CN110178761A - 一种吻鮈的人工催产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种吻鮈的人工催产方法，属于水产养殖领域。该方法包括吻鮈亲本选择、生境模拟、人工催产、人工授精、人工孵化、出膜后管理等步骤。该方法在国内首次成功的对吻鮈进行人工授精，繁殖出了吻鮈苗，成功解决了吻鮈在人工条件下繁殖卵成熟度不够、难于授精和不能孵化的难题。该方法简单高效，四组亲本共获得人工授精吻鮈卵8.5万余粒，受精率80%以上，孵化率60%以上，共获得吻鮈仔鱼3.9万余尾。该方法能够为因环境遭受破坏的吻鮈种群实现全人工繁殖提供方法支持；同时能为吻鮈苗种培养提供大量苗种，使吻鮈的增殖放流和人工养殖得以实现，具有重大的生态效益、经济效益和社会效益。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖领域，特别涉及一种吻鮈的人工催产方法。
背景技术
吻鮈（Rhinogobio typus Bleeker）属于鲤形目、鲤科、鮈亚科、吻鮈属，俗称秋子、长鼻白杨鱼、大鼓眼、铁杆鳅和鳅儿棒等。吻鮈为底层鱼类，是一种喜栖息于透明度较高、泥沙和碎石底质的缓流河口、湾沱内的底栖鱼类，一般2-3 龄达到性成熟，产卵在流水滩上，浮性卵，顺水冲流。但由于水电项目开建、挖沙、过度捕捞以及污染等原因导致吻鮈自然资源受到巨大的挑战，据本课题组 2015 年、2016 年内部调查资料显示，2015年赣江泰和、吉安、峡江、樟树和吴城江段吻鮈占日渔获物重量很低，仅为2.30%、1.28%、1.14%、0.86%和0.35%；有报导在重庆江津段吻鮈占渔获物比例也仅有2.37%,且种群资源量呈下降趋势。因此，亟需突破吻鮈繁殖技术，以达到人工养殖和为恢复资源进行增殖放流提供苗种的目的。
但目前很少有见关于吻鮈的相关研究，只有少量关于吻鮈资源结构的相关调查研究，关于其繁殖技术研究及成功繁殖的先例尚未见报道。主要原因是缺乏吻鮈生物学和繁殖生物学相关的基础研究，而直接捕捞野生亲本进行繁殖又面临应激性强、性腺发育不同步、受精率低、难于孵化出苗等问题，致使其人工繁殖一直未获突破。
发明内容
本发明的目的是提供一种吻鮈的人工催产方法，该方法成功解决了吻鮈在人工条件下繁殖卵成熟度不够、难于授精和不能孵化的难题。该方法使用生境模拟方法，人工催产及孵化方法，可使实现吻鮈全人工繁殖，批量生产为增殖放流和人工养殖规格吻鮈苗种成为可能。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种吻鮈的人工催产方法，包括以下步骤：
（1）亲本选择：雄性吻鮈亲本选择体重大于150g, 活力旺盛和体表完好的吻鮈；雌性吻鮈亲本选择体重大于200g，活力旺盛和体表完好，腹部柔软、膨大的吻鮈；
雌、雄吻鮈亲本的辨别方法：繁殖季节成熟雄鱼体型较雌鱼修长，生殖突突出，轻压腹部有精液流出；成熟雌鱼腹部膨大，卵巢轮廊明显，生殖孔大、变红。
（2）人工催产：包括生境模拟和人工催产2个步骤；
所述生境模拟的方法为：将雌性吻鮈和雄性吻鮈分开暂养于暂养水池中，使用遮阳网为暂养水池遮阳，保持暂养水池中的水温稳定在20-23℃之间；每天早上2:00开始使用流水刺激雌性吻鮈5h，流水速度为0.4-0.6m/s，8:00-9:00和16:00-17:00投饵期将流速调到0.1m/s，其余时间保持流水速度为0.2m/s，水体溶氧保持8mg/L以上，pH在6.8-8.0之间，连续用流水刺激10天后开始催产，催产前2天停止投喂饲料；雄性吻鮈不用流水刺激，保持暂养水池中的水流速度为0.2m/s，溶氧保持8mg/L以上，pH在6.8-8.0之间，使用遮阳网为暂养水池遮阳，保持暂养水池中的水温稳定在20-23℃之间；
进一步地，使用遮阳网为暂养水池遮阳时，遮阳网遮阳需要根据光照情况确定，遮阳时间段为10:00-14:00，晚上不用覆盖，减少人为干扰和声音干扰。
所述人工催产的方法为：雌性吻鮈亲本采用两针注射法注射催产药物，第一针注射药物剂量为总剂量的3/4，第二针注射药物剂量为总剂量的1/4，两针注射间隔8h；雄性亲本催产剂量为雄性亲本剂量的一半，采用一次注射法注射，注射时间与雌性吻鮈亲本第二针同时进行；所述催产药物总剂量为每公斤雌性吻鮈亲鱼注射LRH-A3 6ug、HCG 800IU、DOM5mg；
进一步地，所述催产药物总剂量与温度有关，当温度低于20℃时，雌性吻鮈亲本第一针注射药物剂量为总剂量的2/3，第二针注射药物剂量为总剂量的1/3，催产药物总剂量为每公斤雌性吻鮈亲本LRH-A3 6ug、HCG 800IU、DOM 5mg。
（3）人工授精：完成人工催产后，按照雌雄比为2:3将雌、雄吻鮈亲本放入一起，流水刺激，水流速度为0.4-0.6m/s，用遮阳网完全遮阴，保持安静；然后观察雌雄吻鮈活动情况，当雄性吻鮈追尾雌性吻鮈且水体中有卵粒出现时开始进行人工授精；
所述人工授精的方法为：捞出雌性吻鮈亲本，使用干抹布将鱼体体表水分擦干，蒙住鱼眼睛将鱼卵挤入干净、干燥的瓷碗中，所述鱼卵有弹力，色泽圆润，呈金黄色；然后捞出雄性吻鮈亲本，擦干体表水分和生殖孔，然后蒙住鱼眼睛将精液挤入另一干净、干燥的瓷碗中，然后向精液中加入3-5ML 0.65%生理盐水，得精液生理盐水混合液，所述精液为乳白色，遇水即散；然后将精液生理盐水混合液与卵按重量比为1: 50混合，用羽毛搅拌混匀，边搅拌边加入清水10ML，搅拌均匀后静置2min，得受精卵，然后倒入孵化设施中进行人工孵化。
（4）人工孵化：孵化采用孵化环道进行孵化，水流控制在0.2-0.4m/s，使用显微镜观察受精卵胚胎发育情况，在原肠中期统计受精率；受精卵脱膜后将水流调整为0.1-0.2m/s；吻鮈从受精到出膜时间为14h，当鱼苗能够沉入水底后即可开始进行苗种培育；孵化用水预先进行过滤处理，水温维持在22.5±0.6℃，pH在6.8-8.0之间，溶解氧8mg/L以上。
进一步地，受精卵出膜后处理方法为：受精卵出膜后卵黄苗漂浮在孵化环道中，将环道水流速度调整为0.1-0.2m/s，清除卵膜和死卵，保持水质稳定，水温维持在22.5±0.6℃，pH在6.8-8.0之间，溶解氧5-8mg/L之间，3天后卵黄囊消失，鱼苗开始平游，水流稳定在0.2m/s，2天后鱼苗下沉，消化道发育完全后转移进行鱼苗培育。
本发明所述一种吻鮈的人工繁殖方法，与现有技术相比具有以下有益效果：
（1）本发明成功解决了吻鮈在人工条件下繁殖卵成熟度不够、难于授精和不能孵化的难题。
（2）本发明方法提供的吻鮈人工催产方法简单高效，一次人工授精吻鮈鱼卵8.5万余粒，受精率在85%以上，孵化率60%以上，出苗大约3.9万余尾。
（3）本发明提供的吻鮈人工繁殖方法，受精卵脱膜后孵化为吻鮈鱼苗后生长速度快，胚后发育相关时间如下：
（4）本发明首次在国内成功的对吻鮈进行人工催产，并获得了鱼苗，对于保护吻鮈野生资源具有重要作用。
（5）本发明使用生境模拟的方法成功的促使了吻鮈的性腺发育，使卵成熟度达到了90%以上，实现了同步产卵。同时与其他的鱼类繁殖方式相比较，本发明强调了出膜后管理，出膜后需要精细管理5天，使鱼苗能够下沉后才能转移苗种培育，这对于提高后期苗种培育成功率至关重要。
附图说明
图1：吻鮈出膜后11h；
图2：吻鮈出膜后35h；
图3：吻鮈出膜后40h；
图4：吻鮈出膜后52h；
图5：吻鮈出膜后76h；
图6 ：吻鮈出膜后100h；
图7 ：吻鮈出膜后124h。
具体实施方式
下面通过实施例详细叙述本发明技术方法：
一种吻鮈的人工催产方法，包括以下步骤：
（1）亲本选择：雄性吻鮈亲本选择体重大于150g, 活力旺盛和体表完好的吻鮈；雌性吻鮈亲本选择体重大于200g，活力旺盛和体表完好，腹部柔软、膨大的吻鮈；
雌雄吻鮈亲本的辨别方法：繁殖季节成熟雄鱼体型较雌鱼修长，生殖突突出，轻压腹部有精液流出；成熟雌鱼腹部膨大，卵巢轮廊明显，生殖孔大、变红。
（2）人工催产：包括生境模拟和人工催产2个步骤；
所述生境模拟的方法为：将雌性吻鮈和雄性吻鮈分开暂养于暂养水池中，使用遮阳网为暂养水池遮阳，保持暂养水池中的水温稳定在20-23℃之间；每天早上2:00开始使用流水刺激雌性吻鮈5h，流水速度为0.5m/s，8:00-9:00和16:00-17:00投饵期将流速调到0.1m/s，其余时间保持流水速度为0.2m/s，水体溶氧保持8mg/L以上，pH在6.8-8.0之间，连续用流水刺激10天后开始催产，催产前2天停止投喂饲料；雄性吻鮈不用流水刺激，保持暂养水池中的水流速度为0.2m/s，溶氧保持8mg/L以上，pH在6.8-8.0之间，使用遮阳网将暂养水池遮阳，保持暂养水池中的水温稳定在20-23℃之间；
使用遮阳网遮阳需要根据光照情况确定，遮阳时间段为10:00-14:00，晚上不用覆盖，减少人为干扰和声音干扰。
所述人工催产的方法为：雌性吻鮈亲本采用两针注射法注射催产药物，第一针注射药物剂量为总剂量的3/4，第二针注射药物剂量为总剂量的1/4，两针注射间隔8h；雄性亲本催产剂量为雄性亲本剂量的一半，采用一次注射法注射，注射时间与雌性吻鮈亲本第二针同时进行；所述催产药物总剂量为每公斤雌性吻鮈亲鱼注射LRH-A3 6ug、HCG 800IU、DOM5mg。
（3）人工授精：完成人工催产后，按照雌雄比为2:3将雌、雄吻鮈亲本放入一起，流水刺激，水流速度为0.5m/s，然后观察雌雄吻鮈活动情况，当雄性吻鮈追尾雌性吻鮈且水体中有卵粒出现时开始进行人工授精；
所述人工授精的方法为：捞出雌性吻鮈亲本，使用干抹布将鱼体体表水分擦干，蒙住鱼眼睛将鱼卵挤入干净、干燥的瓷碗中，所述鱼卵有弹力，色泽圆润，呈金黄色；然后捞出雄性吻鮈亲本，擦干体表水分和生殖孔，然后蒙住鱼眼睛将精液挤入另一干净、干燥的瓷碗中，然后向精液中加入3-5ML 0.65%生理盐水，得精液生理盐水混合液，所述精液为乳白色，遇水即散；然后将精液生理盐水混合液与卵按重量比为1: 50混合，用羽毛搅拌混匀，边搅拌边加入清水10ML，搅拌均匀后静置2min，得受精卵，然后倒入孵化设施中孵化。
（4）人工孵化：孵化采用孵化环道进行孵化，水流控制在0.2-0.4m/s，使用显微镜观察受精卵胚胎发育情况，在原肠中期统计受精率；受精卵脱膜后将水流调整为0.1-0.2m/s，当鱼苗能够沉入水底后即可开进行苗种培育；孵化用水预先进行过滤处理，水温维持在22.5±0.6℃，pH在6.8-8.0之间，溶解氧8mg/L以上。
受精卵出膜后处理方法为：受精卵出膜后卵黄苗漂浮在孵化环道中，将环道水流速度调整为0.15m/s，清除卵膜和死卵，保持水质稳定，水温维持在22.5±0.6℃，pH在6.8-8.0之间，溶解氧5-8mg/L之间，3天后卵黄囊消失，鱼苗开始平游，水流稳定在0.2m/s左右，2天后鱼苗下沉，消化道发育完全可以转移进行鱼苗培育。
试验例：
按照上述具体实施例方法，2019年4月12日至2019年4月25日选取江西省水产科学研究封闭循环水系统暂养吻鮈亲本（雄鱼12尾，雌鱼8尾）分成四组进行人工催产试验。实验开始前，雌雄亲本单独养殖，模拟吻鮈繁殖生境刺激雌鱼性腺发育，暂养情况见下表1。生境模拟刺激10天后可以人工催产，人工催产情况及孵化情况见表2，吻鮈出膜后胚后发育情况见图1-7。
表1 吻鮈生境模拟
表2 催产和孵化情况
具体产卵、授精、孵化和出苗情况见表3。
表3 催产情况
由表3可见，采用本发明人工催产方法，吻鮈卵的受精率均在85%及以上，孵化率均在60%以上，四组吻鮈产卵数合计8.5万枚，出苗数为3.97万尾，取得了良好的催产效果。由图1-图7，可见，吻鮈出膜后11h出现眼点，出膜后35h开始出现消化道；出膜后40h出现鳍条，开始出现泄殖孔，肛门，色素；出膜后52h开始出现鳔，口腔，色素加深；出膜后76h开始平游，体表色素增多，颌部出现，部分卵黄囊；出膜后100h腰点明显，消化系统发育完全，卵黄囊消失；出膜后124h平游，下沉。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其它的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的。
Claims (4)
1.一种吻鮈的人工催产方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）亲本选择：雄性吻鮈亲本选择体重大于150g，活力旺盛和体表完好的吻鮈；雌性吻鮈亲本选择体重大于200g，活力旺盛和体表完好，腹部柔软、膨大的吻鮈；
（2）人工催产：包括生境模拟和人工催产2个步骤；
所述生境模拟的方法为：将雌性吻鮈和雄性吻鮈分开暂养于暂养水池中，用遮阳网为暂养水池遮阳，保持暂养水池中的水温稳定在20-23℃之间；每天早上2:00开始使用流水刺激雌性吻鮈5h，流水速度为0.4-0.6m/s，8:00-9:00和16:00-17:00投饵期将流速调到0.1m/s，其余时间保持流水速度为0.2m/s，水体溶氧保持8mg/L以上，pH在6.8-8.0之间，连续用流水刺激10天后开始催产，催产前2天停止投喂饲料；雄性吻鮈不用流水刺激，保持暂养水池中的水流速度为0.2m/s，溶氧保持8mg/L以上，pH在6.8-8.0之间，使用遮阳网为暂养水池遮阳，保持暂养水池中的水温稳定在20-23℃之间；
所述人工催产的方法为：雌性吻鮈亲本采用两针注射法注射催产药物，第一针注射药物剂量为总剂量的3/4，第二针注射药物剂量为总剂量的1/4，两针注射间隔8h；雄性亲本催产剂量为雄性亲本剂量的一半，采用一次注射法注射，注射时间与雌性吻鮈亲本第二针同时进行；所述催产药物总剂量为每公斤雌性吻鮈亲鱼注射LRH-A3 6ug、HCG 800IU、DOM 5mg；
（3）人工授精：完成人工催产后，按照雌雄比为2:3将雌、雄吻鮈亲本放入一起，流水刺激，水流速度为0.4-0.6m/s，用遮阳网完全遮阴，保持安静；然后观察雌、雄吻鮈活动情况，当雄性吻鮈追尾雌性吻鮈且水体中有卵粒出现时开始进行人工授精；
所述人工授精的方法为：捞出雌性吻鮈亲本，使用干抹布将鱼体体表水分擦干，蒙住鱼眼将卵挤入干净、干燥的瓷碗中；然后捞出雄性吻鮈亲本，擦干体表水分和生殖孔，然后蒙住鱼眼睛将精液挤入另一干净、干燥的瓷碗中，然后向精液中加入3-5ML 0.65%生理盐水，得精液生理盐水混合液，然后将精液生理盐水混合液与卵按重量比为1: 50混合，用羽毛搅拌混匀，边搅拌边加入清水10ML，搅拌均匀后静置2min，然后倒入孵化设施中进行人工孵化；
（4）人工孵化：孵化采用孵化环道进行孵化，水流控制在0.2-0.4m/s，使用显微镜观察受精卵胚胎发育情况，在原肠中期统计受精率，受精卵脱膜后将水流调整为0.1-0.2m/s；当鱼苗能够沉入水底后即可开始苗种培育；孵化用水过滤处理，水温维持在22.5±0.6℃，pH在6.8-8.0之间，溶解氧8mg/L以上。
2.根据权利要求1所述一种吻鮈的人工催产方法，其特征在于：所述步骤（2）中使用遮阳网为暂养水池遮阳，遮阳网遮阳需要根据光照情况确定，遮阳时间段为10:00-14:00，晚上不用覆盖，减少人为干扰和声音干扰。
3.根据权利要求1所述一种吻鮈的人工催产方法，其特征在于：所述催产药物总剂量与温度有关，当温度低于20℃时，雌性吻鮈亲本第一针注射药物剂量为总剂量的2/3，第二针注射药物剂量为总剂量的1/3，催产药物总剂量为每公斤雌性吻鮈亲本LRH-A3 6ug、HCG800IU、DOM 5mg。
4.根据权利要求1所述一种吻鮈的人工催产方法，其特征在于：所述步骤（4）受精卵出膜后处理方法为：出膜后卵黄苗漂浮在孵化环道中，将环道水流速度调整为0.1-0.2m/s，清除卵膜和死卵，保持水质稳定，水温维持在22.5±0.6℃，pH在6.8-8.0之间，溶解氧5-8mg/L之间，3天后卵黄囊消失，鱼苗开始平游，水流稳定在0.2m/s，2天后鱼苗下沉，消化道发育完全后转移进行鱼苗培育。
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