CN1554335A - 一种注射用丹红冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种注射用丹红冻干粉针剂及其制备工艺，其特征在于根据丹参总酚酸为弱酸性物质，易溶于碱成盐，水中溶解度增大，并且成盐后化合物稳定性提高的性质，对丹参采用碱水提取后，再过树脂柱的提取方法；对红花采用乙醇回流保留红花中的二聚查耳酮类有效部位，再用酸水提取，酸水提取液与丹参提取液过树脂柱的提取工艺，提高了制剂中酚酸及黄酮类有效部位的含量，为临床应用提供一种产率高、成本低、质量好、制备工艺更合理的丹红冻干粉针剂。可用于冠心病、心绞痛、脑血管病等多种疾病的治疗。

Description

一种注射用丹红冻干粉针剂及其制备方法

所属领域

本发明属中药制药领域，具体涉及一种含丹参、红花有效部位的丹红注射用冻干粉针剂及其制备方法。

背景技术

丹参为唇型科植物丹参的干燥根及根茎，根据现有文献：丹参首载于《神农本草经》，历代本草多有收载，中华人民共和国药典(2000年版一部)则归纳丹参的功能与主治为：“祛瘀止痛，活血通经，清心除烦。用于月经不调，经闭痛经，瘕积聚，胸腹刺痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛”。说明丹参在临床应用中表现出多方面的功效。丹参的化学成分主要可分为水溶性成分和脂溶性成分两大部分。众所周知，丹参的传统应用方式为水煎液，因此，其有效成分应以水溶性物质为主。我国药物研究人员对丹参的水溶性成分进行了研究，证明丹参水溶性有效成分主要是酚酸类化合物。目前，丹参酚酸类化合物的提取方法多为水提后过树脂柱(中国发明专利CN1247855A、CN1270809A、CN1384090A、CN1459448A)，但是无论是水提或者是热水提后过树脂柱，均不能将丹参总酚酸有效地提取出来。

红花是中医传统的活血化瘀药，既是一种妇科良药，又是天然色素的原料。自古以来，红花品质以红为优，黄次之。《本草求真》记载：“红花辛苦而温，色红入血，为通瘀活血要剂。”认为有效成分是红色成分。如对红花的加工，李时珍有过这样的论述：“清晨采花捣熟，以水淘，布袋绞去黄汁又捣，以酸粟米泔清又淘，又绞袋去汁，以青蒿覆一宿，晒干，或捏成薄饼，阴干收之。入药搓碎用。”作药用的红花饼、板红花所含药用成分为用酸水除去水溶性黄色素后的非水溶性成分。文献表明，红花主要含红色素和黄色素。红色素是二聚查耳酮，黄色素是多种水溶性成分的混合物，属查耳酮类化合物。二聚查耳酮是降压活性主要成分〔孟歌等.开封医专学报.1999，18(3)：46〕。目前，对红花有效部位的提取方法多为水提法，弃去了其非水溶性成分，对药材的利用率不高。

丹红注射液系由丹参、红花等中药配伍，经加工提取而制成的复方针剂。对冠心病、心绞痛、脑血管病等多种疾病具有较好的疗效。现行部颁标准采用对丹参稀醇提后，再与红花共水提的方法，纯化效果不好，其有效成分的含量不高，对药材是一种极大的浪费，且注射液水剂存在运输不便，质量稳定性差等问题，需要对其进行改进，为临床提供更好的药品。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，根据丹参总酚酸为弱酸性物质，易溶于碱成盐，水中的溶解度增大，并且成盐后化合物稳定性提高的性质，对丹参采用碱水提取后，再过树脂柱的提取方法；对红花采用乙醇回流保留红花中的二聚查耳酮类有效部位，再用酸水提，最后与丹参过树脂柱的提取工艺，提高了制剂中酚酸及黄酮类有效部位的含量，为临床应用提供一种产率高、成本低、质量好、制备工艺更合理的丹红冻干粉针剂。

本发明通过以下技术方案实现：

(1)丹参粉碎，用pH为10以上的碱水提2～3次，温度为80～100℃，每次60～120min，合并提取液为提取液A；

(2)红花用40～80％乙醇回流提取2～3次，每次60～120min，回收乙醇至无醇味，得提取液B；

(3)将用乙醇提取后的红花药渣加5～50倍量水，用pH为3～5的酸水提2～3次，温度为20～80℃，每次30～120min，合并提取液，得提取液C；

(4)合并提取液A和C，离心，取上清液，减压浓缩，调pH 6.5～7，上大孔树脂柱，先以去离子水洗至无Molish反应，继续用20～90％乙醇洗至洗脱液加1％三氯化铁试剂无明显的酚羟基反应、洗脱液与浓氨水溶液不显色止。回收醇洗脱液，浓缩得提取液D；

(5)合并提取液B和D，补充注射用水至规定量，搅匀、冷藏、滤过，加入冻干赋形剂，调pH 6.5～7，滤液加适量活性炭煮沸15min，放冷，过滤至澄明，得溶液，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖即得。

用于纯化有效部位的大孔吸附树脂，可以是非极性、弱极性或者极性大孔吸附树脂，优选弱极性大孔吸附树脂，包括AB-8和D₁₀₁树脂。

冻干赋形剂可以是制剂学上可接受的任意常用的冻干赋形剂。优选冻干赋形剂为甘露醇、乳糖、蔗糖、或葡萄糖中的一种或两种的复合赋形剂。

本发明的一种丹红冻干粉针剂制备工艺，根据丹参总酚酸为弱酸性物质，易溶于碱成盐，水中的溶解度增大，并且成盐后化合物稳定性提高的性质，对丹参采用碱水提取后，再过大孔树脂的纯化工艺，极大地提高了丹参总酚酸的提取率(碱水提取丹参，其丹酚酸B的含量是水提的10倍)，优于中国发明专利CN1247855A、CN1270809A、CN1384090A、CN1459448A对丹参水提后上树脂柱的工艺；对红花采用乙醇回流后，酸水提，再与丹参过树脂柱的提取工艺，保留了红花中的二聚查耳酮类有效部位，并且酸水提取保证了红花黄色素的稳定性，优于传统方法的水提取工艺；本发明的制备工艺，采用大孔树脂吸附技术，提高了制剂中酚酸及黄酮类有效部位的含量，优于部颁标准WS-11220(ZD-1220)-2002的丹红注射液制备工艺。应用本发明方法制得的一种注射用丹红冻干粉针制剂疏松多孔、复溶性好，含水量低，符合国家标准，其生产过程无菌操作，低温干燥，活性成分不被破坏，真空或惰性气体填充，不易发生氧化，贮存时间长，稳定性得以提高，从而延长了该药的有效期，便于贮存、运输和销售，也便于保证产品质量。实验表明，丹红冻干粉针剂对急性血淤模型大鼠全血粘度改善作用优于现有的丹红注射剂。

下面通过实验对本发明的一种丹红冻干粉针剂作进一步的说明。

实验一：水提取和碱水提取丹参总酚酸的比较实验

丹参的总酚酸成分中丹酚酸B的药理作用强，且在药材中含量最高，因此通过测定丹酚酸B的含量，可以比较丹参水溶性成分提取方法的优劣。

1仪器与试药

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪；日本岛津SPD-6A紫外检测器；丹酚酸B对照品，昆明同持医药有限公司；乙腈为色谱纯；

甲醇、甲酸为分析纯；水为去离子重蒸水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：BeckmanC₁₆色谱柱(4.6×25cm，5μm)；流动相：甲醇-乙腈-水-甲酸＝42∶5∶52∶1，流速：1ml/min，检测波长285nm；

柱温：室温；丹酚酸B对照品保留时间为14min，定量方法：外标法。

2.2含量测定方法

2.2.1对照品溶液制备  取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成质量浓度为0.1mg/ml的丹酚酸B溶液，作为丹酚酸B对照品贮备液。精密吸取贮备液5ml置50ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为丹酚酸B对照品溶液。

2.2.2供试品溶液制备  取干燥研细并过40目筛的丹参细粉约0.2g，精密称定，加水40ml，超声处理20min后，滤过，滤液置于50ml棕色量瓶中，加水并稀释至刻度，摇匀即得供试品溶液A。另取干燥研细并过40目筛的丹参细粉约0.2g，精密称定，加pH为10的碱水40ml，超声处理20min后，滤过，滤液置于50ml棕色量瓶中，调pH至6左右，加水并稀释至刻度，摇匀即得供试品溶液B。

2.2.3标准曲线的制作

丹酚酸B在4.0～16.0μg/ml的范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，r＝0.9995，回归方程：y＝1.6482×10⁶C-1732。

2.2.4精密度试验  精密吸取供试品20μl，连续进样3次，丹酚酸B的RSD为2.1％。

2.2.5回收率实验  于已测定丹酚酸B含量的丹参溶液A中精密称入一定量的丹酚酸B对照品，按相同的方法处理并测定，丹酚酸B的平均回收率为96.5％，RSD为1.3％。

2.3样品测定  吸取供试品20μl，进样，根据标准曲线计算含量，结果见表1。

     表1  样品中丹酚酸B含量的测定结果(mg·g^-1)

                              测定批数

样品

               1      2      3      4      5      X

丹参供试品A    54     49     51     53     58     53

丹参供试品B    463    625    557    672    481    559.6

实验二：丹红冻干粉针剂、丹红注射液对大鼠血液流变学的影响

一、实验材料

SD大鼠60只，由第一军医大学实验动物中心提供，体重200±20g，雄性。肾上腺素，上海生物化学制药厂；丹红注射液，三江制药有限公司生产；丹红冻干粉针制剂(丹红冻干粉针制剂10mg与丹红注射液1ml所含生药量相当)，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供；丹参注射液，正大天晴制药有限公司。

二、实验方法

大鼠60只随机分6组：A正常对照组(生理盐水组)、B血淤模型组、C丹红注射剂组0.15ml/kg、D丹红注射剂组0.3ml/kg、E丹红冻干粉针剂组1.5mg/kg、F丹红冻干粉针剂组3mg/kg、G阳性对照丹参注射液组0.3ml/kg。每日1次，连续im给药7d，末次给药后30min，除对照组用0.9％NS外，其余各组均皮下注射0.1％肾上腺素(0.9mg/kg)，30min后将大鼠放入冰水中冷浴8min，间隔2h后再注射等量肾上腺素，制备血淤模型。腹主动脉取血5ml，肝素抗凝，测定10s^-1、40s^-1、200s^-1全血粘度、血浆比粘度、红细胞压积。实验室温度控制在(20±1)℃。

三、实验结果

与正常组相比，血淤模型组低、中、高切率的全血粘度、血浆比粘度、纤维蛋白原、红细胞压积均明显升高(P＜0.01)，说明模型可靠。与模型组相比，丹红冻干粉针剂及注射液组，阳性对照丹参注射液组均能明显改善血液流变学指标(P＜0.05)；丹红冻干粉针剂组疗效优于注射液组，实验结果见表2。

表2  丹红注射制剂对急性血淤模型大鼠血液流变学的影响(x±s，

                           n＝10)

组  剂                        气血粘度

                                                             血浆比粘度     红细胞压积

别  量        10s^-1          40s^-1          200s^-1

A    -        20.77±5.27     11.51±2.84     6.91±1.01     1.55±0.09     0.40±0.04

B    -        38.16±9.05^*   16.64±2.34^*  8.39±0.69^*   1.80±0.07^*   0.48±0.03^*

     1.5mg/

C             21.64±5.37^a   11.73±2.23^a  6.46±0.43^a   1.68±0.04^a   0.39±0.03^a

     kg

D    3mg/kg   16.74±2.48^a   9.81±1.27^a   6.43±0.53^a   1.67±0.13^a   0.39±0.03^a

     0.15ml

E             28.47±9.47^a   14.36±3.17    7.55±0.58^a   1.70±0.14      0.40±0.03^a

     /kg

     0.3ml/

F             23.67±4.82^a   11.98±3.43^a  6.85±0.56^a   1.68±0.07^a   0.39±0.04^a

     kg

     0.3ml/

G             22.06±4.93^a   11.08±2.07^a  6.53±0.80^a   1.66±0.11^a   0.40±0.05^a

     kg

注：*与正常组比较P＜0.01，^a与模型组比较P＜0.05

具体实施方式

实施例一：规格1000瓶

(1)丹参1500g粉碎，用pH为10以上的碱水提2次，温度为80℃，第一次60min，第二次120min，合并提取液为提取液A；

(2)红花500g，用40％乙醇回流提取3次，每次90min，回收乙醇至无醇味，得提取液B；

(3)将用乙醇提取后的红花药渣加5倍量水，用pH为3～5的酸水提3次，温度为20℃，每次120min，合并提取液，得提取液C；

(4)合并提取液A和C，离心，取上清液，减压浓缩，调pH 6.5～7，上大孔树脂，先以去离子水洗至无Molish反应，继续用20％乙醇洗至洗脱液加1％三氯化铁试剂无明显的酚羟基反应、洗脱液与浓氨水溶液不显色止。回收醇洗脱液，浓缩得提取液D；

(5)合并提取液B和D，补充注射用水至规定量，搅匀、冷藏、滤过，加注射用甘露醇200g、加注射用乳糖200g，调PH 6.5～7，滤液加适量活性炭煮沸15min，放冷，过滤至澄明，得溶液，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖即得。

实施例二：规格100瓶

(1)丹参150g粉碎，用pH为10以上的碱水提3次，温度为80℃，每次60min，合并提取液为提取液A；

(2)红花50g，用80％乙醇回流提取2次，每次60min，回收乙醇至无醇味，得提取液B；

(3)将用乙醇提取后的红花药渣加50倍量水，用pH为3～5的酸水提2次，温度为80℃，每次30min，合并提取液，得提取液C；

(4)合并提取液A和C，离心，取上清液，减压浓缩，调pH 6.5～7，上大孔树脂，先以去离子水洗至无Molish反应，继续用90％乙醇洗至洗脱液加1％三氯化铁试剂无明显的酚羟基反应、洗脱液与浓氨水溶液不显色止。回收醇洗脱液，浓缩得提取液D；

(5)合并提取液B和D，补充注射用水至规定量，搅匀、冷藏、滤过，加注射用甘露醇30g，调PH 6.5～7，滤液加适量活性炭煮沸15min，放冷，过滤至澄明，得溶液，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖即得。

实施例三：规格500瓶

(1)丹参750g粉碎，用pH为10以上的碱水提2次，温度为100℃，每次60min，合并提取液为提取液A；

(2)红花250g，用60％乙醇回流提取2次，每次90min，回收乙醇至无醇味，得提取液B；

(3)将用乙醇提取后的红花药渣加10倍量水，用pH为3～5的酸水提3次，温度为40℃，每次90min，合并提取液，得提取液C；

(4)合并提取液A和C，离心，取上清液，减压浓缩，调pH 6.5～7，上大孔树脂，先以去离子水洗至无Molish反应，继续用40％乙醇洗至洗脱液加1％三氯化铁试剂无明显的酚羟基反应、洗脱液与浓氨水溶液不显色止。回收醇洗脱液，浓缩得提取液D；

(5)合并提取液B和D，补充注射用水至10000ml，加入甘露醇、葡萄糖250g，搅拌溶解，无菌过滤，西林瓶分装成每瓶20ml，冷冻干燥，包装，即得。

实施例四：规格200瓶

(1)丹参300g粉碎，用pH为10以上的碱水提2次，温度为90℃，第一次90min，第二次120min，合并提取液为提取液A；

(2)红花100g，用60％乙醇回流提取2次，第一次90min，第二次120min，回收乙醇至无醇味，得提取液B；

(3)将用乙醇提取后的红花药渣加25倍量水，用pH为3～5的酸水提2次，温度为60℃，第一次90min，第二次120min，合并提取液，得提取液C；

(4)合并提取液A和C，离心，取上清液，减压浓缩，调pH 6.5～7，上大孔树脂，先以去离子水洗至无Molish反应，继续用60％乙醇洗至洗脱液加1％三氯化铁试剂无明显的酚羟基反应、洗脱液与浓氨水溶液不显色止。回收醇洗脱液，浓缩得提取液D；

(5)合并提取液B和D，补充注射用水至规定量，搅匀、冷藏、滤过，加注射用甘露醇50g、加注射用乳糖50g，调PH 6.5～7，滤液加适量活性炭煮沸15min，放冷，过滤至澄明，得溶液，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖即得。

Claims (6)

1一种注射用丹红冻干粉针剂，其特征在于它是由从丹参中提取的酚酸及从红花中提取的黄酮类有效部位组成的。

2根据权利要求1所述的酚酸类有效部位，其特征在于它是先用碱水提取丹参的有效组分后，提取液调为中性后，上大孔吸附树脂柱，用乙醇溶液洗脱，纯化制得的。

3根据权利要求1所述的黄酮类有效部位，其特征在于它是先用乙醇回流保留红花中的二聚查耳酮类有效部位，再用酸水提，酸水提取液与丹参提取液调为中性后过树脂柱，用乙醇溶液洗脱，纯化制得的。

4根据权利要求2和3所述用于纯化有效部位的大孔吸附树脂，其特征在于它可以是非极性、弱极性或者极性大孔吸附树脂，优选弱极性大孔吸附树脂，包括AB-8和D₁₀₁。

5根据权利要求2和3所述用大孔吸附树脂柱纯化，以乙醇溶液洗脱，其特征在于所用乙醇的浓度为20～90％。

6一种丹红冻干粉针剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)丹参粉碎，用pH为10以上的碱水提2～3次，温度为80～100℃，每次60～120min，合并提取液，为提取液A；

(2)红花用40～80％乙醇回流提取2～3次，每次60～120min，回收乙醇至无醇味，得提取液B；

(3)将用乙醇提取后的红花药渣加5～50倍量水，用pH为3～5的酸水提2～3次，温度为20～80℃，每次30～120min，合并提取液，得提取液C；

(4)合并提取液A和C，离心，取上清液，减压浓缩，调pH6.5～7，上大孔树脂柱，先以去离子水洗至无Molish反应，继续用20～90％乙醇洗至洗脱液加1％三氯化铁试剂无明显的酚羟基反应、洗脱液与浓氨水溶液不显色止。回收醇洗脱液，浓缩得提取液D；

(5)合并提取液B和D，补充注射用水至规定量，搅匀、冷藏、滤过，加入冻干赋形剂，调PH6.5～7，滤液加适量活性炭煮沸15min，放冷，过滤至澄明，得溶液，灭菌后分装，冷冻干燥，压盖即得。