Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN1245982C - 哮喘和气道疾病的治疗 - Google Patents

哮喘和气道疾病的治疗 Download PDF

Info

Publication number
CN1245982C
CN1245982C CNB971945055A CN97194505A CN1245982C CN 1245982 C CN1245982 C CN 1245982C CN B971945055 A CNB971945055 A CN B971945055A CN 97194505 A CN97194505 A CN 97194505A CN 1245982 C CN1245982 C CN 1245982C
Authority
CN
China
Prior art keywords
methoxyestradiol
cell
airway
asthma
effect
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB971945055A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1218401A (zh
Inventor
阿拉斯泰尔·乔治·斯图加特
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CSL IP Investments Pty Ltd
Original Assignee
Amrad Operations Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AUPN9766A external-priority patent/AUPN976696A0/en
Priority claimed from AUPN9918A external-priority patent/AUPN991896A0/en
Application filed by Amrad Operations Pty Ltd filed Critical Amrad Operations Pty Ltd
Publication of CN1218401A publication Critical patent/CN1218401A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1245982C publication Critical patent/CN1245982C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/566—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol having an oxo group in position 17, e.g. estrone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及载体或载体类似物在治疗慢性和急性气管炎症、特别是哮喘中的应用。还涉及调节气管组织改变的化合物和组合物。在优选实施方案中，所述甾体是2-甲氧基雌二醇。

Description

哮喘和气道疾病的治疗
技术领域
本发明涉及治疗慢性和急性气道炎症包括哮喘病的方法。本发明还涉及用于上述治疗中的甾体或甾体类似物，以及包含这些化合物作为活性成分的药物组合物。在优选实施方案中，活性成分抑制气道壁中的炎症以及平滑肌细胞的增殖。它还可具有至少一种选自抗血管生成、抗氧化和破坏微管形成中的其他活性。
背景技术
在治疗哮喘中目前有两类截然不同的药物。使用支气管舒张剂可提供对症缓解，所述支气管舒张剂包括β2-肾上腺素受体激动剂如舒喘宁(salbutamol)和沙美特罗(salmeterol)。其他具有支气管舒张剂性质的药物包括毒覃碱受体拮抗剂、异丙托溴铵、和磷酸二酯酶抑制剂如茶碱(theophylline)。
第二类药物是预防性的，包括糖皮质激素如氯地米松二丙酸盐。也可使用色甘酸二钠和萘多罗米(nedocromil)钠，但是这些药物比糖皮质激素的效用低。
然而，以上药物中没有一个可以完全反转气道的高应答性或者防止所有病人的哮喘灾害性致命和致死期。这些病症普遍存在而且有时是致死原因的事实说明以上药物的作用并不是最佳的。
现在认为哮喘是一种慢性气道炎症疾病，其特征是嗜曙红性支气管炎(Frigas等人，1991)。与其他慢性炎症疾病一样，哮喘中的炎症也诱发组织改变，这已被记载于气道的尸体解剖研究(Dunnill等人，1969)中以及活供体的支气管活体解剖(Brewster等人，1990；Bai和Pare，1995)中。该组织改变包括：上皮脱落；嗜曙红细胞明显过滤至粘膜中；肥大细胞和淋巴细胞的活化；粘液腺的增大；外伤型胶原立即沉降至上皮的真基膜以下并存在与粘膜中；以及肌成纤细胞(myofibroblast)数量的增加。另外，在哮喘气道中血管的体积和数量也增加，这表明该组织改变中还伴随着血管生成(Kuwano等人，1993)。气道壁的总体积随着气道平滑肌体积的增加也增加(Kuwano等人，1993)，这是肥大性和增生性应答的结果(Ebina等人，1993)。
气道高应答性(AHR)是哮喘患者对各种刺激产生过度的支气管缩肌应答。气道壁增厚是AHR发展的中心这一概念在最近10年已被接受。气道增厚已用放大平滑肌缩短之后果的数学模型研究来表现，即计算一定量的平滑肌缩短以与健康受试者相比在哮喘病患者中产生更大的气道阻力(例如40％缩短在健康受试者中产生15倍的增加，但在哮喘患者中产生290倍的增加)(James等人，1989)。气道壁面积增加50-250％，在更大的气道中可观察到更多的增加(James等人，1989)。肌肉体积增加2-3倍，而且其增加的幅度与哮喘的严重程度有关(Kuwano等人，1993)。变化的本质尚未进行广泛的研究，但其包括增生和肥大(Ebina等人，1993)。过敏性哮喘患者中延长对过敏原的回避，证明气道中的应答性降低至在健康受试者中所观察到的水平，而且伴随着症状的缓解(Platts-Mills等人，1987)。以上这些研究与哮喘气道中结构的改变也是可逆的这一概念是相一致的。
哮喘气道中此等长期变化为治疗性介入提供了新目标(Stewart等人，1993)。因此，主要的兴趣集中在鉴别出该气道壁组织变化应答的机理以及现存的抗哮喘药物对这些过程的影响。许多因子已被确认为各种来源包括人的经培养的平滑肌的有丝分裂因子(参考Stewart等人，1995a)。正如所希望的，属于生长因子族的刺激，包括基本成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生的生长因子(PDGFBB)和表皮生长因子(EGF)，是最有效的增殖剂(Hirst等人，1992；Stewart等人，1995a)。凝血酶也是有效的生长因子(Tomlinson等人，1994)，其中如内皮素-1和血栓烷A2模拟物、U46619的支气管收缩剂，其活性较弱，而且一些其他收缩剂如组胺和神经激肽是完全无活性的(Stewart等人，1995a)。
在经培养的人气道平滑肌中，连续地暴露在β-肾上腺素受体激动剂可降低对宽范围之有丝分裂因子的增殖性应答，所述有丝分裂因子包括凝血酶、EGF和血栓烷A2类似物、U46619(Tomlinson等人，1994；1995)。而且，地塞米松和其他抗炎甾体药物也具有抗经培养之气道平滑肌增殖的作用(Stewart等人，1995b)，但是抑制作用的幅度取决于首先刺激增殖作用的有丝分裂因子。还应注意的是，通过吸入抗炎甾体药物进行的长期治疗仅中等程度地降低AHR(Sotomayor等人，1984；Lungren等人，1988)，其中据报道β2-激动剂既没有作用也不能增加AHR(Wahedna等人，1993)。因此，两类最经常使用而且最有效的治疗哮喘的药物对AHR具有亚最佳作用，而且因此不可能有效地调节与气道组织改变有关的结构变化，所述气道组织改变对病症的前进和发展有作用。
我们已研究了使组织改变过程停止或者调节该过程的潜在方式，并已令人惊奇地发现适用于该目的的甾体及其类似物。
发明内容
2-甲氧基雌二醇是人生理雌激素——17β-雌二醇的天然代谢物。
该物质是分两步产生的，其涉及雌激素的羟基化，产生儿茶酚雌激素，然后通过可诱导的细胞色素p450通路进行甲氧基化，产生相应的甲氧基雌激素(Spink等人，1994)。目前认为是无生理活性的(Rosner等人，1991)，但在细胞培养研究中已确认2-甲氧基雌二醇抑制某些变形细胞系的增殖作用(Lottering等人，1992)，并抑制活动性内皮细胞和成纤维细胞的活性增殖(Fotsis等人，1994)。Fotsis等人还表明给药2-甲氧基雌二醇可通过抑制肿瘤诱导的血管生成来抑制肿瘤的生长，但它并不是直接抑制肿瘤细胞的增殖。有人提出该化合物可减少基膜损坏，因此可防止细胞迁移至细胞外基质中，并使其具有潜在的抗血管生成药物的作用，用于治疗实体瘤或血管生成疾病。在Klauber等人，1997中证实了对肿瘤新血管形成的抑制作用。
2-甲氧基雌二醇对经培养之兔主动脉平滑肌细胞的抗增殖作用(Nishigaki等人，1995)也表明该化合物可用于防止动脉粥样硬化的发展，该疾病中的细胞变化与哮喘和AHR中的不同。
抗增殖作用的机理尚未确定。Lottering等人(1992)提出环腺苷-磷酸(cAMP)的升高可解释2-甲氧基雌二醇对DNA合成的抑制作用，其中在有丝分裂的纺锤体形成期间对微血管形成的抑制作用可用于解释对细胞分裂的抑制作用(Fotsis等人，1994)。2-甲氧基雌二醇的其他生理作用没有被广泛表征。在猪子宫内膜细胞培养物中，2-甲氧基雌二醇抑制PGF2α的合成(Zhang和Davis，1992)。2-甲氧基雌二醇的非基因组作用包括通过在秋水仙素位点处与微管素的结合产生的微管破裂作用(D′Amato等人，1994；Aizu-Yokota等人，1995)以及血管平滑肌的松弛作用(Goyache等人，1995)。
在国际专利申请公开WO 95/04535中，描述了通过抑制微管素在体外的聚合作用而具有抗有丝分裂作用的雌二醇衍生物。在该体外研究中可推导出，所述化合物抑制内皮细胞增殖。
本发明涉及2-甲氧基雌二醇的作用以及对炎性细胞活化的抑制。其特别是涉及对如哮喘的气道疾病进行治疗或预防。
没有一份文献提到上述设想或公开了本发明。例如，在气道中抑制平滑肌细胞增殖和炎性细胞的活化并不能经由WO 95/04535的体外观察而被预测到，而且这些活性的机理似乎与对微管形成的作用无关。
2-甲氧基雌二醇对兔血管平滑肌的抗增殖作用(Nishigaki等人，同上)也不能外推至气道平滑肌，这是因为这两种来源的细胞的应答性不同。
一些增加内皮细胞增殖的药物如肝素，实际上抑制气道平滑肌细胞的增殖。因此，2-甲氧基雌二醇在内皮细胞中的抗增殖作用(Fotsis等人，WO 95/04535，同上)不能说明平滑肌以相同的方式进行应答。
我们发现2-甲氧基雌二醇抑制髓过氧化酶从人外周血之多形核白细胞中的释放以及对这些细胞的细胞吞噬活性。在这些细胞中降低细胞吞噬活性可证明其抗炎性质。这是非常令人惊奇的，特别是因为已知2-甲氧基雌二醇对糖皮质激素或者雌激素受体没有明显的亲和性(Merriam等人，1980)。
这些性质使2-甲氧基雌二醇以及相关化合物有利于治疗包括但不限于哮喘、慢性阻塞性气道疾病和其他以炎症为特征的气道疾病。适合于本发明方法治疗的其他疾病包括例如肺气肿、肺炎或以增殖性和炎性病症如中性白细胞过滤为特征的气道疾病、或者其症状或后遗症导致残留炎性细胞活化的肺感染疾病。
还可治疗如过敏性鼻炎的病症，这是因为发现2-甲氧基雌二醇抑制与肥大细胞有关的细胞系——RBL2H3的脱粒。2-甲氧基雌二醇的抑制作用对抗原刺激的释放是选择性的，因为对蛋白激酶C刺激剂、PMA以及对钙离子载体A23187的应答不受影响。因此，对抗原释放的作用不是由于对微管依赖性的颗粒挤压作用产生非特异性作用的结果。我们实验的结果表明2-甲氧基雌二醇和具有这些活性的相关甾体可用于治疗过敏性疾病，该疾病包括但不限于鼻炎和特异反应性的皮肤疾病。不希望受限于任何具体的作用机理，这些数据表明与涉及受体的特异性信号传导机理有关，而且该机理对抑制气道炎症是有作用的。
我们进一步发现2-甲氧基雌二醇抑制DNA合成以及用宽范围之包括FCS和bFGF的生长因子刺激的气道平滑肌中的细胞分裂。另外，血清素刺激的蛋白合成速率增加被2-甲氧基雌二醇抑制，除抑制细胞增殖外，还提高了抗肥大作用的可能性。与2-甲氧基雌二醇的抗血管生成活性一起，我们的观察表明该化合物及其相关化合物在治疗以炎症为特征的上述气道疾病中有治疗价值，特别是治疗慢性哮喘，其对气道壁组织改变有特别的作用并因而对气道高应答性产生影响。还测试了2-甲氧基雌二醇的类似物抑制DNA合成的作用，其结果表明这些化合物也是有治疗价值的。
在第一方面中，本发明提供治疗以慢性或急性气道炎症为特征的疾病的方法，其包括向需要此等治疗的哺乳动物给药具有调节气道组织改变之活性的甾体或甾体类似物。优选的是，所述哺乳动物是人、猫、马或牛，更优选的是人。甾体2-甲氧基雌二醇特别优选用于本发明方法中。在本发明所用剂量水平时没有有效糖皮质激素活性的甾体或其类似物是特别希望的。
在第二方面中，本发明提供治疗以慢性或急性气道炎症为特征的疾病的方法，其包括向需要此等治疗的哺乳动物给药甾体或甾体类似物，其中，所述甾体或类似物抑制多形核白细胞的细胞吞噬作用。优选的是，髓过氧化酶从白细胞中的释放也被抑制。还抑制巨噬细胞的活化。
在一个实施方案中，根据本发明的方法进一步通过抑制平滑肌细胞的增殖和炎症来调节气道壁的组织改变。所述组织改变进一步通过抑制以下一种或多种活性来调节：气道壁中血管生成、氧化剂的形成和微管功能的形成。
在一个特别优选的实施方案中，本发明的方法用于治疗以下疾病：哮喘、气道高应答性、支气管收缩、肺气肿、肺炎、特异反应性疾病如过敏性鼻炎和肺感染。
在第三方面中，本发明提供通过抑制气道壁的炎症来调节气道组织改变的甾体或甾体类似物。优选的是，所述化合物还具有抑制气道平滑肌细胞增殖的活性、特别是应答有丝分裂因子刺激的活性。
在第四方面中，本发明涉及通过抑制细胞吞噬活性来调节气道组织改变的甾体或甾体类似物，在一个优选实施方案中，用2-甲氧基雌二醇抑制多形核白细胞的细胞吞噬活性。在另一个实施方案中，还抑制髓过氧化酶从多形核白细胞中的释放。在一个特别优选的实施方案中，所述甾体或甾体类似物不具有糖皮质激素活性。
在第五方面中，本发明提供的上述甾体或甾体类似物进一步具有抗血管生成活性和/或抗氧化活性。在一个特别优选的实施方案中，本发明的甾体或甾体类似物还具有破裂气道壁中的微管的活性。
在第六方面中，本发明提供包括上述甾体或甾体类似物、任选一种或多种药物学上可接受的载体和赋形剂的组合物。所述载体和赋形剂的例子包括但不限于干燥的微粉化粉末和乳糖或者最近研制出的氢氟烷烃。本发明的组合物可成型为通过在治疗气道疾病或哮喘中所用的常规途径例如局部、口服、鼻腔给药或吸入给药的制剂。这些制剂可为任何常规的剂型，如胶囊剂、扁囊剂、片剂、气雾剂、粉末颗粒剂、微粉化颗粒剂或溶液剂。任选地，所述甾体或甾体类似物可与环糊精复合，也可为与药物学上可接受的酸形成酯的形式，所述酸例如是硫酸、乙酸、苯甲酸等。本领域普通技术人员可参考标准教材，如Remington′sPharmaceutical Sciences 17th版，来确定制剂所采用的剂型以及如何给药。
甾体或甾体类似物的给药剂量取决于待治疗的病症和给药途径，而且这对普通住院医生或兽医来说这是显而易见的。此类普通技术人员可容易地确定合适的给药剂量、方式和频率。本发明的组合物可用于治疗慢性或急性气道炎症，包括哮喘、气道高应答性(AHR)或支气管收缩。
在本发明的一个特别优选实施方案中，通过给药包含2-甲氧基雌二醇的组合物可抑制哮喘病人之气道壁平滑肌细胞的炎症和增殖。
虽然具体参考2-甲氧基雌二醇来描述本发明，但可理解的是也可在本发明中使用具有所需生理活性的该化合物的类似物。这些类似物包括但不限于2-羟基雌二醇、2-甲氧基雌二醇-3-甲基醚和4-甲氧基雌二醇。
已鉴别出许多雌二醇衍生物的化合物在其他组织中具有抗增殖和/或抗血管生成活性。例如见WO 95/04535，其整个内容在此并入作为参考。
此等化合物也是适用于本发明中的候选药物，并在本发明的甾体、甾体类似物或甾体类似化合物的意思范围内。优选的化合物在甾体骨架的2位上具有甲氧基。
另外，可设想到目前尚未知晓的其他化合物也有可能具有与本发明之2-甲氧基甾体或甾体类似化合物相似的结构，并具有本发明范围内的生理活性。在本发明说明书中，术语“甾体”、“甾体类似物”或“甾体类似化合物”可理解为包括2-甲氧基雌二醇、2-羟基雌二醇、2-甲氧基雌二醇-3-甲基醚、4-甲氧基雌二醇以及其他基于具有与本发明目的相关生理活性的甾核的化合物。其他化合物可具有与2-甲氧基雌二醇足够的结构和/或电(电荷分布)相似性，并具有本发明范围内的生理活性，而不被限制具有甾核，此等化合物可被认为是本发明的甾体类似物，例如WO 95/04535中的化合物。具有此等活性的化合物可容易地通过使用能够指示本发明说明书中其他处所描述类型的活性的试验来鉴别出来。例如，可通过测定气道平滑肌细胞增殖作用来测试化合物对慢性呼吸阻塞性疾病的作用；通过确定对炎性细胞活化的抑制来测试对过敏性鼻炎和感染性疾病的作用，对鼻炎测试肥大细胞，而对感染性疾病测试中性白细胞。
本领域技术人员还可利用其他测试，并容易地筛选出适合于本发明的化合物。
附图说明
现参考附图并根据实施例来详细描述本发明，图中：
图1显示2-甲氧基雌二醇对辣根过氧化酶介导的四甲基联苯胺氧化没有作用。
图2显示2-甲氧基雌二醇(0.3-10μM，30分钟预处理)对有丝分裂因子诱导的[3H]-胸甙插入经培养之人气道平滑肌细胞中的作用。测试的有丝分裂因子是0.3U/ml的凝血酶、1％的FCS、300pM的bFGF(图2a)和10％的FCS、3nM的EGF(图2b)。进行与图2a和2b相同设计的附加实验，并且在图2c中显示的是该后一个结果与图2a和2b中的结果组合的图。还研究了2-甲氧基雌二醇(3μM)对凝血酶(0.3U/ml)诱导的DNA合成随时间的作用(图2d)。数据以3个不同培养基中的3个实验的平均值及平均值的标准误差来表示，并以在未经预处理的细胞中[3H]-胸甙插入的百分数来表示。
图3显示2-甲氧基雌二醇(0.3-10μM，30分钟预处理)对有丝分裂因子诱导的[3H]-白氨酸插入的作用。数据以3个不同培养基中的3个实验的平均值及平均值的标准误差来表示，并以在未经预处理的细胞中[3H]-白氨酸插入的百分数来表示。
图4显示2-甲氧基雌二醇(0.3-10μM，30分钟预处理)在(a)FCS(1％)或(b)bFGF(300pM)存在时对细胞数量的作用。数据以3个不同培养基中的3个实验的平均值及平均值的标准误差来表示，并以在未经预处理的细胞中细胞数量增加的百分数来表示。
图5显示甾体受体拮抗剂——RU 486(1μM)对2-甲氧基雌二醇(3μM)抑制FCS(1％)诱导DNA合成的作用。数据以3个不同培养基中的3个实验的平均值及平均值的标准误差来表示，并以在未经预处理的细胞中[3H]-胸甙插入的百分数来表示。RU 486在2-甲氧基雌二醇前30分钟加入，而2-甲氧基雌二醇在FCS前30分钟加入。
图6显示17β-雌二醇和2-羟基雌二醇(0.3-10μM，30分钟预处理)对FCS(1％)诱导的[3H]-胸甙插入的作用。数据以3个不同培养基中的3个实验的平均值及平均值的标准误差来表示，并以在未经预处理的细胞中[3H]-胸甙插入的百分数来表示。有关2-甲氧基雌二醇的数据从图1中复制以易于对比。
图7显示2-甲氧基雌酮和2-甲氧基雌三醇(0.3-10μM，30分钟预处理)对凝血酶(0.3U/ml)诱导[3H]-胸甙插入的作用。数据以3个不同培养基中的3个实验的平均值及平均值的标准误差来表示，并以在未经预处理的细胞中[3H]-胸甙插入的百分数来表示。有关2-甲氧基雌二醇的数据从图2a中复制以易于对比。
图8显示2-甲氧基雌二醇对豚鼠腹膜巨噬细胞中超氧化物阴离子释放的作用。该化合物完全阻断巨噬细胞对酵母多糖的超氧化物阴离子应答，并降低对fMLP的应答。
图9显示2-甲氧基雌二醇对豚鼠腹膜巨噬细胞中前列环素释放的作用。结果表明该雌二醇完全阻断对fMLP的巨噬细胞应答，并抑制对PMA的应答50％。
图10是显示各种浓度的卵白蛋白(DNP-OA)对肥大细胞(RBL2H3)脱粒的作用、以及2-甲氧基雌二醇的抑制作用的图。
图11显示2-甲氧基雌二醇降低卵白蛋白(DNP-OA)刺激的[3H]-5HT从豚鼠腹膜巨噬细胞中的释放，但对PMA的应答没有作用。
具体实施方式
缩写
本发明所用缩写如下：
AHR：气道高应答性
bFGF：基本成纤细胞生长因子
DNP-OA：经二硝基-苯酚处理的卵白蛋白
EGF：表皮生长因子
fMLP：甲酰基甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸
PDGF：血小板衍生的生长因子
PMA：佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸盐
5HT：血清素
常规方法
细胞培养
从Alfred医院(Melbourne)的肺移植供体或受体的宏观正常肺切除样品中得到人支气管平滑肌。按以前所述具体制备培养物(Tomlinson等人，1994)。简言之，在37℃下将组织部分消化在包含3mg/ml胶原酶的Dulbecoo改良Eagle培养基(DMEM)(补充有2mM L-谷酰胺、100μg/ml链霉素、100U/ml青霉素G、2μg/ml两性霉素B、和0.25w/v％牛血清白蛋白(BSA))中30分钟，然后在0.5mg/ml弹性蛋白酶中温育2小时进一步消化约0.5g平滑肌，接着于37℃在胶原酶(3mg/ml)中温育18小时。离心细胞悬浮液(10分钟，100×g，25℃)，在经补充的DMEM中洗涤三次，重新悬浮在25ml包含10％(v/v)经热灭活的胎牛血清(FCS)的DMEM中，接种在25cm2 Falcon培养烧瓶中，并温育(37℃，5％CO2)7-10天，直至达到单层融合。通过10分钟接触0.5％肝素和1mM EDTA来每周收集细胞，并按1∶3分流比在75cm2Falcon培养烧瓶中传代。在实验中使用第3-15代的细胞。
免疫细胞化学
将细胞次代培养在8孔室式组织培养玻片(Labtek)中，并在DMEM(10％FCS)中培养至100％融合。在冰冷丙酮中固定20秒前，在PBS中洗涤三次玻片，在染色前于4℃下储存最多至4周。在PBS/BSA(0.25％)中再水化20分钟，然后在0.5％Triton X-100(于PBS)中温育，由此使细胞渗透，接着在22℃下与原发抗体温育至少60分钟。用0.25％BSA之PBS溶液洗涤3次，由此除去原发抗体，然后于22℃使细胞与次生抗体接触至少60分钟(辣根过氧化酶(HRP)-缀合的羊抗鼠；IgF(ab′)2片段或羊抗兔IgG)。用PBS/BSA(0.25％)代替原发抗体，由此制备对照溶液。用光显微镜(连接在VideoPro 32影象分析系统上的Olympus BH2，Faulding Imaging，Clayton，Victoria)分析经固定细胞的染色。用于在培养基中鉴别平滑肌的抗体的特征建立在天然气道壁样品上。所用的抗体可对抗α-肌动蛋白、肌凝蛋白、calponin(对平滑肌都是特异性的)、细胞发育素(cytokeratin)(上皮细胞)和PECAM-l(CD31，其是内皮细胞标记物)。
在所有用于本研究的培养基中都观察到平滑肌α-肌动蛋白、肌凝蛋白和calponin的表达。这些培养基没有表达可检测到的PECAM-1染色，而且少于5％的细胞对于用抗细胞发育素的单克隆抗体的染色是阳性的。用于产生培养物的气道附近的包埋石蜡的气道部分正性染色仅在气道平滑肌和血管束中的平滑肌α-肌动蛋白以及肌凝蛋白。抗PECAM-1的抗体染色血管内皮，而抗细胞发育素的抗体仅染色上皮，这证明这些抗体对靶抗原的特异性。
DNA和蛋白质的合成
按1∶3的比例将细胞次代培养在24孔板中，并在37℃下于5％CO2的大气环境下培养72-96小时至单层融合。用无血清的DMEM替换含血清的培养基24小时，产生生长停止。在某些实验中，在添加有丝分裂因子前用2-甲氧基雌二醇对细胞进行预处理30分钟。在适当的孔中加入刺激剂(有丝分裂因子)以及包含胰岛素、转铁蛋白和硒(MonomedA，1％v/v)的补充液。加入Monomed A是为了提供前进因子，这些因子对如凝血酶、表皮生长因子(EGF)和基本成纤细胞生长因子(bGF)的生长因子的有丝分裂活性是最基本的(Stewart等人，1995a)。在添加时使有丝分裂因子和抑制剂与细胞相接触，直至实验结束，除非另有说明。根据以前的研究(Stewart等人，1995)，在用[3H]-胸甙(1μCi/ml，4小时)脉冲以测定放射标记插入新合成之DNA前，温育细胞24小时(37℃，5％CO2)。放射活性的插入通过在脉冲-标记阶段结束时的过滤来确定。抽出包含放射活性的培养基，通过添加200μl的0.1M NaOH使细胞溶解。在结合收集器(Packard Filtermate 196)中于玻璃纤维过滤器(Packard，标准)上进行过滤，由此固定DNA，用3×3ml体积的蒸馏水和单次1ml体积的100％乙醇洗涤该过滤器。经干燥的过滤器在Packard Topcount液体闪烁计数器中计数。蛋白质合成速率在与上述实验类似的实验中确定，但是在4小时的脉冲温育中[3H]-白氨酸代替[3H]-胸甙。而且，在确定有丝分裂因子和2-甲氧基雌二醇对蛋白质合成速率的作用的实验中，与有丝分裂因子的温育进行48小时。这些实验需要持续更长的时间，以便有足够的时间使细胞分裂发生。
细胞计数
测量与上述DNA合成类似的实验中细胞数量的变化，由此确定气道平滑肌细胞通过细胞循环至有丝分裂的前进过程，不同的是继续与有丝分裂因子温育48小时。曝露在200μl的0.5％胰蛋白酶之PBS溶液中30-45分钟，该PBS包含1Mm EDTA，以确保细胞完全地相互分开，并与培养板分开，以便能够进行精确的计数，由此将细胞从实验所用的6孔培养板的各孔中移出。在该时间段终止后，进一步添加200μl的PBS(20％FCS)，以防止细胞被胰蛋白酶溶解，然后在血细胞计数器中直接计数细胞。
统计学分析
对于DNA和蛋白质合成实验，每个实验的各项处理重复4次。各实验至少在从3个不同的个体中得到的3个不同培养基中进行。在细胞计数时，在3个培养基中进行单独的温育。结果以从多个培养基中得到的分组数据表示，然后以n个培养基的平均值±SE来表示。经处理细胞的应答除以在相同24孔板上的对照的应答，由此计算出增加度。在对数转化进行回归后，通过成对t-检验来分析分组数据。在必要时使用多重比较的Bonferroni调节。如果p＜0.05，则认为差异显著。
材料
所用的化学品都是分析级的或者更高级别的。所用的化合物及其来源如下：2-甲氧基雌二醇(1，3，5-[10]-雌三烯-2，3，17-三醇2-甲基醚，商品编号83H4065)；17β-雌二醇(1，3，5[10]-雌三烯-3，17β-二醇，商品编号E8876)；2-甲氧基雌三醇(1，3，5-雌三烯-2，3，16α，17β-四醇，商品编号26F 4038)；2-甲氧基雌酮(2，3-二羟基-1，3，5[10]-雌三烯-17-酮，商品编号110F4003)；2-羟基雌二醇(1，3，5[10]-雌三烯-2，3，17β-三醇，商品编号75H0853)；L-谷酰胺、基本上无脂肪酸的牛血清白蛋白部分V(BSA)、凝血酶(牛血浆)，得自于Sigma公司，美国；两性霉素B(Fungizone)、人重组基本FGF(bFGF)，得自于Promega公司，美国；CLS1型胶原酶、弹性蛋白酶，得自于Worthington Biochemical公司，美国；Dulbecco‘A’磷酸盐缓冲盐水(RBS)，得自于Oxoid公司，英国；胰蛋白酶、依地酸、青霉素-G、链霉素、Monomed A，得自于CSL，澳大利亚；胎牛血清(FCS)，得自于Flow Laboratories，澳大利亚；Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)，得自于Flow Laboratories，苏格兰。[6-3H]-胸甙(185GBq/mmol，5Ci/mmol)，得自于Amersham，英国；Microscint-O闪烁体，得自于Canberra-Packard，澳大利亚。用于免疫细胞化学中的抗体是抗平滑肌α-肌动蛋白(鼠单克隆)(Dako M851)、单克隆鼠抗PECAM-1(DAKO-CD31，JC/70A)(Dako M823)，得自于Dako公司，美国；抗细胞发育素(鼠单克隆CY90，Sigma，美国)抗鼠Ig F(ab′)2片段FITC-缀合物(宿主羊)、羊抗兔Ig HRP-缀合物(SilenusDDAF)，得自于Silenus公司，澳大利亚，以及抗平滑肌myosin(兔多克隆)，由M Sparrow教授(Perth，WA)提供。
实施例1
2-甲氧基雌二醇对白细胞活性的作用
白细胞激活是哮喘病理学的一个特征。2-甲氧基雌二醇与微管素上的秋水仙素结合位点的结合产生该化合物干扰白细胞功能如细胞吞噬作用和移动作用的可能性。
2-甲氧基雌二醇的功能作用在由人外周血中得到的多形核白细胞(PMN)和粘性单核细胞上进行检查。超氧化物阴离子的产生通过超氧化物歧化酶敏感性还原细胞色素C来确定(Stewart和Harris，1992)。髓过氧化酶的释放通过四甲基-联苯胺的氧化反应来确定(Menegazzi等人，1992)。细胞吞噬作用通过酵母多糖颗粒的放射性碘化来确定(Shelton和Hosking，1975)。
根据我们以前的研究收集并培养豚鼠腹膜巨噬细胞(Stewart和Phillips，1989)。细胞与刺激剂在有或没有2-甲氧基雌二醇(10μM)存在时温育30分钟，所述刺激剂包括向化性的三肽、甲酰基甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸(fMLP，100nM)、酵母多糖(400μg/ml)或佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸盐(PMA，100nm)，而2-甲氧基雌二醇在刺激剂前15分钟加入。通过超氧化物歧化酶敏感的细胞色素C还原来确定超氧化物阴离子(Stewart和Harris，1992)，而前列环素的稳定代谢物——6-氧-PGF1通过放射性免疫测定法来测定(Stewart和Phillips，1989)。所有的单独培养重复进行两次，并在来自于5只豚鼠的巨噬细胞中进行实验。
RBL2H3细胞在包含10％FCS的RPMI 1640培养基中培养，并在24孔板中传代用于实验。与从分泌抗DNP卵白蛋白抗体的淋巴细胞系中得到的50％(v/v)调理的培养基一起温育48小时，由此致敏化细胞。在该温育的最后24小时中，在各孔中加入[3H]-5HT(1μCi/ml)，以标记粒状胺储存。在温育结束后，抽出培养基，在RPMI 1640中洗涤两次细胞，在有或没有2-甲氧基雌二醇存在下在RPMI 1640(0.25％BSA)中培养15分钟，然后用经DNP处理的卵白蛋白、A23187或PMA刺激30分钟，此时收集上清液，离心上清液(100×g，4℃，5分钟)，并取样以确定[3H]-5HT的释放量。所有实验重复4次。
结果表明，如表1所示，2-甲氧基雌二醇(3μM)降低用酵母多糖(400μg/ml)或fMLP刺激的白细胞中四甲基-联苯胺的氧化。通过四甲基-联苯胺氧化反应测定出，从经fMLP刺激的白细胞中得到的无细胞的上清液仍包含髓超氧化酶活性。但是该活性仅被最高浓度的2-甲氧基雌二醇(10μM)降低。另外，用经纯化的辣根过氧化酶进行实验，以检查2-甲氧基雌二醇对四甲基联苯胺的氧化反应是否有直接作用。2-甲氧基雌二醇(10μM)在该测定中没有作用。结果见图1。
                表1：人多形核白细胞的四甲基联苯胺氧化反应
  对照   fMLP100nm   酵母多糖400μg/ml
  基线   -0.001±0.002   -0.057±0.021   -0.26±0.009
  2-甲氧基雌二醇3μM   -0.004±0.001   -0.028±0.03   -0.013±0.012
数据以吸收值的变化来表示。测定使用2×106PMN在0.5ml缓冲液中进行。
在PMN中，最高至10μM的2-甲氧基雌二醇没有降低在fMLP(100nm)或酵母多糖(400μg/ml)应答中超氧化物阴离子的产生。在细胞吞噬作用试验中，2-甲氧基雌二醇降低了以PNM对酵母多糖颗粒的放射性碘化，在3和10μM时都观察到显著的作用，见表2。
                    表2：人多形核白细胞对125I的吸收
  无PHS   PHS*
  对照   酵母多糖   对照   酵母多糖
  基线   1.80±0.09   2.83±0.09   2.13±0.24   4.33±0.51
  2-甲氧基雌二醇3μM   1.97±0.44   1.97±0.48   1.87±0.46   3.27±0.64
  2-甲氧基雌二醇10μM   2.05±0.44   1.80±0.49   1.75±0.45   1.65±0.15
*PHS＝储存的人血清
数据以在可玻璃纤维过滤的材料中125I插入的百分数来表示。测定使用1×106PMN来进行。
在粘性单核细胞中，10μM的2-甲氧基雌二醇对相应于佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸盐(1μM)PMA或酵母多糖(400μg/ml)的应答的四甲基-联苯胺氧化反应没有作用。而且，该细胞类型中在对PMA应答中超氧化物阴离子的产生没有作用。但是，在至少某些供体的单核细胞中，酵母多糖刺激的超氧化物阴离子产生明显被2-甲氧基雌二醇(10μM)抑制。
如图8所示，豚鼠巨噬细胞对酵母多糖或fMLP的超氧化物阴离子应答被2-甲氧基雌二醇降低。但是，对PMA(100nM)的应答未被影响。另外，fMLP(100nM)诱导的6-氧-PGF1α产生增加完全被2-甲氧基雌二醇阻断，而对PMA的诱导仅被降低50％，而且如图9所示，酵母多糖没有刺激前列环素代谢物水平的增加。
卵白蛋白(DNP-OA)诱导浓度依赖性的[3H]-HT释放，如图10所示，该释放可被10μM的2-甲氧基雌二醇降低。但是，如图11所示，[3H]-HT的基线释放以及应答PMA(100nM)或钙离子载体A23187(10μM)中的释放未被2-甲氧基雌二醇影响。
2-甲氧基雌二醇对PMN髓过氧化酶释放和活性的抑制作用以及对细胞吞噬作用的降低表明，该化合物具有体内抗炎作用。对经酵母多糖刺激的超氧化物阴离子产生的选择性抑制作用说明对该吞噬刺激物的特异性作用。这些现象和我们说明对巨噬细胞功能的抑制作用的试验都提供了有益于哮喘和其他慢性阻塞性气道疾病、特别是那些明显有PMN参与的气道疾病的抗炎作用的证据。
实施例2
2-甲氧基雌二醇对DNA合成的作用
在添加有丝分裂因子前使经培养的人气道平滑肌细胞于0.3-10μM的2-甲氧基雌二醇温育30分钟，并如图2a所示，在剩余的28小时实验期间使凝血酶刺激的[3H]-胸甙插入产生浓度依赖性的降低。在2-甲氧基雌二醇的最高浓度(10μM)时，对凝血酶的应答被降低至大约为对照水平的10％。2-甲氧基雌二醇对DNA合成的抑制作用不限于凝血酶的存在，因为在DNA合成被胎牛血清(FCS，1％v/v)或基本成纤细胞生长因子(bFGF，300pM)刺激的细胞中(图2a和2b)，观察到了2-甲氧基雌二醇类似的浓度相关性抑制作用。但是，EGF(3nM)或10％FCS存在时的DNA合成被显著抑制，其程度更甚于对凝血酶、bFGF或更低浓度的FCS的应答(图2c)。10％FCS应答中的DNA合成(比未经刺激的[3H]-胸甙插入水平高27.2±7.8倍)显著大于(p＜0.05，成对Student′s t-检验)对0.3U/ml凝血酶(8.4±3.1倍)、3nm EGF(4.5±0.7)或1％FCS(12.7±0.4)的应答，但是与对300pM的bFGF(22.5±0.4)的应答没有显著差异。
还进行了随时间的研究，以确定在与有丝分裂因子接触后添加2-甲氧基雌二醇是否仍抑制DNA的合成。当在凝血酶后最多4小时添加2-甲氧基雌二醇(3μM)时，凝血酶(0.3U/ml)刺激的DNA合成被抑制，在添加凝血酶后2小时观察到最大抑制作用。在凝血酶后4-14小时之间添加2-甲氧基雌二醇产生较小的抑制作用(约20％)，而如图2d所示，在18小时或更后的添加对该有丝分裂因子存在时的DNA合成没有作用。随后检查另外的时间点，这些研究表明在凝血酶的同时或在其后1小时添加2-甲氧基雌二醇时可观察到最高水平的活性，但是显著的抑制作用可持续至凝血酶添加后的6小时(图2d)。
实施例3
2-甲氧基雌二醇对蛋白质合成和细胞数量的作用
为确定对DNA合成的抑制作用是否也导致细胞循环发展的停止以及对有丝分裂的抑制，在与有丝分裂因子温育48小时后进行蛋白质合成和细胞数量的测定。在凝血酶(0.3U/ml)、FCS(1％v/v)或bFGF(300pM)存在时，抑制[3H]-白氨酸插入的阈浓度是1μM，而且与抑制[3H]-胸甙插入的结果类似。大约30％应答时的最大百分降低低于DNA合成时观察到的值，并发生在3μM。在10μM时，如图3所示，在凝血酶或bFGF存在时，没有显著的抑制作用。2-甲氧基雌二醇单独在0.3μM时对[3H]-白氨酸插入产生小的刺激作用。更高的浓度(1和3μM)具有小的抑制作用，而在10μM时没有作用。这些结果见表3。相反地，应答FCS(1％，v/v)或bFGF(300pM)时细胞数量的增加对2-甲氧基雌二醇的抑制作用更敏感，超过对蛋白质或DNA合成的作用，如图4a和4b所示，在3μM观察到增殖应答被完全抑制。
表3：2-甲氧基雌二醇对未经刺激的平滑肌细胞中蛋白质合成速率的作用
  2-甲氧基雌二醇(μM)   [3H]-白氨酸插入(％对照)平均值±SEM
  -   100
  0.3   135±3*
  1.0   84±4*
  3.0   77±3*
  10.0   113±9
*p＜0.05成对Student′s t-检验，与100％相比(无预处理)
实施例4
血清素刺激的[ 3 H]-白氨酸在平滑肌细胞中的插入
浓度为0.1nM-10μM的血清素(5HT)对[3H]-胸甙的插入没有作用，但是10nM的5HT可增加[3H]-白氨酸的插入。与0.3-10μM的2-甲氧基雌二醇预先温育可按照浓度依赖性方式降低5HT(10nM)刺激的蛋白合成的增加，结果见表4。
表4：2-甲氧基雌二醇对经5HT刺激的平滑肌细胞中蛋白质合成速率的作用
  2-甲氧基雌二醇(μM)   [3H]-白氨酸插入(％对照)平均值±SEM
  -   100
  0.3   91±5
  1.0   62±2*
  3.0   56±2*
  10.0   51±6*
*p＜0.05成对Student′s t-检验，与100％相比(无预处理)
实施例5
2-甲氧基雌二醇的形态学作用
浓度为3和10μM的2-甲氧基雌二醇可观察到包括显示正常纺锤形细胞的圆形外观的形态学变化。形状变化在开始时相对较快，在6小时内即可观察到，而且在温育期间都保持。这些形状变化与用微管解聚剂——秋水仙素(0.1-10μM)温育细胞时诱导的形状变化类似。甾体受体拮抗剂——RU 486(Stewart等人，1995b)降低应答秋水仙素或2-甲氧基雌二醇时产生的形状变化，但是对2-甲氧基雌二醇抑制DNA合成没有作用。这些结果如图5所示。
实施例6
2-甲氧基雌二醇类似物的作用
检查几种与2-甲氧基雌二醇有关的化合物对经FCS(1％，v/v)刺激的DNA合成的抑制作用，包括母体化合物——17β-雌二醇和立即的前体化合物——2-羟基雌二醇。如图6所示，较低浓度的这些化合物都可增加经FCS(1％)刺激的DNA合成。在更高浓度时，增加作用被反转，并在10μM的这些化合物浓度时观察到抑制作用。2-羟基雌二醇(10μM)的抑制作用等于2-甲氧基雌二醇(10μM)。用包括2-甲氧基雌酮和2-甲氧基雌三醇的类似物观察到双相作用，这些化合物在最高至3μM的浓度时增加经凝血酶刺激的DNA合成，但是在10μM时增加水平下降，参见图7。17β-雌二醇和2-羟基雌二醇对蛋白质合成的作用见表5。
表5：2-甲氧基雌二醇对未经刺激的平滑肌细胞中蛋白质合成速率的作用
  浓度   [3H]-白氨酸插入(％对照)平均值±SEM
  17β-雌二醇   2-羟基雌二醇
  100   100
  0.3   103±6   107±3
  1.0   89±4   94±10
  3.0   87±6   56±8*
  10.0   100±9   51±10*
*p＜0.05成对Student′s t-检验，与100％相比(无预处理)
我们发现2-甲氧基雌二醇具有抗炎活性并抑制DNA合成和随后的从人支气管培养出来的气道平滑肌细胞的分裂，2-甲氧基雌二醇是17β-雌二醇的天然代谢物，而以前认为17β-雌二醇是无活性的。
抗炎活性使该化合物及其类似物可用于炎性疾病的治疗，如哮喘和其他慢性阻塞性气道疾病、特别是具有明显PMN参与的那些疾病的治疗。
对DNA合成的抑制作用不是细胞毒性的结果，这是因为细胞与最高浓度的2-甲氧基雌二醇(10μM)一起温育时蛋白质合成速率没有被改变，而且在该浓度时没有观察到细胞从培养板上脱落。不希望使观察到的优点囿于任何机理的限制，可能的情况是，甾体在细胞循环的G1阶段(有丝分裂因子后2小时)即早期抑制细胞，产生最大的DNA合成抑制作用。尚未确定有丝分裂因子后添加2-甲氧基雌二醇是否仍可维持其抗增殖作用。2-甲氧基雌二醇以相同的效力抑制对bFGF、凝血酶和FCS(1％)的应答，这说明对任何有丝分裂因子没有特异性抑制作用。该观察的结果暗示2-甲氧基雌二醇作用在使用各有丝分裂因子的早期分子内发送信号步骤中。然而，对DNA合成的抑制作用是可克服的，用2-甲氧基雌二醇预先温育，较高浓度的FCS(10％)被明显地较少抑制。该耐受性可用对高浓度FCS的更大应答来解释，但是当有丝分裂因子是EGF时，类似的理由不能用于对抑制作用的耐受，因为该EGF诱导小的应答，低于凝血酶、FCS 1％或bFGF诱导的应答。但是，EGF和10％FCS的增殖作用可被2-甲氧基雌二醇抑制。我们尚未发现任何将对DNA合成的抑制作用与对细胞增殖的抑制作用联系在一起的证据。然而，在较低浓度的2-甲氧基雌二醇时观察到的后期作用说明2-甲氧基雌二醇除对DNA合成的抑制作用外的其他作用对抗增殖作用也是有贡献的。
检查了几种2-甲氧基雌二醇的类似物，以确定它们是否具有相同的抗增殖作用。母体化合物17β-雌二醇和立即的前体化合物2-羟基雌二醇在较低浓度时增加应答FCS(1％)的DNA合成，但在3和10μM时抑制DNA合成。尚未确定DNA合成中的这些变化是否导致相应的细胞增殖的变化。2-甲氧基雌酮和2-甲氧基雌三醇对经凝血酶刺激的DNA合成的增加显示出铃形的浓度应答曲线，在较高浓度时具有较低的作用。总而言之，我们观察的结果表明2-甲氧基雌二醇是所有已检查化合物中效力最高的，这与以前对内皮细胞的增殖应答的观察结果一致(Fotsis等人，1994)。
还有可能的是与诱导代谢至活性化合物的药物一起给药母体化合物17β-雌二醇。例如，可使用p450细胞色素以及儿茶胺甲基转移酶的诱导剂。芳基硫酸酯酶的抑制剂也可考虑。
2-甲氧基雌二醇的抗增殖作用及其降低5HT诱导的蛋白质合成增加表明其同时具有抗增生和抗肥大的作用。在哮喘气道中有许多增生和肥大现象(Ebina等人，1993)，它们是AHR现象的主要部分(James等人，1989)。降低AHR与完全缓解某些哮喘病患者中的症状有关(Platts-Mills等人，1987)。而且，在所有哮喘气道壁组织改变应答时的结构变化中，气道平滑肌的增加是最重要的(Pare和Bai，1995)。如2-甲氧基雌二醇的化合物可防止气道平滑肌的生长应答，因此可降低AHR并缓解哮喘症状。另外，2-甲氧基雌二醇的抗血管生成活性(Fotsis等人，1994)也有可能限制气道组织改变应答，这是因为已经确定在组织改变中有血管生成发生(Kuwano等人，1993)。看来需要用血管生成作用来支持组织质量增加的代谢需求。因此，防止血管生成作用可使组织改变应答停止，这与2-甲氧基雌二醇对平滑肌和其他细胞类型的任何直接抑制作用是不相关的。
2-甲氧基雌二醇的许多其他性质对于治疗哮喘也是有益的，这包括其已知的破坏微管形成的作用(D′Amato等人，1994)，该作用可降低炎性介质从肥大细胞、巨噬细胞和嗜曙红细胞中的细胞排粒性释放。
我们的数据表明2-甲氧基雌二醇抑制抗原诱导的肥大细胞脱粒作用。该活性支持在更广范围的过敏性疾病中使用2-甲氧基雌二醇，所述过敏性疾病包括过敏性鼻炎和特异反应性皮肤疾病。fMLP对豚鼠腹膜巨噬细胞活化的抑制作用表明2-甲氧基雌二醇的作用可增加至与肌肉骨架有关的情况中，这是因为fMLP活化与G-蛋白质有关的受体，而不是细胞吞噬作用。
另外，2-甲氧基雌二醇的抗氧化活性也是有益的，因为在气道炎症中涉及的三种关键的炎性细胞类型都具有产生大量氧自由基的能力，而且与氧化氮一起可导致明显的氧化剂损坏。这些活性还支持2-甲氧基雌二醇在治疗慢性阻塞性气道疾病中的应用，在该疾病中已确定了氧自由基的主要作用而且有气道壁组织改变的证据(Kuwano等人，1993)。最后，几个研究表明2-甲氧基雌二醇和相关化合物可减少钙向平滑肌中的流入(Goyache等人，1995)，如果该现象也在气道平滑肌中得到证实，这将对抗哮喘中的支气管痉挛。
虽然为清除和理解的目的已具体地描述了一些实施例，但它们仅是指导性的。本领域普通技术人员应认识到，在不偏离本发明范围的情况下还可对在此描述的实施方案进行各种的改进和变化。
本文中所引用的文献如下。
Aizu-Yokotta，E.，Susaki，A.和Sato，Y.(1995)，天然雌激素诱导对培养基中中国仓鼠V79细胞之微管的调节(Natural estrogens induce modulationof microtubules in chinese hamster V79 cells in culture)，Cancer Research，55，1863。
Brewster，C.E.P.，Howarth，P.H.，Djukanovic，R.，Wilson，J.，Holgate，S.T.和Roche，W.R.(1990)，支气管哮喘中的肌成纤细胞和上皮下的变性(Myofibroblasts and subepithelial fibrosisin bronchial asthma)，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.3.507。
Goyache，E.M.，Gutierrez，M.，Hidalgo，A.和Cantabrana，B.(1995)，儿茶酚雌激素在体内鼠子宫收缩中的非基因组作用(Non-genomic effects ofcatecholestrogens in the in vivo rat uterine contraction)，GeneralPharmacology，26，219。
D′Amato，R.J.，Lin，C.M.，Flynn，E.，Folkman，J.和Hamel，E.(1994)，2-甲氧基雌二醇，一种内源性哺乳动物代谢物，通过在秋水仙素位点处的相互作用抑制微管素的聚合(2-Methoxyoestradiol，an endogenousmammalian metabolite，inhibits tubulin polymerization by interacting at thecolchicine site)，Proceedings of the National Academy of Sciences(美国)，91，3964。
Dunhill，M.S.，Massarella，G.R.，Anderson，J.A.(1969)，正常受试者、哮喘病患者、慢性支气管炎和肺气肿中的支气管定量解剖比较(Acomparision of the quantitative anatomy of the bronchi in normal subjects，in status asthmaticus，in chronic bronchitis，and in emphysema)，Throax，24，176。
Ebina，M.，Takahashi，T.，Chiba，T.，Motomiya，M.(1993)，支气管哮喘的气道平滑肌的细胞肥大和增生。3-D形态学研究。(Cellular hypertrophyand hyperplasia of airway smooth muscle underlying bronchial asthma.A3-D morphometric study)，Am.Rev.Resp.Dis.，148，720。
Fotsis，T.，Zhang，Y.，Pepper，M.S.，Adlecrutz，H.，Montesano，R.，Nawroth，P.和Schweiger，L.(1994)，内源性雌激素代谢物2-甲氧基雌二醇抑制血管生成和肿瘤生长(The endogenous oestrogen metabolite2-methoxyoestradiol inhibits angiogenesis and suppresses tumour growth)，Nature，368，237。
Frigas，E.，Motojima，S.和Gleich，G.J.(1991)，支气管哮喘的发病机理中嗜曙红细胞对气道粘膜的损伤(The eosinophilic injury to the mucosa ofthe airways in the pathogenesis of bronchial asthma)，Eur.J.Respir.Dis.，13，123S。
Hirst，S.J.，Barnes，P.J.，Twort，C.H.C.(1992)，定量应答血清和血小板衍生的生长因子中经培养的人和兔气道平滑肌细胞的增殖(Quantifyingproliferation of cultured human and rabbit airway smooth muscle cells inresponse to serum and platelet-derived growth factor)，Am.J.Resp.Cell.Mol.Biol.，7，574。
James，A.J.，Pare，P.D.，Hogg，J.C.(1989)，哮喘中气道狭窄的机理(Themechanics of airway narrowing in asthma)，Am.Rev.Respir.Dis.，139，242。
Klauber，N.，Panangi，S.，Flynn，E.，Hanel，E.和D′Amato，R.J.(1997)，微管抑制剂2-甲氧基雌二醇和紫杉酚对鼠血管生成和乳腺癌的抑制作用(Inhibition of angiogenesis and breast cancer in mice by the microtubuleinhibitors 2-methoxyoestradiol and taxol)，Cancer Research 57：81-86。Kuwano，K.，Bosken，C.H.，Pase，P.D.，Bai，T.R.，Wiggs，B.R.和Hogg，J.C.(1993)，哮喘中小气道体积和慢性气道阻塞性肺疾病(Small airwaysdimensions in asthma and chronic airway obstructive pulmonary disease)，Am.Rev.Resp.Dis.，148，1220。
Lottering，M.L.，Haag，M.和Seegers，J.C.(1992)，17β-雌二醇代谢物对MCF-7细胞中细胞循环过程的作用(Effects of 17β-oestradiolmetabolites on cell cycle events in MCF-7 cells)，Cancer Research，52，5926。
Lungren，R.，Soderberg，M.，Horstedt，P.和Stenling，R.(1989)，在吸入甾体治疗10年之前和之后哮喘患者支气管粘膜活体解剖的形态学研究(Morphological studies on bronchial mucosa biopsies from asthmaticsbefore and after ten years of treatment with inhaled steroids)，Eur.Repir.J.，1，883。
Menegazzi，R.，Zaborchi，G.，Knowles，A.，Cramer，C.和Patrarca，P.(1992)，总细胞悬浮液中测定人中性白细胞和嗜曙红细胞分泌的过氧化酶的新一步法(A new one-step assay on whole cell suspensions for peroxidasesecretion by human neutrophils and oesinophils)，J.Leuk-Biol.，52：612。Merriam，G.R.，Machusky，N.J.，Picard，M.K.和Naftolin，F.(1980)，儿茶酚雌激素的比较性质，I：儿茶酚-O-甲基转移酶的甲基化以及与胞液雌激素受体的结合(Comparative properties of the catecholestrogens，I：methylation by catechol-O-methyltransferase and binding to cytosolestrogen receptors)，Steroids，36：1-11。
Nishigaki，I.，Sasguri，Y.和Yagi，K.(1995)，2-甲氧基雌二醇对经培养的兔主动脉平滑肌细胞的抗增殖作用(Anti-proliferative effect of2-methoxyoestradiol on cultured smooth muscle cells from rabbit aorta)，Atherosclerosis，113，167。
Pare，P.和Bai，T.R.(1995)，慢性过敏炎症的后果(The consequences ofchronic allergic inflammation)，Thorax，50，328。
Platts-Mills，T.A.E.和Chapman，M.D.(1987)，尘螨：免疫学、过敏性疾病和环境控制(Dust mites：immunology，allergic disease，andenvironmental control)，J.Allergy Clin.Immunol.，80，755。
Rosner，W.，Hryb，D.J.，Khan，M.S.，Nakhla，A.M.和Ronmas，N.A.(1991)，结合性激素的球蛋白：新调节系统的解剖和生理学(Sex-hormone bindingglobulin：anatomy and physiology of a new regulatory system)，Journal ofSteroid Biochemistry & Molecular Biology，40，813。
Shelton，M.J.和Hosking s.(1975)，复发感染的儿童中的中性白细胞和调理功能。I中性白细胞碘化(Neutrophil and Opsonic function in childrenwith recurrent infections I.Neurophil iodination.)，Aust.J.Med.Tech.，6：54。
Sotomayor，H.，Badier，M.M.，Vervloet，D.，Orehek，J.(1984)，对植物花粉过敏的病人中卡巴可气道应答性的季节性增加。用皮质类甾醇治疗(Seasonal increase of carbachol airway responsiveness in patients allergicto grass pollen.Reversal by corticosteriods)，Am.Rev.Resp.Dis.，130，56。
Spink，D.C.，Hayes，C.L.，Young，N.R.，Christou，M.，Sutter，T.R.，Jefcoate，C.R.和Gierthy，J.F.(1994)，2，3，7，8-四氯二苯并-p-二噁英对MCF-7乳腺癌细胞中雌激素代谢的作用：新型17β-雌二醇4-羟基酶诱导作用的证据(The effect of 2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin onestrogen metabolism in MCF-7 breast cancer cells：evidence for induction ofa novel 17-beta estradiol 4-hydroxylase)，Journal of Steroid Biochemistry &Molecular Biology，51，251。
Stewart AG，和Harris T.(1992)，腺苷抑制血小板活化因子而不是肿瘤坏死因子α诱导的人中性白细胞的引发(Adenosine inhibitsplatelet-activating factor but not tumour necrosis factor α-induced primingof human neutrophils)，Immunology 78：152-158。
Stewart AG，Tomlinson PRT和Wilson JW.(1995a)，调节气道壁组织改变：发展新型抗哮喘药物的前途(Regulation of airway wall remodelling：prospects for the development of novel anti-asthma drugs)，Advances inPharmacology 33，200。
Stewart AG，Fernandes DJ和Tomlinson PRT(1995b)，糖皮质激素抑制经培养的人气道平滑肌的促有丝分裂应答(Glucocorticoids inhibitmitogenic responses of human cultured airway smooth muscle)，BritishJournal of Pharmacology，116，3219。
Stewart，A.G.和Phillips，W.A.(1989)，细胞内血小板活化因子调节豚鼠腹膜巨噬细胞中二十碳酸化合物的产生(Intracellular platelet-activatingfactor regulates eicosanoid generation in guinea-pig peritonealmacrophages)，British Journal of Pharmacology，98：141-148。
Stewart，A.G.，Tomlinson PR，Fernandes DJ，Wilon J和Harris T(1995c)，肿瘤坏死因子α调节经培养的人气道平滑肌的促有丝分裂应答(Tumournecrosis factor αmodulates mitogenic responses of human cultured airwaysmooth muscle)，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.，12，110。
Stewart AG，Tomlinson PRT和Wilson，J.(1993)，哮喘中的气道壁组织改变：发展抗哮喘药物的新目标(Airway wall remodelling in asthma：anovel target for the development of anti-asthma drugs)，Trends inPharmacological Sciences，14，275。
Stewart AG，Schachte L和Tonlinson PR(1997)，在“哮喘发病机理中的气道壁组织改变”(Airway wall remodelling in the pathogenesis ofasthma)(Stewart编辑)一书中的“β2-肾上腺素受体激动剂对气道平滑肌增殖作用的调节”(Regulation of airway smooth muscle proliferationby β2-adrenoceptor agonists)，CRC Press，Boca Raton，第11章第195-335页。
Tomlinson PRT，Wilson J和Stewart AG(1994)，舒喘宁对培养基中培养的人气道平滑肌细胞增殖的抑制作用(Inhibition by salbutamol of theproliferation of human airway smooth muscle cells grown in culture)，British Journal of Pharmacology，111，641。
Tomlinson PRT，Wilson JW和Stewart AG(1995)，舒喘宁抑制培养基中培养的人气道平滑肌细胞的增殖：与高水平的cAMP的关系(Salbutamolinhibits the proliferation of human airway smooth muscle cells grown inculture：relationship to elevated cAMP levels)，Biochemical Pharmacology，49，1809。
Wahedna，I，Wong，C.S.，Wisniewski，A.F.Z.，Pavord，I.D.和Tattersfield，A.E.(1993)，常规β2-激动剂治疗期间和停止之后对哮喘的控制(Asthma control during and after cessation of regular β2-agonisttreatment)，Am.Rev.Respir.Dis.，148，707。
Zhang，Z和Davis，D.L.(1992)，从用儿茶酚雌激素、甲氧基雌激素和黄体酮处理的猪子宫内膜得到的腺细胞和基质细胞对前列腺素分泌的细胞类型特异性应答(Cell-type specific responses in prostaglandinsecretion by glandular and stromal cells from pig endometrium treated withcatecholestrogens，methoxyestrogens and progesterone)，Prostaglandins，44，53-64。

Claims (5)

1、甾体或甾体类似物在制备用于治疗以慢性或急性气道炎症为特征之疾病的药物中的应用，其中所述甾体或甾体类似物选自：2-甲氧基雌二醇、2-羟基雌二醇、2-甲氧基雌酮、2-甲氧基雌二醇-3-甲基醚和4-甲氧基雌二醇。
2、如权利要求1所述的应用，其中所述甾体是2-甲氧基雌二醇。
3、如权利要求1或2所述的应用，其中所述疾病选自：哮喘、气道高应答性、支气管收缩、肺气肿、肺炎、特异反应性疾病和肺感染。
4、如权利要求3所述的应用，其中所述特异反应性疾病是过敏性鼻炎。
5、如权利要求1所述的应用，其中所述药物为适合于吸入给药的剂型。
CNB971945055A 1996-05-09 1997-05-09 哮喘和气道疾病的治疗 Expired - Fee Related CN1245982C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPN9766 1996-05-09
AUPN9766A AUPN976696A0 (en) 1996-05-09 1996-05-09 Treatment of asthma and airway diseases
AUPN9918A AUPN991896A0 (en) 1996-05-20 1996-05-20 Treatment of asthma and airway diseases
AUPN9918 1996-05-20

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1218401A CN1218401A (zh) 1999-06-02
CN1245982C true CN1245982C (zh) 2006-03-22

Family

ID=25645169

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB971945055A Expired - Fee Related CN1245982C (zh) 1996-05-09 1997-05-09 哮喘和气道疾病的治疗

Country Status (8)

Country Link
US (2) US5962445A (zh)
EP (1) EP0923376B1 (zh)
JP (1) JP4228116B2 (zh)
CN (1) CN1245982C (zh)
AT (1) ATE281170T1 (zh)
CA (1) CA2253943C (zh)
DE (1) DE69731473T2 (zh)
WO (1) WO1997042958A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102793689A (zh) * 2012-09-12 2012-11-28 郑州大学 一种抗肿瘤药物2-甲氧基雌二醇干粉吸入剂及其制备方法

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040214807A1 (en) * 1993-08-06 2004-10-28 D'amato Robert J. Estrogenic compounds as anti-mitotic agents
US6908910B2 (en) 1993-08-06 2005-06-21 The Children's Medical Center Corporation Estrogenic compounds as anti-mitotic agents
US5504074A (en) * 1993-08-06 1996-04-02 Children's Medical Center Corporation Estrogenic compounds as anti-angiogenic agents
US6346510B1 (en) * 1995-10-23 2002-02-12 The Children's Medical Center Corporation Therapeutic antiangiogenic endostatin compositions
US6495579B1 (en) 1996-12-02 2002-12-17 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Method for treating multiple sclerosis
US20020002294A1 (en) * 1997-09-24 2002-01-03 D' Amato Robert J. Estrogenic compounds as antiangiogenic agents
GB9923076D0 (en) 1999-09-29 1999-12-01 Phytopharm Plc Sapogenin derivatives and their use
CA2339835C (en) 1998-08-11 2008-12-16 Entremed, Inc. Use of estrogenic compounds as anti-fungal agents
US6667299B1 (en) * 2000-03-16 2003-12-23 Hollis-Eden Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions and treatment methods
GB9923078D0 (en) * 1999-09-29 1999-12-01 Phytopharm Plc Sapogenin derivatives and their use
US7087592B1 (en) 1999-08-23 2006-08-08 Entre Med, Inc. Compositions comprising purified 2-methoxyestradiol and methods of producing same
GB9923077D0 (en) * 1999-09-29 1999-12-01 Phytopharm Plc Sapogenin derivatives and their use
GB0000228D0 (en) * 2000-01-06 2000-03-01 Phytopharm Plc Fluoro substituted sapogenins and their use
US20050192258A1 (en) * 2000-08-18 2005-09-01 Agoston Gregory E. Antiangiogenic agents
US7135581B2 (en) 2000-08-18 2006-11-14 Entremed, Inc. Antiangiogenic agents
US6995278B2 (en) 2000-08-18 2006-02-07 Entre Med, Inc. Antiangiogenic agents
GB0107822D0 (en) * 2001-03-28 2001-05-23 Phytopharm Plc Sapogenin derivatives their synthesis and use methods based upon their use
US20030236439A1 (en) * 2002-01-30 2003-12-25 Gregory Agoston Non-steroidal analogs of 2-methoxyestradiol
US20050130948A1 (en) * 2002-03-27 2005-06-16 Daryl Rees Therapeutic methods and uses of sapogenins and their derivatives
KR101130212B1 (ko) * 2002-03-27 2012-04-13 파이토팜 피엘씨 사포게닌 및 그 유도체의 치료 방법 및 사용법
AU2003297294A1 (en) * 2002-11-20 2004-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for inhibiting allergic inflammation and other responses initiated by pollens, molds, and other non-animal derived allergens
US20040175384A1 (en) * 2003-12-12 2004-09-09 Mohapatra Shyam S. Protein kinase C as a target for the treatment of respiratory syncytial virus
JP2006518393A (ja) * 2003-02-20 2006-08-10 ユニバーシティ オブ ピッツバーグ 肺高血圧症の処置のためのエストラジオール代謝産物
CN1867577A (zh) * 2003-05-13 2006-11-22 克里普托法玛有限公司 雌三烯衍生物
AU2004275693A1 (en) * 2003-05-28 2005-04-07 Entremed, Inc. Antiangiogenic agents
US8592368B2 (en) * 2003-12-19 2013-11-26 University Of South Florida JAK/STAT inhibitors and MAPK/ERK inhibitors for RSV infection
WO2005089256A2 (en) 2004-03-12 2005-09-29 Entremed, Inc. Antiangiogenic agents
US20070004689A1 (en) * 2004-03-12 2007-01-04 Agoston Gregory E Antiangiogenic agents
JP2008513375A (ja) * 2004-09-13 2008-05-01 ピーアール ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド エストラジオール代謝産物の長期間作用型の注射可能な結晶性処方物およびその使用法
WO2006058298A2 (en) * 2004-11-29 2006-06-01 Entremed, Inc. A method of administering anti-angiogenic agents and a method of treating disease using same
US20070048230A1 (en) * 2005-08-24 2007-03-01 Walter Parsadayan Pheromone compositions and methods
WO2007059111A2 (en) * 2005-11-14 2007-05-24 Entremed, Inc. Anti-angiogenic activity of 2-methoxyestradiol in combination with anti-cancer agents
US20070176403A1 (en) * 2006-02-01 2007-08-02 Dennis Calderone Air adjustable seat
AU2007227256B2 (en) 2006-03-20 2012-10-04 Entremed, Inc. Disease modifying anti-arthritic activity of 2-methoxyestradiol
US20080234243A1 (en) * 2007-01-31 2008-09-25 Lavallee Theresa M Method of treating amyloidosis mediated diseases
WO2008097971A2 (en) * 2007-02-06 2008-08-14 The Research Foundation Of State University Of New York Methods for treating diseases of altered ige regulation
US9301920B2 (en) 2012-06-18 2016-04-05 Therapeuticsmd, Inc. Natural combination hormone replacement formulations and therapies
MX365818B (es) 2011-11-23 2019-05-30 Therapeuticsmd Inc Formulaciones y terapias de reemplazo hormonal de combinacion naturales.
US10806740B2 (en) 2012-06-18 2020-10-20 Therapeuticsmd, Inc. Natural combination hormone replacement formulations and therapies
US10806697B2 (en) 2012-12-21 2020-10-20 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US20130338122A1 (en) 2012-06-18 2013-12-19 Therapeuticsmd, Inc. Transdermal hormone replacement therapies
US20150196640A1 (en) 2012-06-18 2015-07-16 Therapeuticsmd, Inc. Progesterone formulations having a desirable pk profile
US11246875B2 (en) 2012-12-21 2022-02-15 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US10537581B2 (en) 2012-12-21 2020-01-21 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US9180091B2 (en) 2012-12-21 2015-11-10 Therapeuticsmd, Inc. Soluble estradiol capsule for vaginal insertion
US10471072B2 (en) 2012-12-21 2019-11-12 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US11266661B2 (en) 2012-12-21 2022-03-08 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
US10568891B2 (en) 2012-12-21 2020-02-25 Therapeuticsmd, Inc. Vaginal inserted estradiol pharmaceutical compositions and methods
CA2947767A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Therapeuticsmd, Inc. Natural combination hormone replacement formulations and therapies
US10328087B2 (en) 2015-07-23 2019-06-25 Therapeuticsmd, Inc. Formulations for solubilizing hormones
US10286077B2 (en) 2016-04-01 2019-05-14 Therapeuticsmd, Inc. Steroid hormone compositions in medium chain oils
JP2019513709A (ja) 2016-04-01 2019-05-30 セラピューティックスエムディー インコーポレーテッドＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｍｄ， Ｉｎｃ． ステロイドホルモン薬学的組成物
US11633405B2 (en) 2020-02-07 2023-04-25 Therapeuticsmd, Inc. Steroid hormone pharmaceutical formulations
PL244930B1 (pl) * 2021-12-08 2024-04-02 Gdanski Univ Medyczny Zastosowanie 2-metoksyestradiolu w leczeniu mastocytozy

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3274056A (en) * 1963-05-17 1966-09-20 American Cyanamid Co Methods for lowering blood cholesterol and compositions of alkali metal 2-methoxyestra-1, 3, 5(10)-trien-3-ol-17-one sulfate
US4427669A (en) * 1982-06-28 1984-01-24 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Contraceptive
US4420428A (en) * 1982-12-27 1983-12-13 E. R. Squibb & Sons, Inc. 16-Ketoandrostene-17-dithioketals
DE3344834A1 (de) * 1983-12-08 1985-06-13 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Neue hydrocortison-und prednisolon-derivate
US4529548A (en) * 1984-05-07 1985-07-16 E. R. Squibb & Sons, Inc. 17β-(substituted thio)androstenes
US4529547A (en) * 1984-06-20 1985-07-16 E.R. Squibb & Sons, Inc. 17-(substituted thio)-17-(substituted dithio)androstenes
IL75903A (en) * 1984-07-25 1989-10-31 Hovione Int Ltd Di-isopropyl ether solvates of beclomethasone 17,21-dipropionate,their preparation and use
RU2028083C1 (ru) * 1987-07-10 1995-02-09 Андрюкин Алексей Алексеевич Способ лечения стероидозависимой бронхиальной астмы
US5116829A (en) * 1990-04-23 1992-05-26 Kao Corporation Steroid compounds
DK0588897T3 (da) * 1991-06-10 1996-03-18 Schering Corp Aerosolformuleringer, der i det væsentlige er fri for chlorfluorcarbonforbindelser
EP0653205B1 (en) * 1991-06-10 2002-10-16 Schering Corporation Non-chloroflurocarbon aerosol formulations
CA2078804C (en) * 1991-10-01 2003-02-25 Takehiko Suzuki Manufacture and use of novel glycosides of catechol estrogens
DK0675897T3 (da) * 1992-12-24 1998-01-26 Rhone Poulenc Rorer Ltd Nye steroider
US5504074A (en) * 1993-08-06 1996-04-02 Children's Medical Center Corporation Estrogenic compounds as anti-angiogenic agents
PE44995A1 (es) * 1994-01-27 1995-12-18 Schering Corp Furoato de mometasona para el tratamiento de las enfermedades pulmonares y de las vias respiratorias
JPH08165242A (ja) * 1994-12-09 1996-06-25 Kunio Yagi 抗動脈硬化剤

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102793689A (zh) * 2012-09-12 2012-11-28 郑州大学 一种抗肿瘤药物2-甲氧基雌二醇干粉吸入剂及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
US5962445A (en) 1999-10-05
JP4228116B2 (ja) 2009-02-25
JP2000507923A (ja) 2000-06-27
EP0923376A1 (en) 1999-06-23
CN1218401A (zh) 1999-06-02
WO1997042958A1 (en) 1997-11-20
CA2253943C (en) 2009-09-29
DE69731473D1 (de) 2004-12-09
ATE281170T1 (de) 2004-11-15
DE69731473T2 (de) 2005-10-27
US6200966B1 (en) 2001-03-13
EP0923376A4 (en) 2001-09-26
EP0923376B1 (en) 2004-11-03
CA2253943A1 (en) 1997-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1245982C (zh) 哮喘和气道疾病的治疗
Torday et al. Leptin mediates the parathyroid hormone-related protein paracrine stimulation of fetal lung maturation
Lee et al. Effect of estrogen on the expression of matrix metalloproteinase (MMP)-1, MMP-3, and MMP-13 and tissue inhibitor of metalloproternase-1 in osteoarthritis chondrocytes
Wu et al. Expression of mucin synthesis and secretion in human tracheobronchial epithelial cells grown in culture.
US20080221074A1 (en) Drug Screen and Treatment Method
Fu et al. Effects of senescent lens epithelial cells on the severity of age-related cortical cataract in humans: a case–control study
Stoerk et al. The Blood Calcium Lowering Effect of Hvdrocortisone in Parathyroidectomized Rats
Oikawa et al. Angiogenic activity of rat mammary carcinomas induced by 7, 12-dimethylbenz [a] anthracene and its inhibition by medroxyprogesterone acetate: possible involvement of antiangiogenic action of medroxyprogesterone acetate in its tumor growth inhibition
CN1036135A (zh) 生长抑制剂及其应用
Tran et al. Relationship between avian and mammalian anti-Müllerian hormones
Sen et al. Enhancement of disaturated phosphatidylcholine synthesis by epidermal growth factor in cultured fetal lung cells involves a fibroblast-epithelial cell interaction
Braun et al. Immunotoxicology of cigarette smoke condensates: suppression of macrophage responsiveness to interferon γ
Stoll et al. Action of estradiol on the hermaphroditism induced by testicular graft in the female chick embryo
Yang et al. Effects of dexamethasone on the basal and cytokine-stimulated release of endothelin-1 from guinea-pig cultured tracheal epithelial cells
Baird et al. Control of steroid synthesis in human fetal adrenals in monolayer culture
Li et al. Reduced PGC-1β protein expression may underlie corticosterone inhibition of mitochondrial biogenesis and oxidative phosphorylation in chicken muscles
Rodriguez et al. Inhibition of eosinophil transepithelial migration and downregulation of adhesion molecule expression on eosinophils and airway epithelial cells induced by budesonide
Cinti et al. Effects of noradrenaline exposure on rat brown adipocytes in cultures. An ultrastructural study
Liskova‐Kiar Mode of action of cortisol on bone resorption in fetal rat fibulae cultured in vitro
Pouyet et al. A histological and dynamic study of the gastric region of Discoglossus pictus larvae, cultured with or without thyroxine
Glišić et al. GASTRIN-PRODUCING G CELLS OF GASTRIC MUCOSA IN DEXAMETHASONE-TREATED RATS.
AU725048B2 (en) Treatment of asthma and airway diseases
Jie et al. Effects of steroid hormones on epithelial and stromal cells culture and proliferation of laying hens, in vitro
US20230416299A1 (en) Compound and method for the treatment and diagnosis of neurodegenerative conditions
Arikan et al. Effects of dbcAMP on progesterone synthesis by cultured goat luteal cell subpopulations isolated from early and late luteal stage corpora lutea

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20060322

Termination date: 20140509