CN112321450B - 一种羟基-α-山椒素单体的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种羟基‑α‑山椒素单体的制备方法，属于天然药物提取分离技术领域。该制备方法包括如下步骤：(1)用低级醇浸提得花椒提取物总浸膏；(2)采用乙酸乙酯萃取后柱层析富集羟基山椒素混合物；(3)采用冷冻结晶法去除杂质，富集羟基‑α‑山椒素；(4)对于羟基‑α‑山椒素分离纯化。本发明羟基‑α‑山椒素单体的制备方法操作简便，对操作人员技术要求低；制备过程中条件温和，即保证了羟基‑α‑山椒素的稳定性，又十分安全；同时，该制备方法制得的羟基‑α‑山椒素单体纯度高，制备得到的羟基‑α‑山椒素单体纯度可达99％以上，可作为羟基‑α‑山椒素单体标准品。本发明制备方法成本低、适合大规模工业化推广，具有良好的应用前景。

Description

一种羟基-α-山椒素单体的制备方法

技术领域

本发明属于天然药物提取分离技术领域，具体涉及一种羟基-α-山椒素单体的制备方法。

背景技术

花椒(Zanthoxylum L.)，芸香科(Rutaceae)花椒属植物，作为我国传统的调味品及中药材有着非常悠久的历史，其果实具有浓郁的香气和辛麻味，兼具“镇膻解腥”的作用，是我国的“八大调味品”之一。辛麻味是花椒最主要的风味特征，也是评价其品质优劣的最重要指标。此外花椒也是我国常用中药，具有温中止痛，抗菌杀虫的作用，可用于治疗呕吐、腹泻、蛔虫病等疾病，另外还具有镇痛、抗炎、抑菌、抗衰老等作用。

在花椒的应用中，最主要的仍然是它的风味，花椒中不饱和脂肪酰胺类化合物是花椒辛麻味的主要来源。这些物质主要包括α-山椒素、β-山椒素、γ-山椒素、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素和羟基-ε-山椒素等三十余种。其中以下式所示的羟基-α-山椒素(1)和羟基-β-山椒素(2)含量最高，是花椒属植物中特异性含有的活性成分。其中，羟基-α-山椒素具有强烈的麻刺感和麻木感，是花椒产生麻味作用机制最主要的活性化合物。

由于花椒中的羟基山椒素类化合物结构极为相似，多为顺反异构体，因此，从中提取、分离纯化得到高纯度单体的难度极大。专利CN 103099163A仅得到羟基山椒素的混合物。CN 105481711A公开了一种羟基-β-山椒素单体的制备方法，但没有公开如何制备羟基-α-山椒素单体。CN106977416A公开了一种经过紫外照射和正己烷萃取制备羟基-α-山椒素的方法，但该方法需要进行紫外照射，羟基-α-山椒素很不稳定，光照或者室温放置都极易发生变化。其他的有关花椒麻味物质的提取制备方法如利用超临界CO₂萃取、TLC薄层等方法，只能得到混合的羟基山椒素。可用作标准品的单体也仅有羟基-β-山椒素单体。而高纯度、高收率的羟基-α-山椒素单体的制备仍是空白，导致花椒麻味物质检测的标准品单一，在很大程度上限制了花椒的研究及应用。

发明内容

为了解决以上问题，本发明提供一种可用作标准品的高纯度羟基-α-山椒素单体的高效制备方法。

本发明提供了一种羟基-α-山椒素单体的制备方法，它包括如下步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备：用低级醇作为提取溶剂对花椒进行浸提，得浸提液，将浸提液减压浓缩，得花椒提取物总浸膏；

(2)羟基山椒素混合物的富集：将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释，采用乙酸乙酯进行萃取，收集乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得山椒素混合物浸膏，将山椒素混合物浸膏经过柱层析，收集洗脱液浓缩得羟基山椒素混合物浸膏；

(3)羟基-α-山椒素的富集：将步骤(2)所得的羟基山椒素混合物浸膏溶于有机溶剂中，冷冻结晶，过滤收集羟基山椒素混合物母液；

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化：将步骤(3)所得的羟基山椒素混合物母液经过RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮水溶液洗脱，得羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤，滤液减压浓缩后通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥即得。

进一步地，

步骤(1)中，所述低级醇为体积分数为70％-100％的低级醇水溶液；

和/或，步骤(1)中，所述花椒与提取溶剂的料液比为1:5～1:10；

和/或，步骤(1)中，所述浸提为冷浸提取；

和/或，步骤(1)中，所述减压浓缩的温度为40～50℃；

和/或，步骤(1)中，所述减压浓缩得到的浓缩液体积为浸提液的1/5～1/4。

进一步地，

步骤(1)中，所述低级醇为体积分数为85％-100％的低级醇水溶液；

和/或，步骤(1)中，所述花椒与提取溶剂的料液比为1:8～1:10；

和/或，步骤(1)中，所述花椒为干燥花椒粉末；

和/或，步骤(1)中，所述浸提的提取时间为48h；

和/或，步骤(1)中，所述浸提的提取次数为2～3次；

优选地，

步骤(1)中，所述花椒为干燥花椒果皮粉碎至20～40目的粉末。

进一步地，步骤(1)中，所述低级醇为甲醇、乙醇的一种或一种以上的混合物。

进一步地，

步骤(2)中，所述稀释为将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释至低级醇溶液体积分数10％～20％；

和/或，步骤(2)中，所述乙酸乙酯与水的体积比为1:0.8～1；

和/或，步骤(2)中，所述减压浓缩的温度为40～50℃；

和/或，步骤(2)中，所述柱层析使用100～200目硅胶进行柱层析；

和/或，步骤(2)中，所述柱层析中，洗脱为梯度洗脱；

和/或，步骤(2)中，所述柱层析中，洗脱的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯混合溶液；

优选地，

步骤(2)中，所述萃取为萃取3次；

和/或，步骤(2)中，所述梯度洗脱时，按石油醚和乙酸乙酯的体积比为4:1，2:1，1:1，0:1顺序梯度洗脱。

进一步地，步骤(3)中，所述有机溶剂为石油醚、丙酮、乙醚、乙酸乙酯中的一种或一种以上的混合物。

进一步地，步骤(3)中，所述有机溶剂为石油醚和丙酮混合溶液或者乙酸乙酯；

优选地，步骤(3)中，所述石油醚和丙酮混合溶液中，石油醚和丙酮体积比为1：1～2。

进一步地，

步骤(4)中，所述丙酮水溶液为丙酮和AgNO₃水溶液的混合溶液；

和/或，步骤(4)中，所述过滤后减压浓缩的温度为40℃；

优选地，所述丙酮和AgNO₃水溶液的体积比为45:55。

进一步地，

所述AgNO₃水溶液的浓度为1.5～2％。

进一步地，步骤(4)中，所述的非极性聚苯乙烯型大孔树脂型号是D101、AB-8、HP20。

与现有技术相比，本发明的优点和效果：

一、本发明方法通过提取、混合物的富集、目标物的富集、分离纯化四个步骤即可从花椒果皮萃取物中获得高纯度的羟基-α-山椒素单体。整个制备过程条件温和，最高温度不超过50℃，保证了羟基-α-山椒素的稳定性，且收率高、操作简便、对操作人员技术要求低，适合工业化推广。

二、本发明提供的羟基-α-山椒素单体的制备采用低温冷冻结晶的方法，使得羟基-α-山椒素在羟基山椒素混合物中的含量大幅提高，同时采用Ag离子反相柱层析结合大孔树脂柱层析的方法对其进行分离纯化，解决了羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素等顺反异构体难以分离的难题，此过程操作简单，耗时短，避免了由于羟基-α-山椒素不稳定性，在制备过程中发生变化导致得率降低的缺点，所得的产品纯度高，制得的羟基-α-山椒素单体纯度可达98％以上。填补了目前花椒麻度检测及花椒品质检测中羟基-α-山椒素作为参比样的空白。

三、本发明方法使用的设备主要有柱层析时的层析柱，减压浓缩时的旋转蒸发仪，层析柱和旋转蒸发仪的价格低廉，生产成本低。

综上，本发明羟基-α-山椒素单体的制备方法操作简便，对操作人员技术要求低；制备过程中条件温和，即保证了羟基-α-山椒素的稳定性，又十分安全；同时，该制备方法制得的羟基-α-山椒素单体纯度高，制备得到的羟基-α-山椒素单体纯度可达99％以上，可作为羟基-α-山椒素单体标准品。本发明制备方法成本低、适合大规模工业化推广，具有良好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为本发明实施例5制备得到的羟基-α-山椒素单体的高效液相色谱分析图，图中t＝11.60min峰为羟基-α-山椒素。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

使用高效液相色谱(HPLC)对实施例的终产品羟基-α-山椒素单体进行纯度检测。检测色谱条件为：流动相组成为乙腈-水45:55(v/v)，色谱柱型号YMC-Pack C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流速1.0mL/min；柱温：室温；检测波长266nm。

实施例1、本发明羟基-α-山椒素单体的制备方法

该制备方法包括下述步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备

取干燥花椒粉末2kg，用体积分数为95％乙醇水溶液浸提48h，料液比为1:10(kg/L)，提取3次，合并浸提液，弃药渣，浸提液在50℃下减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5，得到花椒提取物总浸膏。

(2)羟基山椒素混合物的富集

将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释到乙醇体积分数为20％，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯与水体积比例为1L：1L，重复此萃取过程3次，合并萃取所得乙酸乙酯液，于50℃温度下减压浓缩得山椒素混合物浸膏70g。将山椒素混合物浸膏用100-200目硅胶进行柱层析，石油醚:乙酸乙酯按4:1，2:1，1:1，0:1(v/v)的比例顺序梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩得羟基山椒素混合物10g。

(3)羟基-α-山椒素的富集

按每克羟基山椒素混合物添加30mL石油醚-丙酮(1:1v/v)混合溶液溶解羟基山椒素混合物，通过HPLC检测可知该溶液中羟基-α-山椒素含量为64.1％，将其置于冰箱中低温(-18℃)冷冻18h，过滤除去固体，通过HPLC检测可知母液中羟基-α-山椒素含量为84.1％。提高了羟基-α-山椒素在羟基山椒素混合物中的含量。

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化

步骤(3)所得羟基山椒素混合物母液，避光条件下采用RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮:2％AgNO₃水溶液45:55(v/v)洗脱，得到羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液；然后加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤得到不含Ag⁺的羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，40℃温度下减压浓缩后，通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥得到纯度为98.5％的羟基-α-山椒素单体(29.2g，收率1.46％)。

实施例2、本发明羟基-α-山椒素单体的制备方法

该制备方法包括下述步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备

取干燥花椒粉末2kg，用体积分数为85％乙醇水溶液浸提48h，料液比为1：8(kg/L)，提取3次，合并浸提液，弃药渣，浸提液在50℃下减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5，得到花椒提取物总浸膏。

(2)羟基山椒素混合物的富集

将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释到乙醇体积分数为20％，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯与水体积比例为1L:1L，重复此萃取过程3次，合并萃取所得乙酸乙酯液，于50℃温度下减压浓缩得到山椒素混合物浸膏65g。将山椒素混合物浸膏用100-200目硅胶进行柱层析，石油醚:乙酸乙酯按4:1，2:1，1:1，0:1(v/v)的比例顺序梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩得到羟基山椒素混合物8.9g。

(3)羟基-α-山椒素的富集

按每克羟基山椒素混合物添加30mL石油醚-丙酮(1:1v/v)混合溶液溶解羟基山椒素混合物，通过HPLC检测可知该溶液中羟基-α-山椒素含量为62.9％，将其置于冰箱中低温(-18℃)冷冻24h，过滤除去固体，通过HPLC检测可知母液中羟基-α-山椒素含量为79.7％。提高了羟基-α-山椒素在羟基山椒素混合物中的含量。

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化

步骤(3)所得羟基山椒素混合物母液，避光条件下采用RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮:1.5％AgNO₃水溶液45:55(v/v)洗脱，得到羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液；然后加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤得到不含Ag⁺的羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，40℃温度下减压浓缩后，通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥，得到纯度为98.9％的羟基-α-山椒素单体(24.2g，收率1.21％)。

实施例3、本发明羟基-α-山椒素单体的制备方法

该制备方法包括下述步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备

取干燥花椒粉末2kg，用体积分数为90％甲醇水溶液浸提48h，料液比为1：10(kg/L)，提取3次，合并浸提液，弃药渣，浸提液在50℃下减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5，得花椒提取物总浸膏。

(2)羟基山椒素混合物的富集

将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释到甲醇体积分数为20％，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯与水体积比例为1L:1L，重复此萃取过程3次，合并萃取所得乙酸乙酯液，于50℃温度下减压浓缩得到山椒素混合物浸膏58g。将山椒素混合物浸膏用100-200目硅胶进行柱层析，石油醚:乙酸乙酯按4:1，2:1，1:1，0:1(v/v)的比例顺序梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩得到羟基山椒素混合物8.1g。

(3)羟基-α-山椒素的富集

按每克羟基山椒素混合物30mL添加石油醚-丙酮(1:1v/v)混合溶液溶解羟基山椒素混合物，通过HPLC检测可知该溶液中羟基-α-山椒素含量为59.0％，将其置于冰箱中低温(-18℃)冷冻36h，过滤除去固体，通过HPLC检测可知析晶后母液中羟基-α-山椒素含量为78.2％。提高了羟基-α-山椒素在羟基山椒素混合物溶液中的含量。

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化

步骤(3)所得羟基山椒素混合物母液，避光条件下采用RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮:1.5％AgNO₃水溶液45:55(v/v)洗脱，得到羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液；然后加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤得到不含Ag⁺的羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，40℃温度下减压浓缩后，通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥，得到纯度达到98.6％的羟基-α-山椒素单体(30.6g，收率1.53％)。

实施例4、本发明羟基-α-山椒素单体的制备方法

该制备方法包括下述步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备

取干燥花椒粉末2kg，用无水甲醇浸提48h，料液比为1:8(kg/L)，提取3次，合并浸提液，弃药渣，浸提液在50℃下减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/5，得到花椒提取物总浸膏。

(2)羟基山椒素混合物的富集

将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释到甲醇体积分数为20％，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯与水体积比例为1L：1L，重复此萃取过程3次，合并萃取所得乙酸乙酯液，于50℃温度下减压浓缩得山椒素混合物浸膏65g。将山椒素混合物浸膏用100-200目硅胶进行柱层析，石油醚:乙酸乙酯按4:1，2:1，1:1，0:1(v/v)的比例顺序梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩得到羟基山椒素混合物9.3g。

(3)羟基-α-山椒素的富集

按每克羟基山椒素混合物添加30mL石油醚-丙酮(1:1v/v)混合溶液溶解羟基山椒素混合物，通过HPLC检测可知该溶液中羟基-α-山椒素含量为65.9％，将其置于冰箱中低温(-18℃)冷冻20h，过滤除去固体，通过HPLC检测可知析晶后母液中羟基-α-山椒素含量为80.6％。提高了羟基-α-山椒素在羟基山椒素混合物溶液中的含量。

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化

步骤(3)所得羟基山椒素混合物母液，避光条件下采用RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮:1.5％AgNO₃水溶液45:55(v/v)洗脱，得到羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液；然后加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤得到不含Ag⁺的羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，40℃温度下减压浓缩后，通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥，得到纯度为99.1％的羟基-α-山椒素单体(26.4g，收率1.32％)。

实施例5、本发明羟基-α-山椒素单体的制备方法

该制备方法包括下述步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备

取干燥花椒粉末10kg，用体积分数为95％的甲醇水溶液浸提48h，料液比为1:8(kg/L)，提取3次，合并浸提液，弃药渣，浸提液在50℃下减压浓缩得浓缩液，浓缩液的体积为浸提液的1/4，得到花椒提取物总浸膏。

(2)羟基山椒素混合物的富集

将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释到甲醇体积分数为10％，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯与水体积比例为1L:1L，重复此萃取过程3次，合并萃取所得乙酸乙酯液，于50℃温度下减压浓缩得到山椒素混合物浸膏150g。将山椒素混合物浸膏用100-200目硅胶进行柱层析，石油醚:乙酸乙酯按4:1，2:1，1:1，0:1(v/v)的比例顺序梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩得到羟基山椒素混合物28.5g。

(3)羟基-α-山椒素的富集

按每克羟基山椒素混合物添加30mL石油醚-丙酮(1:2v/v)混合溶液溶解羟基山椒素混合物，通过HPLC检测可知该溶液中羟基-α-山椒素含量为66.6％，将其置于冰箱中低温(-18℃)冷冻18h，过滤除去固体，通过HPLC检测可知析晶后母液中羟基-α-山椒素含量为84.4％。提高了羟基-α-山椒素在羟基山椒素混合物溶液中的含量。

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化

步骤(3)所得羟基山椒素混合物母液，避光条件下采用RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮:2％AgNO₃水溶液45:55(v/v)洗脱，得到羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液；然后加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤得到不含Ag⁺的羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，40℃温度下减压浓缩后，通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥，得到纯度达98.7％的羟基-α-山椒素单体(148g，收率1.48％)。

图1为该实施例制备得到的羟基-α-山椒素单体的高效液相色谱分析图，图中t＝11.60min峰为羟基-α-山椒素。

综上，本发明羟基-α-山椒素单体的制备方法操作简便，对操作人员技术要求低；制备过程中条件温和，即保证了羟基-α-山椒素的稳定性，又十分安全；同时，该制备方法制得的羟基-α-山椒素单体纯度高，制备得到的羟基-α-山椒素单体纯度可达99％以上，可作为羟基-α-山椒素单体标准品。本发明制备方法成本低、适合大规模工业化推广，具有良好的应用前景。

Claims (8)

1.一种羟基-α-山椒素单体的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)花椒提取物总浸膏的制备：用低级醇作为提取溶剂对花椒进行浸提，得浸提液，将浸提液减压浓缩，得花椒提取物总浸膏；

(2)羟基山椒素混合物的富集：将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释，采用乙酸乙酯进行萃取，收集乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得山椒素混合物浸膏，将山椒素混合物浸膏经过柱层析，收集洗脱液浓缩得羟基山椒素混合物浸膏；

(3)羟基-α-山椒素的富集：将步骤(2)所得的羟基山椒素混合物浸膏溶于有机溶剂中，冷冻结晶，过滤收集羟基山椒素混合物母液；

(4)羟基-α-山椒素的分离纯化：将步骤(3)所得的羟基山椒素混合物母液经过RP-18反相硅胶柱层析，用丙酮水溶液洗脱，得羟基-α-山椒素单体丙酮水溶液，加入NaCl至不再有沉淀析出，过滤，滤液减压浓缩后通过非极性聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱层析得到羟基-α-山椒素溶液，减压浓缩，干燥即得；

步骤(3)中，所述有机溶剂为石油醚和丙酮混合溶液或者乙酸乙酯；所述石油醚和丙酮混合溶液中，石油醚和丙酮体积比为1：1～2；

步骤(4)中，所述丙酮水溶液为丙酮和AgNO₃水溶液的混合溶液；所述丙酮和AgNO₃水溶液的体积比为45:55；所述AgNO₃水溶液的浓度为1.5～2％；

步骤(4)中，所述过滤后减压浓缩的温度为40℃。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述低级醇为体积分数为70％-100％的低级醇水溶液；

和/或，步骤(1)中，所述花椒与提取溶剂的料液比为1:5～1:10；

和/或，步骤(1)中，所述浸提为冷浸提取；

和/或，步骤(1)中，所述减压浓缩的温度为40～50℃；

和/或，步骤(1)中，所述减压浓缩得到的浓缩液体积为浸提液的1/5～1/4。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述低级醇为体积分数为85％-100％的低级醇水溶液；

和/或，步骤(1)中，所述花椒与提取溶剂的料液比为1:8～1:10；

和/或，步骤(1)中，所述花椒为干燥花椒粉末；

和/或，步骤(1)中，所述浸提的提取时间为48h；

和/或，步骤(1)中，所述浸提的提取次数为2～3次。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述花椒为干燥花椒果皮粉碎至20～40目的粉末。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述低级醇为甲醇或乙醇。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤(2)中，所述稀释为将步骤(1)所得的花椒提取物总浸膏用水稀释至低级醇溶液体积分数10％～20％；

和/或，步骤(2)中，所述乙酸乙酯与水的体积比为1:0.8～1；

和/或，步骤(2)中，所述减压浓缩的温度为40～50℃；

和/或，步骤(2)中，所述柱层析使用100～200目硅胶进行柱层析；

和/或，步骤(2)中，所述柱层析中，洗脱为梯度洗脱；

和/或，步骤(2)中，所述柱层析中，洗脱的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯混合溶液。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：

步骤(2)中，所述萃取为萃取3次；

和/或，步骤(2)中，所述梯度洗脱时，按石油醚和乙酸乙酯的体积比为4:1，2:1，1:1，0:1顺序梯度洗脱。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的非极性聚苯乙烯型大孔树脂型号是D101、AB-8、HP20。

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