CN110382014A - 用于生物加工细胞样品的装置和方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及适合于生物加工细胞样品（例如，用于免疫疗法应用的外周血样品）的完全封闭的系统和相关的使用方法。系统不对空气敞开，因此允许贯穿整个生物加工过程进行无菌样品加工和样品转移。所公开的系统的每个部件包含独有标识符，从而在样品进行生物加工中所涉及的各种步骤时允许该样品的可追溯性。标识符最终将样品追溯回到该样品所来源的患者。某些实施例提供了用于长期存储细胞样品的独特的冷冻袋。冷冻袋具有：独有标识符，其允许可容易追溯和检索生物存档的样品；以及至少两个端口，一个用于样品测试，另一个用于无菌对接到允许将冷冻袋的内容物递送到患者的装置。

Description

用于生物加工细胞样品的装置和方法

技术领域

细胞生物加工是生物制药制造的形式，其目的在于建立用于生产治疗细胞的可再现且稳健的制造过程。

背景技术

当前的细胞制造过程高度依赖于用户，需要在许多点处进行人为干预。由于这种依赖性，因此当前的过程是繁琐的、高度可变的和昂贵的。

作为示例，大多数当前的制造过程如下发生：从患者获得细胞样品（全血、骨髓、脐带血等）。将获得的生物样品转移到实验室以进行生物加工。在基于实验室的加工之初，进行细胞分离技术（诸如，多糖（聚蔗糖）依赖性细胞分离）以获得富含单核细胞（MNC）且红血细胞（RBC）浓度降低的期望的细胞级分（fraction）。分离出富含MNC的细胞级分，并将其转移到生物反应器以进行细胞扩增。然后，将扩增的细胞产物从生物反应器中移出，在这种情况下对它们进行洗涤以移除过量的培养基和细胞碎片，并将其浓缩。从洗涤和浓缩的细胞产物中取出测试样品以用于品质测试，并且如果测试结果显示产物可接受，则最终的工程制造的（engineered）细胞产物要么准备用于长期存储、低温保存，要么被施用到样品所来源的患者，或者以上两种情况。正如能够了解的，这些步骤中的若干步骤需要将样品从一个容器移动到另一容器，这不仅需要用户干预（有在加工期间错误标记样品的风险），而且还有可能使样品暴露于环境（因此将无菌性置于高风险）。对于患者、特别是那些免疫功能受损的患者而言，无菌性受损的可能性是不可接受的。

发明内容

因此，需要优化的封闭的细胞生物加工和制造系统。这样的系统由本公开提供。所公开的系统消除了用户依赖性，从而导致显著更多的放手不管时间，由此允许优化昂贵的技术资源。

本文中所公开的装置、系统和方法具有若干特征，这些特征中没有单独一个特征独自为其期望的属性负责。在不限制后面的权利要求的范围的情况下，将简要讨论所公开的装置、系统和方法的某些特征。在考虑该讨论之后，且特别是在阅读了标题为“具体实施方式”的部分之后，本领域普通技术人员将理解装置、系统和方法的特征如何提供优于传统系统和方法的若干优点。

在一个方面中，提供了用于细胞生物加工和制造的系统，该系统包括：一个或多个加工袋组（bagset）、培养袋组和洗涤袋组，其中，每个袋组包括该系统所独有的相同2D条码，并且每个袋组被构造成经由一个或多个鲁尔连接件或经由使用无菌连接装置的一个或多个无菌对接件与其他袋组流体连接。

在系统的第一实施例中，系统的一个或多个加工袋组包括柔性部件，并且这些柔性部件包括加工袋、红血细胞袋和细胞浓缩物袋。系统对外部环境是封闭的，并且这些部件经由多个管彼此流体连接。

加工袋经由第一管与红血细胞袋流体连接；加工袋经由第二管与细胞浓缩物袋流体连接；并且红血细胞袋和细胞浓缩物袋彼此不直接连接。

部件之间的体积转移经由多端口阀来控制，该多端口阀直接连接到加工袋、红血细胞袋和细胞浓缩物袋中的每者。

柔性加工袋组被构造成供单次使用，并且是一次性的。加工袋能够由选自乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）和其他塑料的材料制成；红血细胞袋能够由选自PVC或其他塑料的材料制成；并且细胞浓缩物袋能够由EVA、PVC或其他塑料制成。

加工袋能够包括在加工袋顶部处的入口管线，该入口管线与加工袋的内部流体连接，其中，该入口管线包括选自阴型鲁尔连接件和无菌对接件的无菌连接件，并且其中，该入口管线被构造成用于从加工袋组的外部接收样品。

细胞浓缩物袋能够包括：大隔间和小隔间，它们通过两个通道连接；以及一个或多个端口，其被构造成用于从加工袋组中移除细胞浓缩物袋的内容物，其中，所述一个或多个端口选自穿刺器（spike）端口、鲁尔连接件和无菌对接件。

多端口阀包括：外部部分，其具有三个连接器；以及内部部分，该内部部分包括手柄和筒体，所述筒体被构造成在关闭位置、第一打开位置和第二打开位置之间移动。

第一打开位置准许从加工袋通过多端口阀到红血细胞袋的流体流动；并且第二位置准许从加工袋通过多端口阀到细胞浓缩物袋的流体流动。

在系统的第二实施例中，一个或多个加工袋组包括柔性部件和刚性部件的组合。刚性部件包括加工容器和红血细胞容器，并且柔性部件包括细胞浓缩物袋。系统对外部环境封闭，并且这些部件经由多个管彼此流体连接。

加工容器经由第一管与红血细胞容器流体连接；加工容器经由第二管与细胞浓缩物袋流体连接；并且红血细胞容器和细胞浓缩物袋彼此不直接连接。

在部件之间的体积转移经由多端口阀来控制，该多端口阀直接连接到加工容器、红血细胞容器和细胞浓缩物袋中的每者。

加工袋组被构造成供单次使用，并且是一次性的。加工容器由选自乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）和其他塑料的材料制成；红血细胞容器由选自PVC或其他塑料的材料制成；并且细胞浓缩物袋由EVA、PVC或其他塑料制成。

加工容器包括在加工容器顶部处的入口管线，该入口管线与加工容器的内部流体连接，其中，该入口管线包括选自阴型鲁尔连接件和无菌对接件的无菌连接件，并且其中，该入口管线被构造成用于从加工袋组的外部接收样品。

细胞浓缩物袋包括：大隔间和小隔间，它们通过两个通道连接；以及一个或多个端口，其被构造成用于从加工袋组中移除细胞浓缩物袋的内容物，其中，所述一个或多个端口选自穿刺器端口、鲁尔连接件和无菌对接件。

多端口阀包括：外部部分，其具有三个连接器；以及内部部分，该内部部分包括手柄和筒体，所述筒体被构造成在关闭位置、第一打开位置和第二打开位置之间移动。

第一打开位置准许从加工容器通过多端口阀到红血细胞容器的流体流动；并且第二位置准许从加工容器通过多端口阀到细胞浓缩物袋的流体流动。

在第二方面中，本公开提供三维冷冻袋，其包括：内部室，该内部室包括大隔间和小隔间，这些隔间通过两个通道连接；第一端口，其限定在大隔间与冷冻袋的外部之间的流体连接；第二端口，其限定在小隔间与冷冻袋的外部之间的流体连接；以及独有2D条码标记；其中，冷冻袋被建构成用于长期低温存储。

冷冻袋遵照C252.72标准，其中：存储袋的内部体积为25 mL，存在从冷冻袋的内部室引出的总共2个端口，并且冷冻袋所具有的厚度深度（thickness depth）为7.2 mm。

大隔间所具有的总体积为20 mL，并且小隔间所具有的总体积为5 mL。

第一端口被构造成从冷冻袋的外部接收细胞样品，并且第一端口还被构造成将大室的内容物递送到冷冻袋的外部。

第二端口被构造成将小隔间的内容物中的至少一些递送到冷冻袋的外部。

这些端口包括无菌连接件，所述无菌连接件选自鲁尔连接件和用于使用无菌连接装置进行连接的无菌对接件。

冷冻袋针对在液氮中低温（cyrogenic）保存细胞样品而被评定，并且由选自乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚烯烃-EVA共混物、氟化乙烯丙烯（FEP）材料以及前述各者中的任何的组合的材料制成。

存在于冷冻袋上的独有2D条码对应于存在于低温存储盒上的1D条码。

在第三方面中，本公开提供了产生和低温存储工程制造的自体细胞产物的方法。在一些实施例中，该方法包括：从受试者获得细胞样品；通过使在其中获得样品的容器与一个或多个加工袋组之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器附接，或者通过使用无菌连接装置来无菌对接在其中获得样品的容器的管材与一个或多个加工袋组，将样品转移到一个或多个细胞加工袋组而不将样品暴露于外部环境；将一个或多个加工袋组放置在一个或多个加工容器中；使一个或多个加工容器离心，由此基于细胞的大小、密度以及起始体积对细胞样品进行分层和分离；通过附接在一个或多个加工袋组与培养袋之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器，或者通过使用无菌连接装置来无菌对接一个或多个加工袋组的管材和培养袋的管材，经由重力流将期望的细胞浓缩物从一个或多个加工袋组转移到培养袋而不将样品暴露于外部环境；培育培养袋，由此扩增期望的细胞浓缩物；通过使在培养袋与洗涤袋组之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者通过使用无菌连接装置来无菌对接培养袋的管材和洗涤袋组，经由重力流将扩增的细胞浓缩物从培养袋转移到洗涤袋组；洗涤扩增的细胞浓缩物，由此将因扩增产生的细胞废物副产物与工程制造的细胞产物分离；通过使在洗涤袋组与冷冻袋之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者使用无菌连接装置来无菌对接洗涤袋组的管材和冷冻袋，将工程制造的细胞产物从洗涤袋组转移到冷冻袋，其中，经由离心力或重力流发生该转移；将冷冻袋转移到低温冷冻的外包装袋和罐中；以及将冷冻袋、低温冷冻的外包装和罐转移到受控速率的低温冷冻系统中，该系统使用液氮蒸汽来冷冻工程制造的细胞产物并将其保持处于低温保存状态中。

细胞样品能够选自外周血、全血、骨髓、脐带血以及前述各者中的任何的组合。

一个或多个细胞加工袋组、培养袋组、洗涤袋组和冷冻袋：全部都被构造成供单次使用；是一次性的；并且全部包括特定于样品的相同的独有2D条码。

在一些实施例中，该方法包括：在离心之前，从样品中贫化（deplete）红血细胞。

在一些实施例中，样品是外周血，在离心之前从样品中贫化红血细胞，并且离心将外周血分离成红血细胞、干细胞级分和血浆。

在一些实施例中，在培育培养袋之前，该方法包括：用选自细胞因子、葡萄糖和两者的一种或多种添加剂来补充培养袋内所包含的细胞生长培养基。

冷冻袋符合C252.72标准，其具有25毫升（mL）的存储体积、2个端口或猪尾管（pigtail）、以及7.2 mm的深度。

罐包括独有1D条码，该1D条码耦合到冷冻袋上的2D条码。

在一些实施例中，该方法还包括：在将所述冷冻袋、低温冷冻外包装和罐转移到受控速率的低温冷冻系统期间，扫描1D条码以确认1D条码信息耦合到2D条码信息。

在一些实施例中，该方法还包括：在转移到低温冷冻系统之后，将冷冻袋、低温冷冻外包装和罐转移到填充有液氮的瓶（flask）中的存储位置以进行长期低温存储。

附图说明

通过参考阐述说明性实施例的以下详细描述和附图，可进一步解释本公开的特征和优点。

图1提供了如由本公开提供的使用用于完整加工、低温存储和运输生物样品的套件部件的方法的概观，如本公开所提供的。

图2A描绘了适合于在由本公开提供的系统和方法中使用的柔性细胞加工袋组的代表性示例。该袋组包含印刷在每个部件上的呈2D条码形式的独有标识符。

图2B描绘了适合于在由本公开提供的系统和方法中使用的半刚性细胞加工袋组的代表性示例。该袋组包含印刷在每个部件上的呈2D条码形式的独有标识符。

图3描绘了具有三个端口和连接器的细胞培养袋的代表性示例。细胞培养袋包含呈2D条码形式的独有标识符。

图4A描绘了适合于在由本公开提供的系统和方法中使用的柔性细胞洗涤袋组的代表性示例。该袋组包含印刷在每个部件上的呈2D条码形式的独有标识符。

图4B描绘了适合于在由本公开提供的系统和方法中使用的半刚性细胞洗涤袋组的代表性示例。该袋组包含印刷在每个部件上的呈2D条码形式的独有标识符。

图5描绘了适合于在由本公开提供的系统和方法中使用的冷冻袋的代表性示例。所描绘的尺寸是近似的，并且可能不是按比例的。冷冻袋包含呈2D条码形式的独有标识符。在所描绘的实施例中，冷冻袋的2D条码对应于罐上的1D条码，如本文中所描述。

具体实施方式

在描述本公开的实施例之前，将理解的是，这样的实施例仅作为示例提供，并且可在实践本公开时采用本文中所描述的本公开的实施例的各种替代例。在不脱离本公开的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。

除非另外限定，否则本文中使用的所有技术和科学术语都具有如本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文中所描述的方法和材料类似或等同的方法和材料能够用于实践或测试本公开，但是下文描述了合适的方法和材料。在有冲突的情况下，将以包括限定的本专利说明书为准。另外，材料、方法和示例仅是说明性的而不意图是限制性的。在不脱离本公开的情况下，本领域技术人员将想到许多变化、改变和替换。

如说明书中和权利要求中使用的，除非上下文明确地另有规定，否则单数形式“一（a/an）”和“该/所述（the）”包括复数引用。例如，术语“细胞（a cell）”包括多个细胞，包括其混合物。

在一个方面中，本公开提供了适合于生物加工细胞样品（例如，用于免疫疗法应用的外周血样品）的完全封闭的系统。系统不对空气敞开，因此允许贯穿整个生物加工过程进行无菌样品加工和样品转移。所公开的系统中的每个包含独有标识符，所公开的系统的每个部件具有相同的独有标识符，从而在样品进行生物加工时允许该样品的可追溯性，并且最终允许扩增的细胞样品追溯到该样品所来源的患者。

由本公开提供的系统提供了易于使用的细胞生物加工和制造过程所需要的从装置到方法的所有部件。这样的部件包括但不限于一个或多个加工袋组、培养袋组和洗涤袋组。除了别的之外，洗涤袋组包括专门设计的冷冻袋。在一些实施例中，系统被称为CXP平台。

所公开的系统提供其中能够进行生物加工细胞制造过程的无菌封闭环境。换句话说，本公开提供了用于生物加工细胞样品（诸如例如，用于免疫疗法应用的外周血）的装置的完整套件和相关方法。系统允许贯穿制造过程进行细胞样品的无菌加工和转移。

即使所公开的系统的部件中的一些可彼此分离（如下文详细描述的），它们被构造成以完全无菌的方式彼此连接，由此允许在制造过程期间将样品从一个部件转移到另一部件。如上所述，每个系统包含将其与另一系统区分开的独有标识符，其中单个系统的每个部件包含相同的独有标识符。因此，所公开的系统在该过程的每个步骤处提供可追溯性，由此减少污染并且还降低（如果不是消除的话）所制造的细胞样品将被施用到错误受试者的风险。

在一些实施例中，并且如下文更详细描述的，给予单个系统的独有标识符是独有2D条码。独有2D条码特定于单个系统，并且系统的每个部件包含相同的独有2D条码。更具体地说，对于单个系统，独有2D条码被印记到以下系统部件中的每者上：加工袋组、培养袋组和洗涤袋组，除了别的之外，其包括专门设计的冷冻袋组，该冷冻袋组也将具有相同的独有2D条码。

在第二方面中，提供了使用封闭的系统的方法。

在第三方面中，本公开提供了独特的冷冻袋。该冷冻袋是所公开的系统的部件，并且适合于与生物加工细胞样品的所公开的方法一起使用。与所公开的系统的所有部件一样，冷冻袋具有允许可容易追溯和检索生物存档的样品的独有标识符。冷冻袋还具有至少两个端口，一个端口用于样品测试，另一端口用于无菌对接到允许将冷冻袋的内容物递送到患者的装置。

在一些实施例中，冷冻袋被印记有独有标识符，该标识符将冷冻袋识别为独特的生物加工系统的部件。独有标识符能够是独有2D条码，它将与冷冻袋的系统的其他部件的独有2D条码相匹配。在一些实施例中，并且如下文详细描述的，冷冻袋的独有2D条码与被施加于存储罐的1D条码相匹配。被放置在冷冻袋上的2D条码与放置在存储罐上的1D条码的配对允许在将制造的细胞样品存储在生物档案系统中时可容易追溯和检索。

在各种实施例中，除了别的之外，冷冻袋具有至少两个端口或猪尾管。根据需要，一个这样的端口或猪尾管用于样品品质测试或其他测试。另一端口或猪尾管用于无菌对接到将细胞样品递送到患者的装置（例如，生理盐水袋）。

在各种实施例中，冷冻袋符合C_252.72标准。也就是说，存储袋具有25毫升（mL）的存储体积、2个端口或猪尾管，并且具有7.2 mm的深度。

使用方法

图1呈现了使用由本公开提供的系统的方法的一个实施例的概观。该方法从左上方的方框中描绘的步骤开始，并沿为每个步骤提供的箭头的方向进行。所描绘的方法涉及使用所公开的系统来加工、低温存储和运输自体细胞产物。在所描绘的实施例中，系统包括成组或成套的袋组一次性用品，这些袋组一次性用品共同地包括由本公开提供的系统，在一些实施例中，该系统是CXP装置和用于长期存储所制造的细胞产物的生物档案系统。

该过程以从患者或供体提取细胞样品（诸如，外周血、全血、骨髓、脐带血等）开始（左上方的框）。

由配备有本公开所涵盖的系统的核心实验室来接收和加工样品。系统包括多个一次性部件，包括但不限于样品加工袋组、培养袋组、洗涤袋组和冷冻袋，所有这些都标记有印刷在每个部件上的呈2D条码形式的相同的独有且共同的标识符。

为了加工样品以进行低温存储，实验室首先基于从患者提取的初始体积将样品转移到适当数量的细胞加工袋组。在一些实施例中，用于加工该样品的每个加工袋组是其自身的独特系统的部件，且因此每个加工袋组被印记有其自身独有识别的2D条码。在这方面，如果单个细胞样品被拆分在多个加工袋组当中，则每个袋组将经由其自身的独特系统进行加工。在其他实施例中，用于加工该单个样品的每个加工袋组是同一系统的部件，且因此每个加工袋组被印记有相同的独有识别的2D条码。在这方面，在单个系统中加工整个单个样品。

在一些实施例中，然后，将样品从一个或多个加工袋组无菌转移到加工容器。在不将样品暴露于外部环境的情况下执行该无菌转移。在这方面，转移能够经由任何数量的方式发生，这些方式将保持（一个或多个）所公开的系统的封闭的无菌环境。可通过以下方式实现该转移：使在一个或多个加工袋组与加工容器之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者使用无菌连接装置来无菌对接一个或多个加工袋组的管材与加工容器。通过重力流使样品从一个或多个加工袋转移到加工容器以进行离心，在一些实施例中，该加工容器是便携式CXP机电加工装置。在其他实施例中，将一个或多个加工袋组放入一个或多个加工容器中。在一些实施例中，CXP加工装置被编程为在将加工袋组装载到离心机中之前从样品中贫化红血细胞。在离心期间，加工装置或便携式CXP机电装置基于细胞的大小、密度和起始体积自动地对细胞样品进行分层和分离。例如，如果样品是外周血，则加工装置首先从样品中贫化红血细胞，然后使样品离心以便将外周血分离成红血细胞、干细胞级分和血浆。在这样做时，来自样品的期望的细胞级分将被浓缩并且能够从一个或多个加工袋组中被容易地移除。

然后，将期望的细胞浓缩物从加工装置中的一个或多个加工袋移动到培养袋。可通过以下方式实现该转移：使在一个或多个加工袋组与培养袋之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者使用无菌连接装置来无菌对接一个或多个加工袋组的管材与培养袋。通过重力流使样品从一个或多个加工袋转移到培养袋。在培养袋中，期望的细胞级分驻留在其中的培养基被补充有一种或多种期望的添加剂，例如，细胞因子、葡萄糖和/或其他剂，以便实现特定的细胞工程制造处理。然后，将培养袋放入培育器中，在该培育器中，允许期望的细胞级分在期望的生长条件下扩增。扩增能够发生历时任何期望的时间量，条件是期望的细胞级分驻留所在的培养基能够支持期望的细胞级分的细胞的生长。

一旦样品已得到充分处理和/或扩增，就将其转移到洗涤袋组，在一些实施例中，该洗涤袋组是AutoXpress加工袋。如与其他样品转移一样，可通过以下方式实现该转移：使在一个或多个加工袋组与洗涤袋之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者使用无菌连接装置来无菌对接培养袋的管材与洗涤袋组。通过重力流使样品从培养袋转移到洗涤袋组。在洗涤袋组中，洗涤期望的扩增和/或处理的细胞样品，以便将因扩增/处理阶段产生的细胞废物副产物与最终的工程制造的细胞产物分离。在一些实施例中，洗涤袋组被称为CXP装置预调装置，其被构造成进行细胞洗涤。

在洗涤完成时，期望的扩增和/或处理的细胞级分处于供施用到患者和/或低温存储的条件下。将经洗涤和浓缩的细胞样品转移到冷冻袋。可将样品收集在作为洗涤袋组的部分的期望的冷冻袋中，或者如与其他样品转移一样，可通过以下方式实现该转移：使在洗涤袋组与冷冻袋之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者使用无菌连接装置来无菌对接洗涤袋组的管材和冷冻袋。通过离心力抑或重力流将样品从洗涤袋组转移到冷冻袋。

依照C_252.72标准以及与一个或多个加工袋、细胞培养袋组和洗涤袋组相匹配的2D条码，将最终的洗涤的细胞产物收集到冷冻袋中。在其中冷冻袋符合C_252.72标准的那些实施例中，冷冻袋具有25毫升（mL）的存储体积、2个端口或猪尾管，并且具有7.2 mm的深度。

此时，该方法进展超过“用于细胞加工和低温存储的步骤”并进入长期存储。长期存储能够是例如如美国专利5,964,095号；6,146,124号；6,232,115号；6,302,327号；和/或6,808,675号中所公开的生物档案存储。

在将期望的扩增和/或处理的细胞级分移入冷冻袋中之后，将冷冻袋装载到低温冷冻外包装袋和罐中。在若干实施例中，罐包括独有1D条码，该独有1D条码经由硬拷贝或电气数据库耦合到冷冻袋上的2D条码。这样做是为了确保样品可追溯到该样品所来源的患者。然后，将冷冻袋、低温冷冻外包装和罐的组合装载到低温冷冻系统中，该低温冷冻系统是受控速率的冷冻装置，其使用液氮蒸汽来冷冻样品并将其保持处于低温保存状态中。

在许多实施例中，低温冷冻系统/控制速率冷冻器使用经验证的冷冻曲线以便确保最佳的低温保存。

为了确保期望的扩增和/或处理的细胞级分与恰当的受试者挂钩和/或被递送到恰当的受试者，在受控速率冷冻过程期间，机械臂扫描存在于罐上的1D条码以确认被存储在1D条码中的信息，该信息耦合到存在于一个或多个加工袋组、培养袋组、洗涤袋组和冷冻袋中的每者上的2D条码信息。在一些实施例中，在冷冻过程结束时，机械臂从控制速率冷冻器中移除冷冻袋、低温冷冻外包装和罐组合，并将其转移到填充有液氮的杜瓦瓶中的存储位置以进行长期低温存储。

当医疗保健提供者（例如，医院）准备好将期望的扩增和/或处理的细胞级分施用回到该细胞级分所来源的受试者时，用户将1D或2D条码信息输入到低温系统中以进行检索。机械臂接收该信息（该信息直接挂钩到罐上的1D条码），并使用该信息以从液氮中自动取回样品以用于冷链运输到受试者。

一旦期望的扩增和/或处理的细胞级分到达医疗保健提供者的位置处，它能够被再次存储例如在内部（in-house）低温系统中，抑或被施用到受试者。

系统

如上文所陈述的，由本公开所提供的系统提供了易于使用的细胞生物加工和制造过程所需要的所有部件。这样的部件包括但不限于一个或多个加工袋组、培养袋组和洗涤袋组。除了别的之外，洗涤袋组包括专门设计的冷冻袋。

加工袋组

适合与由本公开提供的系统和方法一起使用的加工袋组能够是柔性的或半刚性的。

图2A描绘了适合与由本公开提供的系统一起使用的柔性加工袋组的一个实施例的示例。所描绘的柔性袋组包括多个部件。在一些实施例中，这些部件包括：加工袋（图2A-1）、红血细胞袋（图2A-2）和细胞浓缩物袋（图2A-3）。部件之间的体积转移经由多端口阀（图2A-4）来控制。当将细胞样品装载到所公开的系统中时，首先将其装载到加工袋（图2A-1）中。多端口阀（图2A-4）管理样品在柔性加工袋组的其他部件之间的流动。

如本文中所公开的，柔性袋的每个部件包括独有2D条码标记。在一些实施例中，在加工期间将2D条码激光蚀刻到每个部件上，以便确保样品可追溯回到该样品所来源的受试者。所有2D条码（图2A-6）、（图2A-7）、（图2A-8）和（图2A-9）是相同的。

柔性加工袋组对外部环境是封闭的，并且是一次性的。

如上所述，袋组包括加工袋（图2A-1）、红血细胞袋（图2A-2）和细胞浓缩物袋（图2A-3），所有这些都利用入口管线、夹具、过滤器和采样部位通过至多端口阀（图2A-4）的管线或管材而连接。

加工袋（图2A-1）可由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）或其他塑料制成。红血细胞袋（图2A-2）可由PVC或其他塑料制成。细胞浓缩物袋（图2A-3）可由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）制成，不过可使用其他塑料。

三个袋（图2A-1）、（图2A-2）和（图2A-3）中的每者可以是吹塑成型的。红血细胞袋（图2A-2）可以是射频、高频或介电焊接的，并且可以是吹塑成型的。

在一些实施例中，加工袋（图2A-1）是具有不对称形状的三维袋，其包括顶边缘、弯曲侧部、与弯曲侧部相对的笔直侧部、渐缩底部和与多端口阀（图2A-4）流体连接的底部出口。顶边缘包括用于接收来自受试者的样品的入口、以及可用于将加工袋悬挂在空间中的两个孔。在其他实施例中，加工袋（图2A-1）可被对称地成形，使得其侧部朝向底部出口对称地渐缩。

加工袋的总体积可以是25一直到125 mL，不过在若干实施例中，当在使用中时，其通常填充有约50至150 mL的来自受试者的样品。

为了接收来自受试者的样品，加工袋（图2A-1）被构造成在沿顶部管线的离散点处接收入口管线，该入口管线连接到与加工袋（图2A-1）的内部流体连接的入口。在一些实施例中，入口管线包括阴型鲁尔连接件，该阴型鲁尔连接件允许将加工袋组连接到细胞样品源，无论该细胞样品源是受试者还是包含待被转移到加工袋（图2A-1）中的细胞样品的容器。在其他实施例中，入口管线包括无菌对接件以用于使用无菌连接装置连接到细胞样品源。

红血细胞浓缩物袋（图2A-2）可以是扁平袋，其具有顶边缘、底边缘和两个基本上类似的侧边缘。在一些实施例中，红血细胞袋沿顶边缘包括蝶形穿刺器（spike）端口，如果需要的话，该穿刺器端口能够用于在生物加工期间取出红血细胞的等份（aliquot）。底边缘在一个拐角处包括入口，该入口经由多端口阀（图2A-4）与加工袋流体连接。

红血细胞袋的体积高达90 mL，不过在使用中其通常被填充约30至80 mL。

细胞浓缩物袋（图2A-3）是形状为矩形的三维袋，其具有顶边缘、底边缘和两个隔间，即大隔间和小隔间，所述大隔间和小隔间通过两个通道连接。顶边缘包括：入口，其经由多端口阀（图2A-4）与加工袋流体连接；以及两个端口，其用于在过程的该步骤结束时移除期望的细胞级分。这些端口可以是穿刺器端口、鲁尔连接件或用于使用无菌连接装置进行连接的无菌对接件。

细胞浓缩物袋（图2A-3）的体积为10至50 mL，不过在使用中，其通常被填充约25mL，该25 mL中约20 mL存在于大隔间中，且该25 mL中约5 mL存在于小隔间中。

连接加工袋组的每个袋的管线是可由聚氯乙烯（PVC）、乙烯醋酸乙烯酯（EVA）或其他材料制成的管材。

在一些实施例中，多端口阀（图2A-4）是三通旋塞阀，其具有三个连接器使得其能够连接到三个袋：加工袋（图2A-1）、红血细胞袋（图2A-2）和细胞浓缩物袋（图2A-3）。其他类型的计量阀或旋塞阀也将起作用，诸如，具有四个连接器的四通旋塞阀。

在所描绘的实施例中，多端口阀（图2A-4）包括：外部部分，其具有三个连接器；以及内部部分。外部部分可由聚碳酸酯制成。内部部分包括一体成型的手柄和筒体，其可由聚乙烯制成。筒体在若干个位置之间移动，这些位置包括：关闭位置，其被限定为不允许通过多端口阀（图2A-4）的任何流体流动的位置；以及两个打开位置，其被限定为准许流体流动通过多端口阀（图2A-4）的位置。

两个打开位置包括：第一位置，其准许从加工袋（图2A-1）通过多端口阀（图2A-4）到红血细胞袋（图2A-2）的流体流动；以及第二位置，其准许从加工袋（图2A-1）通过多端口阀（图2A-4）到细胞浓缩物袋（图2A-3）的流体流动。通过袋组的所有流体流动都经由重力实现。

图2B描绘了适合与由本公开所提供的系统一起使用的加工袋组的半刚性实施例。在所描绘的实施例中，半刚性加工袋组包括刚性（脊）加工袋（图2B-1）或容器、刚性（脊）红血细胞容器（图2B-2）和柔性细胞浓缩物袋（图2B-3）以用于加工细胞样品。当装载到CXP或CXP-II装置中时，在袋与容器之间的体积转移经由多端口阀（图2B-4）来控制。当将细胞样品装载到所公开的系统中时，首先将其装载到加工袋（图2B-1）中。多端口阀（图2B-4）管理样品在半刚性加工袋组的其他部件之间的流动。

如本文中所公开的，半刚性袋的每个部件包括独有2D条码标记。在一些实施例中，在加工期间将2D条码激光蚀刻到每个部件上，以便确保样品可追溯回到该样品所来源的受试者。所有2D条码（图2B-6）、（图2B-7）和（图2B-8）是相同的。

半刚性加工袋组对外部环境是封闭的，并且是一次性的。

如上所述，袋组包括加工袋（图2B-1）、红血细胞容器（图2B-2）和细胞浓缩物袋（图2B-3），所有这些都利用入口管线、夹具、过滤器和采样部位而通过到多端口阀（图2B-4）的管线或管材连接。

半刚性袋组包括用于加工袋（图2B-1）的刚性塑料壳体，所述刚性塑料壳体保持加工袋的形状并且能够在操作期间保持整个袋组直立。壳体被构造成使得其包含用于红血细胞容器的附接点，其也包括连接到刚性壳体的刚性塑料背衬。细胞浓缩物袋是柔性的，并且经由管材的管线和多端口阀（图2B-4）连接到加工袋和红血细胞容器。

刚性塑料壳体和刚性塑料背衬能够由任何合适的刚性塑料材料制成。刚性塑料材料既不展现弹性变形，也不表现出由柔性塑料所通常表现的任何弹性行为。由任何合适的刚性塑料制成的刚性塑料材料包括例如高密度聚乙烯（HDPE）或聚丙烯（PP）。

刚性塑料壳体和背衬中的每者可以是注射成型的或模切的。

加工袋（图2B-1）被包含在刚性塑料壳体内，该刚性塑料壳体可能会或可能不会完全围住加工袋（图2B-1）。在所描绘的实施例中，加工袋（图2B-1）未完全被围住在刚性塑料壳体内；相反，壳体部分地围住加工袋（图2B-1），从而在使用期间将其保持就位。加工袋（图2B-1）可由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）或其他塑料制成。红血细胞容器（图2B-2）可由PVC或其他塑料制成，并且附接到刚性塑料背衬的一侧，该刚性塑料背衬可移除地连接到刚性塑料壳体。细胞浓缩物袋（图2B-3）可由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）制成，不过可使用其他塑料。

袋（图2B-1）和（图2B-3）以及容器（图2B-2）中的每者可以是吹塑成型的。红血细胞容器（图2B-2）可以是射频、高频或介电焊接的，并且可以是吹塑成型的。

在一些实施例中，加工袋（图2B-1）是具有不对称形状的三维袋，其包括顶边缘、弯曲侧部、与弯曲侧部相对的笔直侧部、渐缩底部和与多端口阀（图2B-4）流体连接的底部出口。顶边缘包括用于接收来自受试者的样品的入口、以及可用于将加工袋悬挂在空间中的两个孔。在这样的实施例中，刚性塑料壳体的形状反映（mirror）了加工袋（图2B-1）的形状，其从顶部到底部渐缩，以便恰当地收容加工袋（图2B-1）。在其他实施例中，加工袋（图2B-1）可被对称地成形，使得其侧部朝向底部出口对称地渐缩。在这样的实施例中，刚性塑料壳体的形状反映了加工袋（图2B-1）的形状，其具有对称的侧部以便恰当地收容加工袋（图2B-1）。

加工袋的总体积可高达125 mL，不过在若干实施例中，当在使用中时，其通常填充有约50至150 mL的来自受试者的样品。

为了接收来自受试者的样品，加工袋（图2B-1）被构造成在沿顶部管线的离散点处接收入口管线，该入口管线连接到与加工袋（图2B-1）的内部流体连接的入口。在一些实施例中，入口管线包括阴型鲁尔连接件，该阴型鲁尔连接件允许将加工袋组连接到细胞样品源，无论该细胞样品源是受试者还是包含待被转移到加工袋（图2B-1）中的细胞样品的容器。在其他实施例中，入口管线包括无菌对接件以用于使用无菌连接装置连接到细胞样品源。

红血细胞浓缩物容器（图2B-2）可以是扁平袋，其具有顶边缘、底边缘和两个基本上类似的侧边缘。在一些实施例中，红血细胞袋沿顶边缘包括蝶形穿刺器端口，如果需要的话，该穿刺器端口能够用于在生物加工期间取出红血细胞的等份。底边缘在一个拐角处包括入口，该入口经由多端口阀（图2B-4）与加工袋流体连接。容器被安装到刚性塑料背衬，该刚性塑料背衬可移除地连接到刚性塑料壳体。

红血细胞容器（图2B-2）的体积高达90 mL，不过在使用中其通常被填充约30至80mL。

细胞浓缩物袋（图2B-3）是形状为矩形的三维袋，其具有顶边缘和底边缘。在所描绘的实施例中，细胞浓缩物袋（图2B-3）包括具有仅单个开口的单个大隔间，该开口经由多端口阀（图2B-4）与其他部件流体连接。在这样的实施例中，可经由至多端口阀（图2B-4）的连接从袋组移除细胞浓缩物袋（图2B-3），该连接经由鲁尔连接件或用于使用无菌连接装置进行连接的无菌对接件来实现，这允许细胞浓缩物袋以无菌方式连接到其他袋组，从而将细胞样品保持在永不暴露于外部空气的封闭环境中。

在其他实施例中，细胞浓缩物袋（图2B-3）是形状为矩形的三维袋，其具有顶边缘和底边缘以及两个隔间，即大隔间和小隔间，所述大隔间和小隔间通过两个通道连接。顶边缘包括：入口，其经由多端口阀（图2B-4）与加工袋流体连接；以及两个端口，其用于在过程的该步骤结束时移除期望的细胞级分。这些端口可以是穿刺器端口、鲁尔连接件或用于使用无菌连接装置进行连接的无菌对接件。

细胞加工袋（图2B-3）的体积是10至50 mL，不过在使用中，其通常被填充约25 mL。在其中细胞浓缩物袋（图2B-3）具有两个隔间的那些实施例中，25 mL容量被划分成使得该容量中约20 mL存在于大隔间中，且该容量中约5 mL存在于小隔间中。

连接加工袋组的袋中的每个的管线是可由聚氯乙烯（PVC）、乙烯醋酸乙烯酯（EVA）或其他材料制成的管材。

在一些实施例中，多端口阀（图2B-4）是三通旋塞阀，其具有三个连接器使得其能够连接到三个袋：加工袋（图2B-1）、红血细胞袋（图2B-2）和细胞浓缩物袋（图2B-3）。其他类型的计量阀或旋塞阀也将起作用，诸如，具有四个连接器的四通旋塞阀。

在所描绘的实施例中，多端口阀（图2B-4）被包含在刚性塑料壳体内，并且包括：外部部分，其具有三个连接器；以及内部部分。外部部分可由聚碳酸酯制成。内部部分包括一体成型的手柄和筒体，其可由聚乙烯制成。筒体在若干个位置之间移动，这些位置包括：关闭位置，其被限定为不允许通过多端口阀（图2B-4）的任何流体流动的位置；以及两个打开位置，其被限定为准许通过多端口阀（图2B-4）的流体流动的位置。在其他实施例中，刚性塑料壳体可具有适合于可移除地收容多端口阀（图2B-4）的开口，使得多端口阀（图4）可滑入和滑出壳体。

两个打开位置包括：第一位置，其准许从加工袋（图2B-1）通过多端口阀（图2B-4）到红血细胞袋（图2B-2）的流体流动；以及第二位置，其准许从加工袋（图2B-1）通过多端口阀（图2B-4）到细胞浓缩物袋（图2B-3）的流体流动。通过袋组的所有流体流动经由重力实现。

细胞培养袋组

图3描绘了适合与由本公开提供的系统一起使用的细胞培养袋（图3-1）的实施例。在所描绘的实施例中，细胞培养袋（图3-1）具有三个互锁装置的端口和连接器（图3-3）、（图3-4）、（图3-5），以确保在封闭的系统内完成细胞样品转移到袋中和从袋转移出。这些端口和连接器可以是穿刺器端口、鲁尔连接件或用于使用无菌连接装置进行连接的无菌对接件。

如本文中所公开的，细胞培养袋（图3-1）包括独有2D条码标记（图3-6）。在一些实施例中，在加工期间将2D条码激光蚀刻到袋上，以便确保样品可追溯回到该样品所来源的受试者。在操作中，2D条码（图3-6）与存在于加工袋组的部件上的2D条码相同。

在所描绘的实施例中，细胞培养袋（图3-1）具有细胞培养气体交换通气孔（图3-2）。通气孔允许在细胞培养袋（图3-1）中的无菌气体交换。在各种实施例中，气体交换通气孔（图3-2）是具有疏水涂层的单向阀，其防止通气孔润湿以允许到袋中的气体交换。

细胞培养袋的总体积可以是50至500 mL，不过在若干实施例中，当在使用中时，其通常被填充约200 mL，包括培养基和样品。

细胞培养袋（图3-1）可以是扁平袋，其具有带凹口的顶边缘（如所示的）、底边缘和两个基本上类似的侧边缘。在其他实施例中，顶边缘可以是衬里。在所描绘的实施例中，细胞培养袋（图3-1）的顶面包括三个互锁装置的端口和连接器（图3-3）、（图3-4）、（图3-5）。这三个端口的管线和连接器可由聚氯乙烯（PVC）、乙烯醋酸乙烯酯（EVA）或其他材料制成。

细胞培养袋（图3-1）可以是射频、高频或介电焊接的，并且可以是吹塑成型的。

如上所述，细胞培养袋（图3-1）将被放置到培育器中以用于扩增和/或处理样品。因此，它必须由能够承受由培育器提供的条件的材料制成。

在各种实施例中，细胞培养袋（图3-1）可由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）、聚乙烯（诸如，超低密度聚乙烯、氟化乙烯丙烯或其他塑料）制成。

洗涤袋组

图4A描绘了适合与由本公开提供的系统一起使用的柔性洗涤袋组的一个实施例的示例。所描绘的柔性袋组包括多个部件。在一些实施例中，这些部件包括：加工袋（图4A-1）、细胞废物袋（图4A-2）和细胞浓缩物袋或冷冻袋（图4A-3）。部件之间的体积转移经由多端口阀（图4A-4）来控制。当将扩增和/或处理的细胞样品被装载到所公开的系统中时，首先将其装载到加工袋（图4A-1）中。多端口阀（图4A-4）管理样品在柔性洗涤袋组的其他部件之间的流动。

如本文中所公开的，柔性袋组的每个部件包括独有2D条码标记。在一些实施例中，在加工期间将2D条码激光蚀刻到每个部件上，以便确保样品可追溯回到该样品所来源的受试者。所有2D条码（图4A-9）、（图4A-10）、（图4A-11）、（图4A-12）、（图4A-15）和（图4A-16）是相同的。在操作中，洗涤袋组的2D条码与存在于加工袋组和细胞培养袋的部件上的2D条码相同。

柔性洗涤袋组对外部环境是封闭的，并且是一次性的。

洗涤袋组还包括用于在保持封闭的系统的完整性的同时从袋组移除冷冻袋（图4A-3）的机构。在一些实施例中，存在可移除互锁装置（图4A-5）以将细胞浓缩物冷冻袋与多端口分离。在其他实施例中，存在从加工袋（图4A-1）到细胞浓缩物冷冻袋（图4A-3）的封闭管路径（图4A-13）。在每个实施例中，可经由使用鲁尔连接件或无菌对接件从袋组移除冷冻袋（图4A-3）。

如上所述，袋组包括加工袋（图4A-1）、细胞废物袋（图4A-2）和细胞浓缩物冷冻袋（图4A-3），所有这些都通过至多端口阀（图4A-4）的管线或管材经由入口管线连接。

细胞浓缩物冷冻袋（图4A-3）还包括单个互锁装置（图4A-8）或密封延伸部（图4A-14）以容易从冷冻袋（图4A-3）移除扩增和/或处理的样品。

加工袋（图4A-1）和细胞废物袋（图4A-2）可由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）或其他塑料制成。下文详细描述了冷冻袋的性质。

加工袋（图4A-1）和细胞废物袋（图4A-2）中的每者可以是吹塑成型的。在一些实施例中，这些袋可以是射频、高频或介电焊接的，并且可以是吹塑成型的。

在一些实施例中，加工袋（图4A-1）是具有不对称形状的三维袋，其包括顶边缘、弯曲侧部、与弯曲侧部相对的笔直侧部、渐缩底部和与多端口阀（图4A-4）流体连接的底部出口。顶边缘包括用于接收来自细胞培养袋的扩增和/或加工的样品的入口、以及可用于将加工袋悬挂在空间中的两个孔。在其他实施例中，加工袋（图4A-1）可被对称地成形，使得其侧部朝向底部出口对称地渐缩。

加工袋的总体积可高达200 mL，不过在若干实施例中，当在使用中时，其通常填充有约50至150 mL的扩增和/或处理的细胞样品。

为了接收扩增和/或处理的细胞样品，加工袋（图4A-1）被构造成在沿顶部管线的离散点处接收入口管线，该入口管线连接到与加工袋（图4A-1）的内部流体连接的入口。在一些实施例中，入口管线包括阴型鲁尔连接件，该阴型鲁尔连接件允许将加工袋组连接到细胞培养袋，该细胞培养袋包含待被转移到加工袋（图4A-1）中的细胞样品。在其他实施例中，入口管线包括无菌对接件以用于使用无菌连接装置连接到细胞培养袋。

细胞废物袋（图4A-2）可以是扁平袋，其具有倒圆的顶边缘、底边缘和两个基本上类似的侧边缘。在一些实施例中，细胞废物袋（图4A-2）沿顶边缘包括蝶形穿刺器端口，如果需要的话，该穿刺器端口能够用于在生物加工期间取出细胞废物产物的等份。底边缘在一个拐角处包括入口，该入口经由多端口阀（图4A-4）与加工袋流体连接。

细胞废物袋（图4A-2）的体积高达150 mL，不过在使用中其通常被填充约30至80mL。

连接洗涤袋组的袋中的每个的管线是可由聚氯乙烯（PVC）、乙烯醋酸乙烯酯（EVA）或其他材料制成的管材。

在一些实施例中，多端口阀（图4A-4）是三通旋塞阀，其具有三个连接器使得其能够连接到三个袋：加工袋（图4A-1）、细胞废物袋（图4A-2）和细胞浓缩物冷冻袋（图4A-3）。其他类型的计量阀或旋塞阀也将起作用，诸如，具有四个连接器的四通旋塞阀。

在所描绘的实施例中，多端口阀（图4A-4）包括：外部部分，其具有三个连接器；以及内部部分。外部部分可由聚碳酸酯制成。内部部分包括一体成型的手柄和筒体，其可由聚乙烯制成。筒体在若干个位置之间移动，这些位置包括：关闭位置，其被限定为不允许通过多端口阀（图4A-4）的任何流体流动的位置；以及两个打开位置，其被限定为准许通过多端口阀（图4A-4）的流体流动的位置。

两个打开位置包括：第一位置，其准许从加工袋（图4A-1）通过多端口阀（图4A-4）到细胞废物袋（图4A-2）的流体流动；以及第二位置，其准许从加工袋（图4A-1）通过多端口阀（图4A-4）到冷冻袋 （图4A-3）的流体流动。通过袋组的所有流体流动经由重力实现。

图4B描绘了适合与由本公开提供的系统一起使用的洗涤袋组的半刚性实施例。在所描绘的实施例中，半刚性洗涤袋组包括刚性（脊）加工袋（图4B-1）、刚性（脊）细胞废物容器（图4B-2）和细胞浓缩物冷冻袋（图4B-3）以用于加工细胞样品。当装载到CXP-II装置中时，在袋和容器之间的体积转移经由多端口阀（图4B-4）来控制。当将细胞样品装载到所公开的系统中时，首先将其装载到加工袋（图4B-1）中。多端口阀（图4B-4）管理样品在半刚性加工袋组的其他部件之间的流动。

如本文中所公开的，柔性袋组的每个部件包括独有2D条码标记。在一些实施例中，在加工期间将2D条码激光蚀刻到每个部件上，以便确保样品可追溯回到该样品所来源的受试者。所有2D条码（图4B-8）、（图4B-9）、（图4B-10）、（图4B-13）和（图4B-14）是相同的。在操作中，洗涤袋组的2D条码与存在于加工袋组和细胞培养袋的部件上的2D条码相同。

半刚性洗涤袋组对外部环境是封闭的，并且是一次性的。

洗涤袋组还包括用于在保持封闭的系统的完整性的同时从袋组移除冷冻袋（图4B-3）的机构。在一些实施例中，存在可移除互锁装置（图4B-12）以将细胞浓缩物冷冻袋与多端口分离。在其他实施例中，存在从加工袋（图4B-1）到细胞浓缩物冷冻袋（图4B-3）的封闭的管路径（图4B-5）。在每个实施例中，可经由使用鲁尔连接件或无菌对接件从袋组移除冷冻袋（图4B-3）。

如上所述，袋组包括加工袋（图4B-1）、细胞废物容器（图4B-2）和细胞浓缩物冷冻袋（图4B-3），所有这些都利用入口管线通过到多端口阀（图4B-4）的管线或管材而连接。

细胞浓缩物冷冻袋（图4B-3）还包括单个互锁装置（图4B-6）或密封延伸部（图4B-11）以容易从冷冻袋（图4B-3）中移除扩增和/或处理的样品。

半刚性袋组包括用于加工袋（图4B-1）的刚性塑料壳体，所述刚性塑料壳体保持加工袋的形状并且能够在操作期间保持整个袋组直立。壳体被构造成使得其包含用于细胞废物容器（图4B-2）的附接点，其还包括连接到刚性壳体的刚性塑料背衬。冷冻袋经由管材的管线和多端口阀（图4B-4）连接到加工袋和红血细胞容器。

刚性塑料壳体和刚性塑料背衬能够由任何合适的刚性塑料材料制成。刚性塑料材料既不展现弹性变形，也不表现出柔性塑料所通常表现的任何弹性行为。由任何合适的刚性塑料制成的刚性塑料材料包括例如高密度聚乙烯（HDPE）或聚丙烯（PP）。

刚性塑料壳体和背衬中的每者可以是注射成型的或模切的。

加工袋（图4B-1）被包含在刚性塑料壳体内，该刚性塑料壳体可能会或可能不会完全围住加工袋（图4B-1）。在所描绘的实施例中，加工袋（图4B-1）未被完全围住在刚性塑料壳体内；相反，壳体部分地围住加工袋（图4B-1），从而在使用期间将其固定就位。加工袋（图4B-1）可由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）或其他塑料制成。细胞废物容器（图4B-2）可由EVA、PVC或其他塑料制成，并且附接到刚性塑料背衬的一侧，该刚性塑料背衬可移除地连接到刚性塑料壳体。下文详细描述了冷冻袋的性质。

加工袋（图4B-1）和细胞废物容器（图4B-2）中的每者可以是吹塑成型的。每者也可以是射频、高频或介电焊接的，并且可以是吹塑成型的。

在一些实施例中，加工袋（图4B-1）是具有不对称形状的三维袋，其包括顶边缘、弯曲侧部、与弯曲侧部相对的笔直侧部、渐缩底部和与多端口阀（图4B-4）流体连接的底部出口。顶边缘包括用于接收来自受试者的样品的入口、以及可用于将加工袋悬挂在空间中的两个孔。在这样的实施例中，刚性塑料壳体的形状反映了加工袋（图4B-1）的形状，其从顶部到底部渐缩，以便恰当地收容加工袋（图4B-1）。在其他实施例中，加工袋（图4B-1）可被对称地成形，使得其侧部朝向底部出口对称地渐缩。在这样的实施例中，刚性塑料壳体的形状反映了加工袋（图4B-1）的形状，其具有对称的侧部以便恰当地收容加工袋（图4B-1）。

加工袋的总体积可高达200 mL，不过在若干实施例中，当在使用中时，其通常填充有约50至150 mL的来自细胞培养袋的扩增和/或处理的细胞。

为了从细胞培养袋接收扩增和/或处理的样品，加工袋（图4B-1）被构造成在沿顶部管线的离散点处接收入口管线，该入口管线连接到与加工袋（图4B-1）的内部流体连接的入口。在一些实施例中，入口管线包括阴型鲁尔连接件，该阴型鲁尔连接件允许将加工袋组连接到细胞培养袋，该细胞培养袋包含待被转移到加工袋（图4B-1）中的细胞样品。在其他实施例中，入口管线包括无菌对接件以用于使用无菌连接装置连接到细胞培养袋。

细胞废物容器（图4B-2）可以是扁平袋，其具有顶边缘、底边缘和两个基本上类似的侧边缘。在一些实施例中，细胞废物容器（图4B-2）沿顶边缘包括蝶形穿刺器端口，如果需要的话，该穿刺器端口能够用于在生物加工期间取出细胞废物产物的等份。底边缘在一个拐角处包括入口，该入口经由多端口阀（图4B-4）与加工袋流体连接。容器被安装到刚性塑料背衬，该刚性塑料背衬可移除地连接到刚性塑料壳体。

细胞废物容器（图4B-2）的体积高达150 mL，不过在使用中其通常被填充约30至80mL。

连接加工袋组的每个袋的管线是可由聚氯乙烯（PVC）、乙烯醋酸乙烯酯（EVA）或其他材料制成的管材。

在一些实施例中，多端口阀（图4B-4）是三通旋塞阀，其具有三个连接器使得其能够连接到三个袋：加工袋（图4B-1）、细胞废物容器（图4B-2）和细胞浓缩物冷冻袋（图4B-3）。其他类型的计量阀或旋塞阀也将起作用，诸如，具有四个连接器的四通旋塞阀。

在所描绘的实施例中，多端口阀（图4B-4）被包含在刚性塑料壳体内，并且包括：外部部分，其具有三个连接器；以及内部部分。外部部分可由聚碳酸酯制成。内部部分包括一体成型的手柄和筒体，其可由聚乙烯制成。筒体在若干个位置之间移动，这些位置包括：关闭位置，其被限定为不允许通过多端口阀（图4B-4）的任何流体流动的位置；以及两个打开位置，其被限定为准许通过多端口阀（图4B-4）的流体流动的位置。在其他实施例中，刚性塑料壳体可具有适合于可移除地收容多端口阀（图4B-4）的开口，使得多端口阀（图4B-4）可滑入和滑出壳体。

两个打开位置包括：第一位置，其准许从加工袋（图4B-1）通过多端口阀（图4B-4）到细胞废物容器（图4B-2）的流体流动；以及第二位置，其准许从加工袋（图4B-1）通过多端口阀（图4B-4）到冷冻袋（图4B-3）的流体流动。通过袋组的所有流体流动经由重力实现。

冷冻袋

图5描绘了适合与所公开的系统和方法一起使用的冷冻袋的实施例。在所描绘的实施例中，尺寸是近似的。

冷冻袋是形状为矩形的三维袋，其具有顶边缘、底边缘、两个相同的侧边缘、倒圆的拐角和两个内部隔间，即大隔间和小隔间，所述大隔间和小隔间通过两个通道连接。

如本文中所公开的，冷冻袋包括独有2D条码标记（图5-1）。在一些实施例中，在加工期间将2D条码激光蚀刻到冷冻袋上，以便确保样品可追溯回到该样品所来源的受试者。在操作中，冷冻袋的2D条码与存在于加工袋组、细胞培养袋和洗涤袋组的部件上的2D条码相同。

在一些实施例中，冷冻袋的尺寸是特定且精确的，其遵照所建立的标准，诸如例如，CVP.D标准，其中V表示体积，P代表从冷冻袋引出的端口的数量，并且D代表袋的深度（以毫米为单位）。在一些实施例中，冷冻袋通过具有遵照C_252.72标准的尺寸来遵照CVP.D标准，其中冷冻袋具有25 mL的总内部存储体积，包含从冷冻袋引出的2个端口或猪尾管，并且具有7.2毫米（mm）的厚度深度。在该实施例中，大隔间所具有的总体积为20 mL，并且小隔间所具有的总体积为5 mL。

在所描绘的实施例中，冷冻袋的顶边缘具有从内部室引出的两个端口或猪尾管。在生物加工期间，所述端口中的一者可以是能够经由多端口阀（例如，见图4A）连接到洗涤袋组的入口。如上文所描述的，可以以使得保持封闭的系统的完整性的方式从洗涤袋组移除冷冻袋。

一旦从洗涤袋组移除，冷冻袋就能够被移动到低温存储装置。那时，两个端口能够具有不同的功能。例如，位于小隔间上方的端口能够用于取出扩增和/或处理的细胞样品的样品，以用于品质控制的目的。位于大隔间上方的端口能够用于将冷冻袋的内容物递送回到样品所来源的受试者。这些端口可以是鲁尔连接件或用于使用无菌连接装置进行连接的无菌对接件。

冷冻袋意图用作长期低温存储装置。在这方面，它必须由能够承受低温保存的极低温度的部件制成。在一些实施例中，冷冻袋表现出液氮稳定性，同时仍然是抗冲击和抗刺穿的。

在一些实施例中，冷冻袋针对在液氮中低温保存细胞样品（诸如，用于免疫疗法应用的外周血）而被评定。

在一些实施例中，冷冻袋由乙烯醋酸乙烯酯（EVA）制成。在一些实施例中，冷冻袋由聚烯烃-EVA共混物制成。在一些实施例中，冷冻袋由氟化乙烯丙烯（FEP）材料制成，其可遵照USP VI级标准。

Claims (40)

1.一种用于细胞生物加工和制造的系统，所述系统包括：一个或多个加工袋组、培养袋组和洗涤袋组，其中：

每个袋组包括所述系统所独有的相同2D条码；并且

每个袋组被构造成经由一个或多个鲁尔连接件或经由使用无菌连接装置的一个或多个无菌对接件与其他袋组流体连接。

2.根据权利要求1所述的系统，其中，所述一个或多个加工袋组包括柔性部件。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的系统，其中，所述柔性部件包括加工袋、红血细胞袋和细胞浓缩物袋；

其中，所述系统对外部环境是封闭的，并且所述部件经由多个管彼此流体连接。

4.根据权利要求3所述的系统，其中：

所述加工袋经由第一管与所述红血细胞袋流体连接；

所述加工袋经由第二管与所述细胞浓缩物袋流体连接；并且

所述红血细胞袋和所述细胞浓缩物袋彼此不直接连接。

5.根据权利要求3或权利要求4所述的系统，其中，所述部件之间的体积转移经由多端口阀来控制，所述多端口阀直接连接到所述加工袋、所述红血细胞袋和所述细胞浓缩物袋中的每者。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的系统，其中，所述柔性加工袋组被构造成供单次使用，并且是一次性的。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的系统，其中：

所述加工袋由选自乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）和其他塑料的材料制成；

所述红血细胞袋由选自PVC或其他塑料的材料制成；并且

所述细胞浓缩物袋由EVA、PVC或其他塑料制成。

8.根据权利要求2至7中任一项所述的系统，其中，所述加工袋包括在所述加工袋顶部处的入口管线，所述入口管线与所述加工袋的内部流体连接，

其中，所述入口管线包括选自阴型鲁尔连接件和无菌对接件的无菌连接件，并且

其中，所述入口管线被构造成用于从所述加工袋组的外部接收样品。

9.根据权利要求2至8中任一项所述的系统，其中，所述细胞浓缩物袋包括：

通过两个通道连接的大隔间和小隔间；以及

一个或多个端口，所述一个或多个端口被构造成用于从所述加工袋组移除所述细胞浓缩物袋的内容物，

其中，所述一个或多个端口选自穿刺器端口、鲁尔连接件和无菌对接件。

10.根据权利要求5所述的系统，其中，所述多端口阀包括：外部部分，所述外部部分具有三个连接器；以及内部部分，所述内部部分包括手柄和筒体，所述筒体被构造成在关闭位置、第一打开位置和第二打开位置之间移动。

11.根据权利要求10所述的系统，其中：

所述第一打开位置准许从所述加工袋通过所述多端口阀到所述红血细胞袋的流体流动；并且

所述第二位置准许从所述加工袋通过多端口阀到所述细胞浓缩物袋的流体流动。

12.根据权利要求1所述的系统，其中，所述一个或多个加工袋组包括柔性部件和刚性部件的组合。

13.根据权利要求1或权利要求12所述的系统，其中，所述刚性部件包括加工容器和红血细胞容器，并且所述柔性部件包括细胞浓缩物袋；

其中，所述系统对外部环境是封闭的，并且所述部件经由多个管彼此流体连接。

14.根据权利要求13所述的系统，其中：

所述加工容器经由第一管与所述红血细胞容器流体连接；

所述加工容器经由第二管与所述细胞浓缩物袋流体连接；并且

所述红血细胞容器和所述细胞浓缩物袋彼此不直接连接。

15.根据权利要求13或权利要求14所述的系统，其中，所述部件之间的体积转移经由多端口阀来控制，所述多端口阀直接连接到所述加工容器、所述红血细胞容器和所述细胞浓缩物袋中的每者。

16.根据权利要求12至15中任一项所述的系统，其中，所述加工袋组被构造成供单次使用，并且是一次性的。

17.根据权利要求12至16中任一项所述的系统，其中：

所述加工容器由选自乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚氯乙烯（PVC）和其他塑料的材料制成；

所述红血细胞容器由选自PVC或其他塑料的材料制成；并且

所述细胞浓缩物袋由EVA、PVC或其他塑料制成。

18.根据权利要求12至17中任一项所述的系统，其中，所述加工容器包括在所述加工容器顶部处的入口管线，所述入口管线与所述加工容器的内部流体连接，

其中，所述入口管线包括选自阴型鲁尔连接件和无菌对接件的无菌连接件，并且

其中，所述入口管线被构造成用于从所述加工袋组的外部接收样品。

19.根据权利要求12至18中任一项所述的系统，其中，所述细胞浓缩物袋包括：

通过两个通道连接的大隔间和小隔间；以及

一个或多个端口，所述一个或多个端口被构造成用于从所述加工袋组中移除所述细胞浓缩物袋的内容物，

其中，所述一个或多个端口选自穿刺器端口、鲁尔连接件和无菌对接件。

20.根据权利要求15所述的系统，其中，所述多端口阀包括：外部部分，所述外部部分具有三个连接器；以及内部部分，所述内部部分包括手柄和筒体，所述筒体被构造成在关闭位置、第一打开位置和第二打开位置之间移动。

21.根据权利要求20所述的系统，其中：

所述第一打开位置准许从所述加工容器通过所述多端口阀到所述红血细胞容器的流体流动；并且

所述第二位置准许从所述加工容器通过多端口阀到所述细胞浓缩物袋的流体流动。

22.一种三维冷冻袋，所述冷冻袋包括：

内部室，所述内部室包括大隔间和小隔间，所述隔间通过两个通道连接；

第一端口，所述第一端口限定在所述大隔间与所述冷冻袋的外部之间的流体连接；

第二端口，所述第二端口限定在所述小隔间与所述冷冻袋的外部之间的流体连接；以及

独有2D条码标记；

其中，所述冷冻袋被建构成用于长期低温存储。

23.根据权利要求22所述的冷冻袋，其中，所述冷冻袋遵照C_252.72标准，其中：

所述存储袋的内部体积为25 mL，

存在从所述冷冻袋的内部室引出的总共2个端口，并且

所述冷冻袋具有7.2 mm的厚度深度。

24.根据权利要求22或权利要求23所述的冷冻袋，其中，所述大隔间所具有的总体积为20 mL，并且所述小隔间所具有的总体积为5 mL。

25.根据权利要求22至24中任一项所述的冷冻袋，其中：

所述第一端口被构造成从所述冷冻袋的外部接收细胞样品，并且

所述第一端口还被构造成将所述大室的所述内容物递送到所述冷冻袋的外部。

26.根据权利要求22至25中任一项所述的冷冻袋，其中：

所述第二端口被构造成将所述小隔间的内容物中的至少一些递送到所述冷冻袋的外部。

27.根据权利要求22至26中任一项所述的冷冻袋，其中，所述端口包括无菌连接件，所述无菌连接件选自鲁尔连接件和用于使用无菌连接装置进行连接的无菌对接件。

28.根据权利要求22至27中任一项所述的冷冻袋，其中，所述冷冻袋针对细胞样品在液氮中的低温保存而被评定。

29.根据权利要求22至28中任一项所述的冷冻袋，其中，所述冷冻袋由选自乙烯醋酸乙烯酯（EVA）、聚烯烃-EVA共混物、氟化乙烯丙烯（FEP）材料以及前述各者中的任何的组合的材料制成。

30.根据权利要求12至19中任一项所述的冷冻袋，其中，所述独有2D条码对应于存在于低温存储盒上的1D条码。

31.一种产生和低温存储工程制造的自体细胞产物的方法，所述方法包括：

从受试者获得细胞样品；

通过使在其中获得所述样品的所述容器与所述一个或多个加工袋组之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器附接，或者通过使用无菌连接装置来无菌对接在其中获得所述样品的所述容器的管材与所述一个或多个加工袋组，将所述样品转移到所述一个或多个细胞加工袋组而不使所述样品暴露于外部环境；

将所述一个或多个加工袋组放置在一个或多个加工容器中；

使所述一个或多个加工容器离心，由此基于所述细胞的大小、密度以及起始体积对所述细胞样品进行分层和分离；

通过使在所述一个或多个加工袋组与所述培养袋之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器附接，或者通过使用无菌连接装置来无菌对接所述一个或多个加工袋组的管材与所述培养袋的管材，经由重力流使期望的细胞浓缩物从所述一个或多个加工袋组转移到培养袋而不使所述样品暴露于所述外部环境；

培育所述培养袋，由此扩增所述期望的细胞浓缩物；

通过使在所述培养袋与洗涤袋组之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者通过使用无菌连接装置来无菌对接所述培养袋的管材与所述洗涤袋组，经由重力流将所述扩增的细胞浓缩物从所述培养袋转移到洗涤袋组；

洗涤所述扩增的细胞浓缩物，由此将因扩增产生的细胞废物副产物与工程制造的细胞产物分离；

通过使在所述洗涤袋组与冷冻袋之间的阳型和阴型鲁尔锁连接器彼此附接，或者使用无菌连接装置来无菌对接所述洗涤袋组的管材与所述冷冻袋，将所述工程制造的细胞产物从所述洗涤袋组转移到冷冻袋，其中，经由离心力或重力流发生所述转移；

将所述冷冻袋转移到低温冷冻外包装袋和罐中；以及

将所述冷冻袋、低温冷冻外包装和罐转移到受控速率的低温冷冻系统中，所述系统使用液氮蒸汽来冷冻所述工程制造的细胞产物并将其保持处于低温保存状态中。

32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述细胞样品选自外周血、全血、骨髓、脐带血以及前述各者中的任何的组合。

33.根据权利要求31或权利要求32所述的方法，其中，所述一个或多个细胞加工袋组、所述培养袋组、所述洗涤袋组和所述冷冻袋：

全部被构造成供单次使用；

是一次性的；并且

全部包括特定于所述样品的相同的独有2D条码。

34.根据权利要求31至33中任一项所述的方法，所述方法还包括：在离心之前，从所述样品中贫化红血细胞。

35.根据权利要求31至34中任一项所述的方法，其中，所述样品是外周血，在离心之前从所述样品中贫化红血细胞，并且所述离心将所述外周血分离成红血细胞、干细胞级分和血浆。

36.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中，在培育所述培养袋之前，用选自细胞因子、葡萄糖和两者的一种或多种添加剂来补充所述培养袋内所包含的细胞生长培养基。

37.根据权利要求31至36中任一项所述的方法，其中，所述冷冻袋符合C_252.72标准，所述冷冻袋具有25毫升（mL）的存储体积、2个端口或猪尾管、以及7.2 mm的深度。

38.根据权利要求31至37中任一项所述的方法，其中，所述罐包括独有1D条码，所述1D条码耦合到所述冷冻袋上的所述2D条码。

39.根据权利要求38所述的方法，所述方法还包括：在将所述冷冻袋、低温冷冻外包装和罐转移到受控速率的低温冷冻系统中期间，扫描所述1D条码以确认所述1D条码信息耦合到所述2D条码信息。

40.根据权利要求31至39中任一项所述的方法，所述方法还包括：在转移到所述低温冷冻系统之后，将所述冷冻袋、低温冷冻外包装和罐转移到填充有液氮的瓶中的存储位置以进行长期低温存储。