CN111202002B

CN111202002B - 一种赪桐的组培快繁方法

Info

Publication number: CN111202002B
Application number: CN202010055483.0A
Authority: CN
Inventors: 苏凌业; 何春梅; 王丛丛; 王洪峰
Original assignee: Guangdong Academy of Forestry
Current assignee: Guangdong Academy of Forestry
Priority date: 2020-01-17
Filing date: 2020-01-17
Publication date: 2022-04-19
Anticipated expiration: 2040-01-17
Also published as: CN111202002A

Abstract

本发明公开了一种赪桐的组培快繁方法，包括赪桐外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖和生根培养、移栽；利用本发明方法，污染率仅6.1％，不定芽诱导率达91.8％，增殖系数7.5，生根率95％，且增殖和生根可同步完成，具有生长周期短、操作简单、繁殖系数高等特点，可直接用于赪桐苗木工厂化生产。

Description

一种赪桐的组培快繁方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种赪桐的组培快繁方法。

背景技术

赪桐(Clerodendrumjaponicum(Thunb.)Sweet)是马鞭草科大青属植物，别名百日红、状元红、红花倒血莲等，通常生于平原、山谷、溪边或疏林中，分布于江苏、浙江南部、江西南部、湖南、福建、台湾、广东、广西、四川、贵州、云南等地。赪桐是优良的观花灌木，花色鲜艳，形态优美，花果期长达6个月，适合公园、花坛和花境的布置，逐渐在园林绿化上推广应用。此外，赪桐全株药用，首载于《南方草木状》，有祛风利湿、消肿散瘀的功效，是西南地区传统的民间药物。

由于赪桐具有一定的观赏和药用价值，在市场利益的驱动下，野生赪桐被过度采挖，使其自然生境遭受严重破坏。虽然赪桐已经可以人工种植，但仍以种子繁殖和扦插繁殖为主。由于坐果率不高，自然生长的种子发芽率低，导致赪桐种子繁殖效率低下；而扦插繁殖易造成早衰，繁殖速度慢。因此，利用组培快繁技术，实现赪桐优良植株的工厂化生产，对于提高赪桐繁殖率，促进赪桐产业化开发具有重要现实意义。

目前，在赪桐快繁体系研究中，仅有中国发明专利申请CN104255481A公开了一种赪桐悬浮细胞的快速繁殖方法，步骤包括无菌叶片获得、愈伤组织诱导和悬浮细胞培养，其技术方案并未涉及苗木组培扩繁。在赪桐近缘种的组培快繁体系研究中，均未研究增殖与生根同步发生技术，增加了培养基更换次数，不利于大规模工厂化生产。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中没有赪桐的组培方法的不足，提供一种同步进行增殖和生根培养的赪桐的组培快繁方法。

本发明的一种赪桐的组培快繁方法，包括以下步骤：

a.外植体消毒：取赪桐嫩芽，并去掉苞片，将嫩芽消毒处理；

b.不定芽诱导培养：将步骤a消毒的嫩芽外植体以形态学下端朝下接种至诱导培养基中，诱导不定芽发生，培养获得启动苗；所述的诱导培养基：每升含有6-BA 1-2mg、IBA0.2-0.5mg、蔗糖20g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；

c.增殖和生根培养：将步骤b的启动苗切成单个茎段，接入增殖培养基中，同步进行增殖和生根培养，获得生根苗；所述的增殖培养基：每升含有6-BA 2mg、IBA0.2-0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；

d.移栽：将步骤c的生根苗在自然光下炼苗然后移栽。

优选，所述的步骤a的嫩芽消毒处理，是将嫩芽置于质量分数0.4％洗衣粉水溶液中浸泡2min后取出，用自来水冲洗30min；然后用体积分数75％乙醇水溶液消毒30s，无菌水冲洗3次，再用添加有终浓度为质量分数0.02％吐温-20的质量分数0.1％的升汞溶液消毒6-8min，用无菌水冲洗5次。

优选，所述的步骤b、c的培养条件为：温度23℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d。

优选，所述的步骤c的单个茎段为0.5-1cm高、带2个腋芽。

优选，所述的步骤d，是将步骤c的生根苗在自然光下炼苗3d后取出，洗净根部残留的培养基，栽植于泥炭基质中。

本发明的有益效果：本发明采用植物组织培养技术有效地建立了赪桐的组培快繁方法，且赪桐植株增殖与生根可同步完成，生长周期短、操作简单，且繁殖系数高，可直接用于赪桐苗木工厂化生产。

附图说明

图1是实施例1的赪桐组培快繁过程示意图；其中：A为赪桐不定芽诱导培养；B为赪桐增殖培养；C为赪桐生根培养；D为赪桐移栽。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1

一种赪桐的组培快繁方法，包括以下步骤：

a.外植体消毒：选取生长健壮、无明显病虫害的赪桐枝条，扦插于泥炭土基质中，保持湿度80％。20-25d后待插穗抽出嫩芽约1cm时，小心剥取整棵嫩芽，去掉残留的苞片，然后将嫩芽置于质量分数0.4％洗衣粉水溶液(选用洗衣粉为普通市售产品)中浸泡2min，缓慢震荡，取出嫩芽用自来水冲洗30min。在超净工作台内用体积分数75％乙醇水溶液消毒30s，无菌水冲洗3次，再用添加有终浓度为质量分数0.02％吐温-20的质量分数0.1％的升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗5次。

b.不定芽诱导培养：将步骤a消毒的嫩芽外植体以形态学下端朝下接种至诱导培养基中，培养诱导不定芽发生；所述的诱导培养基：每升含有6-BA2 mg、IBA0.2 mg、蔗糖20g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养条件：温度23℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d。培养20d后得到1-2cm高的启动苗(图1A)，诱导率达91.8％。

c.增殖和生根培养：将步骤b中的启动苗切成单个茎段(0.5-1cm高，带2个腋芽)接入增殖培养基中，同步进行增殖和生根培养；所述的增殖培养基：每升含有6-BA2 mg、IBA0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养条件：温度23℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d。培养30d后，赪桐植株健壮，叶大且浓绿(图1B)，增殖系数为7.5。在不更换培养基和不改变培养条件下，继续培养15d，幼苗基部长出1-2条粗壮主根(图1C)，生根率为95％，获得生根苗。

d.移栽：将步骤c中根系生长良好的生根苗在自然光下炼苗3d后取出，洗净根部残留的培养基，栽植于泥炭土铺设的基质中，移栽30d后(图1D)成活率为96％。

关于消毒方法：

实施例2

本实施例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：本实施例使用添加有终浓度为质量分数0.02％吐温-20的质量分数0.1％的升汞溶液消毒的时间为7min，对应的消毒效果如表1所示。

实施例3

本实施例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：本实施例使用添加有终浓度为质量分数0.02％吐温-20的质量分数0.1％的升汞溶液消毒的时间为6min，对应的消毒效果如表1所示。

对比例1

本对比例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：本对比例将实施例1中的用添加有终浓度为质量分数0.02％吐温-20的质量分数0.1％的升汞溶液消毒8min替换为用质量分数5％的NaClO溶液消毒8min，对应的消毒效果如表1所示。

对比例2

本对比例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：本对比例使用的外植体不是嫩芽，而是带芽茎段，对应的消毒效果如表1所示。

分别按照实施例1、实施例2、实施例3、对比例1和对比例2的方法进行平行培养，培养时间20d，经统计，结果如表1所示。

表1不同外植体类型、消毒溶液和消毒时间对赪桐外植体消毒的影响

从表1可以看出，以赪桐嫩芽为外植体，利用质量分数0.1％升汞溶液消毒6-8min，在诱导培养基(同实施例1)上培养20d后外植体污染率为低于11％，存活率超过81％，消毒效果远远优于对比例1、对比例2。其中，实施例1的消毒方法污染率仅6.1％，存活率可达84.8％。

关于诱导培养基的激素种类及浓度：

实施例4

本实施例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的诱导培养基中6-BA浓度与实施例1的不同，本实施例具体用的诱导培养基：每升含有6-BA 1mg、IBA0.2 mg、蔗糖20g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养20d后诱导率结果如表2所示。

实施例5

本实施例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的诱导培养基中6-BA和IBA浓度与实施例1的不同，本实施例具体用的诱导培养基：每升含有6-BA 2mg、IBA0.5 mg、蔗糖20g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养20d后诱导率结果如表2所示。

对比例3

本对比例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的诱导培养基中不含激素，本对比例具体用的诱导培养基：每升含有蔗糖20g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养20d后诱导率结果如表2所示。

对比例4

本对比例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的诱导培养基中含有6-BA和2,4-D(激素浓度与发明专利CN104255481A公开的相同)，本对比例具体用的诱导培养基：每升含有6-BA 5mg、2,4-D 1mg、蔗糖20g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养20d后诱导率结果如表2所示。

分别按照实施例1、实施例4、实施例5、对比例3和对比例4的方法进行平行培养，培养时间20d，经统计，不定芽诱导培养结果如表2所示。

表2不同诱导培养基对赪桐不定芽诱导率的影响

从表2可以看出，使用实施例1、4、5的诱导培养基，培养20d后诱导率高于85％，诱导效率优于对比例3、对比例4。其中，利用实施例1的诱导培养基进行培养，不定芽诱导率可达91.8％。

关于增殖培养基的激素种类及浓度：

实施例6

本实施例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的增殖培养基中IBA浓度与实施例1的不同，本实施例具体用的增殖培养基：每升含有6-BA 2mg、IBA0.2 mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养后增殖和生根结果如表3所示。

对比例5

本对比例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的增殖培养基中6-BA、IBA浓度与实施例1的不同，本对比例具体用的增殖培养基：每升含有6-BA0.5 mg、IBA0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养后增殖和生根结果如表3所示。

对比例6

本对比例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的增殖培养基中IBA浓度与实施例1的不同，本对比例具体用的增殖培养基：每升含有IBA 1mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养后增殖和生根结果如表3所示。

对比例7

本对比例与实施例1的方法步骤基本相同，不同在于：所用的增殖培养基中不含激素，本对比例具体用的增殖培养基：每升含有蔗糖30g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；培养后增殖和生根结果如表3所示。

分别按照实施例1、实施例6、对比例5、对比例6、对比例7的方法进行平行培养，培养时间45d，经统计，培养结果如表3所示。

表3不同增殖培养基对赪桐组培苗增殖和生根的影响

从表3可以看出，使用实施例1、6的增殖培养基，培养30d后增殖系数达6.9以上，且植株较健壮，增殖效果和植株长势均优于对比例5、6、7；培养45d后生根率80％以上，主根粗壮，生根率和根部长势均优于对比例5、6、7。其中，实施例1的增殖培养基培养30d增殖系数可达7.5，培养45d生根率可达95％。

Claims

1.一种赪桐的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.外植体消毒：取赪桐嫩芽，并去掉苞片，将嫩芽消毒处理；所述的嫩芽消毒处理，是将嫩芽置于质量分数0.4％洗衣粉水溶液中浸泡2min后取出，用自来水冲洗30min；然后用体积分数75％乙醇水溶液消毒30s，无菌水冲洗3次，再用添加有终浓度为质量分数0.02％吐温-20的质量分数0.1％的升汞溶液消毒6-8min，用无菌水冲洗5次；

b.不定芽诱导培养：将步骤a消毒的嫩芽外植体以形态学下端朝下接种至诱导培养基中，诱导不定芽发生，培养获得启动苗；所述的诱导培养基：每升含有6-BA 1-2mg、IBA 0.2-0.5mg、蔗糖20g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；

c.增殖和生根培养：将步骤b的启动苗切成单个茎段，接入增殖培养基中，同步进行增殖和生根培养，获得生根苗；所述的增殖培养基：每升含有6-BA 2mg、IBA 0.2-0.5mg、蔗糖30g、琼脂7g，余量为MS培养基，pH5.8；

d.移栽：将步骤c的生根苗在自然光下炼苗然后移栽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b、c的培养条件为：温度23℃，光照强度2000lx，光照时间16h/d。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤c的单个茎段为0.5-1cm高、带2个腋芽。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤d，是将步骤c的生根苗在自然光下炼苗3d后取出，洗净根部残留的培养基，栽植于泥炭基质中。