CN111278854A

CN111278854A - 与混合谱系白血病(mll)特异性磷酸肽结合的t细胞受体和其使用方法

Info

Publication number: CN111278854A
Application number: CN201880069966.7A
Authority: CN
Inventors: M·范迪杰克; E·V·布雷奥斯-奈斯特罗姆; A·弗兰基诺; S·拉勒维; A·A·赫维兹; M·A·埃克斯利; B·J·沃尔夫
Original assignee: Agenus Inc
Current assignee: Agenus Inc
Priority date: 2017-09-04
Filing date: 2018-09-04
Publication date: 2020-06-12
Also published as: KR20200052327A; JP2020532304A; AU2018326875A1; WO2019046856A1; US20240301025A1; SG11202001319QA; MA50084A; US20200308246A1; CA3073055A1; US11718658B2; EP3679062A1; JP7387585B2

Abstract

提供了TCR(例如，与MLL结合的TCR，例如，与MLL磷酸肽结合的TCR，例如，与MLL磷酸肽/MHC复合物结合的TCR)、包括这些TCR的细胞和药物组合物、编码这些TCR的核酸、用于制备这些TCR的表达载体和宿主细胞以及使用这些TCR治疗受试者的方法。

Description

与混合谱系白血病(MLL)特异性磷酸肽结合的T细胞受体和其使用方法

相关申请

本申请要求于2017年9月4日提交的美国临时申请第62/553,957号的权益，所述美国临时申请通过引用整体并入本文。

技术领域

本公开涉及与混合谱系白血病(MLL)磷酸肽结合的T细胞受体和其使用方法。

背景技术

由翻译后修饰失调引起的磷蛋白是癌细胞转化的关键决定因素。这些磷蛋白的降解可以产生由MHC分子呈递的磷酸肽，并介导癌症特异性T细胞应答。混合谱系白血病(MLL，还称为组蛋白-赖氨酸-N-甲基转移酶2A(KMT2A))是调节基因组可接近性和转录的组蛋白修饰酶。已报道许多源自MLL的磷酸肽，参见例如，Cobbold等人,《科学转化医学期刊(SciTransl Med)》,2013年9月18日；5(203):203ra125，所述文献通过引用整体并入本文。考虑到MLL磷酸肽的肿瘤表达谱，MLL磷酸肽作为用于癌症治疗的靶标具有很大的前景。

因此，本领域需要可以识别在表面上呈递MLL磷酸肽的癌细胞并且指导针对这些细胞的免疫应答的新型组合物。

发明内容

本公开提供了TCR(例如，与MLL磷酸肽(例如，磷酸肽MLL-pM EPR[pS]PSHSM(SEQID NO:45)或MLL-pP RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)结合的TCR)、包括这些TCR的细胞和药物组合物、编码这些TCR的核酸、用于制备这些TCR的表达载体和宿主细胞以及用于使用这些TCR治疗受试者的方法。本文所公开的TCR对于引导针对表达MLL的癌细胞(例如，展示MLL磷酸肽(例如，磷酸肽MLL-pM EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)或MLL-pP RVR[pS]PTRSP(SEQID NO:47))的癌细胞)的免疫应答，并且因此对于治疗受试者的MLL表达性癌症特别有用。

因此，在一方面，本公开提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:21中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:11和16中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:86中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:1中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:58中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:236中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括选自由SEQ ID NO:58、236、259、260、272、261和249组成的组的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:26和31中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:2中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括选自由SEQ ID NO:59、237、262、263、264、273、60和250组成的组的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:26和31中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:2中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQID NO:60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括选自由SEQ ID NO:59、237、262、263、264、273、60和250组成的组的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:73中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:73中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:74中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ IDNO:74中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:74中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:74中阐述的氨基酸序列。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:11、16、21、26、31和36中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文公开了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:11、16、21、26、31和36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:86和87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:1和2中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文公开了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:58中阐述的氨基酸序列，和/或所述β链包括SEQ ID NO:59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，和/或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链包括SEQ ID NO:236中阐述的氨基酸序列，和/或所述β链包括SEQ ID NO:237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本文公开了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，所述α链包括选自由SEQ ID NO:58、236、259、260、272、261和249组成的组的氨基酸序列，并且所述β链包括选自由SEQ ID NO:59、237、262、263、264、273、60和250组成的组的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链恒定区，所述α链恒定区包括SEQ ID NO:249中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:250中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文公开了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:58或236中阐述的氨基酸序列，和/或所述β链包括SEQ ID NO:60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文公开了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:22中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:12和17中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:88中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:61中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQID NO:251中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:37中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:27和32中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:89中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:4中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:62中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:63中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:252中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:37中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:27和32中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:89中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:4中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:62中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQID NO:63中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ IDNO:252中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:75中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:75中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:76中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ IDNO:76中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:76中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:76中阐述的氨基酸序列。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:12、17、22、27、32和37中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:12、17、22、27、32和37中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:88和89中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:3和4中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:61中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:62中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:61中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:63中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:251中阐述的氨基酸序列，和/或所述β链包括SEQ ID NO:252中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，和/或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:23中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:13和109中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:106中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:64中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:38中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:28和33中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:107中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:65中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:66中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:23中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:13和18中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:5中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:253中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:38中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:28和33中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:6中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:254中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:38中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:28和33中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:107中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:6中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:65中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQID NO:66中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ IDNO:254中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:77中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:77中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:78中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ IDNO:78中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:78中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:78中阐述的氨基酸序列。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:13、109、23、28、33和38中阐述的氨基酸序列。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:13、18、23、28、33和38中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:13、109、23、28、33和38中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:106和107中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:13、18、23、28、33和38中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:5和6中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:64中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:65中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:64中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:66中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:253中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:254中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:24中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:14和19中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:7中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:67中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:255中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:39中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:29和34中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:108中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:8中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:68中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQID NO:69中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ IDNO:256中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:39中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:29和34中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:108中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:8中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:68中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQID NO:69中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ IDNO:256中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:79中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:79中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:80中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ IDNO:80中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:80中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:80中阐述的氨基酸序列。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:14、19、24、29、34和39中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:14、19、24、29、34和39中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:7和108中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:7和8中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:67中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:68中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:67中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:69中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:255中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:256中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:25中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:15和20中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:9中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:70中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:257中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:40中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:30和35中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:10中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:71中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:72中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:258中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:40中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:30和35中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:10中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:71中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:72中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:258中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:81中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:81中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:82中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ IDNO:82中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:82中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:82中阐述的氨基酸序列。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:15、20、25、30、35和40中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:15、20、25、30、35和40中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:9和10中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:70中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:71中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:70中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:72中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:257中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:258中阐述的氨基酸序列。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了一种与本文公开的TCR结合到同一表位的分离的TCR。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；或viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或ix)其任何组合。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列。

在一些实施例中，本文描述的分离的TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或iii)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽；或iv)其任何组合。在一些实施例中，本文描述的分离的TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；和iii)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；或viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或ix)其任何组合，其中所述分离的TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：a)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；b)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或c)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽；或d)其任何组合。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；和viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽，其中所述分离的TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：a)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；b)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或c)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:219中阐述的氨基酸序列组成的肽；ix)由SEQ ID NO:220中阐述的氨基酸序列组成的肽；x)由SEQ ID NO:226中阐述的氨基酸序列组成的肽；或xi)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或xii)其任何组合。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:219中阐述的氨基酸序列组成的肽；ix)由SEQ ID NO:220中阐述的氨基酸序列组成的肽；x)由SEQ ID NO:226中阐述的氨基酸序列组成的肽；和xi)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:219中阐述的氨基酸序列组成的肽；ix)由SEQ ID NO:220中阐述的氨基酸序列组成的肽；x)由SEQ ID NO:226中阐述的氨基酸序列组成的肽；或xi)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或xii)其任何组合，其中所述分离的TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：a)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；b)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或c)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽；或d)其任何组合。

在另一方面，本文提供了一种分离的T细胞受体(TCR)，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:219中阐述的氨基酸序列组成的肽；ix)由SEQ ID NO:220中阐述的氨基酸序列组成的肽；x)由SEQ ID NO:226中阐述的氨基酸序列组成的肽；和xi)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽，其中所述分离的TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：a)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；b)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或c)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ IDNO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；或viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或ix)其任何组合。在某些实施例中，所述分离的TCR与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ IDNO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或iii)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽；或iv)其任何组合。在某些实施例中，所述TCR不与以下中的任何一个结合或基本上不与以下中的任何一个结合：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及ix)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽。在某些实施例中，所述TCR与由SEQ ID NO:46、49、50、52、53、54、55、57或47中阐述的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合相对于所述TCR与由SEQ ID NO:45、51、56、117、128、135、192或233中阐述的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合显著减弱。在某些实施例中，所述TCR与以下中的任何一个之间的所述结合：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及ix)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽相对于所述TCR与以下中的任何一个之间的所述结合显著减弱：a)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；b)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；c)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；d)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；e)由SEQ IDNO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；f)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；g)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；或h)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与选自由以下组成的组的肽中的至少一个肽结合：

i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；

v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；和viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽，

其中所述分离的TCR不与选自由以下组成的组的肽中的至少一个肽结合或基本上不与其结合：

a)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；

b)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；和

c)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR：

a)与以下结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ IDNO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；或viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或ix)其任何组合；并且

b)包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:21中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:11和16中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:86中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:1中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:58中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:236中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:259、260、272、261或249中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:26和31中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:2中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:262、263、264、273或250中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR：

b)包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:26和31中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:2中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括选自由SEQ ID NO:262、263、264、273和250组成的组的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR：

b)包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:11、16、21、26、31和36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:86和87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:1和2中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：i)当与展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；iii)当与展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iv)当与展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或v)其任何组合。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：i)当与展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；iii)当与展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iv)当与展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下不活化或基本上不活化：i)当与展示由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iii)当与展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iv)其任何组合。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示以下肽中的任何肽的第二细胞共培养时，所述T细胞不活化或基本上不活化：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；vi)由SEQID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；vii)由SEQ IDNO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；以及iv)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的所述表面上表达时，当所述T细胞与展示由SEQ ID NO:46、49、50、52、53、54、55、57或47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:46、49、50、52、53、54、55、57或47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时的所述T细胞的所述活化相对于当所述T细胞与展示由SEQ ID NO:45、51、56、117、128、135、192或233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:45、51、56、117、128、135、192或233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞)共培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当所述T细胞与展示以下肽中的任何肽的第二细胞共培养时的所述T细胞的所述活化：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；v)由SEQ IDNO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；以及iv)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；相对于当所述T细胞与展示由以下肽中的任何肽的第三细胞共培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱：a)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；b)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；c)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)；以及d)由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽(例如，在HLA-B*0702的背景下)。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当所述T细胞单独与以下中的每一个共培养时的所述T细胞的所述活化：i)展示由SEQID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；ii)展示由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；iii)展示由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；iv)展示由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；v)展示由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；vi)展示由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；vii)展示由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；viii)展示由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；ix)展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；相对于当所述T细胞与以下中的每一个单独地共培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱：a)展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；b)展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；c)展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；d)展示由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；e)展示由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；f)展示由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；g)展示由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；h)展示由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞。在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ ID NO:21中阐述的氨基酸序列，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：i)当与展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；iii)当与展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iv)当与展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或v)其任何组合。在某些实施例中，所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQID NO:11和16中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:86中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα包括SEQ ID NO:1中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:58中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:236中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括选自由SEQ ID NO:259、260、272、261和249组成的组的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ IDNO:26和31中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:2中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括选自由SEQ ID NO:262、263、264、273和250组成的组的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列，其中当所述TCR在T细胞的所述表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：i)当与展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；iii)当与展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iv)当与展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iv)其任何组合。在某些实施例中，所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:26和31中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vβ包括SEQ IDNO:2中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括选自由SEQ ID NO:262、263、264、273和250组成的组的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:11、16、21、26、31和36中阐述的氨基酸序列，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：i)当与展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；iii)当与展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时；或iv)当与展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时或v)其任何组合。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:86和87中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:1和2中阐述的氨基酸序列。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，所述分离的TCR与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合。在某些实施例中，所述TCR不与由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽结合或基本上不与其结合。在某些实施例中，所述TCR与由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合相对于所述TCR与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合显著减弱。

在另一方面，本文提供了一种分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时，所述T细胞活化。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时，所述T细胞不活化或基本上不活化。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当所述T细胞与展示由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由选自由SEQ ID NO:45、46、49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞)共培养时的所述T细胞的所述活化相对于当所述T细胞与展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞)共培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括α链恒定区，所述α链恒定区包括SEQ ID NO:41中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链恒定区包括SEQID NO:42中阐述的氨基酸序列。在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括α链，所述α链包括α链恒定区，所述α链恒定区包括SEQ ID NO:247中阐述的氨基酸序列。

在前述方面的某些实施例中，所述TCR包括β链，所述β链包括β链恒定区，所述β链恒定区包括SEQ ID NO:43、44或248中阐述的氨基酸序列。

以下实施例适用于前述方面中的每个方面。

在某些实施例中，所述TCR是人TCR(例如，全长人TCR)。在某些实施例中，所述TCR是全长TCR、可溶性TCR或单链TCR。

在某些实施例中，所述肽在HLA-B*0702的背景下呈递。在某些实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示所述肽的第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示所述肽的第二细胞)共培养时，所述T细胞活化。在某些实施例中，当与展示所述肽的所述第二细胞(例如，在HLA-B*0702的背景下，展示所述肽的第二细胞)共培养时，所述T细胞表现出(a)CD69表面表达增加；(b)CD25表面表达增加；(c)CD107a表达增加；(d)T细胞增殖增加；(e)IFNγ分泌增加；或(f)活化T细胞核因子(NFAT)启动子活化增加。在某些实施例中，所述T细胞诱导展示所述肽的所述第二细胞(例如，在HLA-B*0702背景下，展示所述肽的第二细胞)的细胞凋亡或死亡。

在某些实施例中，所述TCR与效应子部分轭合。在某些实施例中，所述效应子部分是细胞毒性剂、细胞生长抑制剂、毒素、放射性核素、可检测标签或结合部分。在某些实施例中，所述结合部分是抗体。在某些实施例中，所述结合部分是抗体Fc区。

在另一方面，本公开提供了一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码包括本文所公开的TCR的α链可变区和/或β链可变区或α链和/或β链的多肽。在某些实施例中，所述多核苷酸包括SEQ ID NO:90的核酸序列。在某些实施例中，所述多核苷酸包括SEQ IDNO:238的核酸序列。在某些实施例中，所述多核苷酸编码包括选自由SEQ ID NO:83、266、267、268、269、270和271组成的组的氨基酸序列的多肽。在某些实施例中，所述多核苷酸编码包括SEQ ID NO:91的氨基酸序列的多肽。在某些实施例中，所述多核苷酸编码包括SEQID NO:265的氨基酸序列的多肽。在某些实施例中，所述多核苷酸编码包括SEQ ID NO:92的氨基酸序列的多肽。

在另一方面，本公开提供了一种分离的载体，所述分离的载体包括本文所公开的多核苷酸。在某些实施例中，所述载体是选自由以下组成的组的病毒载体：慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体和杆状病毒载体。在某些实施例中，所述载体包括编码选自由SEQ ID NO:83、266、267、268、269、270和271组成的组的氨基酸序列的多肽。

在另一方面，本公开提供了一种工程化细胞，所述工程化细胞包括本文所公开的多核苷酸或载体。在某些实施例中，所述多核苷酸或载体编码选自由SEQ ID NO:83、266、267、268、269、270和271组成的组的氨基酸序列。在另一方面，本公开提供了一种产生TCR的方法，所述TCR与由SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述方法包括培养工程化细胞，使得表达所述多核苷酸并产生所述TCR。在另一方面，本公开提供了一种通过此类方法产生的分离的TCR。

在另一方面，本公开提供了一种通过本文所公开的多核苷酸序列编码的TCR。另一方面，本公开提供了一种由本文公开的多核苷酸序列的表达产生的TCR。

在另一方面，本公开提供了一种产生工程化细胞的方法，所述工程化细胞表达与由SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR，所述方法包括在允许将载体引入到细胞中的条件下使细胞与编码本文所公开的TCR的α链可变区和/或β链可变区或α链和/或β链的多核苷酸(或包括此类多核苷酸的载体)接触(例如，包括SEQ ID NO:90或238的核酸序列的多核苷酸)。在某些实施例中，使用载体(例如，病毒载体)将所述多核苷酸引入到所述细胞中。在某些实施例中，通过电穿孔将所述多核苷酸引入到所述细胞中。在某些实施例中，所述多核苷酸是mRNA且通过电穿孔引入到所述细胞中。

在另一方面，本公开提供了一种工程化细胞，所述工程化细胞在细胞表面上呈递本文公开的TCR。在某些实施例中，所述细胞表达所述TCR。在某些实施例中，所述细胞是人淋巴细胞。在某些实施例中，所述细胞选自由以下组成的组：αβ或γδT细胞(例如，CD8⁺ T细胞或CD4⁺ T细胞)、自然杀伤T(NKT)细胞、恒定型自然杀伤T(iNKT)细胞、粘膜相关恒定型T(MAiT)细胞和自然杀伤(NK)细胞。在一个实施例中，所述细胞是iNKT细胞。

在另一方面，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本文公开的TCR、多核苷酸、载体或工程化细胞以及药学上可接受的载剂。

在另一方面，本公开提供了一种在受试者中诱导对展示由SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列组成的肽的细胞的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文公开的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物。在另一方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文公开的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物。在某些实施例中，所述TCR、所述多核苷酸、所述载体、所述工程化细胞或所述药物组合物静脉内施用。在某些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用另外的治疗剂。在某些实施例中，所述另外的治疗剂是化学治疗剂、放射治疗剂或检查点靶向剂。在某些实施例中，所述检查点靶向剂选自由以下组成的组：拮抗剂抗PD-1抗体、拮抗剂抗PD-L1抗体、拮抗剂抗PD-L2抗体、拮抗剂抗CTLA-4抗体、拮抗剂抗TIM-3抗体、拮抗剂抗LAG-3抗体、拮抗剂VISTA抗体、拮抗剂CD96抗体、拮抗剂抗CEACAM1抗体、拮抗剂抗TIGIT抗体、激动剂抗CD137抗体、激动剂抗GITR抗体以及激动剂抗OX40抗体。在某些实施例中，所述另外的治疗剂是抗PD-1抗体，任选地其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)或纳武单抗(nivolumab)。在某些实施例中，所述另外的治疗剂是吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂。在某些实施例中，所述抑制剂选自由以下组成的组：依帕卡哚司他(epacadostat)、F001287、吲哚莫德(indoximod)和NLG919。在某些实施例中，所述抑制剂是依帕卡哚司他。在某些实施例中，所述另外的治疗剂是疫苗。在某些实施例中，所述疫苗包括热休克蛋白肽复合物(HSPPC)，所述HSPPC包括与抗原肽复合的热休克蛋白。在某些实施例中，所述热休克蛋白是hsc70并且与肿瘤相关抗原肽复合。在某些实施例中，所述热休克蛋白是gp96并且与肿瘤相关抗原肽复合，其中所述HSPPC源自从受试者获得的肿瘤。在某些实施例中，所述癌症是白血病(例如，混合谱系白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病或慢性骨髓白血病)、腺泡横纹肌肉瘤、骨癌、脑癌(例如，胶质母细胞瘤)、乳腺癌、肛门癌、肛管癌或肛门直肠癌、眼癌、肝内胆管癌(例如，肝内胆管细胞癌)、关节癌、颈癌、胆囊癌或胸膜癌、鼻癌、鼻腔癌或中耳癌、口腔癌、外阴癌、骨髓瘤(例如，慢性骨髓癌症)、结肠癌、食道癌、宫颈癌、胃肠类癌。霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、肾癌、喉癌、肝癌(例如，肝细胞癌)、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、恶性间皮瘤、黑素瘤、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、腹膜癌、网膜癌和肠系膜癌、舌咽癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌(例如，肾细胞癌(RCC))、胃癌(gastric cancer)、小肠癌、软组织癌、胃癌(stomach cancer)、癌、肉瘤(例如，滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤)、睾丸癌、甲状腺癌、头颈癌、输尿管癌和膀胱癌。在某些实施例中，所述癌症是黑素瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、卵巢癌或滑膜肉瘤。在一个实施例中，所述癌症是滑膜肉瘤或脂肪肉瘤(例如，粘液样/圆形细胞脂肪肉瘤)。

附图说明

图1是条形图，示出了在用MLL-pM肽(EPR[pS]PSHSM；SEQ ID NO:45)、MLL-pP肽(RVR[pS]PTRSP；SEQ ID NO:47)或选自病毒T细胞表位的肽的混合物刺激三个HLA-B*0702健康供体的PBMC之后，来自所述三个HLA-B*0702健康供体的全部CD8+细胞中的TNFα+细胞的百分比。

图2是一对流式细胞术绘图，示出了对与未经脉冲处理的DC(“无肽”)或用肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)(“MLL-pM肽”)脉冲处理的DC共培养的记忆CD8+ T细胞的分析。共培养后，将细胞用MLL-pM/HLA-B*0702五聚体和抗CD8抗体染色。

图3是一组流式细胞术绘图，示出了使用负载有MLL-pM肽(EPR[pS]PSHSM；SEQ IDNO:45)(5微升/孔或0.5微升/孔)、未经磷酸化的MLL-M对照肽(EPRSPSHSM；SEQ ID NO:46)(5微升/孔)或MLL-pP肽(RVR[pS]PTRSP；SEQ ID NO:47)(5微升/孔)的PE标记的HLA-B*0702五聚体对表达嵌合TCR TCR0077、TCR0079、TCR0081、TCR0083或TCR0085的AK-D10R3细胞进行染色。每个绘图的右上图中指示了五聚体+TCR+细胞的百分比。

图4A和4B是流式细胞术绘图，示出了测试在效应子与靶细胞的比率为2:1的情况下与用50μg/ml或5μg/mL的MLL-pM肽(EPR[pS]PSHSM；SEQ ID NO:45)、50μg/mL的MLL-M对照肽(EPRSPSHSM；SEQ ID NO:46)或50μg/mL的MLL-pP肽(RVR[pS]PTRSP；SEQ ID NO:47)脉冲处理的T2-B7细胞(即，过表达HLA-B*0702的T2细胞)共培养后表达嵌合TCR TCR0077、TCR0079、TCR0081、TCR0083或TCR0085的AK-D10R3单个细胞克隆的活化的测定的结果。仅TCR表达性AK-D10R3细胞或含有TCR表达性AK-D10R3细胞和未经脉冲处理的T2-B7细胞的共培养物被包含作为对照。每个绘图的右上图中指示了TCR+EGFP+细胞的百分比。

图5是一组直方图，示出了测试TCR表达性AK-D10R3单细胞克隆在用50μg/ml或5μg/mL的MLL-pM肽(EPR[pS]PSHSM；SEQ ID NO:45)、50μg/mL的MLL-M对照肽(EPRSPSHSM；SEQID NO:46)或50μg/mL的MLL-pP肽(RVR[pS]PTRSP；SEQ ID NO:47)脉冲处理的T2-B7靶细胞中诱导细胞凋亡的潜力的测定结果。含有未经脉冲处理的T2-B7细胞或在没有TCR表达性AK-D10R3细胞的情况下进行温育的T2-B7细胞的共培养物充当对照。每个直方图的右上图中指示了半胱天冬酶+T2-B7细胞的百分比。

图6A和6B是条形图，示出了与用MLL-pM肽(EPR[pS]PSHSM；SEQ ID NO:45)、其丙氨酸修饰的变体、MLL-M肽或MLL-pP肽脉冲处理的T2-B7靶细胞共培养后的TCR0077表达性或TCR0085表达性AK-D10R3细胞的活化。AK-D10R3细胞的活化通过测量由IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体的活化产生的EGFP表达来评估。测定一式三份，并且y轴示出了EGFP阳性TCR阳性AK-D10R3细胞的百分比。

图7A和7B是热图，比较了所指示的TCR(图7A：TCR0077；图7B：TCR0081)与肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的一组变体的特异性，其中将SEQ ID NO:45的每个肽中的每个氨基酸的位置(除了锚定位置P2(P)和P9(M)之外)分别用19种其它可能的天然存在的氨基酸取代，并且另外将位置P4([pS])用未经磷酸化的丝氨酸取代。在与TCR表达性AK-D10R3效应子细胞共培养之前，将所述组的每个肽单独负载到T2靶细胞上。在TCR与所得到的突变体肽结合后，AK-D10R3细胞被活化以表达EGFP报告基因，这通过FACS检测。结果示出为热图，其中每个框表示MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)中的天然残基的氨基酸残基取代。天然残基示出在横轴上，并且取代残基示出在纵轴上。每个框都依照归一化平均活化的比率进行着色(归一化值被裁剪为最小值0.0和最大值1.0)。“X”表示未经测试的突变体。从所有肽负载样品(经过改变的序列和天然序列)中减去本底活化(未负载肽)。

图8A和8B是比较了所指示的TCR(图8A：TCR0077；图8B：TCR0081)的特异性曲线的条形图，并且示出了在表8中描述的每个变体MLL-pM肽(黑点，“经过改变的”)的归一化平均活化值，以及肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)(空心方形，“表位”)的值。根据表8中的肽序列，即SEQ ID NO:49、110-127、51、128-145、52、146-159、46、160-163、53、164-181、54、182-199、55、200-217、56和218-235从左到右展示了对应于表8中变体MLL-pM肽的归一化平均活化值。括号用于根据变体MLL-pM肽的变体残基在MLL-pM肽序列中的位置来指定变体MLL-pM肽的组。误差条表示平均值的标准误差(SEM)。

图9A-9D是流式细胞术绘图，示出了对照T细胞和TCR0078转导的T细胞的表型。具体地，用Zombie NIR^TM存活/死亡试剂、抗CD3-FITC、抗CD4-PerCp/Cy5.5和抗CD8-PE/Cy7抗体以及负载有MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的PE轭合的HLA-B*0702五聚体对经过TCR转导和未经TCR转导的刺激的原代T细胞进行染色。图9A示出了用于标识完整细胞、存活细胞、单细胞的流式细胞术门控的序列。具体地，左图示出了用于从整个样品中选择完整细胞的门控；中间图示出了用于从完整细胞中选择存活细胞的门控；右图示出了用于从存活细胞中选择单细胞的门控。图9A中的数据用于对照T细胞。使用相同的流式细胞术门控参数获得TCR0078转导的T细胞的相似数据。每个图中的数字示出了通过每个门控的细胞的百分比，其中完整细胞、存活细胞、单细胞用于实验的剩余部分。在图9B中，使用抗CD3-FITC抗体染色来标识T细胞，并且使用五聚体染色来标识对照T细胞(左)和TCR0078转导的T细胞(右)两者中的表达TCR0078的细胞。图9C示出了在三种条件中的每一种条件下的CD4和CD8的表达：左图示出了来自对照T细胞(来自左图，图9B)的整个群的数据；中间图示出了来自TCR0078转导的细胞(来自右图，图9B)的整个群的数据；并且右图示出了来自通过五聚体染色标识为表达TCR0078的58.1％的细胞的数据(来自图9B右图的门控细胞)。通过分别用抗CD4-PerCp/Cy5.5和抗CD8-PE/Cy7抗体染色来标识CD4和CD8。标识了两个细胞群(CD4+/CD8-和CD4-/CD8+)。所述两个细胞群在其它染色的情况下也很明显，如具有五聚体染色的抗CD3或抗CD8抗体(图9D)。

图10是一组条形图，示出了测试用模拟mRNA、TCR0086 mRNA或TCR0078 mRNA电穿孔并且在效应子:靶标比率为2:1的情况下与表达MLL的KG1a-A2细胞或表达MLL的KG1a-B7细胞共培养的T细胞的活化的测定结果。左图示出了CD25+ T细胞的百分比。中间图示出了CD107a+ T细胞的百分比。右图示出了增殖T细胞的百分比。

图11是示出了通过用模拟mRNA、TCR0086 mRNA或TCR0078mRNA电穿孔的T细胞特异性杀伤KG1a-B7靶细胞的百分比的图。x轴示出了这项研究中使用的效应子:靶标(E:T)比率。

图12A-12C是一组条形图，示出了与表达HLA-B*0702的各种肿瘤细胞系共培养后，表达TCR0078的Jurkat IL-2-NFAT-荧光素酶报告细胞系的活化。在图12A中，在各种效应子:靶标比率(如x轴)下将Jurkat细胞(效应子)与过表达HLA-B*0702(“KG1a B7”)的KG1a细胞、过表达HLA-B*0702(“K562 B7”)的K562细胞、Namalwa细胞、或Loucy细胞(靶标)共培养24小时。Jurkat细胞的活化通过测量由IL-2-NFAT-荧光素酶报告的活化产生的荧光素酶活性(所述荧光素酶活性在y轴上通过任意单位(a.u.)表示)来评估。图12B表示阴性对照，其中未用TCR0078转导的Jurkat报告细胞与相同的肿瘤细胞共培养。作为阳性对照，用佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯(PMA)和离子霉素(表示最大NFAT荧光素酶表达)刺激表达或不表达TCR0078的Jurkat细胞后，对发光进行测量(图12C)。对于“Jurkat对照”，使用针对图12B描述的未转导的Jurkat报告细胞。对于“表达TCR的Jurkat”，使用具有最佳的TCR表达的源自一个细胞克隆(“c75”)的TCR0078转导的Jurkat报告细胞。

图13A-13C是一组条形图，示出了在与各种肿瘤细胞系共培养后表达TCR0078的Jurkat NFAT-荧光素酶报告细胞系的活化。将TCR0078转导的表达HLA-B*0702(效应子)的Jurkat报告细胞与如Loucy、H929、过表达HLA-B*0702(“KG1a B7”)的KG1a(图13A)；Raji、YT-Indy、J.RT3-T3.5、KG1a B7和过表达HLA-B*0702的Raji(图13B)；以及THP-1、LCL721.221、过表达HLA-B*0702的THP-1、U266B1、KG1a B7和过表达HLA-B*0702(“721.221B7”)的LCL 721.221(图13C)在各种比率下共培养24小时。Jurkat细胞的活化通过测量由IL-2-NFAT-荧光素酶报告的活化产生的荧光素酶生物发光活性(所述荧光素酶活性在y轴上通过任意单位(a.u.)表示)来评估。在每个图中，KG1a-HLA-B*0702细胞系用作其它肿瘤细胞系的参考。

图14是一组图，示出了测试用模拟mRNA或TCR0078编码的mRNA电穿孔并且与用MLL-pM磷酸肽或未经磷酸化MLL-M对照肽脉冲处理的T2-B7靶细胞共培养的T细胞的活化的测定结果。与抗CD3和抗CD28抗体温育的T细胞用作阳性对照(“TCR0078 mRNA；CD3/CD28”)。上方的两个图示出了CD25+ T细胞的百分比。下方的两个图示出了CD107a+ T细胞的百分比。在所有四个图中，x轴示出了用于脉冲处理T2-B7细胞的肽的浓度。

图15是一对图，示出了肽脉冲处理的T2-B7细胞与用模拟mRNA或TCR0078 mRNA电穿孔的T细胞共培养后的计数。在共培养之前，已经用MLL-pM磷酸肽或未磷酸化的MLL-M对照肽对T2-B7细胞进行了脉冲处理。x轴示出了用于脉冲处理T2-B7细胞的肽的浓度。

图16A-16C是一组图，示出了测试与用MLL磷酸肽EPR[pS]SHSM(SEQ ID NO:45)或未经磷酸化的对照肽EPRSPSHSM(SEQ ID NO:46)脉冲处理的T2-HLA-B*0702(“T2-B7细胞”)共培养的TCR0078转导的T细胞的活化和细胞毒性活性的测定。在与稳定表达TCR0078的原代T细胞共培养20小时之前，用CFSE标记表达HLA-B*0702的T2细胞，并且然后用任一肽的剂量滴定脉冲处理2.5小时。图16A示出了在共培养后，被TCR0078转导的T细胞杀伤的T2-HLA-B*0702细胞的百分比(通过从没有与效应子原代T细胞共培养的总T2-B7细胞数目中减去存活的T2-B7细胞数目，然后除以没有共培养的总T2-B7细胞数目来计算)。图16B和16C分别示出了CD25和IFN-γ阳性原代T细胞在所有原代T细胞中的百分比，通过抗CD25-PE/Cy7和抗IFNγ-FITC抗体检测并且通过对应的荧光染料发出的荧光测量。x轴示出了用于脉冲处理T2-B7细胞的肽的浓度。使用采用邦费罗尼测试(Bonferroni test)的双向ANOVA。“***”表示p＝0.001。

图17A和17B是一对条形图，示出了测试与表达HLA*A02.01或T2-HLA-B*0702的T2细胞共培养且用磷酸肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)或未经磷酸化的肽EPRSPSHSM(SEQID NO:46)脉冲处理的TCR0078转导的原代T细胞的活化的测定。如图16中测量通过效应子原代T细胞进行的CD25和IFNγ表达。图17A比较了与用不同的肽脉冲处理的T2靶细胞共培养后CD25在T细胞上的表面表达(MFI＝平均荧光表达)。图17B比较了共培养后总效应子原代T细胞中IFN-γ阳性T细胞的百分比。使用采用邦费罗尼测试的双向ANOVA。“*”表示p＝0.05。“**”表示p＝0.01。“***”表示p＝0.001。“ns”表示不显著。

图18A-18C是一组条形图，示出了测试与KG1a-HLA*A02.01或KG1a-HLA-B*0702共培养的对照或TCR0078转导的原代T细胞的细胞毒性活性和活化的测定。共培养、细胞染色和计数方法与图16中的共培养、细胞染色和计数方法相同。图18A示出了共培养后被原代T细胞杀伤的KG1a肿瘤细胞的百分比，表示T细胞对KG1a肿瘤细胞的细胞毒性活性。图18B和图18C分别示出了共培养后CD25和IFN-γ阳性原代T细胞的百分比。使用采用邦费罗尼测试的双向ANOVA。“***”表示p＝0.001。

图19A-19E是一组条形图，示出了测试与KG1a-HLA-B*0702、K562-HLA-B*0702、SK-MEL-5、U266B1或Namalwa肿瘤细胞系共培养的对照和TCR0078转导的原代T细胞的细胞毒性活性的测定。共培养、细胞染色和计数方法与在图18A-18C中阐述的实验中使用的共培养、细胞染色和计数方法相同。x轴指示所使用的T细胞/肿瘤细胞的比率。使用采用邦费罗尼测试的双向ANOVA。“*”表示p＝0.05。“**”表示p＝0.01。“***”表示p＝0.001。

图20A和20B是一组条形图，示出了在过继性转移到携带KG1a-HLA-B*0702肿瘤的NOG小鼠之前，与KG1a-HLA-B*0702共培养的TCR0078转导的T细胞的细胞毒性活性和活化的离体测定。图20A和图20B分别比较了对照T细胞与TCR0078转导的T细胞之间的细胞毒性活性和T细胞活化(由CD25表达表示)。x轴指示各种T细胞/肿瘤细胞比率。

图21A-21C是一组图和流式细胞术绘图，示出了过继性转移到携带KG1a-HLA-B*0702肿瘤的NOG小鼠之后，TCR0078转导的人原代T细胞的抗肿瘤活性。给二十只小鼠每个皮下地注射一百万个肿瘤细胞(KG1a-HLA-B*0702)。注射后一天，二十只小鼠中的十只小鼠被静脉注射500万个TCR0078转导的原代T细胞(“表达TCR0078的T细胞”)并且另外十只小鼠未注射(“无T细胞”)。图21A比较了从第7天到第42天每3-5天测定的两组小鼠(每组n＝10)的肿瘤体积(平均+/-SEM)。使用采用邦费罗尼测试的双向ANOVA。“***”表示p＝0.001。图21B比较了注射有表达TCR0078的T细胞的10只个别小鼠的肿瘤体积。在第7天的第一次测量后，十只小鼠中的两只小鼠被处死，以确认T细胞注射和归巢；因此，在第7天后没有这两只小鼠的数据点。图21B中的每条线表示在整个42天的周期内剩余的八只小鼠之一的肿瘤体积。除了具有显著肿瘤生长(白色圆圈)的两只小鼠外，八只小鼠中有六只小鼠具有最小的肿瘤生长(黑色圆圈)。图21C示出了一对流式细胞术绘图，标识了注射有TCR0078转导的T细胞的小鼠脾脏中的人T细胞和转移性肿瘤细胞。在肿瘤植入后第41天处死所有小鼠，并且收集、处理并用抗CD3抗体和抗CD45抗体染色其脾脏，以供随后通过荧光活化的细胞分选(FACS)进行检测。图21C的左图示出了在图21B中在具有显著肿瘤生长的已注射小鼠中，T细胞(CD3+/CD45+，样品中所有细胞的0.027％)和肿瘤细胞(CD3-/CD45+，样品中所有细胞的0.25％)的百分比。图21C的右图示出了在图21B中在具有最小肿瘤生长的已注射小鼠的脾脏中T细胞(72.5％)和肿瘤细胞(0.037％)的百分比。指示了每个门控内的细胞的百分比。

具体实施方式

提供了TCR(例如，与MLL磷酸肽结合的TCR)、包括这些TCR的细胞和药物组合物、编码这些TCR的核酸、用于制备这些TCR的表达载体和宿主细胞以及使用这些TCR治疗受试者的方法。本文所公开的TCR对于引导针对在细胞表面上展示MLL磷酸肽的癌细胞的免疫应答，并且因此对于治疗受试者的MLL表达性癌症特别有用。

5.1定义

如本文所使用的，术语“约”和“大约”，当用于修饰数值或数值范围时，指示5％到10％以上(例如，高达5％到10％以上)和5％到10％低于(例如，高达5％到10％以下)所述值或范围的偏差维持在所述值或范围旨在意指的范围内。

如本文所使用的，术语“MLL”是指在人中由KMT2A基因编码的混合谱系白血病(还称为组蛋白-赖氨酸-N-甲基转移酶2A)。

如本文所使用的，术语“T细胞受体”和“TCR”可互换使用并且是指包括来自αβ或γδT细胞受体的CDR或可变区的分子。TCR的实例包含但不限于全长TCR、TCR的抗原结合片段、缺乏跨膜区和胞质区的可溶性TCR、含有通过柔性接头附接的TCR可变区的单链TCR、通过工程化二硫键连接的TCR链、单TCR可变结构域、单肽-MHC特异性TCR、多特异性TCR(包含双特异性TCR)、TCR融合、包括共刺激区的TCR、人TCR、人源化TCR、嵌合TCR、重组产生的TCR和合成TCR。在某些实施例中，TCR是包括全长α链和全长β链的全长TCR。在某些实施例中，TCR是缺乏一个或多个跨膜区和/或胞质区的可溶性TCR。在某些实施例中，TCR是包括通过肽接头连接的Vα和Vβ的单链TCR(scTCR)，如具有如PCT公开号：WO 2003/020763、WO 2004/033685或WO 2011/044186中所描述的结构的scTCR，所述公开中的每一个通过引用整体并入本文中。在某些实施例中，TCR包括跨膜区。在某些实施例中，TCR包括共刺激信号传导区。

如本文所使用的，术语“全长TCR”是指包括第一多肽链和第二多肽链的二聚体的TCR，所述多肽链中的每一个包括TCR可变区和包括TCR跨膜区和TCR胞质区的TCR恒定区。在某些实施例中，全长TCR包括一个或两个未修饰的TCR链，例如，未修饰的α、β、γ或δTCR链。在某些实施例中，全长TCR包括一个或两个经过改变的TCR链，如包括相对于未修饰的TCR链的一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的嵌合TCR链和/或TCR链。在某些实施例中，全长TCR包括成熟的全长TCRα链和成熟的全长TCRβ链。在某些实施例中，全长TCR包括成熟的全长TCRγ链和成熟的全长TCRδ链。

如本文所使用的，术语“TCR可变区”是指成熟TCR多肽链(例如，TCRα链或β链)的部分，所述部分不由TCRα链的TRAC基因、TCRβ链的TRBC1基因或TRBC2基因、TCRδ链的TRDC基因或TCRγ链的TRGC1基因或TRGC2基因编码。在一些实施例中，TCRα链的TCR可变区涵盖由TRAV基因和/或TRAJ基因编码的成熟TCRα链多肽的所有氨基酸，并且TCRβ链的TCR可变区涵盖由TRBV基因、TRBD基因和/或TRBJ基因编码的成熟TCRβ链多肽的所有氨基酸(参见例如，《T细胞受体资料手册(T cell receptor Factsbook)》,(2001),LeFranc和LeFranc,学术出版社(Academic Press),ISBN0-12-441352-8，所述文献通过引用整体并入本文中)。TCR可变区通常包括框架区(FR)1、2、3和4以及互补决定区(CDR)1、2和3。

如本文所使用的，术语“α链可变区”和“Vα”可互换使用，并且是指TCRα链的可变区。

如本文所使用的，术语“β链可变区”和“Vβ”可互换使用，并且是指TCRβ链的可变区。

如本文在TCR的背景下所使用的，术语“CDR”或“互补决定区”是指在TCR链(例如，α链或β链)的可变区内发现的非邻接的抗原结合位点。这些区已经在Lefranc,(1999)《免疫学家(The Immunologist)》7:132-136；Lefranc等人,(1999)《核酸研究(Nucleic AcidsRes)》27:209-212；LeFranc(2001)《T细胞受体资料手册》,学术出版社,ISBN 0-12-441352-8；Lefranc等人,(2003)《发展竞争免疫学(Dev Comp Immunol)》27(1):55-77；以及在Kabat等人,(1991)《免疫学上所关注的蛋白的序列(Sequences of protein of immunologicalinterest)》中描述，所述文献中的每一个文献通过引用整体并入本文中。在某些实施例中，根据上文Lefranc(1999)中所描述的IMGT编号系统测定CDR。在某些实施例中，根据上文Kabat中所描述的Kabat编号系统定义CDR。在某些实施例中，CDR是凭经验定义的，例如，基于TCR与同源抗原(例如，肽或肽-MHC复合物)的相互作用的结构分析。在某些实施例中，TCR的α链和β链CDR根据不同的惯例(例如，根据Kabat编号系统或IMGT编号系统，或凭经验基于结构分析)来定义。

如本文所使用的，术语“框架氨基酸残基”是指TCR链(例如，α链或β链)的框架区中的那些氨基酸。如本文所使用的，术语“框架区”或“FR”包含作为TCR可变区的一部分但不是CDR的一部分的氨基酸残基。

如本文所使用的，关于TCR的术语“恒定区”是指由TRAC基因(对于TCRα链)、TRBC1或TRBC2基因(对于TCRβ链)、TRDC基因(对于TCRδ链)或TRGC1或TRGC2基因(对于TCRγ链)编码的TCR的一部分，任选地缺少跨膜区的全部或一部分和/或胞质区的全部或一部分。在某些实施例中，TCR恒定区缺少跨膜区和胞质区。TCR恒定区不包含由TRAV、TRAJ、TRBV、TRBD、TRBJ、TRDV、TRDD、TRDJ、TRGV或TRGJ基因编码的氨基酸(参见例如，《T细胞受体资料手册》,(2001),LeFranc和LeFranc,学术出版社,ISBN0-12-441352-8，所述文献通过引用整体并入本文中)。

如本文所使用的，术语“主要组织相容性复合体”和“MHC”可互换使用，并且是指MHC I类分子和/或MHC II类分子。

如本文所使用的，术语“MHC I类”是指MHC I类α链和β2微球蛋白链的二聚体，并且术语“MHC II类”是指MHC II类α链和MHC II类β链的二聚体。

如本文所使用的，术语“肽-MHC复合物”是指具有结合在本领域公认的MHC肽结合口袋中的肽的MHC分子(MHC I类或MHC II类)。在一些实施例中，MHC分子是在细胞表面上表达的膜结合蛋白。在一些实施例中，MHC分子是缺乏跨膜区或胞质区的可溶性蛋白质。

如本文所使用的，术语“[pS]”和“(pS)”可互换使用并且是指磷酸丝氨酸。

如本文所使用的，关于TCR的术语“细胞外”是指重组跨膜蛋白的位于细胞外的一个或多个部分。

如本文所使用的，关于TCR链的术语“跨膜”是指TCR链的嵌入细胞的质膜中的一个或多个部分。

如本文所使用的，关于TCR链的术语“细胞质”是指TCR链的位于细胞的细胞质中的一个或多个部分。

如本文所使用的，术语“共刺激信号传导区”是指共刺激分子的负责介导细胞内信号传导事件的细胞内部分。

“结合亲和力”通常是指分子(例如，TCR)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，肽-MHC复合物)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所使用的，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，TCR和肽-MHC复合物)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(K_D)表示。亲和力可以以本领域已知的多种方式测量和/或表示，包含但不限于平衡解离常数(K_D)和平衡缔合常数(K_A)。K_D由k_off/k_on的商计算，而K_A由k_on/k_off的商计算。k_on是指例如TCR对肽-MHC复合物的缔合速率常数，并且k_off是指例如TCR对肽-MHC复合物的解离速率常数。k_on和k_off可以通过本领域普通技术人员已知的技术测定，如使用

或KinExA。如本文所使用的，“较低亲和力”是指较大的K_D。

如本文所使用的，术语“特异性结合”是指TCR优先结合特定抗原(例如，特定肽或特定肽-MHC复合物组合)的能力，因为这种结合是本领域技术人员所理解的。例如，与抗原特异性结合的TCR可以通常以较低亲和力与其它抗原结合，如通过例如

或本领域已知的其它免疫测定法(参见例如Savage等人,《免疫(Immunity)》,1999,10(4):485-92，其通过引用整体并入本文中)所测定的。在具体实施例中，当TCR与另一种抗原结合时，与抗原特异性结合的TCR以至少缔合常数(K_a)的2倍、5倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1,000倍、5,000倍或10,000倍的K_a与抗原结合。在某些实施例中，本文所公开的TCR与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽特异性结合。在某些实施例中，本文所公开的TCR与由SEQ IDNO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽特异性结合。

在一些实施例中，当TCR与抗原结合的结合常数(K_a)比当TCR与另一种抗原结合时的K_a小至少2倍、5倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1,000倍、5,000倍或10,000倍时，TCR基本上不与抗原结合。在一些实施例中，当TCR与抗原之间的结合比TCR与另一种抗原之间的结合弱至少2倍、5倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1,000倍、5,000倍或10,000倍时，TCR基本上不与抗原结合。

如本文所使用的，如果测试TCR与第一抗原之间的结合相对于测试TCR与第二抗原之间的结合减少至少30％、40％、50％、60％、70％或80％，则测试TCR与第一抗原之间的结合相对于测试TCR与第二抗原之间的结合“显著减弱”，例如在给定的实验中，或使用来自多个实验的平均值。

在一些实施例中，当TCR在T细胞的表面表达时，如果T细胞的活化比当T细胞与展示另一个肽的第三细胞共培养时的活化弱至少2倍、5倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1,000倍、5,000倍或10,000倍，则当T细胞与展示肽的第二细胞共培养时，T细胞基本上不活化。

如本文所使用的，当测试TCR在T细胞的表面表达时，如果当与展示第一肽的第二细胞共培养时T细胞的活化相对于当与展示第二肽的第三细胞共培养时T细胞的活化减少至少30％、40％、50％、60％、70％或80％，例如，在给定的实验中，或使用来自多个实验的平均值，如通过例如，包括以下步骤的分析所评估的，则当T细胞与展示第一肽的第二细胞共培养时T细胞的活化相对于当T细胞与展示第二肽的第三细胞共培养时T细胞的活化“显著减弱”：(a)在包括IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体的T细胞中表达测试TCR；(b)用第一肽或第二肽对HLA-B*0702阳性T2细胞(“T2-B7细胞”)进行脉冲处理；(c)在37℃和10％CO₂下，以1:2的比率将TCR表达性T细胞与肽脉冲处理的T2-B7靶细胞共培养16小时；(d)使用流式细胞术分析TCR和EGFP的表达；(e)测定TCR+EGFP+细胞的百分比；和(f)基于TCR+EGFP+细胞的相应百分比，测定当与展示第一肽的T2-B7靶细胞共培养时，相对于当与展示第二肽的T2-B7靶细胞共培养时，T细胞活化的减少。

如本文所使用的，“表位”是本领域中的术语，并且是指TCR可以结合的抗原(例如，肽或肽-MHC复合物)的局部区。在某些实施例中，TCR结合的表位可以通过例如NMR光谱、X射线衍射结晶学研究、ELISA测定、氢/氘交换质谱(例如，液相色谱电喷雾质谱法)、流式细胞术分析、诱变作图(例如，定点诱变作图)和/或结构建模来测定。对于X射线结晶学，可以使用本领域中已知的方法中的任何一种方法完成结晶(例如，Giegé R等人,(1994)《晶体学学报D区—生物晶体学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)》50(Pt 4):339-350；McPherson A(1990)《《欧洲生物化学杂志(Eur J Biochem)》189:1-23；Chayen NE(1997)《结构(Structure)》5:1269-1274；McPherson A(1976)《生物化学杂志(J Biol Chem)》251:6300-6303，上述文献中的每一个通过引用整体并入本文)。TCR:抗原晶体可以使用公知的X射线衍射技术进行研究并且可以使用如X-PLOR等计算机软件(耶鲁大学,1992,由分子模拟公司(Molecular Simulations,Inc.)改进，参见例如，Meth Enzymol(1985)第114&115卷,Wyckoff HW等人编著,U.S.2004/0014194)；以及BUSTER(Bricogne G(1993)《晶体学学报D区—生物晶体学》49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)《酶学方法(Meth.Enzymol.)》276A:361-423,Carter CW编著；Roversi P等人,(2000)《晶体学学报D区—生物晶体学》56(Pt10):1316-1323)，上述文献中的每一个通过引用整体并入本文。诱变作图研究可以使用本领域技术人员已知的任何方法来完成。关于诱变技术的描述，包含丙氨酸扫描诱变技术，参见例如，Champe M等人,(1995)《生物化学杂志》270:1388-1394以及Cunningham BC&WellsJA(1989)《科学(Science)》244:1081-1085，上述文献中的每一个通过引用整体并入本文。在具体实施例中，使用丙氨酸扫描诱变研究测定抗原的表位。在具体实施例中，使用氢/氘交换质谱测定抗原的表位。在某些实施例中，抗原是肽-MHC复合物。在某些实施例中，抗原是由MHC分子呈递的肽。

如本文所使用的，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”以及“治疗(treatment)”是指本文中所描述的治疗性或预防性措施。在一些实施例中，“治疗”方法采用向患有疾病或病状或倾向于患有此类疾病或病状的受试者施用TCR或表达TCR的细胞，以预防、治愈、延迟疾病或病状或复发性疾病或病症、降低其严重度或改善其一种或多种症状或延长受试者的存活期超过在不使用此类治疗的情况下所预期的时间。

如本文所使用的，在向受试者施用疗法的背景下，术语“有效量”是指达到所期望的预防或治疗效果的量的疗法。

如本文所使用的，术语“受试者”包含任何人或非人动物。在一个实施例中，受试者是人或非人哺乳动物。在一个实施例中，受试者是人。

两个序列(例如，氨基酸序列或核酸序列)之间的“同一性百分比”的测定可以使用数学算法来完成。用于比较两个序列的数学算法的具体的非限制性的实例是Karlin S&Altschul SF(1990)《美国国家科学院院刊(PNAS)》87:2264-2268的算法，所述算法在Karlin S&Altschul SF(1993)《美国国家科学院院刊(PNAS)》90:5873-5877中被修改，所述文献中的每一个通过引用整体并入本文中。此类算法并入到Altschul SF等人,(1990)《分子生物学杂志》215:403的NBLAST和XBLAST程序中，所述文献通过引用整体并入本文中。可以用NBLAST核苷酸程序参数集(例如，分数＝100，字长＝12)执行BLAST核苷酸搜索，以获得与本文所描述的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序参数集(例如，分数＝50，字长＝3)执行BLAST蛋白检索，以获得与本文所描述的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的有空位的比对(gapped alignments)，可以利用如Altschul SF等人,(1997)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》,25:3389-3402)中所描述的有空位的BLAST，所述文献通过引用整体并入本文中。可替代地，PSI BLAST可以用于执行检测分子之间的距离关系的迭代检索。同上。当利用BLAST、有空位的BLAST以及PSI Blast程序时，可以使用相应程序的(例如，XBLAST和NBLAST的)默认参数(参见例如，万维网(ncbi.nlm.nih.gov)上的国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI))。用于序列比较的数学算法的另一个具体的非限制性实例是Myers和Miller的算法，1988,CABIOS4:11-17，所述文献通过引用整体并入本文中。这种算法并入ALIGN程序(第2.0版)中，所述程序是GCG序列比对软件包的一部分。当利用ALIGN程序比较氨基酸序列时，可以使用PAM120权重残基表、缺口长度罚分12以及缺口罚分4。

在容许或不容许缺口的情况下，可以使用类似于以上所描述的那些技术的技术，测定两个序列之间的同一性百分比。在计算同一性百分比时，通常仅对确切的匹配进行计数。

如本文所使用的，术语“效应子部分”是指增加或降低分子的天然活性或赋予分子新颖活性的分子的组分或官能团。在某些实施例中，效应子部分是结合部分。在一个实施例中，结合部分与细胞表面蛋白结合。在某些实施例中，所述结合部分是抗体。

如本文所使用的，术语“抗体(antibody)”和“抗体(antibodies)”包含全长抗体、全长抗体的抗原结合片段以及包括抗体CDR、VH区或VL区的分子。抗体的实例可以包含单克隆抗体、重组产生的抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(包含双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、免疫球蛋白、合成抗体、包括两个重链分子和两个轻链分子的四聚体抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-抗体重链对、胞内抗体、异源轭合物抗体、抗体-药物轭合物、单结构域抗体、单价抗体、单链抗体或单链Fv(scFv)、驼峰化(camelized)抗体、亲合体(affybody)、Fab片段、F(ab')₂片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(抗Id)抗体(包含例如抗抗Id抗体)以及上述各项中的任何项的抗原结合片段。在某些实施例中，本文所描述的抗体是指多克隆抗体群。抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何种类(例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁或IgA₂)或任何亚类(例如，IgG_2a或IgG_2b)的免疫球蛋白分子。在某些实施例中，本文所描述的抗体是IgG抗体或其种类(例如，人IgG₁或IgG₄)或亚类。在具体实施例中，抗体是人源化单克隆抗体。在另一个具体实施例中，抗体是人单克隆抗体。

5.2 T细胞受体

在一方面，本公开提供了一种与由EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的氨基酸序列组成的肽结合的TCR。在某些实施例中，所述TCR与由EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的氨基酸序列组成的肽特异性结合。在某些实施例中，所述TCR与包括由EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的氨基酸序列组成的肽的肽-MHC复合物结合。在某些实施例中，所述TCR与包括由SEQID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的肽-MHC复合物特异性结合。在一方面，本公开提供了一种与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)结合的TCR，所述TCR由主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递。在一方面，本公开提供了一种与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR。示例性TCR的氨基酸序列在本文的表1中阐述。

在一方面，本公开提供了一种与由RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)的氨基酸序列组成的肽结合的TCR。在某些实施例中，所述TCR与由RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)的氨基酸序列组成的肽特异性结合。在某些实施例中，所述TCR与包括由RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)的氨基酸序列组成的肽的肽-MHC复合物结合。在某些实施例中，所述TCR与包括由SEQID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的肽-MHC复合物特异性结合。在一方面，本公开提供了一种与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)结合的TCR，所述TCR由主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递。在一方面，本公开提供了一种与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR。示例性TCR的氨基酸序列在本文的表1中阐述。

表1.示例性TCR的氨基酸序列

表2.示例性MLL TCR的α链CDR氨基酸序列*

*CDR是根据Lefranc等人,《发展竞争免疫学》,2003；27(1):55-77所定义的。表3.示例性MLL TCR的β链CDR氨基酸序列*

*CDR是根据Lefranc等人,《发展竞争免疫学》,2003；27(1):55-77所定义的。表4.示例性MLL TCR的可变区氨基酸序列

表5.示例性肽序列

本文所公开的TCR的CDR可以使用任何本领域公认的编号惯例来定义。另外或可替代地，CDR可以凭经验定义，例如，基于TCR与同源抗原(例如，肽或肽-MHC复合物)的相互作用的结构分析。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)或与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括本文表1中所公开的Vα或Vβ的CDR中的一个、两个或全部三个，其中CDR根据IMGT编号系统定义，例如，如在上文LefrancM-P(1999)和上文Lefranc M-P等人,(1999)中所描述的。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)或与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括本文表1中所公开的Vα或Vβ的CDR中的一个、两个或全部三个，其中CDR根据上文Kabat中所描述的Kabat编号系统进行定义。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)或与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括本文表1中所公开的Vα或Vβ的CDR中的一个、两个或全部三个，其中CDR凭经验测定，例如基于TCR与同源抗原(例如，肽-MHC复合物)的相互作用的结构分析。

在某些实施例中，本公开提供了一种与SEQ ID NO:45结合的TCR(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)或与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括本文表1中所公开的Vα或Vβ的CDR中的一个、两个或全部三个，其中每个CDR根据IMGT或Kabat编号系统定义或凭经验测定，例如，基于TCR与同源抗原(例如，肽或肽-MHC复合物)的相互作用的结构分析。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:1的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:2的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:86的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:87的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:3的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:4的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ IDNO:88的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ IDNO:89的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ IDNO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:5的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:6的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:106的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:107的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:7的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:8的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:7的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:108的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α分别包括SEQ ID NO:9的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列，并且所述CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:10的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在一个实施例中，每个CDR根据IMGT编号系统定义。在一个实施例中，每个CDR根据Kabat编号系统定义。在一个实施例中，每个CDR是凭经验定义的，例如，基于TCR与同源抗原(例如，肽或肽-MHC复合物)的相互作用的结构分析。在一个实施例中，每个CDR是根据IMGT或Kabat编号系统独立定义或凭经验测定的，例如，基于TCR与同源抗原(例如，肽-MHC复合物)的相互作用的结构分析。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物)，所述TCR包括：

(a)CDR1α，所述CDR1α包括SEQ ID NO:11的氨基酸序列和/或

(b)CDR2α，所述CDR2α包括SEQ ID NO:16的氨基酸序列和/或

(c)CDR3α，所述CDR3α包括SEQ ID NO:21的氨基酸序列和/或

(d)CDR1β，所述CDR1β包括SEQ ID NO:26的氨基酸序列和/或

(e)CDR2β，所述CDR2β包括SEQ ID NO:31的氨基酸序列和/或

(f)CDR3β，所述CDR3β包括SEQ ID NO:36的氨基酸序列。

(a)CDR1α，所述CDR1α包括SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或

(b)CDR2α，所述CDR2α包括SEQ ID NO:17的氨基酸序列和/或

(c)CDR3α，所述CDR3α包括SEQ ID NO:22的氨基酸序列和/或

(d)CDR1β，所述CDR1β包括SEQ ID NO:27的氨基酸序列和/或

(e)CDR2β，所述CDR2β包括SEQ ID NO:32的氨基酸序列和/或

(f)CDR3β，所述CDR3β包括SEQ ID NO:37的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括：

(a)CDR1α，所述CDR1α包括SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或

(b)CDR2α，所述CDR2α包括SEQ ID NO:18的氨基酸序列和/或

(c)CDR3α，所述CDR3α包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列和/或

(d)CDR1β，所述CDR1β包括SEQ ID NO:28的氨基酸序列和/或

(e)CDR2β，所述CDR2β包括SEQ ID NO:33的氨基酸序列和/或

(f)CDR3β，所述CDR3β包括SEQ ID NO:38的氨基酸序列。

(a)CDR1α，所述CDR1α包括SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或

(b)CDR2α，所述CDR2α包括SEQ ID NO:109的氨基酸序列和/或

(c)CDR3α，所述CDR3α包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列和/或

(d)CDR1β，所述CDR1β包括SEQ ID NO:28的氨基酸序列和/或

(e)CDR2β，所述CDR2β包括SEQ ID NO:33的氨基酸序列和/或

(f)CDR3β，所述CDR3β包括SEQ ID NO:38的氨基酸序列。

(a)CDR1α，所述CDR1α包括SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或

(b)CDR2α，所述CDR2α包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列和/或

(c)CDR3α，所述CDR3α包括SEQ ID NO:24的氨基酸序列和/或

(d)CDR1β，所述CDR1β包括SEQ ID NO:29的氨基酸序列和/或

(e)CDR2β，所述CDR2β包括SEQ ID NO:34的氨基酸序列和/或

(f)CDR3β，所述CDR3β包括SEQ ID NO:39的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括：

(a)CDR1α，所述CDR1α包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列和/或

(b)CDR2α，所述CDR2α包括SEQ ID NO:20的氨基酸序列和/或

(c)CDR3α，所述CDR3α包括SEQ ID NO:25的氨基酸序列和/或

(d)CDR1β，所述CDR1β包括SEQ ID NO:30的氨基酸序列和/或

(e)CDR2β，所述CDR2β包括SEQ ID NO:35的氨基酸序列和/或

(f)CDR3β，所述CDR3β包括SEQ ID NO:40的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括CDR3α和/或CDR3β，所述CDR3α包括SEQ ID NO:21的氨基酸序列，所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括CDR3α和/或CDR3β，所述CDR3α包括SEQ ID NO:22的氨基酸序列，所述CDR3β包括SEQ ID NO:37中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括CDR3α和/或CDR3β，所述CDR3α包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列，所述CDR3β包括SEQ ID NO:38中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括CDR3α和/或CDR3β，所述CDR3α包括SEQ ID NO:24的氨基酸序列，所述CDR3β包括SEQ ID NO:39中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括CDR3α和/或CDR3β，所述CDR3α包括SEQ ID NO:25的氨基酸序列，所述CDR3β包括SEQ ID NO:40的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括Vα，所述Vα具有分别在SEQ ID NO:11、16和21；12、17和22；13、18和23；13、109和23；或14、19和24中阐述的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括Vα，所述Vα具有分别在SEQ ID NO:11、16和21中阐述的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有分别在SEQ ID NO:26、31和36；27、32和37；28、33和38；或29、34和39中阐述的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有分别在SEQ ID NO:26、31和36中阐述的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括Vα，所述Vα具有分别在SEQ ID NO:15、20和25中阐述的CDR1α、CDR2α和CDR3α氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有分别在SEQ ID NO:30、35和40中阐述的CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)结合的TCR，其中所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα具有CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ具有CDR1β、CDR2β和CDR3β，并且其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α、CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:11、16、21、26、31和36；12、17、22、27、32和37；13、18、23、28、33和38；13、109、23、28、33和38；或14、19、24、29、34和39中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)结合的TCR，其中所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα具有CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ具有CDR1β、CDR2β和CDR3β，并且其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α、CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:11、16、21、26、31和36中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，其中所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα具有CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ具有CDR1β、CDR2β和CDR3β，并且其中所述CDR1α、CDR2α和CDR3α、CDR1β、CDR2β和CDR3β分别包括SEQ ID NO:15、20、25、30、35和40中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有与SEQ ID NO:1、3、5、7、86、88或106中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vα，所述Vα具有SEQ ID NO:1、3、5、7、86、88或106中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有与SEQ ID NO:86中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vα，所述Vα具有SEQ ID NO:86中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有与SEQ ID NO:2、4、6、8、87、89、107或108中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有SEQ ID NO:2、4、6、8、87、89、107或108中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了与由在SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有与SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有与SEQ ID NO:9中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vα，所述Vα具有SEQ ID NO:9中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有与SEQ ID NO:10中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有SEQ ID NO:10中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα具有与SEQ ID NO:1、3、5、7、86、88、106中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列，所述Vβ具有与SEQ ID NO:2、4、6、8、87、89、107或108中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα和Vβ分别包括SEQ ID NO:1和2、3和4、5和6、7和8、86和87、88和89、106或107、7和108中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα具有与SEQ ID NO:86中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列，所述Vβ具有与SEQ ID NO:87中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα和Vβ分别包括SEQ ID NO:86和87中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα具有与SEQ ID NO:9中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列，所述Vβ具有与SEQ IDNO:10中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和Vβ，所述Vα和Vβ分别包括SEQ ID NO:9和10中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有源自人TRAV27种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:73的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRAV27种系序列(例如，包括SEQ ID NO:73的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α全部源自人TRAV27种系序列(例如，包括SEQ ID NO:73的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和CDR3α，所述Vα具有源自人TRAV27种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ IDNO:73的氨基酸序列)，所述CDR3α具有SEQ ID NO:21中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有源自人TRBV27种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRBV27种系序列(例如，包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β全部源自人TRBV27种系序列(例如，包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ和CDR3β，所述Vβ具有源自人TRBV27种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ IDNO:74的氨基酸序列)，所述CDR3β具有SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有源自人TRAV10种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRAV10种系序列(例如，包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α全部源自人TRAV10种系序列(例如，包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和CDR3α，所述Vα具有源自人TRAV10种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ IDNO:75的氨基酸序列)，所述CDR3α具有SEQ ID NO:22中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有源自人TRBV12-3种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRBV12-3种系序列(例如，包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β全部源自人TRBV12-3种系序列(例如，包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ和CDR3β，所述Vβ具有源自人TRBV12-3种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列)，所述CDR3β具有SEQ ID NO:37中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有源自人TRAV8-4种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:77的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRAV8-4种系序列(例如，包括SEQ ID NO:77的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α全部源自人TRAV8-4种系序列(例如，包括SEQ ID NO:77的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和CDR3α，所述Vα具有源自人TRAV8-4种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQID NO:77的氨基酸序列)，所述CDR3α具有SEQ ID NO:23中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有源自人TRBV9种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:78的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRBV9种系序列(例如，包括SEQ ID NO:78的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β全部源自人TRBV9种系序列(例如，包括SEQ ID NO:78的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ和CDR3β，所述Vβ具有源自人TRBV9种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ IDNO:78的氨基酸序列)，所述CDR3β具有SEQ ID NO:38中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有源自人TRAV20种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:79的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRAV20种系序列(例如，包括SEQ ID NO:79的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α全部源自人TRAV20种系序列(例如，包括SEQ ID NO:79的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和CDR3α，所述Vα具有源自人TRAV20种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ IDNO:79的氨基酸序列)，所述CDR3α具有SEQ ID NO:24中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有源自人TRBV7-9种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRBV7-9种系序列(例如，包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β全部源自人TRBV7-9种系序列(例如，包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ和CDR3β，所述Vβ具有源自人TRBV7-9种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQID NO:80的氨基酸序列)，所述CDR3β具有SEQ ID NO:39中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与在SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vα，所述Vα具有源自人TRAV21种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRAV21种系序列(例如，包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1α和CDR2α全部源自人TRAV21种系序列(例如，包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vα和CDR3α，所述Vα具有源自人TRAV21种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ IDNO:81的氨基酸序列)，所述CDR3α具有SEQ ID NO:25中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括Vβ，所述Vβ具有源自人TRBV5-1种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列)。选自框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β的一个或多个区(例如，这些区中的两个区、三个区、四个区或五个区)可以源自人TRBV5-1种系序列(例如，包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列)。在某些实施例中，框架1、框架2、框架3、CDR1β和CDR2β全部源自人TRBV5-1种系序列(例如，包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列)。在某些实施例中，所述TCR包括Vβ和CDR3β，所述Vβ具有源自人TRBV5-1种系序列的氨基酸序列(例如，包括SEQID NO:82的氨基酸序列)，所述CDR3β具有SEQ ID NO:40中阐述的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:249和250、251和252、253和254、255和256或257和258中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:249和250、251和252、253和254、255和256或257和258中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:58和59中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:58和60中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链和所述β链分别包括SEQ ID NO:236和237中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链包括选自由SEQ IDNO:58、236、259、260、272和261组成的组的氨基酸序列，并且所述β链进一步分别包括选自由SEQ ID NO:59、237、262、263、264、273和60组成的组的氨基酸序列。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:61和62中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:61和63中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:64和65中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:64和66中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:67和68中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:67和69中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:70和71中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，本公开提供了一种与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR(例如，分离的TCR)(例如，与EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)HLA-B*0702复合物结合的TCR)，所述TCR包括α链和β链，所述α链和β链分别包括SEQ ID NO:70和72中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。在某些实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，或所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GS。在某一实施例中，所述α链进一步包括C端处的氨基酸序列GS，并且所述β链进一步包括C端处的氨基酸序列GSGATNFSLLKQAGDVEENPG(SEQ ID NO:93)。

在另一方面，本文提供了TCR，所述TCR与如上文所描述的TCR结合到包括SEQ IDNO:45或47中阐述的氨基酸序列的肽的相同表位(例如，相同氨基酸残基)。在某些实施例中，肽与如上所述的MHC(例如，HLA-B*0702)复合。在某些实施例中，TCR包括并非天然存在于动物或哺乳动物(例如，人)体内的TCR种系库中的序列。

在一方面，本文提供了一种TCR，所述TCR与以下中的一个、两个、三个或全部四个结合：i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及iv)由选自由SEQ ID NO:117、128、135、192和233组成的组的氨基酸序列组成的肽。在一个实施例中，所述TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或iii)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽；或iv)其任何组合，例如，如在流式细胞仪分析或Biacore分析中测量的。在一个实施例中，在某些实施例中，所述TCR不与以下中的任何一个结合或基本上不与以下中的任何一个结合：i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及ix)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽，例如，如在流式细胞仪分析或Biacore分析中测量的。在一个实施例中，所述TCR与由SEQ ID NO:46、49、50、52、53、54、55、57或47中阐述的氨基酸序列组成的肽的所述结合相对于所述TCR与由SEQ IDNO:45、51、56、117、128、135、192或233中阐述的氨基酸序列组成的肽的所述结合显著减弱(例如，减弱至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)，例如，如在流式细胞仪分析或Biacore分析中测量的。

在一方面，本文提供了一种TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面表达时，所述T细胞在以下情况下活化：i)当与展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；iii)当与展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或当与展示由SEQ ID NO:117、128、135、192和233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或v)其任何组合，例如，如通过本文所描述的测定所测量的，例如，如使用IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体所测量的。在一个实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下不活化或基本上不活化：i)当与展示SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；ii)当与展示由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；iii)当与展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或v)其任何组合，例如，如通过本文所描述的测定所测量的，例如，如使用IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体所测量的。在一个实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示以下肽中的任何肽的第二细胞共培养时，所述T细胞不活化或基本上不活化：i)由SEQ ID NO 46中阐述的氨基酸序列组成的肽；ii)由SEQID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽；iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽；iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽；v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽；vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽；vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽；viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及ix)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽，例如，如通过本文所描述的测定所测量的，例如，如使用IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体所测量的。在一个实施例中，当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当所述T细胞与展示由SEQ ID NO:46、49、50、52、53、54、55、57或47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时的所述T细胞的所述活化相对于当所述T细胞与展示由SEQ ID NO:45、51、56、117、128、135、192或233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞共培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱(例如，减弱至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)，例如，如通过本文所描述的测定测量的，例如，使用包括以下步骤：(a)在包括IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体的T细胞中表达测试TCR；(b)用第一肽或第二肽对HLA-B*0702阳性T2细胞(“T2-B7细胞”)进行脉冲处理；(c)在37℃和10％CO₂下，以1:2的比率将TCR表达性T细胞与肽脉冲处理的T2-B7靶细胞共培养16小时；(d)使用流式细胞术分析TCR和EGFP的表达；(e)测定TCR+EGFP+细胞的百分比；和(f)基于TCR+EGFP+细胞的相应百分比，测定当与展示第一肽的T2-B7靶细胞共培养时，相对于当与展示第二肽的T2-B7靶细胞共培养时，T细胞活化的减少。

来自任何物种的任何TCR恒定区可以用于本文所公开的TCR中。在某些实施例中，TCR包括人α、β、γ或δTCR恒定区。在某些实施例中，TCR包括野生型恒定区。在某些实施例中，TCR包括经过改变的恒定区，如嵌合恒定区或包括相对于野生型恒定区的一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的恒定区。在一些实施例中，TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:41的α链恒定区。在一些实施例中，TCR包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:42的α链恒定区。在一些实施例中，TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:43或44的β链恒定区。在某些实施例中，TCR包括小鼠TCR恒定区。在某些实施例中，TCR包括野生型小鼠恒定区。在某些实施例中，TCR包括经过改变的小鼠恒定区，如嵌合恒定区或包括相对于野生型小鼠恒定区的一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的恒定区。在一些实施例中，TCR包括α链，所述α链包括SEQ IDNO:247的α链恒定区。在一些实施例中，TCR包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:248的β链恒定区。

本文所公开的TCR可以以任何TCR结构格式使用。例如，在某些实施例中，TCR是包括全长α链和全长β链的全长TCR。可以从全长TCR中去除跨膜区(以及任选地还有胞质区)以产生可溶性TCR。因此，在某些实施例中，TCR是缺乏一个或多个跨膜区和/或胞质区的可溶性TCR。产生可溶性TCR的方法是本领域熟知的。在一些实施例中，可溶性TCR包括促进二聚化的工程化二硫键，参见例如，美国专利第7,329,731号，所述美国专利通过引用整体并入本文中。在一些实施例中，通过将本文所描述的TCR的细胞外结构域与其它蛋白质结构域(例如，麦芽糖结合蛋白、硫氧还蛋白、人恒定κ结构域或亮氨酸拉链)融合来产生可溶性TCR，参见例如

等人,《肿瘤学前沿(Front Oncol.)》,2014；4:378，所述文献通过引用整体并入本文中。还可以产生包括通过肽接头连接的Vα和Vβ的单链TCR(scTCR)。此类scTCR可以包括Vα和Vβ，所述Vα和Vβ各自与TCR恒定区连接。可替代地，scTCR可以包括Vα和Vβ，其中Vα、Vβ或Vα和Vβ两者不与TCR恒定区连接。示例性scTCR描述于PCT公开第WO 2003/020763号、第WO 2004/033685号和第WO 2011/044186号中，所述公开中的每一个公开通过引用整体并入本文中。此外，本文所公开的TCR可以包括两条多肽链(例如，α链和β链)，其中所述链已经被工程化为各自具有可以形成链间二硫键的半胱氨酸残基。因此，在某些实施例中，本文所公开的TCR包括通过工程化二硫键连接的两条多肽链。具有工程化二硫键的示例性TCR描述于美国专利第8,361,794号和第8,906,383号中，所述专利中的每一个专利通过引用整体并入本文中。

在某些实施例中，本文所公开的TCR包括具有跨膜区的一条或多条链(例如，α链和/或β链)。在某些实施例中，本文所公开的TCR包括具有跨膜区的两条链(例如，α链和β链)。跨膜区可以是所述TCR链的内源性跨膜区、内源性跨膜区的变体或异源性跨膜区。在某些实施例中，本文所公开的TCR包括具有内源跨膜区的α链和β链。

在某些实施例中，本文所公开的TCR包括具有胞质区的一条或多条链(例如，α链和/或β链)。在某些实施例中，本文所公开的TCR包括各自具有胞质区的两条链(例如，α链和β链)。胞质区可以是所述TCR链的内源性胞质区、内源性胞质区的变体或异源性胞质区。在某些实施例中，本文所公开的TCR包括两条链(例如，α链和β链)，其中所述两条链都具有跨膜区但一条链缺少胞质区。在某些实施例中，本文所公开的TCR包括两条链(例如，α链和β链)，两条链都具有内源性跨膜区但缺少内源性胞质区。在某些实施例中，本文所公开的TCR包括α链和β链，其中两条链都具有内源性跨膜区但缺乏内源性胞质区。在某些实施例中，本文所公开的TCR包括来自共刺激分子的共刺激信号传导区；参见例如，PCT公开第WO 1996/018105号、第WO 1999/057268号和第WO 2000/031239号以及美国专利第7,052,906号，所有这些公开都通过引用整体并入本文中。

在某些实施例中，本文所描述的TCR与肽-MHC复合物结合，所述肽-MHC复合物包括具有SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列的肽，其中所述MHC可以是任何MHC。在某些实施例中，MHC是人MHC。在某些实施例中，MHC是MHC I类分子，所述MHC I类分子包括MHC I类重链(例如，HLA-A、HLA-B或HLA-C，包含任何多态形式的任何亚型)和β2-微球蛋白轻链。在某些实施例中，MHC是HLA-B*0702。在某些实施例中，肽-MHC复合物是EPR[pS]PSHSM(SEQ IDNO:45)-HLA-B*0702。在某些实施例中，肽-MHC复合物是RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702。在某些实施例中，MHC是MHC II类分子，所述MHC II类分子包括MHC II类α链(例如，HLA-DR、HLA-DQ或HLA-DP的α链，包含任何多态形式的任何亚型)和MHC II类β链(例如，HLA-DR、HLA-DQ或HLA-DP的β链，包含任何多态形式的任何亚型)。在某些实施例中，MHCII类α链和MHC II类β链源自同一类型(例如，HLA-DR、HLA-DQ或HLA-DP)。

在某些实施例中，本公开提供了一种多肽，所述多肽包括融合在一起的TCRα链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)。例如，此类多肽可以依次包含Vα和Vβ或Vβ和Vα，任选地在所述两个区之间具有接头(例如，肽接头)。例如，弗林蛋白酶和/或2A切割位点(例如，表7中的序列之一)或其组合可以用于Vα/Vβ融合多肽的接头中。

在某些实施例中，本公开提供了一种多肽，所述多肽包括融合在一起的TCRα链和β链。例如，此类多肽可以依次包括α链和β链或β链和α链，任选地在所述两条链之间具有接头(例如，肽接头)。例如，弗林蛋白酶和/或2A切割位点(例如，表7中的序列之一)或其组合可以用于α/β融合多肽的接头中。例如，融合多肽从N端到C端可以包括：TCR的α链、弗林蛋白酶切割位点、2A切割位点和TCR的β链。TCR0078的示例性α链-弗林蛋白酶-P2A-β链融合TCR序列包含SEQ ID NO:268和269。在某些实施例中，所述多肽从N端到C端包括：TCR的β链、弗林蛋白酶切割位点、2A元件和TCR的α链。示例性β链-弗林蛋白酶-P2A-α链融合TCR序列包含SEQ ID NO:265(对于TCR0080)、266(对于TCR0078)以及267(对于TCR0078)。在某些实施例中，所述多肽从N端到C端包括：TCR的α链、2A切割位点和TCR的β链。TCR0078的示例性α链-P2A-β融合TCR序列包含SEQ ID NO:270和271。在某些实施例中，所述多肽从N端到C端包括：TCR的β链、2A元件和TCR的α链。在某些实施例中，所述多肽从N端到C端包括：TCR的α链、弗林蛋白酶切割位点和TCR的β链。在某些实施例中，所述多肽从N端到C端包括：TCR的β链、弗林蛋白酶元件和TCR的α链。示例性β链-P2A-α链融合TCR序列包含SEQ ID NO:83(对于TCR0078)、91(对于TCR0080)以及92(对于TCR0086)。

5.3呈递T细胞受体的细胞

另一方面，本公开提供了一种哺乳动物细胞(例如，工程化哺乳动物细胞)或其群，所述哺乳动物细胞或其群在细胞表面上呈递本文所公开的TCR。任何哺乳动物细胞都可以用于呈递本文所公开的TCR。在某些实施例中，哺乳动物细胞表达CD3(例如，CD3γ链、CD3δ链和两条CD3ε链)。在某些实施例中，哺乳动物细胞是人细胞。细胞免疫系统的效应子细胞对于呈递本文所公开的TCR特别有用，因为细胞表面TCR可以将这些效应子细胞靶向表达MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肿瘤细胞，从而促进肿瘤细胞的杀伤。因此，在某些实施例中，哺乳动物细胞是淋巴细胞(例如，人淋巴细胞)，如T细胞或天然杀伤(NK)细胞。在某些实施例中，淋巴细胞是T细胞。任何发育阶段的任何T细胞都可以用于呈递本文所公开的TCR。例如，在某些实施例中，T细胞选自由以下组成的组：CD8+细胞毒性T细胞、CD4+细胞毒性T细胞、CD4+辅助T细胞(例如，Th1或Th2细胞)、CD4/CD8双阳性T细胞、肿瘤浸润T细胞、胸腺细胞、记忆T细胞、未处理的T细胞和自然杀伤T细胞，例如，恒定型自然杀伤T细胞。细胞免疫系统的前体细胞(例如，T淋巴细胞的前体)也可以用于呈递本文所公开的TCR，因为这些细胞可以分化、发育或成熟为效应细胞。因此，在某些实施例中，哺乳动物细胞是多能干细胞(例如，胚胎干细胞、诱导的多能干细胞)、造血干细胞或淋巴细胞祖细胞。在某些实施例中，造血干细胞或淋巴细胞祖细胞从例如骨髓、脐带血或外周血中分离和/或富集。

细胞可以从许多来源获得，包含但不限于肿瘤、血液、骨髓、淋巴结、胸腺或另一种组织或体液或单采术产物。在某些实施例中，在使受试者具有功能性T细胞的处理之后直接从患者获得细胞。在这方面，已经观察到，在某些癌症治疗，特别是用损害免疫系统的药物进行的治疗后，在患者通常将会从治疗中恢复期间的治疗之后不久，获得的T细胞的质量可能是最佳的或在其离体扩增能力方面有所改善。同样，在使用本文所描述的方法进行离体操作后，这些细胞可以处于优选的状态，以增强植入和体内扩增。因此，在某些实施例中，在此恢复阶段期间，从血液、骨髓、淋巴结、胸腺或另一种组织或体液或单采产物中收集细胞。

在某些实施例中，哺乳动物细胞是在细胞表面上呈递本文所公开的TCR的细胞群。细胞群可以是异质的或同质的。在某些实施例中，所述群的至少50％(例如，至少60、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％或99.9％)是如本文所描述的细胞。在某些实施例中，所述群基本上是纯的，其中所述群的至少50％(例如，至少60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％或99.9％)是同质的。在某些实施例中，所述群是异质的并且包括混合的细胞群(例如，细胞具有不同的细胞类型、发育阶段、起源、通过不同方法分离、纯化或富集、用不同的药剂刺激和/或通过不同的方法工程化)。在某些实施例中，细胞是外周血单核细胞(PBMC)(例如，人PBMC)群。

细胞群可以根据需要富集或纯化。在某些实施例中，调节性T细胞(例如，CD25⁺ T细胞)例如通过使用与表面(如珠粒、颗粒或细胞)轭合的抗CD25抗体从所述群中耗尽。在某些实施例中，抗CD25抗体与荧光染料(例如，用于荧光活化细胞分选)轭合。在某些实施例中，表达检查点受体(例如，CTLA-4、PD-1、TIM-3、LAG-3、TIGIT、VISTA、BTLA、TIGIT、CD137或CEACAM1)的细胞从所述群中耗尽，例如通过使用与检查点受体特异性结合的抗体，所述检查点受体与表面(如珠、颗粒或细胞)轭合。在某些实施例中，可以选择T细胞群，使得其表达IFNγ、TNFα、IL-17A、IL-2、IL-3、IL-4、GM-CSF、IL-13、颗粒酶(例如，颗粒酶B)和穿孔素或其它合适的分子(例如，其它细胞因子)中的一种或多种。用于测定此类表达的方法描述于例如PCT公开第WO 2013/126712号中，其通过引用整体并入本文中。

可以离体刺激细胞以增加活力、增殖和/或活性。在一些实施例中，诱导不包含任何限定的抗原，因而提供细胞群，就抗原反应性而言所述细胞群是多克隆的。在某些实施例中，细胞与诱导或活化TCR/CD3复合物相关信号的第一药剂(例如，抗CD3抗体)接触。在某些实施例中，细胞与刺激T细胞表面上的辅助分子的第二药剂(例如，CD28的配体或抗CD28抗体)接触。在某些实施例中，细胞与分子或复合物接触，所述分子或复合物与CD3和CD28两者相互作用，其中所述分子或复合物可以呈递在表面(例如，珠粒、颗粒或细胞)上。在某些实施例中，细胞与呈递抗CD3抗体和抗CD28抗体的表面(例如，珠粒、颗粒或细胞)接触。在某些实施例中，细胞与一种或多种药剂接触，所述一种或多种药剂与细胞表面受体结合以增加T细胞活力、增殖和/或活性(例如，IL-2或IL-7)。在某些实施例中，细胞与植物血凝素接触。在某些实施例中，细胞与刺激如Ca²⁺释放等一种或多种细胞内信号的药剂(例如，佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯和/或离子霉素)接触。可替代地，诱导可以包含包括肽(例如，MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽))，所述肽与呈递在细胞表面上的TCR结合，从而提供相对于抗原反应性富集(例如，单克隆)的细胞群。抗原可以进一步包括与肽复合的MHC分子(例如，HLA分子)。抗原可以以可溶形式呈递、与膜结合或呈递在表面上。如以上所描述的药剂可以以任何组合使用，并且可以同时或依次与效应细胞或其前体接触。接触可以在细胞可以保持在增加的活力、增殖和/或活性状态的同时终止。在延长的时间段内T细胞的持续增殖可以使细胞数量相对于原始T细胞群多倍增加。在一些实施例中，可以通过提供生物能燃料源来进行活化以促进代谢适应性，这使得能够调节T细胞以获得最佳的生物活性和存活率。

在某些实施例中，哺乳动物细胞(例如，淋巴细胞)从引入到细胞中的转基因表达本文所公开的TCR，并且在细胞表面上呈递TCR。TCR可以组成性地展示在细胞表面上。可替代地，细胞可以能够条件表达和/或展示TCR。例如，TCR的表达或展示可以通过外源刺激或通过细胞分化诱导。在某些实施例中，转基因对TCRα链和/或β链或其片段(例如，Vα、Vβ、CDR3α和/或CDR3β)进行编码。在某些实施例中，转基因可操作地连接到外源转录和/或转译控制序列(例如，启动子、增强子和/或Kozak序列)。在某些实施例中，转基因不在其天然基因组基因座(例如，由载体引入)处可操作地连接到内源转录和/或转译控制序列(例如，启动子、增强子和/或Kozak序列)。在某些实施例中，转基因在其天然基因组基因座处(例如，通过将转基因插入到天然基因组基因座中)可操作地连接到内源转录和/或转译控制序列(例如，启动子、增强子和/或Kozak序列)。

在某些实施例中，转基因是整合到宿主细胞基因组中的DNA，其中整合通过位点特异性整合(例如，同源重组)或DNA的随机插入发生。在某些实施例中，转基因是未整合到宿主细胞基因组中的DNA(例如，维持为非整合型病毒基因组或作为游离型DNA)。在某些实施例中，转基因是多核苷酸(包含但不限于DNA、RNA、经过修饰的DNA和经过修饰的RNA)，所述多核苷酸可以转录和/或转译以表达本文所公开的TCR。在某些实施例中，转基因是在5'端上具有帽和/或在3'端上具有poly(A)尾的RNA，其中帽和poly(A)尾可以调节核糖体结合、转译启动和细胞中RNA的稳定性。

在某些实施例中，转基因包括第一序列和第二序列，所述第一序列对包括TCRα链或其片段(例如，Vα或CDR3α)的多肽进行编码，并且所述第二序列对包括TCRβ链或其片段(例如，Vβ或CDR3β)的多肽进行编码。在某些实施例中，第一序列和第二序列各自可操作地连接到转录和/或转译控制序列(例如，启动子、增强子和/或Kozak序列)。在某些实施例中，第一序列和第二序列位于不同的多核苷酸(例如，DNA、RNA、经过修饰的DNA或经过修饰的RNA)分子中。在某些实施例中，转基因的第一序列和第二序列位于同一多核苷酸(例如，DNA、RNA、经过修饰的DNA或经过修饰的RNA)分子中。在某些实施例中，第一序列和第二序列通过接头序列可操作地连接，所述接头序列促进两个单独的多肽(例如，内部核糖体进入位点(IRES)、自切割肽(例如，2A肽)或由细胞内或细胞外蛋白酶识别的肽序列)产生。在某些实施例中，第一序列和第二序列可以独立地转录和/或转译。在某些实施例中，第一序列和第二序列各自整合到宿主细胞基因组中。在某些实施例中，第一序列和第二序列各自整合到宿主细胞基因组的不同区中。

可替代地，在某些实施例中，细胞不表达TCR，而通过化学方法或通过将TCR与细胞表面抗原结合将TCR附接到细胞的外表面。因此，在某些实施例中，TCR连接到与细胞表面抗原结合的结合部分。任何类型的结合部分可以(共价或非共价)连接到本文所公开的TCR。在某些实施例中，TCR与特异性结合到细胞(例如，淋巴细胞)的细胞表面抗原的抗体或其抗原结合片段融合(化学上或基因上)。

在某些实施例中，细胞进一步包括对能够诱导细胞死亡的多肽进行编码的多核苷酸。在某些实施例中，多肽是嵌合多肽，所述嵌合多肽包括多聚化(例如，二聚化或寡聚化)区和细胞死亡诱导区，其中细胞死亡诱导区通过多聚化活化。在某些实施例中，细胞死亡诱导区包括具有蛋白酶活性的半胱天冬酶(例如，半胱天冬酶-9)的序列。在某些实施例中，细胞死亡诱导区包括全长人半胱天冬酶-9多肽。在某些实施例中，细胞死亡诱导区包括截短的人半胱天冬酶-9多肽(例如，其中半胱天冬酶-9的CARD结构域缺失)。

在某些实施例中，细胞进一步包括对能够诱导T细胞活化的多肽进行编码的多核苷酸。在某些实施例中，所述多肽是诱导型嵌合刺激分子，例如，如PCT公开第WO 2015/123527号中所描述的，所述公开通过引用整体并入本文中。在某些实施例中，多肽包括多聚化(例如，二聚化或寡聚化)区，其中多肽在多聚化时诱导T细胞活化。

存在于例如能够诱导细胞死亡的多肽或能够诱导T细胞活化的多肽中的多聚化区可以包括将在与配体(例如，合成配体)结合时多聚化的配体结合结构域。配体可以具有两个或更多个结合位点，每个结合位点能够与嵌合多肽的配体结合结构域结合。在某些实施例中，配体具有两个结合位点并且能够诱导嵌合多肽二聚化。可以采用多种合成配体和对应的配体结合结构域。例如，多聚体(例如，二聚体)FK506可以用于多聚化FK506结合蛋白(FKBP例如，FKBP12或其变体)；多聚体(例如，二聚体)环孢菌素A可以用于多聚化亲环素受体；多聚体(例如，二聚体)雌激素可以用于多聚化雌激素受体；多聚体(例如，二聚体)糖皮质激素可以用于多聚化糖皮质激素受体；多聚体(例如，二聚体)四环素可以用于多聚化四环素受体；多聚体(例如，二聚体)维生素D可以用于多聚化维生素D受体。配体结合结构域可以位于细胞膜的内部或外部，这取决于构建体的性质和配体的选择。美国专利第9,089,520号中描述了配体和相应的配体结合结构域的非限制性实例；Kopytek,S.J.等人,《化学与生物学(Chemistry&Biology)》7:313-321(2000)；Gestwicki,J.E.等人,《组合化学(Combinatorial Chem.)》&《高通量筛选(High Throughput Screening)》10:667-675(2007)；Clackson T《化学生物学与药物设计(Chem Biol Drug Des)》67:440-2(2006)；以及Schreiber等人,《化学生物学：从小分子到系统生物学和药物设计(Chemical BiologyFrom Small Molecules to Systems Biology and Drug Design)》(Wiley,2007)，所述文献的内容通过引用整体并入本文中。

在某些实施例中，能够诱导细胞死亡的多肽是嵌合多肽，所述嵌合多肽包括FKBP12多肽和全长或截短的半胱天冬酶-9(例如，人半胱天冬酶-9)多肽。在某些实施例中，FKBP12多肽包括在位置36处的缬氨酸。在某些实施例中，FKBP12多肽包括SEQ ID NO:94中阐述的氨基酸序列。在某些实施例中，能够诱导FKBP12多聚化的配体是AP1903(CAS登记号：195514-63-7；分子式：C78H98N4O20；分子量：1411.65)。在某些实施例中，配体是AP20187或AP20187类似物(例如，AP1510)。在某些实施例中，半胱天冬酶-9多肽包括SEQ ID NO:95中阐述的氨基酸序列。

表6.FKBP12和半胱天冬酶-9序列

在某些实施例中，对能够诱导细胞死亡的多肽进行编码的多核苷酸可操作地连接到转录和/或转译控制序列(例如，启动子、增强子和/或Kozak序列)。多核苷酸可以整合到宿主细胞基因组中。可替代地，多核苷酸可以维持为非整合型病毒基因组或游离型DNA。在某些实施例中，多核苷酸通过接头序列可操作地连接到对TCR进行编码的第一序列和/或第二序列，所述接头序列促进两个单独的多肽(例如，内部核糖体进入位点(IRES)、自切割肽(例如，2A肽)或由细胞内或细胞外蛋白酶识别的肽序列)产生。在某些实施例中，多核苷酸独立于第一序列和/或第二序列转录和/或转译。

在某些实施例中，细胞以溶液形式提供。在某些实施例中，细胞在约-80℃或以下冷冻保存(例如，在液氮储罐中)。低温保存方法在本领域中是公知的，例如，如美国专利第5,580,714号和第6,740,484号中所描述的，所述美国专利通过引用整体并入本文中。低温保存的细胞可以通过解冻恢复，并且如上文所描述的TCR的任何分离、纯化、富集、刺激和展示可以在冷冻保存之前或恢复之后进行。

5.4使用方法

另一方面，本公开提供了一种使用本文所公开的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞(例如，包括异源和/或重组核酸的细胞)或药物组合物治疗受试者的方法。受试者的将受益于将TCR靶向MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的任何疾病或病状可以使用本文所公开的TCR进行治疗。本文所公开的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞和药物组合物对于诱导对展示MLL肽(例如，包括MLL肽的肽-MHC复合物，例如，包括MLL磷酸肽的肽-MHC复合物；例如，EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)-HLA-B*0702或RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702)的肿瘤的免疫力特别有用，并且因此可以用作患有MLL阳性癌症(例如，MLL磷酸肽阳性癌症)的受试者的免疫疗法。例如，在某些实施例中，本公开提供了一种在受试者中响应于MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)而诱导细胞介导的免疫力的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所描述的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物。在某些实施例中，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所公开的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物。

在某些实施例中，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所公开的细胞或其群体。在某些实施例中，将细胞工程化以在细胞表面上组成性地展示如本文所公开的TCR。在某些实施例中，将细胞工程化以响应于诱导事件而在细胞表面上有条件地展示如本文所公开的TCR。该诱导事件可以是在施用细胞之前、同时或之后施用的外源性药剂产生的刺激。另外或可替代地，诱导事件可以是受试者的细胞、组织或损伤产生的刺激。

在某些实施例中，所述细胞进一步包括对嵌合多肽进行编码的多核苷酸，所述嵌合多肽包括配体结合多聚化(例如，二聚化或寡聚化)区和细胞死亡诱导区，并且所述方法进一步包括施用多聚化区的配体的步骤。在某些实施例中，所述嵌合多肽包括FKBP12多肽和半胱天冬酶-9(例如人半胱天冬酶-9)多肽，并且所述方法进一步包括施用FKBP12配体(例如，AP1903)的步骤。在某些实施例中，在观察到疾病改善指示(例如，癌缩小、癌症标志物减少和/或癌症症状改善)之后或在鉴定出无法忍受的副作用(例如，高水平的炎性细胞因子和/或宿主对施用细胞的排斥)之后，施用FKBP12配体。

如上所述，施用到受试者的细胞可以是自体的或同种异体的。在某些实施例中，自体细胞在癌症治疗后直接从患者获得。在这方面，已经观察到，在某些癌症治疗，特别是用损害免疫系统的药物进行的治疗后，在患者通常将会从治疗中恢复期间的治疗之后不久，获得的T细胞的质量可能是最佳的或在其离体扩增能力方面有所改善。同样，在使用本文所描述的方法进行离体操作后，这些细胞可以处于优选的状态，以增强植入和体内扩增。因此，在某些实施例中，在此恢复阶段期间，从血液、骨髓、淋巴结、胸腺或另一种组织或体液或单采产物中收集细胞。进一步地，在某些方面，可以使用动员与调节方案在受试者中产生这样的条件：特定细胞类型的再增、再循环、再生和/或扩增是有利的，尤其是在治疗后的限定时间窗期间。动员剂可以选自由以下组成的组：CXCL12相互作用的类肝素、GM-CSF、G-CSF(例如，未经过修饰的、经过糖基化的或经过聚乙二醇化的)、IL-2(例如，未经过修饰的、经过糖基化的或经过聚乙二醇化的)、CXCR4拮抗剂(例如，普乐沙福(plerixafor))、整合素α4β1拮抗剂(例如，BIO5192)、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、顺铂、依托泊苷、异环磷酰胺、阿糖胞苷和其任何组合。

所采用的细胞的数量将取决于多种情况，包含细胞的寿命、要使用的方案(例如，施用次数)、细胞繁殖的能力、重组构建体的稳定性等等。在某些实施例中，细胞作以分散体形式施用，通常在所关注部位处或附近注射。细胞可以在任何生理学上可接受的培养基中施用。

可以用本文所公开的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物治疗的癌症可以是表达MLL的任何肿瘤(例如，在细胞表面上展示MLL磷酸肽/MHC复合物的任何肿瘤)。表达MLL的肿瘤的实例(例如，在细胞表面上展示MLL磷酸肽/MHC复合物的肿瘤)已经在例如，Cobbold等人,《科学转化医学期刊》,2013年9月18日；5(203):203ra125；Rao,《癌症自然评论(Nat Rev Cancer)》,2015年6月；15(6):334-46；Li等人,《实验血液学(ExpHematol)》,2014年12月；42(12):995-1012；以及Krivtsov等人,《癌症自然评论》,2007年11月；7(11):823-33中公开，所述文献中的每一个通过引用整体并入本文中。

在某些实施例中，所述癌症是白血病(例如，混合谱系白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病或慢性骨髓白血病)、腺泡横纹肌肉瘤、骨癌、脑癌(例如，胶质母细胞瘤)、乳腺癌、肛门癌、肛管癌或肛门直肠癌、眼癌、肝内胆管癌(例如，肝内胆管细胞癌)、关节癌、颈癌、胆囊癌或胸膜癌、鼻癌、鼻腔癌或中耳癌、口腔癌、外阴癌、骨髓瘤(例如，慢性骨髓癌症)、结肠癌、食道癌、宫颈癌、胃肠类癌。霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、肾癌、喉癌、肝癌(例如，肝细胞癌)、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、恶性间皮瘤、黑素瘤、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、腹膜癌、网膜癌和肠系膜癌、舌咽癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌(例如，肾细胞癌(RCC))、胃癌(gastric cancer)、小肠癌、软组织癌、胃癌(stomach cancer)、癌、肉瘤(例如，滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤)、睾丸癌、甲状腺癌、头颈癌、输尿管癌和膀胱癌。在某些实施例中，所述癌症是黑素瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、卵巢癌或滑膜肉瘤。在一个实施例中，所述癌症是滑膜肉瘤或脂肪肉瘤(例如，粘液样/圆形细胞脂肪肉瘤)。

在某些实施例中，这些方法进一步包括向受试者施用另外的治疗剂。在某些实施例中，另外的治疗剂是化学治疗剂、放射治疗剂或检查点靶向剂。在某些实施例中，化学治疗剂是低甲基化剂(例如，阿扎胞苷(azacitidine))。在某些实施例中，所述检查点靶向剂选自由以下组成的组：拮抗剂抗CTLA-4抗体、拮抗剂抗PD-L1抗体、拮抗剂抗PD-L2抗体、拮抗剂抗PD-1抗体、拮抗剂抗TIM-3抗体、拮抗剂抗LAG-3抗体、拮抗剂抗VISTA抗体、拮抗剂抗CD96抗体、拮抗剂抗CEACAM1抗体、拮抗剂抗TIGIT抗体、激动剂抗CD137抗体、激动剂抗GITR抗体以及激动剂抗OX40抗体。

在某些实施例中，将抗PD-1抗体用于本文所公开的方法中。在某些实施例中，抗PD-1抗体是纳武单抗，又被称为BMS-936558或MDX1106，由百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)开发。在某些实施例中，抗PD-1抗体是派姆单抗，又被称为拉立珠单抗(lambrolizumab)或MK-3475，由默克公司(Merck&Co.)开发。在某些实施例中，抗PD-1抗体是皮地利珠单抗(pidilizumab)，又被称为CT-011，由CureTech公司开发。在某些实施例中，抗PD-1抗体是MEDI0680，又被称为AMP-514，由医学免疫公司(Medimmune)开发。在某些实施例中，抗PD-1抗体是由诺华制药公司(Novartis Pharmaceuticals)开发的PDR001。在某些实施例中，抗PD-1抗体是由再生元制药公司(Regeneron Pharmaceuticals)开发的REGN2810。在某些实施例中，抗PD-1抗体是由辉瑞公司(Pfizer)开发的PF-06801591。在某些实施例中，抗PD-1抗体是由百济神州公司(BeiGene)开发的BGB-A317。在某些实施例中，抗PD-1抗体是由AnaptysBio公司和Tesaro公司开发的TSR-042。在某些实施例中，抗PD-1抗体是由恒瑞公司(Hengrui)开发的SHR-1210。

进一步地，可以用于本文所公开的治疗方法的抗PD-1抗体的其它非限制性实例公开于以下专利和专利申请中，所述专利和专利申请出于所有目的通过引用整体并入本文中：美国专利第6,808,710号；美国专利第7,332,582号；美国专利第7,488,802号；美国专利第8,008,449号；美国专利第8,114,845号；美国专利第8,168,757号；美国专利第8,354,509号；美国专利第8,686,119号；美国专利第8,735,553号；美国专利第8,747,847号；美国专利第8,779,105号；美国专利第8,927,697号；美国专利第8,993,731号；美国专利第9,102,727号；美国专利第9,205,148号；美国国公开第US 2013/0202623 A1号；美国国公开第US2013/0291136 A1号；美国国公开第US 2014/0044738 A1号；美国国公开第US 2014/0356363 A1号；美国国公开第US 2016/0075783 A1号；以及PCT公开第WO 2013/033091 A1号；PCT公开第WO 2015/036394 A1号；PCT公开第WO 2014/179664 A2号；PCT公开第WO2014/209804 A1号；PCT公开第WO 2014/206107 A1号；PCT公开第WO 2015/058573 A1号；PCT公开第WO 2015/085847 A1号；PCT公开第WO 2015/200119 A1号；PCT公开第WO 2016/015685 A1号；以及PCT公开第WO 2016/020856 A1号。

在某些实施例中，抗PD-L1抗体用于本文所公开的方法中。在某些实施例中，抗PD-L1抗体是由基因泰克公司(Genentech)开发的阿特珠单抗(atezolizumab)。在某些实施例中，抗PD-L1抗体是由阿斯利康制药有限公司(AstraZeneca)、塞尔基因公司(Celgene)和医学免疫公司开发的度伐单抗(durvalumab)。在某些实施例中，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗(avelumab)，又被称为MSB0010718C，由默克雪兰诺公司(Merck Serono)和辉瑞公司开发。在某些实施例中，抗PD-L1抗体是由百时美施贵宝公司开发的MDX-1105。在某些实施例中，抗PD-L1抗体是由Amplimmune公司和GSK公司开发的AMP-224。

可以用于本文所公开的治疗方法的抗PD-1抗体的其它非限制性实例公开于以下专利和专利申请中，所述专利和专利申请出于所有目的通过引用整体并入本文中：美国专利第7,943,743号；美国专利第8,168,179号；美国专利第8,217,149号；美国专利第8,552,154号；美国专利第8,779,108号；美国专利第8,981,063号；美国专利第9,175,082号；美国国公开第US 2010/0203056 A1号；美国国公开第US 2003/0232323 A1号；美国国公开第US2013/0323249 A1号；美国国公开第US 2014/0341917 A1号；美国国公开第US 2014/0044738 A1号；美国国公开第US 2015/0203580 A1号；美国国公开第US 2015/0225483 A1号；美国国公开第US 2015/0346208 A1号；美国国公开第US 2015/0355184 A1号；以及PCT公开第WO 2014/100079 A1号；PCT公开第WO 2014/022758 A1号；PCT公开第WO 2014/055897 A2号；PCT公开第WO 2015/061668 A1号；PCT公开第WO 2015/109124 A1号；PCT公开第WO 2015/195163 A1号；PCT公开第WO 2016/000619 A1号；以及PCT公开第WO 2016/030350 A1号。

在某些实施例中，本文所公开的TCR、细胞或药物组合物与靶向一种或多种免疫调节酶(如IDO(吲哚胺-(2,3)-双加氧酶)和/或TDO(色氨酸2,3-双加氧酶))的化合物组合施用于受试者。在某些实施例中，此类化合物选自由以下组成的组：依帕卡哚司他(因塞特公司(Incyte Corp)；参见例如，PCT公开第WO 2010/005958号，其通过引用整体并入本文中)、F001287(福克斯生物科学公司(Flexus Biosciences)/百时美施贵宝公司)、吲哚莫德(纽琳基因公司(NewLink Genetics))和NLG919(纽琳基因公司)。在一个实施例中，化合物是依帕卡哚司他。在另一个实施例中，化合物是F001287。在另一个实施例中，化合物是吲哚莫德。在另一个实施例中，化合物是NLG919。在具体实施例中，本文所公开的TCR、细胞或药物组合物与用于治疗癌症的IDO抑制剂组合施用于受试者。如本文所描述的用于治疗癌症的IDO抑制剂以药物组合物的如片剂、丸剂或胶囊剂等固体剂型存在，其中所述药物组合物包含IDO抑制剂和药学上可接受的赋形剂。因此，如本文所描述的TCR、细胞或药物组合物和如本文所描述的IDO抑制剂可以以单独的剂型单独地、顺序地或同时施用。在一个实施例中，胃肠外施用细胞或药物组合物，并且口服施用IDO抑制剂。在特定实施例中，抑制剂选自由以下组成的组：依帕卡哚司他(因塞特公司)、F001287(福克斯生物科学公司/百时美施贵宝公司)、吲哚莫德(纽琳基因公司)和NLG919(纽琳基因公司)。依帕卡哚司他已经在PCT公开第WO 2010/005958号中描述，所述文献出于所有目的通过引用整体并入本文中。在一个实施例中，抑制剂是依帕卡哚司他。在另一个实施例中，抑制剂是F001287。在另一个实施例中，抑制剂是吲哚莫德。在另一个实施例中，抑制剂是NLG919。

在某些实施例中，本文所公开的TCR、细胞或药物组合物与疫苗组合施用于受试者。疫苗可以是例如肽疫苗、DNA疫苗或RNA疫苗。在某些实施例中，疫苗是基于热休克蛋白的肿瘤疫苗或基于热休克蛋白的病原体疫苗。在具体实施例中，本文所公开的TCR、细胞或药物组合物与基于热休克蛋白的肿瘤疫苗组合施用于受试者。热休克蛋白(HSP)是普遍存在于所有物种中的高度保守蛋白质家族。由于热休克或其它形式的应激(包含暴露于毒素、氧化应激或葡萄糖剥夺)，热休克蛋白的表达可以有力地诱导到高得多的水平。根据分子量，分类了五个家族：HSP-110、HSP-90、HSP-70、HSP-60和HSP-28。HSP通过如巨噬细胞和树突细胞(DC)等抗原呈递细胞(APC)中的交叉呈递途径递送免疫原性肽，从而导致T细胞活化。HSP充当形成能够诱导肿瘤特异性免疫力的复合物的肿瘤相关抗原肽的分子伴侣载剂。一旦从垂死肿瘤细胞中释放，HSP-抗原复合物就被抗原呈递细胞(APC)吸收，其中所述抗原被加工成结合MHC I类和II类分子的肽，从而导致抗肿瘤CD8+和CD4+ T细胞活化。由源自肿瘤制剂的HSP复合物引发的免疫力特异性地针对每个受试者的癌症所表达的独特抗原肽抗体库。

热休克蛋白肽复合物(HSPPC)是由与抗原肽非共价复合的热休克蛋白组成的蛋白肽复合物。HSPPC引发先天性免疫应答和适应性免疫应答两者。在具体实施例中，一种或多种抗原肽展示出针对被治疗的癌症的抗原性。HSPPC经由膜受体(主要是CD91)或通过与Toll样受体结合而被APC高效地抓住。HSPPC内化使具有趋化因子和细胞因子产生的APC的功能成熟，从而导致自然杀伤细胞(NK)、单核细胞以及Th1和Th2介导的免疫应答活化。在某些实施例中，用于本文所公开的方法中的HSPPC包括来自与抗原肽复合的应激蛋白家族hsp60、hsp70或hsp90的一种或多种热休克蛋白。在某些实施例中，HSPPC包括hsc70、hsp70、hsp90、hsp110、grp170、gp96、钙网蛋白或其中的两种或更多种的组合。

在具体实施例中，热休克蛋白肽复合物(HSPPC)包括重组热休克蛋白(例如，hsp70或hsc70)或其与重组抗原肽复合的肽结合结构域。重组热休克蛋白可以通过重组DNA技术产生，例如，使用如Dworniczak和Mirault,《核酸研究》15:5181-5197(1987)和GenBank登录号P11142和/或Y00371中所描述的人hsc70序列，所述文献中的每一个均通过引用整体并入本文中。在某些实施例中，Hsp70序列在如Hunt和Morimoto《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)》,82(19),6455-6459(1985)和GenBank登录号P0DMV8和/或M11717中进行描述，所述文献中的每一个均通过引用整体并入本文中。抗原肽还可以通过本领域中已知的重组DNA方法制备。

在某些实施例中，抗原肽包括经过修饰的氨基酸。在某些实施例中，经过修饰的氨基酸包括转译后修饰。在某些实施例中，经过修饰的氨基酸包括转译后修饰的模拟物。在某些实施例中，经过修饰的氨基酸是已经在侧链羟基或胺上磷酸化的Tyr、Ser、Thr、Arg、Lys或His。在某些实施例中，经过修饰的氨基酸是已经在侧链羟基或胺上磷酸化的Tyr、Ser、Thr、Arg、Lys或His氨基酸的模拟物。

在具体实施例中，本文所公开的TCR、细胞或药物组合物与热休克蛋白肽复合物(HSPPC)(例如热休克蛋白肽复合物-96(HSPPC-96))组合施用于受试者以治疗癌症。HSPPC-96包括与抗原肽复合的96kDa热休克蛋白(Hsp)gp96。HSPPC-96是由受试者的肿瘤制造的癌症免疫疗法并且含有癌症的抗原“指纹”。在某些实施例中，这个指纹含有仅存在于所述特定受试者的特异性癌细胞中的独特抗原，并且注射疫苗旨在刺激受试者的免疫系统识别并攻击具有特异性癌症指纹的任何细胞。

在某些实施例中，HSPPC(例如，HSPPC-96)由受试者的肿瘤组织产生。在具体实施例中，HSPPC(例如，HSPPC-96)由被治疗的癌症类型的肿瘤或其转移产生。在另一个具体实施例中，HSPPC(例如，HSPPC-96)对于被治疗的受试者来说是自体的。在某些实施例中，肿瘤组织是非坏死肿瘤组织。在某些实施例中，使用至少1克(例如，至少1克、至少2克、至少3克、至少4克、至少5克、至少6克、至少7克、至少8克、至少9克或至少10克)非坏死肿瘤组织来产生疫苗方案。在某些实施例中，在手术切除之后，非坏死肿瘤组织在用于疫苗制备之前进行冷冻。在一些实施例中，HSPPC(例如，HSPPC-96)通过纯化技术从肿瘤组织中分离、过滤并且制备成可注射疫苗。在某些实施例中，向受试者施用的HSPPC(例如，HSPCC-96)的6-12个剂量。在此类实施例中，HSPPC(例如HSPPC-96)剂量可以每周一次施用前4个剂量并且然后每两周一次施用另外的2-8个剂量。

可以根据本文所描述的方法使用的HSPPC的进一步实例公开于以下专利和专利申请中，所述专利和专利申请通过引用整体并入本文中：美国专利第6,391,306号、第6,383,492号、第6,403,095号、第6,410,026号、第6,436,404号、第6,447,780号、第6,447,781号和第6,610,659号。

在某些实施例中，本文所公开的TCR、细胞或药物组合物与疫苗组合施用于受试者。根据治疗背景，可以使用各种佐剂。适合的佐剂的非限制性实例包含但不限于完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant，CFA)、不完全弗氏佐剂(Incomplete Freund'sAdjuvant，IFA)、montanide ISA(不完全赛比克(Seppic)佐剂)、Ribi佐剂系统(RAS)、TiterMax、胞壁酰肽、辛太克斯佐剂调配物(Syntex Adjuvant Formulation，SAF)、明矾(氢氧化铝和/或磷酸铝)、铝盐佐剂、

佐剂、硝酸纤维素吸附抗原、包封或包埋抗原、3脱O-酰化单磷酰脂质A(3 D-MPL)、免疫刺激性寡核苷酸、toll样受体(TLR)配体、甘露聚糖结合凝集素(MBL)配体、STING激动剂、如皂苷等免疫刺激复合物、Quil A、QS-21、QS-7、ISCOMATRIX等等。其它佐剂包含CpG寡核苷酸和双链RNA分子，如poly(A)和poly(U)。还可以使用上述佐剂的组合。参见例如，美国专利第6,645,495号；第7,029,678号；和第7,858,589号，所有这些专利都通过引用整体并入本文。在一个实施例中，本文所使用的佐剂是QS-21STIMULON。

在某些实施例中，本文所公开的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物与肿瘤微环境(TME)调节剂组合施用于受试者。在某些实施例中，TME调节剂是细胞因子(例如，白介素-2、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14))。在某些实施例中，细胞因子是趋化因子(例如，(C-C基序)配体21(CCL21)和C-X-C基序趋化因子10(CXCL10))。在某些实施例中，TME调节剂是模式识别受体(PRR)的激动剂。在某些实施例中，激动剂是TLR9的合成激动剂(例如，CpG)。在某些实施例中，激动剂是STING的合成激动剂(例如，cGAMP)。

TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物和另外的治疗剂(例如，化学治疗剂、放射治疗剂、检查点靶向剂、IDO抑制剂、疫苗、佐剂和/或TME调节剂)可以以单独的剂型单独地、顺序地或同时施用。在一个实施例中，肠胃外施用TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物，并且口服施用IDO抑制剂。

本文所描述的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物可以通过各种途径递送到受试者。这些途径包含但不限于肠胃外、鼻内、气管内、口服、皮内、局部、肌肉内、腹膜内、透皮、静脉内、瘤内、结膜、鞘内和皮下途径。还可以采用肺部施用，例如，通过使用吸入器或喷雾器和用雾化剂作为喷雾剂的调配物。在某些实施例中，静脉内递送本文所描述的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物。在某些实施例中，皮下递送本文所描述的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物。在某些实施例中，瘤内递送本文所描述的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物。在某些实施例中，本文所描述的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物递送到肿瘤引流淋巴结中。

将有效治疗和/或预防病症的TCR、多核苷酸、载体、工程化细胞或药物组合物的量将取决于疾病的性质并且可以通过标准临床技术测定。

组合物中采用的精确剂量还将取决于施用途径和由其造成的感染或疾病的严重性，并且应当根据从业者的判断和各个受试者的情况决定。例如，有效剂量还可以根据施用方式、靶位点、患者的生理状态(包含年龄、体重和健康)、患者是人还是动物、施用的其它药物或治疗是预防性的还是治疗性的而变化。通常，患者是人，但也可以治疗包含转基因哺乳动物在内的非人哺乳动物。可以将治疗剂量以最佳方式滴定，以优化安全性和疗效。

本文所描述的TCR还可以用于使用本领域技术人员已知的经典免疫组织学方法测定生物样品中包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的水平和/或展示包含MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的细胞数目，所述测定包含免疫测定，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫沉淀或蛋白质印迹。适合的TCR测定标签是本领域中已知的并且包含：酶标签，如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，如碘(¹²⁵I、¹²¹I)、碳(¹⁴C)、硫(³⁵S)、氚(³H)、铟(¹²¹In)以及锝(⁹⁹Tc)；发光标签，如鲁米诺；以及荧光标签，如荧光素和罗丹明以及生物素。此类标签可以用于标记本文所描述的TCR。可替代地，可以标记识别本文所描述的TCR的分子，并且所述分子可以与本文所描述的TCR组合用于检测生物样品中包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物和/或展示包含MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的细胞数目。

测定包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的水平旨在包含直接(例如，通过测定或估计绝对蛋白水平)或相对地(例如，通过与第二生物样品中的疾病相关蛋白水平进行比较)定性或定量测定或估计第一生物样品中包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的水平。可以测定或估计第一生物样品中包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的水平并且将其与标准水平进行比较，所述标准取自从并未患病的个体获得的第二生物样品或由并未患病的个体群体的平均水平测定。如本领域中将了解到的，一旦已知“标准”水平，所述标准水平就可以重复用作比较标准。

如本文所使用的，术语“生物样品”是指从可能展示包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的受试者、细胞系、组织或其它细胞来源获得的任何生物样品。用于从动物(例如，人)获得组织活检和体液的方法是本领域中公知的。生物样本包含外周血单核细胞。

本文所描述的TCR可以用于预后、诊断、监测和筛查应用，包含对于本领域技术人员而言公知和标准并且基于本说明书的体外和体内应用。用于体外评估和评价免疫系统状态和/或免疫应答的预后、诊断、监测和筛查测定和试剂盒可以用于预测、诊断并且监测以评估患者样本，包含已知患有或怀疑患有与展示包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的细胞相关的病状(例如，MLL阳性癌症)的样本。体内应用包含展示包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的细胞、组织或器官的定向细胞疗法和免疫系统调节以及放射成像。

在一个实施例中，本文所描述的TCR还可以用于检测活检样品免疫组织化学中包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物和/或展示包含MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的细胞数目。本文所描述的TCR可以携带可检测或功能性标签。当使用荧光标签时，可以利用本领域中已知的目前可获得的显微镜检查法和荧光活化细胞分选器分析(FACS)或这两种方法的组合来鉴别和量化特异性结合成员。本文所描述的TCR可以携带荧光标签。示例性荧光标签包含例如反应性和轭合探针，例如，氨基香豆素、荧光素及德克萨斯红、Alexa Fluor荧光染料、Cy染料以及DyLight染料。本文所描述的TCR可以携带放射性标签，如同位素³H、¹⁴C、³²P、³⁵S、³⁶Cl、⁵¹Cr、⁵⁷Co、⁵⁸Co、⁵⁹Fe、⁶⁷Cu、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹¹¹In、¹¹⁷Lu、¹²¹I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁹⁸Au、²¹¹At、²¹³Bi、²²⁵Ac和¹⁸⁶Re。当使用放射性标签时，可以利用本领域中已知的目前可获得的计数程序来标识和量化TCR与包括MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的特异性结合。在标签是酶的情况下，检测可以如本领域中已知的通过目前利用的比色、分光光度、荧光分光光度、电流滴定或气体定量技术中的任何一种技术来完成。这可以通过使样本或对照样本与本文所描述的TCR在允许TCR与包括MLL肽(例如，MLL肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物之间形成复合物的条件下相接触来实现。检测TCR与肽-MHC复合物之间形成的任何复合物并且在样本和对照物中进行比较。鉴于本文所描述的TCR与包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的特异性结合可以使用TCR来检测展示包括MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物的细胞。还可以使用本文所描述的TCR经由免疫亲和纯化来纯化这种复合物或细胞。本文还包含可以以测试试剂盒的形式制备的测定系统以用于半定量或定量分析例如包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物或包括肽-MHC复合物的复合物的存在程度。系统或测试试剂盒可以包括带标记的组分，例如带标记的TCR以及一种或多种另外的免疫化学试剂。

5.5产生TCR的多核苷酸、载体和方法

在另一方面，本文提供了多核苷酸和载体，所述多核苷酸包括对与MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)结合的本文所描述的TCR(例如，α链、β链、Vα结构域和/或Vβ结构域)进行编码的核苷酸序列，所述载体例如包括此类多核苷酸以用于在宿主细胞(例如，大肠杆菌(E.coli)和哺乳动物细胞)中重组表达。本文提供了多核苷酸和载体，所述多核苷酸包括对本文所提供的TCR中的任何TCR的α链和/或β链进行编码的核苷酸序列，所述载体包括此类多核苷酸序列，例如用于在宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中高效表达。

在某些实施例中，本文所描述的多核苷酸或核酸分子是分离的或纯化的。通常，“分离的”多核苷酸或核酸分子是从存在于核酸分子的天然来源(例如，小鼠或人)中的其它核酸分子中分离出来的分子。另外或可替代地，分离的多核苷酸或核酸分子(例如，cDNA分子)基本上不含其它细胞材料或当通过重组技术产生时基本上不含培养基或当化学合成时基本上不含化学前体或其它化学制品。例如，语言“基本上不含”包含其它材料(例如，细胞材料、培养基、其它核酸分子、化学前体和/或其它化学制品)少于约15％、10％、5％、2％、1％、0.5％或0.1％(特别是少于约10％)的多核苷酸或核酸分子的制剂。

在特定方面，本文提供了包括对TCR进行编码的核苷酸序列的多核苷酸，所述TCR与上述TCR结合到包括SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列的肽的相同表位。在某些实施例中，肽与如上所述的MHC(例如，HLA-B*0702)复合。在某些实施例中，TCR包括并非天然存在于动物或哺乳动物(例如，人)体内的TCR种系库中的序列。在某些实施例中，多核苷酸包括并非天然存在于动物或哺乳动物(例如，人)体内的TCR编码DNA种系库中的序列。

在某些方面，本文提供了包括对本文所描述TCR的α链和/或β链进行编码的核苷酸序列的多核苷酸。多核苷酸可以包括对包括本文所描述的TCR的α链FR和CDR的α链进行编码的核苷酸序列(参见例如，表1)或对包括本文所描述TCR的β链FR和CDR的β链进行编码的核苷酸序列(参见例如，表1)。

在某些实施例中，多核苷酸编码本文所描述的TCR的α链和β链。在某些实施例中，多核苷酸对从N端到C端包括以下的多肽进行编码：TCR的α链、2A切割位点和TCR的β链。在某些实施例中，多核苷酸对从N端到C端包括以下的多肽进行编码：TCR的β链、2A切割位点和TCR的α链。在某些实施例中，多核苷酸对从N端到C端包括以下的多肽进行编码：TCR的α链、弗林蛋白酶切割位点、2A切割位点和TCR的β链。在某些实施例中，多核苷酸对从N端到C端包括以下的多肽进行编码：TCR的β链、弗林蛋白酶切割位点、2A切割位点和TCR的α链。弗林蛋白酶切割位点通常具有共有序列RX1X2R，其中X1可以是任何氨基酸，并且X2是K或R(SEQ IDNO:96)。在某些实施例中，X1是K或R。在某些实施例中，弗林蛋白酶切割位点具有序列RAKR(SEQ ID NO:97)。在某些实施例中，弗林蛋白酶切割位点在第二精氨酸残基后被切割。2A切割位点通常包括共有序列X₁X₂EX₃NPGP，其中X₁是D或G，X₂是V或I，并且X₃是任何氨基酸(SEQID NO:99)。在某些实施例中，2A切割位点在C端脯氨酸残基与先前的甘氨酸残基之间切割。在某些实施例中，2A切割位点包括选自SEQ ID NO:100-105和239-246(表7)的氨基酸序列。在某些实施例中，2A切割位点是具有SEQ ID NO:100中阐述的氨基酸序列的猪捷申病毒-12A(P2A)切割位点。在某些实施例中，2A切割位点是具有SEQ ID NO:239中阐述的氨基酸序列的猪捷申病毒-1 2A(P2A)切割位点。在某些实施例中，多核苷酸包括对SEQ ID NO:90进行编码的核酸序列。在某些实施例中，多核苷酸包括对SEQ ID NO:238进行编码的核酸序列。

表7.示例性2A切割位点

本文还提供了对本文所描述的TCR进行编码的例如通过密码子/RNA优化、用异源信号序列替换以及消除mRNA不稳定元件优化的多核苷酸。因此，用于通过引入密码子变化和/或消除mRNA中的抑制区产生编码TCR(例如，α链、β链、Vα结构域和/或Vβ结构域)的优化核酸以实现重组表达的方法可以通过调整例如美国专利第5,965,726号，用于重组表达的；第6,174,666号；第6,291,664号；第6,414,132号；以及第6,794,498号中描述的优化方法来执行。例如，可以在不改变由核酸序列编码的氨基酸的情况下对RNA中的潜在剪接位点和不稳定元件(例如，富含A/T或A/U的元件)进行突变，以增加RNA用于重组表达的稳定性。这些改变利用遗传密码的简并性，例如，使用用于相同的氨基酸的替代密码子。在一些实施例中，可能需要改变一个或多个密码子以编码保守突变，例如，具有与原始氨基酸相似的化学结构和性质和/或功能的类似氨基酸。此类方法可以使TCR的表达相对于尚未被优化的多核苷酸编码的TCR的表达增加至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍或更多。

在某些实施例中，对本文所描述的TCR(例如，α链、β链、Vα结构域和/或Vβ结构域)进行编码的经过优化的多核苷酸序列可以与对本文所描述的TCR(例如，α链、β链、Vα结构域和/或Vβ结构域)进行编码的未优化的多核苷酸序列的反义(例如，互补)多核苷酸杂交。在具体实施例中，编码本文描述的TCR的优化的核苷酸序列在高严格条件下与编码本文描述的TCR的未优化的多核苷酸序列的反义多核苷酸杂交。在具体实施例中，编码本文所描述的TCR的优化的核苷酸序列在高严格性、中等或较低严格性杂交条件下与编码本文所描述的TCR的未优化的核苷酸序列的反义多核苷酸杂交。已经描述了关于杂交条件的信息，参见，例如，美国专利申请第US2005/0048549号(例如，72-73段)，所述专利申请通过引用并入本文。

可以通过本领域中已知的任何方法获得多核苷酸并测定多核苷酸的核苷酸序列。对本文所描述的TCR(例如表1-4中描述的TCR)以及这些TCR的经过修饰的版本进行编码的核苷酸序列可以使用本领域中公知的方法来测定，即，已知对特定氨基酸进行编码的核苷酸密码子以产生对TCR进行编码的核酸的方式组装。编码TCR的这种多核苷酸可以由化学合成的寡核苷酸组装(例如，如Kutmeier G等人(1994),《生物技术(BioTechniques)》17:242-6中所描述的)，简言之，其涉及合成含有编码TCR的部分序列的重叠寡核苷酸、退火和连接那些寡核苷酸，然后通过PCR扩增连接的寡核苷酸。

可替代地，可以使用本领域中公知的方法(例如，PCR和其它分子克隆方法)由来自适合的来源(例如，T淋巴细胞)的核酸产生对本文所描述的TCR进行编码的多核苷酸。例如，可以使用从表达所关注TCR的T细胞获得的基因组DNA，使用可与已知序列的3'和5'末端杂交的合成引物进行PCR扩增。这种PCR扩增方法可以用于获得包括编码TCR的α链和/或β链的序列的核酸。这种PCR扩增方法可以用于获得包括编码TCR的Vα结构域和/或Vβ结构域的序列的核酸。可以将扩增的核酸克隆到载体中以在宿主细胞中表达并进一步克隆，例如，以产生嵌合和人源化TCR。

如果无法获得含有对特定TCR进行编码的核酸的克隆，但TCR分子的序列是已知的，则对TCR进行编码的核酸可以化学合成或者通过以下方式从合适的来源(例如，TCRcDNA文库或由表达TCR的任何组织或细胞如被选择以表达本文所描述的TCR的T淋巴细胞产生的cDNA文库或从所述组织或细胞中分离的核酸例如聚A⁺RNA)获得：通过PCR扩增使用可与序列的3'端和5'端杂交的合成引物或通过使用对特定基因序列特异的寡核苷酸探针进行克隆来鉴别例如来自对TCR进行编码的cDNA文库的cDNA克隆。然后可以使用本领域熟知的任何方法将通过PCR产生的扩增核酸克隆到可复制的克隆载体中。

对本文所描述的TCR进行编码的DNA可以使用常规程序容易地分离和测序，例如，通过使用能够与对TCR的α链和/或β链进行编码的基因特异性地结合的寡核苷酸探针。T淋巴细胞可以充当这种DNA的源。一旦被分离，DNA就可以被放置到表达载体中，表达载体然后被转染到不以其它方式产生TCR蛋白的如大肠杆菌细胞等宿主细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(例如，来自CHO GS System^TM(龙沙集团(Lonza))的CHO细胞)或骨髓瘤细胞中，以获得重组宿主中TCR的合成。

为了产生全部TCR，可以使用包含Vα核苷酸序列或Vβ核苷酸序列、限制位点和用于保护限制位点的侧翼序列的PCR引物将Vα序列或Vβ序列扩增成克隆，例如，各个Vα核苷酸序列或Vβ核苷酸序列的克隆或含有通过柔性接头附接的TCR的可变区的单链TCR的克隆。利用本领域技术人员已知的克隆技术，可以将PCR扩增的Vα结构域克隆到表达α链恒定区的载体中，并且可以将PCR扩增的Vβ结构域克隆到表达β链恒定区的载体中。在某些实施例中，用于表达Vα或Vβ结构域的载体包括EF-1α启动子、分泌信号、用于可变区的克隆位点、恒定结构域和如新霉素等选择标记。然后将α链和β链载体同时或依次共转染到细胞系中，以使用本领域技术人员已知的技术产生表达完整TCR的稳定或瞬时细胞系。还可以将Vα或Vβ结构域克隆到表达必要恒定区的一个载体中。然后将载体转染到细胞系中以产生使用本领域技术人员已知的技术表达完整TCR的稳定或瞬时细胞系。

DNA还可以被修饰，例如，通过用编码序列取代代替鼠类序列的人α链和β链恒定结构域，或通过使非TCR多肽的编码序列的全部或一部分与TCR编码序列共价连接。

还提供了在高、中等或低严格性杂交条件下与对本文所描述TCR进行编码的多核苷酸杂交的多核苷酸。在具体实施例中，本文所描述的多核苷酸在高、中或低严格杂交条件下与编码本文所提供的Vα结构域和/或Vβ结构域的多核苷酸杂交。

杂交条件已经在本领域中描述并且是本领域技术人员已知的。例如，在严格条件下的杂交可以涉及在约45℃下与6x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中的过滤器结合的DNA杂交，然后在约50-65℃下在0.2xSSC/0.1％SDS中洗涤一次或多次；在高度严格条件下的杂交可以涉及在约45℃下与6xSSC中的过滤器结合的核酸杂交，然后在约68℃下在0.1xSSC/0.2％SDS中洗涤一次或多次；在其它严格杂交条件下的杂交是本领域技术人员已知的并且已经描述过，参见例如，Ausubel FM等人编辑(1989),《当代分子生物学实验手册的方法概要(Current Protocols in Molecular Biology)》第I卷,第6.3.1-6.3.6页和2.10.3页,格林出版协会有限公司(Green Publishing Associates,Inc)以及纽约约翰威立父子公司(John Wiley&Sons,Inc)。

在某些方面，本文提供了表达(例如，重组地)本文所描述的结合MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的细胞，以及相关的多核苷酸和表达载体。本文提供了载体(例如，表达载体)，所述载体包括多核苷酸，所述多核苷酸包括对此类TCR进行编码以在宿主细胞中(例如在哺乳动物细胞中)重组表达的核苷酸序列。本文还提供了包括用于重组表达本文所描述的TCR(例如，人或人源化TCR)的此类载体的宿主细胞。在特定方面，本文提供了用于产生本文所描述的TCR的方法，所述方法包括从宿主细胞表达这种TCR。

另一方面，本文提供了用于产生如本文所描述的工程化细胞(例如，包括异源和/或重组核酸的细胞)的方法。在某些实施例中，所述方法包括在允许将如本文所描述的载体引入到细胞中的条件下使细胞与载体接触。在某些实施例中，所述条件允许用载体转染细胞(例如，通过脂质体或电穿孔)。在一个实施例中，所述条件允许通过电穿孔用mRNA载体转染细胞。在某些实施例中，载体是病毒载体，并且所述条件允许用病毒载体转导细胞。在某些实施例中，在体外或体内将载体引入细胞。在某些实施例中，在体外将载体引入细胞。

与MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)结合的本文所描述的TCR(例如，本文所描述的全长TCR、TCR的α链/或β链或单链TCR)的重组表达涉及构建含有对TCR进行编码的多核苷酸的表达载体。一旦获得了对本文所描述的TCR进行编码的多核苷酸，就可以使用本领域中公知的技术通过重组DNA技术产生用于产生TCR分子的载体。因此，本文描述了通过表达含有编码核苷酸序列的TCR的多核苷酸制备蛋白质的方法。可以使用本领域技术人员熟知的方法构建含有编码序列的TCR和适当的转录和转译控制信号的表达载体。这些方法包含，例如，体外重组DNA技术、合成技术和体内遗传重组。还提供了可复制的载体，所述载体包括可操作地连接到启动子的编码本文所描述的TCR分子(例如，全长TCR、TCR的α链或β链、TCR的Vα或Vβ或α或β链CDR)的核苷酸序列。

载体可以包括任何类型的核苷酸(包含但不限于DNA和RNA)，所述核苷酸可以是单链或双链的、合成的或部分地从天然来源获得的并且可以含有天然的、非天然的或经过改变的核苷酸。重组表达载体可以包括天然存在的或非天然存在的核苷酸间连接，或两种类型的连接。在一个实施例中，非天然存在的或经改变的核苷酸或核苷酸间连接不会阻碍载体的转录或复制。表达载体可以是病毒载体(例如，逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或杆状病毒载体)。在某些实施例中，逆转录病毒载体是慢病毒载体(例如，包括HIV-1基因组的遗传元件的载体)或马传染性贫血病毒载体。在某些实施例中，载体与一种或多种病毒衣壳蛋白一起包装以提供病毒颗粒。

表达载体可以通过常规技术转移到细胞(例如，宿主细胞)，并且然后，所得细胞可以通过常规技术进行培养以产生本文所描述的TCR。因此，本文提供的宿主细胞含有可操作地连接到用于在宿主细胞中表达此类序列的启动子的编码本文所描述的TCR分子(例如，全长TCR、TCR的α链或β链、TCR的Vα或Vβ或α或β链CDR)的多核苷酸。在某些实施例中，如以下详细描述的，对于双链TCR的表达，分别编码α链和β链的载体可以在宿主细胞中共表达以表达整个TCR分子，如下所述。在某些实施例中，宿主细胞含有包括编码本文所描述的TCR的α链和β链的多核苷酸的载体。在具体实施例中，宿主细胞含有两种不同的载体，第一载体包括编码本文所描述的TCR的α链或α链可变区的多核苷酸，并且第二载体包括编码本文所描述的TCR的β链或β链可变区的多核苷酸。在其它实施例中，第一宿主细胞包括第一载体，所述第一载体包括编码本文所描述的TCR的α链或α链可变区的多核苷酸，并且第二宿主细胞包括第二载体，所述第二载体包括编码本文所描述的β链或β链可变区的多核苷酸。在具体实施例中，α链或α链可变区由与以第二细胞表达的β链或β链可变区相关的第一细胞来表达，以形成本文所描述的TCR。在某些实施例中，本文提供了包括此类第一宿主细胞和此类第二宿主细胞的宿主细胞群。

在特定实施例中，本文提供了载体群，所述载体群包括第一载体和第二载体，所述第一载体包括对本文所描述的TCR的α链或α链可变区进行编码的多核苷酸，所述第二载体包括对本文所描述的β链或β链可变区进行编码的多核苷酸。

可以利用各种宿主表达载体系统来表达本文所描述的TCR分子(参见例如，美国专利第5,807,715号)。此类宿主表达系统代表可以借以产生并随后纯化所关注的编码序列的媒剂，还代表在用适当的核苷酸编码序列转化或转染时可以原位表达本文所描述的TCR分子的细胞。这些包含但不限于用重组噬菌体DNA转化的如细菌等微生物(例如，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌)，质粒DNA或含有TCR编码序列的粘粒DNA表达载体；用含有TCR编码序列的重组酵母表达载体转化酵母(例如，酵母(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia))；用含有TCR编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒，CaMV；感染的植物细胞系统(例如，如莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)等绿藻)；烟草花叶病毒(TMV)或用含有TCR编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化；或哺乳动物细胞系统(例如，COS(例如，COS1或COS)、CHO、BHK、MDCK、HEK293、NS0、PER.C6、VERO、CRL7O3O、HsS78Bst、HeLa和NIH 3T3、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20和BMT10细胞)含有来自哺乳动物细胞基因组(例如，金属硫蛋白启动子)或源自哺乳动物病毒(例如，腺病毒晚期启动子；痘苗病毒7.5K启动子)的启动子的重组表达构建体。在具体实施例中，本文所描述的用于表达TCR的细胞是CHO细胞，例如来自CHO GS System^TM(瑞士龙沙集团(Lonza))的CHO细胞。在特定实施例中，本文所描述的用于表达TCR的细胞是人细胞，例如，人细胞系。在具体实施例中，哺乳动物表达载体是pOptiVEC^TM或pcDNA3.3。在特定实施例中，如大肠杆菌或真核细胞(例如，哺乳动物细胞)等细菌细胞(特别是对于整个重组TCR分子的表达)用于重组TCR分子的表达。例如，如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞等哺乳动物细胞(与如来自人巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子等载体结合)是用于TCR的有效表达系统(Foecking MK和Hofstetter H(1986),《基因(Gene)》45:101-5；和Cockett MI等人(1990),《生物技术(Biotechnology)》8(7):662-7)。在某些实施例中，本文所描述的TCR由CHO细胞或NS0细胞产生。在具体实施例中，编码本文所描述的TCR的核苷酸序列的表达受组成型启动子、诱导型启动子或组织特异性启动子的调节。

在某些实施例中，哺乳动物宿主细胞是淋巴细胞(例如，人淋巴细胞)，如T细胞或自然杀伤(NK)细胞。在某些实施例中，淋巴细胞是T细胞。任何发育阶段的任何T细胞都可以用于表达本文所公开的TCR。例如，在某些实施例中，T细胞选自由以下组成的组：CD8+细胞毒性T细胞、CD4+细胞毒性T细胞、CD4+辅助T细胞(例如，Th1或Th2细胞)、CD4/CD8双阳性T细胞、肿瘤浸润T细胞、胸腺细胞、记忆T细胞、未处理的T细胞和自然杀伤T细胞(例如，恒定型自然杀伤T细胞)。细胞免疫系统的前体细胞(例如，T淋巴细胞的前体)也可以用于呈递本文所公开的TCR，因为这些细胞可以分化、发育或成熟为效应细胞。因此，在某些实施例中，哺乳动物宿主细胞是多能干细胞(例如，胚胎干细胞、诱导多能干细胞)、淋巴细胞祖细胞或造血干细胞(例如，从骨髓、脐带血或周边血液中分离和/或富集)。

在某些实施例中，哺乳动物宿主细胞是在细胞表面上呈递本文所公开的TCR的细胞群。细胞群可以是异质的或同质的。在某些实施例中，所述群的至少50％(例如，至少60、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％或99.9％)是如本文所描述的细胞。在某些实施例中，所述群基本上是纯的，其中所述群的至少50％(例如，至少60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％或99.9％)是同质的。在某些实施例中，所述群是异质的并且包括混合的细胞群(例如，细胞具有不同的细胞类型、发育阶段、起源、通过不同方法分离、纯化或富集、用不同的药剂刺激和/或通过不同的方法工程化)。在某些实施例中，细胞是外周血单核细胞(PBMC)(例如，人PBMC)群。

在细菌系统中，根据预期用于表达TCR分子的用途，可以有利地选择许多表达载体。例如，当要产生大量此类TCR时，为了产生TCR分子的药物组合物，可能期望引导高水平的易于纯化的融合蛋白产物表达的载体。此类载体包含但不限于大肠杆菌表达载体pUR278(Ruether U&Mueller-Hill B(1983)《欧洲分子生物学组织杂志(EMBO J)》J 2:1791-1794)，其中TCR编码序列可以单独连接到具有lac Z编码区的框架中的载体中，从而产生融合蛋白；pIN载体(Inouye S&Inouye M(1985)《核酸研究》13:3101-3109；Van Heeke G&Schuster SM(1989),《生物化学杂志》24:5503-5509)；等等。例如，pGEX载体还可以用于表达作为与谷胱甘肽5-转移酶(GST)的融合蛋白的外源多肽。通常，此类融合蛋白是可溶的并且可以通过吸附且与基质谷胱甘肽琼脂糖珠粒结合、随后在游离谷胱甘肽存在的情况下洗脱而从经过溶解的细胞中容易地纯化。所述pGEX载体被设计成包含凝血酶或因子Xa蛋白酶切割位点，使得克隆的靶基因产物可以从GST部分释放。

在昆虫系统中，例如，苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcNPV)可以作为载体表达外来基因。病毒在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞中生长。可以将TCR编码序列单独地克隆到病毒的非必需区域(例如多角体蛋白基因)中且置于AcNPV启动子(例如多角体蛋白启动子)的控制下。

在哺乳动物宿主细胞中，可以利用许多基于病毒的表达系统。在将腺病毒用作表达载体的情况下，可以将所关注的TCR编码序列连接到腺病毒转录/翻译控制复合物，例如，晚期启动子和三联前导序列。然后可以通过体外或体内重组将所述嵌合基因插入腺病毒基因组中。插入病毒基因组的非必需区域(例如，区域El或E3)将引起可存活且能够在受感染的宿主中表达TCR分子的重组病毒(例如参见，Logan J和Shenk T(1984),《美国国家科学院院刊(PNAS)》81(12):3655-9)。为了高效地转译插入的TCR编码序列，还可能需要特异性起始信号。这些信号包含ATG起始密码子和相邻序列。此外，起始密码子必须与所需编码序列的阅读框同步，以确保整个插入物的翻译。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以是天然和合成的多种起源。通过包含适当的转录增强子元件、转录终止子等，可以增强表达效率(参见例如，Bitter G等人,(1987),《酶学方法(Methods Enzymol)》153:516-544)。

另外，可以选择调节所插入序列的表达或以期望的特异性方式修饰和处理基因产物的宿主细胞株。蛋白质产物的此类修饰(例如，糖基化)和加工(例如，切割)对于蛋白质的功能来说可能是重要的。不同的宿主细胞具有蛋白质和基因产物的翻译后加工和修饰的特征和特异性机制。可以选择适当的细胞系或宿主系统以确保表达的外源蛋白的正确修饰和加工。为此，可以使用具有用于基因产物的初级转录、糖基化和磷酸化的适当处理的细胞机制的真核宿主细胞。此类哺乳动物宿主细胞包含但不限于CHO、VERO、BHK、Hela、MDCK、HEK293、NIH 3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NS0(不会内源性产生任何免疫球蛋白链的小鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O、COS(例如，COS1或COS)、PER.C6、VERO、HsS78Bst、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20、BMT10和HsS78Bst细胞。在某些实施例中，本文所描述的TCR分子在如CHO细胞等哺乳动物细胞中产生。

为了重组TCR的长期表达，可以产生稳定的表达细胞。例如，可以工程化稳定地表达本文所描述的TCR的细胞系。在具体实施例中，本文所提供的细胞稳定地表达结合形成本文所描述的TCR的α链或α链可变区和β链或β链可变区。

在某些方面，宿主细胞可以用由适当的表达对照元件(例如，启动子、增强子、序列、转录终止子、多腺苷酸化位点等)控制的DNA以及可选标志物来转化。在引入外来DNA/多核苷酸后，可以允许工程化细胞在富集的培养基中生长1-2天并且然后切换到选择性培养基。重组质粒中的选择标记授予对选择的抗性，并允许细胞将质粒稳定地整合到它们的染色体中并生长形成病灶，而病灶又进而克隆并扩增到细胞系中。这种方法可以用于对表达本文所描述的TCR的细胞系进行工程化。此类工程化的细胞系可以特别用于筛选和评估与TCR分子直接或间接相互作用的组合物。

可以使用许多选择系统，包含但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler M等人(1977),《细胞(Cell)》11(1):223-32)，次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Szybalska EH和Szybalski W(1962),《美国国家科学院刊(PNAS)》48(12):2026-2034)，和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy I等人(1980),《细胞(Cell)》22(3):817-23)分别在胸苷激酶、磷酸核糖转移酶或腺嘌呤磷酸核糖转移酶细胞中的基因，这些文献中的每一个都通过引用整体并入本文中。此外，抗代谢物抗性可以用作以下基因的选择基础：dhfr，其赋予对甲氨蝶呤的抗性(Wigler M等人(1980),《美国国家科学院院刊(PNAS)》77(6):3567-70；O’Hare K等人(1981),《美国国家科学院院刊(PNAS)》78:1527-31)；gpt，其赋予对霉酚酸的抗性(Mulligan RC&Berg P(1981),《美国国家科学院院刊(PNAS)》78(4):2072-6)；neo，其赋予对氨基糖苷G-418的抗性(Wu GY&Wu CH(1991),《生物疗法(Biotherapy)》3:87-95；Tolstoshev P(1993),《药理学与毒理学年评(Ann Rev Pharmacol Toxicol)》32:573-596；Mulligan RC(1993),《科学(Science)》260:926-932；以及Morgan RA&Anderson WF(1993),《生物化学年评(Annu Rev Biochem)》62:191-217；Nabel GJ&Felgner PL(1993),《生物技术趋势(Trends Biotechnol)》11(5):211-5)；以及hygro，其赋予对潮霉素的抗性(Santerre RF等人(1984),《基因》30(1-3):147-56)，所述文献中的每一个都均通过引用整体并入本文中。可以常规地应用重组DNA技术领域中公知的方法来选择期望的重组克隆，并且此类方法描述在以下中进行描述，例如，在Ausubel FM等人编著,《当代分子生物学实验手册(Current Protocols in Molecular Biology)》，纽约市约翰威立父子公司(1993)；Kriegler M,《基因转移与表达：实验室手册(Gene Transfer and Expression，ALaboratory Manual)》,Stockton出版社(Stockton Press),纽约(1990)；并且在第12章和第13章,Dracopoli NC等人(编著),《人类遗传学实验指南(Current Protocols in HumanGenetics)》,纽约市约翰威立父子公司(1994)；Colbère-Garapin F等人,(1981)《分子生物学杂志》150:1-14中所描述的，所述文献通过引用整体并入本文中。

通过载体扩增，可以增加TCR分子的表达水平(综述参见Bebbington CR和Hentschel CCG,载体在DNA克隆中基于基因扩增将克隆的基因表达在哺乳动物细胞中的用途(The use of vectors based on gene amplification for the expression ofcloned genes in mammalian cells in DNA cloning),第3卷(学术出版社(AcademicPress),纽约,1987)，上述文献通过引用整体并入本文中)。当表达TCR的载体系统中的标志物可扩增时，宿主细胞培养物中存在的抑制剂水平的增加将导致为宿主细胞选择增加的标志物基因拷贝数。由于扩增的区域与TCR基因相关，因此TCR的产生还将增加(Crouse GF等人(1983),《分子细胞生物学(Mol Cell Biol)》3:257-66，其通过引用整体并入本文中)。

在其它方面，宿主细胞可以用包括对如本文所描述的TCR进行编码的序列的病毒载体(例如，逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或杆状病毒载体)转导。在某些实施例中，逆转录病毒载体是慢病毒载体(例如，包括HIV-1基因组的遗传元件的载体)或马传染性贫血病毒载体。在某些实施例中，载体与一种或多种病毒衣壳蛋白一起包装以提供病毒颗粒。

在某些实施例中，载体进一步包括与对如本文所描述的TCR进行编码的序列可操作地连接的转录和/或转译控制序列(例如，启动子、增强子和/或Kozak序列)。可替代地，对TCR进行编码的序列可能不与转录和/或转译控制序列(例如，启动子、增强子和/或Kozak序列)可操作地连接，但其侧翼是与宿主细胞基因组的基因座侧翼的序列同源的序列，其中TCR编码序列的整合允许表达来自基因组基因座处或附近的转录和/或转译控制序列的经过编码的TCR。

宿主细胞可以与本文所描述的两种或更多种表达载体共转移(例如，共转染或共转导)，第一载体对α链衍生的多肽进行编码，并且第二载体对β链衍生的多肽进行编码。这两种载体可以含有相同的可选标志物，所述可选标志物使多肽α链和β链多肽能够相等表达。宿主细胞可以与不同量的所述两个或更多个表达载体共转移。例如，宿主细胞可以按第一表达载体与第二表达载体的以下比率中的任何比率共转移：1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:12、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45或1:50。在一些实施例中，α链和β链的编码序列是DNA。在一些实施例中，α链和β链的编码序列是RNA。

可替代地，可以使用对α链多肽和β链多肽两者进行编码并且能够表达α链多肽和β链多肽两者的单个载体。用于α链和β链的编码序列可以包括cDNA或基因组DNA。表达载体可以是单顺反子或多顺反子。多顺反子核酸构建体可以对2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个或者2-5个、5-10个或10-20个的范围内的基因/核苷酸序列进行编码。例如，双顺反子核酸构建体可以按以下顺序包括启动子、第一基因(例如，本文所描述的TCR的β链)和第二基因(例如，本文所描述的TCR的α链)。在此类表达载体中，两个基因的转录可以由启动子驱动，而来自第一基因的mRNA的转译可以通过帽依赖性扫描机制启动，并且来自第二基因的mRNA的转译可以通过帽独立性机制(例如，通过IRES)进行。可替代地，所述两个基因可以通过自切割肽(例如，2A肽)或由细胞内蛋白酶或细胞外蛋白酶识别的肽序列可操作地连接。

一旦通过重组表达产生了本文所描述的TCR分子，TCR分子就可以通过本领域中已知的用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法进行纯化，例如，通过色谱法(例如，离子交换、亲和力和尺寸柱色谱法)、离心、差别溶解或通过用于纯化蛋白质的任何其它标准技术。进一步地，本文所描述的TCR可以与本文所描述的或本领域已知的异源多肽序列融合以促进纯化。

在具体实施例中，本文所描述的TCR是分离的或纯化的。通常，分离的TCR是基本上不含与分离的TCR具有不同抗原特异性的其它TCR的TCR。例如，在特定实施例中，本文所描述的TCR制剂基本上不含细胞材料和/或化学前体。术语“基本上不含细胞物质”包含TCR的制剂，其中TCR与分离或重组产生TCR的细胞的细胞组分分离。因此，基本上不含细胞物质的TCR包含具有少于约30％、20％、10％、5％、2％、1％、0.5％、0.1％(按干重计)异源蛋白质的TCR制剂(在本文中还称为“污染蛋白”)和/或TCR的变体，例如，TCR的不同转译后修饰形式或TCR的其它不同版本(例如，其片段)。当重组产生TCR时，TCR通常还基本上不含培养基，即，培养基占蛋白质制剂体积的小于约20％、10％、2％、1％、0.5％或0.1％。当通过化学合成产生TCR时，TCR通常基本上不含化学前体或其它化学物质，即，TCR与合成TCR时涉及的化学前体或其它化学物质分离。因此，除所关注的TCR外，TCR的此类制剂的化学前体或化合物少于约30％、20％、10％或5％(按干重计)。在具体实施例中，本文所描述的TCR是分离的或纯化的。

结合MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的TCR可以通过本领域中已知的用于合成TCR的任何方法产生，例如，通过化学合成或通过重组表达技术。除非另有说明，否则本文所描述的方法采用分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成与修饰、核酸杂交以及本领域技术范围内的相关领域的常规技术。这些技术描述在例如本文所引用的参考文献中并且在文献中进行了充分解释。参见例如，Maniatis T等人,(1982)《分子克隆：实验手册(MolecularCloning:A Laboratory Manual)》,冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press)；Sambrook J等人,(1989),《分子克隆：实验手册》,第二版,冷泉港实验室出版社；Sambrook J等人,(2001)《分子克隆：实验手册》,纽约市冷泉港的冷泉港实验室出版社；Ausubel FM等人,《当代分子生物学实验手册》,约翰威立父子公司(1987和年度更新)；《当代免疫学实验手册(Current Protocols in Immunology)》,约翰威立父子公司(1987和年度更新)Gait(编著)(1984),《寡核苷酸合成：实用方法(OligonucleotideSynthesis:A Practical Approach)》,IRL出版社(IRL Press)；Eckstein(编著)(1991),《寡核苷酸和类似物：实用方法(Oligonucleotides and Analogues:A PracticalApproach)》,IRL出版社；Birren B等人(编著)(1999),《基因组分析：实验室手册(GenomeAnalysis:A Laboratory Manual)》,冷泉港实验室出版社，所述文献中的每一个均通过引用整体并入本文中。

在具体实施例中，本文所描述的TCR是通过涉及产生的任何方法例如经由DNA序列的合成、基因工程化而制备、表达、产生或分离的TCR(例如，重组TCR)。在某些实施例中，此类TCR包括不天然存在于动物或哺乳动物体内(例如，人)的TCR种系库中的序列(例如，DNA序列、RNA序列或氨基酸序列)。

在一方面，本文提供了制备与MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)结合的TCR的方法，所述方法包括培养本文所描述的细胞或宿主细胞。在某些方面，本文提供了制备与MLL多肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)结合的TCR的方法，所述方法包括使用本文所描述的细胞或宿主细胞(例如，包括对本文所描述的TCR进行编码的多核苷酸的细胞和宿主细胞)表达(例如，重组地表达)TCR。在特定实施例中，细胞是分离的细胞。在特定实施例中，已经将外源多核苷酸引入细胞中。在特定实施例中，所述方法进一步包括纯化从细胞或宿主细胞获得的TCR的步骤。

本文所描述的TCR可以使用本领域中已知的各种噬菌体展示方法产生。在噬菌体展示方法中，功能性TCR结构域被展示于噬菌体颗粒的表面上，这些噬菌体颗粒携带编码它们的多核苷酸序列。特别地，编码Vα和Vβ结构域的DNA序列从动物cDNA文库(例如，受影响组织的人或小鼠cDNA文库)中扩增。编码Vα和Vβ结构域的DNA通过PCR与肽连接基连接，并克隆到噬菌粒载体中。将所述载体以电穿孔转至大肠杆菌中，并且用辅助噬菌体对所述大肠杆菌进行感染。在这些方法中使用的噬菌体典型地是丝状噬菌体，包含fd和M13，并且Vα和Vβ结构域通常与噬菌体基因III或基因VIII重组融合。表达与特定抗原结合的抗原结合域的噬菌体可以用肽或肽-MHC复合物来选择或识别，例如，使用显示在细胞表面或捕获到固体表面或珠粒上的这种复合物。可用于制备本文所描述的TCR的噬菌体展示方法的实例包含Zhao Y等人(2007),《免疫学杂志(J Immunol)》179:5845-54，其通过引用整体并入本文中。

如以上参考文献中描述的，在噬菌体选择之后，来自噬菌体的TCR编码区可以被分离并且用来产生全部TCR，包含人TCR，并且表达在任何期望的宿主中，包含哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌，例如，如以下所描述的。

在某些实施例中，为了产生全部TCR，可以使用包含Vα核苷酸序列或Vβ核苷酸序列、限制位点和用于保护限制位点的侧翼序列的PCR引物来从模板扩增Vα序列或Vβ序列，例如，含有通过肽接头连接的TCR的可变区的单链TCR的克隆。利用本领域技术人员已知的克隆技术，可以将PCR扩增的Vα结构域克隆到表达Vα恒定区的载体中，并且可以将PCR扩增的Vβ结构域克隆到表达Vβ恒定区的载体中。然后将α链和β链载体同时或依次共转染到细胞系中，以使用本领域技术人员已知的技术产生表达完整TCR的稳定或瞬时细胞系。还可以将Vα或Vβ结构域克隆到表达必要恒定区的一个载体中。然后将载体转染到细胞系中以产生使用本领域技术人员已知的技术表达完整TCR的稳定或瞬时细胞系。

在某些实施例中，为了由对如本文所描述的TCR的α链和β链进行编码的多核苷酸或由包括所述多核苷酸的载体产生全部TCR，从多核苷酸或载体表达包括TCR的α链和β链的多肽。任选地，多肽是分离的和/或纯化的。使多肽与弗林蛋白酶接触。在某些实施例中，其中弗林蛋白酶切割位点具有RX₁X₂R的氨基酸序列，其中X₁是K或R，并且X₂是K或R(SEQ IDNO:98)，所述多肽进一步与羧肽酶同时或随后接触，其中所述羧肽酶从多肽的C端去除碱性氨基酸K或R。

嵌合TCR是其中TCR的不同部分源自不同TCR分子的分子，例如来自不同物种的TCR。

在特定实施例中，本文所描述的TCR是人TCR，所述TCR与如本文所描述的TCR结合到包括SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列的肽的相同表位。人TCR可以使用本领域中已知的任何方法产生。例如，可以使用不能表达功能性内源性TCR但可以表达人TCR基因的转基因小鼠。特别地，人α和β链TCR基因可以随机地或通过同源重组引入到老鼠胚胎干细胞中。小鼠α和β链TCR基因可以通过由同源重组引入人TCR基因座而单独地或同时地呈现非功能性。具体地，J_H区的纯合缺失阻止内源性TCR产生。将修饰的胚胎干细胞扩增并显微注射到胚泡中以产生嵌合子小鼠。然后将嵌合体小鼠培育成表达人TCR的纯合子后代。以正常方式用所选抗原例如抗原(例如，MLL肽，例如，MLL磷酸肽)的全部或一部分对转基因小鼠免疫。可以从经过免疫的转基因小鼠中获得包括针对抗原的TCR的T淋巴细胞。由转基因小鼠携带的人TCR转基因在T细胞分化期间重排。因此，使用此类技术，可以产生由体内免疫引起的在治疗上有用的TCR。

与MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)结合的人TCR可以通过本领域中已知的各种方法制备，包含噬菌体展示方法或使用源自人TCR序列的TCR文库的哺乳动物展示。

5.6试剂盒

还提供了试剂盒，所述试剂盒包括本文所描述的一种或多种TCR、其药物组合物或轭合物、对本文所描述的一种或多种TCR进行编码的多核苷酸(例如，表达载体)或表达本文所描述的一种或多种TCR的细胞。在具体实施例中，本文提供了药物包或试剂盒，所述药物包或所述试剂盒包括填充有本文所描述的药物组合物的成分中的一种或多种成分的一个或多个容器，所述一种或多种成分如本文所提供的一种或多种TCR、多核苷酸或细胞。在一些实施例中，试剂盒含有如本文所描述的那些等本文所描述的药物组合物和任何预防或治疗剂。在某些实施例中，试剂盒可以含有T细胞有丝分裂原(例如植物血凝素(PHA)和/或佛波醇12-豆蔻酸13-乙酸酯(PMA))或刺激如抗CD3抗体和抗CD28抗体等抗体的TCR复合物。任选地，与此类一个或多个容器相关的可以是由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的公告，所述公告反映所述机构针对人类给予，对制造、使用或销售的许可。

还提供了可以用于上述方法的试剂盒。在一个实施例中，试剂盒在一个或多个容器中包括本文所描述的TCR，例如，经过纯化的TCR。在具体实施例中，本文所描述的试剂盒含有包括作为对照抗原的MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的基本上分离的肽-MHC复合物。在另一个具体实施例中，本文所描述的试剂盒进一步包括对照TCR，所述对照TCR不与包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物反应。在另一个具体实施例中，本文所描述的试剂盒含有一种或多种用于检测TCR与包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)(例如，TCR可以与如荧光化合物、酶底物、放射性化合物或发光化合物等可检测底物结合，或识别TCR的结合分子可以与可检测底物轭合)的肽-MHC复合物的结合。在具体实施例中，本文提供的试剂盒可以包含包括MLL肽(例如，酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的重组产生的或化学合成的肽-MHC复合物。试剂盒中提供的包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物可以与固体支持物(例如，固体表面或珠粒)附接或整合到脂质膜(例如，脂质体或固定细胞)中。在更具体的实施例中，以上所描述的试剂盒的检测装置包含包括MLL肽(例如，MLL磷酸肽，例如，由SEQ ID NO:45或47的氨基酸序列组成的肽)的肽-MHC复合物所附接的固体支持物。这种试剂盒还可以包含识别TCR的非附接带报告基因标记的结合分子。在这个实施例中，TCR与肽MHC复合物的结合可以通过所述报告子标记的结合分子的结合来检测。

6.实例

这部分(即，第6部分)中的实例通过说明而非限制的方式提供。

6.1实例1：新型MLL TCR的发现

使用两个专有的平台标识与MLL磷酸肽结合的新型TCR。第一平台是主要的T细胞扩增平台，其中通过功能筛选和基于NGS的测序标识磷酸肽特异性同源TCRαβ对。第二平台是TCR展示平台，其中α链和β链文库由供体PBMC产生，任选地在没有先前的靶特异性刺激的情况下，随后进行多轮TCR富集用于靶特异性磷酸肽结合。

6.1.1细胞的制备

是从健康供体HLA-B*0702+PBMC(谢克海茨(Shaker Heights),俄亥俄州(OH)的细胞科技有限公司(Cellular Technologies Ltd.))中分离人树突状细胞(DC)和CD8+ T细胞。

简而言之，根据制造商的说明，通过使用抗CD14微珠的磁分离，通过阳性选择从PBMC中分离CD14+单核细胞(贝尔吉施格拉德巴赫(Bergisch Gladbach),德国的美天旎生物技术有限公司(Miltenyi Biotec))目录号：130-050-201)并在由

DC-培养基组成的生长培养基中培养三天(Cell Genix，目录号：20801-05500)——所述培养基补充有5％人血清(西格玛公司(Sigma)，目录号：H3667-100mL)、1％青霉素/链霉素(英国伦敦的Amimed Direct，目录号：4-01F00-H)、800U/mL GM-CSF(美天旎生物技术有限公司，目录号：130-095-372)以及10ng/mL IL-4(美天旎生物技术有限公司,目录号：130-093-917)——以诱导分化为DC。在补充有10ng/mL大肠杆菌LPS(密苏里州圣路易斯西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich，#L4391-1MG))、100U/mL IFNγ(新泽西州罗基希尔派普泰克公司(Peprotech),目录号：300-02)和20μg/mL MLL-pM(EPR[pS]PSHSM；SEQ ID NO:45)或FLU和CMV对照肽的生长培养基中另外温育16小时后完全分化，使DC在50μg/mL丝裂霉素(西格玛公司，目录号：M05053-2MG)存在下温育60分钟以抑制树突状细胞增殖。将在没有抗原肽的情况下温育的DC制备为对照样品。

根据制造商的说明，通过使用磁珠人CD8+ T细胞分离试剂盒进行阴性选择来从CD14+单核细胞耗尽的PBMC中分离CD8+ T细胞(美天旎生物技术有限公司，目录号：130-096-495)。在用抗CD8-PerCP(eBioscience，马萨诸塞州沃尔瑟姆赛默飞世尔科技公司，目录号：9043-0087-120)、抗CD45RA-PE-Cy7(eBiosciences，目录号：25-0458-42)、抗CD45RO-FITC(eBioscience，目录号：11-0457-42)、抗CD57-PE(加利福尼亚州圣地亚哥Biolegend，目录号：322312)、抗CCR7-BV421(BD horizon，目录号：562555)、抗CD62L-APC(eBioscience，目录号：17-0629-42)试剂的混合物进行表面染色后，使用FACSAriaIII(新泽西州富兰克林湖贝迪医疗公司(Becton Dickinson))细胞分选仪将CD8+ T分离成CD45RO+/CD57-记忆T细胞和CD45RA+/CCR7+/CD62L+未处理T细胞群。

6.1.2人CD8+ T细胞的磷酸肽特异性刺激和染色

将用5μg/mL IL-7(美天旎生物技术有限公司，目录号：130-093-937)处理16小时的记忆和未处理CD8+ T细胞亚群(1.0×10⁶细胞/毫升)与经过肽脉冲处理或未经脉冲处理的DC(2.5×10⁵个细胞/毫升)在补充有30ng/mL IL-21(派普泰克公司，目录号：200-21)的生长培养基中以4:1的T细胞:DC比率共温育10天。在第3天、第6天、第8天和第10天之后，将补充有5ng/mL(第10天为10ng/mL)IL-15(Bioloegend，目录号：目录号：570302)和IL-7的新鲜生长培养基加入到共培养物中。

用1μM达沙替尼(细胞信号传导技术公司(Cell Signaling Technology)，目录号：9052S)处理来自共培养物的1.0×10⁶个细胞，然后添加10μL负载有MLL-pM EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)、流感对照肽QPEWFRNVL(SEQ ID NO:84)或CMV对照肽TPRVTGGGAM(SEQ IDNO:85)的HLA-B*0702五聚体。在添加抗CD8-Per-CP试剂后，通过使用FACSCantoII细胞仪的流式细胞仪评估CD8+ T细胞的五聚体结合。随后，用莫能菌素(Monensin)(1:1000)(eBioscience，目录号：00-4505-51)和布雷菲德菌素(Brefeldin)A(1:1000)(eBioscience，目录号：004506-61)处理最多1.0×10⁶个含有结合MLL-pM肽的记忆或未处理CD8+ T细胞的共培养物的细胞，并如以上所描述的用pMHC五聚体进行染色。包括抗CD8-FITC、抗KLGR1-PerCP-eFluor710(eBioscience，目录号：46-9488-49)、抗4-1BB-BV421、抗CD69-PE-Cy7(eBioscience，目录号：25-069942)、抗IFNγ-APC(eBioscience，目录号：17-7319-82)或抗IFNγ-PE(eBioscience，目录号：12-7319-82)以及抗TNFα-BV510(BioLegend，目录号：502950)的混合物用于检测T细胞活化标记物的表面表达和细胞内表达。根据制造商的说明，使用Cytofix/Cytoperm(BD，目录号：51-2090KZ)和PermWash缓冲液(BD，目录号：51-2091KZ)进行分析。使用FACSCantoII细胞仪重新评估肽五聚体结合，并且然后使用FACSAriaII细胞仪获取结合MLL-pM肽和/或响应于MLL-pM刺激的记忆和未处理CD8+ T细胞亚群。

6.1.3来自筛选过程的示例性数据

在第一研究中，使用MLL-pM肽(EPR[pS]PSHSM；SEQ ID NO:45)和MLL-pP肽(RVR[pS]PTRSP；SEQ ID NO:47)对来自17个HLA-B*0702健康供体的PBMC进行为期7天的刺激，随后针对IFNγ和TNFα进行细胞内细胞因子染色(ICS)。选自病毒T细胞表位的32个肽的池用作阳性对照。图1中示出了来自三个供体的代表性数据，其中增加的TNFα的产量高于无肽阴性对照。

在第二研究中，将记忆CD8+ T细胞亚群与肽脉冲或未经脉冲处理的DC共培养10天。将来自共培养物的细胞用负载有MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)和抗CD8抗体的HLA-B*0702五聚体染色，随后通过流式细胞术进行结合评估。如图2所示出的，在与用MLL-pM肽脉冲处理的DC共培养后，检测到CD8+五聚体+细胞群。

6.1.4 TCR亚库产生与逆转录病毒转导

针对TCRα和β链产生单独的库。从健康供体的HLA-B*0702+PBMC源性CD8+ T细胞或通过用MLL-pM脉冲DC刺激而富集的CD8+ T细胞使用

试剂盒(凯杰公司(Qiagen)，目录号：75142)或AllPrep^TM DNA/RNA微试剂盒(凯杰公司，目录号：80204)分离RNA。根据制造商的说明，将分离的RNA在RNA6000 Pico测定(安捷伦，目录号：5067-1513)中使用2100生物分析仪(安捷伦,目录号：DE13701147)进行分析。使用

5'/3'试剂盒(克隆技术实验室公司(Clontech Laboratories)，目录号：634860)将RNA转录成cDNA，并且将可变TCRα(TRAV和TRAJ基因)和β链(TRBV和TRBJ基因)单独通过多重PCR扩增。

将所得到的可变链TCRα和TCRβ基因库单独地克隆到逆转录病毒表达载体(源自MIGR1，Addgene，目录号：27490)，所述逆转录病毒表达载体含有包含跨膜结构域和胞内结构域的小鼠非可变α或β区，以实现与小鼠CD3相互作用并在小鼠T细胞中进行信号转导。α和β链表达载体还分别包括表达标志物CD6和CD7。通过下一代测序(NGS)评估所得到的质粒库的多样性。为了获得稳定的细胞TCRαβ库，将TCRα和TCRβ库质粒连续地引入小鼠细胞系AK-D10R3。AK-D10R3是表达嵌合CD8(与对应的小鼠CD8α和β跨膜区和细胞内区融合的人CD8α和β细胞外区)和包括最小IL-2启动子的T细胞活化报告构建体的小鼠类胸腺瘤衍生的小鼠TCR阴性、小鼠CD8阴性细胞系，所述最小IL-2启动子包含与EGFP可操作地连接的三个NFAT结合位点(“IL-2-(NFAT)₃-EGFP”报道构建体)。用抗人CD6-bio(Antibodies Online，目录号：ABIN609887)(1:1000)和抗小鼠-TCRβ-PE(BD生物科学公司，目录号：553172)(1:1000)染色后通过流式细胞术证实α和β链的表达并且通过NGS测定最终链的分布和多样性。

6.2实例2：小鼠细胞中新型MLL TCR的表征

使用专有的哺乳动物细胞TCR展示平台开发五种结合MLL磷酸肽的新型TCR。这些TCR中的四种TCR——TCR0077、TCR0079、TCR0081和TCR0083结合到EPR[pS]PSHSM(SEQ IDNO:45)-HLA-B*0702。这些TCR中的一种TCR——TCR0085结合到RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)-HLA-B*0702。两种磷酸肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)和RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO47)分别被称为MLL-pM肽和MLL-pP肽。这五种TCR的α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)序列提供在表4中。在以上所描述的小鼠细胞系AK-D10R3的表面上，这些TCR表达为嵌合蛋白，其中人可变区与鼠恒定区融合。小鼠恒定区确保适当锚定和与小鼠CD3相互作用以及适当触发鼠类信号传导路径。

6.2.1 TCR表达性AK-D10R3细胞与肽-MHC五聚体的结合

将AK-D10R3细胞转导以表达嵌合的TCR——TCR0077、TCR0079、TCR0081、TCR0083或TCR0085，并使用SF-IMDM培养基(百康特公司(BioConcept)，目录号：1-28S07-1)使其在37℃和10％CO₂下扩增3天。包含TCR阴性AK-D10R3细胞作为阴性对照。将1.0x 10⁵个AK-D10R3细胞铺板于96孔测定板的每孔中，在300x g和4℃下离心5分钟，使用200μL测定缓冲液(补充有2％FCS的1x PBS)洗涤两次并且以1.0x 10⁵个细胞/100微升的浓度重悬于测定缓冲液中。对于染色，在每个孔中添加20μL抗小鼠TCRβ-链-APC抗体(BD，目录号：553174，克隆H57-597)的储备溶液(1:500)和负载有MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)(5微升/孔或0.5微升/孔)、MLL-pP肽RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)(5微升/孔)或未经磷酸化的对照肽MLL-M EPRSPSHSM(SEQ ID NO:46)(5微升/孔)的PE标记的HLA-B*0702五聚体(Proimmune公司)。在室温下温育30分钟后，将细胞洗涤两次，并使用BD FACSCanto II血细胞计数器通过流式细胞术进行分析。对细胞的TCR表达(APC+)与pMHC结合(PE+)进行分析。使用FlowJo软件产生点图，并且测定TCR+pMHC+细胞的百分比(％)。

如图3所示出的，嵌合的TCR——TCR0077、TCR0079、TCR0081和TCR0083全都与MLL-pM/HLA-B*0702五聚体结合，而嵌合TCR——TCR0085与MLL-pP/HLA-B*0702五聚体结合。所述五个TCR都没有与负载有未经磷酸化的对照肽MLL-M的HLA-B*0702五聚体结合。

6.2.2通过肽脉冲处理的HLA-B*0702 T2细胞对TCR表达性AK-D10R3细胞进行活化

如以上所描述的，在SF-IMDM培养基中培养表达IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体和嵌合TCR——TCR0077、TCR0079、TCR0081、TCR0083或TCR0085的AK-D10R3细胞。并行地，用MLL肽脉冲处理HLA-B*0702阳性T2靶细胞(“T2-B7细胞”)。简而言之，将T2-B7细胞在300x g和4℃下离心5分钟，使用1x PBS洗涤，并重悬浮于以最终浓度1.0×10⁶个细胞/250微升补充有50μg/mL或5μg/mL MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)、50μg/mL MLL-pP肽RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)或50μg/mL未经磷酸化的对照肽MLL-M EPRSPSHSM(SEQ ID NO:46)的1x PBS中。将细胞在37℃下温育3小时，使用1x PBS洗涤两次并且使用SF-IMDM培养基以5.0x 10⁶个细胞/20毫升的最终浓度重新悬浮。将200μL(5.0x 10⁴个细胞)TCR表达性AK-D10R3细胞加入到96孔测定板的每个孔中，并且在300x g下离心5分钟，并且丢弃上清液。接下来，将100μL(2.5×10⁴个细胞)T2-B7靶细胞悬浮液加入每个孔中，并在37℃和10％CO2下共温育16小时。

对于共染色，将细胞悬浮液在300x g下离心10分钟、使用测定缓冲液洗涤两次、使用20微升/孔染色溶液(补充有1:500带APC标记的抗小鼠TCRβ链抗体的1x PBS)重新悬浮并在室温下培育30分钟。随后，将细胞使用测定缓冲液洗涤两次、重悬于80μL测定缓冲液中并使用BD FACSCanto II血细胞计数器通过流式细胞术进行分析。对细胞的TCR表达(APC+)与T细胞活化(EGFP+)进行门控。使用FlowJo软件产生点图，并且测定APC+EGFP+细胞的百分比(％)。在不存在T2-B7靶细胞或与未经脉冲处理的T2-B7细胞共培养物的TCR表达性AK-D10R3细胞的情况下培养的AK-D10R3充当阴性对照。

表达嵌合TCR——TCR0077、TCR0079、TCR0081或TCR0083的AK-D10R3细胞在与用磷酸肽MLL-pM脉冲处理的T2-B7细胞共培养后示出了IL-2-NFAT报道构建体的活化，但未示出未磷酸化的对照肽MLL-M(图4A)。嵌合TCR——TCR0085在与用磷酸肽MLL-pP脉冲处理的T2-B7细胞共培养后，介导了IL-2-NFAT报道构建体的活化(图4A)。AK-D10R3细胞的活化依赖于MLL TCR与其同源肽-MHC复合物之间的相互作用，因为当单独测试AK-D10R3细胞时，或TCR表达性AK-D10R3细胞与没有用任何肽脉冲处理的T2-B7细胞一起温育时，没有观察到此类活化(图4B)。

6.2.3细胞毒性测定

接下来，在类似的共培养研究中，评估TCR表达性AK-D10R3细胞在肽脉冲T2-B7靶细胞中诱导细胞凋亡的潜力。简而言之，将T2-B7靶细胞用5μg/mL或50μg/mL MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)、50μg/mL MLL-pP肽RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)或50μg/mL未经磷酸化的对照肽MLL-M EPRSPSHSM(SEQ ID NO:46)进行脉冲处理。如以上所描述的，将表达嵌合TCR——TCR0077、TCR0079、TCR0081、TCR0083或TCR0085的AK-D10R3细胞与肽脉冲T2-B7靶细胞在37℃和10％CO2下，在补充有500ng/mL抗FAS试剂(Biolegend公司，#305702，克隆EOS9.1)和10μM喜树碱(西格玛公司，#C9911)的SF-IMDM培养基(Amimed公司，#1-28507-I)中共培养16小时。然后用抗小鼠TCRβ-APC和抗半胱天冬酶3-PE(BD Biosciences公司，#550821)对细胞进行染色，并使用FACSCantoII细胞计数器进行评估。在不存在AK-D10R3细胞的情况下，含有未经脉冲处理的T2-B7细胞或T2-B7细胞的共培养物充当对照。

如图5所示出的，表达嵌合TCR——TCR0077、TCR0079、TCR0081或TCR0083的AK-D10R3细胞增加了用MLL-pM磷酸肽脉冲处理的T2-B7靶细胞中的半胱天冬酶3表达水平，但未增加用未经磷酸化的对照肽MLL-M脉冲处理的T2-B7细胞中的半胱天冬酶3表达水平。表达嵌合TCR——TCR0085的AK-D10R3细胞增加了用MLL-pP磷酸肽脉冲处理的T2-B7细胞中半胱天冬酶3的表达水平(图5)。在不存在TCR表达性AK-D10R3细胞的情况下，在含有未经脉冲处理的T2-B7细胞或T2-B7细胞的共培养物中，半胱天冬酶3的表达最小(图5)。

6.2.4用丙氨酸扫描表征TCR特异性

为了评估MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的抗原识别，将表达IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道构建体和嵌合TCR——TCR0077或TCR0085的AK-D10R3细胞或TCR阴性AK-D10R3细胞与用MLL-pM肽或其丙氨酸修饰的变体：MLL-pM-A1APR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:49)、MLL-pM-A2 EAR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:50)、MLL-pM-A3 EPA[pS]PSHSM(SEQ ID NO:51)、MLL-pM-A4 EPRAPSHSM(SEQ ID NO:52)、MLL-pM-A5 EPR[pS]ASHSM(SEQ ID NO:53)、MLL-pM-A6 EPR[pS]PAHSM(SEQ ID NO:54)、MLL-pM-A7 EPR[pS]PSASM(SEQ ID NO:55)、MLL-pM-A8 EPR[pS]PSHAM(SEQ ID NO:56)或MLL-pM-A9 EPR[pS]PSHSA(SEQ ID NO:57)脉冲处理的T2-B7靶细胞在37℃和10％CO2下以靶标:效应子比率2:1共培养16小时。在用抗小鼠TCRβ-APC抗体染色后，通过流式细胞术评估IL-2-(NFAT)₃-EGFP报道的表达。针对TCR表达与T细胞活化(EGFP+)对细胞进行门控。使用FlowJo软件产生点图，并且测定APC+EGFP+细胞的百分比(％)。将数据复制到Microsoft Excel中进行本底校正，方法是减去含有未用肽脉冲处理的T2-B7细胞的共培养物所测定的活化值，以产生图。

如图6A所示出的，表达嵌合TCR——TCR0077的AK-D10R3细胞在与用MLL-pM肽、MLL-pM-A3肽或MLL-pM-A8肽脉冲处理的T2-B7细胞共培养后，示出了IL-2-NFAT报道构建体的活化。当TCR0077表达性AK-D10R3细胞与用MLL-pM、MLL-M对照肽或MLL-pP对照肽的其它丙氨酸修饰的变体脉冲处理的T2-B7细胞一起温育时，检测到最小的活化(图6A)。作为对照，在相同的条件下测试表达嵌合TCR——TCR0085的AK-D10R3细胞，并且这些细胞仅在MLL-pP-脉冲处理的T2-B7细胞，而不是在用MLL-M肽、MLL-pM肽或任何丙氨酸修饰的MLL-pM肽变体脉冲处理的T2-B7细胞的存在下示出了增加的EGFP表达(图6B)。

6.2.5使用X-扫描表征TCR特异性

如以下所描述的，通过“x-扫描”测定使用肽变体库来评估TCR0077和TCR0081的靶特异性EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)。

制备肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的一组变体，其中将SEQ ID NO:45的每个肽中的每个氨基酸的位置(除了锚定位置P2(P)和P9(M)之外)分别用19种其它可能的天然存在的氨基酸取代，其中另外将位置P4([pS])用未经磷酸化的丝氨酸取代。在表8中列出所得到的134个变体。在与负载有134个变体肽之一或亲代肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的T2-B7靶细胞共培养后，通过测量TCR表达性AK-D10R3效应子细胞的活化来评估TCR0077和TCR0081的特异性特征。

将AK-D10R3细胞用嵌合TCR——TCR0077或TCR0081、嵌合小鼠/人CD8和连接到包括三个NFAT结合位点(3xNFAT)的最小IL-2启动子的EGFP报告构建体稳定地转导。在补充有3％胎牛血清(FCS；Amimed Direct公司)、1％青霉素/链霉素(密苏里州圣路易斯西格玛-奥德里奇公司)和50μMβ-巯基乙醇(Gibco，英国飞世尔科技公司)的SF-IMDM(英国伦敦的Amimed Direct公司)中在37℃和10％CO₂下培养细胞。在37℃和5％CO₂下，将来自ATCC(CRL-1992^TM)的抗原呈递Tap缺乏性T2(174x CEM.T2)细胞保持在补充有10％FCS和1％青霉素/链霉素的RPMI 1640(西格玛-奥德里奇公司)中。

将肽(购自德国Peptides and Elephants公司或内部产生)悬浮在DMSO中，并将浓度调整到4mg/ml。

将T2-B7细胞在PBS(Gibco公司)中洗涤，并在37℃和5％CO₂下，与各自20μg每1×10⁶细胞134个经过改变的肽一起温育3小时。在培养之后，将T2-B7细胞在PBS/2％FCS中洗涤，并且然后重悬于SF-IMDM培养基中。将表达所关注的TCR的效应细胞与肽脉冲处理的T2-B7细胞在37℃和10％CO₂下在SF-IMDM培养基中以1:2的比率(96孔板每孔共150,000个细胞)共培养16小时。将细胞在2％FCS/PBS中洗涤两次，并在室温下用抗小鼠TCR-β链抗体(克隆H57-597；加利福尼亚州圣何塞BD Pharmingen公司(BD Pharmingen)以1:500稀释30分钟。将细胞洗涤两次，随后用BD FACSCanto^TM II流式细胞仪(贝迪医疗)进行FACS分析。

使用FlowJo V10软件执行数据分析。将TCR活化计算为AK-D10R3群中EGFP表达性细胞的比率(基于TCR表达标识AK-D10R3细胞)。从所有负载肽的样品(经过改变的和天然序列)中减去本底活化(在测定中T2-B7细胞没有负载肽)。从所有复制品(每个TCR至少3个复制品)中计算减去本底后的值的均值和平均数标准误差(SEM)，并将值归一化到肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的那些值，出于展示目的，将归一化值裁剪到最小为0.0(仅热图)并且最大为1.0(仅热图)。归一化值以热图格式示出在图7A(TCR0077)和7B(TCR0081)中并且以条形图的格式示出在图8A(TCR0077)和8B(TCR0081)中。

热图谱和条形图揭示了每种测试的TCR的独特的特异性特征。一般而言，较大的白色百分比(低归一化值)指示对MLL-pM同源肽的突变的耐受性较低，并且指示在以上所描述的测定背景中MLL-pM同源肽的特异度越高。如图7A和7B所示出的，TCR0077和TCR0081均对MLL-pM同源肽的每个残基位置表现出不同程度的特异性。

表8.用于产生嵌合TCR的特异性特征的经过改变的肽

6.3实例3：原代人T细胞中新型MLL TCR的表征

在此实例中，以上所描述的嵌合TCR——TCR0077和TCR0085被表达为完全人TCR，分别被指定为TCR0078和TCR0086。TCR0078除了可变区框架4中的少数目突变外与TCR0077共享可变区序列，并且含有人恒定区。具体地，TCR0078包括α链和β链，所述α链和所述β链分别包括SEQ ID NO:58和59中阐述的氨基酸序列。TCR0086与TCR0085共享可变区序列，并且含有人恒定区。TCR0086包括α链和β链，所述α链和所述β链分别包括SEQ ID NO:70和71中阐述的氨基酸序列。如本实例中所描述的，用于TCR0078或TCR0086的示例性表达构建体编码融合蛋白，所述融合蛋白依次编码TCRβ链、P2A自切割位点和TCRα链。如表1中所列出的，示例性不成熟TCR0078或TCR0086融合蛋白(含有用于α链和β链两者的信号肽)分别具有SEQID NO:83或92中阐述的氨基酸序列。表达后，在P2A位点处切割融合蛋白以分别产生TCR0078(SEQ ID NO:236和237)或TCR0086的成熟的α链和β链。如SEQ ID NO:236中所示出的，TCR0078的示例性成熟α链包括到其核心序列(SEQ ID NO:58)的C端的GS氨基酸残基延伸，从而产生融合蛋白上的克隆瘢痕。如SEQ ID NO:237中所示出的，TCR0078的示例性成熟β链包括到其核心序列(SEQ ID NO:59)的C端的短肽延伸(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG，SEQ IDNO:93)，从而产生融合蛋白的P2A切割。如表1中所示出的，另外的示例性不成熟TCR0078融合蛋白(含有α链和β链两者的信号肽)具有SEQ ID NO:266-271中阐述的氨基酸序列。

6.3.1 TCR0078在已转导的T细胞表面上的表达

将原代T细胞通过与CD3/CD28

(马萨诸塞州沃尔瑟姆赛默飞世尔科技公司)以1×10⁶个细胞/毫升的浓度和1:1的T细胞:珠粒比率在37℃共温育48小时进行刺激。然后用慢病毒转导T细胞，所述慢病毒依次编码TCR0078(SEQ ID NO:83)的β链、P2A切割位点和α链，所述慢病毒由Lentigen制造(马里兰州盖瑟斯堡)。对于转导，将T细胞/珠粒以1×10⁶个细胞/毫升重悬于含有8μg/ml聚凝胺(EMD，密理博(Millipore))的新鲜T细胞培养基中。将细胞悬液与慢病毒(MOI 10:1)混合，并且然后在1200g，32℃下离心90分钟以促进转导。将细胞/珠粒悬浮液在37℃下温育4小时，之后加入1体积的T细胞培养基，并且将细胞/珠粒在37℃下进一步温育过夜。次日，将细胞洗涤并以1×10⁶个细胞/毫升重悬于T细胞培养基中，随后在37℃下进一步温育。在转导后的第3天，使用DynaMag磁体(赛默飞世尔科技公司)从细胞培养物中去除珠粒。在转导后第5天，通过流式细胞术评估TCR0078的表达。具体地，根据制造商的说明，首先用Zombie NIR^TM(Biolegend公司)对细胞进行染色，以区分活细胞和死细胞。然后，将细胞洗涤并用负载有MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45；英国牛津的ProImmune公司)的PE轭合的HLA-B*0702以及包括抗CD3-FITC、抗CD4-PerCp/Cy5.5和抗CD8-PE/Cy7抗体(Biolegend公司)的抗体混合物在室温下避光30分钟染色。未转导的T细胞用作阴性对照。通过使用BD FACSCanto^TM II血细胞计数器的流式细胞术洗涤已染色的T细胞并进行分析。

TCR0078在完整T细胞、存活T细胞、单T细胞中有效表达。如图9A所示出的，对于对照细胞，62.8％的检测到的细胞是完整的(左图)。在这些完整细胞中，99.2％是活细胞(中图)。在这些活细胞中，81.3％是单细胞(右图)。将相同的流式细胞仪门控用于用TCR0078转导的细胞，并获得类似的数据(数据未示出)。将完整细胞、存活细胞、单细胞选择用于实验的剩余部分。对于对照T细胞，仅1.11％对CD3和五聚体染色呈阳性(图9B，左图)。在用TCR0078转导的细胞中，58.1％呈CD3和五聚体阳性(图9B，右图)。在TCR0078转导的细胞中高水平的五聚体染色指示在受刺激的T细胞中TCR0078的阳性表达。

对照T细胞和TCR0078表达性已刺激T细胞两者主要位于以下两个群之一中：CD8+/CD4-细胞群和CD8-/CD4+细胞群。对照T细胞为44.6％CD8+/CD4-和49.1％CD8-/CD4+(图9C，左图)。针对通过五聚体染色测定的TCR0078转导的细胞(图9C，中图)和TCR0078表达性细胞(图9C，右图)的整个群获得了类似的结果。在被呈现以示出五聚体染色的水平的流式细胞术数据中可标识CD8+或CD4+群(图9D，两个图)。

6.3.2表征与KG1a靶细胞共培养的表达MLL TCR的人T细胞

将原代人T细胞与编码TCR0078或TCR0086的mRNA混合，并在第0天电穿孔。所述两个TCR由编码TCRβ链、P2A切割位点和TCRα链的载体依次表达。在第1天，通过流式细胞术，在用负载有MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)或MLL-pP肽RVR[pS]PTRSP(SEQ ID NO:47)的HLA-B*0702五聚体染色后，评估靶TCR表达。然后用CellTrace Violet细胞增殖试剂盒标记T细胞(生命技术公司(Life Technologies)，目录号：C34557)。并行地，用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)(Biolegend公司，目录号：423801)标记KG1a细胞(内源性表达MLL且过表达HLA-B*0702(“KG1a-B7细胞”)或HLA-A*0201(“KG1a-A2细胞”)的髓性白血病细胞系)。将CellTrace Violet标记的T细胞与CFSE标记的KG1a-B2细胞或KG1a-A2细胞以4:1到0.25:1的范围内的效应子:靶标比率共培养。用抗CD3和抗CD28抗体温育的T细胞用作阳性对照。在第2天，使用流式细胞术针对CD25表达、CD107a表达、T细胞增殖和靶细胞的特异性杀伤的靶细胞对细胞进行评估。将用模拟mRNA(编码对照TCR的mRNA)电穿孔的原代人T细胞用作阴性对照。

效应子:靶标比率为2:1的代表性实验如图10所示。如通过CD25表达、CD107a表达和T细胞增殖所测量的，表达MLL TCR——TCR0078或TCR0086的T细胞仅被表达HLA-B*0702的KG1a细胞活化，而不被表达HLA-A*0201的KG1a细胞活化。T细胞的活化依赖于MLL TCR的表达，因为用模拟mRNA电穿孔的T细胞在相同条件下未被活化(图10)。

表达MLL TCR——TCR0078或TCR0086的T细胞能够特异性杀伤KG1-B7靶细胞，即使在低效应子:靶标比率下也是如此，而用模拟mRNA电穿孔的T细胞不杀伤靶细胞(图11)。

6.3.3使用IL-2-NFAT荧光素酶报告表达性T细胞系对TCR0078进行表征

本研究使用IL-2-NFAT荧光素酶报告T细胞系评估在与各种肿瘤细胞系共培养时表达TCR0078的T细胞活化的特异性。具体地，将在IL-2-NFAT应答元件和短的CMV最小启动子的控制下稳定表达荧光素酶报告子的Jurkat细胞系J.RT3-T3.5(

目录号：TIB-153^TM)用第6.3.1部分中所描述的相同慢病毒转导。简而言之，将对照(未转导)或TCR0078转导的Jurkat细胞以各种Jurkat:肿瘤(效应子:靶标)细胞比率(在0.1:1到2:1的范围内)在37℃下与稳定表达HLA-B*0702的KG1a细胞、稳定表达HLA-B*0702的K562细胞(内源性地表达MLL的骨髓性白血病细胞系)、Loucy细胞(内源性地表达MLL和HLA-B*0702的淋巴母细胞白血病细胞系)或Namalwa细胞(内源性地表达MLL和HLA-B*0702的伯基特淋巴瘤细胞系)共培养24小时。然后根据制造商的说明，洗涤细胞，溶解细胞并将细胞与

荧光素酶测定试剂(威斯康星州麦迪逊的普洛麦格公司(Promega))混合。记录所表达的IL-2-NFAT-荧光素酶报告的发光，所述发光表示Jurkat细胞活化的程度。作为活化IL-2-NFAT报告的阳性对照，使用佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯(PMA)和离子霉素(Biolegend公司)根据制造商的说明在对照和TCR0078转导的Jurkat效应子细胞中诱导最大NFAT荧光素酶表达。

如图12A所示出的，当以不同比率与稳定表达HLA-B*0702的KG1a细胞或K562细胞共培养时，TCR0078表达性Jurkat细胞被显著活化。Namalwa细胞在所有已测试的效应子:靶标比率下活化TCR0078表达性Jurkat细胞。与图12B所示出的对照Jurkat细胞活化水平相比，Loucy细胞在较高的效应子:靶标比率下活化TCR0078表达性Jurkat细胞。正如预期的，PMA/罗奴霉素在Jurkat细胞中诱导了最大的报道活化(图12C)。

还对其它肿瘤靶细胞执行前述报告分子活化测定。H929细胞和U266B1细胞(所述细胞均内源性地表达HLA-B*0702)以及过表达HLA-B*0702的THP-1细胞(HLA-B*0702阴性)全都活化了Jurkat效应子细胞(图13A和13C)。当Raji细胞(

CCL-86^TM，HLA-B*0702阴性细胞系)和LCL 721.221细胞(MHC-1阴性人细胞系)两者过表达HLA-B*0702时，所述两种细胞比KG1a-HLA-B*0702细胞更有效地显著活化Jurkat效应子细胞(图13B和13C)。相比之下，YT-Indy细胞(HLA-B*0702阴性)、J.RT3-T3.5细胞(HLA-B*0702阴性)、Raji细胞、THP-1细胞和LCL 721.221细胞未活化Jurkat效应子细胞(图13A-13C)。

6.3.4肽剂量滴定对T细胞活化和靶细胞杀伤的影响

接下来，进行研究以评估MLL特异性TCR的敏感性。简而言之，在第0天，如以上所描述的用模拟mRNA(编码对照TCR的mRNA)或TCR0078 mRNA电穿孔原代人T细胞。在第1天，使用CellTrace Violet细胞增殖试剂盒(生命技术公司，目录号：C34557)标记表达HLA-B*0702的T2细胞(“T2-B7”细胞)并以MLL-pM肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)或未磷酸化的MLL-M对照肽EPRSPSHSM(SEQ ID NO:46)的剂量滴定进行脉冲处理。然后将T2-B7靶细胞以效应子:靶标比率1:1与已经用CFSE(Biolegend公司，目录号：423801)标记的电穿孔T细胞共培养。用抗CD3和抗CD28抗体温育的T细胞用作阳性对照。在第2天，使用流式细胞术评估细胞的CD25表达、CD107a表达和靶细胞的特异性杀伤。

如图14中所示出的，即使在低剂量的肽下，表达MLL TCR——TCR0078的T细胞也被用磷酸肽MLL-pM脉冲处理的T2-B7靶细胞活化。T细胞的活化取决于磷酰部分的存在，因为未经磷酸化的MLL-M对照肽未活化T细胞(图14，右上图和右下图)。用模拟mRNA电穿孔的T细胞未被靶细胞活化(图14)。

与T细胞活化的观察结果一致，表达MLL TCR——TCR0078的T细胞有效地杀伤用MLL-pM肽脉冲处理的T2-B7靶细胞，但不会杀伤用未经磷酸化的MLL-M对照脉冲处理的T2-B7靶细胞肽(图15)。用模拟mRNA电穿孔的T细胞不会杀伤靶细胞(图15)。

使用稳定表达TCR0078的原代T细胞进行评估TCR对MLL磷酸肽EPR[pS]PSHSM(SEQID NO:45)的敏感性的类似研究。简而言之，如在6.3.1部分中所描述的，用编码TCR0078(SEQ ID NO:83)的慢病毒转导原代T细胞。13天后，在MLL磷酸肽存在下测试转导的T细胞针对其靶细胞的活化和细胞毒性活性。将表达HLA-B*0702的T2细胞(“T2-B7细胞”)用琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记(Biolegend公司，目录号：423801)，然后用的EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)磷酸肽或EPRSPSHSM(SEQ ID NO:46)肽的剂量滴定脉冲处理2.5小时。然后将经过脉冲处理的T2-B7细胞(靶标)与表达TCR0078的原代T细胞(效应子)在37℃下以效应子:靶标比率1:1共培养20小时，所述原代T细胞先前使用Cell Trace^TM Violet细胞增殖试剂盒(加利福尼亚州卡尔斯巴德生命技术公司，目录号：C34557)进行标记。第二天，通过流式细胞术评估细胞毒性活性(通过T2-B7细胞的杀伤来测量)以及效应子原代T细胞的CD25和IFN-γ表达。对通过Cell Trace^TMViolet染色检测到的T2-B7活细胞的数目进行计数。死亡T2-B7细胞的百分比(通过从没有与效应子原代T细胞共培养的总T2-B7细胞数目中减去共培养后的存活T2-B7细胞数目，然后除以没有共培养的总T2-B7细胞数目来计算)表示效应子原代T细胞的细胞毒活性。为了检测CD25，首先根据制造商的说明，用Zombie NIR^TM(Biolegend公司)对细胞进行染色，以区分活细胞，并且然后用抗CD25-PE/Cy7抗体(Biolegend公司)进行染色。为了检测IFN-γ表达，将细胞在染色前用布雷菲德菌素(Brefeldin)A和莫能菌素(Monensin)(Biolegend公司)一起温育5小时。如先前所描述的，对CD25-PE/Cy7、CD4-PerCP/Cy5.5和CD8/PE进行细胞活力染色和表面染色后，根据制造商的说明将细胞固定并透化(Biolegned公司)，并且然后用抗IFN-γ-FITC抗体(Biolegend公司)进行染色。所测量的荧光指示CD25和IFN-γ表达水平。

如图16A-16C中所示出的，随着磷酸肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)浓度的增加，在效应子原代T细胞中观察到细胞毒性活性、CD25表达和IFN-γ表达以剂量依赖性方式增加。相比而言，未修饰的MLL-M肽不增加T细胞的细胞毒性活性、CD25表达或IFN-γ表达(图16A-16C)。这些结果指示TCR0078对磷酸肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)具有特异性。

为了进一步表征TCR0078对HLA-B*0702和磷酸肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)的特异性，将用TCR0078转导的原代T细胞与表达HLA-B*0702或HLA-A*02.01的经肽脉冲处理的T2细胞共培养。然后将细胞染色，并使用与以上所描述的相同方法通过流式细胞术分析CD25和IFN-γT细胞表达。

如图17A和17B中所示出的，当与用磷酸肽EPR[pS]PSHSM(SEQ ID NO:45)脉冲处理的T2-HLA-B*0702共培养时，原代T细胞被活化。相比而言，当与用磷酸肽或未修饰的肽脉冲处理的T2-HLA-A*02.02共培养时，原代T细胞未活化。

6.4实例4：将TCR0078表征为癌症疗法

6.4.1使用肿瘤细胞作为靶细胞表征TCR0078

如实例3中所描述的，为了评估TCR0078相对于肿瘤细胞系的功效，将未转导或用TCR0078转导的原代T细胞与KG1a细胞(内源性地表达MLL并过表达HLA-B*0702或HLA-A*02.02)在各种效应子:靶标比率下共培养20小时。如实例3中所描述的，将细胞染色(例如，用Zombie NIR^TM、抗CD25抗体和抗IFN-γ抗体)，并通过流式细胞术分析细胞毒性活性和效应子原代T细胞的活化。

通过在效应子原代T细胞中靶KG1a细胞的杀伤增加(图18A)和CD25表达增加(图18B)和IFN-γ表达增加(图18C)证实TCR0078表达性原代T细胞在各种效应子:靶标比率下通过稳定表达HLA-B*0702的KG1a细胞，而不是表达HLA-A*02.01的KG1a进行活化。相比而言，未转导的原代T细胞(阴性对照)未被前述KG1a细胞系中的任一个细胞系活化。

在各种效应子:靶标比率下使用与表达内源性或重组HLA-B*0702的各种肿瘤细胞(KG1a细胞、K562细胞、SK-MEL-5细胞、U266B1细胞和Namalwa细胞)共培养的原代T细胞(经过或未经过TCR0078转导)执行类似的测定。使用与如实例3中所描述相同的方案和流式细胞术方法，通过杀伤靶肿瘤细胞来测量原代T细胞的活化。如图19中所示出的，TCR0078表达性原代T细胞而不是表达TCR0078的对照T细胞在各种效应子:靶标比率下显著促进稳定表达重组HLA-B*0702的靶KG1a(图19A)和K562(图19B)细胞以及SK-MEL-5细胞(图19C)和U266B1细胞(图19D)的杀伤。效应子原代T细胞的细胞毒性活性效力较低，但针对靶Namalwa细胞仍具有统计学意义(图19E)。

6.4.2 TCR0078的体内抗癌活性

为了体内评估TCR0078表达性原代T细胞的功效，在携带KG1a-HLA-B*0702肿瘤的免疫抑制性NOG小鼠(缅因州巴尔港的杰克逊实验室(Jackson Laboratory))中进行T细胞过继转移实验。

在过继转移之前，体外测试TCR0078转导的原代T细胞，以确认其对KG1a-HLA-B*0702肿瘤细胞的活化和细胞毒活性。如先前所描述的，将对照T细胞和TCR0078转导的T细胞与肿瘤细胞在各种效应子:靶标比率下共培养。如实例3中所描述的，通过流式细胞术分析杀伤效率和T细胞活化。

如图20A中所示出的，表达TCR0078的T细胞而不是对照T细胞在各种效应子:靶标比率下显著促进了表达HLA-B*0702的靶KG1a细胞的杀伤。与对照T细胞中的CD25水平相比，表达TCR0078的原代T细胞中的CD25表达还显著增加(图20B)。因此，TCR0078表达性原代T细胞在体外被KG1a-HLA-B*0702细胞活化并具有针对KG1a-HLA-B*0702细胞的细胞毒性活性。

对于过继转移，在第0天，将一百万个KG1a-HLA-B*0702肿瘤细胞皮下注射到二十只小鼠中的每一只小鼠中。在第1天，将15天前用TCR0078转导的5x 10⁶个原代T细胞静脉内注射到10只小鼠中。另外十只小鼠作为对照未注射。在测量肿瘤的长度和宽度并计算肿瘤的体积(通过将已测量的长度和宽度相乘并且然后乘以0.52)之后，在第7天处死十只经过注射的小鼠中的两只，以确认T细胞注射和归巢。在第7天，然后每3-5天，直到第42天，通过相同的方法计算其它注射和对照小鼠的肿瘤的体积。然后在肿瘤植入后第42天处死所有小鼠，并且收集其脾脏，进行处理，并用Zombie NIR^TM试剂、抗CD3抗体和抗CD45抗体(Biolegend公司)染色以检测T细胞和肿瘤细胞。

如图21A中所示出的，与未注射的小鼠相比，注射有TCR0078表达性T细胞的小鼠显示出显著较慢的平均肿瘤生长。在42天的时间里存活的所有八只注射小鼠中，仅两只显示出显著的肿瘤生长(图21B中的白色圆圈，与图21A中未注射的小鼠的肿瘤体积相当)，而另外六只小鼠具有最小的肿瘤生长(图21B中的黑圈)，从而指示显著的肿瘤抑制。如通过流式细胞术检测到的，在图21B中具有显著肿瘤生长的一只小鼠具有作为已注射的人T细胞(CD45+/CD3+)的0.027％脾细胞和作为转移性肿瘤细胞(CD45+/CD3-)的0.25％脾细胞(图21C，左图)。相比而言，在图21B中具有最小肿瘤生长的一只小鼠具有较高百分比(72.5％)的作为CD45+/CD3+ T细胞的脾细胞和较小百分比(0.037％)的作为转移性CD45+/CD3-肿瘤细胞的脾细胞(图21C，右图)，从而指示注射TCR0078表达性T细胞抑制了转移以及肿瘤体积。

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本发明的范围不受本文所描述的具体实施例限制。事实上，除了所述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说将从前面的描述和附图中变得显而易见。此类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。

本文所引用的全部参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)均通过引用并且出于所有目的整体并入本文中，其程度如同每个单独的参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)出于所有目的被具体地或单独地指示通过引用整体并入一样。

其它实施例处于以下权利要求内。

Claims

1.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQ IDNO:21中阐述的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的分离的TCR，其中所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:11和16中阐述的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:86或1中阐述的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的分离的TCR，其包括α链，所述α链包括选自由SEQ ID NO:58、236、259、260、272、261和249组成的组的氨基酸序列。

5.根据前述权利要求中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:36中阐述的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:26和31中阐述的氨基酸序列。

7.根据权利要求5所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:87或2中阐述的氨基酸序列。

8.根据权利要求5所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括选自由SEQ ID NO:59、237、262、263、264、273、60和250组成的组的氨基酸序列。

9.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ IDNO:36中阐述的氨基酸序列。

10.根据权利要求9所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:26和31中阐述的氨基酸序列。

11.根据权利要求9所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:87或2中阐述的氨基酸序列。

12.根据权利要求9所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括选自由SEQ ID NO:59、237、262、263、264、273、60和250组成的组的氨基酸序列。

13.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:73中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

14.根据权利要求13所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:73中阐述的氨基酸序列。

15.根据权利要求13所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:74中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

16.根据权利要求15所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:74中阐述的氨基酸序列。

17.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:74中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

18.根据权利要求17所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:74中阐述的氨基酸序列。

19.根据前述权利要求中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ IDNO:11、16、21、26、31和36中阐述的氨基酸序列。

20.一种分离的TCR，其包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:11、16、21、26、31和36中阐述的氨基酸序列。

21.根据权利要求20所述的分离的TCR，其中所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:86和87或1和2中阐述的氨基酸序列。

22.一种分离的TCR，其包括α链和β链，其中所述α链包括选自由SEQ ID NO:58、236、259、260、272、261和249组成的组的氨基酸序列，并且所述β链包括选自由SEQ ID NO:59、237、262、263、264、273、60和250组成的组的氨基酸序列。

23.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQID NO:22中阐述的氨基酸序列。

24.根据权利要求23所述的分离的TCR，其中所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:12和17中阐述的氨基酸序列。

25.根据权利要求23所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:88或3中阐述的氨基酸序列。

26.根据权利要求23所述的分离的TCR，其包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:61或251中阐述的氨基酸序列。

27.根据权利要求23到26中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:37中阐述的氨基酸序列。

28.根据权利要求27所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:27和32中阐述的氨基酸序列。

29.根据权利要求27所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:89或4中阐述的氨基酸序列。

30.根据权利要求27所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:62、63或252中阐述的氨基酸序列。

31.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQID NO:37中阐述的氨基酸序列。

32.根据权利要求31所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:27和32中阐述的氨基酸序列。

33.根据权利要求31所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:89或4中阐述的氨基酸序列。

34.根据权利要求31所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:62、63或252中阐述的氨基酸序列。

35.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:75中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

36.根据权利要求35所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:75中阐述的氨基酸序列。

37.根据权利要求35所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:76中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

38.根据权利要求37所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:76中阐述的氨基酸序列。

39.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:76中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

40.根据权利要求39所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:76中阐述的氨基酸序列。

41.根据权利要求23到40中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ IDNO:12、17、22、27、32和37中阐述的氨基酸序列。

42.一种分离的TCR，其包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:12、17、22、27、32和37中阐述的氨基酸序列。

43.根据权利要求42所述的分离的TCR，其中所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:88和89或3和4中阐述的氨基酸序列。

44.一种分离的TCR，其包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:61或251中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:62、63或252中阐述的氨基酸序列。

45.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQID NO:23中阐述的氨基酸序列。

46.根据权利要求45所述的分离的TCR，其中所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:13和109或13和18中阐述的氨基酸序列。

47.根据权利要求45所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:106或5中阐述的氨基酸序列。

48.根据权利要求45所述的分离的TCR，其包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:64或253中阐述的氨基酸序列。

49.根据权利要求45到48中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:38中阐述的氨基酸序列。

50.根据权利要求49所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:28和33中阐述的氨基酸序列。

51.根据权利要求49所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:107或6中阐述的氨基酸序列。

52.根据权利要求49所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:65、66或254中阐述的氨基酸序列。

53.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQID NO:38中阐述的氨基酸序列。

54.根据权利要求53所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:28和33中阐述的氨基酸序列。

55.根据权利要求53所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:107或6中阐述的氨基酸序列。

56.根据权利要求53所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:65、66或254中阐述的氨基酸序列。

57.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:77中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

58.根据权利要求57所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:77中阐述的氨基酸序列。

59.根据权利要求57所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:78中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

60.根据权利要求57所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:78中阐述的氨基酸序列。

61.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:78中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

62.根据权利要求61所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:78中阐述的氨基酸序列。

63.根据权利要求45到62中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ IDNO:13、109、23、28、33和38或13、18、23、28、33和38中阐述的氨基酸序列。

64.一种分离的TCR，其包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:13、109、23、28、33和38或13、18、23、28、33和38中阐述的氨基酸序列。

65.根据权利要求64所述的分离的TCR，其中所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:106和107或5和6中阐述的氨基酸序列。

66.一种分离的TCR，其包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:64或253中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:65、66或254中阐述的氨基酸序列。

67.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQID NO:24中阐述的氨基酸序列。

68.根据权利要求67所述的分离的TCR，其中所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:14和19中阐述的氨基酸序列。

69.根据权利要求67所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:7中阐述的氨基酸序列。

70.根据权利要求67所述的分离的TCR，其包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:67或255中阐述的氨基酸序列。

71.根据权利要求67到70中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:39中阐述的氨基酸序列。

72.根据权利要求71所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:29和34中阐述的氨基酸序列。

73.根据权利要求71所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:108或8中阐述的氨基酸序列。

74.根据权利要求71所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:68、69或256中阐述的氨基酸序列。

75.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQID NO:39中阐述的氨基酸序列。

76.根据权利要求75所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:29和34中阐述的氨基酸序列。

77.根据权利要求75所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:108或8中阐述的氨基酸序列。

78.根据权利要求75所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:68、69或256中阐述的氨基酸序列。

79.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:79中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

80.根据权利要求79所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:79中阐述的氨基酸序列。

81.根据权利要求79所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:80中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

82.根据权利要求79所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:80中阐述的氨基酸序列。

83.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:80中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

84.根据权利要求83所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:80中阐述的氨基酸序列。

85.根据权利要求67到84中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ IDNO:14、19、24、29、34和39中阐述的氨基酸序列。

86.一种分离的TCR，其包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:14、19、24、29、34和39中阐述的氨基酸序列。

87.根据权利要求86所述的分离的TCR，其中所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:7和108或7和8中阐述的氨基酸序列。

88.一种分离的TCR，其包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:67或255中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:68、69或256中阐述的氨基酸序列。

89.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括互补决定区CDR3α，其中所述CDR3α包括SEQID NO:25中阐述的氨基酸序列。

90.根据权利要求89所述的分离的TCR，其中所述Vα包括CDR1α和CDR2α，所述CDR1α和所述CDR2α分别包括SEQ ID NO:15和20中阐述的氨基酸序列。

91.根据权利要求89所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:9中阐述的氨基酸序列。

92.根据权利要求89所述的分离的TCR，其包括α链，所述α链包括SEQ ID NO:70或257中阐述的氨基酸序列。

93.根据权利要求89到92中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQ ID NO:40中阐述的氨基酸序列。

94.根据权利要求93所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:30和35中阐述的氨基酸序列。

95.根据权利要求93所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:10中阐述的氨基酸序列。

96.根据权利要求93所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:71、72或258中阐述的氨基酸序列。

97.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括互补决定区CDR3β，其中所述CDR3β包括SEQID NO:40中阐述的氨基酸序列。

98.根据权利要求97所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括CDR1β和CDR2β，所述CDR1β和所述CDR2β分别包括SEQ ID NO:30和35中阐述的氨基酸序列。

99.根据权利要求97所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:10中阐述的氨基酸序列。

100.根据权利要求97所述的分离的TCR，其包括β链，所述β链包括SEQ ID NO:71、72或258中阐述的氨基酸序列。

101.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括α链可变区(Vα)，所述Vα包括与SEQ ID NO:81中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

102.根据权利要求101所述的分离的TCR，其中所述Vα包括SEQ ID NO:81中阐述的氨基酸序列。

103.根据权利要求101所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:82中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

104.根据权利要求101所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:82中阐述的氨基酸序列。

105.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述TCR包括β链可变区(Vβ)，所述Vβ包括与SEQ ID NO:82中阐述的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同的氨基酸序列。

106.根据权利要求105所述的分离的TCR，其中所述Vβ包括SEQ ID NO:82中阐述的氨基酸序列。

107.据权利要求89到106中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ IDNO:15、20、25、30、35和40中阐述的氨基酸序列。

108.一种分离的TCR，其包括α链可变区(Vα)和β链可变区(Vβ)，所述Vα包括互补决定区CDR1α、CDR2α和CDR3α，所述Vβ包括CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR1α、所述CDR2α、所述CDR3α、所述CDR1β、所述CDR2β和所述CDR3β分别包括SEQ ID NO:15、20、25、30、35和40中阐述的氨基酸序列。

109.根据权利要求108所述的分离的TCR，其中所述Vα和所述Vβ分别包括SEQ ID NO:9和10中阐述的氨基酸序列。

110.一种分离的TCR，其包括α链和β链，其中所述α链包括SEQ ID NO:70或257中阐述的氨基酸序列，并且所述β链包括SEQ ID NO:71、72或258中阐述的氨基酸序列。

111.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与以下结合：

i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；

v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；或

viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或

ix)其任何组合。

112.根据权利要求1到22中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR与以下结合：

i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；

v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；或

viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽；或

ix)其任何组合。

113.根据权利要求111或112所述的分离的TCR，其中所述TCR与以下结合：

i)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iii)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iv)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；

v)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vi)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vii)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；和

viii)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽。

114.根据权利要求111到113中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR不与以下结合或基本上不与以下结合：

i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽；或

iii)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽；或

iv)其任何组合。

115.根据权利要求114所述的分离的TCR，其中所述TCR不与以下中的任何一个结合或基本上不与以下中的任何一个结合：

i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽；

v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽；

viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及

ix)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽。

116.根据权利要求111到115中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR与由SEQ ID NO:46、49、50、52、53、54、55、57或47中阐述的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合相对于所述TCR与由SEQ ID NO:45、51、56、117、128、135、192或233中阐述的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合显著减弱。

117.根据权利要求116所述的分离的TCR，其中所述TCR与以下中的每一个之间的所述结合：

i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽；

v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽；

viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及

ix)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽；

相对于所述TCR与以下中的每一个之间的所述结合显著减弱：

a)由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽；

b)由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽；

c)由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽；

d)由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽；

e)由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽；

f)由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽；

g)由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及

h)由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽。

118.一种分离的T细胞受体(TCR)，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：

i)当与展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；

ii)当与展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；

iii)当与展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；

iv)当与展示由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；

v)当与展示由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；

vi)当与展示由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；

vii)当与展示由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或

vii)当与展示由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或

ix)其任何组合。

119.根据权利要求1到22中任一项所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：

viii)当与展示由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或

ix)其任何组合。

120.根据权利要求118或119所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下活化：

vii)当与展示由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；以及

viii)当与展示由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时。

121.根据权利要求118到120中任一项所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，所述T细胞在以下情况下不活化或基本上不活化：

i)当与展示由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；

ii)当与展示由SEQ ID NO:49、50、52、53、54、55或57中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或

iii)当与展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时；或

iv)其任何组合。

122.根据权利要求121所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示以下肽中的任何肽的第二细胞共培养时，所述T细胞不活化或基本上不活化：

i)由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽；

ii)由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iii)由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽；

iv)由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽；

v)由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vi)由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽；

vii)由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽；

viii)由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽；以及

ix)由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽。

123.根据权利要求118到122中任一项所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当所述T细胞与展示由SEQ ID NO:46、49、50、52、53、54、55、57或47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时的所述T细胞的所述活化相对于当所述T细胞与展示由SEQ ID NO:45、51、56、117、128、135、192或233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞一起培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱。

124.根据权利要求123所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当所述T细胞单独与以下中的每一个共培养时的所述T细胞的所述活化：

i)展示由SEQ ID NO:46中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

ii)展示由SEQ ID NO:49中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

iii)展示由SEQ ID NO:50中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

iv)展示由SEQ ID NO:52中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

v)展示由SEQ ID NO:53中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

vi)展示由SEQ ID NO:54中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

vii)展示由SEQ ID NO:55中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

viii)展示由SEQ ID NO:57中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；以及

ix)展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞；

相对于当所述T细胞单独与以下中的每一个共培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱：

a)展示由SEQ ID NO:45中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；

b)展示由SEQ ID NO:51中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；

c)展示由SEQ ID NO:56中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；

d)展示由SEQ ID NO:117中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；

e)展示由SEQ ID NO:128中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；

f)展示由SEQ ID NO:135中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；

g)展示由SEQ ID NO:192中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞；以及

h)展示由SEQ ID NO:233中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞。

125.一种分离的T细胞受体(TCR)，其与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合。

126.根据权利要求89到110或125中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR不与由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽结合或基本上不与其结合。

127.根据权利要求89到100、125或126中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR与由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合相对于所述TCR与由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽之间的所述结合显著减弱。

128.一种分离的T细胞受体(TCR)，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时，所述T细胞活化。

129.根据权利要求89到110中任一项所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示由SEQ ID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时，所述T细胞活化。

130.根据权利要求128或129所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时，所述T细胞不活化或基本上不活化。

131.根据权利要求128到130中任一项所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当所述T细胞与展示由选自由SEQ ID NO:45、46和49到57组成的组的氨基酸序列组成的肽的第二细胞共培养时的所述T细胞的所述活化相对于当所述T细胞与展示由SEQID NO:47中阐述的氨基酸序列组成的肽的第三细胞共培养时的所述T细胞的所述活化显著减弱。

132.根据权利要求1到3、5到21、23到25、27到43、45到47、49到65、67到69、71到87、89到91、93到109或111到131中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括α链，所述α链包括α链恒定区，所述α链恒定区包括SEQ ID NO:41或247中阐述的氨基酸序列。

133.根据权利要求132所述的分离的TCR，其中所述α链恒定区包括SEQ ID NO:42中阐述的氨基酸序列。

134.根据权利要求1到7、9到11、13到21、23到29、31到33、35到43、45到51、53到55、57到65、67到73、75到77、79到87、89到95、97到99、101到109或111到133中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR包括β链，所述β链包括β链恒定区，所述β链恒定区包括SEQ ID NO:43、44或248中阐述的氨基酸序列。

135.根据前述权利要求中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR是人TCR。

136.根据前述权利要求中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR是全长TCR、可溶性TCR或单链TCR。

137.根据权利要求1到19、23到41、45到63、67到85或89到107中任一项所述的分离的TCR，其中当所述TCR在T细胞的表面上表达时，当与展示所述肽的第二细胞共培养时，所述T细胞活化。

138.根据权利要求137所述的分离的TCR，其中当与展示所述肽的所述第二细胞共培养时，所述T细胞表现出：(a)CD69表面表达增加；(b)CD25表面表达增加；(c)CD107a表达增加；(d)T细胞增殖增加；(e)IFNγ分泌增加；或(f)活化T细胞核因子(NFAT)启动子活化增加。

139.根据权利要求137所述的分离的TCR，其中所述T细胞诱导展示所述肽的所述第二细胞的细胞凋亡或死亡。

140.根据权利要求1到19、23到41、45到63、67到85、89到107或111到139中任一项所述的分离的TCR，其中所述肽在HLA，任选地HLA-B*0702的背景下呈递。

141.根据前述权利要求中任一项所述的分离的TCR，其中所述TCR与效应子部分轭合。

142.根据权利要求141所述的分离的TCR，其中所述效应子部分是细胞毒性剂、细胞生长抑制剂、毒素、放射性核素、可检测标签或结合部分。

143.根据权利要求142所述的分离的TCR，其中所述结合部分是抗体。

144.根据权利要求142所述的分离的TCR，其中所述结合部分是抗体Fc区。

145.一种分离的多核苷酸，其编码包括根据权利要求1到144中任一项所述的TCR的α链可变区和/或β链可变区或α链和/或β链的多肽。

146.根据权利要求145所述的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸：

i)包括SEQ ID NO:90或238的氨基酸序列，或

ii)编码包括选自由SEQ ID NO:83、266、267、268、269、270和271组成的组的氨基酸序列的多肽。

147.一种分离的载体，其包括根据权利要求145或146所述的多核苷酸。

148.根据权利要求147所述的分离的载体，其中所述载体是选自由以下组成的组的病毒载体：慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体和杆状病毒载体。

149.一种工程化细胞，其包括根据权利要求145或146所述的多核苷酸或根据权利要求147或148所述的载体。

150.一种工程化细胞，其在细胞表面上呈递根据权利要求1到144中任一项所述的TCR。

151.根据权利要求150所述的工程化细胞，其中所述细胞表达所述TCR。

152.根据权利要求149到151中任一项所述的工程化细胞，其中所述细胞是人淋巴细胞。

153.根据权利要求152所述的工程化细胞，其中所述细胞选自由以下组成的组：T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、恒定型自然杀伤T(iNKT)细胞、粘膜相关恒定型T(MAiT)细胞和自然杀伤(NK)细胞。

154.根据权利要求153所述的工程化细胞，其中所述细胞是iNKT细胞。

155.一种分离的TCR，其由根据权利要求145或146所述的多核苷酸或根据权利要求147或148所述的载体进行编码。

156.一种分离的TCR，其由根据权利要求145或146所述的多核苷酸或根据权利要求147或148所述的载体在细胞中的表达产生。

157.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到144、155或156中任一项所述的TCR、根据权利要求145或146所述的多核苷酸、根据权利要求147或148所述的载体或根据权利要求149到154中任一项所述的工程化细胞以及药学上可接受的载剂。

158.一种产生TCR的方法，所述TCR与由SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合，所述方法包括培养根据权利要求149所述的工程化细胞，使得表达所述多核苷酸并产生所述TCR。

159.一种分离的TCR，其通过根据权利要求158所述的方法产生。

160.一种产生工程化细胞的方法，所述工程化细胞表达与由SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列组成的肽结合的TCR，所述方法包括在允许将根据权利要求147或148所述的载体引入到细胞中的条件下使所述细胞与所述载体接触。

161.一种在受试者中诱导对展示由SEQ ID NO:45或47中阐述的氨基酸序列组成的肽的细胞的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1到144、155或156中任一项所述的TCR、根据权利要求145或146所述的多核苷酸、根据权利要求147或148所述的载体、根据权利要求149到154中任一项所述的工程化细胞或根据权利要求157所述的药物组合物。

162.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1到144、155或156中任一项所述的TCR、根据权利要求145或146所述的多核苷酸、根据权利要求147或148所述的载体、根据权利要求149到154中任一项所述的工程化细胞或根据权利要求157所述的药物组合物。

163.根据权利要求161或162所述的方法，其中所述TCR、所述多核苷酸、所述载体、所述工程化细胞或所述药物组合物静脉内施用。

164.根据权利要求161到163中任一项所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用另外的治疗剂。

165.根据权利要求164所述的方法，其中所述另外的治疗剂是化学治疗剂、放射治疗剂或检查点靶向剂。

166.根据权利要求165所述的方法，其中所述检查点靶向剂选自由以下组成的组：拮抗剂抗PD-1抗体、拮抗剂抗PD-L1抗体、拮抗剂抗PD-L2抗体、拮抗剂抗CTLA-4抗体、拮抗剂抗TIM-3抗体、拮抗剂抗LAG-3抗体、拮抗剂VISTA抗体、拮抗剂CD96抗体、拮抗剂抗CEACAM1抗体、拮抗剂抗TIGIT抗体、激动剂抗CD137抗体、激动剂抗GITR抗体以及激动剂抗OX40抗体。

167.根据权利要求164所述的方法，其中所述另外的治疗剂是疫苗。

168.根据权利要求167所述的方法，其中所述疫苗包括热休克蛋白肽复合物(HSPPC)，所述HSPPC包括与抗原肽复合的热休克蛋白。

169.根据权利要求168所述的方法，其中所述热休克蛋白是hsc70并且与肿瘤相关抗原肽复合。

170.根据权利要求168所述的方法，其中所述热休克蛋白是gp96并且与肿瘤相关抗原肽复合，其中所述HSPPC源自从受试者获得的肿瘤。