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CN112778156B - 双酰肼结构类化合物、其制备方法及其应用 - Google Patents

双酰肼结构类化合物、其制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了双酰肼结构类化合物、其制备方法及其应用。具体地，本发明提供了式I所示的双酰肼结构类化合物。本发明化合物具有增强肠干细胞的活性，促进肠上皮的修复，同时降低促炎性细胞因子的表达，从而达到治疗炎症性肠道疾病。

Description

双酰肼结构类化合物、其制备方法及其应用
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及双酰肼结构类化合物、其制备方法及其应用。
背景技术
炎症性肠道疾病(inflammatory bowel disease,IBD)包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)，以消化道反复发作的炎症为特征。近几年来，全球发病率呈现大幅上升。IBD的发病机制至今尚未清楚，研究表明与遗传、免疫、感染和精神活动等因素相关。疾病的反复发作可引起DNA损伤和黏膜细胞的微卫星不稳定，进而导致结肠癌的发生。已有研究证实，IBD患者发生结肠癌的风险显著高于正常人群。
在涉及IBD发病机制的炎性细胞因子中，IL-12家族成员，尤其是IL-23受到广泛的重视，被认为是实验性肠炎模型和人类IBD发病中的核心因素。IL-23能激活CD4+记忆细胞、CD8+细胞、NK细胞和少数单核巨噬细胞/树突状细胞。通过与IL-23受体(IL-23R)相结合，诱导IL-10、IL-17和INF-γ等的分泌，从而促进炎症的发展。最近人类遗传学研究确定IL-23R变异与小肠(回肠CD)和大肠(UC)的炎症反应相关。研究发现，IL-23能维持和扩大Th17细胞功能，加剧肠道炎症性反应。
近年来，生物疗法(如抗-TNF治疗)的出现极大地改善IBD的治疗。然而，仍有大量患者存在难治性溃疡或难以治愈的上皮异构，使得这些患者难以达到“黏膜愈合”。黏膜愈合表明IBD患者肠上皮结构和功能恢复，同时也揭示长期缓解或手术低风险预后。目前，恢复肠上皮结构和功能的重要性在IBD治疗中已经被确认；黏膜愈合作为治疗的标准目标在临床医生和研究人员中也已达成共识。然而，目前尚缺乏合适的治疗手段。免疫抑制剂和抗细胞因子的应用改善了IBD患者的复发率，然而至今仍缺乏能够治愈IBD的药物。
因此，本领域迫切需要寻找在IBD发病机制和/或病情进展中的关键分子，并开发可用于治疗IBD的新化合物。
发明内容
本发明的目的就是提供了一类可用于治疗IBD的双酰肼结构类化合物。
本发明的第一方面，提供一种式I所示的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物，
Figure BDA0002266407890000021
其中，
Figure BDA0002266407890000023
表示单键或双键；
X1，X2，X3各自独立地选自下组：C(R1)2、NR1、CR1或N；
且
Figure BDA0002266407890000022
为芳香环或非芳香环；
G选自下组：氢、卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基、C1-C6卤代烷基、或-L1-M；
Q选自下组：氢、卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基、C1-C6卤代烷基、或-L1-M；
当G位于X3上时，Q可位于X1或X2上；
当Q位于X3上时，G可位于X1或X2上；
R1独立地选自下组：氢、卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基、或C1-C6卤代烷基；
L1独立地选自下组：-NHC(＝O)-、-OC(＝O)-、-NHS(＝O)-、-OS(＝O)-、-NHSO2-、-C(＝O)NH-、-C(＝O)O-、-S(＝O)NH-、-OS(＝O)O-、或-SO2NH-；
M独立地选自下组：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代或未取代C3-C20环烷基、取代或未取代3-20杂环基、取代或未取代C6-C14芳基、取代或未取代6-14元杂芳基；且-L1-M可以任选地进一步被一个或多个卤素、3-12元杂环基或C3-12环烷基所取代；
所述取代选自下组的一个或多个：卤素、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C3-C6环烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基炔基、C6-C14芳基、5-14元杂环基，且所述芳基、杂芳基可任选地进一步被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氨基；
A独立地选自下组：取代或未取代C3-12环烷基、取代或未取代3-20元杂环基、取代或未取代C6-C14芳基、取代或未取代6-14元杂芳基；其中，所述取代选自下组的一个或多个：卤素、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基或C1-C6卤代烷基；
K独立地选自下组：R2-C(＝O)NH-、R2-C(＝O)O-、-C(＝O)NH-R2、-C(＝O)O-R2，R2独立地选自下组：氢、C1-C6烷基、C6-C14芳基、6-14元杂芳基。
在另一优选例中，所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物，其具有如下式II所示的结构
Figure BDA0002266407890000031
其中，
X1，X2，X3各自独立地选自：CR1或N；
R1独立地选自下组：氢、卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基、卤代甲基或-L1-M；
L1独立地选自下组：-NHC(＝O)-、-OC(＝O)-、-NHS(＝O)-、-OS(＝O)-、-NHSO2-、-C(＝O)NH-、-C(＝O)O-、-S(＝O)NH-、-OS(＝O)O-或-SO2NH-；
M独立地选自下组：C2-C4烷基、C1-C6烷氧基、取代或未取代C3-C8环烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代萘基、取代或未取代四氢萘基、取代或未取代6-20元稠合杂环、取代或未取代嘧啶基、取代或未取代5-6元杂芳基；所述的M可以进一步地被一个或多个卤素、3-12元杂环基或C3-12元环烷基所取代；且所述取代选自下组的一个或多个：卤素、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C3-C6环烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基-C3-C6炔基、苯基、或5-14元杂环基，且所述苯基、5-14元杂环基可以可任选地进一步被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氧基、或C1-C6烷氨基；
A独立地选自下组：取代或未取代C3-12环烷基、取代或未取代C6-C14芳基、或取代或未取代6-14元杂芳基；其中，所述取代选自下组的一个或多个：卤素、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基或卤代甲基；
K独立地选自下组：-C(＝O)NH-R2、-C(＝O)O-R2，R2独立地选自下组：氢、C1-C6烷基、C6-C14芳基或6-14元杂芳基。
在另一优选例中，所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物，其具有如下式III所示的结构，
Figure BDA0002266407890000032
其中，G、Q、A、K的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物，其具有如下式IV所示的结构，
Figure BDA0002266407890000041
其中，G、Q、A、K的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物，其具有如下式V所示的结构，
Figure BDA0002266407890000042
其中，G、Q、A、K的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的化合物，选自以下化合物：
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸甲酯；
2-(2-(4-(3-甲基丁酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-乙酰氨基苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-苯甲酰氨基苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(环己烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(环丙基氨基甲酰基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(叔丁基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(三氟甲基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(恶唑-5-基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(3-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(2-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(2,4-二氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(6-氯烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(6-溴烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)-3-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)-2-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(2-氯-4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(3-氯-4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(3-(环丙烷甲酰氨基)-4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
3-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚-5-烯-2-羧酸；
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)苯甲酸；
3-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸；
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环丙烷-1-羧酸；
4,5-二溴-2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸；
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-3,6-二氟苯甲酸；
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-3,6-二氟苯甲酸；
2-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)苯甲酸；
3-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸；
3-(2-(4-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸；
3-(2-(3-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸；
3-(2-(2-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸；
3-(2-(2,4-二氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸；
3-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-2-萘甲酸。
本发明第二方面，提供第一方面所述的式I化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物的制备方法，包括以下步骤：
Figure BDA0002266407890000051
在第一惰性溶剂中，a2化合物与化合物b反应，任选地进一步发生反应制得化合物I；
其中，X1，X2，X3、G、Q、A、K的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的进一步发生反应是指与卤代烷烃发生取代，或与醇或胺发生缩合反应制得化合物I；所述的醇为C1-C6烷基-OH，所述的胺为C1-C6烷基-NH2或C1-C6烷基-N-C1-C6烷基。
在另一优选例中，所述第一惰性溶剂选自：CH3CN、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、DMF、或其组合。
在另一优选例中，所述的盐的制备方法包括使式I化合物与游离碱或酸与化学等量或过量的酸(无机酸或有机酸)或碱(无机碱或有机碱)，在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。
在另一优选例中，式I化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物的制备方法，还包括如下步骤：
Figure BDA0002266407890000061
在第二惰性溶剂中，化合物a1与水合肼发生反应，从而形成化合物a2；
其中，X1，X2，X3、G、Q的定义如上所述。
在另一优选例中，所述的第二惰性溶剂为醇，优选C1-C6烷基醇，更优选为甲醇或乙醇。
本发明第三方面，提供一种药物组合物，其包含第一方面所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或活性代谢物；和药学上可接受的载体。
本发明第四方面，提供第一方面所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或活性代谢物，或第三方面所述的药物组合物在制备治疗或预防炎症性肠道疾病药物及药物组合物中的用途。
在另一优选例中，所述的炎症性肠道疾病包括节段性回肠炎或Behcet病伴有的肠道病变、溃疡性结肠炎、出血性直肠溃疡和回肠囊炎。
在另一优选例中，所述治疗包括：促进黏膜愈合、恢复肠上皮结构、或其组合。
在另一优选例中，所述的治疗包括：促进肠干细胞的活性、降低促炎性细胞因子的表达、或其组合。
本发明第五方面，提供了一种体外抑制IL-23和上调cyclinD1的方法，包括步骤：将本发明第一方面所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或活性代谢物，与体细胞(或组织)接触，从而抑制IL-23并上调cyclinD1。
在另一优选例中，所述的抑制IL-23包括抑制IL-23miRNA的形成、抑制IL-23蛋白的表达。
在另一优选例中，所述的上调cyclinD1包括促进cyclinD1 miRNA的形成、促进cyclinD1蛋白的表达。
在另一优选例中，所述的体细胞选自下组：巨噬细胞、肠道细胞(包括肠干细胞、肠上皮细胞)、或其组合。
在另一优选例中，所述的体细胞来自啮齿动物(如小鼠、大鼠)、或灵长动物(如人)。
本发明第五方面，提供了一种治疗炎症性肠道疾病的方法，包括步骤：给需要治疗的对象施用本发明第一方面中所述的化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或活性代谢物，或第三方面所述的药物组合物。
在另一优选例中，所述的炎症性肠道疾病包括节段性回肠炎或Behcet病伴有的肠道病变、溃疡性结肠炎、出血性直肠溃疡和回肠囊炎。
在另一优选例中，所述的对象为哺乳动物，较佳地为人。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了化合物A1对小鼠结肠炎模型的治疗作用。
图2显示了化合物A1在两种浓度下，口服给药小鼠的血药浓度变化。
图3显示了化合物A1对小鼠来源的肠类器官的生长的促进作用。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地开发了一类既可抑制IL-23又可上调cyclinD1的双酰肼结构类化合物。本发明化合物既可以抑制过度激活的肠道炎症反应和免疫应答，从而明显减轻IBD小鼠结肠炎症，还可以有效促进肠黏膜的愈合和维护稳态，因此可有效而协同地用于治疗炎症性肠道疾病。在此基础上完成了本发明。
术语
术语“烷基”是指直链或支链烷烃基，包含1-18个碳原子，尤其指1-6个碳原子。典型的“烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、异戊基、庚基、4,4–二甲基戊基，辛基，2,2,4-三甲基戊基，壬基，癸基、十一烷基，十二烷基等等。术语“(C1-C6)烷基”指的是直链或支链烷基，包括从1-6个碳原子，如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基。“取代烷基”是指烷基中的一个或多个位置被取代，尤其是1-4个取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一个或多个以下基团：如氢，氘，卤素(例如，单卤素取代基或多卤素取代基，后者如三氟甲基或包含Cl3的烷基)、腈基、硝基、氧(如＝O)、三氟甲基、三氟甲氧基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环、芳环、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe,P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe,NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra、或NRbP(＝O)2Re，其中在此出现的Ra可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环，Rb、Rc和Rd可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、杂环或芳环，或者说Rb和Rc与N原子一起可以形成杂环；Re可以独立表示氢、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环。上述典型的取代基，如烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环可以任选取代。
术语“烯基”是指直链或支链烃基含有2-18个碳原子，至少一个碳碳双键的取代基。术语“(C2-C6)烯基”是指直链或支链的含有2-6个碳原子，至少有一个碳碳双键的基团，如乙烯基、丙烯基、2-丙烯基、(E)-2-丁烯基、(Z)-2-丁烯基、(E)-2-甲基-2-丁烯基、(Z)-2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、(Z)-2-戊烯基、(E)-1-戊烯基、(E)-2-戊烯基、(Z)-2-己烯基、(E)-1-己烯基、(Z)-1-己烯基、(E)-2-己烯基、(Z)-3-己烯基、(E)-3-己烯基、(E)-1,3-己二烯基、4-甲基-3-戊烯基或降冰片烯。“取代烯基”是指烯基中的一个或多个位置被取代，尤其是1-4个取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一个或多个以下基团：如氢，氘，卤素(例如，单卤素取代基或多卤素取代基，后者如三氟甲基或包含Cl3的烷基)、腈基、硝基、氧(如＝O)、三氟甲基、三氟甲氧基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环、芳环、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe,P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe,NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra、或NRbP(＝O)2Re，其中在此出现的Ra可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环，Rb、Rc和Rd可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、杂环或芳环，或者Rb和Rc与N原子一起可以形成杂环；Re可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环。上述典型的取代基，如烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环可以任选取代。
术语“炔基”是指直链或支链烃基含有2-18个碳原子，至少一个碳碳三键的取代基。典型的基团包括乙炔基。术语“(C2-C6)炔基”是指直链或支链的含有2-6个碳原子，至少有一个碳碳双键的基团，如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基。“取代炔基”是指炔基中的一个或多个位置被取代，尤其是1-4个取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一个或多个以下基团：如氢、氘、卤素(例如，单卤素取代基或多卤素取代基，后者如三氟甲基或包含Cl3的烷基)、腈基、硝基、氧(如＝O)、三氟甲基、三氟甲氧基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环、芳环、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe,P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe,NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra、或NRbP(＝O)2Re，其中在此出现的Ra可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环，Rb、Rc和Rd可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、杂环或芳环，或者Rb和Rc与N原子一起可以形成杂环；Re可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环。典型的取代基可以任选取代。
术语“环烷基”是指完全饱和的环状烃类化合物基团，包括1-4个环，每个环中含有3-8个碳原子，例如包含3-18个碳原子，尤其指3-14个碳原子，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或降莰烷。“取代环烷基”是指环烷基中的一个或多个位置被取代，尤其是1-4个取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一个或多个以下基团：如氢，氘，卤素(例如，单卤素取代基或多卤素取代基，后者如三氟甲基或包含Cl3的烷基)、腈基、硝基、氧(如＝O)、三氟甲基、三氟甲氧基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环、芳环、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe,P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe,NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra、或NRbP(＝O)2Re，其中在此出现的Ra可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环，Rb、Rc和Rd可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、杂环或芳环，或者Rb和Rc与N原子一起可以形成杂环；Re可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环。上述典型的取代基可以任选取代。典型的取代还包括螺环、桥环或稠环取代基，尤其是螺环烷基、螺环烯基、螺环杂环(不包括杂芳环)、桥环烷基、桥环烯基、桥环杂环(不包括杂芳环)、稠环烷基、稠环烯基、稠环杂环基或稠环芳环基，上述环烷基、环烯基、杂环基和杂环芳基可以任选取代。
术语“环烯基”是指部分不饱和的环状烃类化合物基团，包括1-4个环，每个环中含有3-8个碳原子，例如包含3-18个碳原子，尤其指3-14个碳原子。典型的环烯基如环丁烯基、环戊烯基、环己烯基等等。“取代环烯基”是指环烷基中的一个或多个位置被取代，尤其是1-4个取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一个或多个以下基团：如氢，氘，卤素(例如，单卤素取代基或多卤素取代基，后者如三氟甲基或包含Cl3的烷基)、腈基、硝基、氧(如＝O)、三氟甲基、三氟甲氧基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环、芳环、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe,P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe,NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra、或NRbP(＝O)2Re，其中在此出现的Ra可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环，Rb、Rc和Rd可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、杂环或芳环，或者Rb和Rc与N原子一起可以形成杂环；Re可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环。上述典型的取代基可以任选取代。典型的取代还包括桥环、螺环或稠环取代基，尤其是螺环烷基、螺环烯基、螺环杂环(不包括杂芳环)、稠环烷基、稠环烯基、稠环杂环基或稠环芳环基，上述环烷基、环烯基、杂环基和杂环芳基可以任选取代。
术语“环烷基炔基”是指环烷基取代的炔基，包括C3-C8环烷基-C≡C-Ra，Ra可以独立表示无、氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环，例如：环丙基乙炔、环丁基乙炔、环戊基乙炔、环己基乙炔。其中，环烷基可以被取代，取代基可以如术语“环烷基”中的取代基。
术语“芳基”是指芳香环状烃类化合物基团，具有1-5个环，例如包含6-18个碳原子，尤其指6-14个碳原子。尤其指单环和双环基团，如苯基、联苯基或萘基。凡含有两个或两个以上芳香环(双环等)，芳基基团的芳香环可由单键联接(如联苯)，或稠合(如萘、蒽等等)。“取代芳基”是指芳基中的一个或多个位置被取代，尤其是1-3个取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一个或多个以下基团：如氢，氘，卤素(例如，单卤素取代基或多卤素取代基，后者如三氟甲基或包含Cl3的烷基)、腈基、硝基、氧(如＝O)、三氟甲基、三氟甲氧基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环、芳环、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe,P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe,NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra、或NRbP(＝O)2Re，其中在此出现的Ra可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环，Rb、Rc和Rd可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、杂环或芳环，或者Rb和Rc与N原子一起可以形成杂环；Re可以独立表示氢、氘、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环或芳环。上述典型的取代基可以任选取代。典型的取代还包括稠环取代基，尤其是稠环烷基、稠环烯基、稠环杂环基或稠环芳环基，上述环烷基、环烯基、杂环基和杂环芳基可以任选取代。
术语“杂芳基”指包含1-4个杂原子(优选1或2个)、5-14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、氮和硫。杂芳基优选5至10元环，更优选为5元或6元，例如吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、噁二唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三氮嗪基、三氮唑基、嘌呤、咔唑、吲哚基、吲唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噁唑基、异构化的喹啉基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基或萘啶基及四氮唑基等。“杂芳基”可以是取代的或者非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个一下基团，其独立地选自烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、烷硫基、烷基氨基、卤素、氨基、硝基、羟基、巯基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。
术语“卤素”或“卤”是指氯、溴、氟、碘。
“卤代烷基”是指直链或支链卤代烷基，如“C1-C6卤代烷基”，其是指具有1至6个碳原子的包含一个或多个相同或不同的卤素原子的直链或支链卤代烷基，非限制性地包括-CH2Cl、-CHCl2、-CCl3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2Br、-CHBr2、-CBr3、CF3CH2、CCl3CH2、CBr3CH2。
术语“烷氧基”是指直链或支链烷氧基，如“C1-C6烷氧基”，其是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。优选为C1-C4烷氧基。
术语“卤代烷氧基”是指卤素取代的直链或支链烷氧基，如“C1-C6卤代烷氧基”，其是指具有1至6个碳原子的直链或支链卤代烷氧基，非限制性地包括氯代甲氧基、氯代乙氧基、氯代丙氧基、氯代异丙氧基、氯代丁氧基、溴代甲氧基、溴代乙氧基、溴代丙氧基、溴代异丙氧基和溴代丁氧基等。
术语“烷氨基”是指”是指氨基取代的直链或支链烷基，如“C1-C6烷氨基”，其是指具有1至6个碳原子的氨基取代的直链或支链烷基，非限制性地包括H2N-CH2-、H2N-CH2CH2-、H2N-CH2CH2CH2-、H2N-CH(CH3)CH2-等。
术语“卤代烯基”是指含有2-18个碳原子，至少一个碳碳双键的取代基。术语“(C2-C6)卤代烯基”是指直链或支链的含有2-6个碳原子，至少有一个碳碳双键，一个或多个相同或不同的卤素原子基团，包括-CH＝CHCl、-CH＝CCl2、-CH＝CHF、-CH＝CF2、-CH＝CHBr、-CH＝CBr2、-CH＝CH-CH2F、-CH＝CHCHF2、-CH＝CH-CF3、-CH＝CHCH2Br、-CH＝CHCHBr2、-CH＝CHCBr3等。
术语“卤代炔基”是指含有2-18个碳原子，至少一个碳碳三键的取代基。术语“(C2-C6)卤代炔基”是指直链或支链的含有2-6个碳原子，至少有一个碳碳三键，一个或多个相同或不同的卤素原子基团，包括-C≡CCl、-C≡CF、-C≡CBr、-C≡C-CH2F、-C≡CCHF2、-C≡C-CF3、-C≡CCH2Br、-C≡CCHBr2、-C≡CCBr3等。
术语“羧基”是指-COOH。
术语“羟甲基”是指-CH2OH。
术语“缩合反应”是指，本发明中得到的羧酸化合物在缩合剂存在下，与醇或胺反应；缩合剂可以使用本领域熟知的常用缩合剂，例如：DMAP、EDCI、HOBT、HOAT、HATU、HBTU等。
除非另外说明，假定任何不满价态的杂原子有足够的氢原子补充其价态。
本发明中的化合物可能形成的盐也是属于本发明的范围。除非另有说明，本发明中的化合物被理解为包括其盐类。在此使用的术语“盐”，指用无机或有机酸和碱形成酸式或碱式的盐。药学上可接受的(即无毒，生理可接受的)盐是首选，虽然其他盐类也有用，例如可以用在制备过程中的分离或纯化步骤。本发明的化合物可能形成盐，例如，化合物I与一定量如等当量的酸或碱反应，在介质中盐析出来，或在水溶液中冷冻干燥得来。
如本文所述，本发明中的化合物可与任何数量取代基或官能团取而扩大其包涵范围。通常，术语“取代”不论在术语“可选”前面或后面出现，在本发明配方中包括取代基的通式，是指用指定结构取代基，代替氢自由基。当特定结构中的多个在位置被多个特定的取代基取代时，取代基每一个位置可以是相同或不同。本文中所使用的术语“取代”包括所有允许有机化合物取代。从广义上讲，允许的取代基包括非环状的、环状的、支链的非支链的、碳环的和杂环的，芳环的和非芳环的有机化合物。
在本发明中，如杂原子氮可以有氢取代基或任何允许的上文所述的有机化合物来补充其价态。
在本说明书中，炎症性肠道疾病不仅指严格意义上的炎症性肠道疾病如节段性回肠炎、溃疡性结肠炎，而且也指广义上的炎症性肠道疾病，包括伴有Behcet病的肠道病变、出血性直肠溃疡、回肠囊炎、肠结核、局部缺血性肠炎、药物性结肠炎、辐射性肠炎、感染性肠炎等。
此外，本发明是无意以任何方式限制允许取代有机化合物。本发明认为取代基和可变基团的组合在以稳定化合物形式在疾病的治疗上是很好的，例如传染病或增生性疾病。此处术语“稳定”是指具有稳定的化合物，在足够长的时间内检测足以维持化合物结构的完整性，最好是在足够长的时间内都在效，本文在此用于上述目的。
本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本发明范围内。
活性成分
如本文所用，术语“本发明化合物”、或“本发明的双酰肼结构类化合物”可互换使用，指式I所示的化合物。该术语还包括及式I化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物。
其中，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。
术语“溶剂化物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
此外，本发明化合物还包括式I所示的双酰肼结构的前药。术语“前药”包括其本身可以是具有生物学活性的或非活性的，当用适当的方法服用后，其在人体内进行代谢或化学反应而转变成式I的一类化合物，或式I的一个化合物所组成的盐或溶液。所述的前药包括(但不局限于)所述化合物的羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、砜酯、亚砜酯、氨基化合物、氨基甲酸盐、偶氮化合物、磷酰胺、葡萄糖苷、醚、乙缩醛等形式。
制备方法
下面更具体地描述本发明式I结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在0℃或室温至回流温度(如0℃～160℃，优选0℃～120℃)下进行。反应时间通常为0.1小时-60小时，较佳地为0.5-48小时。
下面的通用制备路线可以用于合成本发明式I结构的化合物：
Figure BDA0002266407890000131
在第一惰性溶剂中，化合物a2与化合物b反应，从而制得化合物I。
在本发明中，所述的化合物a2可通过如下步骤制备：
Figure BDA0002266407890000141
在上述反应式中，各基团的定义如上所述。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物兼具抑制IL-23(例如抑制IL-23mRNA)及上调cyclinD1(如增加cyclinD1 mRNA)的作用，因此本发明化合物、其光学异构体或顺反异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药或其活性代谢物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解IBD。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-1000mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温
Figure BDA0002266407890000142
)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选50～1000mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括：
1、本发明的双酰肼结构类化合物具有增强肠干细胞的活性，促进肠上皮的修复，同时降低促炎性细胞因子的表达，从而达到治疗炎症性肠道疾病(IBD)。
2、本发明的双酰肼结构类化合物既可抑制IL-23mRNA又可上调cyclinD1mRNA，因此可协同地、更高效地治疗IBD。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
实施例1化合物A1的合成：
Figure BDA0002266407890000161
第一步：将化合物1(500mg)溶于DCM(10mL)后，降温至0℃，加入化合物3(348mg)，缓慢升至室温，保持室温反应30min。加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，减压浓缩，残余物以石油醚：乙酸乙酯＝5：1为洗脱剂经柱层析纯化，得到化合物2(610mg，产率84％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.00(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),3.90(s,3H),1.53(m,1H),1.12(m,2H),0.88(m,2H)。
第二步：将化合物2(400mg)溶于CH3CH2OH(25mL)中，加入水合肼(5mL)，回流反应4h。反应完毕后，减压浓缩，并用冰水洗固体，然后乙醇重结晶，得到化合物4(120mg，产率40％)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.74(d,J＝9.2Hz,2H),7.65(d,J＝9.2Hz,2H),1.89(s,3H),1.77(m,1H),1.28(s,2H),0.95(m,2H),0.87(m,2H)。
第三步：将化合物5(352mg)溶于CH3CN(15mL)中，加热至回流，然后加入化合物4(500mg)，保持回流反应30min。反应完毕后，抽滤得到固体，然后用CH3CN洗固体，于70℃下真空干燥2h，得到化合物A1(605mg，产率71％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.45(s,1H),10.11(s,1H),9.64(s,1H),7.82(d,J＝6.0Hz,2H),7.66(d,J＝5.6Hz,2H),2.87(m,1H),2.12(m,1H),2.06(m,1H),1.97(m,1H),1.80(m,1H),1.72(m,1H),1.65(m,1H),1.57(m,1H),1.41(m,2H),1.29(m,1H),0.82(m,5H)；13CNMR(125MHz,DMSO-d6):δ175.37,173.35,172.54,165.38,142.71,128.84,127.26,118.56,42.33,40.72,28.23,25.60,24.51,22.83,15.15,7.84；LRMS(ESI):397.5(M+Na)+,372.7(M-H)-；HRMS(ESI):calcd for C19H22N3O5(M-H)-:372.1565,found:372.1561.
实施例2化合物A2的合成
Figure BDA0002266407890000171
将化合物A1(100mg)和K2CO3(74mg)溶于DMF(2mL)中，搅拌下逐滴加入CH3I，继续搅拌过夜。反应完毕后，加水淬灭反应，用EA萃取，加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物以石油醚：乙酸乙酯＝5：1位洗脱剂经柱层析纯化，得到化合物A2(90mg，产率85％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.37(s,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),7.20(d,J＝8.8Hz,1H),3.12(s,3H),2.94(s,1H),1.75(m,1H),1.45(m,3H),1.19(m,2H),0.88(m,4H),0.79(d,J＝5.6Hz,4H).LRMS(ESI):387.0(M)+。
实施例3-37化合物A3-A37的合成
参照实施例1-2的方法，采用相应的底物替换实施例1中的底物，从而合成化合物A3-A37。
化合物A3-A37结构及表征结果如下：
表A
Figure BDA0002266407890000172
Figure BDA0002266407890000181
Figure BDA0002266407890000191
Figure BDA0002266407890000201
Figure BDA0002266407890000211
Figure BDA0002266407890000221
Figure BDA0002266407890000231
Figure BDA0002266407890000241
实施例38动物与细胞实验
一、实验材料
细胞及动物
HCT116细胞和Raw264.7细胞由中国科学院院细胞库提供；肠道类器官来源于Lgr5-EGFP小鼠分离的肠隐窝培养；Lgr5-EGFP小鼠由复旦放射医学研究所华国强课题组赠予，遗传背景为C57/BL6，小鼠饲养于复旦大学药学院实验动物中心二楼SPF级动物房。
主要试剂
Figure BDA0002266407890000242
Figure BDA0002266407890000251
二、实验方法
A.细胞实验
化合物活性筛选：
1.IL-23mRNA的检测：
用DMSO将所有测试化合物配成浓度为50mM的贮存液，置于-20度冰箱保存。将Raw264.7细胞接种于12孔板，24小时后细胞密度约为70-80％，加入不同稀释比例的化合物，于加药1h后每孔加入20μl(即0.5μg/ml)的LPS，轻摇培养板混匀。空白组不加。6小时后弃去培养基，冰冷PBS缓冲液洗3遍，加入1ml Trizol，静置10min，收集裂解液，离心取得上清，加入1/5体积三氯甲烷振摇1min，静置3min，4℃离心12000g。取上清，加入等体积异丙醇混匀，静置10min，离心12000xg，10min。去上清，沉淀用70％乙醇洗涤，7500g离心5min，干燥沉淀，加入20μL DEPC水。检测样品RNA浓度，并调至100～1000ng/μL，使用市售的逆转录试剂盒以及SYBR-qPCR试剂盒检测IL-23mRNA水平的变化。
(1)逆转录合成cDNA
根据逆转录试剂盒的操作说明进行,在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2min。逆转录反应程序如下:阶段1:25℃,5min；阶段2:42℃,30min；阶段3:85℃,5min；阶段4:4℃,保持，产物-20℃保存，或直接用于RT-qPCR。
(2)RT-PCR扩增
Real-Time PCR涉及到的引物序列如下：
Figure BDA0002266407890000252
采用
Figure BDA0002266407890000262
方法来分析数据，计算
Figure BDA0002266407890000263
的数值即为实验组的目的基因表达相对于对照组的倍数。
2.CyclinD1 mRNA的检测：
结直肠癌HCT 116细胞株进行化合物筛选，所用培养基为含10％FBS的McCOY's 5A培养基。接种细胞于12孔板中，使第二天贴壁细胞的密度为70％～80％。取1μL储存液(50mM)于1ml培养基中，配制成50μM的含药培养基(对照组为0.1％DMSO培养基)。弃去原培养基，加入含药培养基，37℃培养6h。弃去培养基，冰冷PBS缓冲液洗3遍，加入1ml Trizol，静置10min，收集裂解液，离心取得上清，加入1/5体积三氯甲烷振摇1min，静置3min，4℃离心12000xg。取上清，加入等体积异丙醇混匀，静置10min，离心12000xg，10min。去上清，沉淀用70％乙醇洗涤，7500xg离心5min，干燥沉淀，加入20μL DEPC水。检测样品RNA浓度，并调至100～1000ng/μL，使用市售的逆转录试剂盒以及SYBR-qPCR试剂盒检测cyclinD1的mRNA水平的变化。
(1)逆转录合成cDNA
根据逆转录试剂盒的操作说明进行,在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2min。逆转录反应程序如下:阶段1:25℃,5min；阶段2:42℃,30min；阶段3:85℃,5min；阶段4:4℃,保持，产物-20℃保存，或直接用于RT-qPCR。
(2)RT-PCR扩增
Real-Time PCR涉及到的引物序列如下：
Figure BDA0002266407890000261
用Bio-Rad的CFX100荧光定量PCR仪器对cDNA的目的片段进行扩增。
收集仪器数据，采用2-△△Ct方法来分析数据，计算2-△△Ct的数值即为实验组的目的基因表达相对于对照组的倍数。
B.动物实验
动物饲养繁殖与基因鉴定
Lgr5-EGFP小鼠的繁殖
小鼠基因型鉴定
Lgr5-EGFP小鼠基因型鉴定
基因鉴定序列
Figure BDA0002266407890000271
按如下反应体系进行PCR:
Figure BDA0002266407890000272
反应程序按说明进行设置。
1.小鼠急性IBD模型的建立及化合物A1体内药效实验
实验分组设为对照组、模型组、美沙拉嗪给药组，A1-10mg/kg给药组和化合物A1-20mg/kg给药组，共五组，每组8只8周龄雄性C57/BL6小鼠，除对照组都给以3％硫酸葡聚糖钠盐(DSS)水自由饮用，隔天重新配制并更换，持续7天。
化合物A1用DMSO溶解配成母液，再分别溶于超纯水，配制成终浓度分别1mg/ml和2mg/ml的4％DMSO水溶液，美沙拉嗪采用0.5％CMC-Na配制成50mg/ml的混悬液，在造模同时开始灌胃，采取灌胃剂量为10μL/g(对应给药剂量10mg/kg、20mg/kg和50mg/kg)，持续10天。
每天记录小鼠体重变化，10天后对小鼠处死进行取样。
2.血清炎症因子的测定
上述给药10天后，对小鼠采取摘眼球取血，收集全血后，让血液在室温下不受干扰地凝固15-30分钟。通过在离心机中以1,000×g 4℃离心10min获得血清。对血清样品采用达科为公司的IL-1β和IL-23ELISA试剂盒检测IL-1β和IL-23的血清水平。
3.小鼠结肠长度测量
上述眼球取血后，处死小鼠，取整段结肠进行拍照和长度测量。
4.检测结肠组织的炎症因子mRNA水平
对结肠组织使用PBS反复冲洗，刮去粘液，分离小鼠的结肠粘膜，加入Trizol进行组织匀浆，静置10min离心取得上清，加入1/5体积三氯甲烷振摇1min，静置3min，4℃离心12000xg。取上清，加入等体积异丙醇混匀，静置10min，离心12000xg，10min。去上清，沉淀用70％乙醇洗涤，7500xg离心5min，干燥沉淀，加入适量DEPC水。检测样品RNA浓度，并调至100～1000ng/μL，使用市售的逆转录试剂盒以及SYBR-qPCR试剂盒检测相应炎性因子的mRNA水平。
5.RT-qPCR
根据逆转录试剂盒的操作说明，进行如下操作：
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2min。
Figure BDA0002266407890000281
逆转录反应体系配制(20μL体系)
Figure BDA0002266407890000282
得到cDNA按照下述表格，配制工作液体系：
Figure BDA0002266407890000291
各炎性因子的qPCR引物如下表
Figure BDA0002266407890000292
收集仪器数据，采用2-△△Ct方法来分析数据，计算2-△△Ct的数值即为实验组的目的基因表达相对于对照组的倍数。
6.炎症浸润和粘膜损伤观察
取小鼠中段约0.5cm结肠，4℃多聚甲醛固定16h，委托武汉赛维尔生物公司进行石蜡包埋，切片，进行苏木精-伊红(H&E)染色。
7.药动学实验
对小鼠(C57)18只，雄性，体重18-22g，随机分为6组，每组3只，灌胃给予受试化合物，试验前禁食12h，自由饮水，给药后2h统一进食。实验方案如下表：
Figure BDA0002266407890000293
根据表中时间点，对小鼠进行眼眶后静脉丛采血，收集于肝素钠处理过的EP管中，离心取血浆。准确吸取15μL血浆于对应样品编号的EP管中，加入300μL含内标50ng/mL甲苯磺丁脲(tolbutamide)的甲醇/乙腈等体积混合溶液，混合物涡旋1min,室温条件下12000rpm离心10min。取35μL上清液与65μL乙腈/水等体积混合溶液混匀，转移至96孔板中，进行LC-MS/MS分析，进样体积2μL。超高效液相色谱(Waters公司)进行梯度分离，三重四极杆质谱(API5000,SCIEX公司)使用电喷雾离子源，在负离子条件下采用多反应监测模式(MRM,multi reaction monitoring)进行检测。化合物A1标曲线性范围是1～3000ng/mL。
色谱条件如下
色谱柱：Waters Acquity C18 column(2.1*50mm,1.7μm)
柱温：45℃
流动相：MPA含0.1％甲酸的水
MPB含0.1％甲酸的乙腈/甲醇(9/1，v/v)
流速：0.5mL/min
梯度洗脱程序：
Figure BDA0002266407890000301
质谱条件如下
Compound Transition
A1 372.3>218.0
tolbutamide 269.2>169.8
8.结肠类器官的分离和培养
取6到8周大的小鼠全部结肠，从中间剪开，用预冷的PBS洗干净，将小肠分成5-8厘米长的若干段，用载玻片小心的将结肠表面的粘液刮去，将刮好的结肠放入50mL离心管中，置于冰上。将离心管转移至安全柜中，用含双抗的PBS清洗3-4次，将结肠转移至25ml 2mM的EDTA的溶液中4℃冰箱中消化25分钟。将消化好的结肠转移至50ml离心管中，加25ml含双抗的PBS，适当摇晃50下，悬浮液用70um的细胞过滤筛过滤，将结肠转移至新的含25ml含双抗的PBS的离心管中，继续合适摇晃50下，悬浮液用70um的细胞过滤筛过滤，将两次过滤后的悬液转移至同一个50ml离心管中，室温下900rpm离心5分钟。弃上清，用2mL的Advanced-DMEM/F12重悬沉淀，取适量的悬液计数。隐窝的数量为5-10个/ul为最好。取适当体积的悬液加入到1.5ml的离心管中，室温下900rpm离心5分钟。用事先在冰上预冷的基质胶重悬沉淀。将96孔板事先在培养箱中预热，然后每个孔接5ul的重悬液。将接种好的板于培养箱中放置10-15分钟。每孔加100ul培养基，然后每隔2-3天换一次培养基。
WNER培养基组成为：
Figure BDA0002266407890000311
9.检测化合物对类器官生长的影响
根据化合物A1的Mw配制50μM的的DMSO溶液，分别加入类器官培养基，拍照观察形态，第7天吸去培养基，冰上冷却10min融化基质胶，用PBS离心收集类器官。按上述操作提取mRNA检测干细胞相关基因表达。
10.数据分析
使用SPSS 13.0对数据进行分析，两组间的比较采用配对t检验，多组间的比较采用单因素方差分析，P＜0.05视为检验结果有差异。数据表示为均数±标准差(mean±SD)。GraphPad Prism 7.0软件做柱状图和线图。
三、实验结果
1、细胞实验化合物活性表
表B
Figure BDA0002266407890000321
抑制率计算公式为：
Figure BDA0002266407890000331
如表B所示，实验表明，本发明化合物大多数化合物对IL-23mRNA抑制率超过50％(优于美沙拉嗪或与美沙拉嗪相当)，且绝大多数化合物对cyclinD1 mRNA有一定上调作用，其中，上调程度超过1.5的化合物有19个化合物。此外，对IL-23mRNA抑制率超过50％(平均值)且对cyclinD1 mRNA上调作用超过1.5(平均值)的化合物有14个。与此相反，阳性对照药美沙拉嗪只能抑制IL-23mRNA表达，对cyclinD1 mRNA没有上调作用，甚至表现出轻微的下调作用(平均值为0.9)。
2、动物实验结果
图1示出化合物A1对小鼠结肠炎模型的治疗作用。其中A是C57小鼠在DSS造模及同步口服给药(10mg/kg和20mg/kg的化合物A1以及50mg/kg美沙拉嗪)期间的体重变化(N＝5-7)。B是DSS造模7天，给药10天后，小鼠结肠的照片以及结肠长度统计(N＝5-7)。C是小鼠结肠组织的IBD相关蛋白的mRNA表达检测结果。D是小鼠血清炎性因子水平ELISA检测结果。E是小鼠结肠标本H&E染色结果，显示出结肠部分的隐窝破坏和炎症浸润情况。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
结果显示，化合物A1可以剂量依赖地改善DSS诱导的IBD小鼠肠粘膜破坏和炎性浸润，促进小鼠的体重恢复和结肠长度恢复，降低外周血和肠道TNFα、IL-1β和IL-23的水平和肠道这些炎症细胞因子mRNA表达量，提高cyclin D1的mRNA表达量。以上数据表明化合物A1对小鼠急性IBD的病情有显著的改善作用。
图2示出化合物A1在3mg/kg和20mg/kg两种浓度下，经口服给药途径后，24h内小鼠的血药浓度变化。结果显示，小鼠口服3mg/kg和20mg/kg的化合物A1后的血药峰浓度分别是175ng/mL，700ng/mL，达峰时间大约为1小时；半衰期约为1.72小时；药时曲线下面积分别为410(h*ng/mL)和2363(h*ng/mL)，提示暴露量和剂量有线性关系。
图3示出化合物A1对小鼠来源的肠类器官的生长的促进作用。其中A为小鼠结肠隐窝分离并在覆有WNER培养基的Matrigel基质胶中的生长情况，化合物A1的浓度为50μM，使用Zeiss 710活细胞成像仪拍摄，并对类器官的大小和出芽率进行了统计，采用Image J软件进行分析(N＝5)。B为第7天收集类器官后，提取RNA进行肠道干细胞标记基因检测(N＝5)。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
结果显示，化合物A1对小鼠来源的肠类器官的生长有明显的促进作用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 中国科学院上海药物研究所
复旦大学
<120> 双酰肼结构类化合物、其制备方法及其应用
<130> P2019-1393
<160> 15
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
ctgtccctgt atgcctctg 19
<210> 2
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<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 2
atgtcacgca cgatttcc 18
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 3
agtgtgaaga tggttgtgac ccac 24
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ctccttaatg tcacgcacga t 21
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cggtcgttga ggaggttgg 19
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ctgctctctg ctcccagtct 20
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ataccccatc ccttttgagc 20
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gaacttcagg gtcagcttgc 20
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ctgggacagt gacctggact 20
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gcacctcagg gaagagtctg 20
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tcgctcaggg tcacaagaaa 20
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<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 15
catcagaggc aaggaggaaa a 21

Claims (4)

1.一种化合物或其药学可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自以下化合物：
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸甲酯，
2-(2-(4-乙酰氨基苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-苯甲酰氨基苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙基氨基甲酰基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(三氟甲基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(恶唑-5-基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(6-氯烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(6-溴烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)-3-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)-2-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(2-氯-4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(3-氯-4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(3-(环丙烷甲酰氨基)-4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
3-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚-5-烯-2-羧酸，
3-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环丙烷-1-羧酸，
4,5-二溴-2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-3,6-二氟苯甲酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-3,6-二氟苯甲酸，
2-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)苯甲酸，
3-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(2-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(2,4-二氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-2-萘甲酸。
2.一种式III化合物或其药学可接受的盐在制备治疗或预防炎症性肠道疾病药物及药物组合物中的用途；
式中，
Figure FDA0004055419890000021
Q选自下组：氢、卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基、C1-C6卤代烷基、或-L1-M；
G选自下组：氢、卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基、C1-C6卤代烷基、或-L1-M；
A独立地选自下组：取代或未取代C3-12环烷基、取代或未取代C6-C14芳基、取代或未取代6-14元杂芳基；其中，所述取代选自下组的一个或多个：卤素、羟基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氨基、羟甲基或C1-C6卤代烷基；
L1为-NHC(＝O)-；
M独立地选自下组：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代或未取代C3-C8环烷基、取代或未取代C6-C14芳基、取代或未取代6-14元杂芳基；且所述取代选自下组的一个或多个：卤素、硝基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷氨基；
K独立地为-C(＝O)O-R2，其中，R2独立地选自下组：氢、C1-C6烷基。
3.一种化合物或其药学可接受的盐在制备治疗或预防炎症性肠道疾病药物及药物组合物中的用途，其特征在于，所述化合物选自：
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸甲酯，
2-(2-(4-(3-甲基丁酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-乙酰氨基苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-苯甲酰氨基苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环己烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙基氨基甲酰基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(叔丁基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(三氟甲基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(恶唑-5-基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(3-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(2-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(2,4-二氯苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(6-氯烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(6-溴烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)-3-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)-2-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(2-氯-4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(3-氯-4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(3-(环丙烷甲酰氨基)-4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
3-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚-5-烯-2-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)苯甲酸，
3-(2-(4-(环丙烷甲酰氨基)苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环丙烷-1-羧酸，
4,5-二溴-2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-3,6-二氟苯甲酸，
2-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-3,6-二氟苯甲酸，
2-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)苯甲酸，
3-(2-(4-氟苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(4-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(3-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(2-氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(2,4-二氯苯甲酰基)肼-1-羰基)双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，
3-(2-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯甲酰基)肼-1-羰基)-2-萘甲酸。
4.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐；和药学上可接受的载体。
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