CN111407748B - 酪醇在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供酪醇在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。所述药物是以有效量的酪醇为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。所述药物与放疗和化疗联用。本发明通过实验证明，酪醇可以增强胶质母细胞瘤对放化疗的敏感性，提高放化疗的治疗效果，延长模型动物的生存期，为治疗脑胶质瘤提供了新的治疗手段和选择，具有明显的社会价值，同时也开拓了酪醇的应用领域。

Description

酪醇在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，更具体地，涉及酪醇在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。

背景技术

脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的、最常见的原发性颅脑肿瘤，具有高发病率、高复发率、高病死率和低治愈率的特点。其生长特点为浸润性生长，与正常脑组织无明显界限，多数不限于一个脑叶，向脑组织外呈指状深入破坏脑组织。

据美国统计，在20-40岁人群肿瘤死亡病因中，脑肿瘤在男性是第一位的死亡病因，在女性排第五位。原发性恶性胶质瘤是最常见的成人脑癌类型，其中多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiforme，GBM)是最常见和最致命的类型，仍然是无法治愈的疾病，即使是最具侵略性的治疗方案，患者的平均预期寿命仅为12-15个月。

目前，脑胶质瘤的标准治疗措施是在可行的范围内进行手术切除，随后进行放疗加替莫唑胺化疗(放疗同时和放疗后)。具体来说，放射治疗(6周内，每周5天，每日2Gy部分的局部照射)加每日替莫唑胺(75mg/m²)，休息4周，随后6个周期的辅助替莫唑胺(150-200mg/m²)化疗(每28天给药5天)。但是，经标准治疗措施治疗的脑胶质瘤病人2年存活率仍很低，因此急需开发新的有效治疗胶质瘤的药物或有效的放化疗增敏剂。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供酪醇在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。

酪醇，又叫对羟基苯乙醇，白色晶体，分子式为C₈H₁₀O₂，相对分子质量为138.0，结构式为

酪醇是天然的抗氧化剂，是苯乙醇的一种衍生物,在女贞子、红景天和橄榄油中大量存在，也可通过化学方法合成。作为一种抗氧化剂，它可以保护细胞免受氧化伤害。

本发明经实验发现，酪醇与化疗和放疗联用，可以增强胶质母细胞瘤对放化疗的敏感性，提高放化疗的治疗效果，延长模型动物的生存期，为治疗脑胶质瘤提供了新的治疗手段和选择。

进一步地，所述药物是以有效量的酪醇为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

进一步地，所述药物与放疗和化疗联用。

进一步地，所述放疗的放射线为X射线、电子线或中性粒子束；所述化疗使用的化学药物为替莫唑胺。

进一步地，所述脑胶质瘤包括星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤等。

进一步地，所述脑胶质瘤包括原发性脑胶质瘤和其他肿瘤转移到脑部的肿瘤，包括肺癌和乳腺癌等。

本发明还提供一种治疗脑胶质瘤的药物，包括酪醇或酪醇在药学上可接受的盐、酯或羟基衍生物，如羟基酪醇。

进一步地，所述药物是以有效量的酪醇为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

进一步地，所述有效量的酪醇为大于25mg/kg体重，优选大于50mg/kg体重，更优选大于100mg/kg体重。

进一步地，所述辅助性成分为其它实体肿瘤放/化疗增敏剂、靶向试剂、免疫治疗剂中的一种或多种。

进一步地，所述药物的剂型为注射剂、片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、缓释剂、纳米制剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂中的一种或多种；进一步优选为注射剂或口服制剂。

实体肿瘤放/化疗增敏剂一般制成注射剂，本发明中酪醇还可以开发成口服制剂，从而提高患者的服药依从性。

本发明通过实验证明，酪醇可以增强胶质母细胞瘤对放化疗的敏感性，提高放化疗的治疗效果，延长模型动物的生存期，为治疗脑胶质瘤提供了新的治疗手段和选择，具有明显的社会价值，同时也开拓了酪醇的应用领域。

附图说明

图1为酪醇联合放疗和化疗条件下，BALB/c裸小鼠C6原位胶质瘤模型动物的Kaplan-Meier生存曲线和各组曲线之间的统计参数；

图2为酪醇联合化疗条件下，C57BL/6小鼠同源GL261原位胶质瘤模型动物的Kaplan-Meier生存曲线和各组曲线之间的统计参数；

图3为酪醇联合放疗和化疗条件下，C57BL/6小鼠同源GL261原位胶质瘤模型动物的Kaplan-Meier生存曲线和各组曲线之间的统计参数。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。

以下通过具体的药效学试验证明本发明的有益效果。

实施例1酪醇联合放疗和化疗(替莫唑胺)对BALB/c裸小鼠C6原位胶质瘤模型的抑制作用

1、实验材料

C6胶质瘤细胞株：购自宁波明舟生物科技有限公司；

酪醇：购自上海源叶生物科技有限公司，纯度>99％，用0.5％羧甲基纤维素钠配制成酪醇悬浊液；

替莫唑胺：购于广州糖姆氏生命科技有限公司，纯度大于99％。

2、方法

2.1BALB/c裸鼠C6原位胶质母细胞瘤造模

6-8周龄BALB/c雄性裸鼠(体重约18±2g)由浙江省医学科学院实验动物中心所提供，饲养在无特定病原体级(specefic pathogenfree，SPF)环境中。胶质瘤细胞常规传代培养，取对数生长期的细胞，用胰酶消化后，制成胶质瘤细胞悬液，浓度为2×10⁶细胞/10μl。将2.5微升细胞悬液(5×10⁵个细胞)立体定位接种于每只小鼠的颅内。

2.2给药干预

接种6天后，造模小鼠随机分为4组：

A.模型对照组(Control)；

B.替莫唑胺+放疗组(TMZ(50mg/kg)+RT(8Gy))；

C.口服酪醇+替莫唑胺+放疗组(Tyrosol(25mg/kgig)+TMZ+RT)；

D.静注酪醇+替莫唑胺+放疗组(Tyrosol(25mg/kgiv)+TMZ+RT)。

第一阶段给药：所有小鼠从7-11天，连续5天先静脉注射或灌胃酪醇或生理盐水(对照)，20分钟后，再进行腹腔注射给药替莫唑胺(50mg/kg，149mg/m²)。第5天给药后30分钟内，B、C、D组的小鼠接受局部8Gy照射(RS-2000-PRO-225(RAD SOURCE))。

第二阶段给药：所有小鼠从16-20天，连续5天先静脉注射或灌胃酪醇或生理盐水(对照)，20分钟后，再进行腹腔注射给药替莫唑胺(50mg/kg，149mg/m²)。

2.3实验观察

每日观察小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食、粪便性状及对外界刺激的反应，记录全部给药期间各组小鼠的生存期，计算各组小鼠的存活率：存活率＝各组剩余动物数量/各组动物总数。

2.4统计学方法

数据分析采用统计程序软件包(SPSS 21.0for Windows)进行统计分析，运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，对数秩检验(LogRank(Mantel-Cox))用于确定不同测试组存活分布间的差异，P＜0.05为具有统计学显著性差异。

3、结果

图1示出了各组小鼠的Kaplan-Meier生存曲线和各组小鼠生存曲线之间的统计参数。替莫唑胺加放疗能明显延长原位种植肿瘤裸鼠的生存期(36vs 22，P<0.01)；酪醇(包括静脉注射和口服)能更进一步明显延长替莫唑胺加放疗对原位种植肿瘤裸鼠生存期的延长(42vs 36，P<0.01)。

4、结论

上述试验证明，酪醇能增加放疗疗法和替莫唑胺对BALB/C裸小鼠C6原位胶质瘤模型的抑制作用，延长原位种植肿瘤裸鼠的生存期。

实施例2酪醇联合化疗(替莫唑胺)对C57BL/6小鼠GL261原位胶质瘤模型的作用

1、实验材料

GL261胶质瘤细胞株：购自宁波明舟生物科技有限公司；

酪醇：购自上海源叶生物科技有限公司，纯度>99％，用0.5％羧甲基纤维素钠配制成酪醇悬浊液；

替莫唑胺：购于广州糖姆氏生命科技有限公司，纯度大于99％。

2、方法

2.1C57BL/6小鼠同源原位GL261胶质母细胞瘤造模

6-8周龄C57BL/6雄性小鼠(体重约18±2g)由浙江省医学科学院实验动物中心所提供，饲养在无特定病原体级(specefic pathogenfree，SPF)环境中。胶质瘤细胞常规传代培养，取对数生长期的细胞，用胰酶消化后，制成胶质瘤细胞悬液，浓度为2×10⁶细胞/10μl。将2.5微升细胞悬液(5×10⁵个细胞)立体定位接种于每只小鼠的颅内。

2.2给药干预

接种11天后，造模小鼠随机分为4组：

A.模型对照组(Control)；

B.替莫唑胺(TMZ)；

C.静注酪醇+替莫唑胺组(TMZ+Tyrosol(50mg/kg iv))；

D.静注酪醇组(Tyrosol(50mg/kg iv))。

所有小鼠从11-15天，连续5天给药：先静脉注射酪醇或生理盐水，20分钟后，B、C组再进行腹腔注射给药替莫唑胺(50mg/kg，149mg/m²)

2.3实验观察

每日观察小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食、粪便性状及对外界刺激的反应，记录全部给药期间各组小鼠的生存期，计算各组小鼠的存活率：存活率＝各组剩余动物数量/各组动物总数。

2.4统计学方法

数据分析采用统计程序软件包(SPSS 21.0for Windows)进行统计分析，运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，对数秩检验(LogRank(Mantel-Cox))用于确定不同测试组存活分布间的差异，P＜0.05为具有统计学显著性差异。

3、结果

图2示出了各组小鼠的Kaplan-Meier生存曲线和各组小鼠生存曲线之间的统计学参数。与对照组比较，单独给酪醇不能延长原位胶质瘤小鼠的生存期(P>0.05)；替莫唑胺能明显延长原位种植肿瘤裸鼠的生存期(P<0.01)；酪醇联合替莫唑胺不能更进一步延长替莫唑胺对原位种植肿瘤裸鼠的生存期(P>0.05)。

4、结论

上述试验证明，酪醇单独给药对C57BL/6小黑鼠GL261原位胶质瘤模型无抑制作用，联合替莫唑胺也不能显著延长替莫唑胺治疗C57BL/6小黑鼠GL261原位胶质瘤模型的生存期。

实施例3酪醇联合放疗和化疗(替莫唑胺)对C57BL/6小鼠GL261原位胶质瘤模型的作用

1、实验材料

GL261胶质瘤细胞株：购自宁波明舟生物科技有限公司；

酪醇：购自上海源叶生物科技有限公司，纯度>99％，用0.5％羧甲基纤维素钠配制成酪醇悬浊液；

替莫唑胺：购于广州糖姆氏生命科技有限公司，纯度大于99％。

2、方法

2.1C57BL/6小鼠同源原位GL261胶质母细胞瘤造模

6-8周龄C57BL/6雄性小鼠(体重约18±2g)由浙江省医学科学院实验动物中心所提供，饲养在无特定病原体级(specefic pathogenfree，SPF)环境中。胶质瘤细胞常规传代培养，取对数生长期的细胞，用胰酶消化后，制成胶质瘤细胞悬液，浓度为2×10⁶细胞/10μl。将2.5微升细胞悬液(5×10⁵个细胞)立体定位接种于每只小鼠的颅内。

2.2给药干预

接种11天后，造模小鼠随机分为5组：

A.模型对照组(Control)；

B.替莫唑胺+放疗组(TMZ+RT)；

C.静注酪醇+替莫唑胺+放疗组(Tyrosol(25mg/kg iv)+TMZ+RT)；

D.静注酪醇+替莫唑胺+放疗组(Tyrosol(50mg/kg iv)+TMZ+RT)；

E.静注酪醇+替莫唑胺+放疗组(Tyrosol(100mg/kg iv)+TMZ+RT)。

所有小鼠从11-13天，连续3天给药：第11天静脉注射酪醇或生理盐水(对照)；第12天先静脉注射酪醇或生理盐水，20分钟后，再替莫唑胺进行腹腔注射给药(100mg/kg，298.5mg/m²)；第13天先静脉注射酪醇或生理盐水，30分钟内，B、C、D、E组的小鼠接受局部5Gy照射(RS-2000-PRO-225(RAD SOURCE))。

2.3实验观察

每日观察小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食、粪便性状及对外界刺激的反应，记录全部给药期间各组小鼠的生存期，计算各组小鼠的存活率：存活率＝各组剩余动物数量/各组动物总数。

2.4统计学方法

数据分析采用统计程序软件包(SPSS 21.0for Windows)进行统计分析，运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，对数秩检验(LogRank(Mantel-Cox))用于确定不同测试组存活分布间的差异，P＜0.05为差异具有显著性。

3、结果

图3示出了各组小鼠的Kaplan-Meier生存曲线和各组小鼠生存曲线之间的统计学参数；与对照组比较，其它治疗组均能有效延长原位胶质瘤小黑鼠的生存期(P<0.01)，生存中位数从25天延长到34天以上；与TMZ+RT组比较，联合酪醇后，TMZ+RT的治疗效果均不同程度提高(P<0.01)，生存中位数从34天提高到44天以上；且3组不同浓度的酪醇联合TMZ+RT组间存在显著差异(P<0.05)，表现为酪醇剂量越高，生存中位数越长，从44到51天；综上，酪醇+TMZ+RT组合治疗的动物较其它治疗组具有统计学显著的生存优势(P<0.01)，且酪醇能剂量依赖性的延长TMZ+RT组合治疗的动物生存期。

4、结论

上述试验证明，酪醇能显著增强放疗和替莫唑胺对C57BL/6小黑鼠GL261原位胶质瘤模型的抑制作用，剂量依赖性延长原位种植肿瘤小鼠的生存期。

通过上述实施例可知，尽管酪醇本身不能改善模型动物的生存期，但是酪醇联合放疗和化疗能增强胶质母细胞瘤对放化疗的敏感性，提高放化疗的治疗效果，显著改善模型动物的生存期。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (3)

1.酪醇在制备治疗脑胶质瘤的放化疗增敏剂中的应用，其特征在于，所述放化疗增敏剂是以有效量的酪醇为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂，采用所述放化疗增敏剂时，放疗的放射线为X射线；化疗使用的化学药物为替莫唑胺。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述有效量的酪醇为大于25mg/kg体重。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述放化疗增敏剂为注射剂或口服制剂。

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