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CN113049729B - 一种珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法 - Google Patents

一种珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法 Download PDF

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CN113049729B CN202110262796.8A CN202110262796A CN113049729B CN 113049729 B CN113049729 B CN 113049729B CN 202110262796 A CN202110262796 A CN 202110262796A CN 113049729 B CN113049729 B CN 113049729B
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Abstract

本发明公开了一种珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法，旨在为了保证复方中珍珠的质量，因此在研发“珍蜜口服液”的过程中，本发明系统地开展多指标检测的珍珠复方的质量标准研究，突破以往珍珠中成药只测定碳酸钙及总氮、标准专属性不强的问题，建立测定钙盐、亮氨酸及总氮与合浦珍珠水解产物特征甘氨酸含量的质量标准体系，有效地控制“珍蜜口服液”道地药材合浦珍珠的内在质量，并为全面控制珍珠复方产品质量提供借鉴。

Description

一种珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法
技术领域
本发明涉及一种珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法，属于中药检测技术领域。
背景技术
珍珠是《中华人民共和国药典》收载的11味海洋中药材之一，始见于晋·葛洪《肘后备急方》，南朝《雷公炮炙论》正式收载，唐代甄权《药性论》、李珣《海药本草》亦有著录，至宋代珍珠则作为新增药物补入《开宝本草》。珍珠药性、功效、主治记载明确，应用广泛、疗效确切，具有较好的开发价值，有望在老年病、免疫缺陷性疾病、养生康复等领域开发应用。
海水珍珠味甘、咸、性寒，归心、肝经，具有益阴潜阳、解毒生肌等功能。现代药理研究：海水珍珠含丰富的微量元素及全部10种人体必须氨基酸，还含有5种非蛋白质氨基酸如牛磺酸等；水解珍珠获取活性肽是一种分子量很小的细胞修复物质。现代药理研究证明珍珠具有增强人体免疫调节的功效，适合研发新的制剂。合浦珍珠是广西的标志性物产，是海水药用珍珠的代表，是中医药界公认、首推的道地药材，但在复方中并无专属性强的检测标准。
据国家药监局数据库显示：①批准上市含珍珠或珍珠层粉的药品33个品种，质量标准测定碳酸钙或总氮含量33个，测定氨基酸含量0个；其中单方6个，复方27个；口服29个，滴眼液3个，软膏剂1个；口服固体品种中以原粉入药26个，以水解提取物入药0个。②在珍珠加工工艺方面，只有复方珍珠口服液、人参珍珠口服液分别采用了珍珠层粉盐酸水解及珍珠提取物。具体如表1示。
表1已上市的含珍珠或珍珠层粉药品剂型、生产厂家数量、加工工艺及质量指标
Figure BDA0002970708820000021
Figure BDA0002970708820000031
(根据国家药监局数据库数据统计)
根据以上数据分析，珍珠主要以原粉入药，影响机体吸收，珍珠复方的鉴别指标专属性也不强，珍珠中成药的质量控制标准有待提高。
发明内容
本发明旨在以自主研发并已经取得中药民族药医疗机构制剂注册的“珍蜜片”(桂药制字Z20140001)的基础上，开发“珍蜜口服液”制剂，在质量控制方面，开展多指标检测的珍珠复方的质量标准研究，建立钙盐鉴别、亮氨酸多成分同步鉴别，总氮、甘氨酸含量测定的质量标准，有效控制“珍蜜口服液”的内在质量，为进一步全面控制珍珠复方产品质量提供依据。
本发明所采取的技术方案如下：一种珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法，包括(1)钙盐鉴别；(2)总氮含量测定；(3)亮氨酸TCL薄层鉴别；(4)甘氨酸HPLC含量测定，所述鉴别检测标准为：检出钙盐；亮氨酸在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰,分离效果好；总氮含量每ml不少于10ug，甘氨酸含量每ml不少于40ug。
以下技术方案为进一步优化的方案：
所述总氮含量测定的方法，按《中国药典》2015年版四部通则0704氮测定法下第二法进行，并在凯氏烧瓶中滴加硫酸之后，再加入过氧化氢溶液，从而加速反应速率，并使反应完全，反应终点为溶液逐渐澄清。
所述过氧化氢溶液的浓度为30％，加入量为3ml。
所述亮氨酸TCL薄层鉴别的方法为：取珍珠复方制剂25ml，加入6mol/L的盐酸50ml，回流加热水解4小时，放至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加70％乙醇2ml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液；另取亮氨酸对照品，加70％甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液2μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4:1:1的正丁醇-冰乙酸-水为展开剂，展开，展距7.5cm，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
所述甘氨酸HPLC含量测定采用的色谱条件为：色谱柱以氨丙基官能团键合硅胶为填充剂；以乙腈:甲醇:水＝6:2:2为流动相A，0.05mol/L乙酸钠水溶液为流动相B，检测波长为254nm；进样量为10μl；并按照以下梯度比例进行洗脱：
Figure BDA0002970708820000041
所述珍珠复方制剂为“珍蜜口服液”，每瓶“珍蜜口服液”含珍珠粉1g、蜂蜜2g、枸橼酸1g以及水100ml。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果：本发明提供准确、快速地对珍珠复方制剂中的珍珠定性定量检测方法，使用简单，将定性与定量相结合，专属性强，能够完成对多指标检测的质量标准研究，建立合浦珍珠水解产物-特征甘氨酸含量测定标准、多成分同步鉴别及总氮限度检查，有效控制珍珠复方制剂内在质量；同时为含珍珠的复方制剂中珍珠的质量控制提供借鉴，具有极大应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例“珍蜜口服液”珍珠质量标准技术路线图。
图2为蒸馏装置结构示意图；图中标记：A-1000ml圆底烧瓶、B-安全瓶、C-连有氮气球的蒸馏器、D-漏斗、E-直形冷凝管、F-100ml锥形瓶、G、H-橡皮管夹。
图3为对照药材溶液10μl、供试品溶液2μl，以正丁醇-冰醋酸-水(8:3:1)为展开剂的色谱图；其中，1为对照药材溶液；2为供试品溶液。
图4为谷氨酸、亮氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸对照溶液各8μl、供试品溶液2μl，以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:0.5)为展开剂的色谱图；其中，1为谷氨酸；2为亮氨酸；3为赖氨酸；4为缬氨酸；5为供试品。
图5为谷氨酸、亮氨酸对照品溶液各5μl、供试品溶液2μl，以正丁醇-冰醋酸-水(4︰1︰1)为展开剂的色谱图；其中，1为供试品；2为谷氨酸；3为亮氨酸。
图6为亮氨酸5μl、三批样品供试品溶液各2μl，以正丁醇-冰醋酸-水(4︰1︰1)为展开剂的色谱图；其中，1-3分别为供试品溶液(珍蜜口服液20191223，20191225，20191227)；4为亮氨酸。
图7为供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl，以正丁醇-冰醋酸-水(4︰1︰1)为展开剂的色谱图；其中，1-3为供试品溶液(水解南珠蜂蜜口服混悬液20191223，20191225，20191227)；4为亮氨酸；5为阴性对照。
图8为供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl在30℃条件下的色谱图；其中，1-3为供试品；4为亮氨酸；5为阴性样品。
图9为供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl在8℃条件下的色谱图；其中，1-3为供试品；4为亮氨酸；5为阴性样品。
图10为供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl，展距7.5cm的色谱图；其中，1-3为供试品；4为亮氨酸；5为阴性样品。
图11为供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl，展距8cm的色谱图；其中，1-3为供试品；4为亮氨酸；5为阴性样品。
图12为各溶液再温度30℃，湿度70RH％，展距7.5cm条件下的色谱图；其中，1-3为水解南珠蜂蜜口服混悬液供试品(20191223、20191225、20191227)；4为亮氨酸对照品；5为缺珍珠末阴性对照。
具体实施方式
为使得本发明的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本发明部分实施例，而非全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
一、珍珠复方制剂
珍蜜口服液(以下称“本品”)，每瓶含珍珠粉1g，蜂蜜2g，枸橼酸1g，水100ml。
二、鉴别方法
(一)钙盐鉴别
因本品的主要成分珍珠末中含有大量的碳酸钙盐，根据《中国药典》2015年版四部通则0301“一般鉴别试验”中“钙盐”项下规定，对本品进行理化鉴别。
具体鉴别方法为：摇匀本品，取10ml，加甲基红指示液2滴，用氨试液中和，再滴加盐酸至恰呈酸性，加草酸铵试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀盐酸。
取3批中试成品进行钙盐鉴别试验。试验结果见表2。
表2 3批中试成品钙盐鉴别试验结果
批号 鉴别结果
20191223 检出钙盐
20191225 检出钙盐
20191227 检出钙盐
(二)总氮含量测定
本品主要药材为珍珠末，珍珠末含有宏量元素、微量元素、蛋白质(水解后可得到18种氨基酸，其中7种是人体必需氨基酸)等。
本品每瓶含珍珠末生药量为1g，药材含氮量为3mg左右；药材水解之后，本品每瓶的含氮量约为2.0～2.5mg。按《中国药典》2015年版四部通则0704氮测定法下第二法(半微量法)进行测定。测定过程中发现：待测品在凯氏烧瓶中反应时间过长，反应不完全。本品由于含有较多蜂蜜，反应液一般难以变成澄明的绿色。
故本发明作出如下改进：
1、在凯氏烧瓶中滴加硫酸之后，再加入3ml 30％过氧化氢溶液，可加速待测品的氧化分解，加快反应的速率，并使反应完全。
2、反应终点由溶液变为“澄明的绿色”改为溶液“逐渐澄清(有少许沉淀)”。
最终确定的方法为：蒸馏装置如图2所示。连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃珠或沸石数粒，从D漏斗加水约50ml，关闭G夹，开放冷凝水，煮沸A瓶中的水，当蒸气从冷凝管尖端冷凝而出时，移去火源，关H夹，使C瓶中的水反抽到B瓶，开G夹，放出B瓶中的水，关B瓶及G夹，将冷凝管尖端插入约50ml水中，使水自冷凝管尖端反抽至C瓶，再抽至B瓶，如上法放去。如此将仪器内部洗涤2～3次。
摇匀本品，精密量取10ml，置干燥的50ml凯氏烧瓶中，加硫酸钾(或无水硫酸钠)0.3g与30％硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml,最后加入30％过氧化氢溶液3ml，充分摇匀；在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使溶液保持在沸点以下，等泡沸停止，逐步加大火力，沸腾至溶液逐渐澄清(有少许沉淀)后，继续加热10分钟，放冷。
取2％硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端插人液面下。然后，将凯氏烧瓶中内容物经由D漏斗转人C蒸馏瓶中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗数次，再加入40％氢氧化钠溶液10ml，用少量水再洗漏斗数次，关G夹，加热A瓶进行蒸气蒸馏，至硼酸液开始由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏10分钟后，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。
馏出液用硫酸滴定液(0.005mol/L)滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸滴定液(0.005mol/L)相当于0.1401mg的N。
样品测定：
取三批中试成品(20191223、20191225、20191227)各2瓶照最终确定方法进行测定。结果见表3。
表3 3批中试成品总氮测定结果
Figure BDA0002970708820000081
由结果可知，3批样品中，最高为2.45mg/瓶，最低为2.33mg/瓶，平均为2.40mg/瓶。考虑到药材来源的复杂性及水解液的稳定性，故限度按平均值适当下调，设定本品每瓶含总氮(N)，不得少于1mg。
(三)亮氨酸TCL薄层鉴别
1、实验条件
样品：珍蜜口服液，批号：20191223，20191225，20191227
国产硅胶G预制板：青岛海洋化工有限公司。
对照药材及对照品：珍珠对照药材(121022-201604，中国食品药品检定研究院)；谷氨酸对照品(140690-201604，中国食品药品检定研究院)；亮氨酸对照品(140690-201604，中国食品药品检定研究院)；缬氨酸对照品(140690-201604，中国食品药品检定研究院)；盐酸赖氨酸对照品(140673-201509，中国食品药品检定研究院)。
所用试剂均为分析纯。
2、供试品溶液，对照药材溶液，对照品溶液及阴性对照溶液制备
2.1供试品溶液制备：摇匀本品，取25ml,加入6mol/L的盐酸50ml，回流加热水解4小时，放至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加70％乙醇2ml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。
2.2对照药材溶液制备：取对照药材20mg，加入稀盐酸10ml，浸渍20分钟，加入6mol/L的盐酸50ml，回流加热水解4小时，放至室温，滤过，滤液蒸干。残渣加70％乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。
2.3对照品溶液制备：取谷氨酸、亮氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸，分别加70％甲醇制备成0.5mg/mL的对照品溶液。
2.4阴性对照溶液制备：取缺珍珠末的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
3、对照药材及对照品考察
3.1对照药材考察
吸取对照药材溶液10μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(8:3:1)为展开剂，展开。取出。晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰(见图3)。
结果：本供试品溶液用合浦珍珠制成的样品配制而成，对照药材中一个主斑点未能在供试品中检出，有可能是药材复杂性引起，可能与产地、品种有关，故考虑不将对照药材作为对照标准进行检验，而采用对照品进行薄层鉴别；另外，图谱展开分离效果不理想，需调节展开剂比例。
3.2对照品考察
3.2.1吸取谷氨酸、亮氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸对照溶液各8μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:0.5)为展开剂，展开。取出。晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰(见图4)。
结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，谷氨酸、亮氨酸显相同颜色的斑点，缬氨酸、赖氨酸未见相同颜色的斑点，故考虑保留谷氨酸、亮氨酸进行进一步考察；另外，供试品色谱分离不够清晰，展开剂比例仍可进一步优化。
3.2.2吸取谷氨酸、亮氨酸对照品溶液各5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4︰1︰1)为展开剂，展开。取出。晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰(见图5)。
结果显示：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，亮氨酸斑点显相同颜色且清晰，谷氨酸未见相应斑点。
3.2.3吸取亮氨酸5μl、三批样品供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4︰1︰1)为展开剂，展开。取出。晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰(见图6)。
结果显示：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，亮氨酸斑点显相同颜色且清晰，薄层分离效果好。
4、专属性考察
吸取供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4︰1︰1)为展开剂，展开。取出。晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰(见图7)。
结果显示：供试品色谱中，亮氨酸在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照物干扰，专属性强，且斑点清晰，分离效果好。
5、方法耐用性考察
吸取供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl分别在30℃和8℃条件下展开、显色、观察(见图8、图9)。
结果显示：温度对展开效果影响不大。
6、展距考察
吸取供试品溶液各2μl，亮氨酸溶液5μl、阴性对照溶液2μl，点于同一硅胶G薄层板上，展距分别为7.5cm和8cm，展开、显色、观察(见图10、图11)。
结果显示：展距为8cm时，对照品斑点和相应位置的供试品斑点未对齐，故确定本鉴别展距为7.5cm。
7、最终方法
摇匀本品，取25ml，加入6mol/L的盐酸50ml，回流加热水解4小时，放至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加70％乙醇2ml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取亮氨酸对照品，加70％甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液2μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水(4:1:1)为展开剂，展开，展距7.5cm，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
三批样品鉴别结果(见图12)。
(五)甘氨酸HPLC含量测定(高效液相色谱法测定甘氨酸的含量)
建立采用高效液相色谱法测定本品甘氨酸的含量测定方法，结果各峰分离较好，表明该法不受其它成分的干扰，专属性强，重现性、稳定性均较好，方法简便，可达到更好控制本品内在质量的目的。因此用高效液相色谱法测定本品甘氨酸的含量，作为控制本品质量的指标。实验结果如下：
1、实验条件的选择
1.1色谱柱的选择
曾用岛津、UltimateXB、VenusilAA等不同品牌氨基色谱柱进行分离，结果本品供试液的HPLC色谱图中甘氨酸峰与相邻杂质峰能很好分离，塔板数均在4000以上，见表4。故确定理论板数(n)按甘氨酸峰计，应不低于4000。
表4本品系统适用性试验结果
Figure BDA0002970708820000111
1.2流动相的选择
分别比较乙腈：甲醇：水(6:2:2)为流动相A、乙腈：甲醇：水(4:1:1)为流动相A、乙腈：甲醇：水(3:2:1)为流动相A，结果以乙腈：甲醇：水(6:2:2)为流动相A作为流动相时所测成分甘氨酸峰形良好，且与其它成分达到基线分离。
1.3检测器的选择
采用紫外检测器。
2、方法学考察及样品的测定
2.1仪器、试剂与样品
仪器：岛津LC-10AT高效液相色谱仪，岛津SPD-10Avp紫外检测器，威玛龙用色谱数据工作站。
甘氨酸对照品：由中国药品生物制品检定所提供(批号：140689-201103供含量测定用)。
试剂与样品：乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水，珍蜜口服液10批及缺珍珠粉的阴性对照品1批。
2.2方法与结果
2.2.1色谱条件
色谱柱：以氨丙基官能团键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈：甲醇：水(6:2:2)为流动相A，0.05mol/L乙酸钠水溶液(冰乙酸调节pH值为6.50±0.05)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；波长：检测波长为254nm；进样量：10μl。
表5梯度洗脱比例
Figure BDA0002970708820000121
Figure BDA0002970708820000131
2.2.2储备溶液制备
甘氨酸储备液：精密称取甘氨酸对照品0.90mg置于25ml容量瓶中，加入70％甲醇，摇匀，并稀释至刻度，即得。
异硫氰酸苯酯溶液：将500μl异硫氰酸苯酯用乙腈定容至20ml，得到0.2mol/L异硫氰酸苯酯溶液。
三乙胺溶液：将1.4ml三乙胺用乙腈定容至10ml，得到1.0mol/L三乙胺溶液
2.2.3对照品溶液的制备
精密量取甘氨酸使用液4ml置10ml容量瓶中，再精密加入异硫氰酸苯酯溶液及三乙胺溶液各2ml。摇匀，室温反应1h，然后加水至刻度。摇匀，即得。
2.2.4供试品溶液的制备
摇匀本品，精密量取25ml，置于平底烧瓶中，共3份。然后再精密加入6mol/L的盐酸40、50、60ml。精密称定。加热回流4h。放冷至室温。用6mol/L的盐酸补足减失重量。摇匀，过滤。精密量取续滤液50ml至蒸发皿中，蒸干。残渣用70％甲醇定容至25ml容量瓶中。精密量取4ml，置10ml容量瓶中，再精密加入异硫氰酸苯酯溶液及三乙胺溶液各2ml。摇匀，室温反应1h，然后加水至刻度。将溶液离心，取上清液，即得。
表6提取溶剂筛选结果
提取溶剂量 40 50 60
甘氨酸含量(mg/g) 0.750 0.843 0.833
2.2.5线性关系考察
精密吸取上述甘氨酸对照品溶液2、4、8、10、12、14μL，按上述色谱条件进样分析，测定峰面积，以峰面积(Y)对进样量(μg)(X)进行线性回归，求得回归方程分别是：Y＝7389814X-15308，r＝0.9998。实验结果显示，甘氨酸在0.0288～0.2016μg范围内，其峰面积(Y)与进样量(μg)(X)呈良好的线性关系(n＝6)。
2.2.6精密度试验
对同一供试品溶液(批号：20191223)，按拟订的色谱条件，连续测定6次，计算含量。结果6次测定结果的平均值为：1058455，RSD＝0.50％(n＝6)。详见表7。试验表明，本法的精密度良好。
表7甘氨酸精密度试验结果
Figure BDA0002970708820000141
2.2.7重复性试验
对同一批样品(批号：20191223)，按拟订的方法平行测定6份，结果见表8。6份测定结果的平均值为：865μg/g，RSD＝0.59％(n＝6)。结果表明，本法的重复性较好。
表8甘氨酸重复性试验结果(测定结果为两次进样平均值)
Figure BDA0002970708820000142
2.2.8稳定性试验
对同一供试品溶液(批号：20191223)，每隔一定时间测定一次，共测定6次。结果6次测定峰面积平均值为987982，RSD＝0.68％(n＝6)，详见表9。结果表明，供试品溶液在24小时内稳定。
表9甘氨酸稳定性试验结果
Figure BDA0002970708820000151
2.2.9阴性试验
取缺珍珠粉的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按拟订的色谱条件测定。结果阴性对照在甘氨酸出峰位置无吸收峰，表明处方中其它成分对测定无干扰。
2.2.10加样回收率测定
取已知含量的同一批样品(批号：20191223)约25ml，共9份，精密称定，分为3组，每组分别按照样品含量与对照品的量为1：0.8、1：1、1：1.2加入甘氨酸对照品，按供试品溶液的制备方法及色谱条件进行测定，测得甘氨酸的平均回收率为99.33％，RSD为1.04％。(n＝9)，符合定量分析的要求，详见表10。
表10甘氨酸回收率测定结果(测定结果为两次进样平均值)
Figure BDA0002970708820000152
2.2.11样品测定
按拟订的含量测定方法，测定了本品10批样品中甘氨酸的含量，结果见表11，10批样品中，最高为1331μg/25ml，最低为1208μg/25ml，平均含量为1269μg/25ml。考虑到药材来源的复杂性，故限度按平均值适当下浮约30％，保持原标准的以本品每瓶100ml含甘氨酸(C2H5NO2)计，不得少于3000μg。即1ml含甘氨酸(C2H5NO2)不得少于30μg。
表11样品测定结果
Figure BDA0002970708820000161

Claims (2)

1.一种珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法，其特征在于，所述方法包括(1)钙盐鉴别，(2)总氮含量测定，(3)亮氨酸TLC薄层鉴别，(4)甘氨酸HPLC含量测定；所述鉴别检测标准为：检出钙盐；亮氨酸在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰,分离效果好；总氮含量每ml不少于10ug，甘氨酸含量每ml不少于40ug；
所述珍珠复方制剂为“珍蜜口服液”，每瓶“珍蜜口服液”含珍珠粉1g、蜂蜜2g、枸橼酸1g以及水100ml；
所述总氮含量测定的方法，按《中国药典》2015年版四部通则0704氮测定法下第二法进行，并在凯氏烧瓶中滴加硫酸之后，再加入过氧化氢溶液，从而加速反应速率，并使反应完全，反应终点为溶液逐渐澄清；所述硫酸加入量为2ml,过氧化氢溶液的浓度为30％，加入量为3ml；
所述甘氨酸HPLC含量测定采用的色谱条件为：色谱柱以氨丙基官能团键合硅胶为填充剂；以乙腈:甲醇:水＝6:2:2为流动相A，0.05mol/L乙酸钠水溶液为流动相B，检测波长为254nm；进样量为10μl；并按照以下梯度比例进行洗脱：
Figure FDA0004139725330000011
2.根据权利要求1所述的珍珠复方制剂中珍珠质量标准的控制方法，其特征在于，所述亮氨酸TLC薄层鉴别的方法为：取珍珠复方制剂25ml，加入6mol/L的盐酸50ml，回流加热水解4小时，放至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加70％乙醇2ml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液；另取亮氨酸对照品，加70％甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液2μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4:1:1的正丁醇-冰乙酸-水为展开剂，展开，展距7.5cm，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
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