CN112543636A - 治疗与egfr突变相关的癌症的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了普那布林和其用于治疗以表达表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的突变形式为特征的癌症或肿瘤的用途，其包括将普那布林(plinabulin)施用至有所需要的对象。

Description

治疗与EGFR突变相关的癌症的组合物和方法

参照优先权申请的合并

本申请要求享有2018年6月1日提交的美国临时申请No.62/679,619的优先权的权益，该临时申请的全部内容通过引用合并于此。

发明背景

发明领域

本发明涉及化学和医学领域。更具体地，本发明涉及治疗与表皮生长因子受体相关的癌症的方法。

背景技术的描述

能够催化蛋白质在酪氨酸残基上的磷酸化反应的酶称为酪氨酸激酶。许多跨膜受体包含具有酪氨酸激酶活性的结构域，并被分类为受体酪氨酸激酶(RTK)。该RTK家族有多个成员，其中I类包括erbB家族，例如表皮生长因子受体(EGFR)、erbB2、erbB3和erbB4。EGFR酪氨酸激酶结构域通过多种配体与外部结构域的结合而被激活。

已知受体酪氨酸激酶的erbB家族经常参与驱动肿瘤细胞的增殖和存活。发生这种现象的一种机制是受体在蛋白质水平上的过度表达，例如由于基因扩增。这已在许多常见的人类癌症中观察到，例如非小细胞肺癌(NSCLC)，包括腺癌以及其他肺癌。EGFR在多种上皮癌中明显过表达，一些免疫组织化学研究表明EGFR表达与不良预后有关。需要开发可以治疗EGFR相关癌症的药物。

概要

一些实施方式涉及治疗以表达表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的突变形式为特征的癌症或肿瘤的方法，其包括将普那布林(plinabulin)施用至有所需要的对象。在一些实施方式中，所述治疗以表达EGFR蛋白的突变形式为特征的癌症或肿瘤的方法包括向有所需要的对象施用有效量的普那布林。

一些实施方式涉及抑制具有EGFR突变的细胞或表达EGFR蛋白的突变形式的细胞的增殖的方法，其包括使细胞与普那布林接触。在一些实施方式中，抑制细胞增殖的方法

一些实施方式涉及一种抑制一对象中以表达EGFR蛋白的突变形式为特征的癌症的进展的方法，其包括向有所需要的对象施用普那布林。

一些实施方式涉及一种治疗癌症或肿瘤的方法，其包括将普那布林和奥西替尼(osimertinib)共同施用给有所需要的对象。

一些实施方式涉及一种包含普那布林和奥西替尼的药物组合物。

附图的简要说明

图1显示了六个测试组中肿瘤大小的变化。

图2a显示了在第6天肿瘤大小的变化；图2b显示了在第9天肿瘤大小的变化；图2c显示了在第13天的肿瘤大小的变化；图2d显示了EGFR突变小鼠在第24天的普那布林剂量反应曲线。

优选实施方式的详细说明

普那布林，(3Z，6Z)-3-苯亚甲基-6-{[5-(2-甲基-2-丙基)-1H-咪唑-4-基]亚甲基}-2，5-哌嗪二酮，是天然化合物苯海拉斯汀(phenylahistin)的合成类似物。可以根据美国专利7,064,201和7,919,497中详述的方法和步骤可以容易地制备普那布林，其通过整体引用并入本文。一些实施方式涉及普那布林在治疗与致癌EGFR突变相关的癌症中的用途。一些实施方式涉及普那布林在治疗一对象中以表达EGFR蛋白的突变形式为特征的癌症中的用途。一些实施方式涉及普那布林在抑制具有EGFR突变的细胞的增殖中的用途。一些实施方式涉及普那布林在具有EGFR突变的细胞中诱导细胞凋亡的用途。一些实施方式涉及普那布林在抑制一对象中以表达EGFR蛋白的突变形式为特征的癌症的进展中的用途。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。所有专利、申请、公开的申请和其他出版物均通过引用全文纳入本文。在本文术语有多个定义的情况下，除非另有说明，否则以本节中的定义为准。

如本文所用，“对象”是指人类或非人哺乳动物，例如狗、猫、小鼠、大鼠、牛、绵羊、猪、山羊、非人灵长类动物，或鸟类，例如鸡，以及任何其他脊椎动物或无脊椎动物。

术语“哺乳动物”以其通常的生物学意义使用。因此，它特别包括但不限于灵长类动物，包括猿猴(黑猩猩、猿、猴)和人、牛、马、绵羊、山羊、猪、兔、狗、猫、啮齿动物、大鼠、小鼠、豚鼠等。

如本文所用，“有效量”或“治疗有效量”是指在一定程度上有效减轻或降低疾病或病症的某种或多种症状发生的可能性(包括治愈疾病或病症)的治疗剂的量。

如本文所用，“治疗”、“处理”或“治疗的”是指为了预防和/或治疗目的而向对象施用化合物或药物组合物。术语“预防性治疗”是指对尚未表现出疾病或病症的症状，但是易感于特定疾病或病症，或以其他方式处于该特定疾病或病症的风险中的对象的治疗，使得该治疗降低了患者发展所述疾病或病症的可能性。术语“治疗性治疗”是指对已经患有疾病或病症的对象进行的治疗。

术语“药学上可接受的盐”是指保留化合物的生物学效力和性质，并且不是在生物学上或其他方面不适合用于药物的盐。在许多情况下，由于存在氨基和/或羧基或与其类似的基团，本文公开的化合物能够形成酸和/或碱式盐。药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸和有机酸形成。可以衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、甲苯磺酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。药学上可接受的盐也可以使用无机和有机碱形成。可以衍生盐的无机碱包括，例如，含有钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等的碱；特别优选的是铵、钾、钠、钙和镁盐。在一些实施方式中，用无机碱处理本文公开的化合物导致化合物中不稳定氢的丢失，从而得到包括无机阳离子(例如Li⁺、Na⁺、K⁺、Mg²⁺和Ca²⁺等)的盐形式。可以衍生盐的有机碱包括，例如伯、仲和叔胺、取代胺，包括天然存在的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等，特别是异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。许多这样的盐是本领域已知的，如1987年9月11日公开的Johnston等的WO87/05297(在此引用整体并入本文)中所描述的。

术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这种介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域众所周知的。除非任何常规介质或试剂与所述活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗组合物中。另外，可以包括各种佐剂，例如本领域常用的佐剂。在药物组合物中包括各种成分的注意事项描述于例如Gilman等(编辑)(1990)；Goodman和Gilman的：《治疗学的药理基础》，第8版，佩加蒙出版社(Pergamon Press)，通过引用将其全部内容并入本文。

药物成分与施用

一些实施方式涉及用于治疗癌症或肿瘤的药物组合物，所述癌症或肿瘤的特征在于表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的突变形式的表达，其中所述组合物包含普那布林。

一些实施方式涉及一种包含普那布林和奥西替尼的药物组合物。

在一些实施方式中，包含普那布林的组合物可以进一步包括一种或多种药学上可接受的稀释剂。在一些实施方式中，所述药学上可接受的稀释剂可以包括Kolliphor HS

(聚乙二醇(15)-羟基硬脂酸酯)。在一些实施方式中，所述药学上可接受的稀释剂可包括丙二醇。在一些实施方式中，所述药学上可接受的稀释剂可包括kolliphor和丙二醇。在一些实施方式中，所述药学上可接受的稀释剂可包括kolliphor和丙二醇，其中，基于稀释剂的总重量，kolliphor的重量为约40％，丙二醇重量为约60％。在一些实施方式中，所述组合物可以进一步包括一种或多种其他药学上可接受的赋形剂。

可以使用标准药物配制技术来制备如本文所述的药物组合物，例如在Remington的《药学科学与实践》，第21版，Lippincott Williams&Wilkins(2005)中公开的那些，其通过引用全文并入本文。因此，一些实施方式包括药物组合物，其包含：(a)安全和治疗有效量的普那布林或其药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。

其他实施方式包括通过单独的组合物或在同一组合物中联合施用普那布林和其他治疗剂。因此，一些实施方式包括第一药物组合物，其包含：(a)安全和治疗有效量的普那布林或其药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合；和第二药物组合物，其包含：(a)安全和治疗有效量的其他治疗剂，和(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。一些实施方式包括一种药物组合物，其包含：(a)安全和治疗有效量的普那布林(plinabulin)或其药学上可接受的盐；(b)安全和治疗有效量的其他治疗剂；和(c)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。

对如下所述或本文其他地方所述的药物组合物的施用可以通过具有类似效用的试剂的任何可接受的给药方式，包括但不限于口服、舌下、颊、皮下、静脉内、鼻内、局部、透皮、皮内、腹膜内、肌肉内、肺内、阴道、直肠或眼内。作为优选的实施方式，口服和肠胃外给药对于治疗对象的适应症是常规的。

可以用作药学上可接受的载体或其组分的物质的一些实例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，例如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可属油；多元醇，例如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，例如TWEENS；润湿剂，如十二烷基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂，稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水；和磷酸盐缓冲液。

如本文所述的组合物优选以单位剂型提供。如本文所用，“”是包含一定量的化合物或组合物的组合物，根据良好医学实践，该一定量的化合物或组合物适合向动物，优选哺乳动物对象单次给药。然而，单次剂型或单位剂型的制备并不意味着该剂型每天施用一次或每个疗程施用一次。预期此类剂型每天一次、两次、三次或更多次施用，并且可以在一段时间(例如约30分钟至约2-6小时)内进行输注施用，或进行连续输注施用，并且在治疗过程中可以多次施用，尽管未明确排除单次施用。本领域技术人员将认识到，所述制剂并未具体地考虑整个治疗过程，并且由治疗领域的技术人员决定，而非制剂。

如上所述的有用的组合物可以以各种合适的剂型中的任何一种，用于各种给药途径，例如口服、舌下、颊、鼻、直肠、局部(包括透皮和皮内)、眼、脑内、颅内、鞘内、动脉内、静脉内、肌肉内或其他肠胃外给药途径。本领域技术人员将理解，口服和鼻用组合物包括通过吸入施用并使用可行方法制备的组合物。根据所需的特定给药途径，可以使用本领域众所周知的多种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括例如固体或液体填充剂、稀释剂、水溶助长剂、表面活性剂和包囊物质。可以包括任选的基本上不干扰化合物或组合物的活性的药物活性材料。与化合物或组合物结合使用的载体的量足以提供施用每单位剂量化合物的材料的实际量。制备可用于本文所述方法的剂型的技术和组合物描述于以下文献：《现代药学》，第4版，第9和10章(Banker&Rhodes编辑，2002年)；Lieberman等，《药物剂型：片剂》(1989)；和Ansel，《药物剂型简介》第8版(2004年)，其全部通过引用并入本文。

可以使用各种口服剂型，包括例如片剂、胶囊(例如，液体凝胶胶囊和固体凝胶胶囊)、颗粒和散装粉末的固体形式。片剂可以被压片、磨粉、包有肠溶衣，糖衣，薄膜包衣或多次压片，其中含有合适的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂和熔融剂。液体口服剂型包括由非泡腾颗粒重构的水溶液、乳剂、悬浮液、溶液和/或悬浮液，以及由泡腾颗粒重构的泡腾制剂，其包含合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、熔融剂、着色剂和调味剂。

适合制备用于口服施用的单位剂型的药学上可接受的载体是本领域众所周知的。片剂通常包含常规的药学上相容的佐剂作为惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、乳糖和纤维素；粘合剂，例如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂，例如淀粉、藻酸和交联羧甲基纤维素；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉。助流剂(例如二氧化硅)可用于改善粉末混合物的流动特性。可以添加着色剂(例如FD&C染料)以改善外观。甜味剂和调味剂，例如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果香料，是可咀嚼片剂的有用佐剂。胶囊通常包含以上公开的一种或多种固体稀释剂。载体组分的选择取决于次要因素，例如味道、成本和贮存稳定性，这不是关键的，并且本领域技术人员可以容易地制备。

口服组合物还包括液体溶液、乳液、悬浮液等。适用于制备此类组合物的药学上可接受的载体是本领域众所周知的。用于糖浆、酏剂(elixirs)、乳剂和悬浮液的载体的典型成分包括乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨糖醇和水。对于悬浮液，典型的悬浮剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、AVICEL RC-591、西黄蓍胶和藻酸钠；典型的润湿剂包括卵磷脂和聚山梨酯80；典型的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。口服液体组合物还可包含一种或多种组分，例如以上公开的甜味剂、调味剂和着色剂。

这样的组合物也可以通过常规方法进行包衣，通常使用pH或时间依赖性包衣，以使本发明的组合物在胃肠道中所需局部给药的附近释放，或在不同时间释放以延长所需作用。这种剂型通常包括但不限于乙酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙基纤维素，尤特奇(Eudragit)包衣、蜡和虫胶中的一种或多种。

本文所述的组合物可任选地包含其他药物活性成分。

可用于全身递送主题化合物的其他组合物包括舌下、颊和鼻剂型。这样的组合物通常包含一种或多种可溶性填充剂物质，例如蔗糖、山梨糖醇和甘露糖醇；以及粘合剂，例如阿拉伯胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。也可以包括以上公开的助流剂、润滑剂、甜味剂、着色剂、抗氧化剂和调味剂。

配制用于局部眼科用途的液体组合物，使得其可以局部施用于眼睛。应当尽可能地使舒适度最大化，尽管有时出于配制考虑(例如药物稳定性)，可能无法达到最佳舒适度。在不能最大程度地提高舒适度的情况下，可以配制对局部眼科应用的患者而言是可容忍的液体。另外，眼科上可接受的液体可以被包装，以供单次使用，或包含防腐剂以防止多次使用时的污染。

对于眼科应用，通常使用生理盐水溶液作为主要媒介物来制备溶液或药物。眼药溶液可以优选地用适当的缓冲系统保持在舒适的pH下。该制剂还可以包含常规的药学上可接受的防腐剂、稳定剂和表面活性剂。

可用于本文公开的药物组合物中的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、PHMB、氯丁醇、硫柳汞、苯汞乙酸盐和苯汞硝酸盐。有用的表面活性剂是例如吐温80。同样地，各种有用的载体可以用于本文公开的眼科制剂中。这些载体包括但不限于聚乙烯醇、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素和纯净水。

张力调节剂可根据需要或方便性添加。它们包括但不限于盐(特别是氯化钠、氯化钾)、甘露醇和甘油，或任何其他合适的眼科可接受的张力调节剂。

可以使用各种缓冲剂和调节pH的手段，只要所得制剂是眼科可接受的。对于许多组合物，pH值在4到9之间。相应地，缓冲剂包括乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和硼酸盐缓冲剂。根据需要，可以使用酸或碱来调节这些制剂的pH。

眼科上可接受的抗氧化剂包括但不限于焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁基化羟基茴香醚和丁基化羟基甲苯。

可以包含在眼科制剂中的其他赋形剂成分是螯合剂。有用的螯合剂是乙二胺四乙酸二钠(EDTA)，尽管其他螯合剂也可以代替或与其结合使用。

对于局部使用，使用包含本文公开的组合物的霜剂、软膏、凝胶、溶液或混悬液等。局部用制剂通常可包含药物载体、助溶剂、乳化剂、渗透促进剂、防腐剂系统和润肤剂。

对于静脉内给药，可以将本文所述的组合物溶解或分散在药学上可接受的稀释剂中，例如盐水或右旋糖溶液中。可包括合适的赋形剂以达到所需的pH，包括但不限于NaOH、碳酸钠、乙酸钠、HCl和柠檬酸。在各种实施方式中，最终组合物的pH为2至8，或优选为4至7。抗氧化剂赋形剂可包括亚硫酸氢钠、丙酮亚硫酸氢钠、甲醛钠、亚硫酸盐、硫脲和EDTA。在最终的静脉内组合物中发现的合适的赋形剂的其他非限制性实例可以包括磷酸钠或磷酸钾、柠檬酸、酒石酸、明胶和碳水化合物，例如右旋糖、甘露醇和葡聚糖。其他可接受的赋形剂被描述于Powell等，《肠胃外制剂赋形剂简编》，PDA J Pharm Sci and Tech 1998，52 238-311和Nema等，《赋形剂及其在批准的注射用产品中的作用：当前用法和未来方向》，PDA JPharm Sci and Tech 2011，65 287-332，二者均通过引用整体并入本文。还可以包括抗菌剂以获得抑细菌或抑真菌溶液，包括但不限于硝酸苯汞、硫柳汞、苄索氯铵、苯扎氯铵、苯酚、甲酚和氯丁醇。

用于静脉内施用的组合物可以以一种或多种固体的形式提供给护理人员，所述固体在施用前不久用合适的稀释剂例如无菌水、盐水或葡萄糖水溶液溶解。在其他实施方式中，所述组合物以易于肠胃外给药的溶液形式提供。在其他实施方式中，所述组合物以溶液形式提供，所述溶液在给药前进一步稀释。在包括施用本文所述的化合物和另一种药剂的组合的实施方式中，可以将组合物以混合物的形式提供给护理人员，或者护理人员可以在施用之前将两种药剂混合，或者可以将两种药剂分开施用。

本文所述的活性化合物的实际剂量取决于具体的化合物，以及要治疗的病症；合适剂量的选择完全在本领域技术人员的知识范围内。在一些实施方式中，普那布林或其他治疗剂的单次剂量可为约5mg/m²至约150mg/m²体表面积、约5mg/m²至约100mg/m²体表面积、约10mg/m²至约100mg/m²体表面积、约10mg/m²至约80mg/m²体表面积、约10mg/m²至约50mg/m²体表面积、约10mg/m²至约40mg/m²体表面积、约10mg/m²至约30mg/m²体表面积、约13.5mg/m²至约100mg/m²体表面积、约13.5mg/m²至约80mg/m²体表面积、约13.5mg/m²至约50mg/m²体表面积、约13.5mg/m²至约40mg/m²体表面积、约13.5mg/m²至约30mg/m²体表面积、约15mg/m²至约80mg/m²体表面积、约15mg/m²至约50mg/m²体表面积，或约15mg/m²至约30mg/m²体表面积。在一些实施方式中，普那布林或其他治疗剂的单次剂量可以为约13.5mg/m²至约30mg/m²体表面积。在一些实施方式中，普那布林或其他治疗剂的单次剂量可以为约2mg/m²、约5mg/m²、约10mg/m²、约12.5mg/m²、约13.5mg/m²、约15mg/m²、约17.5mg/m²、约20mg/m²、约22.5mg/m²、约25mg/m²、约27.5mg/m²、约30mg/m²、约40mg/m²、约50mg/m²、约60mg/m²、约70mg/m²、约80mg/m²、约90mg/m²或约100mg/m²体表面积。在一些实施方式中，单次剂量的普那布林或其他治疗剂可以为约2mg/m²至约40mg/m²，或5mg/m²至约35mg/m²。

在一些实施方式中，普那布林或其他治疗剂的单次剂量可为5mg至300mg、约5mg至约300mg、5mg至200mg、约5mg至约200mg、7.5mg至200mg、约7.5mg至约200mg、10mg至100mg、约10mg至约100mg、约15mg至约100mg、约20mg至约100mg、约30mg至约100mg、约40mg至约100mg、约10mg至约80mg、约15mg至约80mg、约20mg至约80mg、约30mg至约80mg、约40mg至约80mg、约10mg至约60mg、约15mg至约60mg、约20mg至约60mg、约30mg至约60mg，或约40mg至约60mg。在一些实施方式中，普那布林或其他治疗剂的单次剂量可为20mg至60mg、27mg至60mg、20mg至45mg，或27mg至45mg。在一些实施方式中，普那布林或其他治疗剂的单次剂量可为约20mg至约60mg、约27mg至约60mg、约20mg至约45mg，或约27mg至约45mg。在一些实施方式中，普那布林或其他治疗剂的单次剂量可为约5mg、10mg、12.5mg、13.5mg、15mg、17.5mg、20mg、22.5mg、25mg、27mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、125mg、150mg或200mg。

只要肿瘤保持可控并且该方案在临床上可以耐受，则给药期可以是数周的治疗周期。在一些实施方式中，在三周(21天)治疗周期中，可以每周一次，优选在第1天和第8天每天一次施用单次剂量的普那布林或其他治疗剂。在一些实施方式中，可以在一周、两周、三周、四周或五周的治疗周期内每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次施用单次剂量的普那布林或其他治疗剂。给药可以在治疗周期的每周的同一日或不同日。

治疗方法

一些实施方式涉及治疗以表达表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的突变形式为特征的癌症或肿瘤的方法，其包括将普那布林施用至有所需要的对象。在一些实施方式中，施用步骤包括向有所需要的对象施用有效量的普那布林。一些实施方式涉及治疗癌症或肿瘤的方法，其包括将普那布林和奥西替尼共同施用给有所需要的对象。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤的特征在于表达表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的突变形式。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤选自鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、头颈部上皮肿瘤、肺鳞状癌、肝细胞癌、结肠癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤，和肝细胞癌。在一些实施方式中，所述癌症或肿瘤选自转移性结直肠癌(CRC)；乳腺癌；NSCLC(ALK阳性)；肾细胞癌(RCC)；甲状腺癌；转移性髓质NSCLC(克唑替尼(crizotinib)耐药后ALK阳性)；具有BRAF突变的黑色素瘤；NSCLC(ALK阳性或ROS1阳性)；黑色素瘤和具有BRAF突变的NSCLC；胰腺癌；乳腺癌(ER2阴性)；胰腺源性进行性神经内分泌肿瘤(PNET)(不可切除、局部晚期或转移性的)；肾血管平滑肌脂肪瘤；室管膜下巨细胞星形细胞瘤；套细胞淋巴瘤；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；瓦尔登斯特罗姆(Waldenstrom)巨球蛋白血症；费城染色体阳性慢性粒细胞白血病(Ph+CML)；处于急性转化期(BC)(Ph+CML)；处于加速期(AP)(Ph+CML)；处于慢性期(CP)(Ph+CML)；费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)；与PDGFR(血小板源性生长因子受体)基因重排有关的骨髓增生异常/骨髓增生性疾病(MDS/MPD)；无D816V c-Kit突变的侵袭性全身肥大细胞增多症(ASM)；具有FIP1L1-PDGFRα融合激酶(突变分析或FISH证实的CHISH2等位基因缺失)的高嗜酸性粒细胞综合征(HES)和/或慢性嗜酸性粒细胞白血病(CEL)；不可切除的、复发的和/或转移性的隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；转移性恶性胃肠道间质瘤(GIST)；MDS/MDP；急性髓细胞性白血病；肥大细胞增多症；肥大细胞白血病；HER+乳腺癌；特发性肺纤维化(IPF)；乳腺癌(ER+和HER2+)；软组织肉瘤；骨髓纤维化；真性红细胞增多症；肾移植；淋巴管平滑肌瘤病；已分化的甲状腺癌；肝细胞癌；胰腺神经内分泌肿瘤；晚期RCC；黑色素瘤；髓样甲状腺癌；多发性骨髓瘤，或其任何组合。在一些实施方式中，所述癌症是具有BRAFV600E突变的黑素瘤。在一些实施方式中，所述癌症是NSCLC。在一些实施方式中，所述癌症是受体(EGFR)T790M突变阳性的非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方式中，所述癌症是多发性骨髓瘤。

在一些实施方式中，上文或本文其他地方所述的治疗是针对经FDA批准的试验检测到的在EGFR TKI治疗中或之后发展的具有转移性表皮生长因子受体(EGFR)T790M突变阳性的非小细胞肺癌(NSCLC)的患者，其中，EGFR TKI包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼和/或奥西替尼。

一些实施方式涉及抑制具有表皮生长因子受体(EGFR)突变的细胞或表达EGFR蛋白的突变形式的细胞的增殖的方法，其包括使细胞与普那布林接触。在一些实施方式中，所述细胞是癌细胞。在一些实施方式中，接触步骤包括对具有该细胞的对象施用普那布林。在一些实施方式中，接触步骤包括向具有该细胞的对象施用有效量的普那布林。

一些实施方式涉及一种抑制一对象中表达以EGFR蛋白的突变形式为特征的癌症的进展的方法，其包括向有所需要的对象施用普那布林。在一些实施方式中，施用步骤包括向有所需要的对象施用有效量的普那布林。

在本文所述的一些实施方式中，EGFR蛋白的突变形式包括选自下组的一个或多个位点的突变：G719、L858、L861、T790、T854、D761、外显子19和外显子20。在一些实施方式中，外显子19上的突变包括外显子19中的缺失突变。在一些实施方式中，外显子20上的突变包括外显子20中的插入突变。在一些实施方式中，EGFR蛋白的突变形式包含选自下组的一个或多个位点的一种或多种氨基酸取代：G719S、G719C、G719A、L858R、L861Q、T854A和D761Y。在一些实施方式中，EGFR蛋白的突变形式包含T790M的氨基酸取代。

在一些实施方式中，上文或本文其他地方描述的方法包括确定对象是否具有EGFR突变。在一些实施方式中，以上或本文其他地方描述的方法包括鉴定对象是否患有转移性EGFR T790M突变阳性肿瘤。

在一些实施方式中，本文描述的方法包括施用一种或多种其他活性疗法。在一些实施方式中，本文所述的方法包括施用一种或多种其他活性剂。在一些实施方式中，其他活性剂是其他化学治疗剂。在一些实施方式中，其他化学治疗剂是奥西替尼。在一些实施方式中，其他化学治疗剂是酪氨酸激酶抑制剂。在一些实施方式中，其他疗法是放射疗法。

在一些实施方式中，酪氨酸激酶抑制剂(例如，奥西替尼)在普那布林施用之前、同时或之后施用。在一些实施方式中，酪氨酸激酶抑制剂在普那布林施用之前施用。在一些实施方式中，酪氨酸激酶抑制剂在普那布林施用之后施用。在一些实施方式中，酪氨酸激酶抑制剂与普那布林同时施用。在一些实施方式中，所述酪氨酸激酶抑制剂选自下组：阿卡拉布替尼(Acalabrutinib)(ACP-196)、阿法替尼(Afatinib)(BIBW 2992，Tovok，OWN，PDB ID：4G5J(结合有EGFR))、阿来替尼(Alectinib)(CH5424802，Alecensa，EMH，PDB ID:3AOX(结合有ALK))、阿西替尼(Axitinib)(AG-013736，Inlyta，AXI，PDB ID：4AG8(结合有VEGFR2))、博司替尼(Bosutinib)(SKI-606，BOSULIF，DB8，PDB ID：3UE4(结合有Abl))、百加替尼(Brigatinib)(AP 26113，Alunbrig，PDB ID：5J7H(结合有ALK))、卡博扎替尼(Cabozantinib)(XL-184，BMS-907351，Cometriq，无X射线结构)、色瑞替尼(Ceritinib)(LDK378，Zykadia，4MK，PDB ID：4MKC(结合有ALK))、考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，EUI，Cotellic，PDB ID：4AN2(结合有MEK1))、克唑替尼(Crizotinib)(PF 2341066，VGH，Xalkori，PDB：2XB2(ALK)、3ZBF(ROS)、2WGJ(结合有MET))、达布拉非尼(Dabrafenib)(GSK2118436，Tafinlar，P06，PDB ID：5CSW(结合有B-Raf))、达沙替尼(Dasatinib)(BMS-354825，Sprycel，1N1，PDB ID：2GQG(结合有Abl))、厄洛替尼(Erlotinib)(CP-358774，OSI-774，Tarceva，AQ4，PDB ID：4HJO和1M17(结合有EGFR))、依维莫司(Everolimus)(RAD001，Afinitor)、吉非替尼(Gefitinib)(ZD1839，Iressa，IRE，PDB ID：4WKQ和2ITY(结合有EGFR))、伊布替尼(Ibrutinib)(PCI-32765，Imbruvica，PDB ID：5P9J(结合有BTK1))、伊马替尼(Imatinib)(STI571，Gleevec，STI，PDB ID：2HYY和1IEP(结合有Abl))、拉帕替尼(Lapatinib)(GW572016，Tykerb，FMM，PDB ID：1XKK(结合有EGFR))、乐伐替尼(Lenvatinib)(AK175809，Lenvima，LEV，PDB ID：3WZD(结合有VEGFR2))、米哚妥林(Midostaurin)(PKC412，CPG 41251，Rydapt)、来那替尼(Neratinib)(HKI-272，PDB ID：2JIV(结合有EGFR))、尼洛替尼(Nilotinib)(AMN107，Tasigna，NILK，PDB ID：3CS9(结合有Abl))、尼达尼布(Nintedanib)(BIBF-1120，Vargatef，XIN，PDB ID：3C7Q(结合有VEGFR2))、奥希替尼(Osimertinib)(AZD-9292，Tagrisso)、帕洛昔布(Palbociclib)(PD-0332991，Ibrance，LQQ，PDB ID：5L2I)、帕唑帕尼(Pazopanib)(GW786034，Votrient)、泊那替尼(Ponatinib)(AP 24534，Iclusig，OLI，PDB ID：4U0I(结合有Kit)、3OXZ(结合有Abl)、1UWH(结合有B-Raf))、瑞戈菲尼(Regorafenib)(BAY 73-4506，Stivarga)、瑞博西林(Ribociclib)(LEE011，Kisqali，PDB ID：5L2T)、鲁索替尼(Ruxolitinib)(INCB-018424，Jakafi，RXT，PDBID：4U5J(结合有Src))、西罗莫司(Sirolimus)(雷帕霉素(Rapamycin))、索拉非尼(Sorafenib)(BAY 43-9006，Nexavar，BAX，PDB ID：4ASD(结合有VEGFR2))、舒尼替尼(Sunitinib)(SU-11248，Sutent，B49，PDB ID：4AGD(结合有VEGFR2))、坦罗莫司(Temsirolimus)(CCI-779，Torisel)、托法替尼(Tofacitinib)(CP-690550，Tasocitinib，MI1，PDB ID：3EYG(结合有JAK1)、3LXK(结合有JAK3))、曲美替尼(Trametinib)(Mekinist)、凡德他尼(Vandetanib)(ZD6474，Zactima，ZD6，PDB ID：2IVU(结合有RET))、维罗非尼(Vemurafenib)(PLX-4032，Zelboraf，O32，PDB ID：4RZV和3OG7(结合有B-Raf))，及其任意组合。在一些实施方式中，所述酪氨酸激酶抑制剂是奥西替尼。在一些实施方式中，如上所述或本文其他地方所述的酪氨酸激酶抑制剂(例如，奥西替尼)经口服施用。在一些实施方式中，以80mg或约80mg每天的剂量施用奥西替尼。在一些实施方式中，以如下或约10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg，或200mg每天的剂量施用奥西替尼。在一些实施方式中，以每天1mg至200mg、每天约1mg至约200mg、每天10mg至200mg、每天约10mg至约200mg、每天20mg至160mg、每天约20mg至约160mg、每天40mg至160mg、每天约40mg至约160mg、每天40mg至140mg、每天约40mg至约140mg的范围的剂量施用奥西替尼。在一些实施方式中，以每天60mg至100mg，或约60mg至约100mg的范围的剂量施用奥西替尼。在一些实施方式中，以大于或大于约5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg或200mg每天的剂量施用奥西替尼。在一些实施方式中，以小于或小于约5mg、10mg、20mg、20mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg或200mg每天的剂量施用奥西替尼。

在一些实施方式中，普那布林与酪氨酸激酶抑制剂(例如奥西替尼)联合施用。在一些实施方式中，普那布林通过肠胃外给药。在一些实施方式中，普那布林通过肌肉内给药。在一些实施方式中，普那布林通过静脉内给药。在一些实施方式中，以2.5至35mg/mm²或约2.5至约35mg/mm²范围内的剂量施用普那布林。在一些实施方式中，以2.5至40mg/mm²、约2.5至约40mg/mm²、5至40mg/mm²,或约5至约40mg/mm²范围内的剂量施用普那布林。在一些实施方式中，以2.5至37.5mg/mm²、约2.5至约37.5mg/mm²、5至35mg/mm²，或约5至约35mg/mm²范围内的剂量施用普那布林。在一些实施方式中，普那布林和奥西替尼按不同的时间安排施用。在一些实施方式中，普那布林和奥西替尼按相同的时间安排施用。在一些实施方式中，以1-50mg/m²或约1-50mg/m²体表面积范围内的剂量施用普那布林。在一些实施方式中，以以下或约以下范围的剂量施用普那布林：1-2,1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10、1-11、1-12、1-13、1-13.75、1-14、1-15、1-16、1-17、1-18、1-19、1-20、1-22.5、1-25、1-27.5、1-30、1.5-2、1.5-3、1.5-4、1.5-5、1.5-6、1.5-7、1.5-8、1.5-9、1.5-10、1.5-11、1.5-12、1.5-13、1.5-13.75、1.5-14、1.5-15、1.5-16、1.5-17、1.5-18、1.5-19、1.5-20、1.5-22.5、1.5-25、1.5-27.5、1.5-30、2.5-2、2.5-3、2.5-4、2.5-5、2.5-6、2.5-7、2.5-8、2.5-9、2.5-10、2.5-11、2.5-12、2.5-13、2.5-13.75、2.5-14、2.5-15、2.5-16、2.5-17、2.5-18、2.5-19、2.5-20、2.5-22.5、2.5-25、2.5-27.5、2.5-30、2.5-35、2.5-40、2.5-20、3-4、3-5、3-6、3-7、3-8、3-9、3-10、3-11、3-12、3-13、3-13.75、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19、3-20、3-22.5、3-25、3-27.5、3-30、3-40、3-50、3.5-6.5、3.5-13.75、3.5-15、2.5-17.5、4-5、4-6、4-7、4-8、4-9、4-10、4-11、4-12、4-13、4-13.75、4-14、4-15、4-16、4-17、4-18、4-19、4-20、4-22.5、4-25、4-27.5、4-30、5-6、5-7、5-8、5-9、5-10、5-11、5-12、5-13、5-13.75、5-14、5-15、5-16、5-17、5-18、5-19、5-20、5-22.5、5-25、5-27.5、5-30、5-40、5-50、6-7、6-8、6-9、6-10、6-11、6-12、6-13、6-13.75、6-14、6-15、6-16、6-17、6-18、6-19、6-20、6-22.5、6-25、6-27.5、6-30、6-40、6-50、7-8、7-9、7-10、7-11、7-12、7-13、7-13.75、7-14、7-15、7-16、7-17、7-18、7-19、7-20、7-22.5、7-25、7-27.5、7-30、7-40、7-50、7.5-12.5、7.5-13.5、7.5-15、8-9、8-10、8-11、8-12、8-13、8-13.75、8-14、8-15、8-16、8-17、8-18、8-19、8-20、8-22.5、8-25、8-27.5、8-30、8-40、8-50、9-10、9-11、9-12、9-13、9-13.75、9-14、9-15、9-16、9-17、9-18、9-19、9-20、9-22.5、9-25、9-27.5、9-30、9-40、9-50、10-11、10-12、10-13、10-13.75、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18、10-19、10-20、10-22.5、10-25、10-27.5、10-30、10-40、10-50、11.5-15.5、12.5-14.5、7.5-22.5、8.5-32.5、9.5-15.5、15.5-24.5、5-35、17.5-22.5、22.5-32.5、25-35、25.5-24.5、27.5-32.5、2-20、t 2.5-22.5，或9.5-21.5mg/m²体表面积。在一些实施方式中，以以下或约以下的剂量施用普那布林：0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、50mg/m²体表面积。在一些实施方式中，以小于以下或小于约以下的剂量施用普那布林：0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50mg/m²体表面积。在一些实施方式中，以大于以下或大于约以下的剂量施用普那布林：0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50mg/m²体表面积。在一些实施方式中，普那布林的剂量为以下范围或约以下范围：5mg-300mg、5mg-200mg、7.5mg-200mg、10mg-100mg、15mg-100mg、20mg-100mg、30mg-100mg、40mg-100mg、10mg-80mg、15mg-80mg、20mg-80mg、30mg-80mg、40mg-80mg、10mg-60mg、15mg-60mg、20mg-60mg、30mg-60mg，或约40mg-60mg。在一些实施方式中，施用的普那布林的剂量为以下范围或约以下范围：20mg-60mg、27mg-60mg、20mg-45mg，或27mg-45mg。在一些实施方式中，施用的普那布林的剂量为以下范围或约以下范围：5mg-7.5mg、5mg-9mg、5mg-10mg、5mg-12mg、5mg-14mg、5mg-15mg、5mg-16mg、5mg-18mg、5mg-20mg、5mg-22mg、5mg-24mg、5mg-26mg、5mg-28mg、5mg-30mg、5mg-32mg、5mg-34mg、5mg-36mg、5mg-38mg、5mg-40mg、5mg-42mg、5mg-44mg、5mg-46mg、5mg-48mg、5mg-50mg、5mg-52mg、5mg-54mg、5mg-56mg、5mg-58mg、5mg-60mg、7mg-7.7mg、7mg-9mg、7mg-10mg、7mg-12mg、7mg-14mg、7mg-15mg、7mg-16mg、7mg-18mg、7mg-20mg、7mg-22mg、7mg-24mg、7mg-26mg、7mg-28mg、7mg-30mg、7mg-32mg、7mg-34mg、7mg-36mg、7mg-38mg、7mg-40mg、7mg-42mg、7mg-44mg、7mg-46mg、7mg-48mg、7mg-50mg、7mg-52mg、7mg-54mg、7mg-56mg、7mg-58mg、7mg-60mg、9mg-10mg、9mg-12mg、9mg-14mg、9mg-15mg、9mg-16mg、9mg-18mg、9mg-20mg、9mg-22mg、9mg-24mg、9mg-26mg、9mg-28mg、9mg-30mg、9mg-32mg、9mg-34mg、9mg-36mg、9mg-38mg、9mg-40mg、9mg-42mg、9mg-44mg、9mg-46mg、9mg-48mg、9mg-50mg、9mg-52mg、9mg-54mg、9mg-56mg、9mg-58mg、9mg-60mg、10mg-12mg、10mg-14mg、10mg-15mg、10mg-16mg、10mg-18mg、10mg-20mg、10mg-22mg、10mg-24mg、10mg-26mg、10mg-28mg、10mg-30mg、10mg-32mg、10mg-34mg、10mg-36mg、10mg-38mg、10mg-40mg、10mg-42mg、10mg-44mg、10mg-46mg、10mg-48mg、10mg-50mg、10mg-52mg、10mg-54mg、10mg-56mg、10mg-58mg、10mg-60mg、12mg-14mg、12mg-15mg、12mg-16mg、12mg-18mg、12mg-20mg、12mg-22mg、12mg-24mg、12mg-26mg、12mg-28mg、12mg-30mg、12mg-32mg、12mg-34mg、12mg-36mg、12mg-38mg、12mg-40mg、12mg-42mg、12mg-44mg、12mg-46mg、12mg-48mg、12mg-50mg、12mg-52mg、12mg-54mg、12mg-56mg、12mg-58mg、12mg-60mg、15mg-16mg、15mg-18mg、15mg-20mg、15mg-22mg、15mg-24mg、15mg-26mg、15mg-28mg、15mg-30mg、15mg-32mg、15mg-34mg、15mg-36mg、15mg-38mg、15mg-40mg、15mg-42mg、15mg-44mg、15mg-46mg、15mg-48mg、15mg-50mg、15mg-52mg、15mg-54mg、15mg-56mg、15mg-58mg、15mg-60mg、17mg-18mg、17mg-20mg、17mg-22mg、17mg-24mg、17mg-26mg、17mg-28mg、17mg-30mg、17mg-32mg、17mg-34mg、17mg-36mg、17mg-38mg、17mg-40mg、17mg-42mg、17mg-44mg、17mg-46mg、17mg-48mg、17mg-50mg、17mg-52mg、17mg-54mg、17mg-56mg、17mg-58mg、17mg-60mg、20mg-22mg、20mg-24mg、20mg-26mg、20mg-28mg、20mg-30mg、20mg-32mg、20mg-34mg、20mg-36mg、20mg-38mg、20mg-40mg、20mg-42mg、20mg-44mg、20mg-46mg、20mg-48mg、20mg-50mg、20mg-52mg、20mg-54mg、20mg-56mg、20mg-58mg、20mg-60mg、22mg-24mg、22mg-26mg、22mg-28mg、22mg-30mg、22mg-32mg、22mg-34mg、22mg-36mg、22mg-38mg、22mg-40mg、22mg-42mg、22mg-44mg、22mg-46mg、22mg-48mg、22mg-50mg、22mg-52mg、22mg-54mg、22mg-56mg、22mg-58mg、22mg-60mg、25mg-26mg、25mg-28mg、25mg-30mg、25mg-32mg、25mg-34mg、25mg-36mg、25mg-38mg、25mg-40mg、25mg-42mg、25mg-44mg、25mg-46mg、25mg-48mg、25mg-50mg、25mg-52mg、25mg-54mg、25mg-56mg、25mg-58mg、25mg-60mg、27mg-28mg、27mg-30mg、27mg-32mg、27mg-34mg、27mg-36mg、27mg-38mg、27mg-40mg、27mg-42mg、27mg-44mg、27mg-46mg、27mg-48mg、27mg-50mg、27mg-52mg、27mg-54mg、27mg-56mg、27mg-58mg、27mg-60mg、30mg-32mg、30mg-34mg、30mg-36mg、30mg-38mg、30mg-40mg、30mg-42mg、30mg-44mg、30mg-46mg、30mg-48mg、30mg-50mg、30mg-52mg、30mg-54mg、30mg-56mg、30mg-58mg、30mg-60mg、33mg-34mg、33mg-36mg、33mg-38mg、33mg-40mg、33mg-42mg、33mg-44mg、33mg-46mg、33mg-48mg、33mg-50mg、33mg-52mg、33mg-54mg、33mg-56mg、33mg-58mg、33mg-60mg、36mg-38mg、36mg-40mg、36mg-42mg、36mg-44mg、36mg-46mg、36mg-48mg、36mg-50mg、36mg-52mg、36mg-54mg、36mg-56mg、36mg-58mg、36mg-60mg、40mg-42mg、40mg-44mg、40mg-46mg、40mg-48mg、40mg-50mg、40mg-52mg、40mg-54mg、40mg-56mg、40mg-58mg、40mg-60mg、43mg-46mg、43mg-48mg、43mg-50mg、43mg-52mg、43mg-54mg、43mg-56mg、43mg-58mg、42mg-60mg、45mg-48mg、45mg-50mg、45mg-52mg、45mg-54mg、45mg-56mg、45mg-58mg、45mg-60mg、48mg-50mg、48mg-52mg、48mg-54mg、48mg-56mg、48mg-58mg、48mg-60mg、50mg-52mg、50mg-54mg、50mg-56mg、50mg-58mg、50mg-60mg、52mg-54mg、52mg-56mg、52mg-58mg，或52mg-60mg。在一些实施方式中，普那布林的剂量大于或大于约：5mg、10mg、12.5mg、13.5mg、15mg、17.5mg、20mg、22.5mg、25mg、27mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、125mg、150mg或200mg。在一些实施方式中，普那布林的剂量小于或小于约：5mg、10mg、12.5mg、13.5mg、15mg、17.5mg、20mg、22.5mg、25mg、27mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、125mg、150mg或200mg。在一些实施方式中，将普那布林与表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂联合施用。在一些实施方式中，普那布林与奥西替尼联合施用。只要肿瘤保持可控并且该方案在临床上可以耐受，则给药期可以是数周的治疗周期。在一些实施方式中，奥西替尼和普那布林可以每三周施用一次。在一些实施方式中，奥西替尼和普那布林可以每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次或每六周一次施用。在一些实施方式中，在三周(21天)治疗周期中，可以每周一次，优选在第1天和第8天每天一次施用奥西替尼和普那布林。在一些实施方式中，可以在一周、两周、三周、四周或五周的治疗周期内每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次施用奥西替尼和普那布林。给药可以在治疗周期的每周的同一日或不同日。在一些实施方式中，普那布林在奥西替尼给药之前给药。在一些实施方式中，普那布林与奥西替尼同时给药。在一些实施方式中，普那布林在奥西替尼给药之后给药。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂(例如，奥西替尼)之后给药。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之后以下时间或约以下时间给药：1min、5min、10min、15min、20min、25min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h或12h。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之后少于以下时间或少于约以下时间给药：1min、5min、10min、15min、20min、25min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之后多于以下时间或多于约以下时间给药：1min、5min、10min、15min、20min、25min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之后以下时间内或约以下时间内给药：1min-5min、1min-10min、1min-15min、1min-20min、1min-25min、1min-30min、0.25h-0.5h、0.25-0.75h、0.25-1h、0.5h-1h、0.5h-2h、0.5h-2.5h、1h-2h、1h-3h、1h-5h。

在一些实施方式中，当普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂(例如，奥西替尼)之前给药时，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之前以下时间或约以下时间给药：1min-5min、1min-10min、1min-15min、1min-20min、1min-25min、1min-30min、0.25h-0.5h、0.25-0.75h、0.25-1h、0.5h-1h、0.5h-2h、0.5h-2.5h、1h-2h、1h-3h、1h-5h。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之前以下时间或约以下时间给药：1min、5min、10min、15min、20min、25min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h或12h。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之前少于以下时间或少于约以下时间给药：1min、5min、10min、15min、20min、25min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h。在一些实施方式中，普那布林在施用酪氨酸激酶抑制剂之前多于以下时间或多于约以下时间给药：1min、5min、10min、15min、20min、25min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h。

在一些实施方式中，治疗方案包括酪氨酸激酶抑制剂(例如，奥西替尼)的施用，随后每3周一次施用普那布林。在一些实施方式中，治疗方案包括酪氨酸激酶抑制剂的施用，随后每1周、每2周、每3周、每4周、每5周、每6周、每7周或每8周一次施用普那布林。在一些实施方式中，治疗方案包括酪氨酸激酶抑制剂的施用，随后每1周、每2周、每3周、每4周、每5周、每6周、每7周或每8周两次施用普那布林。在一些实施方式中，治疗方案包括酪氨酸激酶抑制剂的施用，随后在1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周的治疗周期中每周一次施用普那布林。在一些实施方式中，治疗方案包括酪氨酸激酶抑制剂的施用，随后在1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周的治疗周期中每周两次施用普那布林。在一些实施方式中，治疗方案包括酪氨酸激酶抑制剂的施用，随后在21天的治疗周期中的第1天、第8天和第15天施用普那布林。只要该方案在临床上可以耐受，就可以重复该治疗周期。在一些实施方式中，将奥西替尼和普那布林的治疗周期重复n次，其中n是2至30范围内的整数。在一些实施方式中，n为2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方式中，新的治疗周期可以在先前的治疗周期完成之后立即开始。在一些实施方式中，新的治疗周期可以在先前的治疗周期完成之后的一段时间后发生。

实施例

实施例1

对奥西替尼和普那布林的体内疗效进行了测试。在Balb/c裸鼠的皮下NCI-H1975人肺癌异种移植模型治疗中，将这两种药物作为单一药物并且联合进行了测试。

在以下实验设计表1中显示了每个测试组的测试物的施用和动物数量。

表1研究设计

*N：动物编号；Osi：奥西替尼；Plin：普那布林

剂量：根据体重(10μl/g)调整剂量

根据BW损失或其他不利影响，治疗方案可根据规定的规则和/或客户要求进行更改。

研究终点：该研究的主要终点包括：肿瘤生长抑制(TGI)：TGI％是抗肿瘤效力的指标，表示为：TGI(％)＝100×(1-T/C)。T和C分别是在指定的一天时治疗组和对照组的平均肿瘤体积(或重量)。

该测试使用6-8周的雌性小鼠(物种：小家鼠，种系：Balb/c裸鼠)。小鼠的平均体重为18-22g。总共使用了84只小鼠(60只加上40％的备用)。在以下条件下，将动物圈养在单独的通风笼中(每笼最多5只小鼠)：温度：20-26℃；湿度：40-70％；光周期：光照为上午7:00-晚上19:00、黑暗为晚上19:00–上午7:00(第二天)；聚砜IVC笼：325mm×210mm×180mm尺寸；垫料：玉米芯；饮食：小鼠饮食，Co60辐照灭菌的干颗粒食品。在整个研究期间，动物可以自由进入；水：反渗透(RO)水，使用前需高压灭菌。动物可以自由饮用无菌饮用水；笼子识别标签：动物数量、性别、种系、接受日期、治疗、研究编号、组编号和治疗开始日期等；动物识别：用耳朵编码(缺口)标记动物；适应圈养：将动物在设备中适应至少7天。

细胞培养：NCI-H1975肿瘤细胞在添加了0.01mM NEAA和10％热灭活的胎牛血清的MEM培养基中，在空气中5％CO₂的气氛下于37℃进行体外单层培养。通过胰蛋白酶-EDTA处理，每周将肿瘤细胞常规传代培养两次。收获在指数生长期生长的细胞，并计数肿瘤接种量。

肿瘤接种：在每只小鼠的右侧腹皮下接种NCI-H1975肿瘤细胞(0.1ml PBS中5×10⁶，以形成肿瘤)。当平均肿瘤大小达到约150(100-200)mm³时开始治疗。在以下的实验设计表2中示出了每组的测试物的施用和动物数量。肿瘤细胞接种的日期表示为第0天。

小组分配：在分组和治疗之前，将所有动物称重并使用卡尺测量肿瘤体积。由于肿瘤体积会影响任何给定治疗的效果，因此使用随机区组设计将小鼠分为几组：

首先，根据实验动物的肿瘤体积将其分为不同区块(每个区块中的不同小鼠的肿瘤体积相似)。其次，将每个区块随机分配到治疗组。通过使用随机区组设计，可以确保每只动物被分配给任何给定治疗组的可能性相同，因此可以最大程度地减少系统误差。

在每次给药之前新鲜制备给药制剂，并针对体重调节体积(给药体积＝10μl/g)。配料材料的制备在表2中描述。

表2配料材料制备

轻轻上下旋转试管，确保在使用前立即混合配方。

测试物的施用：根据研究设计，在分组后立即或一天后开始治疗(表1)。

观察和数据收集：接种肿瘤细胞后，每天检查动物的发病率和死亡率。在常规监测期间，检查动物是否有肿瘤生长和治疗对正常行为的任何影响，例如活动能力、肉眼估计的食物和水摄入、体重增加/减少(体重每周两次测量)、眼睛/毛发缠结和任何其他异常影响。数据表的注释中详细记录了每只动物的死亡和观察到的临床体征。

使用卡尺每周两次在二维上测量肿瘤体积，并使用下式以mm³表示体积：V＝0.5a×b²，其中a和b分别是肿瘤的长度和宽度。(根据赞助商要求，研究结束时测量肿瘤重量)。整个给药过程以及肿瘤和体重测量均在层流柜中进行。

研究期间的BWL动物处理以及动物的人为终点：当动物体重的变化小于10％时，可以恢复治疗。根据对以下症状的持续观察和动物状态的分析，对动物的健康状况进行了分析。例如，观察到明显的机能减退和肌肉萎缩的迹象。

研究终点：当用载体治疗的对照组的平均肿瘤负荷达到2000mm³的值或在最终剂量后一周(以先到者为准)时，该研究常规终止。样品收集包括肿瘤收集、肿瘤重量、在福尔马林中固定并加工成FFPE样品的保存方法。

总结数据：在每个时间点为每组的肿瘤体积提供了平均值和平均值的标准差(SEM)。对两个比较组之间的肿瘤体积差异的统计分析是在最佳治疗时间点(通常在最终剂量后)获得的数据使用独立样本T检验进行的。所有数据在SPSS(统计产品和服务解决方案)版本18.0(IBM，Armonk，NY，美国)中分析。除非原始P值小于0.001时，否则P值均四舍五入到小数点后三位，然后将它们表示为P<0.001。所有测试都是双面的。P<0.05被认为具有统计学意义。

合规性：在进行此项研究之前，须由CrownBio的机构动物护理和使用委员会(IACUC)审查并批准涉及本研究中动物的护理和使用的规程以及任何步骤和修正或程序。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验室动物护理评估和鉴定协会(AAALAC)的规定进行。

研究结果如图1和图2a-2d所示。在六个测试组中比较了肿瘤接种后的肿瘤大小变化。第1组(仅载体)、第3组(普那布林7.5mg/kg)和第4组(普那布林2.5mg/kg)在被施用了受试制剂后显示肿瘤大小增加；在对动物进行了15天的测试后，第2组(奥西替尼2.5mg/kg)和第6组(普那布林7.5mg/kg+奥西替尼2.5mg/kg)显示出对肿瘤大小的控制和肿瘤大小的轻微增加；并且第5组(普那布林7.5mg/kg+奥西替尼2.5mg/kg)在测试组中显示出更好的肿瘤大小控制，即使22天后肿瘤大小也没有明显增加。

Claims (22)

1.一种治疗癌症或肿瘤的方法，其特征在于，所述癌症或肿瘤以表达表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的突变形式为特征，所述方法包括将有效量的普那布林(plinabulin)施用至有所需要的对象。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述癌症或肿瘤选自下组：鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、头颈部上皮肿瘤、肺鳞状癌、肝细胞癌、结肠癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤，和肝细胞癌。

3.一种抑制细胞增殖的方法，其特征在于，所述细胞表达EGFR蛋白的突变形式，所述方法包括使所述细胞与普那布林接触。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述接触步骤包括向具有所述细胞的对象施用有效量的普那布林。

5.一种抑制对象中癌症或肿瘤进展的方法，其特征在于，所述的癌症或肿瘤以表达EGFR蛋白的突变形式为特征，所述方法包括将有效量的普那布林施用至有所需要的对象。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，EGFR蛋白的突变形式包括选自下组的一个或多个位点的突变：G719、L858、L861、T790、T854、D761、外显子19和外显子20。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述EGFR蛋白的突变形式包含选自下组的一种或多种氨基酸取代：G719S、G719C、G719A、L858R、L861Q、T854A和D761Y。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述EGFR蛋白的突变形式包含T790M的氨基酸取代。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，包括确定所述对象是否具有EGFR突变。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，包括鉴定所述对象是否患有转移性EGFR T790M突变阳性肿瘤。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其特征在于，包括施用其他活性剂。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述其他活性剂是其他化学治疗剂。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述其他化学治疗剂是奥西替尼(osimertinib)。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，奥西替尼在普那布林施用之前、同时或之后施用。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，奥西替尼以每天约80mg的剂量口服给药。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其特征在于，普那布林以约2.5至约40mg/mm²的剂量给药。

17.如权利要求13至16中任一项所述的方法，其特征在于，普那布林和奥西替尼以不同的时间表施用。

18.如权利要求13至16中任一项所述的方法，其特征在于，普那布林和奥西替尼以相同的时间表施用。

19.一种治疗癌症或肿瘤的方法，其特征在于，包括将普那布林和奥西替尼共同施用给有所需要的对象。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述癌症或肿瘤的特征在于表达表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的突变形式。

21.如权利要求19或20所述的方法，其特征在于，所述癌症或肿瘤选自鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、头颈部上皮肿瘤、肺鳞状癌、肝细胞癌、结肠癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤，和肝细胞癌。

22.一种药物组合物，其特征在于，包含普那布林和奥西替尼。

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