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CN111088224B - 促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法 - Google Patents

促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法，其包括以下步骤：取出脐带组织并剪碎清洗，加入组织消化液消化，消化终止后过滤移去上清，得到脐带间充质干细胞；用脐带间充质干细胞选择性培养基培养所述脐带间充质干细胞；待细胞达到80‑90％汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，然后用脐带间充质干细胞冻存液进行冻存，放置于液氮中；从液氮中去除细胞，在37℃水浴锅中快速解冻，离心去上清，加入细胞复苏液对细胞进行复苏；移去复苏液，更换诱导前激动液培养；待细胞长至80‑90％汇合度时，用所述低毒性消化液消化细胞；接种细胞，培养过夜，移去上清，加入成软骨诱导培养基，以2％氧气浓度的低氧培养箱中培养。与现有技术相比，本发明的方法能够以较短诱导时间稳定、有效地促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化。

Description

促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法
技术领域
本发明属于干细胞与再生医学领域，具体涉及一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法及培养基。
背景技术
脐带间充质干细胞具有多向分化能力。间充质干细胞分化效果主要由干细胞自身活性和诱导条件决定的。
间充质干细胞软骨发生是个多步骤的细胞事件，先由特殊亚群的间充质干细胞的聚集，进而向软骨分化。
常用的脐带间充质干细胞获取方法如下：将华通氏胶剪碎，在完全培养基(10％FBS的DMEM)中贴壁培养16天。常规的冻存方法如下：含10％DMSO完全培养基中程序降温后冻存在液氮中。常规的复苏方法如下：在37℃水浴中快速解冻，用完全培养基培养。常规的成软骨诱导方法如下：细胞种板后添加诱导分化培养基为高糖DMEM加入100μg/ml丙酮酸钠、10ng/mlTGF-β3、100μM地塞米松、25μg/ml维生素C、40μg/ml脯氨酸、1×ITS+1premix，并需要在定的固体介质或成球生长。3天一换液，在37℃细胞培养箱中培养20天。最后用1％甲苯胺蓝染色，软骨组织外基质中的糖胺聚糖能被染成蓝色。
以上现有干细胞成软骨分化方法的不足如下：所需诱导时间较长；使用支撑介质辅助成软骨分化，较为复杂，成本较高；虽然每一次诱导前均会检测细胞活性，但是并不能保证每一批细胞都能完成软骨分化，会造成细胞资源浪费。
发明内容
本发明的目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法，其能够以较短诱导时间稳定、有效地促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化，并且所得成软骨细胞的存活率和细胞活性较高。
为此，本发明提供了以下技术方案。
一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法，其包括以下步骤：
(1)取出脐带组织并剪碎清洗，加入组织消化液消化，消化终止后过滤移去上清，得到脐带间充质干细胞；
(2)用脐带间充质干细胞选择性培养基培养所述脐带间充质干细胞；
(3)待细胞达到80-90％汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，然后用脐带间充质干细胞冻存液进行冻存，放置于液氮中；
(4)从液氮中取出细胞，在37℃水浴锅中快速解冻，离心去上清，加入细胞复苏液对细胞进行复苏；
(5)移去复苏液，更换诱导前激动液培养；
(6)待细胞长至80-90％汇合度时，用所述低毒性消化液消化细胞；
(7)接种细胞，培养过夜，移去上清，加入成软骨诱导培养基，以2％氧气浓度的低氧培养箱中培养。
具体地，步骤(1)为：取出脐带组织并剪碎清洗，加入组织消化液，于37℃摇动消化30min消化，所述脐带组织的重量与所述组织消化液的体积之比为1：1，加入为消化液3倍体积的DMEM培养基终止消化后，1000rpm离心5min，移去上清，得到脐带间充质干细胞。
具体地，步骤(2)为：用脐带间充质干细胞选择性培养基重悬细胞，并按2*104/cm2接种到培养瓶中，37℃培养13天，3天一换。
具体地，步骤(3)为：待细胞达到80-90％汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，按4*106-5*106个/ml细胞量冻存，使用脐带间充质干细胞冻存液，冻存体积为1ml并应用程序降温盒冻存，最后放置液氮中。
具体地，步骤(5)为：移去复苏液，更换诱导前激动液培养2天。
具体地，步骤(7)为：按照2*104个/cm2把细胞接种到24孔板中，37℃培养箱中过夜培养；将24孔板取出，移去上清，加入成软骨诱导培养基1ml，放置2％氧气浓度的低氧培养箱中培养10天，3天一换液。
优选地，所述脐带组织是人脐带组织。
优选地，所述组织消化液包括DMEM、终浓度为3mg/ml的I型胶原酶和终浓度为0.3mg/ml的DNA酶。
优选地，所述脐带组织的重量与所述组织消化液的体积之比为1：1。
优选地，所述脐带间充质干细胞选择性培养基包括：40％汇合度的脐带间充质干细胞使用无血清培养基培养2-3天得到的培养上清离心后过滤得到的产物，与间充质干细胞无血清培养基以1：1的体积混合。
优选地，所述低毒性消化液包括：DMEM、以及按DMEM体积计0.05％胰酶、0.3mg/mlDNA酶。
优选地，所述脐带间充质干细胞冻存液包括：DMEM、以及按DMEM体积计脐带间充质干细胞培养上清液25～35mL/100mL、甘油4～6mL/100mL、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)4～6g/100mL、聚乙烯醇(PVA)0.5～1.5g/100mL、海藻糖1.5～2.5g/100mL、羟基磷灰石纳米颗粒1～2.5g/100mL、全反式维甲酸0.5～1.5mg/100mL、血清替代物8～12mL/100mL。
优选地，所述细胞复苏液包括：DMEM、以及按DMEM体积计间充质干细胞培养上清液25～35mL/100mL、葡萄糖0.25～0.75g/100mL、全反式维甲酸0.5～1.5mg/100mL、抗坏血酸0.5～1.5mg/100mL。
优选地，所述激动液包括：DMEM、以及按DMEM体积计10％血清替代物、1％双抗(青霉素链霉素)、1mg/ml二甲基乙二酰基甘氨酸。
优选地，所述成软骨诱导培养基包括：DMEM、以及基于DMEM体积的1％双抗、10％血清替代物、1mM丙酮酸钠、0.35mM脯氨酸、0.284mM抗坏血酸、0.1μM地塞米松、10ng/mlTGF-β3、50mg/mlITS、1μM IGF-1，1μM视黄醇受体拮抗剂。
体外研究间充质干细胞向软骨分化是通过细胞因子诱发过表达特定基因，如SOX9，从而促使其向软骨分化。低氧环境有利于干细胞的SOX9基因表达，也符合模拟体内环境，促进细胞分化成软骨组织，使用视黄醇受体拮抗剂能有效的促进间充质干细胞向成软骨方向分化。
与现有方法相比，本发明通过设计细胞分离、冻存、复苏及较简单有效的诱导的方法系统，保证细胞的质与量。使用本发明的冻存液、复苏液及相应的冻存和复苏方法，使得每一管冻存细胞的存活率和细胞活性，保证每一瓶复苏的细胞的质量在诱导前都能达到一样的高质量标准。在诱导前对细胞进行预处理，过程中使用低氧环境和调配本发明的成软骨诱导培养基进行诱导，能够有效提高成软骨诱导情况并缩短诱导需要的时长。
附图说明
图1是实施例1分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片。
图2是实施例2分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片。
图3是实施例3分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片。
图4是应用实施例1分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片。
图5是应用实施例2分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片。
图6是应用实施例3分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片。
图7是对比例1分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片。
图8是对比例2分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片。
图9是对比例3分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片。
图10是应用对比例1分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片。
图11是应用对比例2分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片。
图12是应用对比例3分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的详述，但本发明并不限于以下实施例。
值得注意的是，本发明提供的脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法并不用于疾病诊断目的和治疗目的。
如未特别指出，本发明所使用的试剂均为现有试剂，可通过商业渠道获得。出于简要目的，部分技术操作并未具体描述细节，但应理解，这些操作都在本领域技术人员所熟知的范围内，其可以根据本说明书中所记载的内容予以实现。
促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化，步骤如下：
1.取出人脐带组织，用剪刀剪成2-3cm长，用镊子分离出华通氏胶。
2.将华通氏胶放置到50ml离心管，用剪刀将其剪碎。
3.加入适量的组织消化液(脐带组织重量与消化液体积之比为1g：1.6ml)，于37℃摇动消化30min。该组织消化液的配方如下：DMEM(DMEM培养基，购自Gibco公司，货号：12491-015)、终浓度为3mg/ml的I型胶原酶、终浓度为0.3mg/ml的DNA酶。
4.取出离心管，加入为消化液3倍体积的DMEM培养基终止消化，1000rpm离心5min
5.移去上清，用脐带间充质干细胞选择性培养基重悬细胞，并按照2*104/cm2接种到培养瓶中，37℃培养13天，3天一换。选择性培养基通过以下步骤制得：取40％汇合度的脐带间充质干细胞使用无血清培养基(友康恒业生物科技(北京)有限公司，间充质干细胞无血清培养基，产品货号：NC0103)培养2-3天得到的培养上清，进行2400rpm离心10min，用0.4μm滤膜过滤，与新鲜间充质干细胞无血清培养基按1：1体积混合)
6.待细胞达到80-90％汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，按4*106-5*106个/ml细胞量冻存，使用专门的脐带间充质干细胞冻存液，冻存体积为1ml并应用程序降温盒冻存，最后放置液氮中。上述低毒性消化液的配方为：0.05％胰酶、0.3mg/ml DNA酶、DMEM余量。脐带间充质干细胞冻存液的配方为：脐带间充质干细胞培养上清液25～35mL/100mL、甘油4～6mL/100mL、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)4～6g/100mL、聚乙烯醇(PVA)0.5～1.5g/100mL、海藻糖1.5～2.5g/100mL、羟基磷灰石纳米颗粒1～2.5g/100mL、全反式维甲酸0.5～1.5mg/100mL、血清替代物8～12mL/100mL、DMEM余量。
7.复苏细胞：从液氮中取出细胞，在37℃水浴锅中快速解冻，离心去上清，加入细胞复苏液。该细胞复苏液的配方为：间充质干细胞培养上清液25～35mL/100mL、葡萄糖0.25～0.75g/100mL、全反式维甲酸0.5～1.5mg/100mL、抗坏血酸0.5～1.5mg/100mL、DMEM余量，接种到培养瓶中，37℃培养1天。
8.移去复苏液，更换诱导前激动液培养2天。激动液的配方如下：10％血清替代物、1％双抗(青霉素链霉素)、1mg/ml二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)、DMEM余量。
9.待细胞长至80-90％汇合度时，用上述低毒性消化液消化细胞，用新鲜培养基重悬细胞并计数。
10.按照2*104个/cm2把细胞接种到24孔板中，37℃培养箱中过夜培养。
11.将24孔板取出，移去上清，加入成软骨诱导培养基1ml，放置2％氧浓度的低氧培养箱中培养10天，3天一换液。成软骨诱导培养基的配方如下：DMEM、以及基于DMEM体积的1％双抗、10％血清替代物、1mM丙酮酸钠、0.35mM脯氨酸、0.284mM抗坏血酸、0.1μM地塞米松、10ng/mlTGF-β3、50mg/mlITS、1μM IGF-1，1μM视黄醇受体拮抗剂。
12.取出24孔板，移去上清，加入500μl 4％(质量浓度)多聚甲醛处理30min。
13.移去多聚甲醛，用PBS清洗3次，加入0.1％(质量浓度)甲苯胺蓝溶液染色30min。
14.移去染液，用PBS清洗5次，显微镜下观察拍照。
实施例
实施例1-3按照上述方法分离、培养、传代、冻存、诱导成软骨。结果如表1所示。
表1
实施例1 实施例2 实施例3
分离培养13天 图1 图2 图3
分离培养13天细胞计数 5*10<sup>6</sup>个 4.6*10<sup>6</sup>个 5.2*10<sup>6</sup>个
细胞冻存数 5*10<sup>6</sup>个/ml 5*10<sup>6</sup>个/ml 5*10<sup>6</sup>个/ml
细胞复苏计数 4.8*10<sup>6</sup>个 4.9*10<sup>6</sup>个 4.8*10<sup>6</sup>个
细胞成软骨诱导10天 图4 图5 图6
其中，图1-3是实施例1-3中分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片，显示细胞密集、生长良好；图4-6是应用实施例1-3中分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片，甲苯胺蓝染色细胞的糖胺聚糖，显示深蓝色沉淀。由此可见，实施例1-3均有效促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化。
对比例
对比例1-3使用如下常规分离纯化培养冻存诱导方法：
1.剪碎华通氏胶后，不进行消化，用新鲜培养基(DMEM，Gibco)培养。
2.使用0.25％胰酶消化细胞传代。
3.使用10％DMSO10％人血清在程序降温盒中冻存，最后放置液氮。
4.使用诱导液诱导细胞在常规37℃培养箱中成软骨培养。
结果如表2所示。
表2
对比例1 对比例2 对比例3
分离培养13天 图7 图8 图9
分离培养13天细胞计数 1*10<sup>6</sup>个 1.4*10<sup>6</sup>个 1.2*10<sup>6</sup>个
细胞冻存数 5*10<sup>6</sup>个/ml 5*10<sup>6</sup>个/ml 5*10<sup>6</sup>个/ml
细胞复苏计数 2*10<sup>6</sup>个 2.5*10<sup>6</sup>个 2.1*10<sup>6</sup>个
细胞成软骨诱导10天 图10 图11 图12
其中，图7-9是对比例1-3中分离纯化组织脐带间充质干细胞13天的照片，显示细胞稀疏、生长不佳；图10-12是应用对比例1-3中分离、冻存、复苏和诱导方法后获得的成软骨染色照片，仅有少数蓝色沉淀。由此可见，对比例1-3促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的效力极低。

Claims (2)

1.一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取出脐带组织并剪碎清洗，加入组织消化液消化，消化终止后过滤移去上清，得到脐带间充质干细胞；
（2）用脐带间充质干细胞选择性培养基培养所述脐带间充质干细胞；
（3）待细胞达到80-90%汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，然后用脐带间充质干细胞冻存液进行冻存，放置于液氮中；
（4）从液氮中取出细胞，在37℃水浴锅中快速解冻，离心去上清，加入细胞复苏液对细胞进行复苏；
（5）移去复苏液，更换诱导前激动液培养；
（6）待细胞长至80-90%汇合度时，用所述低毒性消化液消化细胞；
（7）接种细胞，培养过夜，移去上清，加入成软骨诱导培养基，以2%氧气浓度的低氧培养箱中培养；
所述组织消化液是：DMEM、终浓度为3mg/ml 的I型胶原酶和终浓度为0.3mg/ml的DNA酶；
所述脐带组织的重量与所述组织消化液的体积之比为1：1；
所述脐带间充质干细胞选择性培养基是：40%汇合度的脐带间充质干细胞使用无血清培养基培养2-3天得到的培养上清离心后过滤得到的产物，与间充质干细胞无血清培养基以1：1的体积混合；
所述低毒性消化液是：DMEM、以及按DMEM体积计 0.05%胰酶、0.3mg/ml DNA酶；
所述脐带间充质干细胞冻存液是：DMEM、以及按DMEM体积计脐带间充质干细胞培养上清液25~35mL/100mL、甘油4~6mL/100mL、聚乙烯吡咯烷酮4~6g/100mL、聚乙烯醇0.5~1.5g/100mL、海藻糖1.5~2.5g/100mL、羟基磷灰石纳米颗粒1~2.5g/100mL、全反式维甲酸0.5~1.5mg/100mL、血清替代物8~12mL/100mL；
所述细胞复苏液是：DMEM、以及按DMEM体积计间充质干细胞培养上清液25~35mL/100mL、葡萄糖0.25~0.75g/100mL、全反式维甲酸0.5~1.5mg/100mL、抗坏血酸0.5~1.5mg/100mL；
所述激动液是：DMEM、以及按DMEM体积计10%血清替代物、1%双抗、1mg/ml 二甲基乙二酰基甘氨酸；
所述成软骨诱导培养基是：DMEM、以及基于DMEM体积的1%双抗、10%血清替代物、1mM丙酮酸钠、0.35mM脯氨酸、0.284mM抗坏血酸、0.1μM地塞米松、10ng/ml TGF-β3、50mg/ml ITS、1μM IGF-1、1μM视黄醇受体拮抗剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脐带组织是人脐带组织。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111657267B (zh) * 2020-06-17 2021-02-02 科瑞百奥泰州生物技术有限公司 一种用于软骨，肌腱，半月板保存的无冰晶冷冻保存液和冷冻方法
CN111826343A (zh) * 2020-07-23 2020-10-27 北京中卫医正科技有限公司 一种增强诱导软骨分化的细胞培养液、方法及应用
CN111944749A (zh) * 2020-08-14 2020-11-17 福建医科大学附属协和医院 一种用于治疗心肌梗死的人脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法
CN111869659A (zh) * 2020-08-24 2020-11-03 上海雅酶生物医药科技有限公司 一种无血清细胞冻存液、制备方法及其使用方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105420189A (zh) * 2015-12-11 2016-03-23 郭镭 一种无血清培养基及其制备方法和用途
CN107183008A (zh) * 2017-05-27 2017-09-22 魏方萌 一种胎盘间充质干细胞冻存液及其冻存方法
CN108531448A (zh) * 2018-03-06 2018-09-14 安徽瑞杰赛尔生物科技有限公司 一种人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基及制备方法
CN109161520A (zh) * 2018-08-17 2019-01-08 北昊干细胞与再生医学研究院有限公司 间充质干细胞的分离培养方法及相应的保存方法和无血清培养基

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105420189A (zh) * 2015-12-11 2016-03-23 郭镭 一种无血清培养基及其制备方法和用途
CN107183008A (zh) * 2017-05-27 2017-09-22 魏方萌 一种胎盘间充质干细胞冻存液及其冻存方法
CN108531448A (zh) * 2018-03-06 2018-09-14 安徽瑞杰赛尔生物科技有限公司 一种人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基及制备方法
CN109161520A (zh) * 2018-08-17 2019-01-08 北昊干细胞与再生医学研究院有限公司 间充质干细胞的分离培养方法及相应的保存方法和无血清培养基

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DMOG对间充质干细胞生物学特性影响的研究;姜丽霞等;《浙江中医药大学学报》;20190228;第43卷(第2期);摘要 *
Pharmacological Regulation of Adult Stem Cells: Chondrogenesis Can Be Induced Using a Synthetic Inhibitor of the Retinoic Acid Receptor;WAEL KAFIENAH等;《Stem Cells》;20071031;第25卷(第10期);第2463页左栏倒数第2段 *
低氧培养对人脐带间充质干细胞成软骨分化特性的影响;肖建林;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20120115;第5页第2.3.2小节，第6页第2.3.6小节，第19页最后1句 *
定向诱导间充质干细胞成软骨分化相关活性因子研究进展;陈锦富等;《组织工程与重建外科杂志》;20180831;第14卷(第4期);第228页右栏第3-8行，第229页左栏第3-5行 *
肖建林.低氧培养对人脐带间充质干细胞成软骨分化特性的影响.《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》.2012, *

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