CN110283156B

CN110283156B - 从刺五加中提取的新型降血脂化合物

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Publication number: CN110283156B
Application number: CN201910687452.4A
Authority: CN
Inventors: 贾东升; 谢晓亮; 魏曼; 温春秀; 崔施展; 王腾; 李茜云; 田伟
Original assignee: INSTITUTE OF CASH CROPS HEBEI ACADEMY OF AGRICULTURE AND FORESTRY SCIENCES
Current assignee: INSTITUTE OF CASH CROPS HEBEI ACADEMY OF AGRICULTURE AND FORESTRY SCIENCES
Priority date: 2019-07-29
Filing date: 2019-07-29
Publication date: 2020-06-30
Anticipated expiration: 2039-07-29
Also published as: CN110283156A

Abstract

本发明涉及一种从刺五加中提取分离得到的化合物。本发明所述化合物对于高脂模型大鼠具有十分明显的降血脂作用，可降低高脂模型动物血中甘油三酯的水平，而且还具有良好的降低胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇、升高高密度脂蛋白胆固醇的作用；同时，所述化合物的生物毒性较低。因此，本发明所述化合物适合用作降血脂药物。

Description

从刺五加中提取的新型降血脂化合物

技术领域

本发明涉及医药领域，具体而言，本发明涉及一种从刺五加中提取的新型降血脂化合物及其制备方法。

背景技术

血脂异常通常指血浆中胆固醇(TC)和/或甘油三酯(TG)升高，俗称高脂血症。高脂血症是动脉粥样硬化发生的主要危险因素，也是诱发心脑血管疾病的重要因素，血清中TC、TG和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量升高，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量降低，可导致动脉内膜损伤，通透性增高，加速脂质在血管内皮下沉积。而血脂升高时，氧自由基大量产生，脂质过氧化作用增强，产生大量的MDA，使SOD活性降低，促进动脉粥样硬化的发生和发展。

目前血脂异常等慢性疾病的治疗如药物处理和医疗手段(手术)所发挥的作用甚小。血脂异常的预防与治疗主要采用药物治疗与非药物治疗相结合的方式。临床上常用的一线降血脂的药物为他汀类，这类药物降低TC作用最强，同时也能降低TG和升高HDL-C，从而有效控制血脂。此外，还有烟酸及其衍生物、贝特类药物等。但所用药物只能起到控制血脂的作用，且副作用较多，不能从根本上预防和调节血脂。因此，通过天然植物活性成分来调节血脂以预防高脂血症所引起的疾病，已成为当前医疗保健研究的热点。

刺五加(拉丁学名：Eleutherococcus senticosus)是药食两用植物，从1977年版《中国药典》开始收载，其根部和根状茎可入药，具有益气健脾、补肾安神、活血化瘀的功效，《本草纲目》记载刺五加能“补力益精，明目下气”，能“补五劳七伤，久服轻身耐老”，常用于治疗脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦。现代医学研究也表明，刺五加具有降血糖、降血脂、抗病毒、抗肿瘤和止痛杀菌等多种药理作用和临床应用。CN102579532A、CN101584719A等研究了刺五加提取物在降血脂方面的作用；“刺五加叶皂试对实验性高脂血症大鼠血脂的影响”，刘宏雁，《白求恩医科大学学报》，第21卷第4期，341-343等研究了刺五加叶皂甙对实验性高脂血症大鼠血脂的影响。

本发明在刺五加的提取物中发现了一种新型天然化合物，所述化合物具有良好降血脂作用。

发明内容

本发明克服了现有技术的不足，提供了一种新型天然降血脂化合物，所述化合物从刺五加中提取得到。

本发明通过以下技术方案来实现的：

本发明所述的新型天然降血脂化合物，其结构式如式I所示：

所述式I所示的化合物的命名为(E)-2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-3-(3,5-二甲氧基苯乙烯基)环戊烯-2-酮。

在另一方面，本发明提供了所述化合物的制备方法。

在又一方面，本发明提供了包含所述化合物的药物组合物。

在再一方面，本发明提供了所述化合物在制备药物中的应用。

有益效果

本发明式I所示的化合物对于高脂模型大鼠具有十分明显的降血脂作用，可降低高脂模型动物血中甘油三酯的水平，而且还具有良好的降低胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇、升高高密度脂蛋白胆固醇的作用；同时，所述化合物的生物毒性较低。因此，本发明式I所示的化合物适合用作降血脂药物。

具体实施方式

尽管在本申请中示出和描述了本发明优选的实施方案，但是对本领域技术人员而言明显的是，该实施方案仅以实例的方式提供。本领域技术人员将想起大量的变更、变换和置换，这些均在本发明范围内。应理解的是，在实践本发明中，可以使用本申请所述的本发明实施方案的各种备选方案。意在所附权利要求限定了本发明范围并且由此覆盖了在这些权利要求范围内的方法和结构及它们的等同形式。

除非另外定义，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常所理解相同的含义。将本申请提及的所有专利和出版物通过引用的方式并入本文。

化合物

本发明提供了一种新型天然降血脂化合物，其结构式如式I所示：

制备方法

本发明还提供了所述式I所示的化合物的制备方法，其包括以下步骤：

(1)取干燥的刺五加(Eleutherococcus senticosus)药材，粉碎后加入5～10倍质量的60％～80％的乙醇，加热回流提取1～3次，每次2～4h，滤过，合并提取液，减压浓缩至提取液初始体积的1/5～1/10得刺五加的乙醇浸膏；

(2)将刺五加的乙醇浸膏加2～4倍体积的水混悬后，依次用等体积的环己烷、乙酸乙酯萃取，各萃取液减压回收溶剂得环己烷部分和乙酸乙酯部分；

(3)将乙酸乙酯部分用硅胶柱进行分离，依次用不同比例的石油醚-甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得到粗分产物；粗分产物再用MCI柱进行分离，依次用不同比例的乙醚-甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得到式I所示的化合物。

在一个实施方案中，步骤1中提取用的乙醇量为刺五加药材质量的6～8倍，浓度为70％～75％。

在一个实施方案中，步骤2中用环己烷萃取2～4次，用乙酸乙酯萃取3～5次。

在一个实施方案中，步骤3中将乙酸乙酯部分用硅胶柱进行分离，依次用99:1～50:50(v/v)的不同比例的石油醚-甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得到I-V的5个组分；组分V再用MCI柱进行分离，依次以99:1～80:20(v/v)的不同比例的乙醚:甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得V(1)-V(6)的6个组分，组分V(4)为式I所示的化合物。

在一个实施方案中，硅胶柱分离时的不同比例的石油醚-甲醇是指99:1、95:5、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50(v/v)的石油醚-甲醇。

在一个实施方案中，MCI柱分离时的不同比例的乙醚-甲醇是指99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、70:30(v/v)的乙醚-甲醇。

组合物

本发明涉及这样的药物，其包含式I所示的化合物作为药物活性成分，任选地包含一种或多种惰性载体和/或稀释剂。

本发明化合物和将要与其组合的其它活性物质可一起形成一种制剂，例如片剂或胶囊剂，或者分开配制成两种相同或不同的制剂，例如所谓的套盒。

本发明化合物可以其本身、彼此混合或以药物组合物的形式作为药物给予动物，优选给予包括人类的哺乳动物。给药方式可以为：口服给药，例如其为片剂、薄膜包衣片剂、糖包衣片剂、颗粒剂、硬和软明胶胶囊、溶液(包括水、醇和油性溶液)、汁剂、滴剂、糖浆剂、乳剂或混悬液的形式；直肠给药，例如其为栓剂的形式；或者肠胃外给药，例如其为皮下注射、肌内注射或静脉注射或输注的溶液剂的形式，具体地为水溶液的形式。

用于口服给药的合适药物化合物可为分开的单元的形式，例如胶囊、扁胶囊、锭剂或片剂，每种含有规定量的本发明化合物；为粉末剂或颗粒剂；为在水性或非水性液体中的溶液或混悬液；或者为水包油型或油包水型乳剂。如已经提到的，可通过任何合适的药学方法制备这些组合物，所述方法包括其中使活性成分和载体(其可由一种或多种其它成分组成)相接触的步骤。组合物一般通过将活性成分与液体和/或细碎的固体载体均匀且均质混合来制备，此后需要时使产物成型。因此，例如，片剂可通过压制或模塑化合物的粉末或颗粒来制备，适当时与一种或多种其它成分一起制备。压制的片剂可通过将呈自由流动形式(例如粉末或颗粒)的化合物在合适的机器中制成片剂来制备，适当时与粘合剂、助流剂、惰性稀释剂和/或一种(或多种)表面活性剂/分散剂一起混合。模塑的片剂可通过将呈粉末形式且已经用惰性液体稀释剂润湿的化合物在合适的机器中模塑来制备。

适于经口(舌下)给药的药物组合物包含锭剂和软锭剂，所述锭剂含有本发明化合物与矫味剂(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)，所述软锭剂包含在惰性基(例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中的化合物。

包衣的制剂和包衣的缓释制剂，尤其是耐酸且耐胃液制剂，也属于本发明的框架内。耐胃液的合适包衣包括乙酸邻苯二甲酸纤维素、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、羟基丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的阴离子聚合物。

适于直肠给药的药物组合物优选呈单剂量栓剂的形式。这些可如下制备：将本发明化合物与一种或多种常规固体载体混合，并使所得混合物成型。

适于胃肠外给药的药物组合物优选地包括本发明化合物的无菌水性制剂，其优选地与预定接受者的血液等渗。虽然优选静脉内给药这些制剂，但是还可进行皮下、肌内或皮内注射给药。这些制剂可优选地如下制备：将化合物与水混合，使所得溶液无菌且与血液等渗。可注射的本发明组合物一般含有0.1重量％至5重量％的活性化合物。

其它合适的给药形式为例如经皮或局部给药，例如呈软膏剂、乳膏剂、酊剂、喷雾剂、粉末剂或透皮治疗系统的形式；或者吸入性给药，例如呈鼻喷雾剂或气雾剂混合物的形式，或者例如微囊、植入物的形式。

适于在皮肤上局部使用的药物组合物优选地呈软膏剂、乳膏剂、洗剂、糊剂、喷雾剂、气雾剂或油的形式。所用的载体可为凡士林油、羊毛脂、聚乙二醇、醇和两种或更多种这些物质的组合。活性成分一般呈现的浓度为组合物的0.1重量％至15重量％，例如0.5重量％至2重量％。

还可经皮给药。适于经皮给药的药物组合物可呈适于与患者表皮长期紧密接触的单一贴剂的形式。上述贴剂适当地含有在水溶液中的活性成分，所述水溶液适当时为缓冲过的、溶解和/或分散在胶粘剂中或者分散在聚合物中。合适的活性成分浓度为约1％至35％，优选为3％至15％。具体的选择是为了通过电转运或离子电渗释放的活性成分。

本发明化合物可与其它药理学活性化合物广泛地组合使用，所述活性成分组合可通过对患者分开给药活性成分或者以组合产品(其中在一种药物制剂中存在多种活性成分)形式给药。当分开给药时，可同时或按任意次序依序给药。为了达到所需组合的治疗效应，可选择本发明化合物和(一种或多种)其它药学活性成分的量以及给药的相对时机。所述组合的给药可伴随：(1)包括所有药学活性成分的单位药物组合物；或(2)各自包含至少一种药学活性成分的单独药物组合物。可替换地，所述组合物可依序分开给药，其中先给予一种治疗剂，然后再给予第二种，反之亦然。上述依序给药在时间上可以是接近的或远离的。

适于组合的治疗剂包括，例如抗糖尿病药(诸如胰岛素和胰岛素衍生物、胃肠肽、钠依赖型葡萄糖转运体2(SGLT-2)抑制剂、双胍类、噻唑烷二酮类、GPR119激动剂等)、用于治疗代谢综合征和糖尿病的抗炎药(诸如：核因子κB抑制剂、腺苷一磷酸活化蛋白激酶)、一种或多种其他降脂药(诸如辛伐他汀、瑞舒伐他汀等)、一种或多种用于治疗肥胖的活性物质(诸如溴隐亭、芬特明等)、影响高血压、慢性心力衰竭或动脉粥样硬化的药物(诸如一氧化氮供体、AT1拮抗剂或血管紧张素II(AT2)受体拮抗剂)等。

达到期望治疗效果的本发明化合物的剂量取决于许多因素，例如所选择的具体化合物、预期用途、给药模式和患者的临床状况。日剂量范围通常为0.3mg至100mg(优选为3mg至50mg)/天/千克体重，例如3-10mg/kg/天。本发明化合物本身可作为化合物使用，但是它们优选与相容性载体呈现为药物组合物的形式。当然，载体在与组合物的其它成分是相容的且对患者健康无害的意义上来讲必须是可接受的。载体可为固体或液体或此二者且优选地与化合物配制为单剂量，例如片剂，其可含有0.05重量％至95重量％的活性成分。本发明的药物组合物可通过已知药学方法中的一种来制备，所述方法大体上包括将成分与药理学上可接受的载体和/或赋形剂混合。

用途

本发明式I所示的化合物具有良好的降低甘油三酯水平、胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，升高高密度脂蛋白胆固醇的作用，并且生物毒性较低，因此适合用作降血脂药物。

因此，本发明还提供了式I所示的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于降血脂。

在另一方面，本发明还提供了式I所示的化合物在制备预防和/或治疗心脑血管疾病的药物中的应用。

在一个实施方案中，所述心脑血管疾病指高血压、高血脂和/或动脉粥样硬化。

实施例

实施例1：式I所示的化合物的制备

(1)取干燥的刺五加药材3Kg，粉碎后加入24Kg的75％的乙醇，加热回流提取3次，每次4h，滤过，合并提取液，减压浓缩至提取液初始体积的1/5得刺五加的乙醇浸膏；

(2)将刺五加的乙醇浸膏加3倍体积的水混悬后，依次用等体积的环己烷、乙酸乙酯萃取，其中环己烷萃取2次，乙酸乙酯萃取4次，合并相同溶剂的萃取液后，分别减压回收溶剂得环己烷部分(10.5g)和乙酸乙酯部分(22.3g)；

(3)将乙酸乙酯部分用硅胶柱进行分离，依次用99:1、95:5、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50(v/v)的石油醚-甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得到组分I(1.8g)、II(2.2g)、III(3.7g)、IV(0.9g)、V(2.5g)共5个组分；组分V再用MCI柱进行分离，依次用99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、70:30(v/v)的乙醚:甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得V(1)(33.5mg)、V(2)(28.4mg)、V(3)(17.2mg)、V(4)(24.6mg)、V(5)(17.3mg)、V(6)(19.5mg)共6个组分，其中，组分V(4)为目标化合物。

结构鉴定：

高分辩质谱结果，HR-ESI-MS：m/z 401.1342[M+Na]⁺(C₂₃H₂₂O₅Na，计算值为401.1365)，因此，式I所示的化合物的分子式为C₂₃H₂₂O₅，其不饱和度为13。IR谱图示出在1675cm^-1存在归属于C＝O的伸缩振动峰，结合1600cm^-1附近的归属于C＝C的伸缩振动峰，可判定分子结构中存在羰基-双键共轭结构；在1050cm^-1-1010cm^-1附近存在归属于C-O-C的伸缩振动峰，表明分子中有醚键的存在。¹H NMR(600MHz，CDCl₃)谱图示出了δ6.87d(15.2Hz)、6.81d(15.2Hz)的反式双键氢；示出δ6.83s、6.97d(7.5Hz)、6.93d(7.5Hz)、6.73s、6.61s、6.74s的苯环氢峰；示出δ3.80s的两个甲氧基氢。¹³C NMR(600MHz，CDCl₃)谱图示出了δ206.3的羰基碳，δ148.5、131.7、134.8、127.1的双键碳，δ131.0、109.4、147.1、145.7、108.6、122.9、136.8、105.4、161.2、99.4、161.2、105.4的苯环碳，δ55.7的两个甲氧基碳。式I所示的化合物的¹H NMR(600MHz，CDCl₃)和¹³C NMR(600MHz，CDCl₃)总结于以下表1中。

表1：

结合各表征数据进行解析，可以确定式I所示的化合物的结构如下：

其命名为：(E)-2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-3-(3,5-二甲氧基苯乙烯基)环戊烯-2-酮。

实施例2：式I所示的化合物的降血脂活性测试

式I所示的化合物用5％DMSO，2％Tween80及93％的生理盐水配制成10mg/ml的混悬药液，使用前超声混匀；每只动物给予200μl/100g的给药体积，给药剂量为20mg/kg。

实验方法：取SD大鼠36只，雌雄各半，随机分3组，分别为正常对照组、模型对照组、式I所示的化合物组(即给药组)，每组12只。模型对照组和给药组喂食高脂饲料，同时，给药组每日灌胃给药1次(20mg/kg)式I所示的化合物，连续给药4周；模型对照组灌胃给予等体积水。正常对照组给予正常饲料。4周后末次给药后1小时，大鼠腹腔注射1％戊巴比妥纳45mg/kg进行麻醉(禁食不禁水12h)，腹主动脉取血，分离血清，测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。统计方法：应用Prism软件进行统计分析。对多组间差异比较采用ANOVA分析；两组间比较采用t检验。结果列于以下表1中。

表1：

测试组别	TC/mmol/l	TG/mmol/l	HDL-C/mmol/l	LDL-C/mmol/l
					正常对照组	1.38±0.21**	1.49±0.18**	1.19±0.22*	0.42±0.08*
模型对照组	2.89±0.40	2.51±0.24	0.74±0.17	0.86±0.10
					给药组	2.02±0.33*	1.78±0.19*	0.93±0.20*	0.57±0.06*

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

实验结果：模型对照组大鼠的TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量测定结果均明显劣于正常对照组，表明喂食高脂饲料后高血脂大鼠模型建立成功。而给药组大鼠的TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量测定结果均显示优于模型对照组，表明了本发明式I所示的化合物对于高脂模型大鼠具有十分明显的降血脂作用。

实施例3：急性毒性试验

实验方法：取体重18-20g的ICR小鼠20只，雌雄各半；给药前禁食16小时，采用口服灌胃单次给药(5g/kg，0.5％CMC-Na)，给受试药物后再禁食3-4小时，密切观察一般征状6小时，持续观察14天。实验结果：试验期间所有动物均无死亡，一般状况无异常。

Claims

1.一种式I所示的化合物：

2.一种根据权利要求1所述的式I所示的化合物的制备方法，其包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1中提取用的乙醇量为刺五加药材质量的6～8倍，浓度为70％～75％。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2中用环己烷萃取2～4次，用乙酸乙酯萃取3～5次。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3中将乙酸乙酯部分用硅胶柱进行分离，依次用99:1～50:50(v/v)的不同比例的石油醚-甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得到I-V的5个组分；组分V再用MCI柱进行分离，依次以99:1～80:20(v/v)的不同比例的乙醚:甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分，得V(1)-V(6)的6个组分，组分V(4)为式I所示的化合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，硅胶柱分离时的不同比例的石油醚-甲醇是指99:1、95:5、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50(v/v)的石油醚-甲醇。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，MCI柱分离时的不同比例的乙醚-甲醇是指99:1、95:5、90:10、85:15、80:20、70:30(v/v)的乙醚-甲醇。

8.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的式I所示的化合物作为药物活性成分，任选地包含一种或多种惰性载体和/或稀释剂。

9.根据权利要求1所述的式I所示的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于降血脂。

10.根据权利要求1所述的式I所示的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于预防和/或治疗心脑血管疾病，所述心脑血管疾病是高血脂和/或动脉粥样硬化。