CN112888445A - 治疗老年化相关病症的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状、杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞数量、改善有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观以及有助于治疗有需要的受试者的肥胖症的方法，所述方法包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于所述受试者。

Description

治疗老年化相关病症的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求以下申请的优先权：2019年3月11日提交的美国专利申请第62/816,683号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,038号；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,244号；2019年7月31日提交的美国专利申请第62/881,039号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/724,969号；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,230号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,043号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,010号；2018年10月22日提交的美国专利申请第62/749,007号；2018年10月17日提交的美国专利申请第62/746,832号；2018年10月23日提交的美国专利申请第62/749,506号；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,241号；和2019年7月31日提交的美国专利申请第62/881,088号，它们各自以全文引用的方式并入本文。

技术领域

本公开涉及免疫学和细胞生物学领域。

背景技术

衰老是不可逆的生长停滞的一种形式，伴随着表型变化、对细胞凋亡的抗性和损伤感测信号传导路径的活化。细胞衰老最初描述为培养的人纤维母细胞失去了增殖能力，在约50群体翻倍后到达永久停滞(称为海弗利克极限(Hayflick limit))。衰老被认为是可由广泛范围的内在和外在伤害，包括氧化和遗传毒性应激、DNA损伤、端粒损耗、致癌活化、线粒体功能障碍或化疗剂诱导的应激反应。

衰老细胞保持代谢活性，并且可通过其分泌表型影响组织止血、疾病和老年化。衰老被认为是生理过程，并且对促进伤口愈合、组织稳态、再生和纤维化调节很重要。例如，在伤口愈合期间观察到衰老细胞的瞬时诱导，并且其有助于伤口愈合。衰老还起着抑制肿瘤的作用。但是，衰老细胞的积累也驱动老年化以及老年化相关疾病和病状。衰老表型还可触发慢性炎性反应，并且因此增强慢性炎症病状以促进肿瘤生长。衰老与老年化之间的联系最初是基于衰老细胞在老年化组织中积累的观察结果。使用转基因模型已经能够在许多老年化相关病症中系统地检测衰老细胞。选择性消除衰老细胞的策略表明，衰老细胞在老年化相关病症中起着因果作用。

发明内容

本发明基于以下发现：向患有癌症的哺乳动物施用NK细胞活化剂使得肿瘤被抑制，并且向糖尿病动物模型施用NK细胞活化剂显示出改善的皮肤和毛发外观和质地，以及降低的血液葡萄糖水平。鉴于此发现，本文提供了治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。本文还提供了杀死或减少有需要的受试者中的衰老细胞数量的方法，其包括将治疗有效量的一种或多种NK细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。本文还提供了在一段时间内改善有需要的受试者的皮肤和/或头发的质地和/或外观的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞。本文还提供了有助于在一段时间内治疗有需要的受试者的肥胖症的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。

本文提供了治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。

本文还提供了杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞数量的方法，包括将治疗有效量的一种或多种NK细胞活化剂施用于受试者。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，衰老细胞是衰老的癌细胞、衰老的单核细胞、衰老的淋巴细胞、衰老的星形胶质细胞、衰老的微神经胶质细胞、衰老的神经元、衰老的组织纤维母细胞、衰老的真皮纤维母细胞、衰老的角质细胞，或其它分化组织特异性分裂功能细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，衰老癌细胞是化学疗法诱导的衰老细胞或辐射诱导的衰老细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，受试者已经鉴定或诊断患有老年化相关疾病或病状。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自以下群组：癌症、自体免疫疾病、代谢疾病、神经退化性疾病、心血管疾病、皮肤病、早衰疾病和脆性疾病。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下群组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃癌和食道癌、胰脏癌、前列腺癌、乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，自体免疫疾病是1型糖尿病。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，代谢疾病选自以下群组：肥胖症、脂质营养不良和2型糖尿病。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，神经退化性疾病选自以下群组：阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)和痴呆症。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，心血管疾病选自以下群组：冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和肺动脉高压。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，皮肤病选自以下群组：伤口愈合、秃发、皱纹、老年性雀斑痣、皮肤变薄、着色性干皮病和先天性角化不良。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，早衰疾病选自以下群组：早衰和呼奇逊-吉尔福早衰综合症(Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome)。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，脆性疾病选自以下群组：脆性、疫苗接种反应、骨质疏松症和肌肉减少症。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自以下群组：年龄相关黄斑变性、骨关节炎、脂肪萎缩、特发性肺纤维化、肾脏移植失败、肝纤维化、骨量损失、肌肉减少症、年龄相关的肺组织弹性丧失、骨质疏松症、年龄相关的肾功能障碍，和化学诱发的肾功能障碍。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，老年化相关疾病或病状是2型糖尿病或动脉粥样硬化。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，施药使得受试者的靶组织中的衰老细胞数量减少。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，靶组织选自：脂肪组织、胰组织、肝组织、肺组织、脉管系统、骨骼组织、中枢神经系统(CNS)组织、眼组织、皮肤组织、肌肉组织和二级淋巴器官组织。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，施药使得活化NK细胞中CD25、CD69、mTORC1、SREBP1、IFN-γ和颗粒酶B的表达水平增加。

本文还提供了治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，包括将治疗有效数量的活化NK细胞施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。

本文还提供了杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞数量的方法，包括将治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，衰老细胞是衰老的癌细胞、衰老的单核细胞、衰老的淋巴细胞、衰老的星形胶质细胞、衰老的微神经胶质细胞、衰老的神经元、衰老的组织纤维母细胞、衰老的真皮纤维母细胞、衰老的角质细胞，或其它分化组织特异性分裂功能细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，衰老癌细胞是化学疗法诱导的衰老细胞或辐射诱导的衰老细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，受试者已经鉴定或诊断患有老年化相关疾病或病状。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自以下群组：癌症、自体免疫疾病、代谢疾病、神经退化性疾病、心血管疾病、皮肤病、早衰疾病和脆性疾病。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，癌症选自以下群组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃癌和食道癌、胰脏癌、前列腺癌、乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，自体免疫疾病是1型糖尿病。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，代谢疾病选自以下群组：肥胖症、脂质营养不良和2型糖尿病。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，神经退化性疾病选自以下群组：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和痴呆。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，心血管疾病选自以下群组：冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和肺动脉高压。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，皮肤病选自以下群组：伤口愈合、秃发、皱纹、老年性雀斑痣、皮肤变薄、着色性干皮病和先天性角化不良。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，早衰疾病选自以下群组：早衰和呼奇逊-吉尔福早衰综合症。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，脆性疾病选自以下群组：脆性、疫苗接种反应、骨质疏松症和肌肉减少症。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自以下群组：年龄相关黄斑变性、骨关节炎、脂肪萎缩、特发性肺纤维化、肾脏移植失败、肝纤维化、骨量损失、肌肉减少症、年龄相关的肺组织弹性丧失、骨质疏松症、年龄相关的肾功能障碍，和化学诱发的肾功能障碍。

本文所述的任一种方法的一些实施例进一步包括：获得休眠NK细胞；以及使休眠NK细胞在试管内、在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后将所述NK细胞施用于受试者。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是人工NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是单倍型休眠NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。本文所述的任一种方法的一些实施例进一步包括分离出活化NK细胞，随后将活化NK细胞施用于受试者。本文所述的任一种方法的一些实施例进一步包括将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入休眠NK细胞或活化NK细胞之后施用于受试者。

本文还提供了在一段时间内改善有需要的受试者的皮肤和/或头发的质地和/或外观的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂。

本文还提供了在一段时间内改善有需要的受试者的皮肤和/或头发的质地和/或外观的方法，其包括向受试者施用治疗有效数量的活化NK细胞。本文所述的任一种方法的一些实施例进一步包括：获得休眠NK细胞；以及使休眠NK细胞在试管内、在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后将所述NK细胞施用于受试者。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是人工NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是单倍型休眠NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。本文所述的任一种方法的一些实施例进一步包括分离出活化NK细胞，随后将活化NK细胞施用于受试者。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法在一段时间内提供受试者皮肤的质地和/或外观的改善。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的皮肤在一段时间内的皱纹形成速率降低。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的皮肤在一段时间内的着色改善。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的皮肤质地在一段时间内改善。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者头发的质地和/或外观在一段时间内改善。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者在一段时间内的白发形成速率降低。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的白发数量在一段时间内减少。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的脱发率随时间降低。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的头发质地在一段时间内改善。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述时间段在约一个月与约10年之间。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者皮肤中的衰老真皮纤维母细胞数量在一段时间内减少。

本文还提供了有助于在一段时间内治疗有需要的受试者的肥胖症的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于受试者。

本文还提供了有助于在一段时间内治疗有需要的受试者的肥胖症的方法，包括将治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。本文所述的任一种方法的一些实施例进一步包括：获得休眠NK细胞；以及使休眠NK细胞在试管内、在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后将所述NK细胞施用于受试者。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是人工NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是单倍型休眠NK细胞。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。本文所述的任一种方法的一些实施例进一步包括分离出活化NK细胞，随后将活化NK细胞施用于受试者。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的质量在一段时间内降低。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的身体质量指数(BMI)在一段时间内降低。在一些本文所述的任一种方法的实施例中，所述方法使得受试者的前期糖尿病恶化成2型糖尿病的速率降低。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的空腹血清葡萄糖水平降低。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的胰岛素敏感性增加。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的动脉粥样硬化严重程度降低。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，所述时间段在约两周与约10年之间。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种引起以下中的一者或多者活化：IL-2的受体、IL-7的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、IL-33的受体；CD16、CD69、CD25、CD59、CD352、NKp80、DNAM-1、2B4、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、KIR2DS1、KIR2Ds2/3、KIR2DL4、KIR2DS4、KIR2DS5和KIR3DS1的受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IL-2受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-2受体的可溶性IL-2或激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IL-7受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-7受体的可溶性IL-7或激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IL-12受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-2受体的可溶性IL-12或激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IL-15受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-15受体的可溶性IL-15或激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IL-21受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-21受体的可溶性IL-21或激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IL-33受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-33受体的可溶性IL-33或激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起CD16受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD16受体的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起CD69受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD69的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起CD25或CD59受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD25或CD59的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起CD352受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD352的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起NKp80受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp80的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起DNAM-1受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到DNAM-1的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起2B4受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到2B4的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起NKp30受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp30的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起NKp44受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp44的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起NKp46受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp46的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起NKG2D受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKG2D的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DS1受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS1的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DS2/3受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS2/3的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DL4受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL4的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DS4受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS4的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DS5受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS5的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR3DS1受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DS1的激动性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种引起以下中的一种或多种的活化减少：PD-1、TGF-β受体、TIGIT、CD1、TIM-3、Siglec-7、IRP60、Tactile、IL1R8、NKG2A/KLRD1、KIR2DL1、KIR2DL2/3、KIR2DL5、KIR3DL1、KIR3DL2、ILT2/LIR-1和LAG-2。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起PD-1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到PD-1的拮抗性抗体、可溶性PD-1、可溶性PD-L1，或特异性结合到PD-L1的抗体。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起TGF-β受体活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是可溶性TGF-β受体、特异性结合到TGF-β的抗体，或特异性结合到TGF-β受体的拮抗性抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起TIGIT活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到TIGIT的拮抗性抗体、可溶性TIGIT，或特异性结合到TIGIT配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起CD1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD1的拮抗性抗体、可溶性CD1，或特异性结合到CD1配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起TIM-3活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到TIM-3的拮抗性抗体、可溶性TIM-3，或特异性结合到TIM-3配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起Siglec-7活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到Siglec-7的拮抗性抗体，或特异性结合到Siglec-7配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IRP60活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IRP60的拮抗性抗体，或特异性结合到IRP60配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起Tactile活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到Tactile的拮抗性抗体，或特异性结合到Tactile配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起IL1R8活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL1R8的拮抗性抗体，或特异性结合到IL1R8配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起NKG2A/KLRD1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKG2A/KLRD1的拮抗性抗体，或特异性结合到NKG2A/KLRD1配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DL1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL1的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR2DL1配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DL2/3活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL2/3的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR2DL2/3配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR2DL5活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL5的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR2DL5配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR3DL1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DL1的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR3DL1配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起KIR3DL2活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DL2的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR3DL2配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起ILT2/LIR-1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到ILT2/LIR-1的拮抗性抗体，或特异性结合到ILT2/LIR-1配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，引起LAG-2活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到LAG-2的拮抗性抗体，或特异性结合到LAG-2配体的抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是单链嵌合多肽，所述单链嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合域；(ii)可溶性组织因子域；以及(iii)第二靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与可溶性组织因子域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域与第二靶标结合域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域和第二靶标结合域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于第一靶标结合域和第二靶标结合域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第二靶标结合域与可溶性组织因子域直接彼此邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于第二靶标结合域和可溶性组织因子域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域各自是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域包括与SEQ ID NO:93至少80％一致的序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域包括与SEQ ID NO:93至少90％一致的序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域包括与SEQ ID NO:93至少95％一致的序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域不包括以下中的一个或多个：位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域不包括以下中的任一个：位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域不能够结合因子VIIa。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括一个或多个位于其N端和/或C端的其它靶标结合域。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽包括一个或多个位于其N端的其它靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一个或多个其它靶标结合域直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于至少一个其它靶标结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽包括一个或多个位于其C端的其它靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一个或多个其它靶标结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于至少一个其它靶标结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽包括一个或多个位于其N端和C端的其它靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，位于N端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于N端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，位于C端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于C端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性地结合到相同抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性地结合到相同的表位。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包括相同的氨基酸序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性地结合到相同抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性地结合到相同的表位。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性地结合到不同抗原。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个特异性地结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一嵌合多肽，其包括：(i)第一靶标结合域、(ii)可溶性组织因子域，和(iii)一对亲和域中的第一域；以及(b)第二嵌合多肽，其包括：(i)一对亲和域中的第二域，和(ii)第二靶标结合域，其中第一嵌合多肽与第二嵌合多肽经由亲和域对的第一域与第二域的结合而发生缔合。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域各自是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个特异性地结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括一个或多个其它靶标结合域，其中一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与一个或多个其它抗原结合域中的至少一个之间的接头序列，和/或介于一个或多个其它抗原结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括一个或多个位于第一嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接亲和域对中的第一域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接第一靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第一靶标结合域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。在本文所述的任一种方法一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。在本文所述的任一种方法一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括接头序列，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括一个或多个位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接亲和域对中的第二域。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第二域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接第二靶标结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第二靶标结合域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性地结合到相同抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性地结合到相同的表位。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包括相同的氨基酸序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性地结合到相同抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性地结合到相同的表位。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性地结合到不同抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合域包括scFv。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个特异性地结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II

(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域包括与SEQ ID NO:93至少80％一致的序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域包括与SEQ ID NO:93至少90％一致的序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域包括与SEQ ID NO:93至少95％一致的序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域不包括以下中的一个或多个：位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人可溶性组织因子域不包括以下中的任一个：位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域不能够结合到因子VIIa。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，亲和域对是来自人IL-15受体α链的寿司域(IL-15Rα)和可溶性IL-15。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，人IL-15Rα是成熟的全长IL-15Rα。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，亲和域对选自以下群组：芽胞杆菌核糖核酸酶(barnase)和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子(barnstar)、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块，以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包括：(a)第一和第二嵌合多肽，其中每一者包括：(i)第一靶标结合域、(ii)Fc域和(iii)一对亲和域中的第一域；以及(b)第三和第四嵌合多肽，其中每一者包括：(i)一对亲和域中的第二域和(ii)第二靶标结合域，其中第一和第二嵌合多肽与第三和第四嵌合多肽经由亲和域对中的第一域和第二域的结合发生缔合，并且第一和第二嵌合多肽经由其Fc域发生缔合。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一和第二嵌合多肽中的第一靶标结合域与Fc域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法一些实施例中，第一和第二嵌合多肽进一步包括介于第一和第二嵌合多肽中的第一靶标结合域与Fc域之间的接头序列。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一和第二嵌合多肽中的Fc域与亲和域对中的第一域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一和第二嵌合多肽中的Fc域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第三和第四嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域彼此直接邻接。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第三和第四嵌合多肽进一步包括介于第三和第四嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域与第二靶标结合域各自是抗原结合域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个特异性地结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域是不刺激血液凝结的人可溶性组织因子域。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，可溶性组织因子域包含或由人野生型可溶性组织因子的序列组成。

如本文所用，术语“嵌合”是指多肽包括最初来源于两个不同来源(例如两种天然存在的不同蛋白质，例如来自相同或不同物种)的氨基酸序列(例如结构域)。举例而言，嵌合多肽可以包括来自至少两种天然存在的不同人蛋白质的结构域。在一些实例中，嵌合多肽可包括作为合成序列(例如scFv)的结构域和来源于天然存在的蛋白质(例如天然存在的人蛋白质)的结构域。在一些实施例中，嵌合多肽可以包括至少两个不同的作为合成序列(例如两个不同scFv)的结构域。

“活化NK细胞”是一种NK细胞，其展现CD25、CD69、MTOR-C1、SREBP、IFN-γ和颗粒酶(例如颗粒酶B)中的两种或更多种(例如三种、四种、五种或六种)的升高的表达水平，例如相较于休眠NK细胞。本文描述了用于鉴定CD25、CD69、MTOR-C1、SREBP、IFN-γ和颗粒酶(例如颗粒酶B)的表达水平的示例性方法。

“休眠NK细胞”是一种NK细胞，其对CD25、CD69、MTOR-C1、SREBP、IFN-γ和颗粒酶(例如颗粒酶B)中的两种或更多种(例如三种、四种、五种或六种)的表达减少，例如相较于活化NK细胞。

“NK细胞活化剂”是一种诱导或促进(单独或与其它NK细胞活化剂组合)休眠NK细胞发展成活化NK细胞的药剂。本文描述了NK细胞活化剂的非限制性实例和方面。

“抗原结合域”是能够特异性结合到一种或多种不同抗原的一个或多个蛋白质结构域(例如，由来自单一多肽的氨基酸形成或由来自两种或更多种多肽(例如相同或不同的多肽)的氨基酸形成)。在一些实例中，抗原结合域能够以与天然存在的抗体相似的特异性和亲和力结合到抗原或表位。在一些实施例中，抗原结合域可以是抗体或其片段。在一些实施例中，抗原结合域可包括替代支架。抗原结合域的非限制性实例在本文中描述。抗原结合域的其它实例是本领域已知的。

“可溶性组织因子域”是指与缺少跨膜域和胞内域的野生型哺乳动物组织因子蛋白(例如人野生型组织因子蛋白)的区段具有至少70％一致性((例如至少75％一致性、至少80％一致性、至少85％一致性、至少90％一致性、至少95％一致性、至少99％一致性或100％一致性)的多肽。本文描述了可溶性组织因子域的非限制性实例。

术语“可溶性白介素蛋白”在本文中用于指成熟并且分泌的白介素蛋白或其生物活性片段。在一些实例中，可溶性白介素蛋白可包括与成熟和分泌的哺乳动物野生型白介素蛋白(例如人野生型白介素蛋白)至少70％一致、至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致并且保持其生物活性的序列。可溶性白介素蛋白的非限制性实例在本文中描述。

术语“可溶性细胞因子蛋白”在本文中用于指成熟和分泌的细胞因子蛋白或其生物活性片段。在一些实例中，可溶性细胞因子蛋白可包括与成熟和分泌的哺乳动物野生型白介素蛋白(例如人野生型白介素蛋白)至少70％一致、至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致并且保持其生物活性的序列。可溶性细胞因子蛋白的非限制性实例在本文中描述。

术语“可溶性白介素受体”在本文中以最广泛的意义使用，是指一种多肽，其缺乏能够结合一个或多个其天然配体(例如，在生理条件下，例如在室温下、在磷酸盐缓冲盐水中)的跨膜域(和任选的胞内域)。举例来说，可溶性白介素受体可包括与野生型白介素受体的胞外域至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)并且保持其特异性结合到一个或多个其天然配体的能力、但缺少其跨膜域(并且任选地，还缺少其胞内域)的序列。本文描述了可溶性白介素受体的非限制性实例。

术语“可溶性细胞因子受体”在本文中以最广泛的意义使用，是指一种多肽，其缺乏能够结合一个或多个其天然配体(例如在生理条件下，例如在室温下、在磷酸盐缓冲液中)的跨膜域(和任选的胞内域)。举例来说，可溶性细胞因子受体可包括与野生型细胞因子受体的胞外域至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)并且保持其特异性结合到一个或多个其天然配体的能力、但缺少其跨膜域(并且任选地，还缺少其胞内域)的序列。本文描述了可溶性细胞因子受体的非限制性实例。

术语“抗体”在本文中以其最广泛的意义使用，并且包括某些类型的免疫球蛋白分子，其包括一个或多个特异性结合到抗原或表位的抗原结合域。抗体具体包括例如完整抗体(例如完整免疫球蛋白)、抗体片段和多特异性抗体。抗原结合域的一个实例是由VH-VL二聚体形成的抗原结合域。本文描述了抗体的其它实例。抗体的其它实例是本领域已知的。

“亲和力”是指抗原结合位点与其结合伴侣(例如抗原或表位)之间的非共价相互作用力的总和。除非另有说明，否则如本文所用，“亲和力”是指固有结合亲和力，其反映了抗原结合域的成员与抗原或表位之间的1：1相互作用。分子X对其伴侣Y的亲和力可以用解离平衡常数(K_D)表示。对解离平衡常数有贡献的动力学组分在下文中更详细地描述。亲和力可以通过本领域已知的常规方法来测量，包括本文所述的方法。亲和力可以例如使用表面等离子体共振(SPR)技术(例如

)或生物层干涉测量法(例如

)来测定。测定对抗原结合域和其相应抗原或表位的亲和力的其它方法是本领域已知的。

如本文所用，“单链多肽”是指单条蛋白质链。

如本文所用，“多链多肽”是指包含两个或更多个(例如三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)蛋白链(例如至少第一嵌合多肽和第二多肽)的多肽，其中两个或更多个蛋白链通过非共价键缔合形成四级结构。

术语“一对亲和域”是以小于1×10^-7M(例如小于1×10^-8M、小于1×10^-9M、小于1×10^-10M或小于1×10^-11M)的K_D彼此特异性结合的两个不同的蛋白质结构域。在一些实例中，一对亲和域可以是一对天然存在的蛋白质。在一些实施例中，一对亲和域可以是一对合成蛋白。亲和域对的非限制性实例在本文中描述。

术语“表位”是指特异性结合到抗原结合域的抗原的一部分。表位可以例如由表面可及的氨基酸残基和/或糖侧链组成，并且可以具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象表位和非构象表位的区别在于，在存在变性溶剂的情况下，对前者的结合可能会消失，而对后者的结合则不会消失。表位可包含直接参与结合的氨基酸残基和不直接参与结合的其它氨基酸残基。鉴定与抗原结合域结合的表位的方法是本领域已知的。

术语“治疗”是指改善病症的至少一种症状。在一些实例中，所治疗的病症是癌症，并且改善癌症的至少一种症状包括减少异常增殖、基因表达、信号传导、翻译和/或因子的分泌。一般来说，治疗方法包括向需要或已确定需要这种治疗的受试者施用治疗有效量的组合物，从而减少病症的至少一种症状。

除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。本文描述用于本发明的方法和材料；还可使用其它在本领域已知的合适的方法和材料。材料、方法和实例仅具说明性，而非旨在限制性。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献通过引用以其整体并入。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包括定义)为准。

本发明的其它特征和优点将通过以下详细描述和附图以及通过权利要求变得显而易见。

附图说明

图1A-1B显示了示例性多链多肽在C57BL/6小鼠中的免疫刺激结果。图1A显示了相较于对照溶液处理的小鼠，经递增剂量的示例性多链多肽处理的小鼠的脾脏重量。图1B显示了相较于对照溶液处理的小鼠，经递增剂量的示例性多链多肽处理的小鼠的脾脏中所存在的免疫细胞类型的百分比。

图2A-2B显示了示例性多链多肽在C57BL/6小鼠中的免疫刺激持续时间。图2A显示了经3mg/kg示例性多链多肽处理的小鼠的脾脏在92小时期间的重量。图2B显示了经3mg/kg示例性多链多肽处理的小鼠的脾脏中所存在的免疫细胞类型在92小时期间的百分比。

图3A-3B显示了示例性多链多肽诱导免疫细胞对Ki67和颗粒酶B的表达。图3A显示了多链多肽处理后，CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、自然杀手(NK)细胞和CD19⁺B细胞在不同时间点对Ki67的表达。图3B显示了多链多肽处理后，CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、自然杀手(NK)细胞和CD19⁺B细胞在不同时间点对颗粒酶B的表达。

图4显示了处理之后，由示例性多链多肽处理的小鼠制备的脾细胞在不同时间点的肿瘤抑制效应。

图5A-5B显示了饲喂对照饮食、高脂肪饮食且未处理的B6.129P2-ApoE^tm1Unc/J小鼠(购自杰克逊实验室(Jackson Laboratory))以及饲喂高脂肪饮食且经TGFRt15-TGFR、2t2或21t15-TGFR处理的小鼠的血液中的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、自然杀手(NK)细胞和CD19⁺B细胞的百分比和增殖速率。图5A显示了每个对照组和实验组中不同细胞类型的百分比。图5B显示了每个对照组和实验组中不同细胞类型的增殖速率。

图6A-6E显示了饲喂对照饮食或高脂肪饮食且未处理或经TGFRt15-TGFR、2t2或21t15-TGFR处理的小鼠的示例性身体外观。

图7显示了饲喂对照饮食或高脂肪饮食且未处理或经TGFRt15-TGFR、2t2或21t15-TGFR处理的小鼠的空腹体重。

图8显示了饲喂对照饮食或高脂肪饮食且未处理或经TGFRt15-TGFR、2t2或21t15-TGFR处理的小鼠的空腹血糖水平。

图9A-9F显示了化学疗法诱导的衰老B16F10细胞和衰老基因的表达。图9A显示了使用SAβ-gal染色可视化的经化学疗法诱导的衰老B16F10细胞。图9B-9F显示了化学疗法诱导的衰老B16F10细胞随时间对p21、IL6、DPP4、RATE1E和ULBP1的表达。

图10A-10F显示了化学疗法诱导的衰老B16F10细胞的集落形成和干细胞标志物的表达。图10A显示了化学疗法诱导的衰老B16F10细胞的集落形成。图10B和10C显示了相较于对照B16F10细胞，化学疗法诱导的衰老B16F10细胞对Oct4 mRNA和Notch4 mRNA的表达。图10D-10F显示了化学疗法诱导的衰老B16F10细胞对三种干细胞标志物(包括CD44、CD24和CD133)中的两种呈双重阳性的百分比。

图11A-11C显示了化学疗法诱导的衰老B16F10细胞的迁移和侵袭特性。图11A显示了迁移分析的结果，所述迁移分析对化学疗法诱导的具有干细胞特性的衰老细胞(B16F10-SNC-CSC)与对照B16F10细胞进行了比较。图11B和11C显示了侵袭分析的结果，所述侵袭分析对化学疗法诱导的具有干细胞特性的衰老细胞(B16F10-SNC-CSC)与对照B16F10细胞进行了比较。

图12A和12B显示了试管内扩增的NK细胞和其对化学疗法诱导的具有干细胞特性的衰老细胞(B16F10-SNC-CSC)或对照B16F10细胞的细胞毒性。图12A显示了获得试管内扩增的NK细胞的示例性工艺示意图。图12B显示了所扩增的NK细胞对化学疗法诱导的具有干细胞特性的衰老细胞(B16F10-SNC-CSC)或对照B16F10细胞的细胞毒性。

图13A-13C显示了使用小鼠黑色素瘤模型进行组合处理的结果。图13A显示了用于治疗小鼠模型的黑色素瘤的示例性示意图。图13B和13C显示了相较于化学疗法或单独的TA99处理，包括TGFRt15-TGFR在内的组合处理使肿瘤体积随时间发生的变化。

图14显示了对人胰脏肿瘤细胞系SW1990衰老的诱导和衰老的SW1990细胞对CD44和CD24的表达(相较于对照SW1990细胞)。

图15显示了化学疗法诱导的衰老SW1990细胞对衰老标志物的表达。

图16显示了试管内活化的人NK细胞对化学疗法诱导的衰老SW1990细胞或对照SW1990细胞的细胞毒性。

图17显示了示例性IL-12/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图18显示了示例性IL-18/TF/IL-15 DNA构建体的示意图。

图19显示了示例性IL-12/IL-15RαSu与IL-18/TF/IL-15 DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图20显示了示例性IL-12/IL-15RαSu与IL-18/TF/IL-15融合蛋白之间相互作用而产生IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu复合物(18t15-12s)的示意图。

图21显示了抗TF抗体亲和柱纯化洗脱18t15-12s的色谱。

图22显示了在分析型尺寸排阻柱上洗脱后，抗TF Ab/SEC纯化的18t15-12s蛋白的示例性色谱特征曲线，证明多蛋白单体18t15-12s复合物从蛋白质聚集体中分离出来。

图23显示了二硫键还原后，18t15-12s复合物的4-12％SDS-PAGE的实例。泳道1：SeeBlue Plus2标志物；泳道2：抗TF Ab纯化的18t15-12s(0.5μg)；泳道3：抗TF Ab纯化的18t15-12s(1μg)。

图24显示了脱糖基化和未脱糖基化18t15-12s的SDS PAGE分析。泳道1：抗TF Ab纯化的18t15-12s(0.5μg)，未脱糖基化；泳道2：抗TF Ab纯化的18t15-12s(1μg)，未脱糖基化；泳道3：18t15-12s(1μg)，脱糖基化；泳道4：Mark12未染色标志物。

图25显示了用于18t15-12s复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子捕捉抗体和生物素化抗人IL-12检测抗体(BAF 219)。

图26显示了用于18t15-12s复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子捕捉抗体和生物素化抗人IL-15检测抗体(BAM 247)。

图27显示了用于18t15-12s复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子捕捉抗体和生物素化抗人IL-18检测抗体(D045-6)。

图28显示了用于18t15-12s复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子(I43)捕捉抗体和抗人组织因子检测抗体。

图29显示了由18t15-12s复合物(空心方形)和重组IL-15(黑色方形)介导的IL-15依赖性32Dβ细胞的增殖。

图30显示了18t15-12s复合物(空心方形)内的IL-18的生物活性，其中重组IL-18(黑色方形)和重组IL-12(黑色圆)分别充当阳性和阴性对照。

图31显示了18t15-12s复合物(空心方形)内的IL-12的生物活性，其中重组IL-12(黑色圆)和重组IL-18(空心方形)分别充当阳性和阴性对照。

图32A和32B显示了18t15-12s复合物诱导NK细胞在细胞表面上表达CD25以及18t15-12s复合物诱导NK细胞在细胞表面上表达CD69。

图33显示了18t15-12s复合物诱导NK细胞在细胞内表达IFN-γ的流式细胞术图。

图34显示了18t15-12s诱导的人NK细胞对K562细胞的细胞毒性。

图35显示了示例性IL-12/IL-15RαSu/αCD16 DNA构建体的示意图。

图36显示了示例性IL-18/TF/IL-15 DNA构建体的示意图。

图37显示了示例性IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv与IL-18/TF/IL-15 DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图38显示示例性18t15-12s/αCD16蛋白复合物的示意图。

图39显示了用于18t15-12s16复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子抗体捕捉抗体和生物素化抗人IL-12(BAF 219)(深色线)或抗人组织因子检测抗体(浅色线)。

图40显示示例性TGFβRII/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图41显示示例性IL-21/TF/IL-15构建体的示意图。

图42显示示例性IL-IL-21/TF/IL-15与TGFβRII/IL-15RαSu构建体之间的相互作用的示意图。

图43显示了示例性TGFβRII/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间相互作用而产生IL-21/TF/IL-15/TGFβRII/IL-15RαSu复合物(21t15-TGFRs)的示意图。

图44显示了抗TF抗体亲和柱纯化洗脱21t15-TGFRs的色谱。

图45显示了示例性21t15-TGFRs尺寸排阻色谱，其显示了主要蛋白质峰和高分子量峰。

图46显示了二硫键还原后，21t15-TGFRs复合物的4-12％SDS-PAGE的实例。泳道1：Mark12未染色标志物(左侧的数字表示分子量(kDa))；泳道2：21t15-TGFRs(0.5μg)；泳道3：21t15-TGFRs(1μg)；泳道4：21t15-TGFRs，脱糖基化(1μg)，其中MW是53kDa和39.08kDa的预期大小。

图47显示了用于21t15-TGFRs复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子捕捉抗体和生物素化抗人IL-21检测抗体(13-7218-81，BioLegend)。

图48显示了用于21t15-TGFRs复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子捕捉抗体和生物素化抗人IL-15检测抗体(BAM 247，安迪生物科技公司(R&D Systems))。

图49显示了用于21t15-TGFRs复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子捕捉抗体和生物素化抗人TGFβRII检测抗体(BAF241，安迪生物科技公司)。

图50显示了用于21t15-TGFRs复合物的夹层ELISA，其包含抗人组织因子(I43)捕捉抗体和抗人组织因子检测抗体。

图51显示相较于IL-15(黑色方形)，21t15-TGFRs复合物(空心方形)介导32Dβ细胞发生IL-15依赖性增殖。

图52显示了21t15-TGFRs复合物(空心方形)内的TGFβRII域的生物活性。TGFβRII/Fc(黑色方形)充当阳性对照。

图53显示了21t15-TGFRs复合物诱导NK细胞在细胞表面上表达CD25的流式细胞术图。

图54显示了21t15-TGFRs复合物诱导NK细胞在细胞表面上表达CD69的流式细胞术图。

图55显示了21t15-TGFRs复合物诱导NK细胞在细胞内表达IFN-γ的流式细胞术图。

图56显示了21t15-TGFRs诱导人NK细胞针对K562细胞的细胞毒性。

图57是示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的示意图。

图58是色谱，其显示了示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽从抗组织因子亲和柱中的洗脱。

图59是色谱，其显示了负载有示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱的洗脱。

图60是使用抗组织因子亲和柱纯化的示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳图。

图61是显示了使用实例1所述方法执行的ELISA定量示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的曲线图。纯化的组织因子用作对照。

图62是显示了示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激从两位供者的血液分离出的CD4⁺T细胞表达CD25的能力的曲线图。如实例2所述进行实验。

图63是显示了示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激从两位供者的血液分离出的CD8⁺T细胞表达CD25的能力的曲线图。如实例2所述进行实验。

图64是显示了示例性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激从两位供者的血液分离出的CD4⁺T细胞表达CD69的能力的曲线图。如实例2所述进行实验。

图65显示示例性IL-7/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图66显示示例性IL-21/TF/IL-15 DNA构建体的示意图。

图67显示示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15 DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图68显示了示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间相互作用而产生IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu复合物(21t15-7s)的示意图。

图69显示示例性IL-21/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图70显示示例性IL-7/TF/IL-15 DNA构建体的示意图。

图71显示示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15 DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图72显示了示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15融合蛋白之间相互作用而产生IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu复合物(7t15-21s)的示意图。

图73显示了从两个不同供者的血液中分离出的人NK细胞(2×10⁶个细胞/毫升)的耗氧速率(OCR)(皮摩尔/分钟)。

图74显示了

从两个不同供者的血液中分离出的人NK细胞(2×10⁶个细胞/毫升)的胞外酸化速率(ECAR)(mpH/min)。

图75显示7t15-16s21构建体的示意图。

图76显示7t15-16s21构建体的另一示意图。

图77A和77B显示了相较于对照蛋白，7t15-16s21对表达人CD16b的CHO细胞的结合。

图78A-78C是来自使用针对IL-15、IL-21和IL-7的抗体检测7t15-16s21的ELISA实验的结果。

图79显示了用7t15-16s21或重组IL-15进行32Dβ细胞增殖分析的结果。

图80显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含7t15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图81显示了7t15-16s21的分析型SEC特征曲线。

图82显示TGFRt15-16s21构建体的示意图。

图83显示TGFRt15-16s21构建体的另一示意图。

图84A和84B显示了TGFRT15-16S21和7t15-21s与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。图84A显示了TGFRT15-16S21与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。图84B显示了7t15-21s与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。

图85显示了TGFRt15-16s21和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图86显示用TGFRt15-16s21或重组IL-15进行的32Dβ细胞增殖分析的结果。

图87A-87C显示了使用ELISA、利用相应抗体检测TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII的结果。

图88显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含TGFRt15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图89显示TGFRt15-16s21的还原型SDS-PAGE分析的结果。

图90显示7t15-7s构建体的示意图。

图91显示7t15-7s构建体的另一示意图。

图92显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含7t15-7s蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图93显示使用ELISA检测7t15-7s中的TF、IL-15和IL-7。

图94A和94B显示了经7t15-7s处理和经对照物处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图94A显示了相较于PBS对照组，经7t15-7s处理的小鼠的脾脏重量。图94B显示了相较于PBS对照组，经7t15-7s处理的小鼠中的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比。

图95显示TGFRt15-TGFRs构建体的示意图。

图96显示TGFRt15-TGFRs构建体的另一示意图。

图97显示了TGFRt15-TGFRs和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图98显示用TGFRt15-TGFRs或重组IL-15进行32Dβ细胞增殖分析的结果。

图99A和99B显示了使用ELISA、使用相应抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII的结果。

图100是曲线图，其显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有TGFRt15-TGFRs蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图101显示了TGFRt15-TGFRs的分析型SEC特征曲线。

图102显示了脱糖基化之前和之后的TGFRt15-TGFRs，如还原型SDS-PAGE所分析。

图103A和103B显示了经TGFRt15-TGFRs处理和经对照物处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图103A显示了相较于PBS对照组，经TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图103B显示了相较于PBS对照组，经TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比。

图104A和104B显示了经TGFRt15-TGFRs处理的小鼠在92小时期间的脾脏重量和免疫刺激。图104A显示了经TGFRt15-TGFRs处理的小鼠在处理之后的第16、24、48、72和92小时时的脾脏重量。图104B显示了经TGFRt15-TGFRs处理的小鼠在处理之后的第16、24、48、72和92小时时的免疫细胞百分比。

图105A和105B显示了经TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中的Ki67和颗粒酶B在一段时间内的表达。

图106显示了TGFRt15-TGFRs对C57BL/6小鼠的脾细胞的细胞毒性增强。

图107显示了在胰脏癌小鼠模型中，肿瘤尺寸响应于PBS处理、单独的化学疗法、单独的TGFRt15-TGFRs，或化学疗法与TGFRt15-TGFRs组合而发生的变化。

图108显示从TGFRt15-TGFRs处理的小鼠分离出的NK细胞的细胞毒性。

图109显示7t15-21s137L(长版)构建体的示意图。

图110显示7t15-21s137L(长版)构建体的另一示意图。

图111是曲线图，其显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有7t15-21s137L(长版)蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图112显示了7t15-21s137L(长版)的分析型SEC特征曲线。

图113显示了7t15-21s137L(短版)对CD137L(4.1BBL)的结合。

图114A-114C显示了用ELISA检测7t15-21s137L(短版)中的IL-15、IL21和IL7。图114A显示了用ELISA检测7t15-21s137L(短版)中的IL-15。图114B显示了用ELISA检测7t15-21s137L(短版)中的IL21。图114C显示了用ELISA检测7t15-21s137L(短版)中的IL7。

图115显示了CTLL-2细胞增殖分析的结果。

图116显示了7t15-1s137L(短版)促进含IL21R的B9细胞增殖的活性。

图117显示了7t15-TGFRs构建体的示意图。

图118显示了7t15-TGFRs构建体的另一示意图。

图119显示了7t15-TGFR和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图120A-120C显示了ELISA检测7t15-TGFRs中的IL-15、TGFβRII和IL-7。

图121显示用7t15-TGFRs或重组IL-15进行的32Dβ细胞增殖分析的结果。

图122是曲线图，其显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有7t15-TGFRs蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图123显示了脱糖基化之前和之后的7t15-TGFRs，如使用还原型SDS-PAGE所分析。

图124显示了ELISA检测7t15-TGFRs蛋白中的IL-7、IL-15和TGFβRII。

图125A和125B显示了经7t15-TGFRs处理和经对照物处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图125A显示了相较于PBS对照组，经不同剂量的7t15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图125B显示了相较于PBS对照组，经不同剂量的TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比。

图126A和126B显示了7t15-TGFRs使C57BL/6小鼠的CD4+和CD8+T细胞对CD44的表达上调。

图127A和127B显示了7t15-TGFRs使C57BL/6小鼠的CD8+T细胞和NK细胞对Ki67的表达和对颗粒酶B的表达上调。

图128显示了7t15-TGFRs增强C57BL/6小鼠的脾细胞的细胞毒性。

图129显示了TGFRt15-21s137L构建体的示意图。

图130显示了TGFRt15-21s137L构建体的另一示意图。

图131是曲线图，其显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有TGFRt15-21s137L蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图132显示了TGFRt15-TGFRs21构建体的示意图。

图133显示了TGFRt15-TGFRs21构建体的另一示意图。

图134是曲线图，其显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有TGFRt15-TGFRs21蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图135显示了脱糖基化之前和之后的TGFRt15-TGFRs21，如还原型SDS-PAGE所分析。

图136A和136B显示了使用ELISA检测TGFRt15-TGFRs21中的组分。

图137A和137B显示了经对照物处理和经TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中存在的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和自然杀手(NK)细胞的百分比和增殖。

图138显示了经TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾细胞对颗粒酶B的表达上调。

图139显示了TGFRt15-TGFRs21增强C57BL/6小鼠的脾细胞的细胞毒性。

图140显示了TGFRt15-TGFRs16构建体的示意图。

图141显示了TGFRt15-TGFRs16构建体的另一示意图。

图142显示了TGFRt15-TGFRs137L构建体的示意图。

图143显示了TGFRt15-TGFRs137L构建体的另一示意图。

图144是示例性2t2单链嵌合多肽的示意图。

图145显示了使用32Dβ细胞增殖分析测得的2t2中的IL-2活性与重组IL-2的比较。

图146显示了使用CTLL-2细胞增殖分析测得的2t2中的IL-2活性与重组IL-2的比较。

图147显示了饲喂标准食物或高脂肪饮食且经PBS对照物(未处理)或2t2处理的ApoE^-/-小鼠的空腹血糖水平。

图148显示了饲喂标准食物或高脂肪饮食且经PBS对照物(未处理)或2t2处理的ApoE^-/-小鼠的血液淋巴细胞中的CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺T调控细胞比率。

图149是曲线图，其显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有2t2蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图150显示了2t2的分析型SEC特征曲线。

图151A和151B显示了2t2在脱糖基化之前和之后的还原型SDS-PAGE分析。图151A显示了2t2在脱糖基化之前的还原型SDS-PAGE分析。图151B显示了2t2在脱糖基化之后的还原型SDS-PAGE分析。

图152A和152B显示了使用2t2对C57BL/6小鼠进行免疫刺激的结果。图152A显示了用2t2处理后的脾脏重量。图152B显示了2t2处理后的免疫细胞类型的百分比。

图153显示了经2t2处理的小鼠中的CD4⁺T细胞对CD25的表达上调。

图154显示了2t2在C57BL/6小鼠中的药代动力学。

图155A和155B显示了2t2减轻ApoE^-/-小鼠形成高脂肪诱导动脉粥样硬化斑的作用。图155A显示了饲喂标准食物或高脂肪饮食且经PBS对照物或2t2处理的ApoE^-/-小鼠的动脉粥样硬化斑的代表性视图。图155B显示了每组的动脉粥样硬化斑的定量分析结果。

图156显示了相较于对照物处理的小鼠，2t2处理的小鼠的空腹葡萄糖水平。

图157显示了经2t2处理的小鼠和经对照物处理的小鼠的血液淋巴细胞中的CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Tregs百分比。

图158是示例性15t15单链嵌合多肽的示意图。

图159显示了通过32Dβ细胞增殖分析测得的15t15中的IL-15活性与重组IL-15的比较。

图160是曲线图，其显示了在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有15t15蛋白的细胞培养上清液的色谱特征曲线。

图161A和161B显示了15t15在脱糖基化之前和之后的还原型SDS-PAGE分析。图161A显示了15t15在脱糖基化之前的还原型SDS-PAGE分析。图161B显示了15t15在脱糖基化之后的还原型SDS-PAGE分析。

图162A和162B是一组直方图(图162A)和一组图示(图162B)，其显示了在18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s+抗TF抗体刺激之后，NK细胞的表面表型变化。

图163是一组图示，其显示了在18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s刺激之后，淋巴细胞群体的表面表型变化。

图164是一组图示，其显示了18t15-12s处理之后，NK细胞的糖酵解增强。

图165是一组图示，其显示了在18t15-12s刺激之后，NK细胞中的磷酸化STAT4和磷酸化STAT5水平提高。

图166是一组图示，其显示了18t15-12s整夜刺激NK细胞使细胞代谢增强。

图167A-C是一组图示，其显示了C57BL/6小鼠在2t2处理之后的免疫刺激。

图168A-B是一组图示，其显示了C57BL/6小鼠在TGFRt15-TGFRs处理之后的免疫刺激。

图169A-C是一组图示，其显示了饲喂西方饮食且经TGFRt15-TGFRs或2t2处理的ApoE^-/-小鼠中的Tregs、NK细胞和CD8⁺T细胞的体内刺激。

图170A-B是一组图示，其显示了2t2诱导C57BL/6小鼠的脾细胞增殖。

图171A-C是一组图示，其显示了C57BL/6小鼠在TGFRt15-TGFRs处理之后的免疫刺激。

图172A-B是一组图示，其显示了饲喂西方饮食且经TGFRt15-TGFRs或2t2处理的ApoE^-/-小鼠中的NK细胞和CD8⁺T细胞在体内被诱导增殖。

图173是示意图和一组图示，其显示了经7t15-21、TGFRt15-TGFRs或2t2处理之后，经7t15-21s和抗抗体扩增的NK细胞持久存在于NSG小鼠中。

图174A-B是一组图示，其显示了NK细胞经TGFRt15-TGFRs处理之后，NK细胞的细胞毒性增强。

图175A-B是一组图示，其显示了NK细胞经TGFRt15-TGFRs处理之后，NK细胞的ADCC活性增强。

图176是经TGFRt15-TGFRs/2t2活化的小鼠NK细胞在试管内杀死衰老的B16F10黑色素瘤细胞的图示。

图177A-H是一组图示，其显示了TGFRt15-TGFRs外加抗TRP1抗体(TA99)与化学疗法组合在黑色素瘤小鼠模型中的抗肿瘤活性。

图178A-C是一组图示，其显示了2t2改善了ApoE^-/-小鼠被西方饮食诱导的高血糖症。

图179是显示了细胞表面染色的一组图示，其概述了在18t15-12s刺激且在rhIL-15中培养之后，NK细胞分化成细胞因子诱导的记忆细胞，如NK细胞(CIML-NK细胞)。

图180显示了CD44记忆T细胞的上调。上图显示了用TGFRt15-TGFRs处理后，CD44记忆T细胞的上调。下图显示了用2t2处理后，CD44记忆T细胞的上调。

图181A和181B显示了用2t2或IL-2处理的小鼠在脱毛后的毛发再生长改善。图181A显示了经PBS、2t2或IL-2处理的小鼠在脱毛之后第10天的皮肤色素沉着。图181B显示了经PBS、2t2或IL-2处理的小鼠的色素沉着百分比，如使用ImageJ软件所分析。

图182显示了经PBS、2t2或IL-2处理的小鼠在脱毛之后第14天的皮肤色素沉着。

图183显示了用单链或多链嵌合多肽处理后，因子X(FX)活化的图示。

图184显示了含有不同浓度的因诺维(Innovin)的缓冲液在凝血酶原时间(PT)测试中的凝结时间。

图185显示了多链嵌合多肽在PT分析中的凝结时间。

图186显示了多链嵌合多肽在PT分析中当与32DB细胞混合时的凝结时间。

图187显示了多链嵌合多肽在PT分析中当与人PBMC混合时的凝结时间。

图188显示了7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)对CD137(4.1BB)的结合。

图189A-189D显示了使用ELISA、通过各别抗体检测7t15-21s137L(长版)中的IL7、IL21、IL15和4.1BBL。

图190显示了7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)的IL-15活性，如通过含有IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖分析所评估。

图191A-191C显示了响应于2t2或IL2处理的CD4⁺CD25^hiT_reg细胞、CD4⁺CD25^-T_con细胞或CD8⁺T_con细胞中的人血液淋巴细胞pStat5a应答。图191A显示了CD4⁺CD25^hiT_reg细胞中的pSTAT5应答。图C191B显示了CD4⁺CD25^-T_con细胞中的pSTAT5应答。图191C显示了CD8⁺Tcon细胞中的pSTAT5应答。

图192A-192E是一组影像，其显示了小鼠模型在脱毛之后，基于IL-2的分子(2t2)的处理能够诱导毛囊形成。图192A是刮毛之后进行的仅对照小鼠脱毛的影像，图192B是脱毛之后施用低剂量IL-2(1mg/kg)的小鼠的影像，并且图192C-192E显示了脱毛之后施用0.3mg/kg(图192C)、1mg/kg(图192D)和3mg/kg(图192E)的2t2的小鼠的影像。黑色箭头表示生长期的毛囊，这些毛囊随后将延伸到真皮中并促进头发生长。

图193显示了每个处理组每10个视野计数的生长期毛囊总数。

图194图示了在用7t15-21s+抗组织因子(TF)抗体(IgG1)(50nM)扩增之后，来自两个不同供者的NK细胞(相对于未暴露的NK细胞)具有不同的DNA脱甲基化百分比。

具体实施方式

本文提供了治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。本文还提供了杀死或减少有需要的受试者中的衰老细胞数量的方法，其包括将治疗有效量的一种或多种NK细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。本文还提供了使有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观在一段时间内改善的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。本文还提供了有助于在一段时间内治疗有需要的受试者的肥胖症的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂和/或治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。

活化NK细胞

本文所述的任一种方法的一些实施例可包括向受试者(例如本文所述的任何示例性受试者)施用治疗有效数量的活化NK细胞(例如人活化NK细胞)。活化NK细胞是一种NK细胞(例如人NK细胞)，其CD25、CD69、MTOR-C1、SREBP1、IFN-γ和颗粒酶(例如颗粒酶B)中的两种或更多种(例如三种、四种、五种或六种)的表达水平相较于休眠NK细胞(例如人休眠NK细胞)增加。举例来说，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)中的CD25、CD69、MTOR-C1、SREBP1、IFN-γ和颗粒酶(例如颗粒酶B)中的两种或更多种(例如三种、四种、五种或六种)的表达水平可以增加至少10％(例如，至少增加15％，至少增加20％，至少增加25％，至少增加30％，至少增加35％，至少增加40％，至少增加45％，至少增加50％，至少增加55％，至少增加60％，至少增加65％，至少增加70％，至少增加75％，至少增加80％，至少增加85％，至少增加90％，至少增加95％，至少增加100％至少增加120％，至少增加140％，至少增加160％，至少增加180％，至少增加200％，至少增加220％，至少增加240％至少增加260％，至少增加280％或至少增加300％)，例如相较于休眠NK细胞。

在一些实施例中，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)中的CD25、CD59、CD352、NKp80、DNAM-1、2B4、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、CD16、KIR2DS1、KIR2Ds2/3、KIR2DL4、KIR2DS4、KIR2DS5、KIR3DS1、NKG2C、CCR7、CXCR3、L-选择素、CXCR1、CXCR2、CX3CR1、ChemR23、CXCR4、CCR5、S1P5、c-Kit、mTORC1中的两种或更多种(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29种)的表达水平可以任选地进一步至少增加10％(例如，至少增加15％，至少增加20％，至少增加25％，至少增加30％，至少增加35％，至少增加40％，至少增加45％，至少增加50％，至少增加55％，至少增加60％，至少增加65％，至少增加70％，至少增加75％，至少增加80％，至少增加85％，至少增加90％，至少增加95％，至少增加100％，至少增加120％，至少增加140％，至少增加160％，至少增加180％，至少增加200％，至少增加220％，至少增加240％，至少增加260％，至少增加280％，或至少增加300％)，例如相较于休眠NK细胞。

举例来说，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)中的CD25、CD69、mTORC1、SREBP1、IFN-γ和颗粒酶(例如颗粒酶B)中的两种或更多种(例如三种、四种、五种或六种)的表达水平可以大约增加10％至大约增加500％，大约增加10％至大约增加450％，大约增加10％至大约增加400％，大约增加10％至大约增加350％，大约增加10％至大约增加300％，大约增加10％至大约增加280％，大约增加10％至大约增加260％，大约增加10％至大约增加240％，大约增加10％至大约增加220％，大约增加10％到大约增加200％，大约增加10％至大约增加180％，大约增加10％至大约增加160％，大约增加10％至大约增加140％，大约增加10％至大约增加120％，大约增加10％到大约增加100％，大约增加10％到大约增加80％，大约增加10％至大约增加60％，大约增加10％到大约增加40％，大约增加10％至大约增加20％，增加20％至大约增加500％，大约增加20％至大约增加450％，大约增加20％至大约增加400％，大约增加20％至大约增加350％，大约增加20％至大约增加300％，大约增加20％至大约增加280％，大约增加20％至大约增加260％，大约增加20％至大约增加240％，大约增加20％至大约增加220％，大约增加20％到大约增加200％，大约增加20％至大约增加180％，大约增加20％至大约增加160％，大约增加20％至大约增加140％，大约增加20％至大约增加120％，大约增加20％到大约增加100％，大约增加20％至大约增加80％，大约增加20％至大约增加60％，大约增加20％至大约增加40％，增加40％至大约增加500％，大约增加40％至大约增加450％，大约增加40％至大约增加400％，大约增加40％至大约增加350％，大约增加40％至大约增加300％，大约增加40％至大约增加280％，大约增加40％至大约增加260％，大约增加40％至大约增加240％，大约增加40％至大约增加220％，大约增加40％至大约增加200％，大约增加40％至大约增加180％，大约增加40％至大约增加160％，大约增加40％至大约增加140％，大约增加40％至大约增加120％，大约增加40％至大约增加100％，大约增加40％至大约增加80％，大约增加40％至大约增加60％，增加60％至大约增加500％，大约增加60％至大约增加450％，大约增加60％至大约增加400％，大约增加60％至大约增加350％，大约增加60％至大约增加300％，大约增加60％至大约增加280％，大约增加60％至大约增加260％，大约增加60％至大约增加240％，大约增加60％至大约增加220％，大约增加60％至大约增加200％，大约增加60％至大约增加180％，大约增加60％至大约增加160％，大约增加60％至大约增加140％，大约增加60％至大约增加120％，大约增加60％到大约增加100％，大约增加60％至大约增加80％，增加80％至大约增加500％，大约增加80％至大约增加450％，大约增加80％至大约增加400％，大约增加80％至大约增加350％，大约增加80％至大约增加300％，大约增加80％至大约增加280％，大约增加80％至大约增加260％，大约增加80％至大约增加240％，大约增加80％至大约增加220％，大约增加80％至大约增加200％，大约增加80％至大约增加180％，大约增加80％至大约增加160％，大约增加80％至大约增加140％，大约增加80％至大约增加120％，大约增加80％至大约增加100％，增加100％至大约增加500％，大约增加100％至大约增加450％，大约增加100％至大约增加400％，大约增加100％至大约增加350％，大约增加100％至大约增加300％，大约增加100％至大约增加280％，大约增加100％至大约增加260％，大约增加100％至大约增加240％，大约增加100％至大约增加220％，大约增加100％到大约增加200％，大约增加100％至大约增加180％，大约增加100％至大约增加160％，大约增加100％至大约增加140％，大约增加100％至大约增加120％，增加120％至大约增加500％，大约增加120％至大约增加450％，大约增加120％至大约增加400％，大约增加120％至大约增加350％，大约增加120％至大约增加300％，大约增加120％至大约增加280％，大约增加120％至大约增加260％，大约增加120％至大约增加240％，大约增加120％至大约增加220％，大约增加120％至大约增加200％，大约增加120％至大约增加180％，大约增加120％至大约增加160％，大约增加120％至大约增加140％，增加140％至大约增加500％，大约增加140％至大约增加450％，大约增加140％至大约增加400％，大约增加140％至大约增加350％，大约增加140％至大约增加300％，大约增加140％至大约增加280％，大约增加140％至大约增加260％，大约增加140％至大约增加240％，大约增加140％至大约增加220％，大约增加140％至大约增加200％，大约增加140％至大约增加180％，大约增加140％至大约增加160％，增加160％至大约增加500％，大约增加160％至大约增加450％，大约增加160％至大约增加400％，大约增加160％至大约增加350％，大约增加160％至大约增加300％，大约增加160％至大约增加280％，大约增加160％至大约增加260％，大约增加160％至大约增加240％，大约增加160％至大约增加220％，大约增加160％至大约增加200％，大约增加160％至大约增加180％，增加180％至大约增加500％，大约增加180％至大约增加450％，大约增加180％至大约增加400％，大约增加180％至大约增加350％，大约增加180％至大约增加300％，大约增加180％至大约增加280％，大约增加180％至大约增加260％，大约增加180％至大约增加240％，大约增加180％至大约增加220％，大约增加180％至大约增加200％，增加200％至大约增加500％，大约增加200％至大约增加450％，大约增加200％至大约增加400％，大约增加200％至大约增加350％，大约增加200％至大约增加300％，大约增加200％至大约增加280％，大约增加200％至大约增加260％，大约增加200％至大约增加240％，大约增加200％至大约增加220％，增加220％至大约增加500％，大约增加220％至大约增加450％，大约增加220％至大约增加400％，大约增加220％至大约增加350％，大约增加220％至大约增加300％，大约增加220％至大约增加280％，大约增加220％至大约增加260％，大约增加220％至大约增加240％，增加240％至大约增加500％，大约增加240％至大约增加450％，大约增加240％至大约增加400％，大约增加240％至大约增加350％，大约增加240％至大约增加300％，大约增加240％至大约增加280％，大约增加240％至大约增加260％，增加260％至大约增加500％，大约增加260％至大约增加450％，大约增加260％至大约增加400％，大约增加260％至大约增加350％，大约增加260％至大约增加300％，大约增加260％至大约增加280％，增加280％至大约增加500％，大约增加280％至大约增加450％，大约增加280％至大约增加400％，大约增加280％至大约增加350％，大约增加280％至大约增加300％，增加300％至大约增加500％，大约增加300％至大约增加450％，大约增加300％至大约增加400％，大约增加300％至大约增加350％，增加350％至大约增加500％，大约增加350％至大约增加450％，大约增加350％至大约增加400％，增加400％至大约增加500％，大约增加400％至大约增加450％，或者增加400％到增加约500％，例如相较于休眠NK细胞(例如人休眠NK细胞)。

在一些实施例中，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)中的CD25、CD59、CD352、NKp80、DNAM-1、2B4、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、CD16、KIR2DS1、KIR2Ds2/3、KIR2DL4、KIR2DS4、KIR2DS5、KIR3DS1、NKG2C、CCR7、CXCR3、L-选择素、CXCR1、CXCR2、CX3CR1、ChemR23、CXCR4、CCR5、S1P5、c-Kit、mTORC1中的两种或更多种(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29种)的表达水平可以进一步增加大约10％至增加大约500％(例如本文所述的此范围的任一子范围)，例如相较于休眠NK细胞。

能够用于测定CD25、CD69、CD59、CD352、NKp80、DNAM-1、2B4、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、CD16、KIR2DS1、KIR2Ds2/3、KIR2DL4、KIR2DS4、KIR2DS5、KIR3DS1、NKG2C、CCR7、CXCR3、L-选择素、CXCR1、CXCR2、CX3CR1、ChemR23、CXCR4、CCR5、S1P5、c-Kit、mTORC1、MYC、SREBP1、IFN-γ和颗粒酶(例如颗粒酶B)的表达水平的非限制性分析实例包括例如免疫印迹法、荧光辅助式细胞分选、酶联免疫吸附分析和RT-PCR。

能够用于测定CD25表达水平的商业ELISA分析的非限制性实例获自Diaclone、Covalab Biotechnology和Caltag Medsystems。成熟的人CD25的蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CD25蛋白(SEQ ID NO:1)

elcdddppe iphatfkama ykegtmlnce ckrgfrriks gslymlctgn sshsswdnqcqctssatrnt tkqvtpqpee qkerkttemq spmqpvdqas lpghcreppp weneateriy hfvvgqmvyyqcvqgyralh rgpaesvckm thgktrwtqp qlictgemet sqfpgeekpq aspegrpese tsclvtttdfqiqtemaatm etsiftteyq vavagcvfll isvlllsglt wqrrqrksrr ti

人CD25 cDNA(SEQ ID NO：2)

gagctctg tgacgatgac ccgccagaga tcccacacgc cacattcaaa gccatggcctacaaggaagg aaccatgttg aactgtgaat gcaagagagg tttccgcaga ataaaaagcg ggtcactctatatgctctgt acaggaaact ctagccactc gtcctgggac aaccaatgtc aatgcacaag ctctgccactcggaacacaa cgaaacaagt gacacctcaa cctgaagaac agaaagaaag gaaaaccaca gaaatgcaaagtccaatgca gccagtggac caagcgagcc ttccaggtca ctgcagggaa cctccaccat gggaaaatgaagccacagag agaatttatc atttcgtggt ggggcagatg gtttattatc agtgcgtcca gggatacagggctctacaca gaggtcctgc tgagagcgtc tgcaaaatga cccacgggaa gacaaggtgg acccagccccagctcatatg cacaggtgaa atggagacca gtcagtttcc aggtgaagag aagcctcagg caagccccgaaggccgtcct gagagtgaga cttcctgcct cgtcacaaca acagattttc aaatacagac agaaatggctgcaaccatgg agacgtccat atttacaaca gagtaccagg tagcagtggc cggctgtgtt ttcctgctgatcagcgtcct cctcctgagt gggctcacct ggcagcggag acagaggaag agtagaagaa caatc

能够用于测定CD69表达水平的商业ELISA分析的非限制性实例获自RayBiotech、Novus Biologicals和Aviscera Bioscience。成熟的人CD69的蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CD69蛋白(SEQ ID NO:3)

mssencfvae nsslhpesgq endatsphfs trhegsfqvp vlcavmnvvf itiliialialsvgqyncpg qytfsmpsds hvsscsedwv gyqrkcyfis tvkrswtsaq nacsehgatl avidsekdmnflkryagree hwvglkkepg hpwkwsngke fnnwfnvtgs dkcvflknte vssmeceknl ywicnkpyk

人CD69 cDNA(SEQ ID NO:4)

atgagctctg aaaattgttt cgtagcagag aacagctctt tgcatccgga gagtggacaagaaaatgatg ccaccagtcc ccatttctca acacgtcatg aagggtcctt ccaagttcct gtcctgtgtgctgtaatgaa tgtggtcttc atcaccattt taatcatagc tctcattgcc ttatcagtgg gccaatacaattgtccaggc caatacacat tctcaatgcc atcagacagc catgtttctt catgctctga ggactgggttggctaccaga ggaaatgcta ctttatttct actgtgaaga ggagctggac ttcagcccaa aatgcttgttctgaacatgg tgctactctt gctgtcattg attctgaaaa ggacatgaac tttctaaaac gatacgcaggtagagaggaa cactgggttg gactgaaaaa ggaacctggt cacccatgga agtggtcaaa tggcaaagaatttaacaact ggttcaacgt tacagggtct gacaagtgtg tttttctgaa aaacacagag gtcagcagcatggaatgtga gaagaattta tactggatat gtaacaaacc ttacaaataa 成熟的人CD59的蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CD59蛋白(SEQ ID NO:5)

lqcyncpnptadckt avncssdfda clitkaglqv ynkcwkfehc nfndvttrlreneltyycck kdlcnfneql en

人CD59 cDNA(SEQ ID NO:6)

atgggaatcc aaggagggtc tgtcctgttc gggctgctgc tcgtcctggc tgtcttctgccattcaggtc atagcctgca gtgctacaac tgtcctaacc caactgctga ctgcaaaaca gccgtcaattgttcatctga ttttgatgcg tgtctcatta ccaaagctgg gttacaagtg tataacaagt gttggaagtttgagcattgc aatttcaacg acgtcacaac ccgcttgagg gaaaatgagc taacgtacta ctgctgcaagaaggacctgt gtaactttaa cgaacagctt gaaaatggtg ggacatcctt atcagagaaa acagttcttctgctggtgac tccatttctg gcagcagcct ggagccttca tccctaa

成熟的人CD352的蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CD352蛋白(SEQ ID NO:7)

qssltplmv ngilgesvtl plefpagekv nfitwlfnet slafivphet kspeihvtnpkqgkrlnftq syslqlsnlk medtgsyraq istktsakls sytlrilrql rniqvtnhsq lfqnmtcelhltcsvedadd nvsfrwealg ntlssqpnlt vswdprisse qdytciaena vsnlsfsvsa qklcedvkiqytdtkmilfm vsgicivfgf iillllvlrk rrdslslstq rtqgpaesar nleyvsvspt nntvyasvthsnreteiwtp rendtitiys tinhskeskp tfsrataldn vv

人CD352 cDNA(SEQ ID NO:8)

atgttgtggc tgttccaatc gctcctgttt gtcttctgct ttggcccagg gaatgtagtttcacaaagca gcttaacccc attgatggtg aacgggattc tgggggagtc agtaactctt cccctggagtttcctgcagg agagaaggtc aacttcatca cttggctttt caatgaaaca tctcttgcct tcatagtaccccatgaaacc aaaagtccag aaatccacgt gactaatccg aaacagggaa agcgactgaa cttcacccagtcctactccc tgcaactcag caacctgaag atggaagaca caggctctta cagagcccag atatccacaaagacctctgc aaagctgtcc agttacactc tgaggatatt aagacaactg aggaacatac aagttaccaatcacagtcag ctatttcaga atatgacctg tgagctccat ctgacttgct ctgtggagga tgcagatgacaatgtctcat tcagatggga ggccttggga aacacacttt caagtcagcc aaacctcact gtctcctgggaccccaggat ttccagtgaa caggactaca cctgcatagc agagaatgct gtcagtaatt tatccttctctgtctctgcc cagaagcttt gcgaagatgt taaaattcaa tatacagata ccaaaatgat tctgtttatggtttctggga tatgcatagt cttcggtttc atcatactgc tgttacttgt tttgaggaaa agaagagattccctatcttt gtctactcag cgaacacagg gccccgagtc cgcaaggaac ctagagtatg tttcagtgtctccaacgaac aacactgtgt atgcttcagt cactcattca aacagggaaa cagaaatctg gacacctagagaaaatgata ctatcacaat ttactccaca attaatcatt ccaaagagag taaacccact ttttccagggcaactgccct tgacaatgtc gtgtaa

成熟的人NKp80的蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人NKp80蛋白(SEQ ID NO:9)

mqdeerymtl nvqskkrssa qtsqltfkdy svtlhwykil lgisgtvngi ltltlislillvsqgvllkc qkgscsnatq yedtgdlkvn ngtrrnisnk dlcasrsadq tvlcqsewlk yqgkcywfsnemkswsdsyv yclerkshll iihdqlemaf iqknlrqlny vwiglnftsl kmtwtwvdgs pidskiffikgpakenscaa ikeskifset cssvfkwicq y

人NKp80 cDNA(SEQ ID NO:10)

atgcaagatg aagaaagata catgacattg aatgtacagt caaagaaaag gagttctgcccaaacatctc aacttacatt taaagattat tcagtgacgt tgcactggta taaaatctta ctgggaatatctggaaccgt gaatggtatt ctcactttga ctttgatctc cttgatcctg ttggtactat gccaatcagaatggctcaaa taccaaggga agtgttattg gttctctaat gagatgaaaa gctggagtga cagttatgtgtattgtttgg aaagaaaatc tcatctacta atcatacatg accaacttga aatggctttt atacagaaaaacctaagaca attaaactac gtatggattg ggcttaactt tacctccttg aaaatgacat ggacttgggtggatggttct ccaatagatt caaagatatt cttcataaag ggaccagcta aagaaaacag ctgtgctgccattaaggaaa gcaaaatttt ctctgaaacc tgcagcagtg ttttcaaatg gatttgtcag tattag

成熟的人DNAM-1蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人DNAM-1蛋白(SEQ ID NO:11)

ee vlwhtsvpfa enmslecvyp smgiltqvew fkigtqqdsi aifspthgmv irkpyaervyflnstmasnn mtlffrnase ddvgyyscsl ytypqgtwqk viqvvqsdsf eaavpsnshi vsepgknvtltcqpqmtwpv qavrwekiqp rqidlltycn lvhgrnftsk fprqivsncs hgrwsvivip dvtvsdsglyrcylqasage netfvmrltv aegktdnqyt lfvaggtvll llfvisitti iviflnrrrr rerrdlfteswdtqkapnny rspistsqpt nqsmddtred iyvnyptfsr rpktrv

人DNAM-1cDNA(SEQ ID NO:12)

atggattatc ctactttact tttggctctt cttcatgtat acagagctct atgtgaagaggtgctttggc atacatcagt tccctttgcc gagaacatgt ctctagaatg tgtgtatcca tcaatgggcatcttaacaca ggtggagtgg ttcaagatcg ggacccagca ggattccata gccattttca gccctactcatggcatggtc ataaggaagc cctatgctga gagggtttac tttttgaatt caacgatggc ttccaataacatgactcttt tctttcggaa tgcctctgaa gatgatgttg gctactattc ctgctctctt tacacttacccacagggaac ttggcagaag gtgatacagg tggttcagtc agatagtttt gaggcagctg tgccatcaaatagccacatt gtttcggaac ctggaaagaa tgtcacactc acttgtcagc ctcagatgac gtggcctgtgcaggcagtga ggtgggaaaa gatccagccc cgtcagatcg acctcttaac ttactgcaac ttggtccatggcagaaattt cacctccaag ttcccaagac aaatagtgag caactgcagc cacggaaggt ggagcgtcatcgtcatcccc gatgtcacag tctcagactc ggggctttac cgctgctact tgcaggccag cgcaggagaaaacgaaacct tcgtgatgag attgactgta gccgagggta aaaccgataa ccaatatacc ctctttgtggctggagggac agttttattg ttgttgtttg ttatctcaat taccaccatc attgtcattt tccttaacagaaggagaagg agagagagaa gagatctatt tacagagtcc tgggatacac agaaggcacc caataactatagaagtccca tctctaccag tcaacctacc aatcaatcca tggatgatac aagagaggat atttatgtcaactatccaac cttctctcgc agaccaaaga ctagagttta a

成熟的人2B4蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人2B4蛋白(SEQ ID NO:13)

gk gcqgsadhvv sisgvplqlq pnsiqtkvds iawkkllpsq ngfhhilkwe ngslpsntsndrfsfivknl sllikaaqqq dsglyclevt sisgkvqtat fqvfvfdkve kprlqgqgki ldrgrcqvalsclvsrdgnv syawyrgskl iqtagnltyl deevdingth tytcnvsnpv sweshtlnlt qdcqnahqefrfwpflviiv ilsalflgtl acfcvwrrkr kekqsetspk efltiyedvk dlktrrnheq eqtfpgggstiysmiqsqss aptsqepayt lysliqpsrk sgsrkrnhsp sfnstiyevi gksqpkaqnp arlsrkelenfdvys

人2B4 cDNA(SEQ ID NO:14)

atgctggggc aagtggtcac cctcatactc ctcctgctcc tcaaggtgta tcagggcaaaggatgccagg gatcagctga ccatgtggtt agcatctcgg gagtgcctct tcagttacaa ccaaacagcatacagacgaa ggttgacagc attgcatgga agaagttgct gccctcacaa aatggatttc atcacatattgaagtgggag aatggctctt tgccttccaa tacttccaat gatagattca gttttatagt caagaacttgagtcttctca tcaaggcagc tcagcagcag gacagtggcc tctactgcct ggaggtcacc agtatatctggaaaagttca gacagccacg ttccaggttt ttgtatttga taaagttgag aaaccccgcc tacaggggcaggggaagatc ctggacagag ggagatgcca agtggctctg tcttgcttgg tctccaggga tggcaatgtgtcctatgctt ggtacagagg gagcaagctg atccagacag cagggaacct cacctacctg gacgaggaggttgacattaa tggcactcac acatatacct gcaatgtcag caatcctgtt agctgggaaa gccacaccctgaatctcact caggactgtc agaatgccca tcaggaattc agattttggc cgtttttggt gatcatcgtgattctaagcg cactgttcct tggcaccctt gcctgcttct gtgtgtggag gagaaagagg aaggagaagcagtcagagac cagtcccaag gaatttttga caatttacga agatgtcaag gatctgaaaa ccaggagaaatcacgagcag gagcagactt ttcctggagg ggggagcacc atctactcta tgatccagtc ccagtcttctgctcccacgt cacaagaacc tgcatataca ttatattcat taattcagcc ttccaggaag tctggatccaggaagaggaa ccacagccct tccttcaata gcactatcta tgaagtgatt ggaaagagtc aacctaaagcccagaaccct gctcgattga gccgcaaaga gctggagaac tttgatgttt attcctag

成熟的人NKp30蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人NKp30蛋白(SEQ ID NO:15)

lw vsqppeirtl egssaflpcs fnasqgrlai gsvtwfrdev vpgkevrngt pefrgrlaplassrflhdhq aelhirdvrg hdasiyvcrv evlglgvgtg ngtrlvveke hpqlgagtvl llragfyavsflsvavgstv yyqgkcltwk gprrqlpavv paplpppcgs sahllppvpg g

人NKp30 cDNA(SEQ ID NO:16)

atggcctgga tgctgttgct catcttgatc atggtccatc caggatcctg tgctctctgggtgtcccagc cccctgagat tcgtaccctg gaaggatcct ctgccttcct gccctgctcc ttcaatgccagccaagggag actggccatt ggctccgtca cgtggttccg agatgaggtg gttccaggga aggaggtgaggaatggaacc ccagagttca ggggccgcct ggccccactt gcttcttccc gtttcctcca tgaccaccaggctgagctgc acatccggga cgtgcgaggc catgacgcca gcatctacgt gtgcagagtg gaggtgctgggccttggtgt cgggacaggg aatgggactc ggctggtggt ggagaaagaa catcctcagc taggggctggtacagtcctc ctccttcggg ctggattcta tgctgtcagc tttctctctg tggccgtggg cagcaccgtctattaccagg gcaaatgcca ctgtcacatg ggaacacact gccactcctc agatgggccc cgaggagtgattccagagcc cagatgtccc tag

成熟的人NKp44蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人NKp44蛋白(SEQ ID NO:17)

qskaqvlqs vagqtltvrc qypptgslye kkgwckeasa lvcirlvtss kprtmawtsrftiwddpdag fftvtmtdlr eedsghywcr iyrpsdnsvs ksvrfylvvs pasastqtsw tprdlvssqtqtqscvppta garqapesps tipvpsqpqn stlrpgpaap ialvpvfcgl lvakslvlsa llvwwgdiwwktmmelrsld tqkatchlqq vtdlpwtsvs spvereilyh tvartkisdd ddehtl

人NKp44 cDNA(SEQ ID NO:18)

atggcctggc gagccctaca cccactgcta ctgctgctgc tgctgttccc aggctctcaggcacaatcca aggctcaggt acttcaaagt gtggcagggc agacgctaac cgtgagatgc cagtacccgcccacgggcag tctctacgag aagaaaggct ggtgtaagga ggcttcagca cttgtgtgca tcaggttagtcaccagctcc aagcccagga cgatggcttg gacctctcga ttcacaatct gggacgaccc tgatgctggcttcttcactg tcaccatgac tgatctgaga gaggaagact caggacatta ctggtgtaga atctaccgcccttctgacaa ctctgtctct aagtccgtca gattctatct ggtggtatct ccagcctctg cctccacacagacctcctgg actccccgcg acctggtctc ttcacagacc cagacccaga gctgtgtgcc tcccactgcaggagccagac aagcccctga gtctccatct accatccctg tcccttcaca gccacagaac tccacgctccgccctggccc tgcagccccc attgccctgg tgcctgtgtt ctgtggactc ctcgtagcca agagcctggtgctgtcagcc ctgctcgtct ggtgggtttt aaggaatcgg cacatgcagc atcaagggag gtctctgctgcacccagctc agcccaggcc ccaggcccat agacacttcc cactgagcca cagggcacca ggggggacatatggtggaaa accatga

成熟的人NKp46蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人NKp46蛋白(SEQ ID NO:19)

qqqtlpkpf iwaephfmvp kekqvticcq gnygaveyql hfegslfavd rpkpperinkvqfyipdmns rmagqysciy rvgelwseps nlldlvvtem ydtptlsvhp gpevisgekv tfycrldtatsmflllkegr sshvqrgygk vqaefplgpv ttahrgtyrc fgsynnhaws fpsepvkllv tgdientslapedptfpadt wgtyllttet glqkdhalwd htaqnllrmg laflvlvalv wflvedwlsr krtrerasrastwegrrrln tqtl

人NKp46 cDNA(SEQ ID NO:20)

atggcctggc gagccctaca cccactgcta ctgctgctgc tgctgttccc aggctctcaggcacaatcca aggctcaggt acttcaaagt gtggcagggc agacgctaac cgtgagatgc cagtacccgcccacgggcag tctctacgag aagaaaggct ggtgtaagga ggcttcagca cttgtgtgca tcaggttagtcaccagctcc aagcccagga cgatggcttg gacctctcga ttcacaatct gggacgaccc tgatgctggcttcttcactg tcaccatgac tgatctgaga gaggaagact caggacatta ctggtgtaga atctaccgcccttctgacaa ctctgtctct aagtccgtca gattctatct ggtggtatct ccagcctctg cctccacacagacctcctgg actccccgcg acctggtctc ttcacagacc cagacccaga gctgtgtgcc tcccactgcaggagccagac aagcccctga gtctccatct accatccctg tcccttcaca gccacagaac tccacgctccgccctggccc tgcagccccc attgccctgg tgcctgtgtt ctgtggactc ctcgtagcca agagcctggtgctgtcagcc ctgctcgtct ggtgggtttt aaggaatcgg cacatgcagc atcaagggag gtctctgctgcacccagctc agcccaggcc ccaggcccat agacacttcc cactgagcca cagggcacca ggggggacatatggtggaaa accatga

成熟的人NKG2D蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人NKG2D蛋白(SEQ ID NO:21)

mgwirgrrsr hswemsefhn ynldlkksdf strwqkqrcp vvkskcrena spfffccfiavamgirfiim vaiwsavfln slfnqevqip ltesycgpcp knwicyknnc yqffdesknw yesqascmsqnasllkvysk edqdllklvk syhwmglvhi ptngswqwed gsilspnllt iiemqkgdca lyassfkgyiencstpntyi cmqrtv

人NKG2D cDNA(SEQ ID NO:22)

atggggtgga ttcgtggtcg gaggtctcga cacagctggg agatgagtga atttcataattataacttgg atctgaagaa gagtgatttt tcaacacgat ggcaaaagca aagatgtcca gtagtcaaaagcaaatgtag agaaaatgca tctccatttt ttttctgctg cttcatcgct gtagccatgg gaatccgtttcattattatg gtaacaatat ggagtgctgt attcctaaac tcattattca accaagaagt tcaaattcccttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaattttttgatgagag taaaaactgg tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagtatacagcaaa gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcatatcatt ggatgggact agtacacattccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca ataattgaaatgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggctatata gaaaactgtt caactccaaatacgtacatc tgcatgcaaa ggactgtgta a

成熟的人CD16a蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CD16a蛋白(SEQ ID NO:23)

maegtlwqil cvssdaqpqt fegvkgadpp tlppgsflpg pvlwwgslar lqteksdevsrkgnwwvtem gggagerlft ssclvglvpl glrislvtcp lqcgimwqll lptallllvs agmrtedlpkavvflepqwy rvlekdsvtl kcqgaysped nstqwfhnes lissqassyf idaatvddsg eyrcqtnlstlsdpvqlevh igwlllqapr wvfkeedpih lrchswknta lhkvtylqng kgrkyfhhns dfyipkatlkdsgsyfcrgl fgsknvsset vnititqgla vstissffpp gyqvsfclvm vllfavdtgl yfsvktnirsstrdwkdhkf kwrkdpqdk

人CD16a cDNA(SEQ ID NO:24)

atggctgagggcacactctggcagattctgtgtgtgtcctcagatgctcagccacagacctttgagggagtaaagggggcagacccacccaccttgcctccaggctctttccttcctggtcctgttctatggtggggctcccttgccagacttcagactgagaagtcagatgaagtttcaagaaaaggaaattggtgggtgacagagatgggtggaggggctggggaaaggctgtttacttcctcctgtctagtcggtttggtccctttagggctccggatatctttggtgacttgtccactccagtgtggcatcatgtggcagctgctcctcccaactgctctgctacttctagtttcagctggcatgcggactgaagatctcccaaaggctgtggtgttcctggagcctcaatggtacagggtgctcgagaaggacagtgtgactctgaagtgccagggagcctactcccctgaggacaattccacacagtggtttcacaatgagagcctcatctcaagccaggcctcgagctacttcattgacgctgccacagtcgacgacagtggagagtacaggtgccagacaaacctctccaccctcagtgacccggtgcagctagaagtccatatcggctggctgttgctccaggcccctcggtgggtgttcaaggaggaagaccctattcacctgaggtgtcacagctggaagaacactgctctgcataaggtcacatatttacagaatggcaaaggcaggaagtattttcatcataattctgacttctacattccaaaagccacactcaaagacagcggctcctacttctgcagggggctttttgggagtaaaaatgtgtcttcagagactgtgaacatcaccatcactcaaggtttggcagtgtcaaccatctcatcattctttccacctgggtaccaagtctctttctgcttggtgatggtactcctttttgcagtggacacaggactatatttctctgtgaagacaaacattcgaagctcaacaagagactggaaggaccataaatttaaatggagaaaggaccctcaagacaaatga

成熟的人CD16b蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CD16b蛋白(SEQ ID NO:25)

mwqlllptal lllvsagmrt edlpkavvfl epqwysvlek dsvtlkcqga yspednstqwfhneslissq assyfidaat vndsgeyrcq tnlstlsdpv qlevhigwll lqaprwvfke edpihlrchswkntalhkvt ylqngkdrky fhhnsdfhip katlkdsgsy fcrglvgskn vssetvniti tqglavstissfsppgyqvs fclvmvllfa vdtglyfsvk tni

人CD16b cDNA(SEQ ID NO:26)

atgtggcagctgctcctcccaactgctctgctacttctagtttcagctggcatgcggactgaagatctcccaaaggctgtggtgttcctggagcctcaatggtacagcgtgcttgagaaggacagtgtgactctgaagtgccagggagcctactcccctgaggacaattccacacagtggtttcacaatgagaacctcatctcaagccaggcctcgagctacttcattgacgctgccacagtcaacgacagtggagagtacaggtgccagacaaacctctccaccctcagtgacccggtgcagctagaagtccatatcggctggctgttgctccaggcccctcggtgggtgttcaaggaggaagaccctattcacctgaggtgtcacagctggaagaacactgctctgcataaggtcacatatttacagaatggcaaagacaggaagtattttcatcataattctgacttccacattccaaaagccacactcaaagatagcggctcctacttctgcagggggcttgttgggagtaaaaatgtgtcttcagagactgtgaacatcaccatcactcaaggtttggcagtgtcaaccatctcatcattctctccacctgggtaccaagtctctttctgcttggtgatggtactcctttttgcagtggacacaggactatatttctctgtgaagacaaacatttga

成熟的人KIR2DS1蛋白质和cDNA序列如下所示。

人KIR2DS1蛋白(SEQ ID NO:27)

msltvvsmac vgffllqgaw phegvhrkps llahpgrlvk seetvilqcw sdvmfehfllhregmfndtl rligehhdgv skanfsisrm kqdlagtyrc ygsvthspyq vsapsdpldi viiglyekpslsaqpgptvl agesvtlscs srssydmyhl sregeaherr lpagtkvngt fqanfplgpa thggtyrcfgsfrdspyews kssdpllvsv tgnpsnswps ptepssetgn prhlhvligt svvkipftil lffllhrwcsdkknaavmdq epagnrtvns edsdeqdhqe vsya

人KIR2DS1 cDNA(SEQ ID NO:28)

atgtcgctcacggtcgtcagcatggcgtgtgttgggttcttcttgctgcagggggcctggccacatgagggagtccacagaaaaccttccctcctggcccacccaggtcgcctggtgaaatcagaagagacagtcatcctgcaatgttggtcagatgtcatgtttgaacacttccttctgcacagagaggggatgtttaacgacactttgcgcctcattggagaacaccatgatggggtctccaaggccaacttctccatcagtcgcatgaagcaagacctggcagggacctacagatgctacggttctgttactcactccccctatcagttgtcagctcccagtgaccctctggacatcgtgatcataggtctatatgagaaaccttctctctcagcccagccgggccccacggttctggcaggagagaatgtgaccttgtcctgcagctcccggagctcctatgacatgtaccatctatccagggaaggggaggcccatgaacgtaggctccctgcagggaccaaggtcaacggaacattccaggccaactttcctctgggccctgccacccatggagggacctacagatgcttcggctctttccgtgactctccatacgagtggtcaaagtcaagtgacccactgcttgtttctgtcacaggaaacccttcaaatagttggccttcacccactgaaccaagctccgaaaccggtaaccccagacacctacatgttctgattgggacctcagtggtcaaaatccctttcaccatcctcctcttctttctccttcatcgctggtgctccgacaaaaaaaatgctgctgtaatggaccaagagcctgcagggaacagaacagtgaacagcgaggattctgatgaacaagaccatcaggaggtgtcatacgcataa

成熟的人KIR2DS2蛋白质和cDNA序列如下所示。

人KIR2DS2蛋白(SEQ ID NO:29)

mslmvvsmvc vgffllqgaw phegvhrkps llahpgplvk seetvilqcw sdvrfehfllhregkykdtl hligehhdgv skanfsigpm mqdlagtyrc ygsvthspyq lsapsdpldi vitglyekpslsaqpgptvl agesvtlscs srssydmyhl sregeaherr fsagpkvngt fqadfplgpa thggtyrcfgsfrdspyews nssdpllvsv tgnpsnswps ptepssktgn prhlhvligt svvkipftil lffllhrwcsnkknaavmdq epagnrtvns edsdeqdhqe vsya

人KIR2DS2 cDNA(SEQ ID NO:30)

atgtcgctcatggtcgtcagcatggcgtgtgttgggttcttcttgctgcagggggcctggccacatgagggagtccacagaaaaccttccctcctggcccacccaggtcccctggtgaaatcagaagagacagtcatcctgcaatgttggtcagatgtcaggtttgagcacttccttctgcacagagaggggaagtataaggacactttgcacctcattggagagcaccatgatggggtctccaaggccaacttctccatcggtcccatgatgcaagaccttgcagggacctacagatgctacggttctgttactcactccccctatcagttgtcagctcccagtgaccctctggacatcgtcatcacaggtctatatgagaaaccttctctctcagcccagccgggccccacggttttggcaggagagagcgtgaccttgtcctgcagctcccggagctcctatgacatgtaccatctatccagggagggggaggcccatgaacgtaggttctctgcagggcccaaggtcaacggaacattccaggccgactttcctctgggccctgccacccacggaggaacctacagatgcttcggctctttccgtgactctccctatgagtggtcaaactcgagtgacccactgcttgtttctgtcacaggaaacccttcaaatagttggccttcacccactgaaccaagctccaaaaccggtaaccccagacacctgcatgttctgattgggacctcagtggtcaaaatccctttcaccatcctcctcttctttctccttcatcgctggtgctccaacaaaaaaaatgctgctgtaatggaccaagagcctgcagggaacagaacagtgaacagcgaggactctgatgaacaagaccctcaggaggtgacatacacacagttgaatcactgcgttttcacacagagaaaaatcactcgcccttctcagaggcccaagacacccccaacagatatcatcgtgtacacggaacttccaaatgctgagtccaga

成熟的人KIR2DS3蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人KIR2DS3蛋白(SEQ ID NO:31)

mslmvismac vgffwlqgaw phegfrrkps llahpgrlvk seetvilqcw sdvmfehfllhregtfndtl rligehidgv skanfsigrm rqdlagtyrc ygsvphspyq fsapsdpldi vitglyekpslsaqpgptvl agesvtlscs swssydmyhl stegeaherr fsagpkvngt fqadfplgpa tqggtyrcfgsfhdspyews kssdpllvsv tgnpsnswps ptepssktgn prhlhvligt svvklpftil lffllhrwcsdkknasvmdq gpagnrtvnr edsdeqdhqe vsya

人KIR2DS3 cDNA(SEQ ID NO:32)

atgtcgctcatggtcatcagcatggcatgtgttgggttcttctggctgcagggggcctggccacatgagggattccgcagaaaaccttccctcctggcccacccaggtcgcctggtgaaatcagaagagacagtcatcctgcaatgttggtcagatgtcatgtttgagcacttccttctgcacagagaggggacgtttaacgacactttgcgcctcattggagagcacattgatggggtctccaaggccaacttctccatcggtcgcatgaggcaagacctggcagggacctacagatgctacggttctgttcctcactccccctatcagttttcagctcccagtgaccctctggacatcgtgatcacaggtctatatgagaaaccttctctctcagcccagccgggccccacggttctggcaggagagagcgtgaccttgtcctgcagctcctggagctcctatgacatgtaccatctatccacggagggggaggcccatgaacgtaggttctctgcagggcccaaggtcaacggaacattccaggccgactttcctctgggccctgccacccaaggaggaacctacagatgcttcggctctttccatgactctccctacgagtggtcaaagtcaagtgacccactgcttgtttctgtcacaggaaacccttcaaatagttggccttcacccactgaaccaagctccaaaaccggtaaccccagacacctacacgttctgattgggacctcagtggtcaaactccctttcaccatcctcctcttctttctccttcatcgctggtgctccgacaaaaaaaatgcatctgtaatggaccaagggcctgcggggaacagaacagtgaacagggaggattctgatgaacaggaccatcaggaggtgtcatacgcataa

成熟的人KIR2DL4蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人KIR2DL4蛋白(SEQ ID NO:33)

hvggqdk pfcsawpsav vpqgghatlr chcrrgfnif tlykkdgvpv pelynrifwnsflispvtpa hagtyrcrgf hphsptewsa psnplvimvt glyekpslta rpgptvrage nvtlscssqssfdiyhlsre geahelrlpa vpsingtfqa dfplgpathg etyrcfgsfh gspyewsdps dplpvsvtgnpssswpspte psfktgiarh lhavirysva iilftilpff llhrwcskkk naavmnqepa ghrtvnredsdeqdpqevty aqldhciftq rkitgpsqrs krpstdtsvc ielpnaepra lspahehhsq almgssrettalsqtqlass nvpaagi

人KIR2DL4 cDNA(SEQ ID NO:34)

atgtccccttcacatgttgtggtcaatgtgtcaactgcacgatccgggcccctcaccacatcctctgcaccggtcagtcgagccgagtcactgcgtcctggcagcagaagctgcaccatgtccatgtcacccacggtcatcatcctggcatgtcttgggttcttcttggaccagagtgtgtgggcacacgtgggtggtcaggacaagcccttctgctctgcctggcccagcgctgtggtgcctcaaggaggacacgtgactcttcggtgtcactatcgtcgtgggtttaacatcttcacgctgtacaagaaagatggggtccctgtccctgagctctacaacagaatattctggaacagtttcctcattagccctgtgaccccagcacacgcagggacctacagatgtcgaggttttcacccgcactcccccactgagtggtcggcacccagcaaccccctggtgatcatggtcacaggtctatatgagaaaccttcgcttacagcccggccgggccccacggttcgcgcaggagagaacgtgaccttgtcctgcagctcccagagctcctttgacatctaccatctatccagggagggggaagcccatgaacttaggctccctgcagtgcccagcatcaatggaacattccaggccgacttccctctgggtcctgccacccacggagagacctacagatgcttcggctctttccatggatctccctacgagtggtcagacccgagtgacccactgcctgtttctgtcacaggaaacccttctagtagttggccttcacccactgaaccaagcttcaaaactggtatcgccagacacctgcatgctgtgattaggtactcagtggccatcatcctctttaccatccttcccttctttctccttcatcgctggtgctccaaaaaaaaagatgctgctgtaatgaaccaagagcctgcgggacacagaacagtgaacagggaggactctgatgaacaagaccctcaggaggtgacatacgcacagttggatcactgcattttcacacagagaaaaatcactggcccttctcagaggagcaagagaccctcaacagataccagcgtgtgtatagaacttccaaatgctgagcccagagcgttgtctcctgcccatgagcaccacagtcaggccttgatgggatcttctagggagacaacagccctgtctcaaacccagcttgccagctctaatgtaccagcagctggaatctga

成熟的人KIR2DS4蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人KIR2DS4蛋白(SEQ ID NO:35)

qegvhrkps flalpghlvk seetvilqcw sdvmfehfll hregkfnntl hligehhdgvskanfsigpm mpvlagtyrc yssvphspyq lsapsdpldm viiglyekps lsaqpgptvq agenvslscssiypgrgrpm nvgslqcaas tehsrptflw alpptegptd asalsvtlpt sgqtrvihcl fpsqetlqivglhplnqapk pvtpdtymf

人KIR2DS4 cDNA(SEQ ID NO:36)

atgtcgctcatggtcatcatcatggcgtgtgttgggttcttcttgctgcagggggcctggccacaggagggagtccacagaaaaccttccttcctggccctcccaggtcacctggtgaaatcagaagagacagtcatcctgcaatgttggtcggatgtcatgtttgagcacttccttctgcacagagaggggaagtttaacaacactttgcacctcattggagagcaccatgatggggtttccaaggccaacttctccattggtcccatgatgcctgtccttgcaggaacctacagatgctacggttctgttcctcactccccctatcagttgtcagctcccagtgaccctctggacatggtgatcataggtctatatgagaaaccttctctctcagcccagccgggccccacggttcaggcaggagagaatgtgaccttgtcctgcagctccatctatccagggaaggggaggcccatgaacgtaggctccctgcagtgcgcagcatcaacggaacattccaggccgactttcctctgggccctgccacccacggagggacctacagatgcttcggctctttccgtgacgctccctacgagtggtcaaactcgagtgatccactgcttgtttccgtcacaggaaacccttcaaatagttggccttcacccactgaaccaagctccaaaaccggtaaccccagacacctacatgttctgattgggacctcagtggtcaaaatccctttcaccatcctcctcttctttctccttcatcgctggtgctccgacaaaaaaaatgctgctgtaatggaccaagagcctgcagggaacagaacagtgaacagcgaggattctgatgaacaagaccatcaggaggtgtcatacgcataa成熟的人KIR2DS5蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人KIR2DS5(SEQ ID NO:37)

hegfrrkps llahpgplvk seetvilqcw sdvmfehfll hregtfnhtl rligehidgvskgnfsigrm tqdlagtyrc ygsvthspyq lsapsdpldi vitglyekps lsaqpgptvl agesvtlscssrssydmyhl sregeaherr lpagtkvngt fqadfpldpa thggtyrcfg sfrdspyews kssdpllvsvtgntsnswps ptepssktgn prhlhvligt svvklpftil lffllhrwcs nkknasvmdq gpagnrtvnredsdeqdhqe vsya

人KIR2DS5 cDNA(SEQ ID NO:38)

atgtcgctcatggtcatcagcatggcgtgtgttgcgttcttcttgctgcagggggcctggccacatgagggattccgcagaaaaccttccctcctggcccacccaggtcccctggtgaaatcagaagagacagtcatcctgcaatgttggtcagatgtcatgtttgagcacttccttctgcacagagaggggacgtttaaccacactttgcgcctcattggagagcacattgatggggtctccaagggcaacttctccatcggtcgcatgacacaagacctggcagggacctacagatgctacggttctgttactcactccccctatcagttgtcagcgcccagtgaccctctggacatcgtgatcacaggtctatatgagaaaccttctctctcagcccagccgggccccacggttctggcaggagagagcgtgaccttgtcctgcagctcccggagctcctatgacatgtaccatctatccagggaaggggaggcccatgaacgtaggctccctgcagggcccaaggtcaacagaacattccaggccgactttcctctggaccctgccacccacggagggacctacagatgcttcggctctttccgtgactctccatacgagtggtcaaagtcaagtgacccactgcttgtttctgtcacaggaaactcttcaaatagttggccttcacccactgaaccaagctccgaaaccggtaaccccagacacctacacgttctgattgggacctcagtggtcaaactccctttcaccatcctcctcttctttctccttcatcgctggtgctccaacaaaaaaaatgcatctgtaatggaccaagggcctgcggggaacagaacagtgaacagggaggattctgatgaacaggaccatcaggaggtgtcatacgcataa

成熟的人KIR3DS1蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人KIR3DS1 cDNA(SEQ ID NO:39)

hmggqdkpf lsawpsavvp rgghvtlrch yrhrfnnfml ykedrihvpi fhgrifqegfnmspvttaha gnytcrgshp hsptgwsaps npmvimvtgn hrkpsllahp gplvksgerv ilqcwsdimfehfflhkegi skdpsrlvgq ihdgvskanf sigsmmrala gtyrcygsvt htpyqlsaps dpldivvtglyekpslsaqp gpkvqagesv tlscssrssy dmyhlsregg aherrlpavr kvnrtfqadf plgpathggtyrcfgsfrhs pyewsdpsdp llvsvtgnps sswpspteps sksgnlrhlh iligtsvvki pftillffllhrwcsnkkkc ccngpracre qk

人KIR3DS1 cDNA(SEQ ID NO:40)

atgttgctcatggtcgtcagcatggcgtgtgttgggttgttcttggtccagagggccggtccacacatgggtggtcaggacaagcccttcctgtctgcctggcccagcgctgtggtgcctcgcggaggacacgtgactcttcggtgtcactatcgtcataggtttaacaatttcatgctatacaaagaagacagaatccacgttcccatcttccatggcagaatattccaggagggcttcaacatgagccctgtgaccacagcacatgcagggaactacacatgtcggggttcacacccacactcccccactgggtggtcggcacccagcaaccccatggtgatcatggtcacaggaaaccacagaaaaccttccctcctggcccacccaggtcccctggtgaaatcaggagagagagtcatcctgcaatgttggtcagatatcatgtttgagcacttctttctgcacaaagagtggatctctaaggacccctcacgcctcgttggacagatccatgatggggtctccaaggccaatttctccatcggttccatgatgcgtgcccttgcagggacctacagatgctacggttctgttactcacaccccctatcagttgtcagctcccagtgatcccctggacatcgtggtcacaggtctatatgagaaaccttctctctcagcccagccgggccccaaggttcaggcaggagagagcgtgaccttgtcctgtagctcccggagctcctatgacatgtaccatctatccagggaggggggagcccatgaacgtaggctccctgcagtgcgcaaggtcaacagaacattccaggcagatttccctctgggccctgccacccacggagggacctacagatgcttcggctctttccgtcactctccctacgagtggtcagacccgagtgacccactgcttgtttctgtcacaggaaacccttcaagtagttggccttcacccacagaaccaagctccaaatctggtaacctcagacacctgcacattctgattgggacctcagtggtcaaaatccctttcaccatcctcctcttctttctccttcatcgctggtgctccaacaaaaaaaaatgctgctgtaatggaccaagagcctgcagggaacagaagtga

成熟的人NKG2C蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人NKG2C蛋白(SEQ ID NO:41)

mskqrgtfse vslaqdpkrq qrkpkgnkss isgteqeifq velnlqnpsl nhqgidkiydcqgllpppek ltaevlgiic ivlmatvlkt ivlipfleqn nsspntrtqk arhcghcpee witysnscyyigkerrtwee sllactskns sllsidneee mkflasilps swigvfrnss hhpwvtingl afkhkikdsdnaelncavlq vnrlksaqcg ssmiyhckhk l

人NKG2C cDNA(SEQ ID NO:42)

atgaataaacaaagaggaaccttctcagaagtgagtctggcccaggacccaaagcggcagcaaaggaaacctaaaggcaataaaagctccatttcaggaaccgaacaggaaatattccaagtagaattaaatcttcaaaatccttccctgaatcatcaagggattgataaaatatatgactgccaaggtttactgccacctccagagaagctcactgccgaggtcctaggaatcatttgcattgtcctgatggccactgtgttaaaaacaatagttcttattcctttcctggagcagaacaatttttccccgaatacaagaacgcagaaagcacgtcattgtggccattgtcctgaggagtggattacatattccaacagttgttattacattggtaaggaaagaagaacttgggaagagagtttgctggcctgtacttcgaagaactccagtctgctttctatagataatgaagaagaaatgaaatttctggccagcattttaccttcctcatggattggtgtgtttcgtaacagcagtcatcatccatgggtgacaataaatggtttggctttcaaacataagataaaagactcagataatgctgaacttaactgtgcagtgctacaagtaaatcgacttaaatcagcccagtgtggatcttcaatgatatatcattgtaagcataagctttag

成熟的人CCR7蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CCR7蛋白(SEQ ID NO:43)

qdevtd dyigdnttvd ytlfeslcsk kdvrnfkawf lpimysiicf vgllgnglvvltyiyfkrlk tmtdtyllnl avadilfllt lpfwaysaak swvfgvhfck lifaiykmsf fsgmllllcisidryvaivq avsahrhrar vllisklscv giwilatvls ipellysdlq rssseqamrc slitehveafitiqvaqmvi gflvpllams fcylviirtl lqarnfernk aikviiavvv vfivfqlpyn gvvlaqtvanfnitsstcel skqlniaydv tyslacvrcc vnpflyafig vkfrndlfkl fkdlgclsqe qlrqwsscrhirrssmsvea ettttfsp

人CCR7 cDNA(SEQ ID NO:44)

atggacctggggaaaccaatgaaaagcgtgctggtggtggctctccttgtcattttccaggtatgcctgtgtcaagatgaggtcacggacgattacatcggagacaacaccacagtggactacactttgttcgagtctttgtgctccaagaaggacgtgcggaactttaaagcctggttcctccctatcatgtactccatcatttgtttcgtgggcctactgggcaatgggctggtcgtgttgacctatatctatttcaagaggctcaagaccatgaccgatacctacctgctcaacctggcggtggcagacatcctcttcctcctgacccttcccttctgggcctacagcgcggccaagtcctgggtcttcggtgtccacttttgcaagctcatctttgccatctacaagatgagcttcttcagtggcatgctcctacttctttgcatcagcattgaccgctacgtggccatcgtccaggctgtctcagctcaccgccaccgtgcccgcgtccttctcatcagcaagctgtcctgtgtgggcatctggatactagccacagtgctctccatcccagagctcctgtacagtgacctccagaggagcagcagtgagcaagcgatgcgatgctctctcatcacagagcatgtggaggcctttatcaccatccaggtggcccagatggtgatcggctttctggtccccctgctggccatgagcttctgttaccttgtcatcatccgcaccctgctccaggcacgcaactttgagcgcaacaaggccatcaaggtgatcatcgctgtggtcgtggtcttcatagtcttccagctgccctacaatggggtggtcctggcccagacggtggccaacttcaacatcaccagtagcacctgtgagctcagtaagcaactcaacatcgcctacgacgtcacctacagcctggcctgcgtccgctgctgcgtcaaccctttcttgtacgccttcatcggcgtcaagttccgcaacgatctcttcaagctcttcaaggacctgggctgcctcagccaggagcagctccggcagtggtcttcctgtcggcacatccggcgctcctccatgag

tgtggaggccgagaccaccaccaccttctccccatag

成熟的人CXCR3蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CXCR3蛋白(SEQ ID NO:45)

mvlevsdhqv lndaevaall enfsssydyg enesdsccts ppcpqdfsln fdraflpalysllfllgllg ngavaavlls rrtalsstdt fllhlavadt llvltlplwa vdaavqwvfg sglckvagalfninfyagal llacisfdry lnivhatqly rrgpparvtl tclavwglcl lfalpdfifl sahhderlnathcqynfpqv grtalrvlql vagfllpllv maycyahila vllvsrgqrr lramrlvvvv vvafalcwtpyhlvvlvdil mdlgalarnc gresrvdvak svtsglgymh cclnpllyaf vgvkfrermw mlllrlgcpnqrglqrqpss srrdsswset seasysgl

人CXCR3 cDNA(SEQ ID NO:46)

atggagttgaggaagtacggccctggaagactggcggggacagttataggaggagctgctcagagtaaatcacagactaaatcagactcaatcacaaaagagttcctgccaggcctttacacagccccttcctccccgttcccgccctcacaggtgagtgaccaccaagtgctaaatgacgccgaggttgccgccctcctggagaacttcagctcttcctatgactatggagaaaacgagagtgactcgtgctgtacctccccgccctgcccacaggacttcagcctgaacttcgaccgggccttcctgccagccctctacagcctcctctttctgctggggctgctgggcaacggcgcggtggcagccgtgctgctgagccggcggacagccctgagcagcaccgacaccttcctgctccacctagctgtagcagacacgctgctggtgctgacactgccgctctgggcagtggacgctgccgtccagtgggtctttggctctggcctctgcaaagtggcaggtgccctcttcaacatcaacttctacgcaggagccctcctgctggcctgcatcagctttgaccgctacctgaacatagttcatgccacccagctctaccgccgggggcccccggcccgcgtgaccctcacctgcctggctgtctgggggctctgcctgcttttcgccctcccagacttcatcttcctgtcggcccaccacgacgagcgcctcaacgccacccactgccaatacaacttcccacaggtgggccgcacggctctgcgggtgctgcagctggtggctggctttctgctgcccctgctggtcatggcctactgctatgcccacatcctggccgtgctgctggtttccaggggccagcggcgcctgcgggccatgcggctggtggtggtggtcgtggtggcctttgccctctgctggaccccctatcacctggtggtgctggtggacatcctcatggacctgggcgctttggcccgcaactgtggccgagaaagcagggtagacgtggccaagtcggtcacctcaggcctgggctacatgcactgctgcctcaacccgctgctctatgcctttgtaggggtcaagttccgggagcggatgtggatgctgctcttgcgcctgggctgccccaaccagagagggctccagaggcagccatcgtcttcccgccgggattcatcctggtctgagacctcagaggcctcctactcgggcttgtga

成熟的人L-选择素蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人L-选择素蛋白(SEQ ID NO:47)

df lahhgtdcwt yhysekpmnw qrarrfcrdn ytdlvaiqnk aeieylektl pfsrsyywigirkiggiwtw vgtnksltee aenwgdgepn nkknkedcve iyikrnkdag kwnddachkl kaalcytascqpwscsghge cveiinnytc ncdvgyygpq cqfviqcepl eapelgtmdc thplgnfsfs sqcafscsegtnltgieett cgpfgnwssp eptcqviqce plsapdlgim ncshplasfs ftsactfics egteligkkkticessgiws npspicqkld ksfsmikegd ynplfipvav mvtafsglaf iiwlarrlkk gkkskrsmndpy

人L-选择素cDNA(SEQ ID NO:48)

atgggctgcagaagaactagagaaggaccaagcaaagccatgatatttccatggaaatgtcagagcacccagagggacttatggaacatcttcaagttgtgggggtggacaatgctctgttgtgatttcctggcacatcatggaaccgactgctggacttaccattattctgaaaaacccatgaactggcaaagggctagaagattctgccgagacaattacacagatttagttgccatacaaaacaaggcggaaattgagtatctggagaagactctgcctttcagtcgttcttactactggataggaatccggaagataggaggaatatggacgtgggtgggaaccaacaaatctcttactgaagaagcagagaactggggagatggtgagcccaacaacaagaagaacaaggaggactgcgtggagatctatatcaagagaaacaaagatgcaggcaaatggaacgatgacgcctgccacaaactaaaggcagccctctgttacacagcttcttgccagccctggtcatgcagtggccatggagaatgtgtagaaatcatcaataattacacctgcaactgtgatgtggggtactatgggccccagtgtcagtttgtgattcagtgtgagcctttggaggccccagagctgggtaccatggactgtactcaccctttgggaaacttcagcttcagctcacagtgtgccttcagctgctctgaaggaacaaacttaactgggattgaagaaaccacctgtggaccatttggaaactggtcatctccagaaccaacctgtcaagtgattcagtgtgagcctctatcagcaccagatttggggatcatgaactgtagccatcccctggccagcttcagctttacctctgcatgtaccttcatctgctcagaaggaactgagttaattgggaagaagaaaaccatttgtgaatcatctggaatctggtcaaatcctagtccaatatgtcaaaaattggacaaaagtttctcaatgattaaggagggtgattataaccccctcttcattccagtggcagtcatggttactgcattctctgggttggcatttatcatttggctggcaaggagattaaaaaaaggcaagaaatccaagagaagtatgaatgacccatattaa

成熟的人CXCR1蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CXCR1蛋白(SEQ ID NO:49)

msnitdpqmw dfddlnftgm ppadedyspc xletetlnky vviiayalvf llsllgnslvmlvilysrvg rsvtdvylln laladllfal tlpiwaaskv ngwifgtflc kvvsllkevn fysgilllacisvdrylaiv hatrtltqkr hlvkfvclgc wglsmnlslp fflfrqayhp nnsspvcyev lgndtakwrmvlrilphtfg fivplfvmlf cygftlrtlf kahmgqkhra mrvifavvli fllcwlpynl vlladtlmrtqviqescerr nnigraldat eilgflhscl npiiyafigq nfrhgflkil amhglvskef larhrvtsytsssvnvssnl

人CXCR1 cDNA(SEQ ID NO:50)

atgtcaaatattacagatccacagatgtgggattttgatgatctaaatttcactggcatgccacctgcagatgaagattacagcccctgtatgctagaaactgagacactcaacaagtatgttgtgatcatcgcctatgccctagtgttcctgctgagcctgctgggaaactccctggtgatgctggtcatcttatacagcagggtcggccgctccgtcactgatgtctacctgctgaacctggccttggccgacctactctttgccctgaccttgcccatctgggccgcctccaaggtgaatggctggatttttggcacattcctgtgcaaggtggtctcactcctgaaggaagtcaacttctacagtggcatcctgctgttggcctgcatcagtgtggaccgttacctggccattgtccatgccacacgcacactgacccagaagcgtcacttggtcaagtttgtttgtcttggctgctggggactgtctatgaatctgtccctgcccttcttccttttccgccaggcttaccatccaaacaattccagtccagtttgctatgaggtcctgggaaatgacacagcaaaatggcggatggtgttgcggatcctgcctcacacctttggcttcatcgtgccgctgtttgtcatgctgttctgctatggattcaccctgcgtacactgtttaaggcccacatggggcagaagcaccgagccatgagggtcatctttgctgtcgtcctcatcttcctgctttgctggctgccctacaacctggtcctgctggcagacaccctcatgaggacccaggtgatccaggagagctgtgagcgccgcaacaacatcggccgggccctggatgccactgagattctgggatttctccatagctgcctcaaccccatcatctacgccttcatcggccaaaattttcgccatggattcctcaagatcctggctatgcatggcctggtcagcaaggagttcttggcacgtcatcgtgttacctcctacacttcttcgtctgtcaatgtctcttccaacctctga

成熟的人CXCR2蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CXCR2蛋白(SEQ ID NO:51)

medfnmesds fedfwkgedl snysysstlp pflldaapce pesleinkyf vviiyalvfllsllgnslvm lvilysrvgr svtdvyllnl aladllfalt lpiwaaskvn gwifgtflck vvsllkevnfysgilllaci svdrylaivh atrtltqkry lvkficlsiw glslllalpv llfrrtvyss nvspacyedmgnntanwrml lrilpqsfgf ivpllimlfc ygftlrtlfk ahmgqkhram rvifavvlif llcwlpynlvlladtlmrtq viqetcerrn hidraldate ilgilhscln pliyafigqk frhgllkila ihgliskdslpkdsrpsfvg sssghtsttl

人CXCR2 cDNA(SEQ ID NO:52)

atggaagattttaacatggagagtgacagctttgaagatttctggaaaggtgaagatcttagtaattacagttacagctctaccctgcccccttttctactagatgccgccccatgtgaaccagaatccctggaaatcaacaagtattttgtggtcattatctatgccctggtattcctgctgagcctgctgggaaactccctcgtgatgctggtcatcttatacagcagggtcggccgctccgtcactgatgtctacctgctgaacctagccttggccgacctactctttgccctgaccttgcccatctgggccgcctccaaggtgaatggctggatttttggcacattcctgtgcaaggtggtctcactcctgaaggaagtcaacttctatagtggcatcctgctactggcctgcatcagtgtggaccgttacctggccattgtccatgccacacgcacactgacccagaagcgctacttggtcaaattcatatgtctcagcatctggggtctgtccttgctcctggccctgcctgtcttacttttccgaaggaccgtctactcatccaatgttagcccagcctgctatgaggacatgggcaacaatacagcaaactggcggatgctgttacggatcctgccccagtcctttggcttcatcgtgccactgctgatcatgctgttctgctacggattcaccctgcgtacgctgtttaaggcccacatggggcagaagcaccgggccatgcgggtcatctttgctgtcgtcctcatcttcctgctctgctggctgccctacaacctggtcctgctggcagacaccctcatgaggacccaggtgatccaggagacctgtgagcgccgcaatcacatcgaccgggctctggatgccaccgagattctgggcatccttcacagctgcctcaaccccctcatctacgccttcattggccagaagtttcgccatggactcctcaagattctagctatacatggcttgatcagcaaggactccctgcccaaagacagcaggccttcctttgttggctcttcttcagggcacacttccactactctctaa

成熟的人CX3CR1蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CX3CR1蛋白(SEQ ID NO:53)

mdqfpesvte nfeyddlaea cyigdivvfg tvflsifysv ifaiglvgnl lvvfaltnskkpksvtdiyl lnlalsdllf vatlpfwthy linekglhna mckfttafff igffgsiffi tvisidrylaivlaansmnn rtvqhgvtis lgvwaaailv aapqfmftkq keneclgdyp evlqeiwpvl rnvetnflgfllpllimsyc yfriiqtlfs cknhkkakai klillvvivf flfwtpynvm ifletlklyd ffpscdmrkdlrlalsvtet vafshcclnp liyafagekf rrylyhlygk clavlcgrsv hvdfsssesq rsrhgsvlssnftyhtsdgd allll

人CX3CR1 cDNA(SEQ ID NO:54)

atggatcagttccctgaatcagtgacagaaaactttgagtacgatgatttggctgaggcctgttatattggggacatcgtggtctttgggactgtgttcctgtccatattctactccgtcatctttgccattggcctggtgggaaatttgttggtagtgtttgccctcaccaacagcaagaagcccaagagtgtcaccgacatttacctcctgaacctggccttgtctgatctgctgtttgtagccactttgcccttctggactcactatttgataaatgaaaagggcctccacaatgccatgtgcaaattcactaccgccttcttcttcatcggcttttttggaagcatattcttcatcaccgtcatcagcattgataggtacctggccatcgtcctggccgccaactccatgaacaaccggaccgtgcagcatggcgtcaccatcagcctaggcgtctgggcagcagccattttggtggcagcaccccagttcatgttcacaaagcagaaagaaaatgaatgccttggtgactaccccgaggtcctccaggaaatctggcccgtgctccgcaatgtggaaacaaattttcttggcttcctactccccctgctcattatgagttattgctacttcagaatcatccagacgctgttttcctgcaagaaccacaagaaagccaaagccattaaactgatccttctggtggtcatcgtgtttttcctcttctggacaccctacaacgttatgattttcctggagacgcttaagctctatgacttctttcccagttgtgacatgaggaaggatctgaggctggccctcagtgtgactgagacggttgcatttagccattgttgcctgaatcctctcatctatgcatttgctggggagaagttcagaagatacctttaccacctgtatgggaaatgcctggctgtcctgtgtgggcgctcagtccacgttgatttctcctcatctgaatcacaaaggagcaggcatggaagtgttctgagcagcaattttacttaccacacgagtgatggagatgcattgctccttctctga

成熟的人ChemR23蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人ChemR23蛋白(SEQ ID NO:55)

mrmededynt sisygdeypd yldsivvled lsplearvtr iflvvvysiv cflgilgnglviiiatfkmk ktvnmvwfln lavadflfnv flpihityaa mdyhwvfgta mckisnflli hnmftsvflltiissdrcis vllpvwsqnh rsvrlaymac mviwvlaffl sspslvfrdt anlhgkiscf nnfslstpgssswpthsqmd pvgysrhmvv tvtrflcgfl vpvliitacy ltivcklqrn rlaktkkpfk iivtiiitfflcwcpyhtln llelhhtamp gsvfslglpl atalaiansc mnpilyvfmg qdfkkfkval fsrlvnalsedtghssypsh rsftkmssmn ertsmneret gml

人ChemR23 cDNA(SEQ ID NO:56)

atgagaatggaggatgaagattacaacacttccatcagttacggtgatgaataccctgattatttagactccattgtggttttggaggacttatcccccttggaagccagggtgaccaggatcttcctggtggtggtctacagcatcgtctgcttcctcgggattctgggcaatggtctggtgatcatcattgccaccttcaagatgaagaagacagtgaacatggtctggttcctcaacctggcagtggcagatttcctgttcaacgtcttcctcccaatccatatcacctatgccgccatggactaccactgggttttcgggacagccatgtgcaagatcagcaacttccttctcatccacaacatgttcaccagcgtcttcctgctgaccatcatcagctctgaccgctgcatctctgtgctcctccctgtctggtcccagaaccaccgcagcgttcgcctggcttacatggcctgcatggtcatctgggtcctggctttcttcttgagttccccatctctcgtcttccgggacacagccaacctgcatgggaaaatatcctgcttcaacaacttcagcctgtccacacctgggtcttcctcgtggcccactcactcccaaatggaccctgtggggtatagccggcacatggtggtgactgtcacccgcttcctctgtggcttcctggtcccagtcctcatcatcacagcttgctacctcaccatcgtgtgcaaactgcagcgcaaccgcctggccaagaccaagaagcccttcaagattattgtgaccatcatcattaccttcttcctctgctggtgcccctaccacacactcaacctcctagagctccaccacactgccatgcctggctctgtcttcagcctgggtttgcccctggccactgcccttgccattgccaacagctgcatgaaccccattctgtatgttttcatgggtcaggacttcaagaagttcaaggtggccctcttctctcgcctggtcaatgctctaagtgaagatacaggccactcttcctaccccagccatagaagctttaccaagatgtcatcaatgaatgagaggacttctatgaatgagagggagaccggcatgctttga

成熟的人CXCR4的蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CXCR4蛋白(SEQ ID NO:57)

megisiytsd nyteemgsgd ydsmkepcfr eenanfnkif lptiysiifl tgivgnglvilvmgyqkklr smtdkyrlhl svadllfvit lpfwavdava nwyfgnflck avhviytvnl yssvlilafisldrylaivh atnsqrprkl laekvvyvgv wipallltip dfifanvsea ddryicdrfy pndlwvvvfqfqhimvglil pgivilscyc iiisklshsk ghqkrkalkt tvililaffa cwlpyyigis idsfilleiikqgcefentv hkwisiteal affhcclnpi lyaflgakfk tsaqhaltsv srgsslkils kgkrgghssvstesesssfh ss

人CXCR4 cDNA(SEQ ID NO:58)

atgtccattcctttgcctcttttgcagatatacacttcagataactacaccgaggaaatgggctcaggggactatgactccatgaaggaaccctgtttccgtgaagaaaatgctaatttcaataaaatcttcctgcccaccatctactccatcatcttcttaactggcattgtgggcaatggattggtcatcctggtcatgggttaccagaagaaactgagaagcatgacggacaagtacaggctgcacctgtcagtggccgacctcctctttgtcatcacgcttcccttctgggcagttgatgccgtggcaaactggtactttgggaacttcctatgcaaggcagtccatgtcatctacacagtcaacctctacagcagtgtcctcatcctggccttcatcagtctggaccgctacctggccatcgtccacgccaccaacagtcagaggccaaggaagctgttggctgaaaaggtggtctatgttggcgtctggatccctgccctcctgctgactattcccgacttcatctttgccaacgtcagtgaggcagatgacagatatatctgtgaccgcttctaccccaatgacttgtgggtggttgtgttccagtttcagcacatcatggttggccttatcctgcctggtattgtcatcctgtcctgctattgcattatcatctccaagctgtcacactccaagggccaccagaagcgcaaggccctcaagaccacagtcatcctcatcctggctttcttcgcctgttggctgccttactacattgggatcagcatcgactccttcatcctcctggaaatcatcaagcaagggtgtgagtttgagaacactgtgcacaagtggatttccatcaccgaggccctagctttcttccactgttgtctgaaccccatcctctatgctttccttggagccaaatttaaaacctctgcccagcacgcactcacctctgtgagcagagggtccagcctcaagatcctctccaaaggaaagcgaggtggacattcatctgtttccactgagtctgagtcttcaagttttcactccagctaa

成熟的人CCR5蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人CCR5蛋白(SEQ ID NO:59)

mdyqvsspiy dinyytsepc qkinvkqiaa rllpplyslv fifgfvgnml vililinckrlksmtdiyll nlaisdlffl ltvpfwahya aaqwdfgntm cqlltglyfi gffsgiffii lltidrylavvhavfalkar tvtfgvvtsv itwvvavfas lpgiiftrsq keglhytcss hfpysqyqfw knfqtlkivilglvlpllvm vicysgilkt llrcrnekkr hravrlifti mivyflfwap ynivlllntf qeffglnncsssnrldqamq vtetlgmthc cinpiiyafv gekfrnyllv ffqkhiakrf ckccsifqqe aperassvytrstgeqeisv gl

人CCR5 cDNA(SEQ ID NO:60)

atggattatcaagtgtcaagtccaatctatgacatcaattattatacatcggagccctgccaaaaaatcaatgtgaagcaaatcgcagcccgcctcctgcctccgctctactcactggtgttcatctttggttttgtgggcaacatgctggtcatcctcatcctgataaactgcaaaaggctgaagagcatgactgacatctacctgctcaacctggccatctctgacctgtttttccttcttactgtccccttctgggctcactatgctgccgcccagtgggactttggaaatacaatgtgtcaactcttgacagggctctattttataggcttcttctctggaatcttcttcatcatcctcctgacaatcgataggtacctggctgtcgtccatgctgtgtttgctttaaaagccaggacggtcacctttggggtggtgacaagtgtgatcacttgggtggtggctgtgtttgcgtctctcccaggaatcatctttaccagatctcaaaaagaaggtcttcattacacctgcagctctcattttccatacagtcagtatcaattctggaagaatttccagacattaaagatagtcatcttggggctggtcctgccgctgcttgtcatggtcatctgctactcgggaatcctaaaaactctgcttcggtgtcgaaatgagaagaagaggcacagggctgtgaggcttatcttcaccatcatgattgtttattttctcttctgggctccctacaacattgtccttctcctgaacaccttccaggaattctttggcctgaataattgcagtagctctaacaggttggaccaagctatgcaggtgacagagactcttgggatgacgcactgctgcatcaaccccatcatctatgcctttgtcggggagaagttcagaaactacctcttagtcttcttccaaaagcacattgccaaacgcttctgcaaatgctgttctattttccagcaagaggctcccgagcgagcaagctcagtttacacccgatccactggggagcaggaaatatctgtgggcttgtga

成熟的人S1P5蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人S1P5蛋白(SEQ ID NO:61)

mesgllrpap vsevivlhyn ytgklrgary qpgaglrada vvclavcafi vlenlavllvlgrhprfhap mflllgsltl sdllagaaya anillsgplt lklspalwfa reggvfvalt asvlsllaialersltmarr gpapvssrgr tlamaaaawg vslllgllpa lgwnclgrld acstvlplya kayvlfcvlafvgilaaica lyariycqvr anarrlparp gtagttstra rrkprslall rtlsvvllaf vacwgplfllllldvacpar tcpvllqadp flglamansl lnpiiytltn rdlrhallrl vccgrhscgr dpsgsqqsasaaeasgglrr clppgldgsf sgsersspqr dgldtsgstg spgaptaart lvsepaad

人S1P5 cDNA(SEQ ID NO:62)

atggagtcggggctgctgcggccggcgccggtgagcgaggtcatcgtcctgcattacaactacaccggcaagctccgcggtgcgcgctaccagccgggtgccggcctgcgcgccgacgccgtggtgtgcctggcggtgtgcgccttcatcgtgctagagaatctagccgtgttgttggtgctcggacgccacccgcgcttccacgctcccatgttcctgctcctgggcagcctcacgttgtcggatctgctggcaggcgccgcctacgccgccaacatcctactgtcggggccgctcacgctgaaactgtcccccgcgctctggttcgcacgggagggaggcgtcttcgtggcactcactgcgtccgtgctgagcctcctggccatcgcgctggagcgcagcctcaccatggcgcgcagggggcccgcgcccgtctccagtcgggggcgcacgctggcgatggcagccgcggcctggggcgtgtcgctgctcctcgggctcctgccagcgctgggctggaattgcctgggtcgcctggacgcttgctccactgtcttgccgctctacgccaaggcctacgtgctcttctgcgtgctcgccttcgtgggcatcctggccgctatctgtgcactctacgcgcgcatctactgccaggtacgcgccaacgcgcggcgcctgccggcacggcccgggactgcggggaccacctcgacccgggcgcgtcgcaagccgcgctcgctggccttgctgcgcacgctcagcgtggtgctcctggcctttgtggcatgttggggccccctcttcctgctgctgttgctcgacgtggcgtgcccggcgcgcacctgtcctgtactcctgcaggccgatcccttcctgggactggccatggccaactcacttctgaaccccatcatctacacgctcaccaaccgcgacctgcgccacgcgctcctgcgcctggtctgctgcggacgccactcctgcggcagagacccgagtggctcccagcagtcggcgagcgcggctgaggcttccgggggcctgcgccgctgcctgcccccgggccttgatgggagcttcagcggctcggagcgctcatcgccccagcgcgacgggctggacaccagcggctccacaggcagccccggtgcacccacagccgcccggactctggtatcagaaccggctgcagactga

成熟的人C-kit蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人C-kit蛋白(SEQ ID NO:63)

qpsvs pgepsppsih pgksdlivrv gdeirllctd pgfvkwtfei ldetnenkqnewitekaeat ntgkytctnk hglsnsiyvf vrdpaklflv drslygkedn dtlvrcpltd pevtnyslkgcqgkplpkdl rfipdpkagi miksvkrayh rlclhcsvdq egksvlsekf ilkvrpafka vpvvsvskasyllregeeft vtctikdvss svystwkren sqtklqekyn swhhgdfnye rqatltissa rvndsgvfmcyanntfgsan vtttlevvdk gfinifpmin ttvfvndgen vdliveyeaf pkpehqqwiy mnrtftdkwedypksenesn iryvselhlt rlkgteggty tflvsnsdvn aaiafnvyvn tkpeiltydr lvngmlqcvaagfpeptidw yfcpgteqrc sasvlpvdvq tlnssgppfg klvvqssids safkhngtve ckayndvgktsayfnfafkg nnkeqihpht lftplligfv ivagmmciiv miltykylqk pmyevqwkvv eeingnnyvyidptqlpydh kwefprnrls fgktlgagaf gkvveatayg liksdaamtv avkmlkpsah lterealmselkvlsylgnh mnivnllgac tiggptlvit eyccygdlln flrrkrdsfi cskqedhaea alyknllhskesscsdstne ymdmkpgvsy vvptkadkrr svrigsyier dvtpaimedd elaldledll sfsyqvakgmaflaskncih rdlaarnill thgritkicd fglardiknd snyvvkgnar lpvkwmapes ifncvytfesdvwsygiflw elfslgsspy pgmpvdskfy kmikegfrml spehapaemy dimktcwdad plkrptfkqivqliekqise stnhiysnla ncspnrqkpv vdhsvrinsv gstasssqpl lvhddv

人C-kit cDNA(SEQ ID NO:64)

atgagaggcgctcgcggcgcctgggattttctctgcgttctgctcctactgcttcgcgtccagacaggctcttctcaaccatctgtgagtccaggggaaccgtctccaccatccatccatccaggaaaatcagacttaatagtccgcgtgggcgacgagattaggctgttatgcactgatccgggctttgtcaaatggacttttgagatcctggatgaaacgaatgagaataagcagaatgaatggatcacggaaaaggcagaagccaccaacaccggcaaatacacgtgcaccaacaaacacggcttaagcaattccatttatgtgtttgttagagatcctgccaagcttttccttgttgaccgctccttgtatgggaaagaagacaacgacacgctggtccgctgtcctctcacagacccagaagtgaccaattattccctcaaggggtgccaggggaagcctcttcccaaggacttgaggtttattcctgaccccaaggcgggcatcatgatcaaaagtgtgaaacgcgcctaccatcggctctgtctgcattgttctgtggaccaggagggcaagtcagtgctgtcggaaaaattcatcctgaaagtgaggccagccttcaaagctgtgcctgttgtgtctgtgtccaaagcaagctatcttcttagggaaggggaagaattcacagtgacgtgcacaataaaagatgtgtctagttctgtgtactcaacgtggaaaagagaaaacagtcagactaaactacaggagaaatataatagctggcatcacggtgacttcaattatgaacgtcaggcaacgttgactatcagttcagcgagagttaatgattctggagtgttcatgtgttatgccaataatacttttggatcagcaaatgtcacaacaaccttggaagtagtagataaaggattcattaatatcttccccatgataaacactacagtatttgtaaacgatggagaaaatgtagatttgattgttgaatatgaagcattccccaaacctgaacaccagcagtggatctatatgaacagaaccttcactgataaatgggaagattatcccaagtctgagaatgaaagtaatatcagatacgtaagtgaacttcatctaacgagattaaaaggcaccgaaggaggcacttacacattcctagtgtccaattctgacgtcaatgctgccatagcatttaatgtttatgtgaatacaaaaccagaaatcctgacttacgacaggctcgtgaatggcatgctccaatgtgtggcagcaggattcccagagcccacaatagattggtatttttgtccaggaactgagcagagatgctctgcttctgtactgccagtggatgtgcagacactaaactcatctgggccaccgtttggaaagctagtggttcagagttctatagattctagtgcattcaagcacaatggcacggttgaatgtaaggcttacaacgatgtgggcaagacttctgcctattttaactttgcatttaaaggtaacaacaaagagcaaatccatccccacaccctgttcactcctttgctgattggtttcgtaatcgtagctggcatgatgtgcattattgtgatgattctgacctacaaatatttacagaaacccatgtatgaagtacagtggaaggttgttgaggagataaatggaaacaattatgtttacatagacccaacacaacttccttatgatcacaaatgggagtttcccagaaacaggctgagttttgggaaaaccctgggtgctggagctttcgggaaggttgttgaggcaactgcttatggcttaattaagtcagatgcggccatgactgtcgctgtaaagatgctcaagccgagtgcccatttgacagaacgggaagccctcatgtctgaactcaaagtcctgagttaccttggtaatcacatgaatattgtgaatctacttggagcctgcaccattggagggcccaccctggtcattacagaatattgttgctatggtgatcttttgaattttttgagaagaaaacgtgattcatttatttgttcaaagcaggaagatcatgcagaagctgcactttataagaatcttctgcattcaaaggagtcttcctgcagcgatagtactaatgagtacatggacatgaaacctggagtttcttatgttgtcccaaccaaggccgacaaaaggagatctgtgagaataggctcatacatagaaagagatgtgactcccgccatcatggaggatgacgagttggccctagacttagaagacttgctgagcttttcttaccaggtggcaaagggcatggctttcctcgcctccaagaattgtattcacagagacttggcagccagaaatatcctccttactcatggtcggatcacaaagatttgtgattttggtctagccagagacatcaagaatgattctaattatgtggttaaaggaaacgctcgactacctgtgaagtggatggcacctgaaagcattttcaactgtgtatacacgtttgaaagtgacgtctggtcctatgggatttttctttgggagctgttctctttaggaagcagcccctatcctggaatgccggtcgattctaagttctacaagatgatcaaggaaggcttccggatgctcagccctgaacacgcacctgctgaaatgtatgacataatgaagacttgctgggatgcagatcccctaaaaagaccaacattcaagcaaattgttcagctaattgagaagcagatttcagagagcaccaatcatatttactccaacttagcaaactgcagccccaaccgacagaagcccgtggtagaccattctgtgcggatcaattctgtcggcagcaccgcttcctcctcccagcctctgcttgtgcacgacgatgtctga

成熟人mTOR的蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人mTOR蛋白(SEQ ID NO:65)

mlgtgpaaat taattssnvs vlqqfasglk srneetraka akelqhyvtm elremsqeestrfydqlnhh ifelvsssda nerkggilai asligveggn atrigrfany lrnllpsndp vvmemaskaigrlamagdtf taeyvefevk ralewlgadr negrrhaavl vlrelaisvp tfffqqvqpf fdnifvavwdpkqairegav aalraclilt tqrepkemqk pqwyrhtfee aekgfdetla kekgmnrddr ihgallilnelvrissmege rlreemeeit qqqlvhdkyc kdlmgfgtkp rhitpftsfq avqpqqsnal vgllgysshqglmgfgtsps pakstlvesr ccrdlmeekf dqvcqwvlkc rnsknsliqm tilnllprla afrpsaftdtqylqdtmnhv lscvkkeker taafqalgll svavrsefkv ylprvldiir aalppkdfah krqkamqvdatvftcismla ramgpgiqqd ikellepmla vglspaltav lydlsrqipq lkkdiqdgll kmlslvlmhkplrhpgmpkg lahqlaspgl ttlpeasdvg sitlalrtlg sfefeghslt qfvrhcadhf lnsehkeirmeaartcsrll tpsihlisgh ahvvsqtavq vvadvlskll vvgitdpdpd irycvlasld erfdahlaqaenlqalfval ndqvfeirel aictvgrlss mnpafvmpfl rkmliqilte lehsgigrik eqsarmlghlvsnaprlirp ymepilkali lklkdpdpdp npgvinnvla tigelaqvsg lemrkwvdel fiiimdmlqdssllakrqva lwtlgqlvas tgyvvepyrk yptllevlln flkteqnqgt rreairvlgl lgaldpykhkvnigmidqsr dasavslses kssqdssdys tsemlvnmgn lpldefypav smvalmrifr dqslshhhtmvvqaitfifk slglkcvqfl pqvmptflnv irvcdgaire flfqqlgmlv sfvkshirpy mdeivtlmrefwvmntsiqs tiillieqiv valggefkly lpqliphmlr vfmhdnspgr ivsikllaai qlfganlddylhlllppivk lfdapeaplp srkaaletvd rltesldftd yasriihpiv rtldqspelr stamdtlsslvfqlgkkyqi fipmvnkvlv rhrinhqryd vlicrivkgy tladeeedpl iyqhrmlrsg qgdalasgpvetgpmkklhv stinlqkawg aarrvskddw lewlrrlsle llkdssspsl rscwalaqay npmardlfnaafvscwseln edqqdelirs ielaltsqdi aevtqtllnl aefmehsdkg plplrddngi vllgeraakcrayakalhyk elefqkgptp aileslisin nklqqpeaaa gvleyamkhf geleiqatwy eklhewedalvaydkkmdtn kddpelmlgr mrclealgew gqlhqqccek wtlvndetqa kmarmaaaaa wglgqwdsmeeytcmiprdt hdgafyravl alhqdlfsla qqcidkardl ldaeltamag esysraygam vschmlseleeviqyklvpe rreiirqiww erlqgcqriv edwqkilmvr slvvsphedm rtwlkyaslc gksgrlalahktlvlllgvd psrqldhplp tvhpqvtyay mknmwksark idafqhmqhf vqtmqqqaqh aiatedqqhkqelhklmarc flklgewqln lqginestip kvlqyysaat ehdrswykaw hawavmnfea vlhykhqnqardekkklrha sganitnatt aattaatatt tastegsnse seaestensp tpsplqkkvt edlsktllmytvpavqgffr sislsrgnnl qdtlrvltlw fdyghwpdvn ealvegvkai qidtwlqvip qliaridtprplvgrlihql ltdigryhpq aliypltvas kstttarhna ankilknmce hsntlvqqam mvseelirvailwhemwheg leeasrlyfg ernvkgmfev leplhammer gpqtlketsf nqaygrdlme aqewcrkymksgnvkdltqa wdlyyhvfrr iskqlpqlts lelqyvspkl lmcrdlelav pgtydpnqpi iriqsiapslqvitskqrpr kltlmgsngh efvfllkghe dlrqdervmq lfglvntlla ndptslrknl siqryaviplstnsgligwv phcdtlhali rdyrekkkil lniehrimlr mapdydhltl mqkvevfeha vnntagddlakllwlkspss evwfdrrtny trslavmsmv gyilglgdrh psnlmldrls gkilhidfgd cfevamtrekfpekipfrlt rmltnamevt gldgnyritc htvmevlreh kdsvmavlea fvydpllnwr lmdtntkgnkrsrtrtdsys agqsveildg velgepahkk tgttvpesih sfigdglvkp ealnkkaiqi inrvrdkltgrdfshddtld vptqvellik qatshenlcq cyigwcpfw

人mTOR cDNA(SEQ ID NO:66)

atgcttgga accggacctg ccgccgccac caccgctgcc accacatcta gcaatgtgagcgtcctgcag cagtttgcca gtggcctaaa gagccggaat gaggaaacca gggccaaagc cgccaaggagctccagcact atgtcaccat ggaactccga gagatgagtc aagaggagtc tactcgcttc tatgaccaactgaaccatca catttttgaa ttggtttcca gctcagatgc caatgagagg aaaggtggca tcttggccatagctagcctc ataggagtgg aaggtgggaa tgccacccga attggcagat ttgccaacta tcttcggaacctcctcccct ccaatgaccc agttgtcatg gaaatggcat ccaaggccat tggccgtctt gccatggcaggggacacttt taccgctgag tacgtggaat ttgaggtgaa gcgagccctg gaatggctgg gtgctgaccgcaatgagggc cggagacatg cagctgtcct ggttctccgt gagctggcca tcagcgtccc taccttcttcttccagcaag tgcaaccctt ctttgacaac atttttgtgg ccgtgtggga ccccaaacag gccatccgtgagggagctgt agccgccctt cgtgcctgtc tgattctcac aacccagcgt gagccgaagg agatgcagaagcctcagtgg tacaggcaca catttgaaga agcagagaag ggatttgatg agaccttggc caaagagaagggcatgaatc gggatgatcg gatccatgga gccttgttga tccttaacga gctggtccga atcagcagcatggagggaga gcgtctgaga gaagaaatgg aagaaatcac acagcagcag ctggtacacg acaagtactgcaaagatctc atgggcttcg gaacaaaacc tcgtcacatt acccccttca ccagtttcca ggctgtacagccccagcagt caaatgcctt ggtggggctg ctggggtaca gctctcacca aggcctcatg ggatttgggacctcccccag tccagctaag tccaccctgg tggagagccg gtgttgcaga gacttgatgg aggagaaatttgatcaggtg tgccagtggg tgctgaaatg caggaatagc aagaactcgc tgatccaaat gacaatccttaatttgttgc cccgcttggc tgcattccga ccttctgcct tcacagatac ccagtatctc caagataccatgaaccatgt cctaagctgt gtcaagaagg agaaggaacg tacagcggcc ttccaagccc tggggctactttctgtggct gtgaggtctg agtttaaggt ctatttgcct cgcgtgctgg acatcatccg agcggccctgcccccaaagg acttcgccca taagaggcag aaggcaatgc aggtggatgc cacagtcttc acttgcatcagcatgctggc tcgagcaatg gggccaggca tccagcagga tatcaaggag ctgctggagc ccatgctggcagtgggacta agccctgccc tcactgcagt gctctacgac ctgagccgtc agattccaca gctaaagaaggacattcaag atgggctact gaaaatgctg tccctggtcc ttatgcacaa accccttcgc cacccaggcatgcccaaggg cctggcccat cagctggcct ctcctggcct cacgaccctc cctgaggcca gcgatgtgggcagcatcact cttgccctcc gaacgcttgg cagctttgaa tttgaaggcc actctctgac ccaatttgttcgccactgtg cggatcattt cctgaacagt gagcacaagg agatccgcat ggaggctgcc cgcacctgctcccgcctgct cacaccctcc atccacctca tcagtggcca tgctcatgtg gttagccaga ccgcagtgcaagtggtggca gatgtgctta gcaaactgct cgtagttggg ataacagatc ctgaccctga cattcgctactgtgtcttgg cgtccctgga cgagcgcttt gatgcacacc tggcccaggc ggagaacttg caggccttgtttgtggctct gaatgaccag gtgtttgaga tccgggagct ggccatctgc actgtgggcc gactcagtagcatgaaccct gcctttgtca tgcctttcct gcgcaagatg ctcatccaga ttttgacaga gttggagcacagtgggattg gaagaatcaa agagcagagt gcccgcatgc tggggcacct ggtctccaat gccccccgactcatccgccc ctacatggag cctattctga aggcattaat tttgaaactg aaagatccag accctgatccaaacccaggt gtgatcaata atgtcctggc aacaatagga gaattggcac aggttagtgg cctggaaatgaggaaatggg ttgatgaact ttttattatc atcatggaca tgctccagga ttcctctttg ttggccaaaaggcaggtggc tctgtggacc ctgggacagt tggtggccag cactggctat gtagtagagc cctacaggaagtaccctact ttgcttgagg tgctactgaa ttttctgaag actgagcaga accagggtac acgcagagaggccatccgtg tgttagggct tttaggggct ttggatcctt acaagcacaa agtgaacatt ggcatgatagaccagtcccg ggatgcctct gctgtcagcc tgtcagaatc caagtcaagt caggattcct ctgactatagcactagtgaa atgctggtca acatgggaaa cttgcctctg gatgagttct acccagctgt gtccatggtggccctgatgc ggatcttccg agaccagtca ctctctcatc atcacaccat ggttgtccag gccatcaccttcatcttcaa gtccctggga ctcaaatgtg tgcagttcct gccccaggtc atgcccacgt tccttaacgtcattcgagtc tgtgatgggg ccatccggga atttttgttc cagcagctgg gaatgttggt gtcctttgtgaagagccaca tcagacctta tatggatgaa atagtcaccc tcatgagaga attctgggtc atgaacacctcaattcagag cacgatcatt cttctcattg agcaaattgt ggtagctctt gggggtgaat ttaagctctacctgccccag ctgatcccac acatgctgcg tgtcttcatg catgacaaca gcccaggccg cattgtctctatcaagttac tggctgcaat ccagctgttt ggcgccaacc tggatgacta cctgcattta ctgctgcctcctattgttaa gttgtttgat gcccctgaag ctccactgcc atctcgaaag gcagcgctag agactgtggaccgcctgacg gagtccctgg atttcactga ctatgcctcc cggatcattc accctattgt tcgaacactggaccagagcc cagaactgcg ctccacagcc atggacacgc tgtcttcact tgtttttcag ctggggaagaagtaccaaat tttcattcca atggtgaata aagttctggt gcgacaccga atcaatcatc agcgctatgatgtgctcatc tgcagaattg tcaagggata cacacttgct gatgaagagg aggatccttt gatttaccagcatcggatgc ttaggagtgg ccaaggggat gcattggcta gtggaccagt ggaaacagga cccatgaagaaactgcacgt cagcaccatc aacctccaaa aggcctgggg cgctgccagg agggtctcca aagatgactggctggaatgg ctgagacggc tgagcctgga gctgctgaag gactcatcat cgccctccct gcgctcctgctgggccctgg cacaggccta caacccgatg gccagggatc tcttcaatgc tgcatttgtg tcctgctggtctgaactgaa tgaagatcaa caggatgagc tcatcagaag catcgagttg gccctcacct cacaagacatcgctgaagtc acacagaccc tcttaaactt ggctgaattc atggaacaca gtgacaaggg ccccctgccactgagagatg acaatggcat tgttctgctg ggtgagagag ctgccaagtg ccgagcatat gccaaagcactacactacaa agaactggag ttccagaaag gccccacccc tgccattcta gaatctctca tcagcattaataataagcta cagcagccgg aggcagcggc cggagtgtta gaatatgcca tgaaacactt tggagagctggagatccagg ctacctggta tgagaaactg cacgagtggg aggatgccct tgtggcctat gacaagaaaatggacaccaa caaggacgac ccagagctga tgctgggccg catgcgctgc ctcgaggcct tgggggaatggggtcaactc caccagcagt gctgtgaaaa gtggaccctg gttaatgatg agacccaagc caagatggcccggatggctg ctgcagctgc atggggttta ggtcagtggg acagcatgga agaatacacc tgtatgatccctcgggacac ccatgatggg gcattttata gagctgtgct ggcactgcat caggacctct tctccttggcacaacagtgc attgacaagg ccagggacct gctggatgct gaattaactg cgatggcagg agagagttacagtcgggcat atggggccat ggtttcttgc cacatgctgt ccgagctgga ggaggttatc cagtacaaacttgtccccga gcgacgagag atcatccgcc agatctggtg ggagagactg cagggctgcc agcgtatcgtagaggactgg cagaaaatcc ttatggtgcg gtcccttgtg gtcagccctc atgaagacat gagaacctggctcaagtatg caagcctgtg cggcaagagt ggcaggctgg ctcttgctca taaaacttta gtgttgctcctgggagttga tccgtctcgg caacttgacc atcctctgcc aacagttcac cctcaggtga cctatgcctacatgaaaaac atgtggaaga gtgcccgcaa gatcgatgcc ttccagcaca tgcagcattt tgtccagaccatgcagcaac aggcccagca tgccatcgct actgaggacc agcagcataa gcaggaactg cacaagctcatggcccgatg cttcctgaaa cttggagagt ggcagctgaa tctacagggc atcaatgaga gcacaatccccaaagtgctg cagtactaca gcgccgccac agagcacgac cgcagctggt acaaggcctg gcatgcgtgggcagtgatga acttcgaagc tgtgctacac tacaaacatc agaaccaagc ccgcgatgag aagaagaaactgcgtcatgc cagcggggcc aacatcacca acgccaccac tgccgccacc acggccgcca ctgccaccaccactgccagc accgagggca gcaacagtga gagcgaggcc gagagcaccg agaacagccc caccccatcgccgctgcaga agaaggtcac tgaggatctg tccaaaaccc tcctgatgta cacggtgcct gccgtccagggcttcttccg ttccatctcc ttgtcacgag gcaacaacct ccaggataca ctcagagttc tcaccttatggtttgattat ggtcactggc cagatgtcaa tgaggcctta gtggaggggg tgaaagccat ccagattgatacctggctac aggttatacc tcagctcatt gcaagaattg atacgcccag acccttggtg ggacgtctcattcaccagct tctcacagac attggtcggt accaccccca ggccctcatc tacccactga cagtggcttctaagtctacc acgacagccc ggcacaatgc agccaacaag attctgaaga acatgtgtga gcacagcaacaccctggtcc agcaggccat gatggtgagc gaggagctga tccgagtggc catcctctgg catgagatgtggcatgaagg cctggaagag gcatctcgtt tgtactttgg ggaaaggaac gtgaaaggca tgtttgaggtgctggagccc ttgcatgcta tgatggaacg gggcccccag actctgaagg aaacatcctt taatcaggcctatggtcgag atttaatgga ggcccaagag tggtgcagga agtacatgaa atcagggaat gtcaaggacctcacccaagc ctgggacctc tattatcatg tgttccgacg aatctcaaag cagctgcctc agctcacatccttagagctg caatatgttt ccccaaaact tctgatgtgc cgggaccttg aattggctgt gccaggaacatatgacccca accagccaat cattcgcatt cagtccatag caccgtcttt gcaagtcatc acatccaagcagaggccccg gaaattgaca cttatgggca gcaacggaca tgagtttgtt ttccttctaa aaggccatgaagatctgcgc caggatgagc gtgtgatgca gctcttcggc ctggttaaca cccttctggc caatgacccaacatctcttc ggaaaaacct cagcatccag agatacgctg tcatcccttt atcgaccaac tcgggcctcattggctgggt tccccactgt gacacactgc acgccctcat ccgggactac agggagaaga agaagatccttctcaacatc gagcatcgca tcatgttgcg gatggctccg gactatgacc acttgactct gatgcagaaggtggaggtgt ttgagcatgc cgtcaataat acagctgggg acgacctggc caagctgctg tggctgaaaagccccagctc cgaggtgtgg tttgaccgaa gaaccaatta tacccgttct ttagcggtca tgtcaatggttgggtatatt ttaggcctgg gagatagaca cccatccaac ctgatgctgg accgtctgag tgggaagatcctgcacattg actttgggga ctgctttgag gttgctatga cccgagagaa gtttccagag aagattccatttagactaac aagaatgttg accaatgcta tggaggttac aggcctggat ggcaactaca gaatcacatgccacacagtg atggaggtgc tgcgagagca caaggacagt gtcatggccg tgctggaagc ctttgtctatgaccccttgc tgaactggag gctgatggac acaaatacca aaggcaacaa gcgatcccga acgaggacggattcctactc tgctggccag tcagtcgaaa ttttggacgg tgtggaactt ggagagccag cccataagaaaacggggacc acagtgccag aatctattca ttctttcatt ggagacggtt tggtgaaacc agaggccctaaataagaaag ctatccagat tattaacagg gttcgagata agctcactgg tcgggacttc tctcatgatgacactttgga tgttccaacg caagttgagc tgctcatcaa acaagcgaca tcccatgaaa acctctgccagtgctatatt ggctggtgcc ctttctggta a

能够用于测定SREBP1表达水平的商业ELISA分析的非限制性实例获自NovusBiologicals和艾博抗(Abcam)。成熟的人SREBP1蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人SREBP1蛋白(SEQ ID NO:67)

MDEPPFSEAALEQALGEPCDLDAALLTDIEDMLQLINNQDSDFPGLFDPPYAGSGAGGTDPASPDTSSPGSLSPPPATLSSSLEAFLSGPQAAPSPLSPPQPAPTPLKMYPSMPAFSPGPGIKEESVPLSILQTPTPQPLPGALLPQSFPAPAPPQFSSTPVLGYPSPPGGFSTGSPPGNTQQPLPGLPLASPPGVPPVSLHTQVQSVVPQQLLTVTAAPTAAPVTTTVTSQIQQVPVLLQPHFIKADSLLLTAMKTDGATVKAAGLSPLVSGTTVQTGPLPTLVSGGTILATVPLVVDAEKLPINRLAAGSKAPASAQSRGEKRTAHNAIEKRYRSSINDKIIELKDLVVGTEAKLNKSAVLRKAIDYIRFLQHSNQKLKQENLSLRTAVHKSKSLKDLVSACGSGGNTDVLMEGVKTEVEDTLTPPPSDAGSPFQSSPLSLGSRGSGSGGSGSDSEPDSPVFEDSKAKPEQRPSLHSRGMLDRSRLALCTLVFLCLSCNPLASLLGARGLPSPSDTTSVYHSPGRNVLGTESRDGPGWAQWLLPPVVWLLNGLLVLVSLVLLFVYGEPVTRPHSGPAVYFWRHRKQADLDLARGDFAQAAQQLWLALRALGRPLPTSHLDLACSLLWNLIRHLLQRLWVGRWLAGRAGGLQQDCALRVDASASARDAALVYHKLHQLHTMGKHTGGHLTATNLALSALNLAECAGDAVSVATLAEIYVAAALRVKTSLPRALHFLTRFFLSSARQACLAQSGSVPPAMQWLCHPVGHRFFVDGDWSVLSTPWESLYSLAGNPVDPLAQVTQLFREHLLERALNCVTQPNPSPGSADGDKEFSDALGYLQLLNSCSDAAGAPAYSFSISSSMATTTGVDPVAKWWASLTAVVIHWLRRDEEAAERLCPLVEHLPRVLQESERPLPRAALHSFKAARALLGCAKAESGPASLTICEKASGYLQDSLATTPASSSIDKAVQLFLCDLLLVVRTSLWRQQQPPAPAPAAQGTSSRPQASALELRGFQRDLSSLRRLAQSFRPAMRRVFLHEATARLMAGASPTRTHQLLDRSLRRRAGPGGKGGAVAELEPRPTRREHAEALLLASCYLPPGFLSAPGQRVGMLAEAARTLEKLGDRRLLHDCQQMLMRLGGGTTVTSS

人SREBP1 cDNA(SEQ ID NO:68)

atggacgagccacccttcagcgaggcggctttggagcaggcgctgggcgagccgtgcgatctggacgcggcgctgctgaccgacatcgaagacatgcttcagcttatcaacaaccaagacagtgacttccctggcctatttgacccaccctatgctgggagtggggcagggggcacagaccctgccagccccgataccagctccccaggcagcttgtctccacctcctgccacattgagctcctctcttgaagccttcctgagcgggccgcaggcagcgccctcacccctgtcccctccccagcctgcacccactccattgaagatgtacccgtccatgcccgctttctcccctgggcctggtatcaaggaagagtcagtgccactgagcatcctgcagacccccaccccacagcccctgccaggggccctcctgccacagagcttcccagccccagccccaccgcagttcagctccacccctgtgttaggctaccccagccctccgggaggcttctctacaggaagccctcccgggaacacccagcagccgctgcctggcctgccactggcttccccgccaggggtcccgcccgtctccttgcacacccaggtccagagtgtggtcccccagcagctactgacagtcacagctgcccccacggcagcccctgtaacgaccactgtgacctcgcagatccagcaggtcccggtcctgctgcagccccacttcatcaaggcagactcgctgcttctgacagccatgaagacagacggagccactgtgaaggcggcaggtctcagtcccctggtctctggcaccactgtgcagacagggcctttgccgaccctggtgagtggcggaaccatcttggcaacagtcccactggtcgtagatgcggagaagctgcctatcaaccggctcgcagctggcagcaaggccccggcctctgcccagagccgtggagagaagcgcacagcccacaacgccattgagaagcgctaccgctcctccatcaatgacaaaatcattgagctcaaggatctggtggtgggcactgaggcaaagctgaataaatctgctgtcttgcgcaaggccatcgactacattcgctttctgcaacacagcaaccagaaactcaagcaggagaacctaagtctgcgcactgctgtccacaaaagcaaatctctgaaggatctggtgtcggcctgtggcagtggagggaacacagacgtgctcatggagggcgtgaagactgaggtggaggacacactgaccccacccccctcggatgctggctcacctttccagagcagccccttgtcccttggcagcaggggcagtggcagcggtggcagtggcagtgactcggagcctgacagcccagtctttgaggacagcaaggcaaagccagagcagcggccgtctctgcacagccggggcatgctggaccgctcccgcctggccctgtgcacgctcgtcttcctctgcctgtcctgcaaccccttggcctccttgctgggggcccgggggcttcccagcccctcagataccaccagcgtctaccatagccctgggcgcaacgtgctgggcaccgagagcagagatggccctggctgggcccagtggctgctgcccccagtggtctggctgctcaatgggctgttggtgctcgtctccttggtgcttctctttgtctacggtgagccagtcacacggccccactcaggccccgccgtgtacttctggaggcatcgcaagcaggctgacctggacctggcccggggagactttgcccaggctgcccagcagctgtggctggccctgcgggcactgggccggcccctgcccacctcccacctggacctggcttgtagcctcctctggaacctcatccgtcacctgctgcagcgtctctgggtgggccgctggctggcaggccgggcagggggcctgcagcaggactgtgctctgcgagtggatgctagcgccagcgcccgagacgcagccctggtctaccataagctgcaccagctgcacaccatggggaagcacacaggcgggcacctcactgccaccaacctggcgctgagtgccctgaacctggcagagtgtgcaggggatgccgtgtctgtggcgacgctggccgagatctatgtggcggctgcattgagagtgaagaccagtctcccacgggccttgcattttctgacacgcttcttcctgagcagtgcccgccaggcctgcctggcacagagtggctcagtgcctcctgccatgcagtggctctgccaccccgtgggccaccgtttcttcgtggatggggactggtccgtgctcagtaccccatgggagagcctgtacagcttggccgggaacccagtggaccccctggcccaggtgactcagctattccgggaacatctcttagagcgagcactgaactgtgtgacccagcccaaccccagccctgggtcagctgatggggacaaggaattctcggatgccctcgggtacctgcagctgctgaacagctgttctgatgctgcgggggctcctgcctacagcttctccatcagttccagcatggccaccaccaccggcgtagacccggtggccaagtggtgggcctctctgacagctgtggtgatccactggctgcggcgggatgaggaggcggctgagcggctgtgcccgctggtggagcacctgccccgggtgctgcaggagtctgagagacccctgcccagggcagctctgcactccttcaaggctgcccgggccctgctgggctgtgccaaggcagagtctggtccagccagcctgaccatctgtgagaaggccagtgggtacctgcaggacagcctggctaccacaccagccagcagctccattgacaaggccgtgcagctgttcctgtgtgacctgcttcttgtggtgcgcaccagcctgtggcggcagcagcagcccccggccccggccccagcagcccagggcaccagcagcaggccccaggcttccgcccttgagctgcgtggcttccaacgggacctgagcagcctgaggcggctggcacagagcttccggcccgccatgcggagggtgttcctacatgaggccacggcccggctgatggcgggggccagccccacacggacacaccagctcctcgaccgcagtctgaggcggcgggcaggccccggtggcaaaggaggcgcggtggcggagctggagccgcggcccacgcggcgggagcacgcggaggccttgctgctggcctcctgctacctgccccccggcttcctgtcggcgcccgggcagcgcgtgggcatgctggctgaggcggcgcgcacactcgagaagcttggcgatcgccggctgctgcacgactgtcagcagatgctcatgcgcctgggcggtgggaccactgtcacttccagctag

能够用于测定IFN-γ表达水平的商业ELISA分析的非限制性实例获自安迪生物科技公司、赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)、艾博抗、恩佐生命科学公司(EnzoLife Sciences)和瑞博奥生物科技公司(RayBiotech)。成熟的人IFN-γ蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人IFN-γ(SEQ ID NO:69)

qdpyvke aenlkkyfna ghsdvadngt lflgilknwk eesdrkimqs qivsfyfklfknfkddqsiq ksvetikedm nvkffnsnkk krddfekltn ysvtdlnvqr kaiheliqvm aelspaaktgkrkrsqmlfr g

人IFN-γcDNA(SEQ ID NO:70)

caggac ccatatgtaa aagaagcaga aaaccttaag aaatatttta atgcaggtcattcagatgta gcggataatg gaactctttt cttaggcatt ttgaagaatt ggaaagagga gagtgacagaaaaataatgc agagccaaat tgtctccttt tacttcaaac tttttaaaaa ctttaaagat gaccagagcatccaaaagag tgtggagacc atcaaggaag acatgaatgt caagtttttc aatagcaaca aaaagaaacgagatgacttc gaaaagctga ctaattattc ggtaactgac ttgaatgtcc aacgcaaagc aatacatgaactcatccaag tgatggctga actgtcgcca gcagctaaaa cagggaagcg aaaaaggagt cagatgctgtttcgaggt

能够用于测定颗粒酶B表达水平的商业ELISA分析的非限制性实例获自瑞博奥生物科技公司、赛默飞世尔科技和安迪生物科技公司。成熟的人颗粒酶B蛋白质和cDNA序列如下所示。

成熟的人颗粒酶B(SEQ ID NO:71)

iiggheakph srpymaylmi wdqkslkrcg gflirddfvl taahcwgssi nvtlgahnikeqeptqqfip vkrpiphpay npknfsndim llqlerkakr travqplrlp snkaqvkpgq tcsvagwgqtaplgkhshtl qevkmtvqed rkcesdlrhy ydstielcvg dpeikktsfk gdsggplvcn kvaqgivsygrnngmpprac tkvssfvhwi kktmkry

人颗粒酶B cDNA(SEQ ID NO:72)

atcatcgggg gacatgaggc caagccccac tcccgcccct acatggctta tcttatgatctgggatcaga agtctctgaa gaggtgcggt ggcttcctga tacgagacga cttcgtgctg acagctgctcactgttgggg aagctccata aatgtcacct tgggggccca caatatcaaa gaacaggagc cgacccagcagtttatccct gtgaaaagac ccatccccca tccagcctat aatcctaaga acttctccaa cgacatcatgctactgcagc tggagagaaa ggccaagcgg accagagctg tgcagcccct caggctacct agcaacaaggcccaggtgaa gccagggcag acatgcagtg tggccggctg ggggcagacg gcccccctgg gaaaacactcacacacacta caagaggtga agatgacagt gcaggaagat cgaaagtgcg aatctgactt acgccattattacgacagta ccattgagtt gtgcgtgggg gacccagaga ttaaaaagac ttcctttaag ggggactctggaggccctct tgtgtgtaac aaggtggccc agggcattgt ctcctatgga cgaaacaatg gcatgcctccacgagcctgc accaaagtct caagctttgt acactggata aagaaaacca tgaaacgcta c

能够用于测定MYC表达水平的商业ELISA分析的非限制性实例获自英杰公司(Invitrogen)、LSBio、Biocodon Technologies和Elisa Genie。成熟的人MYC蛋白质和cDNA序列如下所示。

人Myc蛋白(SEQ ID NO:329)

mdffrvvenq qppatmplnv sftnrnydld ydsvqpyfyc deeenfyqqq qqselqppapsediwkkfel lptpplspsr rsglcspsyv avtpfslrgd ndggggsfst adqlemvtel lggdmvnqsficdpddetfi kniiiqdcmw sgfsaaaklv seklasyqaa rkdsgspnpa rghsvcstss lylqdlsaaasecidpsvvf pyplndsssp kscasqdssa fspssdslls stesspqgsp eplvlheetp pttssdseeeqedeeeidvv svekrqapgk rsesgspsag ghskpphspl vlkrchvsth qhnyaappst rkdypaakrvkldsvrvlrq isnnrkctsp rssdteenvk rrthnvlerq rrnelkrsff alrdqipele nnekapkvvilkkatayils vqaeeqklis eedllrkrre qlkhkleqlr nsca

人Myc cDNA(SEQ ID NO:330)

ctggatt tttttcgggt agtggaaaac cagcagcctc ccgcgacgat gcccctcaacgttagcttca ccaacaggaa ctatgacctc gactacgact cggtgcagcc gtatttctac tgcgacgaggaggagaactt ctaccagcag cagcagcaga gcgagctgca gcccccggcg cccagcgagg atatctggaagaaattcgag ctgctgccca ccccgcccct gtcccctagc cgccgctccg ggctctgctc gccctcctacgttgcggtca cacccttctc ccttcgggga gacaacgacg gcggtggcgg gagcttctcc acggccgaccagctggagat ggtgaccgag ctgctgggag gagacatggt gaaccagagt ttcatctgcg acccggacgacgagaccttc atcaaaaaca tcatcatcca ggactgtatg tggagcggct tctcggccgc cgccaagctcgtctcagaga agctggcctc ctaccaggct gcgcgcaaag acagcggcag cccgaacccc gcccgcggccacagcgtctg ctccacctcc agcttgtacc tgcaggatct gagcgccgcc gcctcagagt gcatcgacccctcggtggtc ttcccctacc ctctcaacga cagcagctcg cccaagtcct gcgcctcgca agactccagcgccttctctc cgtcctcgga ttctctgctc tcctcgacgg agtcctcccc gcagggcagc cccgagcccctggtgctcca tgaggagaca ccgcccacca ccagcagcga ctctgaggag gaacaagaag atgaggaagaaatcgatgtt gtttctgtgg aaaagaggca ggctcctggc aaaaggtcag agtctggatc accttctgctggaggccaca gcaaacctcc tcacagccca ctggtcctca agaggtgcca cgtctccaca catcagcacaactacgcagc gcctccctcc actcggaagg actatcctgc tgccaagagg gtcaagttgg acagtgtcagagtcctgaga cagatcagca acaaccgaaa atgcaccagc cccaggtcct cggacaccga ggagaatgtcaagaggcgaa cacacaacgt cttggagcgc cagaggagga acgagctaaa acggagcttt tttgccctgcgtgaccagat cccggagttg gaaaacaatg aaaaggcccc caaggtagtt atccttaaaa aagccacagcatacatcctg tccgtccaag cagaggagca aaagctcatt tctgaagagg acttgttgcg gaaacgacgagaacagttga aacacaaact tgaacagcta cggaactctt gtgcgtaa

在一些实施例中，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)在受试者(例如本文所述的任一受试者)中或在试管内杀死衰老细胞(例如本文所述的任一种衰老细胞)的能力相较于休眠NK细胞(例如人休眠NK细胞)可以是增加的(例如，至少增加10％，至少增加20％，至少增加30％，至少增加40％，至少增加50％，至少增加60％，至少增加70％，至少增加80％，至少增加90％，至少增加100％至少增加120％，至少增加140％，至少增加160％，至少增加180％，至少增加200％，至少增加220％，至少增加240％至少增加260％，至少增加280％，或至少增加300％)。

在一些实施例中，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)在受试者(例如本文所述的任一受试者)中或在体内杀死衰老细胞(例如本文所述的任一种衰老细胞)的能力相较于休眠NK细胞(例如人休眠NK细胞)可以增加大约10％到约增加500％(或本文所述的此范围的任一子范围)。

在一些实施例中，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)在接触式细胞毒性分析中，在特异性结合到存在于衰老细胞或靶细胞上的抗原的抗体存在下可以显示出增加(例如，至少增加10％，至少增加20％，至少增加30％，至少增加40％，至少增加50％，至少增加60％，至少增加70％，至少增加80％，至少增加90％，至少增加100％至少增加120％，至少增加140％，至少增加160％，至少增加180％，至少增加200％，至少增加220％，至少增加240％至少增加260％，至少增加280％，或至少增加300％)的细胞毒性活性，例如相较于休眠NK细胞(例如人休眠NK细胞)。

在一些实施例中，活化NK细胞(例如人活化NK细胞)在接触式细胞毒性分析中，在特异性结合到存在于衰老细胞或靶细胞上的抗原的抗体存在下可以显示出增加(例如增加大约10％至增加大约500％，或本文所述的此范围的任一子范围)的细胞毒性活性，例如相较于休眠NK细胞(例如人休眠NK细胞)。

在一些实施例中，活化NK细胞可以通过包括以下的方法产生：获得休眠NK细胞；以及使所述休眠NK细胞在试管内在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后施用于受试者。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是单倍体休眠NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是人造NK细胞。在这些方法中的任一种的一些实例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

在这些方法的一些实例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。这些方法的一些实例进一步包括分离出活化NK细胞(和任选地进一步将治疗有效量的活化NK细胞施用于受试者，例如本文所述的任一受试者)。

在这些方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的时段(例如约2小时至约18天，约2小时至约16天，约2小时至约14天，约2小时至约12天，约2小时至约10天，约2小时至约8天，约2小时至约7天，约2小时至约6天，约2小时至约5天，约2小时至约4天，约2小时至约3天，约2小时至约2天，约2小时至约1天，约6小时至约18天，约6小时至约16天，约6小时至约14天，约6小时至约12天，约6小时至约10天，约6小时至约8天，约6小时至约7天，约6小时至约6天，约6小时至约5天，约6小时至约4天，约6小时至约3天，约6小时至约2天，约6小时至约1天，约12小时至约18天，约12小时至约16天，约12小时至约14天，约12小时至约12天，约12小时至约10天，约12小时至约8天，约12小时至约7天，约12小时至约6天，约12小时至约5天，约12小时至约4天，约12小时至约3天，约12小时至约2天，约12小时至约1天，约1天至约18天，约1天至约16天，约1天至约15天，约1天至约14天，约1天至约12天，约1天至约10天，约1天至约8天，约1天至约7天，约1天至约6天，约1天至约5天，约1天至约4天，约1天至约3天，约1天至约2天，约2天至约18天，约2天至约16天，约2天至约14天，约2天至约12天，约2天至约10天，约2天至约8天，约2天至约7天，约2天至约6天，约2天至约5天，约2天至约4天，约2天至约3天，约3天至约18天，约3天至约16天，约3天至约14天，约3天至约12天，约3天至约10天，约3天至约8天，约3天至约7天，约3天至约6天，约3天至约5天，约3天至约4天，约4天至约18天，约4天至约16天，约4天至约14天，约4天至约12天，约4天至约10天，约4天至约8天，约4天至约7天，约4天至约6天，约4天至约5天，约5天至约18天，约5天至约16天，约5天至约14天，约5天至约12天，约5天至约10天，约5天至约8天，约5天至约7天，约5天至约6天，约6天至约18天，约6天至约16天，约6天至约14天，约6天至约12天，约6天至约10天，约6天至约8天，约6天至约7天，约7天至约18天，约7天至约16天，约7天至约14天，约7天至约12天，约7天至约10天，约7天至约8天，约8天至约18天，约8天至约16天，约8天至约14天，约8天至约12天，约8天至约10天，约9天至约18天，约9天至约16天，约9天至约14天，约9天至约12天，约12天至约18天，约12天至约16天，约12天至约14天，约14天至约18天，约14天至约16天，或约16天至约18天，

NK细胞活化剂

本文提供的方法包括使用或施用一种或多种NK细胞活化剂。在一些实施例中，NK细胞活化剂可以是蛋白质。在一些实施例中，NK细胞活化剂可以是单链嵌合多肽(例如本文所述的任一种单链嵌合多肽)、多链嵌合多肽(例如本文所述的任一种多链嵌合多肽，例如本文所述的示例性A型和B型多链嵌合多肽)、抗体、重组细胞因子或白介素(例如本文所述的任一种重组细胞因子或白介素)，以及可溶性白介素或细胞因子受体(例如本文所述的任一种可溶性白介素或细胞因子受体)。在一些实施例中，NK细胞活化剂可以是小分子(例如肝糖合成酶激酶-3(GSK3)抑制剂，例如Cichocki等人，《癌症研究(Cancer Res.)》77:5664-5675，2017中所述的CHIR99021)或适体。

在本文提供的一种或多种NK细胞活化剂中的任一种的一些实施例中，相较于在不存在一种或多种NK细胞活化剂的情况下的活化水平，一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种引起以下中的一种或多种(例如二、三、四、五、六、七或八种)活化：IL-2的受体、IL-7的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、IL-33的受体、CD16、CD69、CD25、CD59、CD352、NKp80、DNAM-1、2B4、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、KIR2DS1、KIR2Ds2/3、KIR2DL4、KIR2DS4、KIR2DS5和KIR3DS1(例如在免疫细胞中，例如人免疫细胞，例如人NK细胞)。

在一些实施例中，引起IL-2受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-2受体的可溶性IL-2或激动性抗体。

在一些实施例中，引起IL-7受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-7受体的可溶性IL-7或激动性抗体。

在一些实施例中，引起IL-12受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-2受体的可溶性IL-2或激动性抗体。

在一些实施例中，引起IL-15受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-15受体的可溶性IL-15或激动性抗体。

在一些实施例中，引起IL-21受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-21受体的可溶性IL-21或激动性抗体。

在一些实施例中，引起IL-33受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-33受体的可溶性IL-33或激动性抗体。

在一些实施例中，引起CD16活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD16的激动性抗体。

在一些实施例中，引起CD69活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD69的激动性抗体。

在一些实施例中，引起CD25、CD59活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD25、CD59的激动性抗体。

在一些实施例中，引起CD352活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD352的激动性抗体。

在一些实施例中，引起NKp80活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp80的激动性抗体。

在一些实施例中，引起DNAM-1活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到DNAM-1的激动性抗体。

在一些实施例中，引起2B4活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到2B4的激动性抗体。

在一些实施例中，引起NKp30活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp30的激动性抗体。

在一些实施例中，引起NKp44活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp44的激动性抗体。

在一些实施例中，引起NKp46活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp46的激动性抗体。

在一些实施例中，引起NKG2D活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKG2D的激动性抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DS1活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIT2DS1的激动性抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DS2/3活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIT2DS2/3的激动性抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DL4活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIT2DL4的激动性抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DS4活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIT2DS4的激动性抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DS5活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIT2DS5的激动性抗体。

在一些实施例中，引起KIR3DS1活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIT3DS1的激动性抗体。

在本文提供的一种或多种NK细胞活化剂中的任一种的一些实施例中，相较于在一种或多种NK细胞活化剂不存在的情况下的活化水平，一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种(例如两种、三种、四种或五种)引起以下中的一种或多种的活化减少：PD-1、TGF-β受体、TIGIT、CD1、TIM-3、Siglec-7、IRP60、Tactile、IL1R8、NKG2A/KLRD1、KIR2DL1、KIR2DL2/3、KIR2DL5、KIR3DL1、KIR3DL2、ILT2/LIR-1，和LAG-2(例如在免疫细胞中，例如人免疫细胞，例如人NK细胞)。

在一些实施例中，引起TGF-β受体活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是可溶性TGF-β受体、特异性结合到TGF-β的抗体，或特异性结合到TGF-β受体的拮抗性抗体。

在一些实施例中，引起TIGIT活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到TIGIT的拮抗性抗体、可溶性TIGIT，或特异性结合到TIGIT配体的抗体。

在一些实施例中，引起CD1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD1的拮抗性抗体、可溶性CD1，或特异性结合到CD1配体的抗体。

在一些实施例中，引起TIM-3活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到TIM-3的拮抗性抗体、可溶性TIM-3，或特异性结合到TIM-3配体的抗体。

在一些实施例中，引起Siglec-7活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到Siglec-7的拮抗性抗体、可溶性Siglec-7，或特异性结合到Siglec-7配体的抗体。

在一些实施例中，引起IRP-60活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IRP-60的拮抗性抗体、可溶性IRP-60，或特异性结合到IRP-60配体的抗体。

在一些实施例中，引起Tactile活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到Tactile的拮抗性抗体、可溶性Tactile，或特异性结合到Tactile配体的抗体。

在一些实施例中，引起IL1R8活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL1R8的拮抗性抗体、可溶性IL1R8，或特异性结合到IL1R8配体的抗体。

在一些实施例中，引起NKG2A/KLRD1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKG2A/KLRD1的拮抗性抗体、可溶性NKG2A/KLRD1，或特异性结合到NKG2A/KLRD1配体的抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DL1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL1的拮抗性抗体、可溶性KIR2DL1，或特异性结合到KIR2DL1配体的抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DL2/3活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL2/3的拮抗性抗体、可溶性KIR2DL2/3，或特异性结合到KIR2DL2/3配体的抗体。

在一些实施例中，引起KIR2DL5活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL5的拮抗性抗体、可溶性KIR2DL5，或特异性结合到KIR2DL5配体的抗体。

在一些实施例中，引起KIR3DL1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DL1的拮抗性抗体、可溶性KIR3DL1，或特异性结合到KIR3DL1配体的抗体。

在一些实施例中，引起KIR3DL2活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DL2的拮抗性抗体、可溶性KIR3DL2，或特异性结合到KIR3DL2配体的抗体。

在一些实施例中，引起ILT2/LIR-1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到ILT2/LIR-1的拮抗性抗体、可溶性ILT2/LIR-1，或特异性结合到ILT2/LIR-1配体的抗体。

在一些实施例中，引起LAG2活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到LAG2的拮抗性抗体、可溶性LAG2，或特异性结合到LAG2配体的抗体。

NK细胞活化剂的非限制性实例在下文描述并且可以以任何组合使用。

在一些实例中，NK细胞活化剂可以是可溶性PD-1、可溶性PD-L1、可溶性TIGIT、可溶性CD1，或可溶性TIM-3。下面提供了可溶性PD-1、PD-L1、TIGIT、CD1和TIM-3的非限制性实例。

人可溶性PD-1(SEQ ID NO:73)

pgwfldspdr pwnpptfspa llvvtegdna tftcsfsnts esfvlnwyrm spsnqtdklaafpedrsqpg qdcrfrvtql pngrdfhmsv vrarrndsgt ylcgaislap kaqikeslra elrvterraevptahpspsp rpagqfqtlv vgvvggllgs lvllvwvlav icsraargti garrtgqplk edpsavpvfsvdygeldfqw rektpeppvp cvpeqteyat ivfpsgmgts sparrgsadg prsaqplrpe dghcswpl

人可溶性PD-L1(SEQ ID NO:74)

ftvtvpkdlyvv eygsnmtiec kfpvekqldl aalivyweme dkniiqfvhg eedlkvqhssyrqrarllkd qlslgnaalq itdvklqdag vyrcmisygg adykritvkv napynkinqr ilvvdpvtseheltcqaegy pkaeviwtss dhqvlsgktt ttnskreekl fnvtstlrin tttneifyct frrldpeenhtaelvipelp lahppnerth lvilgaillc lgvaltfifr lrkgrmmdvk kcgiqdtnsk kqsdthleet

人可溶性TIGIT(SEQ ID NO:75)

mmtgtiett gnisaekggs iilqchlsst taqvtqvnwe qqdqllaicn adlgwhispsfkdrvapgpg lgltlqsltv ndtgeyfciy htypdgtytg riflevless vaehgarfqi pllgamaatlvvictavivv valtrkkkal rihsvegdlr rksagqeews psapsppgsc vqaeaapagl cgeqrgedcaelhdyfnvls yrslgncsff tetg

人可溶性CD1A(SEQ ID NO:76)

nadglkeplsfhvt wiasfynhsw kqnlvsgwls dlqthtwdsn sstivflcpw srgnfsneewkeletlfrir tirsfegirr yahelqfeyp feiqvtggce lhsgkvsgsf lqlayqgsdf vsfqnnswlpypvagnmakh fckvlnqnqh endithnlls dtcprfilgl ldagkahlqr qvkpeawlsh gpspgpghlqlvchvsgfyp kpvwvmwmrg eqeqqgtqrg dilpsadgtw ylratlevaa geaadlscrv khsslegqdivlywehhssv gfiilavivp lllliglalw frkrcfc

人可溶性TIM3(SEQ ID NO:77)

seveyraev gqnaylpcfy tpaapgnlvp vcwgkgacpv fecgnvvlrt derdvnywtsrywlngdfrk gdvsltienv tladsgiycc riqipgimnd ekfnlklvik pakvtpaptr qrdftaafprmlttrghgpa etqtlgslpd inltqistla nelrdsrlan dlrdsgatir igiyigagic aglalalifgalifkwyshs kekiqnlsli slanlppsgl anavaegirs eeniytieen vyeveepney ycyvssrqqpsqplgcrfam

在一些实施例中，可溶性PD-1蛋白可以包括与SEQ ID NO:73至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性PD-L1蛋白可以包括与SEQ ID NO:74至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性TIGIT蛋白可以包括与SEQ ID NO:75至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性CD1A蛋白可以包括与SEQ ID NO:76至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性TIM3蛋白可以包括与SEQ ID NO:77至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

重组抗体

在一些实例中，NK活化剂可以是：特异性结合到IL-2受体的激动性抗体(参见例如Gaulton等人，《临床免疫学和免疫病理学(Clinical Immunology and Immunopathology)》36(1):18-29，1985)、特异性结合到IL-7受体的激动性抗体、特异性结合到IL-12受体的激动性抗体(参见例如Rogge等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》162(7)：3926-3932，1999中所述的那些)、特异性结合到IL-15受体的激动性抗体、特异性结合到IL-21受体的激动性抗体(参见例如美国专利申请公开第2006/159655号中所述的那些)、特异性结合到IL-33受体的激动性抗体(参见例如美国专利申请公开第2007/160579号中所述的那些)、特异性结合到PD-1的拮抗性抗体(参见例如美国专利第7,521,051号中所述的那些)、特异性结合到PD-L1的抗体(参见例如美国专利第8,217,149号中所述的那些)、特异性结合到TGF-β的抗体、特异性结合到TGF-β受体的拮抗性抗体(参见例如欧洲专利申请公开第1245676A1号中所述的那些)、特异性结合到TIGIT的拮抗性抗体(参见例如WO 2017/053748中所述的那些)、特异性结合到TIGIT配体的抗体(参见例如WO 2011/127324中所述的那些)、特异性结合到CD1的拮抗性抗体(参见例如Szalay等人，《免疫学杂志》162(12):6955-6958，1999中所述的那些)、特异性结合到CD1配体的抗体(参见例如Kain等人，《免疫(Immunity)》41(4):543-554，2014中所述的那些)、特异性结合到TIM-3的拮抗性抗体(参见例如美国专利申请公开第2015/218274号中所述的那些)、特异性结合到TIM-3配体的抗体(参见例如美国专利申请公开第2017/283499号中所述的那些)、特异性结合到CD69的激动性抗体(参见例如Moretta等人，《实验医药杂志(Journal of Experimental Medicine)》174:1393，1991)、特异性结合到CD25、CD59的激动性抗体、特异性结合到CD352的激动性抗体(参见例如Yigit等人，《肿瘤靶标(Oncotarget)》7:26346-26360，2016中所述的那些)、特异性结合到NKp80的激动性抗体(参见例如Peipp等人，《肿瘤靶标》6:32075-32088，2015中所述的那些)、特异性结合到DNAM-1的激动性抗体、特异性结合到2B4的激动性抗体(参见例如Sandusky等人，《欧洲免疫学杂志(European J.Immunol.)》36:3268-3276，2006中中所述的那些)、特异性结合到NKp30的激动性抗体(参见例如Kellner等人，《肿瘤免疫学(OncoImmunology)》5:1-12，2016中所述的那些)、特异性结合到NKp44的激动性抗体、特异性结合到NKp46的激动性抗体(参见例如Xiong等人，《临床研究杂志(J.Clin.Invest.)》123:4264-4272，2013中所述的那些)、特异性结合到NKG2D的激动性抗体(参见例如Kellner等人，《肿瘤免疫学(OncoImmunology)》5:1-12，2016中所述的那些)、特异性结合到KIR2DS1的激动性抗体(参见例如Xiong等人，《临床研究杂志(J.Clin.Invest.)》123:4264-4272，2013中所述的那些)、特异性结合到KIR2Ds2/3的激动性抗体(参见例如Borgerding等人，《实验血液学(Exp.Hematology)》38:213-221，2010中所述的那些)、特异性结合到KIR2DL4的激动性抗体(参见例如Miah等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》180:2922-32，2008中所述的那些)、特异性结合到KIR2DS4的激动性抗体(参见例如Czaja等人，《基因和免疫(Genes andImmunity)》15:33-37，2014中所述的那些)、特异性结合到KIR2DS5的激动性抗体(参见例如Czaja等人，《基因和免疫》15:33-37，2014中所述的那些)、特异性结合到KIR3DS1的激动性抗体(参见例如Czaja等人，《基因和免疫》15:33-37，2014中所述的那些)、特异性结合到Siglec-7的拮抗性抗体(参见例如Hudak等人，《自然化学生物学(Nature ChemicalBiology)》10:69-75，2014中所述的那些)、特异性结合到IRP60的拮抗性抗体(参见例如Bachelet等人，《生物化学杂志》281:27190-27196，2006中所述的那些)、特异性结合到Tactile的拮抗性抗体(参见例如Brooks等人，《欧洲癌症杂志(Eur.J.Cancer)》61(增刊1):S189，2016中所述的那些)、特异性结合到IL1R8的拮抗性抗体(参见例如Molgora等人，《免疫学前沿(Frontiers Immunol.)》7:1，2016中所述的那些)、特异性结合到NKG2A/KLRD1的拮抗性抗体(参见例如Kim等人，《感染免疫(Infection Immunity)》76:5873-5882，2008中所述的那些)、特异性结合到KIR2DL1的拮抗性抗体(参见例如Weiner等人，《细胞(Cell)》148:1081-1084，2012中所述的那些)、特异性结合到KIR2DL2/3的拮抗性抗体(参见例如Weiner等人，《细胞》148:1081-1084，2012中所述的那些)、特异性结合到KIR2DL5的拮抗性抗体(参见例如US 9,067,997中所述的那些)，以及特异性地结合KIR3DL1的拮抗性抗体(参见例如US 9,067,997中所述的那些)、特异性结合到KIR3DL2的拮抗性抗体(参见例如US 9,067,997中所述的那些)、特异性结合到ILT2/LIR-1的拮抗性抗体(参见例如US 8,133,485中所述的那些)，以及特异性结合到LAG-2的拮抗性抗体。

作为NK细胞活化剂的重组抗体可以是任一种示例性类型的抗体(例如人抗体或人源化抗体)或本文所述的任一种示例性抗体片段。作为NK细胞活化剂的重组抗体可以包括例如本文所述的任一种抗原结合域。

重组白介素或细胞因子

在一些实例中，NK活化剂可以是例如可溶性IL-2、可溶性IL-7、可溶性IL-12、可溶性IL-15、可溶性IL-21和可溶性IL-33。可溶性IL-12、IL-15、IL-21和IL-33的非限制性实例在下文提供。

人可溶性IL-2(SEQ ID NO:78)

aptssstkkt qlqlehllld lqmilnginn yknpkltrml tfkfympkka telkhlqcleeelkpleevl nlaqsknfhl rprdlisnin vivlelkgsettfmceyade tativeflnr witfcqsiistlt

人可溶性IL-7(SEQ ID NO:79)

dcdiegkdgkqyesv lmvsidqlld smkeigsncl nnefnffkrh icdankegmflfraarklrq flkmnstgdf dlhllkvseg ttillnctgq vkgrkpaalg eaqptkslee nkslkeqkklndlcflkrll qeiktcwnki lmgtkeh

人可溶性IL-12亚单元α(SEQ ID NO:80)

rnlpvatp dpgmfpclhh sqnllravsn mlqkarqtle fypctseeid heditkdktstveaclplel tknesclnsr etsfitngsc lasrktsfmm alclssiyed lkmyqvefkt mnakllmdpkrqifldqnml avidelmqal nfnsetvpqk ssleepdfyk tkiklcillh afriravtid rvmsylnas

人可溶性IL-12亚单元β(SEQ ID NO:81)

iwelkkdv yvveldwypd apgemvvltc dtpeedgitw tldqssevlg sgktltiqvkefgdagqytc hkggevlshs llllhkkedg iwstdilkdq kepknktflr ceaknysgrf tcwwlttistdltfsvkssr gssdpqgvtc gaatlsaerv rgdnkeyeys vecqedsacp aaeeslpiev mvdavhklkyenytssffir diikpdppkn lqlkplknsr qvevsweypd twstphsyfs ltfcvqvqgk skrekkdrvftdktsatvic rknasisvra qdryysssws ewasvpcs

人可溶性IL-15(SEQ ID NO:82)

Nwvnvisdlkki edliqsmhid atlytesdvh psckvtamkc fllelqvisl esgdasihdtvenliilann slssngnvte sgckeceele eknikeflqs fvhivqmfin ts

人可溶性IL-21(SEQ ID NO:83)

qgqdrhmi rmrqlidivd qlknyvndlv peflpapedv etncewsafs cfqkaqlksantgnneriin vsikklkrkp pstnagrrqk hrltcpscds yekkppkefl erfksllqkm ihqhlssrthgseds

人可溶性IL-33(SEQ ID NO:84)

mkpkmkystn kistakwknt askalcfklg ksqqkakevc pmyfmklrsg lmikkeacyfrrettkrpsl ktgrkhkrhl vlaacqqqst vecfafgisg vqkytralhd ssitgispit eylaslstyndqsitfaled esyeiyvedl kkdekkdkvl lsyyesqhps nesgdgvdgk mlmvtlsptk dfwlhannkehsvelhkcek plpdqaffvl hnmhsncvsf ecktdpgvfi gvkdnhlali kvdssenlct enilfklset

在一些实施例中，可溶性IL-2蛋白可以包括与SEQ ID NO:78至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性IL-7蛋白可以包括与SEQ ID NO:79至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性IL-2蛋白包括与SEQ ID NO:80至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列；以及与SEQ IDNO:81至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性IL-15蛋白可以包括与SEQ ID NO:82至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性IL-21蛋白可以包括与SEQ ID NO:83至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性IL-33蛋白可以包括与SEQ ID NO:84至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

可溶性细胞因子或白介素受体

在本文所述的任一种可溶性细胞因子或白介素受体的一些实例中，可溶性细胞因子或白介素受体可以是可溶性TGF-β受体。在一些实例中，可溶性TGF-β受体是可溶性TGF-β受体I(TGF-βRI)(参见例如Docagne等人，《生物化学杂志(Journal of BiologicalChemistry)》276(49)：46243-46250，2001中所述的那些)、可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)(参见例如Yung等人，《美国呼吸与重症护理医学(Am.J.Resp.Crit.Care Med.)》194(9)：1140-1151，2016中所述的那些)、可溶性TGF-βRIII(参见例如Heng等人，《胎盘(Placenta)》57：320，2017中所述的那些)。在一些实例中，可溶性TGF-β受体是TGF-β的受体“捕获器”(参见例如Zwaagstra等人，《分子癌症治疗学(Mol.Cancer Ther.)》11(7)：1477-1487，2012中所述的那些；以及De Crescenzo等人，《癌症疗法中的转型生长因子-β(TransformingGrowth Factor-βin Cancer Therapy)》第II卷，第671-684页中所述的那些)。

可溶性细胞因子或可溶性白介素受体的其它实例在所属领域中已知。

单链嵌合多肽

NK细胞活化剂的非限制性实例是单链嵌合多肽，其包括：(i)第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一个靶标结合域)、(ii)可溶性组织因子域(例如本文所述或所属领域中已知的任一个示例性可溶性组织因子域)，以及(iii)第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一个靶标结合域)。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实例中，单链嵌合多肽的总长度可以是约50个氨基酸至约3000个氨基酸，约50个氨基酸至约2500个氨基酸，约50个氨基酸至约2000个氨基酸，约50个氨基酸至约1500个氨基酸，约50个氨基酸至约1000个氨基酸，约50个氨基酸至约950个氨基酸，约50个氨基酸至约900个氨基酸，约50个氨基酸至约850个氨基酸，约50个氨基酸至约800个氨基酸，约50个氨基酸至约750个氨基酸，约50个氨基酸至约700个氨基酸，约50个氨基酸至约650个氨基酸，约50个氨基酸至约600个氨基酸，约50个氨基酸至约550个氨基酸，约50个氨基酸至约500个氨基酸，约50个氨基酸至约480个氨基酸，约50个氨基酸至约460个氨基酸，约50个氨基酸至约440个氨基酸，约50个氨基酸至约420个氨基酸，约50个氨基酸至约400个氨基酸，约50个氨基酸至约380个氨基酸，约50个氨基酸至约360个氨基酸，约50个氨基酸至约340个氨基酸，约50个氨基酸至约320个氨基酸，约50个氨基酸至约300个氨基酸，约50个氨基酸至约280个氨基酸，约50个氨基酸至约260个氨基酸，约50个氨基酸至约240个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约3000个氨基酸，约100个氨基酸至约2500个氨基酸，约100个氨基酸至约2000个氨基酸，约100个氨基酸至约1500个氨基酸，约100个氨基酸至约1000个氨基酸，约100个氨基酸至约950个氨基酸，约100个氨基酸至约900个氨基酸，约100个氨基酸至约850个氨基酸，约100个氨基酸至约800个氨基酸，约100个氨基酸至约750个氨基酸，约100个氨基酸至约700个氨基酸，约100个氨基酸至约650个氨基酸，约100个氨基酸至约600个氨基酸，约100个氨基酸至约550个氨基酸，约100个氨基酸至约500个氨基酸，约100个氨基酸至约480个氨基酸，约100个氨基酸至约460个氨基酸，约100个氨基酸至约440个氨基酸，约100个氨基酸至约420个氨基酸，约100个氨基酸至约400个氨基酸，约100个氨基酸至约380个氨基酸，约100个氨基酸至约360个氨基酸，约100个氨基酸至约340个氨基酸，约100个氨基酸至约320个氨基酸，约100个氨基酸至约300个氨基酸，约100个氨基酸至约280个氨基酸，约100个氨基酸至约260个氨基酸，约100个氨基酸至约240个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约3000个氨基酸，约150个氨基酸至约2500个氨基酸，约150个氨基酸至约2000个氨基酸，约150个氨基酸至约1500个氨基酸，约150个氨基酸至约1000个氨基酸，约150个氨基酸至约950个氨基酸，约150个氨基酸至约900个氨基酸，约150个氨基酸至约850个氨基酸，约150个氨基酸至约800个氨基酸，约150个氨基酸至约750个氨基酸，约150个氨基酸至约700个氨基酸，约150个氨基酸至约650个氨基酸，约150个氨基酸至约600个氨基酸，约150个氨基酸至约550个氨基酸，约150个氨基酸至约500个氨基酸，约150个氨基酸至约480个氨基酸，约150个氨基酸至约460个氨基酸，约150个氨基酸至约440个氨基酸，约150个氨基酸至约420个氨基酸，约150个氨基酸至约400个氨基酸，约150个氨基酸至约380个氨基酸，约150个氨基酸至约360个氨基酸，约150个氨基酸至约340个氨基酸，约150个氨基酸至约320个氨基酸，约150个氨基酸至约300个氨基酸，约150个氨基酸至约280个氨基酸，约150个氨基酸至约260个氨基酸，约150个氨基酸至约240个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约3000个氨基酸，约200个氨基酸至约2500个氨基酸，约200个氨基酸至约2000个氨基酸，约200个氨基酸至约1500个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约480个氨基酸，约200个氨基酸至约460个氨基酸，约200个氨基酸至约440个氨基酸，约200个氨基酸至约420个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约380个氨基酸，约200个氨基酸至约360个氨基酸，约200个氨基酸至约340个氨基酸，约200个氨基酸至约320个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约3000个氨基酸，约220个氨基酸至约2500个氨基酸，约220个氨基酸至约2000个氨基酸，约220个氨基酸至约1500个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约480个氨基酸，约220个氨基酸至约460个氨基酸，约220个氨基酸至约440个氨基酸，约220个氨基酸至约420个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约380个氨基酸，约220个氨基酸至约360个氨基酸，约220个氨基酸至约340个氨基酸，约220个氨基酸至约320个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约3000个氨基酸，约240个氨基酸至约2500个氨基酸，约240个氨基酸至约2000个氨基酸，约240个氨基酸至约1500个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约480个氨基酸，约240个氨基酸至约460个氨基酸，约240个氨基酸至约440个氨基酸，约240个氨基酸至约420个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约380个氨基酸，约240个氨基酸至约360个氨基酸，约240个氨基酸至约340个氨基酸，约240个氨基酸至约320个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约3000个氨基酸，约260个氨基酸至约2500个氨基酸，约260个氨基酸至约2000个氨基酸，约260个氨基酸至约1500个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约480个氨基酸，约260个氨基酸至约460个氨基酸，约260个氨基酸至约440个氨基酸，约260个氨基酸至约420个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约380个氨基酸，约260个氨基酸至约360个氨基酸，约260个氨基酸至约340个氨基酸，约260个氨基酸至约320个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约3000个氨基酸，约280个氨基酸至约2500个氨基酸，约280个氨基酸至约2000个氨基酸，约280个氨基酸至约1500个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约480个氨基酸，约280个氨基酸至约460个氨基酸，约280个氨基酸至约440个氨基酸，约280个氨基酸至约420个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约380个氨基酸，约280个氨基酸至约360个氨基酸，约280个氨基酸至约340个氨基酸，约280个氨基酸至约320个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约3000个氨基酸，约300个氨基酸至约2500个氨基酸，约300个氨基酸至约2000个氨基酸，约300个氨基酸至约1500个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约480个氨基酸，约300个氨基酸至约460个氨基酸，约300个氨基酸至约440个氨基酸，约300个氨基酸至约420个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约380个氨基酸，约300个氨基酸至约360个氨基酸，约300个氨基酸至约340个氨基酸，约300个氨基酸至约320个氨基酸，约320个氨基酸至约3000个氨基酸，约320个氨基酸至约2500个氨基酸，约320个氨基酸至约2000个氨基酸，约320个氨基酸至约1500个氨基酸，约320个氨基酸至约1000个氨基酸，约320个氨基酸至约950个氨基酸，约320个氨基酸至约900个氨基酸，约320个氨基酸至约850个氨基酸，约320个氨基酸至约800个氨基酸，约320个氨基酸至约750个氨基酸，约320个氨基酸至约700个氨基酸，约320个氨基酸至约650个氨基酸，约320个氨基酸至约600个氨基酸，约320个氨基酸至约550个氨基酸，约320个氨基酸至约500个氨基酸，约320个氨基酸至约480个氨基酸，约320个氨基酸至约460个氨基酸，约320个氨基酸至约440个氨基酸，约320个氨基酸至约420个氨基酸，约320个氨基酸至约400个氨基酸，约320个氨基酸至约380个氨基酸，约320个氨基酸至约360个氨基酸，约320个氨基酸至约340个氨基酸，约340个氨基酸至约3000个氨基酸，约340个氨基酸至约2500个氨基酸，约340个氨基酸至约2000个氨基酸，约340个氨基酸至约1500个氨基酸，约340个氨基酸至约1000个氨基酸，约340个氨基酸至约950个氨基酸，约340个氨基酸至约900个氨基酸，约340个氨基酸至约850个氨基酸，约340个氨基酸至约800个氨基酸，约340个氨基酸至约750个氨基酸，约340个氨基酸至约700个氨基酸，约340个氨基酸至约650个氨基酸，约340个氨基酸至约600个氨基酸，约340个氨基酸至约550个氨基酸，约340个氨基酸至约500个氨基酸，约340个氨基酸至约480个氨基酸，约340个氨基酸至约460个氨基酸，约340个氨基酸至约440个氨基酸，约340个氨基酸至约420个氨基酸，约340个氨基酸至约400个氨基酸，约340个氨基酸至约380个氨基酸，约340个氨基酸至约360个氨基酸，约360个氨基酸至约3000个氨基酸，约360个氨基酸至约2500个氨基酸，约360个氨基酸至约2000个氨基酸，约360个氨基酸至约1500个氨基酸，约360个氨基酸至约1000个氨基酸，约360个氨基酸至约950个氨基酸，约360个氨基酸至约900个氨基酸，约360个氨基酸至约850个氨基酸，约360个氨基酸至约800个氨基酸，约360个氨基酸至约750个氨基酸，约360个氨基酸至约700个氨基酸，约360个氨基酸至约650个氨基酸，约360个氨基酸至约600个氨基酸，约360个氨基酸至约550个氨基酸，约360个氨基酸至约500个氨基酸，约360个氨基酸至约480个氨基酸，约360个氨基酸至约460个氨基酸，约360个氨基酸至约440个氨基酸，约360个氨基酸至约420个氨基酸，约360个氨基酸至约400个氨基酸，约360个氨基酸至约380个氨基酸，约380个氨基酸至约3000个氨基酸，约380个氨基酸至约2500个氨基酸，约380个氨基酸至约2000个氨基酸，约380个氨基酸至约1500个氨基酸，约380个氨基酸至约1000个氨基酸，约380个氨基酸至约950个氨基酸，约380个氨基酸至约900个氨基酸，约380个氨基酸至约850个氨基酸，约380个氨基酸至约800个氨基酸，约380个氨基酸至约750个氨基酸，约380个氨基酸至约700个氨基酸，约380个氨基酸至约650个氨基酸，约380个氨基酸至约600个氨基酸，约380个氨基酸至约550个氨基酸，约380个氨基酸至约500个氨基酸，约380个氨基酸至约480个氨基酸，约380个氨基酸至约460个氨基酸，约380个氨基酸至约440个氨基酸，约380个氨基酸至约420个氨基酸，约380个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约3000个氨基酸，约400个氨基酸至约2500个氨基酸，约400个氨基酸至约2000个氨基酸，约400个氨基酸至约1500个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约480个氨基酸，约400个氨基酸至约460个氨基酸，约400个氨基酸至约440个氨基酸，约400个氨基酸至约420个氨基酸，约420个氨基酸至约3000个氨基酸，约420个氨基酸至约2500个氨基酸，约420个氨基酸至约2000个氨基酸，约420个氨基酸至约1500个氨基酸，约420个氨基酸至约1000个氨基酸，约420个氨基酸至约950个氨基酸，约420个氨基酸至约900个氨基酸，约420个氨基酸至约850个氨基酸，约420个氨基酸至约800个氨基酸，约420个氨基酸至约750个氨基酸，约420个氨基酸至约700个氨基酸，约420个氨基酸至约650个氨基酸，约420个氨基酸至约600个氨基酸，约420个氨基酸至约550个氨基酸，约420个氨基酸至约500个氨基酸，约420个氨基酸至约480个氨基酸，约420个氨基酸至约460个氨基酸，约420个氨基酸至约440个氨基酸，约440个氨基酸至约3000个氨基酸，约440个氨基酸至约2500个氨基酸，约440个氨基酸至约2000个氨基酸，约440个氨基酸至约1500个氨基酸，约440个氨基酸至约1000个氨基酸，约440个氨基酸至约950个氨基酸，约440个氨基酸至约900个氨基酸，约440个氨基酸至约850个氨基酸，约440个氨基酸至约800个氨基酸，约440个氨基酸至约750个氨基酸，约440个氨基酸至约700个氨基酸，约440个氨基酸至约650个氨基酸，约440个氨基酸至约600个氨基酸，约440个氨基酸至约550个氨基酸，约440个氨基酸至约500个氨基酸，约440个氨基酸至约480个氨基酸，约440个氨基酸至约460个氨基酸，约460个氨基酸至约3000个氨基酸，约460个氨基酸至约2500个氨基酸，约460个氨基酸至约2000个氨基酸，约460个氨基酸至约1500个氨基酸，约460个氨基酸至约1000个氨基酸，约460个氨基酸至约950个氨基酸，约460个氨基酸至约900个氨基酸，约460个氨基酸至约850个氨基酸，约460个氨基酸至约800个氨基酸，约460个氨基酸至约750个氨基酸，约460个氨基酸至约700个氨基酸，约460个氨基酸至约650个氨基酸，约460个氨基酸至约600个氨基酸，约460个氨基酸至约550个氨基酸，约460个氨基酸至约500个氨基酸，约460个氨基酸至约480个氨基酸，约480个氨基酸至约3000个氨基酸，约480个氨基酸至约2500个氨基酸，约480个氨基酸至约2000个氨基酸，约480个氨基酸至约1500个氨基酸，约480个氨基酸至约1000个氨基酸，约480个氨基酸至约950个氨基酸，约480个氨基酸至约900个氨基酸，约480个氨基酸至约850个氨基酸，约480个氨基酸至约800个氨基酸，约480个氨基酸至约750个氨基酸，约480个氨基酸至约700个氨基酸，约480个氨基酸至约650个氨基酸，约480个氨基酸至约600个氨基酸，约480个氨基酸至约550个氨基酸，约480个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约3000个氨基酸，约500个氨基酸至约2500个氨基酸，约500个氨基酸至约2000个氨基酸，约500个氨基酸至约1500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约3000个氨基酸，约550个氨基酸至约2500个氨基酸，约550个氨基酸至约2000个氨基酸，约550个氨基酸至约1500个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约3000个氨基酸，约600个氨基酸至约2500个氨基酸，约600个氨基酸至约2000个氨基酸，约600个氨基酸至约1500个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约3000个氨基酸，约650个氨基酸至约2500个氨基酸，约650个氨基酸至约2000个氨基酸，约650个氨基酸至约1500个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约3000个氨基酸，约700个氨基酸至约2500个氨基酸，约700个氨基酸至约2000个氨基酸，约700个氨基酸至约1500个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约3000个氨基酸，约750个氨基酸至约2500个氨基酸，约750个氨基酸至约2000个氨基酸，约750个氨基酸至约1500个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约3000个氨基酸，约800个氨基酸至约2500个氨基酸，约800个氨基酸至约2000个氨基酸，约800个氨基酸至约1500个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约3000个氨基酸，约850个氨基酸至约2500个氨基酸，约850个氨基酸至约2000个氨基酸，约850个氨基酸至约1500个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约3000个氨基酸，约900个氨基酸至约2500个氨基酸，约900个氨基酸至约2000个氨基酸，约900个氨基酸至约1500个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，约950个氨基酸至约3000个氨基酸，约950个氨基酸至约2500个氨基酸，约950个氨基酸至约2000个氨基酸，约950个氨基酸至约1500个氨基酸，约950个氨基酸至约1000个氨基酸，约1000个氨基酸至约3000个氨基酸，约1000个氨基酸至约2500个氨基酸，约1000个氨基酸至约2000个氨基酸，约1000个氨基酸至约1500个氨基酸，约1500个氨基酸至约3000个氨基酸，约1500个氨基酸至约2500个氨基酸，约1500个氨基酸至约2000个氨基酸，约2000个氨基酸至约3000个氨基酸，约2000个氨基酸至约2500个氨基酸，或约2500个氨基酸至约3000个氨基酸。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性第一靶标结合域)与可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包含介于可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性示例性靶标结合域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，

第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包含介于第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与可溶性组织因子域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性可溶性组织因子域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:85)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由核酸编码，所述核酸包括与CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:86)至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:87)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由核酸编码，所述核酸包括与以下至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCCCAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:88)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKRSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:89)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由核酸编码，所述核酸包括与以下至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCCGGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGCGACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGGAGCGGCACCACCAACACAGTGGCCGCCTACAATCTGACTTGGAAATCCACCAACTTCAAGACCATCCTCGAGTGGGAGCCCAAGCCCGTTAATCAAGTTTATACCGTGCAGATTTCCACCAAGAGCGGCGACTGGAAATCCAAGTGCTTCTATACCACAGACACCGAGTGCGATCTCACCGACGAGATCGTCAAAGACGTGAAGCAGACATATTTAGCTAGGGTGTTCTCCTACCCCGCTGGAAACGTGGAGAGCACCGGATCCGCTGGAGAGCCTTTATACGAGAACTCCCCCGAATTCACCCCCTATCTGGAAACCAATTTAGGCCAGCCCACCATCCAGAGCTTCGAACAAGTTGGCACAAAGGTGAACGTCACCGTCGAAGATGAGAGGACTTTAGTGCGGAGGAACAATACATTTTTATCCTTACGTGACGTCTTCGGCAAGGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCTAGCTCCTCCGGCAAGAAGACCGCCAAGACCAATACCAACGAATTTTTAATTGACGTGGACAAGGGCGAGAACTACTGCTTCTCCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACAGTGAACCGGAAGTCCACCGACTCCCCCGTGGAGTGCATGGGCCAAGAGAAGGGAGAGTTTCGTGAGCAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGTGGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGCCAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO:90)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKRSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:91)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由核酸编码，所述核酸包括与以下至少70％一致(例如至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

ATGAAATGGGTCACCTTCATCTCTTTACTGTTTTTATTTAGCAGCGCCTACAGCGTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCCGGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGCGACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGGAGCGGCACCACCAACACAGTGGCCGCCTACAATCTGACTTGGAAATCCACCAACTTCAAGACCATCCTCGAGTGGGAGCCCAAGCCCGTTAATCAAGTTTATACCGTGCAGATTTCCACCAAGAGCGGCGACTGGAAATCCAAGTGCTTCTATACCACAGACACCGAGTGCGATCTCACCGACGAGATCGTCAAAGACGTGAAGCAGACATATTTAGCTAGGGTGTTCTCCTACCCCGCTGGAAACGTGGAGAGCACCGGATCCGCTGGAGAGCCTTTATACGAGAACTCCCCCGAATTCACCCCCTATCTGGAAACCAATTTAGGCCAGCCCACCATCCAGAGCTTCGAACAAGTTGGCACAAAGGTGAACGTCACCGTCGAAGATGAGAGGACTTTAGTGCGGAGGAACAATACATTTTTATCCTTACGTGACGTCTTCGGCAAGGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCTAGCTCCTCCGGCAAGAAGACCGCCAAGACCAATACCAACGAATTTTTAATTGACGTGGACAAGGGCGAGAACTACTGCTTCTCCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACAGTGAACCGGAAGTCCACCGACTCCCCCGTGGAGTGCATGGGCCAAGAGAAGGGAGAGTTTCGTGAGCAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGTGGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGCCAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO:92)。

本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例可以进一步包括一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)位于其N端和/或C端的其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)位于其N端的其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)。在一些实施例中，位于单链嵌合多肽N端的一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一可以直接邻接第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)，或可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)，所述接头序列介于单链嵌合多肽N端的至少一个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一与第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)或可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)之间。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽包括一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)位于其C端的其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)。在一些实施例中，位于单链嵌合多肽C端的一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一直接邻接第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)，或可溶性组织因子域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性可溶性组织因子域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包含接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)，所述接头序列介于单链嵌合多肽C端的至少一个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一与第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)或可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)之间。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽包含一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)位于其N端和其C端的其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)。在一些实施例中，位于单链嵌合多肽N端的一个或多个其它抗原结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一直接邻接第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)，或可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)，所述接头序列介于N端的一个或多个其它抗原结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一与第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)或可溶性组织因子域(例如任一种示例性可溶性组织因子域)之间。在一些实施例中，位于C端的一个或多个其它抗原结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一直接邻接第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)，或可溶性组织因子域(例如任一种示例性可溶性组织因子域)。在一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)，所述接头序列介于C端的一个或多个其它抗原结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之一与第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)或可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)之间。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的两个或更多个(例如三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)特异性地结合到相同抗原。在一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的两个或更多个(例如三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)特异性地结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的两个或更多个(例如三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)各自特异性地结合到相同抗原。在一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)各自特异性地结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)其它靶标结合域各自包含相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)特异性地结合到不同抗原。

在任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个是抗原结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性抗原结合域)。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性抗原结合域)。在一些实施例中，抗原结合域包含scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一种或多种其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一种或多种(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十种)特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体，以及CD28的受体。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。可溶性白介素蛋白和可溶性细胞因子蛋白的非限制性实例包括：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。可溶性白介素受体和可溶性细胞因子受体的非限制性实例包括：可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKP30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)和一种或多种其它靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)可以各自独立地特异性结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD122的受体。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

A型多链嵌合多肽-

NK细胞活化剂的非限制性实例是多链嵌合多肽，其包括：(a)第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽包括：(i)第一靶标结合域、(ii)可溶性组织因子域和(iii)一对亲和域中的第一域；以及(b)第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽包括：(i)一对亲和域中的第二域和(ii)第二靶标结合域，其中第一嵌合多肽与第二嵌合多肽经由亲和域对中的第一域与第二域的结合而发生缔合。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽的总长度可各自独立地是约50个氨基酸至约3000个氨基酸，约50个氨基酸至约2500个氨基酸，约50个氨基酸至约2000个氨基酸，约50个氨基酸至约1500个氨基酸，约50个氨基酸至约1000个氨基酸，约50个氨基酸至约950个氨基酸，约50个氨基酸至约900个氨基酸，约50个氨基酸至约850个氨基酸，约50个氨基酸至约800个氨基酸，约50个氨基酸至约750个氨基酸，约50个氨基酸至约700个氨基酸，约50个氨基酸至约650个氨基酸，约50个氨基酸至约600个氨基酸，约50个氨基酸至约550个氨基酸，约50个氨基酸至约500个氨基酸，约50个氨基酸至约480个氨基酸，约50个氨基酸至约460个氨基酸，约50个氨基酸至约440个氨基酸，约50个氨基酸至约420个氨基酸，约50个氨基酸至约400个氨基酸，约50个氨基酸至约380个氨基酸，约50个氨基酸至约360个氨基酸，约50个氨基酸至约340个氨基酸，约50个氨基酸至约320个氨基酸，约50个氨基酸至约300个氨基酸，约50个氨基酸至约280个氨基酸，约50个氨基酸至约260个氨基酸，约50个氨基酸至约240个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约3000个氨基酸，约100个氨基酸至约2500个氨基酸，约100个氨基酸至约2000个氨基酸，约100个氨基酸至约1500个氨基酸，约100个氨基酸至约1000个氨基酸，约100个氨基酸至约950个氨基酸，约100个氨基酸至约900个氨基酸，约100个氨基酸至约850个氨基酸，约100个氨基酸至约800个氨基酸，约100个氨基酸至约750个氨基酸，约100个氨基酸至约700个氨基酸，约100个氨基酸至约650个氨基酸，约100个氨基酸至约600个氨基酸，约100个氨基酸至约550个氨基酸，约100个氨基酸至约500个氨基酸，约100个氨基酸至约480个氨基酸，约100个氨基酸至约460个氨基酸，约100个氨基酸至约440个氨基酸，约100个氨基酸至约420个氨基酸，约100个氨基酸至约400个氨基酸，约100个氨基酸至约380个氨基酸，约100个氨基酸至约360个氨基酸，约100个氨基酸至约340个氨基酸，约100个氨基酸至约320个氨基酸，约100个氨基酸至约300个氨基酸，约100个氨基酸至约280个氨基酸，约100个氨基酸至约260个氨基酸，约100个氨基酸至约240个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约3000个氨基酸，约150个氨基酸至约2500个氨基酸，约150个氨基酸至约2000个氨基酸，约150个氨基酸至约1500个氨基酸，约150个氨基酸至约1000个氨基酸，约150个氨基酸至约950个氨基酸，约150个氨基酸至约900个氨基酸，约150个氨基酸至约850个氨基酸，约150个氨基酸至约800个氨基酸，约150个氨基酸至约750个氨基酸，约150个氨基酸至约700个氨基酸，约150个氨基酸至约650个氨基酸，约150个氨基酸至约600个氨基酸，约150个氨基酸至约550个氨基酸，约150个氨基酸至约500个氨基酸，约150个氨基酸至约480个氨基酸，约150个氨基酸至约460个氨基酸，约150个氨基酸至约440个氨基酸，约150个氨基酸至约420个氨基酸，约150个氨基酸至约400个氨基酸，约150个氨基酸至约380个氨基酸，约150个氨基酸至约360个氨基酸，约150个氨基酸至约340个氨基酸，约150个氨基酸至约320个氨基酸，约150个氨基酸至约300个氨基酸，约150个氨基酸至约280个氨基酸，约150个氨基酸至约260个氨基酸，约150个氨基酸至约240个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约3000个氨基酸，约200个氨基酸至约2500个氨基酸，约200个氨基酸至约2000个氨基酸，约200个氨基酸至约1500个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约480个氨基酸，约200个氨基酸至约460个氨基酸，约200个氨基酸至约440个氨基酸，约200个氨基酸至约420个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约380个氨基酸，约200个氨基酸至约360个氨基酸，约200个氨基酸至约340个氨基酸，约200个氨基酸至约320个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约3000个氨基酸，约220个氨基酸至约2500个氨基酸，约220个氨基酸至约2000个氨基酸，约220个氨基酸至约1500个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约480个氨基酸，约220个氨基酸至约460个氨基酸，约220个氨基酸至约440个氨基酸，约220个氨基酸至约420个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约380个氨基酸，约220个氨基酸至约360个氨基酸，约220个氨基酸至约340个氨基酸，约220个氨基酸至约320个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约3000个氨基酸，约240个氨基酸至约2500个氨基酸，约240个氨基酸至约2000个氨基酸，约240个氨基酸至约1500个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约480个氨基酸，约240个氨基酸至约460个氨基酸，约240个氨基酸至约440个氨基酸，约240个氨基酸至约420个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约380个氨基酸，约240个氨基酸至约360个氨基酸，约240个氨基酸至约340个氨基酸，约240个氨基酸至约320个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约3000个氨基酸，约260个氨基酸至约2500个氨基酸，约260个氨基酸至约2000个氨基酸，约260个氨基酸至约1500个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约480个氨基酸，约260个氨基酸至约460个氨基酸，约260个氨基酸至约440个氨基酸，约260个氨基酸至约420个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约380个氨基酸，约260个氨基酸至约360个氨基酸，约260个氨基酸至约340个氨基酸，约260个氨基酸至约320个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约3000个氨基酸，约280个氨基酸至约2500个氨基酸，约280个氨基酸至约2000个氨基酸，约280个氨基酸至约1500个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约480个氨基酸，约280个氨基酸至约460个氨基酸，约280个氨基酸至约440个氨基酸，约280个氨基酸至约420个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约380个氨基酸，约280个氨基酸至约360个氨基酸，约280个氨基酸至约340个氨基酸，约280个氨基酸至约320个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约3000个氨基酸，约300个氨基酸至约2500个氨基酸，约300个氨基酸至约2000个氨基酸，约300个氨基酸至约1500个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约480个氨基酸，约300个氨基酸至约460个氨基酸，约300个氨基酸至约440个氨基酸，约300个氨基酸至约420个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约380个氨基酸，约300个氨基酸至约360个氨基酸，约300个氨基酸至约340个氨基酸，约300个氨基酸至约320个氨基酸，约320个氨基酸至约3000个氨基酸，约320个氨基酸至约2500个氨基酸，约320个氨基酸至约2000个氨基酸，约320个氨基酸至约1500个氨基酸，约320个氨基酸至约1000个氨基酸，约320个氨基酸至约950个氨基酸，约320个氨基酸至约900个氨基酸，约320个氨基酸至约850个氨基酸，约320个氨基酸至约800个氨基酸，约320个氨基酸至约750个氨基酸，约320个氨基酸至约700个氨基酸，约320个氨基酸至约650个氨基酸，约320个氨基酸至约600个氨基酸，约320个氨基酸至约550个氨基酸，约320个氨基酸至约500个氨基酸，约320个氨基酸至约480个氨基酸，约320个氨基酸至约460个氨基酸，约320个氨基酸至约440个氨基酸，约320个氨基酸至约420个氨基酸，约320个氨基酸至约400个氨基酸，约320个氨基酸至约380个氨基酸，约320个氨基酸至约360个氨基酸，约320个氨基酸至约340个氨基酸，约340个氨基酸至约3000个氨基酸，约340个氨基酸至约2500个氨基酸，约340个氨基酸至约2000个氨基酸，约340个氨基酸至约1500个氨基酸，约340个氨基酸至约1000个氨基酸，约340个氨基酸至约950个氨基酸，约340个氨基酸至约900个氨基酸，约340个氨基酸至约850个氨基酸，约340个氨基酸至约800个氨基酸，约340个氨基酸至约750个氨基酸，约340个氨基酸至约700个氨基酸，约340个氨基酸至约650个氨基酸，约340个氨基酸至约600个氨基酸，约340个氨基酸至约550个氨基酸，约340个氨基酸至约500个氨基酸，约340个氨基酸至约480个氨基酸，约340个氨基酸至约460个氨基酸，约340个氨基酸至约440个氨基酸，约340个氨基酸至约420个氨基酸，约340个氨基酸至约400个氨基酸，约340个氨基酸至约380个氨基酸，约340个氨基酸至约360个氨基酸，约360个氨基酸至约3000个氨基酸，约360个氨基酸至约2500个氨基酸，约360个氨基酸至约2000个氨基酸，约360个氨基酸至约1500个氨基酸，约360个氨基酸至约1000个氨基酸，约360个氨基酸至约950个氨基酸，约360个氨基酸至约900个氨基酸，约360个氨基酸至约850个氨基酸，约360个氨基酸至约800个氨基酸，约360个氨基酸至约750个氨基酸，约360个氨基酸至约700个氨基酸，约360个氨基酸至约650个氨基酸，约360个氨基酸至约600个氨基酸，约360个氨基酸至约550个氨基酸，约360个氨基酸至约500个氨基酸，约360个氨基酸至约480个氨基酸，约360个氨基酸至约460个氨基酸，约360个氨基酸至约440个氨基酸，约360个氨基酸至约420个氨基酸，约360个氨基酸至约400个氨基酸，约360个氨基酸至约380个氨基酸，约380个氨基酸至约3000个氨基酸，约380个氨基酸至约2500个氨基酸，约380个氨基酸至约2000个氨基酸，约380个氨基酸至约1500个氨基酸，约380个氨基酸至约1000个氨基酸，约380个氨基酸至约950个氨基酸，约380个氨基酸至约900个氨基酸，约380个氨基酸至约850个氨基酸，约380个氨基酸至约800个氨基酸，约380个氨基酸至约750个氨基酸，约380个氨基酸至约700个氨基酸，约380个氨基酸至约650个氨基酸，约380个氨基酸至约600个氨基酸，约380个氨基酸至约550个氨基酸，约380个氨基酸至约500个氨基酸，约380个氨基酸至约480个氨基酸，约380个氨基酸至约460个氨基酸，约380个氨基酸至约440个氨基酸，约380个氨基酸至约420个氨基酸，约380个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约3000个氨基酸，约400个氨基酸至约2500个氨基酸，约400个氨基酸至约2000个氨基酸，约400个氨基酸至约1500个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约480个氨基酸，约400个氨基酸至约460个氨基酸，约400个氨基酸至约440个氨基酸，约400个氨基酸至约420个氨基酸，约420个氨基酸至约3000个氨基酸，约420个氨基酸至约2500个氨基酸，约420个氨基酸至约2000个氨基酸，约420个氨基酸至约1500个氨基酸，约420个氨基酸至约1000个氨基酸，约420个氨基酸至约950个氨基酸，约420个氨基酸至约900个氨基酸，约420个氨基酸至约850个氨基酸，约420个氨基酸至约800个氨基酸，约420个氨基酸至约750个氨基酸，约420个氨基酸至约700个氨基酸，约420个氨基酸至约650个氨基酸，约420个氨基酸至约600个氨基酸，约420个氨基酸至约550个氨基酸，约420个氨基酸至约500个氨基酸，约420个氨基酸至约480个氨基酸，约420个氨基酸至约460个氨基酸，约420个氨基酸至约440个氨基酸，约440个氨基酸至约3000个氨基酸，约440个氨基酸至约2500个氨基酸，约440个氨基酸至约2000个氨基酸，约440个氨基酸至约1500个氨基酸，约440个氨基酸至约1000个氨基酸，约440个氨基酸至约950个氨基酸，约440个氨基酸至约900个氨基酸，约440个氨基酸至约850个氨基酸，约440个氨基酸至约800个氨基酸，约440个氨基酸至约750个氨基酸，约440个氨基酸至约700个氨基酸，约440个氨基酸至约650个氨基酸，约440个氨基酸至约600个氨基酸，约440个氨基酸至约550个氨基酸，约440个氨基酸至约500个氨基酸，约440个氨基酸至约480个氨基酸，约440个氨基酸至约460个氨基酸，约460个氨基酸至约3000个氨基酸，约460个氨基酸至约2500个氨基酸，约460个氨基酸至约2000个氨基酸，约460个氨基酸至约1500个氨基酸，约460个氨基酸至约1000个氨基酸，约460个氨基酸至约950个氨基酸，约460个氨基酸至约900个氨基酸，约460个氨基酸至约850个氨基酸，约460个氨基酸至约800个氨基酸，约460个氨基酸至约750个氨基酸，约460个氨基酸至约700个氨基酸，约460个氨基酸至约650个氨基酸，约460个氨基酸至约600个氨基酸，约460个氨基酸至约550个氨基酸，约460个氨基酸至约500个氨基酸，约460个氨基酸至约480个氨基酸，约480个氨基酸至约3000个氨基酸，约480个氨基酸至约2500个氨基酸，约480个氨基酸至约2000个氨基酸，约480个氨基酸至约1500个氨基酸，约480个氨基酸至约1000个氨基酸，约480个氨基酸至约950个氨基酸，约480个氨基酸至约900个氨基酸，约480个氨基酸至约850个氨基酸，约480个氨基酸至约800个氨基酸，约480个氨基酸至约750个氨基酸，约480个氨基酸至约700个氨基酸，约480个氨基酸至约650个氨基酸，约480个氨基酸至约600个氨基酸，约480个氨基酸至约550个氨基酸，约480个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约3000个氨基酸，约500个氨基酸至约2500个氨基酸，约500个氨基酸至约2000个氨基酸，约500个氨基酸至约1500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约3000个氨基酸，约550个氨基酸至约2500个氨基酸，约550个氨基酸至约2000个氨基酸，约550个氨基酸至约1500个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约3000个氨基酸，约600个氨基酸至约2500个氨基酸，约600个氨基酸至约2000个氨基酸，约600个氨基酸至约1500个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约3000个氨基酸，约650个氨基酸至约2500个氨基酸，约650个氨基酸至约2000个氨基酸，约650个氨基酸至约1500个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约3000个氨基酸，约700个氨基酸至约2500个氨基酸，约700个氨基酸至约2000个氨基酸，约700个氨基酸至约1500个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约3000个氨基酸，约750个氨基酸至约2500个氨基酸，约750个氨基酸至约2000个氨基酸，约750个氨基酸至约1500个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约3000个氨基酸，约800个氨基酸至约2500个氨基酸，约800个氨基酸至约2000个氨基酸，约800个氨基酸至约1500个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约3000个氨基酸，约850个氨基酸至约2500个氨基酸，约850个氨基酸至约2000个氨基酸，约850个氨基酸至约1500个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约3000个氨基酸，约900个氨基酸至约2500个氨基酸，约900个氨基酸至约2000个氨基酸，约900个氨基酸至约1500个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，约950个氨基酸至约3000个氨基酸，约950个氨基酸至约2500个氨基酸，约950个氨基酸至约2000个氨基酸，约950个氨基酸至约1500个氨基酸，约950个氨基酸至约1000个氨基酸，约1000个氨基酸至约3000个氨基酸，约1000个氨基酸至约2500个氨基酸，约1000个氨基酸至约2000个氨基酸，约1000个氨基酸至约1500个氨基酸，约1500个氨基酸至约3000个氨基酸，约1500个氨基酸至约2500个氨基酸，约1500个氨基酸至约2000个氨基酸，约2000个氨基酸至约3000个氨基酸，约2000个氨基酸至约2500个氨基酸，或约2500个氨基酸至约3000个氨基酸。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽中的第一靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性靶标结合域)与可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性第一靶标结合域)与可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第二域)与第二靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性第二靶标结合域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，

第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一对亲和域中的第二域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的的任一种示例性第二域)与第二靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性第二靶标结合域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域已知的任一种示例性接头序列)。

在任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)，其中一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性可溶性组织因子域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)之间。在一些实施例中，第一嵌合多肽可进一步包括介于可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文描述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)之间的接头序列(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性接头序列)，和/或介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)与一对亲和域中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的本文所述的任一种示例性第一域)之间的接头序列(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽还包括位于第一嵌合多肽N端和/或C端的一个或多个(例如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)其它靶标结合域。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)直接邻接亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的本文所述的任一种示例性第一域)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于一个或多个其它靶标结合结构域中的至少一个(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)与一对亲和域中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的本文所述的任一种示例性第一域)之间的接头序列(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性接头序列)。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)直接邻接第一靶标结合域(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性可溶性组织因子域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)之间。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)直接邻接第一靶标结合域(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)或亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种接头序列)，所述接头序列安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)或亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的本文所述的任一种示例性第一域)之间。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)直接邻接第一靶标结合域(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)或亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)，所述接头序列安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)或亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的本文所述的任一种示例性第一域)之间。在一些实施例中，定位于可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种第一域或本文所述的任一种示例性亲和域对)之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之间，所述一个或多个其它靶标结合域定位于可溶性组织因子域(例如本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述一个或多个其它靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)直接邻接亲和域对中的第二域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第二域)。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)与亲和域对中的第二域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的本文所述的任一种示例性第二域)之间的接头序列(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性接头序列)。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)直接邻接第二靶标结合域(例如本文所述或本领域已知的任一种示例性靶标结合域)。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽中的的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个(例如三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个(例如三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个(例如三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到不同的抗原。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个(例如两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)是抗原结合域。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域(例如scFv或单域抗体)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个(例如二、三、四、五、六、七、八、九或十个)特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。可溶性白介素蛋白和可溶性细胞因子蛋白的非限制性实例包括：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。可溶性白介素受体和可溶性细胞因子受体的非限制性实例包括：可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKP30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)和一个或多个其它靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)可以各自独立地特异性结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD122的受体。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)、第二靶标结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)和一个或多个其它结合域(例如本文所述的任一种靶标结合域)中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

B型多链嵌合多肽

NK细胞活化剂的非限制性实例是多链嵌合多肽，其包括：(a)第一和第二嵌合多肽，其各自包括：(i)第一靶标结合域、(ii)Fc域，和(iii)一对亲和域中的第一域；以及(b)第三和第四嵌合多肽，其各自包括：(i)一对亲和域中的第二域，和(ii)第二靶标结合域，其中第一和第二嵌合多肽与第三和第四嵌合多肽经由亲和域对中的第一域与第二域的结合而发生缔合，并且第一和第二嵌合多肽经由其Fc域发生缔合。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一和第二嵌合多肽中的第一靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性靶标结合域)与Fc域(例如本文所述的任一种示例性Fc域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一和第二嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性第一靶标结合域)与Fc域(例如本文所述的任一种示例性Fc域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一和第二嵌合多肽中的Fc域(例如本文所述的任一种示例性Fc域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一和第二嵌合多肽进一步包含介于第一和第二嵌合多肽中的Fc域(例如本文所述的任一种示例性Fc域)与亲和域对中的第一域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第一域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第三和第四嵌合多肽中的亲和域对中的第二域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第二域)与第二靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性第二靶标结合域)彼此直接邻接。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第三和第四嵌合多肽进一步包含介于第三和第四嵌合多肽中的亲和域对中的第二域(例如本文所述的任一种示例性亲和域对中的任一种示例性第二域)与第二靶标结合域(例如本文所述的任一种示例性第二靶标结合域)之间的接头序列(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域(例如本文所述的任一种示例性第二靶标结合域)包括scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)和第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)中的一个或两个特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)与第二靶标结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性示例性靶标结合域)彼此直接邻接。可溶性白介素蛋白和可溶性细胞因子蛋白的非限制性实例包括：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性靶标结合域)是可溶性白介素或细胞因子受体。可溶性白介素受体和可溶性细胞因子受体的非限制性实例包括：可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKP30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域可以各自独立地特异性结合到选自以下群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性白介素或细胞因子蛋白选自以下群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素受体或细胞因子受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

组织因子

人组织因子是263个氨基酸的跨膜蛋白，其含有三个结构域：(1)219个氨基酸的N端胞外域(残基1-219)；(2)22个氨基酸的跨膜域(残基220-242)；和(3)21个氨基酸的胞质C端尾(残基242-263)((UniProtKB标识符编号：P13726)。胞质尾在Ser253和Ser258处含有两个磷酸化位点，在Cys245处含有一个S-棕榈酰化位点。没有发现胞质域的缺失或突变影响组织因子凝血活性。组织因子在蛋白质胞内域中Cys245处具有一个S-棕榈酰化位点。Cys245位于胞内域的氨基酸端，并且靠近膜表面。组织因子跨膜域由单跨α-螺旋构成。

由两个纤连蛋白III型结构域构成的组织因子的胞外域通过六氨基酸接头与跨膜域连接。这一接头提供构象灵活性，以使组织因子胞外域与其跨膜域和胞质域解偶联。每个组织因子纤连蛋白III型模块均由两个重叠的β折叠构成，其中顶层折叠结构域含有三个反平行的β链，而底层折叠含有四个β链。β链通过β环在链βA和βB、βC和βD以及βE和βF之间连接，其在两个模块中均构象保守。有三个短的α螺旋段连接β链。组织因子的独特特征是链β10与链β11之间的17个氨基酸的β-发夹，这不是纤连蛋白超家族的常见成分。N端域还在β6F与β7G之间包含一个12个氨基酸的环，所述环不存在于C端域，并且是组织因子特有的。这种纤连蛋白III型结构域结构是免疫球蛋白样家族蛋白质折叠的的特征，并且在广泛多种细胞外蛋白中是保守的。

一旦酶原FVII与组织结合形成活性组织因子-FVIIa复合物，就可通过有限的蛋白水解将其迅速转化为FVIIa。FVIIa以大约0.1nM(血浆FVII的1％)的浓度作为酶循环，也可直接结合到组织因子。组织因子与FVIIa在组织因子-FVIIa复合物上的变构相互作用极大地提高了FVIIa的酶促活性：小的发色肽基底物的水解速率提高约20到100倍，并且天然大分子底物FIX和FX的活化速率提高接近一百万倍。与结合到组织因子时FVIIa活性位点的变构活化相一致，磷脂双层上组织因子-FVIIa复合物的形成(即，当磷脂酰-L-丝氨酸暴露在膜表面时)以Ca²⁺依赖的方式提高FIX或FX活化的速率1000倍。相对于游离FVIIa，组织因子-FVIIa-磷脂复合物对FX活化的大约百万倍总体增加是凝血级联反应的关键调节点。

FVII是约50kDa的单链多肽，由406个氨基酸残基组成，具有N端富含γ-羧基谷氨酸(GLA)的结构域，两个表皮生长因子样结构域(EGF1和EFG2)和C端丝氨酸蛋白酶域。FVII通过在EGF2与蛋白酶域之间的短接头区中Ile-¹⁵⁴-Arg¹⁵²键的特异性蛋白水解裂解而被活化为FVIIa。这种裂解使得轻链和重链通过Cys¹³⁵和Cys²⁶²的单个二硫键连在一起。FVIIa通过其N端GLA域以Ca²⁺依赖性方式结合磷脂膜。GLA域的C端紧邻芳香族堆叠和两个EGF域。芳香族堆叠将GLA连接到结合单个Ca²⁺离子的EGF1域。占用这一Ca²⁺结合位点会增加FVIIa酰胺分解活性和组织因子缔合。催化三联体由His¹⁹³、Asp²⁴²和Ser³⁴⁴组成，并且FVIIa蛋白酶域内单个Ca²⁺离子的结合对其催化活性至关重要。FVII对FVIIa的蛋白水解活化释放了Ile¹⁵³处新形成的氨基端，使其向后折叠并且插入活化袋中，与Asp³⁴³的羧酸盐形成盐桥，以生成氧阴离子孔。这一盐桥的形成对于FVIIa活性至关重要。但是，在蛋白水解活化后，游离的FVIIa中不会发生氧阴离子孔的形成。结果，FVIIa以酶原样状态循环，血浆蛋白酶抑制剂不能很好识别所述状态，使其以大约90分钟的半衰期循环。

FVIIa活性位点在膜表面上方的组织因子介导的定位对于FVIIa朝向同源底物很重要。游离FVIIa在结合到膜上时采用稳定扩展结构，其活性位点定位在膜表面上方约

FVIIa与组织因子结合后，FVa活性位点将重新定位为更靠近膜约

这种调节可帮助FVIIa催化三联体与靶标底物裂解位点正确对齐。使用无GLA域的FVIIa，已显示活性位点仍位于膜上方相似的距离，证明即使在没有FVIIa-膜相互作用的情况下，组织因子也能够完全支持FVIIa活性位点定位。另外的数据显示，只要组织因子胞外域以某种方式系栓到膜表面，组织因子就支持完全FVIIa蛋白水解活性。但是，将FVIIa的活性位点提高到膜表面上方大于

会大大降低组织因子-FVIIa复合物活化FX的能力，但不会降低组织因子-FVIIa的酰胺分解活性。

丙氨酸扫描诱变已用于评定组织因子胞外域中特定氨基酸侧链对与FVIIa相互作用的作用(Gibbs等人,《生物化学(Biochemistry)》33(47):14003-14010,1994；Schullek等人,《生物化学杂志(J Biol Chem)》269(30):19399-19403,1994)。丙氨酸取代鉴定出有限数量的残基位置，在这些位置处，丙氨酸置换引起对FVIIa结合的亲和力降低5到10倍。发现这些残基侧链中的大多数在晶体结构中充分暴露于溶剂，与大分子配体相互作用一致。FVIIa配体结合位点位于两个模块之间边界处的宽广区上。在C模块中，位于突出的B-C环上的残基Arg¹³⁵和Phe¹⁴⁰提供与FVIIa的独立接触。Leu¹³³位于手指状结构的基底部，并且挤入两个模块之间的裂缝中。这提供由Lys²⁰、Thr⁶⁰、Asp⁵⁸和Ile²²组成的重要结合残基的主要簇的连续性。Thr⁶⁰仅部分暴露于溶剂，并且可能起局部结构作用，而不是与配体显著接触。结合位点延伸到模块间角的凹面，其涉及Glu²⁴和Gln¹¹⁰，并且可能涉及更远的残基Val²⁰⁷。结合区从Asp58延伸到由Lys⁴⁸、Lys⁴⁶、Gln³⁷、Asp⁴⁴和Trp⁴⁵形成的凸表面区。Trp⁴⁵和Asp⁴⁴不会独立地与FVIIa相互作用，表明Trp⁴⁵位置处的突变效应可能反映这一侧链对邻近Asp⁴⁴和Gln³⁷侧链的局部堆积的结构重要性。相互作用区进一步包括两个表面暴露的芳香族残基Phe⁷⁶和Tyr⁷⁸，其在N模块中形成疏水簇的一部分。

组织因子-FVIIa的已知生理底物是FVII、FIX和FX以及某些蛋白酶活化的受体。突变分析已鉴定出许多残基，当突变时，所述残基支持对小肽基底物的完全FVIIa酰胺分解活性，但缺少支持大分子底物(即，FVII、FIX和FX)活化的能力(Ruf等人,《生物化学杂志》267(31):22206-22210,1992；Ruf等人,《生物化学杂志》267(9):6375-6381,1992；Huang等人,《生物化学杂志》271(36):21752-21757,1996；Kirchhofer等人,《生物化学》39(25):7380-7387,2000)。已显示在残基159-165处的组织因子环区和在这一柔性环中或附近的残基对于组织因子-FVIIa复合物的蛋白水解活性至关重要。这定义了提出的组织因子的底物结合位点外区，所述区与FVIIa活性位点相距甚远。甘氨酸残基被稍大的残基丙氨酸取代会大大损害组织因子-FVIIa的蛋白水解活性。这表明甘氨酸提供的柔性对于用于组织因子大分子底物识别的残基159-165的环至关重要。

还证明了残基Lys¹⁶⁵和Lys¹⁶⁶对于底物识别和结合很重要。这些残基中的任何一个突变为丙氨酸均会引起组织因子辅助因子功能的显著降低。在大多数组织因子-FVIIa结构中，Lys¹⁶⁵和Lys¹⁶⁶彼此背对，Lys¹⁶⁵指向的FVIIa，而Lys¹⁶⁶指向晶体结构中的底物结合位点外区。FVIIa的Lys¹⁶⁵和Gla³⁵之间的推定盐桥形成将支持组织因子与FVIIa的GLA域相互作用调节底物识别的观点。这些结果表明，组织因子胞外域的C端部分直接与FIX和FX的GLA域、可能的邻近EGF1域相互作用，并且FVIIa GLA域的存在可直接或间接调节这些相互作用。

可溶性组织因子域

在本文所述的任何多肽、组合物或方法的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是缺少信号序列、跨膜域和胞内域的野生型组织因子多肽。在一些实例中，可溶性组织因子域可以是组织因子突变体，其中野生型组织因子多肽缺少信号序列、跨膜域和胞内域，并且已在选定的氨基酸处被进一步修饰。在一些实例中，可溶性组织因子域可以是人可溶性组织因子域。在一些实例中，可溶性组织因子域可以是小鼠可溶性组织因子域。在一些实例中，可溶性组织因子域可以是大鼠可溶性组织因子域。人可溶性组织因子域、小鼠可溶性组织因子域、大鼠可溶性组织因子域和突变可溶性组织因子域的非限制性实例在下文显示。

示例性人可溶性组织因子域(SEQ ID NO:93)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

编码人可溶性组织因子域的示例性核酸(SEQ ID NO:94)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

示例性小鼠可溶性组织因子域(SEQ ID NO:95)

agipekafnltwistdfktilewqpkptnytytvqisdrsrnwknkcfsttdtecdltdeivkdvtwayeakvlsvprrnsvhgdgdqlvihgeeppftnapkflpyrdtnlgqpviqqfeqdgrklnvvvkdsltlvrkngtfltlrqvfgkdlgyiityrkgsstgkktnitntnefsidveegvsycffvqamifsrktnqnspgsstvcteqwksflge

示例性大鼠可溶性组织因子域(SEQ ID NO:96)

Agtppgkafnltwistdfktilewqpkptnytytvqisdrsrnwkykctgttdtecdltdeivkdvnwtyearvlsvpwrnsthgketlfgthgeeppftnarkflpyrdtkigqpviqkyeqggtklkvtvkdsftlvrkngtfltlrqvfgndlgyiltyrkdsstgrktntthtneflidvekgvsycffaqavifsrktnhkspesitkcteqwksvlge

示例性人突变型可溶性组织因子域(SEQ ID NO:97)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

示例性人突变型可溶性组织因子域(SEQ ID NO:98)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDAKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLAENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

在一些实施例中，可溶性组织因子域可以包括与SEQ ID NO:93、95、96、97或98至少70％一致、至少72％一致、至少74％一致、至少76％一致、至少78％一致、至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。在一些实施例中，可溶性组织因子域可以包括SEQ ID NO:93、95、96、97或98的序列，其N端有一到二十个氨基酸(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)已去除和/或其C端有一到二十个氨基酸(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)已去除。

如本领域中可了解，本领域技术人员将理解，在不同哺乳动物物种之间保守的氨基酸的突变更可能降低蛋白质的活性和/或结构稳定性，而在不同哺乳动物物种之间不保守的蛋白质的突变不太可能降低蛋白质的活性和/或结构稳定性。

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实例中，可溶性组织因子域不能结合到因子VIIa。在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实例中，可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的凝血。

在一些实例中，可溶性组织因子域可以是人可溶性组织因子域。在一些实施例中，可溶性组织因子域可以是小鼠可溶性组织因子域。在一些实施例中，可溶性组织因子域可以是大鼠可溶性组织因子域。

在一些实例中，可溶性组织因子域不包括以下中的一个或多个(例如二、三、四、五、六或七个)：位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。在一些实施例中，突变可溶性组织因子具有SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的氨基酸序列。

在一些实施例中，可溶性组织因子域可以由核酸编码，所述核酸包括与SEQ IDNO:94至少70％一致、至少72％一致、至少74％一致、至少76％一致、至少78％一致、至少80％一致、至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致的序列。

在一些实施例中，可溶性组织因子域的总长度可以是约20个氨基酸至约220个氨基酸，约20个氨基酸至约215个氨基酸，约20个氨基酸至约210个氨基酸，约20个氨基酸至约205个氨基酸，约20个氨基酸至约200个氨基酸，约20个氨基酸至约195个氨基酸，约20个氨基酸至约190个氨基酸，约20个氨基酸至约185个氨基酸，约20个氨基酸至约180个氨基酸，约20个氨基酸至约175个氨基酸，约20个氨基酸至约170个氨基酸，约20个氨基酸至约165个氨基酸，约20个氨基酸至约160个氨基酸，约20个氨基酸至约155个氨基酸，约20个氨基酸至约150个氨基酸，约20个氨基酸至约145个氨基酸，约20个氨基酸至约140个氨基酸，约20个氨基酸至约135个氨基酸，约20个氨基酸至约130个氨基酸，约20个氨基酸至约125个氨基酸，约20个氨基酸至约120个氨基酸，约20个氨基酸至约115个氨基酸，约20个氨基酸至约110个氨基酸，约20个氨基酸至约105个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约95个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约85个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约75个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约220个氨基酸，约30个氨基酸至约215个氨基酸，约30个氨基酸至约210个氨基酸，约30个氨基酸至约205个氨基酸，约30个氨基酸至约200个氨基酸，约30个氨基酸至约195个氨基酸，约30个氨基酸至约190个氨基酸，约30个氨基酸至约185个氨基酸，约30个氨基酸至约180个氨基酸，约30个氨基酸至约175个氨基酸，约30个氨基酸至约170个氨基酸，约30个氨基酸至约165个氨基酸，约30个氨基酸至约160个氨基酸，约30个氨基酸至约155个氨基酸，约30个氨基酸至约150个氨基酸，约30个氨基酸至约145个氨基酸，约30个氨基酸至约140个氨基酸，约30个氨基酸至约135个氨基酸，约30个氨基酸至约130个氨基酸，约30个氨基酸至约125个氨基酸，约30个氨基酸至约120个氨基酸，约30个氨基酸至约115个氨基酸，约30个氨基酸至约110个氨基酸，约30个氨基酸至约105个氨基酸，约30个氨基酸至约100个氨基酸，约30个氨基酸至约95个氨基酸，约30个氨基酸至约90个氨基酸，约30个氨基酸至约85个氨基酸，约30个氨基酸至约80个氨基酸，约30个氨基酸至约75个氨基酸，约30个氨基酸至约70个氨基酸，约30个氨基酸至约60个氨基酸，约30个氨基酸至约50个氨基酸，约30个氨基酸至约40个氨基酸，约40个氨基酸至约220个氨基酸，约40个氨基酸至约215个氨基酸，约40个氨基酸至约210个氨基酸，约40个氨基酸至约205个氨基酸，约40个氨基酸至约200个氨基酸，约40个氨基酸至约195个氨基酸，约40个氨基酸至约190个氨基酸，约40个氨基酸至约185个氨基酸，约40个氨基酸至约180个氨基酸，约40个氨基酸至约175个氨基酸，约40个氨基酸至约170个氨基酸，约40个氨基酸至约165个氨基酸，约40个氨基酸至约160个氨基酸，约40个氨基酸至约155个氨基酸，约40个氨基酸至约150个氨基酸，约40个氨基酸至约145个氨基酸，约40个氨基酸至约140个氨基酸，约40个氨基酸至约135个氨基酸，约40个氨基酸至约130个氨基酸，约40个氨基酸至约125个氨基酸，约40个氨基酸至约120个氨基酸，约40个氨基酸至约115个氨基酸，约40个氨基酸至约110个氨基酸，约40个氨基酸至约105个氨基酸，约40个氨基酸至约100个氨基酸，约40个氨基酸至约95个氨基酸，约40个氨基酸至约90个氨基酸，约40个氨基酸至约85个氨基酸，约40个氨基酸至约80个氨基酸，约40个氨基酸至约75个氨基酸，约40个氨基酸至约70个氨基酸，约40个氨基酸至约60个氨基酸，约40个氨基酸至约50个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约215个氨基酸，约50个氨基酸至约210个氨基酸，约50个氨基酸至约205个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约195个氨基酸，约50个氨基酸至约190个氨基酸，约50个氨基酸至约185个氨基酸，约50个氨基酸至约180个氨基酸，约50个氨基酸至约175个氨基酸，约50个氨基酸至约170个氨基酸，约50个氨基酸至约165个氨基酸，约50个氨基酸至约160个氨基酸，约50个氨基酸至约155个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约145个氨基酸，约50个氨基酸至约140个氨基酸，约50个氨基酸至约135个氨基酸，约50个氨基酸至约130个氨基酸，约50个氨基酸至约125个氨基酸，约50个氨基酸至约120个氨基酸，约50个氨基酸至约115个氨基酸，约50个氨基酸至约110个氨基酸，约50个氨基酸至约105个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约50个氨基酸至约95个氨基酸，约50个氨基酸至约90个氨基酸，约50个氨基酸至约85个氨基酸，约50个氨基酸至约80个氨基酸，约50个氨基酸至约75个氨基酸，约50个氨基酸至约70个氨基酸，约50个氨基酸至约60个氨基酸，约60个氨基酸至约220个氨基酸，约60个氨基酸至约215个氨基酸，约60个氨基酸至约210个氨基酸，约60个氨基酸至约205个氨基酸，约60个氨基酸至约200个氨基酸，约60个氨基酸至约195个氨基酸，约60个氨基酸至约190个氨基酸，约60个氨基酸至约185个氨基酸，约60个氨基酸至约180个氨基酸，约60个氨基酸至约175个氨基酸，约60个氨基酸至约170个氨基酸，约60个氨基酸至约165个氨基酸，约60个氨基酸至约160个氨基酸，约60个氨基酸至约155个氨基酸，约60个氨基酸至约150个氨基酸，约60个氨基酸至约145个氨基酸，约60个氨基酸至约140个氨基酸，约60个氨基酸至约135个氨基酸，约60个氨基酸至约130个氨基酸，约60个氨基酸至约125个氨基酸，约60个氨基酸至约120个氨基酸，约60个氨基酸至约115个氨基酸，约60个氨基酸至约110个氨基酸，约60个氨基酸至约105个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约95个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约85个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约75个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约220个氨基酸，约70个氨基酸至约215个氨基酸，约70个氨基酸至约210个氨基酸，约70个氨基酸至约205个氨基酸，约70个氨基酸至约200个氨基酸，约70个氨基酸至约195个氨基酸，约70个氨基酸至约190个氨基酸，约70个氨基酸至约185个氨基酸，约70个氨基酸至约180个氨基酸，约70个氨基酸至约175个氨基酸，约70个氨基酸至约170个氨基酸，约70个氨基酸至约165个氨基酸，约70个氨基酸至约160个氨基酸，约70个氨基酸至约155个氨基酸，约70个氨基酸至约150个氨基酸，约70个氨基酸至约145个氨基酸，约70个氨基酸至约140个氨基酸，约70个氨基酸至约135个氨基酸，约70个氨基酸至约130个氨基酸，约70个氨基酸至约125个氨基酸，约70个氨基酸至约120个氨基酸，约70个氨基酸至约115个氨基酸，约70个氨基酸至约110个氨基酸，约70个氨基酸至约105个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约95个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约85个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约220个氨基酸，约80个氨基酸至约215个氨基酸，约80个氨基酸至约210个氨基酸，约80个氨基酸至约205个氨基酸，约80个氨基酸至约200个氨基酸，约80个氨基酸至约195个氨基酸，约80个氨基酸至约190个氨基酸，约80个氨基酸至约185个氨基酸，约80个氨基酸至约180个氨基酸，约80个氨基酸至约175个氨基酸，约80个氨基酸至约170个氨基酸，约80个氨基酸至约165个氨基酸，约80个氨基酸至约160个氨基酸，约80个氨基酸至约155个氨基酸，约80个氨基酸至约150个氨基酸，约80个氨基酸至约145个氨基酸，约80个氨基酸至约140个氨基酸，约80个氨基酸至约135个氨基酸，约80个氨基酸至约130个氨基酸，约80个氨基酸至约125个氨基酸，约80个氨基酸至约120个氨基酸，约80个氨基酸至约115个氨基酸，约80个氨基酸至约110个氨基酸，约80个氨基酸至约105个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约95个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，约90个氨基酸至约220个氨基酸，约90个氨基酸至约215个氨基酸，约90个氨基酸至约210个氨基酸，约90个氨基酸至约205个氨基酸，约90个氨基酸至约200个氨基酸，约90个氨基酸至约195个氨基酸，约90个氨基酸至约190个氨基酸，约90个氨基酸至约185个氨基酸，约90个氨基酸至约180个氨基酸，约90个氨基酸至约175个氨基酸，约90个氨基酸至约170个氨基酸，约90个氨基酸至约165个氨基酸，约90个氨基酸至约160个氨基酸，约90个氨基酸至约155个氨基酸，约90个氨基酸至约150个氨基酸，约90个氨基酸至约145个氨基酸，约90个氨基酸至约140个氨基酸，约90个氨基酸至约135个氨基酸，约90个氨基酸至约130个氨基酸，约90个氨基酸至约125个氨基酸，约90个氨基酸至约120个氨基酸，约90个氨基酸至约115个氨基酸，约90个氨基酸至约110个氨基酸，约90个氨基酸至约105个氨基酸，约90个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约215个氨基酸，约100个氨基酸至约210个氨基酸，约100个氨基酸至约205个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约195个氨基酸，约100个氨基酸至约190个氨基酸，约100个氨基酸至约185个氨基酸，约100个氨基酸至约180个氨基酸，约100个氨基酸至约175个氨基酸，约100个氨基酸至约170个氨基酸，约100个氨基酸至约165个氨基酸，约100个氨基酸至约160个氨基酸，约100个氨基酸至约155个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约100个氨基酸至约145个氨基酸，约100个氨基酸至约140个氨基酸，约100个氨基酸至约135个氨基酸，约100个氨基酸至约130个氨基酸，约100个氨基酸至约125个氨基酸，约100个氨基酸至约120个氨基酸，约100个氨基酸至约115个氨基酸，约100个氨基酸至约110个氨基酸，约110个氨基酸至约220个氨基酸，约110个氨基酸至约215个氨基酸，约110个氨基酸至约210个氨基酸，约110个氨基酸至约205个氨基酸，约110个氨基酸至约200个氨基酸，约110个氨基酸至约195个氨基酸，约110个氨基酸至约190个氨基酸，约110个氨基酸至约185个氨基酸，约110个氨基酸至约180个氨基酸，约110个氨基酸至约175个氨基酸，约110个氨基酸至约170个氨基酸，约110个氨基酸至约165个氨基酸，约110个氨基酸至约160个氨基酸，约110个氨基酸至约155个氨基酸，约110个氨基酸至约150个氨基酸，约110个氨基酸至约145个氨基酸，约110个氨基酸至约140个氨基酸，约110个氨基酸至约135个氨基酸，约110个氨基酸至约130个氨基酸，约110个氨基酸至约125个氨基酸，约110个氨基酸至约120个氨基酸，约110个氨基酸至约115个氨基酸，约115个氨基酸至约220个氨基酸，约115个氨基酸至约215个氨基酸，约115个氨基酸至约210个氨基酸，约115个氨基酸至约205个氨基酸，约115个氨基酸至约200个氨基酸，约115个氨基酸至约195个氨基酸，约115个氨基酸至约190个氨基酸，约115个氨基酸至约185个氨基酸，约115个氨基酸至约180个氨基酸，约115个氨基酸至约175个氨基酸，约115个氨基酸至约170个氨基酸，约115个氨基酸至约165个氨基酸，约115个氨基酸至约160个氨基酸，约115个氨基酸至约155个氨基酸，约115个氨基酸至约150个氨基酸，约115个氨基酸至约145个氨基酸，约115个氨基酸至约140个氨基酸，约115个氨基酸至约135个氨基酸，约115个氨基酸至约130个氨基酸，约115个氨基酸至约125个氨基酸，约115个氨基酸至约120个氨基酸，约120个氨基酸至约220个氨基酸，约120个氨基酸至约215个氨基酸，约120个氨基酸至约210个氨基酸，约120个氨基酸至约205个氨基酸，约120个氨基酸至约200个氨基酸，约120个氨基酸至约195个氨基酸，约120个氨基酸至约190个氨基酸，约120个氨基酸至约185个氨基酸，约120个氨基酸至约180个氨基酸，约120个氨基酸至约175个氨基酸，约120个氨基酸至约170个氨基酸，约120个氨基酸至约165个氨基酸，约120个氨基酸至约160个氨基酸，约120个氨基酸至约155个氨基酸，约120个氨基酸至约150个氨基酸，约120个氨基酸至约145个氨基酸，约120个氨基酸至约140个氨基酸，约120个氨基酸至约135个氨基酸，约120个氨基酸至约130个氨基酸，约120个氨基酸至约125个氨基酸，约125个氨基酸至约220个氨基酸，约125个氨基酸至约215个氨基酸，约125个氨基酸至约210个氨基酸，约125个氨基酸至约205个氨基酸，约125个氨基酸至约200个氨基酸，约125个氨基酸至约195个氨基酸，约125个氨基酸至约190个氨基酸，约125个氨基酸至约185个氨基酸，约125个氨基酸至约180个氨基酸，约125个氨基酸至约175个氨基酸，约125个氨基酸至约170个氨基酸，约125个氨基酸至约165个氨基酸，约125个氨基酸至约160个氨基酸，约125个氨基酸至约155个氨基酸，约125个氨基酸至约150个氨基酸，约125个氨基酸至约145个氨基酸，约125个氨基酸至约140个氨基酸，约125个氨基酸至约135个氨基酸，约125个氨基酸至约130个氨基酸，约130个氨基酸至约220个氨基酸，约130个氨基酸至约215个氨基酸，约130个氨基酸至约210个氨基酸，约130个氨基酸至约205个氨基酸，约130个氨基酸至约200个氨基酸，约130个氨基酸至约195个氨基酸，约130个氨基酸至约190个氨基酸，约130个氨基酸至约185个氨基酸，约130个氨基酸至约180个氨基酸，约130个氨基酸至约175个氨基酸，约130个氨基酸至约170个氨基酸，约130个氨基酸至约165个氨基酸，约130个氨基酸至约160个氨基酸，约130个氨基酸至约155个氨基酸，约130个氨基酸至约150个氨基酸，约130个氨基酸至约145个氨基酸，约130个氨基酸至约140个氨基酸，约130个氨基酸至约135个氨基酸，约135个氨基酸至约220个氨基酸，约135个氨基酸至约215个氨基酸，约135个氨基酸至约210个氨基酸，约135个氨基酸至约205个氨基酸，约135个氨基酸至约200个氨基酸，约135个氨基酸至约195个氨基酸，约135个氨基酸至约190个氨基酸，约135个氨基酸至约185个氨基酸，约135个氨基酸至约180个氨基酸，约135个氨基酸至约175个氨基酸，约135个氨基酸至约170个氨基酸，约135个氨基酸至约165个氨基酸，约135个氨基酸至约160个氨基酸，约135个氨基酸至约155个氨基酸，约135个氨基酸至约150个氨基酸，约135个氨基酸至约145个氨基酸，约135个氨基酸至约140个氨基酸，约140个氨基酸至约220个氨基酸，约140个氨基酸至约215个氨基酸，约140个氨基酸至约210个氨基酸，约140个氨基酸至约205个氨基酸，约140个氨基酸至约200个氨基酸，约140个氨基酸至约195个氨基酸，约140个氨基酸至约190个氨基酸，约140个氨基酸至约185个氨基酸，约140个氨基酸至约180个氨基酸，约140个氨基酸至约175个氨基酸，约140个氨基酸至约170个氨基酸，约140个氨基酸至约165个氨基酸，约140个氨基酸至约160个氨基酸，约140个氨基酸至约155个氨基酸，约140个氨基酸至约150个氨基酸，约140个氨基酸至约145个氨基酸，约145个氨基酸至约220个氨基酸，约145个氨基酸至约215个氨基酸，约145个氨基酸至约210个氨基酸，约145个氨基酸至约205个氨基酸，约145个氨基酸至约200个氨基酸，约145个氨基酸至约195个氨基酸，约145个氨基酸至约190个氨基酸，约145个氨基酸至约185个氨基酸，约145个氨基酸至约180个氨基酸，约145个氨基酸至约175个氨基酸，约145个氨基酸至约170个氨基酸，约145个氨基酸至约165个氨基酸，约145个氨基酸至约160个氨基酸，约145个氨基酸至约155个氨基酸，约145个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约215个氨基酸，约150个氨基酸至约210个氨基酸，约150个氨基酸至约205个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约150个氨基酸至约195个氨基酸，约150个氨基酸至约190个氨基酸，约150个氨基酸至约185个氨基酸，约150个氨基酸至约180个氨基酸，约150个氨基酸至约175个氨基酸，约150个氨基酸至约170个氨基酸，约150个氨基酸至约165个氨基酸，约150个氨基酸至约160个氨基酸，约150个氨基酸至约155个氨基酸，约155个氨基酸至约220个氨基酸，约155个氨基酸至约215个氨基酸，约155个氨基酸至约210个氨基酸，约155个氨基酸至约205个氨基酸，约155个氨基酸至约200个氨基酸，约155个氨基酸至约195个氨基酸，约155个氨基酸至约190个氨基酸，约155个氨基酸至约185个氨基酸，约155个氨基酸至约180个氨基酸，约155个氨基酸至约175个氨基酸，约155个氨基酸至约170个氨基酸，约155个氨基酸至约165个氨基酸，约155个氨基酸至约160个氨基酸，约160个氨基酸至约220个氨基酸，约160个氨基酸至约215个氨基酸，约160个氨基酸至约210个氨基酸，约160个氨基酸至约205个氨基酸，约160个氨基酸至约200个氨基酸，约160个氨基酸至约195个氨基酸，约160个氨基酸至约190个氨基酸，约160个氨基酸至约185个氨基酸，约160个氨基酸至约180个氨基酸，约160个氨基酸至约175个氨基酸，约160个氨基酸至约170个氨基酸，约160个氨基酸至约165个氨基酸，约165个氨基酸至约220个氨基酸，约165个氨基酸至约215个氨基酸，约165个氨基酸至约210个氨基酸，约165个氨基酸至约205个氨基酸，约165个氨基酸至约200个氨基酸，约165个氨基酸至约195个氨基酸，约165个氨基酸至约190个氨基酸，约165个氨基酸至约185个氨基酸，约165个氨基酸至约180个氨基酸，约165个氨基酸至约175个氨基酸，约165个氨基酸至约170个氨基酸，约170个氨基酸至约220个氨基酸，约170个氨基酸至约215个氨基酸，约170个氨基酸至约210个氨基酸，约170个氨基酸至约205个氨基酸，约170个氨基酸至约200个氨基酸，约170个氨基酸至约195个氨基酸，约170个氨基酸至约190个氨基酸，约170个氨基酸至约185个氨基酸，约170个氨基酸至约180个氨基酸，约170个氨基酸至约175个氨基酸，约175个氨基酸至约220个氨基酸，约175个氨基酸至约215个氨基酸，约175个氨基酸至约210个氨基酸，约175个氨基酸至约205个氨基酸，约175个氨基酸至约200个氨基酸，约175个氨基酸至约195个氨基酸，约175个氨基酸至约190个氨基酸，约175个氨基酸至约185个氨基酸，约175个氨基酸至约180个氨基酸，约180个氨基酸至约220个氨基酸，约180个氨基酸至约215个氨基酸，约180个氨基酸至约210个氨基酸，约180个氨基酸至约205个氨基酸，约180个氨基酸至约200个氨基酸，约180个氨基酸至约195个氨基酸，约180个氨基酸至约190个氨基酸，约180个氨基酸至约185个氨基酸，约185个氨基酸至约220个氨基酸，约185个氨基酸至约215个氨基酸，约185个氨基酸至约210个氨基酸，约185个氨基酸至约205个氨基酸，约185个氨基酸至约200个氨基酸，约185个氨基酸至约195个氨基酸，约185个氨基酸至约190个氨基酸，约190个氨基酸至约220个氨基酸，约190个氨基酸至约215个氨基酸，约190个氨基酸至约210个氨基酸，约190个氨基酸至约205个氨基酸，约190个氨基酸至约200个氨基酸，约190个氨基酸至约195个氨基酸，约195个氨基酸至约220个氨基酸，约195个氨基酸至约215个氨基酸，约195个氨基酸至约210个氨基酸，约195个氨基酸至约205个氨基酸，约195个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约200个氨基酸至约215个氨基酸，约200个氨基酸至约210个氨基酸，约200个氨基酸至约205个氨基酸，约205个氨基酸至约220个氨基酸，约205个氨基酸至约215个氨基酸，约205个氨基酸至约210个氨基酸，约210个氨基酸至约220个氨基酸，约210个氨基酸至约215个氨基酸，或约215个氨基酸至约220个氨基酸。

接头序列

在一些实施例中，接头序列可以是柔性接头序列。可使用的接头序列的非限制性实例描述于Klein等人,《蛋白质工程、设计和选择(Protein Engineering,Design&Selection)》27(10):325-330,2014；Priyanka等人,《蛋白质科学(Protein Sci.)》22(2):153-167,2013中。在一些实例中，接头序列是合成接头序列。

在一些实施例中，本文所述的任一种单链嵌合多肽可以包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如相同或不同的接头序列，例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。在一些实施例中，本文所述的任一种单链嵌合多肽可以包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如相同或不同的接头序列，例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性接头序列)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如相同或不同的接头序列，例如本文所描述或本领域已知的任一种示例性接头序列)。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如相同或不同的接头序列，例如本文所描述或本领域已知的任一种示例性接头序列)。

在一些实施例中，接头序列的总长度可以是1个氨基酸至约100个氨基酸，1个氨基酸至约90个氨基酸，1个氨基酸至约80个氨基酸，1个氨基酸至约70个氨基酸，1个氨基酸至约60个氨基酸，1个氨基酸至约50个氨基酸，1个氨基酸至约45个氨基酸，1个氨基酸至约40个氨基酸，1个氨基酸至约35个氨基酸，1个氨基酸至约30个氨基酸，1个氨基酸至约25个氨基酸，1个氨基酸至约24个氨基酸，1个氨基酸至约22个氨基酸，1个氨基酸至约20个氨基酸，1个氨基酸至约18个氨基酸，1个氨基酸至约16个氨基酸，1个氨基酸至约14个氨基酸，1个氨基酸至约12个氨基酸，1个氨基酸至约10个氨基酸，1个氨基酸至约8个氨基酸，1个氨基酸至约6个氨基酸，1个氨基酸至约4个氨基酸，约2个氨基酸至约100个氨基酸，约2个氨基酸至约90个氨基酸，约2个氨基酸至约80个氨基酸，约2个氨基酸至约70个氨基酸，约2个氨基酸至约60个氨基酸，约2个氨基酸至约50个氨基酸，约2个氨基酸至约45个氨基酸，约2个氨基酸至约40个氨基酸，约2个氨基酸至约35个氨基酸，约2个氨基酸至约30个氨基酸，约2个氨基酸至约25个氨基酸，约2个氨基酸至约24个氨基酸，约2个氨基酸至约22个氨基酸，约2个氨基酸至约20个氨基酸，约2个氨基酸至约18个氨基酸，约2个氨基酸至约16个氨基酸，约2个氨基酸至约14个氨基酸，约2个氨基酸至约12个氨基酸，约2个氨基酸至约10个氨基酸，约2个氨基酸至约8个氨基酸，约2个氨基酸至约6个氨基酸，约2个氨基酸至约4个氨基酸，约4个氨基酸至约100个氨基酸，约4个氨基酸至约90个氨基酸，约4个氨基酸至约80个氨基酸，约4个氨基酸至约70个氨基酸，约4个氨基酸至约60个氨基酸，约4个氨基酸至约50个氨基酸，约4个氨基酸至约45个氨基酸，约4个氨基酸至约40个氨基酸，约4个氨基酸至约35个氨基酸，约4个氨基酸至约30个氨基酸，约4个氨基酸至约25个氨基酸，约4个氨基酸至约24个氨基酸，约4个氨基酸至约22个氨基酸，约4个氨基酸至约20个氨基酸，约4个氨基酸至约18个氨基酸，约4个氨基酸至约16个氨基酸，约4个氨基酸至约14个氨基酸，约4个氨基酸至约12个氨基酸，约4个氨基酸至约10个氨基酸，约4个氨基酸至约8个氨基酸，约4个氨基酸至约6个氨基酸，约6个氨基酸至约100个氨基酸，约6个氨基酸至约90个氨基酸，约6个氨基酸至约80个氨基酸，约6个氨基酸至约70个氨基酸，约6个氨基酸至约60个氨基酸，约6个氨基酸至约50个氨基酸，约6个氨基酸至约45个氨基酸，约6个氨基酸至约40个氨基酸，约6个氨基酸至约35个氨基酸，约6个氨基酸至约30个氨基酸，约6个氨基酸至约25个氨基酸，约6个氨基酸至约24个氨基酸，约6个氨基酸至约22个氨基酸，约6个氨基酸至约20个氨基酸，约6个氨基酸至约18个氨基酸，约6个氨基酸至约16个氨基酸，约6个氨基酸至约14个氨基酸，约6个氨基酸至约12个氨基酸，约6个氨基酸至约10个氨基酸，约6个氨基酸至约8个氨基酸，约8个氨基酸至约100个氨基酸，约8个氨基酸至约90个氨基酸，约8个氨基酸至约80个氨基酸，约8个氨基酸至约70个氨基酸，约8个氨基酸至约60个氨基酸，约8个氨基酸至约50个氨基酸，约8个氨基酸至约45个氨基酸，约8个氨基酸至约40个氨基酸，约8个氨基酸至约35个氨基酸，约8个氨基酸至约30个氨基酸，约8个氨基酸至约25个氨基酸，约8个氨基酸至约24个氨基酸，约8个氨基酸至约22个氨基酸，约8个氨基酸至约20个氨基酸，约8个氨基酸至约18个氨基酸，约8个氨基酸至约16个氨基酸，约8个氨基酸至约14个氨基酸，约8个氨基酸至约12个氨基酸，约8个氨基酸至约10个氨基酸，约10个氨基酸至约100个氨基酸，约10个氨基酸至约90个氨基酸，约10个氨基酸至约80个氨基酸，约10个氨基酸至约70个氨基酸，约10个氨基酸至约60个氨基酸，约10个氨基酸至约50个氨基酸，约10个氨基酸至约45个氨基酸，约10个氨基酸至约40个氨基酸，约10个氨基酸至约35个氨基酸，约10个氨基酸至约30个氨基酸，约10个氨基酸至约25个氨基酸，约10个氨基酸至约24个氨基酸，约10个氨基酸至约22个氨基酸，约10个氨基酸至约20个氨基酸，约10个氨基酸至约18个氨基酸，约10个氨基酸至约16个氨基酸，约10个氨基酸至约14个氨基酸，约10个氨基酸至约12个氨基酸，约12个氨基酸至约100个氨基酸，约12个氨基酸至约90个氨基酸，约12个氨基酸至约80个氨基酸，约12个氨基酸至约70个氨基酸，约12个氨基酸至约60个氨基酸，约12个氨基酸至约50个氨基酸，约12个氨基酸至约45个氨基酸，约12个氨基酸至约40个氨基酸，约12个氨基酸至约35个氨基酸，约12个氨基酸至约30个氨基酸，约12个氨基酸至约25个氨基酸，约12个氨基酸至约24个氨基酸，约12个氨基酸至约22个氨基酸，约12个氨基酸至约20个氨基酸，约12个氨基酸至约18个氨基酸，约12个氨基酸至约16个氨基酸，约12个氨基酸至约14个氨基酸，约14个氨基酸至约100个氨基酸，约14个氨基酸至约90个氨基酸，约14个氨基酸至约80个氨基酸，约14个氨基酸至约70个氨基酸，约14个氨基酸至约60个氨基酸，约14个氨基酸至约50个氨基酸，约14个氨基酸至约45个氨基酸，约14个氨基酸至约40个氨基酸，约14个氨基酸至约35个氨基酸，约14个氨基酸至约30个氨基酸，约14个氨基酸至约25个氨基酸，约14个氨基酸至约24个氨基酸，约14个氨基酸至约22个氨基酸，约14个氨基酸至约20个氨基酸，约14个氨基酸至约18个氨基酸，约14个氨基酸至约16个氨基酸，约16个氨基酸至约100个氨基酸，约16个氨基酸至约90个氨基酸，约16个氨基酸至约80个氨基酸，约16个氨基酸至约70个氨基酸，约16个氨基酸至约60个氨基酸，约16个氨基酸至约50个氨基酸，约16个氨基酸至约45个氨基酸，约16个氨基酸至约40个氨基酸，约16个氨基酸至约35个氨基酸，约16个氨基酸至约30个氨基酸，约16个氨基酸至约25个氨基酸，约16个氨基酸至约24个氨基酸，约16个氨基酸至约22个氨基酸，约16个氨基酸至约20个氨基酸，约16个氨基酸至约18个氨基酸，约18个氨基酸至约100个氨基酸，约18个氨基酸至约90个氨基酸，约18个氨基酸至约80个氨基酸，约18个氨基酸至约70个氨基酸，约18个氨基酸至约60个氨基酸，约18个氨基酸至约50个氨基酸，约18个氨基酸至约45个氨基酸，约18个氨基酸至约40个氨基酸，约18个氨基酸至约35个氨基酸，约18个氨基酸至约30个氨基酸，约18个氨基酸至约25个氨基酸，约18个氨基酸至约24个氨基酸，约18个氨基酸至约22个氨基酸，约18个氨基酸至约20个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约45个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约35个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约20个氨基酸至约25个氨基酸，约20个氨基酸至约24个氨基酸，约20个氨基酸至约22个氨基酸，约22个氨基酸至约100个氨基酸，约22个氨基酸至约90个氨基酸，约22个氨基酸至约80个氨基酸，约22个氨基酸至约70个氨基酸，约22个氨基酸至约60个氨基酸，约22个氨基酸至约50个氨基酸，约22个氨基酸至约45个氨基酸，约22个氨基酸至约40个氨基酸，约22个氨基酸至约35个氨基酸，约22个氨基酸至约30个氨基酸，约22个氨基酸至约25个氨基酸，约22个氨基酸至约24个氨基酸，约25个氨基酸至约100个氨基酸，约25个氨基酸至约90个氨基酸，约25个氨基酸至约80个氨基酸，约25个氨基酸至约70个氨基酸，约25个氨基酸至约60个氨基酸，约25个氨基酸至约50个氨基酸，约25个氨基酸至约45个氨基酸，约25个氨基酸至约40个氨基酸，约25个氨基酸至约35个氨基酸，约25个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约100个氨基酸，约30个氨基酸至约90个氨基酸，约30个氨基酸至约80个氨基酸，约30个氨基酸至约70个氨基酸，约30个氨基酸至约60个氨基酸，约30个氨基酸至约50个氨基酸，约30个氨基酸至约45个氨基酸，约30个氨基酸至约40个氨基酸，约30个氨基酸至约35个氨基酸，约35个氨基酸至约100个氨基酸，约35个氨基酸至约90个氨基酸，约35个氨基酸至约80个氨基酸，约35个氨基酸至约70个氨基酸，约35个氨基酸至约60个氨基酸，约35个氨基酸至约50个氨基酸，约35个氨基酸至约45个氨基酸，约35个氨基酸至约40个氨基酸，约40个氨基酸至约100个氨基酸，约40个氨基酸至约90个氨基酸，约40个氨基酸至约80个氨基酸，约40个氨基酸至约70个氨基酸，约40个氨基酸至约60个氨基酸，约40个氨基酸至约50个氨基酸，约40个氨基酸至约45个氨基酸，约45个氨基酸至约100个氨基酸，约45个氨基酸至约90个氨基酸，约45个氨基酸至约80个氨基酸，约45个氨基酸至约70个氨基酸，约45个氨基酸至约60个氨基酸，约45个氨基酸至约50个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约50个氨基酸至约90个氨基酸，约50个氨基酸至约80个氨基酸，约50个氨基酸至约70个氨基酸，约50个氨基酸至约60个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，或约90个氨基酸至约100个氨基酸。

在一些实施例中，接头富含甘氨酸(Gly或G)残基。在一些实施例中，接头富含丝氨酸(Ser或S)残基。在一些实施例中，接头富含甘氨酸和丝氨酸残基。在一些实施例中，接头具有一个或多个甘氨酸-丝氨酸残基对(GS)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GS对。在一些实施例中，接头具有一个或多个Gly-Gly-Gly-Ser(GGGS)(SEQ ID NO:99)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGGS(SEQ ID NO:99)序列。在一些实施例中，接头具有一个或多个Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(GGGGS)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGGGS(SEQ ID NO:100)序列。在一些实施例中，接头具有一个或多个Gly-Gly-Ser-Gly(GGSG)(SEQ ID NO:101)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGSG(SEQ ID NO:101)序列。

在一些实施例中，接头序列可包含以下或由以下组成：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ IDNO:102)。在一些实施例中，接头序列可由包含以下或由以下组成的核酸编码：GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，接头序列可包含以下或由以下组成：GGGSGGGS(SEQ ID NO:104)，

靶标结合域

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和/或一个或多个其它靶标结合域可以是抗原结合域(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性抗原结合域)、可溶性白介素或细胞因子蛋白(例如本文所述的任一种示例性可溶性白介素蛋白或可溶性细胞因子蛋白)，以及可溶性白介素或细胞因子受体(例如本文所述的任一种示例性可溶性白介素受体或可溶性细胞因子受体)。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和/或一个或多个其它靶标结合域的氨基酸总数可各自独立地是约5个氨基酸至约1000个氨基酸，约5个氨基酸至约950个氨基酸，约5个氨基酸至约900个氨基酸，约5个氨基酸至约850个氨基酸，约5个氨基酸至约800个氨基酸，约5个氨基酸至约750个氨基酸，约5个氨基酸至约700个氨基酸，约5个氨基酸至约650个氨基酸，约5个氨基酸至约600个氨基酸，约5个氨基酸至约550个氨基酸，约5个氨基酸至约500个氨基酸，约5个氨基酸至约450个氨基酸，约5个氨基酸至约400个氨基酸，约5个氨基酸至约350个氨基酸，约5个氨基酸至约300个氨基酸，约5个氨基酸至约280个氨基酸，约5个氨基酸至约260个氨基酸，约5个氨基酸至约240个氨基酸，约5个氨基酸至约220个氨基酸，约5个氨基酸至约200个氨基酸，约5个氨基酸至约195个氨基酸，约5个氨基酸至约190个氨基酸，约5个氨基酸至约185个氨基酸，约5个氨基酸至约180个氨基酸，约5个氨基酸至约175个氨基酸，约5个氨基酸至约170个氨基酸，约5个氨基酸至约165个氨基酸，约5个氨基酸至约160个氨基酸，约5个氨基酸至约155个氨基酸，约5个氨基酸至约150个氨基酸，约5个氨基酸至约145个氨基酸，约5个氨基酸至约140个氨基酸，约5个氨基酸至约135个氨基酸，约5个氨基酸至约130个氨基酸，约5个氨基酸至约125个氨基酸，约5个氨基酸至约120个氨基酸，约5个氨基酸至约115个氨基酸，约5个氨基酸至约110个氨基酸，约5个氨基酸至约105个氨基酸，约5个氨基酸至约100个氨基酸，约5个氨基酸至约95个氨基酸，约5个氨基酸至约90个氨基酸，约5个氨基酸至约85个氨基酸，约5个氨基酸至约80个氨基酸，约5个氨基酸至约75个氨基酸，约5个氨基酸至约70个氨基酸，约5个氨基酸至约65个氨基酸，约5个氨基酸至约60个氨基酸，约5个氨基酸至约55个氨基酸，约5个氨基酸至约50个氨基酸，约5个氨基酸至约45个氨基酸，约5个氨基酸至约40个氨基酸，约5个氨基酸至约35个氨基酸，约5个氨基酸至约30个氨基酸，约5个氨基酸至约25个氨基酸，约5个氨基酸至约20个氨基酸，约5个氨基酸至约15个氨基酸，约5个氨基酸至约10个氨基酸，约10个氨基酸至约1000个氨基酸，约10个氨基酸至约950个氨基酸，约10个氨基酸至约900个氨基酸，约10个氨基酸至约850个氨基酸，约10个氨基酸至约800个氨基酸，约10个氨基酸至约750个氨基酸，约10个氨基酸至约700个氨基酸，约10个氨基酸至约650个氨基酸，约10个氨基酸至约600个氨基酸，约10个氨基酸至约550个氨基酸，约10个氨基酸至约500个氨基酸，约10个氨基酸至约450个氨基酸，约10个氨基酸至约400个氨基酸，约10个氨基酸至约350个氨基酸，约10个氨基酸至约300个氨基酸，约10个氨基酸至约280个氨基酸，约10个氨基酸至约260个氨基酸，约10个氨基酸至约240个氨基酸，约10个氨基酸至约220个氨基酸，约10个氨基酸至约200个氨基酸，约10个氨基酸至约195个氨基酸，约10个氨基酸至约190个氨基酸，约10个氨基酸至约185个氨基酸，约10个氨基酸至约180个氨基酸，约10个氨基酸至约175个氨基酸，约10个氨基酸至约170个氨基酸，约10个氨基酸至约165个氨基酸，约10个氨基酸至约160个氨基酸，约10个氨基酸至约155个氨基酸，约10个氨基酸至约150个氨基酸，约10个氨基酸至约145个氨基酸，约10个氨基酸至约140个氨基酸，约10个氨基酸至约135个氨基酸，约10个氨基酸至约130个氨基酸，约10个氨基酸至约125个氨基酸，约10个氨基酸至约120个氨基酸，约10个氨基酸至约115个氨基酸，约10个氨基酸至约110个氨基酸，约10个氨基酸至约105个氨基酸，约10个氨基酸至约100个氨基酸，约10个氨基酸至约95个氨基酸，约10个氨基酸至约90个氨基酸，约10个氨基酸至约85个氨基酸，约10个氨基酸至约80个氨基酸，约10个氨基酸至约75个氨基酸，约10个氨基酸至约70个氨基酸，约10个氨基酸至约65个氨基酸，约10个氨基酸至约60个氨基酸，约10个氨基酸至约55个氨基酸，约10个氨基酸至约50个氨基酸，约10个氨基酸至约45个氨基酸，约10个氨基酸至约40个氨基酸，约10个氨基酸至约35个氨基酸，约10个氨基酸至约30个氨基酸，约10个氨基酸至约25个氨基酸，约10个氨基酸至约20个氨基酸，约10个氨基酸至约15个氨基酸，约15个氨基酸至约1000个氨基酸，约15个氨基酸至约950个氨基酸，约15个氨基酸至约900个氨基酸，约15个氨基酸至约850个氨基酸，约15个氨基酸至约800个氨基酸，约15个氨基酸至约750个氨基酸，约15个氨基酸至约700个氨基酸，约15个氨基酸至约650个氨基酸，约15个氨基酸至约600个氨基酸，约15个氨基酸至约550个氨基酸，约15个氨基酸至约500个氨基酸，约15个氨基酸至约450个氨基酸，约15个氨基酸至约400个氨基酸，约15个氨基酸至约350个氨基酸，约15个氨基酸至约300个氨基酸，约15个氨基酸至约280个氨基酸，约15个氨基酸至约260个氨基酸，约15个氨基酸至约240个氨基酸，约15个氨基酸至约220个氨基酸，约15个氨基酸至约200个氨基酸，约15个氨基酸至约195个氨基酸，约15个氨基酸至约190个氨基酸，约15个氨基酸至约185个氨基酸，约15个氨基酸至约180个氨基酸，约15个氨基酸至约175个氨基酸，约15个氨基酸至约170个氨基酸，约15个氨基酸至约165个氨基酸，约15个氨基酸至约160个氨基酸，约15个氨基酸至约155个氨基酸，约15个氨基酸至约150个氨基酸，约15个氨基酸至约145个氨基酸，约15个氨基酸至约140个氨基酸，约15个氨基酸至约135个氨基酸，约15个氨基酸至约130个氨基酸，约15个氨基酸至约125个氨基酸，约15个氨基酸至约120个氨基酸，约15个氨基酸至约115个氨基酸，约15个氨基酸至约110个氨基酸，约15个氨基酸至约105个氨基酸，约15个氨基酸至约100个氨基酸，约15个氨基酸至约95个氨基酸，约15个氨基酸至约90个氨基酸，约15个氨基酸至约85个氨基酸，约15个氨基酸至约80个氨基酸，约15个氨基酸至约75个氨基酸，约15个氨基酸至约70个氨基酸，约15个氨基酸至约65个氨基酸，约15个氨基酸至约60个氨基酸，约15个氨基酸至约55个氨基酸，约15个氨基酸至约50个氨基酸，约15个氨基酸至约45个氨基酸，约15个氨基酸至约40个氨基酸，约15个氨基酸至约35个氨基酸，约15个氨基酸至约30个氨基酸，约15个氨基酸至约25个氨基酸，约15个氨基酸至约20个氨基酸，约20个氨基酸至约1000个氨基酸，约20个氨基酸至约950个氨基酸，约20个氨基酸至约900个氨基酸，约20个氨基酸至约850个氨基酸，约20个氨基酸至约800个氨基酸，约20个氨基酸至约750个氨基酸，约20个氨基酸至约700个氨基酸，约20个氨基酸至约650个氨基酸，约20个氨基酸至约600个氨基酸，约20个氨基酸至约550个氨基酸，约20个氨基酸至约500个氨基酸，约20个氨基酸至约450个氨基酸，约20个氨基酸至约400个氨基酸，约20个氨基酸至约350个氨基酸，约20个氨基酸至约300个氨基酸，约20个氨基酸至约280个氨基酸，约20个氨基酸至约260个氨基酸，约20个氨基酸至约240个氨基酸，约20个氨基酸至约220个氨基酸，约20个氨基酸至约200个氨基酸，约20个氨基酸至约195个氨基酸，约20个氨基酸至约190个氨基酸，约20个氨基酸至约185个氨基酸，约20个氨基酸至约180个氨基酸，约20个氨基酸至约175个氨基酸，约20个氨基酸至约170个氨基酸，约20个氨基酸至约165个氨基酸，约20个氨基酸至约160个氨基酸，约20个氨基酸至约155个氨基酸，约20个氨基酸至约150个氨基酸，约20个氨基酸至约145个氨基酸，约20个氨基酸至约140个氨基酸，约20个氨基酸至约135个氨基酸，约20个氨基酸至约130个氨基酸，约20个氨基酸至约125个氨基酸，约20个氨基酸至约120个氨基酸，约20个氨基酸至约115个氨基酸，约20个氨基酸至约110个氨基酸，约20个氨基酸至约105个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约95个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约85个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约75个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约65个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约55个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约45个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约35个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约20个氨基酸至约25个氨基酸，约25个氨基酸至约1000个氨基酸，约25个氨基酸至约950个氨基酸，约25个氨基酸至约900个氨基酸，约25个氨基酸至约850个氨基酸，约25个氨基酸至约800个氨基酸，约25个氨基酸至约750个氨基酸，约25个氨基酸至约700个氨基酸，约25个氨基酸至约650个氨基酸，约25个氨基酸至约600个氨基酸，约25个氨基酸至约550个氨基酸，约25个氨基酸至约500个氨基酸，约25个氨基酸至约450个氨基酸，约25个氨基酸至约400个氨基酸，约25个氨基酸至约350个氨基酸，约25个氨基酸至约300个氨基酸，约25个氨基酸至约280个氨基酸，约25个氨基酸至约260个氨基酸，约25个氨基酸至约240个氨基酸，约25个氨基酸至约220个氨基酸，约25个氨基酸至约200个氨基酸，约25个氨基酸至约195个氨基酸，约25个氨基酸至约190个氨基酸，约25个氨基酸至约185个氨基酸，约25个氨基酸至约180个氨基酸，约25个氨基酸至约175个氨基酸，约25个氨基酸至约170个氨基酸，约25个氨基酸至约165个氨基酸，约25个氨基酸至约160个氨基酸，约25个氨基酸至约155个氨基酸，约25个氨基酸至约150个氨基酸，约25个氨基酸至约145个氨基酸，约25个氨基酸至约140个氨基酸，约25个氨基酸至约135个氨基酸，约25个氨基酸至约130个氨基酸，约25个氨基酸至约125个氨基酸，约25个氨基酸至约120个氨基酸，约25个氨基酸至约115个氨基酸，约25个氨基酸至约110个氨基酸，约25个氨基酸至约105个氨基酸，约25个氨基酸至约100个氨基酸，约25个氨基酸至约95个氨基酸，约25个氨基酸至约90个氨基酸，约25个氨基酸至约85个氨基酸，约25个氨基酸至约80个氨基酸，约25个氨基酸至约75个氨基酸，约25个氨基酸至约70个氨基酸，约25个氨基酸至约65个氨基酸，约25个氨基酸至约60个氨基酸，约25个氨基酸至约55个氨基酸，约25个氨基酸至约50个氨基酸，约25个氨基酸至约45个氨基酸，约25个氨基酸至约40个氨基酸，约25个氨基酸至约35个氨基酸，约25个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约1000个氨基酸，约30个氨基酸至约950个氨基酸，约30个氨基酸至约900个氨基酸，约30个氨基酸至约850个氨基酸，约30个氨基酸至约800个氨基酸，约30个氨基酸至约750个氨基酸，约30个氨基酸至约700个氨基酸，约30个氨基酸至约650个氨基酸，约30个氨基酸至约600个氨基酸，约30个氨基酸至约550个氨基酸，约30个氨基酸至约500个氨基酸，约30个氨基酸至约450个氨基酸，约30个氨基酸至约400个氨基酸，约30个氨基酸至约350个氨基酸，约30个氨基酸至约300个氨基酸，约30个氨基酸至约280个氨基酸，约30个氨基酸至约260个氨基酸，约30个氨基酸至约240个氨基酸，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0个氨基酸，约180个氨基酸至约350个氨基酸，约180个氨基酸至约300个氨基酸，约180个氨基酸至约280个氨基酸，约180个氨基酸至约260个氨基酸，约180个氨基酸至约240个氨基酸，约180个氨基酸至约220个氨基酸，约180个氨基酸至约200个氨基酸，约180个氨基酸至约195个氨基酸，约180个氨基酸至约190个氨基酸，约180个氨基酸至约185个氨基酸，约185个氨基酸至约1000个氨基酸，约185个氨基酸至约950个氨基酸，约185个氨基酸至约900个氨基酸，约185个氨基酸至约850个氨基酸，约185个氨基酸至约800个氨基酸，约185个氨基酸至约750个氨基酸，约185个氨基酸至约700个氨基酸，约185个氨基酸至约650个氨基酸，约185个氨基酸至约600个氨基酸，约185个氨基酸至约550个氨基酸，约185个氨基酸至约500个氨基酸，约185个氨基酸至约450个氨基酸，约185个氨基酸至约400个氨基酸，约185个氨基酸至约350个氨基酸，约185个氨基酸至约300个氨基酸，约185个氨基酸至约280个氨基酸，约185个氨基酸至约260个氨基酸，约185个氨基酸至约240个氨基酸，约185个氨基酸至约220个氨基酸，约185个氨基酸至约200个氨基酸，约185个氨基酸至约195个氨基酸，约185个氨基酸至约190个氨基酸，约190个氨基酸至约1000个氨基酸，约190个氨基酸至约950个氨基酸，约190个氨基酸至约900个氨基酸，约190个氨基酸至约850个氨基酸，约190个氨基酸至约800个氨基酸，约190个氨基酸至约750个氨基酸，约190个氨基酸至约700个氨基酸，约190个氨基酸至约650个氨基酸，约190个氨基酸至约600个氨基酸，约190个氨基酸至约550个氨基酸，约190个氨基酸至约500个氨基酸，约190个氨基酸至约450个氨基酸，约190个氨基酸至约400个氨基酸，约190个氨基酸至约350个氨基酸，约190个氨基酸至约300个氨基酸，约190个氨基酸至约280个氨基酸，约190个氨基酸至约260个氨基酸，约190个氨基酸至约240个氨基酸，约190个氨基酸至约220个氨基酸，约190个氨基酸至约200个氨基酸，约190个氨基酸至约195个氨基酸，约195个氨基酸至约1000个氨基酸，约195个氨基酸至约950个氨基酸，约195个氨基酸至约900个氨基酸，约195个氨基酸至约850个氨基酸，约195个氨基酸至约800个氨基酸，约195个氨基酸至约750个氨基酸，约195个氨基酸至约700个氨基酸，约195个氨基酸至约650个氨基酸，约195个氨基酸至约600个氨基酸，约195个氨基酸至约550个氨基酸，约195个氨基酸至约500个氨基酸，约195个氨基酸至约450个氨基酸，约195个氨基酸至约400个氨基酸，约195个氨基酸至约350个氨基酸，约195个氨基酸至约300个氨基酸，约195个氨基酸至约280个氨基酸，约195个氨基酸至约260个氨基酸，约195个氨基酸至约240个氨基酸，约195个氨基酸至约220个氨基酸，约195个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约450个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约350个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约450个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约350个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约450个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约350个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约450个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约350个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约450个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约350个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约450个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约350个氨基酸，约350个氨基酸至约1000个氨基酸，约350个氨基酸至约950个氨基酸，约350个氨基酸至约900个氨基酸，约350个氨基酸至约850个氨基酸，约350个氨基酸至约800个氨基酸，约350个氨基酸至约750个氨基酸，约350个氨基酸至约700个氨基酸，约350个氨基酸至约650个氨基酸，约350个氨基酸至约600个氨基酸，约350个氨基酸至约550个氨基酸，约350个氨基酸至约500个氨基酸，约350个氨基酸至约450个氨基酸，约350个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约450个氨基酸，约450个氨基酸至约1000个氨基酸，约450个氨基酸至约950个氨基酸，约450个氨基酸至约900个氨基酸，约450个氨基酸至约850个氨基酸，约450个氨基酸至约800个氨基酸，约450个氨基酸至约750个氨基酸，约450个氨基酸至约700个氨基酸，约450个氨基酸至约650个氨基酸，约450个氨基酸至约600个氨基酸，约450个氨基酸至约550个氨基酸，约450个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，或约950个氨基酸至约1000个氨基酸。

本文所述的任一种靶标结合域可以小于1×10^-7M、小于1×10^-8M、小于1×10^-9M、小于1×10^-10M、小于1×10^-11M、小于1×10^-12M或小于1×10^-13M的解离平衡常数(K_D)结合到其靶标。在一些实施例中，本文提供的抗原结合蛋白构建体可以约1×10^-3M至约1×10^-5M、约1×10^-4M至约1×10^-6M、约1×10^-5M至约1×10^-7M、约1×10^-6M至约1×10^-8M、约1×10^-7M至约1×10^-9M、约1×10^-8M至约1×10^-10M、or约1×10^-9M至约1×10^-11M(包括端点)的K_D结合到识别抗原。

本文所述的任一种靶标结合域可结合到其靶标，其K_D在约1pM至约30nM之间(例如，约1pM至约25nM，约1pM至约20nM，约1pM至约15nM，约1pM至约10nM，约1pM至约5nM，约1pM至约2nM，约1pM至约1nM，约1pM至约950pM，约1pM至约900pM，约1pM至约850pM，约1pM至约800pM，约1pM至约750pM，约1pM至约700pM，约1pM至约650pM，约1pM至约600pM，约1pM至约550pM，约1pM至约500pM，约1pM至约450pM，约1pM至约400pM，约1pM至约350pM，约1pM至约300pM，约1pM至约250pM，约1pM至约200pM，约1pM至约150pM，约1pM至约100pM，约1pM至约90pM，约1pM至约80pM，约1pM至约70pM，约1pM至约60pM，约1pM至约50pM，约1pM至约40pM，约1pM至约30pM，约1pM至约20pM，约1pM至约10pM，约1pM至约5pM，约1pM至约4pM，约1pM至约3pM，约1pM至约2pM，约2pM至约30nM，约2pM至约25nM，约2pM至约20nM，约2pM至约15nM，约2pM至约10nM，约2pM至约5nM，约2pM至约2nM，约2pM至约1nM，约2pM至约950pM，约2pM至约900pM，约2pM至约850pM，约2pM至约800pM，约2pM至约750pM，约2pM至约700pM，约2pM至约650pM，约2pM至约600pM，约2pM至约550pM，约2pM至约500pM，约2pM至约450pM，约2pM至约400pM，约2pM至约350pM，约2pM至约300pM，约2pM至约250pM，约2pM至约200pM，约2pM至约150pM，约2pM至约100pM，约2pM至约90pM，约2pM至约80pM，约2pM至约70pM，约2pM至约60pM，约2pM至约50pM，约2pM至约40pM，约2pM至约30pM，约2pM至约20pM，约2pM至约10pM，约2pM至约5pM，约2pM至约4pM，约2pM至约3pM，约5pM至约30nM，约5pM至约25nM，约5pM至约20nM，约5pM至约15nM，约5pM至约10nM，约5pM至约5nM，约5pM至约2nM，约5pM至约1nM，约5pM至约950pM，约5pM至约900pM，约5pM至约850pM，约5pM至约800pM，约5pM至约750pM，约5pM至约700pM，约5pM至约650pM，约5pM至约600pM，约5pM至约550pM，约5pM至约500pM，约5pM至约450pM，约5pM至约400pM，约5pM至约350pM，约5pM至约300pM，约5pM至约250pM，约5pM至约200pM，约5pM至约150pM，约5pM至约100pM，约5pM至约90pM，约5pM至约80pM，约5pM至约70pM，约5pM至约60pM，约5pM至约50pM，约5pM至约40pM，约5pM至约30pM，约5pM至约20pM，约5pM至约10pM，约10pM至约30nM，约10pM至约25nM，约10pM至约20nM，约10pM至约15nM，约10pM至约10nM，约10pM至约5nM，约10pM至约2nM，约10pM至约1nM，约10pM至约950pM，约10pM至约900pM，约10pM至约850pM，约10pM至约800pM，约10pM至约750pM，约10pM至约700pM，约10pM至约650pM，约10pM至约600pM，约10pM至约550pM，约10pM至约500pM，约10pM至约450pM，约10pM至约400pM，约10pM至约350pM，约10pM至约300pM，约10pM至约250pM，约10pM至约200pM，约10pM至约150pM，约10pM至约100pM，约10pM至约90pM，约10pM至约80pM，约10pM至约70pM，约10pM至约60pM，约10pM至约50pM，约10pM至约40pM，约10pM至约30pM，约10pM至约20pM，约15pM至约30nM，约15pM至约25nM，约15pM至约20nM，约15pM至约15nM，约15pM至约10nM，约15pM至约5nM，约15pM至约2nM，约15pM至约1nM，约15pM至约950pM，约15pM至约900pM，约15pM至约850pM，约15pM至约800pM，约15pM至约750pM，约15pM至约700pM，约15pM至约650pM，约15pM至约600pM，约15pM至约550pM，约15pM至约500pM，约15pM至约450pM，约15pM至约400pM，约15pM至约350pM，约15pM至约300pM，约15pM至约250pM，约15pM至约200pM，约15pM至约150pM，约15pM至约100pM，约15pM至约90pM，约15pM至约80pM，约15pM至约70pM，约15pM至约60pM，约15pM至约50pM，约15pM至约40pM，约15pM至约30pM，约15pM至约20pM，约20pM至约30nM，约20pM至约25nM，约20pM至约20nM，约20pM至约15nM，约20pM至约10nM，约20pM至约5nM，约20pM至约2nM，约20pM至约1nM，约20pM至约950pM，约20pM至约900pM，约20pM至约850pM，约20pM至约800pM，约20pM至约750pM，约20pM至约700pM，约20pM至约650pM，约20pM至约600pM，约20pM至约550pM，约20pM至约500pM，约20pM至约450pM，约20pM至约400pM，约20pM至约350pM，约20pM至约300pM，约20pM至约250pM，约20pM至约20pM，约200pM至约150pM，约20pM至约100pM，约20pM至约90pM，约20pM至约80pM，约20pM至约70pM，约20pM至约60pM，约20pM至约50pM，约20pM至约40pM，约20pM至约30pM，约30pM至约30nM，约30pM至约25nM，约30pM至约30nM，约30pM至约15nM，约30pM至约10nM，约30pM至约5nM，约30pM至约2nM，约30pM至约1nM，约30pM至约950pM，约30pM至约900pM，约30pM至约850pM，约30pM至约800pM，约30pM至约750pM，约30pM至约700pM，约30pM至约650pM，约30pM至约600pM，约30pM至约550pM，约30pM至约500pM，约30pM至约450pM，约30pM至约400pM，约30pM至约350pM，约30pM至约300pM，约30pM至约250pM，约30pM至约200pM，约30pM至约150pM，约30pM至约100pM，约30pM至约90pM，约30pM至约80pM，约30pM至约70pM，约30pM至约60pM，约30pM至约50pM，约30pM至约40pM，约40pM至约30nM，约40pM至约25nM，约40pM至约30nM，约40pM至约15nM，约40pM至约10nM，约40pM至约5nM，约40pM至约2nM，约40pM至约1nM，约40pM至约950pM，约40pM至约900pM，约40pM至约850pM，约40pM至约800pM，约40pM至约750pM，约40pM至约700pM，约40pM至约650pM，约40pM至约600pM，约40pM至约550pM，约40pM至约500pM，约40pM至约450pM，约40pM至约400pM，约40pM至约350pM，约40pM至约300pM，约40pM至约250pM，约40pM至约200pM，约40pM至约150pM，约40pM至约100pM，约40pM至约90pM，约40pM至约80pM，约40pM至约70pM，约40pM至约60pM，约40pM至约50pM，约50pM至约30nM，约50pM至约25nM，约50pM至约30nM，约50pM至约15nM，约50pM至约10nM，约50pM至约5nM，约50pM至约2nM，约50pM至约1nM，约50pM至约950pM，约50pM至约900pM，约50pM至约850pM，约50pM至约800pM，约50pM至约750pM，约50pM至约700pM，约50pM至约650pM，约50pM至约600pM，约50pM至约550pM，约50pM至约500pM，约50pM至约450pM，约50pM至约400pM，约50pM至约350pM，约50pM至约300pM，约50pM至约250pM，约50pM至约200pM，约50pM至约150pM，约50pM至约100pM，约50pM至约90pM，约50pM至约80pM，约50pM至约70pM，约50pM至约60pM，约60pM至约30nM，约60pM至约25nM，约60pM至约30nM，约60pM至约15nM，约60pM至约10nM，约60pM至约5nM，约60pM至约2nM，约60pM至约1nM，约60pM至约950pM，约60pM至约900pM，约60pM至约850pM，约60pM至约800pM，约60pM至约750pM，约60pM至约700pM，约60pM至约650pM，约60pM至约600pM，约60pM至约550pM，约60pM至约500pM，约60pM至约450pM，约60pM至约400pM，约60pM至约350pM，约60pM至约300pM，约60pM至约250pM，约60pM至约200pM，约60pM至约150pM，约60pM至约100pM，约60pM至约90pM，约60pM至约80pM，约60pM至约70pM，约70pM至约30nM，约70pM至约25nM，约70pM至约30nM，约70pM至约15nM，约70pM至约10nM，约70pM至约5nM，约70pM至约2nM，约70pM至约1nM，约70pM至约950pM，约70pM至约900pM，约70pM至约850pM，约70pM至约800pM，约70pM至约750pM，约70pM至约700pM，约70pM至约650pM，约70pM至约600pM，约70pM至约550pM，约70pM至约500pM，约70pM至约450pM，约70pM至约400pM，约70pM至约350pM，约70pM至约300pM，约70pM至约250pM，约70pM至约200pM，约70pM至约150pM，约70pM至约100pM，约70pM至约90pM，约70pM至约80pM，约80pM至约30nM，约80pM至约25nM，约80pM至约30nM，约80pM至约15nM，约80pM至约10nM，约80pM至约5nM，约80pM至约2nM，约80pM至约1nM，约80pM至约950pM，约80pM至约900pM，约80pM至约850pM，约80pM至约800pM，约80pM至约750pM，约80pM至约700pM，约80pM至约650pM，约80pM至约600pM，约80pM至约550pM，约80pM至约500pM，约80pM至约450pM，约80pM至约400pM，约80pM至约350pM，约80pM至约300pM，约80pM至约250pM，约80pM至约200pM，约80pM至约150pM，约80pM至约100pM，约80pM至约90pM，约90pM至约30nM，约90pM至约25nM，约90pM至约30nM，约90pM至约15nM，约90pM至约10nM，约90pM至约5nM，约90pM至约2nM，约90pM至约1nM，约90pM至约950pM，约90pM至约900pM，约90pM至约850pM，约90pM至约800pM，约90pM至约750pM，约90pM至约700pM，约90pM至约650pM，约90pM至约600pM，约90pM至约550pM，约90pM至约500pM，约90pM至约450pM，约90pM至约400pM，约90pM至约350pM，约90pM至约300pM，约90pM至约250pM，约90pM至约200pM，约90pM至约150pM，约90pM至约100pM，约100pM至约30nM，约100pM至约25nM，约100pM至约30nM，约100pM至约15nM，约100pM至约10nM，约100pM至约5nM，约100pM至约2nM，约100pM至约1nM，约100pM至约950pM，约100pM至约900pM，约100pM至约850pM，约100pM至约800pM，约100pM至约750pM，约100pM至约700pM，约100pM至约650pM，约100pM至约600pM，约100pM至约550pM，约100pM至约500pM，约100pM至约450pM，约100pM至约400pM，约100pM至约350pM，约100pM至约300pM，约100pM至约250pM，约100pM至约200pM，约100pM至约150pM，约150pM至约30nM，约150pM至约25nM，约150pM至约30nM，约150pM至约15nM，约150pM至约10nM，约150pM至约5nM，约150pM至约2nM，约150pM至约1nM，约150pM至约950pM，约150pM至约900pM，约150pM至约850pM，约150pM至约800pM，约150pM至约750pM，约150pM至约700pM，约150pM至约650pM，约150pM至约600pM，约150pM至约550pM，约150pM至约500pM，约150pM至约450pM，约150pM至约400pM，约150pM至约350pM，约150pM至约300pM，约150pM至约250pM，约150pM至约200pM，约200pM至约30nM，约200pM至约25nM，约200pM至约30nM，约200pM至约15nM，约200pM至约10nM，约200pM至约5nM，约200pM至约2nM，约200pM至约1nM，约200pM至约950pM，约200pM至约900pM，约200pM至约850pM，约200pM至约800pM，约200pM至约750pM，约200pM至约700pM，约200pM至约650pM，约200pM至约600pM，约200pM至约550pM，约200pM至约500pM，约200pM至约450pM，约200pM至约400pM，约200pM至约350pM，约200pM至约300pM，约200pM至约250pM，约300pM至约30nM，约300pM至约25nM，约300pM至约30nM，约300pM至约15nM，约300pM至约10nM，约300pM至约5nM，约300pM至约2nM，约300pM至约1nM，约300pM至约950pM，约300pM至约900pM，约300pM至约850pM，约300pM至约800pM，约300pM至约750pM，约300pM至约700pM，约300pM至约650pM，约300pM至约600pM，约300pM至约550pM，约300pM至约500pM，约300pM至约450pM，约300pM至约400pM，约300pM至约350pM，约400pM至约30nM，约400pM至约25nM，约400pM至约30nM，约400pM至约15nM，约400pM至约10nM，约400pM至约5nM，约400pM至约2nM，约400pM至约1nM，约400pM至约950pM，约400pM至约900pM，约400pM至约850pM，约400pM至约800pM，约400pM至约750pM，约400pM至约700pM，约400pM至约650pM，约400pM至约600pM，约400pM至约550pM，约400pM至约500pM，约500pM至约30nM，约500pM至约25nM，约500pM至约30nM，约500pM至约15nM，约500pM至约10nM，约500pM至约5nM，约500pM至约2nM，约500pM至约1nM，约500pM至约950pM，约500pM至约900pM，约500pM至约850pM，约500pM至约800pM，约500pM至约750pM，约500pM至约700pM，约500pM至约650pM，约500pM至约600pM，约500pM至约550pM，约600pM至约30nM，约600pM至约25nM，约600pM至约30nM，约600pM至约15nM，约600pM至约10nM，约600pM至约5nM，约600pM至约2nM，约600pM至约1nM，约600pM至约950pM，约600pM至约900pM，约600pM至约850pM，约600pM至约800pM，约600pM至约750pM，约600pM至约700pM，约600pM至约650pM，约700pM至约30nM，约700pM至约25nM，约700pM至约30nM，约700pM至约15nM，约700pM至约10nM，约700pM至约5nM，约700pM至约2nM，约700pM至约1nM，约700pM至约950pM，约700pM至约900pM，约700pM至约850pM，约700pM至约800pM，约700pM至约750pM，约800pM至约30nM，约800pM至约25nM，约800pM至约30nM，约800pM至约15nM，约800pM至约10nM，约800pM至约5nM，约800pM至约2nM，约800pM至约1nM，约800pM至约950pM，约800pM至约900pM，约800pM至约850pM，约900pM至约30nM，约900pM至约25nM，约900pM至约30nM，约900pM至约15nM，约900pM至约10nM，约900pM至约5nM，约900pM至约2nM，约900pM至约1nM，约900pM至约950pM，约1nM至约30nM，约1nM至约25nM，约1nM至约20nM，约1nM至约15nM，约1nM至约10nM，约1nM至约5nM，约2nM至约30nM，约2nM至约25nM，约2nM至约20nM，约2nM至约15nM，约2nM至约10nM，约2nM至约5nM，约4nM至约30nM，约4nM至约25nM，约4nM至约20nM，约4nM至约15nM，约4nM至约10nM，约4nM至约5nM，约5nM至约30nM，约5nM至约25nM，约5nM至约20nM，约5nM至约15nM，约5nM至约10nM，约10nM至约30nM，约10nM至约25nM，约10nM至约20nM，约10nM至约15nM，约15nM至约30nM，约15nM至约25nM，约15nM至约20nM，约20nM至约30nM，和约20nM至约25nM)。

本文所述的任一种靶标结合域可结合到其靶标，其K_D在约1nM至约10nM之间(例如，约1nM至约9nM，约1nM至约8nM，约1nM至约7nM，约1nM至约6nM，约1nM至约5nM，约1nM至约4nM，约1nM至约3nM，约1nM至约2nM，约2nM至约10nM，约2nM至约9nM，约2nM至约8nM，约2nM至约7nM，约2nM至约6nM，约2nM至约5nM，约2nM至约4nM，约2nM至约3nM，约3nM至约10nM，约3nM至约9nM，约3nM至约8nM，约3nM至约7nM，约3nM至约6nM，约3nM至约5nM，约3nM至约4nM，约4nM至约10nM，约4nM至约9nM，约4nM至约8nM，约4nM至约7nM，约4nM至约6nM，约4nM至约5nM，约5nM至约10nM，约5nM至约9nM，约5nM至约8nM，约5nM至约7nM，约5nM至约6nM，约6nM至约10nM，约6nM至约9nM，约6nM至约8nM，约6nM至约7nM，约7nM至约10nM，约7nM至约9nM，约7nM至约8nM，约8nM至约10nM，约8nM至约9nM，和约9nM至约10nM)。

可使用本领域中已知的多种不同方法来测定本文所述的任一种抗原结合蛋白构建体的K_D值(例如电泳迁移率迁移分析、滤膜结合分析、表面等离子体共振和生物分子结合动力学分析等)。

抗原结合域

在本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。在这些单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

在本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。在本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域。在本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括或是scFv或单域抗体(例如，VHH或VNAR结构域)。

在一些实例中，抗原结合域(例如本文所述的任一种抗原结合域)可特异性结合到以下中的任一种：CD16a(参见例如美国专利第9,035,026号中所述的那些)、CD28(参见例如美国专利第7,723,482号中所述的那些)、CD3(参见例如美国专利第9,226,962号中所述的那些)、CD33(参见例如美国专利第8,759,494号中所述的那些)、CD20(参见例如WO 2014/026054中所述的那些)、CD19(参见例如美国专利第9,701,758号中所述的那些)、CD22(参见例如WO 2003/104425中所述的那些)，CD123(参见例如WO 2014/130635中所述的那些)、IL-1R(参见例如美国专利第8,741,604号中所述的那些)、IL-1(参见例如WO 2014/095808中所述的那些)、VEGF(参见例如美国专利第9,090,684号中所述的那些)、IL-6R(参见例如美国专利第7,482,436号中所述的那些)、IL-4(参见例如美国专利申请公开第2012/0171197号中所述的那些)、IL-10(参见例如美国专利申请公开第2016/0340413号中所述的那些)、PDL-1(参见例如Drees等人,《蛋白质表达和纯化(Protein Express.Purif.)》94:60-66,2014中所述的那些)、TIGIT(参见例如美国专利申请公开第2017/0198042号中所述的那些)、PD-1(参见例如美国专利第7,488,802号中所述的那些)、TIM3(参见例如美国专利第8,552,156号中所述的那些、CTLA4(参见例如WO 2012/120125中所述的那些)、MICA(参见例如WO 2016/154585中所述的那些)、MICB(参见例如美国专利第8,753,640号中所述的那些)、IL-6(参见例如Gejima等人,《人抗体(Human Antibodies)》11(4):121-129,2002中所述的那些)、IL-8(参见例如美国专利第6,117,980号中所述的那些)、TNFα(参见例如Geng等人,《免疫学研究(Immunol.Res.)》62(3):377-385,2015中所述的那些)、CD26a(参见例如WO2017/189526中所述的那些)、CD36(参见例如美国专利申请公开第2015/0259429号中所述的那些)、ULBP2(参见例如美国专利第9,273,136号中所述的那些)、CD30(参见例如Homach等人,《斯堪的纳维亚免疫学杂志(Scand.J.Immunol.)》48(5):497-501,1998中所述的那些)、CD200(参见例如美国专利第9,085,623号中所述的那些)、IGF-1R(参见例如美国专利申请公开第2017/0051063号中所述的那些)、MUC4AC(参见例如WO 2012/170470中所述的那些)、MUC5AC(参见例如美国专利第9,238,084号中所述的那些)、Trop-2(参见例如WO 2013/068946中所述的那些)、CMET(参见例如Edwardraja等人,《生物技术与生物工程(Biotechnol.Bioeng.)》106(3):367-375,2010中所述的那些)、EGFR(参见例如Akbari等人,《蛋白质表达和纯化》127:8-15,2016中所述的那些)、HER1(参见例如美国专利申请公开第2013/0274446号中所述的那些)、HER2(参见例如Cao等人,《生物技术快报(Biotechnol.Lett.)》37(7):1347-1354,2015中所述的那些)、HER3(参见例如美国专利第9,505,843号中所述的那些)、PSMA(参见例如Parker等人,《蛋白质表达和纯化》89(2):136-145,2013中所述的那些)、CEA(参见例如WO 1995/015341中所述的那些)、B7H3(参见例如美国专利第9,371,395号中所述的那些)、EPCAM(参见例如WO 2014/159531中描述的那些)、BCMA(参见例如Smith等人,《分子疗法(Mol.Ther.)》26(6):1447-1456,2018中所述的那些)、P-钙粘着蛋白(参见例如美国专利第7,452,537号中所述的那些)、CEACAM5(参见例如美国专利第9,617,345号中所述的那些)、UL16结合蛋白(参见例如WO 2017/083612中所述)、HLA-DR(参见例如Pistillo等人,《实验和临床免疫遗传学(Exp.Clin.Immunogenet.)》14(2):123-130,1997中所述的那些)、DLL4(参见例如WO 2014/007513中所述的那些)、TYRO3(参见例如WO 2016/166348中所述的那些)、AXL(参见例如WO 2012/175692中所述的那些)、MER(参见例如WO 2016/106221中所述的那些)、CD122(参见例如美国专利申请公开第2016/0367664号中所述的那些)、CD155(参见例如WO 2017/149538中所述的那些)或PDGF-DD(参见例如美国专利第9,441,034号中所述的那些)。

存在于本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽中的抗原结合域各自独立地选自以下组成的群组：VHH域、VNAR域和scFv。在一些实施例中，本文所述的任一种抗原结合域是BiTe、(scFv)₂、纳米抗体(nanobody)、纳米抗体-HAS、DART、TandAb、单链双功能抗体(scDiabody)、单链双功能抗体-CH3、scFv-CH-CL-scFv、HSAbody、单链双功能抗体-HAS或串联scFv。可用于任一种单链或多链嵌合多肽中的抗原结合域的另外实例是本领域已知的。

VH域是可在骆驼科动物中发现的单个单体抗体可变域。VNAR域是可在软骨鱼中发现的单个单体抗体可变域。V_HH域和V_NAR域的非限制性方面描述于例如Cromie等人,《医药化学当前话题(Curr.Top.Med.Chem.)》15:2543-2557,2016；De Genst等人,《发育与比较免疫学(Dev.Comp.Immunol.)》30:187-198,2006；De Meyer等人,《生物技术趋势(TrendsBiotechnol.)》32:263-270,2014；Kijanka等人,《纳米医学(Nanomedicine)》10:161-174,2015；Kovaleva等人,《生物疗法专家观点(Expert.Opin.Biol.Ther.)》14:1527-1539,2014；Krah等人,《免疫药理学和免疫毒理学(Immunopharmacol.Immunotoxicol.)》38:21-28,2016；Mujic-Delic等人,《药理科学趋势(Trends Pharmacol.Sci.)》35:247-255,2014；Muyldermans,《生物技术杂志(J.Biotechnol.)》74:277-302,2001；Muyldermans等人,《生物化学科学趋势(Trends Biochem.Sci.)》26:230-235,2001；Muyldermans,《生物化学年鉴(Ann.Rev.Biochem.)》82:775-797,2013；Rahbarizadeh等人,《免疫学研究(Immunol.Invest.)》40:299-338,2011；Van Audenhove等人,《E生物医学(EBioMedicine)》8:40-48,2016；Van Bockstaele等人,《研究药物当前观点(Curr.Opin.Investig.Drugs)》10:1212-1224,2009；Vincke等人,《分子生物学方法(Methods Mol.Biol.)》911:15-26,2012；和Wesolowski等人,《医学微生物学和免疫学(Med.Microbiol.Immunol.)》198:157-174,2009。

在一些实施例中，本文所述的单链或多链嵌合多肽中的每个抗原结合域都是VHH域，或至少一个抗原结合域是VHH域。在一些实施例中，本文所述的单链或多链嵌合多肽中的每个抗原结合域都是VNAR域，或至少一个抗原结合域是VNAR域。在一些实施例中，本文所述的单链或多链嵌合多肽中的每个抗原结合域都是scFv域，或至少一个抗原结合域是scFv域。

在一些实施例中，存在于单链或多链嵌合多肽中的两种或更多种多肽可以组装(例如非共价组装)形成本文所述的任一种抗原结合域，例如抗体的抗原结合片段(例如本文所述抗体的任一种抗原结合片段)、VHH-scAb、VHH-Fab、双scFab、F(ab')2、双功能抗体、互换单抗、DAF(二合一)、DAF(四合一)、DutaMab、DT-IgG、臼包杵型共同轻链、臼包杵型组装体、电荷对、Fab臂交换、SEEDbody、LUZ-Y、Fcab、κλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、双功能抗体-CH3、三体、微型抗体(miniantibody)、微抗体(minibody)、TriBi微抗体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、F(ab')2-scFv2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、单链双功能抗体-Fc、双功能抗体-Fc、串联scFv-Fc、胞内抗体、对接和锁定(dock and lock)、lmmTAC、IgG-IgG偶联物、Cov-X体和scFv1-PEG-scFv2。参见例如Spiess等人,《分子免疫学(Mol.Immunol.)》67:95-106,2015，其在此全文并入，以便描述这些元件。抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')₂片段和Fab'片段。抗体的抗原结合片段的其它实例是IgG的抗原结合片段(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗原结合片段)(例如人或人源化IgG，例如人或人源化IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗原结合片段)；IgA的抗原结合片段(例如IgA1或IgA2的抗原结合片段)(例如人或人源化IgA，例如人或人源化IgA1或IgA2的抗原结合片段)；IgD的抗原结合片段(例如人或人源化IgD的抗原结合片段)；IgE的抗原结合片段(例如人或人源化IgE的抗原结合片段)；或IgM的抗原结合片段(例如人或人源化IgM的抗原结合片段)。

“Fv”片段包括一个重链可变域和一个轻链可变域的非共价连接型二聚体。

除Fv片段的重链和轻链可变域外，“Fab”片段还包括轻链的恒定域和重链的第一恒定域(C_H1)。

“F(ab')₂”片段包括在铰链区附近通过二硫键接合的两个Fab片段。

“双可变域免疫球蛋白”或“DVD-Ig”是指多价且多特异性结合蛋白，如例如DiGiammarino等人,《分子生物学方法》899:145-156,2012；Jakob等人,《单抗(MABs)》5:358-363,2013；和美国专利第7,612,181号；第8,258,268号；第8,586,714号；第8,716,450号；第8,722,855号；第8,735,546号；和第8,822,645号中所述，其中的每一个均通过引用整体并入。

DART描述于例如Garber,《自然综述：药物发现(Nature Reviews DrugDiscovery)》13:799-801,2014中。

在一些实施例中，本文所述的任一种抗原结合域可结合到选自以下组成的群组的抗原：蛋白质、碳水化合物、脂质和其组合。

抗原结合域的其它实例和方面是本领域已知的。

可溶性白介素或细胞因子蛋白

在本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个可以是可溶性白介素蛋白或可溶性细胞因子蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素或可溶性细胞因子蛋白选自以下群组：IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。可溶性IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF的非限制性实例提供于下文。

人可溶性IL-3(SEQ ID NO:105)

apmtqttplkt swvncsnmid eiithlkqpp lplldfnnln gedqdilmen nlrrpnleafnravkslqna saiesilknl lpclplataa ptrhpihikd gdwnefrrkl tfylktlena qaqqttlslaif

人可溶性IL-8(SEQ ID NO:106)

egavlprsak elrcqcikty skpfhpkfik elrviesgph canteiivkl sdgrelcldpkenwvqrvve kflkraens

人可溶性IL-10(SEQ ID NO:107)

spgqgtqsensc thfpgnlpnm lrdlrdafsr vktffqmkdq ldnlllkesl ledfkgylgcqalsemiqfy leevmpqaen qdpdikahvn slgenlktlr lrlrrchrfl pcenkskave qvknafnklqekgiykamse fdifinyiea ymtmkirn

人可溶性IL-17(SEQ ID NO:108)

gitiprn pgcpnsedkn fprtvmvnln ihnrntntnp krssdyynrs tspwnlhrnedperypsviw eakcrhlgci nadgnvdyhm nsvpiqqeil vlrrepphcp nsfrlekilv svgctcvtpivhhva

人可溶性IL-18(SEQ ID NO:109)

yfgklesklsvirn lndqvlfidq gnrplfedmt dsdcrdnapr tifiismykd sqprgmavtisvkcekistl scenkiisfk emnppdnikd tksdiiffqr svpghdnkmq fesssyegyf lacekerdlfklilkkedel gdrsimftvq ned

人可溶性PDGF-DD(SEQ ID NO:110)

rdtsatpqsasi kalrnanlrr desnhltdly rrdetiqvkg ngyvqsprfp nsyprnllltwrlhsqentr iqlvfdnqfg leeaendicr ydfvevedis etstiirgrw cghkevppri ksrtnqikitfksddyfvak pgfkiyysll edfqpaaase tnwesvtssi sgvsynspsv tdptliadal dkkiaefdtvedllkyfnpe swqedlenmy ldtpryrgrs yhdrkskvdl drlnddakry sctprnysvn ireelklanvvffprcllvq rcggncgcgt vnwrsctcns gktvkkyhev lqfepghikr rgraktmalv diqldhhercdcicssrppr

人可溶性SCF(SEQ ID NO:111)

egicrnrvtnnvkdv tklvanlpkd ymitlkyvpg mdvlpshcwi semvvqlsdsltdlldkfsn iseglsnysi idklvnivdd lvecvkenss kdlkksfksp eprlftpeef frifnrsidafkdfvvaset sdcvvsstls pekdsrvsvt kpfmlppvaa sslrndssss nrkaknppgd sslhwaamalpalfsliigf afgalywkkr qpsltraven iqineednei smlqekeref qev

人可溶性FLT3L(SEQ ID NO:112)

tqdcsfqhspissd favkirelsd yllqdypvtv asnlqdeelc gglwrlvlaq rwmerlktvagskmqgller vnteihfvtk cafqpppscl rfvqtnisrl lqetseqlva lkpwitrqnf srclelqcqpdsstlpppws prpleatapt apqpplllll llpvglllla aawclhwqrt rrrtprpgeq vppvpspqdlllveh

可溶性白介素蛋白和可溶性细胞因子蛋白的其它实例是本领域已知的。

可溶性受体

在本文所述的任一种单链或多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素受体或可溶性细胞因子受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)(参见例如Yung等人,《美国呼吸与重症医学杂志(Am.J.Resp.Crit.Care Med.)》194(9):1140-1151,2016中所述的那些)、可溶性TGF-βRIII(参见例如Heng等人,《胎盘(Placenta)》57:320,2017中所述的那些)、可溶性NKG2D(参见例如Cosman等人,《免疫(Immunity)》14(2):123-133,2001；Costa等人,《免疫学前沿(Front.Immunol.)》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性NKp30(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性NKp44(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150中所述的那些)、可溶性NKp46(参见例如Mandelboim等人,《自然(Nature)》409:1055-1060,2001；Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性NKp44(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150中所述的那些)、scMHCI(参见例如Washburn等人,《公共科学图书馆·综合(PLoS One)》6(3):e18439,2011中所述的那些)、scMHCII(参见例如Bishwajit等人,《细胞免疫学(Cellular Immunol.)》170(1):25-33,1996中所述的那些)、scTCR(参见例如Weber等人，《自然》356(6372):793-796,1992中所述的那些)、可溶性CD155(参见例如Tahara-Hanaoka等人,《国际免疫学(Int.Immunol.)》16(4):533-538,2004中所述的那些)或可溶性CD28(参见例如Hebbar等人,《临床与实验免疫学(Clin.Exp.Immunol.)》136:388-392,2004)。

可溶性白介素受体和可溶性细胞因子受体的其它实例是本领域已知的。

亲和域对

在一些实施例中，多链嵌合多肽包括：1)包括一对亲和域中的第一域的第一嵌合多肽，和2)包括一对亲和域中的第二域的第二嵌合多肽，使得第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过亲和域对中的第一域和第二域的结合而缔合。在一些实施例中，所述亲和域对是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司域和可溶性IL-15。寿司域，也称为短共有重复序列或1型糖蛋白基序，是蛋白质-蛋白质相互作用中的共同基序。已在许多蛋白质结合分子(包括补体组分C1r、C1s、因子H和C2m以及非免疫分子因子XIII和β2-糖蛋白)上鉴定出寿司域。典型的寿司域具有大约60个氨基酸残基，并且包含四个半胱氨酸(Ranganathan,《太平洋生物计算专题讨论会(Pac.Symp Biocomput.)》2000:155-67)。第一半胱氨酸可与第三半胱氨酸形成二硫键，并且第二半胱氨酸可与第四半胱氨酸形成二硫桥键。在亲和域对中的一个成员是可溶性IL-15的一些实施例中，可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。在亲和域对中的一个成员是人IL-15受体的α链(IL15Rα)的一些实施例中，人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。在一些实施例中，亲和域对是芽胞杆菌核糖核酸酶和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子。在一些实施例中，亲和域对是PKA和AKAP。在一些实施例中，所述一对亲和域是基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块(Rossi,《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA.)》103:6841-6846,2006；Sharkey等人,《癌症研究(Cancer Res.)》68:5282-5290,2008；Rossi等人,《药物科学趋势(Trends Pharmacol Sci.)》33:474-481,2012)或基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25相互作用的SNARE模块(Deyev等人,《自然·生物技术(Nat Biotechnol.)》1486-1492,2003)。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽包括一对亲和域中的第一域，并且多链嵌合多肽的第二嵌合多肽包括一对亲和域中的第二域，其中亲和域对中的第一域和亲和域对中的第二域以小于1×10^-7M、小于1×10^-8M、小于1×10^-9M、小于1×10^-10M、小于1×10^-11M、小于1×10^-12M或小于1×10^-13M的解离平衡常数(K_D)彼此结合。在一些实施例中，亲和域对中的第一域与亲和域对中的第二域彼此结合，其K_D为约1×10^-4M至约1×10^-6M、约1×10^-5M至约1×10^-7M、约1×10^-6M至约1×10^-8M、约1×10^-7M至约1×10^-9M、约1×10^-8M至约1×10^-10M、约1×10^-9M至约1×10^-11M、约1×10^-10M至约1×10^-12M、约1×10^-11M至约1×10^-13M、约1×10^-4M至约1×10^-5M、约1×10^-5M至约1×10^-6M、约1×10^-6M至约1×10^-7M、约1×10^-7M至约1×10^-8M、约1×10^-8M至约1×10^-9M、约1×10^-9M至约1×10^-10M、约1×10^-10M至约1×10^-11M、约1×10^-11M至约1×10^-12M或约1×10^-12M至约1×10^-13M(包括端点)。本领域已知的多种不同方法中的任一种均可用于测定一对亲和域中的第一域与一对亲和域中的第二域的结合的K_D值(例如，电泳迁移变动分析、滤膜结合分析、表面等离子体共振和生物分子结合动力学分析等)。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽包括一对亲和域中的第一域，并且多链嵌合多肽的第二嵌合多肽包括一对亲和域中的第二域，其中一对亲和域中的第一域、一对亲和域中的第二域或这两者具有约10至100个氨基酸的长度。例如，一对亲和域中的第一域、一对亲和域中的第二域或这两者可具有约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，一对亲和域中的第一域、一对亲和域中的第二域或这两者均具有约1015、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸的长度。

在一些实施例中，本文公开的一对亲和域中的第一和/或第二域中的任一种可在其N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸(例如1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要一对亲和域中第一个和/或第二域的功能保持完整即可。举例来说，来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司域可在N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸，同时仍保持结合到可溶性IL-15的能力。另外或可替代地，可溶性IL-15可以在N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸，同时仍保持结合到人IL-15受体α链(IL-15Rα)的寿司域的能力。

IL-15受体α的α链(IL-15Rα)的寿司域的非限制性实例可以包括与ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:113)至少70％一致、至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致的序列。在一些实施例中，来自IL15Rα的α链的寿司域可由包括ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:114)的核酸编码。

在一些实施例中，可溶性IL-15蛋白可以包括与NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:115)至少70％一致、至少75％一致、至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致、至少95％一致、至少99％一致或100％一致的序列。在一些实施例中，可溶性IL-15可由包括AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:116)的序列的核酸编码。

信号序列

在一些实施例中，单链嵌合多肽在其N端包含信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽在其N端包括信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽在其N端包括信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和多链嵌合多肽的第二嵌合多肽均包括信号序列。如本领域普通技术人员将理解，信号序列是存在于许多内源产生的蛋白质的N端的氨基酸序列，其将蛋白质引导到分泌路径(例如，蛋白质被引导以存在于某些细胞内细胞器中、存在于细胞膜中或从细胞中分泌)。信号序列是异质的，并且其一级氨基酸序列差异很大。但是，信号序列的长度典型地为16至30个氨基酸，并且包括亲水、通常带正电荷的N端区，中央疏水域和含有信号肽酶的裂解位点的C端区。

在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽，包括具有氨基酸序列MKWVTFISLLFLFSSAYS(SEQ ID NO:117)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽，包括由核酸序列ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO:118)、ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC(SEQ ID NO:119)或ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCA GCGCCTACTCC(SEQ ID NO:120)编码的信号序列。

在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽，包括具有氨基酸序列MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ ID NO:121)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽，包括具有氨基酸序列MGQIVTMFEALPHIIDEVINIVIIVLIIITSIKAVYNFATCGILALVSFLFLAGRSCG(SEQ ID NO:122)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽，包括具有氨基酸序列MPNHQSGSPTGSSDLLLSGKKQRPHLALRRKRRREMRKINRKVRRMNLAPIKEKTAWQHLQALISEAEEVLKTSQTPQNSLTLFLALLSVLGPPVTG(SEQ ID NO:123)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽，包括具有氨基酸序列MDSKGSSQKGSRLLLLLVVSNLLLCQGVVS(SEQ ID NO:124)的信号序列。本领域普通技术人员将了解用于本文所述的多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽、或单链嵌合多肽的其它适当信号序列。

在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽包括信号序列，所述信号序列具有约10至100个氨基酸的长度。举例来说，信号序列可具有约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，信号序列具有约10 15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸的长度。

在一些实施例中，本文公开的任一种信号序列可在其N端和/或C端包括一个或多个另外的氨基酸(例如1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要信号序列的功能保持完整即可。举例来说，具有氨基酸序列MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ ID NO:125)的信号序列可在N端或C端包括一个或多个其它氨基酸，同时仍保持将多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽或这两者或单链嵌合多肽引导到分泌路径的能力。

在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽或这两者或单链嵌合多肽包括将多链嵌合多肽引导到细胞外空间中的信号序列。此类实施例适用于产生相对容易分离和/或纯化的单链或多链嵌合多肽。

肽标签

在一些实施例中，单链嵌合多肽包括肽标签(例如位于嵌合多肽的N端或C端)。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括含有肽标签(例如位于第一嵌合多肽的N端或C端)的第一嵌合多肽。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括含有肽标签(例如位于第二嵌合多肽的N端或C端)的第二嵌合多肽。在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽和多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽均包括肽标签。在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或这两者，或单链嵌合多肽包括两个或更多个肽标签。

能够纳入多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或这两者或单链嵌合多肽中的示例性肽标签包括(不限于)AviTag(GLNDIFEAQKIEWHE；SEQ ID NO:126)、钙调蛋白标签(KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL；SEQ ID NO:127)、聚谷氨酸盐标签(EEEEEE；SEQ ID NO:128)、E标签(GAPVPYPDPLEPR；SEQ ID NO:129)、FLAG标签(DYKDDDDK；SEQ ID NO:130)、HA标签、来自血球凝集素的肽(YPYDVPDYA；SEQ ID NO:131)、his标签(HHHHH(SEQ ID NO:132)；HHHHHH(SEQ ID NO:133)；HHHHHHH(SEQ ID NO:134)；HHHHHHHH(SEQ ID NO:135)；HHHHHHHHH(SEQ ID NO:136)；或HHHHHHHHHH(SEQ ID NO:137))、myc标签(EQKLISEEDL；SEQ ID NO:138)、NE标签(TKENPRSNQEESYDDNES；SEQ ID NO:139)、S标签(KETAAAKFERQHMDS；SEQ ID NO:140)、SBP标签(MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP；SEQ ID NO:141)、Softag 1(SLAELLNAGLGGS；SEQ ID NO:142)、Softag 3(TQDPSRVG；SEQID NO:143)、Spot标签(PDRVRAVSHWSS；SEQ ID NO:144)、Strep标签(WSHPQFEK；SEQ ID NO:145)、TC标签(CCPGCC；SEQ ID NO:146)、Ty标签(EVHTNQDPLD；SEQ ID NO:147)、V5标签(GKPIPNPLLGLDST；SEQ ID NO:148)、VSV标签(YTDIEMNRLGK；SEQ ID NO:149)，和Xpress标签(DLYDDDDK；SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，组织因子蛋白是肽标签。

能够纳入多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或这两者或单链嵌合多肽中的肽标签能够分别用于与多链或单链嵌合多肽有关的多种应用中的任一种。举例来说，肽标签能够用于纯化多链或单链嵌合多肽。作为一个非限制性实例，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽(例如，以重组方式表达的第一嵌合多肽)、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽(例如，以重组方式表达的第二嵌合多肽)或这两者，或单链嵌合多肽可以包括myc标签；包括以myc标记的第一嵌合多肽、以myc标记的第二嵌合多肽或这两者的多链嵌合多肽，或以myc标记的单链嵌合多肽能够使用识别myc标签的抗体纯化。识别myc标签的抗体的一个非限制性实例是9E10，其可从非商业的开发研究融合瘤库(Developmental StudiesHybridoma Bank)获得。作为另一非限制性实例，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽(例如，以重组方式表达的第一嵌合多肽)、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽(例如，以重组方式表达的第二嵌合多肽)或这两者，或单链嵌合多肽可以包括组氨酸标签；包括以组氨酸标记的第一嵌合多肽、以组氨酸标记的第二嵌合多肽或这两者的多链嵌合多肽，或以组氨酸标记的单链嵌合多肽能够使用镍或钴螯合剂纯化。所属领域的一般技术人员将了解其它适合的标签和结合那些标签的药剂以用于纯化单链或多链嵌合多肽。在一些实施例中，纯化后，从多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽或从单链嵌合多肽去除肽标签。在一些实施例中，纯化后，不从多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽或单链嵌合多肽去除肽标签。

能够纳入多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或这两者或单链嵌合多肽中的肽标签能分别用于例如多链嵌合多肽或单链嵌合多肽的免疫沉淀，分别用于多链嵌合多肽或单链嵌合多肽的成像(例如经由蛋白质印迹法、ELISA、流式细胞术和/或免疫细胞化学)，和/或分别用于多链嵌合多肽或单链嵌合多肽的增溶。

在一些实施例中，多链嵌合多肽中的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽中的第二嵌合多肽，或两者，或单链嵌合多肽包括肽标签，所述肽标签具有约10至100个氨基酸的长度。举例来说，肽标签可以具有约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，肽标签具有约1015、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸的长度。

纳入多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或这两者或单链嵌合多肽中的肽标签可以具有任何适合的长度。例如，肽标签的长度可具有5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸。在单链或多链嵌合多肽包括两个或更多个肽标签的实施例中，两个或更多个肽标签可具有相同或不同的长度。在一些实施例中，本文公开的任何肽标签可在N端和/或C端包括一个或多个其它氨基酸(例如1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要肽标签的功能保持完整即可。例如，具有氨基酸序列EQKLISEEDL(SEQ ID NO:138)的myc标签可包括一个或多个其它氨基酸(例如位于肽标签的N端和/或C端)，同时仍保持与抗体(例如9E10)结合的能力。

A型单链嵌合多肽的示例性实施例

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和/或第二靶标结合域可独立地特异性结合到CD3(例如人CD3)或CD28(例如人CD28)。。在一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到CD3(例如人CD3)，而第二靶标结合域特异性结合到CD28(例如人CD28)。在一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到CD28(例如人CD28)，而第二靶标结合域特异性结合到CD3(例如人CD3)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域与第二靶标结合域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域(例如本文所述的任一种示例性抗原结合域)。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

特异性结合到CD3的scFv的非限制性实例可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:151)。

在一些实施例中，特异性结合到CD3的scFv可以由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGC(SEQ ID NO:152)。

特异性结合到CD28的scFv的非限制性实例可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:153)。

在一些实施例中，特异性结合到CD28的scFv可以由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:154)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和/或第二靶标结合域是可溶性受体(例如可溶性CD28受体或可溶性CD3受体)。。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:155)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:156)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO:157)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCCCAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO:158)。

B型单链嵌合多肽的示例性实施例

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和/或第二靶标结合域可独立地特异性结合到IL-2受体(例如人IL-2受体)。

在这些单链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域与第二靶标结合域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域是可溶性人IL-2蛋白。特异性结合到IL-2受体的IL-2蛋白的非限制性实例可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:78)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-2受体的IL-2蛋白可以由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQ ID NO:159)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-2受体的IL-2蛋白可以由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACC(SEQ ID NO:160)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQID NO:164)。

C型单链嵌合多肽的示例性实施例

在本文所述的任一种单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和/或第二靶标结合域可独立地特异性结合到IL-15受体(例如人IL-15受体)。。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域与第二靶标结合域彼此直接邻接。在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，单链嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域是人可溶性IL-15蛋白。特异性结合到IL-15受体的IL-15蛋白的非限制性实例可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQID NO:82)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-15受体的IL-15蛋白可以由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGC(SEQ ID NO:165)。

在一些实施例中，特异性结合到IL-15受体的IL-15蛋白可以由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:166)。

在这些单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:167)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:168)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ IDNO:169)。

在一些实施例中，单链嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCAACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:170)。

示例性的A型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和域中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如，本文所述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和域可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-12的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-12的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括可溶性IL-18(例如人可溶性IL-18)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-18包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:109)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-18由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT(SEQ ID NO:171)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括可溶性IL-12(例如人可溶性IL-12)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-15包括人可溶性IL-12β(p40)的序列和人可溶性IL-12α(p35)的序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人IL-15可溶性IL-15进一步包括介于可溶性IL-12β(p40)的序列与人可溶性IL-12α(p35)的序列之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头序列)。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头序列包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:102)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12β(p40)的序列包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS(SEQ ID NO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12β(p40)由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC(SEQ ID NO:172)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12α(p35)包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS(SEQ ID NO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12α(p35)由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC(SEQ IDNO:173)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:174)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:175)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSYFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:176)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGCTACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:177)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:178)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:179)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可以包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:180)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCCATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:181)。

示例性的B型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如人可溶性IL-21多肽)或可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFRβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地是可溶性IL-21或可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFRβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-21的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合域特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括可溶性IL-21(例如人可溶性IL-21)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:182)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFRβRII受体(例如人可溶性TGFRβRII受体))。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:102)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:183)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:184)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:185)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:186)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:187)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人TGFβRII受体包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQID NO:188)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:189)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:190)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:191)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:192)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:193)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA(SEQ ID NO:194)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如，至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:195)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA(SEQ ID NO:196)。

示例性的C型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如人可溶性IL-21多肽)或可溶性IL-7(例如人可溶性IL-7多肽)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地为可溶性IL-21或可溶性IL-7。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括可溶性IL-21(例如人可溶性IL-21)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:197)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:182)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7的序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:198)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:199)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCCTCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAAAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:200)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MGVKVLFALICIAVAEAQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:201)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCCCAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCCTCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAAAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:202)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQID NO:203)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:204)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

MGVKVLFALICIAVAEADCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:205)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCCGATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:206)。

示例性的D型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如人可溶性IL-21多肽)或可溶性IL-7(例如人可溶性IL-7多肽)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地为可溶性IL-21或可溶性IL-7。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-21的受体，并且第二靶标结合域特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-7的受体，并且第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:197)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:182)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7的序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:198)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:207）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:208）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:209）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQID NO:210）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQ ID NO:211）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG（SEQ IDNO:212）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQID NO:213）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG（SEQ ID NO:214）。

示例性的E型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-18（例如人可溶性IL-18）的受体、IL-12（例如人可溶性IL-12）的受体或CD16（例如，抗CD16scFv）。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域特异性结合到CD16或IL-12的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它抗原结合域中的一个或多个是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它抗原结合域各自是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-12的受体，并且第二靶标结合域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到CD16，而第二靶标结合域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合域特异性结合到CD16。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括可溶性IL-18(例如人可溶性IL-18)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-18包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:109)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-18由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT（SEQ ID NO:171）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括可溶性IL-12（例如人可溶性IL-12）。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-15包括人可溶性IL-12β（p40）的序列和人可溶性IL-12α（p35）的序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-15（例如人可溶性IL-15）进一步包括介于可溶性IL-12β（p40）的序列与人可溶性IL-12α（p35）的序列之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头序列）。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头序列包含GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO:102）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12β（p40）的序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS（SEQ ID NO:81）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12β（p40）由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC（SEQ ID NO:172）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12α（p35）包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS（SEQ ID NO:80）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-12α（p35）由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC（SEQ IDNO:173）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域包括特异性结合到CD16的scFv（例如抗CD16scFv）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变域，所述轻链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH（SEQ ID NO:215）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的轻链可变域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT（SEQ ID NO:216）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变域，所述重链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQ ID NO:217）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的重链可变域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG（SEQ ID NO:218）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:174）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:175）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSYFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:176）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGCTACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:177）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQID NO:223）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG（SEQ ID NO:224）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQ ID NO:225）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCCATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:226)。

示例性的F型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7(例如人可溶性IL-7)的受体、CD16(例如抗CD16scFv)或IL-21(例如人可溶性IL-21)的受体。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它抗原结合域中的一个或多个是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它抗原结合域各自是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到受体IL-7，而第二靶标结合域特异性结合到CD16或IL-21的受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括可溶性IL-7蛋白。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-7蛋白是人可溶性IL-7。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二抗原结合域包括特异性结合到CD16的靶标结合域。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括特异性结合到CD16的scFv。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21是人可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合域。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域包括可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21是人可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到CD16的其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括可溶性IL-7(例如人可溶性IL-7）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH（SEQ ID NO:79）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC（SEQ ID NO:198）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT（SEQ ID NO:227）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21的序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:83）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC（SEQ ID NO:197）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:182）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域包括特异性结合到CD16的scFv（例如抗CD16scFv）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变域，所述轻链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH（SEQ ID NO:215）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的轻链可变域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT（SEQ ID NO:216）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变域，所述重链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQ ID NO:217）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的重链可变域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG（SEQ ID NO:218）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:207）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:208）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:209）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQID NO:210）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:232）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:233）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:234）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:235）。

示例性的G型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGFβ（例如人TGFβRII受体）、CD16（例如抗CD16scFv）或IL-21（例如人可溶性IL-21）的受体。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它抗原结合域中的一个或多个是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它抗原结合域各自是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β、CD16或IL-21的受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到CD16或IL-21的受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域特异性结合到CD16。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二抗原结合域包括特异性结合到CD16的抗原结合域。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二抗原结合域包括特异性结合到CD16的scFv。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括人可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合域。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域包括可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21是人可溶性IL-21。在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到CD16的其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括TGFβRII受体(例如人可溶性TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:102)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:183)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:184)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT（SEQ ID NO:185）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:186）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:188）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFβRII受体由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:187）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21的序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:83）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC（SEQ ID NO:197）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:182）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变域，所述轻链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH（SEQ ID NO:215）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的轻链可变域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT（SEQ ID NO:216）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变域，所述重链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQ ID NO:217）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的重链可变域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG（SEQ ID NO:218）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:236）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:237）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:238）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:239）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:232）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:233）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:234）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:235）。

示例性的H型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括可溶性IL-7（例如人可溶性IL-7）。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH（SEQ ID NO:79）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT（SEQ ID NO:227）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:207）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:208）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:209）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQID NO:210）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQID NO:203）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA（SEQ ID NO:204）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQ ID NO:250）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG（SEQ ID NO:251）。

示例性的I型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如人可溶性TGFβRII)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:102)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:183)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:184）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT（SEQ ID NO:185）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:186）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQID NO:188）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:187）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:236）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:237）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:238）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:239）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQ ID NO:193）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG（SEQ ID NO:257）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQ ID NO:195）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:259)。

示例性的J型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、IL-21的受体或CD137L的受体。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域特异性结合到IL-21(例如可溶性IL-21，例如人可溶性IL-21)的受体或CD137L(例如可溶性CD137L，例如人可溶性CD137L)的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括其它靶标结合域。在一些实施例中，其它靶标结合域和

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它靶标结合域中的一个或多个是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它靶标结合域各自是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。在一些实施例中，其它靶标结合域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域是可溶性IL-7(例如人可溶性IL-7)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7包括与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7由与以下至少80％一致(例如至少82％一致、至少84％一致、至少86％一致、至少88％一致、至少90％一致、至少92％一致、至少94％一致、至少96％一致、至少98％一致、至少99％一致或100％一致)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT（SEQ ID NO:227）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域或其它靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域或其它靶标结合域是可溶性IL-21（例如人可溶性IL-21）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:83）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:182）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域特异性结合到CD137L的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到CD137L的受体的其它靶标结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域和/或其它靶标结合域是可溶性CD137L（例如人可溶性CD137L）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:260）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:261）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI（SEQ ID NO:262）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC（SEQ ID NO:263）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:207）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:208）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:209）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQID NO:210）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:268）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:269）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:270）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:271）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI（SEQ ID NO:272）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC（SEQ ID NO:273）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI（SEQ ID NO:274）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:275)。

示例性的K型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合域特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到IL-7的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域包括可溶性IL-7蛋白(例如人可溶性IL-7蛋白)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7蛋白包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH（SEQ ID NO:79）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-7由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT（SEQ ID NO:227）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包含特异性结合到TGF-β的靶标结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域是可溶性TGF-β受体（例如可溶性TGFβRII受体，例如人可溶性TGFβRII受体）。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO:102）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:183）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:184）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT（SEQ ID NO:185）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:186）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:188）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:187）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:207）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:208）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:209）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQID NO:210）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQ ID NO:193）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG（SEQ ID NO:257）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR（SEQ ID NO:195）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG（SEQ ID NO:259）。

示例性的L型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β、IL-21的受体或CD137L的受体。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域特异性结合到IL-21（例如可溶性IL-21，例如人可溶性IL-21）的受体或CD137L（例如可溶性CD137L，例如人可溶性CD137L）的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列（例如本文所述的任一种示例性接头）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它靶标结合域中的一个或多个是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域、第二靶标结合域和其它靶标结合域各自是激动性抗原结合域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合域包括scFv或单域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如人可溶性TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO:102）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:183）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:184）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT（SEQ ID NO:185）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:186）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:188）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:187）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域或其它靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域或其它靶标结合域包括可溶性IL-21（例如人可溶性IL-21）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:83）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性IL-21由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:182）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域或其它靶标结合域特异性结合到CD137L的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域和/或其它靶标结合域包括可溶性CD137L（例如人可溶性CD137L）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性CD137L包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:260）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性CD137L由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:261）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L包括与以下至少80%一致（例如至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI（SEQ ID NO:262）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L由与以下至少80%一致（例如至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC（SEQ ID NO:263）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:236）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:237）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:238）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:239）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:268）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:269）

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:270）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:271）

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI（SEQ ID NO:272）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC（SEQ ID NO:273）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI（SEQ ID NO:274）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC（SEQ ID NO:275）。

示例性的M型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域特异性结合到IL-21(例如可溶性IL-21，例如人可溶性IL-21)的受体或TGF-β(例如可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体（例如可溶性TGFβRII受体，例如人可溶性TGFβRII受体）。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO:102）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:183）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:184）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT（SEQ ID NO:185）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:186）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:188）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:187）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括可溶性IL-21（例如人可溶性IL-21）。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:83）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:182）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:236）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:237）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:238）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:239）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:300）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQ ID NO:301）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS（SEQ ID NO:302）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC（SEQID NO:303）。

示例性的N型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD16。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述其它靶标结合域特异性结合到CD16（例如抗CD16scFv）或TGF-β（例如可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体）。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到TGF-β或CD16。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如人可溶性TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO:102）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:183）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:184）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT（SEQ ID NO:185）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:186）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:188）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:187）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域特异性结合到CD16。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合域包括抗CD16scFv。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变域，所述轻链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH（SEQ ID NO:215）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的轻链可变域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT（SEQ ID NO:216）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变域，所述重链可变域包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQ ID NO:217）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的重链可变域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG（SEQ ID NO:218）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:236）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:237）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:238）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:239）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQ IDNO:308）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG（SEQ ID NO:309）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR（SEQ ID NO:310）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG（SEQ ID NO:311）。

示例性的O型多链嵌合多肽

在本文所述的任一种多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD137L的受体。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括其它靶标结合域。在本文所述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述其它靶标结合域特异性结合到TGF-β的受体（例如可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体）或CD137L。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个其它靶标结合域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和亲和域对中的第二域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，其它靶标结合域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括介于第二嵌合多肽中的第二靶标结合域与其它靶标结合域之间的接头序列(例如本文所述的任一种示例性接头)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子域可以是本文所述的任一种示例性可溶性组织因子域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，亲和域对可以是本文所述的任一种示例性亲和域对。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到CD137L。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合域或其它靶标结合域是可溶性TGF-β受体(例如可溶性TGFβRII受体，例如人可溶性TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括人可溶性TGFRβRII的第一序列和人可溶性TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII包括安置于人可溶性TGFRβRII的第一序列与人可溶性TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ IDNO:102）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:183）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:184）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT（SEQ ID NO:185）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:186）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD（SEQ IDNO:188）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC（SEQ ID NO:187）。

在一些实施例中这些多链嵌合多肽，第二靶标结合域包括可溶性CD137L蛋白（例如人可溶性CD137L蛋白）。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L包括与以下至少80%一致（例如至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:260）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L由与以下至少80%一致（例如至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:261）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L包括与以下至少80%一致（例如至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI（SEQ ID NO:262）。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性CD137L由与以下至少80%一致（例如至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少96%一致、至少97%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC（SEQ ID NO:263）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:236）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:237）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS（SEQ ID NO:238）。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC（SEQ ID NO:239）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:316）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:317）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE（SEQ ID NO:318）。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80%一致（例如至少82%一致、至少84%一致、至少86%一致、至少88%一致、至少90%一致、至少92%一致、至少94%一致、至少96%一致、至少98%一致、至少99%一致或100%一致）的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA（SEQ ID NO:319）。

治疗老年化相关疾病或病状的方法

本文提供了治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状（例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性类型的老年化相关疾病或病状）的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手（NK）细胞活化剂（例如本文所述或所属领域中已知的任一种自然杀手（NK）细胞活化剂）施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状（例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性类型的老年化相关疾病或病状）的受试者。

本文提供了治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状（例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性类型的老年化相关疾病或病状）的方法，包括将治疗有效量的活化NK细胞（例如本文所述或所属领域中已知的任一种活化NK细胞）施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性类型的老年化相关疾病或病状)的受试者。

这些方法的一些实施例进一步包括：获得休眠NK细胞；以及使休眠NK细胞在试管内、在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后将所述NK细胞施用于受试者。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的单倍体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是人造NK细胞。在任何这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

在这些方法的一些实例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。这些方法的一些实例进一步包括分离出活化NK细胞(和任选地进一步将治疗有效量的活化NK细胞施用于受试者，例如本文所述的任一种受试者)。在这些方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的时段(或本文所述的此范围的任一子范围)。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自以下群组：癌症、自体免疫疾病、代谢疾病、神经退化性疾病、心血管疾病、皮肤病、早衰疾病和脆性疾病。

癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃癌和食道癌、胰脏癌、前列腺癌、乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

自体免疫疾病的非限制性实例是1型糖尿病。

代谢疾病的非限制性实例包括：肥胖、脂质营养不良和2型糖尿病。

神经退化性疾病的非限制性实例包括：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和痴呆。

心血管疾病的非限制性实例包括：冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和肺动脉高压。

皮肤病的非限制性实例包括：伤口愈合、秃发、皱纹、老年性雀斑痣、皮肤变薄、着色性干皮病和先天性角化不良。

早衰疾病的非限制性实例包括：早衰和呼奇逊-吉尔福早衰综合症。

脆性疾病的非限制性实例包括：脆性、疫苗接种有反应、骨质疏松症和肌肉减少症。

在本文所述的任一种老年化相关疾病或病状的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自以下群组：年龄相关黄斑变性、骨关节炎、脂肪萎缩、特发性肺纤维化、肾脏移植失败、肝纤维化、骨量损失、肌肉减少症、年龄相关的肺组织弹性丧失、骨质疏松症、年龄相关的肾功能障碍，和化学诱发的肾功能障碍。

在本文所述的任一种老年化相关疾病或病状的一些实施例中，老年化相关疾病或病状是2型糖尿病或动脉粥样硬化。

在本文所述的任一种方法的一些实施例中，受试者已经诊断或鉴定患有老年化相关疾病或病状(例如本文所述的任一种示例性老年化相关疾病或病状)。本文所述的任一种方法的一些实施例可以包括选择经鉴定或诊断患有老年化相关疾病或病状(例如本文所述的任一种示例性老年化相关疾病或病状)的受试者的步骤。

在这些方法的一些实施例中，施药使得受试者的靶组织中的衰老细胞数量减少(例如减少至少5％，减少至少10％，减少至少15％，减少至少20％，减少至少25％，减少至少30％，减少至少35％，减少至少40％，减少至少45％，减少至少50％，减少至少55％，减少至少60％，减少至少65％，减少至少70％，减少至少75％，减少至少80％，减少至少85％，减少至少90％，或减少至少95％，或减少约10％至减少约99％，减少约10％至减少约95％，减少约10％至减少约90％，减少约10％到减少约85％，减少约10％至减少约80％，减少约10％到减少约75％，减少约10％至减少约70％，减少约10％到减少约65％，减少约10％至减少约60％，减少约10％到减少约55％，减少约10％至减少约50％，减少约10％到减少约45％，减少约10％至减少约40％，减少约10％到减少约35％，减少约10％至减少约30％，减少约10％至减少约25％，减少约10％至减少约20％，减少约10％至减少约15％，减少约15％至减少约99％，减少约15％至减少约95％，减少约15％至减少约90％，减少约15％至减少约85％，减少约15％至减少约80％，减少约15％至减少约75％，减少约15％至减少约70％，减少约15％至减少约65％，减少约15％至减少约60％，减少约15％至减少约55％，减少约15％至减少约50％，减少约15％至减少约45％，减少约15％至减少约40％，减少约15％至减少约35％，减少约15％至减少约30％，减少约15％至减少约25％，减少约15％至减少约20％，减少约20％至减少约99％，减少约20％至减少约95％，减少约20％至减少约90％，减少约20％到减少约85％，减少约20％至减少约80％，减少约20％到减少约75％，减少约20％至减少约70％，减少约20％到减少约65％，减少约20％至减少约60％，减少约20％至减少约55％，减少约20％到减少约50％，减少约20％至减少约45％，减少约20％到减少约40％，减少约20％到减少约35％，减少约20％到减少约30％，减少约20％至减少约25％，减少约25％至减少约99％，减少约25％至减少约95％，减少约25％至约90％，减少约25％至减少约85％，减少约25％至减少约80％，减少约25％至减少约75％，减少约25％至减少约70％，减少约25％至减少约65％，减少约25％至减少约60％，减少约25％至减少约55％，减少约25％至减少约50％，减少约25％至减少约45％，减少约25％至减少约40％，减少约25％至减少约35％，减少约25％至减少约30％，减少约30％至减少约99％，减少约30％至减少约95％，减少约30％至减少约90％，减少约30％到减少约85％，减少约30％至减少约80％，减少约30％到减少约75％，减少约30％至减少约70％，减少约30％到减少约65％，减少约30％至减少约60％，减少约30％至减少约55％，减少约30％至减少约50％，减少约30％至减少约45％，减少约30％至减少约40％，减少约30％至减少约35％，减少约35％至减少约99％，减少约35％至减少约95％，减少约35％至减少约90％，减少约35％至减少约85％，减少约35％至减少约80％，减少约35％至减少约75％，减少约35％至减少约70％，减少约35％至减少约65％，减少约35％至减少约60％，减少约35％至减少约55％，减少约35％至减少约50％，减少约35％至减少约45％，减少约35％至减少约40％，减少约40％至减少约99％，减少约40％至减少约95％，减少约40％至减少约90％，减少约40％至减少约85％，减少约40％至减少约80％，减少约40％到减少约75％，减少约40％至减少约70％，减少约40％到减少约65％，减少约40％至减少约60％，减少约40％至减少约55％，减少约40％至减少约50％，减少约40％至减少约45％，减少约45％至减少约99％，减少约45％至减少约95％，减少约45％至减少约90％，减少约45％至减少约85％，减少约45％至减少约80％，减少约45％至减少约75％，减少约45％至减少约70％，减少约45％至减少约65％，减少约45％至减少约60％，减少约45％至减少约55％，减少约45％至减少约50％，减少约50％至减少约99％，减少约50％至减少约95％，减少约50％至减少约90％，减少约50％至减少约85％，减少约50％至减少约80％，减少约50％至减少约75％，减少约50％至减少约70％，减少约50％到减少约65％，减少约50％至减少约60％，减少约50％至减少约55％，减少约55％至减少约99％，减少约55％至减少约95％，减少约55％至减少约90％，减少约55％至减少约85％，减少约55％至减少约80％，减少约55％至减少约75％，减少约55％至减少约70％，减少约55％至减少约65％，减少约55％至减少约60％，减少约60％至减少约99％，减少约60％至减少约95％，减少约60％至减少约90％，减少约60％至减少约85％，减少约60％至减少约80％，减少约60％到减少约75％，减少约60％至减少约70％，减少约60％到减少约65％，减少约65％至减少约99％，减少约65％至减少约95％，减少约65％至减少约90％，减少约65％至减少约85％，减少约65％至减少约80％，减少约65％至减少约75％，减少约65％至减少约70％，减少约70％至减少约99％，减少约70％至减少约95％，减少约70％至减少约90％，减少约70％到减少约85％，减少约70％至减少约80％，减少约70％到减少约75％，减少约75％至减少约99％，减少约75％至减少约95％，减少约75％至减少约90％，减少约75％至减少约85％，减少约75％至减少约80％，减少约80％至减少约99％，减少约80％至减少约95％，减少约80％至减少约90％，减少约80％至减少约85％，减少约85％至减少约99％，减少约85％至减少约95％，减少约85％至减少约90％，减少约90％至减少约99％，减少约90％至减少约95％，或减少约95％至减少约99％)，例如相较于受试者在治疗之前的靶组织中的衰老细胞数量。

在这些方法的一些实施例中，施药使得受试者的IFN-γ、细胞毒性颗粒颗粒酶和/或穿孔素水平相较于治疗之前的受试者或尚未接受治疗的类似对照受试者的水平增加(例如，至少增加5％，至少增加10％，至少增加15％，至少增加20％，至少增加25％，至少增加30％，至少增加35％，至少增加40％，至少增加45％，至少增加50％，至少增加55％，至少增加60％，至少增加65％，至少增加70％，至少增加75％，至少增加80％，至少增加85％，至少增加90％，至少增加95％，或至少增加99％，或增加约10％至增加约500％(或本文所述的此范围的任一子范围)。

在一些实施例中，这些方法能够使受试者的癌症的一种或多种症状的数目、严重程度或频率降低(例如相较于治疗前的受试者的癌症的一种或多种症状的数目、严重程度或频率)。在一些实施例中，这些方法能使得受试者的一种或多种实体肿瘤的体积减少(例如，减少约1％至减少约99％，减少约1％至减少约95％，减少约1％至减少约90％，减少约1％至减少约85％，减少约1％至减少约80％，减少约1％至减少约75％，减少约1％至减少约70％，减少约1％至减少约65％，减少约1％至减少约60％，减少约1％至减少约55％，减少约1％至减少约50％，减少约1％至减少约45％，减少约1％至减少约40％，减少约1％至减少约35％，减少约1％至减少约30％，减少约1％至减少约25％，减少约1％至减少约20％，减少约1％至减少约15％，减少约1％至减少约10％，减少约1％至减少约5％，减少约5％至减少约99％，减少约5％至减少约95％，减少约5％至减少约90％，减少约5％至减少约85％，减少约5％至减少约80％，减少约5％至减少约75％，减少约5％至减少约70％，减少约5％至减少约65％，减少约5％至减少约60％，减少约5％至减少约55％，减少约5％至减少约50％，减少约5％至减少约45％，减少约5％至减少约40％，减少约5％至减少约35％，减少约5％至减少约30％，减少约5％至减少约25％，减少约5％至减少约20％，减少约5％至减少约15％，减少约5％至减少约10％，减少约10％至减少约99％，减少约10％至减少约95％，减少约10％至减少约90％，减少约10％至减少约85％，减少约10％至减少约80％，减少约10％至减少约75％，减少约10％至减少约70％，减少约10％至减少约65％，减少约10％至减少约60％，减少约10％至减少约55％，减少约10％至减少约50％，减少约10％至减少约45％，减少约10％至减少约40％，减少约10％至减少约35％，减少约10％至减少约30％，减少约10％至减少约25％，减少约10％至减少约20％，减少约10％至减少约15％，减少约15％至减少约99％，减少约15％至减少约95％，减少约15％至减少约90％，减少约15％至减少约85％，减少约15％至减少约80％，减少约15％至减少约75％，减少约15％至减少约70％，减少约15％至减少约65％，减少约15％至减少约60％，减少约15％至减少约55％，减少约15％至减少约50％，减少约15％至减少约45％，减少约15％至减少约40％，减少约15％至减少约35％，减少约15％至减少约30％，减少约15％至减少约25％，减少约15％至减少约20％，减少约20％至减少约99％，减少约20％至减少约95％，减少约20％至减少约90％，减少约20％至减少约85％，减少约20％至减少约80％，减少约20％至减少约75％，减少约20％至减少约70％，减少约20％至减少约65％，减少约20％至减少约60％，减少约20％至减少约55％，减少约20％至减少约50％，减少约20％至减少约45％，减少约20％至减少约40％，减少约20％至减少约35％，减少约20％至减少约30％，减少约20％至减少约25％，减少约25％至减少约99％，减少约25％至减少约95％，减少约25％至减少约90％，减少约25％至减少约85％，减少约25％至减少约80％，减少约25％至减少约75％，减少约25％至减少约70％，减少约25％至减少约65％，减少约25％至减少约60％，减少约25％至减少约55％，减少约25％至减少约50％，减少约25％至减少约45％，减少约25％至减少约40％，减少约25％至减少约35％，减少约25％至减少约30％，减少约30％至减少约99％，减少约30％至减少约95％，减少约30％至减少约90％，减少约30％至减少约85％，减少约30％至减少约80％，减少约30％至减少约75％，减少约30％至减少约70％，减少约30％至减少约65％，减少约30％至减少约60％，减少约30％至减少约55％，减少约30％至减少约50％，减少约30％至减少约45％，减少约30％至减少约40％，减少约30％至减少约35％，减少约35％至减少约99％，减少约35％至减少约95％，减少约35％至减少约90％，减少约35％至减少约85％，减少约35％至减少约80％，减少约35％至减少约75％，减少约35％至减少约70％，减少约35％至减少约65％，减少约35％至减少约60％，减少约35％至减少约55％，减少约35％至减少约50％，减少约35％至减少约45％，减少约35％至减少约40％，减少约40％至减少约99％，减少约40％至减少约95％，减少约40％至减少约90％，减少约40％至减少约85％，减少约40％至减少约80％，减少约40％至减少约75％，减少约40％至减少约70％，减少约40％至减少约65％，减少约40％至减少约60％，减少约40％至减少约55％，减少约40％至减少约50％，减少约40％至减少约45％，减少约45％至减少约99％，减少约45％至减少约95％，减少约45％至减少约90％，减少约45％至减少约85％，减少约45％至减少约80％，减少约45％至减少约75％，减少约45％至减少约70％，减少约45％至减少约65％，减少约45％至减少约60％，减少约45％至减少约55％，减少约45％至减少约50％，减少约50％至减少约99％，减少约50％至减少约95％，减少约50％至减少约90％，减少约50％至减少约85％，减少约50％至减少约80％，减少约50％至减少约75％，减少约50％至减少约70％，减少约50％至减少约65％，减少约50％至减少约60％，减少约50％至减少约55％，减少约55％至减少约99％，减少约55％至减少约95％，减少约55％至减少约90％，减少约55％至减少约85％，减少约55％至减少约80％，减少约55％至减少约75％，减少约55％至减少约70％，减少约55％至减少约65％，减少约55％至减少约60％，减少约60％至减少约99％，减少约60％至减少约95％，减少约60％至减少约90％，减少约60％至减少约85％，减少约60％至减少约80％，减少约60％至减少约75％，减少约60％至减少约70％，减少约60％至减少约65％，减少约65％至减少约99％，减少约65％至减少约95％，减少约65％至减少约90％，减少约65％至减少约85％，减少约65％至减少约80％，减少约65％至减少约75％，减少约65％至减少约70％，减少约70％至减少约99％，减少约70％至减少约95％，减少约70％至减少约90％，减少约70％至减少约85％，减少约70％至减少约80％，减少约70％至减少约75％，减少约75％至减少约99％，减少约75％至减少约95％，减少约75％至减少约90％，减少约75％至减少约85％，减少约75％至减少约80％，减少约80％至减少约99％，减少约80％至减少约95％，减少约80％至减少约90％，减少约80％至减少约85％，减少约85％至减少约99％，减少约85％至减少约95％，减少约85％至减少约90％，减少约90％至减少约99％，减少约90％至减少约95％，或减少约95％至减少约99％)(例如相较于治疗之前或治疗开始时的一种或多种实体肿瘤的体积)。在一些实施例中，这些方法可减少(例如，减少约1％至减少约99％或本文所述的这一范围的任何子范围)在受试者中发生转移或发生一种或多种其它转移的风险(例如相较于治疗之前的受试者或施用不同治疗的相似受试者或受试者群体中发生转移或发生一种或多种其它转移的风险)。

在一些实施例中，这些方法可以使得受试者的代谢疾病得到治疗。在一些实施例中，代谢疾病的治疗能够引起例如以下中的一种或多种(例如二、三、四、五或六种)：葡萄糖耐受性改善、葡萄糖利用率改善、糖尿病性骨关节炎的严重程度或恶化减少、皮肤病变的严重程度或恶化减少、酮症的严重程度或恶化减少、针对胰岛细胞的自体抗体的产生减少、胰岛素敏感性增加、质量减少，以及身体质量指数降低。可以根据标准技术测定空腹葡萄糖或葡萄糖耐受性来监测受试者对治疗的反应。典型地，根据所述方法降低血糖，以便达成一定的血糖水平，其特征为空腹血糖小于100mg/dL或两小时75g口服葡萄糖耐受性测试值小于140mg/dL。在一些实施例中，对治疗的反应可以包括确定与前期糖尿病、新发糖尿病或活动性糖尿病有关的其它因素，包括血压、身体质量指数、PPARy功能、脂质代谢、糖化血红蛋白(H1c)和肾功能。

在一些实施例中，这些方法可以消除神经退化性疾病或降低其风险，减轻其严重程度或延迟其发作，包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状、其并发症以及在疾病恶化过程中出现的中间病理学表型。

在一些实施例中，皮肤病的有效治疗可以通过本文所述或所属领域中已知的任何方法评估，包括检查皮肤状况，包括皮肤颜色、湿度、温度、质地、移动性和肿胀，以及皮肤病变(相较于治疗之前的皮肤状况)。

在一些实施例中，可以通过本文所述的或本领域已知的任何方法来评估对自身免疫疾病的有效治疗，包括监测对新鲜分离的PBMC的全血细胞计数分析、总Ig水平以及血清自身抗体滴度的分析。

在一些实施例中，可以通过本文所述的或本领域已知的任何方法来评估脆性疾病的有效治疗，包括监测骨矿物质密度、骨结构和几何形状、骨转换的生物医学标标志物、维生素D测量、卡诺夫斯基行为状态(Karnofsky performance status)和ECOG分数，以及对疫苗的反应能力。

杀死或减少受试者的衰老细胞数量的方法

本文提供了杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性类型的衰老细胞)的方法，包括将治疗有效量的一种或多种NK细胞活化剂(例如本文所述或所属领域中已知的任一种NK细胞活化剂)施用于受试者。

本文还提供了杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞(例如本文所述或所属领域中已知的任一种示例性类型的衰老细胞)的数量的方法，包括将治疗有效量的活化NK细胞(例如本文所述或所属领域中已知的任一种活化NK细胞)施用于受试者。

这些方法的一些实施例进一步包括：获得休眠NK细胞；以及使休眠NK细胞在试管内、在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后将所述NK细胞施用于受试者。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的单倍体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是人造NK细胞。在任何这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

在这些方法的一些实例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。这些方法的一些实例进一步包括分离出活化NK细胞(和进一步将治疗有效量的活化NK细胞施用于受试者，例如本文所述的任何受试者)。在这些方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的时段(或本文所述的此范围的任一子范围)。

在这些方法的一些实施例中，衰老细胞是衰老的癌细胞、衰老的单核细胞、衰老的淋巴细胞、衰老的星形胶质细胞、衰老的微神经胶质细胞、衰老的神经元、衰老的组织纤维母细胞、衰老的真皮纤维母细胞、衰老的角质细胞，或其它分化组织特异性分裂功能细胞。在这些方法的一些实施例中，衰老癌细胞是化学疗法诱导的衰老细胞或放射线诱导的衰老细胞。

在这些方法的一些实施例中，受试者已鉴定或诊断患有老年化相关的疾病或病状(例如本文所述或本领域已知的任何老年化相关疾病或病症)。在本文所述的任一种老年化相关疾病或病状的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自：癌症、自体免疫疾病、代谢疾病、神经退化性疾病、心血管疾病、皮肤病、早衰症和脆性疾病。

癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃癌和食道癌、胰脏癌、前列腺癌、乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

自体免疫疾病的非限制性实例是1型糖尿病。

代谢疾病的非限制性实例包括：肥胖、脂质营养不良和2型糖尿病。

神经退化性疾病的非限制性实例包括：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和痴呆。

心血管疾病的非限制性实例包括：冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和肺动脉高压。

皮肤病的非限制性实例包括：伤口愈合、秃发、皱纹、老年性雀斑痣、皮肤变薄、着色性干皮病和先天性角化不良。

早衰疾病的非限制性实例包括：早衰和呼奇逊-吉尔福早衰综合症。

脆性疾病的非限制性实例包括：脆性、疫苗接种有反应、骨质疏松症和肌肉减少症。

在本文所述的任一种老年化相关疾病或病状的一些实施例中，老年化相关疾病或病状选自以下群组：年龄相关黄斑变性、骨关节炎、脂肪萎缩、特发性肺纤维化、肾脏移植失败、肝纤维化、骨量损失、肌肉减少症、年龄相关的肺组织弹性丧失、骨质疏松症、年龄相关的肾功能障碍，和化学诱发的肾功能障碍。

在本文所述的任一种老年化相关疾病或病状的一些实施例中，老年化相关疾病或病状是2型糖尿病或动脉粥样硬化。

在这些方法的一些实施例中，施药使得受试者的靶组织中的衰老细胞数量减少(例如至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，减少至少90％，或至少减少约95％，或减少约10％至减少约99％)(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于受试者在治疗之前的靶组织中的衰老细胞数量。在这些方法的一些实施例中，受试者中的靶组织可以以下中的一个或多个：脂肪组织、胰脏组织、肝脏组织、肺组织、血管、骨组织、中枢神经系统(CNS)组织、眼组织、皮肤组织、肌肉组织和二级淋巴器官组织。

在这些方法的一些实施例中，施药使得受试者中的IFN-γ、细胞毒性颗粒的颗粒酶和/或穿孔素水平相较于治疗之前的受试者或尚未接受治疗的类似对照受试者增加(例如至少增加5％，至少增加10％，至少增加15％，至少增加20％，至少增加25％，至少增加30％，至少增加35％，至少增加40％，至少增加45％，至少增加50％，至少增加55％，至少增加60％，至少增加65％，至少增加70％，至少增加75％，至少增加80％，至少增加85％，至少增加90％，至少增加95％，或至少增加99％，或增加约10％至增加约500％(或本文所述的此范围的任一子范围))。

在这些方法的一些实施例中，可以通过对活检样品进行免疫染色来测定靶组织(例如本文所述的任一种靶组织)中的衰老细胞数量。在这些方法的一些实施例中，靶组织(例如本文所述的任一种靶组织)中的衰老细胞数量可以间接地通过受试者的老年化相关疾病或病状的一种或多种症状(例如本文所述的老年化相关疾病或病状的任一种症状)的改善来观察到。

衰老细胞

衰老细胞显示重要且独特的特性，包括形态、染色质组织、基因表达和代谢的变化。存在与细胞衰老相关的几种生化和功能特性，例如(i)细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制子p16和p21的表达增加，(ii)存在衰老相关的β-半乳糖苷酶，即溶酶体活性的标记，(iii)出现衰老相关的异染色质灶和核纤层蛋白B1水平下调，(iv)对由抗凋亡BCL家族蛋白表达增加引起的凋亡的抗性，和(v)CD26(DPP4)、CD36(清道夫(Scavenger)受体)、叉头盒4(FOXO4)和分泌性载体膜蛋白4(SCAMP4)上调。衰老细胞还表达炎症特征，即所谓的衰老相关分泌表型(SASP)。通过SASP，衰老细胞产生广泛范围的炎性细胞因子(IL-6、IL-8)、生长因子(TGF-β)、趋化因子(CCL-2)和基质金属蛋白酶(MMP-3、MMP-9)，其以细胞自主方式运作以增强衰老(自分泌作用)，并且与微环境通信并改变微环境(旁分泌作用)。SASP因子可通过触发衰老监视，即免疫介导的衰老细胞清除来促进肿瘤抑制。然而，慢性炎症也是肿瘤发生的已知驱动因素，并且越来越多的证据表明，慢性SASP也能增强癌症转移和老年化相关疾病。

衰老细胞的分泌概况取决于环境。例如，人纤维母细胞中不同的线粒体功能障碍诱导的线粒体功能障碍相关衰老(MiDAS)引起缺乏IL-1依赖性炎症因子的SASP出现。NAD+/NADH比率的降低活化AMPK信号传导，其通过活化p53诱导MiDAS。结果，p53抑制NF-κB信号传导，其为促炎性SASP的关键诱导因素。相反，由人细胞中持续性DNA损伤引起的细胞衰老诱导炎性SASP，其依赖于共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶的活化，而不依赖于p53的活化。特别地，IL-6和IL-8的表达和分泌水平提高。还展现了由异位表达p16INK4a和p21CIP1引起的细胞衰老诱导人纤维母细胞的衰老表型，且不存在炎性SASP，表明生长停滞本身并不刺激SASP。

衰老的最主要特征之一是稳定生长停滞。这是通过两个重要路径，即p16/Rb和p53/p21实现的，这两个路径均为肿瘤抑制的关键。DNA损伤引起：(1)染色质中γH2Ax(组蛋白编码基因)和53BP1(DNA损伤反应中涉及)的高沉积：这引起激酶级联反应的活化，最终引起p53活化，和(2)p16INK4a和ARF(均由CDKN2A编码)和P15INK4b(由CDKN2B编码)的活化：p53诱导细胞周期蛋白依赖性激酶抑制子(p21)的转录，并且与p16INK4a和p15INK4b两者一起阻断细胞周期进展的基因(CDK4和CDK6)。这最终引起成视网膜细胞瘤蛋白(Rb)磷酸化不足，并且使细胞周期停滞在G1期。

在正常老年化的情况下，选择性杀死衰老细胞已显示可显著改善小鼠的健康寿命，并且改善与年龄相关的疾病或癌症疗法的结果(Ovadya,《临床研究杂志(J ClinInvest.)》128(4):1247-1254,2018)。在自然界中，衰老细胞通常被先天免疫细胞去除。衰老的诱导不仅阻止了受损/改变的细胞的潜在增殖和转化，而且还通过产生SASP因子(主要起自然杀伤(NK)细胞的化学引诱物(如IL-15和CCL2)和巨噬细胞的化学引诱物(如CFS-1和CCL2)的作用)促进组织修复。这些先天免疫细胞介导消除应激细胞的免疫监视机制。衰老细胞通常上调NK细胞活化受体NKG2D和DNAM1配体，其属于应激诱导性配体家族：防御感染性疾病和恶性肿瘤的一线免疫的重要组分。受体活化后，NK细胞可接着通过其溶细胞机构特异性诱导衰老细胞的死亡。已经指出NK细胞在免疫监视肝纤维化(Sagiv，《致癌基因(Oncogene)》32(15)：1971-1977，2013)、肝细胞癌(Iannello，《实验医学杂志(J Exp Med)》210(10)：2057-2069，2013)、多发性骨髓瘤(Soriani，《血液(Blood)》113(15)：3503-3511，2009)以及甲羟戊酸路径功能障碍所应激的神经胶质瘤细胞(Ciaglia，《国际癌症杂志(IntJ Cancer)》142(1)：176-190，2018)的衰老细胞方面的作用。子宫内膜细胞经历急性细胞衰老，并且不会分化成蜕膜细胞。分化的蜕膜细胞分泌IL-15，并且从而募集子宫NK细胞以靶向并消除未分化的衰老细胞，因此有助于重塑和年轻化子宫内膜(Brighton，《E生命(Elife)》6：e31274，2017)。以类似的机制，在肝纤维化过程中，表达p53的衰老肝卫星细胞使驻留库普弗(Kupfer)巨噬细胞和新浸润的巨噬细胞的极化偏向促炎性M1表型，其显示衰老活性。已显示F4/80+巨噬细胞在清除小鼠子宫衰老细胞以维持产后子宫功能中起关键作用。

衰老细胞主要通过上调NKG2D(在NK细胞上表达)的配体、趋化因子和其它SASP因子来募集NK细胞。肝纤维化的体内模型已显示活化NK细胞有效清除衰老细胞(Krizhanovsky,《细胞(Cell)》134(4):657-667,2008)。研究已描述多种模型来研究衰老，包括肝纤维化(Krizhanovsky，《细胞》134(4)：657-667，2008)、骨关节炎(Xu，《老年学杂志：A系列，生物科学与医学(J Gerontol A Biol Sci Med Sci)》72(6)：780-785，2017)和帕金森氏病(Chinta，《细胞报告(Cell Rep)》22(4)：930-940，2018)。用于研究衰老细胞的动物模型描述于：Krizhanovsky,《细胞》134(4):657-667,2008；Baker,《自然》479(7372):232-236,2011；Farr,《自然·医学(Nat Med)》23(9):1072-1079,2017；Bourgeois,《欧洲生物化学学会联合会快报(FEBS Lett)》592(12):2083-2097,2018；Xu,《自然·医学》24(8):1246-1256,2018)。

改善皮肤和/或头发的质地和/或外观的方法

本文还提供了使有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内改善的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂(例如本文所述或所属领域中已知的任一种NK细胞活化剂)施用于受试者。

本文还提供了使有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内改善的方法，包括将治疗有效数量的活化NK细胞(例如本文所述或所属领域中已知的任一种活化NK细胞)施用于受试者。

这些方法的一些实施例进一步包括：获得休眠NK细胞；以及使休眠NK细胞在试管内、在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后将所述NK细胞施用于受试者。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的单倍体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是人造NK细胞。在任何这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

在这些方法的一些实例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。这些方法的一些实例进一步包括分离出活化NK细胞(和进一步将治疗有效量的活化NK细胞施用于受试者，例如本文所述的任何受试者)。在这些方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的时段(或本文所述的此范围的任一子范围)。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的皮肤的质地和/或外观在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内改善。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的皮肤在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的皱纹形成速率减少(例如至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的皱纹形成速率或未接受治疗的类似受试者的皱纹形成速率。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的皮肤着色在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内改善。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的皮肤质地在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内改善。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者毛发的质地和/或外观在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内改善。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者在一段时间(例如本文所述的任一时间段范围)内的白发形成速率减少(例如至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，减少至少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的白发形成速率或未接受治疗的类似受试者的白发形成速率。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的白发数量减少(例如至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的白发数量或未接受治疗的类似受试者的白发形成速率。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的脱发速率减少(例如至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的脱发速率或未接受治疗的类似受试者的脱发速率。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的毛发质地在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内改善。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者皮肤中的衰老真皮纤维母细胞数量在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内减少(例如至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，减少至少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的衰老真皮细胞数量或未接受治疗的类似受试者的衰老真皮细胞数量。

在这些方法的一些实施例中，受试者皮肤的质地和/或外观在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的改善可以利用本文所述或所属领域中已知的任何方法评估，包括检查皮肤病变、肤色和色素沉着、皮肤水分、温度、弹性和血管的存在、尺寸和形状。

在这些方法的一些实施例中，受试者毛发的质地和/或外观在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的改善可以利用本文所述或所属领域中已知的任何方法评估。

在这些方法的一些实施例中，所述时间段是例如一个月到十年，一个月到九年，一个月到八年，一个月到七年，一个月到六年，一个月到五年，一个月到四年，一个月到三年，一个月到两年，一个月到十八个月，一个月到十二个月，一个月到十个月，一个月到八个月，一个月到六个月，一个月到四个月，一个月到两个月一个月到六周，六周到十年，六周到九年六周到八年六周到七年，六周到六年，六周到五年，六周到四年，六周到三年，六周到两年，六周到十八个月，六周到十二个月，六周到十个月，六周到八个月，六周到六个月，六周到四个月，六周到两个月，两个月到十年，两个月到九年两个月到八年两个月到七年两个月到六年，两个月到五年两个月到四年，两个月到三年，两个月到两年，两个月到十八个月，两个月到十二个月，两个月到十个月，两个月到八个月两个月到六个月，两个月到四个月，四个月到十年，四个月到九年，四个月到八年，四个月到七年，四个月到六年，四个月到五年，四个月到四年，四个月到三年，四个月到两年，四个月到十八个月，四个月到十二个月，四个月到十个月，四个月到八个月，四个月到六个月，六个月到十年，六个月到九年，六个月到八年，六个月到七年，六个月到六年，六个月到五年，六个月到四年，六个月到三年，六个月到两年，六个月到十八个月，六个月到十二个月，六个月到十个月，六个月到八个月，八个月到十年，八个月到九年，八个月到八年，八个月到七年，八个月到六年，八个月到五年，八个月到四年，八个月到三年，八个月到两年，几个月到十八个月，八个月到十二个月，八个月到十个月，十个月到十年，十个月到九年，十个月到八年，十个月到七年，十个月到六年，十个月到五年，十个月到四年，十个月到三年，十个月到两年，十个月到十八个月，十个月到十二个月，十二个月到十年，十二个月到九年，十二个月到八年，十二个月到七年，十二个月到六年，十二个月到五年，十二个月到四年，十二个月到三年，十二个月到两年，十二个月到十八个月，十八个月到十年，十八个月到九年，十八个月到八年，十八个月到七年，十八个月到六年，十八个月到五年，十八个月到四年，十八个月到三年，十八个月到两年，两年到十年，两年到九年，两年到八年，两年到七年，两年到六年，两年到五年，两年到四年，两年到三年三年到十年，三年到九年，三年到八年，三年到七年，三年到六年，三年到五年，三年到四年，四年到十年，四年到九年，四年至八年，四年至七年，四年到六年，四年到五年，五年到十年，五年到九年，五年到八年，五年到七年，五年到六年，六年到十年，六年到九年，六年到八年，六年到七年，七年到十年，七年到九年，七年到八年，八年到十年，八年至九年，或九年到十年。

在这些方法的一些实施例中，受试者的年龄是约30至约35、约35至约40、约40至约45、约45至约50、约50至约55、约55至约60、约60至约65、约65至约70、约70至约75、约75至约80、约80至约85、约85至约90、约90至约95、约95至约100、约100至约105、约105至约110、约110至约115，或约115至约120。

有助于治疗受试者的肥胖症的方法

本文提供了有助于使有需要的受试者的肥胖症在一段时间(例如本文所述的任一时间段范围)内得到治疗的方法，包括将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂(例如本文所述或所属领域中已知的任一种NK细胞活化剂)施用于受试者。

本文还提供了有助于使有需要的受试者的肥胖症在一段时间(例如本文所述的任一时间段范围)内得到治疗的方法，包括将治疗有效数量的活化NK细胞(例如本文所述或所属领域中已知的任一种活化NK细胞)施用于受试者。

这些方法的一些实施例进一步包括：获得休眠NK细胞；以及使休眠NK细胞在试管内、在包括一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后将所述NK细胞施用于受试者。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的自体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是获自受试者的单倍体NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。在这些方法的一些实例中，休眠NK细胞是人造NK细胞。在这些方法中的任一种方法的一些实例中，休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

在这些方法的一些实例中，液体培养基是无血清液体培养基。在本文所述的任一种方法的一些实施例中，液体培养基是化学成分确定的液体培养基。这些方法的一些实例进一步包括分离出活化NK细胞(和进一步将治疗有效量的活化NK细胞施用于受试者，例如本文所述的任何受试者)。在这些方法的一些实施例中，接触步骤进行约2小时至约20天的时段(或本文所述的此范围的任一子范围)。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的质量减少(例如，至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的质量。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的身体质量指数(BMI)减少(例如，至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的BMI。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者从前期糖尿病恶化到2型糖尿病的速率减少(例如，至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或减少至少95％，或减少约5％至减少约99％(或本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者从前期糖尿病恶化到2型糖尿病的速率或未接受治疗的类似受试者从前期糖尿病恶化到2型糖尿病的速率。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的空腹血清葡萄糖水平减少(例如，至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的空腹血清葡萄糖水平。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的胰岛素敏感性增加(例如，至少增加5％，至少增加10％，至少增加15％，至少增加20％，至少增加25％，至少增加30％，至少增加35％，至少增加40％，至少增加45％，至少增加50％，至少增加55％，至少增加60％，至少增加65％，至少增加70％，至少增加75％，至少增加80％，至少增加85％，至少增加90％，至少增加95％，或至少增加99％，或增加约10％至增加约500％(本文所述的此范围的任一子范围)，例如相较于治疗之前的受试者的胰岛素敏感性。

在这些方法的一些实施例中，所述方法使得受试者的动脉粥样硬化严重程度减少(例如，至少减少5％，至少减少10％，至少减少15％，至少减少20％，至少减少25％，至少减少30％，至少减少35％，至少减少40％，至少减少45％，至少减少50％，至少减少55％，至少减少60％，至少减少65％，至少减少70％，至少减少75％，至少减少80％，至少减少85％，至少减少90％，或至少减少95％，或减少约5％至减少约99％(本文所述的此范围的任一子范围))，例如相较于治疗之前的受试者的动脉粥样硬化严重程度。

在这些方法的一些实施例中，受试者的肥胖症在一段时间(例如本文所述的任一时间段)内的治疗可以通过本文所述或所属领域中已知的任何方法评估，包括例如测量体重和/或身体尺寸、全身脂肪、全身或局部肥胖，和身体质量指数(BMI)。

在这些方法的一些实施例中，可以通过根据标准技术测定空腹血清葡萄糖水平或葡萄糖耐量来监测受试者对治疗的反应。在这些方法的一些实施例中，可以使用本文所述或本领域已知的任何方法来测量胰岛素敏感性，包括高胰岛素性正常血糖钳夹和静脉内葡萄糖耐量测试、体内稳态模型评估(HOMA)和定量胰岛素敏感性检查指数(QUICKI)。

在这些方法的一些实施例中，可使用本文所述或本领域已知的任何方法测量受试者的动脉粥样硬化严重程度，包括心脏导管插入术、多普勒超声检查、血压比较、MUGA/放射性核素血管造影、铊/心肌灌注扫描，和计算机断层扫描。

在这些方法的一些实施例中，时间段是一个月至十年(或本文所述的此范围的任一子范围)。

在这些方法的一些实施例中，受试者的年龄范围是约1至约5、约5至约10、约10至约15、约15至约20、约20至约25、约25至约30、约30至约35、约35至约40、约40至约45、约45至约50、约50至约55、约55至约60、约60至约65、约65至约70、约70至约75、约75至约80、约80至约85、约85至约90、约90至约95、约95至约100、约100至约105、约105至约110、约110至约115，或约115至约120。

其它治疗剂

本文所述的任一种方法中的一些实施例可进一步包括向受试者(例如本文所述的任一受试者)施用治疗有效量的一种或多种其它治疗剂。一种或多种其它治疗剂能够与NK细胞活化剂或活化NK细胞基本上同时施用于受试者(例如作为单一配制物或两种或更多种配制物施用于受试者)。在一些实施例中，可以在施用NK细胞活化剂或活化NK细胞之前向受试者施用一种或多种其它治疗剂。在一些实施例中，可以在向受试者施用一种或多种NK细胞活化剂或活化NK细胞之后向受试者施用一种或多种其它治疗剂。

其它治疗剂的非限制性实例包括：抗癌药物、活化受体激动剂、免疫检查点抑制剂、用于阻断HLA特异性抑制受体的试剂、糖原合成酶激酶(GSK)3抑制剂和抗体。

抗癌药的非限制性实例包括抗代谢药物(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲、甲氨蝶呤(methotrexate)、6-硫鸟嘌呤、克拉屈滨(cladribine)、奈拉滨(nelarabine)、喷司他汀(pentostatin)或培美曲塞(pemetrexed))、植物碱(例如，长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、喜树碱(camptothecin)、9-甲氧基喜树碱、狗牙花定碱(coronaridine)、紫杉醇(taxol)、乌檀根碱(naucleaoral)、二异戊二烯基化吲哚生物碱(diprenylated indolealkaloid)、山矢车菊碱(montamine)、希什金矢车菊碱(schischkiniin)、原小蘖碱(protoberberine)、小蘖碱(berberine)、血根碱(sanguinarine)、白屈菜红碱(chelerythrine)、白屈菜碱(chelidonine)、鹅掌楸碱(liriodenine)、山岗蠹吾碱(clivorine)、β-咔啉、脱甲氧基娃儿藤碱(antofine)、娃儿藤碱(tylophorine)、白叶藤碱(cryptolepine)、新白叶藤碱(neocryptolepine)、紫堇诺灵碱(corynoline)、依兰碱(sampangine)、咔唑、文珠兰碱(crinamine)、高山网球花碱(montanine)、玫瑰树碱(ellipticine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenisopide)、伊立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)或吖啶酮生物碱)、蛋白酶体抑制剂(例如，乳胞素(lactacystin)、双硫仑(disulfiram)、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯、马里佐米(marizomib)(盐孢菌素(salinosporamide)A)、奥普佐米(oprozomib)(ONX-0912)、地兰佐米(delanzomib)(CEP-18770)、环氧霉素(epoxomicin)、MG132、β-羟基β-甲基丁酸盐、硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib)或埃沙佐米(ixazomib))、抗肿瘤抗生素(例如，阿霉素(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、伊达比星(idarubicin)、放线菌素(actinomycin)、普卡霉素(plicamycin)、丝裂霉素(mitomycin)或博来霉素(bleomycin))、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(例如，伏立诺他(vorinostat)、帕比诺他(panobinostat)、贝林司他(belinostat)、吉韦诺他(givinostat)、阿贝辛他(abexinostat)、缩肽(depsipeptide)、恩替诺特(entinostat)、苯基丁酸盐、丙戊酸、曲古抑菌素(trichostatin)A、达西司他(dacinostat)、莫西司他(mocetinostat)、普瑞司他(pracinostat)、烟酰胺(nicotinamide)、坎比诺尔(cambinol)、替诺文(tenovin)1、替诺文6、斯汀诺(sirtinol)、利可司他(ricolinostat)、替非司他(tefinostat)、凯维林(kevetrin)、奎西司他(quisinostat)、雷米诺他(resminostat)、泰克地那林(tacedinaline)、西达本胺(chidamide)或赛利司他(selisistat))、酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿昔替尼(axitinib)、达沙替尼(dasatinib)、恩可非尼(encorafinib)、厄洛替尼(erlotinib)、伊马替尼(imatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)和舒尼替尼(sunitinib))和化疗剂(例如，全反式维甲酸、阿扎胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、去氧氟尿苷、埃博霉素(epothilone)、羟脲、伊马替尼、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星(valrubicin)、维罗非尼(vemurafenib)和来那度胺(lenalidomide))。化学治疗剂的其它实例包括烷化剂，例如二氯甲二乙胺、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、异环磷酰胺(ifosfamide)、噻替派(thiotepa)、六甲三聚氰胺(hexamethylmelamine)、白消安(busulfan)、六甲蜜胺(altretamine)、丙卡巴肼(procarbazine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、卡莫司汀(carmustine)、罗莫司汀(lumustine)、链脲霉素(streptozocin)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)。

活化受体激动剂的非限制性实例包括活化和增强NK细胞的细胞毒性的活化受体的任何激动剂，包括抗CD16抗体(例如抗CD16/CD30双特异性单克隆抗体(BiMAb))和基于Fc的融合蛋白。检查点抑制剂的非限制性实例包括抗PD-1抗体(例如MEDI0680)、抗PD-L1抗体(例如BCD-135、BGB-A333、CBT-502、CK-301、CS1001、FAZ053、KN035、MDX-1105、MSB2311、SHR-1316、抗PD-L1/CTLA-4双特异性抗体KN046、抗PD-L1/TGFβRII融合蛋白M7824、抗PD-L1/TIM-3双特异性抗体LY3415244、阿特珠单抗(atezolizumab)或阿维鲁单抗(avelumab))、抗TIM3抗体(例如TSR-022、Sym023或MBG453)和抗CTLA-4抗体(例如，AGEN1884、MK-1308或抗CTLA-4/OX40双特异性抗体ATOR-1015)。用于阻断HLA特异性抑制受体的试剂的非限制性实例包括莫那力单抗(monalizumab)(例如抗HLA-E NKG2A抑制受体单克隆抗体)。GSK3抑制剂的非限制性实例包括替格鲁西布(tideglusib)或CHIR99021。可用作另外的治疗剂的抗体的非限制性实例包括抗CD26抗体(例如YS110)、抗CD36抗体和可结合到NK细胞上的Fc受体(例如CD16)并活化所述受体的任何其它抗体或抗体构建体。在一些实施例中，其它治疗剂可以是胰岛素或二甲双胍(metformin)。

实例

本发明在以下实例中进行了进一步描述，所述实例不限制权利要求中所述的本发明范围。

实例1：使用多链多肽对C57BL/6小鼠进行免疫刺激

材料和方法

产生包括第一多肽和第二多肽的示例性多链多肽(本文所述的A型多链多肽)，其中第一多肽是两个TGFβRII域、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合体，并且第二多肽是两个TGFβRII域和人IL-15Rα链寿司域的可溶性融合体。

结果

C57BL/6小鼠的免疫刺激

用对照PBS溶液或用剂量分别为0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的多链多肽皮下处理野生型C57BL/6小鼠。处理后第四天，评估脾脏重量和脾脏中存在的各种免疫细胞类型的百分比。具体地说，产生单一脾细胞悬浮液且用荧光染料偶联的抗体(包括抗CD4、抗CD8、抗NK1.1和抗CD19)染色。利用流式细胞术评估经对照溶液或多链多肽处理的小鼠的脾脏中所存在的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、自然杀手(NK)细胞和CD19⁺B细胞的百分比。如图1A所示，经多链多肽处理的小鼠的脾脏重量随着多链多肽的剂量增加而增加。此外，经1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg多链多肽处理的小鼠的脾脏重量分别显著高于对照溶液处理的小鼠。如图1B所示，在多链多肽处理的小鼠的脾脏中，CD8+T细胞和NK细胞的百分比均随着多链多肽的剂量增加而增加。具体地说，经0.3mg/kg、3mg/kg和10mg/kg多链多肽处理的小鼠中的CD8⁺T细胞百分比高于对照物处理的小鼠，并且经0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg多链多肽处理的小鼠中的NK细胞百分比高于对照物处理的小鼠。这些结果证明示例性多链多肽能够刺激脾脏中的免疫细胞，尤其CD8⁺T细胞和NK细胞。

药物动力学

评估示例性多链多肽在野生型C57BL/6小鼠中的药物动力学。用3mg/kg剂量的多链多肽皮下处理小鼠。在不同时间点经由尾静脉收集血液，并且制备血清。用ELISA测定血清中的多链多肽浓度。简单来说，多链多肽是使用抗人组织因子抗体捕捉并且使用生物素化抗人TGFβ受体、过氧化酶偶联的抗生蛋白链菌素和ABTS底物加以检测。结果表明，示例性多链多肽的半衰期为12.66小时。

C57BL/6小鼠随时间的免疫刺激

为了评估多链多肽随时间的免疫刺激效应，用3mg/kg单次剂量的多链多肽处理小鼠，并且紧接在处理之后以及在处理之后的第16、24、48、72和92小时使用上述技术评估脾脏重量和脾脏中存在的免疫细胞类型百分比。如图2A所示，多链多肽处理的小鼠的脾脏重量在处理后的第48小时增加，并在接下来的44小时内继续增加。另外，如图2B所示，在多链多肽处理的小鼠的脾脏中，CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比在处理后的第48小时均增加，并在接下来的44小时内继续增加。这些结果进一步证明，示例性多链多肽能够随时间刺激脾脏中的免疫细胞，尤其CD8⁺T细胞和NK细胞。

CD8⁺T细胞和NK细胞的增殖增强和对颗粒酶B的表达增强

为了评估多链多肽诱导的免疫细胞增殖和细胞毒性潜力，用3mg/kg单次剂量的多链多肽处理小鼠，并且紧接在处理之后以及在处理之后的第16、24、48、72和92小时评估这些小鼠的脾脏。简单来说，产生单一脾细胞悬浮液并且用针对不同细胞类型的与荧光染料偶联的抗体染色，包括抗CD4、抗CD8、抗NK1.1和抗CD19，以及抗Ki67抗体(即，细胞增殖标志物)和抗颗粒酶B抗体(即，细胞毒性标志物)。通过流式细胞术分析每种免疫细胞类型的Ki67和颗粒酶B的平均荧光强度(MFI)。如图3A和3B所示，与紧接在处理(0小时)之后相比，NK细胞对Ki67和颗粒酶B的表达在第24小时以及随后评估的每个时间点增加。此外，与紧接在处理(0小时)之后相比，CD8⁺T细胞对Ki67和颗粒酶B的表达在第48小时以及随后评估的每个时间点增加。因此，单次剂量的多链多肽使得CD8⁺T细胞和NK细胞的增殖在处理后维持长达至少4天。

这些结果证明，多链多肽不仅使脾脏中的CD8⁺T细胞和NK细胞数量增加，而且使这些细胞的增殖和细胞毒性增强。

针对肿瘤细胞的细胞毒性

接下来，评估多链多肽在C57BL/6小鼠中活化的脾细胞针对肿瘤细胞的细胞毒性。小鼠莫洛尼(Moloney)白血病细胞(Yac-1)用CellTrace紫色标记并且用作肿瘤靶细胞。C57BL/6小鼠用3mg/kg单次剂量的多链多肽处理，并且在随后的多个时间点制备脾细胞且用作效应细胞。将靶标肿瘤细胞与效应细胞以10:1的效应子:靶标(E:T)比率混合并且在37℃下培育20小时。通过使用流式细胞术分析经紫色标记的碘化丙啶(PI)阳性Yac-1细胞来评估靶细胞存活率。使用下式计算Yac-1肿瘤抑制百分比：

Yac-1肿瘤抑制百分比＝(1-实验样品中的Yac-1活细胞数/不含脾细胞的样品中的Yac-1活细胞数)×100

如图4所示，多链多肽处理24小时或更长时间之后的小鼠的脾细胞显示针对Yac-1细胞的细胞毒性相较于未处理小鼠的脾细胞增强。

实例2：使用基于高脂肪饮食的2型糖尿病小鼠模型，对C57BL/6小鼠的免疫刺激

材料和方法

TGFRt15-TGFRs是多链嵌合多肽(本文所述的A型多链嵌合多肽)，其包括两个TGFβ结合域，其是人可溶性TGFβRII二聚体(aa24-159)。21t15-TGFRs是包括IL-21和TGFβ结合域的多链嵌合多肽(本文所述的A型多链嵌合多肽)。3t28是包括两个IL-2多肽的嵌合多肽(本文所述的B型嵌合多肽)。

结果

为了评估TGFRt15-TGFRs、2t2和21t15-TGFRs治疗2型糖尿病的作用，使用基于高脂肪饮食的2型糖尿病小鼠模型(得自杰克逊实验室的B6.129P2-ApoE^tm1Unc/J)。给小鼠饲喂对照饮食或高脂肪饮食11周。饲喂高脂肪饮食的小鼠亚群还用TGFRt15-TGFRs、2t2或21t15-TGFRs处理。饲喂对照饮食、高脂肪饮食的小鼠以及饲喂高脂肪饮食且经TGFRt15-TGFRs、2t2或21t15-TGFRs处理的小鼠在处理后的第4天进行评估。简单来说，产生单一脾细胞悬浮液且用荧光染料偶联的抗体(包括抗CD4、抗CD8、抗NK1.1和抗CD19)染色。使用流式细胞术评估每组小鼠的脾脏中存在的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、自然杀手(NK)细胞和CD19⁺B细胞的百分比。

如图5A所示，相较于未处理的小鼠，饲喂高脂肪饮食的小鼠在用TGFRt15-TGFRs处理之后，PBMC中的NK细胞百分比显著增加，但在21t15 TGFRs处理之后则不然。另外，相较于未处理的小鼠，在TGFRt15-TGFRs、2t2或21t15-TGFRs处理之后，PBMC中的CD8⁺T细胞百分比显著增加。此外，还使用抗Ki67抗体评估PBMC中的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、自然杀手(NK)细胞和CD19⁺B细胞的增殖。如图5B所示，用TGFRt15-TGFRs处理之后，增殖的NK细胞、CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的数量显著增加，但是用2t2或21t15-TGFRs处理之后则不然。

为了检查TGFRt15-TGFRs、2t2和21t15-TGFRs对动物皮肤和毛发外观和质地的影响，向小鼠饲喂对照饮食或高脂肪饮食7周，并且饲喂高脂肪饮食的小鼠亚群还用TGFRt15-TGFRs、2t2或21t15-TGFRs处理。处理后一周，评估小鼠的外观。饲喂高脂肪饮食且未处理的小鼠，或饲喂高脂肪饮食且经21t15-TGFRs处理的小鼠表现为毛发不整洁且打皱，且白发/脱发相较于饲喂对照饮食的小鼠增加(图6A、6B和6E)。惊人的是，相较于饲喂高脂肪饮食且不接受TGFRt15-TGFRs或2t2处理的小鼠(图6B)，饲喂高脂肪饮食且接受TGFRt15-TGFRs或2t2处理的小鼠表现为毛发整洁且更健康(白发/脱发更少)(图6C和6D)。具体而言，与对照小鼠相比，TGFRt15-TGFRs或2t2处理的小鼠显示出优良的皮肤和毛发外观和质地。这些结果表明，用TGFRt15-TGFRs或2t2处理可改善哺乳动物皮肤和毛发的外观和质地。

接下来，给小鼠饲喂对照饮食或高脂肪饮食9周，并且饲喂高脂肪饮食的小鼠亚群用TGFRt15-TGFRs、2t2或21t15-TGFRs处理。处理后四天，测量每组小鼠的空腹体重。相较于饲喂对照饮食的小鼠，饲喂高脂肪饮食且未处理的小鼠以及饲喂高脂肪饮食且经21t15-TGFRs处理的小鼠的空腹体重显著增加。然而，饲喂高脂肪饮食且经TGFRt15-TGFRs或2t2处理的小鼠的空腹体重相较于上述其它两个高脂肪饮食组减少。研究结束时(第9周)的小鼠空腹体重显示于图7中。

为了评估每组小鼠的空腹葡萄糖水平，给小鼠饲喂对照饮食或高脂肪饮食并且未处理或在第44、59和73天用TGFRt15-TGFRs、2t2或21t15-TGFRs处理。处理后4天测量每组小鼠的空腹血糖。如图8所示，第二和第三次剂量(分别在第59天和第73天)之后，饲喂高脂肪饮食且用2t2处理的小鼠(红线)的空腹血糖水平相较于饲喂高脂肪饮食、但未处理的小鼠(黄线)显著降低。饲喂高脂肪饮食且经TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的空腹血糖水平保持恒定(绿线)，而饲喂高脂肪饮食且经21t15-TGFRs处理的小鼠的空腹血糖水平增加(蓝线)。

实例3：化学疗法诱导的衰老B16F10黑色素瘤细胞表达NK配体

材料与方法

通过用多烯紫杉醇(7.5μM，西格玛(Sigma))处理细胞3天、随后在完全培养基中恢复4天来诱导B16F10黑色素瘤细胞的细胞衰老。通过用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA β-gal)将细胞染色来获知细胞衰老。简单来说，B16F10对照细胞和衰老细胞(B16F10-SNC)用PBS洗涤一次，用0.5％戊二醛(PBS(pH 7.2))固定30分钟。细胞在37℃下用X-gal溶液(1mg/mL X-gal、0.12mM K₃Fe[CN]₆、0.12mM K₄Fe[CN]₆，和1mM MgCl₂/PBS，pH 6.0)染色整夜，并且使用尼康(Nikon)光学显微镜成像。

结果

使用如上文所述的化学疗法诱导B16F10黑色素瘤细胞发生细胞衰老。如图9A所示，化学疗法诱导衰老的B16F10细胞(B16F10-SNC)就SAβ-gal染色而言呈阳性，而对照B16F10细胞则未染色。接下来，使用RT-qPCR分析衰老基因的表达，其中在第0天或分别在第4、8、12和16天诱导衰老之后分离出RNA。将表达水平相对于对照B16F10细胞归一化。如图9B-9D所示，在实验过程中，从衰老细胞分离出的RNA中p21、IL6和DPP4的表达上调。另外，如图9E和9F所示，在衰老细胞中也诱导了RATE1E和ULBP1(NK活化受体NKG2D配体)的表达，最高表达水平出现在第16天。这些结果表明，化学疗法诱导衰老的B16F10细胞经受活化NK细胞的细胞毒性比对照B16F10细胞强。

化疗诱导衰老的B16F10黑色素瘤细胞的干细胞特性的获取

为了检查化学疗法诱导衰老的B16F10黑色素瘤细胞是否具有干细胞特性，进行了集落形成分析。简单来说，在六孔板上每孔接种1000个细胞，并且每隔两天更换培养基。如图10A所示(以100倍放大率拍摄影像)，培养5周之后，衰老细胞能够形成集落。为了评估集落对干细胞标志物的表达，从集落中分离出RNA并且通过RT-qPCR测定Oct4和Notch4 mRNA的表达。相较于对照B16F10细胞，化学疗法诱导衰老的B16F10黑色素瘤细胞显示癌症干细胞标志物Oct4和Notch 4上调(图10B和10C)。此外，通过用针对CD44、CD24和CD133的抗体染色、随后进行流式细胞术来评估干细胞标志物CD44、CD24和CD133在细胞表面上的表达。如图10D-10F所示，化学疗法诱导衰老的干细胞(B16F10-SNC-CSC)中的双阳性群体(CD44⁺CD24⁺、CD44⁺CD133⁺和CD24⁺CD133⁺)相较于对照B16F10增加。

化学疗法诱导衰老(CIS)的具有干细胞特性的黑色素瘤细胞比对照B16F10细胞更具“迁移性”和“侵袭性”

使用迁移分析法分析了化学诱导衰老(CIS)的具有干细胞特性的黑色素瘤细胞(B16F10-SNC-CSC)的迁移特性。简单来说，将对照B16F10细胞和B16F10-SNC-CSC细胞接种于六孔培养板上且用p20移液管尖端损伤。在0、12和24小时后对细胞的运动进行成像。如图11A所示，在试管内迁移分析中，化学疗法诱导衰老(CIS)的具有干细胞特性的黑色素瘤细胞(B16F10-SNC-CSC)的迁移性大于对照B16F10细胞。

接下来，使用侵袭分析法分析化学疗法诱导衰老的具有干细胞特性的细胞(B16F10-SNC-CSC)的侵袭特性。在涂有基质胶的24孔插入式共培养池上进行侵袭分析。简单来说，将0.5x10⁶个对照B16F10细胞和B16F10-SNC-CSC细胞接种于上部腔室的无血清培养基中，而下部腔室用补充有10％FBS的培养基填充。培育16小时之后，去除过滤器上表面的细胞，而将过滤器下方的细胞固定且用0.02％结晶紫溶液染色。以100倍放大率对三个视野中的细胞数计数。如图11B和11C所示，化学疗法诱导衰老的具有干细胞特性的细胞在侵入基质胶涂膜时的侵袭性大于对照B16F10细胞。这些结果表明，化学疗法诱导衰老的B16F10肿瘤细胞能够重新获得其增殖能力、获得干细胞特征并且具有增强的迁移能力和侵袭力用于转移。

小鼠NK细胞对化学疗法诱导衰老的具有干细胞特性的细胞发挥的细胞毒性活性

为了在体内扩增NK细胞，将TGFRt15-TGFRs(10mg/kg)皮下注入C57BL/6小鼠维持4天。从这些小鼠获得脾脏且使用MACS Miltenyi柱纯化NK细胞。纯化的NK细胞然后在试管内利用2t2扩增(图12A)。

为了评估所扩增的NK细胞的细胞毒性，用CellTrace紫标记化学疗法诱导衰老的干细胞(B16F10-SNC-CSC)或对照B16F10细胞并且与活化的2t2小鼠NK细胞(从注射10mg/kgTGFRt15-TGFRs维持4天的C57BL/6小鼠的脾脏分离而得)一起以多种E:T比率在试管内培育16小时。B16F10-SNC-CSC和对照B16F10细胞以胰蛋白酶处理，洗涤且再悬浮于含有碘化丙啶(PI)溶液的完全培养基中，并且通过流式细胞术获知细胞毒性。如图12B所示，NK细胞杀死化学疗法诱导衰老的具有干细胞特性的细胞(B16F10-SNC-CSC)的有效性大于对照B16F10细胞。

黑色素瘤小鼠模型的组合疗法

评估TGFRt15-TGFRs治疗小鼠黑色素瘤模型的黑色素瘤的作用。简单地说，将5x10⁵个B16F10细胞皮下注射到C57BL/6小鼠中。当肿瘤体积达到约100mm³时，每隔两天用多烯紫杉醇(化学疗法)(5mg/kg)或TA99(200μg)作为单一药剂或以组合形式治疗小鼠，并且一周给予TGFRt15-TGFRs(3mg/kg)一次(图13A)。接受生理盐水、单独的多烯紫杉醇(化学疗法)/TA99或单独的TGFRt15-TGFRs的小鼠用作对照。每个实验组和对照组测试五只小鼠。每隔两天测量肿瘤体积。如图13B和13C所示，在同基因黑色素瘤小鼠模型中，相较于经生理盐水处理的小鼠或经单独的化学疗法或TA99治疗的小鼠，TGFRt15-TGFRs与化学疗法或TA99的组合减缓了肿瘤恶化。

实例4：化学治疗剂诱导人胰脏细胞系SW1990的衰老

材料和方法

β-半乳糖苷酶染色：使用市购的试剂盒(Cell Signaling Technology)，根据制造商说明书，通过标准β-半乳糖苷酶染色(pH 6.0)证实化学疗法诱导的衰老。次日，去除染色溶液，且用磷酸盐缓冲盐水洗涤细胞，且向孔中添加70％甘油。β-半乳糖苷酶阳性细胞将被染成蓝色，而未处理的对照细胞则不会被染色。

流式细胞术：获得一百万个对照细胞和衰老细胞且使用针对干细胞表面标志物的市购抗体(例如抗CD44和抗CD24抗体(Biolegend))、根据制造商说明书进行染色。然后洗涤细胞，并使用BD Celesta流式细胞仪进行分析。表现出干细胞样特性的细胞对CD44和CD24呈双重阳性。

基因表达分析：获得一百万个对照细胞和衰老细胞且使用Trizol(赛默飞世尔(Thermofisher))溶解，随后使用RNA分离试剂盒(凯杰(Qiagen))进行RNA纯化。使用凯杰的cDNA Quantitect试剂盒对RNA进行定量且转变为cDNA。cDNA然后作为标准的Taqman基因表达分析(赛默飞世尔)的模板用于定量衰老、干细胞标志物以及NK配体的相对丰度。

NK细胞细胞毒性分析：使用市购的NK分离试剂盒(Stem Cell)从健康的人供体(n＝2)中分离出NK细胞，并且使用细胞因子融合分子18t15-12s(100nM)活化整夜。次日，洗涤NK细胞以去除细胞因子分子，并且与CellTrace紫标记的未处理对照肿瘤细胞或化学疗法诱导衰老的肿瘤细胞以4:1的E:T比率混合20小时。次日，用胰蛋白酶消化细胞，并使用流式细胞仪分析每个孔的全部内含物，并分析细胞的抑制百分比。

结果

通过分别用2.5μM和6.25μM的化学治疗药物凯素(Abraxane)(塞尔基因公司(Celgene))和吉西他滨(Gemcitabine)(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))处理3天来诱导人胰脏肿瘤细胞系SW1990衰老。未处理的SW1990细胞用作对照。3天后更换培养基，且使细胞在培养基中静置4天。如图14所示，经化学治疗药物处理的衰老细胞的β-半乳糖苷酶染色呈阳性(蓝色)，而对照细胞未染色。处理后第4天、第11天和第22天，评估衰老细胞和对照细胞对衰老和干细胞标志物的表达。如图14所示，与对照细胞相比，衰老细胞对CD44和CD24的双重阳性染色随时间增加。此外，在第0天以及在处理后的第2、4和24天，还利用上述基因表达分析法分析化学疗法诱导衰老的SW1990细胞对其衰老标志物(包括DPP4、IL6和p21)、干细胞标志物(包括Oct3/4、CD24和CD44)和NK配体(包括连接素和MICA)的表达。如图15所示，所提到的所有标志物的表达随时间增加。

试管内活化的人NK细胞的细胞毒性

为了评估试管内活化的人NK细胞(经18t15-12s处理)的细胞毒性，通过分别用2.5μM和6.25μM的化学治疗药物凯素(塞尔基因公司)和吉西他滨(西格玛奥德里奇公司)处理3天来诱导人胰脏肿瘤细胞系SW1990的衰老。未处理的SW1990细胞用作对照。3天后更换培养基，且使细胞在培养基中静置30天。每4天更换一次培养基。获得活化NK细胞且利用上述NK细胞的细胞毒性分析法评估其对化学疗法诱导衰老的肿瘤细胞和未处理的对照肿瘤细胞的细胞毒性。如图16所示，活化NK细胞对对照SW1990细胞(SW1990)和衰老SW1990细胞(SW1990s)均显示出增加的细胞毒性。

实例5：IL-12/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，产生IL-12/IL-15RαSu DNA构建体(图17)。人IL-12亚单元序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列、人组织因子219序列和人IL-18序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智(Genewiz)合成。如下制造DNA构建体：用GS(3)接头将IL-12亚单元β(p40)连接到IL-12亚单元α(p35)以产生IL-12的单链形式，并且然后直接将IL-12序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-12/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

IL12/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:181)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚单元β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚单元α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

实例6：IL-18/TF/IL-15 DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，如下制造IL-18/TF/IL-15构建体(图18)：将IL-18序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-18/TF构建体与IL-15的N端编码区连接。由金唯智合成的IL-18/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:177)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例7：IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15 DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如Hughes,《人基因疗法(Hum Gene Ther)》16:457-72,2005中所述，所述文献以引用的方式并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu蛋白复合物(称为18t15-12s；图19和图20)。使用抗TF抗体亲和色谱法和尺寸排阻色谱法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化18t15-12s蛋白，得到由IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

IL12/IL-15RαSu融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:180)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚单元β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚单元α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

IL-18/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:176)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，使前导(信号序列)肽从完整的多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

实例8：通过免疫亲和色谱法纯化18t15-12s

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团^TM AKTA Avant蛋白纯化系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

18t15-12s的细胞培养物收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸pH 2.9洗脱。收集280nm吸光度，并且然后通过添加1M Tris碱将样品中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。图21显示18t15-12s复合物结合抗TF抗体亲和柱，其中TF是18t15-12s结合伴侣。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储以用于进一步的生化分析和生物活性测试。

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸pH 2.5剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且在2-8℃下存储。

实例9：18t15-12s的尺寸排阻色谱法

将通用电气医疗集团

200Increase 10/300GL凝胶过滤柱连接到通用电气医疗集团AKTA^TM Avant蛋白纯化系统。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.8mL/min。使用毛细管回路将200μL 1mg/mL的18t15-12s复合物注入色谱柱上。用1.25个柱体积的PBS追踪注射液。SEC色谱如图22所示。有一个主要的18t15-12s蛋白峰以及一个较小的高分子量峰，可能是由于18t15-12s二聚体或聚集体的糖基化程度不同所致。

实例10：18t15-12s的SDS-PAGE

为了测定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE分析纯化的18t15-12s蛋白质样品。凝胶用InstantBlue^TM染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。图23显示抗TF抗体亲和纯化的18t15-12s的示例SDS凝胶，其色带出现在预期分子量(66kDa和56kDa)处。

实例11：CHO-K1细胞中的18t15-12s糖基化

使用蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室(New EnglandBiolabs))，根据制造商说明书，证实CHO-K1细胞中的18t15-12s糖基化。图24显示脱糖基化和未脱糖基化的18t15-12s的示例SDS PAGE。脱糖基化降低18t15-12s的分子量，如图24泳道4所示。

实例12：18t15-12s复合物的重组蛋白定量

使用标准夹层ELISA方法检测并定量了18t15-12s复合物(图25-28)。抗人组织因子抗体充当捕获抗体，并且生物素化的抗人IL-12、IL-15或IL-18抗体(BAF 219、BAM 247、D045-6，皆出自安迪生物公司)充当检测抗体。还使用抗人组织因子捕获抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体检测纯化的18t15-12s蛋白复合物中的组织因子。将I43/抗TF抗体ELISA与相似浓度的纯化组织因子进行比较。

实例13：18t15-12s复合物的免疫刺激能力

为了评估18t15-12s复合物的IL-15免疫刺激活性，向200μL IMDM:10％FBS培养基中的32Dβ细胞(104个细胞/孔)中添加浓度递增的18t15-12s。将32Dβ细胞在37℃下培育3天。在第四天，添加WST-1增殖试剂(10μL/孔)，并且在4小时后，测量450nm吸光度，以基于WST-1裂解为可溶性甲臜染料来测定细胞增殖。评估人重组IL-15作为阳性对照的生物活性。如图29所示，18t15-12s展现32Dβ细胞的IL-15依赖性细胞增殖。与人重组IL-15相比，18t15-12s复合物展现降低的活性，可能是由于IL-18和组织因子与IL-15域的连接所致。

为了评估18t15-12s复合物中IL-12和IL-18的个别活性，将18t15-12s添加到200μL IMDM:10％热灭活的FBS培养基中HEK-Blue IL-12和HEK-Blue IL-18报告细胞(5×10⁴个细胞/孔；hkb-il12和hkb-hmil18，英伟杰(InvivoGen))中。将细胞在37℃下培育整夜。将20μl诱导的HEK-Blue IL-12和HEK-Blue IL-18报告细胞上清液添加到180μl QUANTI-Blue(英伟杰)中，并且在37℃下培育1-3小时。通过测量620nm吸光度来评估IL-12或IL-18活性。人重组IL-12或IL-18作为阳性或阴性对照加以评估。如图30和图31所示，18t15-12s复合物中的每个细胞因子域均保持特定生物活性。与人重组IL-18或IL-12相比，18t15-12s的活性降低，可能是由于IL-15和组织因子与IL-18域的连接以及IL-12与IL-15Rα寿司域的连接所致。

实例14：18t15-12s复合物诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生

用饱和量的IL-12(10ng/mL)、IL-15(50ng/mL)和IL-18(50ng/mL)整夜刺激纯化的NK细胞后，可离体诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生。这些记忆样特性已通过IL-2受体ɑ(IL-2Rɑ、CD25)、CD69(和其它活化标志物)的表达和增加的IFN-γ产生进行测量。为了评估18t15-12s复合物促进细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生的能力，用0.01nM至10000nM的18t15-12s复合物或个别细胞因子的组合(重组IL-12(10ng/mL)、IL-18(50ng/mL)和IL-15(50ng/mL))刺激纯化的人NK细胞(>95％CD56+)14-18小时。通过抗体染色和流式细胞术评估细胞表面CD25和CD 69表达以及细胞内IFN-γ水平。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司(StemCell Technologies))分离出CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×10⁶个/mL再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司(Gibco)，所述完全培养基补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司(Thermo Life Technologies))、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))。°在37℃、5％CO₂下用细胞因子hIL-12(10ng/mL)(Biolegend)、hIL-18(50ng/mL)(安迪生物公司)和hIL-15(50ng/mL)(NCI)的混合物或用0.01nM至10000nM 18t15-12s刺激细胞14-18小时。然后收获细胞，并且用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)进行表面染色30分钟。染色后，将细胞在FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone)，含0.5％BSA(EMD密理博(EMD Millipore))和0.001％叠氮化钠(西格玛(Sigma)))中洗涤(室温下1500RPM 5分钟)。洗涤两次后，使用BD FACSCelesta^TM流式细胞仪分析细胞(绘制的数据-平均荧光强度；图18A和图18B)。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×10⁶个/mL再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，所述完全培养基补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司))、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))。在37℃，5％CO2下用hIL-12(10ng/mL)(Biolegend)、hIL-18(50ng/mL)(安迪)和hIL-15(50ng/mL)(NCI)的细胞因子混合物或0.01nM至10000nM 18t15-12s复合物刺激细胞14-18小时。然后将细胞用10μg/mL布雷菲德菌素(Brefeldin)A(西格玛)和1×莫能菌素(Monensin)(eBioscience)处理4小时，然后收集并用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体染色30分钟。染色后，将细胞在FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone)，含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛))中洗涤(室温下1500RPM 5分钟)，并且在室温下固定10分钟。固定后，将细胞在1×通透缓冲液(eBioscience)中洗涤(室温下1500RPM 5分钟)，并且在室温下用IFN-γ-PEAb(Biolegend)染色30分钟。用1×通透缓冲液再次洗涤细胞，然后用FACS缓冲液洗涤。将细胞集结粒再悬浮于300μl FACS缓冲液中，并且使用BD FACSCelesta^TM流式细胞仪进行分析(绘制的IFN-γ阳性细胞百分比；图33)。

实例15：NK细胞在试管内对人肿瘤细胞的细胞毒性

在存在浓度递增的18t15-12s复合物或作为对照的细胞因子混合物的情况下，将人骨髓性白血病细胞K562(CellTrace紫标记)与纯化的人NK细胞一起培育。20小时后，收获培养物，用碘化丙啶(PI)染色，并且通过流式细胞术评估。如图34所示，18t15-12s复合物以与细胞因子混合物相似或更大的水平诱导人NK对K562的细胞毒性，其中18t15-12s复合物和细胞因子混合物均诱导比培养基对照更大的细胞毒性。

实例16：IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15 DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，产生IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15DNA构建体(图35和图36)。人IL-12亚单元序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列、人组织因子219序列和人IL-18序列由金唯智合成。如下制造DNA构建体：用GS(3)接头将IL-12亚单元β(p40)连接到IL-12亚单元α(p35)以产生IL-12的单链形式，直接将IL-12序列连接到IL-15RαSu序列，并且直接将IL-12/IL-15RαSu构建体连接到αCD16scFv的N端编码区。

IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv构建体的核酸序列如下(SEQ ID NO:226)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚单元β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚单元α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(抗人CD16轻链可变域)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT

(接头)

GGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCC

(抗人CD16重链可变域)

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

还如下制造构建体：将IL-18序列连接到组织因子219的N端编码区，并且将IL-18/TF构建体与IL-15的N端编码区连接(图36)。IL-18/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:177)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例17：IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes，《人基因疗法》16:457-72,2005，通过引用并入本文)中，然后将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv蛋白复合物(称为18t15-12s/αCD16；图37和图38)的分泌。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv蛋白复合物(称为18t15-12s/αCD16；图37和图38)的分泌，所述复合物可通过抗TF Ab亲和法和其它色谱方法纯化。在一些情况下，使信号肽从完整多肽中裂解以产生成熟形式。

IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQID NO:225)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚单元β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚单元α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(抗人CD16轻链可变域)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(抗人CD16重链可变域)

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

IL-18/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:221)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例18：IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15 DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，产生IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15 DNA构建体。人IL-18亚单元序列、人IL-15RαSu序列、人IL-12序列、人组织因子219序列和人IL-15序列由金唯智合成。如下制造DNA构建体：将IL-18直接连接到IL-15RαSu。还如下制造另一种构建体：将IL-12序列连接到人组织因子219形式的N端编码区，并且进一步将IL-12/TF构建体连接到IL-15的N端编码区。如上所述，使用IL-12的单链形式(p40-接头-p35)。

IL-18/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:320)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-12/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:321)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚单元β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚单元α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例19：IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005，通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-12/TF/IL-15:IL-18/IL-15RαSu蛋白复合物(称为12t15/s18)的分泌，所述复合物可通过抗TF Ab亲和法和其它色谱方法纯化。

IL-18/IL-15RαSu融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:322)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

IL-12/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:323)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚单元β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚单元α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，使前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

实例20：18t15-12s16复合物的重组蛋白定量

使用标准夹层ELISA方法检测并定量18t15-12s16复合物(包含IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv；IL-18/TF/IL-15)(图39)。抗人组织因子抗体/IL-2或抗TF Ab/IL-18充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-12或IL-18抗体(BAF 219、D045-6，均出自安迪生物公司)充当检测抗体。还使用抗人组织因子抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体来检测组织因子。

实例21：TGFβRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15 DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，产生TGFβRII/IL-15RαSu DNA构建体(图40)。人TGFβRII二聚体和人IL-21序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。如下制造DNA构建体：用接头将TGFβRII连接到另一TGFβRII以产生TGFβRII的单链形式，并且然后直接将TGFβRII单链二聚体序列连接到IL-15RαSu的N端编码区。

TGFβRII/IL-15RαSu构建体(包括信号序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:196)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβRII-第1片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT

(接头)

GGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGT

(人TGFβRII-第2片段)

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司域)

ATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA

另外，如下制造IL-21/TF/IL-15构建体：将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体连接到IL-15的N端编码区(图41)。IL-21/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:192)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人组织因子219)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

实例22：TGFβRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将TGFβRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15 DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005中所描述，其通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-21/TF/IL-15:TGFβRII/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-TGFRs；图42和图43)的分泌。使用抗TF抗体亲和色谱法和其它色谱方法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-TGFRs复合物。

TGFβRII/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:195)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβRII-第1片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人TGFβRII-第2片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

成熟的IL-21/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ IDNO:191)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，使前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

实例23：通过免疫亲和色谱法纯化21t15-TGFRs

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA^TM Avant蛋白纯化系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

21t15-TGFRs的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸pH 2.9洗脱。收集280nm吸光度，并且然后接着通过添加1M Tris碱将样品中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。图44显示21t15-TGFRs复合物结合抗TF抗体亲和柱，其中TF是21t15-TGFRs结合伴侣。将缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸pH 2.5剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且在2-8℃下存储。

实例24：21t15-TGFRs的尺寸排阻色谱

将通用电气医疗集团

200Increase 10/300GL凝胶过滤柱连接到通用电气医疗集团AKTA^TM Avant蛋白纯化系统。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.8mL/min。使用毛细管回路将200μL 1mg/mL的21t15-TGFRs复合物注入色谱柱上。然后用1.25个柱体积的PBS追踪注射液。SEC色谱如图45所示。有两个蛋白质峰，可能代表21t15-TGFRs的单体和二聚体形式。

实例25：21t15-TGFRs的SDS-PAGE

为了测定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE在还原条件下分析纯化的21t15-TGFRs复合蛋白质样品。凝胶用InstantBlue^TM染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。图46显示抗TF抗体亲和纯化的21t15-TGFRs的示例SDS凝胶，其色带出现在39.08kDa和53kDa处。

使用蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室)和制造商说明书，证实CHO细胞中的21t15-TGFRs糖基化。脱糖基化降低21t15-TGFRs的分子量，如图46泳道4所示。

实例26：21t15-TGFRs复合物的重组蛋白定量

使用标准夹层ELISA方法检测且定量21t15-TGFRs复合物(图47-50)。抗人组织因子抗体充当捕获抗体并且生物素化抗人IL-21、IL-15或TGFβRII充当检测抗体。还使用抗人组织因子捕获抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体来检测组织因子。将I43/抗TF抗体ELISA与相似浓度下的纯化组织因子进行比较。

实例27：21t15-TGFRs复合物的免疫刺激能力

为了评估21t15-TGFRs复合物的IL-15免疫刺激活性，向200μL IMDM:10％FBS培养基中的32Dβ细胞(10⁴个细胞/孔)中添加浓度递增的21t15-TGFRs，并且将细胞在37℃下培育3天。在第四天，然后添加WST-1增殖试剂(10μL/孔)，并且在4小时后，测量450nm吸光度，以基于WST-1裂解为可溶性甲臜染料来测定细胞增殖。评估人重组IL-15作为阳性对照的生物活性。如图51所示，21t15-TGFRs展现IL-15依赖性32Dβ细胞增殖。与人重组IL-15相比，21t15-TGFRs复合物减少了，这可能是由于IL-21和组织因子与IL-15域的连接所致。

另外，HEK-Blue TGFβ报告细胞(hkb-tgfb，英伟杰)用于测量21t15-TGFRs阻断TGFβ1活性的能力(图52)。将浓度递增的21t15-TGFRs与0.1nM TGFβ1混合并添加到200μLIMDM:10％热灭活FBS培养基中的HEK-Blue TGFβ报告细胞(2.5×10⁴个细胞/孔)中。将细胞在37℃下培育整夜。次日，将20μl诱导的HEK-Blue TGFβ报告细胞上清液添加到180μlQUANTI-Blue(英伟杰)中，并且在37℃下培育1-3小时。通过测量620nm吸光度来评估21t15-TGFRs活性。评估人重组TGFβRII/Fc活性作为阳性对照。

这些结果展现21t15-TGFRs复合物的TGFβRII域保持其捕获TGFβ1的能力。与人重组TGFβRII/Fc相比，21t15-TGFRs阻断TGFβ1活性的能力降低，可能是由于TGFβRII连接到IL-15Rα寿司域所致。

实例28：21t15-TGFRs复合物诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生

在用饱和量的细胞因子整夜刺激纯化的NK细胞后，可离体诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生。这些记忆样特性可通过IL-2受体ɑ(IL-2Rɑ、CD25)、CD69(和其它活化标记)的表达，和增加的IFN-γ产生来测量。为了评估21t15-TGFRs复合物促进细胞因子诱导的记忆样NK细胞产生的能力，用1nM至100nM的21t15-TGFRs复合物刺激纯化的人NK细胞(>95％CD56+)14-18小时。通过抗体染色和流式细胞术评估细胞表面CD25和CD 69表达以及细胞内IFN-γ水平。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×10⁶个/mL再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，所述完全培养基补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司))、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))。在37℃、5％CO2下用hIL-21(50ng/ml)(Biolegend)和hIL-15(50ng/ml)(NCI)的混合细胞因子或用1nM、10nM或100nM 21t15-TGFRs复合物整夜刺激细胞14-18小时。然后收获细胞，并且用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体进行表面染色30分钟。染色后，将细胞在FACS缓冲液(含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的1×PBS(Hyclone))中洗涤(室温下1500RPM 5分钟)。洗涤两次后，使用BD FACSCelesta^TM流式细胞仪分析细胞。(绘制的数据-平均荧光强度；图53和图54)。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以0.2×106个/mL再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，所述完全培养基补充有M L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司))、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))。在37℃、5％CO2下用hIL-21(50ng/ml)(Biolegend)和hIL-15(50ng/ml)(NCI)的混合细胞因子或1nM、10nM或100nM 21t15-TGFRs复合物整夜刺激细胞14-18小时。然后用10μg/ml布雷菲德菌素A(西格玛)和1×莫能菌素(eBioscience)处理细胞4小时。收获细胞，并且用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体进行表面染色30分钟。染色后，将细胞在FACS缓冲液(含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的1×PBS(Hyclone)中洗涤(室温下1500RPM 5分钟)，并且在室温下固定10分钟。固定后，将细胞用1×通透缓冲液(eBioscience)洗涤(室温下1500RPM，持续5分钟)，并且在室温下用细胞内IFN-γ-PE(Biolegend)染色30分钟。细胞用1×通透缓冲液再次洗涤，然后用FACS缓冲液洗涤。将细胞集结粒再悬浮于300μl FACS缓冲液中，并且使用BD FACSCelesta^TM流式细胞仪进行分析。(绘制的IFN-γ阳性细胞百分比；图55)。

实例29：NK细胞在试管内对肿瘤细胞的细胞毒性

在存在递增浓度的21t15-TGFRs复合物的情况下，将人骨髓性白血病细胞K562(CellTrace紫标记)与纯化的人NK细胞一起培育(使用StemCell人NK细胞纯化试剂盒(E:T比；2:1))。20小时后，收获培养物，用碘化丙啶(PI)染色，并且通过流式细胞术评估。如图56所示，与对照相比，21t15-TGFRs复合物诱导人NK对K562的细胞毒性。

实例30：IL-21/TF突变体/IL-15DNA构建体的产生和与TGFβRII/IL-15RαSuTGF得 到的融合蛋白复合物

在一个非限制性实例中，通过将IL-21直接连接到组织因子219突变体的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF突变体连接到IL-15的N端编码区来制造IL-21/TF突变体/IL-15DNA构建体。

IL-21/TF突变体/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:324，加阴影的核苷酸是突变体，并且突变密码子带有下划线)：

(信号序列)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人组织因子219突变体)

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-21/TF突变体/IL-15构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:325，取代的残基加阴影)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，使前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

在一些实施例中，IL-21/TF突变体/IL-15 DNA构建体可与TGFβRII/IL-15RαSuDNA构建体组合，使用如上所述的逆转录病毒载体转染到细胞中，并且以IL-21/TF突变体/IL-15和TGFβRII/IL-15RαSu融合蛋白形式表达。TGFβRII/IL-15RαSu融合蛋白的IL-15RαSu域结合到IL-21/TF突变体/IL-15融合蛋白的IL-15域，产生IL-21/TF突变体/IL-15:TGFβRII/IL-15RαSu复合物。

实例31：IL-21/IL-15RαSu和TGFβRII/TF/IL-15 DNA构建体的产生和所得融合蛋 白复合物

在一个非限制性实例中，通过将IL-21直接连接到IL-15RαSu亚单元序列来制造IL-21/IL-15RαSu DNA构建体。IL-21/IL-15RαSu构建体(包括信号序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:214)：

(信号序列)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-21/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:213)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

在一些情况下，使前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

在一些实施例中，IL-21/IL-15RαSu DNA构建体可与TGFβRII/TF/IL-15 DNA构建体组合，转染到如上所述的逆转录病毒载体中，并且以IL-21/IL-15RαSu和TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白形式表达。IL-21/IL-15RαSu融合蛋白的IL-15RαSu域结合到TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白的IL-15域，产生TGFβRII/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu复合物。

通过将TGFβRII序列连接到人组织因子219形式的N端编码区，并且然后将TGFβRII/TF构建体连接到IL-15的N端编码区，产生TGFβRII/TF/IL-15RαSu DNA构建体。如上所述，使用TGFβRII的单链形式(TGFβRII-接头-TGFβRII)。TGFβRII/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:239)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβRII-第1片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT

(接头)

GGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGT

(人TGFβRII-第2片段)

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:238)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβRII-第1片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人TGFβRII-第2片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例32.示例性单链嵌合多肽的产生产生了示例性的单链嵌合多肽，其包括作为抗CD3 scFv的第一靶标结合域、人可溶性组织因子域和作为抗CD28 scFv的第二靶标结合域(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)(图57)。这种单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下所示。

编码示例性单链嵌合多肽(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)的核酸(SEQ ID NO:158)

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCC

(αCD3轻链可变区)

CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGT

(接头)

GGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGC

(αCD3重链可变区)

CAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGC

(人组织因子219形式)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(αCD28轻链可变区)

GTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGC

(接头)

GGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCC

(αCD28轻链可变区)

GACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG

示例性单链嵌合多肽(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)(SEQ ID NO:157)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(αCD3轻链可变区)

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD3重链可变区)

QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(αCD28轻链可变区)

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD28重链可变区)

DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR

产生了第二示例性单链嵌合多肽，其包括作为抗-CD28 scFv的第一靶标结合域，人可溶性组织因子域和作为抗-CD3 scFv的第二靶标结合域(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)(图57)。该单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下所示。

编码示例性单链嵌合多肽(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)的核酸(SEQ ID NO:326)

(信号肽)

ATGAAATGGGTCACCTTCATCTCTTTACTGTTTTTATTTAGCAGCGCCTACAGC

(αCD28轻链可变区)

GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCC

(接头)

GGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGC

(αCD28重链可变区)

GACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGG

(人组织因子219)

AGCGGCACCACCAACACAGTGGCCGCCTACAATCTGACTTGGAAATCCACCAACTTCAAGACCATCCTCGAGTGGGAGCCCAAGCCCGTTAATCAAGTTTATACCGTGCAGATTTCCACCAAGAGCGGCGACTGGAAATCCAAGTGCTTCTATACCACAGACACCGAGTGCGATCTCACCGACGAGATCGTCAAAGACGTGAAGCAGACATATTTAGCTAGGGTGTTCTCCTACCCCGCTGGAAACGTGGAGAGCACCGGATCCGCTGGAGAGCCTTTATACGAGAACTCCCCCGAATTCACCCCCTATCTGGAAACCAATTTAGGCCAGCCCACCATCCAGAGCTTCGAACAAGTTGGCACAAAGGTGAACGTCACCGTCGAAGATGAGAGGACTTTAGTGCGGAGGAACAATACATTTTTATCCTTACGTGACGTCTTCGGCAAGGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCTAGCTCCTCCGGCAAGAAGACCGCCAAGACCAATACCAACGAATTTTTAATTGACGTGGACAAGGGCGAGAACTACTGCTTCTCCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACAGTGAACCGGAAGTCCACCGACTCCCCCGTGGAGTGCATGGGCCAAGAGAAGGGAGAGTTTCGTGAG

(αCD3轻链可变区)

CAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGT

(接头)

GGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGC

(αCD3重链可变区)

CAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC

示例性单链嵌合多肽(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)(SEQ ID NO:327)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(αCD28轻链可变区)

VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD28重链可变区)

DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(αCD3轻链可变区)

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(αCD3重链可变区)

QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS

将编码αCD3scFv/TF/αCD28scFv的核酸克隆到经修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes等人，《人基因疗法》16：457-72，2005)。将编码αCD3scFv/TF/αCD28scFv的表达载体转染到CHO-K1细胞中。表达载体在CHO-K1细胞中的表达允许分泌出可溶性αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽(称为3t28)，所述多肽能够通过抗TF Ab亲和法和其它色谱方法来纯化。

抗组织因子亲和柱用于纯化αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽。抗组织因子亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都使用4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

使用1M Tris碱将包括αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的细胞培养收集物调节到pH 7.4并且加载到经5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱(上文所述)。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸pH 2.9洗脱。收集A280洗脱峰，然后通过添加1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。图58中的数据表明抗组织因子亲和柱能够结合包含人可溶性组织因子域的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽。将缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储以用于进一步的生化分析和生物活性测试。

每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗组织因子亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％NaN₃中和所述柱，并且在2-8℃下存储。

使用与AKTA Avant系统(得自通用电气医疗集团)连接的Superdex 200Increase10/300GL凝胶过滤柱(得自通用电气医疗集团)，对αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽进行分析型尺寸排阻色谱(SEC)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。使用0.8mL/min的流速。使用毛细管回路，将两百微升的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽(1mg/mL)注射到柱上。注射单链嵌合多肽后，将1.25个柱体积的PBS流入柱中。SEC色谱如图59所示。数据显示存在3个蛋白质峰，可能代表αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的单体和二聚体或其它不同形式。

为了测定αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的纯度和蛋白质分子量，利用标准的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法、在还原条件下分析从抗组织因子亲和柱纯化的αCD3scFv/TF/αCD28scFv蛋白质样品。凝胶用InstantBlue染色约30分钟，并用纯化水脱色整夜。图60显示了使用抗组织因子亲和柱纯化的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的SDS凝胶。结果表明，纯化的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽在还原型SDS凝胶中具有预期的分子量(72kDa)。

实例33.αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的功能表征

基于ELISA的方法证实了αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽的形成。使用捕捉抗体、抗人组织因子抗体(I43)和检测抗体抗TF抗体，使用抗TF抗体(I43)/抗TF抗体特异性ELISA检测αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽(图61)。具有相似浓度的纯化组织因子蛋白用作对照。

执行进一步的试管内实验，以确定αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽是否能够活化人周边血液单核细胞(PBMC)。从血库获得新鲜的人白细胞，并使用密度梯度Histopaque(Sigma)分离周边血液单核细胞(PBMC)。对细胞进行计数，并且以0.2×10⁶个/mL再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，其补充有0.2mML-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司))、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))。在37℃、5％CO₂下用0.01nM到1000nM的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激细胞3天。72小时之后，收集细胞且用CD4-488、CD8-PerCP Cy5.5、CD25-BV421、CD69-APCFire750、CD62L-PE Cy7和CD44-PE特异性抗体(Biolegend)进行表面染色30分钟。表面染色之后，用含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone))洗涤细胞(室温下，1500RPM，5分钟)。两次洗涤后，将细胞再悬浮于300ΤL的FACS缓冲液中并通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)进行分析。图62和63中的数据表明αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽能够刺激CD8⁺和CD4⁺T细胞。

进一步进行实验，其中对使用Histopaque(西格玛)分离出的PBMC进行计数且以0.2×10⁶/mL再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(Gibco)，其补充有2mML-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。在37℃、5％CO₂下用0.01nM到1000nM的αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽刺激细胞3天。72小时之后，收集细胞且用CD4-488、CD8-PerCPCy5.5、CD25-BV421、CD69-APCFire750、CD62L-PE Cy7和CD44-PE(Biolegend)进行表面染色30分钟。表面染色后，将细胞在含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone))中洗涤(室温下1500RPM 5分钟)。两次洗涤后，将细胞再悬浮于300ΤL的FACS缓冲液中并通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)进行分析。数据再次表明αCD3scFv/TF/αCD28scFv单链嵌合多肽能够刺激CD4⁺T细胞的活化(图64)。

实例34：IL-7/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，产生IL-7/IL-15RαSu DNA构建体(参见图65)。人IL-7序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列和人组织因子219序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。如下制造DNA构建体：将IL-7序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-7/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

编码IL-7/IL-15RαSu构建体的第二嵌合多肽(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:206)：

(信号肽)

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCC

(人IL-7)

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC

(人IL-15Rα寿司域)

ATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA

IL-7/IL-15RαSu构建体的第二嵌合多肽(包括信号肽序列)如下(SEQ ID NO:205)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例35：IL-21/TF/IL-15 DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，通过将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体与IL-15的N端编码区连接，制造IL-21/TF/IL-15构建体(图66)。

由金唯智合成的编码IL-21/TF/IL-15构建体的第一嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:202)：

(信号肽)

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCC

(人IL-21片段)

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC

(人组织因子219)

TCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAA

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

包括前导序列的IL-21/TF/IL-15构建体的第一嵌合多肽是SEQ ID NO:201：

(信号肽)

MGVKVLFALICIAVAEA(SEQ ID NO:328)

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例36：IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15 DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005，通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-7s；图67和图68)。使用抗TF抗体亲和色谱法和尺寸排阻色谱法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-7s蛋白，得到由IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

在一些情况下，使前导(信号序列)肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

实例37：通过免疫亲和色谱法纯化21t15-7s

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团^TM AKTA Avant蛋白纯化系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

21t15-7s的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸pH 2.9洗脱。收集280nm吸光度，并且然后通过添加1M Tris碱将样品中和到pH7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下储存以用于进一步的生化分析和生物活性测试。

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸pH 2.5剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且在2-8℃下存储。

实例38：尺寸排阻色谱

将通用电气医疗集团

200Increase 10/300GL凝胶过滤柱连接到通用电气医疗集团AKTA^TM Avant蛋白纯化系统。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管回路将200μL 1mg/mL的7t15-21s复合物注入色谱柱上。用1.25个柱体积的PBS追踪注射液。

实例39：21t15-7s和21t15-TGFRs的SDS-PAGE

为了测定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE分析纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白质样品。凝胶将用InstantBlue^TM染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。

实例40：CHO-K1细胞中的21t15-7s和21t15-TGFRs糖基化

使用蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室)，根据制造商说明书，证实CHO-K1细胞中的21t15-7s糖基化或CHO-K1细胞中的21t15-TGFRs糖基化。

实例41：21t15-7s和21t15-TGFRs复合物的重组蛋白定量

使用标准夹层ELISA方法检测并定量21t15-7s复合物或21t15-TGFRs复合物。抗人组织因子抗体(IgG1)充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-21、IL-15或IL-7抗体(21t15-7s)或生物素化抗人IL-21、IL-15或TGF-βRII抗体(21t15-TGFRs)充当检测抗体。使用抗人组织因子捕获抗体和抗人组织因子抗体(IgG1)检测抗体检测纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白复合物中的组织因子。将抗TF抗体ELISA与相似浓度下的纯化的组织因子进行比较。

实例42：IL-21/IL-15RαSu DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu DNA构建体。人IL-21序列和人IL-15RαSu序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。通过将IL-21序列连接到IL-15RαSu序列来制造DNA构建体。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。参见图69。

实例43：IL-7/TF/IL-15 DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制造IL-7/TF/IL-15构建体。参见图70。

实例44：IL-21/IL-15Rα寿司域DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu的第二嵌合多肽。人IL-21和人IL-15Rα寿司域序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。通过将IL-21序列连接到IL-15Rα寿司域序列来制造DNA构建体。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

由金唯智合成的编码IL-21/IL-15RαSu域的第二嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:214)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-21/IL-15Rα寿司域的第二嵌合多肽(包括前导序列)如下(SEQ ID NO:213)：

(信号序列)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

实例45：IL-7/TF/IL-15 DNA构建体的产生

在一个非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制造IL-7/TF/IL-15的示例性第一嵌合多肽。由金唯智合成的编码IL-7/TF/IL-15的第一嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:210)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-7片段)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-7/TF/IL-15的第一嵌合多肽(包括前导序列)如下(SEQ ID NO:209)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

实例46：IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的分泌

将IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15 DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如Hughes,《人基因疗法》16:457-72,2005中所述，通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu蛋白复合物(称为7t15-21s)。使用抗TF抗体(IgG1)亲和色谱法和尺寸排阻色谱法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化7t15-21s蛋白，得到由IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。参见图71和图72。

实例47：7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体扩增原代自然杀伤(NK)细胞的能力

为了评估7t15-21s复合物扩增原代自然杀伤(NK)细胞的能力，将7t15-21s复合物和7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体添加到从新鲜人白细胞样品获得的NK细胞中。在37°和5％CO₂下，在25nM的抗TF IgG1或抗TF IgG4抗体存在或不存在下，用50nM的7t15-21s复合物刺激细胞。通过每48-72小时计数，将细胞维持在0.5×10⁶/mL，不超过2.0×10⁶/mL的浓度，并且用新鲜刺激剂补充培养基。经7t15-21s复合物或抗TF IgG1抗体或抗TF IgG4抗体或抗TF IgG4+7t15-21s复合物刺激的细胞维持直到第5天。观察到原代NK细胞在与21t15-7s复合物+抗TF IgG1抗体一起培育后扩增。

实例48：7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体使扩增的NK细胞活化

用7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体整夜刺激纯化的NK细胞后，离体诱导原代NK细胞。从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以1×10⁶个/mL再悬浮于平底24孔板中的1mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有4mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)、非必需氨基酸(赛默生命技术公司)、丙酮酸钠(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。在37°和5％CO₂下，在25nM的抗TF IgG1抗体存在或不存在下，用50nM的7t15-21s刺激细胞。每48-72小时对细胞计数，并且将其维持在0.5×10⁶/mL至2.0×10⁶/mL的浓度直到第14天。培养基定期补充新鲜刺激剂。收集细胞且在第3天用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体进行表面染色(Biolegend，且通过流式细胞术-Celeste-BD Bioscience进行分析)。观察到活化标志物CD25 MFI随7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体刺激而增加，但不随7t15-21s复合物刺激而增加。观察到活化标志物CD69 MFI随7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体和单独的7t15-21s复合物增加。

实例49：使用18t15-12s增加NK细胞中的葡萄糖代谢

进行了一组实验以测定18t15-12s的构建体对从人血中纯化的NK细胞的耗氧速率和细胞外酸化速率(ECAR)的影响。

在这些实验中，从血库中两个不同的人供体获得新鲜的人白细胞，并且使用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)通过负向选择分离NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且以2×10⁶个/mL再悬浮于平底24孔板中的1mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有4mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)、非必需氨基酸(赛默生命技术公司)、丙酮酸钠(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。在37℃和5％CO₂下，用(1)单独的培养基，(2)100nM 18t15-12s或(3)单一细胞因子重组人IL-12(0.25μg)、重组人IL-15(1.25μg)和重组人IL-18(1.25μg)的混合物刺激细胞整夜。次日，收获细胞，并且使用XFp分析仪(Seahorse Bioscience)对扩增的NK细胞进行细胞外通量分析。将收获的细胞洗涤且以每孔2.0×10⁵个细胞至少双重复接种，以用于OCR(耗氧速率)和ECAR(细胞外酸化速率)的细胞外通量分析。在含有2mM谷氨酰胺的Seahorse培养基中进行糖酵解应激测试。在分析过程中使用以下物质：10mM葡萄糖；100nM寡霉素；和100mM 2-脱氧-D-葡萄糖(2DG)。

数据显示，与用重组人IL-12、重组人IL-15和重组人IL-18的组合活化的相同细胞相比，18t15-12s引起耗氧速率(图73)和细胞外酸化速率(ECAR)显著提高(图74)。

实例50：7t15-16s21融合蛋白产生和表征

产生融合蛋白复合物，其包含抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和IL-7/TF/IL-15融合蛋白。人IL-7和IL-21序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区来制造构建体。

以下显示包含IL-7的构建体的核酸和蛋白质序列，所述IL-7连接到组织因子219的N端，继之与IL-15的N端连接。

IL-7/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-7/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将人CD16scFv序列连接到IL-15RαSu链的N端编码区，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制造构建体。以下显示包含抗CD16scFv的构建体的核酸和蛋白质序列，所述抗CD16scFv连接到IL-15RαSu链的N端，继之与IL-21的N端编码区连接。

抗CD16SscFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

((抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，使前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可能分泌的成熟形式。

将抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能(Transfer of a TCR gene derived from a patient with a marked antitumorresponse conveys highly active T-cell effector functions).《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为7t15-16s21；图75和图76)，其可通过基于抗TF IgG1抗体的亲和力和其它色谱方法纯化。

7t15-16s21对表达人CD16b的CHO细胞的结合

用含有人CD16b的pMC质粒转染CHO细胞，并且用10μg/mL杀稻瘟菌素(blasticidin)选择10天。稳定表达CD16b的CHO细胞用1.2μg/mL的含有抗人CD16 scFv的7t15-16s21或不含抗人CD16 scFv的18t15-12s染色作为阴性对照，并且然后用生物素化抗人组织因子和PE偶联的抗生蛋白链菌素染色。如图77A所示，只有含有7t15-16s21的抗人CD16scFv使细胞染色。如图77B所示，18t15-12s没有将表达人CD16b的CHO细胞染色。

使用ELISA检测7t15-16s21中的IL-15、IL-21和IL-7

96孔板用100μL含有(8μg/mL)抗TF IgG1的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。将7t15-16s21的连续稀释液(1:3比率)添加到孔中，并且在室温下培育60分钟。洗涤3次后，将50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL-21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL-7抗体(506602，安迪生物公司)添加到孔中并且在室温下培育60分钟。洗板3次，并且与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究实验室)一起在室温下以每孔100μL培育30分钟，随后洗涤4次并与100μl的ABTS在室温下培育2分钟。读取405nm吸光度。如图78A-78C所示，通过个别抗体检测7t15-16s21中的IL-15、IL-21和IL-7域。

7t15-16s21中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了分析7t15-16s21中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞，将7t15-16s21的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10⁴个细胞/孔接种在孔中。将连续稀释的7t15-16s21或IL-15添加到细胞中(图79)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加10μl WST1并在CO₂培养箱中在37℃下再培养3小时来检测细胞增殖。通过分析产生的甲臜染料的量来测量450nm吸光度。如图79所示，7t15-16s21和IL-15促进32Dβ细胞增殖，7t15-16s21和IL-15的EC₅₀分别为172.2pM和16.63pM。

抗TF抗体亲和柱纯化洗脱7t15-16s21的色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-16s21加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。然后用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。图80是曲线图，其显示了含有7t15-16s21蛋白的细胞培养上清液在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后的色谱特征曲线。如图80所示，抗TF抗体亲和柱结合含有TF的7t15-16s21。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

7t15-16s21的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

为了对7t15-16s21进行尺寸排阻色谱(SEC)分析，使用与AKTA Avant系统(通用电气医疗集团)连接的Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管回路将含有7t15-16s21于PBS中的样品注入Superdex 200柱，并且通过SEC进行分析。如图81所示，SEC结果显示7t15-16s21有两个蛋白质峰。

实例51：TGFRt15-16s21融合蛋白的产生和表征

产生包含抗人CD16scFv/IL-15RαSu/IL21和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图82和83)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，如下制造构建体：利用G4S(3)接头将两个TGFβ受体II序列连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，继之与IL-15的N端连接。

两个TGFβ受体II/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将抗人CD16scFv序列直接连接到IL-15RαSu链的N端编码区，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制造构建体。以下显示包含抗人CD16scFv的构建体的核酸和蛋白质序列，所述抗人CD16scFv连接到IL-15RαSu的N端，继之与IL-21的N端编码区连接。

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，使前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

将抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为TGFRt15-16s21)，其可通过基于抗TF IgG1的亲和力和其它色谱方法纯化。

TGFRt15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞之间的相互作用

用含有人CD16b的pMC质粒转染CHO细胞，并且用10μg/mL杀稻瘟菌素选择10天。稳定表达CD16b的细胞用1.2μg/mL含有抗人CD16 scFv的TGFRt15-16s21或不含抗人CD16scFv的7t15-21s染色作为阴性对照，并且用生物素化抗人组织因子抗体和PE偶联的抗生蛋白链菌素染色。如图84A和84B所示，含有抗人CD16scFv的TGFRt15-16s21显示阳性结合，而7t15-21s不显示结合。

TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估TGFRt15-16s21中TGFβRII的活性，分析TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(英伟杰)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10⁵个细胞/mL再悬浮于测试培养基(DMEM，10％热灭活的FCS，1×谷氨酰胺，1×抗生素-抗真菌剂和2×谷氨酰胺)中。在平底96孔板中，向每个孔中添加50μl细胞(2.5×10⁴个细胞/孔)，并且接着添加50μL 0.1nM TGFβ1(安迪生物公司)。然后将以1:3连续稀释制备的TGFRt15-16s21或TGFR-Fc(安迪生物公司)添加到板中，以达到200μL的总体积。在37℃下培育24小时后，将40μL诱导的HEK-Blue TGFβ细胞上清液添加到平底96孔板中的160μL预温热的QUANTI-Blue(英伟杰)中，并且在37℃下培育1-3小时。然后使用酶标仪(Multiscan Sky)在620-655nM下测定OD值。用GraphPad Prism 7.04计算每个蛋白质样品的IC₅₀。TGFRt15-16s21和TGFR-Fc的IC₅₀分别为9127pM和460.6pM。这些结果显示TGFRt15-16s21中的TGFβRII域能够阻断HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ-1的活性。

TGFRt15-16s21中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了分析TGFRt15-16s21中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞将TGFRt15-16s21的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10⁴个细胞/孔接种在孔中。将连续稀释的TGFRt15-16s21或IL-15添加到细胞中(图86)。在CO₂培养箱中在37℃下细胞培育3天。通过在第3天向每个孔中添加10μL WST1并在CO₂培养箱中在37℃下再培养3小时来检测细胞增殖。通过分析产生的甲臜染料的量来测量450nm吸光度。数据如图85所示。如图86所示，TGFRt15-16s21和IL-15促进32Dβ细胞增殖，TGFRt15-16s21和IL-15的EC₅₀分别为51298pM和10.63pM。

使用ELISA检测TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII

96孔板用100μL含有(8μg/mL)抗TF IgG1的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。添加以1:3的比连续稀释的TGFRt15-16s21，并且在室温下培育60分钟。洗涤三次后，每孔施加50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL-21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或200ng/mL的生物素化抗TGFβRII抗体(BAF241，安迪生物公司)，并且在室温下培育60分钟。洗涤三次后，与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究实验室)一起在室温下以每孔100μL培育30分钟，接着进行4次洗涤，并且与100μL的ABTS一起在室温下培育2分钟。读取405nm吸光度。如图87A-87C所示，TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII域通过相应抗体检测。

使用抗TF抗体亲和柱纯化洗脱TGFRt15-16s21的色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-16s21加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图88所示，抗TF抗体亲和柱与TGFRt15-16s21结合，其含有组织因子作为融合伴侣。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

对TGFRt15-16s21进行的还原型SDS-PAGE

为了测定TGFRt15-16s21蛋白的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)分析用抗TF抗体亲和柱纯化的蛋白质样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。

为了验证TGFRt15-16s21蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒，根据制造商说明书进行脱糖基化实验。图89显示样品在未脱糖基化(红色轮廓的泳道1)和脱糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下的还原型SDS-PAGE分析的结果。结果显示，当在CHO细胞中表达时，TGFRt15-16s21蛋白被糖基化。脱糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和48kDa)。泳道M载有10μL SeeBlue Plus2预染标准液。

实例52：7t15-7s融合蛋白的产生和表征

产生包含IL-7/TF/IL-15和IL-7/IL-15RαSu融合蛋白的融合蛋白复合物(图90和图91)。人IL-7、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区来制造构建体。

以下显示包含IL-7的构建体的核酸和蛋白质序列，所述IL-7连接到组织因子219的N端，继之与IL-15的N端连接。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将IL-7序列连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链的N端编码区来制造构建体。以下显示包含IL-7的构建体的核酸和蛋白质序列，所述IL-7连接到IL-15RαSu链的N端。

7s构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

7s融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

将抗IL-7/TF/IL-15和IL-7/IL-15RαSu构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌称为7t15-7s的可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu蛋白复合物，其可通过抗TF抗体IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱纯化洗脱7t15-7s的色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-7s加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图92所示，抗TF抗体亲和柱与含有组织因子(TF)作为融合伴侣的7t15-7s结合。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

7t15-7s在C57BL/6小鼠中的免疫刺激

7t15-7s是多链多肽(本文所述的A型多链多肽)，其包括作为人IL-7、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽(7t15)，和作为人IL-7和人IL-15受体α链的寿司域的可溶性融合物的第二多肽(7s)。

CHO细胞用IL7-TF-IL-15(7t15)和IL7-IL-15Ra寿司域(7s)载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化7t15-7s复合物。通过ELISA证明复合物中的IL-7、IL-15和组织因子(TF)组分，如图93所示。人源化抗TF单克隆抗体(抗TF IgG1)作为捕获抗体用于测定7t15-7s中的TF，并且生物素化抗人IL-15抗体(安迪生物公司)和生物素化抗人IL-7抗体(安迪生物公司)作为检测抗体用于分别检测7t15-7s中的IL-15和IL-7，随后使用过氧化酶偶联的抗生蛋白链菌素(杰克逊免疫研究实验室(Jackson ImmunoResearch Lab))和ABTS底物(Surmodics IVD,Inc.)。

将7t15-7s以10mg/kg皮下注射到C57BL/6小鼠中，以测定7t15-7s在体内的免疫刺激活性。用PBS皮下处理的C57BL/6小鼠用作对照。处理后第4天收集小鼠脾脏并称重。制备单一脾细胞悬浮液，并且用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1抗体染色，通过流式细胞术分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比。结果表明，基于脾脏重量，7t15-7s有效扩增脾细胞(图94A)，并且具体地说，CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比高于对照物处理的小鼠(图94B)。

实例53：TGFRt15-TGFRs融合蛋白产生和表征

产生融合蛋白复合物，其包含TGFβ受体II/IL-15RαSu和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(图95和图96)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，如下制造构建体：利用G4S(3)接头将两个TGFβ受体II序列连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端。

两个TGFβ受体II/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链来构建构建体。以下显示包含TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到IL-15RαSu的N端。

TGFβ受体II/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

两个TGFβ受体II/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(两个人TGFβ受体II胞外域)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

将TGFβR/IL-15RαSu和TGFβR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性TGFβR/TF/IL-15:TGFβR/IL-15RαSu蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs)，其可通过抗-TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

TGFRt15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估TGFRt15-TGFRs中TGFβRII的活性，分析TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(英伟杰)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10⁵个细胞/mL再悬浮于测试培养基(DMEM，10％热灭活的FCS，1×谷氨酰胺，1×抗生素-抗真菌剂和2×谷氨酰胺)中。在平底96孔板中，向每个孔中添加50μL细胞(2.5×10⁴个细胞/孔)，并且接着添加50μL 0.1nM TGFβ1(安迪生物公司)。然后将以1:3连续稀释制备的TGFRt15-16s21或TGFR-Fc(安迪生物公司)添加到板中，以达到200μL的总体积。在37℃下培育24小时后，将40μL诱导的HEK-Blue TGFβ细胞上清液添加到平底96孔板中的160μL预温热的QUANTI-Blue(英伟杰)中，并且在37℃下培育1-3小时。然后使用酶标仪(Multiscan Sky)在620-655nM下测定OD值(图97)。用GraphPad Prism 7.04计算每个蛋白质样品的IC₅₀。TGFRt15-TGFRs和TGFR-Fc的IC₅₀分别为216.9pM和460.6pM。这些结果显示TGFRt15-TGFRs中的TGFβRII域能够阻断HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1的活性。

TGFRt15-TGFRs中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估TGFRt15-TGFRs中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞将TGFRt15-TGFRs的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10⁴个细胞/孔接种在孔中。将连续稀释的TGFRt15-TGFRs或IL-15添加到细胞中(图98)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加10μL WST1并在CO₂培养箱中在37℃下再培养3小时来检测细胞增殖。通过分析产生的甲臜染料的量来测量450nm吸光度。如图98所示，TGFRt15-TGFRs和IL-15促进了32Dβ细胞增殖，TGFRt15-16s21和IL-15的EC₅₀分别为1901pM和10.63pM。

使用ELISA用对应抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII域

96孔板用100μL含有(8μg/mL)抗TF IgG1的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。TGFRt15-TGFRs以1:3连续稀释液添加，并且在室温下培育60分钟。洗涤3次后，将50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)或200ng/mL的生物素化抗TGFbRII抗体(BAF241，安迪生物公司)添加到孔中并且在室温下培育60分钟。接着洗板3次，并且以每孔100μL添加0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究实验室)，并且在室温下培育30分钟，接着洗涤4次并与100μL的ABTS在室温下培育2分钟。读取405nm吸光度。如图81A和81B所示，通过个别抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII域。

抗TF抗体亲和柱纯化洗脱TGFRt15-TGFRs的色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-TGFRs加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图100所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的TGFRt15-TGFRs结合。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

TGFRt15-TGFRs的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

将Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)连接到AKTA Avant系统(来自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管回路将含有TGFRt15-TGFRs于PBS中的样品注入Superdex 200柱，并且通过SEC分析。样品的SEC色谱如图101所示。SEC结果显示TGFRt15-TGFRs存在四个蛋白质峰。

TGFRt15-TGFRs的还原型SDS-PAGE分析

为了测定TGFRt15-TGFRs蛋白的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的蛋白质样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。

为了验证TGFRt15-TGFRs蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒和制造商说明书进行脱糖基化实验。图102显示样品在未脱糖基化(红色轮廓的泳道1)和脱糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下的还原型SDS-PAGE分析。结果显示，当在CHO细胞中表达时，TGFRt15-TGFRs蛋白被糖基化。脱糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和39kDa)。泳道M载有10ulSeeBlue Plus2预染标准液。

TGFRt15-TGFRs在C57BL/6小鼠中的免疫刺激活性

TGFRt15-TGFRs是多链多肽(本文所述的A型多链多肽)，其包括作为两个TGFβRII域、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽，以及作为两个TGFβRII域和人IL-15受体α链的寿司域的可溶性融合物的第二多肽。

野生型C57BL/6小鼠用对照溶液或0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg TGFRt15-TGFRs皮下处理。处理后四天，评估脾脏重量和脾脏中存在的各种免疫细胞类型的百分比。如图103A所示，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。此外，分别用1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量高于对照溶液处理的小鼠。另外，评估对照物处理和TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中存在的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、NK细胞和CD19⁺B细胞的百分比。如图103B所示，在用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中，CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比均随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。具体来说，与对照处理的小鼠相比，用0.3mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中CD8⁺T细胞的百分比更高，并且与对照处理的小鼠相比，用0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中NK细胞的百分比更高。这些结果证明TGFRt15-TGFRs能够刺激脾脏中的免疫细胞，尤其CD8⁺T细胞和NK细胞。

评估TGFRt15-TGFRs分子在野生型C57BL/6小鼠中的药代动力学。用3mg/kg剂量的TGFRt15-TGFRs皮下处理小鼠。在多个时间点从尾静脉排出小鼠血液，并且制备血清。用ELISA测定小鼠血清中的TGFRt15-TGFRs浓度(捕获：抗人组织因子抗体；检测：生物素化抗人TGFβ受体抗体，随后使用过氧化酶偶联的抗生蛋白链菌素和ABTS底物)。结果显示，TGFRt15-TGFRs在C57BL/6小鼠中的半衰期为12.66小时。

制备小鼠脾细胞以便评估TGFRt15-TGFRs在小鼠中随时间推移的免疫刺激活性。如图104A所示，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量在处理后48小时增加，并且随时间持续增加。另外，评估对照物处理和TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中存在的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、NK细胞和CD19⁺B细胞的百分比。如图104B所示，在用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中，在处理后48小时，CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比均增加，并且在单次剂量处理后随时间推移越来越高。这些结果进一步证明TGFRt15-TGFRs能够刺激脾脏中的免疫细胞，尤其CD8⁺T细胞和NK细胞。

此外，在单次剂量(3mg/kg)TGFRt15-TGFRs后从小鼠分离的脾细胞中，评估基于脾细胞Ki67表达的免疫细胞的动态增殖和基于颗粒酶B表达的细胞毒性潜力。如图105A和105B所示，在用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中，在处理后24小时，NK细胞对Ki67和颗粒酶B的表达增加，并且CD8⁺T细胞和NK细胞对其的表达在单次剂量处理后48小时和后续时间点均增加。这些结果证明TGFRt15-TGFRs不仅增加CD8⁺T细胞和NK细胞的数目，而且增强这些细胞的细胞毒性。TGFRt15-TGFRs的单次剂量处理引起CD8⁺T细胞和NK细胞增殖至少4天。

还评估来自用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。用CellTrace紫标记小鼠莫洛尼(Moloney)白血病细胞(Yac-1)，并且将其用作肿瘤靶细胞。在处理后的多个时间点，由TGFRt15-TGFRs(3mg/kg)处理的小鼠脾脏制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比率＝10:1混合，并且在37℃下培育20小时。通过使用流式细胞术分析碘化丙啶阳性、紫色标记的Yac-1细胞来评估靶细胞存活率。使用以式计算Yac-1肿瘤抑制的百分比：(1-[实验样品中的Yac-1活细胞数]/[不含脾细胞的样品中的Yac-1活细胞数])×100。如图106所示，来自TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性比对照小鼠脾细胞强。

响应于化疗和/或TGFRt15-TGFRs的肿瘤尺寸分析

将胰脏癌细胞(SW1990，

CRL-2172)皮下(sc)注射到C57BL/6scid小鼠(杰克逊实验室(The Jackson Laboratory)，001913，2×10⁶个细胞/小鼠，在100μL HBSS中)中以建立胰脏癌小鼠模型。注射肿瘤细胞之后的第二周，开始使用凯素(塞尔基因公司，68817-134，5mg/kg，i.p.)和吉西他滨(西格玛奥德里奇公司，G6423，40mg/kg，i.p.)的组合对这些小鼠以腹膜内途径进行化学疗法，接着在2天内用TGFRt15-TGFRs(3mg/kg，s.c.)进行免疫疗法。以上程序视为一个治疗周期，并且重复另外3个周期(1个周期/周)。对照组被设置为注射SW1990的小鼠，其接受PBS、化学疗法(吉西他滨和阿布拉生)或单独的TGFRt15-TGFRs。在整个治疗周期，每隔一天测量并记录每只动物的肿瘤尺寸，直到注射SW1990细胞后2个月实验终止。按组分析肿瘤体积的测量，并且结果表明，与PBS组相比，接受化学疗法和TGFRt15-TGFRs组合的动物的肿瘤明显更小，而化学疗法和单独TGFRt15-TGFRs疗法均不能如组合那样充分发挥作用(图107)。

试管内衰老B16F10黑色素瘤模型

接下来，评估活化的小鼠NK细胞在试管内杀死衰老的B16F10黑色素瘤细胞。用CellTrace紫标记B16F10衰老细胞(B16F10-SNC)细胞，并且与2t2活化的小鼠NK细胞(从注射TGFRt15-TGFRs10 mg/kg 4天的C57BL/6小鼠的脾脏中分离)一起在试管内以不同E:T比率培育16小时。将细胞用胰蛋白酶消化，洗涤并再悬浮在含有碘化丙啶(PI)溶液的完全培养基中。通过流式细胞术评估细胞毒性(图108)。

实例54：7t15-21s137L(长版)融合蛋白产生和表征

产生包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图109和图110)。具体来说，如下制造构建体：将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7的构建体的核酸和蛋白质序列，所述IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L的核酸和蛋白质序列。21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人，来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为7t15-21s137L)，其可通过抗TF抗体IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱纯化洗脱7t15-21s137L的色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-21s137L加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图111所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的7t15-21s137L结合。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。图112显示7t15-21s137L的分析型SEC特征曲线。

实例55：7t15-21s137L(短版)融合蛋白产生和表征

产生包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物。具体来说，如下制造构建体：将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7的构建体的核酸和蛋白质序列，所述IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L(短版)的核酸和蛋白质序列。21s137L(短版)构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137配体短版)

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC

21s137L(短版)构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137配体短版)

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L(短版)和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人，来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为7t15-21s137L(短版))，其可通过抗TF抗体IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

7t15-21s137L(短版)对CD137(4.1BB)的结合

第1天，用100μL含有(2.5μg/mL)GAH IgG Fc(G-102-C，安迪生物科技公司)的R5(涂布缓冲液)或仅R5涂布96孔板且在4℃下培育整夜。第2天，洗板三次，并且在37℃下用300μL含有1％BSA的PBS阻断2小时。以100μL/孔添加10ng/mL的4.1BB/Fc(838-4B，安迪生物公司)，并且将其在室温下培育2小时。洗涤三次后，将7t15-21s137L或7t15-21s以1/3比率连续稀释(从10nM开始)，并且在4℃下培育整夜。在第3天，在3次洗涤后，将300ng/mL的生物素化抗hTF抗体(BAF2339，安迪生物公司)以每孔100μL添加，并且在室温下培育2小时。然后洗板三次，并且与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究实验室)一起以每孔100μL培育30分钟，接着洗涤3次并与100μL的ABTS在室温下培育2分钟。读取405nm吸光度。如图113所示，与7t15-21s相比，7t15-21s137L(短版)显示与4.1BB/Fc(蓝线)的显著相互作用。

用ELISA检测7t15-21s137L(短版)中的IL-15、IL-21和IL-7

96孔板用100μL含有(8μg/mL)抗TF抗体IgG1的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。添加以1:3比率连续稀释的7t15-21s137L(短版)，并且在室温下培育60分钟。洗涤三次后，将50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL7抗体(506602，安迪生物公司)添加到孔中，并且在室温下培育60分钟。洗涤三次并且与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究实验室)以每孔100μL在室温下培育30分钟后，接着进行四次洗涤，并且与100μL的ABTS在室温下培育2分钟。读取405nm吸光度。如图114A-114C所示，通过对应的抗体检测7t15-21s137L(短版)中的IL-15、IL-21和IL-7域。

7t15-1s137L(短版)中的IL-15促进含IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖

为了评估7t15-21s137L(短版)中IL-15的活性，将7t15-21s137L(短版)与重组IL-15在促进表达IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖的方面进行比较。将IL-15依赖性CTLL2细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10⁴个细胞/孔接种到孔中。将连续稀释的7t15-21s137L(短版)或IL-15添加到细胞中(图115)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加10μL WST1，并且在CO₂培养箱中在37℃下再培养3小时来检测细胞增殖。通过测量450nm吸光度来分析产生的甲臜染料的量。如图115所示，7t15-21s137L(短版)和IL-15促进CTLL2细胞增殖。7t15-21s137L(短版)和IL-15的EC₅₀分别为55.91pM和6.22pM。

7t15-1s137L(短版)中的IL-21促进含IL21R的B9细胞增殖

为了评估7t15-21s137L(短版)的IL-21活性，将7t15-21s137L(短版)与重组IL-21在促进表达IL-21R的B9细胞增殖的方面进行比较。将含有IL-21R的B9细胞用RPMI-10％FBS洗涤5次，并且以1×10⁴个细胞/孔接种到孔中。将连续稀释的7t15-21s137L(短版)或IL-21添加到细胞中(图116)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞5天。通过在第5天向每个孔中添加10μL WST1，并且在CO₂培养箱中在37℃下再培养4小时来检测细胞增殖。通过测量450nm吸光度来分析产生的甲臜染料的量。如图116所示，7t15-21s137L(短版)和IL-21促进B9细胞增殖。7t15-21s137L(短版)和IL-21的EC₅₀分别为104.1nM和72.55nM。

实例56：7t15-TGFRs融合蛋白产生和表征

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图117和图118)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、IL-15和IL-7序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，如下制造构建体：将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7的构建体的核酸和蛋白质序列，所述IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到IL-15RαSu的N端。

TGFRs构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

TGFRs融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

7t15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估7t15-TGFRs中TGFβR的活性，分析7t15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(英伟杰)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10⁵个细胞/mL再悬浮于测试培养基(DMEM，10％热灭活的FCS，1×谷氨酰胺，1×抗生素-抗真菌剂和2×谷氨酰胺)中。在平底96孔板中，向每个孔中添加50μL细胞(2.5×10⁴个细胞/孔)，并且接着添加50μL 0.1nM TGFβ1(安迪生物公司)。然后将以1:3连续稀释制备的7t15-TGFRs或TGFR-Fc(安迪生物公司)添加到板中，以达到200μL的总体积。在37℃下培育24小时后，将40μL诱导的HEK-Blue TGFβ细胞上清液添加到平底96孔板中的160μL预温热的QUANTI-Blue(英伟杰)中，并且在37℃下培育1-3小时。然后使用酶标仪(Multiscan Sky)在620-655nM下测定OD值。数据如图119所示。用GraphPad Prism 7.04计算每个蛋白质样品的IC₅₀。7t15-TGFRs和TGFR-Fc的IC₅₀分别为1142pM和558.6pM。这些结果显示7t15-TGFRs中的TGFβR能够阻断HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1的活性。

用ELISA检测7t15-TGFRs中的IL-15、TGFβRII和IL-7

96孔板用100μL含有(8μg/mL)抗TF抗体IgG1的R5(涂布缓冲液)涂布并且在室温(RT)下培育2小时。洗板3次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。添加7t15-TGFRs的连续稀释液(1:3比率)，并且在室温下培育60分钟。洗涤3次后，添加50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、200ng/mL的生物素化抗TGFbRII抗体(BAF241，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL-7抗体(506602，安迪生物公司)并在室温下培育60分钟。洗涤三次后，与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究实验室)一起在室温下以每孔100μL培育30分钟，接着进行4次洗涤，并且与100μL ABTS在室温下培育2分钟。读取405nm吸光度。如图120A-120C所示，通过对应的抗体检测7t15-TGFRs中的IL-15、TGFR和IL-7。

7t15-TGFRs中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估7t15-TGFRs中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞，将7t15-TGFRs与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10⁴个细胞/孔接种在孔中。将连续稀释的7t15-TGFRs或IL-15添加到细胞中(图121)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加10μL WST1并在CO₂培养箱中在37℃下再培养3小时来检测细胞增殖。通过测量450nm吸光度来分析产生的甲臜染料的量。如图121所示，7t15-TGFRs和IL-15促进32Dβ细胞增殖，7t15-TGFRs和IL-15的EC₅₀分别为126nM和16.63pM。

使用抗TF抗体亲和柱纯化洗脱7t15-TGFRs的色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-TGFRs加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图122所示，抗TF抗体亲和柱可结合含有TF作为7t15-TGFRs的融合伴侣的7t15-TGFRs。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

7t15-TGFRs的还原型SDS-PAGE分析

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的7t15-TGFRs蛋白样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。

为了验证7t15-TGFRs蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒和制造商说明书进行脱糖基化实验。图123显示样品在未脱糖基化(红色轮廓的泳道1)和脱糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下的还原型SDS-PAGE分析。这些结果显示所述蛋白质在CHO细胞中表达时被糖基化。脱糖基化后，纯化的样品在还原型SDS凝胶中显示预期的分子量(55kDa和39kDa)。泳道M上载有10ul SeeBluePlus2预染标准液。

7t15-TGFRs的表征

7t15-TGFRs是多链多肽(本文所述的A型多链多肽)，其包括作为人IL-7、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽(7t15)，以及作为单链的两个TGFβRII域和人IL-15受体α链寿司域的可溶性融合物的第二多肽(TGFRs)。

CHO细胞用7t15和TGFRs载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化7t15-TGFRs复合物。如图124所示，通过ELISA证明复合物中的IL-7、IL-15、TGFβ受体和组织因子(TF)组分。使用人源化抗TF抗体单克隆抗体(抗TF抗体IgG1)作为捕获抗体来确定7t15-TGFRs中的TF，并且使用针对人IL-15抗体(安迪生物公司)、人IL-7(Biolegend)、抗TGFβ受体(安迪生物公司)的生物素化抗体作为检测抗体来分别确定7t15-TGFRs中的IL-7、IL-15和TGFβ受体。然后使用过氧化酶偶联的抗生蛋白链菌素(杰克逊免疫研究实验室)和ABTS底物(Surmodics IVD，Inc.)检测所结合的生物素化抗体。通过ELISA分析结果(图124)。

C57BL/6小鼠中7t15-TGFRs的体内表征

为了测定体内7t15-TGFRs的免疫刺激活性，将C57BL/6小鼠用对照溶液(PBS)或7t15-TGFRs以0.3、1、3和10mg/kg进行皮下处理。使经过处理的小鼠安乐死。在处理后第4天收集小鼠脾脏并称重。制备单一脾细胞悬浮液，并且用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1抗体染色，并且通过流式细胞术分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比。结果表明，基于脾脏重量，7t15-TGFRs尤其在1-10mg/kg下有效扩增脾细胞(图125A)。在所有测试剂量下，与对照物处理的小鼠相比，CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比更高(图125B)。

CD4+和CD8+T细胞的CD44表达

已知IL-15诱导T细胞上的CD44表达和记忆T细胞的发育。评估经7t15-TGFRs处理的小鼠中的CD4⁺和CD8⁺T细胞的CD44表达。用7t15-TGFRs皮下处理C57BL/6小鼠。用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗CD44单克隆抗体，针对免疫细胞亚群对脾细胞进行染色。通过流式细胞术分析总CD4+T细胞中的CD4⁺CD44^高T细胞百分比和总CD8⁺T细胞中的CD8⁺CD44^高T细胞百分比。如图126A和126B所示，7t15-TGFRs显著活化CD4⁺和CD8⁺T细胞分化成记忆T细胞。

此外，还评估在小鼠单剂量处理后，7t15-TGFRs诱导的脾细胞基于Ki67表达的免疫细胞的动态增殖，和脾细胞基于颗粒酶B表达的细胞毒性潜力。用3mg/kg的7t15-TGFRs皮下处理C57BL/6小鼠。使经过处理的小鼠安乐死并制备脾细胞。制备的脾细胞用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1(NK)抗体针对免疫细胞亚群进行染色，并且然后用抗Ki67抗体针对细胞增殖进行细胞内染色，并且用抗颗粒酶B抗体针对细胞毒性标记进行细胞内染色。通过流式细胞术分析对应免疫细胞亚群的Ki67和颗粒酶B的平均荧光强度(MFI)。如图127A和127B所示，在用7t15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中，与PBS对照处理相比，CD8⁺T细胞和NK细胞对Ki67和颗粒酶B的表达增加。这些结果证明7t15-TGFRs不仅增加CD8⁺T细胞和NK细胞的数目，而且增强这些细胞的潜在细胞毒性。

另外，还评估小鼠脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。将小鼠Yac-1细胞用CellTrace紫标记，并且用作肿瘤靶细胞。从7t15-TGFRs处理的小鼠制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比率＝10:1在RPMI-10培养基中、在具有或不具有100nM的7t15-TGFRs的情况下混合，并且在37℃下培育20小时。通过使用流式细胞术分析紫色标记的活Yac-1细胞来评估Yac-1靶细胞抑制。使用下式计算Yac-1抑制的百分比：(1-实验样品中的Yac-1活细胞数/不含脾细胞的样品中的Yac-1活细胞数)×100。如图128所示，7t15-TGFRs处理的小鼠脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性强于对照小鼠脾细胞，并且在细胞毒性分析过程中添加7t15-TGFRs进一步增强脾细胞对Yac-1靶细胞的细胞毒性。

实例57：TGFRt15-21s137L融合蛋白产生和表征

产生包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图129和图130)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，如下制造构建体：利用G4S(3)接头将两个TGFβ受体II序列连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L的核酸和蛋白质序列。21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽中裂解以产生可溶或可以分泌的成熟形式。

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人，来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为TGFRt15-21s137L)，其可通过抗TF抗体IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱纯化洗脱TGFRt15-21s137L的色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-21s137L加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图131所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为TGFRt15-21s137L的融合伴侣的TGFRt15-21s137L结合。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTAAvant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

实例58：TGFRt15-TGFRs21融合蛋白产生和表征

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/IL-21和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图132和图133)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、IL-21和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，如下制造构建体：利用G4S(3)接头将两个TGFβ受体II序列连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接IL-21的N端。

TGFRs21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

TGFRs21融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽中裂解以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/IL-21和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人，来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs21)，其可通过抗TF抗体IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱纯化洗脱TGFRt15-TGFRs21的色谱

从细胞培养物中收获的TGFRt15-TGFRs21被加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图134所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的TGFRt15-TGFRs21结合。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

TGFRt15-TGFRs21的还原型SDS-PAGE分析

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的TGFRt15-TGFRs21蛋白样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。

为了验证TGFRt15-TGFRs21蛋白质在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒和制造商说明书进行脱糖基化实验。图135显示未脱糖基化(红色轮廓的泳道1)和脱糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样品的还原SDS-PAGE分析。显然，当蛋白质在CHO细胞中表达时，所述蛋白质被糖基化。脱糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和55kDa)。泳道M载有10ul SeeBluePlus2预染标准液。

TGFRt15-TGFRs21在C57BL/6小鼠中的免疫刺激

TGFRt15-TGFRs21是多链多肽(本文所述的A型多链多肽)，其包括作为单链的两个TGFβRII域、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽(TGFRt15)，以及作为单链的两个TGFβRII域、人IL-15受体α链的寿司域和人IL-21的可溶性融合物的第二多肽(TGFRs21)。

CHO细胞用TGFRt15和TGFRs21载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化TGFRt15-TGFRs21复合物。如图136所示，通过ELISA证明复合物中的TGFβ受体、IL-15、IL-21和组织因子(TF)组分。使用人源化抗TF单克隆抗体(抗TF IgG1)作为捕获抗体来确定TGFRt15-TGFRs21中的TF，使用生物素化抗人IL-15抗体(安迪生物公司)、生物素化抗人TGFβ受体抗体(安迪生物公司)和生物素化抗人IL-21抗体(安迪生物公司)作为检测抗体来分别确定TGFRt15-TGFRs21中的IL-15、TGFβ受体和IL-21。为了检测，使用过氧化酶偶联的抗生蛋白链菌素(杰克逊免疫研究实验室)和ABTS。

用对照溶液(PBS)或TGFRt15-TGFRs21以3mg/kg皮下处理野生型C57BL/6小鼠。处理后四天，评估脾脏重量和脾脏中存在的各种免疫细胞类型的百分比。如图137A所示，评估对照物处理和TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中存在的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比。还评估在TGFRt15-TGFRs21处理后基于Ki67表达的免疫细胞的动态增殖。将脾细胞用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗-NK1.1(NK)抗体染色，并且然后用抗Ki67抗体细胞内染色。通过流式细胞术分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比以及对应免疫细胞亚群的Ki67的平均荧光强度(MFI)(图137A和137B)。此外，还评估小鼠单次剂量处理后由TGFRt15-TGFRs21诱导的脾细胞基于颗粒酶B表达的细胞毒性潜力。如图138所示，在用TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中，NK细胞对颗粒酶B表达在处理后增加。将来自TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾细胞用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1(NK)抗体染色，并且然后用抗颗粒酶B抗体细胞内染色。通过流式细胞术分析对应免疫细胞亚群的颗粒酶B的平均荧光强度(MFI)(图138)。

如图137A所示，在用TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中，在单次TGFRt15-TGFRs21处理后的第4天，CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比均增加。这些结果证明TGFRt15-TGFRs21能够诱导免疫细胞在小鼠脾脏中增殖，尤其CD8⁺T细胞和NK细胞。

另外，还评估小鼠脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。将小鼠Yac-1细胞用CellTrace紫标记，并且用作肿瘤靶细胞。从TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比率＝10:1在RPMI-10培养基中、在具有或不具有100nM的TGFRt15-TGFRs21的情况下混合，并且在37℃下培育24小时。通过使用流式细胞术分析紫色标记的活Yac-1细胞来评估Yac-1靶细胞抑制。使用下式计算Yac-1抑制的百分比：(1-[实验样品中Yac-1活细胞数]/[不含脾细胞的样品中Yac-1活细胞数])×100。如图139所示，在细胞毒性分析期间，在存在TGFRt15-TGFRs21的情况下，TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性强于对照小鼠细胞(图139)。

实例59：TGFRt15-TGFRs16融合蛋白产生

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/抗CD16scFv和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图140和图141)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，如下制造构建体：利用G4S(3)接头将两个TGFβ受体II序列连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到由金唯智合成的抗CD16scFv序列来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接抗CD16scFv序列的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs16构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

TGFRs16融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽中裂解以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/抗CD16scFv和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人，来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/抗CD16scFv蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs16)，其通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

实例60：TGFRt15-TGFRs137L融合蛋白产生

产生包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/CD137L和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图142和图143)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、CD137L和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，如下制造构建体：利用G4S(3)接头将两个TGFβ受体II序列连接以产生TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到(G4S)3接头和由金唯智合成的CD137L序列来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II的构建体的核酸和蛋白质序列，所述受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接(G4S)3接头和CD137L序列。

TGFRs137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

TGFRs137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽中裂解以产生可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/CD137L和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人，来源于具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能.《人基因疗法》2005；16:457-72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达允许形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs137L)，其可通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

实例61.示例性单链嵌合多肽2t2的产生与表征

产生了示例性的单链嵌合多肽，其包括结合至IL-2受体的第一靶标结合域、人可溶性组织因子域和结合至IL-2受体的第二靶标结合域(IL-2/TF/IL-2；称为2t2)(图144)。这种单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下所示。

编码示例性单链嵌合多肽(IL-2/TF/IL-2)的核酸(SEQ ID NO:164)

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(第一IL-2片段)

GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(第二IL-2片段)

GCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT

示例性单链嵌合多肽(IL-2/TF/IL-2)(SEQ ID NO:163)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-2)

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-2)

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT

将编码IL-2/TF/IL-2的核酸克隆到经修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes等人，《人基因疗法》16：457-72，2005)。将编码IL-2/TF/IL-2的表达载体转染到CHO-K1细胞中。表达载体在CHO-K1细胞中的表达允许分泌可溶性IL-2/TF/IL-2单链嵌合多肽(称为2t2)，其可通过抗TF抗体亲和力和其他色谱方法纯化。

IL-2和2t2以类似方式促进含有IL-2Rβ和共用γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估2t2对IL-2的活性，对2t2与重组IL-2在促进表达IL-2Rβ和共用γ链的32Dβ细胞增殖方面进行比较。IL-2依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次且以每孔2×10⁴个细胞接种于孔中。将2t2或IL-2的连续稀释液添加到细胞中(图145)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加10μl WST1并在CO₂培养箱中在37℃下再培养3小时来检测细胞增殖。通过测量450nm吸光度来分析产生的甲臜染料的量。如图145所示，2t2和IL-2以类似方式活化32Dβ细胞。2t2和IL-2的EC₅₀分别是158.1pM和140pM。

相较于IL-2，2t2促进含有IL-2Rαβγ的CTLL-2细胞增殖的能力改善

为了评估2t2对IL-2的活性，将2t2与重组IL-2在促进表达IL-2Rα、IL-2Rβ和共用γ链的CTLL-2细胞增殖方面进行比较。IL-2依赖性CTLL-2细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次且以每孔2×10⁴个细胞接种于孔中。将2t2或IL-2的连续稀释液添加到细胞中(图146)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加10μl WST1且在CO₂培育箱中在37℃下再培育3小时来检测细胞增殖。通过测量450nm吸光度来分析产生的甲臜染料的量。如图146所示，2t2促进CTLL-2细胞增殖比IL-2强4-5倍。2t2的EC₅₀为123.2pM，而IL-2为548.2pM。

2t2抑制ApoE^-/-小鼠的高脂肪诱导高血糖症恶化

向六周龄雌性ApoE^-/-小鼠(杰克逊实验室(Jackson Lab))饲喂标准饮食或含有21％脂肪、0.15％胆固醇、34.1％蔗糖、19.5％酪蛋白和15％淀粉的高脂肪饮食(TD88137，哈兰实验室(Harlan Laboratories))并且在标准条件下维持。在第7周，将饲喂高脂肪饮食的小鼠随机分为对照组和处理组。小鼠然后通过皮下注射接受3mg/kg剂量的2t2(处理组)或PBS(饮食组和对照组)。给药后三天，将小鼠禁食整夜，并通过眼眶后静脉神经丛穿刺收集血样。使用OneTouch血糖仪测量整夜空腹血糖水平。如图147所示，结果表明2t2注射有效地抑制了ApoE^-/-小鼠的葡萄糖水平增加。

2t2使血液淋巴细胞中的CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺T调控(Treg)细胞比率显著上调

向六周龄雌性ApoE^-/-小鼠(杰克逊实验室)饲喂标准饮食或含有21％脂肪、0.15％胆固醇、34.1％蔗糖、19.5％酪蛋白和15％淀粉的高脂肪饮食(TD88137，哈兰实验室)并且在标准条件下维持。第7周，将饲喂高脂肪饮食的小鼠随机分为对照组和处理组。小鼠然后通过皮下注射接受3mg/kg剂量的2t2(处理组)或PBS(饮食组和对照组)。给药后的第三天，通过眼眶后静脉丛穿刺来收集整夜空腹的血液样品且与ACK溶解缓冲液(赛默飞世尔科技)一起在37℃下培育5分钟。然后将样品再悬浮于FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone)，其含有0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛))中且用FITC-抗CD4和APC-抗CD25抗体(BioLegend)进行表面染色30分钟。将表面染色的样品进一步固定，并用Fix/Perm缓冲液(BioLegend)进行预金属化，并用PE-抗Foxp3抗体(BioLegend)进行细胞内染色。染色后，将细胞用FACs缓冲液洗涤两次，然后在室温下以1500RPM离心5分钟。通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。如图148所示，与未处理组(饮食组为0.4％±0.16，高脂肪饮食组为0.46％±0.09)相比，2t2处理显着增加了血液淋巴细胞中的Treg群体(3.5％±0.32)。

抗TF抗体亲和柱纯化洗脱2t2的色谱

从细胞培养物中收获的2t2被加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图149所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的2t2结合。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

2t2的分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析

为了使用分析型尺寸排阻色谱(SEC)分析2t2，将Superdex 200Increase 10/300GL凝胶过滤柱(得自通用电气医疗集团)连接到AKTA Avant系统(得自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管回路将含有2t2于PBS中的样品注入Superdex 200柱，并且通过SEC分析。样品的SEC色谱如图150所示。SEC结果表明2t2有两个蛋白质峰。

2t2的还原型SDS-PAGE

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的2t2蛋白样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。

为了验证2t2蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒，根据制造商说明书进行脱糖基化实验。图151A和151B显示了样品在未脱糖基化(红色轮廓的泳道1)和脱糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下的还原型SDS-PAGE分析。结果表明，2t2蛋白在CHO细胞中表达时被糖基化。脱糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中以预期的分子量(56kDa)跑电泳。泳道M载有10μL SeeBlue Plus2预染标准液。

2t2的体内表征

以不同剂量将2t2皮下注射到C57BL/6小鼠中，以测定2t2在体内的免疫刺激活性。用0.1、0.4、2和10mg/kg的对照溶液(PBS)或2t2皮下处理小鼠。经处理的小鼠在处理后第3天安乐死。在处理后第3天收集小鼠脾脏并称重。制备单一脾细胞悬浮液，且所制备的脾细胞针对CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞染色(用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1抗体染色)，且通过流式细胞术分析。结果表明，基于脾脏重量，2t2尤其在0.1-10mg/kg时有效扩增脾细胞(图152A)。在2和10mg/kg时，CD8⁺T细胞百分比高于对照物处理的小鼠(图152B)。在所有测试剂量下，NK细胞百分比高于对照物处理的小鼠(图152B)。

已知IL-2上调免疫细胞对CD25的表达。我们因此获知了经2t2处理的小鼠中的CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的CD25表达。如上述段落中所述，用2t2皮下处理C57BL/6小鼠。脾细胞用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8、CD25和NK1.1单克隆抗体染色。通过流式细胞术分析脾细胞亚群的CD25表达(MFI)。如图153所示，在测试的剂量和时间点(第3天)，2t2显著上调CD4⁺T细胞对CD25的表达，但CD8+T细胞或NK细胞则不然。

还研究了2t2在C57BL/6小鼠中的药代动力学。将2t2以1mg/kg皮下注射到C57BL/6小鼠中。在如图154所示的多个时间点从小鼠尾静脉抽血，并且制备血清。用ELISA测定2t2浓度(捕获：抗组织因子抗体；检测：生物素化抗人IL-2抗体，然后是SA-HRP和ABTS底物)。使用PK Solutions 2.0(Summit Research Services)计算得出的2t2的半衰期为1.83小时。

2t2使ApoE^-/-小鼠的高脂肪诱导动脉粥样硬化斑的形成减少

向六周龄雌性ApoE^-/-小鼠(杰克逊实验室)饲喂标准饮食或高脂肪饮食(21％脂肪、0.15％胆固醇、34.1％蔗糖、19.5％酪蛋白和15％淀粉)(TD88137，哈兰实验室)并且在标准条件下维持。在第7周，将饲喂高脂肪饮食(HFD)的小鼠随机分为对照组和处理组。然后以3mg/kg的剂量将2t2(处理组)或PBS(饮食组和对照组)皮下施用于小鼠，每周一次，历时4周。在第12周，通过异氟烷对所有小鼠实施安乐死。收集主动脉，纵向打开且使用正面方法，用苏丹IV溶液(0.5％)染色。然后使用Image J软件对斑块面积(红色，如图155A所示)相对于总主动脉面积的百分比进行定量。图155A显示了每组的动脉粥样硬化斑的代表性视图。图155B显示了每组的动脉粥样硬化斑的定量分析结果。对照组(HF饮食)的斑块面积百分比比处理组(HFD+2t2)高得多：10.28％相对于4.68％。

2t2抑制2型糖尿病恶化.

雄性BKS.Cg-Dock7^m+/+Lepr^db/J(db/db(杰克逊实验室))小鼠饲喂标准饮食且随意接受饮用水。在六周龄时，将小鼠随机分为对照组和处理组。处理组每两周一次以皮下注射接受3mg/kg的2t2，而对照组仅接受媒剂(PBS)。使用OneTouch血糖仪每周测量整夜空腹血糖水平。结果显示2t2有效抑制BKS.Cg-Dock7^m+/+Lepr^db/J小鼠的葡萄糖水平增加(图156)。

2t2在第一次注射之后显著上调血液淋巴细胞中的CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺T调控细胞比率

雄性BKS.Cg-Dock7^m+/+Lepr^db/J(db/db)(杰克逊实验室)小鼠饲喂标准饮食且随意接受饮用水。在六周龄时，将小鼠随机分为对照组和处理组。处理组每两周一次以皮下注射接受3mg/kg的2t2，而对照组仅接受媒剂(PBS)。第一次药物注射之后的第四天，收集整夜空腹血液样品且与ACK溶解缓冲液(赛默飞世尔科技)一起在37℃下培育5分钟。然后将样品再悬浮于FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone)，其含有0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛))中且用FITC-抗CD4和APC-抗CD25抗体(BioLegend)进行表面染色30分钟。将表面染色的样品进一步固定，并用Fix/Perm缓冲液(BioLegend)进行预金属化，并用PE-抗Foxp3抗体(BioLegend)进行细胞内染色。染色后，将细胞用FACs缓冲液洗涤两次，并通过流式细胞仪(Celesta-BD Bioscience)进行分析。测量血液淋巴细胞中的CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Tregs百分比。如图157所示，结果表明2t2显著上调血液淋巴细胞中的Tregs比率(*p<0.05)。

实例62.示例性单链嵌合多肽15t15的产生和表征

产生了第二示例性单链嵌合多肽，其包括结合至IL-15受体的第一靶标结合域，人可溶性组织因子域和结合至IL-15受体的第二靶标结合域(IL-15/TF/IL-15；称为15t15)(图158)。这种单链嵌合多肽的核酸和氨基酸序列如下所示。

编码示例性单链嵌合多肽(IL-15/TF/IL-15)的核酸(SEQ ID NO:170)

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(第一IL-15片段)

AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGC

(人组织因子219形式)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(第二IL-15片段)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

示例性单链嵌合多肽(IL-15/TF/IL-15)(SEQ ID NO:169)

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

将编码IL-15/TF/IL-15的核酸克隆到经修饰的逆转录病毒表达载体中，如此前所述(Hughes等人，《人类基因疗法》16：457-72，2005)。将编码IL-15/TF/IL-15的表达载体转染到CHO-K1细胞中。表达载体在CHO-K1细胞中的表达允许分泌可溶性IL-15/TF/IL-15单链嵌合多肽(称为15t15)，其可通过抗TF抗体亲和力和其它色谱方法纯化。

15t15促进含有IL-2Rβ和共用γ链的32Dβ细胞增殖

将15t15对IL-15的活性与重组IL-15在表达IL2Rβ和共用γ链的32Dβ细胞中进行比较。IL15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤五次，并且以2×10⁴个细胞/孔接种到孔中。将15t15或IL-15的连续稀释液添加到细胞中(图159)。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加10μL WST1并在CO₂培养箱中在37℃下再培养3小时来检测细胞增殖。通过测量450nm吸光度来分析产生的甲臜染料的量。如图159所示，15t15促进32Dβ细胞增殖不如IL-15有效。15t15和IL-15的EC₅₀分别是161.4pM和1.6pM。

抗TF抗体亲和柱纯化洗脱15t15的色谱

从细胞培养物中收获的15t15被加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器，使中和的样品在PBS中缓冲交换。如图160所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的15t15结合。缓冲交换的蛋白质样品在2-8℃下存储，以用于进一步的生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以便存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。所有步骤都是4mL/min的流速，但洗脱步骤除外，洗脱步骤是2mL/min。

15t15的还原型SDS-PAGE

为了测定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的15t15蛋白样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30分钟，接着在纯化水中脱色整夜。

为了验证15t15蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质脱糖基化混合物II试剂盒和制造商说明书进行脱糖基化实验。图161A和161B显示样品在未脱糖基化(红色轮廓的泳道1)和脱糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下的还原型SDS-PAGE分析。结果显示，当在CHO细胞中表达时，15t15蛋白被糖基化。脱糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中以预期的分子量(50kDa)跑电泳。泳道M载有10μL SeeBlue Plus2预染标准液。

实例63：NK细胞在试管内的刺激

进行了一组实验，以评估NK细胞在经18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s+抗TF抗体刺激后的表面表型的变化。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56⁺NK细胞。NK细胞的纯度>90％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510，CD25-PE和CD69-APCFire750抗体(BioLegend)染色来确认。对细胞进行计数并以0.2×10⁶个/mL的浓度再悬浮于96孔平底板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。°在37℃和5％CO₂下，用以下物质刺激细胞16小时：18t15-12s(100nM)；18t15-12s16(100nM)；单一细胞因子rhIL15(50ng/mL)(美天旎(Miltenyi))、rhIL18(50ng/mL)(英伟杰)和rhIL-12(10ng/mL)(派普泰克(Peprotech))的混合物；7t15-21s+抗TF抗体(100nM-50nM)；7t15-21s(100nM)；或抗TF抗体(50nM)。次日，收获细胞，并用CD56、CD16、CD25、CD69、CD27、CD62L、NKp30和NKp44特异性抗体进行表面染色30分钟。表面染色后，在含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone))中洗涤细胞(室温下1500RPM 5分钟)。两次洗涤后，通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。图162A和162B表明，纯化NK细胞与18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s+抗TF抗体一起培育整夜使得表达CD25、CD69、NKp44和NKp30活化标志物的细胞的百分比增加且使表达CD62L的细胞的百分比降低。所有活化标志物数据来自以CD56⁺设门的淋巴细胞。

进行了一组实验，以评估淋巴细胞群体在经18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s刺激后的表面表型的变化。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞。用Ficoll-PAQUEPlus(通用电气医疗集团)密度梯度培养基分离外周血淋巴细胞。对细胞进行计数并以0.2×10⁶个/mL的浓度再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。°在37℃和5％CO₂下，用以下物质刺激细胞16小时：18t15-12s(100nM)；18t15-12s16(100nM)；单一细胞因子rhIL15(50ng/mL)(美天旎)、rhIL18(50ng/mL)(英伟杰)和rhIL-12(10ng/mL)(派普泰克)的混合物；7t15-21s(100nM)+抗TF抗体(50nM)；7t15-21s(100nM)；或抗TF抗体(50nM)。次日，收获细胞并用CD4或CD8、CD62L和CD69特异性抗体进行表面染色30分钟。表面染色后，在FACS缓冲液(含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的1×PBS(Hyclone)中洗涤细胞(室温下1500RPM5分钟)。两次洗涤后，通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。图163显示纯化的淋巴细胞群体(CD4和CD8 T细胞)与18t15-12s、18t15-12s16或7t15-21s+抗TF抗体一起整夜培育使得表达CD69的CD8和CD4 T细胞的百分比增加。另外，与7t15-21s+抗TF抗体一起培育使得表达CD62L的CD8和CD4 T细胞的百分比增加(图163)。

进行了一组实验，以确定18t15-12s对从人血中纯化的NK细胞的细胞外酸化速率(ECAR)的影响。ECAR可用于测量糖酵解。糖酵解是一个分子的葡萄糖在细胞内生物化学转化为两个分子的丙酮酸酯，同时产生两个分子的ATP。通过Seahorse XF96分析仪测得的ECAR增加表示糖酵解增加。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56⁺NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE和CD69-APCFire750抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数并以0.2×10⁶个/mL的浓度再悬浮于平底96孔板中的0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。°细胞在37℃和5％CO₂下用单一细胞因子hIL-12(10ng/mL)(Biolegend)、hIL-18(50ng/mL)(R&D)和hIL-15(50ng/mL)(NCI)或18t15-12s(100nM)的混合物刺激14-18小时。次日，收获细胞并在Seahorse培养基中洗涤两次。将细胞(2×10⁵个细胞/孔)接种于涂有10μL聚-L-赖氨酸(西格玛)的96孔通量板中。分析之前，使NK细胞粘附于板30分钟。在缓冲的Seahorse培养基中以10倍浓度制备葡萄糖、寡霉素和2DG溶液且注入校准板的端口A、B和C。ECAR读数每6.5-7分钟获取一次，且ECAR结果代表80分钟内的平均读数或每个时间点的平均读数。图164显示了18t15-12s整夜刺激NK细胞引起基础ECAR水平升高。葡萄糖和寡霉素的添加进一步分别显示了用18t15-12s刺激整夜的NK细胞的糖酵解和糖分解能力增强(图164)。单独培养基或IL12、IL18和IL-15混合物整夜处理的NK细胞用于比较(图164)。

进行了一组实验以确定NK细胞在经18t15-12s刺激后的磷酸化STAT4和磷酸化STAT5水平升高。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56⁺NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE和CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数并以0.05×10⁶个/mL的浓度再悬浮于96孔平底板中0.1mL完全培养基(RPMI1640(吉毕科公司)，补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。°在37℃和5％CO₂下，用hIL-12(10ng/mL)(Biolegend)或hIL-15(50ng/mL)(NCI)(单一细胞因子)或18t15-12s(100nM)刺激细胞90分钟。未刺激的NK细胞(US)用作对照。收获细胞并在多聚甲醛(西格玛)中固定到1.6％的最终浓度。将板在黑暗中在室温下培育10分钟。添加FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone)，含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛))(100μL)，并且将细胞转移到“V”底96孔板。在室温下以1500RPM洗涤细胞5分钟。通过轻轻上下移吸，将细胞集结粒与100μL冷却甲醇混合，并且在4℃下培育细胞30分钟。将细胞与100mL FACS缓冲液混合，并且在室温下以1500RPM洗涤5分钟。将细胞集结粒与50mL含4mL pSTAT4(BD Bioscience)和pSTAT5抗体(BD Bioscience)的FACS缓冲液混合，接着在黑暗中在室温下培育30分钟。将细胞与100mL FACS缓冲液混合，并且在室温下以1500RPM洗涤5分钟。将细胞集结粒与50mLFACS缓冲液混合，并且通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。图165显示NK细胞与18t15-12s一起培育诱导pSTAT4和pSTAT5增加(绘制数据，归一化的倍数变化)。

进行了一组实验，以确定18t15-12s或细胞因子混合物(例如IL12、IL18和IL-15)对从人血中纯化的NK细胞的耗氧速率(OCR)和细胞外酸化速率(ECAR)的影响。通过Seahorse XF96分析仪测量OCR和ECAR。在这些实验中，使用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)，经由负向选择从人白细胞中分离出新鲜的人NK细胞。刚纯化的NK细胞用18t15-12s(100nM)或rhIL12(10ng/mL)、rhIL18(50ng/mL)和rhIL-15(50ng/mL)细胞因子的混合物刺激整夜(16小时)作为对照。次日，洗涤细胞，计数，并将相等数量的细胞接种于缓冲的Seahorse培养基中。在缓冲的Seahorse培养基中以10倍浓度制备葡萄糖、寡霉素和2DG溶液，并注入校准板的端口A、B和C中。图166显示了来自两位个别供体的OCR(左)和ECAR(右)数据。18t15-12s整夜刺激NK细胞使得基础ECAR和OCR水平升高。葡萄糖和寡霉素的添加进一步显示用18t15-12s刺激整夜的NK细胞的糖酵解和糖分解能力分别增强。用单独培养基或IL12、IL18和IL-15的混合物处理整夜的NK细胞用于比较。

实例64：2t2和/或TGFRt15-TGFRs在体内刺激NK细胞

进行了一组实验，以确定2t2构建体在C57BL/6小鼠中进行免疫刺激的作用。在这些实验中，用0.1、0.4、2和10mg/kg的对照溶液(PBS)或2t2皮下处理C57BL/6小鼠。使经过处理的小鼠在处理后第3天安乐死。测量脾脏重量并制备单一脾细胞悬浮液。脾细胞悬浮液用偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1(NK)抗体染色。通过流式细胞术分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比以及淋巴细胞亚群对CD25的表达。图167A表明，基于脾脏重量，2t2尤其在0.1-10mg/kg的剂量水平下有效扩增脾细胞。处理之后，在2和10mg/kg下，2t2处理的小鼠中的CD8⁺T细胞百分比高于对照物处理的小鼠(图167B)。在2t2的所有测试剂量下，经2t2处理的小鼠中的NK细胞百分比也高于对照物处理的小鼠(图167B)。另外，以0.4到10mg/kg处理之后，2t2使CD4⁺T细胞对CD25的表达显著上调，但CD8⁺T细胞和NK细胞则不然(图167C)。

进行了一组实验，以确定TGFRt15-TGFRs构建体在C57BL/6小鼠中进行免疫刺激的作用。在这些实验中，用0.3、1、3和10mg/kg对照溶液(PBS)或TGFRt15-TGFRs皮下处理C57BL/6小鼠。经过处理的小鼠在处理后第4天安乐死。测量脾脏重量并制备单一脾细胞悬浮液。将脾细胞悬浮液用偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1(NK)抗体染色。通过流式细胞术分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞百分比。图168A显示用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。此外，用1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量高于对照溶液处理的小鼠。图168B表明CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比均随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。具体来说，与对照物处理的小鼠相比，用0.3mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中CD8⁺T细胞的百分比更高，并且与对照物处理的小鼠相比，用0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中NK细胞的百分比更高。

进行一组实验，以确定TGFRt15-TGFRs构建体或2t2构建体在饲喂西方饮食的ApoE^-/-小鼠中进行免疫刺激的作用。在这些实验中，给6周龄雌性B6.129P2-ApoE^tm1Unc/J小鼠(杰克逊实验室)饲喂含有21％脂肪、0.15％胆固醇、34.1％蔗糖，19.5％酪蛋白和15％淀粉的西方饮食(TD88137，Envigo Laboratories)。西方饮食8周后，将3mg/kg的TGFRt15-TGFRs或2t2皮下注入小鼠。处理后三天，将小鼠禁食16小时，并且然后通过眼眶后静脉丛穿刺收集血样。将血液与10μL 0.5M EDTA混合，并且抽取20μL血液用于淋巴细胞亚群分析。用ACK(0.15M NH₄Cl，1.0mM KHCO₃，0.1mM Na₂EDTA，pH 7.4)溶解红血细胞，并且在4℃下在FACS染色缓冲液(PBS中1％BSA)中用抗小鼠CD8a和抗小鼠NK1.1抗体将淋巴细胞染色30分钟。洗涤细胞一次并用BD FACS Celesta分析。对于Treg染色，在4℃下在FACS染色缓冲液中，用抗小鼠CD4和抗小鼠CD25抗体将ACK处理的血液淋巴细胞染色30分钟。洗涤细胞一次并再悬浮于固定/通透性工作溶液中，并且在室温下培育60分钟。洗涤细胞一次并再悬浮于通透缓冲液中。在室温下以300-400×g将样品离心5分钟，并且然后弃去上清液。将细胞集结粒再悬浮于残余体积中，并且用1×通透缓冲液将体积调节到约100μL。将抗Foxp3抗体添加到细胞中，并且在室温下培育细胞30分钟。将通透缓冲液(200μL)添加到细胞中，并且将细胞在室温下以300-400×g离心5分钟。将细胞再悬浮于流式细胞术染色缓冲液中，并且在流式细胞仪上进行分析。图169B-169C表明，TGFRt15-TGFRs处理使得饲喂西方饮食的ApoE^-/-小鼠中的NK细胞和CD8⁺T细胞百分比增加。图169A表明2t2处理也增加了Treg细胞的百分比。

实例65：体内诱导免疫细胞增殖

进行一组实验以确定2t2构建体在C57BL/6小鼠中刺激免疫细胞的作用。在这些实验中，用0.1、0.4、2和10mg/kg的对照溶液(PBS)或2t2皮下处理C57BL/6小鼠。使经过处理的小鼠在处理后3天安乐死。测量脾脏重量并制备单一脾细胞悬浮液。脾细胞悬浮液用偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1(NK)抗体染色。通过流式细胞术分析CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比。图170A表明，基于脾脏重量，2t2处理尤其在0.1-10mg/kg时有效扩增脾细胞。在2和10mg/kg时，CD8⁺T细胞百分比高于对照物处理的小鼠(图170B)。另外，在2t2的所有测试剂量下，NK细胞的百分比高于对照物处理的小鼠(图170B)。这些结果表明，2t2处理能够诱导C57BL/6小鼠中的CD8⁺T细胞和NK细胞增殖。

进行了一组实验，以确定TGFRt15-TGFRs构建体在C57BL/6小鼠中进行免疫刺激的作用。在这些实验中，用0.1、0.3、1、3和10mg/kg的对照溶液(PBS)或TGFRt15-TGFRs皮下处理C57BL/6小鼠。使经过处理的小鼠在处理后第4天安乐死。测量脾脏重量并制备脾细胞悬浮液。将脾细胞悬浮液用偶联的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1(NK)抗体染色。另外针对增殖标志物Ki67对细胞进行染色。图171A显示用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。另外，与仅用对照溶液处理的小鼠相比，用1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量更高。CD8⁺T细胞和NK细胞的百分比均随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加(图171B)。最后，在TGFRt15-TGFRs的所有测试剂量下，TGFRt15-TGFRs使得CD8⁺T细胞和NK细胞中的细胞增殖标志物Ki67的表达显著上调。这些结果证明，TGFRt15-TGFRs处理诱导C57BL/6小鼠中的CD8⁺T细胞和NK细胞增殖。

进行一组实验，以确定TGFRt15-TGFRs构建体或2t2构建体在饲喂西方饮食的ApoE^-/-小鼠中进行免疫刺激的作用。在这些实验中，给6周龄雌性B6.129P2-ApoE^tm1Unc/J小鼠(杰克逊实验室)饲喂含有21％脂肪、0.15％胆固醇、34.1％蔗糖，19.5％酪蛋白和15％淀粉的西方饮食(TD88137，Envigo Laboratories)。西方饮食8周后，将3mg/kg的TGFRt15-TGFRs皮下注射到小鼠中。处理后三天，将小鼠禁食16小时，并且然后通过眼眶后静脉丛穿刺收集血样。将血液与10μL 0.5M EDTA混合，并且抽取20μL血液用于淋巴细胞亚群分析。用ACK(0.15M NH₄Cl，1.0mM KHCO₃，0.1mM Na₂EDTA，pH 7.4)溶解红血细胞，并且在4℃下在FACS染色缓冲液(PBS中1％BSA)中用抗小鼠CD8a和抗小鼠NK1.1抗体将淋巴细胞染色30分钟。洗涤细胞一次并在室温下再悬浮于固定缓冲液(BioLegend目录号420801)中20分钟。将细胞以350×g离心5分钟，将固定的细胞再悬浮于细胞内染色通透洗涤缓冲液(BioLegend目录号421002)中，并且然后以350×g离心5分钟。然后在室温下将细胞用抗Ki67抗体染色20分钟。用细胞内染色通透洗涤缓冲液洗涤细胞两次，并且以350×g离心5分钟。然后将细胞再悬浮于FACS染色缓冲液中。用BD FACS Celesta分析淋巴细胞亚群。如图172A中所述，用TGFRt15-TGFRs处理ApoE^-/-小鼠诱导NK和CD8⁺T细胞增殖(Ki67阳性染色)。另外，图172B表明，2t2处理ApoE^-/-小鼠还诱导了NK和CD8⁺T细胞增殖(Ki67阳性染色)。

进行一组实验，以便在7t15-21s、TGFRt15-TGFRs和2t2处理之后，确定7t15-21s+抗TF抗体使NSG小鼠中的NK细胞扩增的作用。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56⁺NK细胞。NK细胞的纯度>90％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510，CD25-PE和CD69-APCFire750抗体(BioLegend)染色来确认。对细胞进行计数并且以2×10⁶个/mL再悬浮于平底24孔板中的2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。用7t15-21s(100nM)和抗TF抗体(50nM)刺激细胞15天。每两天后，以2x10⁶/mL的浓度将细胞再悬浮于含有100nM 7t15-21s和50nM抗TF抗体的新鲜培养基中。随着培养物体积的增加，将细胞转移至更高体积的烧瓶中。使用锥虫蓝对细胞进行计数以获知扩增倍数。7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞在温热的HBSS缓冲液(Hyclone)中、在室温下以1000RPM洗涤三次，历时10分钟。将7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞再悬浮于10×10⁶/0.2mL HBSS缓冲液中且静脉内注射到NSG小鼠(NOD锡特(NOD scid)γ小鼠)的尾静脉中(杰克逊实验室)。转移的NK细胞每48小时用7t15-21s(10ng/剂量，i.p.)、TGFRt15-TGFRs(10ng/剂量，i.p.)或2t2(10ng/剂量，i.p.)支持，长达21天。每周通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)测量血液中的经人7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞的移植和持久性，所述NK细胞针对hCD45、mCD45、hCD56、hCD3和hCD16抗体染色(数据代表每组3只小鼠)。图173表明，相较于对照物处理的小鼠，用7t15-21s、TGFRt15-TGFRs或2t2处理带有授受性转移7t15-21s+抗TF抗体扩增的NK细胞的小鼠诱导了授受性转移的NK细胞扩增和持久存在。

实例66：用单链构建体或多链构建体处理之后，NK介导了细胞毒性

进行一组实验以确定用TGFRt15-TGFRs处理NK细胞是否增强NK细胞的细胞毒性。在这些实验中，将人道迪(Daudi)B淋巴瘤细胞用CellTrace紫(CTV)标记，并且用作肿瘤靶细胞。3mg/kg的TGFRt15-TGFRs皮下处理后第4天，对C57BL/6雌性小鼠脾脏使用磁性细胞分选方法(美天旎生物技术(Miltenyi Biotec))，通过NK1.1正向选择分离出小鼠NK效应细胞。用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)从衍生自人血白细胞层的外周血单核细胞中分离出人NK效应细胞。将靶细胞(人道迪B淋巴瘤细胞)与效应细胞(小鼠NK效应细胞或人NK效应细胞)在存在50nM TGFRt15-TGFRs或不存在TGFRt15-TGFRs(对照)的情况下混合，并且在37℃下对于小鼠NK细胞培育44小时，且对于人NK细胞培育20小时。通过使用流式细胞术分析碘化丙啶阳性、CTV标记的细胞来评估靶细胞(道迪)存活率。使用公式(1-实验样品中活肿瘤细胞数/不含NK细胞的样品中的活肿瘤细胞数)×100计算道迪细胞抑制百分比。图174表明，相比于不存在TGFRt15-TGFRs活化的情况，用TGFRt15-TGFRs活化NK细胞后，小鼠(图174A)和人(图174B)NK细胞对道迪B细胞具有显著更强的细胞毒性。

进行一组实验以确定用TGFRt15-TGFRs处理后的小鼠和人NK细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在这些实验中，将人道迪B淋巴瘤细胞用CellTrace紫色(CTV)标记，并且用作肿瘤靶细胞。3mg/kg的TGFRt15-TGFRs皮下处理后4天，对C57BL/6雌性小鼠脾脏使用磁性细胞分选方法(美天旎生物技术)，用NK1.1阳性选择分离小鼠NK效应细胞。用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)从衍生自人血白细胞层的外周血单核细胞中分离人NK效应细胞。将靶细胞(道迪B细胞)与效应细胞(小鼠NK效应细胞或人NK效应细胞)在存在抗CD20抗体(10nM利妥昔单抗(Rituximab)，基因泰克(Genentech))并且存在50nMTGFRt15-TGFRs或不存在TGFRt15-TGFRs(对照)的情况下混合，并且在37℃下对于小鼠NK细胞培育44小时，且对于人NK细胞培育20小时。道迪B细胞表达抗CD20抗体的CD20靶标。培育后通过使用流式细胞术分析碘化丙啶阳性、CTV标记的靶细胞来评估靶细胞活力。使用公式(1-实验样品中活肿瘤细胞数/不含NK细胞的样品中的活肿瘤细胞数)×100计算道迪抑制的百分比。图175表明，相比于不存在TGFRt15-TGFRs活化的情况，用TGFRt15-TGFRs活化NK细胞后，小鼠NK细胞(图175A)和人NK细胞(图175B)对道迪B细胞具有更强的ADCC活性。

进行了一组实验，以确定TGFRt15-TGFRs活化的小鼠NK细胞对衰老的B16F10黑色素瘤细胞的细胞毒性。在这些实验中，通过将10mg/kg的TGFRt15-TGFRs注射到C57BL/6小鼠维持4天来体内活化小鼠NK细胞，随后分离出脾脏NK细胞。然后在100nM 2t2存在下、在试管内扩增NK细胞7天。衰老的B16F10靶细胞(B16F10-SNC)用CellTrace紫(CTV)标记且与活化的小鼠NK效应细胞以不同的效应子:靶标(E:T)比率培育16小时。细胞用胰蛋白酶消化，洗涤并再悬浮于含有碘化丙啶(PI)溶液的完全培养基中。通过流式细胞术，基于经CTV标记的细胞的PI染色来获知TGFRt15-TGFRs/2t2活化NK细胞针对衰老细胞的细胞毒性。这些发现表明，体内用TGFRt15-TGFRs活化NK细胞，然后在试管内扩增并用2t2活化，使得NK细胞对衰老的黑色素瘤肿瘤细胞的杀伤作用增加(图176)。

实例67：癌症、糖尿病和动脉粥样硬化的治疗

进行一组实验，以评估TGFRt15-TGFRs加抗TRP1抗体(TA99)与化学疗法组合在黑色素瘤小鼠模型中的抗肿瘤活性。在这些实验中，将0.5×10⁶个B16F10黑色素瘤细胞皮下注射到C57BL/6小鼠中。在第1天、第4天和第7天用三次剂量的多烯紫杉醇(10mg/kg)(DTX)处理小鼠，接着在第9天用单次剂量的组合免疫疗法TGFRt15-TGFRs(3mg/kg)+抗-TRP1抗体TA99(200μg)处理小鼠。图177A显示处理方案的示意图。通过卡尺测量监测肿瘤生长，并且使用公式V＝(L×W²)/2来计算肿瘤体积，其中L是最大肿瘤直径，并且W是垂直肿瘤直径。图177B显示与盐水对照和DTX处理组相比，DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99显著减少肿瘤生长(N＝10，****p<0.001，多重t检验分析)。

为了评估B16F10肿瘤模型中的免疫细胞亚群，进行外周血分析。在这些实验中，将C57BL/6小鼠用B16F10细胞注射，并且用DTX、DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99或盐水处理。对于DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99组免疫疗法后第2、5、8天，并且对于DTX和盐水组肿瘤注射后第11天，从荷B16F10瘤小鼠的下颌下静脉采血。在ACK溶解缓冲液中溶解RBC，并且将淋巴细胞洗涤并用抗NK1.1、抗CD8和抗CD4抗体染色。通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。图177C-177E显示与生理盐水和DTX处理组相比，DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99处理诱导肿瘤中的NK细胞和CD8⁺T细胞百分比增加。

在第17天，使用Trizol从生理盐水、DTX或DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99处理的小鼠的肿瘤中提取总RNA。使用QuantiTect逆转录试剂盒(凯杰(Qiagen))将总RNA(1μg)用于cDNA合成。使用FAM标记的衰老细胞标记(F)p21(G)DPP4和(H)IL6预先设计的引物，用CFX96检测系统(伯乐(Bio-Rad))进行实时PCR。管家基因18S核糖体RNA用作内部对照，以将表达水平的变异性归一化。相对于18S rRNA，每个靶标mRNA的表达基于Ct、按照2^-Δ(ΔCt)计算，其中ΔCt＝Ct_靶标-Ct_18S。数据呈现为相比于盐水对照的变化倍数。图177F-177H显示DTX处理诱导衰老肿瘤细胞增加，所述细胞随后在用TGFRt15-TGFRs+TA99免疫疗法处理后减少。

进行一组实验以研究通过TGFRt15-TGFRs改善ApoE^-/-小鼠中西方饮食诱导的高血糖症。在这些实验中，给6周龄雌性B6.129P2-ApoE^tm1Unc/J小鼠(杰克逊实验室)饲喂含有21％脂肪、0.15％胆固醇、34.1％蔗糖，19.5％酪蛋白和15％淀粉的西方饮食(TD88137，Envigo Laboratories)。西方饮食8周后，将3mg/kg的TGFRt15-TGFRs或2t2皮下注射到小鼠中。处理后三天，将小鼠禁食16小时，并且然后通过眼眶后静脉丛穿刺收集血样。用血糖仪(OneTouch UltraMini)和GenUltimated测试条，使用一滴新鲜血液检测血糖。如图178A所示，TGFRt15-TGFRs处理显著减轻西方饮食诱导的高血糖症(p<0.04)。用Eve Technologies的小鼠大鼠代谢阵列(Mouse Rat Metabolic Array)分析血浆胰岛素和抵抗素水平。使用以下公式计算HOMA-IR：稳态模型评估-胰岛素抵抗＝血糖(mg/dL)*胰岛素(mU/mL)/405。如图178B所示，与未处理组相比，2t2与TGFRt15-TGFRs处理均降低胰岛素抵抗。如图178C所示，与未处理组相比，2t2(p<0.02)与TGFRt15-TGFRs(p<0.05)均显著降低抵抗素水平，这可能与2t2和TGFRt15-TGFRs诱导的胰岛素抵抗降低相关(图3B)。

实例68：诱导NK细胞分化成细胞因子诱导的记忆样NK细胞

进行一组实验，以评估用18t15-12s刺激后NK细胞分化成细胞因子诱导的记忆样NK细胞(CIMK-NK细胞)。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56⁺NK细胞。NK细胞的纯度>90％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510，CD25-PE和CD69-APCFire750抗体(BioLegend)染色来确认。对细胞进行计数并且以2×10⁶个/mL再悬浮于平底24孔板中的2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、青霉素(赛默生命技术公司)、链霉素(赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone))中。对细胞不刺激(“无添加”)或用18t15-12s(100nM)或包括rhIL15(50ng/mL)(美天旎)、rhIL18(50ng/mL)(英伟杰)和rhIL-12(10ng/mL)(派普泰克)的单一细胞因子混合物(“单一细胞因子”)在37℃和5％CO₂下刺激16小时。次日，收获细胞，并且在室温下用温热完全培养基以1000RPM洗涤两次持续10分钟。将细胞以2×10⁶个/mL再悬浮于平底24孔板中的2mL含rhIL-15(1ng/mL)的完全培养基中。每2天后，将一半培养基替换为含有rhIL-15的新鲜完全培养基。

为了评估第7天NK细胞记忆表型的变化，将细胞用针对细胞表面CD56、CD16、CD27、CD62L、NKp30和NKp44的抗体染色(BioLegend)。表面染色后，将细胞在含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone))中洗涤(室温下1500RPM5分钟)。两次洗涤后，通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。图179显示将NK细胞与18t15-12s一起培育使得表达CD27、CD62L和NKp44的CD16⁺CD56⁺NK细胞百分比增加，以及CD16⁺CD56⁺NK细胞中的NKp30水平(MFI)提高。

实例69.CD44记忆T细胞的上调

用7t15-TGFRs或2t2皮下处理C57BL/6小鼠。处理之后的第4天(TGFRt15-TGFRs)或第3天(2t2)，使经过处理的小鼠安乐死并且制备单一脾细胞悬浮液。将制备的脾细胞用荧光染料偶联的抗CD4、抗CD8和抗CD44抗体染色，并且通过流式细胞术分析CD4⁺T细胞或CD8⁺T细胞中CD44^高T细胞的百分比。结果显示，TGFRt15-TGFRs和2t2上调记忆标志物CD44在CD4+和CD8+T细胞上的表达(图180)。这些发现表明TGFRt15-TGFRs和2t2能够诱导小鼠T细胞分化成记忆T细胞。

实例70：改善质地和/或外观和/或头发

为了检查2t2对毛发再生的影响，首先用剪刀将C57BL6/J小鼠(杰克逊实验室)的背部毛发剪短，然后将脱毛膏(Nair)涂在剃毛区域维持30秒钟，然后擦净。4小时后，皮下施用2t2(3mg/kg，单次剂量)，低剂量重组IL-2(25000IU，连续5天，1次剂量/天)或PBS。监测小鼠与毛发再生有关的皮肤色素沉着，并且拍摄照片且使用Image J软件分析。图181A显示了在用PBS、2t2或IL-2处理的小鼠脱毛后10天的皮肤色素沉着。图181B显示每组小鼠在处理后第10天的色素沉着百分比，如使用Image J软件所分析。结果表明，与PBS处理的小鼠相比，用2t2或IL-2处理小鼠在脱毛后可促进毛发再生。

首先用剪刀将C57BL6/J小鼠(杰克逊实验室)的背部毛发剪短，然后再将脱毛膏(Nair)涂到刮毛区域刚好约30秒，然后擦净。4小时后，皮下施用2t2(3mg/kg，单次剂量)、低剂量重组IL-2(25000IU，连续5天，1次剂量/天)或PBS。监测小鼠的与毛发再生有关的皮肤色素沉着，并拍照且使用Image J软件分析。图182显示了在用PBS、2t2或IL-2处理的小鼠脱毛后第14天的皮肤色素沉着。结果表明，与PBS处理的小鼠相比，用2t2或IL-2处理小鼠在脱毛后促进毛发再生。

实例71：用单链或多链嵌合多肽处理后的组织因子凝血分析

进行一组实验，以便在单链或多链嵌合多肽处理后，评估血液凝结。为了引发凝血级联路径，组织因子(TF)与因子VIIa(FVIIa)结合以形成TF/FVIIa复合物。然后，TF/FVIIa复合物结合因子X(FX)，并且将FX转化为FXa。

因子VIIa(FVIIa)活性分析

一种测量凝血的分析涉及测量因子VIIa(FVIIa)活性。这类分析需要组织因子和钙的存在。TF/FVIIa复合物活性可通过小的底物或天然蛋白质底物，例如因子X(FX)进行测量。当FX用作底物时，磷脂也是TF/FVIIa活性所需的。在这一分析中，用FVIIa特异性发色底物S-2288(Diapharma，俄亥俄州西切斯特(West Chester,OH))确定FVIIa活性。S-2288底物的颜色变化可通过分光光度法测量，并且与FVIIa(例如，TF/FVIIa复合物)的蛋白水解活性成比例。

在这些实验中，比较以下组的FVIIa活性：组织因子域的219个氨基酸的胞外域(TF₂₁₉)、具有野生型组织因子域的多链嵌合多肽和具有突变组织因子域的多链嵌合多肽。含有突变组织因子分子的嵌合多肽用以下氨基酸位点处对TF结构域的突变构建：Lys20、Ile22、Asp58、Arg135和Phe140。

为了评估FVIIa的活性，将FVIIa和TF₂₁₉或含TF₂₁₉的多链嵌合多肽以等摩尔浓度(10nM)以70μL总体积在96孔ELISA板的所有孔中混合。在37℃下培育10分钟后，添加10μL8mM S-2288底物以开始反应。然后在37℃下保持培育20分钟。最后，通过读取405nm吸光度来监测颜色变化。表1和表2中显示不同TF/VIIa复合物的OD值。表1显示TF₂₁₉、21t15-21s野生型(WT)和21t15-21s突变体(Mut)的比较。表2显示TF₂₁₉、21t15-TGFRs野生型(WT)和21t15-TGFRs突变体(Mut)的比较。这些数据显示，在发色S-2288用作底物时，含TF₂₁₉的多链嵌合多肽(例如21t15-21s-WT、21t15-21s-Mut、21t15-TGFRS-WT和21t15-TGFRS-Mut)的FVIIa活性比TF₂₁₉低。值得注意的是，与含有野生型TF₂₁₉的多链嵌合多肽相比，含有TF₂₁₉突变的多链嵌合多肽显示低得多的FVIIa活性。

表1.FVIIa活性

分子	405nm OD值
		TF<sub>219</sub>	0.307
21t15/21S-WT	0.136
		21t15/21S-Mut	0.095

WT：野生型TF₂₁₉，Mut：含有突变的TF₂₁₉。

表2.FVIIa活性

分子	405nm OD值
		TF<sub>219</sub>	0.345
21t15/TGFRS-WT	0.227
		21t15/TGFRS-Mut	0.100

WT：野生型TF₂₁₉，Mut：含有突变的TF₂₁₉。

因子X(FX)活化分析

测量凝血的另一分析涉及测量因子X(FX)的活化。简单来说，在钙和磷脂的存在下，TF/VIIa将凝血因子X(FX)活化为因子Xa(FXa)。与不含跨膜域的TF₂₁₉相比，含有TF的跨膜域的TF₂₄₃将FX活化为FXa的活性更高。通过使用FXa特异性发色底物S-2765(Diapharma，俄亥俄州西切斯特)测量FXa活性来确定TF/VIIa依赖性的FX活化。S-2765的颜色变化可通过分光光度法进行监测，并且与FXa的蛋白水解活性成比例。

在这些实验中，将多链嵌合多肽(18t15-12s、小鼠(m)21t15、21t15-TGFRs和21t15-7s)的FX活化与阳性对照(因诺维)或TF₂₁₉进行比较。将TF₂₁₉(或含TF₂₁₉的多链嵌合多肽)/FVIIa复合物以等摩尔浓度(每个0.1nM)在96孔ELISA板的圆底孔中以50μL的体积混合，之后添加10μL 180nM FX。在37℃下培育15分钟(在此期间FX转化为Fxa)后，向每个孔中添加8μL 0.5M EDTA(其螯合钙，并且从而终止由TF/VIIa进行FX活化)以停止FX活化。接下来，将10μL 3.2mM S-2765底物添加反应混合物中。紧接着，测量405nm板吸光度，并且记录为0时的吸光度。然后将板在37℃下培育10-20分钟。通过培育后读取405nm吸光度来监测颜色变化。使用发色底物S-2765通过FXa活性测量的FX活化结果如图183所示。在这一实验中，使用含有脂化重组人TF₂₄₃的商业凝血酶原试剂因诺维作为FX活化的阳性对照。用纯化水将因诺维重构到约10nM TF₂₄₃。接下来，通过将等体积的0.2nM FVIIa与0.2nM因诺维混合来制造0.1nM TF/VIIa复合物。因诺维展现非常强效的FX活化活性，而TF₂₁₉和含TF₂₁₉的多链嵌合多肽具有非常低的FX活化活性，从而证实TF₂₁₉在TF/FVIIa复合物中对于体内活化天然底物FX不具有活性。

凝血酶原时间测试

测量凝血的第三种分析是凝血酶原时间(PT)测试，其测量凝血活性。此处，PT测试使用市售正常人血浆(Ci-Trol凝血对照，I级)进行。对于标准PT测试，在钙的存在下，通过添加脂化重组人TF₂₄₃因诺维来引发凝血反应。由STart PT分析仪(Diagnostics Stago，新泽西州帕西帕尼(Parsippany，NJ))监测并报告凝血时间。通过将0.2mL在PT分析缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.5，14.6mM CaCl₂，0.1％BSA)中稀释的因诺维的各种稀释液注入含有0.1mL在37℃下预温热的正常人血浆的比色皿中，开始PT分析。在PT分析中，较短的PT时间(凝血时间)指示较高的TF依赖性凝血活性，而较长的PT(凝血时间)指示较低的TF依赖性凝血活性。

如图184所示，将不同量的因诺维(例如，用纯化水重构，等效于10nM脂化重组人TF₂₄₃的因诺维视为100％因诺维)添加到PT分析中展现剂量反应关系，其中较低浓度的TF₂₄₃引起较长的PT时间(较低的凝血活性)。例如，0.001％的因诺维的PT时间大于110秒，这几乎与单独的缓冲液相同。

在另一实验中，对TF₂₁₉和多链嵌合多肽进行PT测试，所述多肽包括：18t15-12s、7t15-21s、21t15-TGFRs-WT和21t15-TGFRs-Mut。图185显示TF₂₁₉和含TF₂₁₉的多链嵌合多肽(浓度为100nM)具有延长的PT时间，表明凝血活性极低或无凝血活性。

还进行研究以评估在存在携带多链嵌合多肽(32Dβ或人PBMC)的细胞因子组分的受体的其它细胞存在下，培育多链嵌合多肽是否会影响PT分析中的凝血时间。为了检查表达IL-15受体的细胞(32Dβ细胞)或表达IL-15和IL-21受体的细胞(PBMC)是否会结合含IL-15的多链嵌合多肽以模拟天然TF作为细胞FVIIa受体，将含TF₂₁₉的多链嵌合多肽(对于每个分子，在100nM浓度下)在PT分析缓冲液中稀释并与32Dβ细胞(在2×10⁵个细胞/mL下)或PBMC(在1×10⁵个细胞/mL下)在室温下一起预培育20-30分钟。然后如上所述进行PT分析。图186和187显示以100nM最终浓度与32Dβ细胞(图186)或PBMC(图187)混合的TF₂₁₉和含TF₂₁₉的多链嵌合多肽的PT时间延长，与0.001-0.01％因诺维相似(等效于0.1pM至1.0pM TF₂₄₃)。以相对的TF₂₄₃活性百分比表示，含TF₂₁₉的多链嵌合多肽与因诺维相比，TF依赖性凝血活性低100,000至1,000,000倍。这证明即使在分子结合到完整的细胞膜表面，如32Dβ或PBMC时，含TF₂₁₉的多链嵌合多肽也具有极低或不具有TF依赖性凝血活性。

实例72：7t15-21s137L(长版)的表征

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:210)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:209)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:331)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:332)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

进行以下实验以评估7t15-21s137L中的CD137L部分是否完整以结合到CD137(4.1BB)。第1天，用100μL含有(2.5μg/mL)GAH IgG Fc(G-102-C，安迪生物公司)的R5(涂布缓冲液)涂布96孔板整夜。在第2天，将板洗涤三次并在37℃下用300μL含有1％BSA的PBS阻断2小时。在室温下以每孔100μL添加10ng/ml的4.1BB/Fc(838-4B，安迪生物公司)维持2小时。洗涤三次后，以10nM开始添加7t15-21s137L(长版)或7t15-21s137Ls(短版)，或以1/3稀释度从180ng/mL开始添加重组人4.1BBL，接着在4℃下培育整夜。在第3天，将板洗涤三次，并且以每孔100μL施加500ng/mL的生物素化山羊抗人4.1BBL(BAF2295，安迪生物公司)，接着在室温下培育2小时。将板洗涤三次，并且与0.25μg/mL HRP-SA(杰克逊免疫研究)以每孔100μL培育30min。然后将板洗涤三次，并且与100μL ABTS在室温下培育2min。在405nm处读取结果。如图188所示，与人重组4.1BB配体(rhCD137L，浅灰色星)相比，7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)均可与4.1BB/Fc(深色菱形和灰色方块)相互作用。与7t15-21s137L(短版)(灰色方块)相比，7t15-21s137L(长版)(深色菱形)与4.1BB/Fc更好地相互作用。

进行以下实验以评估7t15-21s137L(长版)中的组分IL7、IL21、IL15和4.1BBL是否完整，以使用ELISA通过个别抗体检测。96孔板用100μL含有(4μg/mL)抗TF(人IgG1)的R5(涂布缓冲液)涂布且在室温下培育2小时。将板洗涤三次，并且用100μL含有1％BSA的PBS阻断。以10nM起始并且以1/3稀释度添加纯化的7t15-21s137L(长版)，接着在室温下培育60分钟。将板洗涤三次，并且每孔添加500ng/mL生物素化抗IL7(506602，安迪生物公司)、500ng/mL生物化抗IL21(13-7218-81，安迪生物公司)、50ng/mL生物素化抗IL15(BAM247，安迪生物公司)或500ng/ml生物素化山羊抗人4.1BBL(BAF2295，安迪生物公司)并在室温下培育60分钟。将板洗涤三次并在室温下与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究)以每孔100μL培育30分钟。将板洗涤四次，并且与100μL ABTS在室温下培育2分钟。读取405nm吸光度结果。如图189A-189D所示，通过个别抗体检测到7t15-21s137L(长版)中的组分，包括IL7、IL21、IL15和4.1BBL。

进行以下实验以评估7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)中的IL15的活性。将7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)促进表达IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖的能力与重组IL15进行比较。将IL15依赖性CTLL2细胞用IMDM-10％FBS洗涤五次，并且以2×10⁴个细胞/孔接种到孔中。将连续稀释的7t15-21s137L(长版)、7t15-21s137L(短版)或IL15添加到细胞中。在CO₂培养箱中在37℃下培育细胞3天。通过在第3天向每个孔中添加20μL PrestoBlue(A13261，赛默飞世尔)，并且在CO₂培养箱中在37℃下再培养4小时来检测细胞增殖。在微量滴定板读取器中读取570-610nm原始吸光度。如图190所示，7t15-21s137L(长版)、7t15-21s137L(短版)和IL15都促进CTLL2细胞增殖。7t15-21s137L(长版)、7t15-21s137L(短版)和IL15的EC₅₀分别是51.19pM、55.75pM和4.947pM。

实例73：2t2诱导Treg细胞

通过Ficoll Paque Plus(GE17144003)从5mL全血白细胞层中分离出健康供体(供体163)的外周血单核细胞(PBMC)。然后用ACK裂解PBMC以去除红细胞。细胞用IMDM-10％FBS洗涤并计数。将1.8×10⁶个细胞(100ΤL/管)接种于流量管中且与50ΤL的浓度递减的2t2或IL2(15000、1500、150、15、1.5、0.15或0pM)和50ΤL的预染色抗体(抗CD8-BV605和抗CD127-AF647)一起培育。在水浴中、在37℃下培育细胞30分钟。在水浴中，在37℃下，历时10分钟添加200ΤL预温热的BD Phosflow固定缓冲液I(目录号557870，Becton DickinsonBiosciences)以中止刺激。将细胞(4.5×10⁵个细胞/100ΤL)转移到V形96孔板中且离心，随后在冰上用100ΤL的-20℃预冷却BD Phosflow Perm缓冲液III(Cat#BD Biosciences)渗透30分钟。细胞然后充分地用200ΤL的FACS缓冲液洗涤2次且用一组荧光抗体(抗CD25-PE、CD4-PerCP-Cy5.5、CD56-BV421、CD45RA-PE-Cy7和pSTAT5a-AF488)染色以区分不同的淋巴细胞亚群且评估pSTAT5a状态。将细胞离心并且再悬浮于200ΤL FACS缓冲液中以用于FACSCelesta分析。如图191A中所示，6pM的2t2足以诱导CD4⁺CD25^hi T_reg细胞中的Stat5a发生磷酸化，而诱导相同的淋巴细胞群中的Stat5a发生磷酸化需要43.11pM的IL-2。相比之下，2t2诱导CD4⁺CD25^-T_con和CD8⁺T_con细胞中的Stat5a发生磷酸化的活性小于IL2(图191B)或活性等同于IL2(图191C)。这些结果表明，在活化人PBMC中的T_reg方面，2t2优于IL2，且在人血液淋巴细胞pStat5a应答方面，2t2展现的T_reg选择性相较于IL-2增大。

实例74.使用单链嵌合多肽改善毛发生长

将7周龄C57BL6/J小鼠的背毛剃毛并使用商业脱毛膏脱毛。在同一天向小鼠皮下注射单次剂量2t2或低剂量的市售重组IL-2，然后每天给药历时另外四天。未经处理的小鼠用作对照。在第10天，处死小鼠并制备剃毛区域的皮肤切片。图192A-192E显示了脱毛后第10天C57BL6J小鼠皮肤切片的代表性H&E染色。图192A显示了对照小鼠-仅在剃毛后进行了脱毛，图192B显示了在脱毛后再施用低剂量IL-2(1mg/kg)的小鼠，并且图192C-192E显示了在脱毛后再施用0.3mg/kg(图192C)、1mg/kg(图192D)和3mg/kg(图192E)2t2的小鼠。黑色箭头表示生长期的毛囊，这些毛囊随后将延伸到真皮中并促进头发生长。图194显示了每个处理组每10个视野计数的生长期毛囊总数。总而言之，数据显示与仅脱毛相比，2t2分子使得生长期毛囊数量增加。这种作用也是剂量依赖性的。

实例75：使免疫细胞分化成记忆样免疫细胞

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离出CD56⁺NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数并以2x10⁶细胞/mL的密度再悬浮于补充有2mM L-谷氨酰胺(赛默生命技术公司)、抗生素(青霉素，10,000个单位/mL；链霉素，10,000μg/mL；赛默生命技术公司)和10％FBS(Hyclone)的RPMI 1640培养基(吉毕科)中。。将细胞(1mL)转移至平底24孔板中，且通过培养基进行：不处理，或用7t15-21s+抗组织因子(TF)-抗体(IgG1)(50nM)扩增14天。用新鲜的7t15-21s+抗TF抗体(IgG1)(50nM)加强细胞，以使细胞密度保持在大约1x 10⁶细胞/mL。

处理组的未扩增NK细胞用作全DNA甲基化水平的阳性对照(数据未显示)。使NK细胞集结(1x10⁶)，并使用QIAamp UCP DNA微型试剂盒(凯杰)分离出基因组DNA(nDNA)。使用EZ DNA Methylation-Direct试剂盒(Zymo Research)，根据制造商的方案，对500ng纯化的nDNA进行亚硫酸氢钠处理。亚硫酸氢盐处理在DNA中引入了甲基化依赖的变化，其中去甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则保持不变。亚硫酸氢盐处理的nDNA(10-50ng)用作模板，以便使用含有正向引物IFNG127F(5'-ATGGTATAGGTGGGTATAATGG-3')和生物素化反向引物IFNG355R-bio(生物素-5'-CAATATACTACACCTCCTCTAACTAC-3')(GENEWIZ)的Pyromark PCR试剂盒(凯杰)对含有两个CpG位点(CpG-186和CpG-54，相对于转录起始位点TSS的位置)的IFNγ启动子的228bp区域进行PCR扩增。PCR条件是在95℃下15分钟，在95℃下30秒、在56℃下30秒、在72℃下60秒、然后在72℃下10分钟的48个循环。目测1.2％TAE琼脂糖凝胶上的PCR扩增产物的完整性和品质。通过焦磷酸测序测定这两个CpG位点的DNA甲基化状态，这是在单个CpG位点定量测量DNA甲基化的金标准技术。在约翰霍普金斯大学遗传资源核心机构(Johns Hopkins University Genetic Resources Core Facility)，使用对CpG位点-186和CpG位点-54分别具有特异性的DNA测序引物C186-IFNG135F(5'-GGTGGGTATAATGGG-3')(SEQ ID NO:333)和C54-IFNG261F(5'-ATTATTTTATTTTAAAAAATTTGTG-3')(SEQ ID NO:334)进行焦磷酸测序反应。使用市售的未甲基化和甲基化DNA(Zymo Research)作为DNA甲基化的对照。对于每种处理，合并两个CpG位点(-186和-54)的甲基化百分比。相对于在未暴露的NK细胞中观察到的两个CpG位点的DNA甲基化水平，计算DNA甲基化的百分比差异。

对这两个IFNγCpG位点的DNA甲基化状态的分析揭露，由7t15-21s+抗TF抗体支持的NK细胞中的DNA脱甲基水平高于未暴露的NK细胞(图194)。7t15-21s+抗TF抗体支持的这些NK细胞与未暴露的NK细胞相比，在DNA甲基化方面表现出47.70％±11.76的差异(即，脱甲基化)。在用7t15-21s+抗TF抗体处理后，这两个IFNγCpG位点的DNA甲基化水平与IFNγ的表达增加相关。这些数据表明，NK细胞的长期暴露(培养扩增14天)联合7t15-21s+抗TF抗体的组合方案能够诱导两个低甲基化IFNγCpG位点(-186和-54)的DNA脱甲基化，并且7t15-21s+抗TF抗体(IgG1)能够通过CpG位点的DNA脱甲基化，以表观遗传方式对IFNγ的基因表达进行再编程，从而使得NK细胞相互转化为先天性免疫记忆NK细胞。

其它实施例

应理解，虽然已经结合其具体说明对本发明进行了描述，但前述说明旨在说明而非限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其它方面、优点以及修改均处于以下权利要求书的范围内。

示例性实施例

实施例A1.单链嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)第二靶标结合域，

实施例A2.实施例A1的单链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域与所述可溶性组织因子域彼此直接邻接。

实施例A3.实施例A1的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例A4.实施例A1至A3中任一项的单链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域和所述第二靶标结合域彼此直接邻接。

实施例A5.实施例A1至A3中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于可溶性组织因子域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例A6.实施例A1的单链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域与所述第二靶标结合域彼此直接邻接。

实施例A7.实施例A1的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例A8.实施例A6或A7的单链嵌合多肽，其中第二靶标结合域和可溶性组织因子域彼此直接邻接。

实施例A9.实施例A6或A7的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于第二靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例A10.实施例A1至A9中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。

实施例A11.实施例A10的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例A12.实施例A11的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例A13.实施例A1至A9中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例A14.实施例A1至A13中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。

实施例A15.实施例A14的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例A16.根据实施例A12或A13所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例A17.实施例A1至A16中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-D的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例A18.实施例A1至A16中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例A19.实施例A18的单链嵌合多肽，其中可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-D和SCF、FLT3L、MICA、MICB，和ULP16结合蛋白。

实施例A20.实施例A1至A16中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例A21.实施例A20的单链嵌合多肽，其中可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例A22.实施例A1至A21中任一项的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子域是可溶性人组织因子域。

实施例A23.实施例A22的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少80％一致的序列。

实施例A24.实施例A23的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少90％一致的序列。

实施例A25.实施例A24的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少95％一致的序列。

实施例A26.实施例A22至A25中任一项的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例A27.实施例A26的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例A28.实施例A1至A27中任一项的单链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不能结合因子VIIa。

实施例A29.实施例A1至A28中任一项的单链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例A30.实施例A1至A29中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例A31.实施例A1至A30中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含一个或多个位于其N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例A32.实施例A31的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其N端的其它靶标结合域。

实施例A33.实施例A32的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例A34.实施例A33的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于至少一个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例A35.实施例A31的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其C端的其它靶标结合域。

实施例A36.实施例A35的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例A37.实施例A35的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于至少一个其它靶标结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例A38.实施例A31的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其N端和C端的其它靶标结合域。

实施例A39.实施例A38的单链嵌合多肽，其中位于N端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例A40.实施例A38的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于N端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例A41.实施例A38的单链嵌合多肽，其中位于C端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例A42.实施例A38的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于C端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例A43.实施例A31至A42中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例A44.实施例A43的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例A45.实施例A44的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例A46.实施例A43的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例A47.实施例A46的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性各自结合到相同的表位。

实施例A48.实施例A47的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例A49.实施例A31至A42中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到相同的抗原。

实施例A50.实施例A31至A49中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个是抗原结合域。

实施例A51.实施例A50的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例A52.实施例A51的单链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例A53.实施例A31至A52中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-D的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例A54.实施例A31至A52中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例A55.实施例A54的单链嵌合多肽，其中可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-D和SCF、FLT3L、MICA、MICB，和ULP16结合蛋白。

实施例A56.实施例A31至A52中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例A57.实施例A56的单链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例A58.实施例A1至A57中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含位于其N端的信号序列。

实施例A59.实施例A1至A58中任一项的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽进一步包含定位于单链嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例A60.一种组合物，其包含实施例A1至A59的任一种单链嵌合多肽。

实施例A61.实施例A60的组合物，其中所述组合物是医药组合物。

实施例A62.一种试剂盒，其包含至少一次剂量的实施例A60或A61的组合物。

实施例A63.一种核酸，其编码实施例A1至A59中任一项的任一种单链嵌合多肽。

实施例A64.一种载体，其包含实施例A63的核酸。

实施例A65.实施例A64的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例A66.一种细胞，其包含实施例A63的核酸或实施例A64或A65的载体。

实施例A67.一种产生单链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起所述单链嵌合多肽产生的条件下、在培养基中培养实施例A66的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述单链嵌合多肽。

实施例A68.一种单链嵌合多肽，其通过实施例A67的方法产生。

实施例A69.实施例A26的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少80％一致的序列。

实施例A70.实施例A69的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少90％一致的序列。

实施例A71.实施例A70的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少95％一致的序列。

实施例A72.实施例A71的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少100％一致的序列。

实施例A73.实施例A26的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少80％一致的序列。

实施例A74.实施例A73的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少90％一致的序列。

实施例A75.实施例A74的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少95％一致的序列。

实施例A76.实施例A75的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98 100％一致的序列。

实施例B1.一种单链嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)第二靶标结合域，

其中：

第一靶标结合域和第二靶标结合域各自特异性结合到IL-2受体；或

第一靶标结合域和第二靶标结合域各自特异性结合到IL-15受体。

实施例B2.实施例B1的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域与可溶性组织因子域彼此直接邻接。

实施例B3.实施例B1的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例B4.实施例B1至B3中任一项的单链嵌合多肽，其中可溶性组织因子域与第二靶标结合域彼此直接邻接。

实施例B5.实施例B1至B3中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于可溶性组织因子域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例B6.实施例B1的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域与第二靶标结合域彼此直接邻接。

实施例B7.实施例B1的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例B8.实施例B6或B7的单链嵌合多肽，其中第二靶标结合域与可溶性组织因子域彼此直接邻接。

实施例B9.实施例B6或B7的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于第二靶标结合域和可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例B10.实施例B1至B9中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域均为可溶性白介素蛋白。

实施例B11.实施例B10的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域是可溶性IL-2蛋白。

实施例B12.实施例B11的单链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-2蛋白是人可溶性IL-2蛋白。

实施例B13.实施例B12的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-2蛋白包含SEQ IDNO:78。

实施例B14.实施例B10的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域是可溶性IL-15蛋白。

实施例B15.实施例B14的单链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15蛋白是人可溶性IL-15蛋白。

实施例B16.实施例B15的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-15蛋白包含SEQ IDNO:82。

实施例B17.实施例B1至B16中任一项的单链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例B18.实施例B17的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少80％一致的序列。

实施例B19.实施例B18的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少90％一致的序列。

实施例B20.实施例B19的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少95％一致的序列。

实施例B21.实施例B17至B20中任一项的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例B22.实施例B21的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例B23.实施例B1至B22中任一项的单链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不能结合因子VIIa。

实施例B24.实施例B1至B23中任一项的单链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例B25.实施例B1至B24中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例B26.实施例B1到B25中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含一个或多个位于其N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例B27.实施例B26的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其N端的其它靶标结合域。

实施例B28.实施例B27的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例B29.实施例B28的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于至少一个其它靶标结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例B30.实施例B26的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其C端的其它靶标结合域。

实施例B31.实施例B30的单链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例B32.实施例B30的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于至少一个其它靶标结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例B33.实施例B26的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其N端和C端的其它靶标结合域。

实施例B34.实施例B33的单链嵌合多肽，其中位于N端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例B35.实施例B33的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于N端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例B36.实施例B33的单链嵌合多肽，其中位于C端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例B37.实施例B33的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于C端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例B38.实施例B26至B37中任一项的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到IL-2受体或IL-15受体。

实施例B39.实施例B38的单链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例B40.实施例B26至B37中任一项的单链嵌合多肽，其中所述一个或多个其它靶标结合域是抗原结合域。

实施例B41.实施例B40的单链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例B42.实施例B26至B37、B40和B41中任一项的单链嵌合多肽，其中所述一个或多个其它靶标结合域特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例B43.实施例B6至B37、B40和B41中任一项的单链嵌合多肽，其中所述一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例B44.实施例B43的单链嵌合多肽，其中所述可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

实施例B45.实施例B6至B37、B40和B41中任一项的单链嵌合多肽，其中所述一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例B46.实施例B45的单链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)和可溶性TGF-βRIII。

实施例B47.实施例B1至B46中任一项的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含位于其N端的信号序列。

实施例B48.实施例B1至B47中任一项的单链嵌合多肽，其中单链嵌合多肽进一步包含定位于单链嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例B49.一种组合物，其包含实施例B1至B48的任一种单链嵌合多肽。

实施例B50.实施例B49的组合物，其中所述组合物是医药组合物。

实施例B51.一种试剂盒，其包含至少一次剂量的实施例B49或B50的组合物。

实施例B52.一种核酸，其编码实施例B1到B48中任一项的任一种单链嵌合多肽。

实施例B53.一种载体，其包含实施例B52的核酸。

实施例B54.实施例B53的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例B55.一种细胞，其包含实施例B52的核酸或实施例B53或B54的载体。

实施例B56.一种产生单链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起所述单链嵌合多肽产生的条件下、在培养基中培养实施例B55的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述单链嵌合多肽。

实施例B57.一种单链嵌合多肽，其通过实施例B56的方法产生。

实施例B58.实施例B21的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少80％一致的序列。

实施例B59.实施例B58的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少90％一致的序列。

实施例B60.实施例B59的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少95％一致的序列。

实施例B61.实施例B60的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97 100％一致的序列。

实施例B62.实施例B21的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少80％一致的序列。

实施例B63.实施例B62的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少90％一致的序列。

实施例B64.实施例B63的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少95％一致的序列。

实施例B65.实施例B64的单链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98 100％一致的序列。

实施例C1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域和所述第二域的结合而缔合。

实施例C2.实施例C1的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述可溶性组织因子域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C3.实施例C1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例C4.实施例C1至C3中任一项的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C5.实施例C1至C3中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例C6.实施例C1至C5中任一项的多链嵌合多肽，其中亲和域对中的第二域与第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C7.实施例C1至C5中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例C8.实施例C1至C7中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。

实施例C9.实施例C8的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例C10.实施例C9的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例C11.实施例C1至C7中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例C12.实施例C1至C11中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。

实施例C13.实施例C12的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例C14.实施例C12或C13的多链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例C15.实施例C1至C14中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例C16.实施例C1至C14中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例C17.实施例C16的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB，和ULP16结合蛋白。

实施例C18.实施例C1至C14中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例C19.实施例C18的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例C20.实施例C1至C19中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含一个或多个其它靶标结合域，其中所述一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例C21.实施例C20的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与一个或多个其它抗原结合域中的至少一个之间的接头序列，和/或介于一个或多个其它抗原结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例C22.实施例C1至C19中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第一嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例C23.实施例C22的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第一域。

实施例C24.实施例C22的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例C25.实施例C22的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域。

实施例C26.实施例C22的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第一靶标结合域之间的接头序列。

实施例C27.实施例C22的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例C28.实施例C27的多链嵌合多肽，其中安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例C29.实施例C27的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例C30.实施例C27的多链嵌合多肽，其中安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例C31.实施例C27的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例C32.实施例C27的多链嵌合多肽，其中定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。

实施例C33.实施例C27的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含接头序列，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例C34.实施例C1至C33中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例C35.实施例C34的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第二域。

实施例C36.实施例C34的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第二域之间的接头序列。

实施例C37.实施例C34的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接第二靶标结合域。

实施例C38.实施例C34的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例C39.实施例C20至C38中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例C40.实施例C39的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例C41.实施例C40的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例C42.实施例C39的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例C43.实施例C42的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的表位。

实施例C44.实施例C43的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例C45.实施例C20至C38中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例C46.实施例C20至C45中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个是抗原结合域。

实施例C47.实施例C46的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例C48.实施例C47的多链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv。

实施例C49.实施例C20至C48中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

实施例C50.实施例C20至C48中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例C51.实施例C50的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF、FLT3L、MICA、MICB，和ULP16结合蛋白。

实施例C52.实施例C20至C48中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例C53.实施例C52的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例C54.实施例C1至C53中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含位于第一嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例C55.实施例C1至C53中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含定位于第二嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例C56.实施例C1至C55中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例C57.实施例C56的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少80％一致的序列。

实施例C58.实施例C57的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少90％一致的序列。

实施例C59.实施例C58的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少95％一致的序列。

实施例C60.实施例C56至C59中任一项的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例C61.实施例C60的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例C62.实施例C1至C61中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不能结合到因子VIIa。

实施例C63.实施例C1至C62中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例C64.实施例C1至C63中任一项的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例C65.实施例C1至C64中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对是来自人IL-15受体α链(IL15Rα)的寿司域和可溶性IL-15。

实施例C66.实施例C65的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例C67.实施例C65或C66的多链嵌合多肽，其中所述人IL-15Rα是成熟全长IL-15Rα。

实施例C68.实施例C1至C64中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对选自由以下组成的群组：芽胞杆菌核糖核酸酶(barnase)和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子(barnstar)、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块，以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例C69.实施例C1至C68中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽进一步包含位于其N端的信号序列。

实施例C70.一种组合物，其包含实施例C1至C69的任一种多链嵌合多肽。

实施例C71.实施例C70的组合物，其中所述组合物是医药组合物。

实施例C72.一种试剂盒，其包含至少一次剂量的实施例C70或C71的组合物。

实施例C73.一种核酸，其编码实施例C1至C69中任一项的任一种多链嵌合多肽。

实施例C74.一种载体，其包含实施例C73的核酸。

实施例C75.实施例C74的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例C76.一种细胞，其包含实施例C73的核酸或实施例C74或C75的载体。

实施例C77.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起所述多链嵌合多肽产生的条件下、在培养基中培养实施例C76的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例C78.一种多链嵌合多肽，其通过实施例C77的方法产生。

实施例C79.实施例A56的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少80％一致的序列。

实施例C80.实施例C79的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少90％一致的序列。

实施例C81.实施例C80的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少95％一致的序列。

实施例C82.实施例C81的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97 100％一致的序列。

实施例C83.实施例C56的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少80％一致的序列。

实施例C84.实施例C83的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少90％一致的序列。

实施例C85.实施例C84的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少95％一致的序列。

实施例C86.实施例C85的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少100％一致的序列。

实施例D1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域和所述第二域的结合而缔合；

所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。

实施例D2.实施例D1的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述可溶性组织因子域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D3.实施例D1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合域与所述可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例D4.实施例D1至D3中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域和所述亲和域对中的所述第一域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D5.实施例D1至D3中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子域与所述亲和域对中的所述第一域之间的接头序列。

实施例D6.实施例D1至D5中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对中的所述第二域和所述第二靶标结合域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D7.实施例D1至D5中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于所述第二嵌合多肽中的所述亲和域对中的所述第二域与所述第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例D8.实施例D1至D7中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例D9.实施例D8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少80％一致的序列。

实施例D10.实施例D9的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少90％一致的序列。

实施例D11.实施例D10的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少95％一致的序列。

实施例D12.实施例D8至D11中任一项的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例D13.实施例D12的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例D14.实施例D1至D13中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不能结合到因子VIIa。

实施例D15.实施例D1至D14中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例D16.实施例D1至D15中任一项的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例D17.实施例D1至D16中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含位于第一嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例D18.实施例D1至D17中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含位于第二嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例D19.根据实施例F1至F70中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

实施例D20.实施例D19的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ ID NO:117。

实施例D21.实施例D20的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ ID NO:117。

实施例D22.实施例D1至D21中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对是来自人IL-15受体α链(IL-15Rα)的寿司域和可溶性IL-15。

实施例D23.实施例D22的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例D24.实施例D22的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8280％一致的序列。

实施例D25.实施例D24的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8290％一致的序列。

实施例D26.实施例D25的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8295％一致的序列。

实施例D27.实施例D26的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQ ID NO:82。

实施例D28.实施例D22至D27中任一项的多链嵌合多肽，其中IL-15Rα的寿司域包含来自人IL-15Rα的寿司域。

实施例D29.实施例D28的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 80％一致的序列。

实施例D30.实施例D29的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 90％一致的序列。

实施例D31.实施例D30的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 95％一致的序列。

实施例D32.实施例D31的多链嵌合多肽，其中人IL15Rα的寿司域包含SEQ ID NO:113。

实施例D33.实施例D28的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域是成熟全长IL-15Rα。

实施例D34.实施例D1至D21中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对选自由以下组成的群组：芽胞杆菌核糖核酸酶和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块，以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例D35.实施例D1至D34中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是激动性抗原结合域。

实施例D36.实施例D35的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是激动性抗原结合域。

实施例D37.实施例D35或D36的多链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例D38.实施例D1至D34中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。

实施例D39.实施例D38的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地是可溶性IL-15或可溶性IL-18。

实施例D40.实施例D1至D39中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。

实施例D41.实施例B40的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例D42.实施例D41的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例D43.实施例D1至D39中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到IL-12的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-18的受体。

实施例D44.实施例D1至D39中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到IL-18的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-12的受体。

实施例D45.实施例D44的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域包含可溶性IL-18。

实施例D46.实施例D45的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-18是人可溶性IL-18。

实施例D47.实施例D46的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-18包含与SEQ IDNO:109至少80％一致的序列。

实施例D48.实施例D47的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-18包含与SEQ IDNO:109至少90％一致的序列。

实施例D49.实施例D48的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-18包含与SEQ IDNO:109至少95％一致的序列。

实施例D50.实施例D49的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-18包含与SEQ IDNO:109的序列。

实施例D51.实施例D44至D50中任一项的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合域包含可溶性IL-12。

实施例D52.实施例D51的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-18是人可溶性IL-12。

实施例D53.实施例D52的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-15包含人可溶性IL-12β(p40)的序列和人可溶性IL-12α(p35)的序列。

实施例D54.实施例D53的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-15进一步包含介于可溶性IL-12β(p40)的序列与人可溶性IL-12α(p35)的序列之间的接头序列。

实施例D55.实施例D54的多链嵌合多肽，其中所述接头序列包含SEQ ID NO:102。

实施例D56.实施例D53至D55中任一项的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:81至少80％一致的序列。

实施例D57.实施例D56的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:81至少90％一致的序列。

实施例D58.实施例D57的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:81至少95％一致的序列。

实施例D59.实施例D58的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:81。

实施例D60.实施例D53至D59中任一项的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:80至少80％一致的序列。

实施例D61.实施例D60的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:80至少90％一致的序列。

实施例D62.实施例D61的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:80至少95％一致的序列。

实施例D63.实施例D62的多链嵌合多肽，其中人可溶性IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:80。

实施例D64.实施例D1的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:174至少80％一致的序列。

实施例D65.实施例D64的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:174至少90％一致的序列。

实施例D66.实施例D65的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:174至少95％一致的序列。

实施例D67.实施例D66的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:174。

实施例D68.实施例D67的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:176。

实施例D69.实施例D1和D64至D68中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:178至少80％一致的序列。

实施例D70.实施例D69的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:178至少90％一致的序列。

实施例D71.实施例D70的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:178至少95％一致的序列。

实施例D72.实施例D71的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:178。

实施例D73.实施例D72的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:180。

实施例D74.实施例D1至D63中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含一个或多个其它靶标结合域，其中所述一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例D75.实施例D74的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与一个或多个其它抗原结合域中的至少一个之间的接头序列，和/或介于一个或多个其它抗原结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例D76.实施例D1至D63中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第一嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例D77.实施例D76的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第一域。

实施例D78.根据实施例F22所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个其它靶标结合域中的所述至少一个与所述亲和域对中的所述第一域之间的接头序列。

实施例D79.实施例D76的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域。

实施例D80.实施例D76的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第一靶标结合域之间的接头序列。

实施例D81.实施例D76的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例D82.实施例D81的多链嵌合多肽，其中安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例D83.实施例D81的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例D84.实施例D81的多链嵌合多肽，其中安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例D85.实施例D81的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例D86.实施例D81的多链嵌合多肽，其中定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。

实施例D87.实施例D81的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含接头序列，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例D88.实施例D1至D63和D74至D87中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例D89.实施例D88的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第二域。

实施例D90.实施例D88的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第二域之间的接头序列。

实施例D91.实施例D88的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接第二靶标结合域。

实施例D92.实施例B88的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例D93.实施例D74至D92中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例D94.实施例B93的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例D95.实施例B94的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例D96.实施例D74至D92中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例D97.实施例D74至D96中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它抗原结合域特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例D98.实施例D74至D96中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例D99.实施例B98的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB，和ULP16结合蛋白。

实施例D100.实施例D74至D96中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例D101.实施例B100的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122，或可溶性CD28。

实施例D102.一种组合物，其包含实施例D1至D101的任一种多链嵌合多肽。

实施例D103.实施例D102的组合物，其中所述组合物是医药组合物。

实施例D104.一种试剂盒，其包含至少一次剂量的实施例D102或D103的组合物。

实施例D105.一种核酸，其编码实施例D1至D101中任一项的任一种多链嵌合多肽。

实施例D106.一种载体，其包含实施例D105的核酸。

实施例D107.实施例D106的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例D108.一种细胞，其包含实施例D105的核酸或实施例D106或D107的载体。

实施例D109.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起所述多链嵌合多肽产生的条件下、在培养基中培养实施例D108的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例D110.一种多链嵌合多肽，其通过实施例D109的方法产生。

实施例D111.实施例D8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少80％一致的序列。

实施例D112.实施例D111的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少90％一致的序列。

实施例D113.实施例D112的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少95％一致的序列。

实施例D114.实施例D113的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97 100％一致的序列。

实施例D115.实施例D8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少80％一致的序列。

实施例D116.实施例D115的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少90％一致的序列。

实施例D117.实施例D116的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少95％一致的序列。

实施例D118.实施例D117的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98 100％一致的序列。

实施例E1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域和所述第二域的结合而缔合；和

所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或肿瘤生长因子受体βII(TGFβRII)的配体。

实施例E2.实施例E1的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述可溶性组织因子域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E3.实施例E1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例E4.实施例E1至E3中任一项的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E5.实施例E1至E3中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例E6.实施例E1至E5中任一项的多链嵌合多肽，其中亲和域对中的第二域和第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E7.实施例E1至E5中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例E8.实施例E1至E7中任一项的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例E9.实施例E8的多链嵌合多肽，其中人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少80％一致的序列。

实施例E10.实施例E9的多链嵌合多肽，其中人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少90％一致的序列。

实施例E11.实施例E10的多链嵌合多肽，其中人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少95％一致的序列。

实施例E12.实施例E8至E11中任一项的多链嵌合多肽，其中人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例E13.实施例E12的多链嵌合多肽，其中人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例E14.实施例E1至E13中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不能结合到因子VIIa。

实施例E15.实施例E1至E14中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例E16.实施例E1至E15中任一项的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例E17.实施例E1至E16中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含位于第一嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例E18.实施例E1至E17中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含位于第二嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例E19.实施例E1至E18中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽进一步包含位于其N端的信号序列。

实施例E20.实施例E19的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ ID NO:117。

实施例E21.实施例E20的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ ID NO:117。

实施例E22.实施例E1至E21中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对是来自人IL-15受体α链(IL-15Rα)的寿司域和可溶性IL-15。

实施例E23.实施例E22的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例E24.实施例E22的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8280％一致的序列。

实施例E25.实施例E24的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8290％一致的序列。

实施例E26.实施例E25的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8295％一致的序列。

实施例E27.实施例E26的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQ ID NO:82。

实施例E28.实施例E22至E27中任一项的多链嵌合多肽，其中IL-15Rα的寿司域包含来自人IL-15Rα的寿司域。

实施例E29.实施例E28的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 80％一致的序列。

实施例E30.实施例E29的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 90％一致的序列。

实施例E31.实施例E30的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 95％一致的序列。

实施例E32.实施例E31的多链嵌合多肽，其中人IL15Rα的寿司域包含SEQ ID NO:113。

实施例E33.实施例E28的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域是成熟全长IL-15Rα。

实施例E34.实施例E1至E21中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对选自由以下组成的群组：芽胞杆菌核糖核酸酶和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块，以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例E35.实施例E1至E34中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。

实施例E36.实施例E35的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域是抗原结合域。

实施例E37.实施例E35或E36的多链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例E38.实施例E1至E34中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-21或可溶性TGFβRII。

实施例E39.实施例E1至E38中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-21的受体或TGFβRII的配体。

实施例E40.实施例E39的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例E41.实施例E40的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例E42.实施例E1至E38中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到TGFβRII的配体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

实施例E43.实施例E1至E38中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到IL-21的受体，而第二靶标结合域特异性结合到TGFβRII的配体。

实施例E44.实施例E43的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域包含可溶性IL-21。

实施例E45.实施例E44的多链嵌合多肽，其中可溶性IL-21是人可溶性IL-21。

实施例E46.实施例E45的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含与SEQ IDNO:83至少80％一致的序列。

实施例E47.实施例E46的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含与SEQ IDNO:83至少90％一致的序列。

实施例E48.实施例E47的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含与SEQ IDNO:83至少95％一致的序列。

实施例E49.实施例E48的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含与SEQ IDNO:83的序列。

实施例E50.实施例E43至E49中任一项的多链嵌合多肽，其中第二靶标结合域包含可溶性TGFβRII。

实施例E51.实施例E50的多链嵌合多肽，其中可溶性TGFβRII是人可溶性TGFβRII。

实施例E52.实施例E51的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII包含人可溶性TGFβRII的第一序列和人可溶性TGFβRII的第二序列。

实施例E53.实施例E52的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII进一步包含介于人可溶性TGFβRII的第一序列与人可溶性TGFβRII的第二序列之间的接头序列。

实施例E54.实施例E53的多链嵌合多肽，其中所述接头序列包含SEQ ID NO:102。

实施例E55.实施例E52至E54中任一项的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII的第一序列包含与SEQ ID NO:183至少80％一致的序列。

实施例E56.实施例E55的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII的第一序列包含与SEQ ID NO:183至少90％一致的序列。

实施例E57.实施例E56的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII的第一序列包含与SEQ ID NO:183至少95％一致的序列。

实施例E58.实施例E57的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII的第一序列包含SEQ ID NO:183。

实施例E59.实施例E52至E58中任一项的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII的所述第二序列包含与SEQ ID NO:184至少80％一致的序列。

实施例E60.根据实施例C59所述的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性TGFβRII的第二序列包含与SEQ ID NO:184至少90％一致的序列。

实施例E61.实施例E60的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII的所述第二序列包含与SEQ ID NO:184至少95％一致的序列。

实施例E62.实施例E61的多链嵌合多肽，其中人可溶性TGFβRII的第二序列包含SEQ ID NO:184。

实施例E63.实施例E1的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:189至少80％一致的序列。

实施例E64.实施例E63的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:189至少80％一致的序列。

实施例E65.实施例E64的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:189至少95％一致的序列。

实施例E66.实施例E65的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:189。

实施例E67.实施例E66的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:191。

实施例E68.实施例E1和E63至E67中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少80％一致的序列。

实施例E69.实施例E68的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少90％一致的序列。

实施例E70.实施例E69的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少95％一致的序列。

实施例E71.实施例E70的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:193。

实施例E72.实施例E71的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:195。

实施例E73.实施例E1至E62中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含一个或多个其它靶标结合域，其中所述一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例E74.实施例E73的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与一个或多个其它抗原结合域中的至少一个之间的接头序列，和/或介于一个或多个其它抗原结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例E75.实施例E1至E62中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第一嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例E76.实施例E75的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第一域。

实施例E77.实施例E75的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例E78.实施例E75的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域。

实施例E79.实施例E75的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第一靶标结合域之间的接头序列。

实施例E80.实施例E75的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例E81.实施例E80的多链嵌合多肽，其中安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例E82.实施例E80的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例E83.实施例E80的多链嵌合多肽，其中安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例E84.实施例E80的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例E85.实施例E80的多链嵌合多肽，其中定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。

实施例E86.实施例E80的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含接头序列，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例E87.实施例E1至E62和E73至E86中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例E88.实施例E87的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第二域。

实施例E89.实施例E87的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第二域之间的接头序列。

实施例E90.实施例E87的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接第二靶标结合域。

实施例E91.实施例E87的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例E92.实施例E73至E91中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例E93.实施例E92的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例E94.实施例E93的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例E95.实施例E73至E91中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例E96.实施例E73至E95中任一项的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个其它抗原结合域特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-D、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例E97.实施例E73至E95中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例E98.实施例E97的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB，和ULP16结合蛋白。

实施例E99.实施例E73至E95中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例E100.实施例E99的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例E101.一种组合物，其包含实施例E1至E100的任一种多链嵌合多肽。

实施例E102.实施例E101的组合物，其中所述组合物是医药组合物。

实施例E103.一种试剂盒，其包含至少一次剂量的实施例E101或E102的组合物。

实施例E104.一种核酸，其编码实施例E1至E100中任一项的任一种多链嵌合多肽。

实施例E105.一种载体，其包含实施例E104的核酸。

实施例E106.实施例E105的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例E107.一种细胞，其包含实施例C104的核酸或实施例E105或E106的载体。

实施例E108.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起所述多链嵌合多肽产生的条件下、在培养基中培养实施例E107的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例E109.一种多链嵌合多肽，其通过实施例E108的方法产生。

实施例E110.实施例E12的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少80％一致的序列。

实施例E111.实施例E110的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少90％一致的序列。

实施例E112.实施例E111的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少95％一致的序列。

实施例E113.实施例E112的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97 100％一致的序列。

实施例E114.实施例E12的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少80％一致的序列。

实施例E115.实施例E114的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少90％一致的序列。

实施例E116.实施例E115的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少95％一致的序列。

实施例E117.实施例E116的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98 100％一致的序列。

实施例F1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(c)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(d)第二嵌合多肽，其包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域和所述第二域的结合而缔合；

所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。

实施例F2.实施例F1的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F3.实施例F1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例F4.实施例F1至F3中任一项的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F5.实施例F1至F3中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例F6.实施例F1至F5中任一项的多链嵌合多肽，其中亲和域对中的第二域与第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F7.实施例F1至F5中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例F8.实施例F1至F7中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例F9.实施例F8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少80％一致的序列。

实施例F10.实施例F9的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少90％一致的序列。

实施例F11.实施例F10的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少95％一致的序列。

实施例F12.实施例F11的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含SEQID NO:93。

实施例F13.实施例F8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少80％一致的序列。

实施例F14.实施例F13的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少90％一致的序列。

实施例F15.实施例F14的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少95％一致的序列。

实施例F16.实施例F15的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含SEQID NO:97。

实施例F17.实施例F8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少80％一致的序列。

实施例F18.实施例F17的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少90％一致的序列。

实施例F19.实施例F18的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少95％一致的序列。

实施例F20.实施例F19的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含SEQID NO:98。

实施例F21.实施例F8至F11、F13至F15和F17至F19中任一项的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例F22.实施例F21的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例F23.实施例F1至F22中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不能结合到因子VIIa。

实施例F24.实施例F1至F23中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例F25.实施例F1至F24中任一项的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例F26.实施例F1至F25中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含位于第一嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例F27.实施例F1至F26中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含位于第二嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例F28.实施例F1至F27中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽进一步包含位于其N端的信号序列。

实施例F29.实施例F28的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ ID NO:117。

实施例F30.实施例F28的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ ID NO:328。

实施例F31.实施例F1至F30中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对是来自人IL-15受体α链(IL-15Rα)的寿司域和可溶性IL-15。

实施例F32.实施例F31的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例F33.实施例F31的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:82至少80％一致的序列。

实施例F34.实施例F33的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:82至少90％一致的序列。

实施例F35.实施例F34的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:82至少95％一致的序列。

实施例F36.实施例F35的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQ ID NO:82。

实施例F37.实施例F31至F36中任一项的多链嵌合多肽，其中IL-15Rα的寿司域包含来自人IL-15Rα的寿司域。

实施例F38.实施例F37的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113至少80％一致的序列。

实施例F39.实施例F38的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113至少90％一致的序列。

实施例F40.实施例F39的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113至少95％一致的序列。

实施例F41.实施例F40的多链嵌合多肽，其中人IL15Rα的寿司域包含SEQ ID NO:113。

实施例F42.实施例F37的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域是成熟全长IL-15Rα。

实施例F43.实施例F1至F30中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对选自由以下组成的群组：芽胞杆菌核糖核酸酶和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块，以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例F44.实施例F1至F43中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是激动性抗原结合域。

实施例F45.实施例F44的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是激动性抗原结合域。

实施例F46.实施例F44或F45的多链嵌合多肽，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例F47.实施例F1至F43中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性IL-21或可溶性IL-7。

实施例F48.实施例F47的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地是可溶性IL-21或可溶性IL-7。

实施例F49.实施例F1至F48中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域均特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。

实施例F50.实施例F49的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例F51.实施例F50的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例F52.实施例F1至F48中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到IL-12的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-7的受体。

实施例F53.实施例F1至F48中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

实施例F54.实施例F53的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域包含可溶性IL-21。

实施例F55.实施例F54的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是人可溶性IL-21。

实施例F56.实施例F55的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含与SEQ IDNO:83至少80％一致的序列。

实施例F57.实施例F56的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含与SEQ IDNO:83至少90％一致的序列。

实施例F58.实施例F57的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含与SEQ IDNO:83至少95％一致的序列。

实施例F59.实施例F58的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-21包含SEQ ID NO:83的序列。

实施例F60.实施例F53至F59中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含可溶性IL-7。

实施例F61.实施例D60的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7是人可溶性IL-7。

实施例F62.实施例F61的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-7包含与SEQ IDNO:79至少80％一致的序列。

实施例F63.实施例F62的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-7包含与SEQ IDNO:79至少90％一致的序列。

实施例F64.实施例F63的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-7包含与SEQ IDNO:79至少95％一致的序列。

实施例F65.实施例F64的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性IL-7包含SEQ ID NO:79的序列。

实施例F66.实施例F1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:207至少80％一致的序列。

实施例F67.实施例F66的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少90％一致的序列。

实施例F68.实施例F67的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少95％一致的序列。

实施例F69.实施例F68的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:207。

实施例F70.实施例F69的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:209。

实施例F71.实施例F1和F66至F70中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:211至少80％一致的序列。

实施例F72.实施例F71的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:211至少90％一致的序列。

实施例F73.实施例F72的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:211至少95％一致的序列。

实施例F74.实施例F73的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:211。

实施例F75.实施例F74的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:213。

实施例F76.实施例F1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:199至少80％一致的序列。

实施例F77.实施例F76的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:199至少90％一致的序列。

实施例F78.实施例F77的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:199至少95％一致的序列。

实施例F79.实施例F68的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:199。

实施例F80.实施例F69的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:201。

实施例F81.实施例F1和F76至F80中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:203至少80％一致的序列。

实施例F82.实施例F81的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:203至少90％一致的序列。

实施例F83.实施例F82的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:203至少95％一致的序列。

实施例F84.实施例F83的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:203。

实施例F85.实施例F84的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:209。

实施例F86.实施例F1至F65中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含一个或多个其它靶标结合域，其中所述一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例F87.实施例F86的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与一个或多个其它抗原结合域中的至少一个之间的接头序列，和/或介于一个或多个其它抗原结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例F88.实施例F1至F65中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第一嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例F89.实施例F88的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第一域。

实施例F90.实施例F88的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例F91.实施例F88的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域。

实施例F92.实施例F88的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第一靶标结合域之间的接头序列。

实施例F93.实施例F88的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例F94.实施例F93的多链嵌合多肽，其中安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例F95.实施例F93的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例F96.实施例F93的多链嵌合多肽，其中安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例F97.实施例F93的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例F98.实施例F93的多链嵌合多肽，其中定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。

实施例F99.实施例F93的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含接头序列，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例F100.实施例F1至F65和F86至F99中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例F101.实施例F100的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第二域。

实施例F102.实施例F100的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第二域之间的接头序列。

实施例F103.实施例F100的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接第二靶标结合域。

实施例F104.实施例F100的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例F105.实施例F86至F104中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例F106.实施例F105的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例F107.实施例F106的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例F108.实施例F86至F104中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例F109.实施例F86至F108中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它抗原结合域特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例F110.实施例F86至F108中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例F111.实施例F110的多链嵌合多肽，其中可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF、FLT3L、MICA、MICB，和ULP16结合蛋白。

实施例F112.实施例F86至F108中任一项的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例F113.实施例F112的多链嵌合多肽，其中可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122，或可溶性CD28。

实施例F114.一种组合物，其包含实施例F1至F113的任一种多链嵌合多肽。

实施例F115.实施例F114的组合物，其中所述组合物是医药组合物。

实施例F116.一种试剂盒，其包含至少一次剂量的实施例F114或F115的组合物。

实施例F117.一种核酸，其编码实施例F1至F113中任一项的任一种多链嵌合多肽。

实施例F118.一种载体，其包含实施例F117的核酸。

实施例F119.实施例F118的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例F120.一种细胞，其包含实施例F117的核酸或实施例F118或F119的载体。

实施例F121.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起所述多链嵌合多肽产生的条件下、在培养基中培养实施例F120的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例F122.一种多链嵌合多肽，其通过实施例F121的方法产生。

实施例G1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域和所述第二域的结合而缔合；和

所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到：IL-7的受体、CD16、IL-21的受体、TGF-β或CD137L的受体。

实施例G2.实施例G1的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例G3.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例G4.实施例G1至G3中任一项的多链嵌合多肽，其中可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例G5.实施例G1至G3中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例G6.实施例G1至G5中任一项的多链嵌合多肽，其中亲和域对中的第二域与第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例G7.实施例G1至G5中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例G8.实施例G1至G7中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例G9.实施例G8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少80％一致的序列。

实施例G10.实施例G9的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少90％一致的序列。

实施例G11.实施例G10的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:93至少95％一致的序列。

实施例G12.实施例G8至G11中任一项的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例G13.实施例G12的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例G14.实施例G1至G13中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不能结合到因子VIIa。

实施例G15.实施例G1至G14中任一项的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例G16.实施例G1至G15中任一项的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例G17.实施例G1至G16中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含位于第一嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例G18.实施例G1至G17中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含位于第二嵌合多肽N端或C端的肽标签。

实施例G19.实施例G1至G18中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽进一步包含位于其N端的信号序列。

实施例G20.实施例G19的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ ID NO:117。

实施例G21.实施例G20的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ ID NO:117。

实施例G22.实施例G1至G21中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对是来自人IL-15受体α链(IL-15Rα)的寿司域和可溶性IL-15。

实施例G23.实施例G22的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例G24.实施例G22的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8280％一致的序列。

实施例G25.实施例G24的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:8290％一致的序列。

实施例G26.实施例G25的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:82至少95％一致的序列。

实施例G27.实施例G26的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQ ID NO:82。

实施例G28.实施例G22至G27中任一项的多链嵌合多肽，其中IL-15Rα的寿司域包含来自人IL-15Rα的寿司域。

实施例G29.实施例G28的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的寿司域包含与SEQID NO:113 80％一致的序列。

实施例G30.实施例G29的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 90％一致的序列。

实施例G31.实施例G30的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含与SEQ IDNO:113 95％一致的序列。

实施例G32.实施例G31的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域包含SEQ ID NO:113。

实施例G33.实施例G28的多链嵌合多肽，其中人IL-15Rα的寿司域是成熟全长IL-15Rα。

实施例G34.实施例G1至G21中任一项的多链嵌合多肽，其中所述亲和域对选自由以下组成的群组：芽胞杆菌核糖核酸酶和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块，以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例G35.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、CD16或IL-21的受体。

实施例G36.实施例G35的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到IL-7受体，而第二靶标结合域特异性结合到CD16或IL-21受体。

实施例G37.实施例G36的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域包含可溶性IL-7蛋白。

实施例G38.实施例G37的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7蛋白是人可溶性IL-7。

实施例G39.实施例G36至G38中任一项的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合域包含特异性结合到CD16的抗原结合域。

实施例G40.实施例G39的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例G41.实施例G36至G38中任一项的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G42.实施例G41的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合域包含可溶性IL-21。

实施例G43.实施例G42的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是人可溶性IL-21。

实施例G44.实施例G36至G40中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合域。

实施例G45.实施例G44的多链嵌合多肽，其中其它靶标结合域包含可溶性IL-21。

实施例G46.实施例G45的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是人可溶性IL-12。

实施例G47.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β、CD16，或IL-21的受体。

实施例G48.实施例G47的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到CD16或IL-21受体。

实施例G49.实施例G48的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G50.实施例G49的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G51.实施例G48至G50中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到CD16。

实施例G52.实施例G51的多特异性嵌合多肽，其中所述第二抗原结合域包含特异性结合到CD16的抗原结合域。

实施例G53.实施例G52的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例G54.实施例G48至G50中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G55.实施例G54的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含可溶性IL-21。

实施例G56.实施例G55的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含人可溶性IL-21。

实施例G57.实施例G48至G53中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到IL-21的受体的其它靶标结合域。

实施例G58.实施例G57的多链嵌合多肽，其中所述其它靶标结合域包含可溶性IL-21。

实施例G59.实施例G58的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是人可溶性IL-21。

实施例G60.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。

实施例G61.实施例G60的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域包括可溶性IL-7。

实施例G62.实施例G61的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7是人可溶性IL-7。

实施例G63.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β。

实施例G64.实施例G63的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G65.实施例G64的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G66.实施例G1至G34中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G67.实施例G66的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到IL-7的受体，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G68.实施例G67的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性IL-7。

实施例G69.实施例G68的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7是人可溶性IL-7。

实施例G70.实施例G67至G69中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G71.实施例G70的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域是可溶性IL-21。

实施例G72.实施例E71所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是人可溶性IL-21。

实施例G73.实施例G67至G69中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合域特异性结合到CD137L的受体。

实施例G74.实施例G73的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合域是可溶性CD137L。

实施例G75.实施例G74的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L是人可溶性CD137L。

实施例G76.实施例G67至G72中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到CD137L的受体的其它靶标结合域。

实施例G77.实施例G76的多链嵌合多肽，其中所述其它靶标结合域包含可溶性CD137L。

实施例G78.实施例G77的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L是人可溶性CD137L。

实施例G79.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或TGF-β。

实施例G80.实施例G79的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到受体IL-7，而第二靶标结合域特异性结合到TGF-β。

实施例G81.实施例G80的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域包含可溶性IL-7蛋白。

实施例G82.实施例G81的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7蛋白是人可溶性IL-7。

实施例G83.实施例G80至G82中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合域包含特异性结合到TGF-β的抗原结合域。

实施例G84.实施例G83的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G85.实施例G84的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G86.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶向结合域各自独立地特异性结合到TGF-β、IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G87.实施例G86的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例G88.实施例G87的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G89.实施例G88的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G90.实施例G87至G89中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G91.实施例G90的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含可溶性IL-21。

实施例G92.实施例G91·的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含人可溶性IL-21。

实施例G93.实施例G87至G89中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到CD137L的受体。

实施例G94.实施例G93·的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含可溶性CD137L。

实施例G95.实施例G94·的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含人可溶性CD137L。

实施例G96.实施例G87至G92中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到CD137L的受体的其它靶标结合域。

实施例G97.实施例G96·的多链嵌合多肽，其中所述其它靶标结合域包含可溶性CD137L。

实施例G98.实施例G97·的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L是人可溶性CD137L。

实施例G99.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。

实施例G100.实施例G99的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。

实施例G101.实施例G100·的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G102.实施例G101·的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G103.实施例G100至G102中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到IL-21的受体。

实施例G104.实施例G103的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含可溶性IL-21。

实施例G105.实施例G104·的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含人可溶性IL-21。

实施例G106.实施例G100至G102中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到TGF-β。

实施例G107.实施例G106的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G108.实施例G107的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G109.实施例G100至G105中任一项的多特异性嵌合多肽，其中第二多肽进一步包含特异性结合到TGF-β的其它靶标结合域。

实施例G110.实施例G109的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G111.实施例G110的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G112.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶向结合域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-16。

实施例G113.实施例G112的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到TGF-β或IL-16。

实施例E322.实施例E122所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例E322.实施例G114的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G116.实施例G113至G115中任一项的多特异性嵌合多肽，其中第二靶标结合域特异性结合到IL-16。

实施例G117.实施例G116的多特异性嵌合多肽，其中第二抗原结合域包含特异性结合到CD16的抗原结合域。

实施例G118.实施例G117的多链嵌合多肽，其中第二抗原结合域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例G119.实施例G113至G115中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域特异性结合到TGF-β。

实施例G120.实施例G119的多特异性嵌合多肽，其中第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G121.实施例G120的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G122.实施例G113至G118中任一项的多特异性嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到TGF-β的其它靶标结合域。

实施例G123.实施例G122的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G124.实施例G123的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G125.实施例G1至G34中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD137L的受体。

实施例G126.实施例G125的多链嵌合多肽，其中第一靶标结合域特异性结合到TGF-β，而第二靶标结合域特异性结合到CD137L的受体。

实施例G127.实施例G126的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G128.实施例G127的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G129.实施例G128的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合域包含可溶性CD137L蛋白。

实施例G130.实施例G129的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L蛋白是人可溶性CD137L。

实施例G131.实施例G126至G130中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到TGF-β的其它靶标结合域。

实施例G132.实施例G131的多特异性嵌合多肽，其中所述其它靶标结合域是可溶性TGF-β受体。

实施例G133.实施例G132的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例G134.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少80％一致的序列。

实施例G135.实施例G134的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少90％一致的序列。

实施例G136.实施例G135的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少95％一致的序列。

实施例G137.实施例G136的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:207。

实施例G138.实施例G137的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:209。

实施例G139.实施例G1和G134至G138中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:232至少80％一致的序列。

实施例G140.实施例G139的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:232至少90％一致的序列。

实施例G141.实施例G140的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:232至少95％一致的序列。

实施例G142.实施例G141的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:232。

实施例G143.实施例G142的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:234。

实施例G144.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少80％一致的序列。

实施例G145.实施例G144的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少90％一致的序列。

实施例G146.实施例G145的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少95％一致的序列。

实施例G147.实施例G146的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:236。

实施例G148.实施例G147的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:238。

实施例G149.实施例G1和G144至G148中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:232至少80％一致的序列。

实施例G150.实施例G149的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:232至少90％一致的序列。

实施例G151.实施例G150的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:232至少95％一致的序列。

实施例G152.实施例G151的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:232。

实施例G153.实施例G152的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:234。

实施例G154.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少80％一致的序列。

实施例G155.实施例G154的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少90％一致的序列。

实施例G156.实施例G155的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少95％一致的序列。

实施例G157.实施例G156的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:207。

实施例G158.实施例G157的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:209。

实施例G159.实施例G1和G154至G158中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:203至少80％一致的序列。

实施例G160.实施例G159的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:203至少90％一致的序列。

实施例G161.实施例G160的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:203至少95％一致的序列。

实施例G162.实施例G161的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:203。

实施例G163.实施例G162的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:250。

实施例G164.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少80％一致的序列。

实施例G165.实施例G164的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少90％一致的序列。

实施例G166.实施例G165的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少95％一致的序列。

实施例G167.实施例G166的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:236。

实施例G168.实施例G167的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:238。

实施例G169.实施例G1和G164至G168中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少80％一致的序列。

实施例G170.实施例G169的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:193至少90％一致的序列。

实施例G171.实施例G170的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:193至少95％一致的序列。

实施例G172.实施例G171的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:193。

实施例G173.实施例G172的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:195。

实施例G174.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少80％一致的序列。

实施例G175.实施例G174的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少90％一致的序列。

实施例G176.实施例G175的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少95％一致的序列。

实施例G177.实施例G176的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:207。

实施例G178.实施例G177的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:209。

实施例G179.实施例G1和G174至G178中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:268至少80％一致的序列。

实施例G180.实施例G179的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:268至少90％一致的序列。

实施例G181.实施例G180的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:268至少95％一致的序列。

实施例G182.实施例G181的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:268。

实施例G183.实施例G182的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:270。

实施例G184.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少80％一致的序列。

实施例G185.实施例G184的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少90％一致的序列。

实施例G186.实施例G185的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少95％一致的序列。

实施例G187.实施例G186的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:207。

实施例G188.实施例G187的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:209。

实施例G189.实施例G1和G184至G188中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:272至少80％一致的序列。

实施例G190.实施例G189的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:272至少90％一致的序列。

实施例G191.实施例G190的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:272至少95％一致的序列。

实施例G192.实施例G191的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:272。

实施例G193.实施例G192的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:272。

实施例G194.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少80％一致的序列。

实施例G195.实施例G194的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少90％一致的序列。

实施例G196.实施例G195的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:207至少95％一致的序列。

实施例G197.实施例G196的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:207。

实施例G198.实施例G197的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:209。

实施例G199.实施例G1和G194至G198中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少80％一致的序列。

实施例G200.实施例G199的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:193至少90％一致的序列。

实施例G201.实施例G200的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:193至少95％一致的序列。

实施例G202.实施例G201的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:193。

实施例G203.实施例G202的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:195。

实施例G204.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少80％一致的序列。

实施例G205.实施例G204的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少90％一致的序列。

实施例G206.实施例G205的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少95％一致的序列。

实施例G207.实施例G206的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:236。

实施例G208.实施例G207的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:238。

实施例G209.实施例G1和G204至G208中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:268至少80％一致的序列。

实施例G210.实施例G209的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:268至少90％一致的序列。

实施例G211.实施例G210的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:268至少95％一致的序列。

实施例G212.实施例G211的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:268。

实施例G213.实施例G212的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:270。

实施例G214.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少80％一致的序列。

实施例G215.实施例G214的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少90％一致的序列。

实施例G216.实施例G215的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少95％一致的序列。

实施例G217.实施例G216的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:236。

实施例G218.实施例G217的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:238。

实施例G219.实施例G1和G214至G218中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:300至少80％一致的序列。

实施例G220.实施例G219的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:300至少90％一致的序列。

实施例G221.实施例G220的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:300至少95％一致的序列。

实施例G222.实施例G221的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:300。

实施例G223.实施例G222的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:302。

实施例G224.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少80％一致的序列。

实施例G225.实施例G224的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少90％一致的序列。

实施例G226.实施例G225的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少95％一致的序列。

实施例G227.实施例G226的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:236。

实施例G228.实施例G227的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:238。

实施例G229.实施例G1和G224至G228中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:308至少80％一致的序列。

实施例G230.实施例G229的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:308至少90％一致的序列。

实施例G231.实施例G230的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:308至少95％一致的序列。

实施例G232.实施例G231的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:308。

实施例G233.实施例G232的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:310。

实施例G234.实施例G1的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少80％一致的序列。

实施例G235.实施例G234的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少90％一致的序列。

实施例G236.实施例G235的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ IDNO:236至少95％一致的序列。

实施例G237.实施例G236的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:236。

实施例G238.实施例G237的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ IDNO:238。

实施例G239.实施例G1和G234至G238中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:316至少80％一致的序列。

实施例G240.实施例G239的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:316至少90％一致的序列。

实施例G241.实施例G240的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ IDNO:316至少95％一致的序列。

实施例G242.实施例G241的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:316。

实施例G243.实施例G242的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ IDNO:318。

实施例G244.实施例G1至G133中任一项的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包含一个或多个其它靶标结合域，其中一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例G245.实施例G244的多链嵌合多肽，其中第一嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与一个或多个其它抗原结合域中的至少一个之间的接头序列，和/或介于一个或多个其它抗原结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例G246.实施例G1至G133中任一项的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第一嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例G247.实施例G246的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第一域。

实施例G248.实施例G246的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例G249.实施例G246的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域。

实施例G250.实施例G246的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第一靶标结合域之间的接头序列。

实施例G251.实施例G246的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例G252.实施例G251的多链嵌合多肽，其中安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例G253.实施例G251的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例G254.实施例G251的多链嵌合多肽，其中安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例G255.实施例G251的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例G256.实施例G251的多链嵌合多肽，其中定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。

实施例G257.实施例G251的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含接头序列，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例G258.实施例G44至G46、G57至G59、G76至G78、G96至G98、G109至G111、G122至G124和G131至G133中任一项的多链嵌合多肽，其中第二嵌合多肽进一步包含位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例G259.实施例G258的多链嵌合多肽，其中其它靶标结合域在第二嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第二域。

实施例G260.实施例G258的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的其它靶标结合域与亲和域对中的第二域之间的接头序列。

实施例G261.实施例G258的多链嵌合多肽，其中其它靶标结合域在第二嵌合多肽中直接邻接第二靶标结合域。

实施例G262.实施例G258的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的其它靶标结合域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例G263.一种组合物，其包含实施例G1至G262的任一种多链嵌合多肽。

实施例G264.实施例G263的组合物，其中所述组合物是医药组合物。

实施例G265.一种试剂盒，其包含至少一次剂量的实施例G263或G264的组合物。

实施例G266.一种核酸，其编码实施例G1至G262中任一项的任一种多链嵌合多肽。

实施例G267.一种载体，其包含实施例G266的核酸。

实施例G268.实施例G267的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例G269.一种细胞，其包含实施例G323的核酸或实施例G267或G268的载体。

实施例G270.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起所述多链嵌合多肽产生的条件下、在培养基中培养实施例G269的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例G271.一种多链嵌合多肽，其通过实施例G270的方法产生。

实施例G272.实施例G8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:97至少80％一致的序列。

实施例G273.实施例G272的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少90％一致的序列。

实施例G274.实施例G273的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少95％一致的序列。

实施例G275.实施例G274的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:97至少100％一致的序列。

实施例G276.实施例G8的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQID NO:98至少80％一致的序列。

实施例G277.实施例G276的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少90％一致的序列。

实施例G278.实施例G277的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少95％一致的序列。

实施例G279.实施例G278的多链嵌合多肽，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ ID NO:98至少100％一致的序列。

实施例H1.一种治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。

实施例H2.一种杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞数量的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种NK细胞活化剂施用于受试者。

实施例H3.实施例H2的方法，其中所述衰老细胞是衰老的癌细胞、衰老的单核细胞、衰老的淋巴细胞、衰老的星形胶质细胞、衰老的微神经胶质细胞、衰老的神经元、衰老的组织纤维母细胞、衰老的真皮纤维母细胞、衰老的角质细胞，或其它分化组织特异性分裂功能细胞。

实施例H4.实施例H3的方法，其中所述衰老癌细胞是化学疗法诱导的衰老细胞或辐射诱导的衰老细胞。

实施例H5.实施例H2的方法，其中所述受试者已被鉴定或诊断患有老年化相关疾病或病状。

实施例H6.实施例H1或H5的方法，其中所述老年化相关疾病或病状选自由以下组成的群组：癌症、自体免疫疾病、代谢疾病、神经退化性疾病、心血管疾病、皮肤病、早衰疾病和脆性疾病。

实施例H7.实施例H6的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃癌和食道癌、胰脏癌、前列腺癌、乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H8.实施例H6的方法，其中所述自体免疫疾病是1型糖尿病。

实施例H9.实施例H6的方法，其中所述代谢疾病选自由肥胖症、脂质营养不良和2型糖尿病组成的群组。

实施例H10.实施例H6的方法，其中所述神经退化性疾病选自由阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和痴呆症组成的群组。

实施例H11.实施例H6的方法，其中所述心血管疾病选自由冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和肺动脉高血压组成的群组。

实施例H12.实施例H6的方法，其中所述皮肤病选自由以下组成的群组：伤口愈合、秃发、皱纹、老年性雀斑痣、皮肤变薄、着色性干皮病和先天性角化不良。

实施例H13.实施例H6的方法，其中所述早衰疾病选自由早衰和呼奇逊-吉尔福早衰综合症组成的群组。

实施例H14.实施例H6的方法，其中所述脆性疾病选自由脆性、疫苗接种反应、骨质疏松症和肌肉减少症组成的群组。

实施例H15.实施例H1或H5的方法，其中所述老年化相关疾病或病状选自以下群组：年龄相关黄斑变性、骨关节炎、脂肪萎缩、特发性肺纤维化、肾脏移植失败、肝纤维化、骨量损失、肌肉减少症、年龄相关的肺组织弹性丧失、骨质疏松症、年龄相关的肾功能障碍，和化学诱发的肾功能障碍。

实施例H16.实施例H1或H5的方法，其中所述老年化相关疾病或病状是2型糖尿病或动脉粥样硬化。

实施例H17.实施例H1至H16中任一项的方法，其中施药引起受试者的靶组织中的衰老细胞数量减少。

实施例H18.实施例H17的方法，其中所述靶组织选自由以下组成的群组：脂肪组织、胰脏组织、肝脏组织、肺组织、血管、骨组织、中枢神经系统(CNS)组织、眼组织、皮肤组织、肌肉组织和次级淋巴器官组织。

实施例H19.实施例H1至H18中任一项的方法，其中所述施药引起活化NK细胞中的CD25、CD69、MTOR-C1、SREBP1、IFN-γ和颗粒酶B的表达水平升高。

实施例H20.一种治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。

实施例H21.一种杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞数量的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于受试者。

实施例H22.实施例H21的方法，其中所述衰老细胞是衰老的癌细胞、衰老的单核细胞、衰老的淋巴细胞、衰老的星形胶质细胞、衰老的微神经胶质细胞、衰老的神经元、衰老的组织纤维母细胞、衰老的真皮纤维母细胞、衰老的角质细胞，或其它分化组织特异性分裂功能细胞。

实施例H23.实施例H22的方法，其中所述衰老癌细胞是化学疗法诱导的衰老细胞或辐射诱导的衰老细胞。

实施例H24.实施例H21的方法，其中所述受试者已被鉴定或诊断患有老年化相关疾病或病状。

实施例H25.实施例H20或H24的方法，其中所述老年化相关疾病或病状选自由以下组成的群组：癌症、自体免疫疾病、代谢疾病、神经退化性疾病、心血管疾病、皮肤病、早衰疾病和脆性疾病。

实施例H26.实施例H25的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃癌和食道癌、胰脏癌、前列腺癌、乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例H27.实施例H25的方法，其中所述自体免疫疾病是1型糖尿病。

实施例H28.实施例H25的方法，其中所述代谢疾病选自由肥胖症、脂质营养不良和2型糖尿病组成的群组。

实施例H29.实施例H25的方法，其中所述神经退化性疾病选自由阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和痴呆症组成的群组。

实施例H30.实施例H25的方法，其中所述心血管疾病选自由冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和肺动脉高血压组成的群组。

实施例H31.实施例H25的方法，其中所述皮肤病选自由以下组成的群组：伤口愈合、秃发、皱纹、老年性雀斑痣、皮肤变薄、着色性干皮病和先天性角化不良。

实施例H32.实施例H25的方法，其中所述早衰疾病选自由早衰和呼奇逊-吉尔福早衰综合症组成的群组。

实施例H33.实施例H25的方法，其中所述脆性疾病选自由脆性、疫苗接种反应、骨质疏松症和肌肉减少症组成的群组。

实施例H34.实施例H20或H24的方法，其中所述老年化相关疾病或病状选自由以下组成的群组：年龄相关黄斑变性、骨关节炎、脂肪萎缩、特发性肺纤维化、肾脏移植失败、肝纤维化、骨量损失、肌肉减少症、年龄相关的肺组织弹性丧失、骨质疏松症、年龄相关的肾功能障碍，和化学诱发的肾功能障碍。

实施例H35.实施例H20至H34中任一项的方法，其中所述方法进一步包括：

获得休眠NK细胞；和

使所述休眠NK细胞在试管内、在包含一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后施用于所述受试者。

实施例H36.实施例H35的方法，其中所述休眠NK细胞是获自所述受试者的自体NK细胞。

实施例H37.实施例H35的方法，其中所述休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。

实施例H38.实施例H35的方法，其中所述休眠NK细胞是人工NK细胞。

实施例H39.实施例H35的方法，其中所述休眠NK细胞是单倍型休眠NK细胞。

实施例H40.实施例H35至H39中任一项的方法，其中所述休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

实施例H41.实施例H35至H40中任一项的方法，其中所述方法进一步包含分离出活化NK细胞，随后将所述活化NK细胞施用于受试者。

实施例H42.一种使有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观在一段时间内改善的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于所述受试者。

实施例H43.一种使有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观在一段时间内改善的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于所述受试者。

实施例H44.实施例H43的方法，其中所述方法进一步包括：

获得休眠NK细胞；和

使所述休眠NK细胞在试管内、在包含一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后施用于所述受试者。

实施例H45.实施例H44的方法，其中所述休眠NK细胞是获自所述受试者的自体NK细胞。

实施例H46.实施例H44的方法，其中所述休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。

实施例H47.实施例H44的方法，其中所述休眠NK细胞是人工NK细胞。

实施例H48.实施例H44的方法，其中所述休眠NK细胞是单倍型休眠NK细胞。

实施例H49.实施例H44至H48中任一项的方法，其中所述休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

实施例H50.实施例H44至H49中任一项的方法，其中所述方法进一步包含分离出活化NK细胞，随后将所述活化NK细胞施用于受试者。

实施例H51.实施例H42至H50中任一项的方法，其中所述方法使得所述受试者的皮肤质地和/或外观在一段时间内改善。

实施例E322.实施例H51的方法，其中所述方法使得所述受试者在一段时间内的皮肤皱纹形成速率减小。

实施例E322.实施例H51或H52的方法，其中所述方法使得受试者的皮肤着色在一段时间内改善。

实施例H54.实施例H51至H53中任一项的方法，其中所述方法使得所述受试者的皮肤质地在一段时间内改善。

实施例H55.实施例H42至H50中任一项的方法，其中所述方法使得所述受试者的毛发质地和/或外观在一段时间内改善。

实施例H56.实施例H55的方法，其中所述方法使得所述受试者在一段时间内的白发形成速率减小。

实施例H57.实施例H55或H56的方法，其中所述方法使得所述受试者在一段时间内的白发数量减少。

实施例H58.实施例H55至H57中任一项的方法，其中所述方法使得受试者的脱发率随时间降低。

实施例H59.实施例H55至H58中任一项的方法，其中所述方法使得所述受试者的毛发质地在一段时间内改善。

实施例H60.实施例H42至H59中任一项的方法，其中所述时间段在约一个月与约10年之间。

实施例H61.实施例H42至H60中任一项的方法，其中所述方法使得受试者皮肤中的衰老真皮纤维母细胞数量在一段时间内减少。

实施例H62.一种有助于使有需要的受试者的肥胖症在一段时间内得到治疗的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于所述受试者。

实施例H63.一种有助于使有需要的受试者的肥胖症在一段时间内得到治疗的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于所述受试者。

实施例H64.实施例H63的方法，其中所述方法进一步包含：

获得休眠NK细胞；和

使所述休眠NK细胞在试管内、在包含一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后施用于所述受试者。

实施例H65.实施例H64的方法，其中所述休眠NK细胞是获自所述受试者的自体NK细胞。

实施例H66.实施例H64的方法，其中所述休眠NK细胞是同种异体休眠NK细胞。

实施例H67.实施例H64的方法，其中所述休眠NK细胞是人工NK细胞。

实施例H68.实施例H64的方法，其中所述休眠NK细胞是单倍型休眠NK细胞。

实施例H69.实施例H64至H68中任一项的方法，其中所述休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

实施例H70.实施例H64至H69中任一项的方法，其中所述方法进一步包含分离出活化NK细胞，随后将所述活化NK细胞施用于受试者。

实施例H71.实施例H62至H70中任一项的方法，其中所述方法使得受试者的质量在一段时间内降低。

实施例H72.实施例H62至H71中任一项的方法，其中所述方法使得受试者的身体质量指数(BMI)在一段时间内降低。

实施例H73.实施例H62至H70中任一项的方法，其中所述方法使得所述受试者从前期糖尿病向2型糖尿病恶化的速率降低。

实施例H74.实施例H62至H70中任一项的方法，其中所述方法使得受试者的空腹血清葡萄糖水平降低。

实施例H75.实施例H62至H70中任一项的方法，其中所述方法使得受试者的胰岛素敏感性增加。

实施例H76.实施例H62至H70中任一项的方法，其中所述方法使得受试者的动脉粥样硬化症严重程度降低。

实施例H77.实施例H62-H76中任一项的方法，其中所述时间段在约两周至约30周之间。10年。

实施例H78.实施例H1至H19、H35至H42、H44至H62和H64至H77中任一项的方法，其中一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种引起以下中的一者或多者活化：IL-2的受体、IL-7的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、IL-33的受体；CD16、CD69、CD25、CD59、CD352、NKp80、DNAM-1、2B4、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、KIR2DS1、KIR2Ds2/3、KIR2DL4、KIR2DS4、KIR2DS5和KIR3DS1的受体。

实施例H79.实施例H78的方法，其中引起IL-2受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-2受体的可溶性IL-2或激动性抗体。

实施例H80.实施例H78的方法，其中引起IL-7受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-7受体的可溶性IL-7或激动性抗体。

实施例H81.实施例H78的方法，其中引起IL-12受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-2受体的可溶性IL-12或激动性抗体。

实施例H82.实施例H78的方法，其中引起IL-15受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-15受体的可溶性IL-15或激动性抗体。

实施例H83.实施例H78的方法，其中引起IL-21受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-21受体的可溶性IL-21或激动性抗体。

实施例H84.实施例H78的方法，其中引起IL-33受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL-33受体的可溶性IL-33或激动性抗体。

实施例H85.实施例H78的方法，其中引起CD16受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD16的激动性抗体。

实施例H86.实施例H78的方法，其中引起CD69受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD69的激动性抗体。

实施例H87.实施例H78的方法，其中引起CD25、CD36、CD59的受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD25、CD6、CD59的激动性抗体。

实施例H88.实施例H78的方法，其中引起CD352受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD352的激动性抗体。

实施例H89.实施例H78的方法，其中引起NKp80受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp80的激动性抗体。

实施例H90.实施例H78的方法，其中引起DNAM-1受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到DNAM-1的激动性抗体。

实施例H91.实施例H78的方法，其中引起2B4受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到2B4的激动性抗体。

实施例H92.实施例H78的方法，其中引起NKp30受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp30的激动性抗体。

实施例H93.实施例H78的方法，其中引起NKp44受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp44的激动性抗体。

实施例H94.实施例H78的方法，其中引起NKp46受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKp46的激动性抗体。

实施例H95.实施例H78的方法，其中引起NKG2D受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKG2D的激动性抗体。

实施例H96.实施例H78的方法，其中引起KIR2DS1受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS1的激动性抗体。

实施例H97.实施例H78的方法，其中引起KIR2DS2/3受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS2/3的激动性抗体。

实施例H98.实施例H78的方法，其中引起KIR2DL4受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL4的激动性抗体。

实施例H99.实施例H78的方法，其中引起KIR2DS4受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS4的激动性抗体。

实施例H100.实施例H78的方法，其中引起KIR2DS5受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DS5的激动性抗体。

实施例H101.实施例H78的方法，其中引起KIR3DS1受体活化的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DS1的激动性抗体。

实施例H102.实施例H1至H19、H35至H42、H44至H62和H64至H101中任一项的方法，其中一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种引起以下中的一种或多种的活化减少：PD-1、TGF-β受体、TIGIT、CD1、TIM-3、Siglec-7、IRP60、Tactile、IL1R8、NKG2A/KLRD1、KIR2DL1、KIR2DL2/3、KIR2DL5、KIR3DL1、KIR3DL2、ILT2/LIR-1和LAG-2。

实施例H103.实施例H102的方法，其中引起PD-1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到PD-1的拮抗性抗体、可溶性PD-1、可溶性PD-L1，或特异性结合到PD-L1的抗体。

实施例H104.实施例H102的方法，其中引起TGF-β受体活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是可溶性TGF-β受体、特异性结合到TGF-β的抗体，或特异性结合到TGF-β受体的拮抗性抗体。

实施例H105.实施例H102的方法，其中引起TIGIT活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到TIGIT的拮抗性抗体、可溶性TIGIT，或特异性结合到TIGIT配体的抗体。

实施例H106.实施例H102的方法，其中引起CD1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到CD1的拮抗性抗体、可溶性CD1，或特异性结合到CD1配体的抗体。

实施例H107.实施例H102的方法，其中引起TIM-3活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到TIM-3的拮抗性抗体、可溶性TIM-3，或特异性结合到TIM-3配体的抗体。

实施例H108.实施例H102的方法，其中引起Siglec-7活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到Siglec-7的拮抗性抗体，或特异性结合到Siglec-7配体的抗体。

实施例H109.实施例H102的方法，其中引起IRP60活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IRP60的拮抗性抗体，或特异性结合到IRP60配体的抗体。

实施例H110.实施例H102的方法，其中引起Tactile活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到Tactile的拮抗性抗体，或特异性结合到Tactile配体的抗体。

实施例H111.实施例H102的方法，其中引起IL1R8活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到IL1R8的拮抗性抗体，或特异性结合到IL1R8配体的抗体。

实施例H112.实施例H102的方法，其中引起NKG2A/KLRD1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到NKG2A/KLRD1的拮抗性抗体，或特异性结合到NKG2A/KLRD1配体的抗体。

实施例H113.实施例H102的方法，其中引起KIR2DL1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL1的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR2DL1配体的抗体。

实施例H114.实施例H102的方法，其中引起KIR2DL2/3活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL2/3的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR2DL2/3配体的抗体。

实施例H115.实施例H102的方法，其中引起KIR2DL5活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR2DL5的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR2DL5配体的抗体。

实施例H116.实施例H102的方法，其中引起KIR3DL1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DL1的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR3DL1配体的抗体。

实施例H117.实施例H102的方法，其中引起KIR3DL2活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到KIR3DL2的拮抗性抗体，或特异性结合到KIR3DL2配体的抗体。

实施例H118.实施例H102的方法，其中引起ILT2/LIR-1活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到ILT2/LIR-1的拮抗性抗体，或特异性结合到ILT2/LIR-1配体的抗体。

实施例H119.实施例H102的方法，其中引起LAG-2活化减少的一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是特异性结合到LAG-2的拮抗性抗体，或特异性结合到LAG-2配体的抗体。

实施例H120.实施例H1至H19、H35至H42、H44至H62和H64至H77中任一项的方法，其中一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是单链嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)第二靶标结合域，

实施例H121.实施例H120的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合域和所述可溶性组织因子域彼此直接邻接。

实施例H122.实施例H120的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例H123.实施例H120至H122中任一项的方法，其中所述可溶性组织因子域和所述第二靶标结合域彼此直接邻接。

实施例H124.实施例H120至H122中任一项的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于可溶性组织因子域和第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例H125.实施例H120的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域彼此直接邻接。

实施例H126.实施例H120的方法，其中单链嵌合多肽进一步包含介于第一靶标结合域和第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例H127.实施例H125或H126的方法，其中第二靶标结合域和可溶性组织因子域彼此直接邻接。

实施例H128.实施例H125或H126的方法，其中单链嵌合多肽进一步包含介于第二靶标结合域和可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例H129.实施例H120至H128中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。

实施例H130.实施例H129的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例H131.实施例H130的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例H132.实施例H120至H128中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例H133.实施例H120至H132中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。

实施例H134.实施例H133的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例H135.实施例H134的方法，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例H136.实施例H120至H135中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

实施例H137.实施例H120至H128中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例H138.实施例H137的方法，其中所述可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

实施例H139.实施例H120至H128中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H140.实施例H139的方法，其中所述可溶性白介素或细胞因子受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

实施例H141.实施例H120至H140中任一项的方法，其中所述可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例H142.实施例H141的方法，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少80％一致的序列。

实施例H143.实施例H142的方法，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少90％一致的序列。

实施例H144.实施例H143的方法，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少95％一致的序列。

实施例H145.实施例H141至H144中任一项的方法，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例H146.实施例H145的方法，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例H147.实施例H120至H146中任一项的方法，其中所述可溶性组织因子域不能结合因子VIIa。

实施例H148.实施例H120至H147中任一项的方法，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例H149.实施例H120至H148中任一项的方法，其中所述单链嵌合多肽不刺激哺乳动物中的血液凝结。

实施例H150.实施例H120至H149中任一项的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含一个或多个位于其N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例H151.实施例H150的方法，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其N端的其它靶标结合域。

实施例H152.实施例H151的方法，其中一个或多个其它靶标结合域直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例H153.实施例H152的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于至少一个其它靶标结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例H154.实施例H150的方法，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其C端的其它靶标结合域。

实施例H155.实施例H154的方法，其中一个或多个其它靶标结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例H156.实施例H154的单链嵌合多肽，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于至少一个其它靶标结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例H157.实施例H150的方法，其中所述单链嵌合多肽包含一个或多个位于其N端和C端的其它靶标结合域。

实施例H158.实施例H157的方法，其中位于N端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例H159.实施例H157的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于N端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例H160.实施例H157的方法，其中位于C端的一个或多个其它抗原结合域之一直接邻接第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域。

实施例H161.实施例H157的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于C端的一个或多个其它抗原结合域之一与第一靶标结合域、第二靶标结合域或可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例H162.实施例H150至H161中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H163.实施例H162的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H164.实施例H163的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H165.实施例H162的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H166.实施例H165的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H167.实施例H166的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H168.实施例H150至H161中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例H169.实施例H150至H168中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个是抗原结合域。

实施例H170.实施例H169的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例H171.实施例H170的方法，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例H172.实施例H150至H171中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个特异性地结合到选自选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

实施例H173.实施例H150至H161中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例H174.实施例H173的方法，其中所述可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

实施例H175.实施例H150至H161中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H176.实施例H175的方法，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

实施例H177.实施例H1至H19、H35至H42、H44至H62和H64至H77中任一项的方法，其中一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是多链嵌合多肽，其包含：

(c)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(d)第二嵌合多肽，其包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域和所述第二域的结合而缔合。

实施例H178.实施例H177的方法，其中第一靶标结合域和可溶性组织因子域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H179.实施例H177的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的第一靶标结合域与可溶性组织因子域之间的接头序列。

实施例H180.实施例H177至H179中任一项的方法，其中可溶性组织因子域和亲和域对中的第一域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H181.实施例H177至H179中任一项的方法，其中第一嵌合多肽进一步包含介于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例H182.实施例H177至H181中任一项的方法，其中亲和域对中的第二域与第二靶标结合域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H183.实施例H177至H181中任一项的方法，其中第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例H184.实施例H177至H183中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。

实施例H185.实施例H184的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例H186.实施例H185的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例H187.实施例H177至H183中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例H188.实施例H177至H187中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。

实施例H189.实施例H188的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例H190.实施例H188或H189的方法，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例H191.实施例H177至H190中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

实施例H192.实施例H177至H183中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例H193.实施例H192的方法，其中所述可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

实施例H194.实施例H177至H183中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例H195.实施例H194的方法，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

实施例H196.实施例H177至H195中任一项的方法，其中第一嵌合多肽进一步包含一个或多个其它靶标结合域，其中所述一个或多个其它抗原结合域中的至少一个定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例H197.实施例H196的方法，其中第一嵌合多肽进一步包括介于可溶性组织因子域与一个或多个其它抗原结合域中的至少一个之间的接头序列，和/或介于一个或多个其它抗原结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例H198.实施例H177至H195中任一项的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第一嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例H199.实施例H198的多链嵌合多肽，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第一域。

实施例H200.实施例H198的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例H201.实施例H198的方法，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域。

实施例H202.实施例H198的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第一靶标结合域之间的接头序列。

实施例H203.实施例H198的方法，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N端和/或C端，并且一个或多个其它靶标结合域中的至少一个定位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例H204.实施例H203的方法，其中安置于N端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例H205.实施例H203的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例H206.实施例H203的方法，其中安置于C端的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个其它靶标结合域在第一嵌合多肽中直接邻接第一靶标结合域或亲和域对中的第一域。

实施例H207.实施例H203的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个其它靶标结合域与第一靶标结合域或亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例H208.实施例H203的方法，其中定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个直接邻接可溶性组织因子域和/或亲和域对中的第一域。

实施例H209.实施例H203的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含接头序列，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间；和/或(ii)亲和域对中的第一域与一个或多个其它靶标结合域中的至少一个之间，所述靶标结合域定位于可溶性组织因子域与亲和域对中的第一域之间。

实施例H210.实施例H177至H209中任一项的方法，其中所述第二嵌合多肽进一步包含一个或多个位于第二嵌合多肽N端和/或C端的其它靶标结合域。

实施例H211.实施例H210的方法，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接亲和域对中的第二域。

实施例H212.实施例H210的方法，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与亲和域对中的第二域之间的接头序列。

实施例H213.实施例H210的方法，其中一个或多个其它靶标结合域中的至少一个在第二嵌合多肽中直接邻接第二靶标结合域。

实施例H214.实施例H210的方法，其中所述第二嵌合多肽进一步包含介于第二嵌合多肽中的一个或多个其它靶标结合域中的至少一个与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例H215.实施例H196至H214中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例H216.实施例H215的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例H217.实施例H216的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例H218.实施例H215的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例H219.实施例H218的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自特异性结合到相同的表位。

实施例H220.实施例H219的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例H221.实施例H196至H214中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例H222.实施例H196至H221中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个是抗原结合域。

实施例H223.实施例H222的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例H224.实施例H223的方法，其中抗原结合域包含scFv。

实施例H225.实施例H196至H224中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个靶标结合域中的一个或多个特异性地结合到选自选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

实施例H226.实施例H196至H214中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例H227.实施例H226的方法，其中所述可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

实施例H228.实施例H196至H214中任一项的方法，其中第一靶标结合域、第二靶标结合域和一个或多个其它靶标结合域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H229.实施例H228的方法，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

实施例H230.实施例H196至H229中任一项的方法，其中所述可溶性组织因子域是人可溶性组织因子域。

实施例H231.实施例H230的方法，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少80％一致的序列。

实施例H232.实施例H231的方法，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少90％一致的序列。

实施例H233.实施例H232的方法，其中所述人可溶性组织因子域包含与SEQ IDNO:93至少95％一致的序列。

实施例H234.实施例H230至H233中任一项的方法，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的一种或多种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例H235.实施例H234的方法，其中所述人可溶性组织因子域不包含以下中的任一种：

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置20对应的氨基酸位置的赖氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置22对应的氨基酸位置的异亮氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置45对应的氨基酸位置的色氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置58对应的氨基酸位置的天冬氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置94对应的氨基酸位置的酪氨酸；

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置135对应的氨基酸位置的精氨酸；以及

位于与人成熟野生型组织因子蛋白的氨基酸位置140对应的氨基酸位置的苯丙氨酸。

实施例H236.实施例H196至H235中任一项的方法，其中所述可溶性组织因子域不能结合到因子VIIa。

实施例H237.实施例H196至H236中任一项的方法，其中所述可溶性组织因子域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例H238.实施例H196至H237中任一项的方法，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的血液凝结。

实施例H239.实施例H196至H238中任一项的方法，其中所述亲和域对是来自人IL-15受体α链(IL-15Rα)的寿司域和可溶性IL-15。

实施例H240.实施例H239的方法，其中可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例H241.实施例H239或H240的方法，其中人IL-15Rα是成熟全长IL-15Rα。

实施例H242.实施例H196至H238中任一项的方法，其中所述亲和域对选自由以下组成的群组：芽胞杆菌核糖核酸酶和芽胞杆菌核糖核酸酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块，以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例H243.实施例H1至H19、H35至H42、H44至H62和H64至H77中任一项的方法，其中一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一和第二嵌合多肽，其中各包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)Fc域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(b)第三和第四嵌合多肽，其中各包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中所述第一和第二嵌合多肽与所述第三和第四嵌合多肽通过亲和域对中的第一域与第二域的结合而缔合，并且所述第一和第二嵌合多肽通过其Fc域缔合。

实施例H244.实施例H243的方法，其中第一靶标结合域和Fc域在第一和第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H245.实施例H243的方法，其中所述第一和第二嵌合多肽进一步包含介于第一和第二嵌合多肽中的第一靶标结合域与Fc域之间的接头序列。

实施例H246.实施例H243至H245中任一项的方法，其中Fc域与亲和域对中的第一域在第一和第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H247.实施例H243至H245中任一项的方法，其中第一嵌合多肽进一步包含介于第一和第二嵌合多肽中的Fc域与亲和域对中的第一域之间的接头序列。

实施例H248.实施例H243至H247中任一项的方法，其中亲和域对中的第二域与第二靶标结合域在第三和第四嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例H249.实施例H243至H247中任一项的方法，其中第三和第四嵌合多肽进一步包括介于第三和第四嵌合多肽中的亲和域对中的第二域与第二靶标结合域之间的接头序列。

实施例H250.实施例H243至H249中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的抗原。

实施例H251.实施例H250的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到相同的表位。

实施例H252.实施例H251的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域包含相同的氨基酸序列。

实施例H253.实施例H243至H249中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域特异性结合到不同的抗原。

实施例H254.实施例H243至H253中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是抗原结合域。

实施例H255.实施例H254的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域各自是抗原结合域。

实施例H256.实施例H254或H255的方法，其中抗原结合域包含scFv或单域抗体。

实施例H257.实施例H243至H256中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

实施例H258.实施例H243至H256中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例H259.实施例H258的方法，其中所述可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

实施例H260.实施例H243至H256中任一项的方法，其中第一靶标结合域和第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例H261.实施例H260的方法，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

序列表

<110> HCW生物股份有限公司

<120> 治疗老年化相关病症的方法

<130> 47039-0013WO1

<140>

<141>

<150> 62/881,088

<151> 2019-07-31

<150> 62/881,039

<151> 2019-07-31

<150> 62/817,244

<151> 2019-03-12

<150> 62/817,241

<151> 2019-03-12

<150> 62/817,230

<151> 2019-03-12

<150> 62/816,683

<151> 2019-03-11

<150> 62/749,506

<151> 2018-10-23

<150> 62/749,007

<151> 2018-10-22

<150> 62/746,832

<151> 2018-10-17

<150> 62/725,043

<151> 2018-08-30

<150> 62/725,038

<151> 2018-08-30

<150> 62/725,010

<151> 2018-08-30

<150> 62/724,969

<151> 2018-08-30

<160> 334

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 251

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD25”

<400> 1

Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro His Ala Thr Phe Lys

1 5 10 15

Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn Cys Glu Cys Lys Arg

20 25 30

Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr Met Leu Cys Thr Gly

35 40 45

Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys Gln Cys Thr Ser Ser

50 55 60

Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro Gln Pro Glu Glu Gln

65 70 75 80

Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro Met Gln Pro Val Asp

85 90 95

Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro Pro Pro Trp Glu Asn

100 105 110

Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val Gly Gln Met Val Tyr

115 120 125

Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His Arg Gly Pro Ala Glu

130 135 140

Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg Trp Thr Gln Pro Gln

145 150 155 160

Leu Ile Cys Thr Gly Glu Met Glu Thr Ser Gln Phe Pro Gly Glu Glu

165 170 175

Lys Pro Gln Ala Ser Pro Glu Gly Arg Pro Glu Ser Glu Thr Ser Cys

180 185 190

Leu Val Thr Thr Thr Asp Phe Gln Ile Gln Thr Glu Met Ala Ala Thr

195 200 205

Met Glu Thr Ser Ile Phe Thr Thr Glu Tyr Gln Val Ala Val Ala Gly

210 215 220

Cys Val Phe Leu Leu Ile Ser Val Leu Leu Leu Ser Gly Leu Thr Trp

225 230 235 240

Gln Arg Arg Gln Arg Lys Ser Arg Arg Thr Ile

245 250

<210> 2

<211> 753

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD25”

<400> 2

gagctctgtg acgatgaccc gccagagatc ccacacgcca cattcaaagc catggcctac 60

aaggaaggaa ccatgttgaa ctgtgaatgc aagagaggtt tccgcagaat aaaaagcggg 120

tcactctata tgctctgtac aggaaactct agccactcgt cctgggacaa ccaatgtcaa 180

tgcacaagct ctgccactcg gaacacaacg aaacaagtga cacctcaacc tgaagaacag 240

aaagaaagga aaaccacaga aatgcaaagt ccaatgcagc cagtggacca agcgagcctt 300

ccaggtcact gcagggaacc tccaccatgg gaaaatgaag ccacagagag aatttatcat 360

ttcgtggtgg ggcagatggt ttattatcag tgcgtccagg gatacagggc tctacacaga 420

ggtcctgctg agagcgtctg caaaatgacc cacgggaaga caaggtggac ccagccccag 480

ctcatatgca caggtgaaat ggagaccagt cagtttccag gtgaagagaa gcctcaggca 540

agccccgaag gccgtcctga gagtgagact tcctgcctcg tcacaacaac agattttcaa 600

atacagacag aaatggctgc aaccatggag acgtccatat ttacaacaga gtaccaggta 660

gcagtggccg gctgtgtttt cctgctgatc agcgtcctcc tcctgagtgg gctcacctgg 720

cagcggagac agaggaagag tagaagaaca atc 753

<210> 3

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD69”

<400> 3

Met Ser Ser Glu Asn Cys Phe Val Ala Glu Asn Ser Ser Leu His Pro

1 5 10 15

Glu Ser Gly Gln Glu Asn Asp Ala Thr Ser Pro His Phe Ser Thr Arg

20 25 30

His Glu Gly Ser Phe Gln Val Pro Val Leu Cys Ala Val Met Asn Val

35 40 45

Val Phe Ile Thr Ile Leu Ile Ile Ala Leu Ile Ala Leu Ser Val Gly

50 55 60

Gln Tyr Asn Cys Pro Gly Gln Tyr Thr Phe Ser Met Pro Ser Asp Ser

65 70 75 80

His Val Ser Ser Cys Ser Glu Asp Trp Val Gly Tyr Gln Arg Lys Cys

85 90 95

Tyr Phe Ile Ser Thr Val Lys Arg Ser Trp Thr Ser Ala Gln Asn Ala

100 105 110

Cys Ser Glu His Gly Ala Thr Leu Ala Val Ile Asp Ser Glu Lys Asp

115 120 125

Met Asn Phe Leu Lys Arg Tyr Ala Gly Arg Glu Glu His Trp Val Gly

130 135 140

Leu Lys Lys Glu Pro Gly His Pro Trp Lys Trp Ser Asn Gly Lys Glu

145 150 155 160

Phe Asn Asn Trp Phe Asn Val Thr Gly Ser Asp Lys Cys Val Phe Leu

165 170 175

Lys Asn Thr Glu Val Ser Ser Met Glu Cys Glu Lys Asn Leu Tyr Trp

180 185 190

Ile Cys Asn Lys Pro Tyr Lys

195

<210> 4

<211> 600

<212> DNA

<213> 智人

<220>

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<223> /标注=“CD69”

<400> 4

atgagctctg aaaattgttt cgtagcagag aacagctctt tgcatccgga gagtggacaa 60

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gtcctgtgtg ctgtaatgaa tgtggtcttc atcaccattt taatcatagc tctcattgcc 180

ttatcagtgg gccaatacaa ttgtccaggc caatacacat tctcaatgcc atcagacagc 240

catgtttctt catgctctga ggactgggtt ggctaccaga ggaaatgcta ctttatttct 300

actgtgaaga ggagctggac ttcagcccaa aatgcttgtt ctgaacatgg tgctactctt 360

gctgtcattg attctgaaaa ggacatgaac tttctaaaac gatacgcagg tagagaggaa 420

cactgggttg gactgaaaaa ggaacctggt cacccatgga agtggtcaaa tggcaaagaa 480

tttaacaact ggttcaacgt tacagggtct gacaagtgtg tttttctgaa aaacacagag 540

gtcagcagca tggaatgtga gaagaattta tactggatat gtaacaaacc ttacaaataa 600

<210> 5

<211> 77

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD59”

<400> 5

Leu Gln Cys Tyr Asn Cys Pro Asn Pro Thr Ala Asp Cys Lys Thr Ala

1 5 10 15

Val Asn Cys Ser Ser Asp Phe Asp Ala Cys Leu Ile Thr Lys Ala Gly

20 25 30

Leu Gln Val Tyr Asn Lys Cys Trp Lys Phe Glu His Cys Asn Phe Asn

35 40 45

Asp Val Thr Thr Arg Leu Arg Glu Asn Glu Leu Thr Tyr Tyr Cys Cys

50 55 60

Lys Lys Asp Leu Cys Asn Phe Asn Glu Gln Leu Glu Asn

65 70 75

<210> 6

<211> 387

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD59”

<400> 6

atgggaatcc aaggagggtc tgtcctgttc gggctgctgc tcgtcctggc tgtcttctgc 60

cattcaggtc atagcctgca gtgctacaac tgtcctaacc caactgctga ctgcaaaaca 120

gccgtcaatt gttcatctga ttttgatgcg tgtctcatta ccaaagctgg gttacaagtg 180

tataacaagt gttggaagtt tgagcattgc aatttcaacg acgtcacaac ccgcttgagg 240

gaaaatgagc taacgtacta ctgctgcaag aaggacctgt gtaactttaa cgaacagctt 300

gaaaatggtg ggacatcctt atcagagaaa acagttcttc tgctggtgac tccatttctg 360

gcagcagcct ggagccttca tccctaa 387

<210> 7

<211> 311

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD352”

<400> 7

Gln Ser Ser Leu Thr Pro Leu Met Val Asn Gly Ile Leu Gly Glu Ser

1 5 10 15

Val Thr Leu Pro Leu Glu Phe Pro Ala Gly Glu Lys Val Asn Phe Ile

20 25 30

Thr Trp Leu Phe Asn Glu Thr Ser Leu Ala Phe Ile Val Pro His Glu

35 40 45

Thr Lys Ser Pro Glu Ile His Val Thr Asn Pro Lys Gln Gly Lys Arg

50 55 60

Leu Asn Phe Thr Gln Ser Tyr Ser Leu Gln Leu Ser Asn Leu Lys Met

65 70 75 80

Glu Asp Thr Gly Ser Tyr Arg Ala Gln Ile Ser Thr Lys Thr Ser Ala

85 90 95

Lys Leu Ser Ser Tyr Thr Leu Arg Ile Leu Arg Gln Leu Arg Asn Ile

100 105 110

Gln Val Thr Asn His Ser Gln Leu Phe Gln Asn Met Thr Cys Glu Leu

115 120 125

His Leu Thr Cys Ser Val Glu Asp Ala Asp Asp Asn Val Ser Phe Arg

130 135 140

Trp Glu Ala Leu Gly Asn Thr Leu Ser Ser Gln Pro Asn Leu Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asp Pro Arg Ile Ser Ser Glu Gln Asp Tyr Thr Cys Ile Ala

165 170 175

Glu Asn Ala Val Ser Asn Leu Ser Phe Ser Val Ser Ala Gln Lys Leu

180 185 190

Cys Glu Asp Val Lys Ile Gln Tyr Thr Asp Thr Lys Met Ile Leu Phe

195 200 205

Met Val Ser Gly Ile Cys Ile Val Phe Gly Phe Ile Ile Leu Leu Leu

210 215 220

Leu Val Leu Arg Lys Arg Arg Asp Ser Leu Ser Leu Ser Thr Gln Arg

225 230 235 240

Thr Gln Gly Pro Ala Glu Ser Ala Arg Asn Leu Glu Tyr Val Ser Val

245 250 255

Ser Pro Thr Asn Asn Thr Val Tyr Ala Ser Val Thr His Ser Asn Arg

260 265 270

Glu Thr Glu Ile Trp Thr Pro Arg Glu Asn Asp Thr Ile Thr Ile Tyr

275 280 285

Ser Thr Ile Asn His Ser Lys Glu Ser Lys Pro Thr Phe Ser Arg Ala

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305 310

<210> 8

<211> 996

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD59”

<400> 8

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aaacagggaa agcgactgaa cttcacccag tcctactccc tgcaactcag caacctgaag 300

atggaagaca caggctctta cagagcccag atatccacaa agacctctgc aaagctgtcc 360

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Met Gln Asp Glu Glu Arg Tyr Met Thr Leu Asn Val Gln Ser Lys Lys

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Arg Ser Ser Ala Gln Thr Ser Gln Leu Thr Phe Lys Asp Tyr Ser Val

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Thr Leu His Trp Tyr Lys Ile Leu Leu Gly Ile Ser Gly Thr Val Asn

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Gly Ile Leu Thr Leu Thr Leu Ile Ser Leu Ile Leu Leu Val Ser Gln

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Gly Val Leu Leu Lys Cys Gln Lys Gly Ser Cys Ser Asn Ala Thr Gln

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Tyr Glu Asp Thr Gly Asp Leu Lys Val Asn Asn Gly Thr Arg Arg Asn

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Ile Ser Asn Lys Asp Leu Cys Ala Ser Arg Ser Ala Asp Gln Thr Val

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Leu Cys Gln Ser Glu Trp Leu Lys Tyr Gln Gly Lys Cys Tyr Trp Phe

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Ser Asn Glu Met Lys Ser Trp Ser Asp Ser Tyr Val Tyr Cys Leu Glu

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Arg Lys Ser His Leu Leu Ile Ile His Asp Gln Leu Glu Met Ala Phe

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Ile Gln Lys Asn Leu Arg Gln Leu Asn Tyr Val Trp Ile Gly Leu Asn

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Asp Ser Lys Ile Phe Phe Ile Lys Gly Pro Ala Lys Glu Asn Ser Cys

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Ala Ala Ile Lys Glu Ser Lys Ile Phe Ser Glu Thr Cys Ser Ser Val

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Phe Lys Trp Ile Cys Gln Tyr

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<213> 智人

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<223> /标注=“Npk80”

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tattag 546

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<212> PRT

<213> 智人

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Leu Glu Cys Val Tyr Pro Ser Met Gly Ile Leu Thr Gln Val Glu Trp

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Phe Lys Ile Gly Thr Gln Gln Asp Ser Ile Ala Ile Phe Ser Pro Thr

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His Gly Met Val Ile Arg Lys Pro Tyr Ala Glu Arg Val Tyr Phe Leu

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Asn Ser Thr Met Ala Ser Asn Asn Met Thr Leu Phe Phe Arg Asn Ala

65 70 75 80

Ser Glu Asp Asp Val Gly Tyr Tyr Ser Cys Ser Leu Tyr Thr Tyr Pro

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Gln Gly Thr Trp Gln Lys Val Ile Gln Val Val Gln Ser Asp Ser Phe

100 105 110

Glu Ala Ala Val Pro Ser Asn Ser His Ile Val Ser Glu Pro Gly Lys

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Asn Val Thr Leu Thr Cys Gln Pro Gln Met Thr Trp Pro Val Gln Ala

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Val Arg Trp Glu Lys Ile Gln Pro Arg Gln Ile Asp Leu Leu Thr Tyr

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Cys Asn Leu Val His Gly Arg Asn Phe Thr Ser Lys Phe Pro Arg Gln

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Ile Val Ser Asn Cys Ser His Gly Arg Trp Ser Val Ile Val Ile Pro

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Asp Val Thr Val Ser Asp Ser Gly Leu Tyr Arg Cys Tyr Leu Gln Ala

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Ser Ala Gly Glu Asn Glu Thr Phe Val Met Arg Leu Thr Val Ala Glu

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Gly Lys Thr Asp Asn Gln Tyr Thr Leu Phe Val Ala Gly Gly Thr Val

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Leu Leu Leu Leu Phe Val Ile Ser Ile Thr Thr Ile Ile Val Ile Phe

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Leu Asn Arg Arg Arg Arg Arg Glu Arg Arg Asp Leu Phe Thr Glu Ser

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Trp Asp Thr Gln Lys Ala Pro Asn Asn Tyr Arg Ser Pro Ile Ser Thr

275 280 285

Ser Gln Pro Thr Asn Gln Ser Met Asp Asp Thr Arg Glu Asp Ile Tyr

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Val Asn Tyr Pro Thr Phe Ser Arg Arg Pro Lys Thr Arg Val

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<213> 智人

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<223> /标注=“DNAM-1”

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atggattatc ctactttact tttggctctt cttcatgtat acagagctct atgtgaagag 60

gtgctttggc atacatcagt tccctttgcc gagaacatgt ctctagaatg tgtgtatcca 120

tcaatgggca tcttaacaca ggtggagtgg ttcaagatcg ggacccagca ggattccata 180

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Gly Lys Gly Cys Gln Gly Ser Ala Asp His Val Val Ser Ile Ser Gly

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Val Pro Leu Gln Leu Gln Pro Asn Ser Ile Gln Thr Lys Val Asp Ser

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Ile Ala Trp Lys Lys Leu Leu Pro Ser Gln Asn Gly Phe His His Ile

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Leu Lys Trp Glu Asn Gly Ser Leu Pro Ser Asn Thr Ser Asn Asp Arg

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Phe Ser Phe Ile Val Lys Asn Leu Ser Leu Leu Ile Lys Ala Ala Gln

65 70 75 80

Gln Gln Asp Ser Gly Leu Tyr Cys Leu Glu Val Thr Ser Ile Ser Gly

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Lys Val Gln Thr Ala Thr Phe Gln Val Phe Val Phe Asp Lys Val Glu

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Lys Pro Arg Leu Gln Gly Gln Gly Lys Ile Leu Asp Arg Gly Arg Cys

115 120 125

Gln Val Ala Leu Ser Cys Leu Val Ser Arg Asp Gly Asn Val Ser Tyr

130 135 140

Ala Trp Tyr Arg Gly Ser Lys Leu Ile Gln Thr Ala Gly Asn Leu Thr

145 150 155 160

Tyr Leu Asp Glu Glu Val Asp Ile Asn Gly Thr His Thr Tyr Thr Cys

165 170 175

Asn Val Ser Asn Pro Val Ser Trp Glu Ser His Thr Leu Asn Leu Thr

180 185 190

Gln Asp Cys Gln Asn Ala His Gln Glu Phe Arg Phe Trp Pro Phe Leu

195 200 205

Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu Phe Leu Gly Thr Leu Ala Cys

210 215 220

Phe Cys Val Trp Arg Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser

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Pro Lys Glu Phe Leu Thr Ile Tyr Glu Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr

245 250 255

Arg Arg Asn His Glu Gln Glu Gln Thr Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr

260 265 270

Ile Tyr Ser Met Ile Gln Ser Gln Ser Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu

275 280 285

Pro Ala Tyr Thr Leu Tyr Ser Leu Ile Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly

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Ser Arg Lys Arg Asn His Ser Pro Ser Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu

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Val Ile Gly Lys Ser Gln Pro Lys Ala Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser

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<212> DNA

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<223> /标注=“HB4”

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Leu Trp Val Ser Gln Pro Pro Glu Ile Arg Thr Leu Glu Gly Ser Ser

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Ala Phe Leu Pro Cys Ser Phe Asn Ala Ser Gln Gly Arg Leu Ala Ile

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Gly Ser Val Thr Trp Phe Arg Asp Glu Val Val Pro Gly Lys Glu Val

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Arg Asn Gly Thr Pro Glu Phe Arg Gly Arg Leu Ala Pro Leu Ala Ser

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Ser Arg Phe Leu His Asp His Gln Ala Glu Leu His Ile Arg Asp Val

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Leu Gly Val Gly Thr Gly Asn Gly Thr Arg Leu Val Val Glu Lys Glu

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His Pro Gln Leu Gly Ala Gly Thr Val Leu Leu Leu Arg Ala Gly Phe

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Tyr Ala Val Ser Phe Leu Ser Val Ala Val Gly Ser Thr Val Tyr Tyr

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<213> 智人

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Gln Ser Lys Ala Gln Val Leu Gln Ser Val Ala Gly Gln Thr Leu Thr

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Val Arg Cys Gln Tyr Pro Pro Thr Gly Ser Leu Tyr Glu Lys Lys Gly

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Trp Cys Lys Glu Ala Ser Ala Leu Val Cys Ile Arg Leu Val Thr Ser

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Ser Lys Pro Arg Thr Met Ala Trp Thr Ser Arg Phe Thr Ile Trp Asp

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Asp Pro Asp Ala Gly Phe Phe Thr Val Thr Met Thr Asp Leu Arg Glu

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Glu Asp Ser Gly His Tyr Trp Cys Arg Ile Tyr Arg Pro Ser Asp Asn

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Ser Val Ser Lys Ser Val Arg Phe Tyr Leu Val Val Ser Pro Ala Ser

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Ala Ser Thr Gln Thr Ser Trp Thr Pro Arg Asp Leu Val Ser Ser Gln

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Thr Gln Thr Gln Ser Cys Val Pro Pro Thr Ala Gly Ala Arg Gln Ala

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Thr Leu Arg Pro Gly Pro Ala Ala Pro Ile Ala Leu Val Pro Val Phe

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Cys Gly Leu Leu Val Ala Lys Ser Leu Val Leu Ser Ala Leu Leu Val

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Trp Trp Gly Asp Ile Trp Trp Lys Thr Met Met Glu Leu Arg Ser Leu

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Asp Thr Gln Lys Ala Thr Cys His Leu Gln Gln Val Thr Asp Leu Pro

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Trp Thr Ser Val Ser Ser Pro Val Glu Arg Glu Ile Leu Tyr His Thr

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Val Ala Arg Thr Lys Ile Ser Asp Asp Asp Asp Glu His Thr Leu

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Gln Gln Gln Thr Leu Pro Lys Pro Phe Ile Trp Ala Glu Pro His Phe

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Met Val Pro Lys Glu Lys Gln Val Thr Ile Cys Cys Gln Gly Asn Tyr

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Gly Ala Val Glu Tyr Gln Leu His Phe Glu Gly Ser Leu Phe Ala Val

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Asp Arg Pro Lys Pro Pro Glu Arg Ile Asn Lys Val Gln Phe Tyr Ile

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Pro Asp Met Asn Ser Arg Met Ala Gly Gln Tyr Ser Cys Ile Tyr Arg

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Val Gly Glu Leu Trp Ser Glu Pro Ser Asn Leu Leu Asp Leu Val Val

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Val Ile Ser Gly Glu Lys Val Thr Phe Tyr Cys Arg Leu Asp Thr Ala

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Thr Ser Met Phe Leu Leu Leu Lys Glu Gly Arg Ser Ser His Val Gln

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Arg Gly Tyr Gly Lys Val Gln Ala Glu Phe Pro Leu Gly Pro Val Thr

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Thr Ala His Arg Gly Thr Tyr Arg Cys Phe Gly Ser Tyr Asn Asn His

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Ala Trp Ser Phe Pro Ser Glu Pro Val Lys Leu Leu Val Thr Gly Asp

180 185 190

Ile Glu Asn Thr Ser Leu Ala Pro Glu Asp Pro Thr Phe Pro Ala Asp

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Thr Trp Gly Thr Tyr Leu Leu Thr Thr Glu Thr Gly Leu Gln Lys Asp

210 215 220

His Ala Leu Trp Asp His Thr Ala Gln Asn Leu Leu Arg Met Gly Leu

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Ala Phe Leu Val Leu Val Ala Leu Val Trp Phe Leu Val Glu Asp Trp

245 250 255

Leu Ser Arg Lys Arg Thr Arg Glu Arg Ala Ser Arg Ala Ser Thr Trp

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Glu Gly Arg Arg Arg Leu Asn Thr Gln Thr Leu

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<210> 20

<211> 777

<212> DNA

<213> 智人

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<223> /标注=“NKp46”

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gaggaagact caggacatta ctggtgtaga atctaccgcc cttctgacaa ctctgtctct 360

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<212> PRT

<213> 智人

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<223> /标注=“NKG2D”

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Met Gly Trp Ile Arg Gly Arg Arg Ser Arg His Ser Trp Glu Met Ser

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Arg Trp Gln Lys Gln Arg Cys Pro Val Val Lys Ser Lys Cys Arg Glu

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Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

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Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

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Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

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Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

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<223> /标注=“NKG2D”

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gtagccatgg gaatccgttt cattattatg gtaacaatat ggagtgctgt attcctaaac 240

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Gln Glu Gly Val His Arg Lys Pro Ser Phe Leu Ala Leu Pro Gly His

1 5 10 15

Leu Val Lys Ser Glu Glu Thr Val Ile Leu Gln Cys Trp Ser Asp Val

20 25 30

Met Phe Glu His Phe Leu Leu His Arg Glu Gly Lys Phe Asn Asn Thr

35 40 45

Leu His Leu Ile Gly Glu His His Asp Gly Val Ser Lys Ala Asn Phe

50 55 60

Ser Ile Gly Pro Met Met Pro Val Leu Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr

65 70 75 80

Ser Ser Val Pro His Ser Pro Tyr Gln Leu Ser Ala Pro Ser Asp Pro

85 90 95

Leu Asp Met Val Ile Ile Gly Leu Tyr Glu Lys Pro Ser Leu Ser Ala

100 105 110

Gln Pro Gly Pro Thr Val Gln Ala Gly Glu Asn Val Ser Leu Ser Cys

115 120 125

Ser Ser Ile Tyr Pro Gly Arg Gly Arg Pro Met Asn Val Gly Ser Leu

130 135 140

Gln Cys Ala Ala Ser Thr Glu His Ser Arg Pro Thr Phe Leu Trp Ala

145 150 155 160

Leu Pro Pro Thr Glu Gly Pro Thr Asp Ala Ser Ala Leu Ser Val Thr

165 170 175

Leu Pro Thr Ser Gly Gln Thr Arg Val Ile His Cys Leu Phe Pro Ser

180 185 190

Gln Glu Thr Leu Gln Ile Val Gly Leu His Pro Leu Asn Gln Ala Pro

195 200 205

Lys Pro Val Thr Pro Asp Thr Tyr Met Phe

210 215

<210> 36

<211> 893

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“KIR2DS4”

<400> 36

atgtcgctca tggtcatcat catggcgtgt gttgggttct tcttgctgca gggggcctgg 60

ccacaggagg gagtccacag aaaaccttcc ttcctggccc tcccaggtca cctggtgaaa 120

tcagaagaga cagtcatcct gcaatgttgg tcggatgtca tgtttgagca cttccttctg 180

cacagagagg ggaagtttaa caacactttg cacctcattg gagagcacca tgatggggtt 240

tccaaggcca acttctccat tggtcccatg atgcctgtcc ttgcaggaac ctacagatgc 300

tacggttctg ttcctcactc cccctatcag ttgtcagctc ccagtgaccc tctggacatg 360

gtgatcatag gtctatatga gaaaccttct ctctcagccc agccgggccc cacggttcag 420

gcaggagaga atgtgacctt gtcctgcagc tccatctatc cagggaaggg gaggcccatg 480

aacgtaggct ccctgcagtg cgcagcatca acggaacatt ccaggccgac tttcctctgg 540

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ggccttcacc cactgaacca agctccaaaa ccggtaaccc cagacaccta catgttctga 720

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ggtgctccga caaaaaaaat gctgctgtaa tggaccaaga gcctgcaggg aacagaacag 840

tgaacagcga ggattctgat gaacaagacc atcaggaggt gtcatacgca taa 893

<210> 37

<211> 283

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“KIR2DS5”

<400> 37

His Glu Gly Phe Arg Arg Lys Pro Ser Leu Leu Ala His Pro Gly Pro

1 5 10 15

Leu Val Lys Ser Glu Glu Thr Val Ile Leu Gln Cys Trp Ser Asp Val

20 25 30

Met Phe Glu His Phe Leu Leu His Arg Glu Gly Thr Phe Asn His Thr

35 40 45

Leu Arg Leu Ile Gly Glu His Ile Asp Gly Val Ser Lys Gly Asn Phe

50 55 60

Ser Ile Gly Arg Met Thr Gln Asp Leu Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr

65 70 75 80

Gly Ser Val Thr His Ser Pro Tyr Gln Leu Ser Ala Pro Ser Asp Pro

85 90 95

Leu Asp Ile Val Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Lys Pro Ser Leu Ser Ala

100 105 110

Gln Pro Gly Pro Thr Val Leu Ala Gly Glu Ser Val Thr Leu Ser Cys

115 120 125

Ser Ser Arg Ser Ser Tyr Asp Met Tyr His Leu Ser Arg Glu Gly Glu

130 135 140

Ala His Glu Arg Arg Leu Pro Ala Gly Thr Lys Val Asn Gly Thr Phe

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Gln Ala Asp Phe Pro Leu Asp Pro Ala Thr His Gly Gly Thr Tyr Arg

165 170 175

Cys Phe Gly Ser Phe Arg Asp Ser Pro Tyr Glu Trp Ser Lys Ser Ser

180 185 190

Asp Pro Leu Leu Val Ser Val Thr Gly Asn Thr Ser Asn Ser Trp Pro

195 200 205

Ser Pro Thr Glu Pro Ser Ser Lys Thr Gly Asn Pro Arg His Leu His

210 215 220

Val Leu Ile Gly Thr Ser Val Val Lys Leu Pro Phe Thr Ile Leu Leu

225 230 235 240

Phe Phe Leu Leu His Arg Trp Cys Ser Asn Lys Lys Asn Ala Ser Val

245 250 255

Met Asp Gln Gly Pro Ala Gly Asn Arg Thr Val Asn Arg Glu Asp Ser

260 265 270

Asp Glu Gln Asp His Gln Glu Val Ser Tyr Ala

275 280

<210> 38

<211> 915

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“KIR2DS”

<400> 38

atgtcgctca tggtcatcag catggcgtgt gttgcgttct tcttgctgca gggggcctgg 60

ccacatgagg gattccgcag aaaaccttcc ctcctggccc acccaggtcc cctggtgaaa 120

tcagaagaga cagtcatcct gcaatgttgg tcagatgtca tgtttgagca cttccttctg 180

cacagagagg ggacgtttaa ccacactttg cgcctcattg gagagcacat tgatggggtc 240

tccaagggca acttctccat cggtcgcatg acacaagacc tggcagggac ctacagatgc 300

tacggttctg ttactcactc cccctatcag ttgtcagcgc ccagtgaccc tctggacatc 360

gtgatcacag gtctatatga gaaaccttct ctctcagccc agccgggccc cacggttctg 420

gcaggagaga gcgtgacctt gtcctgcagc tcccggagct cctatgacat gtaccatcta 480

tccagggaag gggaggccca tgaacgtagg ctccctgcag ggcccaaggt caacagaaca 540

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cccagacacc tacacgttct gattgggacc tcagtggtca aactcccttt caccatcctc 780

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<210> 39

<211> 361

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“KIR3DS1”

<400> 39

His Met Gly Gly Gln Asp Lys Pro Phe Leu Ser Ala Trp Pro Ser Ala

1 5 10 15

Val Val Pro Arg Gly Gly His Val Thr Leu Arg Cys His Tyr Arg His

20 25 30

Arg Phe Asn Asn Phe Met Leu Tyr Lys Glu Asp Arg Ile His Val Pro

35 40 45

Ile Phe His Gly Arg Ile Phe Gln Glu Gly Phe Asn Met Ser Pro Val

50 55 60

Thr Thr Ala His Ala Gly Asn Tyr Thr Cys Arg Gly Ser His Pro His

65 70 75 80

Ser Pro Thr Gly Trp Ser Ala Pro Ser Asn Pro Met Val Ile Met Val

85 90 95

Thr Gly Asn His Arg Lys Pro Ser Leu Leu Ala His Pro Gly Pro Leu

100 105 110

Val Lys Ser Gly Glu Arg Val Ile Leu Gln Cys Trp Ser Asp Ile Met

115 120 125

Phe Glu His Phe Phe Leu His Lys Glu Gly Ile Ser Lys Asp Pro Ser

130 135 140

Arg Leu Val Gly Gln Ile His Asp Gly Val Ser Lys Ala Asn Phe Ser

145 150 155 160

Ile Gly Ser Met Met Arg Ala Leu Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Gly

165 170 175

Ser Val Thr His Thr Pro Tyr Gln Leu Ser Ala Pro Ser Asp Pro Leu

180 185 190

Asp Ile Val Val Thr Gly Leu Tyr Glu Lys Pro Ser Leu Ser Ala Gln

195 200 205

Pro Gly Pro Lys Val Gln Ala Gly Glu Ser Val Thr Leu Ser Cys Ser

210 215 220

Ser Arg Ser Ser Tyr Asp Met Tyr His Leu Ser Arg Glu Gly Gly Ala

225 230 235 240

His Glu Arg Arg Leu Pro Ala Val Arg Lys Val Asn Arg Thr Phe Gln

245 250 255

Ala Asp Phe Pro Leu Gly Pro Ala Thr His Gly Gly Thr Tyr Arg Cys

260 265 270

Phe Gly Ser Phe Arg His Ser Pro Tyr Glu Trp Ser Asp Pro Ser Asp

275 280 285

Pro Leu Leu Val Ser Val Thr Gly Asn Pro Ser Ser Ser Trp Pro Ser

290 295 300

Pro Thr Glu Pro Ser Ser Lys Ser Gly Asn Leu Arg His Leu His Ile

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Leu Ile Gly Thr Ser Val Val Lys Ile Pro Phe Thr Ile Leu Leu Phe

325 330 335

Phe Leu Leu His Arg Trp Cys Ser Asn Lys Lys Lys Cys Cys Cys Asn

340 345 350

Gly Pro Arg Ala Cys Arg Glu Gln Lys

355 360

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<211> 1149

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“KIR3DS1”

<400> 40

atgttgctca tggtcgtcag catggcgtgt gttgggttgt tcttggtcca gagggccggt 60

ccacacatgg gtggtcagga caagcccttc ctgtctgcct ggcccagcgc tgtggtgcct 120

cgcggaggac acgtgactct tcggtgtcac tatcgtcata ggtttaacaa tttcatgcta 180

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aacatgagcc ctgtgaccac agcacatgca gggaactaca catgtcgggg ttcacaccca 300

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cagaagtga 1149

<210> 41

<211> 231

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“NKG2C”

<400> 41

Met Ser Lys Gln Arg Gly Thr Phe Ser Glu Val Ser Leu Ala Gln Asp

1 5 10 15

Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Ser

20 25 30

Gly Thr Glu Gln Glu Ile Phe Gln Val Glu Leu Asn Leu Gln Asn Pro

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Ser Leu Asn His Gln Gly Ile Asp Lys Ile Tyr Asp Cys Gln Gly Leu

50 55 60

Leu Pro Pro Pro Glu Lys Leu Thr Ala Glu Val Leu Gly Ile Ile Cys

65 70 75 80

Ile Val Leu Met Ala Thr Val Leu Lys Thr Ile Val Leu Ile Pro Phe

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Leu Glu Gln Asn Asn Ser Ser Pro Asn Thr Arg Thr Gln Lys Ala Arg

100 105 110

His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn Ser Cys

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Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu Leu Ala

130 135 140

Cys Thr Ser Lys Asn Ser Ser Leu Leu Ser Ile Asp Asn Glu Glu Glu

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Met Lys Phe Leu Ala Ser Ile Leu Pro Ser Ser Trp Ile Gly Val Phe

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Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Ile Asn Gly Leu Ala Phe

180 185 190

Lys His Lys Ile Lys Asp Ser Asp Asn Ala Glu Leu Asn Cys Ala Val

195 200 205

Leu Gln Val Asn Arg Leu Lys Ser Ala Gln Cys Gly Ser Ser Met Ile

210 215 220

Tyr His Cys Lys His Lys Leu

225 230

<210> 42

<211> 696

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“NKG2C”

<400> 42

atgaataaac aaagaggaac cttctcagaa gtgagtctgg cccaggaccc aaagcggcag 60

caaaggaaac ctaaaggcaa taaaagctcc atttcaggaa ccgaacagga aatattccaa 120

gtagaattaa atcttcaaaa tccttccctg aatcatcaag ggattgataa aatatatgac 180

tgccaaggtt tactgccacc tccagagaag ctcactgccg aggtcctagg aatcatttgc 240

attgtcctga tggccactgt gttaaaaaca atagttctta ttcctttcct ggagcagaac 300

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tggattacat attccaacag ttgttattac attggtaagg aaagaagaac ttgggaagag 420

agtttgctgg cctgtacttc gaagaactcc agtctgcttt ctatagataa tgaagaagaa 480

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<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CCR7”

<400> 43

Gln Asp Glu Val Thr Asp Asp Tyr Ile Gly Asp Asn Thr Thr Val Asp

1 5 10 15

Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Leu Cys Ser Lys Lys Asp Val Arg Asn Phe

20 25 30

Lys Ala Trp Phe Leu Pro Ile Met Tyr Ser Ile Ile Cys Phe Val Gly

35 40 45

Leu Leu Gly Asn Gly Leu Val Val Leu Thr Tyr Ile Tyr Phe Lys Arg

50 55 60

Leu Lys Thr Met Thr Asp Thr Tyr Leu Leu Asn Leu Ala Val Ala Asp

65 70 75 80

Ile Leu Phe Leu Leu Thr Leu Pro Phe Trp Ala Tyr Ser Ala Ala Lys

85 90 95

Ser Trp Val Phe Gly Val His Phe Cys Lys Leu Ile Phe Ala Ile Tyr

100 105 110

Lys Met Ser Phe Phe Ser Gly Met Leu Leu Leu Leu Cys Ile Ser Ile

115 120 125

Asp Arg Tyr Val Ala Ile Val Gln Ala Val Ser Ala His Arg His Arg

130 135 140

Ala Arg Val Leu Leu Ile Ser Lys Leu Ser Cys Val Gly Ile Trp Ile

145 150 155 160

Leu Ala Thr Val Leu Ser Ile Pro Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Leu Gln

165 170 175

Arg Ser Ser Ser Glu Gln Ala Met Arg Cys Ser Leu Ile Thr Glu His

180 185 190

Val Glu Ala Phe Ile Thr Ile Gln Val Ala Gln Met Val Ile Gly Phe

195 200 205

Leu Val Pro Leu Leu Ala Met Ser Phe Cys Tyr Leu Val Ile Ile Arg

210 215 220

Thr Leu Leu Gln Ala Arg Asn Phe Glu Arg Asn Lys Ala Ile Lys Val

225 230 235 240

Ile Ile Ala Val Val Val Val Phe Ile Val Phe Gln Leu Pro Tyr Asn

245 250 255

Gly Val Val Leu Ala Gln Thr Val Ala Asn Phe Asn Ile Thr Ser Ser

260 265 270

Thr Cys Glu Leu Ser Lys Gln Leu Asn Ile Ala Tyr Asp Val Thr Tyr

275 280 285

Ser Leu Ala Cys Val Arg Cys Cys Val Asn Pro Phe Leu Tyr Ala Phe

290 295 300

Ile Gly Val Lys Phe Arg Asn Asp Leu Phe Lys Leu Phe Lys Asp Leu

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Gly Cys Leu Ser Gln Glu Gln Leu Arg Gln Trp Ser Ser Cys Arg His

325 330 335

Ile Arg Arg Ser Ser Met Ser Val Glu Ala Glu Thr Thr Thr Thr Phe

340 345 350

Ser Pro

<210> 44

<211> 1137

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CCR7”

<400> 44

atggacctgg ggaaaccaat gaaaagcgtg ctggtggtgg ctctccttgt cattttccag 60

gtatgcctgt gtcaagatga ggtcacggac gattacatcg gagacaacac cacagtggac 120

tacactttgt tcgagtcttt gtgctccaag aaggacgtgc ggaactttaa agcctggttc 180

ctccctatca tgtactccat catttgtttc gtgggcctac tgggcaatgg gctggtcgtg 240

ttgacctata tctatttcaa gaggctcaag accatgaccg atacctacct gctcaacctg 300

gcggtggcag acatcctctt cctcctgacc cttcccttct gggcctacag cgcggccaag 360

tcctgggtct tcggtgtcca cttttgcaag ctcatctttg ccatctacaa gatgagcttc 420

ttcagtggca tgctcctact tctttgcatc agcattgacc gctacgtggc catcgtccag 480

gctgtctcag ctcaccgcca ccgtgcccgc gtccttctca tcagcaagct gtcctgtgtg 540

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ttctgttacc ttgtcatcat ccgcaccctg ctccaggcac gcaactttga gcgcaacaag 780

gccatcaagg tgatcatcgc tgtggtcgtg gtcttcatag tcttccagct gccctacaat 840

ggggtggtcc tggcccagac ggtggccaac ttcaacatca ccagtagcac ctgtgagctc 900

agtaagcaac tcaacatcgc ctacgacgtc acctacagcc tggcctgcgt ccgctgctgc 960

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ttcaaggacc tgggctgcct cagccaggag cagctccggc agtggtcttc ctgtcggcac 1080

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<210> 45

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<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CXCR3”

<400> 45

Met Val Leu Glu Val Ser Asp His Gln Val Leu Asn Asp Ala Glu Val

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Ala Ala Leu Leu Glu Asn Phe Ser Ser Ser Tyr Asp Tyr Gly Glu Asn

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Glu Ser Asp Ser Cys Cys Thr Ser Pro Pro Cys Pro Gln Asp Phe Ser

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Leu Asn Phe Asp Arg Ala Phe Leu Pro Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Phe

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Leu Leu Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Ala Ala Val Leu Leu Ser

65 70 75 80

Arg Arg Thr Ala Leu Ser Ser Thr Asp Thr Phe Leu Leu His Leu Ala

85 90 95

Val Ala Asp Thr Leu Leu Val Leu Thr Leu Pro Leu Trp Ala Val Asp

100 105 110

Ala Ala Val Gln Trp Val Phe Gly Ser Gly Leu Cys Lys Val Ala Gly

115 120 125

Ala Leu Phe Asn Ile Asn Phe Tyr Ala Gly Ala Leu Leu Leu Ala Cys

130 135 140

Ile Ser Phe Asp Arg Tyr Leu Asn Ile Val His Ala Thr Gln Leu Tyr

145 150 155 160

Arg Arg Gly Pro Pro Ala Arg Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Val Trp

165 170 175

Gly Leu Cys Leu Leu Phe Ala Leu Pro Asp Phe Ile Phe Leu Ser Ala

180 185 190

His His Asp Glu Arg Leu Asn Ala Thr His Cys Gln Tyr Asn Phe Pro

195 200 205

Gln Val Gly Arg Thr Ala Leu Arg Val Leu Gln Leu Val Ala Gly Phe

210 215 220

Leu Leu Pro Leu Leu Val Met Ala Tyr Cys Tyr Ala His Ile Leu Ala

225 230 235 240

Val Leu Leu Val Ser Arg Gly Gln Arg Arg Leu Arg Ala Met Arg Leu

245 250 255

Val Val Val Val Val Val Ala Phe Ala Leu Cys Trp Thr Pro Tyr His

260 265 270

Leu Val Val Leu Val Asp Ile Leu Met Asp Leu Gly Ala Leu Ala Arg

275 280 285

Asn Cys Gly Arg Glu Ser Arg Val Asp Val Ala Lys Ser Val Thr Ser

290 295 300

Gly Leu Gly Tyr Met His Cys Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ala Phe

305 310 315 320

Val Gly Val Lys Phe Arg Glu Arg Met Trp Met Leu Leu Leu Arg Leu

325 330 335

Gly Cys Pro Asn Gln Arg Gly Leu Gln Arg Gln Pro Ser Ser Ser Arg

340 345 350

Arg Asp Ser Ser Trp Ser Glu Thr Ser Glu Ala Ser Tyr Ser Gly Leu

355 360 365

<210> 46

<211> 1248

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CXCR3”

<400> 46

atggagttga ggaagtacgg ccctggaaga ctggcgggga cagttatagg aggagctgct 60

cagagtaaat cacagactaa atcagactca atcacaaaag agttcctgcc aggcctttac 120

acagcccctt cctccccgtt cccgccctca caggtgagtg accaccaagt gctaaatgac 180

gccgaggttg ccgccctcct ggagaacttc agctcttcct atgactatgg agaaaacgag 240

agtgactcgt gctgtacctc cccgccctgc ccacaggact tcagcctgaa cttcgaccgg 300

gccttcctgc cagccctcta cagcctcctc tttctgctgg ggctgctggg caacggcgcg 360

gtggcagccg tgctgctgag ccggcggaca gccctgagca gcaccgacac cttcctgctc 420

cacctagctg tagcagacac gctgctggtg ctgacactgc cgctctgggc agtggacgct 480

gccgtccagt gggtctttgg ctctggcctc tgcaaagtgg caggtgccct cttcaacatc 540

aacttctacg caggagccct cctgctggcc tgcatcagct ttgaccgcta cctgaacata 600

gttcatgcca cccagctcta ccgccggggg cccccggccc gcgtgaccct cacctgcctg 660

gctgtctggg ggctctgcct gcttttcgcc ctcccagact tcatcttcct gtcggcccac 720

cacgacgagc gcctcaacgc cacccactgc caatacaact tcccacaggt gggccgcacg 780

gctctgcggg tgctgcagct ggtggctggc tttctgctgc ccctgctggt catggcctac 840

tgctatgccc acatcctggc cgtgctgctg gtttccaggg gccagcggcg cctgcgggcc 900

atgcggctgg tggtggtggt cgtggtggcc tttgccctct gctggacccc ctatcacctg 960

gtggtgctgg tggacatcct catggacctg ggcgctttgg cccgcaactg tggccgagaa 1020

agcagggtag acgtggccaa gtcggtcacc tcaggcctgg gctacatgca ctgctgcctc 1080

aacccgctgc tctatgcctt tgtaggggtc aagttccggg agcggatgtg gatgctgctc 1140

ttgcgcctgg gctgccccaa ccagagaggg ctccagaggc agccatcgtc ttcccgccgg 1200

gattcatcct ggtctgagac ctcagaggcc tcctactcgg gcttgtga 1248

<210> 47

<211> 344

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“L-选择素”

<400> 47

Asp Phe Leu Ala His His Gly Thr Asp Cys Trp Thr Tyr His Tyr Ser

1 5 10 15

Glu Lys Pro Met Asn Trp Gln Arg Ala Arg Arg Phe Cys Arg Asp Asn

20 25 30

Tyr Thr Asp Leu Val Ala Ile Gln Asn Lys Ala Glu Ile Glu Tyr Leu

35 40 45

Glu Lys Thr Leu Pro Phe Ser Arg Ser Tyr Tyr Trp Ile Gly Ile Arg

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Lys Ile Gly Gly Ile Trp Thr Trp Val Gly Thr Asn Lys Ser Leu Thr

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Glu Glu Ala Glu Asn Trp Gly Asp Gly Glu Pro Asn Asn Lys Lys Asn

85 90 95

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100 105 110

Lys Trp Asn Asp Asp Ala Cys His Lys Leu Lys Ala Ala Leu Cys Tyr

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Glu Ile Ile Asn Asn Tyr Thr Cys Asn Cys Asp Val Gly Tyr Tyr Gly

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Pro Gln Cys Gln Phe Val Ile Gln Cys Glu Pro Leu Glu Ala Pro Glu

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Leu Gly Thr Met Asp Cys Thr His Pro Leu Gly Asn Phe Ser Phe Ser

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Ser Gln Cys Ala Phe Ser Cys Ser Glu Gly Thr Asn Leu Thr Gly Ile

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Ile Met Asn Cys Ser His Pro Leu Ala Ser Phe Ser Phe Thr Ser Ala

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Cys Thr Phe Ile Cys Ser Glu Gly Thr Glu Leu Ile Gly Lys Lys Lys

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Gln Lys Leu Asp Lys Ser Phe Ser Met Ile Lys Glu Gly Asp Tyr Asn

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Leu Val Lys Phe Ile Cys Leu Ser Ile Trp Gly Leu Ser Leu Leu Leu

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Leu Ala Ile Val Leu Ala Ala Asn Ser Met Asn Asn Arg Thr Val Gln

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Ala Ala Pro Gln Phe Met Phe Thr Lys Gln Lys Glu Asn Glu Cys Leu

165 170 175

Gly Asp Tyr Pro Glu Val Leu Gln Glu Ile Trp Pro Val Leu Arg Asn

180 185 190

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Lys Lys Ala Lys Ala Ile Lys Leu Ile Leu Leu Val Val Ile Val Phe

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Phe Leu Phe Trp Thr Pro Tyr Asn Val Met Ile Phe Leu Glu Thr Leu

245 250 255

Lys Leu Tyr Asp Phe Phe Pro Ser Cys Asp Met Arg Lys Asp Leu Arg

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Leu Ala Leu Ser Val Thr Glu Thr Val Ala Phe Ser His Cys Cys Leu

275 280 285

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Val Leu Ser Ser Asn Phe Thr Tyr His Thr Ser Asp Gly Asp Ala Leu

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355

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<223> /标注=“CXC3CR1”

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Leu Leu Thr Ile Ile Ser Ser Asp Arg Cys Ile Ser Val Leu Leu Pro

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Val Trp Ser Gln Asn His Arg Ser Val Arg Leu Ala Tyr Met Ala Cys

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Met Val Ile Trp Val Leu Ala Phe Phe Leu Ser Ser Pro Ser Leu Val

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Phe Arg Asp Thr Ala Asn Leu His Gly Lys Ile Ser Cys Phe Asn Asn

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Phe Ser Leu Ser Thr Pro Gly Ser Ser Ser Trp Pro Thr His Ser Gln

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Met Asp Pro Val Gly Tyr Ser Arg His Met Val Val Thr Val Thr Arg

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Leu Thr Ile Val Cys Lys Leu Gln Arg Asn Arg Leu Ala Lys Thr Lys

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Lys Pro Phe Lys Ile Ile Val Thr Ile Ile Ile Thr Phe Phe Leu Cys

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275 280 285

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Tyr Gln Lys Lys Leu Arg Ser Met Thr Asp Lys Tyr Arg Leu His Leu

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Ser Val Ala Asp Leu Leu Phe Val Ile Thr Leu Pro Phe Trp Ala Val

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Asp Ala Val Ala Asn Trp Tyr Phe Gly Asn Phe Leu Cys Lys Ala Val

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His Val Ile Tyr Thr Val Asn Leu Tyr Ser Ser Val Leu Ile Leu Ala

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Phe Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Thr Asn Ser

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Val Ser Glu Ala Asp Asp Arg Tyr Ile Cys Asp Arg Phe Tyr Pro Asn

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Ile Leu Pro Gly Ile Val Ile Leu Ser Cys Tyr Cys Ile Ile Ile Ser

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Gly Cys Glu Phe Glu Asn Thr Val His Lys Trp Ile Ser Ile Thr Glu

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<212> DNA

<213> 智人

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Met Ile Val Tyr Phe Leu Phe Trp Ala Pro Tyr Asn Ile Val Leu Leu

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Arg Asn Tyr Leu Leu Val Phe Phe Gln Lys His Ile Ala Lys Arg Phe

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Cys Lys Cys Cys Ser Ile Phe Gln Gln Glu Ala Pro Glu Arg Ala Ser

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Gly Gly Val Phe Val Ala Leu Thr Ala Ser Val Leu Ser Leu Leu Ala

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<213> 智人

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<221> source

<223> /标注=“mTor”

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caggatacac tcagagttct caccttatgg tttgattatg gtcactggcc agatgtcaat 5760

gaggccttag tggagggggt gaaagccatc cagattgata cctggctaca ggttatacct 5820

cagctcattg caagaattga tacgcccaga cccttggtgg gacgtctcat tcaccagctt 5880

ctcacagaca ttggtcggta ccacccccag gccctcatct acccactgac agtggcttct 5940

aagtctacca cgacagcccg gcacaatgca gccaacaaga ttctgaagaa catgtgtgag 6000

cacagcaaca ccctggtcca gcaggccatg atggtgagcg aggagctgat ccgagtggcc 6060

atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc ctggaagagg catctcgttt gtactttggg 6120

gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg 6180

ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag 6240

gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc 6300

tgggacctct attatcatgt gttccgacga atctcaaagc agctgcctca gctcacatcc 6360

ttagagctgc aatatgtttc cccaaaactt ctgatgtgcc gggaccttga attggctgtg 6420

ccaggaacat atgaccccaa ccagccaatc attcgcattc agtccatagc accgtctttg 6480

caagtcatca catccaagca gaggccccgg aaattgacac ttatgggcag caacggacat 6540

gagtttgttt tccttctaaa aggccatgaa gatctgcgcc aggatgagcg tgtgatgcag 6600

ctcttcggcc tggttaacac ccttctggcc aatgacccaa catctcttcg gaaaaacctc 6660

agcatccaga gatacgctgt catcccttta tcgaccaact cgggcctcat tggctgggtt 6720

ccccactgtg acacactgca cgccctcatc cgggactaca gggagaagaa gaagatcctt 6780

ctcaacatcg agcatcgcat catgttgcgg atggctccgg actatgacca cttgactctg 6840

atgcagaagg tggaggtgtt tgagcatgcc gtcaataata cagctgggga cgacctggcc 6900

aagctgctgt ggctgaaaag ccccagctcc gaggtgtggt ttgaccgaag aaccaattat 6960

acccgttctt tagcggtcat gtcaatggtt gggtatattt taggcctggg agatagacac 7020

ccatccaacc tgatgctgga ccgtctgagt gggaagatcc tgcacattga ctttggggac 7080

tgctttgagg ttgctatgac ccgagagaag tttccagaga agattccatt tagactaaca 7140

agaatgttga ccaatgctat ggaggttaca ggcctggatg gcaactacag aatcacatgc 7200

cacacagtga tggaggtgct gcgagagcac aaggacagtg tcatggccgt gctggaagcc 7260

tttgtctatg accccttgct gaactggagg ctgatggaca caaataccaa aggcaacaag 7320

cgatcccgaa cgaggacgga ttcctactct gctggccagt cagtcgaaat tttggacggt 7380

gtggaacttg gagagccagc ccataagaaa acggggacca cagtgccaga atctattcat 7440

tctttcattg gagacggttt ggtgaaacca gaggccctaa ataagaaagc tatccagatt 7500

attaacaggg ttcgagataa gctcactggt cgggacttct ctcatgatga cactttggat 7560

gttccaacgc aagttgagct gctcatcaaa caagcgacat cccatgaaaa cctctgccag 7620

tgctatattg gctggtgccc tttctggtaa 7650

<210> 67

<211> 1147

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“SREBP1”

<400> 67

Met Asp Glu Pro Pro Phe Ser Glu Ala Ala Leu Glu Gln Ala Leu Gly

1 5 10 15

Glu Pro Cys Asp Leu Asp Ala Ala Leu Leu Thr Asp Ile Glu Asp Met

20 25 30

Leu Gln Leu Ile Asn Asn Gln Asp Ser Asp Phe Pro Gly Leu Phe Asp

35 40 45

Pro Pro Tyr Ala Gly Ser Gly Ala Gly Gly Thr Asp Pro Ala Ser Pro

50 55 60

Asp Thr Ser Ser Pro Gly Ser Leu Ser Pro Pro Pro Ala Thr Leu Ser

65 70 75 80

Ser Ser Leu Glu Ala Phe Leu Ser Gly Pro Gln Ala Ala Pro Ser Pro

85 90 95

Leu Ser Pro Pro Gln Pro Ala Pro Thr Pro Leu Lys Met Tyr Pro Ser

100 105 110

Met Pro Ala Phe Ser Pro Gly Pro Gly Ile Lys Glu Glu Ser Val Pro

115 120 125

Leu Ser Ile Leu Gln Thr Pro Thr Pro Gln Pro Leu Pro Gly Ala Leu

130 135 140

Leu Pro Gln Ser Phe Pro Ala Pro Ala Pro Pro Gln Phe Ser Ser Thr

145 150 155 160

Pro Val Leu Gly Tyr Pro Ser Pro Pro Gly Gly Phe Ser Thr Gly Ser

165 170 175

Pro Pro Gly Asn Thr Gln Gln Pro Leu Pro Gly Leu Pro Leu Ala Ser

180 185 190

Pro Pro Gly Val Pro Pro Val Ser Leu His Thr Gln Val Gln Ser Val

195 200 205

Val Pro Gln Gln Leu Leu Thr Val Thr Ala Ala Pro Thr Ala Ala Pro

210 215 220

Val Thr Thr Thr Val Thr Ser Gln Ile Gln Gln Val Pro Val Leu Leu

225 230 235 240

Gln Pro His Phe Ile Lys Ala Asp Ser Leu Leu Leu Thr Ala Met Lys

245 250 255

Thr Asp Gly Ala Thr Val Lys Ala Ala Gly Leu Ser Pro Leu Val Ser

260 265 270

Gly Thr Thr Val Gln Thr Gly Pro Leu Pro Thr Leu Val Ser Gly Gly

275 280 285

Thr Ile Leu Ala Thr Val Pro Leu Val Val Asp Ala Glu Lys Leu Pro

290 295 300

Ile Asn Arg Leu Ala Ala Gly Ser Lys Ala Pro Ala Ser Ala Gln Ser

305 310 315 320

Arg Gly Glu Lys Arg Thr Ala His Asn Ala Ile Glu Lys Arg Tyr Arg

325 330 335

Ser Ser Ile Asn Asp Lys Ile Ile Glu Leu Lys Asp Leu Val Val Gly

340 345 350

Thr Glu Ala Lys Leu Asn Lys Ser Ala Val Leu Arg Lys Ala Ile Asp

355 360 365

Tyr Ile Arg Phe Leu Gln His Ser Asn Gln Lys Leu Lys Gln Glu Asn

370 375 380

Leu Ser Leu Arg Thr Ala Val His Lys Ser Lys Ser Leu Lys Asp Leu

385 390 395 400

Val Ser Ala Cys Gly Ser Gly Gly Asn Thr Asp Val Leu Met Glu Gly

405 410 415

Val Lys Thr Glu Val Glu Asp Thr Leu Thr Pro Pro Pro Ser Asp Ala

420 425 430

Gly Ser Pro Phe Gln Ser Ser Pro Leu Ser Leu Gly Ser Arg Gly Ser

435 440 445

Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Asp Ser Glu Pro Asp Ser Pro Val Phe

450 455 460

Glu Asp Ser Lys Ala Lys Pro Glu Gln Arg Pro Ser Leu His Ser Arg

465 470 475 480

Gly Met Leu Asp Arg Ser Arg Leu Ala Leu Cys Thr Leu Val Phe Leu

485 490 495

Cys Leu Ser Cys Asn Pro Leu Ala Ser Leu Leu Gly Ala Arg Gly Leu

500 505 510

Pro Ser Pro Ser Asp Thr Thr Ser Val Tyr His Ser Pro Gly Arg Asn

515 520 525

Val Leu Gly Thr Glu Ser Arg Asp Gly Pro Gly Trp Ala Gln Trp Leu

530 535 540

Leu Pro Pro Val Val Trp Leu Leu Asn Gly Leu Leu Val Leu Val Ser

545 550 555 560

Leu Val Leu Leu Phe Val Tyr Gly Glu Pro Val Thr Arg Pro His Ser

565 570 575

Gly Pro Ala Val Tyr Phe Trp Arg His Arg Lys Gln Ala Asp Leu Asp

580 585 590

Leu Ala Arg Gly Asp Phe Ala Gln Ala Ala Gln Gln Leu Trp Leu Ala

595 600 605

Leu Arg Ala Leu Gly Arg Pro Leu Pro Thr Ser His Leu Asp Leu Ala

610 615 620

Cys Ser Leu Leu Trp Asn Leu Ile Arg His Leu Leu Gln Arg Leu Trp

625 630 635 640

Val Gly Arg Trp Leu Ala Gly Arg Ala Gly Gly Leu Gln Gln Asp Cys

645 650 655

Ala Leu Arg Val Asp Ala Ser Ala Ser Ala Arg Asp Ala Ala Leu Val

660 665 670

Tyr His Lys Leu His Gln Leu His Thr Met Gly Lys His Thr Gly Gly

675 680 685

His Leu Thr Ala Thr Asn Leu Ala Leu Ser Ala Leu Asn Leu Ala Glu

690 695 700

Cys Ala Gly Asp Ala Val Ser Val Ala Thr Leu Ala Glu Ile Tyr Val

705 710 715 720

Ala Ala Ala Leu Arg Val Lys Thr Ser Leu Pro Arg Ala Leu His Phe

725 730 735

Leu Thr Arg Phe Phe Leu Ser Ser Ala Arg Gln Ala Cys Leu Ala Gln

740 745 750

Ser Gly Ser Val Pro Pro Ala Met Gln Trp Leu Cys His Pro Val Gly

755 760 765

His Arg Phe Phe Val Asp Gly Asp Trp Ser Val Leu Ser Thr Pro Trp

770 775 780

Glu Ser Leu Tyr Ser Leu Ala Gly Asn Pro Val Asp Pro Leu Ala Gln

785 790 795 800

Val Thr Gln Leu Phe Arg Glu His Leu Leu Glu Arg Ala Leu Asn Cys

805 810 815

Val Thr Gln Pro Asn Pro Ser Pro Gly Ser Ala Asp Gly Asp Lys Glu

820 825 830

Phe Ser Asp Ala Leu Gly Tyr Leu Gln Leu Leu Asn Ser Cys Ser Asp

835 840 845

Ala Ala Gly Ala Pro Ala Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Ser Ser Met Ala

850 855 860

Thr Thr Thr Gly Val Asp Pro Val Ala Lys Trp Trp Ala Ser Leu Thr

865 870 875 880

Ala Val Val Ile His Trp Leu Arg Arg Asp Glu Glu Ala Ala Glu Arg

885 890 895

Leu Cys Pro Leu Val Glu His Leu Pro Arg Val Leu Gln Glu Ser Glu

900 905 910

Arg Pro Leu Pro Arg Ala Ala Leu His Ser Phe Lys Ala Ala Arg Ala

915 920 925

Leu Leu Gly Cys Ala Lys Ala Glu Ser Gly Pro Ala Ser Leu Thr Ile

930 935 940

Cys Glu Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Gln Asp Ser Leu Ala Thr Thr Pro

945 950 955 960

Ala Ser Ser Ser Ile Asp Lys Ala Val Gln Leu Phe Leu Cys Asp Leu

965 970 975

Leu Leu Val Val Arg Thr Ser Leu Trp Arg Gln Gln Gln Pro Pro Ala

980 985 990

Pro Ala Pro Ala Ala Gln Gly Thr Ser Ser Arg Pro Gln Ala Ser Ala

995 1000 1005

Leu Glu Leu Arg Gly Phe Gln Arg Asp Leu Ser Ser Leu Arg Arg

1010 1015 1020

Leu Ala Gln Ser Phe Arg Pro Ala Met Arg Arg Val Phe Leu His

1025 1030 1035

Glu Ala Thr Ala Arg Leu Met Ala Gly Ala Ser Pro Thr Arg Thr

1040 1045 1050

His Gln Leu Leu Asp Arg Ser Leu Arg Arg Arg Ala Gly Pro Gly

1055 1060 1065

Gly Lys Gly Gly Ala Val Ala Glu Leu Glu Pro Arg Pro Thr Arg

1070 1075 1080

Arg Glu His Ala Glu Ala Leu Leu Leu Ala Ser Cys Tyr Leu Pro

1085 1090 1095

Pro Gly Phe Leu Ser Ala Pro Gly Gln Arg Val Gly Met Leu Ala

1100 1105 1110

Glu Ala Ala Arg Thr Leu Glu Lys Leu Gly Asp Arg Arg Leu Leu

1115 1120 1125

His Asp Cys Gln Gln Met Leu Met Arg Leu Gly Gly Gly Thr Thr

1130 1135 1140

Val Thr Ser Ser

1145

<210> 68

<211> 3444

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“SREBP1”

<400> 68

atggacgagc cacccttcag cgaggcggct ttggagcagg cgctgggcga gccgtgcgat 60

ctggacgcgg cgctgctgac cgacatcgaa gacatgcttc agcttatcaa caaccaagac 120

agtgacttcc ctggcctatt tgacccaccc tatgctggga gtggggcagg gggcacagac 180

cctgccagcc ccgataccag ctccccaggc agcttgtctc cacctcctgc cacattgagc 240

tcctctcttg aagccttcct gagcgggccg caggcagcgc cctcacccct gtcccctccc 300

cagcctgcac ccactccatt gaagatgtac ccgtccatgc ccgctttctc ccctgggcct 360

ggtatcaagg aagagtcagt gccactgagc atcctgcaga cccccacccc acagcccctg 420

ccaggggccc tcctgccaca gagcttccca gccccagccc caccgcagtt cagctccacc 480

cctgtgttag gctaccccag ccctccggga ggcttctcta caggaagccc tcccgggaac 540

acccagcagc cgctgcctgg cctgccactg gcttccccgc caggggtccc gcccgtctcc 600

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acggcagccc ctgtaacgac cactgtgacc tcgcagatcc agcaggtccc ggtcctgctg 720

cagccccact tcatcaaggc agactcgctg cttctgacag ccatgaagac agacggagcc 780

actgtgaagg cggcaggtct cagtcccctg gtctctggca ccactgtgca gacagggcct 840

ttgccgaccc tggtgagtgg cggaaccatc ttggcaacag tcccactggt cgtagatgcg 900

gagaagctgc ctatcaaccg gctcgcagct ggcagcaagg ccccggcctc tgcccagagc 960

cgtggagaga agcgcacagc ccacaacgcc attgagaagc gctaccgctc ctccatcaat 1020

gacaaaatca ttgagctcaa ggatctggtg gtgggcactg aggcaaagct gaataaatct 1080

gctgtcttgc gcaaggccat cgactacatt cgctttctgc aacacagcaa ccagaaactc 1140

aagcaggaga acctaagtct gcgcactgct gtccacaaaa gcaaatctct gaaggatctg 1200

gtgtcggcct gtggcagtgg agggaacaca gacgtgctca tggagggcgt gaagactgag 1260

gtggaggaca cactgacccc acccccctcg gatgctggct cacctttcca gagcagcccc 1320

ttgtcccttg gcagcagggg cagtggcagc ggtggcagtg gcagtgactc ggagcctgac 1380

agcccagtct ttgaggacag caaggcaaag ccagagcagc ggccgtctct gcacagccgg 1440

ggcatgctgg accgctcccg cctggccctg tgcacgctcg tcttcctctg cctgtcctgc 1500

aaccccttgg cctccttgct gggggcccgg gggcttccca gcccctcaga taccaccagc 1560

gtctaccata gccctgggcg caacgtgctg ggcaccgaga gcagagatgg ccctggctgg 1620

gcccagtggc tgctgccccc agtggtctgg ctgctcaatg ggctgttggt gctcgtctcc 1680

ttggtgcttc tctttgtcta cggtgagcca gtcacacggc cccactcagg ccccgccgtg 1740

tacttctgga ggcatcgcaa gcaggctgac ctggacctgg cccggggaga ctttgcccag 1800

gctgcccagc agctgtggct ggccctgcgg gcactgggcc ggcccctgcc cacctcccac 1860

ctggacctgg cttgtagcct cctctggaac ctcatccgtc acctgctgca gcgtctctgg 1920

gtgggccgct ggctggcagg ccgggcaggg ggcctgcagc aggactgtgc tctgcgagtg 1980

gatgctagcg ccagcgcccg agacgcagcc ctggtctacc ataagctgca ccagctgcac 2040

accatgggga agcacacagg cgggcacctc actgccacca acctggcgct gagtgccctg 2100

aacctggcag agtgtgcagg ggatgccgtg tctgtggcga cgctggccga gatctatgtg 2160

gcggctgcat tgagagtgaa gaccagtctc ccacgggcct tgcattttct gacacgcttc 2220

ttcctgagca gtgcccgcca ggcctgcctg gcacagagtg gctcagtgcc tcctgccatg 2280

cagtggctct gccaccccgt gggccaccgt ttcttcgtgg atggggactg gtccgtgctc 2340

agtaccccat gggagagcct gtacagcttg gccgggaacc cagtggaccc cctggcccag 2400

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cagctgctga acagctgttc tgatgctgcg ggggctcctg cctacagctt ctccatcagt 2580

tccagcatgg ccaccaccac cggcgtagac ccggtggcca agtggtgggc ctctctgaca 2640

gctgtggtga tccactggct gcggcgggat gaggaggcgg ctgagcggct gtgcccgctg 2700

gtggagcacc tgccccgggt gctgcaggag tctgagagac ccctgcccag ggcagctctg 2760

cactccttca aggctgcccg ggccctgctg ggctgtgcca aggcagagtc tggtccagcc 2820

agcctgacca tctgtgagaa ggccagtggg tacctgcagg acagcctggc taccacacca 2880

gccagcagct ccattgacaa ggccgtgcag ctgttcctgt gtgacctgct tcttgtggtg 2940

cgcaccagcc tgtggcggca gcagcagccc ccggccccgg ccccagcagc ccagggcacc 3000

agcagcaggc cccaggcttc cgcccttgag ctgcgtggct tccaacggga cctgagcagc 3060

ctgaggcggc tggcacagag cttccggccc gccatgcgga gggtgttcct acatgaggcc 3120

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<212> PRT

<213> 智人

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<221> source

<223> /标注=“干扰素-γ”

<400> 69

Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn

1 5 10 15

Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

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Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln

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Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln

50 55 60

Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys

65 70 75 80

Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr

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Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

100 105 110

Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys

115 120 125

Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly

130 135

<210> 70

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<212> DNA

<213> 智人

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<221> source

<223> /标注=“干扰素-γ”

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caggacccat atgtaaaaga agcagaaaac cttaagaaat attttaatgc aggtcattca 60

gatgtagcgg ataatggaac tcttttctta ggcattttga agaattggaa agaggagagt 120

gacagaaaaa taatgcagag ccaaattgtc tccttttact tcaaactttt taaaaacttt 180

aaagatgacc agagcatcca aaagagtgtg gagaccatca aggaagacat gaatgtcaag 240

tttttcaata gcaacaaaaa gaaacgagat gacttcgaaa agctgactaa ttattcggta 300

actgacttga atgtccaacg caaagcaata catgaactca tccaagtgat ggctgaactg 360

tcgccagcag ctaaaacagg gaagcgaaaa aggagtcaga tgctgtttcg aggt 414

<210> 71

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<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“颗粒酶B”

<400> 71

Ile Ile Gly Gly His Glu Ala Lys Pro His Ser Arg Pro Tyr Met Ala

1 5 10 15

Tyr Leu Met Ile Trp Asp Gln Lys Ser Leu Lys Arg Cys Gly Gly Phe

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Leu Ile Arg Asp Asp Phe Val Leu Thr Ala Ala His Cys Trp Gly Ser

35 40 45

Ser Ile Asn Val Thr Leu Gly Ala His Asn Ile Lys Glu Gln Glu Pro

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Thr Gln Gln Phe Ile Pro Val Lys Arg Pro Ile Pro His Pro Ala Tyr

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Asn Pro Lys Asn Phe Ser Asn Asp Ile Met Leu Leu Gln Leu Glu Arg

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Lys Ala Lys Arg Thr Arg Ala Val Gln Pro Leu Arg Leu Pro Ser Asn

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Lys Ala Gln Val Lys Pro Gly Gln Thr Cys Ser Val Ala Gly Trp Gly

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Gln Thr Ala Pro Leu Gly Lys His Ser His Thr Leu Gln Glu Val Lys

130 135 140

Met Thr Val Gln Glu Asp Arg Lys Cys Glu Ser Asp Leu Arg His Tyr

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Tyr Asp Ser Thr Ile Glu Leu Cys Val Gly Asp Pro Glu Ile Lys Lys

165 170 175

Thr Ser Phe Lys Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Lys Val

180 185 190

Ala Gln Gly Ile Val Ser Tyr Gly Arg Asn Asn Gly Met Pro Pro Arg

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Ala Cys Thr Lys Val Ser Ser Phe Val His Trp Ile Lys Lys Thr Met

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Lys Arg Tyr

225

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<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“颗粒酶B”

<400> 72

atcatcgggg gacatgaggc caagccccac tcccgcccct acatggctta tcttatgatc 60

tgggatcaga agtctctgaa gaggtgcggt ggcttcctga tacgagacga cttcgtgctg 120

acagctgctc actgttgggg aagctccata aatgtcacct tgggggccca caatatcaaa 180

gaacaggagc cgacccagca gtttatccct gtgaaaagac ccatccccca tccagcctat 240

aatcctaaga acttctccaa cgacatcatg ctactgcagc tggagagaaa ggccaagcgg 300

accagagctg tgcagcccct caggctacct agcaacaagg cccaggtgaa gccagggcag 360

acatgcagtg tggccggctg ggggcagacg gcccccctgg gaaaacactc acacacacta 420

caagaggtga agatgacagt gcaggaagat cgaaagtgcg aatctgactt acgccattat 480

tacgacagta ccattgagtt gtgcgtgggg gacccagaga ttaaaaagac ttcctttaag 540

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cgaaacaatg gcatgcctcc acgagcctgc accaaagtct caagctttgt acactggata 660

aagaaaacca tgaaacgcta c 681

<210> 73

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<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“PD-1”

<400> 73

Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr

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Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe

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Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr

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Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu

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Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu

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Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn

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Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala

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Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

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Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly

130 135 140

Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser

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Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala

165 170 175

Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp

180 185 190

Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe

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Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu

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Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser

225 230 235 240

Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro

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Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

260 265

<210> 74

<211> 272

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“PD-L1”

<400> 74

Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser

1 5 10 15

Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu

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Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln

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Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg

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Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 85

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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln

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<213> 人工序列

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gacgctgcca cctactattg ccagcaatgg agcagcaacc ccttcacatt cggatctggc 300

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ggaagccaag ttcaactcca gcagagcggc gctgaactgg cccggcccgg cgcctccgtc 420

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cagaggcccg gtcaaggttt agagtggatc ggatatatca acccttcccg gggctacacc 540

aactataacc aaaagttcaa ggataaagcc actttaacca ctgacaagag ctcctccacc 600

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aagacaattc tggaatggga acccaagccc gtcaatcaag tttacaccgt gcagatctcc 840

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ttcacccctt atttagagac caatttaggc cagcctacca tccagagctt cgagcaagtt 1080

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tttttatccc tccgggatgt gttcggcaaa gacctcatct acacactgta ctattggaag 1200

tccagctcct ccggcaaaaa gaccgctaag accaacacca acgagttttt aattgacgtg 1260

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cggaagagca cagattcccc cgttgagtgc atgggccaag aaaagggcga gttccgggag 1380

gtccagctgc agcagagcgg acccgaactc gtgaaacccg gtgcttccgt gaaaatgtct 1440

tgtaaggcca gcggatacac cttcacctcc tatgtgatcc agtgggtcaa acagaagccc 1500

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gagaagttta agggaaaggc tactttaacc tccgacaaaa gctccatcac agcctacatg 1620

gagttcagct ctttaacatc cgaggacagc gctctgtact attgcgcccg gtggggcgac 1680

ggcaattact ggggacgggg cacaacactg accgtgagca gcggaggcgg aggctccggc 1740

ggaggcggat ctggcggtgg cggctccgac atcgagatga cccagtcccc cgctatcatg 1800

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accagcaatc tcgccagcgg cgtgccccct aggttttccg gaagcggaag caccagctac 1980

tctttaacca tctcctccat ggaggctgag gatgccgcca cctacttttg tcaccagtac 2040

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 87

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Tyr Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser

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Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile

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<210> 88

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”

<400> 88

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<210> 89

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 89

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<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 91

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<210> 92

<211> 2142

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多核苷酸”

<400> 92

atgaaatggg tcaccttcat ctctttactg tttttattta gcagcgccta cagcgtgcag 60

ctgcagcagt ccggacccga actggtcaag cccggtgcct ccgtgaaaat gtcttgtaag 120

gcttctggct acacctttac ctcctacgtc atccaatggg tgaagcagaa gcccggtcaa 180

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<212> PRT

<213> 智人

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<223> /标注=“组织因子”

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Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys

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Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val

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Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn

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Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

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Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

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Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg

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Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

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Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

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Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

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Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

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Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

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<212> DNA

<213> 智人

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<221> source

<223> /标注=“组织因子”

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aagtccggcg actggaagtc caaatgtttc tataccaccg acaccgagtg cgatctcacc 180

gatgagatcg tgaaagatgt gaaacagacc tacctcgccc gggtgtttag ctaccccgcc 240

ggcaatgtgg agagcactgg ttccgctggc gagcctttat acgagaacag ccccgaattt 300

accccttacc tcgagaccaa tttaggacag cccaccatcc aaagctttga gcaagttggc 360

acaaaggtga atgtgacagt ggaggacgag cggactttag tgcggcggaa caacaccttt 420

ctcagcctcc gggatgtgtt cggcaaagat ttaatctaca cactgtatta ctggaagtcc 480

tcttcctccg gcaagaagac agctaaaacc aacacaaacg agtttttaat cgacgtggat 540

aaaggcgaaa actactgttt cagcgtgcaa gctgtgatcc cctcccggac cgtgaatagg 600

aaaagcaccg atagccccgt tgagtgcatg ggccaagaaa agggcgagtt ccgggag 657

<210> 95

<211> 223

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

<400> 95

Ala Gly Ile Pro Glu Lys Ala Phe Asn Leu Thr Trp Ile Ser Thr Asp

1 5 10 15

Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Gln Pro Lys Pro Thr Asn Tyr Thr Tyr

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Thr Val Gln Ile Ser Asp Arg Ser Arg Asn Trp Lys Asn Lys Cys Phe

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Ser Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp

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Val Thr Trp Ala Tyr Glu Ala Lys Val Leu Ser Val Pro Arg Arg Asn

65 70 75 80

Ser Val His Gly Asp Gly Asp Gln Leu Val Ile His Gly Glu Glu Pro

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Pro Phe Thr Asn Ala Pro Lys Phe Leu Pro Tyr Arg Asp Thr Asn Leu

100 105 110

Gly Gln Pro Val Ile Gln Gln Phe Glu Gln Asp Gly Arg Lys Leu Asn

115 120 125

Val Val Val Lys Asp Ser Leu Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr Phe

130 135 140

Leu Thr Leu Arg Gln Val Phe Gly Lys Asp Leu Gly Tyr Ile Ile Thr

145 150 155 160

Tyr Arg Lys Gly Ser Ser Thr Gly Lys Lys Thr Asn Ile Thr Asn Thr

165 170 175

Asn Glu Phe Ser Ile Asp Val Glu Glu Gly Val Ser Tyr Cys Phe Phe

180 185 190

Val Gln Ala Met Ile Phe Ser Arg Lys Thr Asn Gln Asn Ser Pro Gly

195 200 205

Ser Ser Thr Val Cys Thr Glu Gln Trp Lys Ser Phe Leu Gly Glu

210 215 220

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<212> PRT

<213> 大鼠

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

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Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Gln Pro Lys Pro Thr Asn Tyr Thr

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Lys Val Thr Val Lys Asp Ser Phe Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr

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Thr Tyr Arg Lys Asp Ser Ser Thr Gly Arg Lys Thr Asn Thr Thr His

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Phe Ala Gln Ala Val Ile Phe Ser Arg Lys Thr Asn His Lys Ser Pro

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Glu Ser Ile Thr Lys Cys Thr Glu Gln Trp Lys Ser Val Leu Gly Glu

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<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

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Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

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Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

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Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys

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Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val

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Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

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Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn

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Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

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Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

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Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg

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Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

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Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

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Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

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Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

195 200 205

Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

210 215

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<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

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Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

1 5 10 15

Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

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Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Ala Lys Ser Lys

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Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val

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Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

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Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Ala Glu Asn

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Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

100 105 110

Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

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Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg

130 135 140

Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

145 150 155 160

Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

165 170 175

Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

180 185 190

Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

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Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

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<212> PRT

<213> 人工序列

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1

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 100

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 101

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 101

Gly Gly Ser Gly

1

<210> 102

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 102

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 103

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 104

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 105

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-3”

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Ala Pro Met Thr Gln Thr Thr Pro Leu Lys Thr Ser Trp Val Asn Cys

1 5 10 15

Ser Asn Met Ile Asp Glu Ile Ile Thr His Leu Lys Gln Pro Pro Leu

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Pro Leu Leu Asp Phe Asn Asn Leu Asn Gly Glu Asp Gln Asp Ile Leu

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Met Glu Asn Asn Leu Arg Arg Pro Asn Leu Glu Ala Phe Asn Arg Ala

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Ile His Ile Lys Asp Gly Asp Trp Asn Glu Phe Arg Arg Lys Leu Thr

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Ser Leu Ala Ile Phe

130

<210> 106

<211> 79

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-8”

<400> 106

Glu Gly Ala Val Leu Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys

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Ile Lys Thr Tyr Ser Lys Pro Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu

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Arg Val Ile Glu Ser Gly Pro His Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val

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Val Gln Arg Val Val Glu Lys Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser

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<211> 160

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-10”

<400> 107

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

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Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

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Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

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Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

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Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

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Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

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Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

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Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

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<210> 108

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

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<223> /标注=“IL-17”

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Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys

1 5 10 15

Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg Asn

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Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr

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Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser

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Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp

65 70 75 80

Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile

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Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu

100 105 110

Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile Val

115 120 125

His His Val Ala

130

<210> 109

<211> 157

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-18”

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Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

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Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

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Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

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Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

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Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp

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<210> 110

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<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“PDGF-DD”

<400> 110

Arg Asp Thr Ser Ala Thr Pro Gln Ser Ala Ser Ile Lys Ala Leu Arg

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Asn Ala Asn Leu Arg Arg Asp Glu Ser Asn His Leu Thr Asp Leu Tyr

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Arg Arg Asp Glu Thr Ile Gln Val Lys Gly Asn Gly Tyr Val Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Phe Pro Asn Ser Tyr Pro Arg Asn Leu Leu Leu Thr Trp Arg

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Leu His Ser Gln Glu Asn Thr Arg Ile Gln Leu Val Phe Asp Asn Gln

65 70 75 80

Phe Gly Leu Glu Glu Ala Glu Asn Asp Ile Cys Arg Tyr Asp Phe Val

85 90 95

Glu Val Glu Asp Ile Ser Glu Thr Ser Thr Ile Ile Arg Gly Arg Trp

100 105 110

Cys Gly His Lys Glu Val Pro Pro Arg Ile Lys Ser Arg Thr Asn Gln

115 120 125

Ile Lys Ile Thr Phe Lys Ser Asp Asp Tyr Phe Val Ala Lys Pro Gly

130 135 140

Phe Lys Ile Tyr Tyr Ser Leu Leu Glu Asp Phe Gln Pro Ala Ala Ala

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Ser Glu Thr Asn Trp Glu Ser Val Thr Ser Ser Ile Ser Gly Val Ser

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Asp Leu Asp Arg Leu Asn Asp Asp Ala Lys Arg Tyr Ser Cys Thr Pro

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Arg Asn Tyr Ser Val Asn Ile Arg Glu Glu Leu Lys Leu Ala Asn Val

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Val Phe Phe Pro Arg Cys Leu Leu Val Gln Arg Cys Gly Gly Asn Cys

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Gly Cys Gly Thr Val Asn Trp Arg Ser Cys Thr Cys Asn Ser Gly Lys

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Thr Val Lys Lys Tyr His Glu Val Leu Gln Phe Glu Pro Gly His Ile

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Lys Arg Arg Gly Arg Ala Lys Thr Met Ala Leu Val Asp Ile Gln Leu

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Asp His His Glu Arg Cys Asp Cys Ile Cys Ser Ser Arg Pro Pro Arg

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<210> 111

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<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“SCF”

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Glu Gly Ile Cys Arg Asn Arg Val Thr Asn Asn Val Lys Asp Val Thr

1 5 10 15

Lys Leu Val Ala Asn Leu Pro Lys Asp Tyr Met Ile Thr Leu Lys Tyr

20 25 30

Val Pro Gly Met Asp Val Leu Pro Ser His Cys Trp Ile Ser Glu Met

35 40 45

Val Val Gln Leu Ser Asp Ser Leu Thr Asp Leu Leu Asp Lys Phe Ser

50 55 60

Asn Ile Ser Glu Gly Leu Ser Asn Tyr Ser Ile Ile Asp Lys Leu Val

65 70 75 80

Asn Ile Val Asp Asp Leu Val Glu Cys Val Lys Glu Asn Ser Ser Lys

85 90 95

Asp Leu Lys Lys Ser Phe Lys Ser Pro Glu Pro Arg Leu Phe Thr Pro

100 105 110

Glu Glu Phe Phe Arg Ile Phe Asn Arg Ser Ile Asp Ala Phe Lys Asp

115 120 125

Phe Val Val Ala Ser Glu Thr Ser Asp Cys Val Val Ser Ser Thr Leu

130 135 140

Ser Pro Glu Lys Asp Ser Arg Val Ser Val Thr Lys Pro Phe Met Leu

145 150 155 160

Pro Pro Val Ala Ala Ser Ser Leu Arg Asn Asp Ser Ser Ser Ser Asn

165 170 175

Arg Lys Ala Lys Asn Pro Pro Gly Asp Ser Ser Leu His Trp Ala Ala

180 185 190

Met Ala Leu Pro Ala Leu Phe Ser Leu Ile Ile Gly Phe Ala Phe Gly

195 200 205

Ala Leu Tyr Trp Lys Lys Arg Gln Pro Ser Leu Thr Arg Ala Val Glu

210 215 220

Asn Ile Gln Ile Asn Glu Glu Asp Asn Glu Ile Ser Met Leu Gln Glu

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Lys Glu Arg Glu Phe Gln Glu Val

245

<210> 112

<211> 209

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“FLT3L”

<400> 112

Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His Ser Pro Ile Ser Ser Asp Phe Ala

1 5 10 15

Val Lys Ile Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val

20 25 30

Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp

35 40 45

Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala

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Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu Ile His

65 70 75 80

Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe

85 90 95

Val Gln Thr Asn Ile Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu

100 105 110

Val Ala Leu Lys Pro Trp Ile Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu

115 120 125

Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu Pro Pro Pro Trp Ser

130 135 140

Pro Arg Pro Leu Glu Ala Thr Ala Pro Thr Ala Pro Gln Pro Pro Leu

145 150 155 160

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Pro Val Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala

165 170 175

Trp Cys Leu His Trp Gln Arg Thr Arg Arg Arg Thr Pro Arg Pro Gly

180 185 190

Glu Gln Val Pro Pro Val Pro Ser Pro Gln Asp Leu Leu Leu Val Glu

195 200 205

His

<210> 113

<211> 65

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL15Rα”

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Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

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Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

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Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

35 40 45

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

50 55 60

Arg

65

<210> 114

<211> 195

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL15Rα”

<400> 114

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ctctacagcc gggagaggta tatctgtaac agcggcttca agaggaaggc cggcaccagc 120

agcctcaccg agtgcgtgct gaataaggct accaacgtgg ctcactggac aacaccctct 180

ttaaagtgca tccgg 195

<210> 115

<211> 114

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-15”

<400> 115

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

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Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 116

<211> 342

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-15”

<400> 116

aactgggtga acgtcatcag cgatttaaag aagatcgaag atttaattca gtccatgcat 60

atcgacgcca ctttatacac agaatccgac gtgcacccct cttgtaaggt gaccgccatg 120

aaatgttttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggagacgc tagcatccac 180

gacaccgtgg agaatttaat cattttagcc aataactctt tatccagcaa cggcaacgtg 240

acagagtccg gctgcaagga gtgcgaagag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300

caatcctttg tgcacattgt ccagatgttc atcaatacct cc 342

<210> 117

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 117

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser

<210> 118

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 118

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctcc 54

<210> 119

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 119

atgaagtggg tcacatttat ctctttactg ttcctcttct ccagcgccta cagc 54

<210> 120

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 120

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctcc 54

<210> 121

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 121

Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Leu Gly Val Asn Cys

1 5 10 15

<210> 122

<211> 58

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 122

Met Gly Gln Ile Val Thr Met Phe Glu Ala Leu Pro His Ile Ile Asp

1 5 10 15

Glu Val Ile Asn Ile Val Ile Ile Val Leu Ile Ile Ile Thr Ser Ile

20 25 30

Lys Ala Val Tyr Asn Phe Ala Thr Cys Gly Ile Leu Ala Leu Val Ser

35 40 45

Phe Leu Phe Leu Ala Gly Arg Ser Cys Gly

50 55

<210> 123

<211> 97

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 123

Met Pro Asn His Gln Ser Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ser Asp Leu Leu

1 5 10 15

Leu Ser Gly Lys Lys Gln Arg Pro His Leu Ala Leu Arg Arg Lys Arg

20 25 30

Arg Arg Glu Met Arg Lys Ile Asn Arg Lys Val Arg Arg Met Asn Leu

35 40 45

Ala Pro Ile Lys Glu Lys Thr Ala Trp Gln His Leu Gln Ala Leu Ile

50 55 60

Ser Glu Ala Glu Glu Val Leu Lys Thr Ser Gln Thr Pro Gln Asn Ser

65 70 75 80

Leu Thr Leu Phe Leu Ala Leu Leu Ser Val Leu Gly Pro Pro Val Thr

85 90 95

Gly

<210> 124

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 124

Met Asp Ser Lys Gly Ser Ser Gln Lys Gly Ser Arg Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Ser Asn Leu Leu Leu Cys Gln Gly Val Val Ser

20 25 30

<210> 125

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 125

Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Leu Gly Val Asn Cys

1 5 10 15

<210> 126

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 126

Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

1 5 10 15

<210> 127

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 127

Lys Arg Arg Trp Lys Lys Asn Phe Ile Ala Val Ser Ala Ala Asn Arg

1 5 10 15

Phe Lys Lys Ile Ser Ser Ser Gly Ala Leu

20 25

<210> 128

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 128

Glu Glu Glu Glu Glu Glu

1 5

<210> 129

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 129

Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu Glu Pro Arg

1 5 10

<210> 130

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 130

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 131

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 131

Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala

1 5

<210> 132

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 132

His His His His His

1 5

<210> 133

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 133

His His His His His His

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 134

His His His His His His His

1 5

<210> 135

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 135

His His His His His His His His

1 5

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<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 136

His His His His His His His His His

1 5

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<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 137

His His His His His His His His His His

1 5 10

<210> 138

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 138

Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 10

<210> 139

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 139

Thr Lys Glu Asn Pro Arg Ser Asn Gln Glu Glu Ser Tyr Asp Asp Asn

1 5 10 15

Glu Ser

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<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 140

Lys Glu Thr Ala Ala Ala Lys Phe Glu Arg Gln His Met Asp Ser

1 5 10 15

<210> 141

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 141

Met Asp Glu Lys Thr Thr Gly Trp Arg Gly Gly His Val Val Glu Gly

1 5 10 15

Leu Ala Gly Glu Leu Glu Gln Leu Arg Ala Arg Leu Glu His His Pro

20 25 30

Gln Gly Gln Arg Glu Pro

35

<210> 142

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 142

Ser Leu Ala Glu Leu Leu Asn Ala Gly Leu Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 143

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 143

Thr Gln Asp Pro Ser Arg Val Gly

1 5

<210> 144

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 144

Pro Asp Arg Val Arg Ala Val Ser His Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 145

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 145

Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys

1 5

<210> 146

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 146

Cys Cys Pro Gly Cys Cys

1 5

<210> 147

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-7s序列”

<400> 147

Glu Val His Thr Asn Gln Asp Pro Leu Asp

1 5 10

<210> 148

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 148

Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr

1 5 10

<210> 149

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 149

Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys

1 5 10

<210> 150

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 150

Asp Leu Tyr Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 151

<211> 241

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD3”

<400> 151

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln

115 120 125

Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys

130 135 140

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys

145 150 155 160

Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser

165 170 175

Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu

180 185 190

Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu

195 200 205

Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp

210 215 220

His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser

225 230 235 240

Ser

<210> 152

<211> 723

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD3”

<400> 152

cagatcgtgc tgacccaaag ccccgccatc atgagcgcta gccccggtga gaaggtgacc 60

atgacatgct ccgcttccag ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaaaagcgga 120

accagcccca aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg cctccggagt gcccgctcat 180

ttccggggct ctggatccgg caccagctac tctttaacca tttccggcat ggaagctgaa 240

gacgctgcca cctactattg ccagcaatgg agcagcaacc ccttcacatt cggatctggc 300

accaagctcg aaatcaatcg tggaggaggt ggcagcggcg gcggtggatc cggcggagga 360

ggaagccaag ttcaactcca gcagagcggc gctgaactgg cccggcccgg cgcctccgtc 420

aagatgagct gcaaggcttc cggctataca tttactcgtt acacaatgca ttgggtcaag 480

cagaggcccg gtcaaggttt agagtggatc ggatatatca acccttcccg gggctacacc 540

aactataacc aaaagttcaa ggataaagcc actttaacca ctgacaagag ctcctccacc 600

gcctacatgc agctgtcctc tttaaccagc gaggactccg ctgtttacta ctgcgctagg 660

tattacgacg accactactg tttagactat tggggacaag gtaccacttt aaccgtcagc 720

agc 723

<210> 153

<211> 236

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD28”

<400> 153

Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val

20 25 30

Ile Gln Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ser Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

50 55 60

Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met

65 70 75 80

Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Trp Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val

100 105 110

Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu

130 135 140

Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser

145 150 155 160

Ser Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu

165 170 175

Cys Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe

180 185 190

Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu

195 200 205

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro

210 215 220

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg

225 230 235

<210> 154

<211> 708

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD28”

<400> 154

gtccagctgc agcagagcgg acccgaactc gtgaaacccg gtgcttccgt gaaaatgtct 60

tgtaaggcca gcggatacac cttcacctcc tatgtgatcc agtgggtcaa acagaagccc 120

ggacaaggtc tcgagtggat cggcagcatc aacccttaca acgactatac caaatacaac 180

gagaagttta agggaaaggc tactttaacc tccgacaaaa gctccatcac agcctacatg 240

gagttcagct ctttaacatc cgaggacagc gctctgtact attgcgcccg gtggggcgac 300

ggcaattact ggggacgggg cacaacactg accgtgagca gcggaggcgg aggctccggc 360

ggaggcggat ctggcggtgg cggctccgac atcgagatga cccagtcccc cgctatcatg 420

tccgcctctt taggcgagcg ggtcacaatg acttgtacag cctcctccag cgtctcctcc 480

tcctacttcc attggtacca acagaaaccc ggaagctccc ctaaactgtg catctacagc 540

accagcaatc tcgccagcgg cgtgccccct aggttttccg gaagcggaag caccagctac 600

tctttaacca tctcctccat ggaggctgag gatgccgcca cctacttttg tcaccagtac 660

caccggtccc ccaccttcgg aggcggcacc aaactggaga caaagagg 708

<210> 155

<211> 696

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成3t28序列”

<400> 155

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln

115 120 125

Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys

130 135 140

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys

145 150 155 160

Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser

165 170 175

Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu

180 185 190

Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu

195 200 205

Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp

210 215 220

His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser

225 230 235 240

Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys

245 250 255

Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn

260 265 270

Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser

275 280 285

Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile

290 295 300

Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro

305 310 315 320

Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu

325 330 335

Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro

340 345 350

Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val

355 360 365

Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu

370 375 380

Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys

385 390 395 400

Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe

405 410 415

Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala

420 425 430

Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val

435 440 445

Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Val Gln Leu Gln

450 455 460

Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser

465 470 475 480

Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Ile Gln Trp Val

485 490 495

Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Asn Pro

500 505 510

Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr

515 520 525

Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala Tyr Met Glu Phe Ser Ser

530 535 540

Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Asp

545 550 555 560

Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly

565 570 575

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu

580 585 590

Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val

595 600 605

Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Phe His

610 615 620

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Cys Ile Tyr Ser

625 630 635 640

Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly

645 650 655

Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala

660 665 670

Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Thr Phe Gly Gly

675 680 685

Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg

690 695

<210> 156

<211> 2088

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成3t28序列”

<400> 156

cagatcgtgc tgacccaaag ccccgccatc atgagcgcta gccccggtga gaaggtgacc 60

atgacatgct ccgcttccag ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaaaagcgga 120

accagcccca aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg cctccggagt gcccgctcat 180

ttccggggct ctggatccgg caccagctac tctttaacca tttccggcat ggaagctgaa 240

gacgctgcca cctactattg ccagcaatgg agcagcaacc ccttcacatt cggatctggc 300

accaagctcg aaatcaatcg tggaggaggt ggcagcggcg gcggtggatc cggcggagga 360

ggaagccaag ttcaactcca gcagagcggc gctgaactgg cccggcccgg cgcctccgtc 420

aagatgagct gcaaggcttc cggctataca tttactcgtt acacaatgca ttgggtcaag 480

cagaggcccg gtcaaggttt agagtggatc ggatatatca acccttcccg gggctacacc 540

aactataacc aaaagttcaa ggataaagcc actttaacca ctgacaagag ctcctccacc 600

gcctacatgc agctgtcctc tttaaccagc gaggactccg ctgtttacta ctgcgctagg 660

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<210> 157

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成3t28序列”

<400> 157

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser

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Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser

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Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu

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100 105 110

Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly

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145 150 155 160

Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp

165 170 175

Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn

180 185 190

Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala

195 200 205

Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser

210 215 220

Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr

225 230 235 240

Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr

245 250 255

Val Ser Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr

260 265 270

Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro

275 280 285

Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp

290 295 300

Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp

305 310 315 320

Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser

325 330 335

Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu

340 345 350

Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly

355 360 365

Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val

370 375 380

Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu

385 390 395 400

Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr

405 410 415

Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn

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Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val

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Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser

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Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys

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Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile

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Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp

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Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

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<212> DNA

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<211> 399

<212> DNA

<213> 智人

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<223> /标注=“IL-2”

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<213> 人工序列

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<210> 162

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成2t2序列”

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Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu

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Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn

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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met

50 55 60

Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu

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Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe

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His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu

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Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu

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130 135 140

Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala

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Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp

165 170 175

Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys

180 185 190

Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys

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Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala

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Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu

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Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成2t2序列”

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acagaactga aacatcttca gtgtctagaa gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta 1320

aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta agacccaggg acttaatcag caatatcaac 1380

gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag 1440

acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga tggattacct tttgtcaaag catcatctca 1500

acactaact 1509

<210> 165

<211> 342

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-15”

<400> 165

aactgggtga acgtgatcag cgatttaaag aagatcgagg atttaatcca gagcatgcac 60

atcgacgcca ctctgtacac tgagagcgac gtgcacccta gctgcaaggt gactgccatg 120

aagtgctttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggcgatgc cagcatccac 180

gacactgtgg agaatttaat cattttagcc aacaactctt taagcagcaa cggcaacgtg 240

acagagagcg gctgcaagga gtgcgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagttttta 300

cagagcttcg tgcacatcgt gcagatgttc atcaacacta gc 342

<210> 166

<211> 342

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-15”

<400> 166

aactgggtga acgtcatcag cgatttaaag aagatcgaag atttaattca gtccatgcat 60

atcgacgcca ctttatacac agaatccgac gtgcacccct cttgtaaggt gaccgccatg 120

aaatgttttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggagacgc tagcatccac 180

gacaccgtgg agaatttaat cattttagcc aataactctt tatccagcaa cggcaacgtg 240

acagagtccg gctgcaagga gtgcgaagag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300

caatcctttg tgcacattgt ccagatgttc atcaatacct cc 342

<210> 167

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成15t15序列”

<400> 167

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp

115 120 125

Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val

130 135 140

Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys

145 150 155 160

Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu

165 170 175

Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr

180 185 190

Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr

195 200 205

Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln

210 215 220

Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr

225 230 235 240

Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser

245 250 255

Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp

260 265 270

Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu

275 280 285

Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln

290 295 300

Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro

305 310 315 320

Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val

325 330 335

Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met

340 345 350

His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys

355 360 365

Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser

370 375 380

Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile

385 390 395 400

Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser

405 410 415

Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe

420 425 430

Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

435 440 445

<210> 168

<211> 1341

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成15t15序列”

<400> 168

aactgggtga acgtgatcag cgatttaaag aagatcgagg atttaatcca gagcatgcac 60

atcgacgcca ctctgtacac tgagagcgac gtgcacccta gctgcaaggt gactgccatg 120

aagtgctttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggcgatgc cagcatccac 180

gacactgtgg agaatttaat cattttagcc aacaactctt taagcagcaa cggcaacgtg 240

acagagagcg gctgcaagga gtgcgaggag ctggaggaga agaacatcaa ggagttttta 300

cagagcttcg tgcacatcgt gcagatgttc atcaacacta gcagcggcac aaccaacaca 360

gtcgctgcct ataacctcac ttggaagagc accaacttca aaaccatcct cgaatgggaa 420

cccaaacccg ttaaccaagt ttacaccgtg cagatcagca ccaagtccgg cgactggaag 480

tccaaatgtt tctataccac cgacaccgag tgcgatctca ccgatgagat cgtgaaagat 540

gtgaaacaga cctacctcgc ccgggtgttt agctaccccg ccggcaatgt ggagagcact 600

ggttccgctg gcgagccttt atacgagaac agccccgaat ttacccctta cctcgagacc 660

aatttaggac agcccaccat ccaaagcttt gagcaagttg gcacaaaggt gaatgtgaca 720

gtggaggacg agcggacttt agtgcggcgg aacaacacct ttctcagcct ccgggatgtg 780

ttcggcaaag atttaatcta cacactgtat tactggaagt cctcttcctc cggcaagaag 840

acagctaaaa ccaacacaaa cgagttttta atcgacgtgg ataaaggcga aaactactgt 900

ttcagcgtgc aagctgtgat cccctcccgg accgtgaata ggaaaagcac cgatagcccc 960

gttgagtgca tgggccaaga aaagggcgag ttccgggaga actgggtgaa cgtcatcagc 1020

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caagttatct ctttagagag cggagacgct agcatccacg acaccgtgga gaatttaatc 1200

attttagcca ataactcttt atccagcaac ggcaacgtga cagagtccgg ctgcaaggag 1260

tgcgaagagc tggaggagaa gaacatcaag gagtttctgc aatcctttgt gcacattgtc 1320

cagatgttca tcaatacctc c 1341

<210> 169

<211> 465

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成15t15序列”

<400> 169

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp

20 25 30

Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp

35 40 45

Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu

50 55 60

Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr

65 70 75 80

Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly

85 90 95

Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys

100 105 110

Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe

115 120 125

Ile Asn Thr Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu

130 135 140

Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys

145 150 155 160

Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp

165 170 175

Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr

180 185 190

Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe

195 200 205

Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro

210 215 220

Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu

225 230 235 240

Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn

245 250 255

Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe

260 265 270

Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr

275 280 285

Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr

290 295 300

Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser

305 310 315 320

Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp

325 330 335

Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn

340 345 350

Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln

355 360 365

Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro

370 375 380

Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val

385 390 395 400

Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn

405 410 415

Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr

420 425 430

Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys

435 440 445

Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr

450 455 460

Ser

465

<210> 170

<211> 1395

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成15t15序列”

<400> 170

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccaactgg 60

gtgaacgtga tcagcgattt aaagaagatc gaggatttaa tccagagcat gcacatcgac 120

gccactctgt acactgagag cgacgtgcac cctagctgca aggtgactgc catgaagtgc 180

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gtggagaatt taatcatttt agccaacaac tctttaagca gcaacggcaa cgtgacagag 300

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ggacagccca ccatccaaag ctttgagcaa gttggcacaa aggtgaatgt gacagtggag 780

gacgagcgga ctttagtgcg gcggaacaac acctttctca gcctccggga tgtgttcggc 840

aaagatttaa tctacacact gtattactgg aagtcctctt cctccggcaa gaagacagct 900

aaaaccaaca caaacgagtt tttaatcgac gtggataaag gcgaaaacta ctgtttcagc 960

gtgcaagctg tgatcccctc ccggaccgtg aataggaaaa gcaccgatag ccccgttgag 1020

tgcatgggcc aagaaaaggg cgagttccgg gagaactggg tgaacgtcat cagcgattta 1080

aagaagatcg aagatttaat tcagtccatg catatcgacg ccactttata cacagaatcc 1140

gacgtgcacc cctcttgtaa ggtgaccgcc atgaaatgtt ttttactgga gctgcaagtt 1200

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gagctggagg agaagaacat caaggagttt ctgcaatcct ttgtgcacat tgtccagatg 1380

ttcatcaata cctcc 1395

<210> 171

<211> 471

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-18”

<400> 171

tacttcggca aactggaatc caagctgagc gtgatccgga atttaaacga ccaagttctg 60

tttatcgatc aaggtaaccg gcctctgttc gaggacatga ccgactccga ttgccgggac 120

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gctgtgacaa ttagcgtgaa gtgtgagaaa atcagcactt tatcttgtga gaacaagatc 240

atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300

ttcttccagc ggtccgtgcc cggtcacgat aacaagatgc agttcgaatc ctcctcctac 360

gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420

gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga t 471

<210> 172

<211> 918

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL12β”

<400> 172

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttcc 918

<210> 173

<211> 591

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-12α”

<400> 173

cgtaacctcc ccgtggctac ccccgatccc ggaatgttcc cttgtttaca ccacagccag 60

aatttactga gggccgtgag caacatgctg cagaaagcta ggcagacttt agaattttac 120

ccttgcacca gcgaggagat cgaccatgaa gatatcacca aggacaagac atccaccgtg 180

gaggcttgtt tacctctgga gctgacaaag aacgagtctt gtctcaactc tcgtgaaacc 240

agcttcatca caaatggctc ttgtttagct tcccggaaga cctcctttat gatggcttta 300

tgcctcagct ccatctacga ggatttaaag atgtaccaag tggagttcaa gaccatgaac 360

gccaagctgc tcatggaccc taaacggcag atctttttag accagaacat gctggctgtg 420

attgatgagc tgatgcaagc tttaaacttc aactccgaga ccgtccctca gaagtcctcc 480

ctcgaggagc ccgattttta caagacaaag atcaaactgt gcattttact ccacgccttt 540

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<210> 174

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 174

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

1 5 10 15

Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

20 25 30

Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

35 40 45

Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile

50 55 60

Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

85 90 95

Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys

100 105 110

Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu

130 135 140

Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser Gly Thr

145 150 155 160

Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe

165 170 175

Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr

180 185 190

Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr

195 200 205

Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val

210 215 220

Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val

225 230 235 240

Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu

245 250 255

Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser

260 265 270

Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg

275 280 285

Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe

290 295 300

Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser

305 310 315 320

Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val

325 330 335

Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser

340 345 350

Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly

355 360 365

Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp

370 375 380

Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr

385 390 395 400

Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met

405 410 415

Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp

420 425 430

Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn

435 440 445

Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys

450 455 460

Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val

465 470 475 480

His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

485 490

<210> 175

<211> 1470

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 175

tacttcggca aactggaatc caagctgagc gtgatccgga atttaaacga ccaagttctg 60

tttatcgatc aaggtaaccg gcctctgttc gaggacatga ccgactccga ttgccgggac 120

aatgcccccc ggaccatctt cattatctcc atgtacaagg acagccagcc ccggggcatg 180

gctgtgacaa ttagcgtgaa gtgtgagaaa atcagcactt tatcttgtga gaacaagatc 240

atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300

ttcttccagc ggtccgtgcc cggtcacgat aacaagatgc agttcgaatc ctcctcctac 360

gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420

gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga tagcggcaca 480

accaacacag tcgctgccta taacctcact tggaagagca ccaacttcaa aaccatcctc 540

gaatgggaac ccaaacccgt taaccaagtt tacaccgtgc agatcagcac caagtccggc 600

gactggaagt ccaaatgttt ctataccacc gacaccgagt gcgatctcac cgatgagatc 660

gtgaaagatg tgaaacagac ctacctcgcc cgggtgttta gctaccccgc cggcaatgtg 720

gagagcactg gttccgctgg cgagccttta tacgagaaca gccccgaatt taccccttac 780

ctcgagacca atttaggaca gcccaccatc caaagctttg agcaagttgg cacaaaggtg 840

aatgtgacag tggaggacga gcggacttta gtgcggcgga acaacacctt tctcagcctc 900

cgggatgtgt tcggcaaaga tttaatctac acactgtatt actggaagtc ctcttcctcc 960

ggcaagaaga cagctaaaac caacacaaac gagtttttaa tcgacgtgga taaaggcgaa 1020

aactactgtt tcagcgtgca agctgtgatc ccctcccgga ccgtgaatag gaaaagcacc 1080

gatagccccg ttgagtgcat gggccaagaa aagggcgagt tccgggagaa ctgggtgaac 1140

gtcatcagcg atttaaagaa gatcgaagat ttaattcagt ccatgcatat cgacgccact 1200

ttatacacag aatccgacgt gcacccctct tgtaaggtga ccgccatgaa atgtttttta 1260

ctggagctgc aagttatctc tttagagagc ggagacgcta gcatccacga caccgtggag 1320

aatttaatca ttttagccaa taactcttta tccagcaacg gcaacgtgac agagtccggc 1380

tgcaaggagt gcgaagagct ggaggagaag aacatcaagg agtttctgca atcctttgtg 1440

cacattgtcc agatgttcat caatacctcc 1470

<210> 176

<211> 508

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 176

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn

20 25 30

Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe

35 40 45

Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile

50 55 60

Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val

65 70 75 80

Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn

85 90 95

Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp

100 105 110

Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp

115 120 125

Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala

130 135 140

Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp

145 150 155 160

Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser

165 170 175

Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr

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Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val

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Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys

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Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly

245 250 255

Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser

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Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile

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Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp

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Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp

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Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser

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Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile

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Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile

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Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys

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Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile

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Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp

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Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr

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Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser

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Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala

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Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys

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Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser

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<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 177

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<400> 178

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

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Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

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Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

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Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

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Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

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Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

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Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

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Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

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Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

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Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

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Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

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Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

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<210> 179

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<212> DNA

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

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Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

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Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

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Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

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Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

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Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

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<212> PRT

<213> 智人

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<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

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<223> /标注=“TGFRβRII”

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cccaagctgc cctaccacga tttcatcctg gaagacgccg ccagccctaa gtgcatcatg 300

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<212> DNA

<213> 智人

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<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 187

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcacgatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

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tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga c 861

<210> 188

<211> 287

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 188

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

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Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp

275 280 285

<210> 189

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 189

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn

130 135 140

Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro

145 150 155 160

Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly

165 170 175

Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu

180 185 190

Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val

195 200 205

Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu

210 215 220

Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn

225 230 235 240

Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val

245 250 255

Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr

260 265 270

Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu

275 280 285

Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn

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Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe

305 310 315 320

Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr

325 330 335

Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

340 345 350

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

355 360 365

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

370 375 380

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

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Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

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Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

420 425 430

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

435 440 445

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

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Thr Ser

465

<210> 190

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 190

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aagcccgtca atcaagttta caccgtgcag atctccacca aatccggaga ctggaagagc 540

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<210> 191

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 191

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala

145 150 155 160

Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp

165 170 175

Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys

180 185 190

Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys

195 200 205

Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala

210 215 220

Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala

225 230 235 240

Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu

245 250 255

Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr

260 265 270

Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn

275 280 285

Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr

290 295 300

Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys

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Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr

325 330 335

Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys

340 345 350

Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe

355 360 365

Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp

370 375 380

Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp

385 390 395 400

Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu

405 410 415

Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr

420 425 430

Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly

435 440 445

Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys

450 455 460

Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe

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Ile Asn Thr Ser

<210> 192

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 192

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tataacctca catggaagag caccaacttc aagacaattc tggaatggga acccaagccc 540

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ttctacacaa cagacaccga gtgtgattta accgacgaaa tcgtcaagga cgtcaagcaa 660

acctatctgg ctcgggtctt ttcctacccc gctggcaatg tcgagtccac cggctccgct 720

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cagcctacca tccagagctt cgagcaagtt ggcaccaagg tgaacgtcac cgtcgaggat 840

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gacctcatct acacactgta ctattggaag tccagctcct ccggcaaaaa gaccgctaag 960

accaacacca acgagttttt aattgacgtg gacaaaggcg agaactactg cttcagcgtg 1020

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<210> 193

<211> 352

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 193

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

275 280 285

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

290 295 300

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

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Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

325 330 335

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340 345 350

<210> 194

<211> 1056

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 194

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcacgatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgcaca 600

atcacctcca tctgtgagaa gcctcaggag gtgtgcgtgg ctgtctggcg gaagaatgac 660

gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga catcacgtgt cctcctccta tgtccgtgga acacgcagac 900

atctgggtca agagctacag cttgtactcc agggagcggt acatttgtaa ctctggtttc 960

aagcgtaaag ccggcacgtc cagcctgacg gagtgcgtgt tgaacaaggc cacgaatgtc 1020

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<210> 195

<211> 370

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 195

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

305 310 315 320

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

325 330 335

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

340 345 350

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

355 360 365

Ile Arg

370

<210> 196

<211> 1110

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs21序列”

<400> 196

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcac gatcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

aagaagaagc ccggagagac cttctttatg tgttcctgta gcagcgacga gtgtaacgac 420

aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg cacaatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacatcac gtgtcctcct cctatgtccg tggaacacgc agacatctgg 960

gtcaagagct acagcttgta ctccagggag cggtacattt gtaactctgg tttcaagcgt 1020

aaagccggca cgtccagcct gacggagtgc gtgttgaaca aggccacgaa tgtcgcccac 1080

tggacaaccc ccagtctcaa atgtattaga 1110

<210> 197

<211> 399

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL21”

<400> 197

caaggtcaag atcgccacat gattagaatg cgtcaactta tagatattgt tgatcagctg 60

aaaaattatg tgaatgactt ggtccctgaa tttctgccag ctccagaaga tgtagagaca 120

aactgtgagt ggtcagcttt ttcctgtttt cagaaggccc aactaaagtc agcaaataca 180

ggaaacaatg aaaggataat caatgtatca attaaaaagc tgaagaggaa accaccttcc 240

acaaatgcag ggagaagaca gaaacacaga ctaacatgcc cttcatgtga ttcttatgag 300

aaaaaaccac ccaaagaatt cctagaaaga ttcaaatcac ttctccaaaa gatgattcat 360

cagcatctgt cctctagaac acacggaagt gaagattcc 399

<210> 198

<211> 456

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL7”

<400> 198

gattgtgata ttgaaggtaa agatggcaaa caatatgaga gtgttctaat ggtcagcatc 60

gatcaattat tggacagcat gaaagaaatt ggtagcaatt gcctgaataa tgaatttaac 120

ttttttaaaa gacatatctg tgatgctaat aaggaaggta tgtttttatt ccgtgctgct 180

cgcaagttga ggcaatttct taaaatgaat agcactggtg attttgatct ccacttatta 240

aaagtttcag aaggcacaac aatactgttg aactgcactg gccaggttaa aggaagaaaa 300

ccagctgccc tgggtgaagc ccaaccaaca aagagtttgg aagaaaataa atctttaaag 360

gaacagaaaa aactgaatga cttgtgtttc ctaaagagac tattacaaga gataaaaact 420

tgttggaata aaattttgat gggcactaaa gaacac 456

<210> 199

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 199

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn

130 135 140

Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro

145 150 155 160

Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly

165 170 175

Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu

180 185 190

Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val

195 200 205

Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu

210 215 220

Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn

225 230 235 240

Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val

245 250 255

Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr

260 265 270

Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu

275 280 285

Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn

290 295 300

Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe

305 310 315 320

Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr

325 330 335

Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

340 345 350

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

355 360 365

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

370 375 380

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

385 390 395 400

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

405 410 415

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

420 425 430

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

435 440 445

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

450 455 460

Thr Ser

465

<210> 200

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 200

caaggtcaag atcgccacat gattagaatg cgtcaactta tagatattgt tgatcagctg 60

aaaaattatg tgaatgactt ggtccctgaa tttctgccag ctccagaaga tgtagagaca 120

aactgtgagt ggtcagcttt ttcctgtttt cagaaggccc aactaaagtc agcaaataca 180

ggaaacaatg aaaggataat caatgtatca attaaaaagc tgaagaggaa accaccttcc 240

acaaatgcag ggagaagaca gaaacacaga ctaacatgcc cttcatgtga ttcttatgag 300

aaaaaaccac ccaaagaatt cctagaaaga ttcaaatcac ttctccaaaa gatgattcat 360

cagcatctgt cctctagaac acacggaagt gaagattcct caggcactac aaatactgtg 420

gcagcatata atttaacttg gaaatcaact aatttcaaga caattttgga gtgggaaccc 480

aaacccgtca atcaagtcta cactgttcaa ataagcacta agtcaggaga ttggaaaagc 540

aaatgctttt acacaacaga cacagagtgt gacctcaccg acgagattgt gaaggatgtg 600

aagcagacgt acttggcacg ggtcttctcc tacccggcag ggaatgtgga gagcaccggt 660

tctgctgggg agcctctgta tgagaactcc ccagagttca caccttacct ggagacaaac 720

ctcggacagc caacaattca gagttttgaa caggtgggaa caaaagtgaa tgtgaccgta 780

gaagatgaac ggactttagt cagaaggaac aacactttcc taagcctccg ggatgttttt 840

ggcaaggact taatttatac actttattat tggaaatctt caagttcagg aaagaaaaca 900

gccaaaacaa acactaatga gtttttgatt gatgtggata aaggagaaaa ctactgtttc 960

agtgttcaag cagtgattcc ctcccgaaca gttaaccgga agagtacaga cagcccggta 1020

gagtgtatgg gccaggagaa aggggaattc agagaaaact gggtgaacgt catcagcgat 1080

ttaaagaaga tcgaagattt aattcagtcc atgcatatcg acgccacttt atacacagaa 1140

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gttatctctt tagagagcgg agacgctagc atccacgaca ccgtggagaa tttaatcatt 1260

ttagccaata actctttatc cagcaacggc aacgtgacag agtccggctg caaggagtgc 1320

gaagagctgg aggagaagaa catcaaggag tttctgcaat cctttgtgca cattgtccag 1380

atgttcatca atacctcc 1398

<210> 201

<211> 483

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 201

Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu

1 5 10 15

Ala Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp

20 25 30

Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe

35 40 45

Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe

50 55 60

Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn

65 70 75 80

Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro

85 90 95

Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser

100 105 110

Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe

115 120 125

Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr

130 135 140

His Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr

145 150 155 160

Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu

165 170 175

Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser

180 185 190

Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp

195 200 205

Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg

210 215 220

Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly

225 230 235 240

Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr

245 250 255

Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys

260 265 270

Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn

275 280 285

Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr

290 295 300

Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr

305 310 315 320

Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys

325 330 335

Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser

340 345 350

Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg

355 360 365

Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu

370 375 380

Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val

385 390 395 400

His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu

405 410 415

Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val

420 425 430

Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn

435 440 445

Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn

450 455 460

Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile

465 470 475 480

Asn Thr Ser

<210> 202

<211> 1449

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 202

atgggagtga aagttctttt tgcccttatt tgtattgctg tggccgaggc ccaaggtcaa 60

gatcgccaca tgattagaat gcgtcaactt atagatattg ttgatcagct gaaaaattat 120

gtgaatgact tggtccctga atttctgcca gctccagaag atgtagagac aaactgtgag 180

tggtcagctt tttcctgttt tcagaaggcc caactaaagt cagcaaatac aggaaacaat 240

gaaaggataa tcaatgtatc aattaaaaag ctgaagagga aaccaccttc cacaaatgca 300

gggagaagac agaaacacag actaacatgc ccttcatgtg attcttatga gaaaaaacca 360

cccaaagaat tcctagaaag attcaaatca cttctccaaa agatgattca tcagcatctg 420

tcctctagaa cacacggaag tgaagattcc tcaggcacta caaatactgt ggcagcatat 480

aatttaactt ggaaatcaac taatttcaag acaattttgg agtgggaacc caaacccgtc 540

aatcaagtct acactgttca aataagcact aagtcaggag attggaaaag caaatgcttt 600

tacacaacag acacagagtg tgacctcacc gacgagattg tgaaggatgt gaagcagacg 660

tacttggcac gggtcttctc ctacccggca gggaatgtgg agagcaccgg ttctgctggg 720

gagcctctgt atgagaactc cccagagttc acaccttacc tggagacaaa cctcggacag 780

ccaacaattc agagttttga acaggtggga acaaaagtga atgtgaccgt agaagatgaa 840

cggactttag tcagaaggaa caacactttc ctaagcctcc gggatgtttt tggcaaggac 900

ttaatttata cactttatta ttggaaatct tcaagttcag gaaagaaaac agccaaaaca 960

aacactaatg agtttttgat tgatgtggat aaaggagaaa actactgttt cagtgttcaa 1020

gcagtgattc cctcccgaac agttaaccgg aagagtacag acagcccggt agagtgtatg 1080

ggccaggaga aaggggaatt cagagaaaac tgggtgaacg tcatcagcga tttaaagaag 1140

atcgaagatt taattcagtc catgcatatc gacgccactt tatacacaga atccgacgtg 1200

cacccctctt gtaaggtgac cgccatgaaa tgttttttac tggagctgca agttatctct 1260

ttagagagcg gagacgctag catccacgac accgtggaga atttaatcat tttagccaat 1320

aactctttat ccagcaacgg caacgtgaca gagtccggct gcaaggagtg cgaagagctg 1380

gaggagaaga acatcaagga gtttctgcaa tcctttgtgc acattgtcca gatgttcatc 1440

aatacctcc 1449

<210> 203

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 203

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

145 150 155 160

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

165 170 175

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

180 185 190

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

195 200 205

Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

210 215

<210> 204

<211> 651

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 204

gattgtgata ttgaaggtaa agatggcaaa caatatgaga gtgttctaat ggtcagcatc 60

gatcaattat tggacagcat gaaagaaatt ggtagcaatt gcctgaataa tgaatttaac 120

ttttttaaaa gacatatctg tgatgctaat aaggaaggta tgtttttatt ccgtgctgct 180

cgcaagttga ggcaatttct taaaatgaat agcactggtg attttgatct ccacttatta 240

aaagtttcag aaggcacaac aatactgttg aactgcactg gccaggttaa aggaagaaaa 300

ccagctgccc tgggtgaagc ccaaccaaca aagagtttgg aagaaaataa atctttaaag 360

gaacagaaaa aactgaatga cttgtgtttc ctaaagagac tattacaaga gataaaaact 420

tgttggaata aaattttgat gggcactaaa gaacacatca cgtgccctcc ccccatgtcc 480

gtggaacacg cagacatctg ggtcaagagc tacagcttgt actccaggga gcggtacatt 540

tgtaactctg gtttcaagcg taaagccggc acgtccagcc tgacggagtg cgtgttgaac 600

aaggccacga atgtcgccca ctggacaacc cccagtctca aatgcattag a 651

<210> 205

<211> 234

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 205

Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu

1 5 10 15

Ala Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val

20 25 30

Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly

35 40 45

Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys

50 55 60

Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu

65 70 75 80

Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu

85 90 95

Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln

100 105 110

Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys

115 120 125

Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp

130 135 140

Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn

145 150 155 160

Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met

165 170 175

Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser

180 185 190

Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr

195 200 205

Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His

210 215 220

Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

225 230

<210> 206

<211> 702

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 206

atgggagtga aagttctttt tgcccttatt tgtattgctg tggccgaggc cgattgtgat 60

attgaaggta aagatggcaa acaatatgag agtgttctaa tggtcagcat cgatcaatta 120

ttggacagca tgaaagaaat tggtagcaat tgcctgaata atgaatttaa cttttttaaa 180

agacatatct gtgatgctaa taaggaaggt atgtttttat tccgtgctgc tcgcaagttg 240

aggcaatttc ttaaaatgaa tagcactggt gattttgatc tccacttatt aaaagtttca 300

gaaggcacaa caatactgtt gaactgcact ggccaggtta aaggaagaaa accagctgcc 360

ctgggtgaag cccaaccaac aaagagtttg gaagaaaata aatctttaaa ggaacagaaa 420

aaactgaatg acttgtgttt cctaaagaga ctattacaag agataaaaac ttgttggaat 480

aaaattttga tgggcactaa agaacacatc acgtgccctc cccccatgtc cgtggaacac 540

gcagacatct gggtcaagag ctacagcttg tactccaggg agcggtacat ttgtaactct 600

ggtttcaagc gtaaagccgg cacgtccagc ctgacggagt gcgtgttgaa caaggccacg 660

aatgtcgccc actggacaac ccccagtctc aaatgcatta ga 702

<210> 207

<211> 485

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 207

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala

145 150 155 160

Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu

165 170 175

Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr

180 185 190

Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu

195 200 205

Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu

210 215 220

Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser

225 230 235 240

Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu

245 250 255

Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly

260 265 270

Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg

275 280 285

Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile

290 295 300

Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala

305 310 315 320

Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn

325 330 335

Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg

340 345 350

Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu

355 360 365

Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu

370 375 380

Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser

385 390 395 400

Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu

405 410 415

Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp

420 425 430

Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn

435 440 445

Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu

450 455 460

Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met

465 470 475 480

Phe Ile Asn Thr Ser

485

<210> 208

<211> 1455

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 208

gattgcgaca tcgagggcaa ggacggcaag cagtacgaga gcgtgctgat ggtgtccatc 60

gaccagctgc tggacagcat gaaggagatc ggctccaact gcctcaacaa cgagttcaac 120

ttcttcaagc ggcacatctg cgacgccaac aaggagggca tgttcctgtt cagggccgcc 180

aggaaactgc ggcagttcct gaagatgaac tccaccggcg acttcgacct gcacctgctg 240

aaggtgtccg agggcaccac catcctgctg aactgcaccg gacaggtgaa gggccggaaa 300

cctgctgctc tgggagaggc ccaacccacc aagagcctgg aggagaacaa gtccctgaag 360

gagcagaaga agctgaacga cctgtgcttc ctgaagaggc tgctgcagga gatcaagacc 420

tgctggaaca agatcctgat gggcaccaag gagcatagcg gcacaaccaa cacagtcgct 480

gcctataacc tcacttggaa gagcaccaac ttcaaaacca tcctcgaatg ggaacccaaa 540

cccgttaacc aagtttacac cgtgcagatc agcaccaagt ccggcgactg gaagtccaaa 600

tgtttctata ccaccgacac cgagtgcgat ctcaccgatg agatcgtgaa agatgtgaaa 660

cagacctacc tcgcccgggt gtttagctac cccgccggca atgtggagag cactggttcc 720

gctggcgagc ctttatacga gaacagcccc gaatttaccc cttacctcga gaccaattta 780

ggacagccca ccatccaaag ctttgagcaa gttggcacaa aggtgaatgt gacagtggag 840

gacgagcgga ctttagtgcg gcggaacaac acctttctca gcctccggga tgtgttcggc 900

aaagatttaa tctacacact gtattactgg aagtcctctt cctccggcaa gaagacagct 960

aaaaccaaca caaacgagtt tttaatcgac gtggataaag gcgaaaacta ctgtttcagc 1020

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ttcatcaata cctcc 1455

<210> 209

<211> 503

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 209

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser

20 25 30

Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile

35 40 45

Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile

50 55 60

Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys

65 70 75 80

Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His

85 90 95

Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly

100 105 110

Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr

115 120 125

Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn

130 135 140

Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp

145 150 155 160

Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr

165 170 175

Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile

180 185 190

Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile

195 200 205

Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp

210 215 220

Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr

225 230 235 240

Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr

245 250 255

Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro

260 265 270

Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln

275 280 285

Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val

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Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp

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Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys

325 330 335

Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly

340 345 350

Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val

355 360 365

Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys

370 375 380

Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys

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Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr

405 410 415

Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe

420 425 430

Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile

435 440 445

His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser

450 455 460

Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu

465 470 475 480

Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val

485 490 495

Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

500

<210> 210

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 210

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccgattgc 60

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cggactttag tgcggcggaa caacaccttt ctcagcctcc gggatgtgtt cggcaaagat 960

ttaatctaca cactgtatta ctggaagtcc tcttcctccg gcaagaagac agctaaaacc 1020

aacacaaacg agtttttaat cgacgtggat aaaggcgaaa actactgttt cagcgtgcaa 1080

gctgtgatcc cctcccggac cgtgaatagg aaaagcaccg atagccccgt tgagtgcatg 1140

ggccaagaaa agggcgagtt ccgggagaac tgggtgaacg tcatcagcga tttaaagaag 1200

atcgaagatt taattcagtc catgcatatc gacgccactt tatacacaga atccgacgtg 1260

cacccctctt gtaaggtgac cgccatgaaa tgttttttac tggagctgca agttatctct 1320

ttagagagcg gagacgctag catccacgac accgtggaga atttaatcat tttagccaat 1380

aactctttat ccagcaacgg caacgtgaca gagtccggct gcaaggagtg cgaagagctg 1440

gaggagaaga acatcaagga gtttctgcaa tcctttgtgc acattgtcca gatgttcatc 1500

aatacctcc 1509

<210> 211

<211> 198

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 211

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

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Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

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Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

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Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

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Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His

130 135 140

Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr

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Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr

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Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro

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Ser Leu Lys Cys Ile Arg

195

<210> 212

<211> 594

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 212

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt cagaaggccc agctgaagtc cgccaacacc 180

ggcaacaacg agcggatcat caacgtgagc atcaagaagc tgaagcggaa gcctccctcc 240

acaaacgccg gcaggaggca gaagcacagg ctgacctgcc ccagctgtga ctcctacgag 300

aagaagcccc ccaaggagtt cctggagagg ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat 360

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<210> 213

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 213

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val

145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

195 200 205

Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

210 215

<210> 214

<211> 648

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 214

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

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gagtggtccg ccttctcctg ctttcagaag gcccagctga agtccgccaa caccggcaac 240

aacgagcgga tcatcaacgt gagcatcaag aagctgaagc ggaagcctcc ctccacaaac 300

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<210> 215

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<212> PRT

<213> 智人

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<223> /标注=“CD16”

<400> 215

Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr

1 5 10 15

Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

20 25 30

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

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Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

50 55 60

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val

85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His

100 105

<210> 216

<211> 324

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD16”

<400> 216

tccgagctga cccaggaccc tgctgtgtcc gtggctctgg gccagaccgt gaggatcacc 60

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<210> 217

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD16”

<400> 217

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Arg

115

<210> 218

<211> 351

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD16”

<400> 218

gaggtgcagc tggtggagtc cggaggagga gtggtgaggc ctggaggctc cctgaggctg 60

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cctggaaagg gcctggagtg ggtgtccggc atcaactgga acggcggatc caccggctac 180

gccgattccg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa ctccctgtac 240

ctgcagatga actccctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caggggcagg 300

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<400> 219

000

<210> 220

<400> 220

000

<210> 221

<400> 221

000

<210> 222

<400> 222

000

<210> 223

<211> 823

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 223

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

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Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu

515 520 525

His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg

530 535 540

Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu

545 550 555 560

Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr

565 570 575

Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val

580 585 590

Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser

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Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

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Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro

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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile

645 650 655

Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg

660 665 670

Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

675 680 685

Val Gly His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

690 695 700

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro

705 710 715 720

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp

725 730 735

Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

740 745 750

Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp

755 760 765

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

770 775 780

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

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805 810 815

Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

820

<210> 224

<211> 2469

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 224

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttccgg cggtggagga tccggaggag gtggctccgg cggcggagga 960

tctcgtaacc tccccgtggc tacccccgat cccggaatgt tcccttgttt acaccacagc 1020

cagaatttac tgagggccgt gagcaacatg ctgcagaaag ctaggcagac tttagaattt 1080

tacccttgca ccagcgagga gatcgaccat gaagatatca ccaaggacaa gacatccacc 1140

gtggaggctt gtttacctct ggagctgaca aagaacgagt cttgtctcaa ctctcgtgaa 1200

accagcttca tcacaaatgg ctcttgttta gcttcccgga agacctcctt tatgatggct 1260

ttatgcctca gctccatcta cgaggattta aagatgtacc aagtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctcatgga ccctaaacgg cagatctttt tagaccagaa catgctggct 1380

gtgattgatg agctgatgca agctttaaac ttcaactccg agaccgtccc tcagaagtcc 1440

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gtgtccagg 2469

<210> 225

<211> 841

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 225

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

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Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

35 40 45

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp

65 70 75 80

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

100 105 110

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

115 120 125

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

130 135 140

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

210 215 220

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

245 250 255

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

260 265 270

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

275 280 285

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

290 295 300

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

305 310 315 320

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

325 330 335

Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

340 345 350

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

355 360 365

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

370 375 380

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

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Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

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Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

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Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln

485 490 495

Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu

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Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg

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Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

530 535 540

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

545 550 555 560

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

565 570 575

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

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Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro

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Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

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Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly

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675 680 685

Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys

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Leu Thr Val Gly His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

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Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val

725 730 735

Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr

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Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

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Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr

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Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 226

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aagctgctca tggaccctaa acggcagatc tttttagacc agaacatgct ggctgtgatt 1440

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gaggagcccg atttttacaa gacaaagatc aaactgtgca ttttactcca cgcctttagg 1560

atccgggccg tgaccattga ccgggtcatg agctatttaa acgccagcat tacatgcccc 1620

cctcccatga gcgtggagca cgccgacatc tgggtgaaga gctatagcct ctacagccgg 1680

gagaggtata tctgtaacag cggcttcaag aggaaggccg gcaccagcag cctcaccgag 1740

tgcgtgctga ataaggctac caacgtggct cactggacaa caccctcttt aaagtgcatc 1800

cggtccgagc tgacccagga ccctgctgtg tccgtggctc tgggccagac cgtgaggatc 1860

acctgccagg gcgactccct gaggtcctac tacgcctcct ggtaccagca gaagcccggc 1920

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tccctgaggc tgagctgtgc tgcctccggc ttcaccttcg acgactacgg catgtcctgg 2280

gtgaggcagg ctcctggaaa gggcctggag tgggtgtccg gcatcaactg gaacggcgga 2340

tccaccggct acgccgattc cgtgaagggc aggttcacca tcagcaggga caacgccaag 2400

aactccctgt acctgcagat gaactccctg agggccgagg acaccgccgt gtactactgc 2460

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agg 2523

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<211> 456

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL7”

<400> 227

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<400> 228

000

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<400> 229

000

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<400> 230

000

<210> 231

<400> 231

000

<210> 232

<211> 438

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe

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Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe

340 345 350

Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn

355 360 365

Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro

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Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser

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Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe

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Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr

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His Gly Ser Glu Asp Ser

435

<210> 233

<211> 1314

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 233

tccgagctga cccaggaccc tgctgtgtcc gtggctctgg gccagaccgt gaggatcacc 60

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ctctacagcc gggagaggta tatctgtaac agcggcttca agaggaaggc cggcaccagc 840

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gaggacgtgg agaccaactg cgagtggtcc gccttctcct gctttcagaa ggcccagctg 1080

aagtccgcca acaccggcaa caacgagcgg atcatcaacg tgagcatcaa gaagctgaag 1140

cggaagcctc cctccacaaa cgccggcagg aggcagaagc acaggctgac ctgccccagc 1200

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cagaagatga tccatcagca cctgtcctcc aggacccacg gctccgagga ctcc 1314

<210> 234

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 234

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly

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Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr

35 40 45

Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile

50 55 60

Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

65 70 75 80

Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala

85 90 95

Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn

100 105 110

His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

130 135 140

Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser

165 170 175

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile

180 185 190

Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

195 200 205

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met

210 215 220

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly

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Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

245 250 255

Ser Arg Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile

260 265 270

Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn

275 280 285

Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val

290 295 300

Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys

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Cys Ile Arg Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu

325 330 335

Ile Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro

340 345 350

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355 360 365

Ala Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly

370 375 380

Asn Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys

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Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys

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Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu

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Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser

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Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

450 455

<210> 235

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 235

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcctccgag 60

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gactactact gcaactccag ggactcctcc ggcaaccatg tggtgttcgg cggcggcacc 360

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tccgaggtgc agctggtgga gtccggagga ggagtggtga ggcctggagg ctccctgagg 480

ctgagctgtg ctgcctccgg cttcaccttc gacgactacg gcatgtcctg ggtgaggcag 540

gctcctggaa agggcctgga gtgggtgtcc ggcatcaact ggaacggcgg atccaccggc 600

tacgccgatt ccgtgaaggg caggttcacc atcagcaggg acaacgccaa gaactccctg 660

tacctgcaga tgaactccct gagggccgag gacaccgccg tgtactactg cgccaggggc 720

aggtccctgc tgttcgacta ctggggacag ggcaccctgg tgaccgtgtc caggattaca 780

tgcccccctc ccatgagcgt ggagcacgcc gacatctggg tgaagagcta tagcctctac 840

agccgggaga ggtatatctg taacagcggc ttcaagagga aggccggcac cagcagcctc 900

accgagtgcg tgctgaataa ggctaccaac gtggctcact ggacaacacc ctctttaaag 960

tgcatccggc agggccagga caggcacatg atccggatga ggcagctcat cgacatcgtc 1020

gaccagctga agaactacgt gaacgacctg gtgcccgagt ttctgcctgc ccccgaggac 1080

gtggagacca actgcgagtg gtccgccttc tcctgctttc agaaggccca gctgaagtcc 1140

gccaacaccg gcaacaacga gcggatcatc aacgtgagca tcaagaagct gaagcggaag 1200

cctccctcca caaacgccgg caggaggcag aagcacaggc tgacctgccc cagctgtgac 1260

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atgatccatc agcacctgtc ctccaggacc cacggctccg aggactcc 1368

<210> 236

<211> 620

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-16s21序列”

<400> 236

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ser

275 280 285

Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr

290 295 300

Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val

305 310 315 320

Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys

325 330 335

Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys

340 345 350

Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly

355 360 365

Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser

370 375 380

Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile

385 390 395 400

Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp

405 410 415

Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp

420 425 430

Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser

435 440 445

Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile

450 455 460

Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile

465 470 475 480

Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys

485 490 495

Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile

500 505 510

Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp

515 520 525

Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr

530 535 540

Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser

545 550 555 560

Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala

565 570 575

Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys

580 585 590

Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser

595 600 605

Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

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<210> 237

<211> 1860

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-16s21序列”

<400> 237

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

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<210> 238

<211> 638

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-16s21序列”

<400> 238

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys

305 310 315 320

Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn

325 330 335

Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser

340 345 350

Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile

355 360 365

Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro

370 375 380

Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu

385 390 395 400

Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro

405 410 415

Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val

420 425 430

Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu

435 440 445

Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys

450 455 460

Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe

465 470 475 480

Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala

485 490 495

Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val

500 505 510

Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn

515 520 525

Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His

530 535 540

Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys

545 550 555 560

Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu

565 570 575

Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile

580 585 590

Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly

595 600 605

Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu

610 615 620

Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

625 630 635

<210> 239

<211> 1914

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-16s21序列”

<400> 239

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000

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<400> 249

000

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 250

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser

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Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile

35 40 45

Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile

50 55 60

Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys

65 70 75 80

Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His

85 90 95

Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly

100 105 110

Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr

115 120 125

Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn

130 135 140

Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp

145 150 155 160

Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ile Thr Cys Pro Pro Pro

165 170 175

Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr

180 185 190

Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly

195 200 205

Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala

210 215 220

His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

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<210> 251

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-7s序列”

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<400> 255

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs序列”

<400> 257

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcagcatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgctcc 600

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<210> 259

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs序列”

<400> 259

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcag catcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

aagaagaagc ccggagagac cttctttatg tgttcctgta gcagcgacga gtgtaacgac 420

aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg ctccatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacattac atgcccccct cccatgagcg tggagcacgc cgacatctgg 960

gtgaagagct atagcctcta cagccgggag aggtatatct gtaacagcgg cttcaagagg 1020

aaggccggca ccagcagcct caccgagtgc gtgctgaata aggctaccaa cgtggctcac 1080

tggacaacac cctctttaaa gtgcatccgg 1110

<210> 260

<211> 184

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“CD137”

<400> 260

Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp

1 5 10 15

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Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg

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Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His

85 90 95

Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr

100 105 110

Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly

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Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val

130 135 140

His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln

145 150 155 160

Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala

165 170 175

Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

180

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<213> 智人

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<212> PRT

<213> 智人

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<223> /标注=“CD137”

<400> 262

Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu

1 5 10 15

Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser

20 25 30

Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys

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Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val

50 55 60

Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly

65 70 75 80

Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly

85 90 95

Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu

100 105 110

Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser

115 120 125

Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg

130 135 140

His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg

145 150 155 160

Val Thr Pro Glu Ile

165

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<211> 495

<212> DNA

<213> 智人

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<223> /标注=“CD137”

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000

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<400> 268

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

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Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

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Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His

130 135 140

Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr

145 150 155 160

Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr

165 170 175

Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro

180 185 190

Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

195 200 205

Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro

210 215 220

Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala

225 230 235 240

Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro

245 250 255

Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp

260 265 270

Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe

275 280 285

Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val

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Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala

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Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg

325 330 335

Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly

340 345 350

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355 360 365

Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr

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Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

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<211> 1191

<212> DNA

<213> 人工序列

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<400> 269

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Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

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Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val

145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

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Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp

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Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu

245 250 255

Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser

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Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys

275 280 285

Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val

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Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly

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Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly

325 330 335

Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu

340 345 350

Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser

355 360 365

Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg

370 375 380

His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg

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Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

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<210> 271

<211> 1245

<212> DNA

<213> 人工序列

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<400> 271

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<210> 272

<211> 378

<212> PRT

<213> 人工序列

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<400> 272

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

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Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

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Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

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Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

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Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

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Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

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Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

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Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His

130 135 140

Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr

145 150 155 160

Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr

165 170 175

Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro

180 185 190

Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

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Gly Gly Gly Gly Ser Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly

210 215 220

Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro

225 230 235 240

Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly

245 250 255

Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala

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Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala

275 280 285

Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu

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Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro

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Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg

325 330 335

Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr

340 345 350

Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val

355 360 365

Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile

370 375

<210> 273

<211> 1134

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21CD137序列”

<400> 273

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

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agcgtggagc acgccgacat ctgggtgaag agctatagcc tctacagccg ggagaggtat 480

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aataaggcta ccaacgtggc tcactggaca acaccctctt taaagtgcat ccggggcggt 600

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ctgcggcagg gcatgtttgc gcagctggtg gcccaaaatg ttctgctgat cgatgggccc 720

ctgagctggt acagtgaccc aggcctggca ggcgtgtccc tgacgggggg cctgagctac 780

aaagaggaca cgaaggagct ggtggtggcc aaggctggag tctactatgt cttctttcaa 840

ctagagctgc ggcgcgtggt ggccggcgag ggctcaggct ccgtttcact tgcgctgcac 900

ctgcagccac tgcgctctgc tgctggggcc gccgccctgg ctttgaccgt ggacctgcca 960

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<210> 274

<211> 396

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21CD137序列”

<400> 274

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

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Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

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Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

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Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

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Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

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145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

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Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

210 215 220

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg

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Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp

245 250 255

Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu

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Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala

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Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln

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325 330 335

Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln

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Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu

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370 375 380

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<210> 275

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<212> DNA

<213> 人工序列

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ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tccattacat gcccccctcc catgagcgtg 480

gagcacgccg acatctgggt gaagagctat agcctctaca gccgggagag gtatatctgt 540

aacagcggct tcaagaggaa ggccggcacc agcagcctca ccgagtgcgt gctgaataag 600

gctaccaacg tggctcactg gacaacaccc tctttaaagt gcatccgggg cggtggagga 660

tccggaggag gtggctccgg cggcggagga tctgatcccg ccggcctctt ggacctgcgg 720

cagggcatgt ttgcgcagct ggtggcccaa aatgttctgc tgatcgatgg gcccctgagc 780

tggtacagtg acccaggcct ggcaggcgtg tccctgacgg ggggcctgag ctacaaagag 840

gacacgaagg agctggtggt ggccaaggct ggagtctact atgtcttctt tcaactagag 900

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ccactgcgct ctgctgctgg ggccgccgcc ctggctttga ccgtggacct gccacccgcc 1020

tcctccgagg ctcggaactc ggccttcggt ttccagggcc gcttgctgca cctgagtgcc 1080

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs21序列”

<400> 300

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

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Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

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Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

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Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

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Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

275 280 285

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

290 295 300

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

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Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

325 330 335

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

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Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

355 360 365

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

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Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

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Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

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Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

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Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

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Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

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Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

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Gly Ser Glu Asp Ser

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<210> 301

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<212> DNA

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<210> 302

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 302

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

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Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

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Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

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His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

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Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

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Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

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Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

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Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

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Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

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Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

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Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

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Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

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Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

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Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

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Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

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Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

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Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

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Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

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Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

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Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

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Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<400> 303

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<400> 305

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs16序列”

<400> 308

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

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Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

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Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

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Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

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Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

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Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

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Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

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Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

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Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

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Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

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Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

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Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

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Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

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Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

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Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

405 410 415

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

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Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val

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Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser

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Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val

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<210> 309

<211> 1776

<212> DNA

<213> 人工序列

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<400> 309

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

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aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<400> 310

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

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Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

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Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

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Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

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Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr

385 390 395 400

Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile

405 410 415

Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

420 425 430

Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala

435 440 445

Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn

450 455 460

His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly

465 470 475 480

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

485 490 495

Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg

500 505 510

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser

515 520 525

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile

530 535 540

Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

545 550 555 560

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met

565 570 575

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly

580 585 590

Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

595 600 605

Ser Arg

610

<210> 311

<211> 1830

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs16序列”

<400> 311

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

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gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

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gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

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tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

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<400> 312

000

<210> 313

<400> 313

000

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<400> 314

000

<210> 315

<400> 315

000

<210> 316

<211> 551

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs137序列”

<400> 316

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

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Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

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Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

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Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

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Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

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Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

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Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

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Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

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Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

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Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

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Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

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Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg

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Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu

370 375 380

Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile

385 390 395 400

Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser

405 410 415

Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val

420 425 430

Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg

435 440 445

Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu

450 455 460

Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val

465 470 475 480

Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe

485 490 495

Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His

500 505 510

Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly

515 520 525

Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly

530 535 540

Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

545 550

<210> 317

<211> 1653

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs137序列”

<400> 317

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

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cagaagtcct gcatgtccaa ctgcagcatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

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tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

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<210> 318

<211> 569

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs137序列”

<400> 318

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

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Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

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Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

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Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

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Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

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Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

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Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

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Asp Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

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Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

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Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

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Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

370 375 380

Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu

385 390 395 400

Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu

405 410 415

Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly

420 425 430

Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu

435 440 445

Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu

450 455 460

Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu

465 470 475 480

His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu

485 490 495

Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe

500 505 510

Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly

515 520 525

Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr

530 535 540

Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro

545 550 555 560

Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

565

<210> 319

<211> 1707

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-TGFRs137序列”

<400> 319

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

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<210> 320

<211> 720

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成18s序列”

<400> 320

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<210> 321

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成12t15序列”

<400> 321

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gaactgaaga aggacgtcta cgtggtcgaa ctggactggt atcccgatgc tcccggcgaa 120

atggtggtgc tcacttgtga cacccccgaa gaagacggca tcacttggac cctcgatcag 180

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gctggccaat acacatgcca caagggaggc gaggtgctca gccattcctt attattatta 300

cacaagaagg aagacggaat ctggtccacc gacattttaa aagatcagaa ggagcccaag 360

aataagacct ttttaaggtg tgaggccaaa aactacagcg gtcgtttcac ttgttggtgg 420

ctgaccacca tttccaccga tttaaccttc tccgtgaaaa gcagccgggg aagctccgac 480

cctcaaggtg tgacatgtgg agccgctacc ctcagcgctg agagggttcg tggcgataac 540

aaggaatacg agtacagcgt ggagtgccaa gaagatagcg cttgtcccgc tgccgaagaa 600

tctttaccca ttgaggtgat ggtggacgcc gtgcacaaac tcaagtacga gaactacacc 660

tcctccttct ttatccggga catcattaag cccgatcctc ctaagaattt acagctgaag 720

cctctcaaaa atagccggca agttgaggtc tcttgggaat atcccgacac ttggagcaca 780

ccccacagct acttctcttt aaccttttgt gtgcaagttc aaggtaaaag caagcgggag 840

aagaaagacc gggtgtttac cgacaaaacc agcgccaccg tcatctgtcg gaagaacgcc 900

tccatcagcg tgagggctca agatcgttat tactccagca gctggtccga gtgggccagc 960

gtgccttgtt ccggcggtgg aggatccgga ggaggtggct ccggcggcgg aggatctcgt 1020

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gcttgtttac ctctggagct gacaaagaac gagtcttgtc tcaactctcg tgaaaccagc 1260

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gatgagctga tgcaagcttt aaacttcaac tccgagaccg tccctcagaa gtcctccctc 1500

gaggagcccg atttttacaa gacaaagatc aaactgtgca ttttactcca cgcctttagg 1560

atccgggccg tgaccattga ccgggtcatg agctatttaa acgccagcag cggcacaacc 1620

aacacagtcg ctgcctataa cctcacttgg aagagcacca acttcaaaac catcctcgaa 1680

tgggaaccca aacccgttaa ccaagtttac accgtgcaga tcagcaccaa gtccggcgac 1740

tggaagtcca aatgtttcta taccaccgac accgagtgcg atctcaccga tgagatcgtg 1800

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atcagcgatt taaagaagat cgaagattta attcagtcca tgcatatcga cgccacttta 2340

tacacagaat ccgacgtgca cccctcttgt aaggtgaccg ccatgaaatg ttttttactg 2400

gagctgcaag ttatctcttt agagagcgga gacgctagca tccacgacac cgtggagaat 2460

ttaatcattt tagccaataa ctctttatcc agcaacggca acgtgacaga gtccggctgc 2520

aaggagtgcg aagagctgga ggagaagaac atcaaggagt ttctgcaatc ctttgtgcac 2580

attgtccaga tgttcatcaa tacctcc 2607

<210> 322

<211> 240

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18s序列”

<400> 322

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn

20 25 30

Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe

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Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile

50 55 60

Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val

65 70 75 80

Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn

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Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp

100 105 110

Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp

115 120 125

Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala

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Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ile

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Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

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Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

210 215 220

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

225 230 235 240

<210> 323

<211> 869

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成12t15序列”

<400> 323

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

20 25 30

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

35 40 45

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp

65 70 75 80

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

100 105 110

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

115 120 125

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

130 135 140

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

210 215 220

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

245 250 255

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

260 265 270

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

275 280 285

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

290 295 300

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

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Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

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Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

340 345 350

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

355 360 365

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

370 375 380

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

385 390 395 400

Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

405 410 415

Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

420 425 430

Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu

435 440 445

Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met

450 455 460

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515 520 525

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675 680 685

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Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg

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740 745 750

Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu

755 760 765

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770 775 780

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Phe Ile Asn Thr Ser

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<210> 324

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15序列”

<400> 324

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ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tcctccggca ccaccaatac cgtggccgct 480

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gtcaatcaag tttacaccgt gcagatctcc accaaatccg gagactggaa gagcaagtgc 600

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<210> 325

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15序列”

<400> 325

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

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50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala

145 150 155 160

Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp

165 170 175

Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys

180 185 190

Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys

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210 215 220

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275 280 285

Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr

290 295 300

Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys

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Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr

325 330 335

Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys

340 345 350

Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe

355 360 365

Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp

370 375 380

Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp

385 390 395 400

Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu

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Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr

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Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly

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Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys

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Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe

465 470 475 480

Ile Asn Thr Ser

<210> 326

<211> 2142

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD28tCD3序列”

<400> 326

atgaaatggg tcaccttcat ctctttactg tttttattta gcagcgccta cagcgtgcag 60

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ggtctcgagt ggatcggcag catcaatccc tacaacgatt acaccaagta taacgaaaag 240

tttaagggca aggccactct gacaagcgac aagagctcca ttaccgccta catggagttt 300

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ctcgattact ggggccaagg taccacctta acagtctcct cc 2142

<210> 327

<211> 714

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD28tCD3序列”

<400> 327

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly

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Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser

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65 70 75 80

Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ile Thr Ala

85 90 95

Tyr Met Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr

100 105 110

Cys Ala Arg Trp Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Thr Leu

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala

145 150 155 160

Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val

165 170 175

Ser Ser Ser Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro

180 185 190

Lys Leu Cys Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro

195 200 205

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser

210 215 220

Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr His Arg

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Ser Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Thr Lys Arg Ser Gly

245 250 255

Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn

260 265 270

Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr

275 280 285

Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe

290 295 300

Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp

305 310 315 320

Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn

325 330 335

Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro

340 345 350

Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln

355 360 365

Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu

370 375 380

Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val

385 390 395 400

Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser

405 410 415

Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp

420 425 430

Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro

435 440 445

Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met

450 455 460

Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser

465 470 475 480

Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys

485 490 495

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser

500 505 510

Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

515 520 525

Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser

530 535 540

Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

545 550 555 560

Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu

565 570 575

Glu Ile Asn Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

580 585 590

Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg

595 600 605

Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

610 615 620

Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

625 630 635 640

Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn

645 650 655

Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser

660 665 670

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

675 680 685

Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp

690 695 700

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

705 710

<210> 328

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成信号序列”

<400> 328

Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu

1 5 10 15

Ala

<210> 329

<211> 454

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“Myc”

<400> 329

Met Asp Phe Phe Arg Val Val Glu Asn Gln Gln Pro Pro Ala Thr Met

1 5 10 15

Pro Leu Asn Val Ser Phe Thr Asn Arg Asn Tyr Asp Leu Asp Tyr Asp

20 25 30

Ser Val Gln Pro Tyr Phe Tyr Cys Asp Glu Glu Glu Asn Phe Tyr Gln

35 40 45

Gln Gln Gln Gln Ser Glu Leu Gln Pro Pro Ala Pro Ser Glu Asp Ile

50 55 60

Trp Lys Lys Phe Glu Leu Leu Pro Thr Pro Pro Leu Ser Pro Ser Arg

65 70 75 80

Arg Ser Gly Leu Cys Ser Pro Ser Tyr Val Ala Val Thr Pro Phe Ser

85 90 95

Leu Arg Gly Asp Asn Asp Gly Gly Gly Gly Ser Phe Ser Thr Ala Asp

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Gln Leu Glu Met Val Thr Glu Leu Leu Gly Gly Asp Met Val Asn Gln

115 120 125

Ser Phe Ile Cys Asp Pro Asp Asp Glu Thr Phe Ile Lys Asn Ile Ile

130 135 140

Ile Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Lys Leu Val

145 150 155 160

Ser Glu Lys Leu Ala Ser Tyr Gln Ala Ala Arg Lys Asp Ser Gly Ser

165 170 175

Pro Asn Pro Ala Arg Gly His Ser Val Cys Ser Thr Ser Ser Leu Tyr

180 185 190

Leu Gln Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ser Glu Cys Ile Asp Pro Ser Val

195 200 205

Val Phe Pro Tyr Pro Leu Asn Asp Ser Ser Ser Pro Lys Ser Cys Ala

210 215 220

Ser Gln Asp Ser Ser Ala Phe Ser Pro Ser Ser Asp Ser Leu Leu Ser

225 230 235 240

Ser Thr Glu Ser Ser Pro Gln Gly Ser Pro Glu Pro Leu Val Leu His

245 250 255

Glu Glu Thr Pro Pro Thr Thr Ser Ser Asp Ser Glu Glu Glu Gln Glu

260 265 270

Asp Glu Glu Glu Ile Asp Val Val Ser Val Glu Lys Arg Gln Ala Pro

275 280 285

Gly Lys Arg Ser Glu Ser Gly Ser Pro Ser Ala Gly Gly His Ser Lys

290 295 300

Pro Pro His Ser Pro Leu Val Leu Lys Arg Cys His Val Ser Thr His

305 310 315 320

Gln His Asn Tyr Ala Ala Pro Pro Ser Thr Arg Lys Asp Tyr Pro Ala

325 330 335

Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp Ser Val Arg Val Leu Arg Gln Ile Ser

340 345 350

Asn Asn Arg Lys Cys Thr Ser Pro Arg Ser Ser Asp Thr Glu Glu Asn

355 360 365

Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln Arg Arg Asn Glu

370 375 380

Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile Pro Glu Leu Glu

385 390 395 400

Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys Lys Ala Thr Ala

405 410 415

Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu

420 425 430

Asp Leu Leu Arg Lys Arg Arg Glu Gln Leu Lys His Lys Leu Glu Gln

435 440 445

Leu Arg Asn Ser Cys Ala

450

<210> 330

<211> 1365

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“Myc”

<400> 330

ctggattttt ttcgggtagt ggaaaaccag cagcctcccg cgacgatgcc cctcaacgtt 60

agcttcacca acaggaacta tgacctcgac tacgactcgg tgcagccgta tttctactgc 120

gacgaggagg agaacttcta ccagcagcag cagcagagcg agctgcagcc cccggcgccc 180

agcgaggata tctggaagaa attcgagctg ctgcccaccc cgcccctgtc ccctagccgc 240

cgctccgggc tctgctcgcc ctcctacgtt gcggtcacac ccttctccct tcggggagac 300

aacgacggcg gtggcgggag cttctccacg gccgaccagc tggagatggt gaccgagctg 360

ctgggaggag acatggtgaa ccagagtttc atctgcgacc cggacgacga gaccttcatc 420

aaaaacatca tcatccagga ctgtatgtgg agcggcttct cggccgccgc caagctcgtc 480

tcagagaagc tggcctccta ccaggctgcg cgcaaagaca gcggcagccc gaaccccgcc 540

cgcggccaca gcgtctgctc cacctccagc ttgtacctgc aggatctgag cgccgccgcc 600

tcagagtgca tcgacccctc ggtggtcttc ccctaccctc tcaacgacag cagctcgccc 660

aagtcctgcg cctcgcaaga ctccagcgcc ttctctccgt cctcggattc tctgctctcc 720

tcgacggagt cctccccgca gggcagcccc gagcccctgg tgctccatga ggagacaccg 780

cccaccacca gcagcgactc tgaggaggaa caagaagatg aggaagaaat cgatgttgtt 840

tctgtggaaa agaggcaggc tcctggcaaa aggtcagagt ctggatcacc ttctgctgga 900

ggccacagca aacctcctca cagcccactg gtcctcaaga ggtgccacgt ctccacacat 960

cagcacaact acgcagcgcc tccctccact cggaaggact atcctgctgc caagagggtc 1020

aagttggaca gtgtcagagt cctgagacag atcagcaaca accgaaaatg caccagcccc 1080

aggtcctcgg acaccgagga gaatgtcaag aggcgaacac acaacgtctt ggagcgccag 1140

aggaggaacg agctaaaacg gagctttttt gccctgcgtg accagatccc ggagttggaa 1200

aacaatgaaa aggcccccaa ggtagttatc cttaaaaaag ccacagcata catcctgtcc 1260

gtccaagcag aggagcaaaa gctcatttct gaagaggact tgttgcggaa acgacgagaa 1320

cagttgaaac acaaacttga acagctacgg aactcttgtg cgtaa 1365

<210> 331

<211> 1245

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“21s137L”

<400> 331

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

caggacaggc acatgatccg gatgaggcag ctcatcgaca tcgtcgacca gctgaagaac 120

tacgtgaacg acctggtgcc cgagtttctg cctgcccccg aggacgtgga gaccaactgc 180

gagtggtccg ccttctcctg ctttcagaag gcccagctga agtccgccaa caccggcaac 240

aacgagcgga tcatcaacgt gagcatcaag aagctgaagc ggaagcctcc ctccacaaac 300

gccggcagga ggcagaagca caggctgacc tgccccagct gtgactccta cgagaagaag 360

ccccccaagg agttcctgga gaggttcaag tccctgctgc agaagatgat ccatcagcac 420

ctgtcctcca ggacccacgg ctccgaggac tccattacat gcccccctcc catgagcgtg 480

gagcacgccg acatctgggt gaagagctat agcctctaca gccgggagag gtatatctgt 540

aacagcggct tcaagaggaa ggccggcacc agcagcctca ccgagtgcgt gctgaataag 600

gctaccaacg tggctcactg gacaacaccc tctttaaagt gcatccgggg cggtggagga 660

tccggaggag gtggctccgg cggcggagga tctcgcgagg gtcccgagct ttcgcccgac 720

gatcccgccg gcctcttgga cctgcggcag ggcatgtttg cgcagctggt ggcccaaaat 780

gttctgctga tcgatgggcc cctgagctgg tacagtgacc caggcctggc aggcgtgtcc 840

ctgacggggg gcctgagcta caaagaggac acgaaggagc tggtggtggc caaggctgga 900

gtctactatg tcttctttca actagagctg cggcgcgtgg tggccggcga gggctcaggc 960

tccgtttcac ttgcgctgca cctgcagcca ctgcgctctg ctgctggggc cgccgccctg 1020

gctttgaccg tggacctgcc acccgcctcc tccgaggctc ggaactcggc cttcggtttc 1080

cagggccgct tgctgcacct gagtgccggc cagcgcctgg gcgtccatct tcacactgag 1140

gccagggcac gccatgcctg gcagcttacc cagggcgcca cagtcttggg actcttccgg 1200

gtgacccccg aaatcccagc cggactccct tcaccgaggt cggaa 1245

<210> 332

<211> 415

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“21s137L”

<400> 332

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val

145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

195 200 205

Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

210 215 220

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp

225 230 235 240

Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu

245 250 255

Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser

260 265 270

Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys

275 280 285

Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val

290 295 300

Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly

305 310 315 320

Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly

325 330 335

Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu

340 345 350

Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser

355 360 365

Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg

370 375 380

His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg

385 390 395 400

Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu

405 410 415

<210> 333

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成引物”

<400> 333

ggtgggtata atggg 15

<210> 334

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成引物”

<400> 334

attattttat tttaaaaaat ttgtg 25

Claims (63)

1.一种治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。

2.一种杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞数量的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种NK细胞活化剂施用于所述受试者。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述施用引起所述受试者的靶组织中的衰老细胞数量减少。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述靶组织选自由以下组成的群组：脂肪组织、胰脏组织、肝脏组织、肺组织、血管、骨组织、中枢神经系统(CNS)组织、眼组织、皮肤组织、肌肉组织和次级淋巴器官组织。

5.一种治疗有需要的受试者的老年化相关疾病或病状的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于经鉴定患有老年化相关疾病或病状的受试者。

6.一种杀死或减少有需要的受试者的衰老细胞数量的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于所述受试者。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述受试者已被鉴定或诊断患有老年化相关疾病或病状。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述老年化相关疾病或病状选自由以下组成的群组：癌症、自体免疫疾病、代谢疾病、神经退化性疾病、心血管疾病、皮肤病、早衰疾病和脆性疾病。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞赘瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃癌和食道癌、胰脏癌、前列腺癌、乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述自体免疫疾病是1型糖尿病。

11.根据权利要求8所述的方法，其中所述代谢疾病选自由肥胖症、脂质营养不良和2型糖尿病组成的群组。

12.根据权利要求8所述的方法，其中所述神经退化性疾病选自由阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和痴呆症组成的群组。

13.根据权利要求8所述的方法，其中所述心血管疾病选自由冠状动脉疾病、动脉粥样硬化和肺动脉高血压组成的群组。

14.根据权利要求8所述的方法，其中所述皮肤病选自由以下组成的群组：伤口愈合、秃发、皱纹、老年性雀斑痣、皮肤变薄、着色性干皮病和先天性角化不良。

15.根据权利要求8所述的方法，其中所述早衰疾病选自由早衰和呼奇逊-吉尔福早衰综合症组成的群组。

16.根据权利要求8所述的方法，其中所述脆性疾病选自由脆性、疫苗接种反应、骨质疏松症和肌肉减少症组成的群组。

17.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述老年化相关疾病或病状选自由以下组成的群组：年龄相关黄斑变性、骨关节炎、脂肪萎缩、特发性肺纤维化、肾脏移植失败、肝纤维化、骨量损失、肌肉减少症、年龄相关的肺组织弹性丧失、骨质疏松症、年龄相关的肾功能障碍，和化学诱发的肾功能障碍。

18.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述老年化相关疾病或病状是2型糖尿病或动脉粥样硬化。

19.一种使有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观在一段时间内改善的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于所述受试者。

20.一种使有需要的受试者的皮肤和/或毛发的质地和/或外观在一段时间内改善的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于所述受试者。

21.根据权利要求19或20所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的皮肤质地和/或外观在一段时间内改善。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述方法使得所述受试者在一段时间内的皮肤皱纹形成速率减小。

23.根据权利要求21或22所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的皮肤着色在一段时间内改善。

24.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的皮肤质地在一段时间内改善。

25.根据权利要求20至24中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的毛发质地和/或外观在一段时间内改善。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述方法使得所述受试者在一段时间内的白发形成速率减小。

27.根据权利要求25或26所述的方法，其中所述方法使得所述受试者在一段时间内的白发数量减少。

28.根据权利要求25至27中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者在一段时间内的脱发速率减小。

29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的毛发质地在一段时间内改善。

30.根据权利要求19至29中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的皮肤中的衰老真皮纤维母细胞数量在一段时间内减少。

31.一种有助于使有需要的受试者的肥胖症在一段时间内得到治疗的方法，所述方法包含将治疗有效量的一种或多种自然杀手(NK)细胞活化剂施用于所述受试者。

32.一种有助于使有需要的受试者的肥胖症在一段时间内得到治疗的方法，所述方法包含将治疗有效数量的活化NK细胞施用于所述受试者。

33.根据权利要求1到32中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含：

获得休眠NK细胞；和

使所述休眠NK细胞在试管内、在包含一种或多种NK细胞活化剂的液体培养基中接触，其中所述接触引起活化NK细胞产生，随后施用于所述受试者。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述休眠NK细胞是携带嵌合抗原受体或重组T细胞受体的基因工程化NK细胞。

35.根据权利要求33所述的方法，其中所述方法进一步包含将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入所述休眠NK细胞或所述活化NK细胞，随后施用于所述受试者。

36.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的质量在一段时间内降低。

37.根据权利要求31至36中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的身体质量指数(BMI)在一段时间内降低。

38.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者从前期糖尿病向2型糖尿病恶化的速率降低。

39.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的空腹血清葡萄糖水平降低。

40.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的胰岛素敏感性增加。

41.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述方法使得所述受试者的动脉粥样硬化严重程度降低。

42.根据权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种引起以下中的一者或多者活化：IL-2的受体、IL-7的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、IL-33的受体；CD16、CD69、CD25、CD36、CD59、CD352、NKp80、DNAM-1、2B4、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、KIR2DS1、KIR2Ds2/3、KIR2DL4、KIR2DS4、KIR2DS5和KIR3DS1的受体。

43.根据权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种引起以下中的一者或多者的活化减少：PD-1、TGF-β受体、TIGIT、CD1、TIM-3、Siglec-7、IRP60、Tactile、IL1R8、NKG2A/KLRD1、KIR2DL1、KIR2DL2/3、KIR2DL5、KIR3DL1、KIR3DL2、ILT2/LIR-1和LAG-2。

44.根据权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是单链嵌合多肽，所述单链嵌合多肽包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)第二靶标结合域，

45.根据权利要求44所述的方法，其中所述第一靶标结合域和所述可溶性组织因子域彼此直接邻接。

46.根据权利要求44所述的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于所述第一靶标结合域与所述可溶性组织因子域之间的接头序列。

47.根据权利要求44至46中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子域与所述第二靶标结合域彼此直接邻接。

48.根据权利要求44至46中任一项所述的方法，其中所述单链嵌合多肽进一步包含介于所述可溶性组织因子域与所述第二靶标结合域之间的接头序列。

49.根据权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)可溶性组织因子域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域和所述第二域的结合而缔合。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述第一靶标结合域和所述可溶性组织因子域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

51.根据权利要求49所述的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合域与所述可溶性组织因子域之间的接头序列。

52.根据权利要求49至51中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子域与所述亲和域对中的所述第一域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

53.根据权利要求49至51中任一项所述的方法，其中所述第一嵌合多肽进一步包含介于所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子域与所述亲和域对中的所述第一域之间的接头序列。

54.根据权利要求49至53中任一项所述的方法，其中所述亲和域对中的所述第二域与所述第二靶标结合域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

55.根据权利要求49至53中任一项所述的方法，其中第二嵌合多肽进一步包含介于所述第二嵌合多肽中的所述亲和域对中的所述第二域与所述第二靶标结合域之间的接头序列。

56.根据权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述一种或多种NK细胞活化剂中的至少一种是多链嵌合多肽，所述多链嵌合多肽包含：

(a)第一和第二嵌合多肽，其中各包含：

(i)第一靶标结合域；

(ii)Fc域；和

(iii)亲和域对中的第一域；

(b)第三和第四嵌合多肽，其中各包含：

(i)亲和域对中的第二域；和

(ii)第二靶标结合域，

其中所述第一和第二嵌合多肽与所述第三和第四嵌合多肽通过所述亲和域对中的所述第一域与所述第二域的结合而缔合，并且所述第一和第二嵌合多肽通过其Fc域缔合。

57.根据权利要求44至56中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域中的一个或两个特异性地结合到选自由以下组成的群组的靶标：CD16a、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙粘素、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体，和CD122的受体。

58.根据权利要求44至56中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述可溶性白介素或细胞因子蛋白选自由以下组成的群组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD和SCF。

60.根据权利要求44至56中任一项所述的方法，其中所述第一靶标结合域和所述第二靶标结合域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

61.根据权利要求60所述的方法，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、TNFα的可溶性受体、IL-4的可溶性受体，或IL-10的可溶性受体。

62.根据权利要求44至55中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子域是不刺激血液凝结的人可溶性组织因子域。

63.根据权利要求43至55中任一项所述的方法，其中所述可溶性组织因子域包含或由人野生型可溶性组织因子的序列组成。

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