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CN111133002B - 具有高体内耐受性的基于蒽环类药的抗体药物缀合物 - Google Patents

具有高体内耐受性的基于蒽环类药的抗体药物缀合物 Download PDF

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CN111133002B CN201880061886.7A CN201880061886A CN111133002B CN 111133002 B CN111133002 B CN 111133002B CN 201880061886 A CN201880061886 A CN 201880061886A CN 111133002 B CN111133002 B CN 111133002B
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Abstract

本发明涉及呈现改善的体内耐受性质的抗体药物缀合物(ADC)。

Description

具有高体内耐受性的基于蒽环类药的抗体药物缀合物
技术领域
本发明涉及携带有效药物并在体内具有改善的性质，并且确切地说，在体内具有改善的耐受性的抗体药物缀合物。
背景技术
小分子量毒素(毒性“小分子”，MW<2'500道尔顿)与结合蛋白，确切的说，对肿瘤细胞具有特异性的抗体的共价缀合物是特异地靶向癌细胞进行破坏的强大工具。此类抗体药物缀合物(ADC)对于癌症的治疗具有很高的医学和商业意义。为了开发用于癌症治疗的有效和安全ADC，需要解决几个方面：首先，抗体需要对几乎不被或在理想情况下不被正常或健康组织细胞表达的给定肿瘤特异性抗原(TSA)具有特异性。其次，药物与抗体/结合蛋白之间的共价键或键合需要在循环中足够稳定以防止血流中的有毒有效负载意外释放，同时在结合和/或内化后也能有效地将药物释放到癌细胞中。第三，ADC必须大量地被内化。第四，毒性有效负载必须从抗体中释放出来，并进入适当的细胞区室中以发挥其毒性。第五，毒性有效负载必须具有足够高的毒性或效力以破坏癌细胞，即使可能是有限量的TSA被表达在癌细胞上而因此只有有限量的ADC被内化，或者即使在结合癌细胞或内化到癌细胞中后没有以足够高的效率释放有毒有效负载。
但是，同样地，ADC还必须避免引起副作用，通常由以下介导：(a)由于TSA在健康细胞上的表达而在非靶组织中进行的中靶结合(on-target binding)，(b)由于预期TSA之外的抗原的结合而进行的脱靶结合(off-target binding)，以及/或者(c)一般毒性，这可能是由于血流中药物有效负载的过早释放、从裂解靶细胞释放的有效负载或代谢产物的释放而引起的。
ADC开发的这些多重限制使这种治疗方法成为通过临床评估最具挑战性的方法。此外，由于制造和测试这种基于生物的产品的成本高，因此技术人员无法任意地系统测试抗体、接头和毒素，以及特定缀合位点以及毒素与抗体之间比率的所有可能的变型和组合。
实际上，文献报道了许多可能的毒素有效负载和接头(例如参见Jain等人，2015)，并且此外，还报道了许多可能的缀合位点和缀合方法。
在“Location Matters:Site of Conjugation Modulates Stability andPharmacokinetics of Antibody Drug Conjugates”(Strop等人，Chemistry&Biology，20，2013)中，作者记录了通过微生物转谷氨酰胺酶缀合的ADC。缀合到其抗体重链和轻链C-端的MMAD毒素在体内和体外呈现出相似功效。10mg/kg和25mg/kg剂量的ADC在大鼠中同样具有良好的耐受性。
申请人意外地发现，带有结合在一个或多个特定位点，即排他地(exclusively)结合在一个或两个抗体(或抗体衍生物)轻链的C端上的蒽环类毒素的ADC，不仅在治疗上有效，而且与带有结合在替代位点上，即结合在一个或两个抗体重链的C端或结合在抗体重链和轻链的C端的组合上的蒽环类毒素的同等ADC相比，其在体内的耐受性显著更高。WO2016/150564(其内容以引用方式并入本文)中并没有提出此教义，此文献提及的是相同类别的毒素，但仅提及它们附着到抗体重链和轻链C端的组合。
关于抗体C端的毒素附着方式的教导，即在WO 2014/140317(其内容以引用方式并入本文)中，也没有提及蒽环类毒素优选附着到轻链C端。
因此，本发明的目的是提供一种在体内呈现出改善的特性，并且确切地说，在体内具有高度耐受性的抗体药物缀合物(ADC)。确切地说，本发明的目的是提供一种抗体药物缀合物，所述抗体药物缀合物与包括相同数目的相同毒素但附着到替代C端的对应物相比在体内的耐受性更好。
本发明的另一个目的是提供一种包括此类抗体药物缀合物的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供一种制备此类抗体药物缀合物的方法。
本发明的另一个目的是提供一种用于治疗患有、有风险发展出和/或被诊断为肿瘤性疾病的受试者的抗体药物缀合物。
本发明的另一个目的是提供一种用于治疗患有、有风险发展出和/或被诊断为免疫性疾病的受试者的抗体药物缀合物。
这些和其它目的通过根据本发明的独立权利要求所述的方法和装置来实现。从属权利要求涉及具体实施方案。
发明内容
本发明提供了在体内呈现改善的性质(包括改善的体内耐受性)的抗体药物缀合物。下文将详细讨论本发明及其特征的一般优点。
附图说明
图1示出根据本发明的一般含蒽环类药的ADC，其中Ab是指抗体或片段或衍生物，在其恒定区轻链C端中的一个或两个处连接到含肽序列的接头，连接至蒽环类药分子毒素。
图2示出根据本发明的含蒽环类药分子的ADC的优选实施方案，其中：
-该蒽环类药分子对应于式(i)的PNU衍生物
-L1是可选的接头，该接头可以是可裂解接头
-m大于或等于1并且小于或等于11，并且优选地，m是2
-n大于或等于1并且小于或等于21，并且优选地，n是1、2、3、4或5
-此处的分选酶识别序列(Sortase Recognition Sequence)表示分选酶识别基序(例如LPXTG)(如图中的C-到N-端方向所示)特异性裂解的产物(例如LPXT)，其中X是任何氨基酸
-间隔序列是任选的(如图中的C-端到N-端方向所示)
-Ab是抗体，在其恒定区轻链C端中的一个或这两个处连接到间隔序列(如果存在)或连接到分选酶识别序列(如果不存在间隔序列)。
图3示出用在实施例中的PNU衍生物，其中图3(A)示出五甘氨酸修饰的PNU衍生物(G5-PNU)、图3(B)示出三甘氨酸修饰的PNU衍生物(G3-PNU)，并且图3(C)示出二甘氨酸修饰的PNU衍生物(G2-PNU)。
图4示出使用以下ADC对(A)SKBR3(HER2阳性人乳腺癌)和(B)Karpas-299(HER2阴性人T细胞淋巴瘤)细胞系进行的体外细胞杀灭测定的剂量反应曲线：Tras-HC-PNU(靶向HER2的ADC，其包括连接到其重链C端中的两个的蒽环类药分子)和Tras-LC-PNU(靶向HER2的ADC，其包括连接到其轻链C端中的两个的蒽环类药分子)。仅在重链或仅在轻链上包括蒽环类药有效负载的ADC表现出同等的抗原介导体外功效。
图5示出使用以下ADC对SKOV3(HER2阳性人卵巢癌)细胞系的体外细胞杀灭测定的剂量反应曲线：Tras-HC-PNU(靶向HER2的ADC，其包括连接到其重链C端中的两个的蒽环类药分子)和Tras-LC-PNU(靶向HER2的ADC，其包括连接到其轻链C端中的两个的蒽环类药分子)、Ac10-HC-PNU(靶向CD30的ADC，其包括连接到其重链C端中的两个的蒽环类药分子)以及Ac10-LC-PNU(靶向CD30的ADC，其包括连接到其轻链C端中的两个的蒽环类药分子)。仅在重链或仅在轻链上包括蒽环类药有效负载的ADC表现出同等的抗原介导体外功效。
图6示出经(A)hu4-2-17-PNU(靶向ROR1的ADC，其具有连接到重链和轻链C端这两者的蒽环类药有效负载)、(B)hu4-2-17-HC-PNU(靶向ROR1的ADC，其具有连接到其重链C端的蒽环类药有效负载)或(C)hu4-2-17-LC-PNU(靶向ROR1的ADC，其具有连接到其轻链C端的蒽环类有效负载)治疗的雌性CD1小鼠随时间推移的ADC IgG和蒽环类毒素的血清浓度。
图7示出对人ROR1在工程改造的小鼠EMT-6乳腺癌细胞上的表达的FACS分析。通过使用荧光标记的抗ROR1抗体克隆2A2执行针对ROR1表达的FACS染色分析了被选定用于体内研究的EMT-6-ROR1克隆14。阴性对照显示相同细胞被荧光标记的同种型匹配对照抗体染色。
图8示出使用以下ADC对(A)ROR1过表达EMT6克隆14细胞和(B)CS1阳性L363(人浆细胞白血病)细胞的体外细胞杀灭测定的剂量反应曲线：huERCS-409-LC-PNU(靶向CS1的ADC，其包括连接到其轻链C端的G3-PNU)、huERCS-409-HC-PNU(靶向CS1的ADC，其包括连接到其重链C端的G3-PNU)、huERCS-409-LC-PNU(靶向CS1的ADC，其包括连接到其轻链C端的G2-PNU)、huERCS-409-HC-PNU(靶向CS1的ADC，其包括连接到其重链C端的G2-PNU)、hu4-2-17-LC-PNU(靶向ROR1的ADC，其包括连接到其轻链C端的G3-PNU)、hu4-2-17-HC-PNU(靶向ROR1的ADC，其包括连接到其重链C端的G3-PNU)、hu4-2-17-LC-PNU(靶向ROR1的ADC，其包括连接到其轻链C端的G2-PNU)以及hu4-2-17-HC-PNU(靶向ROR1的ADC，其包括连接到其重链C端的G2-PNU)。仅在重链或仅在轻链上包括蒽环类药有效负载的ADC表现出同等的抗原介导体外功效。
图9示出了常位植入肿瘤细胞并经以下处理的BALB/c雌性小鼠的ROR1过表达EMT-6(克隆14)肿瘤体积的演变(通过卡尺测量；每组的平均值，误差条对应于平均值的标准误差)：媒介物对照，0.5mg/kg的同种型对照ADC(靶向CD30的ADC，其包括连接到其两个重链C端的蒽环类药分子)；0.5mg/kg的hu4-2-17-PNU(靶向ROR1的ADC，其具有连接到重链和轻链C端这两者的蒽环抗生素有效负载)，1.0mg/kg的hu4-2-17-HC-PNU(靶向ROR1-的ADC，其具有连接到重链C-端的蒽环抗生素有效负载)，以及1.0mg/kg的hu4-2-17-LC-PNU(靶向ROR1-的ADC，其具有位于其轻链C端上的蒽环类药有效负载)。在相等毒素负荷下，仅在重链或仅轻链C端处带有毒素的靶向ROR1的ADC相对于在重链和轻链C端均带有毒素的靶向ROR1的ADC而言具有更高的体内功效。仅在重链或轻链C端带有毒素的靶向ROR1的ADC的体内功效基本相同。
定义
除非另有定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。另外，提供以下定义以帮助读者实施本发明。
术语“抗体”是指对给定的抗原、一个或多个表位表现出强单价、二价或多价结合的多肽链。除非另有说明，否则抗体可以使用任何适当技术来生成，例如杂交瘤技术、核糖体展示、噬菌体展示、基因改组库、半合成或完全合成库或其组合。本发明的抗体是完整的抗体(例如，本文中示例的IgG1抗体)。除非本文另有说明，否则所有肽序列，包括所有抗体和抗原结合片段序列，均是指N->C顺序。
完整的抗体通常包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链(约45-70kD)和两条轻(L)链(约20-25kD)。公认的编码免疫球蛋白基因的抗体链包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数个免疫球蛋白可变区基因。轻链分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，进而分别定义了免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。抗体的每条重链均由重链可变区(VH)和重链恒定区组成。就IgG而言，重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。重链和轻链的可变区包括与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括表达Fc受体的免疫系统的各种细胞以及经典补体系统的第一组分(C1q)。单克隆抗体(mAb)由相同(就其编码的氨基酸序列而言)抗体分子组成。
抗体的VH和VL区可以进一步细分为超变区，也称为互补决定区(CDR)，其之间散布着更为保守的框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，它们从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。已经定义了CDR和FR区域的位置以及编号系统，例如IMGT系统和Kabat系统。
此外，抗体可以是任何同种型，包括但不限于IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。因此，例如，所述抗体可以是任何IgA，例如IgA1或IgA2，或任何IgG，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或合成IgG。
此外，抗体可以以衍生形式(“抗体衍生物”)被包括在内，例如双重可变结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)形式以及与IgA、IgD、IgE、IgG或IgM的单链可变片段(scFv)融合物。单链可变区片段(scFv)是单链抗体，即它是包括多肽连接中的VH结构域和VL结构域，通常通过间隔肽连接的多肽。scFv融合物可以在重链的N或C端，也可以在轻链的N端。DVD-Ig格式由Ig形抗体组成，其中每个VL/VH对在N端携带另一个VL/VH对。两个VL/VH对具有相同或不同的抗原结合特异性。同样，抗体可以以典型抗体形式的片段存在，例如F(ab)/F(ab’)2或单链FV(scFv)。为了避免疑问，术语抗体衍生物和抗体片段均指保留靶标结合能力的实施方案，即，排除不再能够结合靶标的实施方案。
术语“嵌合抗体”是指包含来自一个物种的靶向抗原的抗原结合区(VH和VL)以及对应于另一物种的免疫球蛋白序列的恒定区的抗体。
“非人抗体”是指不包括对应于人免疫球蛋白序列的恒定区的抗体。
术语“人源化抗体”是指含有衍生自人和非人(例如兔)免疫球蛋白的序列，使得一些或全部(例如，仅留有轻链和重链的非人CDR3序列，例如在Rader C.等人中所述，1998)，或基本上所有CDR区都是非人源的，而基本上所有FR区都对应于人免疫球蛋白序列的嵌合抗体。
本文所述的抗体或片段或衍生物可以通过完整抗体的酶促或化学修饰产生，或使用重组DNA方法从头合成，或使用噬菌体展示库识别。产生这些抗体或抗体衍生物的方法是所属领域中公知的。
本发明的抗体或片段或衍生物可以通过任何适当技术来产生，例如，使用任何适当真核或非真核表达或无细胞系统。在某些实施方案中，抗体或片段或衍生物是使用哺乳动物表达系统产生的。在某些实施方案中，抗体或片段或衍生物是使用昆虫表达系统产生的。
本发明中的“治疗活性化合物”是指提供治疗有益作用的化合物，并且尤其包括抗体药物缀合物。治疗活性化合物通常被配制成组合物，例如配制于生理学可接受的缓冲剂中。
“耐受性”是指人类或其他动物，例如小鼠、大鼠、兔、猴等，或一群人或其它动物可以耐受所施用的组合物(包括治疗活性化合物或由其组成)的不良作用的程度。在一个实施方案中，耐受性可以相对于死亡率确定。
“不良作用或事件”是由于治疗活性化合物的施用引起的不良作用或事件。确切地说，所述不良作用包括体重减轻，特别是体重相对于用治疗活性化合物治疗当天的初始体重减轻超过10％、15％或20％。确切地说，所述不良作用包括死亡(在动物模型中，无论是自然发生的还是满足安乐死标准执行的死亡)。确切地说，与替代治疗活性化合物和/或缓冲剂对照相比，在单次或重复(恒定或递增)剂量的治疗活性化合物后，在动物模型(例如，多组小鼠、大鼠等)中评估与死亡有关的不良作用。确切地说，耐受性在动物模型中以最大耐受剂量，即以用治疗活性化合物治疗的动物组内的死亡数来评估，其中给定组在一定剂量范围内用给定剂量的化合物治疗。
本文中使用的术语“医治”、“治疗”、“医疗”和“治疗有效”并不一定意味着100％或完全治疗。而是，所属领域中的普通技术人员认识到具有潜在益处或治疗效果的不同程度的治疗。在这方面，本发明的方法可以提供任何量的任何水平的治疗。此外，通过本发明方法提供的治疗可以包括治疗被治疗疾病的一种或多种病症或症状。
具体实施方式
在详细描述本发明之前，应理解，本发明不限于所描述的设备的特定组成部分或所描述的方法的过程步骤，因为所述设备和方法是变化的。还应理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而无意于进行限制。必须注意，说明书和所附权利要求书中所使用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括单数和/或复数指代物，除非上下文另外明确指出。此外应理解，在给出由数值限定的参数范围的情况下，所述范围被视作包括这些限制值。
还应理解，本文中公开的实施方案并不意味着应理解为不会彼此相关的各个实施方案。通过一个实施方案讨论的特征旨在也结合本文所示的其他实施方案公开。如果在一种情况下，特定特征在一个实施方案未公开，而在另一实施方案中公开，则所属领域中的技术人员将理解，这不一定意味着所述特征并不意图是在所述另一实施方案中公开的。所属领域中的技术人员将理解，本申请的要旨是所述特征的公开也用于其他实施方案，但是仅出于清楚并且将说明书保持在可管理的范围内的目的而没有这么做。
此外，本文所引用的现有技术文件的内容通过引用并入。这尤其是针对公开标准或常规方法的现有技术文件。在该情况下，以引用的方式并入的主要目的是提供足够的可复原公开并避免冗长的重复。
抗体药物缀合物(ADC)
根据第一方面，本发明涉及抗体药物缀合物(ADC)，包括
抗体或保留靶结合性质的抗体片段或衍生物，该抗体或抗体片段或衍生物包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
基于蒽环类药的小分子，
其中该蒽环类药分子仅连接到该抗体、片段或衍生物的轻链恒定区C-端，并且
其中该基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到该抗体、片段或衍生物。
“基于蒽环类药(anthracycline)的小分子”在本文中也称为“蒽环类药分子”。
相对于本发明的ADC，意图是蒽环类药分子没有在除抗体或片段或衍生轻链恒定区C-端中的一个或这两个以外的位点与抗体共价连接。
图1中给出了根据本发明的ADC的直观图示。
与抗体有关的本发明的方面
本发明的抗体可以是任何同种型，包括但不限于IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。因此，例如，所述抗体可以是任何IgA，例如IgA1或IgA2，或任何IgG，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或合成IgG。
此外，所述抗体可以以衍生形式(“抗体衍生物”)被包括在内，例如双重可变结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)形式以及与IgA、IgD、IgE、IgG或IgM的单链可变片段(scFv)融合物。在一个优选实施方案中，所述抗体衍生物是DVD-Ig形式。
所述抗体或片段或衍生物是单价、二价或多价抗体。
所述抗体或片段或衍生物是单特异性或多特异性的。术语“多特异性”是指对给定抗原的两个或更多个不同表位具有特异性，或对至少两种不同抗原具有特异性的抗体或片段或衍生物。
在一个优选的实施方案中，所述抗体是IgG抗体。
该抗体或片段或衍生物靶向(或结合)任何抗原，但是优选地靶向肿瘤特异性的抗原或在肿瘤组织上的表达速率以比在健康组织上更高的抗原。
本文所用的“以更高比率表达”是指表达比率至少高10％、优选地高至少20％、更优选地高至少30％、更优选地高至少40％、更优选地高至少50％、更优选地高至少60％、更优选地高至少70％、更优选地高至少80％、更优选地高至少90％，甚至更优选地高至少100％。表达比率可以使用所属领域中的技术人员已知的方法，例如RT-PCR或免疫组织化学来确定。
具体而言，抗原是人抗原。在一个优选实施方案中，抗原是ROR1、ROR2、CS1、间皮素或HER2，更优选地是ROR1、CS1或HER2，甚至更优选地是ROR1或HER2。具体而言，抗原可以是人ROR1(基于来自GenBank的序列NP_005003)、人ROR2(基于来自GenBank的序列NP_004551.2)、人CS1(基于来自GenBank的序列NM_021181.3)、人间皮素(基于来自GenBank中的序列NP_037536)或人HER2(基于来自GenBank的序列NP_004439)。在一个实施方案中，抗体或片段或衍生物不结合人和/或小鼠CS1，并且在该实施方案中，优选地抗体或片段或衍生物不结合人CS1。
在一个优选的实施方案中，抗体或片段或衍生物包括实施例中提供的抗体或抗体衍生物的CDR。确切地说，抗体或片段或衍生物可以包括曲妥珠单抗的CDR(基于使用abYsis软件的Kabat编号)：
具体地说，抗体或片段或衍生物可以包括hu4-2-17的CDR(基于Kabat编号)：
具体地说，抗体或片段或衍生物可以包括huERCS-409的CDR(基于Kabat编号)：
在一个优选的实施方案中，抗体或片段或衍生物包括实施例中呈现的抗体的可变结构域。确切地说，抗体或片段或衍生物可以包括曲妥珠单抗的可变结构域(表2的SEQ IDNO.1/2的可变结构域)。确切地说，抗体或片段或衍生物可以包括hu4-2-17的可变结构域(表2的SEQ ID NO.4/5的可变结构域)。确切地说，抗体或片段或衍生物可以包括huERCS-409的可变结构域(表2的SEQ ID NO.7/8的可变结构域)。
与毒素有关的本发明的方面
本发明的ADC包括一个或两个基于蒽环类药的小分子(“蒽环类药分子”)，其中每个蒽环类药分子通过包括肽序列的接头在轻链恒定区C-端连接到该抗体或抗体衍生物。
蒽环类药是一类非常有趣的DNA嵌入毒素，可作为ADC的有效负载使用，因为它们已被临床验证证明可作为癌症治疗中的化学治疗药物使用(Minotti，2004年)。蒽环类药是具有高抗肿瘤活性的红色聚酮化合物，最初来自链霉菌种。过去的40年中已经描述了许多衍生物，包括一些常规用作各种实体和血液癌症的化学治疗药物，例如多柔比星(也称为阿霉素)、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、吡柔比星、佐柔比星、阿柔比星、卡米霉素(caminomycin)和戊柔比星(valrubicine)。一种新的蒽环类药衍生物称为PNU-159682，被描述为奈莫柔比星的代谢产物(Quintieri，2005年)，据报对微微至毫微微摩尔范围内的一种卵巢(A2780)和一种乳腺癌(MCF7)细胞系具有极高的体外杀灭功效(WO2012/073217)。
在一个实施方案中，本发明的ADC包括一个蒽环类药分子，其通过包括肽序列的接头在轻链恒定区C-端处连接到该抗体或片段或衍生物。在一个实施方案中，本发明的ADC包括两个蒽环类药分子，其通过包括肽序列的接头在两个轻链恒定区C-端中的每一个处连接到该抗体或片段或衍生物。
在一实施方案中，至少一个基于蒽环类的小分子不是多柔比星。
在一个实施方案中，基于蒽环类药的小分子选自包括式(i)的结构的PNU-159682或其衍生物，或包括以下式(i)的结构的其衍生物。在一个优选实施方案中，在其波形线处连接到接头的毒素具有式(i)，如WO 2016/102679中所述，所述专利以引用方式并入本文中：
如Quintieri等(2005年)所述的PNU-159682。
不是蒽环类药分子的毒素可以是植物、真菌或细菌分子。在一些实施方案中，不是蒽环类药分子的毒素是小分子细胞毒素、肽毒素或蛋白质毒素。这些毒素的许多具体示例是所属领域中公知的。参见，例如Dyba等人，《当今药物设计》(Curr.Pharm.Des.)，10:2311-34,2004；Kuyucak等人，《未来药物化学》(Future Med.Chem.)，6:1645-58,2014；Beraud等人，《炎症与过敏症-药物目标》(Inflamm.Allergy Drug Targets)，10:322-42,2011等人；以及Middlebrook等人，《微生物评论》(Microbiol.Rev)，48:199-221,1984。在一些实施方案中，不是蒽环类药分子的毒素可以是美登木素生物碱(maytansinoid，例如美登木醇或DM1美登木素生物碱)、紫杉烷、加利车霉素(calicheamicin)、西马多丁、单甲基奥瑞斯他汀(monomethylauristatin，例如，单甲基奥瑞斯他汀E或单甲基奥瑞斯他汀F)或吡咯并苯并二氮杂(PBD)。不是蒽环类药分子的毒素也可以是长春新碱和泼尼松。在各种实施方案中，不是蒽环类药分子的毒素可以是抗代谢物(例如，抗叶酸剂例如甲氨蝶呤，氟嘧啶例如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷或嘌呤或腺苷的类似物)；丝裂霉素-C、放线菌素或光神霉素，或其他非蒽环类药嵌入剂，例如吡咯并苯并二氮杂；DNA反应剂，例如加利车霉素、田奇霉素(tiancimycin)和其他烯二炔；铂衍生物(例如顺铂或卡铂)；烷基化剂(例如氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、环磷酰胺、异环磷酰胺亚硝基脲或塞替派)；RNA聚合酶抑制剂，例如α-鹅膏菌素；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱例如长春新碱，或者紫杉醇例如紫杉醇或多西紫杉醇)；拓扑异构酶抑制剂(例如，依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶、托泊替康)；细胞周期抑制剂(例如，夫拉平度(flavopyridol))；或微管剂(例如，埃坡霉素(epothilone)、微管赖氨酸(tubulysine)、微管赖氨酸前素(pre-tubulysine)、盘皮海绵内酯(discodermolide)类似物或艾榴素(eleutherobin)类似物)。不是蒽环类药分子的毒素可以是蛋白体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂，例如硼替佐米、安吖啶、依托泊苷、依托泊苷磷酸酯、替尼泊苷或多柔比星，或放射性同位素包括碘(131I)、钇(90Y)、镥(177Lu)、锕(225Ac)、镨、砹(At)、铼(Re)、铋(Bi或Bi)和铑(Rh)。
非蒽环类药分子的毒素优选地选自由以下项构成的组中：
·美登木素生物碱，包括美登素，
·奥瑞斯他汀，包括单甲基奥瑞斯他汀MMAE和单甲基奥瑞斯他汀MMAF，
·加利车霉素，
·微管赖氨酸
·倍癌霉素
·放射性同位素
·包含有毒有效负载的脂质体
·蛋白毒素
·紫杉烷类，和/或
·吡咯并苯并二氮杂。
另外，ADC可以包括标记或染料，特别是用于实现成像。此标记或染料可以是选自以下项构成的组中的至少一者：荧光标记(包括荧光染料或荧光蛋白)、发色团标记，含有碘(例如125I)、镓(67Ga)、铟(111I)、锝(99mTc)、磷(32P)、碳(14C)、氚(3H)或其他放射性同位素(例如放射性离子)的放射性同位素标记，以及/或者蛋白质标记，例如亲和素或链霉亲和素。
与接头有关的本发明的方面
本发明涉及一种抗体药物缀合物(ADC)，包括
抗体或保留靶结合性质的抗体片段或衍生物，该抗体或抗体片段或衍生物包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
基于蒽环类药的小分子，
其中该蒽环类药分子排他地连接到该抗体、片段或衍生物的轻链恒定区C-端，并且
其中该基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到该抗体、片段或衍生物。
在一个优选实施方案中，该接头的该肽序列包括由分选酶(sortase)识别基序的特异性裂解产生的肽基序或由其组成，该分选酶识别基序优选地包括五肽。
在一个优选的实施方案中，该分选酶识别基序选自由以下项构成的组中：-LPXTG-、-LPXAG-、-LPXSG-、-LAXTG-、-LPXTG-、-LPXTA-和-NPQTG-，其中X是任何氨基酸，优选地X是E或Q。
如本文其他处以及其内容以引用方式并入本文中的WO2014140317中公开，分选酶(也称为分选酶转肽酶)形成一组原核酶，其通过识别和切割包括特定肽基序的特定分选信号来修饰表面蛋白。该肽基序在本文中也称为“分选酶识别基序”、“分类酶识别基序”、“分选酶标签”或“分选酶识别标签”。通常，给定的分选酶具有被识别的一个或多个分选酶识别基序。
分选酶可以是天然存在的酶，也可以是经过基因工程改造的酶(Doerr等人，2014年)。Spirig等人(2011年)中一般讨论了分选酶类别及其相应的识别序列。工程化的分选酶，包括来自金黄色葡萄球菌的A2A-9和A 4S-9描述于Dorr等人(2014年)和和Chen等人(2011年)中。
作为背景并且为了举例说明分选酶转肽的一般概念，例如，分选酶A使用寡甘氨酸伸展作为亲核试剂来催化转肽作用，进而使寡甘氨酸的末端氨基对连接分选酶识别序列的最后两个C-端残基的肽键产生亲核攻击。这导致该肽键的断裂并在分选酶标签的C-端倒数第二个残基与寡甘氨酸肽的N-端甘氨酸之间形成新的肽键，即产生转肽作用。
下表示出了分选酶识别基序和特定裂解后所得肽基序的非限制性示例，后者被包括在ADC接头内(从N-到C-端方向)：
表1.分选酶识别序列和特异性裂解产生的肽基序，其中X是任何氨基酸
在分选酶缀合之前，分选酶识别基序可以在其C-端进一步带有其他标签，例如His-标签、Myc-标签或Strep-标签(参见WO2014140317的图4a，其内容以引用方式并入本文中)。但是，由于分选酶识别基序的第4和第5个氨基酸之间的肽键在分选酶介导的缀合作用下被裂解，因此这些额外的标签不会出现在缀合产物中。
分选酶识别基序可以通过遗传融合而融合抗体轻链的C-端，并与之共表达。可以将分选酶识别基序附加到免疫球蛋白轻链中的一个或两个的最后的天然存在的C-端氨基酸，其在人免疫球蛋白κ轻链的情况下，是C-端半胱氨酸残基。该融合或附着可直接完成或通过本文其他各处所述的其他接头元件间接完成。
先前我们已经描述过，在某些情况下(例如，在Igκ轻链的C-端，请参阅：Beerli等人(2015年))，在结合蛋白的C-端与分选酶识别基序之间添加其他氨基酸(在本文中称为“间隔序列”)是有益的。已经表明，这可以提高有效负载与结合蛋白的分选酶缀合效率。对于Igκ轻链，发现在Igκ轻链的最后一个C-端半胱氨酸氨基酸与分选酶识别序列之间添加5个氨基酸可改善缀合动力(参见Beerli等人(2015年))。因此，另一个优选的实施方案是在抗体的最后一个C-端氨基酸与分选酶识别序列之间任选地添加≥1和≤11个氨基酸(“间隔序列”)。在一个优选的实施方案中，在最后的轻链C-端氨基酸与分选酶识别基序之间添加了肽序列GqS，其中q优选地是1至10，并且更优选地是4或5。
在一个优选的实施方案中，该接头的该肽序列包括寡甘氨酸序列(“标签”)或由其组成，表示为Gn或Glyn，其中n是1至21，并且优选地n是1、2、3、4或5。
在一个优选的实施方案中，该接头的该肽序列包括分选酶识别基序的特异性裂解产生的肽基序以及寡甘氨酸序列，或由分选酶识别基序的特异性裂解产生的肽基序，以及寡甘氨酸序列组成，其优选地选自由以下项构成的组中：-LPXTGn-、-LPXAGn-、-LPXSGn-、-LAXTGn-、-LPXTGn-和-NPQTGn-，其中X是任何氨基酸，优选地X是E或Q，并且其中n是1至21，并且优选地n是1、2、3、4或5。在一个优选的实施方案中，该接头的该肽序列包括-LPXTGn-或由其组成，其中X是任何氨基酸，优选地X是E或Q，并且其中n是1至21，并且优选地n是1、2、3，4或5。
在蒽环类药分子具有式(i)的一个实施方案中，优选的是，接头还包括NH2-(CH2)m-NH2形式的烷基二氨基，其中m≥1且≤11，优选地m＝2。在该实施方案中，优选的是，NH2-(CH2)m-NH2的一个氨基直接连接在式(i)的波形线处以形成酰胺键。
在蒽环类药分子具有式(i)并且接头另外包括NH2-(CH2)m-NH2形式的烷基二氨基，其中m≥1且≤11，优选地m＝2的另一个实施方案中，一个氨基可以通过接头元件L1连接到式(i)的波形线。
此外，优选的是，该烷基二氨基的第二氨基连接到寡肽接头，该寡肽接头更优选地是寡甘氨酸(Glyn)。优选地，寡甘氨酸具有1至21个甘氨酸残基(即，n是1至21)，优选地具有1、2、3、4或5个氨基酸的长度。
图2中给出了本发明的ADC的某些非限制性实施方案的直观图示。
在另一个实施方案中，该接头还可包括至少一个其他可裂解或不可裂解的接头，其优选选自由以下项构成的组中：肼接头、硫脲接头、自毁式(self-immolative)接头、琥珀酰亚胺基反式-4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)接头、二硫化物接头、硒醚接头、酰胺接头、硫醚接头和/或马来酰亚胺接头。
所属领域中的技术人员理解，其他接头可能是合适的。该接头可以是不可裂解的，或者可以通过pH、氧化还原电势或特定的细胞内/细胞外酶的变化来裂解。可裂解的寡肽接头包括蛋白酶或基质金属蛋白酶可裂解的接头。应理解，该接头可以包括以上的组合。例如，该接头可以是缬氨酸-瓜氨酸PAB接头。
涉及药物抗体比率(DAR)的本发明方面
在一个优选的实施方案中，设计成具有连接到每个轻链恒定区C-端的蒽环类药分子的本发明的ADC的抗体与有效负载之间的化学计量比是1到≤2，优选地是1.75到≤2，更优选地是1.9到≤2之间的任何值。该比率也可以称为药物与抗体之间的比率(“DAR”)。确定DAR的方法是技术人员公知的，并且包括使用反相色谱法或HPLC-MS的方法。应理解，分选酶介导的转肽反应不是100％完成的，进而制备具有所述DAR的ADC。
在ADC包括其他非蒽环类药毒素的实施方案中，DAR可以是1到≤4之间的任何值。
在一个优选的实施方案中，设计成具有连接到仅一个轻链恒定区C-端的蒽环类药分子的本发明的ADC的抗体与有效负载之间的化学计量比是0.5到≤1，优选地是0.75到≤1，更优选地是0.9到≤1之间的任何值。
与功能性质有关的本发明的方面
在一个实施方案中，本发明涉及一种抗体药物缀合物(ADC)，包括
抗体或保留靶结合性质的抗体片段或衍生物，该抗体或抗体片段或衍生物包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
基于蒽环类药的小分子，
其中该蒽环类药分子排他地连接到该抗体、片段或衍生物的轻链恒定区C-端，并且
其中该基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到该抗体、片段或衍生物，
其中该ADC表现出改善的体内耐受性，优选地相对于具有相同数量和类型的蒽环类药分子但其中的蒽环类药分子连接到重链恒定区C-端或者重链和轻链恒定区C-端的混合物的可比较的(comparable)ADC。
相对于本实施方案，耐受性优选地相对于在给定剂量下小鼠模型中7到14天的死亡率来进行评估。相对于本实施方案，耐受性优选地使用2.5到40mg/kg的ADC剂量来评估。
尽管可比较的ADC呈现非常相似的体外细胞杀灭活性，出乎意料的是，在两个相同剂量水平下，与排他地连接到重链或者连接到重链和轻链这两者的可比较的ADC相比(较低水平导致每5只小鼠中死亡1只，而较高水平导致每5只小鼠中死亡5只)，蒽环类药排他地连接到抗体的轻链的ADC没有显示出体内死亡率(参见表5)。类似地，在单独的实验中，蒽环类药排他地连接在轻链处的ADC的耐受剂量与毒素仅连接到重链或者连接到重链和轻链的ADC相比要高得多。显然，较高的耐受性作为可安全地施用于患者的量的量度对药物是有益的。
在一个实施方案中，本发明涉及一种抗体药物缀合物(ADC)，包括
抗体或保留靶结合性质的抗体片段或衍生物，该抗体或抗体片段或衍生物包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
基于蒽环类药的小分子，
其中该蒽环类药分子排他地连接到该抗体、片段或衍生物的轻链恒定区C-端，并且
其中该基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到该抗体、片段或衍生物，
其中该ADC相对于具有相同数量和类型的蒽环类药分子但其中的蒽环类药分子连接到重链恒定区C-端或者连接至重链和轻链恒定区C-端的混合物的可比较的ADC，表现出改善的体内治疗指数。该治疗指数是引起治疗效果的治疗剂的量与引起毒性的量之间的比较。本发明出乎意料地表明，在相同剂量下，与连接到重链C-端相比，连接到轻链C-端的相同量的毒素呈现出更高的体内功效(参见图9)。
在一个实施方案中，本发明涉及一种抗体药物缀合物(ADC)，包括
抗体或保留靶结合性质的抗体片段或衍生物，该抗体或抗体片段或衍生物包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
基于蒽环类药的小分子，
其中该蒽环类药分子排他地连接到该抗体、片段或衍生物的轻链恒定区C-端，并且
其中该基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到该抗体、片段或衍生物，
其中对于相同的治疗功效，该ADC需要降低的给药频率和/或降低的体内剂量，优选地相对于具有相同数量和类型的蒽环类药分子但其中的蒽环类药分子连接到重链恒定区C-端或者连接到重链和轻链恒定区C-端的混合物的可比较的ADC。
在一个实施方案中，本发明涉及一种抗体药物缀合物(ADC)，包括
抗体或保留靶结合性质的抗体片段或衍生物，该抗体或抗体片段或衍生物包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
基于蒽环类药的小分子，
其中该蒽环类药分子排他地连接到该抗体、片段或衍生物的轻链恒定区C-端，并且
其中该基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到该抗体、片段或衍生物，
其中该ADC展现降低的疏水性，优选地相对于具有相同数量和类型的蒽环类药分子但其中的蒽环类药分子连接到重链恒定区C-端或者连接到重链和轻链恒定区C-端的混合物的可比较的ADC。所述疏水性的降低可以改善ADC的处理和配制。
药物组合物
在一些相关方面中，本发明提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的本文所述的抗体药物缀合物以及药学上可接受的载体。
该药学上可接受的载体可以是适于施用于人或兽医受试者的一种或多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂、其他赋形剂或包囊物质(例如生理上可接受的载体或药学上可接受的载体)。术语“载体”表示与活性成分结合以促进活性成分的使用，例如向受试者给药活性成分的天然或合成的有机或无机成分。当组合物中存在多种药学上可接受的载体时，该药学上可接受的载体可以与一种或多种活性成分例如杂合分子以及与彼此以不实质损害预期药物功效的方式共混在一起。药学上可接受的材料通常能够施用于受试者例如患者，而不会产生明显的不良生理作用，例如恶心、头晕、皮疹或胃部不适。例如，这能够理想地使得包括药学上可接受载体的组合物在出于治疗目的施用于人类患者时不具有免疫原性。
本发明的药物组合物可以另外包括适当的缓冲剂，包括例如盐中的乙酸、盐中的柠檬酸、盐中的硼酸和盐中的磷酸。所述组合物还可以任选地包括适当的防腐剂，例如苯扎氯铵、氯丁醇、对羟基苯甲酸酯和硫柳汞。本发明的药物组合物可以以单位剂型存在，并且可以通过任何适当的方法制备，其中许多方法在药学领域是公知的。该方法包括使本发明的抗体或抗原结合片段与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，该组合物通过将活性剂与液体载体、细分的固体载体或这两者均匀且紧密地结合，然后，如果需要，将产品成型来制备。
适于肠胃外施用的组合物方便地包括本发明组合物的无菌水性制剂，其优选地与接受者的血液等渗。该水性制剂可以根据已知方法使用适当的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。该无菌注射制剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的不挥发性油，例如合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸例如油酸可以用于制备注射剂。适用于口服、皮下、静脉内、肌内等施用的载体制剂可以参见《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，麦克出版有限公司(Mack Publishing Co.)，宾夕法尼亚州伊斯顿。
本发明的药物组合物的制备及其各种施用途径可以按照所属领域中公知的方法进行。可用于本发明的上下文中的递送系统包括时间释放、延迟释放和持续释放的递送系统，使得本发明组合物的递送发生在要治疗部位的致敏之前，并且有足够的时间引起其致敏。本发明的组合物可以与其他治疗剂或疗法结合使用。该系统可以避免本发明组合物的重复施用，从而增加了受试者和医师的便利性，并且可以特别适于本发明的某些组合物。
许多类型的释放递送系统是可用的，并且是所属领域中的普通技术人员已知的。适当的释放递送系统包括聚合物基系统，例如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己酸内酯、聚酰胺酯、聚原酸酯、聚羟丁酸和聚酸酐。前述含聚合物的药物的微胶囊描述于例如美国专利5,075,109中。递送系统还包括非聚合物系统，所述非聚合物系统是脂质，包括固醇，例如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸，或中性脂肪，例如甘油一酯-二酯和甘油三酯；水凝胶释放系统；硅橡胶(sylastic)系统；肽基系统；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形剂的压制片剂；部分融合型植入物；以及类似物。具体示例包括但不限于：(a)其中的活性组合物以某种形式被包括在基质内的侵蚀系统，例如美国专利4,452,775、4,667,014、4,748,034和5,239,660中所述的基质内；(b)其中的活性成分以受控速率从聚合物中渗透的分散系统，例如美国专利3,832,253和3,854,480中所述。此外，可以使用基于泵的硬件递送系统，其中一些适于植入。
通常，将本发明的ADC或药物组合物适当地包装在例如小瓶、小袋、安瓿和/或适于治疗方法的任何容器中。组分可以以浓缩物(包括冻干组合物)的形式提供，可以在使用前进一步稀释，或者可以在使用浓度下提供。为了在体内使用本发明的ADC，可以在具有预期量和浓度的组分的无菌容器中提供单剂量。
通过生产ADC的手段和方法获得的ADC
根据第一方面，本发明涉及一种抗体药物缀合物(ADC)，包括
-抗体或保留靶结合性质的抗体片段或衍生物，该抗体或抗体片段或衍生物包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
-基于蒽环类药的小分子，
其中该蒽环类药分子排他地连接到该抗体、片段或衍生物的轻链恒定区C-端，并且
-其中该基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到该抗体、片段或衍生物。
在一个实施方案中，本发明的抗体药物缀合物可以通过以下项的位点特异性分选酶介导的缀合获得：
a)在轻链C-端带有分选酶识别基序的抗体或片段或衍生物，以及
b)一个或多个基于蒽环类药的小分子，每个所述小分子带有寡甘氨酸标签。
本发明还涉及一种产生本发明的ADC的方法，该方法包括以下步骤：
a)提供在轻链C-端带有分选酶识别基序的抗体或抗体衍生物，
b)提供一个或多个基于蒽环类药的小分子，每个小分子带有寡甘氨酸标签，以及
c)通过使用识别所述分选酶识别基序的分选酶进行分选酶介导的缀合，使该抗体或抗体衍生物与一个或多个基于蒽环类药的小分子缀合。
优选地，在本文讨论的所有实施方案中，分选酶识别基序排他地提供在轻链C-端处。
重要的是要理解，在本文所讨论的所有实施方案中(使用化脓链球菌分选酶A)，寡甘氨酸Glyn可以任选地被寡丙氨酸Alan取代。
所有先前提及的关于抗体或片段或衍生物、基于蒽环类药的小分子、接头和分选酶的限制，以及本文中提及的任何其他限制，代表了涉及本发明ADC的实施方案的优选实施方案通过位点特异性分选酶介导缀合和制备ADC的方法获得。
医疗用途和治疗方法
本发明进一步涉及本文所述的ADC，其用于治疗患有、有风险发展出和/或被诊断为肿瘤性疾病的受试者。
本发明还涉及如本文所述的ADC，其用于治疗患有、有风险发展出和/或被诊断为免疫疾病或病症的受试者。或者，提供了一种用于治疗患有、有风险发展出和/或被诊断为肿瘤性疾病的患者的方法，所述方法包括以治疗有效量或剂量施用根据以上描述的抗体药物缀合物。
本文中使用的术语“医治”或“治疗”并不一定意味着100％或完全治疗。而是，所属领域中的普通技术人员认识到具有潜在益处或治疗效果的不同程度的治疗。在这方面，本发明的方法可以提供任何量的任何水平的治疗。此外，通过本发明方法提供的治疗可以包括治疗被治疗疾病的一种或多种病症或症状。确切地说，该治疗可以以静脉内输注的方式施用。
在一个实施方案中，ADC以单一疗法的方式施用。在一个替代实施方案中，ADC与其他治疗剂一起或并行地施用。
具体地说，ADC的施用剂量为约0.1-20mg/kg。
术语“受试者”是指人和非人动物(特别是非人哺乳动物)，并且优选地是人类动物。
实施例
尽管本发明已经在附图和以上描述中详细地图示和描述了，但是所述图示和描述应被视作说明性或示例性的而非限制性的；本发明不限于所公开的实施方案。通过研究附图、公开内容和所附权利要求，所属领域中的技术人员在实践所要求保护的本发明时可以理解和实现所公开的实施方案的其他变型。权利要求书中的词语“包括”不排除其他元件或步骤，并且不定冠词“一个”或“一种”不排除多个。在互不相同的从属权利要求中记载某些措施的事实并不表示不能有利地使用这些措施的组合。权利要求中的任何附图标记都不应被解释为限制范围。
本文公开的所有氨基酸序列从N-端至C-端示出(图1除外，其中所述方向被图示成C-端至N-端)；本文公开的所有核酸序列均示成5'->3'。
实施例1：抗体表达和纯化
表达载体：对上述确定的结合人CS1的Fab序列进行针对人表达的密码子优化；可变结构域由GenScript(美国皮斯卡塔维)合成为DNA，并且包括在含有适当限制位点和适当恒定结构域的表达载体中(根据针对HEK293T细胞中的表达的Waldmeier等人，2016年的文章以及根据针对CHO细胞的表达的Beerli等人，2015年的文章)。
HEK表达和纯化：
使用带有PLUSTM试剂的LTX试剂(Thermo Fisher Scientific，瑞士雷娜可，15388100)将表达载体转染入HEK293T细胞中；孵育1天后(37℃，5％CO2，生长培养基：杜比克改性伊格尔培养基(DMEM)高葡萄糖(4.5g/l)与L-谷氨酰胺和10％(v/v)胎牛血清(FCS)，100IU/mL青霉素-链霉素-两性霉素和2mM L-谷氨酰胺(均为Bioconcept，Allschwil，瑞士))，细胞在选择条件下(2μg/mL嘌呤霉素(Sigma-Aldrich，Buchs SG，瑞士，P8833-25 mg储备液(浓度为2mg/mL))扩增。细胞被分拆并进一步扩增(37℃，5％CO2)；一旦达到汇合，就在37℃下用20μg/ml聚-L-赖氨酸(Sigma-Aldrich，P1524)包被组织培养皿2小时，并用PBS洗涤两次。然后，将细胞胰蛋白酶化，并以1:3的比例分拆到聚-L-赖氨酸包被板上。达到汇合后，用PBS洗涤细胞，然后将培养基替换成补充有1μg/mL嘌呤霉素(Sigma，P8833)、100IU/mL青霉素-链霉素-两性霉素(Bioconcept)、161μg/mL的N-乙酰基-L-半胱氨酸(Sigma-Aldrich，A8199)和10μg/mL的还原型L-谷胱甘肽(Sigma-Aldrich，G6529)的生产培养基(DMEM/F-12，Gibco/Thermo Fisher Scientific，31330-03)。将上清液每两周收获一次并过滤(0.22μm)以除去细胞，然后保存在4℃下直至纯化。
为了纯化，将过滤的上清液加载到PBS平衡的蛋白A柱上，并用PBS洗涤；在pure(GE Healthcare)上使用0.1M甘氨酸(pH 2.5)进行洗脱。立即用1M Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)中和各个级分，并通过SDS-PAGE分析蛋白质纯度和完整性。合并含蛋白质的级分，并使用Amicon过滤装置(Millipore，瑞士沙夫豪森，UFC901008)进行缓冲液交换，以达到1:100的稀释度，然后使用低保留滤器(0.20μm，Carl Roth，德国喀尔斯鲁俄，PA49.1)进行无菌过滤。
CHO表达和纯化：将编码全长重链和轻链中的每一者的表达载体组装在哺乳动物表达载体中。通过所属领域中已知的方法在CHO细胞中瞬时表达抗体，并且通过所属领域中已知的通过来自CHO细胞上清液的标准蛋白A纯化来纯化重组抗体。简而言之，在使用蛋白A柱进行基于FPLC的亲和纯化之前，通过离心分离来收集CHO细胞上清液并进行无菌过滤(0.2μm)。将结合的抗体在0.1M甘氨酸(pH 2.5到3.5)中洗脱，并立即用1M Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中和。如所属领域已知的方法(例如透析或TFF)进行缓冲液交换至所需的最终制剂缓冲液。通过SDS-PAGE、SEC和MS分析重组抗体的纯度和完整性。
表2.示例的抗体氨基酸序列
表3列出了用于后续实施例中的抗体批次的表达和纯化的方案，以及它们的最终浓度和缓冲液。
表3.用于表达和纯化的实施例中抗体批次的方案
分选酶A。如WO2014140317A1中所公开，在大肠杆菌中产生了来自金黄色葡萄球菌的重组和亲和纯化的分选酶A酶。
产生甘氨酸修饰的毒素。由Concortis/Levena生产五甘氨酸修饰的EDA-蒽环类药衍生物(G5-PNU)、三甘氨酸修饰的EDA-蒽环类药衍生物(G3-PNU)和二甘氨酸修饰的EDA-蒽环类康生物衍生物(G2-PNU)(分别如图3(A)、(B)和(C)所示)。通过质谱和HPLC确认甘氨酸修饰的毒素的定性和纯度。如通过HPLC色谱图中的单个峰所示，每种Gly修饰的毒素均具有>95％的纯度。
分选酶介导的抗体缀合。通过在缀合缓冲液(50mM HEPES、pH 7.5、1mM CaCl2、150mM NaCl、10体积％甘油)中将标记的mAbs[10μM]与甘氨酸修饰的毒素[200μM]和3-4μM分选酶A一起孵育，按照表4将上述毒素与抗体在25℃下缀合至少3.5小时。通过使其通过蛋白A柱(rProtein AGravitrap柱，GE Healthcare)来终止反应。用5个柱体积的洗脱缓冲液(0.1M甘氨酸，pH 2.5，50nM NaCl)洗脱结合缀合物，将1个柱体积的级分收集到含有25％v/v 1M Tris-或HEPES(pH 8)碱的试管中以中和酸。在表4的配制缓冲液中合并并配制含蛋白质的级分。
ADC分析。DAR通过在Polymer Labs PLRP 2.1mm x 5cm，5μm色谱柱段上以1mL/min/80℃，以介于0.05至0.1％TFA/H2O与0.04到0.1％TFA/CH3CN之间的25分钟线性梯度执行反相色谱法来进行评估。首先通过在37℃下于pH 8.0的DTT中孵育15分钟来还原样品。下表4中汇总了通过反相色谱法确定的DAR。
表4.用于生成实施例中使用的ADC的方案
实施例2：
所有耐受性评估均在Aurigon进行。将表5的ADC(以PBS中配制)在14天中(第1天和第8天，通过推注静脉内使用)以指定剂量两次施用至五只CD-1雌性小鼠(5-6周龄；来自德国苏尔兹菲尔德查尔斯河实验室)。将小鼠分成每笼5只动物饲养，并提供任意获取的水和饲料。在整个研究中每天两次地监测参数，包括死亡率和笼侧临床观察。
表5.用ADC处理的小鼠的死亡率
表5的结果表明，相对于用包括位于重链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC(Tras-HC-PNU)或者用包括位于重链和轻链C-端这两者处的蒽环类药有效负载的ADC(Tras-PNU)治疗的小鼠而言，用包括位于轻链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC(Tras-LC-PNU)治疗的小鼠在同等ADC剂量下的死亡率要低得多。
实施例3：
在第1天(通过推注静脉内施用)以指定剂量将表6的ADC(在PBS中配制)施用至三只CD-1雌性小鼠(4-6周龄；来自德国苏尔兹菲尔德查尔斯河实验室)并观察14天(2.5和5mg/kg剂量)或28天(10、15和20mg/kg剂量)。将小鼠分成每笼3只动物饲养，并任意获取的水和饲料。在整个研究中每天两次地监测参数，包括死亡率和笼侧临床观察。
表6.用ADC处理的小鼠的死亡率
表6的结果表明，与用包括位于轻链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC(Tras-LC-PNU)治疗的小鼠相反，用包括位于重链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC(Tras-HC-PNU)处理的小鼠或者用包括位于重链和轻链C-端这两者处的蒽环类药有效负载的ADC(Tras-PNU)治疗的小鼠的死亡率发生在显著较低的剂量下。
实施例4：
使用HER2阳性人SKBR3细胞系研究表7的靶向HER2的ADC的细胞毒性。HER2阴性人细胞系Karpas-299用作对照。为此，分别在75μL DMEM或RPMI中将每孔5000个SKBR3细胞和每孔5000个Karpas-299细胞接种于96孔板(不包括含水的边缘孔)中，并以6.66×104个细胞/孔的密度补充10体积％的FCS、100IU/mL青霉素-链霉素-两性霉素和2mM L-谷氨酰胺，并在37℃的潮湿培养箱中于5％CO2大气下生长。孵育1天后，将每个ADC以25μL的3.5倍系列稀释液生长培养基的量添加到各自的孔中(起始ADC浓度为80μg/mL，最终ADC浓度范围为20μg/ml到0.89ng/ml)。再过4天后，从培养箱中取出板并平衡至室温。大约30分钟后，将50μL2.0发光溶液(Promega，G9243)添加到每个孔中。在以750rpm摇动平板5分钟，然后在不摇动的情况下孵育10分钟后，在Spark 10M平板阅读器上测量发光，每孔的积分时间为1秒。用Graphpad Prism软件拟合发光相对于ADC浓度(ng/mL)的曲线。表7列出了使用Prism软件的内置“对数(抑制剂)相对于响应-可变斜率(四个参数)”IC50确定功能确定的IC50值。
ADC/细胞类型 SKBR3 Karpas-299
HER2表达状态 阳性 阳性
Tras-HC-PNU(adc668) 1.7 27’000
Tras-LC-PNU(adc669) 1.8 48’000
表7.ADC的体外细胞杀灭(ng/mL)
图4示出了在具有表7ADC的SKBR3和Karpas-299细胞系上进行体外细胞杀灭测定的剂量反应曲线。如此图和此表所示，包括排他地位于重链上或排他地位于轻链上的蒽环类药有效负载的同等ADC具有同等的体外功效。
实施例5：
使用HER2阳性人SKOV3细胞系研究表8的靶向HER2的ADC的细胞毒性。将同等靶向CD30的ADC用作同种型对照。为此，按照实施例4中的方案操作，但是在75μLDMEM中将每孔2’000SKOV3细胞接种于96孔板(不包括含水的边缘孔)中，并以2.66×104个细胞/孔的密度补充10体积％的FCS、100IU/mL青霉素-链霉素-两性霉素以及2mM L-谷氨酰胺。
ADC/细胞类型 SKOV3
HER2表达状态 阳性
Tras-HC-PNU(adc589) 4.4
Tras-LC-PNU(adc588) 4.6
Ac10-HC-PNU(adc782) 10000
Ac10-LC-PNU(adc611) 10000
表8.ADC的体外细胞杀灭(ng/mL)
图5示出了在具有表8ADC的SKOV3细胞系上进行体外细胞杀灭测定的剂量反应曲线。如此图和此表所示，包括排他地位于重链上或排他地位于轻链上的蒽环类药有效负载的同等ADC呈现同等的体外功效和抗原介导。
实施例6：
在第1天(通过推注静脉内施用)以指定剂量将表9的ADC(在PBS中配制)施用至多组三只或六只CD-1雌性小鼠(4-6周龄；来自德国苏尔兹菲尔德查尔斯河实验室)，并且观察7-10天。将小鼠分成每笼3只动物的多个组饲养，并提供任意获取的水和饲料。
在整个研究中每天两次地监测参数，包括死亡率和笼侧临床观察。
表9.用ADC处理的小鼠的死亡率
表9的结果表明，与用包括位于轻链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC治疗的小鼠相反，用包括位于重链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC治疗的小鼠或者用包括位于重链和轻链C-端这两者处的蒽环类药有效负载的ADC治疗的小鼠的死亡率发生在显著较低的剂量下。
实施例7：
将表10的ADC(在PBS中配制)以1mg/kg(通过推注单次静脉内施用)施用给多组15只瑞士雌性远亲后代CD1小鼠(体重21-26g；来自法国圣贝特万(Saint Berthevin)的Janvier实验室；通过简单随机分配分配给各个组)。将小鼠分成每笼3只动物的多个组饲养，并提供任意获取的水和饲料。每个治疗组3只小鼠的多个组在ADC施用后1小时、24小时、3天、7天和14天深麻醉后通过终末放血来安乐死。收集来自给定组和时间点的血清用于ELISA分析。
在涂有2μg/ml huROR1抗原的ELISA板上捕获一系列稀释的血清样品(稀释系数3.5)。用内部开发的小鼠抗PNU mAb(通过用人IgG-PNU缀合物免疫小鼠并用BSA-PNU缀合物筛选而产生)检测结合的ADC，而结合的总IgG用HRP缀合驴抗人IgG的1:2500稀释液来检测(Jackson Immunoresearch，709-035-149)。通过将样品滴定的最大值的一半与已知浓度的相同ADC的样品进行比较，计算ADC和总IgG的血清浓度。图6示出血清浓度随时间变化的曲线；这些如表10所示，使用Prism的AUC函数进行了分析，以确定曲线下的面积(AUC)。
表10.小鼠ADC的曲线下面积(AUC)
表10的结果表明，与用包括位于重链和轻链C-端这两者处的蒽环类药有效负载的ADC，或者用包括位于重链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC治疗的小鼠相比，用包括位于轻链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC治疗的小鼠的暴露(AUC)明显更高。此外，表10列出了包括位于重链C-端处的蒽环类药有效负载的ADC在很大程度上损失了有效负载。
实施例8：
将鼠EMT-6乳腺癌细胞在完全DMEM(杜比克改性伊格尔培养基(DMEM)高葡萄糖(4.5g/L)，含有10％(v/v)胎牛血清(FCS)、100IU/mL青霉素-链霉素-两性霉素和2mM L-谷氨酰胺(所有均来自Bioconcept，Allschwil，瑞士))中在37℃和5％CO2下培养。将细胞以如下方式通过换位来工程改造为过表达ROR1：将细胞离心分离(6分钟，1200rpm，4℃)并重悬于RPMI-1640培养基(5x106个细胞/mL)中。将400μL细胞悬液添加到其中含有13.3μg可转座载体pPB-PGK-Puro-ROR1(引导全长ROR1(NP_005003.2)与嘌呤霉素抗性基因的共表达)和6.6μg含转座酶的载体pCDNA3.1_hy_mPB的400μL RPMI中。将DNA/EMT-6细胞混合物转移至电穿孔比色皿(0.4cm-gap，165-2088，BioRad，瑞士克雷榭(Cressier))中，并使用带有电容扩展器的Biorad Gene Pulser II在300V和950μF下电穿孔。然后，将细胞在室温下孵育5-10分钟。孵育后，将细胞以1200rpm离心分离6分钟，洗涤一次，然后重悬于DMEM中，完全悬浮，然后在37℃的潮湿培养箱中于5％CO2大气下孵育。电穿孔后一天，通过添加3μg/mL嘌呤霉素(Sigma-Aldrich，P8833)选择稳定表达人ROR1的细胞池。表达ROR1的单细胞克隆来自抗生素选择的EMT-6-ROR1细胞。然后将细胞与抗ROR1抗体2A2孵育30分钟(4℃，终浓度2μg/mL)，然后离心分离并洗涤。然后将细胞如前所述重悬，并与抗人IgG抗体(Fcγ特异性)PE(eBioscience，奥地利维也纳，12-4998-82)在黑暗中以1:250稀释液孵育(30分钟，4℃)，将其在缓冲液中洗涤一次并在冰上保存，直到使用FACSAriaII仪器(BD Biocsiences，美国圣何塞)通过FACS对抗原表达细胞进行单细胞分选。通过FACS确定ROR1在以下实验中使用的克隆14上的表达(图7)。
实施例9：
使用实施例8的ROR1过表达EMT6克隆14细胞和CS1阳性L363细胞系研究表11的靶向CS1和靶向ROR1的ADC的细胞毒性。为此，按照实施例4的方案操作，但是在75μL DMEM中接种每孔1000个EMT6克隆14和10000个L363细胞，并以每孔1.3×104个细胞和1.3×105个细胞的密度补充10体积％的FCS、100IU/mL青霉素-链霉素-两性霉素和2mM L-谷氨酰胺。
表11.ADC的体外细胞杀灭(ng/mL)
图8示出了具有表11ADC的ROR1过表达EMT6克隆14细胞和L363细胞的体外细胞杀伤测定的剂量反应曲线。如此图和此表所示，包括排他地位于重链上或排他地位于轻链上的蒽环类药有效负载的同等ADC呈现同等的抗原介导的体外功效。
实施例10：
在ProQinase进行了以下研究。在第0天，将100μl PBS中的1×106个EMT-6-ROR1克隆14个肿瘤细胞(来自实施例8)常位植入每只5-6周龄雌性BALB/c小鼠的乳房脂肪垫中。平均肿瘤体积在第3天达到约30-80mm3(通过卡尺测量)之后，将小鼠根据肿瘤大小各自分成6只动物的组。表12的ADC(在PBS中配制)以指定剂量在第3天施用(通过大丸剂静脉内施用)。供给小鼠任意获取的水和饲料。用卡尺每周两次评估肿瘤体积的演变(每组的平均值和对应于平均值的标准误差的误差条)，该曲线如图9中所示。
ADC 剂量(mg/kg)
载体对照(PBS) -
同种型对照(Ac10-G3-PNU(adc517)) 0.5
hu4-2-17-PNU(adc519) 0.5
hu4-2-17-HC-PNU(adc520) 1.0
hu4-2-17-LC-PNU(adc521) 1.0
表12.常位乳腺癌模型中的ADC剂量
图9的结果表明，仅在重链C-端或仅在轻链C-端包括蒽环类药分子的本发明的ADC在体内基本等效；它们的迹线基本上完全重叠。
根据本文提出的实施例，在轻链C-端包括蒽环类药分子的本发明的ADC在对肿瘤细胞和肿瘤的有效性方面相对于在重链C-端包括蒽环类药分子的ADC是相同的；但是，在轻链C-端包括蒽环类药分子的本发明的ADC在体内表现出显著有利特性，包括耐受性和稳定性。
参考文献
Beerli等人，“具有高体外和体内功效的位点特异性缀合抗体药物缀合物的分选酶酶介导生成”(Sortase Enzyme-Mediated Generation of Site-SpecificallyConjugated Antibody Drug Conjugates with High In Vitro and In Vivo Potency)；《公共科学图书馆：综合》10，e131177，2015。
Chen等人，“利用酵母展示进行键形成酶演变的一般策略”(A general strategyfor the evolution of bond-forming enzymes using yeast display)；《美国国家科学院院刊》(PNAS)，108(28)，2011。
Dorr等人，“对分选酶的特异性的重新编程”(Reprogramming the specificityof sortase enzymes)；PNAS，2014。
Dorywalska等人，“啮齿动物血浆中不可裂解的基于奥利司他汀的接头有效负载的位点依赖性降解及其对ADC功效的影响”(Site-Dependent Degradation of a Non-Cleavable Auristatin-Based Linker-Payload in Rodent Plasma and its Effect onADC Efficacy)；《公共科学图书馆：综合》，2015。
Drake等人，“通过醛标记与HIPS化学缀合来生产位点特异性缀合到不同抗体区域，具有不同体内功效和PK结果的ADC”(Aldehyde Tag Coupled with HIPS ChemistryEnables the Production of ADCs Conjugated Site-specifically to DifferentAntibody Regions with Distinct In vivo Efficacy and PK Outcomes)；《生物缀合化学》(Bioconjugate Chemistry)，25，2014。
Jain等人，“当前ADC接头化学”(Current ADC Linker Chemistry)；《药物研究》，32，2015。
Quintieri等人，“人肝微粒体中奈莫柔比星的主要代谢物PNU-159682的形成和抗肿瘤活性”(Formation and Antitumor Activity of PNU-159682,A Major Metaboliteof Nemorubicin in Human Liver Microsomes)；《临床癌症研究》，11，2005。
Spirig等人，“革兰氏阳性细菌中的分选酶”(Sortase enzymes in Gram-positive bacteria)；《分子微生物学》，82(5)，2011。
Strop等人，“位置问题：缀合位点可调节抗体药物缀合物的稳定性和药代动力特性”(Location Matters:Site of Conjugation Modulates Stability andPharmacokinetics of Antibody Drug Conjugates)；《化学与生物学》(Chemistry&Biology)，20，2013。
Waldmeier等人，“Transpo-mAb展示：转座介导的B细胞展示和全长IgG抗体库的功能筛选”(Transpo-mAb display:Transposition-mediated B cell display andfunctional screening of full-length IgG antibody libraries)；mAbs，8(4)，2016。
Swindells等人，“abYsis：整合的抗体序列和结构管理、分析和预测”(abYsis:Integrated Antibody Sequence and Structure-Management,Analysis,andPrediction)；《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.)，429，356–364，2017。
序列
以下序列构成本申请公开内容的一部分。本申请中还提供了与WIPO ST 25兼容的电子序列表。为避免疑问，如果下表中的序列与电子序列表之间存在差异，则该表中的序列应被视为正确的序列。
氨基酸序列(恒定结构域带下划线，CDR基于使用abYsis软件的Kabat系统鉴定，Swindells等人，2017年，粗体)HC：重链，LC：轻链
序列表
<110> 恩比伊治疗股份公司
<120> 具有高体外耐受性的抗体药物缀合物
<130> ND 40653
<160> 21
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >曲妥珠单抗 HC (K467R 突变)
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Arg
450
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >曲妥珠单抗 LC
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 3
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >曲妥珠单抗 HC
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 4
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >hu4-2-17 HC
<400> 4
Gln Val Gln Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Gly Ile Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp His Pro Thr Tyr Gly Met Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 5
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >hu4-2-17 LC
<400> 5
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Glu Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ala Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Tyr Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 6
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >hu4-2-17 HC (K467R 突变)
<400> 6
Gln Val Gln Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Gly Ile Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp His Pro Thr Tyr Gly Met Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Arg
435 440 445
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<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >huERCS-409 HC
<400> 7
Glu Gln Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Ile Ile Gly Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Arg Leu Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Tyr Gly Asp Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
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Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
<210> 8
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >huERCS-409 LC
<400> 8
Asp Gln Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ala Ser Pro Asn Gly Trp
85 90 95
Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 9
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >huERCS-409 HC (K467R 突变)
<400> 9
Glu Gln Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Ile Ile Gly Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Arg Leu Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
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85 90 95
Arg Tyr Tyr Gly Asp Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Arg
435 440 445
<210> 10
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >Ac10 HC
<400> 10
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 11
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >Ac10 LC
<400> 11
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 12
Leu Pro Xaa Thr Gly
1 5
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 13
Leu Pro Xaa Ala Gly
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 14
Leu Pro Xaa Ser Gly
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 15
Leu Ala Xaa Thr Gly
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 16
Leu Pro Xaa Thr Ala
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 17
Asn Pro Gln Thr Gly
1 5
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 18
Asn Pro Gln Thr Asn
1 5
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 19
Leu Pro Leu Thr Gly
1 5
<
210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 20
Leu Ala Phe Thr Gly
1 5
<210> 21
<211> 5
<212> PRT<213> 人工序列
<220>
<223> >分选酶识别标签
<400> 21
Leu Pro Asn Thr Ala
1 5

Claims (18)

1.一种抗体药物缀合物(ADC)，包括：
·抗体或保留靶结合性质的抗体片段，所述抗体或抗体片段包括至少一个轻链恒定区C-端，以及
·基于蒽环类药的小分子，
其中所述蒽环类药分子排他地连接到所述抗体或抗体片段的所述轻链恒定区C-端，并且
其中所述基于蒽环类药的小分子通过包括肽序列的接头连接到所述抗体或抗体片段，
其中所述基于蒽环类药的小分子为PNU-159682，其包括式(i)的结构
2.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或抗体片段结合抗原，所述抗原
·是肿瘤特异性的，或
·在肿瘤组织上的表达率高于在健康组织上的表达率。
3.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或抗体片段不结合人和/或小鼠CS1。
4.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中，基于Kabat编号，所述抗体或抗体片段包括hu4-2-17的CDR，
HC CDR1：SYYMS
HC CDR2：AIGISGNAYYASWAKS
HC CDR3：DHPTYGMDL
LC CDR1：EGNNIGSKAVH
LC CDR2：DDDERPS，以及
LC CDR3：QVWDSSAYV
并且其中所述CDR包括在适当蛋白质框架中，以便能够结合到所述抗体的靶标。
5.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中，基于Kabat编号，所述抗体或抗体片段包括huERCS-409的CDR，
HC CDR1：SYGVI
HC CDR2：IIGSSGNTYYASSVKG
HC CDR3：YYGDSGFDS
LC CDR1：RASQSIGSWLS
LC CDR2：GASNLAS，以及
LC CDR3：LGASPNGWA
并且其中所述CDR包括在适当蛋白质框架中，以便能够结合到所述抗体的靶标。
6.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或抗体片段包括由以下项构成的列表中的至少一个：
·根据SEQ ID NO.1/2的曲妥珠单抗的可变结构域，
·根据SEQ ID NO.4/5的hu4-2-17的可变结构域，以及/或者
·根据SEQ ID NO.7/8的huERCS-409的可变结构域。
7.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中至少一个基于蒽环类药的小分子不是多柔比星。
8.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述接头的所述肽序列包含或由分选酶识别基序的特异性裂解产生的肽基序组成。
9.根据权利要求8所述的抗体药物缀合物，其中所述接头的所述肽序列包括或由表示为Gn或Glyn的寡甘氨酸序列组成，其中n是1至21。
10.根据权利要求9所述的抗体药物缀合物，其中n是1、2、3、4或5。
11.根据权利要求9所述的抗体药物缀合物，其中所述接头还包括NH2-(CH2)m-NH2形式的烷基二氨基，其中m≥1且≤11。
12.根据权利要求11所述的抗体药物缀合物，其中m＝2。
13.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述接头还包括至少一个其它可裂解或不可裂解的接头，所述接头选自由以下项构成的组中：肼接头、硫脲接头、自毁式接头、琥珀酰亚胺基反式-4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)接头、二硫化物接头、硒醚接头、酰胺接头、硫醚接头和/或马来酰亚胺接头。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的抗体药物缀合物，其具有1到≤2之间的任何值的(i)抗体或抗体片段与(ii)基于蒽环类药的小分子之间的化学计量比。
15.一种药物组合物，其包括治疗有效量的权利要求1-12中任一项所述的抗体药物缀合物和药学上可接受的载体。
16.一种抗体药物缀合物，其通过以下项的位点特异性分选酶介导的缀合获得：
a)排他地在轻链C-端带有分选酶识别基序的抗体或抗体片段，以及
b)一个或多个基于蒽环类药的小分子，每个所述小分子带有寡甘氨酸标签，
其中所述基于蒽环类药的小分子为PNU-159682，其包括式(i)的结构
17.一种产生根据权利要求1-12中任一项所述的抗体药物缀合物的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供在所述轻链C-端带有分选酶识别基序的抗体或抗体片段，
b)提供一个或多个基于蒽环类药的小分子，每个所述小分子带有寡甘氨酸标签，以及
c)通过使用识别所述分选酶识别基序的分选酶进行分选酶介导的缀合，使所述抗体或抗体片段与所述一个或多个基于蒽环类药的小分子缀合。
18.根据权利要求1-12中任一项所述的抗体药物缀合物的用途，其用于制备用于治疗肿瘤性疾病的药物。
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ZA (1) ZA202000480B (zh)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3272864A1 (en) 2016-07-20 2018-01-24 Paul Scherrer Institut Solid-phase immobilization of microbial transglutaminase mtg on microbeads for protein conjugation
GB201710836D0 (en) 2017-07-05 2017-08-16 Ucl Business Plc ROR1 Car T-Cells
GB201710838D0 (en) 2017-07-05 2017-08-16 Ucl Business Plc Bispecific antibodies
GB201710835D0 (en) 2017-07-05 2017-08-16 Ucl Business Plc ROR1 Antibodies
CN111133002B (zh) 2017-08-07 2024-05-24 恩比伊治疗股份公司 具有高体内耐受性的基于蒽环类药的抗体药物缀合物
KR102697329B1 (ko) 2017-09-19 2024-08-23 폴 슈레 앙스띠뛰 트랜스글루타미나제 컨쥬게이션 방법 및 링커
EP3636284A1 (en) * 2018-10-11 2020-04-15 NBE Therapeutics AG Binding protein-toxin conjugates comprising anthracyclines, and use thereof in immune-oncological applications
CN113613679A (zh) * 2019-03-19 2021-11-05 保罗·谢勒学院 基于甘氨酸的接头的转谷氨酰胺酶缀合方法
EP4232095A1 (en) 2020-10-25 2023-08-30 Araris Biotech AG Means and methods for producing antibody-linker conjugates
EP4263590A1 (en) 2020-12-21 2023-10-25 Allogene Therapeutics, Inc. Protease-activating cd45-gate car
IL303853A (en) 2021-01-29 2023-08-01 Allogene Therapeutics Inc Knockdown or knockout of one or more TAP2, NLRC5, B2m, TRAC, RFX5, RFXAP, and RFXANK to reduce T cell recognition of allogeneic cell products
KR20240109617A (ko) 2021-10-28 2024-07-11 라이엘 이뮤노파마, 인크. Ror1-결합 단백질을 발현하는 세포를 배양하는 방법
US20240042030A1 (en) 2022-07-29 2024-02-08 Allogene Therapeutics, Inc. Engineered cells with reduced gene expression to mitigate immune cell recognition
WO2024064952A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing nr4a-deficient cells overexpressing c-jun
WO2024064958A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing nr4a-deficient cells
WO2024077174A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing nr4a-deficient cells

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016102679A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Nbe-Therapeutics Ag Binding protein drug conjugates comprising anthracycline derivatives
WO2016127081A1 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
WO2003016484A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Affymetrix, Inc. Gleason grade 4/5 prostate cancer genes
MX359371B (es) 2001-11-13 2018-09-25 Univ Pennsylvania Un metodo para detectar y/o identificar secuencias del virus adeno-asociado y aislamiento de secuencias novedosas identificadas de ese modo.
US7649015B2 (en) 2002-04-26 2010-01-19 Gilead Sciences, Inc. Cellular accumulation of phosphonate analogs of HIV protease inhibitor compounds
US20050025763A1 (en) * 2003-05-08 2005-02-03 Protein Design Laboratories, Inc. Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
US7709610B2 (en) * 2003-05-08 2010-05-04 Facet Biotech Corporation Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
MXPA06011538A (es) 2004-04-06 2007-01-26 Univ California Tirosina cinasa de receptor huerfano como un objetivo en cancer de mama.
WO2008103849A2 (en) 2007-02-21 2008-08-28 The Regents Of The University Of California Methods and compounds for lymphoma cell detection and isolation
WO2007051077A2 (en) 2005-10-28 2007-05-03 The Regents Of The University Of California Methods and compounds for lymphoma cell detection and isolation
WO2007146957A2 (en) 2006-06-13 2007-12-21 Irm Llc Ror1 as a therapeutic target for lung cancer
US20110008347A1 (en) 2006-12-01 2011-01-13 Agency For Science ,Technology And Research Cancer-related protein kinases
WO2008076868A2 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Abbott Laboratories Methods and compositions related to modulation of receptor tyrosine kinase orphan receptor-1 (ror-1)
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
EP2240495B1 (en) 2008-02-01 2015-07-15 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
KR100994996B1 (ko) 2008-08-06 2010-11-18 한국과학기술연구원 페난트렌 노출 여부 확인용 바이오마커 및 이를 이용한확인 방법
EP2421899B1 (en) 2009-04-23 2016-06-08 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Anti-human ror1 antibodies
WO2011054007A1 (en) 2009-11-02 2011-05-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Ror1 as therapeutic and diagnostic target
EP2496690A4 (en) 2009-11-05 2013-07-24 Sloan Kettering Inst Cancer CATENAE: SERIOUS CANCER STEM CELLS
KR20120094098A (ko) 2009-12-07 2012-08-23 유니버시티 오브 조지아 리서치 파운데이션, 인코포레이티드 피리디논 하이드록시사이클로펜틸 카복사미드: 치료 용도의 ｈｉｖ 인테그라제 억제제
ES2635316T3 (es) 2009-12-18 2017-10-03 Kancera Ab Anticuerpos contra ROR1 que pueden inducir muerte celular de LLC
US9242014B2 (en) 2010-06-15 2016-01-26 The Regents Of The University Of California Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) single chain Fv antibody fragment conjugates and methods of use thereof
WO2012012695A2 (en) 2010-07-23 2012-01-26 Fred Hutchinson Cancer Research Center A method for the treatment of obesity
EP3828205A1 (en) 2010-10-01 2021-06-02 Oxford BioTherapeutics Ltd Anti-ror1 antibodies
EP2646469B1 (en) 2010-12-01 2017-11-01 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Chimeric rabbit/human ror1 antibodies
RU2563638C2 (ru) 2010-12-02 2015-09-20 НЕРВИАНО МЕДИКАЛ САЙЕНСИЗ С.р.л. Способ получения производных морфолинилантрациклина
GB201020995D0 (en) 2010-12-10 2011-01-26 Bioinvent Int Ab Biological materials and uses thereof
DK2663579T3 (en) 2011-01-14 2017-07-31 Univ California THERAPEUTIC ANTIBODIES AGAINST ROR-1 PROTEIN AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
US20130131139A1 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Oregon Health & Science University Ror1 as a gene target in acute lymphoblastic leukemia
SI2692865T1 (sl) 2012-07-30 2015-03-31 Nbe-Therapeutics Llc Technology Parc Basel S transpozicijo posredovana identifikacija specifičnih vezavnih ali funkcionalnih proteinov
DK2884999T3 (da) 2012-08-20 2021-01-04 Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Res Inst Fremgangsmåde og sammensætninger til cellulær immunterapi
AU2013306390B2 (en) 2012-08-24 2018-07-05 The Regents Of The University Of California Antibodies and vaccines for use in treating ROR1 cancers and inhibiting metastasis
US10786532B2 (en) 2012-10-02 2020-09-29 Versiti Blood Research Institute Foundation, Inc. Method of providing cellular therapy using modified natural killer cells or T lymphocytes
EP2777714A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-17 NBE-Therapeutics LLC Method of producing an immunoligand/payload conjugate by means of a sequence-specific transpeptidase enzyme
EP2789630A1 (en) 2013-04-09 2014-10-15 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3e and ROR1
WO2015113110A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 University Of Western Sydney A method for the purification of eye lens cells
CN106163547A (zh) 2014-03-15 2016-11-23 诺华股份有限公司 使用嵌合抗原受体治疗癌症
KR102509481B1 (ko) 2014-04-10 2023-03-10 시애틀 칠드런즈 호스피탈 디/비/에이 시애틀 칠드런즈 리서치 인스티튜트 규정된 조성물 유전자 변형된 t-세포 생성물
RU2741899C2 (ru) 2014-04-25 2021-01-29 Блубёрд Био, Инк. Улучшенные способы производства средств адоптивной клеточной терапии
TN2016000525A1 (en) 2014-05-29 2018-04-04 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
ES2876925T3 (es) 2014-07-29 2021-11-15 Cellectis Receptores de antígeno quiméricos específicos para ROR1 (NTRKR1) para inmunoterapia contra el cáncer
EP3194432B1 (en) 2014-07-31 2019-04-10 Cellectis Ror1 specific multi-chain chimeric antigen receptor
EP3699188A1 (en) 2014-09-04 2020-08-26 Cellectis 5t4 (tpbg) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
AU2015329966A1 (en) 2014-10-09 2017-04-27 Engmab Sàrl Bispecific antibodies against CD3epsilon and ROR1 for use in the treatment of ovarian cancer
WO2016055592A1 (en) 2014-10-09 2016-04-14 Engmab Ag Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1
KR102357004B1 (ko) 2014-10-27 2022-01-27 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 입양 세포 면역요법의 효능을 강화하기 위한 조성물 및 방법
US10011657B2 (en) * 2014-10-31 2018-07-03 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-CS1 antibodies and antibody drug conjugates
US10690672B2 (en) 2014-12-08 2020-06-23 George Mason Research Foundation, Inc. Methods for breast cancer treatment
WO2016094873A2 (en) 2014-12-12 2016-06-16 Emergent Product Development Seattle, Llc Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 binding proteins and related compositions and methods
WO2016142768A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Eureka Therapeutics, Inc. Ror2 antibody
WO2016150564A2 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Hesalight A/S Modular magnetic track lighting system
CN108350058B (zh) 2015-04-08 2022-03-18 诺华股份有限公司 Cd20疗法、cd22疗法和与cd19嵌合抗原受体(car)表达细胞的联合疗法
US10913798B2 (en) 2015-04-24 2021-02-09 The Regents Of The University Of California Modulators of ROR1-ROR2 binding
JP2018521004A (ja) 2015-05-18 2018-08-02 ユーリカ セラピューティックス， インコーポレイテッド 抗ｒｏｒ１キメラ抗原受容体
EP3297671A4 (en) 2015-05-18 2019-02-06 Eureka Therapeutics, Inc. ANTI-ROR1 ANTIBODY
WO2017053469A2 (en) 2015-09-21 2017-03-30 Aptevo Research And Development Llc Cd3 binding polypeptides
CN108884160B (zh) * 2015-10-30 2023-02-03 恩比伊治疗股份公司 抗ror1抗体
CN106918698B (zh) 2015-12-25 2019-11-22 广州瑞博奥生物科技有限公司 一种检测人受体酪氨酸激酶的磷酸化抗体芯片试剂盒
SG11201806120WA (en) 2016-01-20 2018-08-30 Scripps Research Inst Ror1 antibody compositions and related methods
WO2017127499A1 (en) 2016-01-22 2017-07-27 Janssen Biotech, Inc. Anti-ror1 antibodies, ror1 x cd3 bispecific antibodies, and methods of using the same
EP3411408B1 (en) 2016-02-02 2021-12-08 Fred Hutchinson Cancer Research Center Anti-ror1 antibodies and uses thereof
UY37127A (es) 2016-02-17 2017-08-31 Macrogenics Inc Moléculas de unión a ror1, y métodos de uso de las mismas
US20210139579A1 (en) 2017-07-20 2021-05-13 Nbe-Therapeutics Ag Multispecific antibody product that binds to different ror1 epitopes
CN111133002B (zh) 2017-08-07 2024-05-24 恩比伊治疗股份公司 具有高体内耐受性的基于蒽环类药的抗体药物缀合物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016102679A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Nbe-Therapeutics Ag Binding protein drug conjugates comprising anthracycline derivatives
WO2016127081A1 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Nikolas Stefan等.Highly Potent, Anthracycline-based Antibody-Drug Conjugates Generated by Enzymatic, Site-specific Conjugation.Mol Cancer Ther.2017,第16卷(第16期),摘要及材料和方法部分. *

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Publication number Publication date
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