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CN110564646B - 一株贝莱斯芽孢杆菌cy30及在茶轮斑病防治中的应用 - Google Patents

一株贝莱斯芽孢杆菌cy30及在茶轮斑病防治中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于农业微生物领域，公开了一株贝莱斯芽孢杆菌CY30及其应用，所述的贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）CY30，保藏编号为：CCTCC NO:M2018710，该菌株首次被报道用于叶面喷雾防治茶树茶轮斑病，灌根对茶树的促生增产作用，在农业生产中具有广阔的应用前景。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌CY30及在茶轮斑病防治中的应用
技术领域
本发明属于属于农业微生物领域，具体涉及一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)CY30及在茶轮斑病防治中的应用。
背景技术
茶树是我国重要的经济作物，自新中国成立以来，茶产业得到了快速的发展。据FAO统计，截止2017，茶园面积2.22×106公顷，产量2.47×106吨，茶园面积和茶叶总产量均居世界第一位。茶叶对我国贫困山区的产业扶贫和出口创汇发挥了巨大的作用。
茶树多生长在温暖、湿润的热带和亚热带地区，这些地区的气候也有利于茶树病害的滋生。茶轮斑病是茶叶的一种重要病害，在全世界茶叶种植区均有报道，在我国茶区也普遍发生，该病主要危害成叶和老叶，影响树势，造成减产。使用化学杀菌剂仍是防治茶轮斑病的主要手段，但是化学杀菌剂的施用极易引起病菌抗药性，同时会造成农药残留和环境污染。
在茶叶种植中为了稳定和提高产量通常会施用大量化学肥料，化学肥料的长期施用会造成土壤板结，茶叶养分吸收利用率不足，还会引起土壤酸化，加快连作茶树的衰退，造成茶叶减产，亟需解决茶叶生产的上述问题。
芽孢杆菌一类好氧或兼型厌氧、产生抗逆性内生孢子的杆状细菌，由于能够产生脂肽类和蛋白类等抗真菌物质，具有广谱抗真菌活性和良好的稳定性，已成为重要的农业生防菌。同时能分泌促生物质及改善土壤微生物菌群，促进氮磷钾吸收及增产，是一种安全、环保和经济效益高且长效的措施。
贝莱斯芽孢杆菌是芽孢杆菌一个新种，目前已经报道其可用于防治梨灰霉病和青霉病、水稻稻瘟病、和番茄早疫病等病害。
本发明从茶树根际土壤分离筛选一株贝莱斯芽孢杆菌CY30，对茶轮斑病防治效果、定殖能力和茶树促生作用进行了研究，旨在为后期CY30在茶树的应用奠定基础。
发明内容
本发明的目的在于提供了一株分离的贝莱斯芽孢杆菌，所述的贝莱斯芽孢杆菌命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CY30，保藏编号为：CCTCC NO:M2018710。
一株分离的贝莱斯芽孢杆菌的应用，该菌株可用于制备成具有茶叶防病和促生的微生物制剂，包括用于防治茶轮斑病，促进茶叶生长。
为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：
一株分离的贝莱斯芽孢杆菌，通过对茶轮斑病菌筛选获得，通过16s rDNA和gyrA基因比对结合生理生化鉴定进一步确定为贝莱斯芽孢杆菌，该菌株已于2018年10月25日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：Bacillus thuringiensis CY30；保藏编号为：CCTCC NO:M2018710；地点：中国，武汉，武汉大学。
该菌在NA培养基菌落生长良好，菌落乳白色(图1)。
一株分离的贝莱斯芽孢杆菌的应用，包括利用该芽孢杆菌制备成作物微生物制剂，该制剂同时具备防治茶轮斑病或/和茶树促生的效果。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明提供了一株贝莱斯芽孢杆菌，该菌株抗逆性强，易于大量发酵，首次报道能够在茶叶叶片定殖，对茶轮斑病具有持效的杀菌活性。
(2)菌株兼具对茶树促生活性，使用方便，无残留和污染，可以有效减少化肥和农药施用。
附图说明
图1菌株CY30的平板菌落形态示意图。
图2CY30发酵液5倍稀释液对茶轮斑病防效示意图。
具体实施方式
为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规技术，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
实施例1：
贝莱斯芽孢杆菌CY30的获得及鉴定：
贝莱斯芽孢杆菌CY30，分离自湖北省恩施州鹤峰县茶树根际土壤，进行杀茶轮斑病抑菌活性筛选获得。该菌株通过16s rDNA、gyrA基因测序，结合生理生化鉴定进一步确定其分类学地位(表1，表2)，已于2018年10月25日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：Bacillus velezensis CY30；保藏编号为CCTCC NO:M2018710；地点：中国，武汉，武汉大学。
在本发明中，贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CY30或被简称为CY30。
表1 菌株CY30生理生化特性–酶活、碳源氧化
Figure BDA0002208873380000021
Figure BDA0002208873380000031
+：阳性反应；-：阴性反应；W：弱阳性反应
表2 菌株CY30生理生化特性—利用碳源产酸
Figure BDA0002208873380000032
Figure BDA0002208873380000041
+：阳性反应；-：阴性反应；W:弱阳性反应
实施例2：
贝莱斯芽孢杆菌CY30的发酵(以下培养基配方中的百分数均为质量分数)：
1)一级种子培养：500ml三角瓶中装有200ml一级种子培养基，121℃湿热灭菌30min，取贝莱斯芽胞杆菌CY30活菌冻干管菌种接种于一级种子培养基中，在30℃-35℃培养8～10h；一级种子培养所用培养基的原料及用量为(质量分数)：葡萄糖2％，牛肉膏2％，蛋白胨1％，氯化钠0.35％，培养基pH为7；
2)二级种子培养：在400L发酵罐中装有240L二级种子培养基，121℃湿热灭菌30min，将200ml一级种子接种于二级种子培养基中；在35℃培养10h；控制罐压0.05Mpa，搅拌转速150rpm，通气比1:0.8，二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖2％，酵母抽提物2％，蛋白胨1％，磷酸氢二钾0.02％-，氯化钠0.5％，硫酸镁0.05％，培养基pH调为7；
3)发酵：在40m3发酵罐中装有30m3贝莱斯芽胞杆菌CY30活菌发酵培养基，121℃湿热灭菌30min，将240L二级种子接种于贝莱斯芽胞杆菌CY30活菌发酵培养基中，控制罐压0.05Mpa，搅拌转速120rpm，通气比1:0.8，在35℃培养36h；发酵所用培养基的原料及用量为：红薯粉3％、花生粕2％、工业蛋白胨1％、酵母膏1％、磷酸二氢钾0.015％、硫酸镁0.02％％、碳酸钙0.1％，培养基pH7；
4)芽孢脱落20％时结束发酵，经测定，芽孢数约为100亿cfu·mL-1，作为发酵液原液，用于以下实施例。
实施例3：
贝莱斯芽孢杆菌CY30在防治茶轮斑病中的应用：
将茶轮斑病菌(Pestalotiopsis theae)活化至PDA平板培养5d后备用，采集未使用杀菌剂的大小一致的茶叶叶片(中茶108)用于离体叶片试验。按照实施例2制备CY30发酵液，芽孢数约为100亿cfu·mL-1，使用无菌水分别将发酵液稀释5倍和10倍备用。使用电动喷雾器将发酵液5倍稀释液和10倍稀释液均匀喷施于茶叶叶片，每片叶子2mL，空白对照喷施无菌水。待各处理风干后使用针刺接种法接种茶轮斑病菌饼，28℃保湿培养12d，统计对照和处理病斑直径并计算防效，每个处理重复3次，每个重复15个叶片，防效＝(对照病斑直径-处理病斑直径/对照病斑直径)×100。
将贝莱斯芽孢杆菌CY30在含不同浓度利福平培养基进行抗性筛选，获得抗利福平突变菌株(该菌株经检测除具有利福平抗性外，其余生理生化特性与CY30无显著性差异)，该菌株可在含300μg·mL-1的利福平的LB中正常生长。
将抗利福平突变菌株按照实施例2发酵，将发酵液喷施于茶叶叶片和对照番茄叶片，10d后将叶片表面使用75％消毒，并用无菌水冲洗3次。晾干后称取茶叶和番茄各1g，随后加入1mL无菌水置于研钵中研磨，静置后吸取上清液，采用梯度稀释法稀释后，涂布于含300μg·mL-1的利福平的LB平板，37℃培养24h后计数，测定CY30在茶叶和番茄叶片的定殖能力。
试验表明，贝莱斯芽孢杆菌CY30对茶轮斑病具有良好防效，5倍和10倍发酵液处理后病斑直径明显低于对照直径，防效分别为77.58％和60.38％(表3，图2)。在茶树根际分离的CY30对茶叶叶片具有专一的定殖效果，定殖量为6.5×105cfu·g，而在番茄叶片无定殖作用，CY30的这种专一定殖效果能持续性防控茶轮斑病的侵染。
表3 CY30发酵液对茶轮斑病防治效果
处理 病斑直径(mm) 防效(％)
CY30 5倍发酵液 6.033 77.59
CY30 10倍发酵液 10.68 60.38
对照 26.97 -
实施例3：
贝莱斯芽孢杆菌CY30对茶树的促生作用
试验田块选在湖北省恩施州鹤峰县走马镇鑫农茶业木耳山基地，CY30发酵原液(100亿cfu·mL-1)稀释20倍，对茶树进行灌根处理，亩用水量600斤，对照灌清水。7天施用一次，共计施用三次。20d后一芽二叶期统计发芽密度，调查发芽密度(33.3cm×33.3cm方框内)，测百芽重。
试验表明，CY30能明显提高茶树发芽密度，百芽重虽然有所下降，但单位面积一芽二叶茶叶质量增加，具有明显增产作用(表4)。
表4 CY30对茶树促生增产作用
处理 发芽密度(个) 百芽重(g)
CY30 191.00 40.59
CK 136.33 42.33

Claims (4)

1.一株分离的贝莱斯芽孢杆菌，所述的贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)CY30，保藏编号为：CCTCC NO:M2018710。
2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备促进茶树增产的制剂中的应用。
3.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备防治茶轮斑病制剂中的应用。
4.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备防治茶轮斑病同时促进茶树增产的药物中的应用。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111019866B (zh) * 2019-12-30 2022-08-16 华南理工大学 一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌及其应用
CN111349588B (zh) * 2020-04-29 2022-01-11 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN113678843B (zh) * 2021-08-06 2022-04-19 南京林业大学 短小芽孢杆菌lymc-3的新用途
CN114292776B (zh) * 2021-12-21 2022-09-30 湖北省生物农药工程研究中心 一株巨大芽孢杆菌及在茶树上的应用
CN114085797B (zh) * 2021-12-23 2023-01-17 湖北省生物农药工程研究中心 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在水稻上的应用
CN114525227B (zh) * 2022-03-15 2023-11-21 武汉楚强生物科技有限公司 一种含贝莱斯芽孢杆菌cy30的微生物菌剂及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108029703A (zh) * 2017-12-21 2018-05-15 福建省农业科学院植物保护研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌在防治辣椒疫病中的应用
CN108330089A (zh) * 2018-03-13 2018-07-27 华中农业大学 一种广谱抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌HNt7及制备方法和应用
CN108641966A (zh) * 2018-05-16 2018-10-12 海南大学 一种微生物生防菌制剂

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108029703A (zh) * 2017-12-21 2018-05-15 福建省农业科学院植物保护研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌在防治辣椒疫病中的应用
CN108330089A (zh) * 2018-03-13 2018-07-27 华中农业大学 一种广谱抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌HNt7及制备方法和应用
CN108641966A (zh) * 2018-05-16 2018-10-12 海南大学 一种微生物生防菌制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bacillus velezensis RC 218 as a biocontrol agent to reduce Fusarium head blight and deoxynivalenol accumulation: Genome sequencing and secondary metabolite cluster profiles;Palazzini JM 等;《Microbiol Res.》;20161231;第192卷;第30-36页 *
贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）研究进展;蔡高磊 等;《北方园艺》;20181231(第12期);第162-167页 *

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