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CN113631557B - Jak激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用 - Google Patents

Jak激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用 Download PDF

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CN113631557B CN202080015759.0A CN202080015759A CN113631557B CN 113631557 B CN113631557 B CN 113631557B CN 202080015759 A CN202080015759 A CN 202080015759A CN 113631557 B CN113631557 B CN 113631557B
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Abstract

涉及JAK激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用，属于医药化学领域。提供了一类新的小分子JAK抑制剂，其具有通式II所示的结构；所述化合物在预防或治疗JAK相关适应症中具有更好药效和安全性。

Description

JAK激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用
本申请要求于2019年3月14日提交中国专利局、申请号为201910193017.6、发明名称为“JAK激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明属于医药化学领域，涉及一类新的JAK激酶抑制剂及其制备方法，及在预防和治疗Janus激酶(JAK)相关疾病方面的应用，其中JAK相关疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病等。
背景技术
蛋白激酶(Protein kinases)是一类催化蛋白质磷酸化反应的酶，其能把三磷酸腺苷(ATP)上的γ-磷酸转移到蛋白质分子的氨基酸残基上，如丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸，组氨酸等残基，从而改变蛋白质的构象和活性。蛋白质的磷酸化是多种信号传导途径的重要环节，细胞内大部分重要的生命活过程都离不开蛋白质磷酸化。蛋白激酶主要负责细胞内信号转导过程的控制，包括调节各种各样重要的生物过程，如细胞生长、存活和分化、器官形成和形态发生、新血管形成、组织修复和再生，诸多疾病与蛋白激酶异常调节所引发的细胞内应答异常有关。
Janus激酶(Janus kinase，JAK)是一类细胞内非受体型酪氨酸激酶，人类JAK家族共有四个成员，分别是JAK1、JAK2、JAK3和非受体酪氨酸激酶2(TYK2)，JAK1、JAK2、TYK2分布广泛，而JAK3只分布于骨髓和淋巴系统中。JAK家族成员的分子量为约120-140kDa，由大于1000个氨基酸残基组成(Leonard，W.，O’Shea，J.J.，JAKS and STATS：Biological implications.Annu.Rev.Immunol.1998，16，293-322.)，它们在结构上有7个JAK同源结构域(JAKhomology domain，JH)，其中靠近C-末端的JH1结构域为激酶区，含有JAK激活所需的特定酪氨酸，磷酸化这些酪氨酸后，JAK蛋白构象发生变化，从而有利于与下游底物结合；JH2结构域是“假”激酶区，对JH1的活性起调节作用；JH4-JH7组成一个四合一结构域，调节JAK与细胞因子受体的结合(Kisseleva，T.，Bhattacharya，S.，Braunstein，J.，Schindler，C.W.Signaling through the JAK/STAT pathway，recent advances and futurechallenges.Gene.2002，285(1-2)，1-24.)。
信号转导子和转录激活子(signal transducer and activator oftranscription，STAT)是一组能与靶基因调控区DNA结合的胞质蛋白，是JAK的下游底物，STAT蛋白家族中包括STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b及STAT6等7个成员。JAK与STAT之间的相互作用在细胞因子受体信号通路中起着重要作用(O’Sullivan，L.A.，Liongue，C.，Lewis，R.S.，Stephenson，S.E.M.，Ward，A.C.Cytokine receptor signalingthrough the Jak Stat pathway in disease.Mol.lmmunol，2007，44{10)：2497-2506.)。细胞因子与其靶细胞上特异性受体结合后，受体的亚单元发生二聚或多聚，结合在各个亚单元上的JAK因彼此接近而发生磷酸化，活化的JAK催化受体本身的酪氨酸残基磷酸化，形成相应的STAT与受体复合物结合的“对接位点”(docking site)。STAT通过其SH2结构域与受体分子上的磷酸酪氨酸残基结合，并在JAK的作用下实现其C-末端酪氨酸残基的磷酸化，磷酸化后的STAT相互作用形成同/异源二聚体进入细胞核中，与相应基因的启动子区域结合，从而调控基因转录与表达。JAK-STAT通路可能与其他信号转导通路相互影响，参与了多种免疫和造血细胞的发育、分化、成熟、凋亡和功能表达过程，对调节机体的免疫应答、免疫细胞分化发育及炎症反应等有重要影响，许多异常的免疫应答，如过敏、哮喘、(异体)移植排斥、类风湿性关节炎、肌萎缩性脊髓侧索硬化症和多发性硬化症等自身免疫性疾病，骨髓增生失调，白血病和淋巴瘤等血液系统恶性肿瘤，它们的调节都与JAK/STAT信号通路有关。
JAK是一类非常重要的药物靶点，对于JAK抑制剂，目前已进行了一些研究(例如Norman，P.Selective JAK inhibitors in development for rheumatoidarthritis.Expert Opin.lnvestig.Drugs，2014，23，1067-1077)，JAK抑制剂可以用于类风湿性关节炎、真性红细胞增多症、银屑病、原发性血小板增多症和骨髓纤维化等疾病的治疗，例如Ruxolitinib为JAK1和JAK2的选择性抑制剂，2011年获得美国FDA批准上市，用于治疗骨髓纤维化；Baricitinib也是JAK1和JAK2的选择性抑制剂(参见CN102026999)，欧洲EMA和日本厚生劳动省已批准其用于治疗中度到重度类风湿性关节炎，但被美国FDA暂时拒绝上市申请；JAK1选择性抑制剂Filgotinib(参见CN102482273)和Upadactinib(ABT-494，参见CN104370909)等针对类风湿性关节炎等多项适应症正开展临床III期实验；托法替尼(Tofacitinib)是目前唯一被FDA批准在美国市场上销售的用于治疗类风湿性关节炎的JAK1和JAK3选择性抑制剂(Kremer，J.M.等，“The safety and efficacy of a JAKinhibitor in patients with active rheumatoid arthritis：Results of a double-blind，placebo-controlled phase Ila trial of three dosage levels of CP-690，550versus placebo.Arthritis & Rheumatology，2009，60(7)，1895-1905)，然而，患者服用托法替尼后会产生一些不良反应，例如可能的严重感染及增加的癌症和心脏衰竭风险(FDA将严重感染与恶性肿瘤列入黑框警告)。
除上述列出的几种JAK抑制剂外，目前还有相关专利如WO2008109943，WO2011112662，WO2013091539，WO2014128591，WO2016027195等也均公开了JAK抑制剂。
尽管目前已公开了一系列的JAK抑制剂，但这些已上市或正处于研究阶段的JAK抑制剂在疗效和安全性方面还有改进的空间，仍需要开发更好药效和安全性的新型JAK抑制剂，以提供更好的疗效并减少患者的不良反应。
发明内容
本发明涉及一类新的小分子JAK抑制剂，提供了式II所示的一类化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其药学上可接受的盐，多晶型物，溶剂合物，前药，代谢物，同位素衍生物，及包含所述化合物的药物组合物，可用于预防或治疗JAK相关适应症，
其中，T为-CN或-CF3；
R0为氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；R0进一步优选为-H或-C1-3烷基；
R1为C3-6环烷基、C3-7杂环烷基、C6-10芳基、C1-9杂芳基、C6-12稠合双环基、C5-12稠合杂双环基；其中所述的C3-7杂环烷基、C1-9杂芳基、C5-12稠合杂双环基上的杂原子可被R2取代，C3-6环烷基、C3-7杂环烷基、C6-10芳基、C1-9杂芳基、C6-12稠合双环基、C5-12稠合杂双环基上的氢原子可被R3或-NHR2取代，具有芳香性的环上的氢原子可被R7取代；R1进一步优选为
R2为-C(O)R4、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-S(O)R4、-S(O)2R4、-S(O)NR5R6或-S(O)2NR5R6；R2进一步优选为-C(O)R4、-S(O)2R4或-C(O)NR5R6；
R3为-H、-C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C3-6环烷基、C3-7杂环烷基，其中所述的-C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C3-6环烷基、C3-7杂环烷基可被以下基团取代：-OH、-C1-3烷基、-O-C1-4烷基、-NH2、卤素、苯基或氰基；R3进一步优选为H或-C1-4烷基或-C3-6环烷基，其中所述的-C1-4烷基可被以下基团取代：-OH、-C1-3烷基、-O-C1-4烷基、-NH2、卤素、苯基或氰基；R3进一步优选为H、-C1-4烷基或-C3-6环烷基；R3具体可为H、-CH2、-CH2CH3、
R4为-C1-5烷基、-C1-4烯基、-C1-5炔基、-C3-6环烷基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、苯基、-杂环基-O-Re、-杂环基-NH-Re-杂环基-R4a-O-Re、-杂环基-R4a-NH-Re，其中所述的-C1-5烷基可被以下基团取代：-OH、-C1-3烷基、-C5-6环烷基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、-O-C1-4烷基、-NH2、卤素、CF3、苯基或氰基；R4进一步优选为-C1-5烷基、-C1-4烯基、-C1-5炔基、-C3-6环烷基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、苯基、-杂环基-O-Re、-杂环基-NH-Re-杂环基-R4a-O-Re、-杂环基-R4a-NH-Re，其中所述的-C1-5烷基可被以下基团取代：-OH、-C1-3烷基、-O-C1-4烷基、-NH2、卤素、CF3、苯基或氰基；R4具体可为甲基、乙基、丙基、-(CH2)n-CH2CN、-(CH2)n-CH2CF3、-CH(OH)-(CH2)nCH3、
R4a为-C1-3亚烷基；其中R4所述的环烷基、杂环基、杂芳基、苯基可被Re取代；
R5为氢、卤素、羟基、C1-6烷基；R5进一步优选为H或-C1-3烷基；R5具体可为H；
R6为-C1-4烷基、-C1-4烯基、-C1-4炔基、-C3-6环烷基、4-6元杂环基、苯基、-CHF2、-CH2CF2CF3，其中所述的-C1-4烷基可被以下基团取代：-OH、-C1-3烷基、-C3-6环烷基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、-O-C1-4烷基、-NH2、卤素、CF3、苯基或氰基，苯基可被Re、Rg取代或被Re和Rg取代，4到6元杂环基上的氢原子可被Re且杂原子可被Rf取代；R6进一步优选为-C1-4烷基、-C3-6环烷基、4-6元杂环基、苯基、4到6元杂环基、其中所述的苯基可被Re或Rg取代或被Re和Rg取代，4到6元杂环基上的氢原子可被Re取代且杂原子可被Rf取代，-C1-4烷基可被以下基团取代：-OH、-C1-3烷基、-C3-6环烷基、4-6元杂环基、5-10元杂芳基、-O-C1-4烷基、-NH2、卤素、CF3、苯基或氰基；R6进一步优选为-(CH2)n-CH2CF3、-(CH2)n-CF2CF3、-(CH2)n-CH2CN、4-6元杂环基、苯基、4到6元杂环基、其中所述的苯基可被Re或Rg取代或被Re和Rg取代，4到6元杂环基上的氢原子可被Re取代且杂原子可被Rf取代；R6进一步优选为-(CH2)n-CH2CF3、-(CH2)n-CF2CF3、-(CH2)n-CH2CN、
Re和Rg分别独立地为卤素、-C1-4烷基、烷氧基、3-6元环烷基、-NRcRd、-(CH2)nNRcRd、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CN、C(O)OCH3，所述的-C1-4烷基、烷氧基及环烷基可被下列取代基单取代或是双取代：卤素、-OH、-NH2、-C1-3烷基、-O-C1-4烷基、CF3、苯基或氰基；Re和Rg具体可为-F、-Cl、甲基、乙基、丙基、-CH(CH3)-(CH2)nCH3、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)2、-CH2C(CH3)3、-C(CH3)2-(CH2)nCH3、-O-(CH2)nCH3、-O-(CH2)nCH2-O-CH3、-(CH2)nOCH3、-O-(CH2)n-CH2-C(CH3)2-OH、-O-(CH2)n-CH2-C(CH3)2-NH2、3-6元环烷基、-(CH2)nNRcRd、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-CN、-C(O)-O-CH3；
Rf为-C1-4烷基、3-6元环烷基，所述的-C1-4烷基及环烷基可被下列取代基取代：卤素、-OH、-NH2、-C1-3烷基、-O-C1-4烷基、CF3、苯基或氰基；Rf进一步优选为-C1-4烷基，所述的-C1-4烷基可被下列取代基取代：卤素、-OH；Rf具体可为甲基、乙基、丙基；
Rc和Rd分别独立地为氢、-C1-3烷基、-C1-4亚烷基-OH、-C1-4亚烷基-CF3、-C2-4亚烷基-OCH3、3-6元环烷基、4-6元杂环基；Rc和Rd进一步优选为氢、-C1-3烷基、-C1-4亚烷基-OH、-C2-4亚烷基-OCH3；Rc和Rd具体可为-H、甲基、乙基、丙基；
R7为卤素、-C1-4烷基、烷氧基、3-6元环烷基、-NRcRd、-(CH2)nNRcRd、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CN、C(O)OCH3，所述的-C1-4烷基、烷氧基及环烷基可被下列取代基单取代或是双取代：卤素、-OH、-NH2、-C1-3烷基、-O-C1-4烷基、CF3、苯基或氰基；R7进一步优选为卤素、-C1-4烷基、烷氧基、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CN；R7进一步优选为-(CH2)n-OH、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CN；
n为0、1、2、3或4。
本发明提供了制备通式II所示的化合物的方法，所述通式II所示的化合物通过以下方案制备，
方案一：
方案二：
其中Pg1为脂肪胺保护基，具体为叔丁氧基羰基或苄氧基羰基，A1为 R2-X为R2的活性形式，X优选自氯、溴、苯氧基、对硝基苯氧基，或者R2-X为R2的异氰酸酯形式；碱1、碱2、碱3各自独立的选自三乙胺、二异丙基乙基胺、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾。
根据本发明通式II所示的化合物及其可药用的盐，其中该化合物具体为：
(顺式)-4-({4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-({4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[4-乙基-1-(3，3，3-三氟丙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-({4-甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[4-甲基-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5R，6aS)-4-{[2-((2S)-2-羟基丙酰基)-六氢环戊并[c]吡咯-5-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-乙基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-{[3-(3-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-{[3-(3，3，3-三氟丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-{[(3R，4R)-1-(2-氰乙酰基)-4-甲基哌啶-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(3，3，3-三氟丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(3-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(3，3，3-三氟丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(4-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(4-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-4-{[3-(苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-叔丁基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(2，2，2-三氟乙基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5S，6aS)-4-{[2-((2S)-2-羟基丙酰基)-六氢环戊并[c]吡咯-5-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-(甲基((3aR，5s，6aS)-2-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-环丙基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
4-(甲基((3aR，5s，6aS)-2-((3，3，3-三氟丙基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-(((3aR，5s，6aS)-2-((3-氟苯基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-1-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-异丙基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(1-乙基-1H-1，2，4-三氮唑-3-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-环丙基-1，2，4-噁二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-二甲胺基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-((1-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)哌啶-4-基)氨基)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-((1-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)哌啶-4-基)-甲基-氨基)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺；
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-甲基-氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-羟基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
6-(5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-3-甲酰胺；
(3S，4S)-4-({4-甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(甲基氨基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-羟甲基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噁二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(顺式)-4-{[3-(丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-乙氧基-1，2，4-噁二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(5-乙氧基-1，2，4-噁二唑-3-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-环丙基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-三氟甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5S，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(2-甲氧基乙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5S，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-(2-甲氧基乙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
5-((3aR，5s，6as)-5-((5-氰基-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)八氢环戊烷[c]吡咯-2-甲酰胺基)-1，2，4-噻二唑-3-羧酸甲酯；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1h-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-((二甲胺基)甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1h-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-((二甲胺基)甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-甲氧基甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺；
N-(-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺；
N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)-4，4，4-三氟丁酰胺；
N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺；
1-((3S，4R)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲；
4-((4-((((3-羟基-3-甲基吡咯烷-1-基)磺酰基)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
反式-4-(甲基((1r，4r)-4-(((4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基)甲基)环己基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-((反式-4-(((3-异丁氧基哌啶-1-基)磺酰基)甲基)环己基)(甲基)氨基-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-乙腈；
4-((反式-4-(((反式-3-(羟甲基)-4-甲基吡咯烷-1-基)磺酰)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-(甲基-(反式-4-(((3-((甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)甲基)环己基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-((反式-4-(((3-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)磺酰)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-((顺式-(3-(((3-(2-甲氧基乙氧基)哌啶-1-基)磺酰基)甲基)环戊基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
4-((顺式-3-(((3-(羟甲基)吡咯烷-1-基)磺酰)甲基)环戊基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(R)-7-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羧酰胺；
(顺式)-3-异丙基-4-(咪唑并[4，5-d]吡咯并[2，3-b]吡啶-1(6H)-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-羧酰胺；
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-环丙基-N-异丁基吡咯烷-1-甲酰胺；
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-异丙基吡咯烷-1-甲酰胺；
4-(((顺式)-4-乙基-1-((3，3，3-三氟丙基)磺酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈；
4-(((顺式)-4-乙基-1-(4，4，4-三氟丁基酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈；
4-((4-乙基-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈；
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-异丁基吡咯烷-1-甲酰胺
4-(((顺式)-4-乙基-1-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-氨基羰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈；
4-(((顺式)-1-(3-氰基丙酰基)-4-乙基吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(环丙基甲基)基吡咯烷-1-甲酰胺；
3-((5-氰基-1-H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(2，2，3，3，3-五氟丙基)-吡咯烷-1-羧酰胺；
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-环丙基-4-乙基吡咯烷-1-甲酰胺；
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(3-甲基丁烷-2-基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-新戊基-吡咯烷-1-甲酰胺；
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2-二氟乙基)-4-乙基吡咯烷-1-甲酰胺；
4-(((顺式)-1-(2-氰基乙基)-4-乙基吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈；
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2-二氟丙基)-4-乙基吡咯烷-1-甲酰胺；
7-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲腈；
(顺式)-3-环丙基-N-(2，2，2-三氟乙基)-4-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(顺式)-3-乙基-N-(2，2，2-三氟乙基)-4-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺；
(顺式)-3-乙基-N-(氰甲基)-4-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。
适合的酸加成盐由形成无毒盐的酸来形成，实例包括但不限于盐酸盐、硫酸盐/硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、醋酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐，及其类似盐。
适合的碱加成盐由形成无毒盐的碱来形成，例如作为碱金属盐、碱土金属盐或作为铵盐，实例包括但不限于钠盐、钾盐、钙盐、镁盐，或与氨或有机胺如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸的盐。
适合的盐的综述参见Stahl，P.H.及Wermuth，C.G.的“Handbook ofPharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use，2nd Revised Edition”(Wiley-VCH，2011)。
如果式(II)化合物在分子内同时包含酸性和碱性基团，本发明还包括除了提及的盐形式之外的内盐或内铵盐(两性离子)。
用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的，例如通过使这些化合物与有机或无机酸或碱在溶剂或分散剂中接触获得，或通过与其他盐进行阴离子交换或阳离子交换获得。
式(II)化合物可以以晶体或无定形形式存在。此外，式(II)化合物的某些晶体形式可以多晶型形式存在，其包括在本发明范围内。可以使用许多常规分析技术包括但不限于单晶X-射线粉末衍射(XRPD)图、红外(IR)光谱、拉曼光谱、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)和固体核磁共振(ssNMR)表征来区分化合物的多晶型。
本发明的化合物也包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键的对换以及伴随的质子迁移而产生。互变异构形式包括质子转移互变异构体，它们是具有相同经验式和总电荷的异构质子化状态。质子转移互变异构体的实例包括酮-烯醇配对、酰胺-亚胺酸配对、内酰胺-内酰亚胺配对、烯胺-亚胺配对，以及其中质子能够占据杂环体系的两个或多个位置的环状形式，例如，1H-和3H-咪唑，1H-、2H-和4H-1，2，4三唑，1H-和2H-异吲哚，以及1H-和2H-吡唑。互变异构形式可以通过适当的取代而处于平衡或空间上固定于一种形式。
本发明还涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备抑制JAK激酶的药物中的用途；所述的JAK激酶优选为JAK1、JAK2或JAK3。
本发明还涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备抑制JAK激酶的药物中的用途，其中所述的药物任选含有另外一种或多种调节哺乳动物免疫系统的试剂、抗癌剂或抗炎剂。
本发明还涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用的盐，或包含其的药物组合物在制备抑制JAK激酶的药物中的用途，其中所述的药物用于治疗或预防下列障碍或疾病：免疫系统的疾病，包括例如器官移植排斥(如异体抑制排斥和移植物抗宿主疾病)；自身免疫性疾病，包括例如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、青少年关节炎、银屑病、溃病性结肠炎、克罗恩氏病、自体免疫性甲状腺疾病等；皮肤病，包括例如牛皮癣、皮疹、特应性皮炎等；变应性病症，包括例如哮喘、鼻炎等；病毒性疾病，包括例如乙型肝炎、丙型肝炎、水痘-带状疱疹病毒等；I型糖尿病与糖尿病并发症；阿尔茨海默病、干眼病、骨髓纤维化、血小板增多症、红细胞增多症或白血病；癌症，包括例如实体瘤(如前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤等)、血液癌(如淋巴瘤、白血病等)、皮肤癌(如皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤)等。
本发明进一步涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐或包含其的药物组合物在制备抑制JAK激酶的药物中的用途，其中所述药物任选包含另外一种或多种调节哺乳动物免疫系统的试剂、抗癌剂或抗炎剂，用于治疗或预防下列障碍或疾病：免疫系统的疾病，包括例如器官移植排斥(如异体抑制排斥和移植物抗宿主疾病)；自身免疫性疾病，包括例如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、青少年关节炎、银屑病、溃病性结肠炎、克罗恩氏病、自体免疫性甲状腺疾病等；皮肤病，包括例如牛皮癣、皮疹、特应性皮炎等；变应性病症，包括例如哮喘、鼻炎等；病毒性疾病，包括例如乙型肝炎、丙型肝炎、水痘-带状疱疹病毒等；I型糖尿病与糖尿病并发症；阿尔茨海默病、干眼病、骨髓纤维化、血小板增多症、红细胞增多症或白血病；癌症，包括例如实体瘤(如前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤等)、血液癌(如淋巴瘤、白血病等)、皮肤癌(如皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤)等。其中所述的哺乳动物为人。
本发明进一步涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐或包含其的药物组合物，其作为抑制JAK激酶的药物。所述的JAK激酶优选为JAK1、JAK2或JAK3。
本发明进一步涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐或包含其的药物组合物，其进一步与另外一种或多种调节哺乳动物免疫系统的试剂、抗癌剂或抗炎剂联合应用。
本发明进一步涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐或包含其的药物组合物，其用于治疗或预防下列障碍或疾病：免疫系统的疾病，包括例如器官移植排斥(如异体抑制排斥和移植物抗宿主疾病)；自身免疫性疾病，包括例如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、青少年关节炎、银屑病、溃病性结肠炎、克罗恩氏病、自体免疫性甲状腺疾病等；皮肤病，包括例如牛皮癣、皮疹、特应性皮炎等；变应性病症，包括例如哮喘、鼻炎等；病毒性疾病，包括例如乙型肝炎、丙型肝炎、水痘-带状疱疹病毒等；I型糖尿病与糖尿病并发症；阿尔茨海默病、干眼病、骨髓纤维化、血小板增多症、红细胞增多症或白血病；癌症，包括例如实体瘤(如前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤等)、血液癌(如淋巴瘤、白血病等)、皮肤癌(如皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤)等。
本发明进一步涉及通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐或包含其的药物组合物，其进一步与另外一种或多种调节哺乳动物免疫系统的试剂、抗癌剂或抗炎剂联合应用，用于治疗或预防下列障碍或疾病：免疫系统的疾病，包括例如器官移植排斥(如异体抑制排斥和移植物抗宿主疾病)；自身免疫性疾病，包括例如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、青少年关节炎、银屑病、溃病性结肠炎、克罗恩氏病、自体免疫性甲状腺疾病等；皮肤病，包括例如牛皮癣、皮疹、特应性皮炎等；变应性病症，包括例如哮喘、鼻炎等；病毒性疾病，包括例如乙型肝炎、丙型肝炎、水痘-带状疱疹病毒等；I型糖尿病与糖尿病并发症；阿尔茨海默病、干眼病、骨髓纤维化、血小板增多症、红细胞增多症或白血病；癌症，包括例如实体瘤(如前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤等)、血液癌(如淋巴瘤、白血病等)、皮肤癌(如皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤)等。
换言之，本发明涉及一种抑制JAK激酶的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐，或包含其的药物组合物。进一步，通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐，或包含其的药物组合物与另外一种或多种调节哺乳动物免疫系统的试剂、抗癌剂或抗炎剂联合应用。
本发明还涉及一种治疗或预防免疫系统障碍或疾病的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐，或包含其的药物组合物，其中所述的免疫系统障碍或疾病选自：免疫系统的疾病，包括例如器官移植排斥(如异体抑制排斥和移植物抗宿主疾病)；自身免疫性疾病，包括例如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、青少年关节炎、银屑病、溃病性结肠炎、克罗恩氏病、自体免疫性甲状腺疾病等；皮肤病，包括例如牛皮癣、皮疹、特应性皮炎等；变应性病症，包括例如哮喘、鼻炎等；病毒性疾病，包括例如乙型肝炎、丙型肝炎、水痘-带状疱疹病毒等；I型糖尿病与糖尿病并发症；阿尔茨海默病、干眼病、骨髓纤维化、血小板增多症、红细胞增多症或白血病；癌症，包括例如实体瘤(如前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤等)、血液癌(如淋巴瘤、白血病等)、皮肤癌(如皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤)等。
本发明还涉及一种治疗或预防免疫系统障碍或疾病的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用盐，或包含其的药物组合物，以及另外一种或多种调节哺乳动物免疫系统的试剂、抗癌剂或抗炎剂，其中所述的免疫系统障碍或疾病选自：免疫系统的疾病，包括例如器官移植排斥(如异体抑制排斥和移植物抗宿主疾病)；自身免疫性疾病，包括例如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、青少年关节炎、银屑病、溃病性结肠炎、克罗恩氏病、自体免疫性甲状腺疾病等；皮肤病，包括例如牛皮癣、皮疹、特应性皮炎等；变应性病症，包括例如哮喘、鼻炎等；病毒性疾病，包括例如乙型肝炎、丙型肝炎、水痘-带状疱疹病毒等；I型糖尿病与糖尿病并发症；阿尔茨海默病、干眼病、骨髓纤维化、血小板增多症、红细胞增多症或白血病；癌症，包括例如实体瘤(如前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤等)、血液癌(如淋巴瘤、白血病等)、皮肤癌(如皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤)等。
本发明的组合物可以利用一种或多种可药用的载体按照常规的方式加以配制。因此，本发明的活性化合物可以被配制成口服、口腔含化给药、鼻内、肠胃外(例如静脉内、肌内或皮下)或直肠给药的剂型，或者适用于通过吸入或吹入给药的剂型。本发明的化合物也可以被配制成持续释放的剂型。
根据治疗目的，可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液及悬浮液)，或者适用于通过吸入或吹入给药的剂型等。
为了使片剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋形剂。例如，载体，如乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素和硅酸等；粘合剂，如水、乙醇、丙醇、普通糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液，羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素和磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干淀粉、藻酸纳、琼脂粉和海带粉，碳酸氢纳、碳酸钙、聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯、十二烷基硫酸纳、硬脂酸单甘酯、淀粉和乳糖等；崩解抑制剂，如白糖、甘油三硬脂酸酯、椰子油和氢化油；吸附促进剂，如季胺碱和十二烷基硫酸纳等；润湿剂，如甘油、淀粉等；吸附剂，如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土和胶体硅酸等；以及润滑剂，如纯净的滑石，硬脂酸盐、硼酸粉和聚乙二醇等。还可以根据需要选用通常的涂渍材料制成糖衣片剂、涂明胶膜片剂、肠衣片剂、涂膜片剂、双层膜片剂及多层片剂。
为了使丸剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知的并广泛使用的赋形剂，例如，载体，如乳糖，淀粉，椰子油，硬化植物油，高岭土和滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯树胶粉，黄蓍胶粉，明胶和乙醇等；崩解剂，如琼脂和海带粉等。
为了使栓剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋形剂，例如，聚乙二醇，椰子油，高级醇，高级醇的酯，明胶和半合成的甘油酯等。
为了制备针剂形式的药物组合物，可将溶液或悬浮液消毒后(最好加入适量的氯化钠，葡萄糖或甘油等)，制成与血液等渗压的针剂。在制备针剂时，也可使用本领域内任何常用的载体。例如，水，乙醇，丙二醇，乙氧基化的异硬脂醇，聚氧基化的异硬脂醇和聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，还可加入通常的溶解剂、缓冲剂和止痛剂等。
为了鼻内给药或通过吸入给药，本发明的活性化合物适宜以溶液或悬液的形式而从收到或者挤压或抽吸的泵式喷雾容器内释放出来，或者以喷雾剂的形式从加压容器或喷雾器内释放出来，释放利用一种适合的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可以通过提供计量释放的阀门加以确定。加压容器或喷雾器可以含有活性化合物的溶液或悬液。用在吸入器或吹入器内的胶囊或药筒(例如由明胶制成)可以被配制成含有本发明化合物与适合的粉末基质，例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋体、外消旋混合物、内消旋体、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。
术语“溶剂合物”是指通常通过溶剂分解反应与溶剂物理结合的化合物形式。此物理结合包含氢键结合。常规溶剂包含水、乙醇、甲醇、乙酸等。式(II)化合物可以结晶形式制备且可呈溶剂合物形式(例如水合形式)。适宜溶剂合物包含药学可接受的溶剂合物(例如水合物)，且进一步包含化学计量溶剂合物及非化学计量溶剂合物。在某些情形下，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂合物将能够解离。“溶剂合物”涵盖溶液相及可解离溶剂合物。代表性溶剂合物包含水合物、乙醇合物及甲醇合物等。
术语“前药”是指通过与酶、胃酸等在生理条件下在活体内例如通过各自在酶催化下进行的氧化、还原、水解等反应转化为本发明化合物的衍生物。
术语“代谢物”是指在细胞或有机体优选人中源自本发明任意化合物的所有分子。
术语“同位素衍生物”是指构成化合物的一或多个原子处，以非天然比例含有同位素的所述的化合物。例如氘(2H或D)、氚(3H或T)、碳-13(13C)、氮-15(15N)、氧-18(18O)等。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本发明所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，其他组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
所述载体包括药学领域所有的可用于制成注射和非注射给药途径的药物制剂，例如稀释剂、润湿剂、填充剂、粘合剂、湿滑剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、阻滞剂、吸附剂、助悬剂、絮凝剂、反絮凝剂、乳化剂、常用基质、增溶剂、助溶剂、潜溶剂、防腐剂、矫味剂、着色剂、抗氧剂、缓冲剂、抑菌剂、等渗调节剂、pH调节剂、金属离子络合剂、硬化剂、增稠剂等。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
本发明中的缩写具有以下含义：
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
实施例
中间体制备方法：
一、4-氯-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1的制备
第一步 4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲酰胺I-1b的制备
在反应瓶中加入化合物4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲酸I-1a(1.00g，5.10mmol)和DMF(10mL)，加入CDI(0.91g，5.61mmol)，室温搅拌1小时，冰水浴冷却，然后在0℃下加入NH3.H2O(1.12mL)，体系在室温搅拌1小时。TLC监测反应完成，将体系倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，二氯甲烷/石油醚＝5ml/1ml打浆，抽滤，旋干得标题化合物I-1b(0.6g，3.08mmol)，收率为60.3％。LCMS(ESI)m/z：196[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δppm)：8.29(s，1H)，7.91(s，1H)，7.65-7.59(m，2H)，7.21(br s，1H)，6.57-6.56(d，J＝3.2Hz，1H)。
第二步 4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1c的制备
在反应瓶中加入化合物4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲酰胺I-1b(300mg，1.54mmol)，三乙胺(6mL)和二氯甲烷(6mL)，室温滴加三氟乙酸酐(3mL)，体系在室温下搅拌6小时。TLC监测反应完成，将体系倒入冰水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，低温浓缩后过柱纯化(v/v，二氯甲烷/甲醇＝100∶1-50∶1)得到标题化合物I-1c(200mg，1.13mmol)，收率为73.4％。LCMS(ESI)m/z：178[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δppm)：12.69(br s，1H)，8.67(s，1H)，7.834-7.825(d，J＝3.6Hz，1H)，6.72-6.71(d，J＝3.6Hz，1H)。
第三步 4-氯-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1的制备
在反应瓶中加入DMF(5mL)，然后分别加入化合物4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1c(100mg，0.57mmol)，三乙胺(114mg，1.13mmol)和苯磺酰氯(150mg，0.85mmol)，室温下搅拌过夜。TLC监测反应完成，反应体系倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相合并后进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝20∶1-5∶1)得到标题化合物I-1(120mg，0.38mmol)，收率为67％。LCMS(ESI)m/z：318[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，δppm)：8.88(s，1H)，8.26-8.25(d，J＝3.6Hz，1H)，8.17-8.15(d，J＝7.6Hz，2H)，7.81-7.77(t，J＝7.6Hz，1H)，7.69-7.65(t，J＝8.0Hz，2H)，7.07-7.06(d，J＝4.0Hz，1H).
终产物制备方法实施例：
实施例1
(顺式)-4-({4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H01的制备
第一步(顺式)-2-戊烯酸乙酯1b的制备
在反应瓶中加入化合物2-戊炔酸乙酯1a(130g，1.03mol)和无水四氢呋喃(1.3L)，然后加入喹啉(13mL)和林德拉催化剂(13.0g)，体系在氢气球保护下搅拌5小时。TLC监测反应完成，将体系用硅藻土过滤，滤液旋干(10-15℃)得粗品，然后过柱纯化(石油醚)，得到标题化合物1b(70g，0.55mol)，收率为53％。1H NMR(400MHz，CDCl3，δppm)：6.21-6.16(m，1H)，5.75-5.71(m，1H)，4.19-4.14(m，2H)，2.67-2.63(m，2H)，1.30-1.26(t，J＝7.2Hz，3H)，1.07-1.03(t，J＝7.6Hz，3H)。
第二步(顺式)-1-苄基-4-乙基-吡咯烷-3-甲酸乙酯1c的制备
在反应瓶中加入二氯甲烷(1.4L)，然后分别加入化合物(顺式)-2-戊烯酸乙酯1b(70.0g，0.54mol)和N-(甲氧甲基)-N-(三甲基硅甲基)苄胺(130g，0.54mol)，降温至0℃，缓慢滴加三氟乙酸(6.20g，0.054mol)，然后在冰水浴下搅拌2小时，TLC监测反应完成。将体系浓缩旋干，过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝50∶1-5∶1)，得到标题化合物1c(70.0g，0.27mol)，收率为49％。LCMS(ESI)m/z：262[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3，δppm)：7.35-7.28(m，5H)，4.16-4.10(m，2H)，3.65(s，2H)，3.12-3.02(m，3H)，2.70-2.64(m，，1H)，2.40-2.35(m，1H)，2.11-2.06(t，J＝9.2Hz，1H)，1.49-1.43(m，1H)，1.29-1.23(m，1H)，1.28-1.24(t，J＝6.8Hz，3H)，0.87-0.84(t，J＝7.6Hz，3H)。
第三步(顺式)-1-苄基-4-乙基-吡咯烷-3-甲酸1d的制备
将化合物(顺式)-1-苄基-4-乙基-吡咯烷-3-甲酸乙酯1c(70.0g，0.27mol)溶于1，4-二氧六环(700mL)，然后加入浓盐酸(700mL)，然后在90℃下搅拌16小时，LCMS监测反应完成。在冰水浴下，用6mol/L的氢氧化钠溶液调节体系的pH＝9，然后用乙酸乙酯萃取(700mLx 2)。将水相用2mol/L的盐酸调节pH＝7，然后旋干得粗品。将粗品用乙醇(200mL)打浆，过滤，滤液旋干得标题化合物1d(35.0g，0.15mol)，收率为56％。LCMS(ESI)m/z：234[M+H]+。1HNMR(400MHz，CDCl3，δppm)：7.60-7.58(m，2H)，7.39-7.37(m，3H)，4.43-4.34(m，2H)，3.66-3.62(m，1H)，3.49-3.42(m，2H)，3.26-3.22(m，1H)，3.02-2.97(m，1H)，2.62-2.55(m，1H)，1.63-1.56(m，1H)，1.41-1.34(m，1H)，0.94-0.90(t，J＝7.2，3H)。
第四步(顺式)-(1-苄基-4-乙基-吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯1e的制备
将化合物(顺式)-1-苄基-4-乙基-吡咯烷-3-甲酸1d(2.00g，8.58mmol)，三乙胺(1.73g，17.2mmol)和叠氮磷酸二苯酯(3.54g，12.9mmol)加入叔丁醇(20mL)中，然后氮气保护下于室温搅拌2小时，然后于90℃反应16小时，TLC监测反应完成。将体系浓缩旋干，用乙酸乙酯和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝50∶1-10∶1)得到标题化合物1e(0.55g，1.81mmol)，收率为20％。1H NMR(400MHz，CDCl3，δppm)：7.33-7.23(m，5H)，4.81-4.78(m，1H)，4.23-4.21(m，1H)，3.66-3.55(m，2H)，2.82-2.78(m，1H)，2.67-2.63(t，J＝9.2Hz，1H)，2.46-2.43(m，1H)，2.32-2.29(m，1H)，2.19-2.14(m，1H)，1.48-1.43(m，1H)，1.44(s，9H)，1.28-1.18(m，1H)，0.89-0.85(t，J＝7.2Hz，3H)。
第五步(顺式)-(4-乙基-吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯1f的制备
在氢化瓶中加入化合物(顺式)-(1-苄基-4-乙基-吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯1e(10.0g，32.9mmol)，甲醇(100mL)和Pd/C(10.0g)，于50psi氢气压力下室温搅拌6小时，TLC监测反应完成。将体系用硅藻土过滤，滤液浓缩旋干到标题化合物1f(6.00g，28.0mmol)，收率为85％。1H NMR(400MHz，CDCl3，δppm)：4.82(br s，1H)，4.16(br s，1H)，3.21-3.14(m，2H)，2.80-2.77(m，1H)，2.55-2.49(t，J＝10.0Hz，1H)，2.32-2.26(m，1H)，2.05-2.01(m，1H)，1.51-1.45(m，1H)，1.44(s，9H)，1.31-1.24(m，1H)，0.95-0.92(t，J＝7.2Hz，3H)。
第六步(顺式)-{4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基]吡咯烷-3-基}氨基甲酸叔丁酯1g的制备
在反应瓶中加入二氯甲烷(60mL)，三乙胺(5.67g，56.1mmol)和三氟乙胺(2.78g，28.0mmol)，然后在0℃加入三光气(3.32g，11.2mmol)，保持0℃搅拌2小时，然后0℃加入化合物(顺式)-(4-乙基-吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯1f(6.00g，28.0mmol)，缓慢恢复至室温搅拌6小时，TLC监测反应完成。将体系倒入水中，用二氯甲烷萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝30∶1-2∶1)得到标题化合物1g(2.50g，7.37mmol)，收率为26％。LCMS(ESI)m/z：362[M+Na]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δppm)：7.11-7.09(d，J＝8.8Hz，1H)，6.73-6.70(t，J＝6.4Hz，1H)，4.04(brs，1H)，3.82-3.73(m，2H)，3.41-3.36(m，2H)，3.20-3.17(d，J＝10.8Hz，1H)，3.10-3.05(t，J＝10.0Hz，1H)，2.10(br s，1H)，1.38(s，9H)，1.36-1.34(m，1H)，1.30-1.23(m，1H)，0.87-0.83(t，J＝7.2Hz，3H)。
第七步(顺式)-3-氨基-4-乙基-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺1h的制备
在0℃将化合物(顺式)-{4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基]吡咯烷-3-基}氨基甲酸叔丁酯1g(2.50g，7.37mmol)溶于盐酸甲醇(25mL，4.8mol/L)，室温搅拌2小时，TLC监测反应完成。将体系浓缩，然后加入水，并用氢氧化钠溶液(2mol/L)调节pH＝9，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩旋干得标题化合物1h(1.5g，6.20mmol)，收率为85％。LCMS(ESI)m/z：240[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δppm)：4.52(br s，1H)，3.98-3.85(m，2H)，3.55-3.50(m，3H)，3.32-3.30(m，1H)，3.15-3.10(t，J＝9.6Hz，1H)，2.12-2.07(m，1H)，1.57-1.41(m，2H)，1.25(br s，2H)，1.00-0.96(t，J＝7.2Hz，3H)。
第八步(顺式)-3-[(5-氰基-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基]-4-乙基-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺1i的制备
在反应瓶中加入二氧六环(12mL)，然后分别加入化合物4-氯-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1(240mg，0.76mmol)，(顺式)-3-氨基-4-乙基-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺1h(199mg，0.83mmol)，碳酸铯(740mg，2.27mmol)，Xantphos(175mg，0.30mmol)和Pd(OAc)2(33.9mg，0.15mmol)，加热到100℃搅拌6小时，TLC监测反应完成。体系降到室温过滤，反应体系倒入水中，用二氯甲烷和水萃取三次，有机相合并进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品用制备TLC纯化得粗品标题化合物1i(100mg，0.19mmol)，收率为25.4％。LCMS(ESI)m/z：521[M+H]+。
第九步(顺式)-4-({4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H01的制备
在反应瓶中加入甲醇(1mL)，然后分别加入化合物(顺式)-3-[(5-氰基-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基]-4-乙基-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺1i(40.0mg，0.074mmol)和氢氧化钠溶液(0.15mL，0.15mmol，1mol/L)，反应体系在室温搅拌12小时。TLC监测反应完成，反应体系用乙酸乙酯和水萃取三次，有机相合并进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品用制备TLC纯化得标题化合物H01(26mg，0.063mmol)，收率为83.3％。LCMS(ESI)m/z：381[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.87(s，1H)，8.11(s，1H)，7.27(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.95-6.80(m，2H)，6.63(dd，J＝9.1Hz，1H)，4.89-4.78(m，1H)，3.86-3.73(m，2H)，3.71-3.63(m，1H)，3.61-3.46(m，2H)，3.40-3.33(m，1H)，2.46-2.36(m，1H)，1.56-1.46(m，1H)，1.44-1.34(m，1H)，0.84(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例2
(顺式)-4-({4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H02的制备
第一步(顺式)-(4-乙基-吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯2a的制备
在反应瓶中加入化合物1e(3.5g，11.5mmol)和甲醇(50mL)，然后加入钯碳(300mg)，体系在氢气球保护下搅拌5小时。TLC监测反应完成，将体系用硅藻土过滤，滤液旋干(10-15℃)得粗品，然后过柱纯化(石油醚)，得到标题化合物2a(2.1g，9.8mmol)，收率为85.2％。LCMS(ESI)m/z：215[M+H]+。
第二步(顺式)-(1-苄氧基羰基-4-乙基-吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯2b的制备
在反应瓶中加入化合物2a(2.1g，9.8mmol)和二氯甲烷(30mL)，然后加入三乙胺(2.0g，19.6mmol)和氯甲酸苄酯(2.5g，14.7mmol)，体系在室温下搅拌2小时。TLC监测反应完成，用二氯甲烷和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)得到标题化合物2b(820mg，2.48mmol)，收率为25.3％。LCMS(ESI)m/z：371[M+Na]+。
第三步(顺式)-(1-苄氧基羰基-4-乙基-吡咯烷-3-基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯2c的制备
在反应瓶中加入化合物2b(0.2g，0.57mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(5mL)，然后加入钠氢(46mg，1.15mmol，60％)，室温下搅拌10min后，加入碘甲烷(121mg，0.86mmol)，体系在室温下搅拌2小时。TLC监测反应完成，用乙酸乙酯和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到标题化合物2c(200mg，0.55mmol)，粗收率为96.5％。LCMS(ESI)m/z：363[M+H]+。
第四步(顺式)-(1-苄氧基羰基-4-乙基-吡咯烷-3-基)-甲基-氨2d的制备
在反应瓶中加入化合物2c(0.2g，0.55mmol)和二氯甲烷(5mL)，然后加入三氟乙酸(0.5mL)，室温下搅拌30min。TLC监测反应完成，浓缩，补加二氯甲烷，继续浓缩，重复这个步骤三次，得到标题化合物2d的三氟乙酸盐(160mg，0.45mmol)，粗收率为81.8％。LCMS(ESI)m/z：263[M+H]+。
第五步(顺式)-3-[(5-氰基-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-甲基-氨基]-4-乙基-吡咯烷-1-甲酸苄酯2e的制备
在反应瓶中加入化合物2d(160mg，0.45mmol)和N-甲基吡咯烷酮(2mL)，然后加入中间体I-1(143mg，0.45mmol)和N-异丙基二乙基胺(116mg，0.90mmol)，于170℃下微波反应1h。TLC监测反应完成，用乙酸乙酯和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)，得到标题化合物2e(50mg，0.092mmol)，收率为20.4％。LCMS(ESI)m/z：544[M+H]+。
第六步(顺式)-3-[(5-氰基-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-甲基-氨基]-4-乙基-吡咯烷2f的制备
在反应瓶中加入化合物2e(50mg，0.092mmol)和甲醇(10mL)，然后加入钯碳(30mg)，体系在氢气球保护下搅拌5小时。TLC监测反应完成，将体系用硅藻土过滤，滤液旋干(10-15℃)得到标题化合物2f(36mg，0.088mmol)，收率为95.7％。LCMS(ESI)m/z：410[M+H]+。
第七步(顺式)-3-[(5-氰基-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-甲基-氨基]-4-乙基-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺2g的制备
在反应瓶中加入二氯甲烷(60mL)，三乙胺(18mg，0.176mmol)和三氟乙胺(9mg，0.088mmol)，然后在0℃加入三光气(10mg，0.035mmol)，保持0℃搅拌2小时，然后0℃加入化合物2f(36mg，0.088mmol)，缓慢恢复至室温搅拌6小时，TLC监测反应完成。将体系倒入水中，用二氯甲烷萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后板层析得到标题化合物2g(10mg，0.019mmol)，收率为21.6％。LCMS(ESI)m/z：535[M+H]+。
第八步(顺式)-4-({4-乙基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H02的制备
在反应瓶中加入甲醇(1mL)，然后分别加入化合物2g(10.0mg，0.019mmol)和氢氧化钠溶液(0.15mL，0.15mmol，1mol/L)，反应体系在室温搅拌12小时。TLC监测反应完成，反应体系用乙酸乙酯和水萃取三次，有机相合并进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品用制备TLC纯化得标题化合物H02(6mg，0.015mmol)，收率为78.9％。LCMS(ESI)m/z：395[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.01(s，1H)，8.20(s，1H)，7.41-7.36(m，1H)，6.98-6.91(m，1H)，6.61-6.56(m，1H)，4.81-4.74(m，1H)，3.84-3.57(m，5H)，3.33-3.30(m，1H)，3.13(s，3H)，2.42-2.32(m，1H)，1.55-1.34(m，2H)，0.71(t，J＝8.0Hz，3H).
实施例3
(顺式)-4-{[4-乙基-1-(3，3，3-三氟丙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H03的制备
第一步(顺式)-1-苯磺酰基-4-{[4-乙基-1-(3，3，3-三氟丙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈3a的制备
在反应瓶中加入化合物2f(100mg，0.24mol)和二氯甲烷(30mL)，然后加入三乙胺(24mg，0.24mmol)和3，3，3-三氟丙酰氯(35mg，0.24mmol)，体系在室温下搅拌2小时。TLC监测反应完成，用二氯甲烷和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)得到标题化合物3a(40mg，0.077mmol)，收率为32.1％。LCMS(ESI)m/z：520[M+H]+。
第二步(顺式)-4-{[4-乙基-1-(3，3，3-三氟丙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H03的制备
在反应瓶中加入甲醇(1mL)，然后分别加入化合物3a(40.0mg，0.077mmol)和氢氧化钠溶液(0.15mL，0.15mmol，1mol/L)，反应体系在室温搅拌12小时。TLC监测反应完成，反应体系用乙酸乙酯和水萃取三次，有机相合并进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品用制备TLC纯化得标题化合物H03(20mg，0.053mmol)，收率为68.8％。LCMS(ESI)m/z：380[M+H]+。
实施例4
(顺式)-4-({4-甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H04的制备
采用与实施例2相同的制备方法，以2-丁炔酸乙酯4a为原料，可得到化合物H04。LCMS(ESI)m/z：381[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，8.22(d，J＝1.0Hz，1H)，7.40(d，J＝3.5Hz，1H)，6.90(t，J＝6.3Hz，1H)，6.62(d，J＝3.5Hz，1H)，4.69(s，1H)，3.86-3.69(m，3H)，3.65-3.52(m，2H)，3.11(m，4H)，2.68-2.49(m，1H)，0.98(d，J＝6.9Hz，3H).
实施例5
(顺式)-4-{[4-甲基-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H05的制备
第一步(顺式)-1-苯磺酰基-4-{[4-甲基-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈5a的制备
在反应瓶中加入化合物4k(95mg，0.24mol)和二氯甲烷(30mL)，然后加入三乙胺(24mg，0.24mmol)，氰乙酸(20mg，0.24mmol)和HATU(91mg，0.24mmol)，体系在室温下搅拌2小时。TLC监测反应完成，用二氯甲烷和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)得到标题化合物5a(50mg，0.11mmol)，收率为43.8％。LCMS(ESI)m/z：463[M+H]+。
第二步(顺式)-4-{[4-甲基-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H05的制备
在反应瓶中加入甲醇(1mL)，然后分别加入化合物5a(50.0mg，0.11mmol)和氢氧化钠溶液(0.15mL，0.15mmol，1mol/L)，反应体系在室温搅拌12小时。TLC监测反应完成，反应体系用乙酸乙酯和水萃取三次，有机相合并进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品用制备TLC纯化得标题化合物H05(30mg，0.093mmol)，收率为84.5％。LCMS(ESI)m/z：323[M+H]+。
实施例6
(3aR，5R，6aS)-4-{[2-((2S)-2-羟基丙酰基)-六氢环戊并[c]吡咯-5-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H06的制备
第一步 N-(2-Boc-六氢环戊并[c]吡咯-5-基)-甲胺6b的制备
将化合物6a(200mg，0.84mmol)溶解于5mL的甲醇中，加入2mL37％的甲胺-乙醇溶液和三乙酰氧基硼氢化钠(532mg，2.5mmol)，反应4h。滴加10ml饱和氯化铵溶液猝灭反应，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物6b(108mg，0.45mmol)收率为53.6％。LCMS(ESI)m/z：241[M+H]+。
第二步 1-苯磺酰基-4-[(2-Boc-六氢环戊并[c]吡咯-5-基)-甲基-氨基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈6c的制备
在反应瓶中加入化合物6b(108mg，0.45mmol)和N-甲基吡咯烷酮(2mL)，然后加入中间体I-1(143mg，0.45mmol)和N-异丙基二乙基胺(116mg，0.90mmol)，于170℃下微波反应1h。TLC监测反应完成，用乙酸乙酯和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)，得到标题化合物6c(50mg，0.096mmol)，收率为21.3％。LCMS(ESI)m/z：522[M+H]+。
第三步 4-[(六氢环戊并[c]吡咯-5-基)-甲基-氨基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈6d的制备
在反应瓶中加入化合物6c(50mg，0.096mmol)和二氯甲烷(5mL)，然后加入三氟乙酸(0.5mL)，室温下搅拌30min。TLC监测反应完成，浓缩，补加二氯甲烷，继续浓缩，重复这个步骤三次，得到标题化合物6d的三氟乙酸盐(40mg，0.077mmol)，粗收率为80.2％。LCMS(ESI)m/z：422[M+H]+。
第四步 1-苯磺酰基-4-{[2-((2S)-2-羟基丙酰基)-六氢环戊并[c]吡咯-5-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈6e的制备
在反应瓶中加入化合物6e(40mg，0.077mol)和二氯甲烷(30mL)，然后加入三乙胺(8mg，0.077mmol)，L-乳酸钠(9mg，0.077mmol)和HATU(29mg，0.077mmol)，体系在室温下搅拌2小时。TLC监测反应完成，用二氯甲烷和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)得到标题化合物6e(30mg，0.061mmol)，收率为79.2％。LCMS(ESI)m/z：494[M+H]+。
第五步 4-{[2-((2S)-2-羟基丙酰基)-六氢环戊并[c]吡咯-5-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H06的制备
在反应瓶中加入甲醇(1mL)，然后分别加入化合物6e(30mg，0.061mmol)和氢氧化钠溶液(0.15mL，0.15mmol，1mol/L)，反应体系在室温搅拌12小时。TLC监测反应完成，反应体系用乙酸乙酯和水萃取三次，有机相合并进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品用制备TLC纯化得标题化合物H06(15mg，0.042mmol)，收率为68.9％。LCMS(ESI)m/z：354[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.95(s，1H)，8.17(s，1H)，7.36-7.31(m，1H)，6.67(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.85(dd，J＝6.9，3.0Hz，1H)，4.30(p，J＝6.5Hz，1H)，3.61-3.57(m，1H)，3.56-3.51(m，2H)，3.47-3.44(m，1H)，3.19(s，3H)，2.72-2.55(m，2H)，2.17-2.06(m，2H)，1.77-1.62(m，2H)，1.23-1.15(m，3H).
实施例7
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H07的制备
第一步：叔-丁基(3aR，5r，6aS)-5-羟基六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯7a的制备
在反应瓶中加入化合物6a(2.0g，8.89mmol)和甲醇(50mL)，冰浴下，缓慢加入NaBH4(338mg，8.89mmol)，后体系在室温下搅拌1h。TLC监测反应完成，将体系加水猝灭，加硅胶拌样，低温浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物7a(2.0g，8.81mmol)，收率为99.1％。
MS m/z(ESI)：228[M+H]+。
第二步：叔-丁基(3aR，5r，6aS)-5-((甲磺酰)氧代)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯7b的制备
在反应瓶中加入化合物7a(2.0g，8.81mmol)，DIPEA(2.3g，17.62mmol)，和DCM(20mL)，后加入甲磺酸酐(1.8g，10.57mmol)。体系在室温下反应4h，反应完成后，将体系倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，低温浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物7b(2.0g，6.56mmol)，收率为74.5％。
MS m/z(ESI)：306[M+H]+。
第三步：叔-丁基(3aR，5s，6aS)-5-(甲基氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯7c的制备
在反应瓶中加入化合物7b(1.0g，3.28mmol)，甲醇胺溶液(10mL)和甲醇(20mL)，置于闷罐中，体系在80oC下反应8h。反应完成后，低温浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物7c(700mg，2.92mmol)，收率为89.0％。
第四步：叔-丁基(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯7d的制备
在反应瓶中加入化合物7c(380mg，1.58mmol)，DIPEA(408mg，3.16mmol)，Int-1(500mg，1.58mmol)和NMP(5mL)，体系在150oC下微波反应1h。反应完成后，将体系倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，低温浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物7d(300mg，0.58mmol)，收率为36.7％。
MS m/z(ESI)：522[M+H]+。
第五步：4-(甲基((3aR，5s，6aS)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈7e的制备
在反应瓶中加入化合物7d(300mg，0.58mmol)，TFA(2mL)和DCM(5mL)，体系在室温下反应1h。反应完成后，直接浓缩得到化合物7e(200mg，0.48mmol)，收率为82.3％。
MS m/z(ESI)：422[M+H]+。
第六步：苯基(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)氨基甲酸酯7h的制备
在反应瓶中加入化合物7f(1.2g，7.63mmol)，化合物7g(1.0g，7.63mmol)和THF(20mL)，后缓慢滴加三乙胺(1.5g，15.26mmol)。体系在室温下反应1h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物7h(90mg，0.36mmol)，收率为4.7％。
MS m/z(ESI)：252[M+H]+。
第七步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺7i的制备
在反应瓶中加入化合物7e(50mg，0.12mmol)，化合物7h(30mg，0.12mmol)，DIPEA(31mg，0.24mmol)和THF(10mL)。体系在60oC温度下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物7i(60mg，0.10mmol)，收率为83.3％。
MS m/z(ESI)：579[M+H]+。
第八步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H7的制备
在反应瓶中加入化合物7i(60mg，0.10mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H7(25mg，0.057mmol)，收率为57.0％。
MS m/z(ESI)：439[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，11.57(s，1H)，8.15(s，1H)，7.31-7.24(m，1H)，6.68-6.61(m，1H)，4.79-4.68(m，1H)，3.89(s，3H)，3.73-3.60(m，2H)，3.19(s，3H)，3.17-3.15(m，2H)，2.96-2.79(m，2H)，2.21-2.08(m，2H)，1.93-1.80(m，2H).
实施例08
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-乙基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H08的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以3-乙基-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H08。LCMS(ESI)m/z：437[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.89(s，1H)，11.42(s，1H)，8.12(s，1H)，7.26-7.20(m，1H)，6.64-6.58(m，1H)，4.76-4.65(m，1H)，3.73-3.58(m，2H)，3.35-3.29(m，2H)，3.16(s，3H)，2.92-2.78(m，2H)，2.69(q，J＝7.5Hz，2H)，2.18-2.05(m，2H)，1.89-1.78(m，2H)，1.20(t，J＝7.6Hz，3H).
实施例09
4-{[3-(3-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H09的制备
(1)叔-丁基(3-((4-甲氧卞基)氨基)环丁基)氨基甲酸酯9b的合成
在反应瓶中加入化合物叔-丁基(3-氧环丁基)氨基甲酸酯9a(1g，5.4mmol)，对甲氧基苄胺(0.74g，5.4mmol)和氰基硼氢化钠(0.68g，10.8mmol)以及50mL的甲醇，在室温搅拌反应4小时，浓缩得到粗品，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝10∶1)得到白色固体化合物9b叔-丁基(3-((4-甲氧卞基)氨基)环丁基)氨基甲酸酯(1.3g)，收率77％，MS m/z(ESI)：307[M+H]+。
(2)叔-丁基(3-((氮-(4-甲氧苄基)-3-(三氟甲基)苯基)磺酰氨基)环丁基)氨基甲酸酯9c的合成
将叔-丁基(3-((4-甲氧卞基)氨基)环丁基)氨基甲酸酯9b(250mg，0.81mmol)和DIPEA(313mg，2.43mmol)溶于DCM中，在室温下滴加入3-(三氟甲基)苯磺酰氯化(200mg，0.81mmol)。滴加完毕，该混合物在室温继续搅拌4小时，加水淬灭，用DCM萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用柱层析纯化(PE∶EA＝3∶1)得到200mg化合物9c叔-丁基(3-((氮-(4-甲氧苄基)-3-(三氟甲基)苯基)磺酰氨基)环丁基)氨基甲酸酯呈无色油状物，收率48％
MS m/z(ESI)：515[M+H]+
(3)叔-丁基(3-((氮-(4-甲氧苄基)-3-(三氟甲基)苯基)磺酰氨基)环丁基)(甲基)氨基甲酸酯9d的合成
将氢化钠(7.4mg，0.42mmol)加入到叔-丁基(3-((氮-(4-甲氧苄基)-3-(三氟甲基)苯基)磺酰氨基)环丁基)氨基甲酸酯9c(110mg，0.21mmol)的THF溶液中，在室温搅拌1小时后，滴加入碘甲烷(60mg，0.42mmol)，该反应混合物在室温搅拌6小时。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品叔-丁基(3-((氮-(4-甲氧苄基)-3-(三氟甲基)苯基)磺酰氨基)环丁基)(甲基)氨基甲酸酯9d(100mg)呈无色油状物，粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：551[M+Na]
(4)N-(3-(甲基氨基)环丁基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺9e的合成
叔-丁基(3-((氮-(4-甲氧苄基)-3-(三氟甲基)苯基)磺酰氨基)环丁基)(甲基)氨基甲酸酯9d(100mg，0.19mmol)溶于2mL的THF中，加入三氟乙酸(2mL)，该混合物在室温下搅拌2小时，浓缩，再次溶于DCM中，用饱和碳酸氢钠溶液中和，有机相用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品化合物N-(3-(甲基氨基)环丁基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺9e(50mg)直接用于下一班反应。
MS m/z(ESI)：309[M+H]+
(5)N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺H09的合成
将N-(3-(甲基氨基)环丁基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺9e(50mg，0.16mmol)，4-氯-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1(50mg，0.16mmol)和DIPEA(62mg，0.48mmol)溶于NMP中，该混合物在170℃微波反应2小时，冷却后加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝10∶1)得到N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺H09(9.7mg)，收率13.5％。
MS m/z(ESI)：450[M+H]+
1H-NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.12-8.08(m，3H)，7.99-7.90(m，2H)，7.77(t，J＝7.9Hz，1H)，7.22(d，J＝3.7Hz，1H)，6.61(d，J＝3.7Hz，1H)，4.27(tt，J＝9.1，7.0Hz，1H)，3.64-3.53(m，1H)，3.24(s，3H)，2.53(dtd，J＝9.8，7.1，2.9Hz，2H)，2.07(qd，J＝9.0，2.8Hz，2H).
实施例10
4-{[3-(3，3，3-三氟丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H10的制备
采用与实施例9相同的制备方法，以3，3，3-三氟丙磺氯为原料，可得到化合物H10。LCMS(ESI)m/z：388[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，8.15(s，1H)，7.76(d，J＝8.9Hz，1H)，7.32(t，J＝3.1Hz，1H)，6.64(dd，J＝3.7，2.0Hz，1H)，4.24(p，J＝8.4Hz，1H)，3.55(h，J＝8.6Hz，1H)，3.23(s，3H)，3.20(dd，J＝7.2，3.8Hz，2H)，2.64(dt，J＝10.8，7.5Hz，4H)，2.25(dt，J＝11.0，8.6Hz，2H).
实施例11
4-{[(3R，4R)-1-(2-氰乙酰基)-4-甲基哌啶-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H11的制备
第一步 1-苯磺酰基-4-[((3R，4R)-1-苄基-4-甲基哌啶-3-基)-甲基-氨基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈11b的制备
在反应瓶中加入化合物11a(293mg，1.35mmol)和N-甲基吡咯烷酮(2mL)，然后加入中间体I-1(429mg，1.35mmol)和N-异丙基二乙基胺(348mg，2.70mmol)，于170℃下微波反应1h。TLC监测反应完成，用乙酸乙酯和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)，得到标题化合物11b(150mg，0.30mmol)，收率为22.2％。LCMS(ESI)m/z：500[M+H]+。
第二步 1-苯磺酰基-4-[((3R，4R)-4-甲基哌啶-3-基)-甲基-氨基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈11c的制备
在反应瓶中加入化合物11b(150mg，0.30mmol)和甲醇(10mL)，然后加入钯碳(30mg)，体系在氢气球保护下搅拌5小时。TLC监测反应完成，将体系用硅藻土过滤，滤液旋干(10-15℃)得到标题化合物11c(100mg，0.24mmol)，收率为80.0％。LCMS(ESI)m/z：410[M+H]+。
第三步1-苯磺酰基-4-{[(3R，4R)-1-(2-氰乙酰基)-4-甲基哌啶-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈11d的制备
在反应瓶中加入化合物11c(100mg，0.24mol)和二氯甲烷(30mL)，然后加入三乙胺(24mg，0.24mmol)，氰乙酸(20mg，0.24mmol)和HATU(91mg，0.24mmol)，体系在室温下搅拌2小时。TLC监测反应完成，用二氯甲烷和水萃取，有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后过柱纯化(v/v，石油醚/乙酸乙酯＝4∶1-2∶1)得到标题化合物11d(50mg，0.11mmol)，收率为43.8％。LCMS(ESI)m/z：477[M+H]+。
第四步4-{[(3R，4R)-1-(2-氰乙酰基)-4-甲基哌啶-3-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H11的制备
在反应瓶中加入甲醇(1mL)，然后分别加入化合物11d(50.0mg，0.11mmol)和氢氧化钠溶液(0.15mL，0.15mmol，1mol/L)，反应体系在室温搅拌12小时。TLC监测反应完成，反应体系用乙酸乙酯和水萃取三次，有机相合并进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品用制备TLC纯化得标题化合物H11(30mg，0.089mmol)，收率为80.9％。LCMS(ESI)m/z：337[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.40(s，1H)，7.91(s，1H)，7.10(s，1H)，6.83(s，1H)，3.88-3.75(m，1H)，3.62-3.50(m，1H)，3.35-3.31(m，1H)，3.29(s，3H)，3.25-3.19(m，1H)，3.14-3.04(m，1H)，2.67(s，2H)，1.56-1.46(m，1H)，1.19(s，2H)，0.97(d，J＝7.1Hz，3H).
实施例12
(顺式)-4-{[3-(3，3，3-三氟丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H12的制备
第一步叔丁基(3-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)氨基甲酸酯12b的合成
将顺式叔-丁基(3-氨基环丁基)氨基甲酸酯12a(200mg，1.07mmol)，4-氯-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1(340mg，1.07mmol)和DIPEA(414mg，3.21mmol)溶于NMP中，该混合物在100℃反应2小时，冷却后加水淬灭，有灰褐色固体析出，过滤，干燥得到化合物叔丁基(3-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)氨基甲酸酯12b(400mg)，收率80％。
MS m/z(ESI)：468[M+H]+
第二步4-((3-氨基环丁基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈12c的合成
叔-丁基(3-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)氨基甲酸酯12b(400mg，0.85mmol)溶于2mL的THF中，加入三氟乙酸(2mL)，该混合物在室温下搅拌2小时，浓缩，再次溶于DCM中，用饱和碳酸氢钠溶液中和，有机相用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品4-((3-氨基环丁基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈12c(250mg)直接用于下一班反应。收率80％
MS m/z(ESI)：368[M+H]+
第三步N-(3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)-3，3，3-三氟丙烷-1-磺酰胺12d的合成
将4-((3-氨基环丁基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈12c(100mg，0.27mmol)和DIPEA(104mg，0.81mmol)溶于DCM中，在室温慢慢滴加3，3，3-三氟丙烷-1-磺酰氯化(80mg，0.4mmol)，滴加完毕，该混合物在室温继续搅拌2小时，加水淬灭，用DCM萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品化合物(4)N-(3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)-3，3，3-三氟丙烷-1-磺酰胺12d(100mg)直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：528[M+H]+
第四步N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)-3，3，3-三氟丙烷-1-磺酰胺H12的合成
将N-(3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)-3，3，3-三氟丙烷-1-磺酰胺12d(100mg，0.19mmol)溶于甲醇(4mL)中，加入2mL的2N的氢氧化钠水溶液，该混合物在室温搅拌2小时，用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝10∶1)得到36mg N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)环丁基)-3，3，3-三氟丙烷-1-磺酰胺H12呈白色固体，收率48％。
MS m/z(ESI)：388[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.77(s，1H)，8.03(s，1H)，7.75(d，J＝7.6Hz，1H)，7.21(t，J＝2.9Hz，1H)，7.09(d，J＝6.9Hz，1H)，6.76(dd，J＝3.7，1.9Hz，1H)，4.19(p，J＝7.5Hz，1H)，3.59(q，J＝8.0Hz，1H)，3.25-3.16(m，2H)，2.77(tt，J＝8.8，4.7Hz，2H)，2.69-2.58(m，2H)，2.14(dt，J＝11.0，8.4Hz，2H).
实施例13
(顺式)-4-{[3-(3-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H13的制备
采用与实施例12相同的制备方法，以3-三氟甲基苯磺酰氯为原料，可得到化合物H13。LCMS(ESI)m/z：436[M+H]+。
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.16-8.10(m，2H)，8.00(s，1H)，7.95-7.91(m，1H)，7.82-7.75(m，1H)，7.14(d，J＝3.7Hz，1H)，6.66(d，J＝3.6Hz，1H)，4.36-4.24(m，1H)，3.64(tt，J＝8.9，7.3Hz，1H)，2.69(dddd，J＝9.2，7.2，4.6，2.9Hz，2H)，1.94(qd，J＝8.9，2.9Hz，2H).
实施例14
(顺式)-4-{[3-(丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H14的制备
采用与实施例9相同的制备方法，以丙磺酰氯为原料，可得到化合物H14。LCMS(ESI)m/z：348[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.96(s，1H)，8.14(s，1H)，7.47(s，1H)，7.31(d，J＝3.6Hz，1H)，6.64(d，J＝3.6Hz，1H)，4.28-4.18(m，1H)，3.48(s，1H)，2.93-2.84(m，2H)，2.68-2.58(m，2H)，2.24(qd，J＝9.0，2.8Hz，2H)，1.68-1.56(m，2H)，0.94(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例15
(顺式)-4-{[3-(3，3，3-三氟丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H15的制备
采用与实施例9相同的制备方法，以3，3，3-三氟丙磺酰氯为原料，可得到化合物H15。
LCMS(ESI)m/z：402[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，8.15(s，1H)，7.76(d，J＝8.9Hz，1H)，7.32(t，J＝3.1Hz，1H)，6.64(dd，J＝3.7，2.0Hz，1H)，4.24(p，J＝8.4Hz，1H)，3.55(h，J＝8.6Hz，1H)，3.23(s，3H)，3.20(dd，J＝7.2，3.8Hz，2H)，2.64(dt，J＝10.8，7.5Hz，4H)，2.25(dt，J＝11.0，8.6Hz，2H).
实施例16
(顺式)-4-{[3-(4-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H16的制备
采用与实施例9相同的制备方法，以4-三氟甲基苯磺酰氯为原料，可得到化合物H16。LCMS(ESI)m/z：450[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.30(s，1H)，7.22(d，J＝8.1Hz，2H)，7.06(d，J＝8.3Hz，2H)，6.41(d，J＝3.7Hz，1H)，5.81(d，J＝3.6Hz，1H)，3.50-3.40(m，1H)，2.77(p，J＝8.2Hz，1H)，2.44(s，3H)，1.73(dtd，J＝9.9，7.2，3.0Hz，2H)，1.33-1.24(m，2H).
实施例17
(顺式)-4-{[3-(4-三氟甲基苯磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H17的制备
采用与实施例12相同的制备方法，以4-三氟甲基苯磺酰氯为原料，可得到化合物H17。LCMS(ESI)m/z：436[M+H]+。
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.09-7.97(m，3H)，7.88(dd，J＝8.7，2.7Hz，2H)，7.13(t，J＝3.5Hz，1H)，6.66(d，J＝3.6Hz，1H)，4.34-4.22(m，1H)，3.63(tt，J＝9.0，7.4Hz，1H)，2.75-2.65(m，2H)，1.96(qd，J＝8.9，2.9Hz，2H).
实施例18
(顺式)-4-{[3-(苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺基)-环丁基-1-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H18的制备
采用与实施例9相同的制备方法，以苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰氯为原料，可得到化合物H18。LCMS(ESI)m/z：424[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.64(s，1H)，8.34(dd，J＝9.1，0.8Hz，1H)，8.12-8.03(m，2H)，7.73(dd，J＝9.1，6.8Hz，1H)，7.28(dd，J＝3.7，2.3Hz，1H)，6.55(dd，J＝3.6，1.9Hz，1H)，4.14(p，J＝8.5Hz，1H)，3.60(d，J＝8.9Hz，1H)，3.13(s，3H)，2.37-2.29(m，2H)，2.17-2.01(m，2H).
实施例19
(顺式)-4-{[3-(苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H19的制备
采用与实施例12相同的制备方法，以苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰氯为原料，可得到化合物H19。LCMS(ESI)m/z：410[M+H]+。
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.18(dd，J＝9.1，0.8Hz，1H)，8.10(dd，J＝6.7，0.8Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.66(dd，J＝9.1，6.7Hz，1H)，7.13(d，J＝3.6Hz，1H)，6.64(d，J＝3.6Hz，
1H)，4.27(t，J＝7.7Hz，1H)，3.85-3.74(m，1H)，2.67(dtd，J＝10.0，7.3，3.0Hz，2H)，1.97(td，J＝8.9，2.9Hz，2H).
实施例20
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H20的制备
第一步：叔-丁基(3aR，5s，6aS)-5-(苯甲基氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯20b的制备
在反应瓶中加入化合物7b(500mg，1.6mmol)，化合物20a(0.5mL，4.9mmol)，无溶剂的条件下加热至80℃下反应。TLC监测反应完成，过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物20b(400mg，1.3mmol)，收率为77.2％。
MS m/z(ESI)：317[M+H]+。
第二步：叔-丁基(3aR，5s，6aS)-5-氨基六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯20c的制备
在反应瓶中加入化合物20b(350mg，1.1mmol)，甲酸铵(1.4g，22.1mmol)，Pd/C(0.7g)溶于乙醇溶剂(15mL)，80℃的条件下反应。TLC监测反应完成，过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物20c(150mg，0.66mmol)，收率为59.9％。
MS m/z(ESI)：227[M+H]+。
第三步：叔-丁基(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸酯20d的制备
在反应瓶中加入化合物20c(150mg，0.66mmol)，DIPEA(1.1mL，6.6mmol)，I-1(421mg，1.3mmol)和NMP(5mL)，体系在140℃下回流反应1.5h。反应完成后，将体系倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，低温浓缩后过柱纯化(v/v，PE/THF＝100∶1-50∶1)得到化合物20d(80mg，0.16mmol)，收率为23.8％。
MS m/z(ESI)：508[M+H]+。
第四步：4-(((3aR，5s，6aS)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈20e的制备
在反应瓶中加入化合物20d(80mg，0.16mmol)，TFA(0.1mL)和DCM(5mL)，体系在室温下反应1h。反应完成后，直接浓缩得到化合物20e(110mg，0.27mmol)。
MS m/z(ESI)：408[M+H]+。
第五步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺20f的制备
在反应瓶中加入化合物20e(110mg，0.27mmol)，化合物7h(68mg，0.27mmol)，DIPEA(3.0mL)和THF(5mL)。体系在60℃温度下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，PE/THF＝100∶1-50∶1)得到化合物20f(40mg，0.07mmol)，收率为26.2％。
MS m/z(ESI)：566[M+H]+。
第六步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H20的制备
在反应瓶中加入化合物20f(40mg，0.07mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H20(12mg，0.03mmol)，收率为39.9％。
MS m/z(ESI)：425[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.78(s，1H)，11.58(s，1H)，8.06(s，1H)，7.26-7.17(m，1H)，6.88-6.70(m，2H)，4.75(q，J＝6.9Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.69(t，J＝9.4Hz，2H)，3.31-3.35(m，2H)，2.91(m，2H)，1.99(d，J＝7.8Hz，4H).
实施例21
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-叔丁基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H21的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以3-叔丁基-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H21。
MS m/z(ESI)：465[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，11.44(s，1H)，8.15(s，1H)，7.25(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.64(dd，J＝3.7，2.0Hz，1H)，4.73(t，J＝8.1Hz，1H)，3.67(m，2H)，3.19(s，3H)，2.87(m，2H)，2.20-2.10(m，2H)，1.92-1.82(m，2H)，1.31(s，9H).
实施例22
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(2，2，2-三氟乙基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H22的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以2，2，2-三氟乙基胺为原料，可得到化合物H22。LCMS(ESI)m/z：407[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.12(s，1H)，7.30-7.25(m，1H)，6.80-6.73(m，1H)，6.63-6.58(m，1H)，4.75-4.61(m，1H)，3.80-3.67(m，2H)，3.54-3.44(m，2H)，3.15(s，3H)，3.09-3.01(m，2H)，2.83-2.72(m，2H)，2.15-2.02(m，2H)，1.84-1.74(m，2H).
实施例23
(3aR，5S，6aS)-4-{[2-((2S)-2-羟基丙酰基)-六氢环戊并[c]吡咯-5-基]-甲基-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H23的制备
采用与实施例6相同的制备方法，以7e为原料，可得到化合物H23。LCMS(ESI)m/z：354[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.91(s，1H)，8.13(s，1H)，7.29(s，1H)，6.62(s，1H)，4.74(t，J＝7.2Hz，1H)，4.70-4.60(m，1H)，4.26-4.17(m，1H)，3.80-3.48(m，2H)，3.28-3.19(m，1H)，3.16(s，3H)，2.91-2.67(m，2H)，2.16-2.02(m，2H)，1.88-1.73(m，2H)，1.17-1.03(m，3H).
实施例24
4-(甲基((3aR，5s，6aS)-2-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H24的制备
第一步：4-(甲基((3aR，5s，6aS)-2-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈24b的制备
在反应瓶中加入化合物7e(50mg，0.12mmol)，化合物24a(30mg，0.12mmol)，DIPEA(31mg，0.24mmol)和DCM(10mL)。体系在室温下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物24b(60mg，0.095mmol)，收率为79.5％。
MS m/z(ESI)：630[M+H]+。
第二步：4-(甲基((3aR，5s，6aS)-2-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H24的制备
在反应瓶中加入化合物24b(60mg，0.095mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H24(25mg，0.051mmol)，收率为53.8％。
MS m/z(ESI)：490[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(s，1H)，8.16-8.03(m，3H)，7.94(s，1H)，7.90-7.82(m，1H)，7.30-7.24(m，1H)，6.55(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.42-4.32(m，1H)，3.28-3.22(m，2H)，3.09(s，3H)，2.90-2.79(m，2H)，2.71-2.62(m，2H)，2.05-1.94(m，2H)，1.70-1.57(m，2H).
实施例25
(3aR，5s，6aS)-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H25的制备
第一步：(3aR，5s，6aS)-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺25b的制备
在反应瓶中加入化合物7e(50mg，0.12mmol)，化合物25a(27mg，0.12mmol)，DIPEA(31mg，0.24mmol)和DCM(10mL)。体系在室温下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物24b(50mg，0.078mmol)，收率为64.8％。
MS m/z(ESI)：643[M+H]+。
第二步：(3aR，5s，6aS)-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H25的制备
在反应瓶中加入化合物25b(50mg，0.078mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H25(20mg，0.040mmol)，收率为51.1％。
MS m/z(ESI)：503[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.60(s，1H)，8.12(s，1H)，8.08(d，J＝2.4Hz，1H)，7.83-7.77(m，1H)，7.52(d，J＝8.9Hz，1H)，7.28-7.22(m，1H)，6.68-6.60(m，1H)，4.77-4.68(m，1H)，3.68-3.57(m，2H)，3.26-3.21(m，2H)，3.17(s，3H)，2.89-2.77(m，2H)，2.17-2.08(m，2H)，1.89-1.80(m，2H).
实施例26
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-环丙基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H26的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以3-环丙基-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H26。
MS m/z(ESI)：449[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.95(s，1H)，11.45(s，1H)，8.15(s，1H)，7.31-7.24(m，1H)，6.64(dd，J＝3.5，1.8Hz，1H)，4.78-4.68(m，1H)，3.74-3.61(m，2H)，3.34-3.28(m，2H)，3.19(s，3H)，2.95-2.78(m，2H)，2.20-2.05(m，3H)，1.91-1.81(m，2H)，1.00-0.85(m，4H).
实施例27
4-(甲基((3aR，5s，6aS)-2-((3，3，3-三氟丙基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H27的制备
采用与实施例24相同的制备方法，以3，3，3-三氟丙磺酰氯为原料，可得到化合物H27。
MS m/z(ESI)：442[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(s，1H)，8.13(s，1H)，7.33-7.26(m，1H)，6.65(dd，J＝3.4，2.0Hz，1H)，4.70-4.61(m，1H)，3.50-3.42(m，2H)，3.36-3.30(m，2H)，3.15(s，3H)，3.09-3.02(m，2H)，2.88-2.79(m，2H)，2.72-2.62(m，2H)，2.15-2.02(m，2H)，1.83-1.72(m，2H).
实施例28
4-(((3aR，5s，6aS)-2-((3-氟苯基)磺酰)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H28的制备
采用与实施例24相同的制备方法，以3-氟苯磺酰氯为原料，可得到化合物H28。
MS m/z(ESI)：440[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(s，1H)，8.10(s，1H)，7.71-7.62(m，1H)，7.62-7.50(m，3H)，7.32-7.25(m，1H)，6.54(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.42-4.32(m，1H)，3.28-3.22(m，2H)，3.09(s，3H)，2.87-2.75(m，2H)，2.72-2.60(m，2H)，2.06-1.92(m，2H)，1.68-1.54(m，2H).
实施例29
(顺式)-1-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲H29的合成
第一步：叔-丁基(3-(甲氨基)环丁基)氨基甲酸酯29a的合成
将叔-丁基(3-环丁酮)氨基甲酸酯9a(1g，5.4mmol)和甲胺盐酸盐(0.55g，8.1mmol)溶于乙酸中，然后再加入硼氢化钠(0.4g，10.8mmol)。该混合物在室温搅拌过夜，加水淬灭，用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用DCM萃取5次，合并有机相，有机相用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝8∶1)得到叔-丁基(3-(甲氨基)环丁基)氨基甲酸酯29a(400mg)，收率37％
MS m/z(ESI)：201[M+H]+
第二步：叔-丁基(3-(甲氨基)环丁基)氨基甲酸酯29b的合成
叔-丁基(3-(甲氨基)环丁基)氨基甲酸酯29a(300mg，1.5mmol)，4-氯-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1(475mg，1.5mmol)和DIPEA(580mg，4.5mmol)溶于NMP中，该混合物在170℃搅拌2小时，冷却，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品用柱层析纯化(PE∶EA＝1∶1)得到叔-丁基(3-(甲氨基)环丁基)氨基甲酸酯29b呈橙色固体(400mg)，收率55％。
MS m/z(ESI)：482[M+H]+
第三步：4-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈29c的合成
叔-丁基(3-(甲氨基)环丁基)氨基甲酸酯29b(400mg，0.83mmol)溶于2mL的DCM中，加入三氟乙酸(2mL)，该混合物在室温下搅拌2小时，浓缩，再次溶于DCM中，用饱和碳酸氢钠溶液中和，有机相用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品4-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈29c(200mg)直接用于下一班反应。
MS m/z(ESI)：382[M+H]+
第四步：1-(3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲29d的合成
将4-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈29c(150mg，0.39mmol)，苯基(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)氨基甲酸酯7h(100mg，0.39mol)和DIPEA(150mg，1.17mmol)溶于THF中，该混合物在60℃搅拌1小时，浓缩，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝20∶1)得到(2)1-(3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲29d(100mg)，收率47％。
MS m/z(ESI)：539(M+H)+
第五步：1-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲H29的合成
将1-(3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲29d(100mg，0.18mmol)溶于甲醇(4mL)中，加入2mL的2N的氢氧化钠水溶液，该混合物在室温搅拌2小时，用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝10∶1)得到1-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲H29(15mg)，收率21％。
MS m/z(ESI)：399(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(s，1H)，11.39(s，1H)，8.15(s，1H)，7.41-7.24(m，2H)，6.65(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.28(p，J＝8.2Hz，1H)，3.94-3.87(m，1H)，3.27(s，3H)，2.58(d，J＝8.6Hz，2H)，2.32(dt，J＝11.9，9.1Hz，2H).
实施例30
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-异丙基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H30的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以3-异丙基-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H30。
MS m/z(ESI)：451[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，11.44(s，1H)，8.11(s，1H)，7.28-7.15(m，1H)，6.61(dd，J＝3.7，2.0Hz，1H)，4.70(m，1H)，3.63(m，2H)，3.31(m，2H)，3.16(s，3H)，2.98(p，J＝7.0Hz，1H)，2.84(s，2H)，2.22-2.01(m，2H)，1.83(dd，J＝13.2，7.6Hz，2H)，1.21(d，6H).
实施例31
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(1-乙基-1H-1，2，4-三氮唑-3-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H31的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以1-乙基-3-氨基-1H-1，2，4-三氮唑为原料，可得到化合物H31。
MS m/z(ESI)：420[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.95(s，1H)，8.58(s，1H)，8.28(s，1H)，8.16(s，1H)，7.37-7.30(m，1H)，6.67(dd，J＝3.4，1.9Hz，1H)，4.81-4.70(m，1H)，4.08(q，J＝7.3Hz，2H)，3.65-3.54(m，2H)，3.19(s，3H)，3.19-3.13(m，2H)，2.91-2.75(m，2H)，2.21-2.07(m，2H)，1.91-1.77(m，2H)，1.35(t，J＝7.3Hz，3H).
实施例32
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-环丙基-1，2，4-噁二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H32的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以3-环丙基-5-氨基-1，2，4-噁二唑为原料，可得到化合物H32。
MS m/z(ESI)：433[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.91(s，1H)，10.68(s，1H)，8.12(s，1H)，7.30-7.22(m，1H)，6.66-6.57(m，1H)，4.75-4.63(m，1H)，3.69-3.49(m，2H)，3.29-3.20(m，2H)，3.15(s，3H)，2.88-2.71(m，2H)，2.17-2.03(m，2H)，2.01-1.89(m，1H)，1.87-1.71(m，2H)，1.02-0.86(m，2H)，0.85-0.72(m，2H).
实施例33
(3aR，5s，6aS)-4-({2-[(3-二甲胺基-1，2，4-噻二唑-5-基)-氨基甲酰基]-六氢环戊并[c]吡咯-5-基}-甲基-氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H33的制备
采用与实施例7相同的制备方法，以3-(N，N-二甲氨基)-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H33。
MS m/z(ESI)：452[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(s，1H)，11.22(s，1H)，8.15(s，1H)，7.32-7.26(m，1H)，6.69-6.63(m，1H)，4.77-4.70(m，1H)，3.72-3.59(m，2H)，3.29(s，3H)，3.19(s，3H)，3.01(s，3H)，2.93-2.81(m，2H)，2.20-2.09(m，2H)，2.07-1.93(m，2H)，1.92-1.79(m，2H).
实施例34
4-((1-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)哌啶-4-基)氨基)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H34的合成
第一步叔丁基4-((5-氰基-1-(苯磺酰)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯34b的合成
将4-氯-1-(苯磺酰)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1(500mg，1.6mmol，1.0eq)和叔-丁基4-氨基哌啶-1-羧酸酯34a(0.96g，4.8mmol，3.0eq)投于NMP(5ml)中，加入DIPEA(0.53ml，3.2mmol，2.0eq)，100℃微波反应1h。冷至室温，加入水(20ml)稀释，乙酸乙酯(50ml)萃取，有机层经brine(10ml)洗涤，浓缩，falsh柱纯化(PE～PE/EA＝2∶1)得白色固体34b(750mg).
MS m/z(ESI)：482[M+1]+
第二步1-(苯磺酰)-4-(哌啶-4-基氨基)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈34c的合成
将化合物34b(750mg，1.6mmol，1.0eq)投于2N HCl/EA(30ml)中，室温反应过夜，过滤，真空干燥得白色固体34c(600mg)。
MS m/z(ESI)：382[M+1]+
第三步1-(苯磺酰)-4-((1-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)哌啶-4-基)氨基)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈34d的合成
将化合物34c(100mg，0.26mmol，1.0eq)和TEA(53mg，0.52mmol，2.0eq)溶于无水DCM(10ml)中，冰水浴冷却下，滴加3-三氟甲基苯磺酰氯(64mg，0.26mmol，1.0eq)DCM溶液(5ml)，加毕，室温反应1h。加入水(10ml)淬灭，分层，有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩，flash柱纯化得白色固体34d(160mg)。
MS m/z(ESI)：590[M+1]+
第四步4-((1-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)哌啶-4-基)氨基)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H34的合成
将化合物34d(160mg，0.27mmol，1.0eq)溶于甲醇(3ml)和THF(3ml)混合溶剂中，加入2N NaOH(0.7ml，1.4mmol，5.0eq)，室温反应2h。将反应液直接拌样，flash柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝20∶1)得白色固体H34(56mg).
MS m/z(ESI)：450[M+1]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(s，1H)，8.18-8.08(m，2H)，8.04(s，1H)，8.01-7.91(m，2H)，7.21(dd，J＝3.5，2.5Hz，1H)，6.75-6.65(m，2H)，4.07(s，1H)，3.76(d，J＝11.8Hz，2H)，2.54(d，J＝10.2Hz，2H)，2.05(d，J＝11.3Hz，2H)，1.75(qd，J＝12.2，4.0Hz，2H).
实施例35
4-((1-((3-(三氟甲基)苯基)磺酰)哌啶-4-基)-甲基-氨基)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H35的合成
采用与实施例34相同的制备方法，以叔-丁基4-(甲基氨基)-哌啶-1-羧酸酯为原料，可得到化合物H35。
MS m/z(ESI)：464[M+1]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(q，J＝8.0Hz，3H)，8.00(s，1H)，7.93(t，J＝7.9Hz，1H)，7.32(t，J＝3.0Hz，1H)，6.61-6.55(m，1H)，3.90(dd，J＝44.8，11.8Hz，3H)，3.14(s，3H)，2.45(d，J＝11.4Hz，2H)，2.03(q，J＝11.1Hz，3H)，1.85(d，J＝12.3Hz，2H).
实施例36
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺H36的合成
第一步叔丁基3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸酯36b
将4-氯-1-(苯磺酰)-2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈I-1(350mg，1.1mmol，1.0eq)和叔丁基-3-氨基吡咯烷-1-羧酸酯36a(0.20g，1.1mmol，1.0eq)投于NMP(5ml)中，加入DIPEA(0.28ml，2.2mmol，2.0eq)，100℃反应5h。冷至室温，加入水(20ml)稀释，乙酸乙酯(50ml)萃取，有机层经brine(10ml)洗涤，浓缩，falsh柱纯化(PE～PE/EA＝1∶1)得白色固体36b(330mg)。
MS m/z(ESI)：468[M+1]+
第二步1-(苯磺酰)-4-(吡咯烷-3-基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈36c的合成
将化合物36b(150mg，0.32mmol，1.0eq)投于2N HCl/EA(10ml)中，室温反应过夜，过滤，真空干燥得白色固体36c(120mg)。
MS m/z(ESI)：368[M+1]+
第三步3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺36d
将三氟乙胺(63mg，0.64mmol，2.0eq)溶于无水THF(10ml)中，加入CDI(0.10g，0.64mmol，2.0eq)，室温反应4h。将化合物36c(120mg，0.32mmol，1.0eq)和TEA(97mg，0.96mmol，3.0eq)溶于无水THF(5ml)中，并将该溶液一次性转移至上述反应液中，回流反应2h。减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯(30ml)，依次用水(10ml)和brine(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩，flash柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝20∶1)得白色固体36d(150mg)。
MS m/z(ESI)：493[M+1]+
第四步3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺H36
将化合物36d(150mg，0.30mmol，1.0eq)溶于MeOH/THF(5ml/5ml)混合溶剂中，加入2N NaOH(0.8ml，1.5mmol，5.0eq)，室温反应4h。浓缩，FLASH柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝10∶1)得白色固体H36(40mg)。
MS m/z(ESI)：353[M+1]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.85(s，1H)，8.10(s，1H)，7.26(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，7.03(d，J＝7.1Hz，1H)，6.89(t，J＝6.2Hz，1H)，6.80(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.82(s，1H)，3.86-3.72(m，2H)，3.66(dd，J＝10.7，6.2Hz，1H)，3.56-3.36(m，3H)，2.30-2.05(m，2H).
实施例37
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-甲基-氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺H37的合成
第一步 叔丁基-3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)吡咯烷-1-羧酸酯37a
将化合物36b(150mg，0.32mmol，1.0eq)和碳酸铯(0.21g，0.64mmol，2.0eq)投于DMF(10ml)中，滴加CH3I(108mg，0.76mmol，2.5eq)，室温反应过夜。加入水(50ml)稀释，乙酸乙酯(30ml×2)萃取，合并有机层，经brine(25ml×3)洗涤，浓缩，flash柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝50∶1)得白色泡沫状固体37a(120mg)。
MS m/z(ESI)：482[M+1]+
第二步 4-(甲基(吡咯烷-3-基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈37b的合成
将化合物37a(120mg，0.25mmol，1.0eq)投于2N HCl/EA(20ml)中，室温反应过夜，过滤，真空干燥得白色固体37b(90mg)。
MS m/z(ESI)：382[M+1]+
第三步 3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺37c
将三氟乙胺(50mg，0.50mmol，2.0eq)溶于无水THF(10ml)中，加入CDI(81g，0.50mmol，2.0eq)，室温反应4h。将化合物37b(90mg，0.25mmol，1.0eq)和TEA(76mg，0.75mmol，3.0eq)溶于无水THF(5ml)中，并将该溶液一次性转移至上述反应液中，回流反应2h。减压蒸干溶剂，加入乙酸乙酯(30ml)，依次用水(10ml)和brine(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩，flash柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝50∶1)得白色固体37c(110mg)。
MS m/z(ESI)：507[M+1]+
第四步3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺H37
将化合物37c(110mg，0.22mmol，1.0eq)溶于MeOH/THF(5ml/5ml)混合溶剂中，加入2N NaOH(0.6ml，1.1mmol，5.0eq)，室温反应4h。浓缩，FLASH柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝15∶1)得白色固体H37(47mg)。
MS m/z(ESI)：367[M+1]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，8.23(s，1H)，7.40(dd，J＝3.7，2.3Hz，1H)，6.92(t，J＝6.3Hz，1H)，6.69(dd，J＝3.6，1.8Hz，1H)，4.76(q，J＝7.5Hz，1H)，3.90-3.72(m，2H)，3.67(dd，J＝10.7，7.7Hz，1H)，3.60-3.40(m，2H)，3.31-3.24(m，1H)，3.21(s，3H)，2.19(m，2H).
实施例38(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-羟基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H38
在反应瓶中加入化合物H07(100mg，0.23mmol)和HBr/AcOH溶液(5mL)，于80℃下搅拌1h，将体系倒入水中，中和至弱碱性，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，低温浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H38(10mg，0.024mmol)，收率为10.4％。
MS m/z(ESI)：425[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.12(brs，1H)，11.91(s，1H)，9.19(brs，1H)，8.12(s，1H)，7.29-7.21(m，1H)，6.64-6.56(m，1H)，4.74-4.65(m，1H)，3.78-3.56(m，2H)，3.16(s，5H)，2.87-2.76(m，2H)，2.14-2.05(m，2H)，1.86-1.78(m，2H).
实施例39
6-(5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-3-甲酰胺H39的合成
第一步：3-苄基6-(叔-丁基)3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-3，6-二羧酸酯39b
在反应瓶中加入化合物39a(300mg，1.5mmol)和二氯甲烷(20mL)，依次加入三乙胺(303mg，3mmol)和氯甲酸苄酯(306mg，1.8mmol)，反应液在常温下搅拌2小时，反应液用水洗涤，有机相干燥旋干，加硅胶拌样，低温浓缩后过柱纯化得到化合物39b(470mg，1.4mmol)，收率为94％。
MS m/z(ESI)：355[M+23]+
第二步：苄基3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-3-羧酸酯39c
在反应瓶中加入化合物39b(470mg，1.4mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，反应液在室温下搅拌2小时，然后浓缩旋干得到化合物39c(328mg，1.4mmol)，收率为100％。
MS m/z(ESI)：233[M+H]+
第三步：苄基6-(5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-3-羧酸酯39d
在反应瓶中加入化合物I-1(200mg，0.63mmol)，化合物39c(146mg，0.63mmol)，DIPEA(162mg，1.26mmol)和NMP(5mL)，体系在170℃下微波反应2h。反应完成后，将体系倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相进行水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，低温浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物39d(200mg，0.39mmol)，收率为62％。
MS m/z(ESI)：514[M+H]+。
第四步：4-(3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚-6-基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈39e
在反应瓶中加入化合物1e(180mg，0.35mmol)和40％的氢溴酸-醋酸溶液(3mL)，反应液在室温下搅拌20分钟，然后浓缩旋干得到化合物39e(133mg，0.35mmol)，收率为100％。
MS m/z(ESI)：380[M+H]+。
第五步：6-(5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-3-甲酰胺39f
在反应瓶中加入化合物39e(133mg，0.35mmol)，N-(3，3，3-三氟乙基)氨基甲酸苯酯(77mg，0.35mmol)，DIPEA(90mg，0.70mmol)和THF(10mL)。体系在60℃温度下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物39f(130mg，0.26mmol)，收率为74％。
MS m/z(ESI)：505[M+H]+。
第六步：6-(5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-3，6-二氮杂二环[3.2.0]庚烷-3-甲酰胺H39
在反应瓶中加入化合物39f(130mg，0.26mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H39(10mg，0.027mmol)，收率为11％。
MS m/z(ESI)：365[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.85(s，1H)，8.01(s，1H)，7.26-7.11(m，2H)，6.45(s，1H)，5.37(dd，J＝6.9，4.5Hz，1H)，4.59(t，J＝8.6Hz，1H)，4.19(dd，J＝8.9，4.4Hz，1H)，4.04(d，J＝12.4Hz，1H)，3.87-3.63(m，3H)，3.19(ddd，J＝23.2，11.9，5.5Hz，2H)，1.96(q，J＝7.1，6.7Hz，1H).
实施例40
(3S，4S)-4-({4-甲基-1-[(2，2，2-三氟乙基)氨基甲酰基)]吡咯烷-3-基}氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H40的制备
采用与实施例1相同的制备方法，以(3S，4S)-(4-甲基-吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯为原料，可得到化合物H40。
MS m/z(ESI)：367[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.86(s，1H)，8.11(s，1H)，7.28(t，J＝3.0Hz，1H)，6.94-6.80(m，2H)，6.70(d，J＝8.8Hz，1H)，4.87(dq，J＝10.9，5.7Hz，1H)，3.81(ddd，J＝9.4，6.3，2.8Hz，2H)，3.71(dd，J＝10.8，6.5Hz，1H)，3.60-3.48(m，2H)，3.26(dd，J＝10.2，7.3Hz，1H)，2.61(p，J＝6.9Hz，1H)，0.98(d，J＝6.9Hz，3H).
实施例41
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(甲基氨基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H41的制备
第一步：苯基(3-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-1，2，4-噻二唑-5-基)氨基甲酸酯41b
在反应瓶中加入化合物41a(267mg，1.71mmol)，化合物92a(388mg，1.55mmol)和DCM(20mL)，与冰浴下缓慢滴加三乙胺(313mg，3.10mmol)。体系在该温度下反应2h。反应完成后，加水，DCM萃取，干燥，浓缩，柱层析纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物41b(450mg，1.22mmol)，收率为78.7％。
MS m/z(ESI)：371[M+H]+。
第二步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺41c
在反应瓶中加入化合物7e(50mg，0.12mmol)，化合物41b(44mg，0.12mmol)，DIPEA(31mg，0.24mmol)和THF(10mL)。体系在60℃温度下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物41c(56mg，0.08mmol)，收率为66.7％。
MS m/z(ESI)：698[M+H]+。
第三步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(甲基氨基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺41d
在反应瓶中加入化合物41c(56mg，0.08mmol)，TFA(2mL)和DCM(10mL)。体系在室温下反应0.5h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物41d(40mg，0.07mmol)，收率为86.7％。
MS m/z(ESI)：578[M+H]+。
第四步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(甲基氨基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H41
在反应瓶中加入化合物41d(40mg，0.07mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H41(10mg，0.023mmol)，收率为32.90％。
MS m/z(ESI)：438[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，11.13(s，1H)，8.12(s，1H)，728-7.19(m，1H)，6.65-6.59(m，1H)，6.56-6.44(m，1H)，4.73-4.64(m，1H)，3.67-3.56(m，2H)，3.29-3.23(m，2H)，3.16(s，3H)，2.88-2.77(m，2H)，2.71(s，3H)，2.16-2.05(m，2H)，1.88-1.78(m，2H).
实施例42
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-羟甲基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H42
第一步：5-胺基-1，2，4-噻二唑-3羧酸甲酯42b
在反应瓶中加入化合物42a(1.0g，9.79mmol)，硫代异氰酸钾(1.0g，10.3mmol)和甲醇(20mL)，冷却到-5℃后缓慢加入甲醇钠(1.0g，18.5mmol)。体系在-5℃下反应3h后缓慢升至室温。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-10∶1)得到化合物42b(300mg，1.88mmol)，收率为19.3％
MS m/z(ESI)：160.1[M+H]+。
第二步：5-((苯氧甲酰基)胺基)-1，2，4-噻二唑-3羧酸甲酯42c
在反应瓶中加入化合物42b(200mg，1.26mmol)，化合物7f(300mg，1.92mmol)和二氯甲烷(10mL)，后缓慢滴加三乙胺(300mg，2.96mmol)。体系在室温下反应1h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-20∶1)得到化合物42c(130mg，0.465mmol)，收率为36.9％。
MS m/z(ESI)：280.1[M+H]+。
第三步：5-((3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-对甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2-甲酰胺基)-1，2，4-噻二唑-3-羧酸甲酯42d
在反应瓶中加入化合物42c(100mg，0.358mmol)，化合物7e(80mg，0.184mmol)，DIPEA(100mg，0.774mmol)和THF(10mL)。体系在60℃温度下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-10∶1)得到化合物42d(100mg，0.161mmol)，收率为87.5％。
MS m/z(ESI)：607.4[M+H]+。
第四步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-对甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-羟甲基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺42e
在反应瓶中加入化合物42d(90mg，0.145mmol)，硼氢化钠(200mg，5.29mmol)和甲醇(10mL)。体系在室温下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-5∶1)得到化合物42e(60mg，0.101mmol)，收率为62.7％。
MS m/z(ESI)：579.3[M+H]+。
第五步：(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-羟甲基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H42
在反应瓶中加入化合物42e(60mg，0.101mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。反应完成后，用稀盐酸调pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-5∶1)得到化合物H42(25mg，0.057mmol)，收率为56.4％。
MS m/z(ESI)：439.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(s，1H)，11.55(s，1H)，8.11(s，1H)，7.25-7.21(m，1H)，6.63-6.59(m，1H)，5.51-5.22(m，1H)，4.75-4.64(m，1H)，4.45(s，2H)，3.71-3.59(m，2H)，3.32-3.24(m，2H)，3.16(s，3H)，2.92-2.77(m，2H)，2.17-2.05(m，2H)，1.88-1.79(m，2H).
实施例43
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噁二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H43
采用与实施例7相同的制备方法，以3-甲氧基-5-氨基-1H-1，2，4-噁二唑为原料，可得到化合物H43。
MS m/z(ESI)：423[M+H]+。
实施例44
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H44
采用与实施例7相同的制备方法，以3-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-5-氨基-1H-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H44。
MS m/z(ESI)：496[M+H]+。
实施例45
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H45
采用与实施例7相同的制备方法，以3-(2-羟基-2-甲基-丙氧基)-5-氨基-1H-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H45。
MS m/z(ESI)：497[M+H]+。
实施例46
(顺式)-4-{[3-(丙磺酰胺基)-环丁基-1-基]-氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H46的制备
采用与实施例12相同的制备方法，以丙磺酰氯为原料，可得到化合物H46。LCMS(ESI)m/z：334[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.76(s，1H)，8.03(s，1H)，7.42(d，J＝8.3Hz，1H)，7.20(dd，J＝3.5，2.4Hz，1H)，7.06(d，J＝6.9Hz，1H)，6.77(dd，J＝3.5，1.9Hz，1H)，4.25-4.12(m，1H)，3.52(h，J＝8.4Hz，1H)，2.95-2.83(m，2H)，2.75(dtd，J＝9.8，7.2，2.9Hz，2H)，2.12(qd，J＝8.8，2.9Hz，2H)，1.70-1.53(m，2H)，0.94(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例47
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-乙氧基-1，2，4-噁二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H47
采用与实施例7相同的制备方法，以3-乙氧基-5-氨基-1H-1，2，4-噁二唑为原料，可得到化合物H47。
MS m/z(ESI)：437[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.95(s，1H)，10.78(s，1H)，8.16(s，1H)，7.31(t，J＝3.0Hz，1H)，6.66(dd，J＝3.7，1.9Hz，1H)，4.73(t，J＝8.1Hz，1H)，4.24(q，J＝7.0Hz，2H)，3.61(d，J＝9.8Hz，2H)，3.29(d，J＝12.1Hz，2H)，3.19(s，3H)，2.91-2.79(m，2H)，2.21-2.09(m，2H)，1.85(dd，J＝13.3，7.6Hz，2H)，1.33(t，J＝7.0Hz，3H).
实施例48
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(5-乙氧基-1，2，4-噁二唑-3-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H48
采用与实施例7相同的制备方法，以5-乙氧基-3-氨基-1H-1，2，4-噁二唑为原料，可得到化合物H48。
MS m/z(ESI)：437[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，10.32(s，1H)，8.16(s，1H)，7.31(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.65(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.83-4.63(m，1H)，4.09(q，J＝7.1Hz，2H)，3.70(dd，J＝10.7，7.9Hz，2H)，3.35(d，J＝4.3Hz，2H)，3.20(s，3H)，2.96(h，J＝3.4Hz，2H)，2.17
(dt，J＝12.7，8.2Hz，2H)，1.91(ddd，J＝13.5，7.2，2.0Hz，2H)，1.20(t，J＝7.1Hz，3H).
实施例49
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-环丙基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H49
采用与实施例20相同的制备方法，以3-环丙基-5-氨基-1H-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H49。
MS m/z(ESI)：435[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.74(s，1H)，11.41(s，1H)，8.02(s，1H)，7.17-7.13(m，1H)，6.79(d，J＝8.4Hz，1H)，6.71(dd，J＝3.5，2.0Hz，1H)，4.75-4.66(m，1H)，3.65-3.55(m，2H)，3.37-3.31(m，2H)，2.92-2.80(m，2H)，2.10-2.03(m，1H)，1.99-1.87(m，4H)，0.95-0.86(m，4H).
实施例50
(3aR，5s，6aS)-5-((5-三氟甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H50的制备
第一步：4-氯-1-(苯基磺酰基)-5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶50b
在反应瓶中加入化合物50a(1.0g，4.55mmol)，TEA(919mg，9.10mmol)和DMF(10mL)，与冰浴下缓慢滴加苯磺酰氯(800mg，4.55mmol)。体系在该温度下反应2h。反应完成后，加水，EA萃取，干燥，浓缩，柱层析纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物50b(1.4g，3.89mmol)，收率为85.5％。
MS m/z(ESI)：361[M+H]+。
第二步：叔丁基(3aR，5s，6aS)-5-((1-(苯基磺酰基)-5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯50c
在反应瓶中加入化合物50b(200mg，0.56mmol)，化合物20c(127mg，0.56mmol)，DIPEA(144mg，1.12mmol)和NMP(10mL)。体系在160℃温度下微波反应1.5h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物50c(80mg，0.15mmol)，收率为26.8％。
MS m/z(ESI)：551[M+H]+。
第三步：N-((3aR，5S，6AS)-八氢环戊[c]吡咯-5-基)-1-(苯基磺酰基)-5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-胺50d
在反应瓶中加入化合物50c(80mg，0.15mmol)，TFA(2mL)和DCM(10mL)。体系在室温下反应0.5h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物50d(60mg，0.13mmol)，收率为86.7％。
MS m/z(ESI)：451[M+H]+。
第四步：(3aR，5S，6aS)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)-5-((1-(苯基磺酰基)-5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，13-b]吡啶-4-基)氨基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺50e
在反应瓶中加入化合物50d(60mg，0.13mmol)，化合物7h(30mg，0.12mmol)，DIPEA(31mg，0.24mmol)和THF(10mL)。体系在60℃温度下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物50e(40mg，0.07mmol)，收率为53.8％。
MS m/z(ESI)：608[M+H]+。
第五步：(3aR，5S，6aS)-N-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)-5-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶哌啶-4-基)氨基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H50在反应瓶中加入化合物102f(40mg，0.07mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H50(20mg，0.04mmol)，收率为57.10％。
MS m/z(ESI)：468[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.66(s，1H)，11.56(s，1H)，8.04(s，1H)，7.22-7.16(m，1H)，6.60(dd，J＝3.6，1.8Hz，1H)，5.31(d，J＝9.7Hz，1H)，4.70-4.62(m，1H)，3.86(s，3H)，3.61(d，J＝7.0Hz，2H)，3.41-3.34(m，2H)，2.88-2.75(m，2H)，2.03-1.83(m，4H).
实施例51
(3aR，5S，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(2-甲氧基乙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H51
采用与实施例7相同的制备方法，以3-(2-甲氧基乙氧基)-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H51。
MS m/z(ESI)：483[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，11.52(s，1H)，8.12(s，1H)，7.27-7.22(m，1H)，6.62(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.75-4.66(m，1H)，4.36-4.26(m，2H)，3.71-3.52(m，4H)，3.35-3.27(m，2H)，3.25(s，3H)，3.16(s，3H)，2.91-2.77(m，2H)，2.18-2.07(m，2H)，1.90-1.77(m，2H).
实施例52
(3aR，5S，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-(2-甲氧基乙氧基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H52
采用与实施例20相同的制备方法，以3-(2-甲氧基乙氧基)-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H52。
MS m/z(ESI)：469[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.74(s，1H)，11.53(s，1H)，8.02(s，1H)，7.18-7.13(m，1H)，6.79(d，J＝7.3Hz，1H)，6.72(dd，J＝3.5，2.0Hz，1H)，4.76-4.67(m，1H)，4.36-4.29(m，2H)，3.71-3.56(m，4H)，3.36-3.29(m，2H)，3.26(s，3H)，2.93-2.81(m，2H)，2.01-1.90(m，4H).
实施例53
5-((3aR，5s，6as)-5-((5-氰基-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)八氢环戊烷[c]吡咯-2-甲酰胺基)-1，2，4-噻二唑-3-羧酸甲酯H53
采用与实施例7相同的制备方法，以5-氨基-1，2，4-噻二唑-3-羧酸甲酯为原料，可得到化合物H53。
MS m/z(ESI)：467(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.03(s，1H)，11.89(s，1H)，8.11(s，1H)，7.23(dd，J＝3.7，2.5Hz，1H)，6.62(dd，J＝3.7，2.0Hz，1H)，4.71(q，J＝8.2Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.72-3.60(m，2H)，3.40-3.30(m，2H)，3.16(s，3H)，2.90-2.75(m，2H)，2.12(dt，J＝12.8，8.3Hz，2H)，1.90-1.78(m，2H).
实施例54
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1h-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-((二甲胺基)甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H54
第一步(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-(羟甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺54a
将化合物53e(400mg，0.66mmol)分散在THF(20mL)中，分批加入硼氢化钠(376mg，9.9mmol)，该混合物在室温搅拌6小时，浓缩，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝15∶1)得到化合物54a(250mg)呈灰色固体，收率65％。
第二步(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-甲酰基-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺54b
将化合物54a(200mg，0.34mmol)、Dess-Martin(293mg，0.68mmol)分散在DCM(14mL)中，该混合物在室温搅拌2小时，反应液用饱和NaHCO3溶液洗，用Na2SO3溶液洗，有机相干燥，浓缩，粗品54b直接用于下一步反应。
第三步(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1h-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-((二甲氨基)甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1h)-甲酰胺54c
将化合物54b(100mg，0.17mmol)和二甲胺的盐酸盐(28mg，0.34mmol)分散在THF(10mL)中，室温下分批加入醋酸硼氢化钠(72mg，0.34mmol)，该混合物在室温搅拌2小时，浓缩，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝10∶1)得到54c(30mg)白色固体。收率29％。
第四步((3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-((二甲胺基)甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H54
将54c(30mg，0.05mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入碳酸钾(34mg，0.25mmol)，该混合物在室温搅拌2小时，过滤，滤液浓缩，粗品用柱层析纯化得到H54(3.5mg)呈白色固体，收率15％。
MS m/z(ESI)：466(M+H)+
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.11(s，1H)，7.18(d，J＝3.7Hz，1H)，6.69(d，J＝3.7Hz，1H)，4.90(s，2H)，3.73(dd，J＝11.1，8.1Hz，2H)，3.59(s，2H)，3.49-3.40(m，3H)，3.01(s，3H)，2.31(s，6H)，2.27(t，J＝8.9Hz，2H)，2.00(dd，J＝13.6，7.7Hz，3H).
实施例55
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1h-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-((二甲胺基)甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H55
采用与实施例54相同的制备方法，以20e为原料，可得到化合物H55。
MS m/z(ESI)：452(M+H)+
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.03(s，1H)，7.13(d，J＝3.7Hz，1H)，6.70(d，J＝3.6Hz，1H)，4.90-4.75(m，1H)，3.75(dd，J＝11.0，8.1Hz，2H)，3.60(s，2H)，3.50-3.45(m，2H)，3.04(s，2H)，2.32(s，6H)，2.20-2.06(m，4H).
实施例56
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)-N-(3-甲氧基甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H56
采用与实施例7相同的制备方法，以3-(甲氧基甲基)-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H56。
MS m/z(ESI)：453(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，11.61(s，1H)，8.12(s，1H)，7.23(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.62(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.71(q，J＝8.0Hz，1H)，4.41(s，2H)，3.65(m，2H)，3.37(m，2H)，3.28(s，3H)，3.17(s，3H)，2.85(s，2H)，2.12(dt，J＝13.4，8.4Hz，2H)，1.84(dd，J＝13.3，7.5Hz，2H).
实施例57
(3aR，5s，6aS)-5-((5-氰基-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(3-甲氧基甲基)-1，2，4-噻二唑-5-基)六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-甲酰胺H57
采用与实施例20相同的制备方法，以3-(甲氧基甲基)-5-氨基-1，2，4-噻二唑为原料，可得到化合物H57。
MS m/z(ESI)：439(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.74(s，1H)，11.63(s，1H)，8.02(d，J＝2.1Hz，1H)，7.21-7.13(m，1H)，6.79(d，J＝7.8Hz，1H)，6.72(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.72(q，J＝6.8Hz，1H)，4.41(s，2H)，3.70-3.64(m，2H)，3.38-3.30(m，2H)，3.28(s，3H)，2.92-2.85(m，2H)，1.99-1.92(m，4H).
实施例58
N-(-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺H58
第一步苯甲基环戊-3-烯-1-基氨基甲酸酯58b
将化合物58a(5g，41.6mmol)和三乙胺(12.6g，124.8mmol)溶于DCM中，在冰浴下慢慢加入CBZ-Cl(7.8g，45.8mmol)，该混合物在室温下搅拌2小时，加水淬灭，用DCM萃取，有机相用水洗，干燥，浓缩，粗品用柱层析纯化(PE∶EA＝3.∶1)得到M∶MeOH＝10∶1)得到化合物58b(4g)，呈白色固体，收率44％
MS m/z(ESI)：218(M+H)+
第二步苯甲基(6-氧杂二环[3.1.0]己烷-3-基)氨基甲酸酯58c
将化合物58b(2g，9.2mmol)溶于DCM(60mL)中，在室温下分批加入m-CPBA(2.3g，13.8mmol)，该混合物在室温搅拌2小时，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液洗，用硫代硫酸钠溶液洗，有机相分离，水相用DCM萃取，合并有机相，干燥，浓缩，粗品58c直接用于下一步反应。
第三步苯甲基((3R，4R)-3-乙基-4-氢氧环戊基)氨基甲酸酯58d
将化合物58c(2g，8.5mmol)和CuBr-DMS(17mg，0.085mmol)溶于无水THF中，在-60℃和氮气保护下慢慢滴加乙基溴化镁(21ml，42.5mmol)，保持反应温度低于-50℃并搅拌2小时。将冷的反应混合物加入到饱和氯化铵溶液中淬灭。用EA萃取，有机相用水洗，干燥，浓缩，粗品用柱层析纯化(PE∶EA＝2∶1)得到58d(1.9g)，淡黄色固体。收率84％。
第四步苯甲基((3S，4R)-3-(1，3-二氧异吲哚啉酮-2-基)-4-乙基环戊基)氨基甲酸酯58e
将化合物58d(1.9g，7.2mmol)，邻苯二甲酰亚胺(1.27g，8.6mmol)和三苯基磷(2.25g，8.6mmol)溶于无水THF中，在冰浴下慢慢加入DIAD(1.7g，8.6mmol)，然后升至室温继续搅拌4小时，加入水淬灭，用EA萃取，有机相水洗，干燥，浓缩，粗品用柱层析纯化(PE∶EA＝1∶1)得到58e(2.8g)呈白色固体。收率，98％。
第五步苯甲基((3S，4R)-3-氨基-4-乙基环戊基)氨基甲酸酯58f
将化合物58e(3g，7.6mmol)溶于乙醇中，加入水合肼(2.4g，76mmol)，该反应混合物在回流下搅拌2小时，冷却，过滤，滤液浓缩，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝10∶1)得到58f(1g)呈无色油状物。收率，50％。
第六步苯甲基((3S，4R)-3-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)氨基甲酸酯58g
将58f(1g，2.8mmol)和I-1(0.96g，3mmol)溶于NMP中，加入DIPEA(1.5g，11.4mmol)，该混合物在75℃搅拌2小时，冷却后倒入水中，用EA萃取，有机相用水洗三次，干燥，浓缩，粗品用柱层析纯化(PE∶EA＝1∶1)得到58g(1.2g)呈淡黄色固体，收率，73％。
第七步4-(((1S，2R)-4-氨基-2-乙基环戊基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈58h
将化合物58g(1.2g，2.2mmol)溶于HBr的乙酸溶液中，该混合物在室温搅拌2小时，混合物浓缩，粗品58h直接用于下一步反应。
第八步N-((3S，4R)-3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺58i
将58h(100mg，0.24mmol)和三乙胺(72mg，0.72mmol)溶于THF中，慢慢加入苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰氯化(64mg，0.29mmol)。该混合物在室温搅拌2小时，加水淬灭，用EA萃取，有机相水洗，干燥，浓缩，粗品用柱层析纯化得到58i(40mg)呈淡黄色固体，收率，28％
第九步N-((3S，4R)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)苯并[c][1，2，5]噁二唑-4-磺酰胺H58
将58i(40mg，0.06mmol)和碳酸钾(41mg，0.3mmol)溶于甲醇中，室温搅拌1小时，过滤，滤液浓缩，粗品用柱层析纯化(DCM∶MeOH＝10∶1)得到H58(18.3mg)淡黄色固体，收率67％
MS m/z(ESI)：452(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.75(s，1H)，8.44(s，1H)，8.32(d，J＝9.1Hz，1H)，8.06(dd，J＝6.7，0.7Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.73(dd，J＝9.1，6.8Hz，1H)，7.19(d，J＝3.5Hz，1H)，6.69(d，J＝3.5Hz，1H)，6.37(d，J＝9.1Hz，1H)，4.67(p，J＝7.4Hz，1H)，3.94(s，1H)，2.10-1.96(m，2H)，1.87-1.76(m，1H)，1.65-1.56(m，2H)，1.32-1.14(m，1H)，1.10-1.02(m，1H)，0.63(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例59
N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)-4，4，4-三氟丁酰胺H59
采用与实施例58相同的制备方法，以4，4，4-三氟丁酰氯为原料，可得到化合物H59。
MS m/z(ESI)：394(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.77(s，1H)，8.11(d，J＝7.1Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.23-7.17(m，1H)，6.79(s，1H)，6.47(d，J＝9.3Hz，1H)，4.81-4.71(m，1H)，4.25-4.15(m，1H)，2.48-2.30(m，4H)，2.16(dt，J＝13.8，7.3Hz，2H)，1.86(ddt，J＝38.3，15.4，7.0Hz，2H)，1.67(dq，J＝12.1，6.9，5.5Hz，1H)，1.37(dt，J＝13.2，6.2Hz，1H)，1.20(t，J＝8.4Hz，1H)，0.77(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例60
N-(3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺H60
采用与实施例58相同的制备方法，以3-三氟甲基苯磺酰氯为原料，可得到化合物H60。
MS m/z(ESI)：478(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.75(s，1H)，8.13-8.05(m，3H)，8.02(d，J＝8.9Hz，2H)，7.84(t，J＝7.8Hz，1H)，7.19(t，J＝3.0Hz，1H)，6.71(dd，J＝3.6，1.9Hz，1H)，6.43(d，J＝9.1Hz，1H)，4.69(q，J＝7.6Hz，1H)，3.73(d，J＝6.5Hz，1H)，2.12(q，J＝7.5Hz，1H)，1.99(dt，J＝13.6，6.9Hz，1H)，1.89-1.77(m，1H)，1.64-1.55(m，2H)，1.33-1.19(m，1H)，1.07(m，1H)，0.65(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例61
1-((3S，4R)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基环戊基)-3-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-基)脲H61
采用与实施例58相同的制备方法，以7h为原料，可得到化合物H61。
MS m/z(ESI)：427(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.78(s，1H)，11.05(s，1H)，8.04(s，1H)，7.21(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，7.06(s，1H)，6.79(dd，J＝3.7，2.0Hz，1H)，6.51(s，1H)，4.78(p，J＝7.2Hz，1H)，4.24-4.15(m，1H)，3.84(s，3H)，2.22(dt，J＝13.9，7.2Hz，2H)，1.99(ddd，J＝13.0，7.4，4.6Hz，1H)，1.88(dt，J＝13.3，7.7Hz，1H)，1.74(ddd，J＝12.6，7.4，4.4Hz，1H)，1.44-1.29(m，1H)，1.25-1.12(m，1H)，0.78(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例62
4-((4-((((3-羟基-3-甲基吡咯烷-1-基)磺酰基)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H62
第一步(反式-4-(甲氨基)环己基)甲醇62b
将化合物62a(1.0g，4.36mmol)分批加入到LiAlH4(1.0M in THF，5ml)中，反应液逐渐升温到75℃保持搅拌5小时。反应液冷却至室温后，在冰浴条件下向反应液中加入乙酸乙酯(200ml)稀释反应液。NaOH(10％w，5ml)滴加至上述反应液中，过滤。滤饼用乙酸乙酯(100ml*2)洗涤两遍。有机相浓缩拉干后得到白色固体化合物62b 700mg，收率70％。
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ3.42(d，J＝6.3Hz，2H)，2.40(d，J＝l.6Hz，3H)，2.28(tt，J＝10.8，3.9Hz，1H)，1.97(dt，J＝10.2，2.4Hz，2H)，1.84-1.70(m，4H)，1.44(dddd，J＝11.4，8.2，5.8，3.3Hz，1H)，1.08-0.94(m，4H).
第二步反式-4-(((4-(羟甲基)环己基)(甲基)氨基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈62c
将62b(310mg，2.1mmol)，Int-1(450mg，1.41mmol)，DIPEA(550mg，5.2mmol)，DMF(5ml)依次加入到50ml单口瓶中，氮气保护下逐渐升温至90℃反应5小时。TLC(PE/EA＝3∶1)显示原料有少量未反应完全。反应液冷却至室温后，乙酸乙酯(100ml)和水(50ml)加入到反应液中，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液旋干得到黄色油状物。粗品经硅胶柱(PE/EA＝10∶1-1∶1)分离得到黄色固体化合物62c 420mg，收率：70％。
MS(ESI)m/z：425.2(M+H+)
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ8.31(s，1H)，8.19-8.13(m，2H)，7.62-7.56(m，2H)，7.49(dd，J＝8.5，7.1Hz，2H)，6.63(d，J＝4.2Hz，1H)，3.94(t，J＝11.7Hz，1H)，3.48(d，J＝6.2Hz，2H)，3.20(s，3H)，1.95(d，J＝11.5Hz，4H)，1.74(q，J＝11.4Hz，2H)，1.53-1.44(m，1H)，1.15(q，J＝11.6Hz，2H).
第三步反式-(4-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环己基)4-甲基苯磺酸甲酯62d
室温条件，将化合物62c(420mg，1.0mmol)，三乙胺(150mmol，1.5mmol)，二氯甲烷，(10ml)TosCl(280mg，1.5mmol)依次加入到25ml单口瓶中，搅拌反应过夜。TLC(PE/EA＝3∶1)点板原料反应完全。向反应液中加入乙酸乙酯(100ml)和水(50ml)，有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液旋干得到粗品。粗品经制备板(PE/EA＝2∶1)分离得到白色固体化合物62d 500mg.收率：86％。
MS(ESI)m/z：396.2(M+H+).
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ8.29(s，1H)，8.18-8.13(m，2H)，7.78-7.73(m，2H)，7.59(dd，J＝8.4，5.8Hz，2H)，7.49(t，J＝7.7Hz，2H)，7.33(d，J＝8.1Hz，2H)，6.60(d，J＝4.1Hz，1H)，3.88(s，1H)，3.81(d，J＝6.4Hz，2H)，3.16(s，3H)，2.44(s，3H)，1.90(t，J＝14.5Hz，4H)，1.67(s，3H)，1.17-1.05(m，2H).
第四步反式-((4-((5-氰基-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环己基)甲基)乙硫醇酸酯62e
将化合物62d(500mg，O.86mmol)，硫代乙酸钾(200mg，1.73mmol)，DMF(5ml)依次加入到50ml单口瓶中，反应液逐渐升温至60℃搅拌2小时。TLC(PE/EA＝3∶1)显示原料反应完全。向反应液中加入乙酸乙酯(100ml)和水(50ml)，有机相经饱和氯化钠溶液洗涤一遍，无水硫酸钠干燥，滤液浓缩得到白色固体化合物62e 350mg，收率：84％。
LCMS(ESI-MS)m/z：483.3(M+H+).
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ8.30(s，1H)，8.16(d，J＝7.7Hz，2H)，7.59(dd，J＝9.2，5.7Hz，2H)，7.49(t，J＝7.7Hz，2H)，6.61(d，J＝4.1Hz，1H)，3.92(s，1H)，3.16(s，3H)，2.79(d，J＝6.6Hz，2H)，2.32(d，J＝0.8Hz，3H)，1.94(t，J＝16.3Hz，4H)，1.68(d，J＝11.7Hz，3H)，1.16(q，J＝12.1Hz，2H).
第五步反式-(4-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环己基)甲磺酸62f
冰浴条件下，将化合物62e(250mg，0.51mmol)溶解在甲酸(3.0ml)中，将过氧化氢溶液(30％aq，0.5ml)滴加至上述反应液中。反应液保持在室温条件下搅拌反应过夜。LCMS显示有少量原料剩余。冰浴调价下，将饱和亚硫酸钠溶液(20ml)缓慢滴加到反应液中淬灭反应。淀粉KI试纸检测过氧化氢被完全淬灭。向反应液中加入(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，50ml*4)，有机相浓缩至干得到粗品。粗品经硅胶柱分离(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1-8∶1)得到白色固体化合物62f 200mg，收率：80％。
MS(ESI)m/z：489.2(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.24(s，1H)，8.08-8.01(m，2H)，7.76-7.67(m，2H)，7.64-7.57(m，2H)，6.86(d，J＝4.2Hz，1H)，3.89-3.79(m，1H)，3.13(s，3H)，2.28(d，J＝6.2Hz，2H)，2.03(d，J＝13.0Hz，2H)，1.72(q，J＝6.3Hz，5H)，1.07-0.94(m，2H).
第六步反式-(4-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)(甲基)氨基)环己基)甲磺酰氯62g
将化合物62f(200mg，0.4mmol)分散在二氯甲烷(30ml)中，将氯化亚砜(1.0ml，13.4mmol)加入到上述反应液中，再滴加一滴DMF。反应液在氮气保护下回流反应2小时。LCMS显示基本反应完全。反应液不经纯化，直接在冰浴条件下，用饱和碳酸氢钠溶液调节至PH＝8，得62g粗品，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI-MS)m/z：507.2(M+H+)
第七步反式-4-((4-((((3-羟基-3-甲基吡咯烷-1-基)磺酰基)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-腈62h
冰浴条件下，向化合物Int-2(202.2mg，2.0mmol)的THF溶液中加入Et3N(303.3mg，3.0mmol)，然后滴加62g(0.4mmol)。反应液保持冰浴反应1h。LCMS显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷(50ml)和水(20ml)，有机相干燥后浓缩得到黄色化合物62h 100mg，收率：44％。
LCMS(ESI-MS)m/z：572.3(M+H+)
第八步4-((反式-4-((((3-羟基-3-甲基吡咯烷-1-基)磺酰基)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H62
将化合物62h(100mg，0.2mmol)溶解在甲醇(3ml)，再加入NaOH(200uL，0.6mmol，4Min water)，反应液保持室温搅拌2小时。TLC(DCM/MeOH＝15∶1)硅胶制备板分离得到白色固体化合物H62 21mg，收率：24％。
MS(ESI)m/z：432.3(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(s，1H)，8.10(s，1H)，7.28(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.56(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.83(s，1H)，3.93(q，J＝6.4，5.6Hz，1H)，δ3.34(dd，J＝10.0，7.6Hz，1H)，3.29-3.24(m，1H)，3.20-3.03(m，5H)，3.00-2.85(m，2H)，2.06-1.90(m，3H)，1.88-1.68(m，8H)，1.24(s，3H).
实施例63
反式-4-(甲基((1r，4r)-4-(((4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基)甲基)环己基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H63
采用与实施例62相同的制备方法，以N-甲基哌嗪为原料，可得到化合物H63。
MS(ESI)m/z：431.3(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.98(s，1H)，8.20(s，1H)，7.38(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.66(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.06-3.96(m，1H)，3.26(s，3H)，3.20(t，J＝4.9Hz，4H)，3.01(d，J＝6.4Hz，2H)，2.44(t，J＝4.7Hz，4H)，2.27(s，3H)，2.10(d，J＝13.0Hz，2H)，1.99-1.87(m，5H)，1.39-1.24(m，2H).
实施例64
反式-4-((4-(((3-(2-甲氧基乙氧基)哌啶-1-基)磺酰基)甲基)环己基)(甲基)氨基-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈H64
采用与实施例62相同的制备方法，以3-(2-甲氧基乙氧基)哌啶为原料，可得到化合物H64。
MS m/z(ESI)：490[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(s，1H)，8.10(s，1H)，7.32-7.25(m，1H)，6.56(dd，J＝3.5，2.0Hz，1H)，3.95-3.87(m，1H)，3.57-3.16(m，13H)，3.10-2.85(m，4H)，2.06-1.97(m，2H)，1.89-1.74(m，6H)，1.72-1.65(m，1H)，1.43-1.34(m，2H)，1.27-1.20(m，2H).
实施例65
4-((反式-4-(((3-异丁氧基哌啶-1-基)磺酰基)甲基)环己基)(甲基)氨基-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-乙腈H65
采用与实施例62相同的制备方法，以3-(2-甲基丙氧基)哌啶为原料，可得到化合物H65。
MS m/z(ESI)：488[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(s，1H)，8.11(s，1H)，7.31-7.25(m，1H)，6.59-6.52(m，1H)，3.95-3.87(m，1H)，3.45-3.38(m，1H)，3.34-3.29(m，1H)，3.27-3.18(m，2H)，3.18-3.11(m，4H)，2.99-2.80(m，4H)，2.04-1.96(m，2H)，1.91-1.74(m，6H)，1.75-1.66(m，2H)，1.44-1.33(m，2H)，1.27-1.20(m，2H)，0.82(s，6H).
实施例66
4-((反式-4-(((反式-3-(羟甲基)-4-甲基吡咯烷-1-基)磺酰)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H66
采用与实施例62相同的制备方法，以反式-3-(羟基甲基)-4-甲基吡咯烷为原料，可得到化合物H66。
MS(ESI)m/z：446(M+H)+.
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(s，1H)，8.10(s，1H)，7.28(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.56(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.64(t，J＝5.2Hz，1H)，3.95-3.87(m，1H)，3.49-3.40(m，2H)，3.40-3.30(m，2H)，3.16(s，3H)，3.03(dd，J＝9.9，8.1Hz，1H)，2.94(d，J＝6.4Hz，2H)，2.78(dd，J＝9.6，8.6Hz，1H)，2.06-1.95(m，3H)，1.89-1.73(m，6H)，1.29-1.20(m，2H)，0.95(d，J＝6.5Hz，3H).
实施例67
4-(甲基-(反式-4-(((3-((甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)甲基)环己基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H67
第一步4-(甲基(反式-4-(((3-((N-Boc-甲基氨基)甲基)吡咯烷基-1-基)磺酰基)甲基)环己基)氨基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-腈67a
冰浴条件下，向化合物3-((N-Boc-甲基氨基)甲基)吡咯烷(214.2mg，1.0mmol)的THF溶液中加入DIEA(387.9mg，3.0mmol)，然后滴加62a(0.4mmol)。自然升至室温反应过夜。LCMS显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷(50ml)和水(20ml)，有机相干燥后浓缩得到黄色化合物67a 200mg，收率：73％。
MS(ESI)m/z：685.4(M+H+)
第二步4-(甲基(反式-4-(((3-((甲基氨基)甲基)吡咯烷基-1-1-基)磺酰基)甲基)环己基)氨基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-腈67b
将化合物67a(200mg，0.3mmol)溶解在二氯甲烷(3ml)中，再加入TFA(100uL，1.2mmo)，反应液保持室温搅拌1小时。直接浓缩得化合物67b粗品150mg，直接进行下一步反应，收率：86％。
第三步4-(甲基(反式-4-(((3-((甲基氨基)甲基)甲基)吡咯烷丁-1-基)磺酰基)甲基)环己基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H67
将化合物67b(150mg，0.2mmol)溶解在甲醇(3ml)，再加入NaOH(200uL，0.6mmol，4Min water)，反应液保持室温搅拌2小时。TLC(DCM/MeOH＝15∶1)硅胶制备板分离得到白色固体化合物H67 30mg，收率：34％。
MS(ESI)m/z：445.3(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.89(s，1H)，8.10(s，1H)，7.28(d，J＝3.6Hz，1H)，6.56(d，J＝3.7Hz，1H)，4.02-3.79(m，1H)，3.35-3.16(m，7H)，2.98-2.93(m，2H)，2.60-2.50(m，2H)，2.35(d，J＝7.2Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.06-1.98(m，2H)，1.97-1.90(m，1H)，1.87-1.73(m，5H)，1.56(dq，J＝12.4，8.1Hz，1H)，1.21(d，J＝13.3Hz，3H).
实施例68
4-((反式-4-(((3-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)磺酰)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H68
采用与实施例62相同的制备方法，以3-(甲氧基甲基)吡咯烷为原料，可得到化合物H68。
MS(ESI-MS)m/z：446(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(s，1H)，8.10(s，1H)，7.38-7.21(m，1H)，6.56(s，1H)，3.92(s，1H)，3.51-3.10(m，12H)，2.93(dd，J＝11.2，6.8Hz，2H)，2.46(s，2H)，2.11-1.71(m，6H)，1.57(dd，J＝12.8，7.5Hz，1H)，1.32-1.20(m，3H).
实施例69
4-((反式-4-(((3-(羟基甲基)吡咯烷-1-基)磺酰)甲基)环己基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H69
采用与实施例62相同的制备方法，以3-(羟基甲基)吡咯烷为原料，可得到化合物H69。
MS(ESI)m/z：432(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，8.14(s，1H)，7.32(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.60(dd，J＝3.7，2.0Hz，1H)，4.73(t，J＝5.3Hz，1H)，3.95(dt，J＝10.1，4.7Hz，1H)，3.44-3.21(m，8H)，3.08-2.91(m，3H)，2.32(p，J＝7.0Hz，1H)，2.14-1.98(m，2H)，1.88(dddd，J＝24.3，10.4，7.5，2.8Hz，5H)，1.63(dt，J＝12.4，7.7Hz，1H)，1.46-1.09(m，3H).
实施例70
4-((顺式-(3-(((3-(2-甲氧基乙氧基)哌啶-1-基)磺酰基)甲基)环戊基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H70
采用与实施例64相同的制备方法，以顺式-3-(甲基氨基)-环戊基-甲醇为原料，可得到化合物H70。
MS m/z(ESI)：476[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.91(s，1H)，8.12(s，1H)，7.33-7.27(m，1H)，6.67-6.60(m，1H)，4.65-4.49(m，1H)，3.58-3.15(m，15H)，2.99-2.82(m，2H)，2.30-2.10(m，2H)，2.01-1.76(m，4H)，1.76-1.59(m，2H)，1.59-1.33(m，3H).
实施例71
4-((顺式-3-(((3-(羟甲基)吡咯烷-1-基)磺酰)甲基)环戊基)(甲基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H71
采用与实施例70相同的制备方法，以3-(羟基甲基)吡咯烷为原料，可得到化合物H71。
MS(ESI)m/z：418
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.12(s，1H)，7.30(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，6.64(dd，J＝3.6，1.8Hz，1H)，4.69(t，J＝5.3Hz，1H)，4.57(p，J＝7.6Hz，1H)，3.41-3.17(m，10H)，2.97(dd，J＝9.8，6.8Hz，1H)，2.29-2.17(m，3H)，1.98-1.78(m，3H)，1.74-1.44(m，3H).
实施例72
(R)-7-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羧酰胺H72
采用与实施例2相同的制备方法，以(R)-(5-氮杂螺[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯为原料，可得到化合物H72。
MS m/z(ESI)：379[M+1]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.85(s，1H)，8.09(s，1H)，7.27(dd，J＝3.6，2.5Hz，1H)，6.89(t，J＝6.3Hz，1H)，6.82(dd，J＝3.5，2.0Hz，1H)，6.71(d，J＝7.6Hz，1H)，4.45(s，1H)，3.84-3.68(m，4H)，3.63(dd，J＝10.9，2.9Hz，1H)，3.21(d，J＝10.2Hz，1H)，0.87(dd，J＝9.2，4.5Hz，1H)，0.77(dd，J＝9.7，5.5Hz，1H)，0.69(d，J＝6.3Hz，2H).
实施例73
(顺式)-3-异丙基-4-(咪唑并[4，5-d]吡咯并[2，3-b]吡啶-1(6H)-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-羧酰胺H73
第一步 6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-羧酸苄酯73b
73a(17g，83.6mmol)溶于120mL二氯甲烷中，冰浴下分批加入m-CPBA(29.4g，167.2mmol)，室温反应过夜。反应完毕，过滤，收集滤液，向滤液中加入亚硫酸氢钠水溶液，搅拌半小时，EA萃取，PE∶EA＝10∶1柱层析分离得73b 10g，收率56％。
MS(ESI)m/z：242(M+Na+).
第二步(反式)-3-异丙基-4-羟基吡咯烷-1-羧酸苄酯73c
将73b(2.19g，10.0mmol)溶于20mL无水THF中，加入CuBr(150mg，1.0mmol)，氢气置换3次，然后于乙酸乙酯干冰浴下滴加环丙基溴化镁(30mL，90mmol，3M in THF)，自然升至室温反应过夜。反应完毕，加氯化铵水溶液淬灭，EA萃取，PE∶EA＝3∶1柱层析分离得73c1.6g收率60％。
MS(ESI)m/z：264(M+H+).
第三步(顺式)-3-异丙基-4-(1，3-二氧异吲哚-2-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯73d
将化合物73c(1.6g，6.08mmol)溶于10mL无水四氢呋喃中，加入PPh3(1.91g，7.3mmol)以及邻苯二甲酰亚胺(1.07g，7.3mmol)，氮气置换三次，冰浴下滴加DIAD(1.91g，.7.3mmol)，自然升至室温反应过夜。反应完毕，加水，EA萃取，收集有机相，PE∶EA＝3∶1柱层析分离，得73d 3.0g粗品。
MS(ESI-MS)m/z：393(M+H+).
第四步(顺式)-3-氨基-4-异丙基吡咯烷-1-羧酸苄酯73e
将73d(3.g，粗品)溶于10mL乙醇中，加入水合肼(979.2mg，30.6mmol)，加热至80℃反应2小时。反应完毕，加饱和NaCl水溶液，DCM萃取，收集有机相，DCM∶MeOH＝95∶5柱层析分离得73e 1.2g。
MS(ESI)m/z：263(M+H+).
第五步(顺式)-3-异丙基-4-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酸苄酯73f
将73e(496g，1.89mmol)溶于5mL NMP中，加入Int-1(300mg，0.94mmol)和DIEA(364mg，2.82mmol)，加热至130℃ 3小时。反应完毕，加水洗NMP，DCM萃取，DCM∶MeOH＝98∶2柱层析得73f 100mg粗品。
MS(ESI)m/z：544(M+H+).
第六步 4-(((顺式)-4-异丙基吡咯烷-3-基)氨基)-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈73g
将73f(100mg，粗品)溶于5mL二氯甲烷中，加入溴化氢的冰醋酸溶液(1ml)，室温搅拌反应2小时。反应完毕，拌硅胶，柱层析DCM∶MeOH＝10∶1得73g 50mg油状物。
MS(ESI)m/z：410(M+H+).
第七步(顺式)-3-((5-氰基-1-(苯磺酰)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-异丙基-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺73h
将73g(50mg，0.12mmol)溶于THF中，加入苯基(2，2，2三氟乙基1)氨基甲酸酯(50mg，0.122mmol)，碳酸钾(25mg，0.18mmol)回流反应4小时，反应完毕直接用于下一步
MS(ESI)m/z：535(M+H+)
第八步(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-异丙基-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-甲酰胺H73
将73h(50mg，0.09mmol)溶于2mL甲醇中，加入2N氢氧化钠(2mL)，室温反应1小时。反应完毕，用EA萃取，有机相旋干，浓缩，爬大板(DCM∶MeOH＝15∶1)得H73(20mg)。
MS(ESI)m/z：395(M+H+).
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.10(s，1H)，7.23(d，J＝3.7Hz，1H)，6.73(d，J＝3.7Hz，1H)，3.87-3.66(m，5H)，3.42(t，J＝10.9Hz，1H)，3.33(s，1H)，2.30(d，J＝23.2Hz，1H)，1.94-1.81(m，1H)，1.03(d，J＝6.5Hz，3H)，0.93(d，J＝6.5Hz，3H).
实施例74
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-环丙基-N-异丁基吡咯烷-1-甲酰胺H74
采用与实施例73相同的制备方法，以环丙基氯化镁为原料，可得到化合物H74。
MS(ESI)m/z：393(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.83(s，1H)，8.09(s，1H)，7.25(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，6.89-6.79(m，2H)，6.62(d，J＝8.7Hz，1H)，4.87(q，J＝6.6，6.1Hz，1H)，3.82-3.65(m，3H)，3.54-3.42(m，3H)，1.80(p，J＝6.8Hz，1H)，0.81(tq，J＝9.5，5.1，4.6Hz，1H)，0.38(ddt，J＝22.2，8.3，4.2Hz，2H)，0.18-0.04(m，2H).
实施例75
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-异丙基吡咯烷-1-甲酰胺H75
第一步(顺式)-N-苄氧羰基-4-乙基吡咯烷-3-氨基75a
2b(184mg，0.53mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入2mL TFA。加毕，室温搅拌半小时，反应完毕，旋干溶剂，即得75a粗品，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z：249(M+H+).
第二步(顺式)-3-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基吡咯烷-1-甲酸苄酯75b
将75a(0.53mmol)溶于5mL NMP中，加入I-1(168mg，0.53mmol)。加毕，100℃搅拌2小时，LCMS监测反应。反应完毕，DCM/H2O分层，收集DCM层，干燥，过滤，TLC制备分离，PE/EA＝4/1展开。得目标化合物75b(175mg)，白色固体，两步收率63％。
MS(ESI)m/z：530(M+H+).
第三步(顺式)-4-((4-乙基吡咯烷-3-基)-氨基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-5-甲腈75c
将化合物75b(175mg，0.33mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入5mL HBr(in aceticacid)。加毕，室温搅拌半小时，反应完毕，旋干溶剂，加乙腈-水冻干，即得75c，直接用于下一步。
MS(ESI)m/z：396(M+H+).
第四步(顺式)-4-((4-乙基吡咯烷-3-基)-氨基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]吡啶-5-甲腈75d
将75c(80mg)溶于5mL 1，4-Dioxane中，加入异丙基异氰酸酯(20mg)及0.5mLDIPEA，在100℃反应1小时。反应完毕，旋干溶剂，TLC制备分离，DCM/MeOH＝20/1展开，得目标化合物75d(60mg)，无色胶状物，收率62％。
LCMS(ESI-MS)m/z：481.3(M+H+).
第五步(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-异丙基吡咯烷-1-甲酰胺H75
将75d(60mg，0.125mmol)溶于5mL甲醇中，加入2mL氢氧化钠溶液，于室温搅拌1小时。反应完毕，二氯甲烷与水分层，二氯甲烷层干燥后，旋干溶剂，制备分离，得目标化合物H75(38mg)，白色固体，收率62％。
MS(ESI)m/z：341(M+H+).
1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝11.82(s，1H)，8.08(s，1H)，7.24(s，1H)，8.82(s，1H)，6.49-6.51(m，1H)，5.80-5.82(d，J＝7.6Hz，1H)，4.77-4.79(m，1H)，3.67-3.76(m，1H)，3.59-3.52(m，3H)，3.22-3.27(t，J＝10Hz，1H)，2.32-2.37(m，1H)，1.44-1.50(m，1H)，1.30-1.38(m，1H)，1.02(s，3H)，1.01(s，3H)，0.80-0.83(t，J＝7.6Hz，3H).
实施例76
4-(((顺式)-4-乙基-1-((3，3，3-三氟丙基)磺酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈H76
采用与实施例75相同的制备方法，以3，3，3-三氟丙磺酰氯为原料，可得到化合物H76。
MS m/z(ESI)：416[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.12(s，1H)，7.28-7.19(m，1H)，6.65-6.59(m，1H)，6.56-6.44(m，1H)，4.73-4.64(m，1H)，3.67-3.23(m，6H)，2.72-2.60(m，2H)，2.51-2.37(m，1H)，1.60-1.22(m，2H)，0.88-0.78(t，3H).
实施例77
4-(((顺式)-4-乙基-1-(4，4，4-三氟丁基酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈H77
第一步 4-(((顺式)-4-乙基-1(4，4，4-三氟丁酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-乙腈77a
在反应瓶中加入化合物75c(100mg，0.25mmol)，化合物4，4，4-三氟丁酸(36mg，0.25mmol)，EDCI(48mg，0.25mmol)，HOBT(34mg，0.25mmol)，DIPEA(65mg，0.50mmol)和DCM(20mL)。体系在室温下反应2h。反应完成后，直接浓缩后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物77a(100mg，0.19mmol)，收率为76.0％。
MS m/z(ESI)：520[M+H]+。
第二步：4-(((顺式)-4-乙基-1(4，4，4-三氟丁酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-乙腈H77
在反应瓶中加入化合物75a(100mg，0.19mmol)，2M氢氧化钠溶液(2mL)和甲醇(5mL)，体系在室温下搅拌1小时。TLC监测反应完成，用稀盐酸调价pH值至8-10，浓缩，后过柱纯化(v/v，DCM/MeOH＝100∶1-50∶1)得到化合物H77(50mg，0.13mmol)，收率为68.4％。
MS m/z(ESI)：380[M+H]+。
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ11.87(d，J＝7.0Hz，1H)，8.12(s，1H)，7.31-7.24(m，1H)，6.83(d，J＝26.2Hz，1H)，6.57(dd，J＝74.5，8.9Hz，1H)，4.99-4.76(m，1H)，3.92-3.38(m，4H)，2.64-2.30(m，5H)，1.58-1.25(m，2H)，0.83(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例78
4-((4-乙基-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈H78
采用与实施例77相同的制备方法，以2-氰基乙酸为原料，可得到化合物H78。
MS m/z(ESI)：323[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.91-11.79(m，1H)，8.08(d，J＝6.8Hz，1H)，7.28-7.22(m，1H)，6.84-6.75(m，1H)，6.66-6.50(m，1H)，4.94-4.77(m，1H)，4.01-3.83(m，2H)，3.68-3.56(m，2H)，3.49-3.30(m，2H)，2.49-2.31(m，1H)，1.64-1.23(m，2H)，0.90-0.76(m，3H).
实施例79
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-异丁基吡咯烷-1-甲酰胺H79
采用与实施例75相同的制备方法，以异丁基异氰酸酯为原料，可得到化合物H79。
LCMS(ESI-MS)m/z：502.1(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.82(s，1H)，8.07(d，J＝6.7Hz，1H)，7.23(td，J＝3.5，2.5Hz，1H)，6.92-6.75(m，2H)，6.14(t，J＝5.8Hz，1H)，4.44(p，J＝7.6Hz，1H)，3.76(dd，J＝10.3，7.1Hz，1H)，3.64-3.54(m，1H)，3.54-3.42(m，1H)，3.31-3.12(m，1H)，2.95(dd，J＝10.3，8.3Hz，1H)，2.79(t，J＝6.4Hz，2H)，2.30(s，1H)，1.72-1.40(m，2H)，1.40-1.18(m，1H)，0.91-0.75(m，9H).
实施例80
4-(((顺式)-4-乙基-1-(3-甲氧基-1，2，4-噻二唑-5-氨基羰基)吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯[2，3-b]并吡啶-5-甲腈H80
采用与实施例75相同的制备方法，以7h为原料，可得到化合物H80。
MS m/z(ESI)：413[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.84(s，1H)，11.63(s，1H)，8.08(s，1H)，7.29-7.21(m，1H)，6.85-6.78(m，1H)，6.77-6.67(m，1H)，4.99-4.82(m，1H)，3.86(s，3H)，3.77-3.61(m，2H)，3.58-3.30(m，2H)，2.41-2.27(m，1H)，1.62-1.26(m，2H)，0.82(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例81
4-(((顺式)-1-(3-氰基丙酰基)-4-乙基吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H81
采用与实施例77相同的制备方法，以3-氰基丙酸为原料，可得到化合物H81。
MS m/z(ESI)：337[M+1]+
1H NMR(400MHz，DMSO-dx)δ11.84(s，1H)，8.09(s，1H)，725(qd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，6.80(ddt，J＝15.9，4.6，2.3Hz，1H)，6.59(dd，J＝48.2，9.0Hz，1H)，4.85-4.75(m，1H)，3.75-3.51(m，3H)，2.75-2.25(m，4H)，1.59-1.27(m，2H)，0.84(ddt，J＝17.6，10.2，7.4Hz，3H).
实施例82
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(环丙基甲基)基吡咯烷-1-甲酰胺H82
采用与实施例75相同的制备方法，以环丙基甲基异氰酸酯为原料，可得到化合物H82。
MS(ESI)m/z：353(M+H)+.
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.83(s，1H)，8.07(d，J＝6.3Hz，1H)，7.23(q，J＝2.9Hz，1H)，6.47-6.92(m，2H)，6.22(t，J＝5.7Hz，1H)，4.83-4.37(m，1H)，3.85-3.39(m，3H)，3.27-3.13(m，1H)，2.99-2.82(m，2H)，2.41-2.27(m，1H)，1.61-1.42(m，1H)，1.40-1.26(m，1H)，1.20(d，J＝3.6Hz，1H)，0.88(q，J＝7.5Hz，2H)，0.82(t，J＝7.4Hz，2H)，0.41-0.24(m，2H)，0.21-0.04(m，2H).
实施例83
3-((5-氰基-1-H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(2，2，3，3，3-五氟丙基)-吡咯烷-1-羧酰胺H83
第一步 2，2，3，3，3-五氟丙基氨基甲酸苯酯83b
冰浴下，将氯甲酸苯酯(1.5g，9.6mmol)逐渐滴加到2，2，3，3，3-五氟丙氨(1g，6.7mmol)和三乙胺(2g，20mmol)的DCM(20mL)中，室温搅拌一小时后浓缩，DCM∶MeOH＝20∶1柱层析分离得83b 1.3g，收率72.0％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.50-7.41(m，1H)，7.38-7.28(m，2H)，7.26-7.16(m，2H)，7.10-7.04(m，1H)，3.42-3.32(m，1H)，3.27(d，J＝7.2Hz，1H).
第二步 3-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(2，2，3，3，3-五氟丙基)-吡咯烷-1-羧酰胺83c
将75c(200mg，0.51mmol)溶于10mL THF中，加入83b(1.4g，1.49mmol)以及DIEA(300mg，2.33mmol)，加热至60℃反应4小时。反应完毕，浓缩，TLC制备分离得83c 120mg收率41.6％。
MS(ESI)m/z：571(M+H)+.
第三步 3-((5-氰基-1-H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(2，2，3，3，3-五氟丙基)-吡咯烷-1-甲酰胺H83
将83c(120mg，0.21mmol)溶于5mL乙醇中，加入NaOH(2mL，6M in water)，室温反应1小时。反应完毕，加水(30mL)稀释，DCM(10mL*3)萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，TLC制备分离得H8335mg收率38.7％。
MS(ESI)m/z：431(M+H)+.
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.83(s，1H)，8.08(d，J＝6.2Hz，1H)，7.24(dd，J＝3.5，2.4Hz，1H)，6.55-6.77(m，3H)，4.42-4.85(m，1H)，3.90-3.75(m，2H)，3.64(dd，J＝10.9，5.6Hz，1H)，3.58-3.46(m，1H)，2.92-3.42(m，2H)，2.27-2.43(m，1H)，1.61-1.49(m，1H)，1.21-1.46(m，1H)，0.84(dt，J＝20.1，7.4Hz，3H).
实施例84
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-环丙基-4-乙基吡咯烷-1-甲酰胺H84
采用与实施例83相同的制备方法，以环丙基胺为原料，可得到化合物H84。
LCMS(ESI-MS)m/z：339.2(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.84(d，J＝5.4Hz，1H)，8.08(d，J＝6.3Hz，1H)，7.23(q，J＝3.1Hz，1H)，6.81(ddd，J＝13.1，3.6，2.0Hz，1H)，6.53(d，J＝8.8Hz，1H)，6.25(d，J＝2.6Hz，1H)，4.78(dtd，J＝8.8，5.7，2.8Hz，1H)，4.42(p，J＝7.5Hz，1H)，3.62-3.51(m，1H)，3.51-3.40(m，1H)，3.27-3.10(m，1H)，2.93(dd，J＝10.3，8.2Hz，1H)，2.40-2.19(m，1H)，1.61-1.41(m，1H)，1.38-1.24(m，1H)，0.83(dt，J＝20.5，7.4Hz，3H)，0.48(dt，J＝6.7，3.3Hz，2H)，0.38-0.30(m，2H).
实施例85
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-(3-甲基丁烷-2-基)吡咯烷-1-甲酰胺H85
采用与实施例83相同的制备方法，以3-甲基丁烷-2-基胺为原料，可得到化合物H85。
LCMS(ESI-MS)m/z：369(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.82(d，J＝7.0Hz，1H)，8.07(d，J＝7.1Hz，1H)，7.23(td，J＝3.5，2.4Hz，1H)，6.96-6.77(m，1H)，6.49(d，J＝13.5Hz，1H)，5.70(d，J＝8.5Hz，1H)，4.79(s，1H)，3.58(d，J＝16.5Hz，1H)，3.52-3.38(m，2H)，3.21(s，1H)，2.95(ddd，J＝21.9，10.3，8.6Hz，1H)，2.40-2.21(m，1H)，1.68-1.53(m，1H)，1.52-1.42(m，1H)，1.41-1.26(m，1H)，0.99-0.92(m，3H)，0.90-0.73(m，9H).
实施例86
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-4-乙基-N-新戊基-吡咯烷-1-甲酰胺H86
采用与实施例83相同的制备方法，以新戊基胺为原料，可得到化合物H86。
LCMS(ESI-MS)m/z：369.3(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.83(s，1H)，8.08(s，1H)，7.24(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，6.82(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，6.46(d，J＝8.7Hz，1H)，5.96(t，J＝6.3Hz，1H)，4.80(dt，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.61(dd，J＝10.9，5.7Hz，1H)，3.50(ddd，J＝10.9，9.6，5.4Hz，1H)，3.30-3.22(m，2H)，2.93-2.76(m，2H)，2.43-2.26(m，1H)，1.54-1.41(m，1H)，1.40-1.26(m，1H)，0.82(t，J＝7.4Hz，3H)，0.77(s，9H).
实施例87
3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2-二氟乙基)-4-乙基吡咯烷-1-甲酰胺H87
采用与实施例83相同的制备方法，以2，2-二氟乙基胺为原料，可得到化合物H87。
LCMS(ESI-MS)m/z：363.2(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.83(s，1H)，8.08(d，J＝5.8Hz，1H)，7.24(q，J＝2.6Hz，1H)，6.96-6.71(m，1H)，6.70-6.45(m，2H)，6.25-5.53(m，1H)，4.81(d，J＝7.5Hz，1H)，4.52-3.73(m，1H)，3.62(ddd，J＝9.8，6.6，3.4Hz，1H)，3.55-3.44(m，1H)，3.37(ddd，J＝14.3，11.4，6.6Hz，2H)，3.10(ddd，J＝85.1，10.3，7.5Hz，1H)，2.35(ddt，J＝22.3，14.6，7.5Hz，1H)，1.63-1.42(m，1H)，1.40-1.20(m，1H)，0.84(dt，J＝20.8，7.4Hz，3H).
实施例88
4-(((顺式)-1-(2-氰基乙基)-4-乙基吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H88
第一步 4-(((顺式)-1-(2-氰基乙基)-4-乙基吡咯烷-3-基)氨基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈88a
将化合物75c(110mg，0.28mmol，1.0eq)和丙烯腈(45mg，0.84mmol，3.0eq)，DIPEA(0.11g，0.84mmol，3.0eq)投于无水MeOH(10ml)中，室温反应2h。浓缩，flash柱纯化得无色油状物88a(99mg)。
MS m/z(ESI)：449[M+1]+
第二步 4-(((顺式)1-(2-氰基乙基)-4-乙基吡咯烷-3-基)氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈H88
将化合物88a(99mg，0.22mmol，1.0eq)溶于甲醇(4ml)和THF(4ml)混合溶剂中，加入2N NaOH(0.55ml，1.1mmol，5.0eq)，室温反应2h。将反应液直接拌样，flash柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝15∶1)得白色固体H88(36mg).
MS m/z(ESI)：309[M+1]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.78(s，1H)，8.04(s，1H)，7.20(dd，J＝3.5，2.4Hz，1H)，6.79-6.73(m，1H)，6.58(s，1H)，4.77(d，J＝7.9Hz，1H)，3.20(t，J＝8.1Hz，1H)，3.04(t，J＝8.0Hz，1H)，2.67(m，4H)，2.56-2.49(m，1H)，2.28(p，J＝7.9，7.5Hz，1H)，2.18(t，J＝8.8Hz，1H)，1.36-1.22(m，2H)，0.76(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例89
(顺式)-3-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2-二氟丙基)-4-乙基吡咯烷-1-甲酰胺H89
采用与实施例83相同的制备方法，以2，2-二氟丙基胺为原料，可得到化合物H89。
LCMS(ESI-MS)m/z：377.2(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.86(s，1H)，8.11(s，1H)，7.27(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，6.85(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，6.58(q，J＝6.1Hz，2H)，4.84(dq，J＝9.0，2.7Hz，1H)，3.66-3.32(m，6H)，2.40(q，J＝6.6Hz，1H)，1.53(m，4H)，1.38(ddd，J＝13.8，8.7，7.1Hz，1H)，0.85(t，J＝7.4Hz，3H).
实施例90
7-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲腈H90
第一步 7-((5-氰基-1-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡啶-2-腈90b
将化合物90a(290mg，1.8mmol，1.0eq)和化合物I-1(0.57g，1.8mmol，1.0eq)溶于NMP(5ml)中，加入DIPEA(1.2g，9.0mmol，5.0eq)，110℃反应4h，加入乙酸乙酯(30m1)稀释，用brine(20ml×4)洗涤，浓缩，flash柱纯化(DCM～DCM/MeOH＝10∶1)得黄色固体90b(20mg).
MS m/z(ESI)：444[M+H]+
第二步 7-((5-氰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲腈H90
将化合物90b(20mg，0.05mmol，1.0eq)溶于甲醇(5ml)和THF(5ml)混合溶剂中，加入2N NaOH(0.13ml，0.25mmol，5.0eq)，室温反应1h。减压蒸干，制备板纯化(DCM～DCM/MeOH＝15：1)得白色固体H90(5mg).
MS m/z(ESI)：304[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.84(s，1H)，8.05(d，J＝22.6Hz，2H)，7.24(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，6.99(d，J＝8.4Hz，1H)，6.74(dd，J＝3.6，2.0Hz，1H)，4.76-4.62(m，1H)，4.23-4.02(m，2H)，3.23-2.98(m，2H)，2.34-2.01(m，2H).
实施例91
(顺式)-3-环丙基-N-(2，2，2-三氟乙基)-4-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺H91
第一步(顺式)-3-环丙基-4-((1-(苯磺酰基)-5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酸苄酯91a
将74c(546.6mg，2.1mmol)溶于3mL 1，4-Dioxane中，加入1-苯磺酰基-4-氯-5-三氟甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(500mg，1.4mmol)和Cs2CO3(1.3g，4.2mmol)，以及X-PhOS(162mg，0.28mmol)，氮气置换三次，再加入醋酸钯(62.9mg，0.28mmol)，加热回流反应3小时。反应完毕，加水，EA萃取，收集有机相，PE∶EA＝5∶1柱层析得9153f460mg，收率56％。
LCMS(ESI-MS)m/z：585.3(M+H+).
第二步 N-((顺式)-4-环丙基吡咯烷-3-基)-1-(苯磺酰基)-5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-胺91b
将91a(460mg，0.8mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入HBr(1mL)，室温反应1小时。反应完毕，浓缩，直接冻干得91b粗品300mg收率83％。
LCMS(ESI-MS)m/z：451.2(M+H+).
第三步(顺式)-3-环丙基-4-((1-(苯磺酰基)-5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯烷-1-羧酰胺91c
将9153g(300mg，0.6mmol)溶于5mL THF中，加入Int-2(263mg，1.2mmol)，以及Na2C03(191mg，1.8mmol)，加热至70℃反应3小时。反应完毕，浓缩，TLC制备分离得91c150mg收率43％。
LCMS(ESI-MS)m/z：576.3(M+H+).
第四步(顺式)-3-环丙基-N-(2，2，2-三氟乙基)-4-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺H91
将91c(150mg，0.26mmol)溶于2mL甲醇中，加入NaOH(1mL，1.5mmol，4M in water)，室温反应1小时。反应完毕，加水，DCM萃取，浓缩，TLC制备分离得H9123mg收率20％。
LCMS(ESI-MS)m/z：436.3(M+H)+.
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.77(s，1H)，8.10(s，1H)，7.32(dd，J＝3.6，2.4Hz，1H)，6.84(t，J＝6.3Hz，1H)，6.71(dd，J＝3.8，1.8Hz，1H)，5.51(d，J＝7.9Hz，1H)，4.82(t，J＝6.8Hz，1H)，3.85-3.63(m，3H)，3.54(dd，J＝10.3，7.0Hz，1H)，3.37-3.31(m，2H)，1.85(s，1H)，0.79(dt，J＝13.9，5.6Hz，1H)，0.48(dd，J＝8.1，1.7Hz，2H)，0.28-0.01(m，2H).
实施例92
(顺式)-3-乙基-N-(2，2，2-三氟乙基)-4-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺H92
采用与实施例91相同的制备方法，以乙基溴化镁为原料，可得到化合物H92。
LCMS(ESI-MS)m/z：481.3(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.79(s，1H)，8.09(s，1H)，7.32(dd，J＝3.7，2.4Hz，1H)，6.84(t，J＝6.3Hz，1H)，6.65(dd，J＝3.7，1.8Hz，1H)，5.06-4.98(m，1H)，4.76(s，1H)，3.79-3.56(m，4H)，3.48(m，1H)，3.07(t，J＝10.2Hz，1H)，2.42(m，1H)，1.47-1.34(m，2H)，0.86(t，J＝7.3Hz，3H).
实施例93
(顺式)-3-乙基-N-(氰甲基)-4-((5-(三氟甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺H93
采用与实施例92相同的制备方法，以N-(氰甲基)氨基甲酸苯酯为原料，可得到化合物H93。
LCMS(ESI-MS)m/z：481.3(M+H+).
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(s，1H)，8.09(s，1H)，7.32(dd，J＝3.7，2.5Hz，1H)，6.93(t，J＝5.7Hz，1H)，6.65(dd，J＝3.7，1.9Hz，1H)，5.05(d，J＝7.7Hz，1H)，4.77(s，1H)，3.95(d，J＝5.5Hz，2H)，3.66-3.56(m，2H)，3.44(d，J＝11.1Hz，1H)，3.06(t，J＝10.1Hz，1H)，2.43-2.40(m，1H)，1.46-1.35(m，2H)，0.85(t，J＝7.3Hz，3H).
生物学实验实施例：
实施例一、本发明化合物对JAK激酶的抑制测试
1.实验目的
通过以下方法进行体外JAK1-3激酶活性的抑制测试。
1.1试剂盒和检测液体
分别使用JAK1 Ultra试验，JAK2 Ultra试验，JAK3Ultra试验方法进行测试，上述试剂盒均来源于珀金埃尔默。
JAK1 Ultra试验酶反应体系包括2nM JAK1(英杰，PV4775)，50nM ULightTM-JAK-1肽(底物，珀金埃尔默，TRF0121-M)，和38uM ATP(西格玛，A7699)。JAK2Ultra试验酶反应体系包括0.03nM JAK2(英杰，PV4288)，50nM ULight TM-JAK-1肽(底物，珀金埃尔默，TRF0121-M)，和12μM ATP(西格玛，A7699)。JAK3 Ultra试验酶反应体系包括0.08nM JAK3(英杰，PV4080)，50nM ULight TM-JAK-1肽(底物，珀金埃尔默，TRF0121-M)，和4μM ATP(西格玛，A7699)。
酶促反应缓冲液为50mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(pH7.5)(英杰，15630130)，10mM氯化镁(西格玛，63020)，1mM乙二胺四乙酸(英杰，1842C505)，2mM二硫苏糖醇(西格玛，43815)，0.01％BRIJ-35(西格玛，B4184)。JAK1，JAK2，JAK3激酶，ATP，底物均使用缓冲液溶解稀释。
检测液为2nM Eu-W1024抗磷酸酪氨酸(珀金埃尔默，AD0069)。终止液为10mM乙二胺四乙酸(英杰，1842C505)。
1.2化合物的配置
将测试化合物H01-H93分别溶解于二甲基亚砜中，从0.017nM到1μM，化合物3倍稀释，共11个梯度浓度。
1.3实验过程
在384孔板中分别加入2.5μl 8倍浓度的化合物溶液，5μl 4倍浓度的JAK1或JAK2或JAK3激酶溶液，室温反应10分钟。加入2.5μl 8倍浓度的ULight TM-JAK-1肽/ATP溶液，室温反应90分钟。最后加入5μl 4倍浓度的乙二胺四乙酸终止液和5μl 4倍浓度的Eu-W1024抗磷酸酪氨酸检测液，继续孵育60分钟，在易美逊多模式读板仪(PE，2105-0010)中读取发光值。
1.4实验结果
根据公式：抑制率百分比＝(最大值-转换值)/(最大值-最小值)×100计算每个化合物不同浓度的抑制率。其中最大值为孔板加入二甲基亚砜对照值，最小值为空白所得值，转换值为每个化合物孔所获得的值。再通过excel中XLFit拟合工具进行拟合，得出相应化合物的IC50。
2.实验结果及结论
本发明的化合物对JAK1-3激酶的活性抑制的IC50见下表。由数据可见，本发明化合物对JAK1-3激酶具有不同的抑制作用，与JAK2和JAK3相比，本发明的化合物对JAK1表现出更好的抑制活性，对JAK家族呈现较好的选择性，说明本发明化合物靶点特异性好，药效强，由同家族其他靶点所诱发的不良反应少。
表1本发明化合物对JAK1-3激酶的活性抑制的IC50
实施例二、本发明化合物对细胞增殖的抑制测试
1.实验目的和方法
通过下列方法进行本发明的化合物对Blast T细胞和TF-1细胞(美国模式培养物集存库)增殖的抑制测试。
1.1化合物的配置
将所测试化合物H01、H02、H03、H07、H08、H09、H11、H12、H14、H15、H18、H19、H22、H25、H26、H29、H30、H33、H34、H39、H40、H41、H43、H44、H50、H58、H62、H70、H85、H92溶解于二甲基亚砜中，从0.0006-10μM，4倍稀释。
1.2 IL-2刺激的Blast T细胞增值实验
培养基包括：RPMI 1640培养基(格兰特岛生物公司TM，11875093)，10％胎牛血清(奥斯比纳，0986180)，55μM 2-硫基乙醇，1％青霉素-链霉素(格兰特岛生物公司，1902422)。NuncTM Edge 2.0 96-孔平底板(Cat.No.167425)
分离健康人源(抽取健康人血液)的PBMC细胞，用EasySepTM人CD4 T细胞分离试剂盒(Stemcell，19052)分离出CD4+T细胞。加入10μg/ml聚羟基脂肪酸酯刺激获得密度为2x106/mL的细胞，继续培养3天。使用磷酸盐缓冲液洗涤3次，加入IL-2(100u/ml)刺激1周。使用培养基重悬细胞并以5x104密度细胞/孔接种到96孔板，加入上述配置好的从0.0006-10μM，以4倍体积稀释所得的不同浓度待测化合物或二甲基亚砜对照孵育1小时。加入20u/ml的IL-2(50μl/孔，对照孔不加)，孵育72小时，加入Celltiter 试剂(Promega，G7571)混匀5分钟，室温孵育30分钟，在SpectraMax L(Molecular Device)上读取发光值。根据公式：抑制率＝1-(数值-最小值)/(最大值-最小值)计算每个浓度的抑制率，其中数值是每孔的发光值，最大值二甲基亚砜对照孔数值，最小值为未加IL-2刺激的数值，再通过excel中XLFit拟合工具进行拟合，得出相应化合物的IC50。
1.3 TF-1细胞增值实验
培养基含：RPMI 1640培养基(格兰特岛生物公司TM-11875093)，10％胎牛血清(奥斯比纳，0986180)，1％青霉素-链霉素(格兰特岛生物公司，1902422)。
用含2ng/mL人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的培养基培养TF-1细胞，达到密度为4.0x105cells/mL后用不含人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的培养基饥饿24小时，细胞1000转/每分钟离心5分钟后，再用含2ng/mL人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的培养基重悬细胞，并以5000个细胞/孔的密度接种于96孔板，加入上述1.1中配置好的不同浓度待测化合物或二甲基亚砜对照孵育72小时，加入Celltiter 试剂(Promega，G7571)，在酶标仪(美谷分子)上读取发光值。根据公式：抑制率＝1-(数值-最小值)/(最大值-最小值)计算每个浓度的抑制率，其中数值是每孔的发光值，最大值为二甲基亚砜对照孔数值，最小值为未加IL-2刺激的数值，再通过excel中XLFit拟合工具进行拟合，得出相应化合物的IC50。
2.实验结果及结论
本发明的化合物对Blast T细胞和TF-1细胞的增殖抑制的IC50如下表所示。由数据域可知，本发明化合物对T细胞增殖的IC50值为13-50nM，对TF-1细胞增殖的IC50值为70-2500nM。可见，本发明化合物对T细胞具有较好的抑制增殖的作用，对TF-1细胞的增殖抑制作用较弱，说明本发明化合物对JAK1的活性较强，对JAK2活性较弱，具有较好的选择性。动物药效更好，不良反应更少。
表2本发明化合物对T细胞和TF-1细胞的增殖抑制的IC50
实施例三、本发明化合物对小鼠足肿胀的药效学测试
1.摘要
以8周龄，体重22-24g的雄性ICR小鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)为实验动物，测定H01、H07、H11、H12、H14、H15、H22、H25、H29、H30、H33、H39、H44化合物灌胃给予后对小鼠足肿胀的抑制效果。探讨发明化合物的抗炎药效学特征。
2.实验方案
2.1实验用化合物
H01、H07、H11、H12、H14、H15、H22、H25、H29、H30、H33、H39、H44化合物。
2.2化合物的配置
称取一定量的化合物，溶于4％吐温80/0.5％羟丙基甲基纤维素溶液中。小鼠灌胃体积为10ml/kg。
2.3操作
按下表所示剂量对小鼠灌胃给予10mg/kg H01、H07、H11、H12、H14、H15、H22、H25、H29、H30、H33、H39、H44化合物以及阳性药吲哚美辛(金刚石试剂有限公司，中国)，半小时后足底皮下注射20μL 1％(W/V)角叉菜胶。在造模前以及造模后的不同时间点(0.5小时、1小时、2小时)分别通过足趾肿胀仪测定足体积，根据公式：足肿胀率＝(给药后的足体积-基础足体积)/基础足体积×100计算化合物对足体积的抑制效果。基础足体积表示给药前的足体积。
3.实验结果及结论
由下表所示数据可知，10mg/kg的本发明化合物能缓解角叉菜胶造成的小鼠足肿胀率，尤其在给药后1-2小时内，说明本发明化合物具有一定的抗急性炎症效果，且抑制足肿胀率优于吲哚美辛。
表3本发明化合物对小鼠足肿胀的药效
实施例四、本发明化合物对大鼠足肿胀的效果测试
1.摘要
以6-7周龄，体重160-180g的雄性斯普拉格-杜勒(SD)大鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)为实验动物，测定H13化合物，H14化合物，H09化合物，H11化合物实施例H12化合物灌胃给予后对大鼠足肿胀的效果。探讨发明化合物的抗炎药效学特征。
2.实验方案
2.1实验用化合物
H01、H07、H11、H12、H14、H15、H22、H25、H29、H30、H33、H39、H44化合物。
2.2化合物的配置
称取一定量的化合物，溶于4％吐温80/0.5％羟丙基甲基纤维素的溶液。
2.3操作
按下表所示剂量，对大鼠灌胃给予H01、H07、H11、H12、H14、H15、H22、H25、H29、H30、H33、H39、H44化合物以及阳性药吲哚美辛(金刚石试剂有限公司，中国)半小时后足底皮下注射0.1ml的0.03％(W/V)的刀豆蛋白。在造模前，及造模后1小时、2小时、4小时、6小时分别通过足趾肿胀仪测定足体积，根据以下公式计算化合物的效果：足肿胀率＝(给药后的足体积-基础足体积)/基础足体积×100。基础足体积表示给药前的足体积。
3.实验结果及结论
由下表数据可知，10mg/kg的本发明化合物能缓解刀豆蛋白诱导的大鼠足肿胀，表明本发明化合物具有一定抗急性炎症的效果，部分化合物4小时后的抗急性炎症的药效优于吲哚美辛。
表4本发明化合物对大鼠足肿胀的药效
实施例五、本发明化合物对大鼠类风湿性关节炎的效果测试
1.摘要
以5-6周龄，实验时体重160g的路易斯(Lewis)雌性大鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)为实验动物，测定H07，H12，H14，H25，H30，H39，H44化合物长期给药后对大鼠类风湿性关节炎的效果。探讨发明化合物的抗炎药效学特征。
2.实验方案
2.1实验用化合物
H07化合物，H12化合物，H14化合物，H25化合物，H30化合物，H39化合物，H44化合物。
2.2化合物的配置
称取一定量的化合物，溶于4％吐温80/0.5％羟丙基甲基纤维素的溶液。大鼠灌胃体积为10ml/kg。
2.3操作
II型胶原溶解于0.1M乙酸中，4℃冰箱过夜，胶原浓度为4mg/mL。实验注射前向胶原溶液中加入等体积不完全氟氏佐剂(西格玛，美国)，用高速匀浆机(30000转)乳化胶原，制成胶原乳剂，此过程在冰上操作。
在第1天和第7天分两次对大鼠免疫注射胶原乳剂造模(造模前一天为第0天)，使用如上制备的胶原乳剂于尾根部皮内单点注射0.1ml，于背部皮内两点注射，每点注射0.2ml。造模后第10天-14天对动物进行临床评分和足体积测试。造模成功(临床评分平均≥3分/动物)的动物随机分配到各个给药组，每组动物10只，以10mg/kg的剂量每天2次灌胃给予上述化合物或溶媒，甲氨蝶呤(2mg/kg，西格玛，美国)3天灌胃给一次，直至第27天。实验期间每周评分2次，足体积测量2次，体重称量2次。
根据病变的不同程度(红肿，关节变形)按照0-4分的标准进行评分，每个肢体的最高评分为4分，每只动物最高评分为16分。评分标准如下：0，无红肿现象；1，中足(跗骨)或者踝关节轻微的红肿；2，从踝关节到中足(跗骨)轻微红胀；3，从踝关节到跖骨关节中等程度红胀；4，从脚趾或手指到踝关节或腕关节严重红肿。
3.实验结果及结论
由下表数据可知，10mg/kg剂量的本发明化合物灌胃给予1周即能减轻大鼠关节炎临床评分，减轻足趾肿胀体积，给药2周后动物能正常走动，显著缓解关节炎的进展，优于临床一线用药甲氨蝶呤。
表5本发明化合物对类风湿性关节炎模型的评分效果
实施例六、本发明化合物的药代动力学测试
1.摘要
以7-8周龄，体重180-220g雄性斯普拉格-杜勒(SD)大鼠为实验动物，应用LC/MS/MS法测定灌胃给予测定H01、H07、H11、H12、H14、H15、H22、H25、H29、H30、H33、H39、H44后不同时间点血浆中的药物浓度。研究本发明化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
2.实验方案
2.1实验用化合物
H01、H07、H11、H12、H14、H15、H22、H25、H29、H30、H33、H39、H44。
2.2化合物的配置
称取一定量的化合物，溶于50％PEG400/水，配置成均一的溶液。
2.3操作
以5mg/kg的剂量对大鼠灌胃上述化合物，在给药前和给药后0.083，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，12.0，24.0小时由眼眶采血0.2ml，置于含有乙二醇二乙醚二胺四乙酸二钾的抗凝管中，4℃，6000转/分钟离心10分钟分离血浆，-80℃保存。
取50μL上述不同时刻的血浆，加入150μL含内标甲苯磺丁脲(西格玛.美国)的乙腈溶液混合、振摇5分钟，12000转，离心5分钟后，取出100μL上清，再与200μL水混合后进样分析。
2.4液相色谱条件和分析软件
液相色谱系统为LC-20AD UFLC高效液相色谱系统。质谱系统为AB Sciex API4000三级四级杆质谱配备电喷雾电离源(ESI)(应用生物系统公司，加拿大)。用于控制液质联用仪和定量分析的软件为安娜拉斯特1.6(应用生物系统公司，加拿大)，药动学参数采用WinNonlin(version 5.2，Pharsight，Mountain View，加拿大)非房室模型进行分析。
2.5标准和质控溶液的准备
将待测化合物溶解在二甲基亚砜中配制成浓度为1mg/mL的储备液，用50％乙腈稀释得到一系列的标准工作溶液，浓度为10、3、1、0.3、0.1、0.03和0.01μg/mL和一系列的标准质控溶液(8、0.5和0.03μg/mL)。将5μL标准溶液和45μL空白血浆基质混合均匀，得到标准曲线的各浓度点的标准溶液(1000、500、200、100、10、5、2和1ng/mL)和质控标准溶液(血浆样品800、50和3ng/mL)。
将内标甲苯磺丁脲固体粉末溶解在二甲基亚砜中配制成1mg/mL的储备液。储备液用100％乙腈稀释得到200ng/mL的溶液作为蛋白沉淀剂。
3.实验结果
表6本发明化合物的药代动力学参数结果
由上表数据可知，本发明化合物药代吸收较好的药动学特征。
实施例七、化合物对hERG钾通道电流的抑制效果测试
1.摘要
应用电生理手动膜片钳检测H07，H12，H14，H25，H30，H39、H44化合物对hERG钾通道的作用，研究本发明化合物初步的心脏安全性。
2.实验方案
2.1化合物的配置
测试化合物溶解于二甲基亚砜中，配置成10，3.3，1.1，0.37mM的母液。接下来使用细胞外液进行次级稀释，最终测试溶液浓度为30，10，3.3，1.1，0.37μM。
2.2试剂准备
细胞外液：130mM氯化钠，4mM氯化钾，1.8mM氯化钙，1mM氯化镁，10mM葡萄糖，10mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸(pH 7.4)
细胞内液：130mM氯化钾，1mM氯化镁，5mM乙二醇二乙醚二胺四乙酸，5mM三磷酸腺苷和10mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(pH7.2)
细胞培养基组成：杜氏培养液(格兰特岛生物公司，11330032)，15％胎牛血清(西格玛，A15-101，美国)，1％青霉素-链霉素(百奥外斯特，L0022-100)
2.3电生理手动膜片钳系统实验方案
将过表达hERG钾离子通道的HEK293细胞(来自于纽约大学医学院MohamedBoutjdir博士实验室-南通科瑞斯)使用杜氏培养液/15％胎牛血清/1％青霉素-链霉素组成的培养基培养于37℃、5％CO2培养箱中。实验时，将细胞转移到嵌入倒置显微镜平台的细胞浴槽中，灌流细胞外液，稳定5分钟待细胞沉淀后即可开始实验。采用HEKA EPC-10膜片钳放大器和PATCHMASTER采集系统(禾卡仪器公司，D-67466 Lambrcht，普法尔茨，德国)记录膜电流。所有实验均在室温(22-24℃)下完成。实验中使用P-97微电极拉制仪(萨特仪器有限公司，诺瓦托，加拿大94949)拉直电极(BF150-110-10)。电极内径为1-1.5mm，充满内液后的入水电阻为2-4MΩ。
实验采用全细胞记录模式进行，按照下方的电生理刺激方案记录电流值。是首先将膜电压钳制在-80mV，给予细胞持续2秒，+20mV电压刺激，激活hERG钾通道，再复极化至-50mV，持续5秒，产生外向尾电流，刺激频率每15秒一次。电流值为尾电流的峰值。实验中采用全细胞记录模式记录通道电流。首先灌流细胞外液(大约每分钟2ml)并持续记录，等待电流稳定(5分钟内电流衰减(运行-降低)小于5％)，此时尾电流峰值即为对照电流值。接着灌流含待测药物的细胞外液并持续记录直到药物对hERG电流的抑制作用到达稳定状态，此时尾电流峰值即为加药后电流值。达到稳定态势以后如果以细胞外液灌流冲洗后hERG电流回复则可以继续灌流测试其它浓度或药物。使用含待测药物的溶液，按浓度由低到高的顺序进行灌流及记录电流值。使用PATCHMASTER V2X60(禾卡仪器公司，D-67466 Lambrecht，普法尔茨，德国)进行数据采集，采用奥闰捷8.5(奥闰捷实验室公司，北安普顿，英国)软件进行分析和统计。
3.结果
本发明化合物对hERG的电流抑制的IC50如下表7所示。由表中数据可知，本发明化合物对hERG的电流抑制作用较弱，安全性好。
表7本发明化合物对hERG的电流抑制效果
实施例八、本发明化合物的急毒测试
1.摘要
以20-22g，8周龄的ICR小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)，实验动物雌雄各半，口服给予实施例H07化合物，实施例H12化合物，实施例H14化合物，实施例H25化合物，实施例H30化合物，实施例H39化合物，实施例H34化合物，给药1次，连续观察14天，包括笼边状态观察、每天的体重称量和终点病理学检查。
2.实验方案
2.1实验用化合物
实施例H07化合物，实施例H12化合物，实施例H14化合物，实施例H25化合物，实施例H30化合物，实施例H39化合物，实施例H34化合物。
2.2化合物的配制
称取一定量的化合物，溶于0.5％羟丙基甲基纤维素，配制成均一的溶液。
2.3操作
采用上下法观察小鼠单次口服给予实施例化合物后的急性毒性，每个剂量组10只小鼠。给药剂量为100mg/kg，300mg/kg，1000mg/kg，给药体积为10ml/kg。
2.4实验统计
根据每个剂量动物的死亡率，使用布利斯软件计算LD50
2.5实验结果
给药后连续观察14天，所有给药组动物均存活，体重正常增加，并未出现异常表现。14天观察期结束后全部动物安乐死后进行大体解剖检查，体表未见明显异常，胸腔、腹腔、盆腔、颅腔未见肉眼可见病变。
本实验条件下，本发明化合物小鼠口服给药后的LD50＞1000mg/kg，安全性较好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。

Claims (8)

1.一种化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其可药用盐，其特征在于，所述化合物为：
。
2.根据权利要求1所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其可药用盐，其中所述可药用盐为酸加成盐、碱加成盐、内盐，所述酸加成盐选自盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、醋酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐，所述碱加成盐选自碱金属盐、碱土金属盐，与氨或有机胺的盐。
3.根据权利要求2中所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其可药用盐，其中所述碱加成盐选自钠盐、钾盐、钙盐、镁盐；所述与氨或有机胺的盐选自乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸的盐。
4.一种药物组合物，其特征在于，包括治疗有效量的权利要求1-3任一项所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其可药用盐，以及任选一种或多种医药上可接受的载体和赋形剂，所述载体选自乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素和硅酸，所述赋形剂选自粘合剂，崩解剂，崩解抑制剂，吸附促进剂，润湿剂，吸附剂，以及润滑剂，所述药物组合物还任选地包括另外一种或多种调节哺乳动物免疫系统的试剂、抗癌剂或抗炎剂。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中所述粘合剂选自水、乙醇、丙醇、普通糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液，羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素和磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮；所述崩解剂选自干淀粉、藻酸钠、琼脂粉和海带粉，碳酸氢钠、碳酸钙、聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘酯、淀粉和乳糖；所述崩解抑制剂选自白糖、甘油三硬脂酸酯、椰子油和氢化油；所述吸附促进剂选自季胺碱和十二烷基硫酸钠；所述湿润剂选自甘油、淀粉；所述吸附剂选自淀粉、乳糖、高岭土、膨润土和胶体硅酸；所述润滑剂选自纯净的滑石，硬脂酸盐、硼酸粉和聚乙二醇。
6.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、及其可药用盐或者根据权利要求4-5任一项所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗JAK介导的相关疾病的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述JAK介导的相关疾病包括：免疫系统的疾病；自身免疫性疾病；皮肤病；变应性病症；病毒性疾病；I型糖尿病与糖尿病并发症；阿尔茨海默病；干眼病；骨髓纤维化；血小板增多症；红细胞增多症或白血病；癌症；炎症性肠病；骨髓增生失调；骨髓瘤。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述免疫系统的疾病包括器官移植排斥，所述器官移植排斥选自异体移植排斥和移植物抗宿主疾病；所述自身免疫性疾病选自狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、青少年关节炎、银屑病、溃病性结肠炎、克罗恩氏病、自体免疫性甲状腺疾病；所述皮肤病选自牛皮癣、皮疹、特应性皮炎；所述变应性病症选自过敏、哮喘、鼻炎；所述病毒性疾病选自乙型肝炎、丙型肝炎、水痘-带状疱疹病毒；所述癌症选自实体瘤，所述实体瘤选自前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤，血液癌，淋巴瘤、白血病，皮肤癌；所述皮肤癌选自皮肤T-细胞淋巴瘤、皮肤B-细胞淋巴瘤。
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