实施方案中，制剂进一步包含等渗剂。在本发明的进一步实施方案中，等渗剂选自盐(如氯化钠)、糖或糖醇、氨基酸(如L-甘氨酸、L-组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)、醛糖醇(如丙三醇(甘油)、1，2-丙二醇(1，2-二羟基丙烷)、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇)聚乙二醇(如PEG400)或其混合物。可使用任何糖如单糖、二糖或多糖或水溶性葡聚糖类，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、芽霉菌糖、糊精、环糊精、可溶性淀粉、羟乙基淀粉和羧甲基纤维素-Na。在一个实施方案中，糖添加剂是蔗糖。糖醇定义为具有至少一个--OH基团的C4-C8烃并包括例如甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇(galacititol)、卫矛醇、木糖醇和阿糖醇。在一个实施方案中，糖醇添加剂是甘露醇。上面提及的糖或糖醇可独立地使用或组合使用。对使用的量无固定限制，只要糖或糖醇可溶解于液体制剂并且对使用本发明方法达到的稳定效应无不利影响。在一个实施方案中，糖或糖醇的浓度在约1mg/ml和约150mg/ml之间。在本发明的进一步实施方案中，等渗剂以1mg/ml-50mg/ml的浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，等渗剂以1mg/ml-7mg/ml的浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，等渗剂以8mg/ml-24mg/ml的浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，等渗剂以25mg/ml-50mg/ml的浓度存在。这些特定的等渗剂的每一种构成本发明的备选实施方案。在药物组合物中等渗剂的使用是技术人员熟知的。为方便起见，将Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995作为参考。
在本发明的进一步实施方案中，制剂进一步包含螯合剂。在本发明的进一步实施方案中，螯合剂选自乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸和天冬氨酸的盐及其混合物。在本发明的进一步实施方案中，螯合剂以0.1mg/ml-5mg/ml的浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，螯合剂以0.1mg/ml-2mg/ml的浓度存在。在本发明的进一步实施方案中，螯合剂以2mg/ml-5mg/ml的浓度存在。这些特定的螯合剂的每一种构成本发明的备选实施方案。在药物组合物中螯合剂的使用是技术人员熟知的。为方便起见，将Remington：The Science andPractice of Pharmacy，19thedition，1995作为参考。
在本发明的进一步实施方案中，制剂进一步包含稳定剂。在药物组合物中稳定剂的使用是技术人员熟知的。为方便起见，将Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995作为参考。
更特别地，本发明组合物是经稳定的液体药物组合物，其治疗活性成分包括在以液体药物制剂存储的过程中可能表现聚集体形成的多肽。“聚集体形成”意指导致寡聚体形成的多肽分子间的物理相互作用，所述的寡聚体可保持为可溶的，或者是从溶液中沉淀的大的可见的聚集物。“存储过程中”意指液体药物组合物或制剂一旦制备，其不立即施用给受试者，而是在制备后将其以液体形式、冷冻状态或以干燥的形式包装存储，以便以后将其重新组成液体形式或适合给受试者施用的其它形式。“干燥的形式”意指将液体药物组合物或制剂通过冷冻干燥(即，冻干法；见例如Williams和Polli(1984)J.Parenteral Sci.Technol.38：48-59)、喷雾干燥(见Masters(1991)于Spray-Drying Handbook(5th ed；Longman Scientific andTechnical，Essez，U.K.)，pp.491-676中；Broadhead等(1992)Drug Devel.Ind.Pharm.18：1169-1206；和Mumenthaler等(1994)Pharm.Res.11：12-20)或风干(Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology 25：459-470；和Roser(1991)Biopharm.4：47-53)进行干燥。在液体药物组合物的存储过程中多肽的聚集体形成可不利地影响该多肽的生物学活性，导致药物组合物的治疗效力的损失。而且，聚集体形成可引起其它问题，例如当采用输注系统施用含有多肽的药物组合物时引起的管道、膜或泵的阻塞。
本发明的药物组合物可进一步包含足够能减少在组合物存储过程中多肽形成聚集体的量的氨基酸碱。“氨基酸碱”意指一种氨基酸或氨基酸组合，其中任何给定的氨基酸以其游离碱形式或以其盐的形式存在。当使用氨基酸组合时，氨基酸可以全部以它们游离碱的形式存在，可以全部以其盐形式存在，或者一些可以其游离碱的形式存在而另一些以其盐的形式存在。在一个实施方案中，用于制备本发明组合物的氨基酸是那些具有带电荷侧链的氨基酸，例如精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。特定氨基酸(如甘氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、咪唑、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸和其混合物)的任何立体异构体(即L、D或DL异构体)或这些立体异构体的组合可存在于本发明的药物组合物中，只要该特定氨基酸以其游离碱形式或以其盐形式存在。在一个实施方案中，使用L-立体异构体。本发明组合物也可用这些氨基酸的类似物配制。“氨基酸类似物”意指带来减少在本发明液体药物组合物的存储过程中由多肽引起的聚集体形成的期望效果的天然存在氨基酸的衍生物。合适的精氨酸类似物包括例如氨基胍、鸟氨酸和N-单乙基L-精氨酸，合适的甲硫氨酸类似物包括S-乙基高半胱氨酸和S-丁基高半胱氨酸并且合适的半胱氨酸类似物包括S-甲基-L半胱氨酸。如同其它氨基酸，将氨基酸类似物以其游离碱形式或以其盐的形式掺入组合物中。在本发明的进一步实施方案中，将氨基酸或氨基酸类似物以足够防止或延迟蛋白聚集的浓度使用。
在本发明的进一步实施方案中，当作为治疗剂的多肽是含有至少一个对氧化敏感的甲硫氨酸残基的多肽时，可加入甲硫氨酸(或其它含硫的氨基酸或氨基酸类似物)以抑制甲硫氨酸残基氧化为蛋氨酸亚砜。“抑制”意指使甲硫氨酸氧化的种类随时间的积聚最小。抑制甲硫氨酸氧化导致多肽更大程度保持其正常的分子形式。可使用甲硫氨酸的任何立体异构体(L、D或DL异构体)或其组合物。加入的量应该是足够能抑制甲硫氨酸残基氧化的量，这样使得蛋氨酸亚砜的量是管理机构可接受的。通常，这意味着该组合物含有不多于约10％-约30％的蛋氨酸亚砜。一般来说，这可通过加入甲硫氨酸实现，使得加入的甲硫氨酸与甲硫氨酸残基的比率为约1∶1-约1000∶1，例如10∶1-约100∶1。
在本发明的进一步实施方案中，制剂进一步含有选自高分子量聚合物或低分子量化合物的稳定剂。在本发明的进一步实施方案中，稳定剂选自聚乙二醇(如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基-/羟基纤维素或其衍生物(如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精、含硫物质如一硫代甘油、巯基乙酸和2-甲硫基乙醇以及不同的盐(例如氯化钠)。这些特定的稳定剂的每一种构成本发明的备选实施方案。
药物组合物还可包含额外的稳定剂，所述的稳定剂能进一步增强其中的治疗活性多肽的稳定性。本发明特别重要的稳定剂包括，但不限于防止多肽发生甲硫氨酸氧化的甲硫氨酸和EDTA，以及能防止多肽发生与冻融或机械剪切相关的聚集的非离子型表面活性剂。
在本发明的进一步实施方案中，制剂进一步包含表面活性剂。在本发明的进一步实施方案中，表面活性剂选自去污剂、乙氧基化蓖麻油、聚乙二醇化(polyglycolyzed)甘油酯、乙酰化单酸甘油酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯类、聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物(如泊洛沙姆类如PluronicF68、泊洛沙姆188和407、Triton X-100)、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯和聚乙烯衍生物如烷化和烷氧化衍生物(吐温类如吐温-20、吐温-40、吐温-80和Brij-35)、单酸甘油酯或其乙氧基化衍生物、甘油二酯或其聚氧乙烯衍生物、醇类、丙三醇、卵磷脂和磷脂(如磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、双磷脂酰甘油和鞘磷脂)、磷脂的衍生物(如二棕榈酰磷脂酸)和溶血磷脂的衍生物(如棕榈酰溶血磷脂酰-L-丝氨酸和乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸的1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯)以及溶血磷脂酰和磷脂酰胆碱的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)-衍生物，如溶血磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱的十二酰和十四酰衍生物，以及对极性头基的修饰，即胆碱、乙醇胺、磷脂酸、丝氨酸、苏氨酸、丙三醇、肌醇和带正电荷的DODAC、DOTMA、DCP、BISHOP、溶血磷脂酰丝氨酸和溶血磷脂酰苏氨酸，以及甘油磷脂类(如脑磷脂)、甘油糖脂(如吡喃半乳糖苷)、鞘糖脂(如神经酰胺，神经节苷脂)、十二烷基磷酸胆碱、鸡蛋溶血卵磷脂、夫西地酸衍生物-(例如牛磺二氢夫西地酸钠等)、长链脂肪酸及其盐C6-C12(例如油酸和辛酸)、酰基肉碱和衍生物、赖氨酸、精氨酸或组氨酸的Nα-酰化衍生物或赖氨酸或精氨酸的侧链酰化衍生物、含有赖氨酸、精氨酸或组氨酸和中性或酸性氨基酸的任意组合的二肽的Nα-酰化衍生物、含有中性氨基酸和两个带电荷氨基酸的任意组合的三肽的Nα-酰化衍生物、DSS(多库酯钠，CAS登录号[577-11-7])、多库酯钙，CAS登录号[128-49-4])、多库酯钾，CAS登录号[7491-09-0])、SDS(十二烷基硫酸钠或月桂硫酸钠)、辛酸钠、胆酸或其衍生物、胆汁酸及其盐和甘氨酸或牛磺酸缀合物、熊脱氧胆酸、胆酸钠、去氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、甘胆酸钠、N-十六烷基-N，N-二甲基-3-铵-1-丙磺酸盐、阴离子(烷基-芳基-磺酸酯)单价表面活性剂、两性离子表面活性剂(例如N-烷基-N，N-二甲基铵-1-丙磺酸盐、3-胆氨基-1-丙基二甲基铵-1-丙磺酸盐)、阳离子表面活性剂(季铵碱)(例如十六烷基-三甲基溴化铵、氯化十六烷基吡啶)、非离子表面活性剂(例如十二烷基β-D-吡喃葡糖苷)、poloxamines(例如Tetronic’s)，所述的poloxamine类是四官能嵌段共聚物，源于相继加入环氧丙烷和环氧乙烷至乙二胺，或表面活性剂可选自咪唑啉衍生物或其混合物。这些特定的表面活性剂的每一种构成本发明的备选实施方案。
药物组合物中表面活性剂的使用是技术人员熟知的。为方便起见，将Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995作为参考。
本发明的肽药物制剂中存在其它成分是可能的。这些额外的成分可包括润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、填充剂、张力调节剂、螯合剂、金属离子、油脂性媒介物、蛋白(如人血清白蛋白、明胶或蛋白质)和两性离子(例如，氨基酸如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。当然，这些额外的成分不应该不利地影响本发明药物制剂的整体稳定性。
含有根据本发明化合物的药物组合物可以在多个位点，例如在局部位点如皮肤和粘膜位点，在绕过吸收的位点如在动脉、静脉、心脏中施用，以及在参与吸收的位点如在皮肤中、皮下、肌肉中或在腹部中施用而施用给需要这种治疗的患者。
根据本发明的药物组合物的施用可通过多种给药途径，例如舌的、舌下的、口腔含化的、口中的、经口的、在胃和肠中、鼻、肺如通过细支气管和肺泡或其组合、表皮的、真皮的、经皮肤的、阴道的、直肠的、眼睛的(例如通过结膜)、输尿管的和肠胃外的途径施用给需要该治疗的患者。
在一方面，本发明涉及含有根据式(I)的化合物以及可药用赋形剂的药物组合物。
在一个实施方案中，该药物组合物适于肺部施用。
在另一个方面，本发明涉及使用式(I)化合物用于制备肺部药物。
本发明组合物可以以多种剂型例如作为溶液、混悬剂、乳剂、微乳剂、多层乳剂、泡沫、油膏剂、泥膏剂、膏剂、软膏剂、片剂、包衣片剂、冲洗剂、胶囊剂例如硬明胶胶囊剂和软明胶胶囊剂、栓剂、直肠用胶囊剂、滴剂、凝胶剂、喷雾剂、粉剂、气雾剂、吸入剂、滴眼剂、眼膏、眼用冲洗剂、阴道栓剂、阴道环、阴道软膏剂、注射液、原位转化液例如原位凝胶化、原位固定、原位沉淀、原位结晶、输液剂和埋植剂施用。
本发明组合物可进一步例如通过共价、疏水和静电相互作用与药物载体、药物递送系统和高级药物递送系统复合或连接以便进一步增强化合物的稳定性，提高生物利用率、增加溶解度、降低不利效应、达到本领域那些技术人员熟知的时间治疗，并且增强患者依从性或其任何组合。载体、药物递送系统和高级药物递送系统的实例包括但不限于聚合物如纤维素和其衍生物、多糖如葡聚糖和其衍生物、淀粉和其衍生物、聚(乙烯醇)、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯聚合物、聚乳酸和聚乙醇酸及其嵌段共聚物、聚乙二醇、载体蛋白如白蛋白、凝胶如热凝胶系统(thermogelling system)如本领域那些技术人员熟知的嵌段共聚体系统、胶束、脂质体、微球体、纳米微粒、液晶和其分散体、L2相和其分散体(脂-水系统中相行为领域的技术人员熟知的)，高分子胶束、多层乳剂、自乳化、自微乳化、环糊精和其衍生物，以及树状高分子。
本发明组合物可用于配制用于肺部施用化合物的固体、半固体、粉末和溶液，其中肺部施用是使用例如计量剂量吸入器、干粉吸入器和喷雾器进行，所有都是本领域那些技术人员熟知的装置。
本发明的组合物可特别用于受控制的、持续、延长的、迟缓性和缓慢释放递药系统的配制。更特别地，但不限于，组合物可用于制备本领域那些技术人员熟知的肠胃外控制释放制剂和持续释放系统(两个系统都导致施用次数减少许多倍)。甚至更优选的是经皮下施用的控制释放系统和持续释放系统。不用于限制本领域的范围，有用的控制释放系统和组合物的实例是水凝胶、油脂性凝胶、液晶、高分子胶束、微球、纳米微粒。
生产用于本发明组合物的控制释放系统的方法包括，但不限于结晶、浓缩、共结晶、沉淀、协同沉淀、乳化、分散、高压匀化、胶囊化、喷雾干燥、微胶囊化、凝聚、相分离、溶剂蒸发以产生微球、挤出和超临界流体方法。一般参考Handbook of PharmaceuticalControlled Release(Wise，D.L.，ed.Marcel Dekker，New York，2000)和Drug and the Pharmaceutical Sciences vol.99：ProteinFormulation and Delivery(MacNally，E.J.，ed.Marcel Dekker，New York，2000)。
可使用注射器任选笔式注射器通过皮下的、肌内的、腹膜内的或静脉内的注射完成肠胃外施用。备选地，肠胃外施用可通过输注泵的方式进行。进一步的选择是一种组合物，所述的组合物可以是用于以鼻或肺喷雾剂形式施用根据本发明化合物的溶液或混悬液。作为更进一步的选择，含有本发明化合物的药物组合物也能适合经皮肤施用，例如通过无针注射或通过贴剂，任选离子电渗疗法药贴，或经粘膜如口腔含化施用。
术语“经稳定的制剂”指具有增强的物理稳定性、增强的化学稳定性或增强的物理和化学稳定性的制剂。
如此处使用的术语蛋白制剂的“物理稳定性”指该蛋白由于其暴露于热-机械应力下和/或与去稳定的界面和表面如疏水表面和界面相互作用而形成生物失活和/或不溶的蛋白聚集物的倾向性。含水的蛋白质制剂的物理稳定性可通过在不同的温度下将置于合适容器(如药筒或管形瓶)中的制剂暴露于机械/物理应力(如搅拌)下不同的时间后通过视觉检查和/或浊度测量来评估。制剂的视觉检查在具有黑暗背景的强烈聚焦的光下进行。制剂的浊度由视觉打分分级混浊程度表征，如以0-3的等级(未显示混浊的制剂相当于视觉打分0，而在日光下显示可见的混浊的制剂相当于视觉打分3)来表征。当制剂在日光下显示可见的混浊度时，在蛋白聚集方面将制剂分类为物理不稳定。备选地，制剂的浊度可通过技术人员熟知的简单浊度测量法评估。含水蛋白质制剂的物理学稳定性也可通过使用蛋白构象状态的光谱剂(spectroscopic agent)或探针来评估。该探针优选地为优先结合至蛋白的非天然构象异构体的小分子。蛋白质结构的小分子光谱探针(spectroscopic probe)的一个实例是Thioflavin T。Thioflavin T是已经广泛用于检测淀粉样蛋白原纤维的荧光染料。存在原纤维以及或许其它蛋白质构型时，Thioflavin T在其结合至原纤维蛋白形式时产生在约450nm下新的激发最大值和约482nm下的增强发射。未结合的Thioflavin T在这些波长下基本上是无荧光的。
其它小分子可用作蛋白质结构从天然到非天然状态的变化的探针。例如，优先地结合至蛋白暴露的疏水斑的“疏水斑”探针。疏水斑通常是包埋于天然状态蛋白的三级结构中，但当蛋白开始去折叠或变性时其变为暴露在外。这些小分子光谱探针的实例是芳族的疏水染料如蒽、吖啶、二氮杂菲等。其它光谱探针是金属氨基酸复合物例如疏水氨基酸如苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸和缬氨酸等的钴金属复合物。
如此处使用的术语蛋白质制剂的“化学稳定性”指蛋白结构中的化学共价变化，其中所述的这种变化导致具有较天然蛋白结构潜在较小的生物学效力和/或潜在增加的免疫原特性的化学降解产物的形成。取决于天然蛋白的类型和性质以及该蛋白质暴露的环境，可形成多种化学降解产物。化学降解的消除常常不可能完全避免并且在存储和使用蛋白质制剂过程中通常可见化学降解产物的量增加，这是本领域技术人员熟知的。多数蛋白质易于脱酰胺作用，即谷氨酰胺酰或天冬酰胺酰残基中的侧链酰胺基水解形成游离羧酸的过程。其它降解途径包括高分子量的转化产物的形成，其中两个或多个蛋白分子通过转酰胺基作用和/或二硫化物相互作用彼此共价结合导致形成共价结合二聚体、寡聚体和多聚体降解产物的形成(Stability of ProteinPharmaceuticals，Ahern.T.J.&Manning M.C.，Plenum Press，New York 1992)。氧化(例如甲硫氨酸残基的氧化)可认为是化学降解的另一种变体。蛋白制剂的化学稳定性可通过在其暴露于不同的环境条件(降解产物的形成通常可通过例如增加温度来加速)下后，在不同的时间点测量化学降解产物的量来评估。每种独立的降解产物的量通常可根据分子大小和/或电荷使用多种色谱技术(如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)分离降解产物而测定。
因此，按上面描述，“经稳定的制剂”指具有增强的物理稳定性、增强的化学稳定性或增强的物理和化学稳定性的制剂。通常，制剂在使用和存储过程中(按照建议的使用和存储条件)必须是稳定的，直到达到有效期满。
在本发明的一个实施方案中，含有根据本发明化合物的药物制剂对于6周以上的使用和3年以上的存储是稳定的。
在本发明的另一个实施方案中，含有根据本发明化合物的药物制剂对于4周以上的使用和3年以上的存储是稳定的。
在本发明进一步的实施方案中，含有根据本发明化合物的药物制剂对于4周以上的使用和2年以上的存储是稳定的。
在本发明更进一步的实施方案中，含有该化合物的药物制剂对于2周以上的使用和2年以上的存储是稳定的。
在另一方面，本发明涉及使用根据本发明的化合物用于制备药物。
在一个实施方案中，将根据本发明的化合物用于制备治疗或预防高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管障碍、中风、炎性肠综合征、消化不良和胃溃疡的药物。
在另一个实施方案中，将根据本发明的化合物用于制备延缓或预防2型糖尿病疾病进展的药物。
在另一个实施方案中，将根据本发明的化合物用于制备减少食物摄取、减少β-细胞凋亡、增强β-细胞功能和增加β-细胞群和/或恢复β-细胞的葡萄糖敏感性的药物。
使用根据本发明的化合物的治疗也可与第二种或更多种药理学活性物质联合，例如选自抗糖尿病剂、减肥药、食欲调节剂、抗高血压剂、用于治疗和/或预防由糖尿病引发或与其相关的并发症的药物以及用于治疗和/或预防由肥胖症引发或与其相关的并发症和障碍的药物的药理学活性物质。这些药理学活性物质的实例是：胰岛素、磺脲类、双胍类、氯茴苯酸类、葡萄糖苷酶抑制剂、胰高血糖素拮抗剂、DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制剂、涉及刺激糖异生和/或糖原分解的肝酶的抑制剂、葡萄糖摄取调节剂、调节脂类代谢的化合物如抗高血脂药物如HMG CoA抑制剂(抑制素类)、降低食物摄取的化合物、RXR激动剂和作用于β-细胞ATP-依赖性钾通道的药剂；消胆胺、降脂宁、降固醇酸、吉非贝齐、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普罗布考、右旋甲状腺素、neteglinide、瑞格列奈；β-阻滞剂如阿普洛尔、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔和美托洛尔、ACE(血管紧张素转换酶)抑制剂如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、alatriopril、喹那普利和雷米普利、钙通道阻滞剂如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地尔硫卓和维拉帕米以及α-阻滞剂如多沙唑嗪、乌拉地尔、哌唑嗪和特拉唑嗪；CART(可卡因安非他明调节的转录物)激动剂、NPY(神经肽Y)拮抗剂、MC4(黑皮质素4)激动剂、阿立新拮抗剂、TNF(肿瘤坏死因子)激动剂、CRF(促肾上腺皮质激素释放因子)激动剂、CRF BP(促肾上腺皮质激素释放因子结合蛋白)拮抗剂、urocortin激动剂、β3激动剂、MSH(促黑激素)激动剂、MCH(黑素细胞凝集激素)拮抗剂、CCK(胆囊收缩素)激动剂、5-羟色胺重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂、混合的5-羟色胺和去甲肾上腺素能化合物、5HT(5-羟色胺)激动剂、铃蟾肽激动剂、促生长激素神经肽拮抗剂、生长激素、生长激素释放化合物、TRH(促甲状腺激素释放激素)激动剂、UCP2或3(解偶联蛋白2或3)调质、来普汀激动剂、DA激动剂(溴麦角环肽、doprexin)、脂酶/淀粉酶抑制剂、RXR(类维生素AX受体)调质、TRβ激动剂；组胺H3拮抗剂。
应该理解，根据本发明的化合物与一种或多种上面提及的化合物及任选地一种或多种另外的药理学活性物质的任何合适的组合可认为是在本发明范围内。
本发明通过下面的实施例进一步阐述，然而，所述的实施例不能认为是用作限制专利保护的范围。在前面描述和下面的实施例中公开的特征，分别地和以其任何组合，可以是用于以其不同形式实现本发明的材料。
在另一方面，本发明涉及含有根据通式(I)的化合物和可药用防腐剂的药物组合物。
在本发明的一个实施方案中，药物组合物含有根据通式(I)的化合物和可药用稳定剂。
在本发明的另一个实施方案中，药物组合物适于肠胃外施用。
在另一方面，本发明涉及根据通式(I)的化合物在药物制备中的用途。
实施例
一般方法(A)
一般的合成方法
使用制造商提供的FastMoc UV方案，以0.25mmol规模，用Applied Biosystems 433A肽合成仪，在采用Fmoc策略进行Fmoc保护的Rink酰胺树脂(Novabiochem)或氯三苯甲基树脂上合成肽，其中所述的方案采用HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基-)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐)介导的在N-甲基吡咯烷酮中的偶合并用紫外线监测Fmoc保护基团的去保护。除了非天然氨基酸如Fmoc-Aib-OH(Fmoc-氨基异丁酸)以外，使用的经保护氨基酸衍生物是装在适于ABI433A合成仪的预称量药筒中的标准Fmoc-氨基酸(Anaspec)。
侧链和接头连接至粗制树脂结合的经保护肽上的特定赖氨酸残基是在自动合成过程中通过整合Fmoc-Lys(Dde)-OH在特定位置完成。
去除Dde-保护的方法。将树脂(0.25mmol)置于一个手动振荡器/过滤装置中并用N-甲基吡咯烷酮中的2％肼(20ml，2×12分钟)处理以除去DDE基团并用N-甲基吡咯烷酮(4×20ml)洗涤。
将侧链连接至赖氨酸残基的方法。
将氨基酸(相对于树脂4摩尔当量)溶解于N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1∶1，20ml)中。加入羟基苯并三唑(HOBt)(相对树脂4摩尔当量)和二异丙基碳二亚胺(相对树脂4摩尔当量)并将溶液搅拌15分钟。将该溶液加入至树脂并加入二异丙基乙胺(相对树脂4摩尔当量)。于室温将树脂振荡24小时。用N-甲基吡咯烷酮(2×20ml)、N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1∶1)(2×20ml)和二氯甲烷(2×20ml)洗涤树脂。
去除Dde-保护的方法：将树脂(0.25mmol)置于手动振荡器中的吸滤瓶中并用N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1∶1)(2×20ml)和用N-甲基吡咯烷酮(1×20ml)处理，在N-甲基吡咯烷酮中的20％哌啶溶液(3×20ml，每次10分钟)。用N-甲基吡咯烷酮(2×20ml)、N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1∶1)(2×20ml)和二氯甲烷(2×20ml)洗涤树脂。
将肽从树脂裂解的方法：
通过于室温将树脂与三氟乙酸、水和三异丙基硅烷(95∶2.5∶2.5)的混合物搅拌180分钟将肽从树脂裂解。过滤裂解混合物并通过氮气流将滤出液浓缩为油状产物。用45ml乙醚将粗制肽从该油状产物中沉淀出并用45ml乙醚洗涤3次。
纯化：在填充有7μC-18硅石的20mm×250mm柱上通过半制备HPLC纯化该肽粗产物。取决于肽，使用一个或两个纯化系统。
TFA：干燥后，将肽粗产物溶解于5ml 50％乙酸水溶液中，并用H2O将其稀释至20ml并且注射至柱上，随后于40℃在50分钟内以10ml/分钟用0.1％TFA中的40-60％CH3CN的梯度洗脱该柱。收集含有肽的级分。用水稀释洗脱物后冻干纯化的肽。
硫酸铵：用在以浓H2SO4调节至pH2.5的0.05M(NH4)2SO4中的40％CH3CN平衡该柱。干燥后，将肽粗产物溶解于5ml 50％乙酸水溶液中，并用H2O将其稀释至20ml并且注射至柱上，随后于40℃在50分钟内以10ml/分钟用0.05M(NH4)2SO4中的40-60％CH3CN的梯度洗脱该柱。收集含有肽的级分并用3体积水稀释，并且使其通过已经用0.1％TFA平衡过的Sep-PakC18柱体(Waters part.#：51910)。随后用含0.1％TFA的70％CH3CN将其洗脱并在用水稀释洗脱物后通过冻干分离纯化的肽。
获得的终产物通过分析RP-HPLC(保留时间)和LCMS表征。
在214nm用UV检测并使用于42℃以1ml/分钟洗脱的Vydac218TP54 4.6mm×250mm 5μC-18硅柱(The Separations Group，Hesperia，USA)进行RP-HPLC分析。使用两种不同的洗脱条件：
A1：在由浓H2SO4调节至pH 2.5的0.1M(NH4)2SO4组成的缓冲液中平衡该柱并在相同的缓冲液中用0％-60％CH3CN梯度洗脱50分钟。
B1：用0.1％TFA/H2O平衡该柱并用0％CH3CN/0.1％TFA/H2O-60％CH3CN/0.1％TFA/H2O的梯度洗脱50分钟。
B6：用0.1％TFA/H2O平衡该柱并用0％CH3CN/0.1％TFA/H2O-90％CH3CN/0.1％TFA/H2O的梯度洗脱50分钟。
LCMS在由Hewlett Packard1100系列G1312A Bin Pump、HewlettPackard 1100系列柱室、Hewlett Packard 1100系列G1315A DAD二极管阵列检测器、Hewlett Packard 1100系列MSD和经HPChemstation软件控制的Sedere75蒸发光散射检测器组成的装置中实施。HPLC泵连接至两个洗脱剂贮液器，其中含有：
A：水中的10mM NH4OH
B：90％乙腈中的10mM NH4OH
于23℃通过将适当体积的样品(优选为20μl)注入至用A和B的梯度洗脱的柱上进行分析。
使用的HPLC条件、检测器设置和质谱仪设置在下面的表中给出。
柱Waters Xterra MS C-18X 3mm id 5μm
梯度在6.5分钟内以1.5ml/分钟使用5％-100％的乙腈线性梯度
检测210nm(从DAD模拟输出)
ELS(从ELS模拟输出)
MS 电离模式API-ES。扫描100-1000amu步长0.1amu
基质辅助激光解吸附电离质谱分析(MALDI-MS)在配备有氮激光(337nm)的Voyager RP MALDI-TOF仪器(Perseptive Biosystems公司Framingham，MA)上进行。通过延迟提取以线性模式操作该仪器，并且离子源中的加速电压是25kV。如下完成样品的制备：将1μl样品溶液(0.5-1.0mg/ml)与10μl基质溶液(芥子酸溶解于乙腈∶水∶3％TFA的5∶4∶1混合物中)混合并将1μl放置于样品板上并让其干燥。
因为使用的常规肽标准是在低分子量范围内并不足以确保正确测定在血清白蛋白范围的质量(＞60KDa)，仅进行外部校准。因此，测定的绝对质量值只在0.2％精确度内。
实施例1(NNC 0113-0040，KHBg)
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([D-Ala8、Lys37]-GLP-1-(7-37)酰胺-Nε37-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
Figure A20048003774100431
根据制造商指导方针在ABI433A机器上用树脂(Rink酰胺，0.68mmol/g Novabiochem 0.25mmol)生产基本序列。除位置37处使用的残基(FmocLys(ivDde)-OH，Novabiochem)之外所有的保护基团都是酸不稳定的，使得该赖氨酸特定地去保护而不是任何其它赖氨酸。
步骤
将树脂(0.25mmol)置于手动振荡器/过滤装置中并用N-甲基吡咯烷酮中的2％肼(2×12分钟，2×20ml)处理以去除Dde基团。用N-甲基吡咯烷酮(4×20ml)洗涤该树脂。将Fmoc-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸(Neosystem FA03202)(相对树脂4摩尔当量)溶解于N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1∶1，20ml)中。加入羟基苯并三唑(HOBt)(相对树脂4摩尔当量)和二异丙基碳二亚胺(相对树脂4摩尔当量)并将该溶液搅拌15分钟。将该溶液加入至树脂并加入二异丙基乙胺(相对树脂4摩尔当量)。于室温振荡该树脂24小时。用N-甲基吡咯烷酮(4×20ml)洗涤该树脂。在振荡同时将N-甲基吡咯烷酮中的20％哌啶溶液(3×20ml，每次10分钟)加入至该树脂。用N-甲基吡咯烷酮(4×20ml)洗涤该树脂。将3-马来酰亚胺丙酸(相对树脂4摩尔当量)溶解于N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1∶1，20ml)中。加入羟基苯并三唑水合物(HOBt；H2O)(相对树脂4摩尔当量)和二异丙基碳二亚胺(相对树脂4摩尔当量)并将该溶液搅拌15分钟。将该溶液加入至树脂并加入二异丙基乙胺(相对树脂4摩尔当量)。于室温振荡该树脂24小时。用N-甲基吡咯烷酮(2×20ml)、N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1∶1)(2×20ml)和二氯甲烷(2×20ml)洗涤该树脂。通过于室温将树脂与三氟乙酸、水和三异丙基硅烷(95∶2.5∶2.5)的混合物搅拌180分钟将肽从树脂裂解。过滤裂解混合物并通过氮气流将滤出液浓缩为油状产物。用45ml乙醚将肽粗产物从该油状产物中沉淀出并用45ml乙醚洗涤3次。在填充有7μC-18硅石的20mm×250mm柱上通过半制备HPLC纯化该肽粗产物。将肽粗产物溶解于5ml50％乙酸水溶液中，并用H2O将其稀释至20ml并且注射至柱上，随后于40℃在50分钟内以10ml/分钟用40-60％(在含有0.1％TFA的水中的CH3CN)的梯度洗脱该柱。收集含有肽的级分。用水稀释洗脱液后冻干纯化的肽得到Nε37-(2-(2-(3-(马来酰亚胺基)丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙酰基)[D-Ala8，Lys37]GLP-1(7-37)酰胺。
HPLC：(方法B6)：RT＝36.8分钟
HPLC：(方法A1)：RT＝35.1分钟
LCMS：m/z＝931.4(M+H)4+，1241.5(M+H)3+。
计算出的(M+H)+＝3722.1
将冷冻干燥的Nε37(2-(2-(3-(马来酰亚胺基)丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙酰基)[D-Ala8，Lys37]GLP-1(7-37)酰胺溶解于10μl 10％的乙酸中，并加800μl在50mM NaPi pH 7.0+4％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)中的40mg/ml Albagen(New CenturyPharma)，并且于周围环境温度搅拌2小时。随后，缓慢加入固体硫酸铵达到2M终浓度。以总体积为1ml在ResourceTM HIC ISO上纯化该缀合物。保持1ml/分钟的流速。缓冲液：50mM NaPi pH 7.0+4％HP-β-CD。用2M-0M的硫酸铵梯度经20柱体积将Albagen从该缀合物中分离。色谱显示两个洗脱峰。第一个峰归于Albagen，第二个峰含有该缀合物。浓缩该缀合物，并在centriprepTM装置上以30,000Da的MW截断值将其从未反应的类似物中分离。总产率是25-35％。通过肽作图法测定缀合位点为Cys-34。
MALDI得出质量为70023Da。
缀合物的理论分子量是70046Da。
实施例2
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Aib8，22，25，Lys37]-GLP-1-(7-37)酰胺-Nε37-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
该化合物如实施例1制备。
GLP1前体的数据
HPLC：(方法B1)：RT＝38.5分钟
HPLC：(方法A1)：RT＝36.9分钟
LCMS：m/z＝949.0(M+H)4+，1264.9(M+H)3+。
计算出的(M+H)+＝3792.2
Figure A20048003774100451
MALDI得出的质量为70102Da。
缀合物的理论分子量是70116Da。
实施例3
S-γ34-((1-{2-[2-(2-([Aib8，Arg26，34，Glu22，23，30]-GLP-1-(7-37))Lys酰胺-Nε-基)乙酰氧基乙氧基]乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
该化合物如实施例1制备。
GLP1-前体的数据
HPLC：(方法B1)：RT＝36.5分钟
HPLC：(方法A1)：RT＝34.9分钟
LCMS：m/z＝(M+H)3+＝1327.8计算出的(M+H)+＝3980.3
Figure A20048003774100461
MALDI得出质量为70208Da。
缀合物的理论分子量是70304Da。
实施例4
根据实施例1中描述的方法合成的其它化合物是：
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Lys32]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε32-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白。(其中白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))。
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Lys20]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε20-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白。(其中白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))。
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Arg12，Lys27]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε27-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白。(白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))。
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Arg12，27，Lys32]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε32-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白。(白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))。
                  序列表
<110>Novo Nordisk A/S
<120>与白蛋白样物质相连的新GLP-1类似物
<130>6790
<160>1
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>585
<212>PRT
<213>智人(homo sapiens)
<400>1
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1               5                   10                  15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
            20                  25                  30
Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
        35                  40                  45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
    50                  55                  60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65                  70                  75                  80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
                85                  90                  95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
            100                 105                 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
        115                 120                 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
    130                 135                 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145                 150                 155                 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
                165                 170                 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
            180                 185                 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
        195                 200                 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
    210                 215                 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225                 230                 235                 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
                245                 250                 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
            260                 265                 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
        275                 280                 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
    290                 295                 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305                 310                 315                 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
                325                 330                 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
            340                 345                 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
        355                 360                 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
    370                 375                 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385                 390                 395                 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
                405                 410                 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
            420                 425                 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
        435                 440                 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
    450                 455                 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465                 470                 475                 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
                485                 490                 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
            500                 505                 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
        515                 520                 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
    530                 535                 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545                 550                 555                 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
                565                 570                 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu
            580                 585
<210>2
<211>31
<212>PRT
<213>智人
<400>2
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
            20                  25                  30
<210>3
<211>39
<212>PRT
<213>钝尾毒蜥(heloderma suspectum)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)..(39)
<223>羧基酰胺化
<400>3
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
            20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
        35
<210>4
<211>40
<212>PRT
<213>合成构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>1位的Xaa为L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，N-α-乙酰基-组氨酸，α-氟甲基-组氨酸，α-甲基-组氨酸，3-吡啶基丙氨酸，2-吡啶基丙氨酸，或4-吡啶基丙氨酸.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>2位的Xaa为Ala，D-Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Lys，Aib，(1-氨基环丙基)羧酸，(1-氨基环丁基)羧酸，(1-氨基环戊基)羧酸，(1-氨基环己基)羧酸，(1-氨基环庚基)羧酸或(1-氨基环辛基)羧酸.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>10位的Xaa为Val或Leu.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(12)..(12)
<223>12位的Xaa为Ser，Lys或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(13)..(13)
<223>13位的Xaa为Tyr或Gln.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(14)..(14)
<223>14位的Xaa为Leu或Met.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(16)..(16)
<223>16位的Xaa为Gly，Glu或Aib.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(17)..(17)
<223>17位的Xaa为Gln，Glu，Lys或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(19)..(19)
<223>19位的Xaa为Ala或Val.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(20)..(20)
<223>20位的Xaa为Lys，Glu或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(21)..(21)
<223>21位的Xaa为Glu或Leu.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(24)..(24)
<223>24位的Xaa为Ala，Glu或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(27)..(27)
<223>27位的Xaa为Val或Lys.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(28)..(28)
<223>28位的Xaa为Lys，Glu，Asn或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(29)..(29)
<223>29位的Xaa为Gly或Aib.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(30)..(30)
<223>30位的Xaa为Arg，Gly或Lys.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(31)..(31)
<223>31位的Xaa为Gly，Ala，Glu，Pro，Lys，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(32)..(32)
<223>32位的Xaa为Lys，Ser，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(33)..(33)
<223>33位的Xaa为Ser，Lys，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(34)..(34)
<223>34位的Xaa为Gly，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(35)..(35)
<223>35位的Xaa为Ala，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(36)..(36)
<223>36位的Xaa为Pro，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(37)..(37)
<223>37位的Xaa为Pro，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(38)..(38)
<223>38位的Xaa为Pro，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(39)..(39)
<223>39位的Xaa为Ser，酰胺或不存在.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(40)..(40)
<223>40位的Xaa为酰胺或不存在.
<400>4
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Xaa
1               5                   10                  15
Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
            20                  25                  30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
        35                  40
<210>5
<211>32
<212>PRT
<213>合成构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>1位的Xaa为L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，N-α-乙酰基-组氨酸，α-氟甲基-组氨酸，α-甲基-组氨酸，3-吡啶基丙氨酸，2-吡啶基丙氨酸，或4-吡啶基丙氨酸.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>2位的Xaa为Ala，D-Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Lys，Aib，(1-氨基环丙基)羧酸，(1-氨基环丁基)羧酸，(1-氨基环戊基)羧酸，(1-氨基环己基)羧酸，(1-氨基环庚基)羧酸或(1-氨基环辛基)羧酸.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(12)..(12)
<223>12位的Xaa为Ser，Lys或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(16)..(16)
<223>16位的Xaa为Gly，Glu或Aib.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(17)..(17)
<223>17位的Xaa为Gln，Glu，Lys或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(20)..(20)
<223>20位的Xaa为Lys，Glu或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(24)..(24)
<223>24位的Xaa为Ala，Glu或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(28)..(28)
<223>28位的Xaa为Lys，Glu或Arg.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(29)..(29)
<223>29位的Xaa为Gly或Aib.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(30)..(30)
<223>30位的Xaa为Arg或Lys.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(31)..(31)
<223>31位的Xaa为Gly，Ala，Glu或Lys.
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(32)..(32)
<223>32位的Xaa为Lys，酰胺或不存在.
<400>5
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Xaa Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Xaa Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
            20                  25                  30

Claims (43)

1.通式(I)化合物：
GLP-1激动剂-L-RR-延迟蛋白           (I)
其中
GLP-1激动剂是为人GLP-1受体激动剂的多肽，
L是连接所述GLP-1激动剂的氨基酸侧链或所述GLP-1激动剂的C末端氨基酸残基与RR的接头，
RR是已经与延迟蛋白的氨基酸残基形成共价键的反应性残基的剩余部分，并且
延迟蛋白是一种具有至少5kDa摩尔重量、在人血浆中具有至少24小时血浆半衰期的蛋白，并且所述的延迟蛋白通过非哺乳动物生物体合成或合成性合成。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述的延迟蛋白是重组人血清白蛋白(SEQ ID NO 1)。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述的延迟蛋白是人血清白蛋白变体。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中当与人血清白蛋白对铜和镍的相应结合亲和力相比时所述人血清白蛋白变体对铜和镍的结合亲和力降低。
5.根据权利要求3-4任意之一所述的化合物，其中所述的延迟蛋白是人血清白蛋白的N-末端片段或其类似物。
6.根据权利要求3-5任意之一所述的化合物，其中所述的延迟蛋白是包含Asp-Ala-His-Lys N-末端序列修饰的人血清白蛋白变体。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中所述的延迟蛋白在三个N-末端氨基酸残基Asp-Ala-His之中包含至少一处缺失。
8.根据权利要求6所述的化合物，其中所述的延迟蛋白包含N-末端延伸，例如Glu-3，Ala-2Glu-1，Phe0-HSA(1-585)或其N-末端片段。
9.根据权利要求6-7任意之一所述的化合物，其中所述的人血清白蛋白(HSA)变体选自HSA(2-585)、HSA(3-585)、HSA(4-585)、Asp-Ala-HSA(4-585)、Xaa3-HSA(1-585)及其N-末端片段，其中所述的Xaa3是已置换在天然HSA中占据位置3的His残基的氨基酸残基。
10.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的延迟蛋白包含60-200个氨基酸残基如100-150个氨基酸残基的氨基酸序列，并且所述的氨基酸序列与SEQ ID NO 1的片段或与有一处或两处氨基酸置换和/或缺失的SEQ ID NO 1的片段相同。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中所述的延迟蛋白是免疫球蛋白的Fc部分、其类似物或片段。
12.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂与GLP-1(7-37)(SEQ ID NO 2)或Exendin-4(1-39)(SEQ IDNO 3)具有至少50％的氨基酸同源性。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂与GLP-1(7-37)(SEQ ID NO 2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID NO 3)具有至少80％的氨基酸同源性。
14.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂包含式(II)的氨基酸序列：
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46
式(II)(SEQ ID No：4)
其中
Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、β-羟基-组氨酸、高组氨酸、Nα-乙酰基-组氨酸、α-氟甲基-组氨酸、α-甲基-组氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；
Xaa8是Ala、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Lys、Aib、(1-氨基环丙基)羧酸、(1-氨基环丁基)羧酸、(1-氨基环戊基)羧酸、(1-氨基环己基)羧酸、(1-氨基环庚基)羧酸或(1-氨基环辛基)羧酸；
Xaa16是Val或Leu；
Xaa18是Ser、Lys或Arg；
Xaa19是Tyr或Gln。
Xaa20是Leu或Met；
Xaa22是Gly、Glu或Aib；
Xaa23是Gln、Glu、Lys或Arg；
Xaa25是Ala或Val；
Xaa26是Lys、Glu或Arg；
Xaa27是Glu或Leu；
Xaa30是Ala、Glu或Arg；
Xaa33是Val或Lys；
Xaa34是Lys、Glu、Asn或Arg；
Xaa35是Gly或Aib；
Xaa36是Arg、Gly或Lys；
Xaa37是Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、酰胺或不存在；
Xaa38是Lys、Ser、酰胺或不存在。
Xaa39是Ser、Lys、酰胺或不存在；
Xaa40是Gly、酰胺或不存在；
Xaa41是Ala、酰胺或不存在；
Xaa42是Pro、酰胺或不存在；
Xaa43是Pro、酰胺或不存在；
Xaa44是Pro、酰胺或不存在；
Xaa45是Ser、酰胺或不存在；
Xaa46是酰胺或不存在；
条件是如果Xaa38、Xaa39、Xaa40、Xaa41、Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45或Xaa46不存在，则下游每个氨基酸残基也不存在。
15.根据权利要求14所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂包含式(III)的氨基酸序列：
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38
式(III)(SEQ ID No：5)
其中
Xaa7是L-组氨酸、D-组氨酸、脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、β-羟基-组氨酸、高组氨酸、Nα-乙酰基-组氨酸、α-氟甲基-组氨酸、α-甲基-组氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；
Xaa8是Ala、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Lys、Aib、(1-氨基环丙基)羧酸、(1-氨基环丁基)羧酸、(1-氨基环戊基)羧酸或(1-氨基环己基)羧酸、(1-氨基环庚基)羧酸或(1-氨基环辛基)羧酸；
Xaa18是Ser、Lys或Arg；
Xaa22是Gly、Glu或Aib；
Xaa23是Gln、Glu、Lys或Arg；
Xaa26是Lys、Glu或Arg；
Xaa30是Ala、Glu或Arg；
Xaa34是Lys、Glu或Arg；
Xaa35是Gly或Aib；
Xaa36是Arg或Lys；
Xaa37是Gly、Ala、Glu或Lys；
Xaa38是Lys、酰胺或不存在。
16.根据权利要求1-15任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂是二肽基氨肽酶IV保护的。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂是一种位置8类似物，即相对于GLP-1(7-37)序列(SEQ ID No：2)的位置8的丙氨酸残基已经由另一个氨基酸残基置换。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂在相对于GLP-1(7-37)序列(SEQ ID No：2)的位置8上包含Aib残基。
19.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中在所述的GLP-1肽位置7(N-末端)的氨基酸残基选自D-组氨酸、脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、β-羟基-组氨酸、高组氨酸、Nα-乙酰基-组氨酸、α-氟甲基-组氨酸、α-甲基-组氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸和4-吡啶基丙氨酸。
20.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，所述的GLP-1激动剂包含不多于12个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
21.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，所述的GLP-1激动剂包含不多于六个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
22.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，所述的GLP-1激动剂包含不多于四个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
23.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂包含不多于4个不是由遗传密码编码的氨基酸残基。
24.根据权利要求1-22任意之一所述的化合物，其中与GLP-1(7-37)(SEQ ID No：2)或Exendin-4(1-39)(SEQ ID No：3)相比，所述的GLP-1激动剂包含不多于两个经交换、添加或缺失的氨基酸残基。
25.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂选自[Arg34]GLP-1(7-37)、[Arg26、34]GLP-1(7-37)Lys、[Lys36Arg26、34]GLP-1(7-36)、[Aib8、22、35]GLP-1(7-37)、[Aib8，35]GLP-1(7-37)、[Aib8，22]GLP-1(7-37)、[Aib8，22，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg26，34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Arg26]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg26]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Arg26]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Arg34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Arg34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Arg34]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Ala37]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，35Ala37]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22Ala37]GLP-1(7-37)Lys、[Aib8，22，35Lys37]GLP-1(7-37)、[Aib8，35Lys37]GLP-1(7-37)和[Aib8，22Lys37]GLP-1(7-37)。
26.根据权利要求1-13任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂是Exendin-4(1-39)(SEQ ID No.3)。
27.根据权利要求1-13任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂是ZP-10，即[Ser38Lys39]Exendin-4(1-39)LysLysLysLysLys-酰胺(SEQ ID No.4)。
28.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂通过在相对于氨基酸序列SEQ ID No：2(GLP-1(7-37))的位置23、26、34、36或38(对应于相对于氨基酸序列SEQ ID No：3(Exendin-4(1-39))的位置17、20、28、30或32)上的氨基酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
29.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂通过C末端氨基酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
30.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂通过选自精氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的氨基酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
31.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的GLP-1激动剂通过半胱氨酸残基的侧链连接至以下部分：-L-RR-延迟蛋白。
32.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其中所述的接头L选自二价连接化学基团
酰胺：-C(O)-NR-，其中R是氢或C1-6-烷基，
胺：-NR-，其中R是氢或C1-6-烷基，
硫醚：-S-，-S-(CH2)2-SO2-或
Figure A2004800377410007C1
醚：-O-，尿烷：-N(R1)-CO-N(R2)-，其中R1和R2独立地是氢或C1-6-烷基，氨基甲酸酯：-O-CO-N(R)-，其中R是氢或C1-6-烷基，肼： 其中R是氢或C1-6-烷基，肟：-O-N＝C(-R)-，其中R是氢或C1-6-烷基，唑烷或噻唑烷：
Figure A2004800377410008C2
R＝H或CH3，X＝S或O和
Figure A2004800377410008C3
33.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其选自
GLP-1激动剂-C(＝O)CH2O(CH2)2O(CH2)2-RR-延迟蛋白，
GLP-1激动剂-C(＝O)(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白，
GLP-1激动剂-S(＝O)2(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白，
GLP-1激动剂-CH2(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白，
GLP-1激动剂-C(＝O)O(CH2)n(OCH2CH2)m-RR-延迟蛋白，
其中n是0-10的整数，并且m是0-100的整数。
34.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其选自
GLP-1激动剂-L-NC(＝O)CH2-延迟蛋白中的半胱氨酸残基中的硫、
GLP-1激动剂-L-S(＝O)2(CH2)2-延迟蛋白中的半胱氨酸残基中的硫、
GLP-1激动剂-L-NC(＝O)CH2-延迟蛋白中的半胱氨酸残基中的硫，和
35.根据先前权利要求任意之一所述的化合物，其选自S-γ34-(1-{2-[2-(2-([D-Ala8，Lys37]-GLP-1-(7-37)酰胺-Nε37-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基)-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
Figure A2004800377410009C1
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Aib8，22，25，Lys37]-GLP-1-(7-37)酰胺-Nε37-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
S-γ34-((1-{2-[2-(2-([Aib8，Arg26，34，Glu22，23，30]-GLP-1-(7-37))Lys酰胺-Nε-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)Albagen
Figure A2004800377410009C3
36.根据权利要求1-34任意之一所述的化合物，其选自
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Lys32]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε32-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白(其中白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))、
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Lys20]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε20-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白(其中白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))、
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Arg12，Lys27]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε27-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白(其中白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))和
S-γ34-(1-{2-[2-(2-([Arg12，27，Lys32]-exendin-(1-39)酰胺-N-ε32-基)乙酰氧基乙氧基)乙基氨甲酰基]乙基}-2，5-二氧代-吡咯烷-3-基)白蛋白(其中白蛋白是来自New Century Pharma的重组Albagen，即重组HSA(2-585))。
37.一种药物组合物，其含有根据先前权利要求任意之一所述的化合物和药用防腐剂。
38.一种药物组合物，其含有根据权利要求1-36任意之一所述的化合物和药用稳定剂。
39.根据权利要求37-38任意之一所述的药物组合物，其适于肠胃外施用。
40.根据权利要求1-36任意之一所述的化合物在制备药物中的用途。
41.根据权利要求1-36任意之一所述的化合物在制备药物中的用途，其中所述的药物用于治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂障碍、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管病症、中风、炎性肠综合征、消化不良和胃溃疡。
42.根据权利要求1-36任意之一所述的化合物在制备药物中的用途，其中所述的药物用于延缓或预防2型糖尿病的疾病进展。
43.根据权利要求1-36任意之一所述的化合物在制备药物中的用途，其中所述的药物用于减少食物摄取、减少β-细胞凋亡、增强β-细胞功能和增加β-细胞群和/或恢复β-细胞的葡萄糖敏感性。
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