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CN118871448A - 双保护的活化的鸟嘌呤单体 - Google Patents

双保护的活化的鸟嘌呤单体 Download PDF

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CN118871448A
CN118871448A CN202380025101.1A CN202380025101A CN118871448A CN 118871448 A CN118871448 A CN 118871448A CN 202380025101 A CN202380025101 A CN 202380025101A CN 118871448 A CN118871448 A CN 118871448A
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methyl
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普雷文·库玛·维穆拉
崔亨旭
方家范
山明德
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Eisai Co Ltd
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Eisai Co Ltd
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Abstract

提供了用于合成多吗啉代寡核苷酸的双保护的活化的鸟嘌呤单体或其药学上可接受的盐以及制备这些双保护的活化的鸟嘌呤单体的方法。

Description

双保护的活化的鸟嘌呤单体
相关申请的交叉引用
本申请要求于2022年3月1日提交的美国临时专利申请号63/315,280的优先权权益。该申请通过援引并入，如同在本文完整重写一样。
技术领域
本披露涉及双保护的活化的鸟嘌呤单体、其合成方法以及其在反义寡核苷酸的生产中的用途。
背景技术
反义寡核苷酸(ASO)以序列特异性方式用于调节基因表达。它们已被开发用于靶标验证和治疗目的。反义技术具有治愈由有害基因的表达引起的疾病(包括由病毒感染、癌症生长、神经元退化(即阿尔茨海默病)和炎性疾病引起的疾病)的潜力。优化的反义寡核苷酸(ASO)可以用于靶向初级基因转录物、一种或多种mRNA产物、剪接和未剪接的编码和非编码RNA。
ASO通过两种广泛的机制调节RNA功能。空间阻断机制，其可能导致剪接调节、无义介导的衰变(NMD)和翻译阻断。以及RNA酶H介导的降解，其通过制造RNA-ASO异源双链体而导致靶RNA的切割。
发明内容
磷二酰胺吗啉代寡聚物(PMO)是短的单链DNA类似物，这些类似物含有由磷二酰胺键连接的吗啉环的骨架。据报道，它们在某些疗法中是有用的。
被修饰用于生产PMO的一种核酸单体是鸟嘌呤。这些单体的鸟嘌呤碱基可以被修饰以保护鸟嘌呤碱基在生产PMO期间不参与副反应。当鸟嘌呤单体的鸟嘌呤碱基被单保护时，稳定性问题开始出现。鉴于鸟嘌呤单体的这种特征，我们提供了双保护的活化的鸟嘌呤单体，其相对于单保护的鸟嘌呤单体具有改善的稳定性。这些更稳定的鸟嘌呤单体可以用于以较低的副产物形成发生率和较高的产率来生产PMO。
一个实施例是双保护的活化的鸟嘌呤单体或其药学上可接受的盐。当单体已被制备用于导致合成二聚体或寡聚物的另外的步骤中时，该单体被称为是“活化的”。
在一些实施例中，双保护的活化的鸟嘌呤单体包含根据式I的活化的吗啉环：
其中R1、R2选自H、(R)-甲基或(S)-甲基、C1-C4烷基、苯基、芳基、环烷基或其任何组合；并且
其中R3选自NH2、-NHC(O)R7、-NHC(O)OR7、 并且其中R7可以是C1-C6烷基、异丙基、2,2,2-三氯乙基、苄基或芳基。
在一些实施例中，R1和R2可以连接在一起以形成C3至C7环烷基环或包含氧和/或氮的杂环的环，所有这些可以是饱和的或不饱和的，并且可以在一个或多个碳原子处被C1-C6烷基取代。
在其他实施例中，双保护的活化的鸟嘌呤单体是具有式I的立体异构体。不限于以下结构，双保护的活化的鸟嘌呤单体的一些实施例包含根据式(Ia)和(Ib)中的一种的立体异构结构。
在一些实施例中，双保护的活化的鸟嘌呤单体包含根据式II的活化的四氢呋喃环：
其中R1、R2选自H、(R)-甲基或(S)-甲基、C1-C4烷基、苯基、芳基、环烷基或其任何组合；
其中R3选自NH2、-NHC(O)R7、-NHC(O)OR7、 并且其中R7可以是C1-C6烷基、异丙基、2,2,2-三氯乙基、苄基或芳基；
其中R4选自H、三苯甲基(Tr)、单甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)、-Si(R8)3、其中R8是C1-C6烷基或芳基；并且
其中R5选自H、-OMe、-F或-OCH2CH2OMe。
在其他实施例中，R5和R6可以连接在一起以形成C3至C7环烷基环或包含氧和/或氮的杂环的环，所有这些可以是饱和的或不饱和的，并且可以是未取代的或被C1-C6烷基取代。例如，在一个实施例中，R5和R6可以连接在一起以形成S-cEt，如以下描绘的(在整个分子的背景下)：
在另一个实施例中，R5和R6形成LNA，其具有以下所描绘的结构(在整个分子的背景下)：
在其他实施例中，R1和R2可以连接在一起以形成C3至C7环烷基环或包含氧和/或氮的杂环的环，所有这些可以是饱和的或不饱和的，并且可以是未取代的或被C1-C6烷基取代。
在一些实施例中，双保护的活化的鸟嘌呤单体是具有式II的立体异构体。不限于以下结构，双保护的活化的鸟嘌呤单体的一些实施例包含根据式(IIa)和(IIb)的立体异构结构。
在其他实施例中，双保护的活化的鸟嘌呤单体可以由以下结构表示：
在一些实施例中，双保护的活化的鸟嘌呤单体具有以下结构：
本文所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体可以由包括以下步骤的方法生产：
i)使根据式(III)的受保护的鸟嘌呤单体：
与醇在碱的存在下反应以生产根据式IV的受保护的鸟嘌呤中间体：
式IV
其中R是
其中R1和R2选自H、(R)-甲基或(S)-甲基、C1-C4烷基、苯基、芳基、环烷基或其任何组合，包括其中R可以是选自以下结构的基团：
ii)使根据式IV的受保护的鸟嘌呤中间体与三乙胺三氢氟酸盐反应以生产根据式V的脱保护的鸟嘌呤中间体：
iii)使根据式V的脱保护的鸟嘌呤中间体与溴化锂、第二活化剂和N,N-二甲基磷氨基二氯化物反应以产生本文所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体。
在一些实施例中，步骤(i)中使用的试剂是N-甲基吡咯烷、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)、奎宁环、三甲胺及其任何组合。
在其他实施例中，步骤(i)中使用的碱是1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、二异丙基乙胺、碳酸钾、叔丁醇钾、氢化钠、Na2CO3、CsCO3、吡咯烷、三乙胺、吡啶及其任何组合。
在一些实施例中，步骤(i)中使用的醇可以是3-羟基-2-甲基丙腈、3-羟基-3-甲基丙腈或2,3-二甲基-3-羟甲基丙腈。步骤(i)中使用的醇还可以是3-羟基-2-甲基丙腈、3-羟基-3-甲基丙腈或2,3-二甲基-3-羟甲基丙腈的任何立体异构体。
在一些实施例中，步骤(iii)中使用的第二活化剂是DBU、2,6-二甲基吡啶、N-甲基咪唑、1H-四唑、4,5-二氯咪唑、4,5-二氰基咪唑、LiHMDS、4-乙基吗啉、DMAP、三乙胺、吡啶、Hunig碱及其任何组合。
在一些实施例中，步骤(i)、(ii)或(iii)的反应可以进一步包括溶剂。溶剂可以是DCM、乙酸乙酯、乙腈，THF、甲苯、二甲亚砜、二甲基乙酰胺、DMF或其任何组合。
在一些实施例中，本文所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体可以由包括以下步骤中的任何步骤并且在一些实施例中包括以下步骤中的所有步骤的方法生产：
i)使根据式VI的鸟嘌呤单体：
与第一保护剂反应，以生产根据式(VII)的第一受保护的鸟嘌呤单体：
ii)使该具有式(VII)的受保护的鸟嘌呤单体与第二保护剂反应以生产根据式(VIII)的受保护的鸟嘌呤单体：
iii)使具有式(VIII)的第二受保护的鸟嘌呤单体与活化剂反应以生产根据式(IX)的受保护的鸟嘌呤单体：
其中A1是由与该活化剂的反应形成的离去基团；
iv)使具有式(IX)的受保护的鸟嘌呤单体与选定的醇反应以生产根据式(X)的受保护的鸟嘌呤单体：
v)用脱保护剂将该根据式(X)的受保护的鸟嘌呤单体脱保护以生产根据式(XI)的受保护的鸟嘌呤单体：
vi)使根据式(XI)的受保护的鸟嘌呤单体与亲电试剂反应以生产根据式II的受保护的鸟嘌呤单体。
在一些实施例中，步骤iv)包括使具有式(IX)的受保护的鸟嘌呤单体与4-(羟甲基)苯基新戊酸酯反应以生产根据式(XII)的受保护的鸟嘌呤单体：
在其他实施例中，步骤v)包括使根据式(XII)的受保护的鸟嘌呤单体与脱保护剂反应以生产根据式(XIII)的受保护的鸟嘌呤单体：
在一些实施例中，步骤vi)包括使根据式(XIII)的受保护的鸟嘌呤单体与亲电试剂反应以生产具有以下结构的化合物：
在一些实施例中，第一保护剂可以是三苯甲基氯、4-单甲氧基三苯甲基氯、4,4'-二甲氧基三苯甲基氯、或包含式(Si(R6)3)Cl的氯硅烷，其中R6是C1-C6烷基或芳基。在一些实施例中，氯硅烷是叔丁基二甲基氯硅烷。
在其他实施例中，第二保护剂可以是三苯甲基氯、4-单甲氧基三苯甲基氯、4,4'-二甲氧基三苯甲基氯、或包含式(Si(R6)3)Cl的氯硅烷，其中R6是C1-C6烷基或芳基。在一些实施例中，氯硅烷是叔丁基二甲基氯硅烷。
在其他实施例中，活化剂是2,4,6-三异丙基苯磺酰氯。
在一些实施例中，A1是可以被1至3个烷基取代的芳基磺酰基、三氟甲磺酰基、甲磺酰基及其组合。
在其他实施例中，步骤iv)中的醇是或4-(羟甲基)苯基新戊酸酯。
在其他实施例中，亲电试剂是
可以将额外的试剂和/或溶剂添加到步骤i)至vi)中的任何一个或多个。这些试剂可以选自DBU、DMAP、三乙胺、N-甲基吡咯烷、LiBr、2,6-二甲基吡啶、N-甲基咪唑或其组合。添加到步骤i)至vi)中任何一个或多个的溶剂可以是DCM、THF、MeCN、甲苯、DMF、水或其组合。
附图说明
图1A和图1B图示了本文所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体的可能结构。
图2描绘了在PMO合成期间伴随在鸟嘌呤碱基上进行常规氰乙基保护可能发生的副反应。
图3A-图3D描绘了PMO胸腺嘧啶单体与丙烯腈、β-甲基丙烯腈和α-甲基丙烯腈在各种条件下的反应性。
图4A和图4B图示了在活化步骤期间修饰的鸟嘌呤单体的氰乙基脱保护的发生。
图5A和图5B描绘了双保护的活化的鸟嘌呤单体的手性分离光谱。
具体实施方式
本披露的方面涉及双保护的活化的鸟嘌呤单体。双保护的活化的鸟嘌呤单体可以包含吗啉环并且具有图1A和图1B中描绘的结构或由式I、Ia或Ib表示的结构。双保护的活化的鸟嘌呤单体还可以包含四氢呋喃环并且具有由式II、IIa或IIb表示的结构。
本文所述的双保护的活化鸟嘌呤单体的一种功用是通过减少脱保护的鸟嘌呤残基与胸腺嘧啶残基之间副反应的发生来改善PMO的合成(参见图2)。
当将常规的氰乙基保护基团安装到鸟嘌呤碱基上时，该氰乙基的脱保护生成丙烯腈，丙烯腈可以与PMO中的胸腺嘧啶残基反应以得到烷基化杂质(参见图3A-图3D)。当将β-甲基或α-甲基安装到氰乙基保护基团上时，这些基团的脱保护导致反应性较低的副产物(即，β-甲基丙烯腈或α-甲基丙烯腈)，这可以引起提高的反应产率(参见图3A-图3D)。
另外，已经发现使用β-甲基化或α-甲基化的氰乙基保护基团用于鸟嘌呤单体减少了在本文所述的鸟嘌呤单体活化期间氰乙基保护基团损失的发生。图4A描绘了首先将氰乙基保护基团安装到鸟嘌呤单体上并且然后将鸟嘌呤单体活化的合成方案。通过用HPLC检测脱保护的物质，图4B示出了在活化步骤期间可能发生的脱保护副反应的发生。在活化步骤期间，当与用常规氰乙基保护基团保护的鸟嘌呤单体相比时，α-甲基化的氰乙基保护基团生产了更稳定的鸟嘌呤单体，因为受α-甲基化的氰乙基保护的鸟嘌呤单体产生了更清晰的反应轮廓(profile)并且以更高的产率(77％相对于43％)得到期望的产物。当与用常规氰乙基保护所保护的鸟嘌呤单体相比时，受β-甲基化的氰乙基保护的鸟嘌呤单体也显示出更好的稳定性和更高的产率(60％相对于43％)。还发现双保护的活化的鸟嘌呤单体降低了在ASO合成期间形成丙烯酸酯副产物的风险，并且显示提高了氯化物稳定性。
除了图1A和图1B中描绘的结构之外，本文所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体的结构还可以包括具有式I和II的立体异构体。图5A和图5B表明可以将双保护的活化的鸟嘌呤单体的不同异构体进行区分和分离。
虽然认为本文使用的术语很好地为本领域的普通技术人员所理解，但本文中阐述定义以便于解释本文所披露的主题。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本文披露的主题所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。尽管与本文所述的那些方法、装置和材料相似或等效的任何方法、装置和材料可以用于目前披露的主题的实践或测试，但是本文描述代表性的方法、装置和材料。
除非另外规定或提及组合的上下文相反地清楚暗示，否则如本文中所使用的方法或过程步骤的所有组合均能以任何顺序进行。
本披露的方法和装置(包括其组分/部件)可以包括本文所述的实施例的必需要素和限制以及本文所述的或另外有用的任何附加或可选的组分/部件或限制，由其组成或基本上由其组成。
除非另外指明，否则本说明书和权利要求书中使用的表示成分的物理大小、量、特性(如反应条件)等的所有数值应被理解为在所有情况中被术语“约”修饰。因此，除非相反地指出，否则本说明书和权利要求书中列出的数值参数是近似值，这些近似值可以根据本披露主题试图获得的所需特性而变化。
作为描述异构体的术语的“R”和“S”是在不对称取代的原子上的立体化学构型的描述符，这些原子包括但不限于：碳、硫、磷和季氮。将不对称取代的原子指定为“R”或“S”是通过应用如本领域技术人员所熟知的Cahn-Ingold-Prelog优先规则完成的，并描述于有机化学命名法E部分，立体化学的国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)规则中。
如本文所用的“药学上可接受的盐”是指本披露中化合物的酸加成盐或碱加成盐。药学上可接受的盐是保留母体化合物的活性并且不会对其施用的受试者和在其施用的情况下产生任何过度有害或不希望的影响的任何盐。药学上可接受的盐包括但不限于金属络合物以及无机酸和羧酸两者的盐。药学上可接受的盐还包括金属盐，如铝盐、钙盐、铁盐、镁盐、锰盐、钠盐和络合盐。此外，药学上可接受的盐包括但不限于，酸性盐如乙酸盐、天冬氨酸盐、烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、醋氧乙(axetil)盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、双硫酸(bisulfuric)盐、双酒石酸盐(bitartaric)、丁酸盐、依地酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯苯甲酸盐、柠檬酸盐、依地酸盐、乙二磺酸(edisylic)盐、十二烷基磺酸(estolic)盐、esyl、乙磺酸(esylic)盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸(gluceptic)盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、羟乙酰基对氨苯胂酸(glycolylarsanilic)盐、环己磺酸(hexamic)盐、己基雷锁辛酸(hexylresorcinoic)盐、海巴酸(hydrabamic)盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、羟基萘甲酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、粘康酸(muconic)盐、萘磺酸(napsylic)盐、硝酸盐、草酸盐、对硝基甲磺酸盐、扑酸(pamoic)盐、泛酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、邻苯二甲酸盐、多聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、对氨基苯磺酸盐、磺酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸(teoclic)盐、甲苯磺酸盐等。
术语“药物组合物”包括适用于对哺乳动物(例如人)施用的制剂。当本发明的化合物作为药物施用于哺乳动物(例如人)时，它们可以以其自身给予或以含有与药学上可接受的载体组合的例如0.1％至99.9％(更优选0.5％至90％)活性成分的药物组合物给予。
术语“烷基”包括支链、直链和环状的取代或未取代的饱和脂族烃基。C1-C6烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、环己基、环己基甲基、环丙基甲基和新己基。
术语“芳基”包括6元至14元单环、双环或三环芳香族烃环系统。芳基的实例包括苯基和萘基。
卤素可以是F、Cl、Br或I。
术语“环烷基”包括含有5至12个碳原子的环烷基环。实例包括环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基和环十二烷基。
实例
缩写
可以在整个实例中使用以下缩写。
DBU：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCM：二氯甲烷
DMAP：4-(二甲基氨基)吡啶
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲亚砜
TEA：三乙胺
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
TBDPS：叔丁基二苯基甲硅烷基
TBS：叔丁基二甲基甲硅烷基
TBS-Cl：叔丁基二甲基氯硅烷
Ph：苯基
EA：乙酸乙酯
ACN：乙腈
实例1：双保护的活化的鸟嘌呤吗啉代单体的合成
通用反应方案
N-(6-(2-氰基丙氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-9H-嘌 呤-2-基)异丁酰胺的合成：
将9-((2R,6S)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-2-异丁酰氨基-9H-嘌呤-6-基2,4,6-三异丙基苯磺酸酯(5.50g，5.73mmol)(通过CA2813183中描述的程序制备)在CH2Cl2(57.3ml，5.733mmol)中的溶液冷却至0℃并用在CH2Cl2(5.0ml)中的1-甲基吡咯烷(2.38ml，22.93mmol)处理。在0℃下搅拌1h之后，添加3-羟基-2-甲基丙腈(1.95g，22.93mmol)和DBU(1.12ml，7.45mmol)在CH2Cl2(5.0ml)中的溶液并在0℃下继续搅拌2-3h(通过LCMS监测反应)。将反应混合物用1.0M NaH2PO4水溶液(50ml)和水(50ml)稀释并在室温下搅拌30min。将CH2Cl2层分离并用CH2Cl2(30ml)洗涤水层两次。将合并的有机层用盐水(30ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将粗残余物通过柱色谱法(正庚烷中的乙酸乙酯＝0％至80％)进行纯化以得到被3-羟基-2-甲基丙腈污染的N-(9-((2R,6S)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-6-(2-氰基丙氧基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺(4.42g，5.816mmol)，其无需进一步纯化即用于下一步骤。
将以上获得的化合物溶解在塑料容器中的CH2Cl2(58.2ml，5.81mmol)中并冷却至0℃。将三乙胺三氢氟化物(9.57g，58.15mmol)逐滴添加到反应溶液中。将反应溶液在0℃下搅拌7-8h。将反应混合物倒入冰冷的碳酸氢钠(7.33g，87.234mmol)在水(60ml)中的溶液中并在室温下搅拌1h。然后将CH2Cl2层分离并且用CH2Cl2(50ml)将水层萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化以得到2.59g(4.01mmol，70％)的呈白色固体的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(s,1H),7.82(s,1H),7.58-7.44(m,6H),7.33(t,J＝7.6Hz,6H),7.26-7.16(m,3H),6.28(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),4.80-4.68(m,1H),4.66-4.52(m,1H),4.41-4.30(m,1H),3.64(qd,J＝11.8,5.0Hz,2H),3.47(dt,J＝11.4,2.4Hz,1H),3.41-3.28(m,1H),3.22-3.14(m,1H),3.14-3.10(s,1H),1.84(t,J＝10.6Hz,1H),1.62(t,J＝11.2Hz,1H),1.49(d,J＝7.1Hz,3H),1.39(d,J＝6.8Hz,3H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。
N-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉- 2-基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺的合成：
使用与制备N-(6-(2-氰基丙氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺相同的程序和相同的体积，20.0g的9-((2R,6S)-6-(((叔丁基二甲基甲烷硅基)氧基)甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基2,4,6-三异丙基苯磺酸酯得到8.5g的呈白色固体的标题化合物(13.16mmol，63％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.83(s,1H),7.82(s,1H),7.57-7.43(m,6H),7.33(t,J＝7.6Hz,6H),7.26-7.18(m,3H),6.27(dd,J＝9.9,2.3Hz,1H),5.73-5.62(m,1H),4.41-4.31(m,1H),3.70-3.56(m,2H),3.51-3.43(m,1H),3.22-3.14(m,1H),3.08(s,1H),2.97(dd,J＝5.9,2.5Hz,2H),1.86(t,J＝10.6Hz,2H),1.66-1.57(m,4H),1.39(d,J＝6.9Hz,3H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。
N-(6-(((S)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉- 2-基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺的合成：
使用与制备N-(6-(2-氰基丙氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺相同的程序和相同的体积，3.00g的9-((2R,6S)-6-(((叔丁基二甲基甲烷硅基)氧基)甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基2,4,6-三异丙基苯磺酸酯得到1.38g的呈白色固体的标题化合物(1.87mmol，68％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(s,1H),7.82(s,1H),7.58-7.42(m,6H),7.33(t,J＝7.6Hz,6H),7.24-7.18(m,3H),6.27(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),5.74-5.62(m,1H),4.40-4.30(m,1H),3.71-3.56(m,2H),3.52-3.43(m,1H),3.22-3.13(m,1H),3.08(s,1H),3.00(dd,J＝16.9,6.1Hz,1H),2.92(dd,J＝16.8,5.5Hz,1H),1.83(t,J＝10.6Hz,1H),1.67-1.56(m,4H),1.38(t,J＝7.2Hz,6H)。
((2S,6R)-6-(6-(2-氰基丙氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-三苯甲基吗 啉-2-基)甲基二甲基磷酰胺基氯化物的合成：
在室温下向N-(6-(2-氰基丙氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺(890mg，1.37mmol)在CH3CN(7990μl，152.98mmol)/CH2Cl2(7981μl，124.03mmol)中的溶液中添加溴化锂(395mg，4.54mmol)并搅拌直至获得澄清溶液。然后，将反应混合物冷却至0℃并添加DBU(686μl，4.54mmol)在CH3CN(1.0ml)中的溶液，随后在0℃下添加N,N-二甲基磷氨基二氯化物(262μl，2.205mmol)在CH3CN(1.0ml)中的溶液。2h后，将反应用10％柠檬酸水溶液(20ml)淬灭并且用乙酸乙酯(30ml)稀释。30min后，将乙酸乙酯层分离并用乙酸乙酯(30ml)将水层萃取两次。将合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，将粗残余物通过硅胶柱纯化以得到820mg(1.06mmol，77％)的标题化合物。
制备型HPLC条件：
柱：Chiralpak IA，21×250mm，5μ
流速：20mL/min
流动相：40％庚烷60％ EA
梯度：等度
运行时间：20分钟
进样体积：500μL
检测：260nm
((2S,6R)-6-(6-(2-氰基丙氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-三苯甲基吗 啉-2-基)甲基(S)-二甲基磷酰胺基氯化物
在HPLC条件下，由于与氰基相邻的甲基立体化学，标题化合物给出两个峰。
峰1(10.20min)：
1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.17(s,1H),7.94(s,1H),7.53-7.34(m,6H),7.22(t,J＝7.6Hz,6H),7.08(t,J＝7.4Hz,3H),6.27(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),4.61-4.45(m,3H),4.06(dd,J＝8.5,5.0Hz,2H),3.48-3.37(m,2H),3.21(d,J＝11.7Hz,1H),3.09-2.97(m,1H),2.48(s,3H),2.45(s,3H),1.87-1.83(m,1H),1.55(t,J＝11.2Hz,1H),1.30(d,J＝7.1Hz,3H),1.13(d,J＝5.1Hz,3H),1.10(d,J＝7.1Hz,3H)；31PNMR(162MHz,丙酮-d6)δ17.53。
峰2(11.35min)：
1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.19(s,1H),7.94(s,1H),7.55-7.35(m,6H),7.21(t,J＝7.7Hz,6H),7.07(t,J＝7.4Hz,3H),6.27(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),4.61-4.48(m,3H),4.05(dd,J＝8.5,5.0Hz,2H),3.47-3.34(m,2H),3.21(dt,J＝12.0,2.5Hz,1H),3.10-2.99(m,1H),2.48(s,3H),2.44(s,3H),1.91-1.80(m,1H),1.55(t,J＝11.2Hz,1H),1.29(d,J＝7.1Hz,3H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H)；31P NMR(162MHz,丙酮-d6)δ17.56。
((2S,6R)-6-(6-(2-氰基丙氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-三苯甲基吗 啉-2-基)甲基(R)-二甲基磷酰胺基氯化物
在HPLC条件下，由于与氰基相邻的甲基立体化学，标题化合物给出两个峰。
峰3(12.77min)：
1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.18(s,1H),7.95(s,1H),7.54-7.33(m,6H),7.21(t,J＝7.7Hz,6H),7.08(t,J＝7.4Hz,3H),6.26(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),4.60-4.44(m,3H),4.15-4.03(m,2H),3.49-3.36(m,2H),3.20(dt,J＝11.8,2.4Hz,1H),3.10-2.99(m,1H),2.48(s,3H),2.45(s,3H),1.91-1.79(m,1H),1.59(t,J＝11.2Hz,1H),1.29(d,J＝7.1Hz,3H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H)；31P NMR(162MHz,丙酮-d6)δ17.17。
峰4(14.36min)：
1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.17(s,1H),7.95(s,1H),7.52-7.31(m,6H),7.21(t,J＝7.7Hz,6H),7.08(t,J＝7.4Hz,3H),6.26(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),4.91(s,1H),4.60-4.47(m,3H),4.15-4.03(m,2H),3.47-3.34(m,2H),3.20(dt,J＝11.8,2.4Hz,1H),3.10-2.99(m,1H),2.48(s,3H),2.45(s,3H),1.90-1.78(m,1H),1.59(t,J＝11.2Hz,1H),1.29(d,J＝7.1Hz,3H),1.15(d,J＝6.9Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H)；31P NMR(162MHz,丙酮-d6)δ17.17。
((2S,6R)-6-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4- 三苯甲基吗啉-2-基)甲基二甲基磷酰胺基氯化物的合成：
使用与制备((2S,6R)-6-(6-(2-氰基丙氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)甲基二甲基-磷酰胺基氯化物相同的程序，3.3g的N-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺得到2.56g的标题化合物(3.32mmol，65％产率)。
制备型HPLC条件：
柱：Chiralpak IC，30×250mm，5μ
流速：30mL/min
流动相：100％ ACN
梯度：等度
运行时间：32分钟
进样体积：500μL
检测：260nm
((2S,6R)-6-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)甲基(S)-二甲基磷酰胺基氯化物
保留时间：11.39min
1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.22(s,1H),7.93(s,1H),7.54-7.33(m,6H),7.21(t,J＝7.7Hz,6H),7.12-7.03(m,3H),6.25(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),5.56-5.44(m,1H),4.59-4.49(m,1H),4.09-4.01(m,2H),3.40(dt,J＝11.6,2.5Hz,1H),3.21(dt,J＝12.0,2.5Hz,1H),3.07(dd,J＝17.1,5.4Hz,1H),3.04-2.98(m,1H),2.93(dd,J＝17.1,5.2Hz,1H),2.47(s,3H),2.44(s,3H),1.90-1.82(m,1H),1.54(t,J＝11.2Hz,1H),1.42(d,J＝6.3Hz,3H),1.14(d,J＝6.9Hz,4H),1.11(d,J＝6.8Hz,3H)；31P NMR(162MHz,丙酮-d6)δ17.56。
((2S,6R)-6-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4- 三苯甲基吗啉-2-基)甲基(R)-二甲基磷酰胺基氯化物
保留时间：14.50min
1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ9.22(s,1H),7.94(s,1H),7.51-7.36(m,6H),7.21(t,J＝7.7Hz,6H),7.11-7.03(m,3H),6.25(dd,J＝9.8,2.4Hz,1H),5.56-5.44(m,1H),4.58-4.48(m,1H),4.16-4.00(m,2H),3.40(dt,J＝11.5,2.5Hz,1H),3.20(dt,J＝11.9,2.5Hz,1H),3.07(dd,J＝17.1,5.4Hz,1H),3.04-2.98(m,0H),2.93(dd,J＝17.1,5.2Hz,1H),2.48(s,3H),2.44(s,3H),1.90-1.83(m,1H),1.58(t,J＝11.2Hz,1H),1.42(d,J＝6.3Hz,3H),1.15(d,J＝6.9Hz,4H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H)；31P NMR(162MHz,丙酮-d6)δ17.18。
((2S,6R)-6-(6-(((S)-1-氰基丙-2-基)氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)甲基二甲基磷酰胺基氯化物的合成：
使用与制备((2S,6R)-6-(6-(2-氰基丙氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)甲基二甲基-磷酰胺基氯化物相同的程序，1.0g的N-(6-(((S)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9-((2R,6S)-6-(羟甲基)-4-三苯甲基吗啉-2-基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺得到0.810g的标题化合物(3.32mmol，68％产率)。
实例2：双保护的活化的鸟嘌呤脱氧核糖核苷的合成
N-(9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅 烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)异丁酰胺的合成：
将N-(9-((2R,4S,5R)-4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)异丁酰胺(2.5g，7.411mmol)与无水吡啶共蒸发一次，然后将其溶解在烧瓶中的DMF(25mL)中，在室温下向其中添加咪唑(2.52g，37.055mmol)，随后分批添加TBS-Cl(2.79g，18.528mmol)。将反应混合物在室温下保持搅拌48hr。然后向混合物中添加水(200mL)，并且收集固体沉淀物并用水冲洗。将固体重新溶解在DCM中，随后用饱和碳酸氢钠(水溶液)和半饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。将浓缩物用DCM中的MeOH进行硅胶柱纯化，得到4.11g的产物。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 11.95(s,1H),8.18(s,1H),7.96(s,1H),6.22(dd,J＝6.4,6.8Hz,1H),4.52-4.61(m,1H),3.98(m,1H),3.76(d,J＝3.2Hz,2H),2.61(m,1H),2.28-2.51(m,2H),1.27(br d,J＝7.0Hz,3H),1.28(br d,J＝6.8Hz,3H),0.91(s,9H),0.90(s,9H),0.10(s,6H),0.07(s,3H),0.07(s,3H)。
MS(ESI)m/z：针对C26H47N5O5Si2[M+H]+的计算值：566.3；实测值566.2。
N-(9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅 烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰 胺的合成：
将N-(9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)异丁酰胺(4.11g，7.263mmol)与无水MeCN共蒸发两次，然后在室温下将其溶解在烧瓶中的DCM(41.1mL)中，向其中添加DMAP(0.089g，0.726mmol)和三乙胺(3.04mL，21.79mmol)，随后添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(3.30g，10.895mmol)。将反应混合物在室温下搅拌20hr，然后将其在冰浴中冷却，并用磷酸二氢钠水溶液(105mL，87.159mmol，10wt％)淬灭。相分离之后，将其用DCM(100mL)反萃取多次。将合并的DCM层用盐水(10wt％)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。
将残余物与无水甲苯共蒸发三次，然后将其重新溶解在冰浴中的烧瓶中的DCM(60.4mL，938.783mmol)中，向其中添加N-甲基吡咯烷(1.509mL，14.515mmol)。首先将混合物在0℃下搅拌1hr，并且然后在环境温度下再搅拌一小时，然后将其冷却回0℃。然后经由套管向混合物中添加(R)-3-羟基丁腈(0.772g，9.072mmol)和DBU(1.367mL，9.072mmol)在DCM(6mL)中的溶液。将其在0℃下保持搅拌4hr并且在环境温度下保持搅拌1hr，然后添加额外的(R)-3-羟基丁腈(0.579g，6.804mmol)和DBU(0.273mL，1.814mmol)。将其在环境温度下搅拌1hr，然后在0℃下用磷酸二氢钠(174mL，145.147mmol)(10wt％水溶液)淬灭。将混合物用DCM萃取多次(150mL×2)。随后将合并的DCM层用水(80mL×2)和盐水(80mL，10％)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将浓缩物用庚烷-乙酸乙酯进行硅胶柱纯化，得到1.58g的产物。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.16(s,1H),7.79(s,1H),6.39(dd,J＝6.8,6.4Hz,1H),5.67(m,1H),4.60(m,1H),4.00(m,1H),3.85(dd,J＝11.2,4.0Hz,1H),3.77(dd,J＝11.2,2.8Hz,1H),3.05(br s,1H),2.96(d,J＝5.8Hz,2H),2.57(m,1H),2.40(ddd,J＝13.0,6.1,3.9Hz,1H),1.64(d,J＝6.5Hz,3H),1.29(d,J＝7.0Hz,6H),0.92(s,9H),0.91(s,9H),0.10(s,6H),0.09(s,6H)。
MS(ESI)m/z：针对C30H52N6O5Si2[M+H]+的计算值：633.4；实测值633.4。
N-(9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-2- 基)-6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺的合成：
在0℃下向N-(9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺(1.58g，2.496mmol)在THF(10.64mL，129.907mmol)和水(3.55mL，196.958mmol)中的混合物中添加TFA(0.577mL，7.489mmol)。将其在冰浴中搅拌5hr。向混合物中添加水(50mL)，并将固体沉淀物通过过滤收集，并用水冲洗(30mL×3)。将固体悬浮于MeCN(50mL)中，并进行超声处理5min。将固体通过过滤收集，并且将滤液浓缩并经受硅胶柱色谱法，用DCM-MeOH洗脱以得到额外的产物级分。将合并的产物级分与吡啶共蒸发一次，并且然后与无水MeCN共蒸发两次，以得到总计1.13g的产物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.41(s,1H),6.48(dd,J＝6.8,6.4Hz,1H),5.72(m,1H),4.79(m,1H),3.97(m,1H),3.79(dd,J＝12.0,4.0Hz,1H),3.74(dd,J＝12.0,4.4Hz,1H),3.17(dd,J＝17.2,5.2Hz,1H),3.04(dd,J＝17.2,5.6Hz,1H),2.81(m,2H),2.44(m,1H),1.60(d,J＝6.4Hz,3H),1.23(d,J＝6.8Hz,6H),0.95(s,9H),0.17(s,3H),0.15(s,3H)。
MS(ESI)m/z：针对C24H38N6O5Si[M+H]+的计算值：519.3；实测值519.4。
((2R,3S,5R)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基) 氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲基二甲基磷酰胺基氯化物的合成：
向N-(9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-6-(((R)-1-氰基丙-2-基)氧基)-9H-嘌呤-2-基)异丁酰胺(1.134g，2.186mmol)在DCM(18.99mL，295.147mmol)和乙腈(18.96mL，362.922mmol)中的悬浮液中添加1-甲基咪唑(0.105mL，1.312mmol)和2,6-二甲基吡啶(1.528mL，13.118mmol)，随后在室温下添加二甲基磷酰胺二氯化物(0.781mL,6.559mmol)。然后将悬浮液在室温下搅拌1天，然后在0℃下用柠檬酸水溶液(88mL，45.912mmol，10％)淬灭。将其用DCM(113mL×2)萃取。随后将合并的DCM层用水洗涤两次并用半饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将浓缩物用庚烷-乙酸乙酯进行硅胶柱纯化，得到944mg的立体异构体混合物。MS(ESI)m/z：针对C26H43ClN7O6PSi[M+H]+的计算值：644.3；实测值644.2。
使立体异构体混合物经受以下HPLC分离方法以将产物的(R)和(S)-立体异构体分离：
HPLC分离方法
柱：Chiralpak IC，30×250mm，5μ
流速：30mL/min
流动相：50％ MTBE 50％ EA
梯度：等度
运行时间：17分钟
进样体积：500μL 40mg/mL浓度
检测：260nm
峰1，保留时间在5.54min
((2R,3S,5R)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基) 氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲基(R)-二甲基磷酰胺基氯化物：
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.73(br s,1H),7.90(s,1H),6.31(dd,J＝6.8,6.8Hz,1H),5.67(m,1H),4.76-4.91(m,2H),4.11-4.27(m,2H),3.05-3.29(m,2H),2.94(d,J＝17.2,5.2Hz,1H),2.84(m,1H),2.76(s,3H),2.72(s,3H),2.37(ddd,J＝13.6,6.8,2.9Hz,1H),1.65(d,J＝6.3Hz,3H),1.27(d,J＝6.8Hz,6H),0.92(s,9H),0.14(s,3H),0.13(s,3H)。31PNMR(162MHz,氯仿-d)δppm 19.17(s,1P)。
峰2，保留时间在9.09min
((2R,3S,5R)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(6-(((R)-1-氰基丙-2-基) 氧基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲基(S)-二甲基磷酰胺基氯化物：
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.57(s,1H),7.90(s,1H),6.32(dd,J＝7.2,6.8Hz,1H),5.65(m,1H),4.74-4.83(m,1H),4.54-4.74(m,1H),4.35-4.49(m,1H),4.18-4.28(m,1H),3.17(dd,J＝16.8,6.0Hz,1H),3.06(m,1H),2.95(dd,J＝17.0,4.8Hz,1H),2.79-2.88(m,1H),2.69(s,3H),2.65(s,3H),2.35(ddd,J＝13.4,6.4,2.6Hz,1H),1.65(d,J＝6.5Hz,3H),1.22-1.34(m,6H),0.93(s,9H),0.15(s,3H),0.13(s,3H)。31P NMR(162MHz,氯仿-d)δppm 19.27(s,1P)。
实例3：新戊酸双保护的活化的鸟嘌呤脱氧核糖核苷的合成
4-(((9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((叔丁基二甲基甲 硅烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基新戊酸酯的合成：
将N-(9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-6-氧代-6,9-二氢-1H-嘌呤-2-基)异丁酰胺(1.50g，2.651mmol)与无水吡啶共蒸发，并且然后与无水MeCN共蒸发，然后将其溶解在具有室温水浴的烧瓶中的DCM(15.00mL，233.126mmol)中。向溶液中添加DMAP(0.032g，0.265mmol)和三乙胺(1.108mL，7.952mmol)，随后添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(1.445g，4.771mmol)。将其搅拌1.5hr，然后将其在冰浴中冷却并用磷酸二氢钠水溶液(54.9mL，39.762mmol，10wt％)淬灭。将其用DCM萃取两次。将合并的DCM层用5wt％盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将残余物与甲苯共蒸发三次，然后将其重新溶解在DCM(22.06mL，342.873mmol)中，然后在0℃下向其中添加4-(羟甲基)苯基新戊酸酯(1.548g,7.430mmol)、DBU(0.799mL，5.301mmol)和N-甲基吡咯烷(0.551ml，5.301mmol)。添加之后，移除冰浴并将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将其在冰浴中冷却并用磷酸二氢钠水溶液(73.2ml，53.012mmol，10wt％)淬灭。将其用DCM萃取两次，并且将合并的DCM层用5wt％盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将浓缩物用庚烷-乙酸乙酯进行硅胶柱纯化，得到2.08g的产物。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.13(s,1H),7.78(s,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,2H),7.04(dd,J＝8.5,2.3Hz,2H),6.39(dd,J＝6.4,6.4Hz,1H),5.60(m,2H),4.60(m,1H),3.99(m,1H),3.85(dd,J＝11.2,4.0Hz,1H),3.77(dd,J＝11.2,3.2Hz,1H),3.22(br s,1H),2.56(m,1H),2.40(ddd,J＝13.0,6.0,3.8Hz,1H),1.35(s,9H),1.28(d,J＝6.8Hz,6H),0.91(s,9H),0.91(s,9H),0.10(s,6H),0.08(s,6H)。
MS(ESI)m/z：针对C38H61N5O7Si2[M+H]+的计算值：756.4；实测值756.3。
4-(((9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(羟甲基)四氢呋喃- 2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基新戊酸酯的合成：
在0℃下向4-(((9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基新戊酸酯(2.08g，2.672mmol)在THF(22.78mL)和水(3.80mL)中的溶液中滴加TFA(0.618ml，8.016mmol)。将反应混合物用冰浴搅拌过夜，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(42.1mL，40.078mmol)淬灭。将其用EtOAc(100mL 2×)萃取，并且将合并的EtOAc层用半饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将浓缩物用庚烷-乙酸乙酯进行硅胶柱纯化，得到0.83g的产物。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.87(s,1H),7.76(s,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.04(m,J＝8.4Hz,2H),6.24(dd,J＝8.8,6.0Hz,1H),5.55-5.70(m,2H),5.01(br dd,J＝10.0,2.8Hz,1H),4.78(br d,J＝5.2Hz,1H),4.10(m,1H),3.94(br d,J＝12.4Hz,1H),3.78(m,1H),2.97(ddd,J＝13.2,8.4,5.2Hz,1H),2.84(m,1H),2.23(ddd,J＝11.6,5.6,1.6Hz,1H),1.35(s,9H),1.28(d,J＝6.8Hz,6H),0.92(s,9H),0.12(s,3H),0.11(s,3H)。
MS(ESI)m/z：针对C32H47N5O7Si[M+H]+的计算值：642.3；实测值642.3。
4-(((9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(((氯(二甲基氨基) 磷酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基新戊 酸酯的合成：
将4-(((9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基新戊酸酯(0.83g，1.293mmol)与无水MeCN共蒸发一次，然后将其溶解在MeCN(8.46mL，162.048mmol)和DCM(8.46ml，131.539mmol)中，向其中添加溴化锂(0.337g，3.879mmol)和DBU(0.585ml，3.879mmol)。然后将混合物在冰浴中冷却，向其中添加二甲基磷酰胺二氯化物(0.200mL，1.681mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌1hr，然后在0℃下用柠檬酸的水溶液(16.40mL，8.535mmol，10wt％)淬灭。将其用DCM(42.3mL 2×)萃取。随后将合并的DCM层用水洗涤两次并用半饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将浓缩物用庚烷-乙酸乙酯进行硅胶柱纯化，得到0.60g的产物。MS(ESI)m/z：针对C34H52ClN6O8PSi[M+H]+的计算值：767.3；实测值767.0。
使立体异构体混合物经受以下HPLC分离方法以将产物的(R)和(S)-立体异构体分离：
HPLC分离方法
柱：Chiralpak IA，21×250mm，5μ
流速：20mL/min
流动相：65％庚烷35％ EA
梯度：等度
运行时间：25分钟
进样体积：500μL 40mg/ml浓度
检测：260nm
峰1，保留时间在11.70min
4-(((9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-((((R)-氯(二甲基 氨基)磷酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基 新戊酸酯：
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.44(br s,1H),7.90(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),7.03(d,J＝8.4Hz,2H),6.32(dd,J＝6.8,6.8Hz,1H),5.56-5.72(m,2H),4.80(m,1H),4.73(m,1H),4.15-4.30(m,2H),3.08(m,1H),2.97(m,1H),2.74(s,3H),2.70(s,3H),2.37(ddd,J＝13.2,6.4,3.2Hz,1H),1.34(s,9H),1.28(d,J＝6.8Hz,6H),0.92(s,9H),0.13(s,3H),0.12(s,3H)。31P NMR(162MHz,氯仿-d)δppm 19.04(s,1P)。
峰2，保留时间在17.94min
4-(((9-((2R,4S,5R)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-((((S)-氯(二甲基 氨基)磷酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-2-异丁酰胺基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基 新戊酸酯：
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.31(s,1H),7.89(s,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,2H),7.03(d,J＝8.4Hz,2H),6.32(dd,J＝6.8,6.8Hz,1H),5.56-5.70(m,2H),4.78(m,1H),4.55(m,1H),4.39(m,1H),4.21(m,1H),3.00(m,2H),2.67(s,3H),2.63(s,3H),2.37(ddd,J＝13.2,6.4,3.2Hz,1H),1.34(s,9H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H),0.92(s,9H),0.15(s,3H),0.13(s,3H)。31P NMR(162MHz,氯仿-d)δppm 19.13(s,1P)。

Claims (22)

1.一种根据式I的双保护的活化的鸟嘌呤单体：
其中R1和R2选自H、卤素、(R)-甲基或(S)-甲基、C1-C4烷基、苯基、芳基、环烷基或其任何组合，或其中R1和R2一起形成C3-C8环烷基，该环烷基是饱和的或不饱和的并且是未取代的或被一个或多个C1-C6烷基取代；并且
其中R3选自NH2、-NHC(O)R7、-NHC(O)OR7、 并且其中R7可以是C1-C6烷基、异丙基、2,2,2-三氯乙基、苄基或芳基。
2.根据权利要求1所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，该鸟嘌呤单体是具有式I的立体异构体，其包含根据式Ia的结构：
3.根据权利要求1所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，该鸟嘌呤单体是具有式I的立体异构体，其包含根据式Ib的结构：
4.根据权利要求1所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，R1是H并且R2是(R)-甲基或(S)-甲基。
5.根据权利要求1所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，R1是(R)-甲基或(S)-甲基并且R2是H。
6.一种根据式II的双保护的活化的鸟嘌呤单体：
其中R1和R2选自H、卤素、(R)-甲基或(S)-甲基、C1-C4烷基、苯基、芳基、环烷基或其任何组合，或其中R1和R2一起形成C3-C7环烷基环或包含氮或氧的杂环的环，该环烷基环或杂环的环是饱和的或不饱和的并且是未取代的或被C1-C6烷基取代；
其中R3选自NH2、-NHC(O)R7、-NHC(O)OR7、 并且其中R7可以是C1-C6烷基、异丙基、2,2,2-三氯乙基、苄基或芳基；
其中R4选自H、三苯甲基(Tr)、单甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)、-Si(R6)3、其中R6是C1-C6烷基或芳基；并且
其中R5选自H、-OMe、-F或-OCH2CH2OMe，或其中R5和R6可以连接在一起以形成C3至C7环烷基环或包含氧和/或氮的杂环的环，所有这些环烷基环或杂环的环可以是饱和的或不饱和的，并且可以是未取代的或被C1-C6烷基取代。
7.根据权利要求6所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，该鸟嘌呤单体是具有式II的立体异构体，其包含根据式IIa的结构：
8.根据权利要求6所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，该鸟嘌呤单体是具有式II的立体异构体，其包含根据式IIb的结构：
9.根据权利要求6所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，R1是H并且R2是(R)-甲基或(S)-甲基。
10.根据权利要求6所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体，其中，R1是(R)-甲基或(S)-甲基并且R2是H。
11.一种用于生产根据权利要求1所述的双保护的活化的鸟嘌呤单体的方法，其中，该方法包括：
i.)使根据式(III)的受保护的鸟嘌呤单体：
与醇在碱和活化剂的存在下反应，以生产根据式IV的受保护的鸟嘌呤中间体：
其中R选自由以下结构组成的组：
ii.)使根据式IV的受保护的鸟嘌呤中间体与三乙胺三氢氟酸盐反应以生产根据式V的脱保护的鸟嘌呤中间体：
以及
iii.)使根据式V的脱保护的鸟嘌呤中间体与溴化锂、第二活化剂和N,N-二甲基磷氨基二氯化物反应以产生该双保护的活化的鸟嘌呤单体。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，该第一和第二活化剂是DBU并且该碱是N-甲基吡咯烷。
13.一种产生双保护的活化的鸟嘌呤单体的方法，其中该方法包括：
i)使根据式VI的鸟嘌呤单体：
与第一保护剂反应，以生产根据式(VII)的第一受保护的鸟嘌呤单体：
其中R3选自NH2、-NHC(O)R7或-NHC(O)OR7，其中R7是C1-C6烷基、异丙基、苄基、2,2,2-三氯乙基、或芳基；
其中R4A选自三苯甲基(Tr)、单甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)、或-Si(R6)3、其中R6是C1-C6烷基或芳基；
其中R5选自H、-OMe、-OMOE、-F或-OCH2CH2OMe；
ii)使该具有式(VII)的受保护的鸟嘌呤单体与第二保护剂反应以生产根据式(VIII)的受保护的鸟嘌呤单体：
其中R4B选自三苯甲基(Tr)、单甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)、或-Si(R6)3、其中R6是C1-C6烷基或芳基；
iii)使具有式(VIII)的第二受保护的鸟嘌呤单体与活化剂反应以生产根据式(IX)的受保护的鸟嘌呤单体：
其中A1是由与该活化剂的反应形成的离去基团；
iv)使该具有式(IX)的受保护的鸟嘌呤单体与醇反应以生产根据式(X)的受保护的鸟嘌呤单体：
v)用脱保护剂将该根据式(X)的受保护的鸟嘌呤单体脱保护以生产根据式(XI)的受保护的鸟嘌呤单体：
vi)使该根据式(XI)的受保护的鸟嘌呤单体与亲电试剂反应以生产根据式II的受保护的鸟嘌呤单体
14.根据权利要求13所述的方法，其中，该第二保护剂是叔丁基二甲基氯硅烷。
15.根据权利要求13所述的方法，其中，该活化剂是2,4,6-三异丙基苯磺酰氯。
16.根据权利要求13所述的方法，其中，A1是
17.根据权利要求13所述的方法，其中，该第三保护剂是
18.根据权利要求13所述的方法，其中，该脱保护剂是三氟乙酸。
19.根据权利要求13所述的方法，其中，该亲电试剂是
20.一种产生双保护的活化的鸟嘌呤单体的方法，其中该方法包括：
i.)使具有式(IX)的鸟嘌呤单体
其中R3是-NHC(O)R7，其中R7是异丙基；
其中R4A和R4B选自三苯甲基(Tr)、单甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)、或-Si(R6)3，其中R6是C1-C6烷基或芳基；
其中R5选自H、-OMe、-OMOE、-F或-OCH2CH2OMe；
其中A1是离去基团；
与4-(羟甲基)苯基新戊酸酯反应以生产根据式(XII)的受保护的鸟嘌呤单体：
ii.)用脱保护剂将该根据式(XII)的受保护的鸟嘌呤单体脱保护以生产根据式(XIII)的受保护的鸟嘌呤单体：
iii.)使该根据式(XIII)的受保护的鸟嘌呤单体与亲电试剂反应以生产具有以下结构的化合物：
21.根据权利要求20所述的方法，其中，该保护剂是4-(羟甲基)苯基新戊酸酯。
22.一种根据以下结构中任一项的双保护的活化鸟嘌呤单体：
其中R3选自NH2、-NHC(O)R7、-NHC(O)OR7、 并且其中R7可以是C1-C6烷基、异丙基、2,2,2-三氯乙基、苄基或芳基；
其中R4选自H、三苯甲基(Tr)、单甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)、-Si(R6)3、其中R6是C1-C6烷基或芳基；并且
其中R5选自H、-OMe、-F或-OCH2CH2OMe。
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