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CN118354789A - 抗糖-cMET抗体及其用途 - Google Patents

抗糖-cMET抗体及其用途 Download PDF

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CN118354789A
CN118354789A CN202280072632.1A CN202280072632A CN118354789A CN 118354789 A CN118354789 A CN 118354789A CN 202280072632 A CN202280072632 A CN 202280072632A CN 118354789 A CN118354789 A CN 118354789A
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J·施纳贝尔
E·谭
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Abstract

本公开涉及特异性结合cMET的癌症特异性糖基化变体的抗糖‑cMET抗体及其抗原结合片段和相关的融合蛋白和抗体‑药物缀合物，以及编码此类生物分子的核酸。本公开进一步涉及抗体、抗原结合片段、融合蛋白、抗体‑药物缀合物和核酸用于癌症治疗的用途。

Description

抗糖-cMET抗体及其用途
1.相关申请的交叉引用
本申请要求2021年9月3日提交的美国临时申请第63/240,761号的优先权，其内容通过在此引用以其整体并入本文。
2.发明背景
使用嵌合抗原受体(CAR)的重定向T细胞应答的疗法已成为癌症免疫疗法中的有效工具并已证明对血液学癌症非常有效，靶向与非必需组织共享的抗原，如B细胞恶性肿瘤中的CD19(Brentjens et al.,2013,Sci Transl Med.5(177):177ra38-177ra38；Grupp etal.,2013,N Engl J Med.368(16):1509–1518；Kalos et al.,2011,Sci Transl Med.3(95):95ra73-95ra73；Kochenderfer et al.,2010,Blood.116(20):4099–4102；Porter etal.,2011,N Engl J Med.365(8):725–733)。然而，对实体瘤采用CAR疗法一直具有挑战性，因为大多数CAR靶标是在实体癌中过度表达的正常自身抗原。因此，在CAR T细胞靶向实体瘤的研究中，经常报道与基本健康组织交叉反应引起的不良反应(Bin Hou et al.,2019,Dis Markers,Article ID 3425291)。为了克服对实体瘤采用CAR疗法的挑战，需要允许选择性靶向的新的癌症特异性抗原。
许多癌症表达与健康组织不同的异常糖基化蛋白。这种异常糖基化蛋白含有可能适用于实体瘤免疫疗法的糖肽表位，但仅鉴定出少数这种糖肽表位。
MET原癌基因编码由上皮-内皮来源的细胞广泛表达的受体酪氨酸激酶(Brand-Saberi et al.,1996,Dev Biol.179(1):303-308；Heymann et al.,1996,Devel Biol.180(2):566-578；Bladt et al.,1995,Nature.376(6543):768771)。在正常条件下，c-MET信号传导引发多种生物效应，导致增加的细胞生长、分散和运动性、侵袭、防止凋亡和血管生成(Sierra et al.,2008,J Exp Biol.205(7):1673-1655；Conrotto et al.,2005,Blood.105(11):4321-4329；Yi and Tsao,2000,Neoplasia.2(3):226-236；Silvagno etal.,1995,Arterioscler Thromb Vasc Biol.15(11):1857-1865)，但是在转化的上皮细胞中，c-MET的不适当激活支持了癌细胞的增殖和侵袭能力(Benvenuti and Comoglio,2007,J Cell Physiol.213(2):316-325；Danilkovitch-Miagkova and Zbar,2002,J ClinInvest.109(7):863-867)。许多研究报道c-MET在多种癌症中过表达。这包括肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌和胃癌(Knowles et al.,2009,Clin Cancer Res.15(11):3740-3750；Lengyel et al.,2005,Int J Cancer.113(4):678-682；Tokunou etal.,2001,Am J Pathol.158(4):1451-1463；Ramirez et al.,2000,Clin Endocrinol(Oxf).53(5):635-644；Tsao et al.,1998,Lung Cancer.20(1):1-16；Koochekpour etal.,1997,Cancer Res.57(23):5391-5398；Olivero et al.,1996,Br J Cancer.74(12):18621868；Tuck et al.,1996,Am J Pathol.148(1):225-232；Di Renzo et al.,1995,Cancer Res.55(5):1129-1138；Furukawa et al.,1995,Am J Pathol.147(4):889-895；Liu et al.,1992,Oncogene.7(1):181-185；Soman et al.,1991,Proc Natl Acad SciUSA.88(11):4892-4896；Houldsworth et al.,1990,Cancer Res.50(19):6417-6422)。由于c-MET在肿瘤发生和癌症进展中的重要性，c-MET被认为是抗癌疗法中的重要靶标(Trusolino et al.,2010,Nat Rev Mol Cell Bio.11(12):834-848；Migliore andGiordano,2008,Eur J Cancer.44(5):641-651；Peschard and Park,2007,Oncogene.26(9):1276-1285；Corso et al.,2005,Trends Mol Med.11(6):284-292)。若干单克隆抗体在高HGF/c-MET水平的肿瘤中显示出有希望的结果，但由于c-MET在健康组织中的显著表达，大多数单克隆抗体主要干扰HGF对c-MET的激活，因此不适合采用细胞毒性策略进行免疫疗法的靶向。因此，需要鉴定在癌细胞中过表达的糖-cMET表位和靶向这种糖-cMET表位的新治疗方式，如抗体和CAR。
3.发明概述
本公开通过提供基于对糖-cMET的癌症特异性表位具有选择性的抗体和抗原结合片段的治疗剂和诊断剂来捕获糖肽变体的肿瘤特异性。抗体和抗原结合片段有利地结合cMET主链及其癌症特异性O-连接聚糖，但不结合健康组织上的cMET。
因此，本公开提供了结合cMET的癌症特异性糖基化变体的抗糖-cMET抗体及其抗原结合片段。本公开进一步提供了包含抗糖-cMET抗体和抗原结合片段的融合蛋白和抗体-药物缀合物，以及编码抗糖-cMET抗体、抗原结合片段和融合蛋白的核酸。
本公开进一步提供了使用抗糖-cMET抗体、抗原结合片段、融合蛋白、抗体-药物缀合物和核酸用于癌症治疗的方法。
在某些方面，本公开提供了与cMET的癌症特异性糖基化变体和第二表位结合的双特异性和其他多特异性抗糖-cMET抗体和抗原结合片段。第二表位可以在cMET本身上，在癌细胞上与cMET共表达的另一种蛋白质上，或者在不同细胞(例如活化的T细胞)上呈递的另一种蛋白质上。此外，还公开了编码此类抗体的核酸，包括包含密码子优化的编码区的核酸和包含未经密码子优化以在特定宿主细胞中表达的编码区的核酸。
抗糖-cMET抗体和结合片段可以是含有融合伴侣的融合蛋白的形式。融合伴侣可用于提供第二功能，如T细胞信号传导蛋白的信号传导结构域的信号传导功能、T细胞活化的肽调节剂或标记系统的酶促组分。示例性的T细胞信号传导蛋白包括4-1BB、CD28、CD2和融合肽,例如,CD28-CD3-zeta、4-1BB-CD3-zeta、CD2-CD3-zeta、CD28-CD2-CD3-zeta、和4-1BB-CD2-CD3-zeta。4-1BB也称为CD137，是T细胞的共刺激受体；CD2是T细胞和NK细胞的共刺激受体；CD3-zeta是T细胞抗原受体的信号转导组分。提供第二功能的部分可以是T细胞活化的调节剂，如IL-15、IL-15Rα或IL-15/IL-15Rα融合体，可以是用于制备MicAbody的MHC类I链相关(MIC)的蛋白质结构域，或者其可以编码用于监测体内或体外结合的程度和/或位置的标记或标记系统的酶促组分。在本公开的一些实施方案中，将编码这些预防性和治疗性活性生物分子的构建体置于T细胞(如自体T细胞)环境中，提供了用于募集过继转移的T细胞以预防或治疗多种癌症的强大平台。
在某些方面，本发明的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含抗糖-cMET抗体15C4.1D8.1G2(有时在本文中称为“15C4”)、8H3.2B9.2C7(有时在本文中称为“8H3”)、16E12.1D9.1B11(有时在本文中称为“16E12”)、14E9、19H2或39A3或其中任何一种的人源化对应物的重链和/或轻链CDR序列(如通过Kabat、Chothia、IMGT或其组合的重叠区域所定义)。在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含抗糖-CMET抗体15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3或其人源化对应物的重链和/或轻链可变序列(或由其核苷酸序列编码)。抗糖-cMET抗体15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3的CDR和可变区序列(以及它们的编码序列)分别列于表1A至1F中。在某些方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含表1A至1F中所列的(或由表1A至1F中所列的核苷酸序列编码的)重链和/或轻链可变序列。为清楚起见，当本文中使用术语“抗糖-cMET抗体”时，旨在包括单特异性和多特异性(包括双特异性)抗糖-cMET抗体、单特异性和多特异性抗体的抗原结合片段、以及含有该抗体及其抗原结合片段的融合蛋白和缀合物，除非上下文另有说明。同样，当使用术语“抗糖-cMET抗体或抗原结合片段”时，其还旨在包括单特异性和多特异性(包括双特异性)抗糖-cMET抗体及其抗原结合片段，以及含有此类抗体和抗原结合片段的融合蛋白和缀合物，除非上下文另有说明。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含表1A-3H中所列的(或由表1A-3H中所列的核苷酸序列编码的)重链和/或轻链CDR序列。表1A-1F中列出的CDR序列包括根据用于定义CDR边界的IMGT(Lefranc et al.,2003,Dev Comparat Immunol 27:55-77)、Kabat(Kabat et al.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.)和Chothia(Al-Lazikani et al.,1997,J.Mol.Biol 273:927-948)方案定义的CDR序列。表1G-1I中列出的CDR序列是分别根据IMGT、Kabat和Chothia定义衍生自表1A至1C(“组1”抗体:15C4、8H3、16E12)中列出的CDR序列的共有序列。表1J-1L中列出的CDR序列是分别根据IMGT、Kabat和Chothia定义衍生自表1D至1F(“组2”抗体:14E9、19H2、和39A3)中列出的CDR序列的共有序列。表2A至2F中列出的CDR序列分别是表1A至1F中列出的CDR序列的组合重叠区域，其中IMGT、Kabat和Chothia序列以加下划线的粗体文本显示。表2G中列出的CDR序列是表2A-2C(“组1”抗体:15C4、8H3、16E12)中列出的共有CDR序列的组合重叠区域。表2H中列出的CDR序列是表2D-2F(“组2”抗体:14E9、19H2、和39A3)中列出的共有CDR序列的组合重叠区域。表3A-3F中列出的CDR序列分别是表1A-1F中所示CDR序列的共同重叠区域。表3G中列出的CDR序列是表3A-3D(“组1”抗体:15C4、8H3、16E12)中列出的CDR序列的共同重叠区域。表3H中列出的CDR序列是表3D-3F(“组2”抗体:14E9、19H2、和39A3)中列出的CDR序列的共同重叠区域。这种抗糖-cMET抗体和抗原结合片段的框架序列可以是表1A-1F中列出的VH和VL序列的天然鼠框架序列，也可以是非天然的(例如，人源化的或人的)框架序列。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含表4A至4G中列出的人源化抗糖-cMET抗体8H3的重链和/或轻链可变序列。
在某些方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含CDR，该CDR包含表1A-3H中列出的任何CDR组合的氨基酸序列。在某些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:253的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:254的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:255的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:256的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:257的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:258的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，CDR-H1包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-H2包含SEQ ID NO:254的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-H3包含SEQ IDNO:255的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-L1包含SEQ ID NO:256的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-L2包含SEQ ID NO:257的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-L3包含SEQ ID NO:258的氨基酸序列。
在某些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:259的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:260的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ IDNO:261的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:262的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ IDNO:263的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:342的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施方案中，CDR-H1包含SEQ ID NO:259的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-H2包含SEQ IDNO:260的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-H3包含SEQ ID NO:261的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-L1包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-L2包含SEQ ID NO:263的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR-L3包含SEQ ID NO:342的氨基酸序列。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:3-5的重链CDR和SEQ ID NO:6-8的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:9-11的重链CDR和SEQ ID NO:12-14的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:15-17的重链CDR和SEQ ID NO:18-20的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:169-171的重链CDR和SEQ ID NO:172-174的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:25-27的重链CDR和SEQ ID NO:28-30的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:31-33的重链CDR和SEQ ID NO:32-34的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:35-37的重链CDR和SEQ ID NO:38-40的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:175-177的重链CDR和SEQ ID NO:178-180的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:47-49的重链CDR和SEQ ID NO:50-52的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:53-55的重链CDR和SEQ ID NO:56-58的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:59-61的重链CDR和SEQ ID NO:62-64的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:181-183的重链CDR和SEQ ID NO:184-186的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:69-71的重链CDR和SEQ ID NO:72-74的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:75-77的重链CDR和SEQ ID NO:78-80的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:81-83的重链CDR和SEQ ID NO:84-86的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:187-189的重链CDR和SEQ ID NO:190-192的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:91-93的重链CDR和SEQ ID NO:94-96的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:97-99的重链CDR和SEQ ID NO:100-102的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:103-105的重链CDR和SEQ ID NO:106-108的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:193-195的重链CDR和SEQ ID NO:196-198的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:113-115的重链CDR和SEQ ID NO:116-118的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:119-121的重链CDR和SEQ ID NO:122-124的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:125-127的重链CDR和SEQ ID NO:128-130的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:199-201的重链CDR和SEQ ID NO:202-204的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:133-135的重链CDR和SEQ ID NO:136-138的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:139-141的重链CDR和SEQ ID NO:142-144的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:145-147的重链CDR和SEQ ID NO:148-150的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:151-153的重链CDR和SEQ ID NO:154-156的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:157-159的重链CDR和SEQ ID NO:160-162的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:163-165的重链CDR和SEQ ID NO:166-168的轻链CDR。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:205-207的重链CDR和SEQ ID NO:208-210的轻链CDR。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:211-213的重链CDR和SEQ ID NO:214-216的轻链CDR。
在某些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:133、139、145、169、175、181、205、217、223、229或253的氨基酸序列的CDR-H1；含有SEQID NO:134、140、146、170、176、182、206、218、224、230或254的氨基酸序列的CDR-H2；含有SEQ ID NO:135、141、147、171、177、183、207、219、225、231或255的氨基酸序列的CDR-H3；含有SEQ ID NO:136、142、148、172、178、184、208、220、226、232或256的氨基酸序列的CDR-L1；含有SEQ ID NO:137、143、149、173、179、185、209、221、227、233或257的氨基酸序列的CDR-L2；和含有SEQ ID NO:138、144、150、174、180、186、210、222、228、234或258的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:151、157、163、187、193、199、211、235、241、247或259的氨基酸序列的CDR-H1；含有SEQID NO:152、158、164、188、194、200、212、236、242、248或260的氨基酸序列的CDR-H2；含有SEQ ID NO:153、159、165、189、195、201、213、237、243、249或261的氨基酸序列的CDR-H3；含有SEQ ID NO:154、160、166、190、196、202、214、238、244、250或262的氨基酸序列的CDR-L1；含有SEQ ID NO:155、161、167、191、197、203、215、239、245、251或263的氨基酸序列的CDR-L2；和含有SEQ ID NO:156、162、168、192、198、204、216、240、246、252或342的氨基酸序列的CDR-L3。
本公开的抗体和抗原结合片段可以是鼠的、嵌合的、人源化的或人的。
在进一步的方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与分别包含SEQ IDNO:1和2的重链和轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:1和2具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与分别包含SEQ ID NO:23和24的重链和轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:23和24具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与分别包含SEQ ID NO:45和46的重链和轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:45和46具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本发明的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段与分别包含SEQ ID NO:67和68的重链和轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:67和68具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与分别包含SEQ ID NO:89和90的重链和轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:89和90具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与分别包含SEQ ID NO:111和112的重链和轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:111和112具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本发明的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含SEQ ID NO:133-144中任一项的重链可变区和SEQ ID NO:145-153中任一项的轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链可变区和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链可变区与SEQ ID NO:133-134中任一项具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性，该轻链可变区与SEQ ID NO:145-153中任一项具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本发明的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含SEQ ID NO:264-275中任一项的重链可变区和SEQ ID NO:276-284中任一项的轻链可变区的抗体或抗原结合片段竞争。在其他方面，本公开提供了具有重链可变区和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链可变区与SEQ ID NO:264-275中任一项具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性，该轻链可变区与SEQ ID NO:276-284中任一项具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段是单链可变片段(scFv)。示例性的scFv包含位于轻链可变片段N端的重链可变片段。在一些实施方案中，scFv重链可变片段和轻链可变片段共价结合至4-15个氨基酸的接头序列。scFv可以是双特异性T细胞衔接器的形式，也可以在嵌合抗原受体(CAR)内。
抗糖-cMET抗体和抗原结合片段可以是单链可变片段多聚体、双特异性单链可变片段和双特异性单链可变片段多聚体的形式。在一些实施方案中，单链可变片段的多聚体选自二价单链可变片段、三价体或四价体。在这些实施方案中的一些中，双特异性单链可变片段的多聚体是双特异性T细胞衔接器。
本公开的其他方面涉及编码本公开的抗糖-cMET抗体和抗体结合片段的核酸。在一些实施方案中，编码抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的核酸部分是密码子优化的用于在人细胞中表达。在某些方面，本公开提供了具有由重链核苷酸序列和轻链核苷酸序列编码的重链可变区和轻链可变区的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，该重链核苷酸序列与SEQID NO:21、43或65具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性，该轻链核苷酸序列与SEQ ID NO:22、44或66具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。在其他方面，本公开提供了具有由重链核苷酸序列和轻链核苷酸序列编码的重链可变区和轻链可变区的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，该重链核苷酸序列与SEQ ID NO:87、109或131具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性，该轻链核苷酸序列与SEQ ID NO:88、110或132具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。包含核酸的载体(例如，病毒载体如慢病毒载体)和宿主细胞也在本公开的范围内。重链和轻链编码序列可以存在于单个载体或单独的载体上。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含根据本公开的抗糖-cMET抗体、抗原结合片段、核酸(或核酸对)、载体(或载体对)或宿主细胞，以及生理学上合适的缓冲液、佐剂或稀释剂。
本公开的又一方面是制备嵌合抗原受体的方法，其包括在适合编码区表达的条件下孵育包含根据本公开的核酸或载体的细胞并收集嵌合抗原受体。
本公开的另一方面是检测癌症的方法，其包括将生物样品(例如，细胞、组织样品或细胞外囊泡)与本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段接触，并检测该抗体是否与生物样品(例如，细胞、组织样品或细胞外囊泡)结合。
本公开的另一方面是根据本公开的公开内容的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段用于检测癌症。
本公开的另一方面是治疗癌症的方法，其包括将预防或治疗有效量的根据本公开的抗糖-cMET抗体、抗原结合片段、核酸、载体、宿主细胞或药物组合物施用于有此需要的受试者。
本公开的另一方面是根据本公开的抗糖-cMET抗体、抗原结合片段、核酸、载体、宿主细胞或药物组合物用于癌症治疗。
本公开的另一方面是根据本公开的抗糖-cMET抗体、抗原结合片段、核酸、载体、宿主细胞或药物组合物在制备用于癌症治疗的药物中的用途。
本文还提供了糖cMET肽。肽的长度可以是13-30个氨基酸，并且包括SEQ ID NO:285(在以粗体下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化)的氨基酸1-11、1-12、1-13、1-14、1-15、1-16、1-17、1-18、1-19、1-20、2-11、2-12、2-13、2-14、2-15、2-16、2-17、2-18、2-19、2-20、3-11、3-12、3-13、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19、3-20、4-11、4-12、4-13、4-14、4-15、4-16、4-17、4-18、4-19、4-20、5-11、5-12、5-13、5-14、5-15、5-16、5-17、5-18、5-19、5-20、6-11、6-12、6-13、6-14、6-15、6-16、6-17、6-18、6-19、6-20、7-11、7-12、7-13、7-14、7-15、7-16、7-17、7-18、7-19、7-20、8-11、8-12、8-13、8-14、8-15、8-16、8-17、8-18、8-19、8-20、9-11、9-12、9-13、9-14、9-15、9-16、9-17、9-18、9-19或9-20。糖-cMET肽在第5.10节和编号实施方案894至920中描述。该肽可以包括在组合物中，如在第5.10.1节和编号实施方案921和922中描述的。糖-cMET肽可用于在动物中产生抗体和/或在动物中引发免疫应答的方法中。使用糖-cMET肽的方法在第5.10.2节和编号实施方案923至926中描述。
4.附图说明
图1:针对50ng Tn-糖基化cMET和多配体蛋白聚糖2肽的14E9、19H2和39A3兔抗体的ELISA。
图2A-2B-5：A549 COSMC-KO和A549细胞上cMET小鼠抗体的流式细胞术分析。图2A:A549 COSMC-KO和A549细胞上15C4.1D8.1G2、8H3.2B9.2C7和16E12.1D9.1B11、抗高尔基体、小鼠IgG同种型对照和抗cMET抗体的代表性直方图。图2B1-2B-4：对A549 COSMC-KO和A549细胞上发现的细胞表面抗原进行15C4.1D8.1G2、8H3.2B9.2C7和16E12.1D9.1B11的滴定。图2B-5：图2B-1至2B-4的图例。
图3A-3B-5：A549 COSMC-KO和A549细胞上cMET兔抗体的流式细胞术分析。图3A:A549 COSMC-KO和A549细胞上14E9、19H2、和39A3、抗高尔基体、小鼠IgG同种型对照和抗cMET抗体染色的代表性直方图。图3B-1-3B-4:对A549 COSMC-KO和A549细胞上发现的细胞表面抗原进行14E9、19H2和39A3的滴定。图3B-5:图3B-1至3B-4的图例。
图4A-4C：cMET小鼠抗体和兔抗体的免疫荧光染色。图4A-4B:A549和A549 COSMC-KO细胞(图4A)和/或T47D和T47D COSMC-KO细胞(图4B)上15C4.1D8.1G2、8H3.2B9.2C7、16E12.1D9.1B11、抗cMET抗体和抗Tn抗体的免疫荧光染色。图4C:A549 COSMC-KO和A549细胞上14E9、19H2、39A3、抗cMET抗体和抗Tn抗体的免疫荧光染色。
图5A-5B：cMET小鼠抗体和兔抗体的免疫组织化学。图5A:结肠癌和正常组织(TMA-T051b Biomax)上15C4.1D8.1G2、8H3.2B9.2C7、16E12.1D9.1B11、14E9、19H2、39A3和IgG对照抗体的染色。图5B:阳性和阴性染色组织的统计。
图6A-1-6B-2：cMET小鼠抗体的免疫组织化学。图6A-1:卵巢癌(TMA-OV1502)、胰腺癌(TMA-PA2082)、肺癌(TMA-LC121b)和胆管癌(TMA-GA802a)的8H3.2B9.2C7(“GO-8H3”)抗体染色。统计数据如图6A-2所示。阳性样品中约70％的癌细胞具有强烈的细胞表面染色。约10％-20％的分析癌组织有约70％的癌细胞特异性细胞表面染色。图6B-1:正常组织(TMA-FDA999x)上8H3.2B9.2C7(“GO-8H3”)的染色。统计数据如图6B-2所示。在正常组织上没有观察到特异性细胞表面染色。
图7A-7C：cMET CART的细胞杀伤测定。图7A:通过T细胞与靶细胞的比例滴定(1、5和10)的A673 COSMC-KO和A673靶细胞上的cMET CART(8H3.2B9.2C7)的杀伤。图7B:cMET-CART杀伤50％靶细胞A673 COSMC-KO的时间(KT50)的总结。N/A＝50％的细胞未被杀伤。图7C:在cMET-Tn低表达(每个细胞少于500个受体)和高表达(每个细胞2x105个受体)的各种细胞系上cMET CART(8H3.2B9.2C7)的杀伤。cMET-CART在低水平cMET-Tn表达的细胞(A549-wt细胞)中显示出细胞毒性。实验通过T细胞与靶细胞的比例滴定(1、5和10)进行。
图8A-8B:cMET-CART(8H3)在实体瘤小鼠模型中的体内活性。图8A:通过侧腹注射建立的A549实体瘤模型(肺癌细胞系)(CDx)。CART注射时的肿瘤体积为88mm3。通过IT注射用第二代8H3-CAR-T处理小鼠(1×107个细胞2剂)。用卡尺测量肿瘤体积。图8B:通过侧腹注射建立的肺癌实体瘤模型(PDx)(Champions模型CTG-2823)。CART注射时的肿瘤体积为200mm3并且CART通过IV注射递送(1×107个细胞4剂)。
图9A-9C：示例性cMET-CART构建体15C4-CART(图9A)、16E12-CART(图9B)和8H3-CART(图9C)。实施例5中描述了构建体的测试。
图10:在E:T比为2:1时，hu8H3-CART对A673(Tn+)和(Tn-)细胞的细胞毒性。
5.发明详述
5.1抗体
本公开提供了针对存在于肿瘤细胞上的cMET的糖型的新型抗体。这些以抗体15C4.1D8.1G2(下文中称为“15C4”)、8H3.2B9.2C7(下文中称为“8H3”)、16E12.1D9.1B11(下文中称为“16E12”)、14E9、19H2和39A3为例。在结合以下cMET中存在的糖基化肽的抗体筛选中鉴定了15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3:在以粗体下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化，以模拟存在于肿瘤细胞上的cMET的糖基化模式。
本公开的抗糖-cMET抗体，以15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3为例，可用作癌症诊断和治疗的工具。
因此，在某些方面，本公开提供了与存在于肿瘤细胞上的cMET的糖型(本文称为“糖cMET”)结合的抗体和抗原结合片段，优选与肽结合，该肽在以粗体下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化。
本公开的抗糖-cMET抗体可以是多克隆的、单克隆的、基因工程的和/或以其他方式修饰的，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、灵长类抗体、单链抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体等。在各种实施方案中，抗体包含抗体恒定区的全部或部分。在一些实施方案中，恒定区是选自以下的同种型：IgA(例如,IgA1或者IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如,IgG1、IgG2、IgG3或者IgG4)和IgM。在具体实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体包含IgG1恒定区同种型。
如本文所用，术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。单克隆抗体通过本领域可用或已知的任何方式衍生自单个克隆，包括任何真核克隆、原核克隆或噬菌体克隆。可用于本公开的单克隆抗体可以使用本领域已知的多种技术来制备，包括使用杂交瘤技术、重组技术和噬菌体展示技术或其组合。在本公开的许多用途中，包括在人体内使用抗糖-cMET抗体，可以适当地使用嵌合的、灵长类化的、人源化的或人抗体。
如本文所用，术语“嵌合”抗体是指具有衍生自非人免疫球蛋白如大鼠或小鼠抗体的可变序列和通常选自人免疫球蛋白模板的人免疫球蛋白恒定区的抗体。产生嵌合抗体的方法是本领域已知的。参加，例如，Morrison,1985,Science 229(4719):1202-7；Oi etal.,1986,BioTechniques 4:214-221；Gillies et al.,1985,J.Immunol.Methods 125:191-202；美国专利号5,807,715；4,816,567；和4,816397，其通过引用以其整体并入本文。
非人(例如，鼠)抗体的“人源化”形式是嵌合免疫球蛋白，其含有衍生自非人免疫球蛋白的最少序列。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个、通常两个的可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区并且所有或基本上所有的框架区(FR)是人免疫球蛋白序列的框架区(FR)。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白共有序列的一部分。抗体人源化的方法是本领域已知的。参见，例如，Riechmann et al.,1988,Nature 332:323-7；美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；和6,180,370至Queen et al.；EP239400；PCT公开WO 91/09967；美国专利号5,225,539；EP592106；EP519596；Padlan,1991,Mol.Immunol.,28:489-498；Studnicka et al.,1994,Prot.Eng.7:805-814；Roguska etal.,1994,Proc.Natl.Acad.Sci.91:969-973；和美国专利号5,565,332，所有这些通过引用以其整体并入本文。
示例性的人源化序列在编号实施方案8至115中描述。表4A-4G列出了本公开的示例性人源化抗体及其抗原结合片段的可变区序列。
“人抗体”包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并且包括从人免疫球蛋白文库或从一种或多种人免疫球蛋白转基因且不表达内源性免疫球蛋白的动物分离的抗体。人抗体可以通过本领域已知的多种方法制备，包括使用衍生自人免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法。参见美国专利号4444887和4716111；和PCT公开WO 98/46645；WO 98/50433；WO 98/24893；WO 98/16654；WO 96/34096；WO 96/33735；和WO 91/10741，其中每篇通过引用以其整体并入本文。也可以使用不能表达功能性内源性免疫球蛋白但可以表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠来产生人抗体。参见，例如PCT公开WO 98/24893；WO 92/01047；WO 96/34096；WO 96/33735；美国专利号5413923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771；和5,939,598，其通过引用以其整体并入本文。可以使用称为“引导选择”的技术生成识别选定表位的完全人抗体。在这种方法中，选择的非人单克隆抗体例如小鼠抗体，用于指导识别相同表位的完全人抗体的选择(参见Jespers et al.,1988，Biotechnology 12：899-903)。
“灵长类抗体”包含猴可变区和人恒定区。产生灵长类抗体的方法是本领域已知的。参见例如,美国专利号5,658,570；5,681,722；和5,693,780,其通过引用以其整体并入本文。
本公开的抗糖-cMET抗体包括全长(完整)抗体分子以及能够结合糖-cMET的抗原结合片段。抗原结合片段的实例包括例如但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、单链Fv片段和单结构域片段。
Fab片段包含轻链的恒定结构域(CL)和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于在重链CH1结构域的羧基末端添加了几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。F(ab’)片段由F(ab’)2胃蛋白酶消化产物的铰链半胱氨酸处的二硫键断裂产生。本领域普通技术人员已知抗体片段的其他化学偶联。Fab和F(ab’)1片段缺乏完整抗体的Fc片段，从动物循环中清除得更快，并且可能比完整抗体具有更少的非特异性组织结合(参见例如，Wahl et al.,1983,J.Nucl.Med.24:316)。
“Fv”片段是含有完整靶标识别和结合位点的抗体的最小片段。该区域由一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域以紧密、非共价缔合的方式组成的二聚体(VH-VL二聚体)。正是在这种构型中，每个可变结构域的三个CDR相互作用以在VH-VL二聚体表面上限定靶结合位点。通常，六个CDR赋予抗体靶结合特异性。然而，在某些情况下，即使单个可变结构域(或仅包含三个对靶标特异的CDR的Fv的一半)也可以具有识别和结合靶标的能力，尽管亲和力低于整个结合位点。
“单链Fv”或“scFv”抗原结合片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。通常，Fv多肽进一步包含位于VH和VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv形成靶标结合所期望的结构。
“单结构域抗体”由对糖-cMET表现出足够亲和力的单个VH或VL结构域组成。在具体的实施方案中，单结构域抗体是骆驼化抗体(参见，例如Riechmann,1999,Journal ofImmunological Methods 231:25-38)。
本公开的抗糖-cMET抗体也可以是双特异性的和其他多特异性抗体。双特异性抗体是通常是人的或人源化的单克隆抗体，对相同或不同抗原上的两个不同表位具有结合特异性。在本公开中，结合特异性之一可以针对糖-cMET，另一个可以针对任何其他抗原，例如细胞表面蛋白、受体、受体亚单位、组织特异性抗原、病毒衍生蛋白、病毒编码包膜蛋白、细菌衍生蛋白或细菌表面蛋白等。在某些实施方案中，双特异性和其他多特异性抗糖-cMET抗体和抗原结合片段特异性结合第二cMET表位、在癌细胞上与cMET共表达的另一种蛋白质上的表位或在不同细胞如活化T细胞上呈递的另一种蛋白质上的表位。本公开的双特异性抗体包括IgG形式的双特异性抗体和基于单链的双特异性抗体。
本公开的IgG形式双特异性抗体可以是本领域已知的各种类型的IgG形式双特异性抗体中的任何一种，如四价体瘤(quadroma)双特异性抗体、“杵臼”双特异性抗体、CrossMab双特异性抗体(即，双特异性结构域交换抗体)、电荷配对双特异性抗体、通用轻链双特异性抗体、单臂单链Fab-免疫球蛋白γ双特异性抗体、二硫键稳定的Fv双特异性抗体、DuetMab、受控的Fab臂交换双特异性抗体、链交换工程化结构域体双特异性抗体、双臂亮氨酸拉链异二聚体单克隆双特异性抗体、κλ-体双特异性抗体、双可变结构域双特异性抗体和交叉双可变结构域双特异性抗体。参见，例如and Milstein,1975,Nature 256:495-497；Milstein and Cuello,1983,Nature 305:537-40；Ridgway et al.,1996,Protein Eng.9:617-621；Schaefer et al.,2011,Proc Natl Acad Sci USA 108:11187-92；Gunasekaran et al.,2010,J Biol Chem 285:19637-46；Fischer et al.,2015Nature Commun 6:6113；Schanzer et al.,2014,J Biol Chem 289:18693–706；Metz etal.,2012 Protein Eng Des Sel 25:571–80；Mazor et al.,2015 MAbs 7:377–89；Labrijn et al.,2013 Proc Natl Acad Sci USA 110:5145–50；Davis et al.,2010Protein Eng Des Sel 23:195–202；Wranik et al.,2012,J Biol Chem 287:43331–9；Guet al.,2015,PLoS One 10(5):e0124135；Steinmetz et al.,2016,MAbs 8(5):867-78；Klein et al.,2016,mAbs,8(6):1010-1020；Liu et al.,2017,Front.Immunol.8:38；和Yang et al.,2017,Int.J.Mol.Sci.18:48，其通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体是在科学和专利文献中称为CrossMab的结构域交换抗体。参见，例如Schaefer et al.,2011,Proc Natl Acad Sci USA108:11187-92。CrossMab技术详细描述于WO 2009/080251、WO 2009/080252、WO 2009/080253、WO 2009/080254、WO 2013/026833、WO 2016/020309和Schaefer et al.,2011,Proc NatlAcad Sci USA 108:11187-92中，其通过引用以其整体并入本文。简而言之，CrossMab技术基于双特异性IgG的一个Fab臂内的重链和轻链之间的结构域交叉，这促进了正确的链缔合。本公开的CrossMab双特异性抗体可以是“CrossMabFAB”抗体，其中双特异性IgG抗体的一个臂的Fab部分的重链和轻链被交换。在其他实施方案中，本公开的CrossMab双特异性抗体可以是“CrossMabVH-VL”抗体，其中仅双特异性IgG抗体的一个臂的Fab部分的重链和轻链的可变结构域被交换。在又一些实施方案中，本公开的CrossMab双特异性抗体可以是“CrossMabCH1-CL”抗体，其中仅双特异性IgG抗体的一个臂的Fab部分的重链和轻链的恒定结构域被交换。与CrossMabFAB和CrossMabVH-VL相比，CrossMabCH1-CL抗体没有预计的副产物，因此，在一些实施方案中，优选CrossMabCH1-CL双特异性抗体。参见，Klein et al.,2016,mAbs,8(6):1010-1020。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体是受控的Fab臂交换双特异性抗体。制备Fab臂交换双特异性抗体的方法描述于PCT公开号WO2011/131746和Labrijn et al.,2014Nat Protoc.9(10):2450-63，其通过引用以其整体并入本文。简而言之，受控的Fab臂交换双特异性抗体可以通过分别表达在CH3结构域中含有单匹配点突变的两个亲本IgG1，在体外氧化还原条件下混合亲本IgG1以实现半分子的重组，并去除还原剂以允许链间二硫键再氧化，从而形成双特异性抗体。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体是“开瓶器”、“mAb-Fv”、“mAb-scFv”、“中心-scFv”、“中心-Fv”、“单臂中心-scFv”或“双scFv”形式的双特异性抗体。这些形式的双特异性抗体描述于PCT公开号WO 2016/182751中，其内容通过引用以其整体并入本文。这些形式中的每一种都依赖于抗体重链Fc结构域的自组装性质，由此两个含有“单体”的Fc亚基组装成含有“二聚体”的Fc结构域。
在开瓶器形式中，第一单体包含与Fc亚基的N端任选地经由接头共价连接的scFv，第二单体包含重链(包含VH、CH1和第二Fc亚基)。开瓶器形式的双特异性抗体进一步包含能够与第二单体配对以形成Fab的轻链。
mAb-Fv双特异性抗体形式依赖于附接到一个重链单体C端的“额外”VH结构域和附接到另一个重链单体的“额外”VL结构域，形成第三抗原结合结构域。在一些实施方案中，mAb-Fv双特异性抗体包含第一单体，该第一单体包含第一VH结构域、CH1结构域和第一Fc亚基，其中VL结构域共价附接至C端。第二单体包含VH结构域、CH1结构域、第二Fc亚基和共价附接至第二单体C端的VH。两个C端附接的可变结构域构成一个Fv。mAb-Fv还包含两条轻链，其当与第一和第二单体缔合时形成Fab。
mAb-scFv双特异性形式依赖于使用scFv与mAb单体之一的C端附接，从而形成第三抗原结合结构域。因此，第一单体包含第一重链(包含VH、CH1和第一Fc亚基)，具有C端共价附接的scFv。mAb-scFv双特异性抗体进一步包含第二单体(包含VH、CH1和第一Fc亚基)和两条轻链，其当与第一和第二单体缔合时形成Fab。
中心-scFv双特异性形式依赖于使用在mAb中插入的scFv结构域，从而形成第三抗原结合结构域。scFv结构域插入到单体之一的Fc亚基和CH1结构域之间，从而提供第三抗原结合结构域。因此，第一单体可以包含VH结构域、CH1结构域(和任选的铰链)和第一Fc亚基，其中scFv使用任选的结构域接头共价附接在CH1结构域的C端和第一Fc亚基的N端之间。其它单体可以是标准的Fab侧单体。中心-scFv双特异性抗体进一步包含两条轻链，其当与第一和第二单体缔合时形成Fab。
中心-Fv双特异性形式依赖于使用插入的Fv结构域，从而形成第三抗原结合结构域。每个单体可以含有Fv的组分(例如一个单体包含可变的重结构域而另一个包含可变的轻结构域)。因此，一个单体可以包含任选地使用结构域接头共价附接在CH1结构域的C端和第一Fc亚基的N端之间的VH结构域、CH1结构域、第一Fc亚基和VL结构域。其它单体可以包含任选地使用结构域接头共价附接在CH1结构域的C端和第二Fc结构域的N端之间的VH结构域、CH1结构域、第二Fc亚基和额外的VH结构域。中心-Fv双特异性抗体进一步包含两条轻链，其当与第一和第二单体缔合时形成Fab。
单臂中心-scFv双特异性形式包含仅包含Fc亚基的一个单体，而另一个单体包含插入的scFv结构域，从而形成第二抗原结合结构域。因此，一个单体可以包含VH结构域、CH1结构域和第一Fc亚基，其中scFv任选地使用结构域接头共价附接在CH1结构域的C端和第一Fc亚基的N端之间。第二单体可以包含Fc结构域。该实施方案进一步利用包含可变轻结构域和恒定轻结构域的轻链，其与第一单体缔合以形成Fab。
双scFv双特异性形式包含含有任选地经由接头共价附接至第一Fc亚基的N端的scFv的第一单体，以及含有任选地经由接头共价附接至第二Fc亚基的N端的scFv的第二单体。
本公开的双特异性抗体可以包含由第一和第二亚基组成的Fc结构域。在一个实施方案中，Fc结构域是IgG Fc结构域。在特定实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域。在另一个实施方案中，Fc结构域是IgG4 Fc结构域。在更具体的实施方案中，Fc结构域是在位置S228(Kabat EU索引编号)处包含氨基酸取代，特别是氨基酸取代S228P的IgG4 Fc结构域。除非本文另有说明，否则Fc结构域或恒定区中的氨基酸残基编号根据EU编号系统(也称为EU索引)，如Kabat et al.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD中描述的。这种氨基酸取代减少了IgG4抗体的体内Fab臂交换(参见Stubenrauch et al.,2010,Drug Metabolism and Disposition 38:84-91)。在进一步的具体实施方案中，Fc结构域是人Fc结构域。在甚至更具体的实施方案中，Fc结构域是人IgG1 Fc结构域。人IgG1 Fc区的示例性序列是:
在特定实施方案中，Fc结构域包含促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的修饰。人IgG Fc结构域的两个亚基之间最广泛的蛋白质-蛋白质相互作用的位点位于CH3结构域。因此，在一个实施方案中所述修饰在Fc结构域的CH3结构域中。
在具体实施方案中，促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的所述修饰是所谓的“杵臼”修饰，其包括在Fc结构域的两个亚基之一中的“杵”修饰以及在Fc结构域的两个亚基中的另一个中的“臼”修饰。杵臼技术描述于例如US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway etal.,1996,Prot Eng 9:617-621,和Carter,J,2001,Immunol Meth 248:7-15。通常，该方法涉及在第一多肽的界面处引入突起(“杵”)并且在第二多肽的界面中引入相应的空腔(“臼”)，使得突起可以定位在空腔中以便促进异二聚体形成并且阻碍同二聚体形成。通过用更大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换第一多肽界面上的小氨基酸侧链来构建突起。通过用较小的氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)替换大的氨基酸侧链，在第二多肽的界面中产生与突起相同或相似大小的补偿空腔。
因此，在一些实施方案中，Fc结构域的第一亚基的CH3结构域中的氨基酸残基被具有更大侧链体积的氨基酸残基取代，从而在第一亚基的CH3结构域内生成可定位于第二亚基的CH3结构域内的空腔中的突起，并且Fc结构域的第二亚基的CH3结构域中的氨基酸残基被具有较小侧链体积的氨基酸残基取代，从而在第二亚基的CH3结构域内生成空腔，第一亚基的CH3结构域内的突起可位于该空腔内。优选地，所述具有更大侧链体积的氨基酸残基选自精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)。优选地，所述具有更小侧链体积的氨基酸残基选自丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和缬氨酸(V)。突起和空腔可以通过改变编码多肽的核酸来形成，例如通过定点诱变或通过肽合成。
在具体的此类实施方案中，在Fc结构域的第一亚基中，位置366处的苏氨酸残基被色氨酸残基取代(T366W)，并且在Fc结构域的第二亚基中，位置407处的酪氨酸残基被缬氨酸残基取代(Y407V)和任选地位置366处的苏氨酸残基被丝氨酸残基取代(T366S)和位置368处的亮氨酸残基被丙氨酸残基取代(L368A)(根据Kabat EU索引编号)。在进一步的实施方案中，在Fc结构域的第一亚基中，另外地，位置354处的丝氨酸残基被半胱氨酸残基取代(S354C)或位置356处的谷氨酸残基被半胱氨酸残基取代(E356C)(特别是位置354处的丝氨酸残基被半胱氨酸残基取代)，并且在Fc结构域的第二亚基中，另外地，位置349处的酪氨酸残基被半胱氨酸残基取代(Y349C)(根据Kabat EU索引编号)。在特定实施方案中，Fc结构域的第一亚基包含氨基酸取代S354C和T366W，Fc结构域的第二亚基包含氨基酸取代Y349C、T366S、L368A和Y407V(根据Kabat EU索引编号)。
在一些实施方案中，静电转向(例如，如Gunasekaran et al.,2010,J Biol Chem285(25):19637-46中所述)可用于促进Fc结构域的第一和第二亚基的缔合。
在一些实施方案中，Fc结构域包含一个或多个减少与Fc受体的结合和/或效应功能的氨基酸取代。
在特定实施方案中，Fc受体是Fcγ受体。在一个实施方案中，Fc受体是人Fc受体。在一个实施方案中，Fc受体是激活的Fc受体。在具体实施方案中，Fc受体是活化的人Fcγ受体，更具体地是人FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa，最具体地是人FcγRIIIa。在一个实施方案中，效应功能是选自补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和细胞因子分泌的一种或多种。在特定实施方案中，效应功能是ADCC。
通常，相同的一个或多个氨基酸取代存在于Fc结构域的两个亚基的每一个中。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸取代降低了Fc结构域与Fc受体的结合亲和力。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸取代将Fc结构域与Fc受体的结合亲和力降低至少2倍、至少5倍或至少10倍。
在一个实施方案中，Fc结构域在选自E233、L234、L235、N297、P331和P329(根据Kabat EU索引编号)的位置处包含氨基酸取代。在更具体的实施方案中，Fc结构域在选自L234、L235和P329(根据Kabat EU索引编号)的位置处包含氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc结构域包含氨基酸取代L234A和L235A(根据Kabat EU索引编号)。在一个这样的实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域，特别是人IgG1 Fc结构域。在一个实施方案中，Fc结构域在位置P329处包含氨基酸取代。在更具体的实施方案中，氨基酸取代是P329A或P329G，特别是P329G(根据Kabat EU索引编号)。在一个实施方案中，Fc结构域包含在位置P329处的氨基酸取代和在选自E233、L234、L235、N297和P331的位置处的进一步氨基酸取代(根据Kabat EU索引编号)。在更具体的实施方案中，进一步的氨基酸取代是E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S。在特定实施方案中，Fc结构域在位置P329、L234和L235(根据KabatEU索引编号)处包含氨基酸取代。在更具体的实施方案中，Fc结构域包含氨基酸突变L234A、L235A和P329G(其可以使用简称“P329G LALA”、“PGLALA”或“LALAPG”指代)。具体而言，在特定实施方案中，Fc结构域的每个亚基包含氨基酸取代L234A、L235A和P329G(Kabat EU索引编号)，即在Fc结构域的第一和第二亚基的每一个中，位置234处的亮氨酸残基被丙氨酸残基取代(L234A)，位置235处的亮氨酸残基被丙氨酸残基取代(L235A)，位置329处的脯氨酸残基被甘氨酸残基取代(P329G)(根据Kabat EU索引编号)。在一个这样的实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域，特别是人IgG1 Fc结构域。
本公开的基于单链的双特异性抗体可以是本领域已知的各种类型的基于单链的双特异性抗体中的任一种，如双特异性T细胞衔接器(BiTE)、双抗体、串联双抗体(tandab)、双亲和性重靶向分子(DART)和双特异性杀伤细胞衔接器。参见，例如，et al.,2000,Blood 95:2098–103；Holliger et al.,1993,Proc Natl Acad Sci USA,90:6444–8；Kipriyanov et al.,1999,Mol Biol293:41–56；Johnson et al.,2010,Mol Biol 399:436–49；Wiernik et al.,2013,Clin Cancer Res 19:3844–55；Liu et al.,2017,Front.Immunol.8:38；和Yang et al.,2017,Int.J.Mol.Sci.18:48，其通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体是双特异性T细胞衔接器(BiTE)。BiTE是具有两个抗原结合结构域的单多肽链分子，其中一个结合T细胞抗原，而第二个结合存在于靶标表面上的抗原(参见，PCT公开WO 05/061547；Baeuerle et al.,2008,Drugs of theFuture 33:137-147；Bargou,et al.,2008,Science 321:974-977，其通过引用以其整体并入本文)。因此，本公开的BiTE具有结合T细胞抗原的抗原结合结构域和针对糖-cMET的第二抗原结合结构域。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体是双亲和重靶向分子(DART)。DART包含至少两条多肽链，其缔合(尤其是通过共价相互作用)以形成至少两个表位结合位点，这些位点可以识别相同或不同的表位。DART的每条多肽链包含一个免疫球蛋白轻链可变区和一个免疫球蛋白重链可变区，但这些区域不相互作用以形成表位结合位点。相反，DART多肽链的一个(例如，第一)免疫球蛋白重链可变区与不同的(例如，第二)DARTTM多肽链的免疫球蛋白轻链可变区相互作用以形成表位结合位点。类似地，DART多肽链的一个(例如，第一)免疫球蛋白轻链可变区与不同的(例如，第二)DART多肽链的免疫球蛋白重链可变区相互作用以形成表位结合位点。DART可以是单特异性的、双特异性的、三特异性的等，因此能够同时结合一个、两个、三个或更多个不同的表位(其可以是相同或不同抗原的)。DART还可以是单价、二价、三价、四价、五价、六价等，因此能够同时结合一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个分子。DART的这两个属性(即，特异性程度和化合价)可以结合起来，例如以产生四价(即，能够结合四组表位)的双特异性抗体(即，能够结合两个表位)等。DART分子在PCT公开WO 2006/113665、WO 2008/157379和WO 2010/080538中公开，其通过引用以其整体并入本文。
在本公开的双特异性抗体的一些实施方案中，一种结合特异性针对糖-cMET，而另一种针对在免疫效应细胞上表达的抗原。如本文所用，术语“免疫效应细胞”或“效应细胞”是指哺乳动物免疫系统中天然细胞库中的细胞，其可以被激活以影响靶细胞的活力。免疫效应细胞包括淋巴细胞谱系的细胞，例如自然杀伤(NK)细胞、T细胞包括细胞毒性T细胞、或B细胞，但髓细胞谱系的细胞也可被视为免疫效应细胞，例如单核细胞或巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞。因此，所述效应细胞优选为NK细胞、T细胞、B细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞或中性粒细胞。效应细胞向异常细胞募集意味着免疫效应细胞被带到异常靶细胞附近，使得效应细胞可以直接杀伤或间接启动杀伤它们所募集至的异常细胞。为了避免非特异性相互作用，优选本公开的双特异性抗体特异性识别免疫效应细胞上的抗原，与体内其他细胞相比，该抗原至少被这些免疫效应细胞过度表达。存在于免疫效应细胞上的靶抗原可以包括CD3、CD8、CD16、CD25、CD28、CD64、CD89、NKG2D和NKp46。优选地，免疫效应细胞上的抗原是在T细胞上表达的CD3。
如本文所用，“CD3”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然CD3，包括哺乳动物如灵长类动物(例如人类)、非人灵长类动物(例如食蟹猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)，除非另有说明。该术语涵盖“全长的”、未加工的CD3以及细胞内加工产生的任何形式的CD3。该术语还涵盖天然存在的CD3变体，例如剪接变体或等位基因变体。免疫效应细胞上最优选的抗原是CD3ε链。该抗原已被证明在将T细胞募集到异常细胞方面非常有效。因此，本发明的双特异性抗体优选特异性识别CD3ε。人CD3ε的氨基酸序列显示在UniProt(uniprot.org)登录号P07766(版本144)或NCBI(ncbi.nlm.nih.gov/)RefSeq NP_000724.1中。食蟹猴[长尾猕猴(Macacafascicularis)]CD3ε的氨基酸序列如NCBI GenBank号BAB71849.1所示。对于人类治疗用途，使用其中CD3结合结构域特异性结合人CD3(例如人CD3ε链)的双特异性抗体。对于非人动物和细胞系的临床前测试，可以使用双特异性抗体，其中CD3结合结构域与用于临床前测试的物种中的CD3(例如，用于灵长类动物测试的食蟹猴CD3)特异性结合。
如本文所用，“特异性结合”或“特异性识别”来自特定物种的靶抗原的结合结构域不排除与来自其他物种的抗原的结合或识别，因此涵盖其中一个或多个结合结构域具有种间交叉反应性的抗体。例如，“特异性结合”或“特异性识别”人CD3的CD3结合结构域也可以结合或识别食蟹猴CD3，反之亦然。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体H2C(描述于PCT公开号WO2008/119567中)竞争结合CD3的表位。在其他实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体V9(描述于Rodrigues et al.,1992,Int J Cancer Suppl 7:45-50和美国专利号6,054,297中)竞争结合CD3的表位。在又一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体FN18(描述于Nooij et al.,1986,Eur J Immunol 19:981-984中)竞争结合CD3的表位。在又一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体SP34(描述于Pessano et al.,1985,EMBO J 4:337-340中)竞争结合CD3的表位。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体mAb1(描述于美国专利号10,730,944中)竞争结合CD8的表位。在其他实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体YTS169(描述于US2015/0191543中)竞争结合CD8的表位。在其他实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体4C9 5F4(描述于WO1987/005912中)竞争结合CD8的表位。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体3G8_(描述于WO2006/064136中)竞争结合CD16的表位。在又一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体VEP13(描述于Ziegler-Heitbrock et al.,1984,Clin.Exp.Immunol.58:470-477中)竞争结合CD16的表位。在一些实施方案中，本发明的双特异性抗体可与单克隆抗体B73.1(描述于Perussia et al.,1983,J.Immunol.130(5):2142-2148)竞争结合CD16的表位。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体达克利珠单抗(daclizumab)及其变体(描述于WO2014/145000中)竞争结合CD25的表位。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体AB1、AB7、AB11或AB12(描述于WO2004/045512中)竞争结合CD25的表位。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体ALD25H1、ALD25H2或ALD25H4(描述于WO2020/234399中)竞争结合CD25的表位。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体FR104(描述于WO2017/103003中)竞争结合CD28的表位。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体hCD28.3(描述于WO2011/101791中)竞争结合CD28的表位。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体MS或21F2(描述于WO2009/077483中)竞争结合NKG2D的表位。在一些实施方案中，本发明的双特异性抗体可与单克隆抗体5C5、320、230、013、296或395(描述于WO2021/009146中)竞争结合NKG2D的表位。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体可以与单克隆抗体KYK-2.0(描述于WO2010/017103中)竞争结合NKG2D的表位。
本公开的抗糖-cMET抗体包括衍生抗体。例如但不作为限制，衍生抗体通常通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团的衍生、蛋白水解切割、与细胞配体或其他蛋白质的连接来修饰。多种化学修饰中的任一种可以通过已知技术进行，包括但不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。另外，衍生物可以含有一种或多种非天然氨基酸，例如使用ambrx技术(参见例如，Wolfson,2006,Chem.Biol.13(10):1011-2)。
抗糖-cMET抗体或结合片段可以是其序列已被修饰以改变至少一种恒定区介导的生物效应功能的抗体或片段。例如，在一些实施方案中，可以修饰抗糖-cMET抗体以相对于未修饰的抗体降低至少一种恒定区介导的生物效应功能，例如，降低与Fc受体(FcγR)的结合。可以通过在FcγR相互作用所必需的特定区域突变抗体的免疫球蛋白恒定区片段来减少FcγR结合(参见,例如,Canfield and Morrison,1991,J.Exp.Med.173:1483-1491；和Lund et al.,1991,J.Immunol.147:2657-2662)。抗体的FcγR结合能力的降低还可以降低依赖于FcγR相互作用的其他效应功能，如调理作用、吞噬作用和抗原依赖性细胞毒性(“ADCC”)。
本文所述的抗糖-cMET抗体或结合片段包括经修饰以相对于未修饰的抗体获得或改善至少一种恒定区介导的生物效应功能(例如以增强FcγR相互作用(参见，例如,US2006/0134709)的抗体和/或结合片段。例如，本公开的抗糖-cMET抗体可以具有以比相应的野生型恒定区更高的亲和力结合FcγRIIA、FcγRIIB和/或FcγRIIIA的恒定区。
因此，本公开的抗体可以具有导致调理作用、吞噬作用或ADCC增加或减少的生物活性的改变。此类改变在本领域中是已知的。例如，在美国专利号5834597中描述了降低ADCC活性的抗体修饰。示例性的ADCC降低变体对应于“突变体3”(美国专利号5,834,597图4中所示)，其中残基236缺失，残基234、235和237(使用EU编号)被丙氨酸取代。另一个示例性的降低ADCC变体包含氨基酸突变L234A、L235A和P329G(其可以使用简称“P329G LALA”指代)。“P329G LALA”氨基酸取代组合几乎完全消除了人IgG1 Fc结构域的Fcγ受体(以及补体)结合，如PCT公开号WO 2012/130831中所述，其通过引用以其整体并入本文。WO 2012/130831还描述了制备此类突变Fc结构域的方法和确定其特性如Fc受体结合或效应功能的方法。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有低水平的岩藻糖或缺乏岩藻糖。缺乏岩藻糖的抗体与增强的ADCC活性相关，尤其是在低剂量的抗体下。参见Shields etal.,2002,J.Biol.Chem.277:26733-26740；Shinkawa et al.,2003,J.Biol.Chem.278:3466-73。制备无岩藻糖抗体的方法包括在大鼠骨髓瘤YB2/0(ATCC CRL 1662)细胞中生长。YB2/0细胞表达低水平的FUT8mRNA，其编码多肽岩藻糖基化所必需的酶α-1,6-岩藻糖基转移酶。
在一些实施方案中，抗糖-cMET抗体或结合片段包括二等分的寡糖，例如其中附接到Fc结构域的双触角寡糖被GlcNAc二等分。如上所述，此类变体可以具有减少的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如Umana et al.,1999,NatBiotechnol 17:176-180；Ferrara et al.,2006,Biotechn Bioeng 93:851-861；WO 99/54342；WO 2004/065540；和WO 2003/011878中。
在又一个方面，抗糖-cMET抗体或结合片段包括增加或减少它们对胎儿Fc受体FcRn的结合亲和力的修饰，例如通过在参与FcRn相互作用的特定区域处突变免疫球蛋白恒定区片段(参见例如，WO 2005/123780)。在特定实施方案中，IgG类的抗糖-cMET抗体被突变，使得重链恒定区的氨基酸残基250、314和428中的至少一个被单独取代，或以其任何组合取代，如在位置250和428处，或在位置250和314处，或在位置314和428处，或在位置250、314和428处，其中位置250和428是特定组合。对于位置250，取代氨基酸残基可以是苏氨酸以外的任何氨基酸残基，包括但不限于丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸。对于位置314，取代氨基酸残基可以是除亮氨酸之外的任何氨基酸残基，包括但不限于丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸。对于位置428，取代氨基酸残基可以是除甲硫氨酸之外的任何氨基酸残基，包括但不限于丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸。合适的氨基酸取代的具体组合在美国专利号7,217,797的表1中确定，其通过引用并入本文。此类突变增加了与FcRn的结合，从而保护抗体免于降解并延长其半衰期。
在其他方面，本公开的抗原结合片段的抗糖-cMET抗体具有插入其一个或多个高变区的一个或多个氨基酸，例如如Jung and Pluckthun,1997,Protein Engineering 10:9,959-966；Yazaki et al.,2004,Protein Eng.Des Sel.17(5):481-9.Epub 2004Aug.17；和美国专利申请号2007/0280931中所描述的。
在其他方面，特别适用于诊断应用，本公开的抗原结合片段的抗糖-cMET抗体附接至可检测部分。可检测部分包括放射性部分、比色分子、荧光部分、化学发光部分、抗原、酶、可检测珠子(如磁性或电极(例如金)珠子)或与另一个分子结合的分子(例如，生物素或链霉亲和素)。
放射性同位素或放射性核素可以包括3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I。
荧光标记可以包括罗丹明、镧系元素荧光粉、荧光素及其衍生物、荧光染料、GFP(GFP表示“绿色荧光蛋白”)、丹酰、伞形酮、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛和荧光胺。
酶标记可以包括辣根过氧化物酶、β半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(“G6PDH”)、α-D-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖淀粉酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶和过氧化物酶。
化学发光标记或化学发光剂，如异鲁米诺(isoluminol)、鲁米诺(luminol)和二氧环丁烷。
其他可检测部分包括分子如生物素、地高辛或5-溴脱氧尿苷。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段可用于检测系统中以检测样品(例如患者来源的生物样品)中的生物标志物。生物标志物可以是蛋白质生物标志物(例如，cMET的肿瘤相关糖型，例如包含氨基酸序列的cMET糖型，在以粗体下划线文本显示的色氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化)，该蛋白质生物标志物存在于例如癌细胞(例如，来自组织活检或循环肿瘤细胞)或癌症衍生的细胞外囊泡)的表面或内部。
细胞外囊泡(EV)是几乎所有细胞类型释放的脂质膜囊泡。EV携带复杂的分子货物，如蛋白质、RNA(例如mRNA和非编码RNA(微小RNA、转运RNA、环状RNA和长非编码RNA))和DNA片段。EV的分子含量在很大程度上反映了来源细胞，因此显示了细胞类型特异性。具体而言，癌症衍生的EV包含并在其表面呈现由亲代癌细胞表达的癌症特异性分子(参见,例如,-Móet al.,2015,J Extracell Vesicles.4:27066；和Li et al.,2015,CellRes.25:981-984)。
在一个实施方案中，本发明的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段用于检测包含EV的样品(例如液体活检)中的生物标志物的方法。在这样的实施方案中，生物标志物被本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段识别。生物标志物可以存在于EV的表面上。检测生物标志物的示例性方法包括但不限于免疫测定，如免疫沉淀；蛋白质印迹；ELISA；免疫组织化学；免疫细胞化学；流式细胞仪；和免疫PCR。在一些实施方案中，免疫测定可以是化学发光免疫测定。在一些实施方案中，免疫测定可以是高通量和/或自动化免疫测定平台。
在一些实施方案中，检测样品中生物标志物的方法包括将样品与本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段接触。在一些实施方案中，这种方法还包括将样品与一种或多种检测标记接触。在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段用一种或多种检测标记进行标记。
在一些实施方案中，进行捕获测定以从诸如液体活检样品的样品中选择性捕获EV，EV捕获测定的示例性实例描述于US2021/0214806中，其通过引用以其整体并入本文。在一些实施方案中，进行捕获测定以选择性捕获特定大小范围和/或特定特征的EV，例如与癌症相关的EV(例如，cMET的肿瘤相关的糖型，例如包含氨基酸序列 的cMET糖型，在以粗体下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化)。在一些这样的实施方案中，在进行捕获测定之前，可以预处理样品以去除非EV，包括但不限于，例如可溶性蛋白质和干扰实体，例如细胞碎片。在一些实施方案中，使用尺寸排阻色谱法从样品中纯化EV。
在一些实施方案中，用于检测生物标志物的方法包括分析个体EV(例如，单个EV测定)。例如，这种测定可以包括(i)捕获测定，例如抗体捕获测定，以及(ii)用于至少一种或多种另外的生物标志物的一种或多种检测测定，其中捕获测定在检测测定之前进行。参见，例如US2021/0214806。
在一些实施方案中，捕获测定包括将样品与至少一种捕获剂接触的步骤，该捕获剂包含本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段。捕获剂可以固定在固体基质上。固体基质可以以适于捕获EV且不干扰下游处理、加工和/或检测的形式提供。例如，在一些实施方案中，固体基质可以是或包含珠子(例如，磁珠)。在一些实施方案中，固体基质可以是或包含表面。例如，在一些实施方案中，这样的表面可以是测定室的捕获表面(例如，管、孔、微孔、板、过滤器、膜、矩阵等)。在一些实施方案中，捕获剂是或包含磁珠，该磁珠包含与其缀合的捕获部分(例如，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段)。参见，例如US2021/0214806。
在某些方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与15C4或包含15C4重链和轻链可变区(分别为SEQ ID NO:1和2)的抗体或抗原结合片段竞争。
在某些方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与8H3或包含鼠或人源化8H3的重链可变区(例如SEQ ID NO:23(鼠)和SEQ ID NO:264-275(示例性人源化序列))和鼠或人源化8H3的轻链可变区(例如SEQ ID NO:24(鼠)和SEQ ID NO:276-284(示例性人源化序列))的抗体或抗原结合片段竞争。
在某些方面，本发明的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与16E12或包含16E12重链和轻链可变区(分别为SEQ ID NO:45和46)的抗体或抗原结合片段竞争。
在某些方面，本发明的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与14E9或包含14E9重链和轻链可变区(分别为SEQ ID NO:67和68)的抗体或抗原结合片段竞争。
在某些方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与19H2或包含19H2重链和轻链可变区(分别为SEQ ID NO:89和90)的抗体或抗原结合片段竞争。
在某些方面，本发明的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与39A3或包含39A3重链和轻链可变区(分别为SEQ ID NO:111和112)的抗体或抗原结合片段竞争。
可以在表达由15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3结合的糖cMET表位的细胞上，或在含有由15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3结合的表位的糖基化cMET肽(例如，肽 用以粗体下划线文字显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化)上测定竞争。不表达表位或非糖基化肽的细胞可以用作对照。
可以进行竞争测定的细胞包括但不限于肺、乳腺、肾和肝细胞系(例如，乳腺癌细胞系T47D；腺癌人肺泡基底上皮细胞系A549)和工程化表达糖cMET表位的重组细胞。在一个非限制性实例中，表达cMET但天生为Tn阴性的T47D细胞被工程化以通过敲除COSMC伴侣蛋白表达cMET Tn抗原。表达未糖基化形式的cMET的野生型T47D细胞可用作阴性对照。在另一个非限制性实例中，表达cMET但天生为Tn阴性的A549细胞被工程化以通过敲除COSMC伴侣蛋白表达cMET Tn抗原。表达未糖基化形式的cMET的野生型A549细胞可用作阴性对照。
竞争测定包括但不限于放射性物质标记免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、夹心ELISA、荧光激活细胞分选(FACS)测定、表面等离子共振(例如，Biacore)测定和生物层干涉法(BLI)测定。在一些实施方案中，可以使用BLI(例如，使用Octet-HTX系统(Molecular Devices))进行抗体竞争测定。可以使用BLI对单克隆抗体针对其特定抗原的抗体竞争或表位分箱进行串联评估。在BLI测定中，抗原可以固定在生物传感器上，并在连续步骤中呈递给两个竞争性抗体。如果用第一抗体的饱和不阻断第二抗体的结合，则发生与非重叠表位的结合。在一些实施方案中，可以使用表面等离子共振(例如，使用Biacore系统(Cytiva))进行抗体竞争测定。在表面等离子体共振测定中，一种或多种抗体可以固定在生物传感器上并与分析物(例如，SEQ ID NO:285的糖cMET肽或阴性对照分析物如SEQ IDNO:286的未糖基化cMET肽)一起呈现。在一些实施方案中，抗体与饱和浓度例如至少约0.5μM的浓度的分析物接触。在一些实施方案中，饱和浓度为约1μM、约1.5μM或约2μM。当比较两种抗体的结合亲和力时，优选使用相同浓度的两种抗体测量两种抗体的亲和力，例如，使用1μM浓度的每种抗体测量。
在参考抗体和测试抗体(不考虑物种或同种型)之间进行抗体竞争测定时，可以首先用可检测标记(如荧光团、生物素或酶(甚至放射性)标记)标记参考以能够后续鉴定。在这种情况下，表达糖-cMET的细胞与未标记的测试抗体一起孵育，加入标记的参考抗体，并测量结合标记的强度。如果测试抗体通过结合重叠表位与标记的参考抗体竞争，则强度相对于没有测试抗体进行的对照反应将降低。
在该测定的具体实施方案中，首先确定在测定条件(例如，指定的细胞密度)下产生80％的最大结合(“conc80％”)的标记参考抗体的浓度，并用10×conc80％的未标记测试抗体和conc80％的标记参考抗体进行竞争测定。
抑制可以表示为抑制常数或Ki，其根据以下公式计算：
Ki＝IC50/(1+[参考Ab浓度]/Kd),
其中IC50是使参考抗体的结合产生50％的减少的测试抗体浓度，Kd是参考抗体的解离常数，衡量其对糖-cMET的亲和力。与本文公开的抗糖-cMET抗体竞争的抗体在本文所述的测定条件下可以具有10pM至10nM的Ki。
在各种实施方案中，如果在所用特定测定条件下参考抗体浓度为最大结合的80％且测试抗体浓度比参考抗体浓度高10倍的情况下，测试抗体将参考抗体的结合减少至少约20％或更多，例如减少至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或甚至更多，或者减少的百分比在任何前述值之间，则认为测试抗体与参考抗体竞争。
在竞争测定的一个实例中，通过将板与肽溶液接触(例如在浓度为1μg/mL的PBS中4℃过夜)，将SEQ ID NO:285的糖基化cMET肽粘附到固体表面例如微孔板上。洗涤板(例如，PBS中的0.1％ Tween 20)并封闭(例如，在Superblock，Thermo Scientific，Rockford，IL中)。将亚饱和量的生物素化的15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3(例如，浓度为80ng/mL)和在ELISA缓冲液(例如,1％ BSA和BSA中0.1％ Tween 20)中连续稀释(例如，浓度为2.8μg/mL、8.3μg/mL或25μg/mL)的未标记的15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3(“参考”抗体)或竞争性抗糖-cMET抗体(“测试”抗体)的混合物加入孔和板中，轻轻摇晃孵育1小时。洗涤板，将稀释在ELISA缓冲液中的1μg/mL HRP-缀合的链霉亲和素添加到每个孔中，并将板孵育1小时。洗涤板并通过添加底物(例如，TMB，Biofx Laboratories Inc.，Owings Mills，MD)检测结合的抗体。通过添加终止缓冲液(例如，Bio FX Stop Reagents，Biofx LaboratoriesInc.，Owings Mills，MD)终止反应，并使用酶标仪(例如，VERSAmax，Molecular Devices，Sunnyvale，CA)在650nm处测量吸光度。
该竞争测定的变体也可用于测试15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3与另一种抗糖-cMET抗体之间的竞争。例如，在某些方面，抗糖-cMET抗体用作参考抗体，15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3用作测试抗体。此外，可以使用培养物中细胞表面上(例如在上述细胞类型之一的表面上)表达的膜结合糖cMET代替SEQ ID NO:285的糖基化cMET肽。通常，使用约104至106个转染子，例如约105个转染子。竞争测定的其他形式是本领域已知的并且可以采用。
在各种实施方案中，当抗糖-cMET抗体以0.08μg/mL、0.4μg/mL、2μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL或任何上述值之间的浓度(例如，2μg/mL至10μg/mL的浓度)使用时，本公开的抗糖-cMET抗体将标记的15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3的结合减少至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或任何前述值之间的百分比(例如，本公开的抗糖-cMET抗体将标记的15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3的结合减少至少50％至70％)。
在其他实施方案中，当15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3以0.4μg/mL、2μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、250μg/mL或任何上述值之间的浓度(例如，2μg/mL至10μg/mL的浓度)使用时，15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3将本公开的标记的抗糖-cMET抗体的结合减少至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或任何前述值之间的百分比范围(例如5C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3将本公开的标记的抗糖-cMET抗体的结合减少50％至70％)。
在前述测定中，15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3抗体可以被包含15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3的CDR或重链和轻链可变区的任何抗体或抗原结合片段所替代，例如3C7、13C3或13G2的人源化或嵌合对应物。表4A-4G提供了8H3的示例性人源化重链和轻链可变区。
在某些方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段具有与15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3的表位相同或相似的表位。例如，可以通过进行丙氨酸扫描来表征本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的表位。糖肽的文库，通过SEQ ID NO:285的一个氨基酸位置处的丙氨酸点突变(或者在cMET肽具有丙氨酸的位置处通过甘氨酸点突变),每个糖肽都与cMET糖肽(SEQ ID NO:285)不同。通过ELISA测量抗体或抗原结合片段与每个肽的结合，可以绘制抗体或抗原结合片段的表位。
在某些方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含表1A-1F(鼠)和4A-4G(人源化)中列出的(或由核苷酸序列编码的)重链和/或轻链可变序列。在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含表1A-3H中列出的(或由表1A-3H中所列的核苷酸序列编码的)重链和/或轻链CDR序列。这种抗糖-cMET抗体和抗原结合片段的框架序列可以是表1A-1F中列出的VH和VL序列的天然鼠框架序列，也可以是非天然的(例如，人源化的或人的)框架序列。表4A-4G列出了8H3的VH和VL序列的人源化框架序列。
在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:1和2具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:23和24具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:45和46具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:67和68具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:89和90具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开提供了具有重链和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链和轻链可变区分别与SEQ ID NO:111和112具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开提供了具有重链可变区和轻链可变区的抗cMET抗体或抗原结合片段，该重链可变区与SEQ ID NO:264-275中的一个具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性，该轻链可变区与SEQ ID NO:276-284中的一个具有至少95％、98％、99％或99.5％的序列同一性。
在其他方面，本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段是单链可变片段(scFv)。示例性的scFv包含位于轻链可变片段N端的重链可变片段。另一个示例性的scFv包含重链可变片段N端的轻链可变片段。在一些实施方案中，scFv重链可变片段和轻链可变片段共价结合至4-15个氨基酸的接头序列。scFv可以是双特异性T细胞衔接器的形式，也可以在嵌合抗原受体(CAR)内。
5.1.1.抗体特异性
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体特异性结合cMET糖蛋白用以粗体下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化。在某些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体特异性结合cMET糖蛋白，并且不特异性结合以下一种或多种:未糖基化的cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)(“未糖基化的cMET肽”)；使用纯化的重组人糖基转移酶GalNAc-T1、GalNAc-T2和GalNAc-T4体外糖基化的MUC1串联重复序列(VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG)3(SEQ ID NO:288)(“第一MUC1糖肽”)；用以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc体外糖基化的MUC1肽(“第二MUC1糖肽”)；在以粗体和下划线文本显示的苏氨酸残基上用GalNAc体外糖基化的平足蛋白肽(“PDPN糖肽”)；在以粗体和下划线文本显示的苏氨酸和丝氨酸残基上用GalNAc体外糖基化的CD44v6肽 (“CD44v6糖肽”)；在以粗体和下划线文本显示的苏氨酸和丝氨酸残基上用GalNAc体外糖基化的MUC4肽 (“MUC4糖肽”)；以及在以粗体和下划线文本显示的苏氨酸和丝氨酸残基上用GalNAc体外糖基化的LAMP1肽 (“LAMP1糖肽”)。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有对cMET糖肽的结合亲和力，该结合亲和力是抗糖-cMET抗体对未糖基化cMET肽的结合亲和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有对cMET糖肽的结合亲和力，该结合亲和力是抗糖-cMET抗体对第一MUC1糖肽的结合亲和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有对cMET糖肽的结合亲和力，该结合亲和力是抗糖-cMET抗体对第二MUC1糖肽的结合亲和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有对cMET糖肽的结合亲和力，该结合亲和力是抗糖-cMET抗体对PDPN糖肽的结合亲和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有对cMET糖肽的结合亲和力，该结合亲和力是抗糖-cMET抗体对CD44v6糖肽的结合亲和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有对cMET糖肽的结合亲和力，该结合亲和力是抗糖-cMET抗体对MUC4糖肽的结合亲和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。
在一些实施方案中，本公开的抗糖-cMET抗体具有对cMET糖肽的结合亲和力，该结合亲和力是抗糖-cMET抗体对LAMP1糖肽的结合亲和力的至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。
用于确定亲和力(包括相对亲和力)的测定包括但不限于放射性物质标记免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、夹心ELISA、荧光激活细胞分选(FACS)测定、表面等离子体共振(例如，Biacore)测定和生物层干涉法(BLI)测定。在一些实施方案中，亲和力通过表面等离子体共振(例如，Biacore)来测量。在其他实施方案中，亲和力
示例性的抗糖-cMET抗体及其片段在编号实施方案1至657中描述。
5.2抗体-药物缀合物
本公开的另一方面涉及抗体药物缀合物(ADC)，包括本公开的抗糖-cMET抗体和抗原结合片段。ADC通常包含如本文所述的抗糖-cMET抗体和/或结合片段，该抗体和/或结合片段通过一个或多个接头与一种或多种细胞毒性剂和/或细胞抑制剂连接。在具体实施方案中，ADC是根据结构式(I)的化合物：
[D-L-XY]n-Ab
或其盐，其中每个“D”彼此独立地代表细胞毒性剂和/或细胞抑制剂(“药物”)；每个“L”彼此独立地代表接头；“Ab”代表抗糖-cMET抗原结合结构域，如本文所述的抗糖-cMET抗体或结合片段；每个“XY”代表接头上的官能团Rx与抗体上的“互补”官能团Ry之间形成的键，n代表与ADC连接的药物的数目或ADC的药物与抗体比(DAR)。
可包含ADC的各种抗体(Ab)的具体实施方案包括上述抗糖-cMET抗体和/或结合片段的各种实施方案。
在结构式(I)的ADC和/或盐的一些具体实施方案中，每个D是相同的和/或每个L是相同的。
下面更详细地描述了可包含本公开的抗糖-cMET ADC的细胞毒性剂和/或细胞抑制剂(D)和接头(L)，以及与ADC连接的细胞毒性剂和/或细胞抑制剂的数量的具体实施方案。
5.2.1.细胞毒性剂和/或细胞抑制剂
细胞毒性剂和/或细胞抑制剂可以是已知抑制细胞的生长和/或复制和/或杀伤细胞的任何药剂，该细胞特别是癌细胞和/或肿瘤细胞。具有细胞毒性和/或细胞抑制特性的许多药剂在文献中是已知的。细胞毒性剂和/或细胞抑制剂的类别的非限制性实例包括但不限于放射性核素、烷化剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、DNA嵌入剂(例如，沟结合剂如小沟结合剂)、RNA/DNA抗代谢物、细胞周期调节剂、激酶抑制剂、蛋白质合成抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、线粒体抑制剂和抗有丝分裂剂。
下面提供了这些不同类别中某些类别的药剂的具体非限制性实例。
烷化剂：asaley((L-亮氨酸，N-[N-乙酰基-4-[双-(2-氯乙基)氨基]-DL-苯丙氨酰)-乙酯；NSC 167780；CAS登记号3577897))；AZQ((1，4-环己二烯-1,4-二氨基甲酸，2,5-双(1-氮丙啶基)-3,6-二氧代-，二乙酯；NSC 182986；CAS登记号57998682))；BCNU((N,N’-双(2-氯乙基)-N-亚硝基脲；NSC 409962；CAS登记号154938))；白消安(1,4-丁二醇二甲磺酸盐；NSC 750；CAS登记号55981)；(羧基邻苯二甲酸)铂(NSC 27164；CAS登记号65296813)；CBDCA((顺式-(1,1-cyclobutanedicarboxylato)diammineplatinum(II))；NSC 241240；CAS登记号41575944))；CCNU((N-(2-氯乙基)-N’-环己基-N-亚硝基脲；NSC 79037；CAS登记号13010474)；CHIP(异丙铂；NSC 256927)；苯丁酸氮芥(NSC 3088；CAS登记号305033)；氯脲霉素((2-[[[(2-氯乙基)nitrosoamino]羰基]氨基]-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖；NSC 178248；CAS登记号54749905))；顺-铂(铂化合物；NSC 119875；CAS登记号15663271)；氯乙矾(NSC338947；CAS登记号88343720)；cyanomorpholinodoxorubicin(NCS 357704；CAS登记号88254073)；甲基二磺酸乙二醇脂(NSC 348948；CAS登记号99591738)；去水卫矛醇(5,6-二脱水半乳糖醇；NSC 132313；CAS登记号23261203)；氟多潘((5-[(2-氯乙基)-(2-氟代乙酯)氨基]-6-甲基-尿嘧啶；NSC 73754；CAS登记号834913)；hepsulfam(NSC 329680；CAS登记号96892578)；海恩酮(NSC 142982；CAS登记号23255938)；美法仑(NSC 8806；CAS登记号3223072)；甲基CCNU((1-(2-氯乙基)-3-(反式-4-甲基环己烷)-1-亚硝基脲；NSC 95441；13909096)；丝裂霉素C(NSC 26980；CAS登记号50077)；mitozolamide(NSC 353451；CAS登记号85622953)；氮芥((双(2-氯乙基)甲胺盐酸盐；NSC 762；CAS登记号55867)；PCNU((1-(2-氯乙基)-3-(2,6-二氧-3-哌啶基)-1-亚硝基脲；NSC 95466；CAS登记号13909029))；哌嗪烷基化剂((1-(2-氯乙基)-4-(3-氯丙基)-哌嗪二氢氯化物；NSC 344007))；哌嗪二酮(NSC135758；CAS登记号41109802)；胍血生((N,N-双(3-溴丙酰基)哌嗪；NSC 25154；CAS登记号54911))；紫菜霉素(N-甲基丝裂霉素C；NSC 56410；CAS登记号801525)；spirohydantoinmustard(NSC 172112；CAS登记号56605164)；替罗昔隆(异氰脲酸三缩水甘油酯；NSC296934；CAS登记号2451629)；四铂(NSC 363812；CAS登记号62816982)；噻替派(N,N’,N”-三-1,2-ethanediylthio磷酰胺；NSC 6396；CAS登记号52244)；三乙撑密胺(NSC 9706；CAS登记号51183)；尿嘧啶氮芥(去甲基多巴；NSC 34462；CAS登记号66751)；Yoshi-864((双(3-甲磺酰氧基丙基)胺盐酸盐；NSC 102627；CAS登记号3458228)。
拓扑异构酶I抑制剂：喜树碱(NSC 94600；CAS登记号7689-03-4)；各种喜树碱衍生物和类似物(例如，NSC 100880、NSC 603071、NSC 107124、NSC 643833、NSC 629971、NSC295500、NSC 249910、NSC 606985、NSC 74028、NSC 176323、NSC 295501、NSC 606172、NSC606173、NSC 610458、NSC 618939、NSC 610457、NSC 610459、NSC 606499、NSC 610456、NSC364830和NSC 606497)；morpholinisoxorubicin(NSC 354646；CAS登记号89196043)；SN-38(NSC 673596；CAS登记号86639-52-3)。
拓扑异构酶II抑制剂：阿霉素(NSC 123127；CAS登记号25316409)；氨萘非特(苯并异喹啉二酮；NSC 308847；CAS登记号69408817)；m-AMSA((4’-(9-acridinylamino)-3’-methoxymethanesulfonanilide；NSC 249992；CAS登记号51264143))；蒽吡唑衍生物((NSC355644)；依托泊苷(VP-16；NSC 141540；CAS登记号33419420)；吡唑啉吖啶((吡唑[3,4,5-kl]吖啶-2(6H)-丙胺,9-甲氧基-N,N-二甲基-5-硝基-,monomethanesulfonate；NSC366140；CAS登记号99009219)；比生群盐酸盐(NSC 337766；CAS登记号71439684)；正定霉素(NSC 821151；CAS登记号23541506)；deoxydoxorubicin(NSC 267469；CAS登记号63950061)；米托蒽醌(NSC 301739；CAS登记号70476823)；美诺立尔(NSC 269148；CAS登记号71628961)；N,N-二苄基正定霉素(NSC 268242；CAS登记号70878512)；oxanthrazole(NSC349174；CAS登记号105118125)；柔红霉素苯腙(NSC 164011；CAS登记号36508711)；替尼泊苷(VM-26；NSC 122819；CAS登记号29767202)。
DNA嵌入剂：蒽霉素(CAS登记号4803274)；契卡霉素A(CAS登记号89675376)；托马霉素(CAS登记号35050556)；DC-81(CAS登记号81307246)；西伯利亚霉素(sibiromycin)(CAS登记号12684332)；吡咯并苯并二氮杂卓衍生物(CAS登记号945490095)；SGD-1882((S)-2-(4-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-4(S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)丙氧基)-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-5(11aH)-酮)；SG2000(SJG-136；(11aS，11a’S)-8,8’-(丙烷-1,3-二基双(氧基))双(7-甲氧基-2-亚甲基-2,3--二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-5(11aH)-酮)；NSC 694501；CAS登记号232931576)。
RNA/DNA抗代谢物:L-阿拉诺新(NSC 153353；CAS登记号59163416)；5-氮杂胞苷(NSC 102816；CAS登记号320672)；5-氟尿嘧啶(NSC 19893；CAS登记号51218)；阿西维辛(NSC 163501；CAS登记号42228922)；氨基蝶呤衍生物N-[2-氯-5-[[((2,4-二氨基-5-甲基-6-喹唑啉基)甲基]氨基]苯甲酰基-]L-天冬氨酸(NSC 132483)；氨基蝶呤衍生物N-[4-[[(2,4-二氨基-5-乙基-6-喹唑啉基)甲基]氨基]苯甲酰基]L-天冬氨酸(NSC 184692)；氨基蝶呤衍生物N-[2-氯-4-[[((2,4-二氨基-6-哌啶基)甲基]氨基]苯甲酰基]L-天冬氨酸一水合物(NSC 134033)；抗叶酸剂((Nα-(4-氨基-4-脱氧蝶酰基)-N7-半邻苯二甲酰基-L-鸟氨酸；NSC 623017))；Baker的可溶性抗叶酸剂(NSC 139105；CAS登记号41191042)；二氯烯丙基指甲花醌((2-(3,3-二氯烯丙基)-3-羟基-1,4-萘醌；NSC 126771；CAS登记号36417160)；布喹那(NSC 368390；CAS登记号96201886)；替加氟((前药；5-氟-1-(四氢-2-呋喃基)-尿嘧啶；NSC 148958；CAS登记号37076689)；5,6-二氢-5-氮杂胞苷(NSC 264880；CAS登记号62402317)；甲氨蝶呤(NSC 740；CAS登记号59052)；甲氨蝶呤衍生物(N-[[4-[[(2,4-二氨基-6-哌啶基)甲基]甲基氨基]-1-萘]羰基]L-谷氨酸；NSC 174121)；PALA((N-(膦酰基乙酰基)-L-天冬氨酸盐；NSC 224131；CAS登记号603425565)；吡唑呋喃菌素(NSC 143095；CAS登记号30868305)；三甲曲沙(NSC 352122；CAS登记号82952645)。
DNA抗代谢物:3-HP(NSC 95678；CAS登记号3814797)；2’-脱氧-5-氟尿苷(NSC27640；CAS登记号50919)；5-HP(NSC 107392；CAS登记号19494894)；α-TGDR(α-2’-脱氧-6-硫鸟苷；NSC 71851 CAS登记号2133815)；阿非迪霉素甘氨酸盐(NSC 303812；CAS登记号92802822)；阿糖胞苷(阿拉伯糖胞嘧啶；NSC 63878；CAS登记号69749)；5-氮杂-2’-脱氧胞苷(NSC 127716；CAS登记号2353335)；β-TGDR(β-2’-脱氧-6-硫鸟苷；NSC 71261；CAS登记号789617)；环胞苷(NSC 145668；CAS登记号10212256)；胍唑(NSC 1895；CAS登记号1455772)；羟基脲(NSC 32065；CAS登记号127071)；肌苷糖二醛(NSC 118994；CAS登记号23590990)；Macbecin II(NSC 330500；CAS登记号73341738)；吡唑并咪唑(NSC 51143；CAS登记号6714290)；硫鸟嘌呤(NSC 752；CAS登记号154427)；硫嘌呤(NSC 755；CAS登记号50442)。
细胞周期调节剂：水飞蓟宾(CAS登记号22888-70-6)；表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG；CAS登记号989515)；原花青素衍生物(例如原花青素A1[CAS登记号103883030]、原花青素B1[CAS登记号20315257]、原花青素B4[CAS登记号29106512]、arecatannin B1[CAS登记号79763283])；异黄酮(例如染料木黄酮[4％5,7-三羟基异黄酮；CAS登记号446720]，黄豆苷元[4’,7-二羟基异黄酮，CAS登记号486668]；吲哚-3-甲醇(CAS登记号700061)；槲皮素(NSC 9219；CAS登记号117395)；雌莫司汀(NSC 89201；CAS登记号2998574)；诺考达唑(CAS登记号31430189)；鬼臼毒素(CAS登记号518285)；酒石酸长春瑞滨(NSC 608210；CAS登记号125317397)；念珠藻素(NSC 667642；CAS登记号124689652)。
激酶抑制剂:阿法替尼(CAS登记号850140726)；阿西替尼(CAS登记号319460850)；ARRY-438162(贝美替尼)(CAS登记号606143899)；博舒替尼(CAS登记号380843754)；卡博替尼(CAS登记号1140909483)；塞瑞替尼(CAS登记号1032900256)；克里唑蒂尼(CAS登记号877399525)；达拉菲尼(CAS登记号1195765457)；达沙替尼(NSC 732517；CAS登记号302962498)；埃罗替尼(NSC 718781；CAS登记号183319699)；依维莫司(NSC 733504；CAS登记号159351696)；福他替尼(NSC 745942；CAS登记号901119355)；吉非替尼(NSC 715055；CAS登记号184475352)；依鲁替尼(CAS登记号936563961)；伊马替尼(NSC 716051；CAS登记号220127571)；拉帕替尼(CAS登记号388082788)；乐伐替尼(CAS登记号857890392)；木利替尼(CAS 366017096)；尼罗替尼(CAS登记号923288953)；尼达尼布(CAS登记号656247175)；帕博西尼(CAS登记号571190302)；帕唑帕尼(NSC 737754；CAS登记号635702646)；哌加他尼(CAS登记号222716861)；帕纳替尼(CAS登记号1114544318)；雷帕霉素(NSC 226080；CAS登记号53123889)；瑞格拉非尼(CAS登记号755037037)；AP 23573(利达福尼)(CAS登记号572924540)；INCB018424(鲁索替尼)(CAS登记号1092939177)；ARRY-142886(司美替尼)(NSC 741078；CAS登记号606143-52-6)；西罗莫司(NSC 226080；CAS登记号53123889)；索拉非尼(NSC 724772；CAS登记号475207591)；舒尼替尼(NSC 736511；CAS登记号341031547)；托法替尼(CAS登记号477600752)；替西罗莫司(NSC 683864；CAS登记号163635043)；曲美替尼(CAS登记号871700173)；万德他尼(CAS登记号443913733)；维莫非尼(CAS登记号918504651)；SU6656(CAS登记号330161870)；CEP-701(lesaurtinib)(CAS登记号111358884)；XL019(CAS登记号945755566)；PD-325901(CAS登记号391210109)；PD-98059(CAS登记号167869218)；ATP-竞争性TORC1/TORC2抑制剂包括PI-103(CAS登记号371935749)、PP242(CAS登记号1092351671)、PP30(CAS登记号1092788094)、Torin 1(CAS登记号1222998368)、LY294002(CAS登记号154447366)、XL-147(CAS登记号934526893)、CAL-120(CAS登记号870281348)、ETP-45658(CAS登记号1198357797)、PX 866(CAS登记号502632668)、GDC-0941(CAS登记号957054307)、BGT226(CAS登记号1245537681)、BEZ235(CAS登记号915019657)、XL-765(CAS登记号934493762)。
蛋白质合成抑制剂:吖啶黄(CAS登记号65589700)；阿米卡星(NSC 177001；CAS登记号39831555)；阿贝卡星(CAS登记号51025855)；阿司米星(CAS登记号55779061)；阿奇霉素(NSC 643732；CAS登记号83905015)；卡那霉素B(CAS登记号4696768)；金霉素(NSC13252；CAS登记号64722)；克拉霉素(NSC 643733；CAS登记号81103119)；克林霉素(CAS登记号18323449)；氯莫环素(CAS登记号1181540)；环己酰亚胺(CAS登记号66819)；更生霉素(NSC 3053；CAS登记号50760)；达福普利丁(CAS登记号112362502)；地美环素(CAS登记号127333)；地贝卡星(CAS登记号34493986)；二双氢链霉素(CAS登记号128461)；地红霉素(CAS登记号62013041)；多西环素(CAS登记号17086281)；吐根碱(NSC 33669；CAS登记号483181)；红霉素(NSC 55929；CAS登记号114078)；氟红霉素(CAS登记号83664208)；弗氏菌丝素(新霉素B；CAS登记号119040)；庆大霉素(NSC 82261；CAS登记号1403663)；甘氨酰环素,例如泰格环素(CAS登记号220620097)；潮霉素B(CAS登记号31282049)；异帕米星(CAS登记号67814760)；交沙霉素(NSC 122223；CAS登记号16846245)；卡那霉素(CAS登记号8063078)；酮内酯例如泰利霉素(CAS登记号191114484)、喹红霉素(CAS登记号205110481)和索利霉素(CAS登记号760981837)；洁霉素(CAS登记号154212)；赖甲环素(CAS登记号992212)；甲氯环素(NSC 78502；CAS登记号2013583)；甲烯土霉素(隆多霉素；NSC 356463；CAS登记号914001)；麦迪霉素(CAS登记号35457808)；米诺环素(NSC 141993；CAS登记号10118908)；美地霉素(CAS登记号55881077)；新霉素(CAS登记号119040)；奈替米星(CAS登记号56391561)；竹桃霉素(CAS登记号3922905)；恶唑烷酮类,例如依哌唑胺(CAS登记号165800044)、利奈唑胺(CAS登记号165800033)、泼斯唑来(CAS登记号252260029)、雷得唑来(CAS登记号869884786)、ranbezolid(CAS登记号392659380)、sutezolid(CAS登记号168828588)、泰迪唑立(CAS登记号856867555)；氧四环素(NSC 9169；CAS登记号2058460)；巴龙霉素(CAS登记号7542372)；青哌环素(CAS登记号4599604)；肽基转移酶抑制剂,例如,氯霉素(NSC 3069；CAS登记号56757)和衍生物如叠氮氯霉素(CAS登记号13838089)、氟苯尼考(CAS登记号73231342)、和甲砜霉素(CAS登记号15318453)，和截短侧耳素如瑞他帕林(CAS登记号224452668)、泰妙菌素(CAS登记号55297955)、沃尼妙林(CAS登记号101312929)；吡利霉素(CAS登记号79548735)；嘌呤霉素(NSC 3055；CAS登记号53792)；奎奴普丁(CAS登记号120138503)；核糖霉素(CAS登记号53797356)；罗他霉素(CAS登记号74014510)；氢吡四环素(CAS登记号751973)；罗红霉素(CAS登记号80214831)；西索米星(CAS登记号32385118)；奇放线菌素(CAS登记号1695778)；螺旋霉素(CAS登记号8025818)；链阳菌素例如原始霉素(CAS登记号270076603)、奎奴普丁/达福普利丁(CAS登记号126602899)和维及霉素(CAS登记号11006761)；链霉素(CAS登记号57921)；四环素(NSC108579；CAS登记号60548)；妥布霉素(CAS登记号32986564)；醋竹桃霉素(CAS登记号2751099)；泰乐菌素(CAS登记号1401690)；威大霉素(CAS登记号49863481)。
组蛋白脱乙酰基酶抑制剂：艾贝司他(abexinostat)(CAS登记号783355602)；贝利司他(NSC 726630；CAS登记号414864009)；西达本胺(CAS登记号743420022)；恩替司他(CAS登记号209783802)；吉维司他(givinostat)(CAS登记号732302997)；莫替司他(mocetinostat)(CAS登记号726169739)；帕比司他(CAS登记号404950807)；quisinostat(CAS登记号875320299)；瑞诺司他(resminostat)(CAS登记号864814880)；罗米地辛(CAS登记号128517077)；萝卜硫素(CAS登记号4478937)；硫脲基丁腈(KevetrinTM；CAS登记号6659890)；丙戊酸(NSC 93819；CAS登记号99661)；伏立诺他(NSC 701852；CAS登记号149647789)；ACY-1215(rocilinostat；CAS登记号1316214524)；CUDC-101(CAS登记号1012054599)；CHR-2845(tefinostat；CAS登记号914382608)；CHR-3996(CAS登记号1235859138)；4SC-202(CAS登记号910462430)；CG200745(CAS登记号936221339)；SB939(pracinostat；CAS登记号929016966)。
线粒体抑制剂:水鬼蕉碱(NSC 349156；CAS登记号96281311)；罗丹明-123(CAS登记号63669709)；依地福新(NSC 324368；CAS登记号70641519)；d-α-生育酚琥珀酸酯(NSC173849；CAS登记号4345033)；化合物11β(CAS登记号865070377)；阿司匹林(NSC 406186；CAS登记号50782)；玫瑰树碱(CAS登记号519233)；黄连素(CAS登记号633658)；浅蓝菌素(CAS登记号17397896)；GX015-070(1H-吲哚,2-(2-((3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-3-甲氧基-2H-吡咯-5-基)-；NSC 729280；CAS登记号803712676)；南蛇藤醇(南蛇藤素；CAS登记号34157830)；二甲双胍(NSC 91485；CAS登记号1115704)；亮绿(NSC5011；CAS登记号633034)；ME-344(CAS登记号1374524556)。
抗有丝分裂剂:别秋水仙碱(NSC 406042)；奥瑞他汀,例如MMAE(单甲基奥瑞他汀E；CAS登记号474645-27-7)和MMAF(单甲基奥瑞他汀F；CAS登记号745017-94-1；软海绵素B(NSC 609395)；秋水仙素(NSC 757；CAS登记号64868)；cholchicine衍生物(N-苯甲酰-去乙酰苯甲酰胺；NSC 33410；CAS登记号63989753)；尾海兔素10(NSC 376128；CAS登记号110417-88-4)；美登素(NSC 153858；CAS登记号35846-53-8)；rhozoxin(NSC 332598；CAS登记号90996546)；紫杉醇(NSC 125973；CAS登记号33069624)；紫杉醇衍生物((2’-N-[3-(二甲氨基)丙基]glutaramate紫杉醇；NSC 608832)；硫代秋水仙碱(3-去甲硫代秋水仙碱；NSC361792)；三苯甲基半胱氨酸(NSC 49842；CAS登记号2799077)；硫酸盐长春花碱(NSC49842；CAS登记号143679)；硫酸盐长春新碱(NSC 67574；CAS登记号2068782)。
包括或可以被修饰以包括与抗体附接的位点的任何这些药剂都可以包括在本文公开的ADC中。
在具体实施方案中，细胞毒性剂和/或细胞抑制剂是抗有丝分裂剂。
在另一个具体实施方案中，细胞毒性剂和/或细胞抑制剂是奥瑞他汀，例如单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)或单甲基奥瑞他汀F(“MMAF”)。
5.2.2.接头
在本公开的抗糖-cMET ADC中，细胞毒性剂和/或细胞抑制剂通过接头与抗体连接。使细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与ADC的抗体连接的接头可以是短的、长的、疏水的、亲水的、柔性的或刚性的，或者可以由各自独立地具有一种或多种上述性质的区段组成，使得接头可以包括具有不同性质的区段。接头可以是多价的，使得它们将多于一个药剂共价连接至抗体的单个位点，或者可以是单价的，使得它们将单个药剂共价连接至抗体的单个位点。
本领域技术人员将理解，接头通过在一个位置与细胞毒性剂和/或细胞抑制剂形成共价连接并在另一位置与抗体形成共价连接，使细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与抗体连接。共价连接通过接头上的官能团与药剂和抗体上的官能团之间的反应形成。如本文所用，表述“接头”旨在包括(i)非缀合形式的接头，其包括能够使接头与细胞毒性剂和/或细胞抑制剂共价连接的官能团以及能够使接头与抗体共价连接的官能团；(ii)部分缀合形式的接头，其包括能够使接头与抗体共价连接的官能团，并且其与细胞毒性剂和/或细胞抑制剂共价连接，或反之亦然；和(iii)完全缀合形式的接头，其与细胞毒性剂和/或细胞抑制剂和抗体两者共价连接。在本公开的接头和抗糖-cMET ADC以及用于使接头药剂与抗体缀合的合成子的某些具体实施方案中，包含接头上的官能团的部分以及在接头和抗体之间形成的共价连接分别具体表示为Rx和XY。
接头优选但不必须是对细胞外部的条件化学稳定，并且可以被设计以在细胞内部裂解、毁灭和/或以其他方式特异性降解。替代性地，可以使用没有被设计以在细胞内特异性裂解或降解的接头。稳定与不稳定接头的选择可取决于细胞毒性即和/或细胞抑制剂的毒性。对于对正常细胞有毒性的药剂，优选稳定的接头。可以利用选择性或靶向性并且对正常细胞具有较低毒性的药剂，接头对细胞外环境的化学稳定性不太重要。在ADC的背景下，可用于使药物与抗体连接的各种接头在本领域是已知的。任何这些接头以及其他接头可用于使细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与本公开的抗糖-cMET ADC的抗体连接。
可用于使许多细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与单个抗体分子连接的示例性多价接头描述于例如WO 2009/073445、WO 2010/068795、WO 2010/138719、WO 2011/120053、WO2011/171020、WO 2013/096901、WO 2014/008375、WO 2014/093379、WO 2014/093394、WO2014/093640中，其内容通过引用以其整体并入本文。例如，Mersana等人开发的Fleximer接头技术具有使高DAR ADC具有良好理化特性的潜力。如下所示，Mersana技术基于经由一系列酯键将药物分子引入可溶解的聚缩醛骨架中。该方法提供了高负载ADC(DAR最高达20)，并同时保持良好的理化特性。
树突型接头的其他实例可见于US2006/116422；US2005/271615；de Groot et al.(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42:4490-4494；Amir et al.(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42:4494-4499；Shamis et al.(2004)J.Am.Chem.Soc.126:1726-1731；Sun et al.(2002)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215；Sun et al.(2003)Bioorganic&Medicinal Chemistry 11:1761-1768；King et al.(2002)TetrahedronLetters 43:1987-1990中，每一篇均通过引用并入本文。
可以使用的示例性多价接头描述于例如Nolting,2013,Antibody-DrugConjugates,Methods in Molecular Biology 1045:71-100；Kitson et al.,2013,CROs/CMOs--Chemica Oggi--Chemistry Today 31(4):30-38；Ducry et al.,2010,Bioconjugate Chem.21:5-13；Zhao et al.,2011,J.Med.Chem.54:3606-3623；美国专利号7,223,837；美国专利号8,568,728；美国专利号8,535,678；和WO2004010957中，每一篇均通过引用并入本文。
作为实例而非限制，以下描述了可包括在本公开的抗糖-cMET ADC中的一些可裂解接头和不可裂解接头。
5.2.3.可裂解接头
在某些实施方案中，选择的接头在体内可裂解。可裂解接头可包括化学或酶促不稳定或可降解的连接。可裂解接头通常依赖细胞内的过程来释放药物，如细胞质减少、暴露于溶酶体的酸性条件下或被细胞内特定的蛋白酶或其他酶裂解。可裂解接头通常掺入一个或多个化学键，这些化学键是化学或酶促可裂解的，而接头的其余部分是不可裂解的。在某些实施方案中，接头包含化学不稳定基团，例如腙和/或二硫化物基团。包含化学不稳定基团的接头利用了血浆和一些细胞质区室之间的不同特性。细胞内有利于含腙接头药物释放的条件是核内体和溶酶体的酸性环境，而含二硫化物的接头在含有高硫醇浓度的细胞质中被还原，如谷胱甘肽。在某些实施方案中，通过使用化学不稳定基团附近的取代基引入空间位阻，可以提高包含化学不稳定基团的接头的血浆稳定性。
酸不稳定基团(如腙)在血液中性pH环境(pH 7.3-7.5)的全身循环期间保持完整，一旦ADC被内化到细胞的弱酸性核内体(pH 5.0-6.5)和溶酶体(pH4.5-5.0)区室中，就会发生水解并释放药物。这种pH依赖的释放机制与药物的非特异性释放有关。为了增加接头腙基的稳定性，该接头可以通过化学修饰(例如取代)来改变，从而允许调节以实现在溶酶体中更有效的释放，同时使循环中的损失最小化。
含腙的接头可以含有另外的裂解位点，例如另外的的酸不稳定裂解位点和/或酶不稳定裂解位点。包括示例性含腙接头的ADC包括以下结构:
其中D和Ab分别表示细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂(药物)和Ab，n表示与抗体连接的药物接头的数量。在某些接头如接头(Ig)中，接头包含两个可裂解的基团-二硫化物和腙部分。对于这种接头，未修饰的游离药物的有效释放需要酸性pH或二硫化物还原和酸性pH。诸如(Ih)和(Ii)的接头已被证明对单一腙裂解位点有效。
在全身循环过程中保持完整并在ADC被内化到酸性细胞区室中时经历水解并释放药物的另外的接头包括碳酸盐。在细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂可以通过氧共价连接的情况下，这种接头可以是有用的。
接头中可能包含的其它酸不稳定基团包括含顺式乌头基的接头。顺式乌头基化学使用与酰胺键并置的羧酸来加速酸性条件下的酰胺水解。
可裂解接头也可以包括二硫基团。二硫化物在生理pH下是热力学稳定的，并且被设计以在细胞内内化时释放药物，其中与细胞外环境相比，胞质溶胶提供了明显更具还原性的环境。二硫键的断裂通常需要细胞质巯基辅因子的存在，例如(还原型)谷胱甘肽(GSH)，使得含二硫化物的接头在循环中相对稳定，从而选择性地将药物释放到胞质溶胶中。细胞内酶蛋白二硫键异构酶或能够裂解二硫键的类似酶也可能有助于细胞内二硫键的优先裂解。据报道，相对于GSH或半胱氨酸在大约5个肿瘤细胞的循环中的显著较低的浓度(最丰富的低分子量硫醇)，GSH在细胞中的浓度范围是0.5-10mM，其中不规则的血流导致缺氧状态，导致还原酶活性增强，因此谷胱甘肽浓度甚至更高。在某些实施方案中，含二硫键的接头的体内稳定性可以通过接头的化学修饰来增强，例如使用二硫键附近的空间位阻。
包括示例性含二硫化物接头的ADC包括以下结构:
其中D和Ab分别表示药物和抗体，n表示与抗体连接的药物接头的数量，R在每次出现时独立地选自例如氢或烷基。在某些实施方案中，增加二硫键附近的空间位阻增加了接头的稳定性。当一个或多个R基团选自较低的烷基如甲基时，结构如(Ij)和(Il)显示出增加的体内稳定性。
可以使用的另一种类型的可裂解接头是被酶特异性裂解的接头。这种接头通常是基于肽的，或者包括充当酶底物的肽区域。基于肽的接头在血浆和细胞外环境中比化学不稳定的接头更稳定。肽键通常具有良好的血清稳定性，因为与溶酶体相比，由于内源性抑制剂和血液的不利高pH值，溶酶体蛋白水解酶在血液中的活性非常低。药物从抗体中的释放特别是由于溶酶体蛋白酶如组织蛋白酶和纤溶酶的作用而发生的。这些蛋白酶可能在某些肿瘤细胞中以较高的水平存在。
在示例性实施方案中，可裂解肽选自四肽如Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO:343)、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:344)或二肽如Val-Cit、Val-Ala、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Val-(D)Asp、Phe-Lys、Ile-Val、Asp-Val、His-Val、NorVal-(D)Asp、Ala-(D)Asp 5、Met-Lys、Asn-Lys、Ile-Pro、Me3Lys-Pro、PhenylGly-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、AM Met-(D)Lys、Asn-(D)Lys、AW Met-(D)Lys和Asn-(D)Lys。在某些实施方案中，由于较长肽的疏水性，二肽优于较长多肽。
已经描述了多种基于二肽的可裂解接头，用于将药物如多柔比星、丝裂霉素、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂卓、太利苏霉素和奥瑞他汀/奥瑞他汀家族成员与抗体连接(参见，Dubowchik et al.,1998,J.Org.Chem.67:1866-1872；Dubowchik et al.,1998,Bioorg.Med.Chem.Lett.8(21):3341-3346；Walker et al.,2002,Bioorg.Med.Chem.Lett.12:217-219；Walker et al.,2004,Bioorg.Med.Chem.Lett.14:4323-4327；Sutherland et al.,2013,Blood 122:1455-1463；和Francisco et al.,2003,Blood 102:1458-1465，这些文献均通过引用并入本文)。所有这些二肽接头或这些二肽接头的修饰形式都可以用于本公开的抗糖-cMET ADC中。可以使用的其他二肽接头包括在ADC中发现的那些接头，如西雅图遗传学公司的本妥昔单抗Vendotin SGN-35(AdcetrisTM)、西雅图遗传学公司的SGN-75(抗-CD-70,Val-Cit-单甲基奥瑞他汀F(MMAF)、西雅图遗传学公司的SGN-CD33A(抗-CD-33,Val-Ala-(SGD-1882))、塞德斯疗法格巴妥木单抗(CDX-011)(抗-NMB,Val-Cit-单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和Cytogen PSMA-ADC(PSMA-ADC-1301)(抗-PSMA,Val-Cit-MMAE)。
酶促可裂解接头可包括自毁间隔物，以在空间上将药物与酶裂解位点分开。药物与肽接头的直接附接可导致药物氨基酸加合物的蛋白水解释放，从而损害其活性。自毁间隔物的使用允许在酰胺键水解时消除完全活性的、化学上未修饰的药物。
一个自毁间隔物是双官能对氨基苯甲醇基团，其通过氨基与肽连接，形成酰胺键，而含胺的药物可以通过氨基甲酸酯官能团与接头(PABC)的苄基羟基连接。所得前药在蛋白酶介导的裂解下被活化，导致1,6-消除反应，释放出未修饰的药物、二氧化碳和接头基团的残余物。以下方案描述了对酰胺基苄基醚的断裂和药物的释放:
其中X-D表示未修饰的药物。
这种自毁基团的杂环变体也有描述。参见例如，美国专利号7,989,434，其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，酶促可裂解接头是基于β-葡萄糖醛酸的接头。通过溶酶体酶β-葡萄糖醛酸苷酶裂解β-葡萄糖醛酸苷糖苷键可以实现药物的容易释放。这种酶大量存在于溶酶体中，在某些肿瘤类型中过表达，而细胞外的酶活性很低。基于β-葡萄糖醛酸的接头可用于避免ADC因β-葡萄糖醛酸苷的亲水性而发生聚集的趋势。在一些实施方案中，基于β-葡萄糖醛酸的接头优选作为连接至疏水性药物的ADC的接头。以下方案描述了药物从含有基于β-葡萄糖醛酸的接头的ADC中的释放:
已经描述了多种可裂解的基于β-葡萄糖醛酸的接头，用于将药物如奥瑞他汀、喜树碱和多柔比星类似物、CBI小沟结合剂和psymberin与抗体连接(参见,参见Nolting,Chapter 5"Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,"In:Antibody-DrugConjugates:Methods in Molecular Biology,vol.1045,pp.71-100,Laurent Ducry(Ed.),Springer Science&Business Medica,LLC,2013；Jeffrey et al.,2006,Bioconjug.Chem.17:831-840；Jeffrey et al.,2007,Bioorg.Med.Chem.Lett.17:2278-2280；和Jiang et al.,2005,J.Am.Chem.Soc.127:11254-11255,每一篇均通过引用并入本文)。所有这些基于β-葡萄糖醛酸的接头都可以用于本公开的抗糖-cMET ADC中。
此外，含有酚基的细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂可以通过酚氧共价键合到接头上。WO 2007/089149中描述的一种这样的接头依赖于一种方法，其中二氨基乙烷“SpaceLink”与传统的基于“PABO”的自毁基团结合使用以递送酚类。接头的裂解如下图所示，其中D表示具有酚羟基的细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂。
可裂解接头可以包括不可裂解的部分或片段，和/或可裂解的片段或部分可以包括在其他不可裂解的接头中以使其可裂解。仅举例来说，聚乙二醇(PEG)和相关聚合物可以在聚合物主链中包括可裂解基团。例如，聚乙二醇或聚合物接头可包括一个或多个可裂解基团，如二硫化物、腙或二肽。
可包含在接头中的其它可降解的键包括由PEG羧酸或活化的PEG羧酸与生物活性剂上的醇基反应形成的酯键，其中这种酯基通常在生理条件下水解以释放生物活性剂。可水解降解的键包括但不限于碳酸酯键；胺和醛反应产生的亚胺键；通过醇与磷酸基团反应形成的磷酸酯键；醛和醇的反应产物缩醛键；甲酸盐和醇的反应产物原酸酯键；以及由亚磷酰胺基团形成的寡核苷酸键，包括但不限于，在聚合物的末端，和寡核苷酸的5’羟基。
在某些实施方案中，接头包含酶促可裂解的肽部分，例如，包含结构式(IVa)或(IVb)的接头:
或其盐，其中:肽表示可被溶酶体酶裂解的肽(图示为C→N，未显示羧基和氨基“末端”)；T表示包含一个或多个乙二醇单元或亚烷基链或其组合的聚合物；Ra选自氢、烷基、磺酸盐和甲基磺酸盐；p是0至5的整数；q是0或1；x是0或1；y是0或1；表示接头与细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂的附接点；*表示与接头其余部分的附接点。
在某些实施方案中，肽选自三肽或二肽。在特定实施方案中，二肽选自:Val-Cit；Cit-Val；Ala-Ala；Ala-Cit；Cit-Ala；Asn-Cit；Cit-Asn；Cit-Cit；Val-Glu；Glu-Val；Ser-Cit；Cit-Ser；Lys-Cit；Cit-Lys；Asp-Cit；Cit-Asp；Ala-Val；Val-Ala；Phe-Lys；Val-Lys；Ala-Lys；Phe-Cit；Leu-Cit；Ile-Cit；Phe-Arg；和Trp-Cit。在某些实施方案中，二肽选自:Cit-Val；和Ala-Val。
根据结构式(IVa)可包含在本公开的抗糖-cMET ADC中的接头的具体示例性实施方案包括以下所示的接头(如图所示，接头包括适于将接头共价连接至抗体的基团):
根据结构式(IVb)可包含在本发明的抗糖-cMET ADC中的接头的具体示例性实施方案包括以下所示的接头(如图所示，接头包括适于将接头共价连接至抗体的基团):
在某些实施方案中，接头包含酶促可裂解的肽部分，例如，包含结构式(IVc)或(IVd)的接头:
或其盐，其中:肽表示可被溶酶体酶裂解的肽(图示为C→N，未显示羧基和氨基“末端”)；T表示包含一个或多个乙二醇单元或亚烷基链或其组合的聚合物；Ra选自氢、烷基、磺酸盐和甲基磺酸盐；p是0至5的整数；q是0或1；x是0或1；y是0或1；.x表示接头与细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂的附接点；*表示与接头其余部分的附接点。
根据结构式(IVc)可包含在本公开的抗糖-cMET ADC中的接头的具体示例性实施方案包括以下所示的接头(如图所示，接头包括适于将接头共价连接至抗体的基团):
根据结构式(IVd)可包含在本发明的抗糖-cMET ADC中的接头的具体示例性实施方案包括以下所示的接头(如图所示，接头包括适于将接头共价连接至抗体的基团):
在某些实施方案中，包含结构式(IVa)、(IVb)、(IVc)或(IVd)的接头进一步包含通过暴露于酸性介质可裂解的碳酸酯部分。在特定的实施方案中，接头通过氧附接至细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂。
5.2.4.不可裂解接头
尽管可裂解接头可提供某些优势，但包含本公开的抗糖-cMET ADC的接头无需是可裂解的。对于不可裂解接头，药物的释放不依赖于血浆和一些细胞质区室之间的不同性质。假设药物的释放发生在经由抗原介导的内吞作用将ADC内化并递送到溶酶体区室之后，在那里抗体通过细胞内蛋白水解降解被降解至氨基酸水平。该过程释放药物衍生物，该药物衍生物由药物、接头和与接头共价附接的氨基酸残基形成。与具有可裂解接头的缀合物相比，来自具有不可裂解接头的缀合物的氨基酸药物代谢物亲水性更强，通常膜渗透性更低，这导致更低的旁观者效应和更低的非特异性毒性。一般来说，具有不可裂解接头的ADC在循环中比具有可裂解接头的ADC具有更高的稳定性。不可裂解的接头可以是亚烷基链，或者可以是聚合性质的，例如基于聚亚烷基二醇聚合物、酰胺聚合物，或者可以包括亚烷基链、聚亚烷基二醇和/或酰胺聚合物的片段。
已经描述了多种用于将药物连接到抗体上的不可裂解的接头。参见，Jeffrey etal.,2006,Bioconjug.Chem.17；831-840；Jeffrey et al.,2007,Bioorg.Med.Chem.Lett.17:2278-2280；和Jiang et al.,2005,J.Am.Chem.Soc.127:11254-11255，每一篇均通过引用并入本文。所有这些接头都可以包括在本公开的抗糖-cMET ADC中。
在某些实施方案中，接头在体内不可裂解，例如根据结构式(VIa)、(VIb)、(VIc)或(VId)的接头(如图所示，接头包括适于将接头共价连接至抗体的基团:
或其盐，其中:Ra选自氢、烷基、磺酸盐和甲基磺酸盐；Rx是包括能够将接头共价连接到抗体上的官能团的部分；并且表示接头与细胞毒性和/或细胞生长抑制剂的附接点。
根据结构式(VIa)-(VId)可包含在本公开的抗糖-cMET ADC中的接头的具体示例性实施方案包括以下所示的接头(如图所示，接头包括适于将接头共价连接至抗体的基团，并且表示与细胞毒性和/或细胞生长抑制剂的附接点):
5.2.5.用于将接头连接到抗体上的基团
多种基团可用于将接头-药物合成子附接到抗体上以产生ADC。附接基团本质上可以是亲电的，包括:马来酰亚胺基团、活性二硫化物、活性酯如NHS酯和HOBt酯、卤甲酸酯、酰基卤、烷基和苄基卤化物如卤代乙酰胺。如下所述，根据本公开内容，还可以使用与“自稳定”马来酰亚胺和“桥连二硫化物”相关的新兴技术。所用的特定基团将部分取决于抗体的附着位点。
“自稳定”马来酰亚胺基团的一个实例在下面的示意图中描述，该基团在抗体缀合条件下自发水解以产生具有改善的稳定性的ADC种类。参见US20130309256A1；以及Lyon etal.,Nature Biotech published online,doi:10.1038/nbt.2968。
正常系统
随着时间的推移导致“DAR损失”
SGN MalDPR(马来酰亚胺二丙氨基)系统：
Polytherics公开了一种桥接一对巯基的方法，该巯基衍生自天然铰链二硫键的还原。参见，Badescu et al.,2014,Bioconjugate Chem.25：1124-1136。下面的示意图描述了该反应。这种方法的优点是能够通过完全还原IgG(以产生4对巯基)然后与4当量的烷化剂反应来合成富集的DAR4 ADC。据称含有“桥连二硫化物”的ADC也具有更高的稳定性。
类似地，如下所述，已经开发了能够桥接一对巯基的马来酰亚胺衍生物(1，如下)。参见WO2013/085925。
5.2.6.接头选择注意事项
如本领域技术人员所知，为特定ADC选择的接头可能受多种因素影响，包括但不限于，与抗体的附接位点(例如，lys、cys或其他氨基酸残基)、药物药效团的结构限制和药物的亲脂性。为ADC选择的特定接头应寻求平衡特定抗体/药物组合的这些不同因素。受ADC中接头选择影响的因素的综述，参见Nolting,Chapter 5“Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates,”In:Antibody-Drug Conjugates:Methods in Molecular Biology,vol.1045,pp.71-100,Laurent Ducry(Ed.),Springer Science&Business Medica,LLC,2013。
例如，已经观察到ADC能够杀伤抗原阳性肿瘤细胞附近的旁观者抗原阴性细胞。ADC杀伤旁观者细胞的机制表明，ADC细胞内加工过程中形成的代谢产物可能起作用。抗原阳性细胞中ADC代谢生成的中性细胞毒性代谢物似乎在旁观者细胞杀伤中起作用，而带电代谢物可能被阻止穿过膜扩散到培养基中，因此不能影响旁观者杀伤。在某些实施方案中，选择接头以减弱由ADC的细胞代谢物引起的旁观者杀伤效应。在某些实施方案中，选择接头以增加旁观者杀伤效应。
在使用和/或储存条件下，接头的性质也可能影响ADC的聚集。通常，文献中报道的ADC每个抗体分子包含不超过3-4个药物分子(参见，例如Chari,2008,Acc Chem Res 41:98-107)。由于ADC的聚集，试图获得更高的药物抗体比率(“DAR”)经常失败,特别是如果药物和接头都是疏水性的(King et al.,2002,J Med Chem 45:4336-4343；Hollander etal.,2008,Bioconjugate Chem 19:358-361；Burke et al.,2009Bioconjugate Chem 20:1242-1250)。在许多情况下，DAR高于3-4可能有利于提高效力。在细胞毒性和/或细胞生长抑制剂本质上是疏水性的情况下，可能期望选择相对亲水的接头作为减少ADC聚集的手段，尤其是在DAR大于3-4的情况下是期望的。因此，在某些实施方案中，接头掺入了在储存和/或使用期间减少ADC聚集的化学部分。接头可以掺入极性或亲水性基团，如带电基团或在生理pH下带电的基团，以减少ADC的聚集。例如，接头可以引入带电基团，如盐或在生理pH下去质子化的基团，例如羧酸盐或质子化的基团，例如胺。
示例性多价接头已被报道产生高达20的DAR，其可用于将多种细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂连接至抗体，该示例性多价接头描述于WO 2010/068795；WO 2010/138719；WO2011/120053；WO 2011/171020；WO 2013/096901；WO 2014/008375；WO 2014/093379；WO2014/093394；WO 2014/093640，其内容通过引用以其整体并入本文。
在特定实施方案中，如通过尺寸排阻色谱法(SEC)测定，储存或使用期间ADC的聚集小于约10％。在特定实施方案中，如通过尺寸排阻色谱法(SEC)测定，储存或使用期间ADC的聚集小于10％，如小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％、小于约0.1％或甚至更低。
5.2.7.制备抗糖-cMET ADC的方法
可以使用众所周知的化学物质合成本公开的抗糖-cMET ADC。所选择的化学物质将取决于，除其他外，细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂的特性、接头和用于将接头附接到抗体上的基团。通常，根据式(I)的ADC可以根据以下方案制备:
D-L-Rx+Ab-Ry→[D-L-XY]n-Ab (I)
其中D、L、Ab、XY和n如前所定义，Rx和Ry代表能够彼此形成共价键的互补基团，如上所述。
Rx和Ry基团的身份将取决于用于将合成子D-L-Rx连接到抗体上的化学物质。通常，所用的化学物质不应改变抗体的完整性，例如其结合其靶标的能力。优选地，缀合抗体的结合特性与未缀合抗体的结合特性非常相似。用于将分子缀合至生物分子如抗体的各种化学物质和技术在本领域是已知的，特别是缀合至抗体是众所周知的。参见，例如，Amon etal.,“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy,”in:Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld et al.Eds.,Alan R.Liss,Inc.,1985；Hellstrom et al.,“Antibodies For Drug Delivery,”in:Controlled DrugDelivery,Robinson et al.Eds.,Marcel Dekker,Inc.,2nd Ed.1987；Thorpe,“AntibodyCarriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review,”in:MonoclonalAntibodies‘84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.,Eds.,1985；“Analysis,Results,and Future Prospective of the Therapeutic Use ofRadiolabeled Antibody In Cancer Therapy,”in:Monoclonal Antibodies For CancerDetection And Therapy,Baldwin et al.,Eds.,Academic Press,1985；Thorpe et al.,1982,Immunol.Rev.62:119-58；PCT公开WO 89/12624。这些化学物质中的任何一种都可以用来将合成子连接到抗体上。
许多用于将合成子连接到可接近的赖氨酸残基上的官能团Rx和化学物质是已知的，包括例如但不限于NHS-酯和异硫氰酸酯。
许多用于将合成子连接到半胱氨酸残基的可接近的游离巯基上的官能团Rx和化学物质是已知的，包括例如但不限于haloacetyls和马来酰亚胺。
然而，缀合化学物质不限于可用的侧链基团。通过将适当的小分子连接到胺上，侧链如胺可以转化成其它有用的基团，如羟基。该策略可通过将多官能小分子缀合至抗体上的可接近的氨基酸残基的侧链，用于增加抗体上可用连接位点的数量。适合将合成子共价连接到这些“转化的”官能团上的官能团Rx随后被包括在合成子中。
抗体也可以被工程化以包括用于缀合的氨基酸残基。Axup et al.,2012,ProcNatl Acad Sci USA.109(40):16101-16106描述了一种工程化抗体的方法，该方法包括可用于在ADC背景下缀合药物的非遗传编码的氨基酸残基，作为化学物质或官能团用于将合成子连接到非编码氨基酸。
典型地，合成子连接到抗体的氨基酸残基的侧链上，包括例如可接近的赖氨酸残基的伯氨基或可接近的半胱氨酸残基的巯基。游离巯基可通过还原链间二硫键获得。
对于其中Ry是巯基的连接(例如，当Rx是马来酰亚胺时)，抗体通常首先被完全或部分还原以破坏半胱氨酸残基之间的链间二硫键。
不参与二硫键的半胱氨酸残基可以通过一个或多个密码子的突变而被工程化成抗体。还原这些不成对的半胱氨酸会产生适合缀合的巯基。用于掺入工程化半胱氨酸的优选位置包括例如但不限于，人IgG1重链上的位置S112C、S113C、A114C、S115C、A176C、5180C、S252C、V286C、V292C、S357C、A359C、S398C、S428C(Kabat编号)和人Igκ轻链上的位置V110C、S114C、S121C、S127C、S168C、V205C(Kabat编号)(参见，例如美国专利号7521541、美国专利号7，855，275和美国专利号8455622)。
如本领域技术人员所理解的，与抗体分子连接的细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂的数量可以变化，使得ADC的集合在性质上可以是异质的，其中一些抗体包含一种连接的试剂，一些包含两种，一些包含三种等(有些不包含)。异质性的程度将取决于，除其他因素外，用于连接细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂的化学物质。例如，当抗体被还原以产生用于附接的巯基时，通常产生每个分子具有0、2、4、6或8个连接试剂的抗体的异质混合物。此外，通过限制附接化合物的摩尔比，通常产生每分子具有0、1、2、3、4、5、6、7或8个连接试剂的抗体。因此，应当理解，根据上下文，所述DAR可以是抗体集合的平均值。例如，“DAR4”可以指未经过纯化以分离特定DAR峰的ADC制剂，并且可以包含ADC分子的异质混合物，该ADC分子具有每个抗体附接的不同数量的细胞抑制剂和/或细胞毒素剂(例如，每个抗体0、2、4、6、8个药剂)，但平均药物与抗体的比例为4。类似地，在一些实施方案中，“DAR2”是指平均药物与抗体比率为2的异质ADC制剂。
当期望富集的制剂时，具有确定数量的连接的细胞毒性剂和/或细胞生长抑制剂的抗体可以经由纯化异质混合物获得，例如经由柱层析，例如疏水相互作用层析。
如本领域已知的，纯度可以通过多种方法进行评估。作为一个具体的例子，ADC制剂可以经由HPLC或其他色谱进行分析，并通过分析所得峰曲线下的面积来评估纯度。
5.3嵌合抗原受体
本公开提供了嵌合抗原受体(CAR)，其包含本文所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，CAR包含一个或多个如本文所述的scFv(例如一个或两个)。例如，CAR可以包含通过接头序列(例如4-15个氨基酸)共价连接的两个scFv。示例性的接头包括GGGGS(SEQ ID NO:293)和(GGGGS)3(SEQ ID NO:346)。
本公开的CAR通常包含可操作地连接到跨膜结构域的胞外结构域，该跨膜结构域又可操作地连接到用于信号传导的胞内结构域。CAR还可以在胞外结构域的N末端包含信号肽(例如，人CD8信号肽)。在一些实施方案中，本公开的CAR包含人CD8信号肽，该信号肽包含氨基酸序列
本公开的CAR的胞外结构域包含抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的序列(例如，如第5.1节或编号实施方案689至724中所述)。
示例性跨膜结构域序列和胞内结构域序列分别在第5.3.1节和第5.3.2节中描述。
本文所述的几种融合蛋白(例如编号实施方案664至688)是CAR，并且CAR相关的公开内容(例如编号实施方案689至724)适用于这种融合蛋白。本文描述的其他融合蛋白(例如编号实施方案735至834中的)是嵌合T细胞受体，并且嵌合TCR相关的公开内容适用于此类融合蛋白。
5.3.1.跨膜结构域
关于跨膜结构域，可以将CAR设计成包含与CAR的胞外结构域可操作地连接(例如融合)的跨膜结构域。
跨膜结构域可以衍生自天然的或衍生自合成来源。当来源是天然的时，结构域可以衍生自任何膜结合或跨膜蛋白。本公开中特别有用的跨膜区可以衍生自以下(即，至少包含以下的跨膜结构域)：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154。在某些情况下，也可以使用多种人类铰链，包括人类Ig(免疫球蛋白)铰链。
在一个实施方案中，跨膜结构域是合成的(即，非天然存在的)。合成跨膜结构域的实例是主要包含疏水性残基如亮氨酸和缬氨酸的肽。优选地，在合成跨膜结构域的每一端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。任选地，长度优选为2至10个氨基酸的短寡或多肽接头可在CAR的跨膜结构域和细胞质信号传导结构域之间形成键。甘氨酸-丝氨酸成对体提供了特别合适的接头。
在一个实施方案中，本公开的CAR中的跨膜结构域是CD8跨膜结构域。在一个实施方案中，CD8跨膜结构域包含氨基酸序列
在一个实施方案中，本公开的CAR中的跨膜结构域是CD28跨膜结构域。在一个实施方案中，CD28跨膜结构域包含氨基酸序列
在一些情况下，本公开的CAR的跨膜结构域通过CD8a铰链结构域与胞外结构域连接。在一个实施方案中，CD8a铰链结构域包含氨基酸序列 在另一个实施方案中，CD8a铰链结构域包含氨基酸序列 在另一个实施方案中，CD8a铰链结构域包含氨基酸序列
在一些情况下，本公开的CAR的跨膜结构域通过人IgG4短铰链与胞外结构域连接。在一个实施方案中，人IgG4短铰链包含氨基酸序列
在一些情况下，本公开的CAR的跨膜结构域通过人IgG4长铰链与胞外结构域连接。在一个实施方案中，人IgG4长铰链包含氨基酸序列
5.3.2.细胞内结构域
本公开的CAR的细胞内信号结构域负责表达CAR的免疫细胞的至少一种正常效应功能的激活。术语“效应功能”是指细胞的特定功能。例如，T细胞的效应功能可以是细胞溶解活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。因此，术语“细胞内信号传导结构域”是指蛋白质中转导效应功能信号并指导细胞进行特定功能的部分。虽然通常可以使用整个细胞内信号结构域，但在许多情况下没有必要使用整个链。就使用细胞内信号传导结构域的截短部分而言，该截短部分可用于代替整个链，只要其转导效应功能信号即可。因此，术语细胞内信号传导结构域意在包括足以转导效应功能信号的细胞内信号传导结构域的任何截短部分。
用于本公开的CAR的细胞内信号结构域的优选实例包括协同作用以在抗原受体结合后启动信号转导的T细胞受体(TCR)和协同受体的胞质序列，，以及这些序列的任何衍生物或变体和具有相同功能能力的任何合成序列。
仅通过TCR生成的信号不足以完全激活T细胞，还需要次级或共刺激信号。因此，T细胞活化可以说是由两类不同的细胞质信号传导序列介导:那些通过TCR启动抗原依赖性初级激活的序列(初级细胞质信号传导序列)，和那些以不依赖于抗原的方式起作用以提供次级或共刺激信号的序列(次级细胞质信号传导序列)。
初级细胞质信号传导序列以刺激方式或抑制方式调节TCR复合物的初级激活。以刺激方式起作用的初级细胞质信号传导序列可以含有称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM的信号传导基序。
在本发明的CAR中特别有用的含初级细胞质信号传导序列的ITAM的实例包括衍生自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些。特别优选的是，本公开的CAR中的细胞质信号传导分子包含来自CD3-ζ的细胞质信号传导序列。
在优选的实施方案中，CAR的胞质结构域被设计成包括本身含有初级胞质信号传导序列结构域(例如CD3-ζ的胞质信号传导序列结构域)的ITAM，或与在本公开的CAR中有用的任何其他期望的胞质结构域组合。例如，CAR的胞质结构域可以包括CD3ζ链部分和共刺激信号传导区。
共刺激信号传导区是指包含共刺激分子胞内结构域的CAR部分。共刺激分子是除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子，是淋巴细胞对抗原有效应答所必需的。这种分子的实例包括CD27、CD28、4-1BB(CD 137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3以及与CD83、DAP10、GITR等特异性结合的配体。
本公开的CAR的细胞质信号传导部分内的细胞质信号传导序列可以以随机或特定的顺序相互连接。任选地，短寡或多肽接头(优选长度在2至10个氨基酸之间)可以形成键。甘氨酸-丝氨酸成对体提供了特别合适的接头。
在一个实施方案中，胞质结构域包含CD3-ζ的信号传导结构域和CD28的信号传导结构域。在一些实施方案中，CD3-ζ的信号传导结构域包含氨基酸序列 在一些实施方案中，CD28的信号传导结构域包含氨基酸序列
在另一个实施方案中，胞质结构域包含CD3-ζ的信号传导结构域和4-1BB的信号传导结构域。
在另一个实施方案中，胞质结构域包含CD3-ζ的信号传导结构域和CD2的信号传导结构域。在一些实施方案中，CD2的信号传导结构域包含氨基酸序列
在另一个实施方案中，胞质结构域包含CD3-ζ的信号传导结构域、CD28的信号传导结构域和CD2的信号传导结构域。
在另一个实施方案中，胞质结构域包含CD3-ζ的信号传导结构域、4-1BB的信号传导结构域和CD2的信号传导结构域。
胞质结构域中包含CD2信号传导结构域允许调节CAR T细胞细胞因子的产生(参见美国专利号9,783,591，其内容通过引用以其整体并入本文)。如美国专利号9,783,591所公开的，在CAR胞质结构域中包含CD2信号传导结构域显著改变了CAR T细胞细胞因子的正向和负向产生，其效果依赖于胞质结构域的共刺激信号传导区中其他共刺激分子的存在和身份。例如，在一些实施方案中，胞质结构域的共刺激信号传导区中包含CD2信号传导结构域和CD28信号传导结构域导致相对于表达具有CD28但不具有CD2的CAR的T细胞而言显著更少的IL2的释放。释放较少IL2的CAR T细胞可导致免疫抑制性Treg细胞增殖减少。在一些实施方案中，胞质结构域的共刺激信号传导区中包含CD2信号传导结构域显著降低了CAR T细胞中的钙内流。这已被证明可以减少激活诱导的CAR T细胞死亡。
5.4嵌合T细胞受体
本公开提供了嵌合T细胞受体(TCR)，其包含本文所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段。嵌合TCR提供了特异性结合抗糖-cMET的抗糖-cMET特异性抗体和TCR嵌合体，并且能够募集至少一种TCR相关信号传导分子(例如，CD3γε、CD3δε和ζζ)。在一些实施方案中，嵌合TCR包含一个或多个能够结合糖-cMET的抗原结合片段。抗原结合片段的实例包括例如但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、单链Fv片段(scFV)和单结构域片段。在一些实施方案中，嵌合T细胞受体的抗原结合片段包含如本文所述的至少一条抗糖-cMET可变重链和至少一条抗糖-cMET可变轻链。
TCR以αβ异二聚体或γδ异二聚体的形式出现，其中T细胞在细胞表面表达αβ形式或γδ形式的TCR。四条链(α、β、γ、δ)各自具有特征性的细胞外结构，由高度多态的“免疫球蛋白可变区”样N-末端结构域和“免疫球蛋白恒定区”样第二结构域组成。这些结构域中的每一个都具有特征性的结构域内二硫键。恒定区靠近细胞膜，后面是连接肽、跨膜区和短的细胞质尾。异二聚体TCR的2条链之间的共价键由位于桥接细胞外恒定结构域和跨膜区的短连接肽序列内的半胱氨酸残基形成，该跨膜区与相应位置的成对TCR链半胱氨酸残基形成二硫键(Lefranc and Lefranc,“The T Cell Receptor FactsBook,”Academic Press,2001)。
本领域已知嵌合TCR的若干实例。参见，例如，Kuwana et al.,Biochem BiophysRes Commun.149(3):960-968；Gross et al.,1989,Proc Natl Acad Sci USA.86:10024-10028；Gross&Eshhar,1992,FASEB J.6(15):3370-3378；Liu et al.,2021,Sci TranslMed,13:eabb5191,WO 2016/187349,WO 2017/070608,WO 2020/029774,和美国专利号7,741,465，每一篇的内容均通过引用以其整体并入本文。
嵌合TCR通常包含含有第一TCR结构域的第一多肽链、含有第二TCR结构域的第二多肽链和本文所述的抗糖-cMET抗原结合片段。在一些实施方案中，嵌合TCR包含单个抗糖-cMET抗原结合片段。在其他实施方案中，嵌合TCR包含两个或多个抗糖-cMET抗原结合片段。在某些实施方案中，嵌合TCR包含两个抗糖-cMET抗原结合片段。
在一些实施方案中，抗糖-cMET抗原结合片段是本文所述的scFv。在嵌合TCR包含单个抗糖-cMET抗原结合片段的实施方案中，单个抗糖-cMET scFv可以包含在嵌合TCR的第一多肽链或第二多肽链中。在嵌合TCR包含例如两个抗糖-cMET抗原结合片段的实施方案中，两个抗糖-cMET scFV可以包含在嵌合TCR的第一多肽链或第二多肽链中，或者第一scFv可以包含在第一多肽链中，第二scFv可以包含在第二多肽链中。在两个scFv包含在嵌合TCR的第一多肽链或第二多肽链之一中的实施方案中，两个scFv可以经由肽接头连接。在一些实施方案中，嵌合TCR包含两个或多个具有相同氨基酸序列的抗糖-cMET scFv。在其他实施方案中，嵌合TCR包含两个或多个具有不同氨基酸序列的抗糖-cMET scFv。
在其他实施方案中，抗糖-cMET抗原结合片段是Fv片段。在一些实施方案中，本文所述的抗糖-cMET可变重链(VH)包含在缔合以形成嵌合TCR的两条多肽链之一中。本文所述的抗糖-cMET可变轻链(VL)可包含在不包含抗糖-cMET VH的多肽链中。当第一和第二多肽链二聚化时，抗糖-cMET VH和VL结合在一起以形成抗糖-cMET Fv片段。在一些实施方案中，VH包含在第一多肽链中，VL包含在第二多肽链中。在其他实施方案中，VH包含在第二多肽链中，VL包含在第一多肽链中。
在其他实施方案中，抗糖-cMET抗原片段是Fab结构域，其包含VH、VL、CH1和CL结构域。在一些实施方案中，本文所述的抗糖-cMET可变重链(VH)和CH1结构域包含在第一或第二多肽链中。在一些实施方案中，本文所述的抗糖-cMET可变轻链(VL)和CL结构域包含在不包含抗糖-cMET VH和CH1的第一或第二多肽链中。在其他实施方案中，抗糖-cMET可变重链(VH)和CL结构域包含在第一或第二多肽链中。在一些实施方案中，抗糖-cMET可变轻链(VL)和CH1结构域包含在不包含抗糖-cMET VH和CL的多肽链中。当第一和第二多肽链二聚化时，抗糖-cMET VH和VL以及CH1和CL结合在一起以形成抗糖-cMET Fab结构域。在一些实施方案中，VH和CH1或CL包含在第一多肽链中，而VL和CL或CH1包含在第二多肽链中。在其他实施方案中，VH和CH1或CL包含在第二多肽链中，而VL和CH1或CL包含在第一多肽链中。
在其他实施方案中，抗糖-cMET VH和CH1或CL包含在第二多肽链的第一多肽链中，嵌合TCR还包含第三多肽，该第三多肽包含VL和CL结构域或CH1结构域之一。第三多肽能够与第一或第二多肽链的VH和CH1或CL缔合，从而形成Fab结构域。在一些实施方案中，第一和第二多肽链都包含VH和CH1结构域或CL结构域。其中第一和第二多肽链都包含VH和CH1或CL，包含VL和CL或CH1的第三多肽与第一多肽链缔合以形成第一Fab结构域，包含VL和CL或CH1的第四多肽与第二多肽链缔合以形成第二Fab结构域。
第一和第二TCR结构域分别包含在第一和第二多肽链中，其中第一TCR结构域包含来自第一TCR亚基的第一TCR跨膜结构域，第二TCR结构域包含来自第二TCR亚基的第二TCR跨膜结构域。在一些实施方案中，第一TCR亚基是TCRα链，第二TCR亚基是TCRβ链。在其他实施方案中，第一TCR亚基是TCRβ链，第二TCR亚基是TCRα链。在一些实施方案中，第一TCR亚基是TCRγ链，第二TCR亚基是TCRδ链。在其他实施方案中，第一TCR亚基是TCRδ链，第二TCR亚基是TCRγ链。来自TCR亚基的TCR跨膜结构域可以是天然的TCR跨膜结构域、其天然或工程化变体、或天然或变体TCR跨膜结构域的片段。在一些实施方案中，第一和/或第二TCR跨膜结构域分别包含WO 2017/070608的SEQ ID NO:77-80之一中包含的TCR跨膜结构域的氨基酸序列，其通过引用以其整体并入本文。在其他实施方案中，第一和/或第二TCR跨膜结构域分别包含WO 2017/070608的SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列。
在一些实施方案中，除了第一和第二TCR跨膜结构域之外，第一和第二TCR结构域还分别包括第一和第二连接肽。第一和第二连接肽分别位于第一和第二TCR跨膜结构域的N末端。在一些实施方案中，第一连接肽包含第一TCR亚基的连接肽的全部或一部分，和/或第二连接肽包含第二TCR亚基的连接肽的全部或一部分。在一些实施方案中，第一跨膜结构域和第一连接肽衍生自不同的TCR亚基和/或第二跨膜结构域和第二连接肽衍生自不同的TCR亚基。来自TCR亚基的连接肽可以是天然的TCR连接肽、其天然或工程化变体、或天然或变体TCR连接肽的片段。在一些实施方案中，第一和/或第二连接肽分别包含WO 2017/070608的SEQ ID NO:77-80之一中含有的连接肽的氨基酸序列。在其他实施方案中，第一和/或第二连接肽分别包含WO 2017/070608的SEQ ID NO:5-12的氨基酸序列。
在一些实施方案中，第一和第二TCR结构域分别包含第一和第二TCR恒定结构域。第一和第二TCR恒定结构域分别位于第一和第二TCR跨膜结构域的C端。如果第一和/或第二TCR结构域包含TCR连接肽，则TCR恒定结构域可以位于TCR连接肽的C端。在一些实施方案中，第一TCR恒定结构域包含第一TCR亚基的恒定结构域的全部或一部分，和/或第二TCR恒定结构域包含第二TCR亚基的恒定结构域的全部或一部分。例如，在一些实施方案中，第一和/或第二TCR恒定结构域衍生自TCRα和β亚基恒定结构域，或TCRγ和δ亚基恒定结构域。来自TCR亚基的TCR恒定区可以是天然的TCR细胞内恒定结构域、其天然或工程化变体、或天然或变体TCR恒定结构域的片段。在一些实施方案中，第一和/或第二TCR恒定区各自包含SEQID NO:172、174、176、178、180或182的氨基酸序列或其野生型等效物。
在一些实施方案中，第一和第二TCR结构域分别包含第一和第二TCR胞内结构域。第一和第二TCR胞内结构域分别位于第一和第二TCR跨膜结构域的C端。在一些实施方案中，第一TCR胞内结构域包含第一TCR亚基的胞内结构域的全部或一部分，和/或第二TCR胞内结构域包含第二TCR亚基的胞内结构域的全部或一部分。来自TCR亚基的TCR胞内结构域可以是天然的TCR胞内结构域、其天然或工程化变体、或天然或变体TCR胞内结构域的片段。在一些实施方案中，第一和/或第二TCR胞内结构域分别包含WO 2017/070608的SEQ ID NO:77-80之一中所含的TCR胞内结构域的氨基酸序列。在其他实施方案中，第一和/或第二TCR胞内结构域分别包含WO 2017/070608的SEQ ID NO:13-14的氨基酸序列。
在一些实施方案中，嵌合TCR的第一多肽链还包含第一TCR跨膜结构域C端的第一附加胞内结构域，和/或嵌合TCR的第二多肽链还包含第二跨膜结构域C端的第二附加胞内结构域。在一些实施方案中，第一和/或第二附加胞内结构域包含TCR共刺激结构域。在一些实施方案中，TCR共刺激结构域包含WO 2017/070608的SEQ ID NO:70或71的全部或部分氨基酸序列。
在一些实施方案中，第一TCR结构域是第一TCR亚基的片段和/或第二TCR亚基是第二TCR亚基的片段。
形成嵌合TCR的第一和第二多肽链连接。在一些实施方案中，形成嵌合TCR的第一和第二多肽链通过二硫键连接。在一些实施方案中，形成嵌合TCR的第一和第二多肽链通过第一连接肽中的残基和第二连接肽中的残基之间的二硫键连接。
在一些实施方案中，第一和第二多肽链连接或以其他方式缔合。在一些实施方案中，缔合的第一和第二多肽链能够募集至少一种TCR相关信号传导模块，如，例如CD3δε、CD3γε和ζζ。在某些实施方案中，缔合的第一和第二多肽链能够募集CD3δε、CD3γε和ζζ中的每一个，形成TCR-CD3复合物。
在一些实施方案中，第一多肽链包含第一TCR结构域和包含在第一多肽链中的scFv、Fv或Fab片段的抗糖-cMET VH或VL之间的第一接头。在一些实施方案中，第二多肽链包含第二TCR结构域和包含在第二多肽链中的scFv、Fv或Fab片段的抗糖-cMET VH或VL之间的第二接头。在一些实施方案中，第一肽接头和/或第二肽接头包含约5至约70个之间的氨基酸。在一些实施方案中，第一和/或第二接头包含来自免疫球蛋白或T细胞受体亚基的恒定结构域或其片段。在一些实施方案中，第一和/或第二接头包含免疫球蛋白恒定结构域或其片段。例如，在上述包含CH1或CL结构域的实施方案中，CH1或CL结构域充当TCR结构域和抗糖-cMET结合片段或其亚部分(例如，VH或VL)之间的接头。除了CH1或CL之外，免疫球蛋白恒定结构域还可以是CH2、CH3或CH4结构域或其片段。免疫球蛋白恒定区可以衍生自IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA(例如，IgA1或IgA2)、IgD、IgM或IgE重链。在一些实施方案中，恒定结构域可以衍生自人(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgM或IgE重链。在其他实施方案中，上述TCR恒定结构域或其片段充当TCR结构域和抗糖-cMET结合片段或其亚部分(例如，VH或VL)之间的接头。在一些实施方案中，第一和第二接头能够彼此结合。
在一些实施方案中，第一和第二多肽链通过可裂解的肽接头连接，至少是暂时连接。在一些实施方案中，可裂解肽接头是弗林蛋白酶-p2A可裂解肽。可裂解肽接头可以促进两条多肽链的表达。可裂解肽接头可被配置以在蛋白质翻译期间和/或翻译后不久暂时将第一多肽链与第二多肽链缔合。
在一些实施方案中，嵌合TCR是合成的T细胞受体和抗原受体(STAR)，如Liu etal.,2021,Sci Transl Med和WO 2020/029774中所述，每一篇的内容通过引用以其整体并入本文。
在一些方面，该STAR从N-端到C-端包含第一多肽链，该第一多肽链包含抗糖-cMET可变重链和TCRα链恒定区结构域；可裂解肽接头；以及第二多肽链，该第二多肽链包含抗糖-cMET可变轻链和TCRβ恒定区结构域(构型STAR 1)。
在其他方面，该STAR从N-端到C-端包含第一多肽链，该第一多肽链包含抗糖-cMET可变重链和TCRβ链恒定区结构域；可裂解肽接头；以及第二多肽链，该第二多肽链包含抗糖-cMET可变轻链和TCRα恒定区结构域(构型STAR 2)。
在其他方面，该STAR从N-端到C-端包含第一多肽链，该第一多肽链包含抗糖-cMET可变轻链和TCRα链恒定区结构域；可裂解肽接头；以及第二多肽链，该第二多肽链包含抗糖-cMET可变重链和TCRβ恒定区结构域(构型STAR 3)。
在其他方面，该STAR从N-端到C-端包含第一多肽链，该第一多肽链包含抗糖-cMET可变轻链和TCRβ链恒定区结构域；可裂解肽接头；以及第二多肽链，该第二多肽链包含抗糖-cMET可变重链和TCRα恒定区结构域(构型STAR 4)。
在某些实施方案中，构型STAR 1至STAR 4中任一个的TCRα链恒定区结构域和TCRβ链恒定区结构域可分别被TCRγ和TCRδ恒定区结构域替代。
本公开的嵌合TCR可以与T细胞中内源性表达的TCR相关信号传导分子(例如CD3γε、CD3δε和ζζ)形成复合物。这些复合物提供TCR信号传导，该信号传导由抗糖-cMET重链和轻链可变链与其靶标的结合控制。
在编号实施方案735至834中进一步描述了本公开的嵌合TCR。
5.4.1.TCR恒定结构域
关于TCR恒定结构域，嵌合TCR可以设计成包含衍生自例如人外周血T细胞的恒定区。表5提供了用于根据本公开的嵌合TCR的TCR恒定区的核苷酸序列和相应的氨基酸序列。
在某些实施方案中，嵌合TCR的TCR恒定区可以被修饰以在嵌合TCR的两个TCR恒定区之间提供另外的键。在一些实施方案中，对应于野生型人TCRα恒定结构域位置48的残基突变为半胱氨酸，对应于野生型人TCRβ恒定结构域位置57的残基突变为半胱氨酸，如表5所示。这导致TCRα和TCRβ恒定结构域之间形成二硫键，从而在嵌合TCR的第一和第二多肽链之间形成二硫键。在一些实施方案中，对应于野生型人TCRα恒定结构域位置85的残基突变为丙氨酸，对应于野生型人TCRβ恒定结构域位置88的残基突变为甘氨酸，如表5所示。同样，这导致TCRα和TCRβ恒定区之间形成二硫键。
5.4.2.可裂解接头
在一些实施方案中，本公开的嵌合TCR的两条多肽链经由可裂解肽接头连接。在一些实施方案中，嵌合TCR的两条多肽链经由弗林蛋白酶-P2A肽接头连接，该接头在两条多肽链之间提供蛋白酶裂解位点。因此，两条多肽链可以被转录和翻译成融合蛋白，该融合蛋白随后被蛋白酶裂解成不同的蛋白亚基。在一些实施方案中，两个所得蛋白质亚基通过二硫键共价结合，随后与T细胞的内源性CD3亚基形成复合物。
在一些实施方案中，弗林蛋白酶-P2A肽接头包含序列
在一些实施方案中，弗林蛋白酶-P2A肽接头包含序列
5.5神经氨酸酶
唾液酸是细胞表面上糖蛋白或糖脂上聚糖的末端糖，并已显示在肿瘤转化和恶性进展期间异常表达。由于唾液酸转移酶/唾液酸酶的异常表达，肿瘤组织中经常发生高唾液酸化。这可能导致癌症加速发展。唾液酸化促进免疫逃逸，增强肿瘤增殖和转移，帮助肿瘤血管生成，并有助于抗凋亡和癌症治疗。
表达本公开CAR的宿主细胞(例如T细胞、NK细胞)可以被工程化以与CAR一起共表达细胞表面或分泌的神经氨酸酶(唾液酸酶)。细胞表面神经氨酸酶经由异源跨膜锚定在细胞表面，赋予宿主细胞糖基化活性。这增强了CAR-T细胞和免疫细胞如先天NK细胞和单核细胞的细胞毒性作用和抗肿瘤功效。共表达CAR和工程化神经氨酸酶的宿主细胞描述于PCT公开号WO2020/236964中，其通过引用以其整体并入本文。
神经氨酸酶可以与本文所述的CAR一起在宿主细胞中共表达。在具体实施方案中描述了共表达神经氨酸酶和CAR的示例性宿主细胞。
神经氨酸酶可以作为本文所述融合蛋白的结构域包括在内。
在某些实施方案中，神经氨酸酶是EC 3.2.1.18或EC 3.2.1.129。
在一些实施方案中，神经氨酸酶衍生自绿色小单孢菌(micromonosporaviridifaciens)。
在一些方面，神经氨酸酶包含与以下序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列:
神经氨酸酶可以保留在经工程化以表达神经氨酸酶的宿主细胞的表面，或者可以由经工程化以表达神经氨酸酶的宿主细胞分泌。经工程化以表达神经氨酸酶的宿主细胞可包括例如编码神经氨酸酶的载体。
5.6 MicAbody
本公开提供了包含本公开的抗糖-cMET抗体和抗原结合片段的MicAbody。MicAbody是融合蛋白，其包含抗体或抗原结合片段和工程化的MHC I类链相关(MIC)蛋白结构域。MIC蛋白是NK细胞表面上表达的人NKG2D受体的天然配体，MIC蛋白的α1-α2结构域为NKG2D受体提供结合位点。通过将工程化MIC蛋白结构域(例如工程化α1-α2结构域)融合到癌症靶向抗体或抗原结合片段，表达能够结合工程化MIC蛋白结构域的工程化NKG2D受体的T细胞可以靶向癌细胞。可包含在本公开的MicAbody中的工程化MIC蛋白结构域和能够结合工程化MIC蛋白结构域的NKG2D受体、包含NKG2D受体的CAR和CAR T细胞描述于美国公开号US2011/0183893、US2011/0311561、US2015/0165065和US2016/0304578以及PCT公开号WO2016/090278、WO2017/024131、WO2017/222556和WO2019/191243，其内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，本发明的MicAbody包含与NKG2D配体(例如MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5、ULBP6或OMCP)的α1-α2结构域至少80％相同或同源的α1-α2结构域。MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5、ULBP6和OMCP的示例性氨基酸序列分别在WO 2019/191243的SEQ ID NO:1-9中列出，其序列通过引用并入本文。在其他实施方案中，α1-α2结构域与NKG2D配体的原生或天然α1-α2结构域85％相同。在其他实施方案中，α1-α2结构域与天然NKG2D配体蛋白的原生或天然α1-α2结构域90％相同，并结合非天然NKG2D。
在一些实施方案中，本发明的MicAbody包含α1-α2结构域，其与人MICA或MICB蛋白的原生或天然α1-α2结构域至少80％相同或同源，并结合NKG2D。在一些实施方案中，α1-α2结构域与人MICA或MICB蛋白的原生或天然α1-α2结构域85％相同，并结合NKG2D。在其他实施方案中，α1-α2结构域与人MICA或MICB蛋白的原生或天然α1-α2平台结构域90％、95％、96％、97％、98％或99％相同，并结合NKG2D。
在一些实施方案中，可以在NKG2D配体的α1-α2结构域中进行特定突变，以产生结合非天然NKG2D受体的非天然α1-α2结构域，该非天然α1-α2结构域本身被工程化以降低对天然NKG2D配体的亲和力。例如，这可以通过遗传工程来完成。如此修饰的非天然NKG2D受体可用于在免疫系统的NK或T细胞表面产生基于NKG2D的CAR，其可优先结合由非天然α1-α2结构域组成的分子并被其激活。与传统的CAR-T细胞和CAR-NK细胞相比，这些非天然NKG2D受体对及其同源非天然NKG2D配体可以为治疗癌症和病毒感染提供重要的安全性、有效性和制造优势。具有基于NKG2D的CAR的CAR-T细胞和CAR-NK细胞的激活可以由MicAbody的施用控制。在发生不良事件的情况下，可以修改MicAbody的给药方案，而不是必须配置诱导自杀机制以破坏输注的CAR细胞。
MicAbody可经由接头将抗体或抗原结合片段附接到工程化的α1-α2结构域生成，接头例如APTSSSGGGGS(SEQ ID NO:319)、GGGS(SEQ ID NO:320)或者GGGGS(SEQ ID NO:293)。例如，如WO 2019/191243中所述，α1-α2结构域可以融合到IgG重链或轻链的C端。
在一些实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序列
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序列
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序列
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
在其他实施方案中，本公开的MicAbody包含工程化的α1-α2结构域，该结构域包含氨基酸序
示例性的工程化NKG2D受体包含氨基酸序列其中位置73的酪氨酸被另一种氨基酸例如丙氨酸取代。
另一个示例性的工程化NKG2D受体包含氨基酸序列 其中位置75和122的酪氨酸被另一种氨基酸取代，例如位置75的丙氨酸和位置122的苯丙氨酸。
5.7核酸、重组载体和宿主细胞
本公开涵盖编码抗糖-cMET抗体的免疫球蛋白轻链和重链基因的核酸分子、包含此类核酸的载体以及能够产生本公开的抗糖-cMET抗体的宿主细胞。在某些方面，核酸分子编码并且宿主细胞能够表达本公开的抗糖-cMET抗体和抗体结合片段(例如，如第5.1节和编号实施方案1至657中所述)以及融合蛋白(例如，如编号实施方案664至688中所述)，以及包含它们的嵌合抗原受体(例如，如第5.3节和编号实施方案689至724中所述)和嵌合TCR(例如，如第5.4节和编号实施方案735至834中所述)。本公开的示例性载体在编号实施方案837至839中描述，示例性宿主细胞在编号实施方案840至846中描述。
本发明的抗糖-cMET抗体可通过在宿主细胞中重组表达免疫球蛋白轻链和重链基因来制备。为了重组表达抗体，用一种或多种携带编码抗体的免疫球蛋白轻链和重链的DNA片段的重组表达载体转染宿主细胞，使得轻链和重链在宿主细胞中表达，并且任选地分泌到培养宿主细胞的培养基中，抗体可以从该培养基中回收。使用标准重组DNA方法获得抗体重链和轻链基因，将这些基因掺入重组表达载体并将载体引入宿主细胞，例如MolecularCloning；ALaboratory Mannual,Second Edition(Sambrook,Fritsch and Maniatis(eds),Cold Spring Harbor,N.Y.,1989),Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel,F.M.et al.,eds.,Greene Publishing Associates,1989)和美国专利号4,816,397中描述的那些。
为了生成编码此类抗糖-cMET抗体的核酸，首先获得编码轻链可变区和重链可变区的DNA片段。这些DNA可以通过扩增和修饰编码轻链可变序列和重链可变序列的种系DNA或cDNA来获得，例如使用聚合酶链式反应(PCR)。人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列是本领域已知的(参见例如，the“VBASE”human germline sequence database；see alsoKabat et al.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,FifthEdition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242；Tomlinson et al.,1992,J.Mol.Biol.22T:116-198；和Cox et al.,1994,Eur.J.Immunol.24:827-836；其中每篇的内容均通过引用并入本文)。
一旦获得编码抗糖-cMET抗体相关的VH和VL片段的DNA片段，可以通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如将可变区基因转化为全长抗体链基因、转化为Fab片段基因或转化为scFv基因。在这些操作中，编码VH或VL的DNA片段可操作地连接至编码另一种蛋白质的另一个DNA片段，例如抗体恒定区或柔性接头。本文中使用的术语“可操作地连接”意指两个DNA片段被连接，使得由两个DNA片段编码的氨基酸序列保持在读码框内。
通过将编码VH的DNA可操作地连接至编码重链恒定区(CH1、CH2、CH3和任选地CH4)的另一个DNA分子，可以将编码VH区的分离的DNA转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如，Kabat et al.,1991,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242)并且涵盖这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但在某些实施方案中是IgGl或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，编码VH的DNA可以可操作地连接至仅编码重链CH1恒定区的另一个DNA分子。
通过将编码VL的DNA可操作地连接至编码轻链恒定区CL的另一个DNA分子，可以将编码VL区的分离的DNA转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如，Kabat et al.,1991,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242)并且涵盖这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区，但在某些实施方案中是κ恒定区。
为了产生scFv基因，可以将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接到另一个编码柔性接头的片段上，例如编码氨基酸序列(Gly4～Ser)3，使得VH和VL序列可以表达为连续的单链蛋白质，其中VH和VL区域通过柔性接头连接(参见例如，Bird et al.,1988,Science 242:423-426；Huston et al.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；McCafferty etal.,1990,Nature 348:552-554)。
为了表达本公开的抗糖-cMET抗体，将如上所述获得的编码部分或全长轻链和重链的DNA插入表达载体中，使得基因可操作地连接至转录和翻译控制序列。在本文中，术语"可操作地连接"意指将抗体基因连接到载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列发挥其调节抗体基因的转录和翻译的预期功能。选择与所用表达宿主细胞相容的表达载体和表达控制序列。抗体轻链基因和抗体重链基因可以插入到单独的载体中，或者更典型地，两个基因都插入到相同的表达载体中。
通过标准方法将抗体基因插入表达载体中(例如，连接抗体基因片段和载体上的互补限制性位点，或者如果不存在限制性位点则进行平末端连接)。在插入抗糖-cMET抗体相关轻链或重链序列之前，表达载体可以已经携带抗体恒定区序列。例如，将抗糖-cMET单克隆抗体相关的VH和VL序列转化为全长抗体基因的一种方法是将它们分别插入已经编码重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，使得VH片段可操作地连接至载体内的CH片段，并且VL片段可操作地连接至载体内的CL片段。另外地或替代性地，重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。可以将抗体链基因克隆到载体中，使得信号肽框内连接至抗体链基因的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
除了抗体链基因之外，本公开的重组表达载体还携带控制抗体链基因在宿主细胞中表达的调控序列。术语“调控序列”旨在包括控制抗体链基因的转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，聚腺苷酸化信号)。这种调控序列描述于，例如Goeddel,Gene Expression Technology:Methods in Enzymology 185,Academic Press,SanDiego,Calif.,1990中。本领域技术人员应当理解，表达载体的设计，包括调控序列的选择，可以取决于诸如待转化的宿主细胞的选择、期望蛋白质的表达水平等因素。用于哺乳动物宿主细胞表达的合适的调控序列包括指导哺乳动物细胞中高水平蛋白质表达的病毒元件，如衍生自巨细胞病毒(CMV)的启动子和/或增强子(如CMV启动子/增强子)、猿猴病毒40(SV40)(如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒。关于病毒调控元件及其序列的进一步描述，参见例如Stinski等人的美国专利号5,168,062,Bell等人的美国专利号4,510,245,和Schaffner等人的美国专利号4,968,615。
除了抗体链基因和调控序列之外，本公开的重组表达载体可以携带另外的序列，例如调节载体在宿主细胞中复制的序列(例如，复制起点)和选择性标志物基因。选择性标志物基因有助于选择已引入载体的宿主细胞(参见例如，Axel等人的美国专利号4，399，216号、4，634，665和5,179,017)。例如，通常选择性标志物基因赋予已引入载体的宿主细胞对药物例如G418、潮霉素或甲氨蝶呤的抗性。合适的选择性标志物基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于使用甲氨蝶呤选择/扩增的DHFR-宿主细胞)和neo基因(用于G418选择)。为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染至宿主细胞中。术语“转染”的各种形式旨在涵盖通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞的多种技术，例如电穿孔、脂转染、磷酸钙沉淀、DEAE--右旋糖酐转染等。
可以在原核或真核宿主细胞中表达本公开的抗体。在某些实施方案中，抗体的表达在正确折叠的和免疫活性的抗体的最佳分泌的真核细胞中进行，例如哺乳动物宿主细胞。用于表达本公开的重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括DHFR-CHO细胞,描述于Urlaub and Chasin,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220,与DHFR选择性标志物一起使用,例如,如Kaufman and Sharp,1982,Mol.Biol.159:601-621中描述的)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当编码抗体基因的重组表达载体被引入哺乳动物宿主细胞时，通过将宿主细胞培养足够长的时间来产生抗体，该时间足以允许抗体在宿主细胞中表达或将抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。宿主细胞还可用于生产完整抗体的部分，如Fab片段或scFv分子。应当理解，上述过程的变化在本公开的范围内。例如，可能期望用编码本公开的抗糖-cMET抗体的轻链或重链(但不是两者)的DNA转染宿主细胞。
为了表达本公开的CAR，例如如第5.3节和编号实施方案689至724中所述，优选宿主细胞是T细胞，优选人T细胞。在一些实施方案中，当细胞与肿瘤细胞上的cMET交联时，宿主细胞表现出抗肿瘤免疫。产生本公开的T细胞的详细方法在第5.7.1节中描述。
为了表达本公开的TCR，例如如第5.4节和编号实施方案735至834中所述，优选宿主细胞是T细胞，优选人T细胞。在一些实施方案中，当细胞与肿瘤细胞上的糖-cMET交联时，宿主细胞表现出抗肿瘤免疫。产生本公开的T细胞的详细方法在第5.7.1节中描述。
重组DNA技术还可用于去除编码轻链和重链之一或两者的部分或全部DNA，这些DNA对于结合糖-cMET来说不是必需的。由此类截短的DNA分子表达的分子也涵盖在本公开的抗体内。
对于本公开的抗糖-cMET抗体的重组表达，可以用本公开的两种表达载体共转染宿主细胞，第一载体编码重链衍生的多肽，第二载体编码轻链衍生的多肽。两个载体可以含有相同的选择性标志物，或者它们可以各自含有单独的选择性标志物。替代性地，可以使用编码重链和轻链多肽的单一载体。
一旦核酸编码抗糖-cMET抗体的一个或多个部分，可以将更多改变或突变引入编码序列中，例如以生成编码具有不同CDR序列的抗体、与Fc受体亲和力降低的抗体或不同亚类的抗体的核酸。
还可以通过化学合成(例如，通过Solid Phase Peptide Synthesis,2nd ed.,1984The Pierce Chemical Co.,Rockford,Ill.中描述的方法)产生本公开的抗糖-cMET抗体。还可以使用无细胞平台生成变体抗体(参见例如，Chu et al.,Biochemia No.2,2001(Roche Molecular Biologicals)和Murray et al.,2013,Current Opinion in ChemicalBiology,17:420-426)。
一旦通过重组表达产生了本公开的抗糖-cMET抗体，就可以通过本领域已知的用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法来纯化它，例如通过层析(例如，离子交换、亲和力和尺寸柱色谱)、离心、差异溶解度或任何其他用于纯化蛋白质的标准技术。此外，本公开的抗糖-cMET抗体和/或结合片段可以与本文所述或本领域已知的异源多肽序列融合以促进纯化。
一旦分离，如果期望，抗糖-cMET抗体可以进一步纯化，例如通过高效液相色谱(参见，例如，Fisher,Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology,Work and Burdon,eds.,Elsevier,1980)，或通过SuperdexTM75柱上的凝胶过滤色谱法(Pharmacia Biotech AB,Uppsala,Sweden)。
5.7.1.T细胞中CAR和嵌合TCR的重组产生
在一些实施方案中，使用逆转录病毒或慢病毒载体将编码本公开的抗糖-cMETCAR或嵌合TCR的核酸递送到细胞中。表达CAR或嵌合TCR的逆转录病毒和慢病毒载体可以使用转导细胞作为载体或无细胞局部或全身递送包封的、结合的或裸露的载体而递送到不同类型的真核细胞以及组织和整个生物体中。所用的方法可以用于其中需要稳定表达或稳定表达足够的任何目的。
在其他实施方案中，使用体外转录的mRNA将CAR或嵌合TCR序列递送至细胞中。体外转录的mRNA CAR或嵌合TCR可以使用转染细胞作为载体或无细胞局部或全身递送包封的、结合的或裸露的mRNA而递送到不同类型的真核细胞以及组织和整个生物体中。所用的方法可以用于其中需要瞬间表达或瞬间表达足够的任何目的。
在另一个实施方案中，期望的CAR或嵌合TCR可以通过转座子在细胞中表达。
本公开的RNA转染方法的一个优点是RNA转染基本上是瞬时的且无需载体：RNA转基因可被递送至淋巴细胞并在短暂的体外细胞激活后在其中表达，作为最小表达盒而不需要任何另外的病毒序列。在这些条件下，转基因整合到宿主细胞基因组中是不可能的。由于RNA的转染效率及其均匀修饰整个淋巴细胞群的能力，细胞克隆不是必需的。
用体外转录的RNA(IVT-RNA)对T细胞进行遗传修饰利用了两种不同的策略，这两种策略都已在各种动物模型中成功进行了测试。通过脂转染或电穿孔用体外转录的RNA转染细胞。优选地，期望使用各种修饰来稳定IVT-RNA，以实现转移的IVT-RNA的延长表达。
一些IVT载体在文献中是已知的，它们以标准化的方式用作体外转录的模板，并且已经以产生稳定的RNA转录本的方式进行了遗传修饰。本领域目前使用的方案基于具有以下结构的质粒载体:能够进行RNA转录的5’RNA聚合酶启动子，随后是3’和/或5’侧翼为非翻译区(UTR)的感兴趣的基因，以及含有50-70个核苷酸的3’聚腺苷酸盒。在体外转录之前，通过II型限制酶(识别序列对应于切割位点)将环状质粒在聚腺苷酸盒的下游线性化。因此，聚腺苷酸盒对应于转录本中后来的聚(A)序列。作为该程序的结果，一些核苷酸在线性化后作为酶切割位点的一部分保留下来，并在3’末端延伸或掩盖聚(A)序列。尚不清楚这种非生理突出端是否影响这种构建体在细胞内产生的蛋白质数量。
与更传统的质粒或病毒方法相比，RNA有几个优点。来自RNA来源的基因表达不需要转录，并且在转染后快速产生蛋白质产物。此外，由于RNA只能进入细胞质而不是细胞核，因此典型的转染方法导致极高的转染率。此外，基于质粒的方法要求驱动感兴趣的基因表达的启动子在所研究的细胞中具有活性。
另一方面，可以通过电穿孔将RNA构建体递送到细胞中。参见例如US 2004/0014645、US2005/0052630A1、US2005/0070841A1、US2004/0059285A1、US2004/0092907A1中教导的将核酸构建体电穿孔引入哺乳动物细胞的制剂和方法。任何已知细胞类型的电穿孔所需的包括电场强度在内的各种参数在相关研究文献以及该领域的许多专利和申请中是公知的。参见例如，美国专利号6,678,556、美国专利号7,171,264和美国专利号7,173,116。用于电穿孔治疗应用的装置可从商业上获得，例如MedPulserTMDNA ElectroporationTherapy System(Inovio/Genetronics,San Diego,Calif.)，并描述于专利中如美国专利号6,567,694；美国专利号6,516,223、美国专利号5,993,434、美国专利号6,181,964、美国专利号6,241,701和美国专利号6,233,482；电穿孔也可用于体外细胞转染，如US20070128708A1中所述。电穿孔也可用于在体外将核酸递送到细胞中。因此，利用本领域技术人员已知的许多可用装置和电穿孔系统中的任何一种将包括表达构建体的核酸电穿孔介导施用到细胞中，提供了将感兴趣的RNA递送到靶细胞的令人兴奋的新方法。
5.7.1.1 T细胞的来源
在扩增和遗传修饰之前，从受试者获得T细胞来源。术语“受试者”旨在包括可引发免疫应答的活生物体(例如哺乳动物)。受试者的实例包括人、狗、猫、小鼠、大鼠及其转基因物种。优选地，受试者是人类。
T细胞可以从多种来源获得，包括外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、感染部位组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在本公开的某些实施方案中，可以使用本领域中可获得的任何数量的T细胞系。在本公开的某些实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的许多技术，例如FicollTM分离，从受试者收集的单位血液中获得T细胞。在一个优选的实施方案中，来自个体循环血液的细胞通过单采获得。单采产物通常含有淋巴细胞包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。在一个实施方案中，可以洗涤通过单采收集的细胞以除去血浆部分，并将细胞置于合适的缓冲液或培养基中用于后续处理步骤。在本公开的一个实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞。在替代实施方案中，洗涤溶液不含钙，可以不含镁，或者可以不含许多二价阳离子(如果不是全部)。同样令人惊讶的是，在没有钙的情况下，最初的激活步骤导致了放大的激活。如本领域普通技术人员将容易理解的，洗涤步骤可通过本领域技术人员已知的方法完成，例如根据制造商的说明使用半自动“流通”离心机(例如Cobe2991细胞处理器、Baxter CytoMate或Haemonetics细胞回收器5)。洗涤后，可将细胞重悬于各种生物相容性缓冲液中，如无钙、无镁的PBS、PlasmaLyte A或其他含或不含缓冲液的盐溶液。或者，可以除去单采样品中不期望的组分，并将细胞直接重悬于培养基中。
在另一个实施方案中，可通过裂解红细胞并耗竭单核细胞，例如通过PERCOLLTM梯度离心或通过逆流离心淘析，从外周血淋巴细胞中分离出T细胞。可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离特定的T细胞亚群，如CD3+、CD28’、CD4+、CD8+、CD45RA+和CD45RO+T细胞。例如，在一个实施方案中，通过与抗-CD3/抗-CD28(即，3x28)缀合的珠(如M-450CD3/CD28 T)孵育足够用于期望T细胞的阳性选择的时间段来分离T细胞。在一个实施方案中，该时间段为约30分钟。在进一步的实施方案中，该时间段的范围为30分钟至36小时或更长以及其间的所有整数值。在进一步的实施方案中，该时间段是至少1、2、3、4、5或6小时。在又一个优选实施方案中，该时间段为10至24小时。在一个优选的实施方案中，孵育时间为24小时。对于T细胞从白血病患者中的分离，较长的孵育时间(如24小时)的使用可以提高细胞产量。在与其他细胞类型相比T细胞很少的任何情况下，可以使用更长的孵育时间来分离T细胞，例如从肿瘤组织或免疫受损个体中分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。此外，更长的孵育时间的使用可以提高捕获CD8+T细胞的效率。因此，通过简单地缩短或延长允许T细胞与CD3/CD28珠结合的时间和/或通过增加或降低珠与T细胞的比率(如本文进一步所述)，可以优先选择T细胞亚群用于或针对培养起始或在此过程中的其他时间点。此外，通过增加或减少珠或其他表面上的抗CD3和/或抗CD28抗体的比率，可以优先选择T细胞亚群用于或针对培养起始或其他期望时间点。本领域技术人员将认识到，在本公开的上下文中也可以使用多轮选择。在某些实施方案中，可以期望执行选择程序并在激活和扩增过程中使用“未选择”的细胞。“未选择”的细胞也可以进行进一步轮次的选择。
T细胞群通过阴性选择的富集可以用针对阴性选择细胞特有的表面标志物的抗体组合来完成。一种方法是经由负磁免疫粘附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择，其使用针对存在于阴性选择细胞上的细胞表面标志物的单克隆抗体混合物。例如，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在某些实施方案中，可能期望富集或阳性选择通常表达CD4+、CD25+、CD62Lhi、GITR+和FoxP3+的调节性T细胞。或者，在某些实施方案中，通过抗C25缀合珠或其他类似的选择方法来耗竭调节性T细胞。
为了通过阳性或阴性选择分离期望的细胞群体，可以改变细胞和表面(例如，颗粒如珠子)的浓度。在某些实施方案中，可能期望显著减少珠子和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞的浓度)，以确保细胞和珠子的最大接触。例如，在一个实施方案中，使用20亿细胞/ml的浓度。在一个实施方案中，使用10亿细胞/ml的浓度。在另一个实施方案中，使用大于1亿个细胞/ml。在进一步的实施方案中，使用10、15、20、25、30、35、40、45或50百万细胞/ml的细胞浓度。在另一个实施方案中，使用75、80、85、90、95或100百万细胞/ml的细胞浓度。在进一步的实施方案中，使用125或150百万细胞/ml的浓度。使用高浓度可导致增加的细胞产量、细胞活化和细胞扩增。此外，使用高细胞浓度允许更有效地捕获可能微弱表达感兴趣的靶标抗原的细胞，例如CD28阴性T细胞，或来自存在许多肿瘤细胞的样品(即，白血病血液、肿瘤组织等)的细胞。这种细胞群可能具有治疗价值，因此期望获得。例如，使用高浓度的细胞可以更有效地选择通常具有较弱CD28表达的CD8+T细胞。
在相关的实施方案中，可能期望使用较低浓度的细胞。通过显著稀释T细胞和表面的混合物(例如，颗粒如珠子)，颗粒和细胞之间的相互作用被最小化。这选择了表达大量期望抗原的细胞与颗粒结合。例如，CD4+ T细胞表达更高水平的CD28，并且在稀释浓度下比CD8+ T细胞更有效地被捕获。在一个实施方案中，使用的细胞浓度为5×106/ml。在其他实施方案中，使用的浓度可以是约1×105/ml至1×106/ml，以及其之间的任何整数值。
在其他实施方案中，细胞可以在2℃-10℃或室温下以不同的速度在旋转器上孵育不同的时长。
用于刺激的T细胞也可以在洗涤步骤后冷冻。不希望被理论所束缚，冷冻和随后的解冻步骤通过去除细胞群体中的粒细胞和一定程度的单核细胞而提供了更均匀的产物。在去除血浆和血小板的洗涤步骤后，细胞可以悬浮在冷冻溶液中。尽管许多冷冻溶液和参数在本领域中是已知的并且在本文中是有用的，但一种方法涉及使用含有20％ DMSO和8％人血清白蛋白的PBS，或含有10％葡聚糖40和5％葡萄糖、20％人血清白蛋白和7.5％ DMSO的培养基，或31.25％ Plasmalyte-A、31.25％葡萄糖5％、0.45％ NaCl、10％葡聚糖40和5％葡萄糖、20％人血清白蛋白和7.5％ DMSO的培养基或含有例如Hespan和PlasmaLyte A的其他合适的细胞冷冻介质，然后以每分钟1°的速度将细胞冷冻至-80℃，并储存在液氮储存罐的气相中。可以使用其他受控冷冻方法，也可以在-20℃或液氮中立即进行非受控冷冻。
在某些实施方案中，冷冻保存的细胞如本文所述被解冻和洗涤，并允许在使用本公开的方法活化前在室温下静置一小时。
在本公开的上下文中还考虑了在可能需要本文所述的扩增细胞之前的一段时间从受试者收集血样或单采产物。因此，可以在任何需要的时间点收集待扩增的细胞源，并分离和冷冻期望的细胞，例如T细胞，以供以后用于将受益于T细胞疗法的许多疾病或病症的T细胞疗法，例如本文所述的那些。在一个实施方案中，血液样品或单采取自总体健康的受试者。在某些实施方案中，血液样品或单采来自有患病风险但尚未患病的总体健康受试者，分离并冷冻感兴趣的细胞以备后用。在某些实施方案中，T细胞可以扩增、冷冻并在以后使用。在某些实施方案中，在如本文所述的特定疾病诊断后不久但在任何治疗前从患者收集样品。在另一个实施方案中，在任何数量的相关治疗方式之前，从受试者的血液样品或单采中分离细胞，所述治疗方式包括但不限于用诸如那他珠单抗、依法珠单抗、抗病毒剂、化疗、放疗、免疫抑制剂(如环孢菌素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、霉酚酸酯和FK506)、抗体或其他免疫清除剂(如CAMPATH、抗CD3抗体、环磷酰胺、氟达拉滨、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸、类固醇、FR901228和辐射治疗)。这些药物抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶(环孢素和FK506)或抑制对生长因子诱导的信号传导很重要的p70S6激酶(雷帕霉素)。(Liu et al.,Cell66:807-815,1991；Henderson et al.,Immun.73:316-321,1991；Bierer et al.,Curr.Opin.Immun.5:763-773,1993)。在另一个实施方案中，针对患者分离细胞并冷冻以备后续与骨髓或干细胞移植或T细胞消融治疗结合使用(例如，之前、同时或之后)，该T细胞消融治疗使用化疗剂例如氟达拉滨、外束放射治疗(XRT)、环磷酰胺。
在本发明的另一个实施方案中，T细胞是在治疗后直接从患者体内获得的。在这方面，已经观察到，在某些癌症治疗后，特别是用损害免疫系统的药物进行治疗，治疗后不久在患者通常从该治疗中恢复的期间，获得的T细胞的质量可能是最佳的或提高了其离体扩增的能力。同样，在使用本文所述方法进行离体操作后，这些细胞可能处于增强移植和体内扩增的优选状态。因此，在本公开的范围内，预期在该恢复阶段收集血细胞，包括T细胞、树突状细胞或造血谱系的其他细胞。此外，在某些实施方案中，动员(例如，用GM-CSF动员)和调理方案可用于在受试者中产生有利于特定细胞类型的再增殖、再循环、再生和/或扩增的状况，尤其是在治疗后的确定时间窗口期间。说明性的细胞类型包括T细胞、B细胞、树突状细胞和免疫系统的其他细胞。
5.7.1.2T细胞的活化和扩增
通常使用以下描述的方法激活和扩增T细胞,例如美国专利号6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；和美国专利申请公开号20060121005中所述。
通常，本公开的T细胞通过与附接有刺激CD3/TCR复合物相关信号的药剂和刺激T细胞表面上的共刺激分子的配体的表面接触而扩增。具体而言，T细胞群体可以如本文所述被刺激，例如通过与固定在表面上的抗CD3抗体或其抗原结合片段或抗CD2抗体接触，或者通过与蛋白激酶C激活剂(例如，苔藓抑素)和钙离子载体接触。对于在T细胞表面上的辅助分子的共刺激，使用结合辅助分子的配体。例如，在适于刺激T细胞增殖的条件下，T细胞群可以与抗CD3抗体和抗CD28抗体接触。为了刺激CD4+T细胞或CD8+T细胞的增殖，抗CD3抗体和抗CD28抗体。抗CD28抗体的实例包括9.3、B-T3、XR-CD28(Diaclone，Besancon，法国)，可以如本领域公知的其他方法使用(Berg et al.,Transplant Proc.30(8):3975-3977,1998；Haanen et al.,J.Exp.Med.190(9):13191328,1999；Garland et al.,J.ImmunolMeth.227(1-2):53-63,1999)。
在某些实施方案中，T细胞的初级刺激信号和共刺激信号可以由不同的方案提供。例如，提供每个信号的药剂可以在溶液中或偶联到表面。当与表面偶联时，药剂可以与同一表面偶联(即“顺式”形成)或与不同的表面偶联(即“反式”形成)。或者，一种药剂可以与表面偶联，另一种试剂在溶液中。在一个实施方案中，提供共刺激信号的药剂与细胞表面结合，提供初级激活信号的药剂在溶液中或与表面偶联。在某些实施方案中，两种药剂都可以在溶液中。在另一个实施方案中，药剂可以是可溶形式，然后交联到表面上，例如表达Fc受体或抗体或其他将结合药剂的结合剂的细胞。在这方面，参见例如美国专利申请公开号20040101519和20060034810用于人工抗原呈递细胞(APC)，其在本公开中被考虑用于激活和扩增T细胞。
在一个实施方案中，两种药剂固定在珠子上，或者固定在同一珠子上，即“顺式”，或者固定在不同的珠子上，即“反式”。举例来说，提供初级激活信号的试剂是抗CD3抗体或其抗原结合片段，提供共刺激信号的试剂是抗CD28抗体或其抗原结合片段；并且两种药剂以相等的分子量共固定在同一珠子上。在一个实施方案中，使用1：1比例的每种抗体与珠子结合用于CD4+T细胞扩增和T细胞生长。在本公开的某些方面，使用与珠结合的抗CD3:CD28抗体的比例，使得与使用1：1的比例观察到的扩增相比，观察到T细胞扩增增加。在一个特定的实施方案中，与使用1：1的比例观察到的扩增相比，观察到约1至约3倍的增加。在一个实施方案中，结合到珠上的CD3：CD28抗体的比例范围为100：1至1：100以及其间的所有整数值。在本公开的一个方面，与抗CD3抗体相比，更多的抗CD28抗体结合到颗粒上，即CD3：CD28的比率小于1。在本公开的某些实施方案中，结合到珠上的抗CD28抗体与抗CD3抗体的比例大于2：1。在一个特定的实施方案中，使用1：100 CD3：CD28比例的抗体结合珠。在另一个实施方案中，使用1：75CD3：CD28比例的抗体结合珠。在进一步的实施方案中，使用1：50 CD3：CD28比例的抗体结合珠。在另一个实施方案中，使用1：30 CD3：CD28比例的抗体结合珠。在一个优选的实施方案中，使用1：10 CD3：CD28比例的抗体结合珠。在另一个实施方案中，使用1：3 CD3：CD28比例的抗体结合珠。在另一个实施方案中，使用3：1 CD3：CD28比例的抗体结合珠。
颗粒与细胞的比例从1：500到500：1以及其间的任何整数值可用于刺激T细胞或其他靶细胞。本领域普通技术人员可以容易地理解，颗粒与细胞的比例可能取决于相对于靶细胞的颗粒大小。例如，小尺寸的珠子只能结合少数细胞，而较大的珠子可以结合许多细胞。在某些实施方案中，细胞与颗粒的比例范围为1：100至100：1以及其间的任何整数值，在进一步的实施方案中，该比例包括1：9至9：1以及其间的任何整数值，也可以用来刺激T细胞。如上所述，导致T细胞刺激的抗CD3-和抗CD28-偶联颗粒与T细胞的比例可以变化，然而某些优选值包括1：100、1：50、1：40、1：30、1：20、1：10、1：9、1：8、1：7、1：6、1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8:1、9:1、10:1和15:1，其中一个优选的比例是每个T细胞至少1:1的颗粒。在一个实施方案中，使用的颗粒与细胞的比例为1:1或更少。在一个特定实施方案中，优选的颗粒与细胞的比例为1：5。在进一步的实施方案中，颗粒与细胞的比例可以根据刺激的日期而变化。例如，在一个实施方案中，在第一天，颗粒与细胞的比例为1：1至10：1，此后每天或每隔一天向细胞中加入另外的颗粒，持续最高达10天，最终比例为1：1至1：10(基于加入当天的细胞计数)。在一个特定的实施方案中，颗粒与细胞的比例在刺激的第一天为1：1，在刺激的第三天和第五天调节至1：5。在另一个实施方案中，每天或每隔一天基础上添加颗粒，第一天的最终比例为1：1，第三天和第五天的最终比例为1：5。在另一个实施方案中，颗粒与细胞的比例在刺激的第一天为2:1，在刺激的第三天和第五天调节至1:10。在另一个实施方案中，每天或每隔一天基础上添加颗粒，第一天的最终比例为1：1，刺激第三天和第五天的最终比例为1:10。本领域技术人员将理解，多种其他比例可能适用于本公开。具体而言，比例将根据颗粒大小和细胞大小和类型而变化。
在本公开的进一步实施方案中，将细胞(如T细胞)与药剂包被的珠子结合，随后分离珠子和细胞，然后培养细胞。在备选实施方案中，在培养前，药剂包被的珠子和细胞不分离，而是一起培养。在进一步的实施方案中，首先通过施加力(例如磁力)浓缩珠子和细胞，导致细胞表面标志物的连接增加，从而诱导细胞刺激。
举例来说，可以通过使附接有抗CD3和抗CD28的顺磁性珠(3×28珠)接触T细胞来连接细胞表面蛋白。在一个实施方案中，细胞(例如，104至109个T细胞)和珠子(例如，1：1比例的M-450 CD3/CD28 T顺磁性珠子)在缓冲液中结合，优选PBS(不含二价阳离子如钙和镁)。同样，本领域普通技术人员可以容易地理解可以使用任何细胞浓度。例如，靶细胞在样品中可能非常稀少，仅占样品的0.01％，或者整个样品(即100％)可能包含感兴趣的靶细胞。因此，任何细胞数量都在本公开的范围内。在某些实施方案中，可能期望显著减少颗粒和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞的浓度)，以确保细胞和颗粒的最大接触。例如，在一个实施方案中，使用约20亿细胞/ml的浓度。在另一个实施方案中，使用大于1亿个细胞/ml。在进一步的实施方案中，使用10、15、20、25、30、35、40、45或50百万细胞/ml的细胞浓度。在另一个实施方案中，使用75、80、85、90、95或100百万细胞/ml的细胞浓度。在进一步的实施方案中，使用125或150百万细胞/ml的浓度。使用高浓度可导致增加的细胞产量、细胞活化和细胞扩增。此外，使用高细胞浓度允许更有效地捕获可能微弱表达感兴趣的靶标抗原的细胞，例如CD28阴性T细胞。这种细胞群可能具有治疗价值，并且在某些实施方案中是期望获得的。例如，使用高浓度的细胞可以更有效地选择通常具有较弱CD28表达的CD8+T细胞。
在本公开的一个实施方案中，混合物可以培养数小时(约3小时)至约14天或其间的任何小时整数值。在另一个实施方案中，混合物可以培养21天。在本公开的一个实施方案中，珠子和T细胞一起培养约八天。在另一个实施方案中，珠子和T细胞一起培养2-3天。还可能期望若干刺激周期，使得T细胞的培养时间可以是60天或更长。适于T细胞培养的条件包括合适的培养基(例如，最小必需培养基或RPMI培养基1640或X-vivo 15(Lonza))，其可含有增殖和生存力所必需的因子，包括血清(例如，胎牛或人血清)、白细胞介素-2(IL-2)、胰岛素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ和TNF-α或本领域技术人员已知的用于细胞生长的任何其他添加剂。用于细胞生长的其他添加剂包括但不限于表面活性剂、人血浆蛋白粉和还原剂如N-乙酰半胱氨酸和2-巯基乙醇。培养基可以包括RPMI 1640、AIM-V、DMEM、MEM、α-MEM、F-12、X-Vivo 15和X-Vivo 20、优化剂，同时添加了氨基酸、丙酮酸钠和维生素，或者是无血清的，或者补充了适量的血清(或血浆)或确定的激素组和/或一定量的足以使T细胞生长和扩增的细胞因子。抗生素(如青霉素和链霉素)仅包含在实验培养物中，而不包含在要输注给受试者的细胞培养物中。将靶细胞维持在支持生长所必需的条件下，例如合适的温度(例如37℃)和气氛(例如空气加5％ CO2)。
暴露于不同刺激时间的T细胞可能表现出不同的特征。例如，典型的血液或单采外周血单核细胞产品具有辅助性T细胞群体(TH、CD4+)，其大于细胞毒性或抑制性T细胞群体(TC、CD8+)。通过刺激CD3和CD28受体进行的T细胞离体扩增产生了在大约8-9天之前主要由TH细胞组成的T细胞群，而在大约8-9天之后，T细胞群包含越来越多的TC细胞群。因此，根据治疗目的，用主要包含TH细胞的T细胞群输注受试者可能是有利的。类似地，如果已经分离出TC细胞的抗原特异性亚组，则在更大程度上扩展该亚组可能是有益的。
此外，除了CD4和CD8标志物，其他表型标志物变化显著，但在很大程度上，在细胞扩增过程中是可重复的。因此，这种再现性使得能够针对特定目的定制活化的T细胞产物。
5.8组合物
本发明的抗糖-cMET抗体、融合蛋白和/或抗糖-cMET ADC可以是包含抗糖-cMET抗体、融合蛋白和/或ADC以及一种或多种载体、赋形剂和/或稀释剂的组合物的形式。组合物可以配制用于特定用途，如用于兽医用途或人的药物用途。组合物的形式(例如，干粉、液体制剂等)和所使用的赋形剂、稀释剂和/或载剂将取决于抗体、融合蛋白和/或ADC的预期用途以及对于治疗用途而言的施用方式。
对于治疗用途，组合物可以作为包括药学上可接受的载剂的无菌药物组合物的一部分提供。该组合物可以是任何合适的形式(取决于将其施用于患者的期望方法)。药物组合物可以通过多种途径施用于患者，如经口、经皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、瘤内、鞘内、外用或局部。在任何给定情况下，最合适的施用途径将取决于特定的抗体和/或ADC、受试者、疾病的性质和严重程度以及受试者的身体状况。通常，药物组合物将通过静脉内或皮下施用。
药物组合物可以方便地以单位剂型存在，每剂单位剂型含有预定量的本公开抗糖-cMET抗体和/或抗糖-cMET ADC。单位剂量中包括的抗体和/或ADC的量将取决于待治疗的疾病以及本领域熟知的其他因素。此类单位剂量可以是含有一定量的适合单次施用的抗体和/或ADC的冻干干粉形式，或者液体形式。干粉单位剂型可以与注射器、适量的稀释剂和/或可用于施用的其他组分一起包装在试剂盒中。液体形式的单位剂量可以方便地以预填充有适合单次施用的一定量的抗体和/或ADC的注射器形式提供。
药物组合物也可以以含有适合多次施用的ADC的数量的批量形式提供。
通过将具有期望纯度的抗体、融合蛋白和/或ADC与本领域通常使用的任选的药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(所有这些在本文中称为“载剂”)(即缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂、非离子去污剂、抗氧化剂和其他杂项添加剂)混合，可以制备药物组合物作为冻干制剂或水溶液储存。参见Remington’s Pharmaceutical Sciences,16th edition(Osol,ed.1980)。此类添加剂在所采用的剂量和浓度下对接受者应该是无毒的。
缓冲剂有助于将pH值维持在接近生理条件的范围内。它们可以以多种浓度存在，但通常以约2mM至约50mM的浓度存在。用于本公开的合适的缓冲剂包括有机酸和无机酸及其盐，如柠檬酸盐缓冲剂(例如，柠檬酸一钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸一钠混合物等)，琥珀酸盐缓冲剂(例如，琥珀酸-琥珀酸一钠的混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等)，酒石酸盐缓冲剂(例如，酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等)，富马酸缓冲剂(例如，富马酸-富马酸一钠混合物、富马酸-富马酸二钠混合物、富马酸一钠-富马酸二钠混合物等)，葡萄糖酸缓冲剂(例如葡萄糖酸-葡萄糖酸钠混合物、葡萄糖酸-氢氧化钠混合物、葡萄糖酸-葡萄糖酸钾混合物等)，草酸盐缓冲剂(例如草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等)，乳酸缓冲剂(例如乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等)和乙酸盐缓冲剂(例如乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等)。另外，可以使用磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和三甲胺盐如Tris。
可以添加防腐剂以阻止微生物生长，并且可以以约0.2％-1％(w/v)的范围的量添加。用于本公开的合适的防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基苄基氯化铵、苯扎卤化铵(例如，氯化物、溴化物和碘化物)、氯化六甲铵、和对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、邻苯二酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。可以添加有时被称为“稳定剂”的等渗剂以确保本公开的液体组合物的等渗性，并且等渗剂包括多元糖醇，例如三元或更高级的糖醇，如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇。稳定剂是指广泛的赋形剂，其涵盖范围可以从填充剂到使治疗剂溶解或有助于防止变性或粘附于容器壁的添加剂。典型的稳定剂可以是多元糖醇(上面列举的)；氨基酸，如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等；有机糖或糖醇，如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、半乳糖醇、甘油等，包括环糖醇如肌醇；聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫的还原剂，如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽(例如，10个残基或以下的肽)；蛋白质，如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮单糖，如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖，如乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖；和三糖苷，如棉子糖；和多糖，如右旋糖酐。稳定剂可以以每重量ADC 0.5至10wt％范围的量存在。
可以添加非离子表面活性剂或去污剂(也称为“润湿剂”)以帮助溶解糖蛋白并保护糖蛋白免受搅拌引起的聚集，这也允许制剂暴露于剪切表面应力而不引起蛋白质的变性。合适的非离子型表面活性剂包括聚山梨酸酯(20、80等)、poloxamer(184、188等)和普朗尼克(pluronic)多元醇。非离子型表面活性剂可以以约0.05mg/mL至约1.0mg/mL，例如约0.07mg/mL至约0.2mg/mL的范围存在。
其他杂项赋形剂包括填充剂(例如，淀粉)、螯合剂(例如，EDTA)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、甲硫氨酸、维生素E)和助溶剂。
5.9使用方法
本文所述的抗糖-cMET抗体或结合片段可用于各种诊断和治疗方法。在一些实施方案中，可使用本文所述的任何方法(例如，如第5.9.1节所述)诊断患者患有癌症，随后使用本文所述的任何方法(例如，如第5.9.2节所述)治疗患者。本文所述的诊断方法(例如，如第5.9.1节所述)可用于在癌症治疗期间或之后监测患者的癌症状态(包括但不限于第5.9.2节所述的癌症治疗)。
5.9.1.诊断方法
抗糖-cMET抗体或结合片段(包括免疫缀合物和标记的抗体和结合片段)可用于诊断测定。例如，抗体和结合片段可用于免疫测定，如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定、以及免疫沉淀测定，包括免疫组织化学、酶联免疫吸附测定(ELISA)、荧光激活细胞分选(FACS)和蛋白质印迹。
本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段可用于检测包含一种或多种EV的样品(例如液体活检)中的生物标志物的方法。在这样的实施方案中，EV表面生物标志物被本公开的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段识别。检测生物标志物的示例性方法包括但不限于捕获测定、免疫测定，如免疫沉淀；蛋白质印迹；ELISA；免疫组织化学；免疫细胞化学；流式细胞仪；和免疫PCR。在一些实施方案中，免疫测定可以是化学发光免疫测定。在一些实施方案中，免疫测定可以是高通量和/或自动化免疫测定平台。
本文所述的抗糖-cMET抗体或结合片段也可以用于放射照相体内成像，其中将用可检测部分如不透射线剂或放射性同位素标记的抗体施用于受试者，优选地施用于血流中，测定宿主中标记抗体的存在和位置。这种成像技术可用于恶性肿瘤的分期和治疗。
5.9.2.治疗方法
本文所述的抗糖-cMET抗体或结合片段、融合蛋白、ADC和CAR以及嵌合TCR可用于治疗表达糖-cMET的癌症，包括肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胆管癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌或胃癌。
因此，本公开提供了用作药物的如本文所述的抗糖-cMET抗体、结合片段、融合蛋白、ADC、CAR和嵌合TCR，例如用于癌症(例如前述段落中鉴定的任何癌症)的治疗，用于诊断测定，以及用于体内放射成像。本公开进一步提供了如本文所述的抗糖-cMET抗体、结合片段、融合蛋白、ADC、CAR和嵌合TCR在制备药物中的用途，例如用于癌症(例如前述段落中鉴定的任何癌症)治疗的药物。
当使用本公开的CAR或嵌合TCR进行治疗时，本公开的治疗方法包括向患有表达糖-cMET的肿瘤的受试者施用有效量的经遗传修饰的细胞，该细胞经工程化以表达本公开的CAR或嵌合TCR，例如第5.3节或编号实施方案689至724中所述的CAR、第5.4节或编号实施方案735至834中所述的嵌合TCR或第5.6节所述的MicAbody。修饰细胞(尤其是T细胞)以表达CAR或嵌合TCR的方法在第5.7.1节中描述。
当使用本公开的MicAbody进行治疗时，本公开的治疗方法包括向患有表达糖cMET的肿瘤的受试者施用治疗有效量的本公开的MicAbody(例如第5.6节中所述的MicAbody)和遗传修饰的T细胞，该T细胞经工程化以表达包含能够特异性结合MicAbody的NKG2D受体的CAR。
5.10cMET肽
还提供了分离的cMET糖肽或糖cMET肽，其包含氨基酸PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQID NO:286)或其片段。在一些实施方案中，cMET糖肽在PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)氨基酸位置10的丝氨酸残基和氨基酸位置11的苏氨酸残基上被O-连接的GalNAc糖基化。在一些实施方案中，cMET糖肽包含氨基酸 或其片段，其中丝氨酸和苏氨酸残基上的O-连接的GalNAc以粗体和下划线文本显示。示例性的分离的cMET糖肽在编号实施方案894至920中描述。
本公开涵盖分离的cMET糖蛋白的合成和用于产生分离的cMET糖蛋白的重组方法。
在某些实施方案中，使用固相肽合成(SPPS)策略合成分离的cMET肽。SPPS方法是本领域已知的。SPPS通过氨基酸衍生物在固体支持物上的连续反应提供多肽的快速组装。通过交替的N端去保护和偶联反应的重复循环，将连续的氨基酸衍生物添加到多肽中。在其他实施方案中，使用液相肽合成策略合成分离的cMET肽。溶液相肽合成方法是本领域已知的。
为了确保在SEQ ID NO:285的氨基酸位置10的丝氨酸和SEQ ID NO:285的氨基酸位置11的苏氨酸上用GaINAc进行适当的O-连接糖基化，可以在延伸反应中使用预先合成的糖基化氨基酸。
提供了编码分离的cMET糖肽的核酸分子、包含这种核酸的载体以及能够产生本公开的分离的cMET糖肽的宿主细胞。在某些方面，核酸分子编码并且宿主细胞能够表达cMETcMETv6糖肽以及包括cMET cMETv6糖蛋白的融合蛋白。
本公开的分离的cMET糖肽可以通过在宿主细胞中重组表达来制备。为了重组表达cMET糖肽，宿主细胞用携带编码糖肽的DNA的重组表达载体转染，使得糖肽在宿主细胞中表达，并且任选地分泌到培养宿主细胞的培养基中，从该培养基中可以回收糖蛋白(即,分离的)。使用标准重组DNA方法获得cMET糖肽基因，将这些基因掺入重组表达载体并将载体引入宿主细胞，例如Molecular Cloning；A Laboratory Manual,Second Edition(Sambrook,Fritsch and Maniatis(eds),Cold Spring Harbor,N.Y.,1989),122 Current Protocolsin Molecular Biology(Ausubel,F.M.et al.,eds.,Greene Publishing Associates,1989)和美国专利号4,816,397中描述的那些。
可以在原核或真核宿主细胞中表达本公开的cMET糖蛋白。在某些实施方案中，cMET糖蛋白的表达在真核细胞中进行，例如哺乳动物宿主细胞。为了产生本公开的分离的cMET糖蛋白，基于其糖基化SEQ ID NO:285的氨基酸位置10的丝氨酸和SEQ ID NO:285的氨基酸位置10和11的苏氨酸的能力来选择宿主细胞。示例性宿主细胞是COSMC HEK293细胞。
5.10.1.cMET肽组合物
本公开的cMET糖肽可以是包含cMET糖肽和一种或多种载体、赋形剂、稀释剂和/或佐剂的组合物的形式。组合物可以配制用于特定用途，如用于兽医用途或人的药物用途。组合物的形式(例如干粉、液体制剂等)以及所用的赋形剂、稀释剂和/或载体将取决于cMET糖肽的预期用途，以及对于治疗用途而言的施用方式。
对于治疗用途，组合物可以作为无菌药物组合物的一部分提供，该药物组合物包括药学上可接受的载剂和/或药学上可接受的佐剂。该组合物可以是任何合适的形式(取决于将其施用于患者的期望方法)。药物组合物可以通过多种途径施用于患者，如经口、经皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、瘤内、鞘内、外用或局部。在任何给定的情况下，最合适的施用途径将取决于要施用的特定cMET糖肽、受试者、疾病的性质和严重程度以及受试者的身体状况。通常，药物组合物将通过静脉内或皮下施用。
药物组合物可以方便地以单位剂型存在，每剂单位剂型含有预定量的本公开的cMET糖肽。单位剂量中包括的cMET糖肽的量将取决于待治疗的疾病以及本领域熟知的其他因素。此类单位剂量可以是含有一定量的适合单次施用的cMET糖肽的冻干干粉形式，或者液体形式。干粉单位剂型可以与注射器、适量的稀释剂和/或可用于施用的其他组分一起包装在试剂盒中。液体形式的单位剂量可以方便地以预填充有适合单次施用的一定量的cMET糖肽的注射器形式提供。
药物组合物也可以以含有适合多次施用的量的cMET糖肽的批量形式提供。
通过将具有期望纯度的cMET糖肽与本领域通常使用的任选的药学上可接受的载剂、赋形剂、佐剂或稳定剂(所有这些在本文中称为“载剂”)(即缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂、非离子去污剂、抗氧化剂和其他杂项添加剂)混合，可以制备药物组合物作为冻干制剂或水溶液储存。参见Remington’s Pharmaceutical Sciences,16th edition(Osol,ed.1980)。此类添加剂在所采用的剂量和浓度下对接受者应该是无毒的。
在一些实施方案中，组合物包括一种或多种药学上可接受的佐剂。佐剂包括例如铝盐(例如无定形羟基磷酸铝硫酸盐(AAHS)、氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝钾(明矾))、dsRNA类似物、脂质A类似物、鞭毛蛋白、咪唑并喹啉类、CpG ODN、皂苷(例如QS21)、C型凝集素配体(例如TDB)、CD1d配体(α-半乳糖神经酰胺)、M F59、AS01、AS02、AS03、ASO4、AS15、AF03、GLA-SE、IC31、CAF01和病毒颗粒。本领域已知的其他佐剂，包括化学佐剂、遗传佐剂、蛋白质佐剂和脂质佐剂，也可以包括在组合物中。
缓冲剂有助于将pH值维持在接近生理条件的范围内。它们可以以多种浓度存在，但通常以约2mM至约50mM的浓度存在。用于本公开的合适的缓冲剂包括有机酸和无机酸及其盐，如柠檬酸盐缓冲剂(例如，柠檬酸一钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸一钠混合物等)，琥珀酸盐缓冲剂(例如，琥珀酸-琥珀酸一钠的混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等)，酒石酸盐缓冲剂(例如，酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等)，富马酸缓冲剂(例如，富马酸-富马酸一钠混合物、富马酸-富马酸二钠混合物、富马酸一钠-富马酸二钠混合物等)，葡萄糖酸缓冲剂(例如葡萄糖酸-葡萄糖酸钠混合物、葡萄糖酸-氢氧化钠混合物、葡萄糖酸-葡萄糖酸钾混合物等)，草酸盐缓冲剂(例如草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等)，乳酸缓冲剂(例如乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等)和乙酸盐缓冲剂(例如乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等)。另外，可以使用磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和三甲胺盐如Tris。
可以添加防腐剂以阻止微生物生长，并且可以以约0.2％-1％(w/v)的量添加。用于本公开的合适的防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基苄基氯化铵、苯扎卤化铵(例如，氯化物、溴化物和碘化物)、氯化六甲铵、和对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、邻苯二酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。可以添加有时被称为“稳定剂”的等渗剂以确保本公开的液体组合物的等渗性，并且等渗剂包括多元糖醇，例如三元或更高级的糖醇，如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇。稳定剂是指广泛的赋形剂，其涵盖范围可以从填充剂到使治疗剂溶解或有助于防止变性或粘附于容器壁的添加剂。典型的稳定剂可以是多元糖醇(上面列举的)；氨基酸，如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等；有机糖或糖醇，如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、半乳糖醇、甘油等，包括环糖醇如肌醇；聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫的还原剂，如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽(例如，10个残基或以下的肽)；蛋白质，如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮单糖，如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖，如乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖；和三糖苷，如棉子糖；和多糖，如右旋糖酐。稳定剂可以以每重量cMET肽0.5至10wt％范围的量存在。
可以添加非离子表面活性剂或去污剂(也称为“润湿剂”)以帮助溶解糖蛋白并保护糖蛋白免受搅拌引起的聚集，这也允许制剂暴露于剪切表面应力而不引起蛋白质的变性。合适的非离子型表面活性剂包括聚山梨酸酯(20、80等)、polyoxamer(184、188等)和普朗尼克多元醇。非离子型表面活性剂可以以约0.05mg/mL至约1.0mg/mL，例如约0.07mg/mL至约0.2mg/mL的范围存在。
其他杂项赋形剂包括填充剂(例如，淀粉)、螯合剂(例如，EDTA)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、甲硫氨酸、维生素E)和助溶剂。
本公开的示例性cMET肽组合物在编号实施方案921和922中描述。
5.10.2.使用cMET肽的方法
本文所述的cMET肽可用于生产针对肿瘤相关形式的cMET的抗体。可以给动物施用cMET肽。施用的肽的量可以有效地使动物产生针对该肽的抗体。如本文所用，“动物”是指来自生物界动物界的多细胞真核生物。在一些实施方案中，动物是哺乳动物。在一些实施方案中，动物是小鼠或兔。然后可以从动物身上收集产生的抗体。cMET肽可以作为纯化的肽或作为本文提供的组合物的一部分施用。
本文所述的cMET肽可用于引发针对cMET的肿瘤相关形式的免疫应答。可以将有效量的cMET肽施用于动物以使动物产生针对该肽的免疫应答(例如，产生抗体)。
使用本公开的cMET肽的示例性方法在编号实施方案923至926中描述。
6.实施例
6.1实施例1：抗糖-cMET抗体的鉴定和表征
6.1.1.概述
聚糖是重要的膜组分，人体细胞的肿瘤转化实际上总是与蛋白质和脂质的异常糖基化有关。存在几种类型的蛋白质糖基化，包括N-糖基化和许多类型的O-糖基化，但最多样化的类型之一是粘蛋白型GalNAc型O-糖基化(以下称为O-糖基化)。癌症相关的O-聚糖变化特别有趣，最常观察到的异常糖表型是最不成熟的截短O-聚糖结构的表达，称为Tn(GalNAcα1-O-Ser/Thr)、STn(NeuAcα2-6GalNAcα1-O-Ser/Thr)和T(Galβ1-3GalNAcα1-O-Ser/Thr)抗原。在几乎所有上皮癌细胞上都观察到截短的O-聚糖，并且与不良预后密切相关。此外，越来越清楚的是聚糖在癌症发展中也具有关键作用，其中截短的O-聚糖影响分化、细胞-细胞和细胞-基质相互作用，直接诱导易感细胞中的致癌特征。
发明人已经鉴定了人类癌细胞中的cMET糖肽表位并使用确定的糖肽来开发癌症特异性抗糖-cMET单克隆抗体。
6.1.2.材料和方法
6.1.2.1 Tn cMET糖肽的合成
使用标准的FMOC肽合成策略合成cMET糖肽其在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上具有O-连接的GalNAc。使用固相或液相肽化学以逐步方式将预先合成的糖基化氨基酸在特定位置偶联到延伸肽上。完成完整序列并去除所有保护基后，将所得糖肽通过高效液相色谱(HPLC)纯化并通过质谱(正离子模式电喷雾电离)进行表征。
6.1.2.2重组Tn-糖基化cMET的合成
使用30μg编码his标记的人cMET的质粒和60μL 293fectinTM转染试剂(Gibco)转染30mL Opti-MEM中的1x106 COSMC KO HEK293细胞。培养48小时后，将细胞离心并使用50％Ni-NTA琼脂糖浆液柱(Invitrogen)从上清液中纯化his标记的重组cMET蛋白，用250mM咪唑洗脱。为了增加纯度，重复了该纯化步骤。使用Amicon Ultra离心过滤器将重组SC-cMET蛋白浓缩在PBS中。
6.1.2.3小鼠免疫方案
用通过马来酰亚胺接头与KLH(钥孔血蓝蛋白)缀合的Tn-糖基化cMET糖肽皮下免疫雌性Balb/c小鼠。分别在第0、14和35天用50μg、45μg和45μg KLH-糖肽对小鼠进行免疫。第一次免疫使用弗氏完全佐剂。随后的所有免疫均使用弗氏不完全佐剂。在第45天，针对多克隆反应评估尾部出血。在第56天或之后，在杂交瘤融合前3至5天，用弗氏不完全佐剂中的15μg KLH-糖肽加强免疫待融合小鼠。使用来自BTX Harvard Apparatus的电细胞操纵器(ECM2001)将小鼠的脾细胞与SP2/0-Ag14(ATCC,cat#CRL-1581)骨髓瘤细胞融合。将杂交瘤接种在96孔板中，培养、扩增，并使用ELISA、流式细胞术和免疫荧光评估和选择对cMET-Tn的特异性，以获得对cMET-Tn具有特异性的单克隆抗体。
6.1.2.4兔子免疫方案
用通过马来酰亚胺接头与KLH缀合的Tn-糖基化cMET糖肽免疫新西兰白兔。在第0、28和47天用50-200μg KLH糖肽免疫兔子。在第58天，针对多克隆反应评估出血。在第66天或之后，在最终放血采集B细胞前12天，用50-200μg KLH糖肽加强免疫感兴趣的兔子。富集B细胞，接种于96孔板中，培养，并使用ELISA和流式细胞仪评估对cMET-Tn的特异性。对感兴趣的B细胞进行克隆、表达，并通过ELISA、流式细胞仪和免疫荧光法进行筛选，以获得对cMET-Tn具有特异性的单克隆抗体。
6.1.2.5 ELISA
96孔Corning高结合微孔板(Fisher)在4℃下用0.2M碳酸氢盐缓冲液(pH 9.4)中的不同浓度的蛋白质、肽或糖肽包被过夜。然后在室温下用含有2.5％ BSA的磷酸盐缓冲盐水(PBS)(pH 7.4)封闭板1小时。弃去板中的内容物，加入不同浓度的纯化抗体或杂交瘤上清液或用于多克隆反应的血清，并在室温下孵育两小时。用含有0.05％ Tween-20的tris缓冲盐水洗涤板，然后在室温下用1:3000稀释的HRP缀合的山羊抗小鼠IgG Fcγ(Sigma)孵育1小时。再次洗涤板并用TMB色原底物显色。适当显色后(约2-3分钟)，用0.2N H2SO4终止反应，并在450nm处读取吸光度。在GraphPad Prism软件中分析数据。
6.1.2.6流式细胞术
用TrypLE select(Gibco)解离贴壁细胞并用细胞培养基(RPMI w/L-谷氨酰胺、1％链霉素、1x谷氨酰胺和10％ FBS)从烧瓶表面洗脱。通过在4℃下以300*g离心5分钟来洗涤细胞数次，然后重悬于含有1％ BSA的PBS(PBS/1％ BSA)中。将细胞重悬至5x105个细胞/ml至2x106个细胞/ml之间，然后分配到96孔U形底板中。将稀释的商业抗体(0.25-2μg/ml)或杂交瘤上清液或用于多克隆反应的血清加入细胞中并在冰上孵育1小时。在用PBS/1％BSA洗涤数次后，将细胞与AlexaFluor647缀合的F(ab)2山羊抗小鼠IgG Fc(JacksonImmunoResearch)的1:1600稀释液在冰上孵育30分钟。用PBS/1％BSA再次洗涤细胞，然后在PBS/1％ BSA中的1％甲醛中固定。在2或4激光Attune NXT流式细胞仪上分析细胞。数据在FlowJo软件中处理。
6.1.2.7免疫荧光
将细胞接种到玻璃底96孔板(Greiner Bio)中至50％汇合，并在37℃5％CO2下孵育12-18小时。过夜生长后，去除载玻片上的培养基，并在室温下用PBS(pH 7.4)中的4％甲醛将细胞固定10分钟。在PBS中洗涤载玻片。将稀释的商业抗体(1-4μg/ml)或杂交瘤上清液或用于多克隆反应的血清添加到载玻片中，并将载玻片在4℃下孵育过夜。在PBS中洗涤载玻片，并在室温下用AlexaFluor488缀合的F(ab)2兔抗小鼠IgG(H+L)(Invitrogen)的1:800稀释液染色45分钟。载玻片在PBS中洗涤，并用4μg/ml DAPI孵育。在尼康Ti LTTL显微镜上成像之前，移除DAPI并添加PBS。
6.1.3.结果
6.1.3.1针对Tn-cMET的糖肽特异性抗体
使用Tn-糖基化的cMET糖肽生成糖肽反应性抗体。小鼠抗体15C4、8H3和16E12以及兔抗体14E9、19H2和39A3显示出优异的选择性。这6种抗体推进以进一步表征。
5.1.3.2 mAb 14E9、19H2和39A3结合特异性的表征
为了表征14E9、19H2和39A3的结合特异性，进行了针对Tn-糖基化cMET和Tn-糖基化多配体蛋白聚糖2肽的ELISA。发现在ELISA的情况下，所有3种兔cMET mAb仅与Tn-糖基化cMET肽反应(图1)。
6.2实施例2：通过Octet和Biacore对15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3抗体的功能表征
6.2.1.概述
15C4、8H3和16E12通过Biacore表征，以测试抗CMET mAb对滴定的CMET肽的反应性。15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3也通过Octet表征，以测试抗CMET mAb对具有不同糖基化残基的肽(包括非糖基化肽)的反应性，如表6所示。
6.2.2.材料和方法
6.2.2.1表面等离子共振
可以使用表面等离子体共振(例如，使用Biacore系统(Cytiva))进行抗体亲和力测定。在表面等离子体共振测定中，一种或多种抗体可以固定在生物传感器上并与分析物(例如，cMET-Tn肽生物素-(其氨基酸部分为SEQ ID NO:285；粗体和下划线残基指示GalNAc糖基化位点)或阴性对照分析物如未糖基化的cMET肽(生物素-PTKSFISGGSTITGVGKNLN(其氨基酸部分为SEQ ID NO:286))一起呈现。抗体与不同浓度的分析物接触，例如2.5nM、7.4nM、22nM、66nM和200nM的浓度。使用多循环动力学对每个分析物浓度的亲和力测量三次，使用1分钟缔合和5分钟解离。当比较两种抗体的结合亲和力时，使用相同浓度的两种抗体(例如，使用1μM浓度的每种抗体测量)。亲和力通过将结合曲线与特定模型拟合来确定:动力学拟合(1:1模型)或适用的异源配体结合模型。误差(>95％置信度)通过生成的曲线与模型匹配的紧密程度来计算。
6.2.2.2生物层干涉测量法(Octet)
可以使用生物层干涉测量法(BLI)针对特定抗原评估单克隆抗体的抗体亲和力和表位分箱。在BLI测定中，抗原可以固定在生物传感器上(例如，cMET-Tn肽生物素-(其氨基酸部分为SEQ ID NO:285)或阴性对照分析物如未糖基化的cMET肽(生物素-PTKSFISGGSTITGVGKNLN(其氨基酸部分为SEQ ID NO:286))，并呈递至一种抗体进行亲和力测量或呈递至两种串联的竞争抗体(或连续步骤)进行表位分箱。如果用第一抗体的饱和不阻断第二抗体的结合，则发生与非重叠表位的结合。亲和力通过将结合曲线与特定模型拟合来确定:1:1单价模型或2:1二价模型。误差(>95％置信度)通过生成的曲线与模型匹配的紧密程度来计算。
6.2.2.1流式细胞术
用TrypLE select(Gibco)解离贴壁细胞，并用细胞培养基(RPMI w/L-谷氨酰胺、1％链霉素和10％ FBS)从烧瓶表面洗脱。通过在4℃下以300*g离心5分钟来洗涤细胞数次，然后重悬于含有1％ BSA的PBS(PBS/1％ BSA)中。将细胞重悬至5x105个细胞/ml至2x106个细胞/ml之间，然后分配到96孔U形底板中。将稀释的商业抗体(0.25-2μg/ml)或杂交瘤上清液或用于多克隆反应的血清加入细胞中并在冰上孵育1小时。在用PBS/1％ BSA洗涤数次后，将细胞与AlexaFluor647缀合的F(ab)2山羊抗小鼠IgG Fc(JacksonImmunoResearch)的1:1600稀释液在冰上孵育30分钟。用PBS/1％BSA再次洗涤细胞，然后在PBS/1％ BSA中的1％甲醛中固定。在2或4激光Attune NXT流式细胞仪上分析细胞。数据在FlowJo软件中处理。
6.2.2.2免疫荧光
将细胞接种到玻璃室载玻片(nunc)中至50％汇合，并在37℃、，5％ CO2下孵育12-18小时。过夜生长后，去除载玻片上的培养基，并在室温下用PBS(pH 7.4)中的4％甲醛将细胞固定10分钟。载玻片在PBS中洗涤并用PBS/2％BSA封闭1小时。将稀释的商业抗体(1-4μg/ml)或杂交瘤上清液或用于多克隆反应的血清添加到载玻片中，并将载玻片在4℃下孵育过夜。在PBS中洗涤载玻片，并在室温下用AlexaFluor488缀合的F(ab)2兔抗小鼠IgG(H+L)(Invitrogen)的1:800稀释液染色45分钟。在PBS中洗涤载玻片，并使用Prolong GoldAntifade Mountant和DAPI(thermofisher)封片，并使用Olympus FV3000共聚焦显微镜进行检查。
6.2.3.结果
6.2.3.1针对Tn-cMET的糖肽特异性抗体
使用Tn-糖基化的cMET糖肽生成糖肽反应性抗体。使用cMET糖肽生成的抗体，包括15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3，证明在选择性方面具有优势。
6.2.3.2 mAb 15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3的结合特异性
15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3对各种cMET糖肽的亲和力通过Biacore和Octet测定。表7总结了15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3针对cMET肽的不同糖型以及未糖基化的cMET和MUC1-Tn的解离常数(Kd)。
为了进一步评估15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3在更自然的构象背景下的特异性，使用15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3对A549细胞进行染色用于流式细胞术，并对A549和T47D细胞进行染色用于免疫荧光。T47D和A549细胞系本身是Tn阴性的，但可以通过COSMC伴侣蛋白的KO诱导表达Tn抗原。当使用15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3染色用于流式细胞术时，发现每种抗体都选择性地对COSMC KO A549细胞进行染色，而不是对其野生型对应物进行染色，尽管两种细胞的CMET染色均为阳性(图2A-3B-5)。与这些结果一致的是，免疫荧光显示只有CMET+Tn+T47D COSMC KO和CMET+Tn+T47D COSMC KO A549细胞被15C4、8H3、16E12、14E9、19H2或39A3染色，而CMET+Tn-T47D WT细胞没有染色(图4A-4C)。
6.3实施例3：15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3识别的Tn-糖基化CMET表位的组织表达
6.3.1.概述
15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3通过各种正常和癌症组织的免疫组织化学进行表征。
6.3.2.材料和方法
用二甲苯和乙醇对石蜡包埋的组织微阵列(TMA)或组织切片进行去石蜡处理，然后用柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)进行抗原恢复，并在微波中加热18分钟。TMA获自USBIOMAX并用Ultra Vison Quanto检测系统HRP DAB进行染色。简而言之，TMA在TBS中洗涤，与mAb上清液一起孵育2小时。在TBS中洗涤2次后，将TMA与Primary Antibody Amplifier Quanto一起孵育10分钟。在TBS中洗涤后，将TMA与HRP polymer quanto一起孵育(10分钟)，然后与DAB色原孵育。载玻片用苏木精复染，脱水并封片。
6.3.3.结果
当对福尔马林固定的石蜡包埋组织切片进行免疫组织化学染色时，观察到15C4、8H3、16E12、4E9、19H2和39A3阳性染色，其中8/8结肠染色(图5A-5B)，8H3在卵巢癌(17％)、胰腺癌(13％)、肺癌(14％)和胆管癌(11％；图6A-1 6A-2)中显示出阳性细胞表面染色。这种染色模式与正常cMET表达的染色相关，表明这些癌中的CMET表达预测了对15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3的反应性。重要的是，当使用15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3对健康的邻近组织进行染色时，在细胞表面没有观察到反应性(图5A-5B和图6B-1至6B-2)。15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3被发现与几种癌组织切片呈阳性反应，但与其健康对应物不呈阳性反应。
表8-14列出了TMA中每个组织的身份。
6.4实施例4：基于Tn-CMET的CAR
6.4.1.概述
设计了具有15C4、8H3和16E12的VH和VL结构域的嵌合抗原受体(CAR)。然后在靶标特异性细胞毒性测定中评估CAR。
6.4.2.材料和方法
6.4.2.1载体设计
设计了具有15C4、8H3和16E12的VH和VL结构域的scFv的各种CAR构建体(图9A-9C)。在构建体中，VH和VL与一个长接头(GGGGS)3(SEQ ID NO:346)一起附接至CD8a铰链，随后是第二代CAR-T(CD28细胞内信号结构域和CD3-ζ细胞内链)。scFv的N端附接至CD8a信号序列。将CMET CAR-T亚克隆到Virapower慢病毒载体pLENTI6.3-V5-DEST(Invitrogen)中。
表15中提供了编码CAR的核苷酸序列。表16提供了CAR的氨基酸序列。
6.4.3.结果
CAR构建体在人类T细胞中表达。使用Alexa 488-ProteinL通过流式细胞术证实了CAR构建体的表面表达。8H3-CART特异性杀伤Tn+COSMC-KO HaCaT和Tn+COSMC-KO A673，但不杀伤Tn-HaCaT或Tn-A673(图7A-7C)。表17总结了杀伤50％ Tn+COSMC-KO HaCaT的时间。在T细胞与HaCaT的比例为3:1时，8H3-CART杀伤50％ Tn+COSMC-KO A673的时间为9小时。在比例为5:1时，8H3-CART杀伤50％ Tn+COSMC-KO A673的时间为5.73小时，比例为10:1时为4.98小时。数据表明8H3-CART选择性地靶向CMET-Tn。
6.5实施例5：cMET-CART在实体瘤小鼠模型中的体内活性
通过侧腹注射建立CDx A549实体瘤模型。CART注射时的肿瘤体积为88mm3。通过IT注射用第二代8H3-CAR-T处理小鼠(1×107个细胞2剂)。通过卡尺测量肿瘤体积，8H3-CAR-T处理导致约70％的肿瘤生长抑制(图8A)。在处理的小鼠中没有观察到指示不良事件的临床症状。
通过侧腹注射建立肺癌实体瘤模型(PDx)(Champions模型CTG-2823)。CART注射时的肿瘤体积为200mm3，CART通过IV注射递送(1×107个细胞4剂)。通过卡尺测量肿瘤体积，8H3-CAR-T处理导致约50％的肿瘤生长抑制(图8B)。在处理的小鼠中没有观察到指示不良事件的临床症状。
6.6实施例6：抗糖-CMET抗体的序列分析
进行cDNA末端快速扩增(RACE)以确定15C4、8H3、16E12、14E9、19H2和39A3的重链和轻链核苷酸序列。编码15C4重链和轻链可变区的核苷酸序列分别在SEQ ID NO:21和SEQID NO:22中列出。由SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22编码的重链和轻链可变区分别在SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2中列出。预测的重链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:3-5中列出，预测的轻链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:6-8中列出。预测的重链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:9-11中列出，预测的轻链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:12-14中列出。预测的重链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:15-17中列出，预测的轻链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:18-20中列出。
编码8H3重链和轻链可变区的核苷酸序列分别在SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44中列出。由SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44编码的重链和轻链可变区分别在SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24中列出。预测的重链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:25-27中列出，预测的轻链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:28-30中列出。预测的重链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:31-33中列出，预测的轻链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:34-36中列出。预测的重链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:37-39中列出，预测的轻链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:40-42中列出。
编码16E12重链和轻链可变区的核苷酸序列分别在SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66中列出。由SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66编码的重链和轻链可变区分别在SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46中列出。预测的重链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:47-49中列出，预测的轻链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:50-52中列出。预测的重链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:53-55中列出，预测的轻链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:56-58中列出。预测的重链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:59-61中列出，预测的轻链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:62-64中列出。
编码14E9重链和轻链可变区的核苷酸序列分别在SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:88中列出。由SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:88编码的重链和轻链可变区分别在SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68中列出。预测的重链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:69-71中列出，预测的轻链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:72-74中列出。预测的重链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:75-77中列出，预测的轻链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:78-80中列出。预测的重链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:81-83中列出，预测的轻链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:84-86中列出。
编码19H2重链和轻链可变区的核苷酸序列分别在SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110中列出。由SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110编码的重链和轻链可变区分别在SEQ IDNO:89和SEQ ID NO:90中列出。预测的重链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:91-93中列出，预测的轻链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:94-96中列出。预测的重链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:97-99中列出，预测的轻链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQID NO:100-102中列出。预测的重链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:103-105中列出，预测的轻链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:106-108中列出。
编码19H2重链和轻链可变区的核苷酸序列分别在SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:132中列出。由SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:132编码的重链和轻链可变区分别在SEQ IDNO:111和SEQ ID NO:112中列出。预测的重链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:113-115中列出，预测的轻链CDR序列(IMGT定义)分别在SEQ ID NO:116-118中列出。预测的重链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:119-121中列出，预测的轻链CDR序列(Kabat定义)分别在SEQ ID NO:122-124中列出。预测的重链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:125-127中列出，预测的轻链CDR序列(Chothia定义)分别在SEQ ID NO:128-130中列出。
6.7实施例7：人源化抗体
6.7.1.概述
使用标准CDR移植技术将鼠抗体8H3人源化。对于重链，使用了四种模板IGHV1-3*01、IGHV5-51*01、IGHV7-4-1*02和IGHV1-69*06，以生成含有连续进袭性水平人源化(即与人类受体种系一致)的CDR移植形式。类似地，对于轻链，使用三种模板IGKV1-9*01、IGKV3-15*01和IGKV6-21*01来生成含有连续进袭性水平的人源化的CDR移植形式。
表达构建体被设计用于在Expi-293细胞中表达。IL2分泌信号被添加到重链和轻链构建体中。使用常规方法用蛋白A珠纯化抗体。使用ELISA评估人源化候选物结合非糖基化和Tn糖基化cMET肽的能力。还通过尺寸排阻色谱法将人源化候选物与亲本抗体进行比较，使用Octet测定与肽抗原的结合亲和力，并使用流式细胞术测定细胞与靶标阳性细胞的结合。
6.7.2.材料和方法
6.7.2.1载体设计
对于每一种系，产生了三种人源化形式:保守的“A”序列、不太保守的“B”序列和“进袭性”“C”序列(见表4A-4G)。还创建了每个种系的所有三个A、B和C序列的共有序列，它们反映了每个位置上最常见的氨基酸残基。
这些人源化模板在两个阶段中被组装和测定最佳生物物理和功能特性。在第一阶段，构建了多达12对保守“A”设计，并对其与cMET糖肽的结合进行了测定。在基于“A”设计选择了最佳组合后，保守的“A”设计被不太保守的“B”设计反复替换，最终被最不保守的“C”设计替换。
6.7.2.2 ELISA
96孔Corning高结合ELISA微孔板用浓度范围为0.08μg/ml至10μg/ml的0.2M碳酸氢盐缓冲液(pH 9.4)滴定的cMET肽在4℃下包被过夜。BSA血清白蛋白被用作背景的对照/测量。然后在室温下用SuperBlockTM(Thermo Fisher)封闭板1小时。洗板后，8H3的人源化变体在ELISA板上孵育1小时。使用常规方法表达和纯化所有测试的变体。简而言之，用重链和轻链构建体瞬时转染Expi-293细胞，抗体分泌到上清液中并使用蛋白A琼脂糖珠纯化。然后洗涤板，然后与二抗(1/3000山羊抗小鼠IgG(H+L)HRP(Abcam 62-6520))一起孵育1小时。然后洗涤该板并用1-StepTM Ultra TMB(Thermo Fisher)显色2分钟。然后用2N硫酸停止显色。然后测量450nm处的吸光度。
6.7.2.3生物层干涉测量法(Octet)
8H3人源化候选物的抗体亲和力可使用BLI针对特定抗原进行评估。在BLI测定中，抗原可以固定在生物传感器上(例如，cMET-Tn肽生物素-PTKSFISGGSTITGVGKNLN(其氨基酸部分为SEQ ID NO:285)或阴性对照分析物如未糖基化的cMET肽(生物素-PTKSFISGGSTITGVGKNLN(其氨基酸部分为SEQ ID NO:286))，并呈递至一种抗体候选物用于亲和力测量或呈递至两种串联竞争抗体(或连续步骤)用于表位分箱。如果用第一抗体的饱和不阻断第二抗体的结合，则发生与非重叠表位的结合。亲和力通过将结合曲线与特定模型拟合来确定:1:1单价模型或2:1二价模型。误差(>95％置信度)通过生成的曲线与模型匹配的紧密程度来计算。
6.7.2.4尺寸排阻色谱法
使用尺寸排阻色谱法(SEC)测试8H3的人源化候选物是否存在可溶性蛋白聚合物。简而言之，将纯化的抗体加载到HPLC硅胶TSK-GEL G3000SW柱(TOSOH Biosciences,Montgomeryville,PA)和相关的UV检测器(166检测器)上。流动相组成为PBS，流速为1.0mL/分钟。通过监测柱洗脱液在280nm处的吸光度来确定蛋白质种类的浓度。
6.8实施例8：基于人源化8H3的CAR
6.8.1.概述
设计了具有人源化8H3的VH和VL结构域的嵌合抗原受体(CAR)。然后在靶标特异性细胞毒性测定中评估CAR。
6.8.2.材料和方法
设计了具有8H3-HV1-3-A VH(SEQ ID NO:264)和8H3-KV1-AVL(SEQ ID NO:276)结构域的scFv的CAR构建体(hu8H3-CART)。在构建体中，VH和VL与一个长接头(GGGGS)3(SEQID NO:346)一起附接至CD8a铰链，随后是第二代CAR-T(CD28细胞内信号结构域和CD3-ζ细胞内链)。scFv的N端附接至CD8a信号序列。表18提供了CAR的核苷酸和氨基酸序列。
hu8H3-CART细胞与A673(Tn+)和A673(Tn-)细胞以效应细胞:靶细胞(E:T)2:1的比例孵育，并使用RTCAiCELLigenceTM仪器上的无创电阻抗实时监测细胞毒性。
6.8.3.结果
用hu8H3-CART在6小时内特异性杀伤了100％的Tn+细胞(图10)。确定hu8H3-CART对A673(Tn+)细胞的KT50(杀伤50％靶细胞的时间)为1小时15分钟。
7.具体实施方案，参考文献的引用
尽管已经说明和描述了各种具体实施方案，但是应当理解，可以在不背离本公开的精神和范围的情况下进行各种改变。本公开通过以下列出的编号实施方案来举例说明。
1.特异性结合cMET肽的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，该cMET肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化(“cMET糖肽”)。
2.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
3.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
4.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
5.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
6.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
7.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
8.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
9.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
10.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
11.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
12.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
13.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
14.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
15.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
16.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
17.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
18.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
19.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
20.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
21.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
22.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
23.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
24.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
25.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
26.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
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28.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
29.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
30.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
31.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
32.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
33.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
34.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
35.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
36.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
37.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
38.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
39.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
40.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
41.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
42.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
43.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
44.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
45.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
46.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
47.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
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49.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
50.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
51.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
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53.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
54.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
55.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
56.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
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58.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
59.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
60.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
61.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
62.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
63.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
64.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
65.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
66.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
67.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
68.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
69.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
70.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
71.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
72.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
73.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
74.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
75.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
76.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
77.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
78.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
79.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
80.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
81.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
82.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
83.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
84.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
85.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
86.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
87.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
88.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
89.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
90.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
91.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
92.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
93.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
94.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
95.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
96.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
97.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
98.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
99.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
100.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
101.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
102.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
103.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
104.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
105.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
106.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
107.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
108.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
109.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
110.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
111.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
112.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
113.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
114.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
115.实施方案1的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
116.实施方案1至115中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其特异性结合COSMC敲除T47D细胞。
117.实施方案1至115中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其特异性结合COSMC敲除A549细胞。
118.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
119.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
120.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
121.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
122.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
123.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
124.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
125.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
126.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
127.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
128.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
129.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
130.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
131.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
132.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
133.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
134.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
135.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
136.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
137.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
138.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
139.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
140.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
141.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
142.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
143.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
144.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
145.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
146.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
147.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
148.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
149.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
150.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
151.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
152.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
153.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
154.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
155.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
156.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
157.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
158.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
159.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
160.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
161.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
162.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
163.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
164.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
165.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
166.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
167.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
168.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
169.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
170.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
171.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
172.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
173.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
174.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
175.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
176.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
177.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
178.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
179.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
180.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
181.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
182.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
183.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
184.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
185.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
186.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
187.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
188.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
189.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
190.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
191.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
192.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
193.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
194.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
195.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
196.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
197.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
198.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
199.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
200.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
201.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
202.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
203.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
204.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
205.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
206.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
207.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
208.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
209.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
210.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
211.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
212.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
213.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
214.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
215.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
216.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
217.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
218.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
219.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
220.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
221.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
222.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
223.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
224.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
225.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
226.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
227.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
228.实施方案116或实施方案117的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合cMET糖肽。
229.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是根据实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，包含:
(a)互补决定区(CDR)H1，其包含表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR-H1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:253)；
(b)CDR-H2，其包含表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR-H2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:254)；
(c)CDR-H3，其包含表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR-H3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207或SEQ ID NO:255)；
(d)CDR-L1，其包含表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR-L1的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208或SEQ ID NO:256)；
(e)CDR-L2，其包含表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR-L2的氨基酸序列(例如，SEQ ID:NO137、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:209或SEQ ID NO:257)；和
(f)CDR-L3，其包含表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR-L3的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:210或SEQ ID NO:258)。
230.实施方案229的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:206和/或SEQ ID NO:254)中指定为X1的氨基酸是G。
231.实施方案229的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:206和/或SEQ ID NO:254)中指定为X1的氨基酸是D。
232.实施方案229至231中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X2的氨基酸是I。
233.实施方案229至231中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X2的氨基酸是V。
234.实施方案229至233中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X3的氨基酸是K。
235.实施方案229至233中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X3的氨基酸是R。
236.实施方案229至235中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X4的氨基酸是N。
237.实施方案229至235中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X4的氨基酸是S。
238.实施方案229至237中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X5的氨基酸是G。
239.实施方案229至237中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:140和/或SEQ ID NO:206)中指定为X5的氨基酸是D。
240.实施方案229至239中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207和/或SEQ ID NO:255)中指定为X6的氨基酸是P。
241.实施方案229至239中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207和/或SEQ ID NO:255)中指定为X6的氨基酸是D。
242.实施方案229至241中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207和/或SEQ ID NO:255)中指定为X7的氨基酸是M。
243.实施方案229至241中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207和/或SEQ ID NO:255)中指定为X7的氨基酸是F。
244.实施方案229至243中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207和/或SEQ ID NO:255)中指定为X8的氨基酸是C。
245.实施方案229至243中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207和/或SEQ ID NO:255)中指定为X8的氨基酸是Y。
246.实施方案229至245中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148和/或SEQ ID NO:208)中指定为X9的氨基酸是K。
247.实施方案229至245中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148和/或SEQ ID NO:208)中指定为X9的氨基酸是R。
248.实施方案229至247中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X10的氨基酸是E。
249.实施方案229至247中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X10的氨基酸是K。
250.实施方案229至249中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X11的氨基酸是N。
251.实施方案229至249中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X11的氨基酸是S。
252.实施方案229至251中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X12的氨基酸是V。
253.实施方案229至251中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X12的氨基酸是I。
254.实施方案229至253中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X13的氨基酸是G。
255.实施方案229至253中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X13的氨基酸是S。
256.实施方案229至253中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X13的氨基酸是N。
257.实施方案229至256中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X14的氨基酸是I。
258.实施方案229至256中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X14的氨基酸是E。
259.实施方案229至256中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID:NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208和/或SEQ ID NO:256)中指定为X14的氨基酸是N。
260.实施方案229至259中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148和/或SEQ ID NO:208)中指定为X15的氨基酸是V。
261.实施方案229至259中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148和/或SEQ ID NO:208)中指定为X15的氨基酸是L。
262.实施方案229至261中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148和/或SEQ ID NO:208)中指定为X16的氨基酸是S。
263.实施方案229至261中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148和/或SEQ ID NO:208)中指定为X16的氨基酸是A。
264.实施方案229至261中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148和/或SEQ ID NO:208)中指定为X16的氨基酸是V。
265.实施方案229至264中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:209和/或SEQ ID NO:257)中指定为X17的氨基酸是G。
266.实施方案229至264中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:209和/或SEQ ID NO:257)中指定为X17的氨基酸是S。
267.实施方案229至266中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:209和/或SEQ ID NO:257)中指定为X18的氨基酸是P。
268.实施方案229至266中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:209和/或SEQ ID NO:257)中指定为X18的氨基酸是G。
269.实施方案229至268中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X19的氨基酸是N。
270.实施方案229至268中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X19的氨基酸是T。
271.实施方案229至270中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X20的氨基酸是R。
272.实施方案229至270中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X20的氨基酸是L。
273.实施方案229至272中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X21的氨基酸是Y。
274.实施方案229至272中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X21的氨基酸是H。
275.实施方案229至272中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X21的氨基酸是Q。
276.实施方案229至275中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X22的氨基酸是T。
277.实施方案229至275中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149和/或SEQ ID NO:209)中指定为X22的氨基酸是S。
278.实施方案229至277中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X23的氨基酸是G。
279.实施方案229至277中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X23的氨基酸是Q。
280.实施方案229至279中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X24的氨基酸是S。
281.实施方案229至279中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X24的氨基酸是H。
282.实施方案229至281中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X25的氨基酸是Y。
283.实施方案229至281中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X25的氨基酸是N。
284.实施方案229至283中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X26的氨基酸是S。
285.实施方案229至283中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1G、1H、1I、2G和3G中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO 210和/或SEQ ID NO:258)中指定为X26的氨基酸是E。
286.实施方案229至285中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列GYTFTDHA(SEQ ID NO:133)。
287.实施方案229至285中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列DHAIH(SEQ ID NO:139)。
288.实施方案229至285中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列GYTFTDH(SEQ ID NO:145)。
289.实施方案229至285中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列GYTFTDHAIH(SEQ ID NO:205)。
290.实施方案229至285中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列DH(SEQ ID NO:253)。
291.实施方案229至290中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列FSPGNX1DX2(SEQ ID NO:134)。
292.实施方案229至290中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列YFSPGNX1DX2X3YX4EKFKX5(SEQ ID NO:140)。
293.实施方案229至290中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列SPGNX1D(SEQ ID NO:146)。
294.实施方案229至290中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列YFSPGNX1DX2X3YX4EKFKX5(SEQ ID NO:206)。
295.实施方案229至290中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列SPGNX1D(SEQ ID NO:254)。
296.实施方案229至295中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列KRSLPGX6X7DX8(SEQ ID NO:135)。
297.实施方案229至295中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列SLPGX6X7DX8(SEQ ID NO:141)。
298.实施方案229至295中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列SLPGX6X7DX8(SEQ ID NO:147)。
299.实施方案229至295中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列KRSLPGX6X7DX8(SEQ ID NO:207)。
300.实施方案229至295中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列SLPGX6X7DX8(SEQ ID NO:255)。
301.实施方案229至300中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸序列X10X11X12X13X14Y(SEQ ID NO:136)。
302.实施方案229至300中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸序列X9ASX10X11X12X13X14YX15X16(SEQ ID NO:142)。
303.实施方案229至300中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸序列X9ASX10X11X12X13X14YX15X16(SEQ ID NO:148)。
304.实施方案229至300中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸序列X9ASX10X11X12X13X14YX15X16(SEQ ID NO:208)。
305.实施方案229至300中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸序列X10X11X12X13X14Y(SEQ ID NO:256)。
306.实施方案229至305中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X17X18S(SEQ ID NO:137)。
307.实施方案229至305中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X17X18SX19X20X21X22(SEQ ID NO:143)。
308.实施方案229至305中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X17X18SX19X20X21X22(SEQ ID NO:149)。
309.实施方案229至305中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X17X18SX19X20X21X22(SEQ ID NO:209)。
310.实施方案229至305中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X17X18S(SEQ ID NO:257)。
311.实施方案229至310中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L3包含氨基酸序列X23QX24X25X26YPFT(SEQ ID NO:138)。
312.实施方案229至310中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L3包含氨基酸序列X23QX24X25X26YPFT(SEQ ID NO:144)。
313.实施方案229至310中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L3包含氨基酸序列X23QX24X25X26YPFT(SEQ ID NO:150)。
314.实施方案229至310中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L3包含氨基酸序列X23QX24X25X26YPFT(SEQ ID NO:210)。
315.实施方案229至310中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L3包含氨基酸序列X23QX24X25X26YPFT(SEQ ID NO:258)。
316.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有IMGT定义的15C4的CDR(例如SEQ ID NO:3-5)的VH和含有IMGT定义的15C4的CDR(例如SEQ ID NO:6-8)的VL。
317.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Kabat定义的15C4的CDR(例如SEQ ID NO:9-11)的VH和含有Kabat定义的15C4的CDR(例如SEQ ID NO:12-14)的VL。
318.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Chothia定义的15C4的CDR(例如SEQ ID NO:15-17)的VH和含有Chothia定义的15C4的CDR(例如SEQ ID NO:18-20)的VL。
319.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有IMGT定义的8H3的CDR(例如SEQ ID NO:25-27)的VH和含有IMGT定义的8H3的CDR(例如SEQ ID NO:28-30)的VL。
320.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Kabat定义的8H3的CDR(例如SEQ ID NO:31-33)的VH和含有Kabat定义的8H3的CDR(例如SEQ ID NO:34-36)的VL。
321.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Chothia定义的8H3的CDR(例如SEQ ID NO:37-39)的VH和含有Chothia定义的8H3的CDR(例如SEQ ID NO:40-42)的VL。
322.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有IMGT定义的16E12的CDR(例如SEQ ID NO:47-49)的VH和含有IMGT定义的16E12的CDR(例如SEQ ID NO:50-52)的VL。
323.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Kabat定义的16E12的CDR(例如SEQ ID NO:53-55)的VH和含有Kabat定义的16E12的CDR(例如SEQ ID NO:56-58)的VL。
324.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Chothia定义的16E12的CDR(例如SEQ ID NO:59-61)的VH和含有Chothia定义的16E12的CDR(例如SEQ ID NO:62-64)的VL。
325.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GYTFTDHAIH(SEQ ID NO:169)、YFSPGNGDIKYNEKFKG(SEQ ID NO:170)和KRSLPGPMDC(SEQ ID NO:171)的CDR；VL包含KASENVGIYVS(SEQ ID NO:172)、GPSNRYT(SEQ ID NO:173)和GQSYSYPFT(SEQ ID NO:174)的CDR。
326.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GYTFTDHAIH(SEQ ID NO:175)、YFSPGNGDIKYNEKFKD(SEQ ID NO:176)和KRSLPGDFDY(SEQ ID NO:177)的CDR；VL包含RASKSVSEYLA(SEQ ID NO:178)、SGSTLHS(SEQ ID NO:179)和QQHNEYPFT(SEQ ID NO:180)的CDR。
327.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GYTFTDHAIH(SEQ ID NO:181)、YFSPGNDDVRYSEKFKG(SEQ ID NO:182)和KRSLPGDFDY(SEQ ID NO:183)的CDR；VL包含RASKSINNYLV(SEQ ID NO:184)、SGSTLQT(SEQ ID NO:185)和QQHNEYPFT(SEQ ID NO:186)的CDR。
328.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含DH(SEQ ID NO:217)、SPGNGD(SEQ IDNO:218)和SLPGPMDC(SEQ ID NO:219)的CDR；VL包含ENVGIY(SEQ ID NO:220)、GPS(SEQ IDNO:221)和GQSYSYPFT(SEQ ID NO:222)的CDR。
329.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含DH(SEQ ID NO:223)、SPGNGD(SEQ IDNO:224)和SLPGDFDY(SEQ ID NO:225)的CDR；VL包含KSVSEY(SEQ ID NO:226)、SGS(SEQ IDNO:227)和QQHNEYPFT(SEQ ID NO:228)的CDR。
330.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含(SEQ ID NO:229)、SPGNDD(SEQ IDNO:230)和SLPGDFDY(SEQ ID NO:231)的CDR；VL包含KSINNY(SEQ ID NO:232)、SGS(SEQ IDNO:233)和QQHNEYPFT(SEQ ID NO:234)的CDR。
331.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，包含:
(a)互补决定区(CDR)H1，其包含表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR-H1的氨基酸序列(例如,SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:211或SEQ ID NO:259)；
(b)CDR-H2，其包含表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR-H2的氨基酸序列(例如,SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212或SEQ ID NO:260)；
(c)CDR-H3，其包含表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR-H3的氨基酸序列(例如,SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213或SEQ ID NO:261)；
(d)CDR-L1，其包含表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR-L1的氨基酸序列(例如,SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214或SEQ ID NO:262)；
(e)CDR-L2，其包含表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR-L2的氨基酸序列(例如,SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:215或SEQ ID NO:263)；和
(f)CDR-L3，其包含表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR-L3的氨基酸序列(例如,SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216或SEQ ID NO:342)。
332.实施方案331的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:163和/或SEQ ID NO:211)中指定为X27的氨基酸是I。
333.实施方案331的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:163和/或SEQ ID NO:211)中指定为X27的氨基酸是V。
334.实施方案331的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:163和/或SEQ ID NO:211)中指定为X27的氨基酸是L。
335.实施方案331至335中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:163和/或SEQ ID NO:211)中指定为X28的氨基酸是D。
336.实施方案331至335中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:163和/或SEQ ID NO:211)中指定为X28的氨基酸是A。
337.实施方案331至336中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:211和/或SEQ ID NO:259)中指定为X29的氨基酸是缺失的。
338.实施方案331至336中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:211和/或SEQ ID NO:259)中指定为X29的氨基酸是G。
339.实施方案331至338中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:211和/或SEQ ID NO:259)中指定为X30的氨基酸是S。
340.实施方案331至338中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:211和/或SEQ ID NO:259)中指定为X30的氨基酸是I。
341.实施方案331至340中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:211和/或SEQ ID NO:259)中指定为X31的氨基酸是Y。
342.实施方案331至340中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:211和/或SEQ ID NO:259)中指定为X31的氨基酸是Q。
343.实施方案331至342中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如SEQ ID NO:157和/或SEQ ID NO:211)中指定为X32的氨基酸是I。
344.实施方案331至342中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如SEQ ID NO:157和/或SEQ ID NO:211)中指定为X32的氨基酸是A。
345.实施方案331至344中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X33的氨基酸是I。
346.实施方案331至344中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X33的氨基酸是M。
347.实施方案331至346中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X34的氨基酸是Y。
348.实施方案331至346中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X34的氨基酸是D。
349.实施方案331至348中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X35的氨基酸是T。
350.实施方案331至348中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X35的氨基酸是N。
351.实施方案331至350中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X36的氨基酸是G。
352.实施方案331至350中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X36的氨基酸是R。
353.实施方案331至352中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X37的氨基酸是S。
354.实施方案331至352中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X37的氨基酸是V。
355.实施方案331至352中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X37的氨基酸是缺失的。
356.实施方案331至355中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X38的氨基酸是G。
357.实施方案331至355中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X38的氨基酸是S。
358.实施方案331至355中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X38的氨基酸是缺失的。
359.实施方案331至358中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X39的氨基酸是G。
360.实施方案331至358中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X39的氨基酸是A。
361.实施方案331至358中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X39的氨基酸是缺失的。
362.实施方案331至361中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X40的氨基酸是N。
363.实施方案331至361中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X40的氨基酸是T。
364.实施方案331至361中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212和/或SEQ ID NO:260)中指定为X40的氨基酸是缺失的。
365.实施方案331至364中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X41的氨基酸是T。
366.实施方案331至364中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X41的氨基酸是D。
367.实施方案331至364中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X41的氨基酸是缺失的。
368.实施方案331至367中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X42的氨基酸是Y。
369.实施方案331至367中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X42的氨基酸是缺失的。
370.实施方案331至369中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X43的氨基酸是T。
371.实施方案331至369中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X43的氨基酸是N。
372.实施方案331至371中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X44的氨基酸是K。
373.实施方案331至371中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:158和/或SEQ ID NO:212)中指定为X44的氨基酸是R。
374.实施方案331至373中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X45的氨基酸是M。
375.实施方案331至373中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X45的氨基酸是G。
376.实施方案331至375中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X46的氨基酸是S。
377.实施方案331至375中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X46的氨基酸是E。
378.实施方案331至375中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X46的氨基酸是G。
379.实施方案331至378中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X47的氨基酸是A。
380.实施方案331至378中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X47的氨基酸是D。
381.实施方案331至378中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X47的氨基酸是缺失的。
382.实施方案331至381中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X48的氨基酸是Y。
383.实施方案331至381中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X48的氨基酸是R。
384.实施方案331至383中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X49的氨基酸是I。
385.实施方案331至383中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X49的氨基酸是V。
386.实施方案331至383中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X49的氨基酸是缺失的。
387.实施方案331至386中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X50的氨基酸是A。
388.实施方案331至386中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X50的氨基酸是G。
389.实施方案331至386中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X50的氨基酸是缺失的。
390.实施方案331至389中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X51的氨基酸是T。
391.实施方案331至389中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X51的氨基酸是V。
392.实施方案331至389中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X51的氨基酸是缺失的。
393.实施方案331至392中任一项的抗糖-CMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X52的氨基酸是Y。
394.实施方案331至392中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X52的氨基酸是缺失的。
395.实施方案331至394中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X53的氨基酸是I。
396.实施方案331至394中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X53的氨基酸是T。
397.实施方案331至394中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X53的氨基酸是缺失的。
398.实施方案331至397中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X54的氨基酸是T。
399.实施方案331至397中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X54的氨基酸是I。
400.实施方案331至397中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X54的氨基酸是L。
401.实施方案331至400中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X55的氨基酸是G。
402.实施方案331至400中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X55的氨基酸是缺失的。
403.实施方案331至402中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X56的氨基酸是A。
404.实施方案331至402中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213和/或SEQ ID NO:261)中指定为X56的氨基酸是缺失的。
405.实施方案331至404中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166和/或SEQ ID NO:214)中指定为X57的氨基酸是A。
406.实施方案331至404中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166和/或SEQ ID NO:214)中指定为X57的氨基酸是S。
407.实施方案331至406中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X58的氨基酸是S。
408.实施方案331至406中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X58的氨基酸是T。
409.实施方案331至408中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X59的氨基酸是I。
410.实施方案331至408中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X59的氨基酸是V。
411.实施方案331至410中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X60的氨基酸是S。
412.实施方案331至410中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X60的氨基酸是Y。
413.实施方案331至412中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X61的氨基酸是N。
414.实施方案331至412中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X61的氨基酸是S。
415.实施方案331至414中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X62的氨基酸是W。
416.实施方案331至414中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X62的氨基酸是Y。
417.实施方案331至414中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X62的氨基酸是N。
418.实施方案331至417中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X63的氨基酸是N。
419.实施方案331至417中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X63的氨基酸是缺失的。
420.实施方案331至419中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X64的氨基酸是E。
421.实施方案331至419中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214和/或SEQ ID NO:262)中指定为X64的氨基酸是缺失的。
422.实施方案331至421中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166和/或SEQ ID NO:214)中指定为X65的氨基酸是A。
423.实施方案331至421中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166和/或SEQ ID NO:214)中指定为X65的氨基酸是S。
424.实施方案331至423中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:215和/或SEQ ID NO:263)中指定为X66的氨基酸是S。
425.实施方案331至423中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:215和/或SEQ ID NO:263)中指定为X66的氨基酸是A。
426.实施方案331至423中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:215和/或SEQ ID NO:263)中指定为X66的氨基酸是D。
427.实施方案331至426中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:215和/或SEQ ID NO:263)中指定为X67的氨基酸是A。
428.实施方案331至426中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:215和/或SEQ ID NO:263)中指定为X67的氨基酸是T。
429.实施方案331至428中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167和/或SEQ ID NO:215)中指定为X68的氨基酸是Y。
430.实施方案331至428中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167和/或SEQ ID NO:215)中指定为X68的氨基酸是T。
431.实施方案331至430中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167和/或SEQ ID NO:215)中指定为X69的氨基酸是E。
432.实施方案331至430中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167和/或SEQ ID NO:215)中指定为X69的氨基酸是A。
433.实施方案331至432中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X70的氨基酸是C。
434.实施方案331至432中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X70的氨基酸是G。
435.实施方案331至434中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X71的氨基酸是T。
436.实施方案331至434中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X71的氨基酸是S。
437.实施方案331至434中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X71的氨基酸是I。
438.实施方案331至437中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X72的氨基酸是G。
439.实施方案331至437中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X72的氨基酸是Y。
440.实施方案331至438中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X73的氨基酸是S。
441.实施方案331至438中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X73的氨基酸是I。
442.实施方案331至441中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X74的氨基酸是S。
443.实施方案331至441中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X74的氨基酸是缺失的。
444.实施方案331至443中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X75的氨基酸是D。
445.实施方案331至443中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X75的氨基酸是Y。
446.实施方案331至445中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X76的氨基酸是S。
447.实施方案331至445中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X76的氨基酸是W。
448.实施方案331至447中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X77的氨基酸是G。
449.实施方案331至447中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X77的氨基酸是Y。
450.实施方案331至449中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X78的氨基酸是W。
451.实施方案331至449中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X78的氨基酸是A。
452.实施方案331至451中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X79的氨基酸是D。
453.实施方案331至451中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X79的氨基酸是T。
454.实施方案331至451中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中表1J、1K、1L、2H和3H中任一项的CDR序列(例如，SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216和/或SEQ ID NO:342)中指定为X79的氨基酸是缺失的。
455.实施方案331至454中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列GX27X28FSX29X30X31W(SEQ ID NO:151)。
456.实施方案331至454中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列X29X30X31WX32C(SEQ ID NO:157)。
457.实施方案331至454中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列GX27X28FSX29X30X31(SEQ ID NO:163)。
458.实施方案331至454中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列GX27X28FSX29X30X31WX32C(SEQ ID NO:211)。
459.实施方案331至454中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H1包含氨基酸序列GX29X30X31(SEQ ID NO:259)。
460.实施方案331至459中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列X33X34X35X36X37X38X39X40X41(SEQ ID NO:152)。
461.实施方案331至459中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列CX33X34X35X36X37X38X39X40X41X42YAX43WAX44G(SEQ ID NO:158)。
462.实施方案331至459中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列X34X35X36X37X38X39X40(EQ ID NO:164)。
463.实施方案331至459中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列CX33X34X35X36X37X38X39X40X41X42YAX43WAX44G(SEQ ID NO:212)。
464.实施方案331至459中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H2包含氨基酸序列X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:260)。
465.实施方案331至464中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列ARX45GYX46X47GX48X49GX50X51X52X53X54VX55X56FNL(SEQ ID NO:153)。
466.实施方案331至464中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列X45GYX46X47GX48X49GX50X51X52X53X54VX55X56FNL(SEQ ID NO:159)。
467.实施方案331至464中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列X45GYX46X47GX48X49GX50X51X52X53X54VX55X56FNL(SEQ ID NO:165)。
468.实施方案331至464中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列ARX45GYX46X47GX48X49GX50X51X52X53X54VX55X56FNL(SEQ ID NO:213)。
469.实施方案331至464中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-H3包含氨基酸序列X45GYX46X47GX48X49GX50X51X52X53X54VX55X56FNL(SEQ ID NO:261)。
470.实施方案331至469中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸QX58X59X60X61X62X63X64(SEQ ID NO:154)。
471.实施方案331至469中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸QX57SQX58X59X60X61X62X63X64LX65(SEQ ID NO:160)。
472.实施方案331至469中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸QX57SQX58X59X60X61X62X63X64LX65(SEQ ID NO:166)。
473.实施方案331至469中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸QX57SQX58X59X60X61X62X63X64LX65(SEQ ID NO:214)。
474.实施方案331至469中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1包含氨基酸QX58X59X60X61X62X63X64(SEQ ID NO:262)。
475.实施方案331至474中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X66X67S(SEQ ID NO:155)。
476.实施方案331至474中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X66X67SX68LX69S(SEQ ID NO:161)。
477.实施方案331至474中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X66X67SX68LX69S(SEQ ID NO:167)。
478.实施方案331至474中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X66X67SX68LX69S(SEQ ID NO:209)。
479.实施方案331至474中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2包含氨基酸序列X66X67S(SEQ ID NO:263)。
480.实施方案331至480中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CDR-L3包含氨基酸序列QX70X71YX72X73X74GX75X76X77SX78X79(SEQ ID NO:156)。
481.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有IMGT定义的14E9的CDR(例如SEQ ID NO:69-71)的VH和含有IMGT定义的14E9的CDR(例如SEQ ID NO:72-74)的VL。
482.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Kabat定义的14E9的CDR(例如SEQ ID NO:75-77)的VH和含有Kabat定义的14E9的CDR(例如SEQ ID NO:78-80)的VL。
483.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Chothia定义的14E9的CDR(例如SEQ ID NO:81-83)的VH和含有Chothia定义的14E9的CDR(例如SEQ ID NO:84-86)的VL。
484.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有IMGT定义的19H2的CDR(例如SEQ ID NO:91-93)的VH和含有IMGT定义的19H2的CDR(例如SEQ ID NO:94-96)的VL。
485.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Kabat定义的19H2的CDR(例如SEQ ID NO:97-99)的VH和含有Kabat定义的19H2的CDR(例如SEQ ID NO:100-102)的VL。
486.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Chothia定义的19H2的CDR(例如SEQ ID NO:103-105)的VH和含有Chothia定义的19H2的CDR(例如SEQ ID NO:106-108)的VL。
487.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有IMGT定义的39A3的CDR(例如SEQ ID NO:113-115)的VH和含有IMGT定义的39A3的CDR(例如SEQ ID NO:116-118)的VL。
488.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Kabat定义的39A3的CDR(例如SEQ ID NO:119-121)的VH和含有Kabat定义的39A3的CDR(例如SEQ ID NO:122-124)的VL。
489.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含含有Chothia定义的39A3的CDR(例如SEQ ID NO:125-127)的VH和含有Chothia定义的39A3的CDR(例如SEQ ID NO:128-130)的VL。
490.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GIDFSSYWIC(SEQ ID NO:187)、CIYTGSGGNTYYATWAKG(SEQ ID NO:188)和ARMGYSAGYIGATYITVGAFNL(SEQ ID NO:189)的CDR；VL包含QASQSISNWLA(SEQ ID NO:190)、SASYLES(SEQ ID NO:191)和QCTYGSSGDSGSWD(SEQ ID NO:192)的CDR。
491.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GVAFSGSQWIC(SEQ ID NO:193)、CIYTGSSATDYYANWARG(SEQ ID NO:194)和ARMGYEDGYVGGVYTIVGAFNL(SEQ ID NO:195)的CDR；VL包含QASQTISSYLA(SEQ ID NO:196)、ATSYLES(SEQ ID NO:197)和QCSYGSGYSGSWT(SEQ ID NO:198)的CDR。
492.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GLDFSGIYWAC(SEQ ID NO:199)、CMDNRVTYATWAKG(SEQ ID NO:200)和ARGGYGGRGLVFNL(SEQ ID NO:201)的CDR；VL包含QSSQSVYNNNELS(SEQ ID NO:202)、DASTLAS(SEQ ID NO:203)和QGIYYIGDWYSA(SEQ ID NO:204)的CDR。
493.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含SY(SEQ ID NO:235)、YTGSGGN(SEQ IDNO:236)和MGYSAGYIGATYITVGAFNL(SEQ ID NO:237)的CDR；VL包含QSISNW(SEQ ID NO:238)、SAS(SEQ ID NO:239)和QCTYGSSGDSGSWD(SEQ ID NO:240)的CDR。
494.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GSQ(SEQ ID NO:241)、YTGSSAT(SEQID NO:242)和MGYEDGYVGGVYTIVGAFNL(SEQ ID NO:243)的CDR；VL包含QTISSY(SEQ ID NO:244)、ATS(SEQ ID NO:245)和QCSYGSGYSGSWT(SEQ ID NO:246)的CDR。
495.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含GIY(SEQ ID NO:247)、DNR(SEQ IDNO:248)和GGYGGRGLVFNL(SEQ ID NO:249)的CDR；VL包含QSVYNNNE(SEQ ID NO:250)、DAS(SEQ ID NO:251)和QGIYYIGDWYSA(SEQ ID NO:252)的CDR。
496.实施方案1至495中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其为嵌合或人源化抗体或嵌合或人源化抗体的抗原结合片段。
497.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
498.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
499.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
500.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含 的氨基酸序列，VL包含 的氨基酸序列。
501.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
502.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
503.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
504.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含 的氨基酸序列，VL包含 的氨基酸序列。
505.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
506.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
507.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
508.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含 的氨基酸序列，VL包含 的氨基酸序列。
509.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
510.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
511.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
512.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含 的氨基酸序列，VL包含 的氨基酸序列。
513.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
514.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
515.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
516.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含 的氨基酸序列，VL包含 的氨基酸序列。
517.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
518.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
519.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
520.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含 的氨基酸序列，VL包含 的氨基酸序列。
521.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是实施方案1至228中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与SEQ ID NO:264-275(“VH参考序列”)具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与SEQ ID NO:276-284(“VL参考序列”)具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
522.实施方案521中的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与VH参考序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与VL参考序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
523.实施方案521中的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与VH参考序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与VL参考序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
524.实施方案521中的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含VH和VL，VH包含与VH参考序列具有100％序列同一性的氨基酸序列，VL包含与VL参考序列具有100％序列同一性的氨基酸序列。
525.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:264。
526.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:265。
527.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:266。
528.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:267。
529.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:268。
530.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:269。
531.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:270。
532.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:271。
533.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:272。
534.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:273。
535.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:274。
536.实施方案521至524中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:275。
537.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:276。
538.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:277。
539.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:278。
540.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:279。
541.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:280。
542.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:281。
543.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:282。
544.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:283。
545.实施方案521至536中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中VH参考序列是SEQ ID NO:284。
546.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是根据实施方案1至545中任一项的抗cMET抗体或抗原结合片段，其与参考抗体或抗原结合片段竞争结合cMET肽该参考抗体或抗原结合片段包含:
(a) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(b) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(c) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(d) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(e) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(f) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(g)8H3的人源化重链可变(VH)序列(例如SEQ ID NO:264-275中的任一项)和8H3的人源化轻链可变(VL)序列(例如SEQ ID NO:276-284)，
该cMET肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化(“cMET糖肽”)，抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含:
(a)在VH序列内具有第一、第二和第三CDR形式的VH序列；和
(b)在VL序列内具有第四、第五和第六CDR形式的VL序列。
其中第一、第二、第三、第四、第五和第六CDR形式协同作用以实现抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与cMET糖肽的结合。
547.与参考抗体或抗原结合片段竞争结合cMET肽的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，包含:
(a) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(b) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(c) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(d) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(e) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(f) 的重链可变(VH)序列和 的轻链可变(VL)序列；
(g)8H3的人源化重链可变(VH)序列(例如SEQ ID NO:264-275中的任一项)和8H3的人源化轻链可变(VL)序列(例如SEQ ID NO:276-284)，
该cMET肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化(“cMET糖肽”)，抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含用于结合cMET糖肽的形式。
548.实施方案547的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中用于结合cMET糖肽的形式包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。
549.实施方案546至548中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与参考抗体或抗原结合片段竞争，该参考抗体或抗原结合片段包含 的VH序列和 的VL序列。
550.实施方案546至548中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与参考抗体或抗原结合片段竞争，该参考抗体或抗原结合片段包含 的VH序列和 的VL序列。
551.实施方案546至548中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与参考抗体或抗原结合片段竞争，该参考抗体或抗原结合片段包含 的VH序列和 的VL序列。
552.实施方案546至548中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与参考抗体或抗原结合片段竞争，该参考抗体或抗原结合片段包含 的VH序列和 的VL序列。
553.实施方案546至548中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与参考抗体或抗原结合片段竞争，该参考抗体或抗原结合片段包含 的VH序列和 的VL序列。
554.实施方案546至548中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与参考抗体或抗原结合片段竞争，该参考抗体或抗原结合片段包含 的VH序列和 的VL序列。
555.实施方案546至548中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中该抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与参考抗体或抗原结合片段竞争，该参考抗体或抗原结合片段包含8H3的人源化重链可变(VH)序列(例如，SEQ ID NO:264-275中的任一项)和8H3的人源化轻链可变(VL)序列(例如，SEQ ID NO:276-284中的任一项)。
556.实施方案1至555中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其优先结合相较于正常细胞在癌细胞上过表达的糖-cMET表位。
557.实施方案1至556中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其特异性结合cMET肽该cMET肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用STn糖基化。
558.实施方案1至556中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:285)，该cMET肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用STn糖基化。
559.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以1nM至200nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
560.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以1nM至150nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
561.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以1nM至100nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
562.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以1nM至50nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
563.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以5nM至200nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
564.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以5nM至100nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
565.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以5nM至50nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
566.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以5nM至25nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
567.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以5nM至10nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
568.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以10nM至200nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
569.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以10nM至100nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
570.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以10nM至150nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
571.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以10nM至100nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
572.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以10nM至50nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
573.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以10nM至25nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
574.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以50nM至200nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
575.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以50nM至150nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
576.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以50nM至100nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
577.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以100nM至200nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
578.实施方案1至558中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以100nM至150nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
579.实施方案1至578中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中对cMET糖肽的结合亲和力通过表面等离子共振测量。
580.实施方案1至578中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中对cMET糖肽的结合亲和力通过生物层干涉法测量。
581.实施方案1至580中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合未糖基化的cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)(“未糖基化的cMET肽”)。
582.实施方案1至581中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与未糖基化的cMET肽的结合亲和力的至少3倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或未糖基化的cMET肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
583.实施方案1至582中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与未糖基化的cMET肽的结合亲和力的至少5倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或未糖基化的cMET肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
584.实施方案1至583中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与未糖基化的cMET肽的结合亲和力的至少10倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或未糖基化的cMET肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
585.实施方案1至584中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与未糖基化的cMET肽的结合亲和力的至少20倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或未糖基化的cMET肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
586.实施方案1至585中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与未糖基化的cMET肽的结合亲和力的至少50倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或未糖基化的cMET肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
587.实施方案1至586中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与未糖基化的cMET肽的结合亲和力的至少100倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或未糖基化的cMET肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
588.实施方案1至587中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合MUC1串联重复序列(VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG)3(SEQ ID NO:288)，该序列使用纯化的重组人糖基转移酶GalNAc-T1、GalNAc-T2和GalNAc-T4在体外糖基化(“第一MUC1糖肽”)。
589.实施方案1至588中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第一MUC1糖肽的结合亲和力的至少3倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量结合亲和力，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第一MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
590.实施方案1至589中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第一MUC1糖肽的结合亲和力的至少5倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第一MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
591.实施方案1至590中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第一MUC1糖肽的结合亲和力的至少10倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第一MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
592.实施方案1至591中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第一MUC1糖肽的结合亲和力的至少20倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第一MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
593.实施方案1至592中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第一MUC1糖肽的结合亲和力的至少50倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第一MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
594.实施方案1至593中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第一MUC1糖肽的结合亲和力的至少100倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第一MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
595.实施方案1至594中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合MUC1肽 该MUC1肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和酪氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“第二MUC1糖肽”)。
596.实施方案1至595中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第二MUC1糖肽的结合亲和力的至少3倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量结合亲和力，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第二MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
597.实施方案1至596中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第二MUC1糖肽的结合亲和力的至少5倍，任选地其中通过结合亲和力表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第二MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
598.实施方案1至597中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第二MUC1糖肽的结合亲和力的至少10倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第二MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
599.实施方案1至598中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第二MUC1糖肽的结合亲和力的至少20倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第二MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
600.实施方案1至599中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第二MUC1糖肽的结合亲和力的至少50倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第二MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
601.实施方案1至600中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与第二MUC1糖肽的结合亲和力的至少100倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或第二MUC1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
602.实施方案1至601中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合CD44v6肽该CD44v6肽在以粗体和和下划线文本显示的苏氨酸和丝氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“CD44v6糖肽”)。
603.实施方案1至602中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与CD44v6糖肽的结合亲和力的至少3倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或CD44v6糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
604.实施方案1至603中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与CD44v6糖肽的结合亲和力的至少5倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或CD44v6糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
605.实施方案1至604中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与CD44v6糖肽的结合亲和力的至少10倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或CD44v6糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
606.实施方案1至605中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与CD44v6糖肽的结合亲和力的至少20倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或CD44v6糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
607.实施方案1至606中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与CD44v6糖肽的结合亲和力的至少50倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或CD44v6糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
608.实施方案1至607中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与CD44v6糖肽的结合亲和力的至少100倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或CD44v6糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
609.实施方案1至608中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合MUC4肽该MUC4肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和酪氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“第二MUC4糖肽”)。
610.实施方案1至609中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与MUC4糖肽的结合亲和力的至少3倍，任选地其中通过结合亲和力表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或MUC4糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
611.实施方案1至610中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与MUC4糖肽的结合亲和力的至少5倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或MUC4糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
612.实施方案1至611中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与MUC4糖肽的结合亲和力的至少10倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或MUC4糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
613.实施方案1至612中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与MUC4糖肽的结合亲和力的至少20倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或MUC4糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
614.实施方案1至613中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与MUC4糖肽的结合亲和力的至少50倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或MUC4糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
615.实施方案1至614中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与MUC4糖肽的结合亲和力的至少100倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或MUC4糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
616.实施方案1至615中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合LAMP1肽该LAMP1肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“LAMP1糖肽”)。
617.实施方案1至616中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与LAMP1糖肽的结合亲和力的至少3倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或LAMP1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
618.实施方案1至617中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与LAMP1糖肽的结合亲和力的至少5倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或LAMP1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
619.实施方案1至618中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与LAMP1糖肽的结合亲和力的至少10倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或LAMP1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
620.实施方案1至619中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与LAMP1糖肽的结合亲和力的至少20倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或LAMP1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
621.实施方案1至620中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与LAMP1糖肽的结合亲和力的至少50倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或LAMP1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
622.实施方案1至621中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与cMET糖肽的结合亲和力为抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与LAMP1糖肽的结合亲和力的至少100倍，任选地其中结合亲和力通过表面等离子体共振测量，并且进一步任选地在表面等离子体共振中，在存在饱和量的cMET糖肽或LAMP1糖肽(例如，约1μM、约1.5μM或约2μM的每种肽)的情况下测量。
623.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式。
624.实施方案623的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中用于结合cMET表位的形式包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。
625.实施方案1至624中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其是多价的。
626.实施方案1至625中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其是抗原结合片段。
627.实施方案626的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中抗原结合片段为单链可变片段(scFv)的形式。
628.实施方案627的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中scFv包含轻链可变片段N端的重链可变片段。
629.实施方案627的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中scFv包含轻链可变片段C端的重链可变片段。
630.实施方案627至629中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中scFv重链可变片段和轻链可变片段共价结合至接头序列，该接头序列任选为4-15个氨基酸。
631.实施方案1至625中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其为多特异性抗体的形式。
632.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式。
633.实施方案632的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中用于结合cMET表位的形式包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。
634.实施方案631至633中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中多特异性抗体是结合不同于第一表位的第二表位的双特异性抗体。
635.实施方案634的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是开瓶器、mAb-Fv、mAb-scFv、中心-scFv、单臂中心-scFv或双scFv形式的双特异性抗体。
636.实施方案635的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是开瓶器形式的双特异性抗体。
637.实施方案635的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是mAb-Fv形式的双特异性抗体。
638.实施方案635的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是mAb-scFv形式的双特异性抗体。
639.实施方案635的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是中心-scFv形式的双特异性抗体。
640.实施方案635的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是单臂中心-scFv形式的双特异性抗体。
641.实施方案635的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双scFv形式的双特异性抗体。
642.实施方案634的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双特异性结构域交换抗体(例如CrossMab)、Fab臂交换抗体、双特异性T细胞衔接器(BiTE)或双亲和力重靶向分子(DART)。
643.实施方案642的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双特异性结构域交换抗体(例如CrossMab)。
644.实施方案643的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双特异性IgG，其包含具有重链和轻链之间结构域交叉的Fab臂(例如，CrossMabFAB)。
645.实施方案643的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双特异性IgG，其包含具有可变重链和可变轻链之间结构域交叉的Fab臂(例如，CrossMabVH-VL)。
646.实施方案643的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双特异性IgG，其包含具有恒定重链和恒定轻链之间结构域交叉的Fab臂(例如，CrossMabCH1-CL)。
647.实施方案642的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是Fab-臂交换抗体。
648.实施方案642的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双亲和力重靶向分子(DART)。
649.实施方案642的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中双特异性抗体是双特异性T细胞衔接器(BiTE)。
650.实施方案634至649中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中第二表位是cMET表位。
651.实施方案634至649中任一项的抗原结合片段的抗糖-cMET抗体，其中第二表位是与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位。
652.实施方案634至649中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中第二表位是T细胞表位。
653.实施方案652的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中T细胞表位包含CD3表位、CD8表位、CD16表位、CD25表位、CD28表位或NKG2D表位。
654.实施方案653的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中T细胞表位包含CD3表位，其任选为人CD3中存在的表位。
655.实施方案654的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中CD3表位包含CD3γ表位、CD3δ表位、CD3ε表位或CD3ζ表位。
656.实施方案1至655中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其与可检测部分缀合。
657.实施方案656的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中可检测部分是酶、放射性同位素或荧光标记。
658.双特异性抗体，其包含(a)用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式和(b)用于结合T细胞表位的形式，任选地，其中双特异性抗体具有实施方案634至657中任一项所述的特征。
659.实施方案658的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中用于结合cMET表位的形式包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。
660.实施方案658或实施方案659的双特异性抗体，其中用于结合T细胞表位的形式包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。
661.实施方案658至660中任一项的双特异性抗体，其中T细胞表位包含CD3表位、CD8表位、CD16表位、CD25表位、CD28表位或NKG2D表位。
662.实施方案661的双特异性抗体，其中T细胞表位包含CD3表位，其任选为人CD3中存在的表位。
663.实施方案662的双特异性抗体，其中CD3表位包含CD3γ表位、CD3δ表位、CD3ε表位或CD3ζ表位。
664.融合蛋白，其包含实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的氨基酸序列或实施方案658至663中任一项的双特异性抗体，其可操作地与至少第二氨基酸序列连接。
665.实施方案664的融合蛋白，其中第二氨基酸序列是4-1BB、CD2、CD3-ζ或其片段。
666.实施方案664的融合蛋白，其中第二氨基酸序列是融合肽的序列。
667.实施方案666的融合蛋白，其中融合肽是CD28-CD3-ζ、4-1BB(CD137)-CD3-ζ融合肽、CD2-CD3-ζ融合肽、CD28-CD2-CD3-ζ融合肽或4-1BB(CD137)-CD2-CD3-ζ融合肽。
668.实施方案664的融合蛋白，其中第二氨基酸序列是T细胞活化调节剂的序列或其片段。
669.实施方案668的融合蛋白，其中T细胞活化调节剂是IL-15或IL-15Ra。
670.实施方案664的融合蛋白，其中第二氨基酸序列是MIC蛋白结构域的序列。
671.实施方案670的融合蛋白，其中MIC蛋白结构域是α1-α2结构域。
672.实施方案671的融合蛋白，其中α1-α2结构域是MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5、ULBP6或OMCPα1-α2结构域。
673.实施方案670至672中任一项的融合蛋白，其中MIC蛋白结构域是工程化的MIC蛋白结构域。
674.实施方案664的融合蛋白，其中第二氨基酸序列是神经氨酸酶的序列(EC3.2.1.18或EC 3.2.1.129)。
675.实施方案674的融合蛋白，其中神经氨酸酶氨基酸序列衍生自绿色小单孢菌。
676.实施方案674或675的融合蛋白，其中神经氨酸酶包含与 具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
677.实施方案674至676中任一项的融合蛋白，其中神经氨酸酶包含与 具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。
678.实施方案674至677中任一项的融合蛋白，其中神经氨酸酶包含与 具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。
679.实施方案674至678中任一项的融合蛋白，其中神经氨酸酶包含与 具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
680.实施方案674至679中任一项的融合蛋白，其中神经氨酸酶包含氨基酸
681.实施方案674至680中任一项的融合蛋白，其包含信号序列。
682.实施方案681的融合蛋白，其中信号序列是颗粒溶素信号序列。
683.实施方案681的融合蛋白，其中信号序列是granzymeK信号序列。
684.实施方案681的融合蛋白，其中信号序列是NPY信号序列。
685.实施方案681的融合蛋白，其中信号序列是IFN信号序列。
686.实施方案674至685中任一项的融合蛋白，其包含自切割肽序列。
687.实施方案686的融合蛋白，其中自切割肽序列是2A肽。
688.实施方案687的融合蛋白，其中2A肽是T2A。
689.嵌合抗原受体(CAR)，其包含一个或多个根据实施方案626至630中任一项的抗原结合片段。
690.实施方案689的CAR，其包含一个或多个根据实施方案627至630中任一项的scFv。
691.实施方案690的CAR，其包含一个根据实施方案627至630中任一项的scFv。
692.实施方案691的CAR，其包含两个根据实施方案627至630中任一项的scFv。
693.实施方案692的CAR，其中两个scFv具有相同的氨基酸序列。
694.实施方案692或693的CAR，其中两个scFv通过任选为4-15个氨基酸的接头序列共价结合。
695.实施方案689至694中任一项的CAR，其以氨基至羧基末端顺序包含:(i)一个或多个抗原结合片段，(ii)跨膜结构域，和(iii)细胞内信号传导结构域。
696.嵌合抗原受体(CAR)，其以氨基至羧基末端顺序包含:(i)一个或多个用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式，(ii)跨膜结构域，和(iii)细胞内信号传导结构域。
697.实施方案696的CAR，其中用于结合cMET表位的形式包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域。
698.实施方案695至697中任一项的CAR，其中跨膜结构域包含CD28跨膜结构域。
699.实施方案698的CAR，其中CD28跨膜结构域包含氨基酸序列
700.实施方案695至699中任一项的CAR，其中细胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区。
701.实施方案700的CAR，其中共刺激信号传导区包含CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特异性结合CD83的配体、DAP10、GITR或其组合的胞质结构域的信号传导部分或全部。
702.实施方案701的CAR，其中CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特异性结合CD83的配体、DAP10或GITR、人CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特异性结合CD83的配体、DAP10或GITR。
703.实施方案701或实施方案702的CAR，其中共刺激信号传导结构域的信号传导部分或全部包含CD2的胞质结构域。
704.实施方案703的CAR，其中CD2的胞质结构域包含氨基酸序列
705.实施方案701至704中任一项的CAR，其中共刺激信号传导结构域包含CD28胞质结构域的信号传导部分或全部。
706.实施方案705的CAR，其中CD28的胞质结构域包含氨基酸序列
707.实施方案694至706中任一项的CAR，其中细胞内信号传导结构域包含T细胞信号传导结构域。
708.实施方案707的CAR，其中T细胞信号传导结构域位于共刺激信号传导区的C端。
709.实施方案707或实施方案708的CAR，其中T细胞信号传导结构域包含CD3-ζ信号传导结构域。
710.实施方案709的CAR，其中CD3-ζ信号传导结构域包含氨基酸序列
711.实施方案695至710中任一项的CAR，其进一步包含一个或多个抗体片段、一个或多个scFv或一个或多个用于结合cMET表位的形式N端的信号肽。
712.实施方案710的CAR，其中信号肽是人CD8信号肽。
713.实施方案712的CAR，其中人CD8信号肽包含氨基酸序列
714.实施方案695至713中任一项的CAR，其进一步包含一个或多个抗原结合片段和跨膜结构域之间的铰链。
715.实施方案714的CAR，其中铰链包含人类CD8a铰链。
716.实施方案715的CAR，其中人CD8a铰链包含氨基酸序列
717.实施方案715的CAR，其中人CD8a铰链包含氨基酸序列
718.实施方案715的CAR，其中人CD8a铰链包含氨基酸序列
719.实施方案714的CAR，其中铰链包含人IgG4短铰链，其包含氨基酸序列ESKYGPPCPSCP(SEQ ID NO:299)。
720.实施方案714的CAR，其中铰链包含人IgG4长铰链，其包含氨基酸序列
721.嵌合抗原受体(CAR)，其氨基酸序列包含表18的hu8H3-CART的氨基酸序列(SEQ ID NO:348)。
722.嵌合抗原受体(CAR)，其氨基酸序列包含表16的15C4-CART的氨基酸序列(SEQID NO:339)。
723.嵌合抗原受体(CAR)，其氨基酸序列包含表16的16E12-CART的氨基酸序列(SEQ ID NO:340)。
724.嵌合抗原受体(CAR)，其氨基酸序列包含表16的8H3-CART的氨基酸序列(SEQID NO:341)。
725.抗体-药物缀合物，其包含与细胞毒性剂缀合的实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段或实施方案658至688中任一项的融合蛋白。
726.实施方案725的抗体-药物缀合物，其中细胞毒性剂是奥瑞他汀、DNA小沟结合剂、烷化剂、烯二炔、lexitropsin、倍癌霉素、紫杉烷、尾海兔素、美登素或长春花生物碱。
727.实施方案726的抗体-药物缀合物，其中抗糖-cMET抗体或抗原结合片段或双特异性抗体经由接头与细胞毒性剂缀合。
728.实施方案727的抗体-药物缀合物，其中接头在细胞内条件下可裂解。
729.实施方案728的抗体-药物缀合物，其中可裂解接头被胞内蛋白酶裂解。
730.实施方案729的抗体-药物缀合物，其中接头包含二肽。
731.实施方案730的抗体-药物缀合物，其中二肽是val-cit或phe-lys。
732.实施方案728的抗体-药物缀合物，其中可裂解接头在小于5.5的pH下可水解。
733.实施方案732的抗体-药物缀合物，其中可水解接头是腙接头。
734.实施方案728的抗体-药物缀合物，其中可裂解接头是二硫化物接头。
735.嵌合T细胞受体(TCR)，其包含
(a)根据实施方案626至630中任一项的抗原结合片段，
(b)包含第一TCR结构域的第一多肽链，该第一TCR结构域包含来自第一TCR亚基的第一TCR跨膜结构域；和
(c)包含第二TCR结构域的第二多肽链，该第二TCR结构域包含来自第二TCR亚基的第二TCR跨膜结构域。
736.实施方案735的嵌合TCR，其包含一个或多个根据实施方案627至630中任一项的scFv。
737.实施方案735或563的嵌合TCR，其包含一个根据实施方案627至630中任一项的scFv。
738.嵌合T细胞受体(TCR)，其包含:
(a)用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式；
(b)包含第一TCR结构域的第一多肽链，该第一TCR结构域包含来自第一TCR亚基的第一TCR跨膜结构域；和
(c)包含第二TCR结构域的第二多肽链，该第二TCR结构域包含来自第二TCR亚基的第二TCR跨膜结构域。
739.实施方案738的嵌合TCR，其中用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式包含scFv。
740.实施方案737或739的嵌合TCR，其中第一多肽链还包含scFv，并且任选地还包含第一TCR结构域和scFv之间的接头。
741.实施方案737或739的嵌合TCR，其中第二多肽链还包含scFv，并且任选地还包含第二TCR结构域和scFv之间的接头。
742.实施方案735或736的嵌合TCR，其包含两个根据实施方案627至630中任一项的scFv。
743.实施方案738的嵌合TCR，其中用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式包含两个scFv。
744.实施方案742或743的嵌合TCR，其中两个scFv具有相同的氨基酸序列。
745.实施方案742或743的嵌合TCR，其中两个scFv具有不同的氨基酸序列。
746.实施方案742至745中任一项的嵌合TCR，其中两个scFv通过接头序列共价结合，该接头序列任选为4-15个氨基酸长。
747.实施方案742至746中任一项的嵌合TCR，其中第一多肽链还包含两个scFv，并且任选地还包含第一TCR结构域和两个scFv的第一scFv之间的接头。
748.实施方案742至746中任一项的嵌合TCR，其中第二多肽链还包含两个scFv，并且任选地还包含第二TCR结构域和两个scFv的第一scFv之间的接头。
749.实施方案742至746中任一项的嵌合TCR，其中第一多肽链包含两个scFv的第一scFv，第二多肽链包含两个scFv的第二scFv，并且任选地其中(i)第一多肽链包含第一TCR结构域和第一scFv之间的第一接头，和(ii)第二多肽链包含第二TCR结构域和第二scFv之间的第二接头。
750.实施方案735的嵌合TCR，其中抗原结合片段是抗糖-cMET Fv片段。
751.实施方案738的嵌合TCR，其中用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式是抗糖-cMET Fv片段。
752.实施方案750或751的嵌合TCR，其中Fv片段包含抗糖-cMET可变重链(VH)和抗糖-cMET可变轻链(VL)，任选地其中VH和VL是根据实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或结合片段的VH和VL。
753.实施方案752的嵌合TCR，其中第一多肽链进一步包含抗糖-cMET VH，第二多肽链进一步包含抗糖-cMET VL，任选地其中(i)第一多肽链进一步包含第一TCR结构域和抗糖-cMET VH之间的接头，和(ii)第二多肽链进一步包含第二TCR结构域和抗糖-cMET VL之间的接头。
754.实施方案752的嵌合TCR，其中第一多肽链进一步包含抗糖-cMET VL，第二多肽链进一步包含抗糖-cMET VH，任选地其中(i)第一多肽链进一步包含第一TCR结构域和抗糖-cMET VL之间的接头，和(ii)第二多肽链进一步包含第二TCR结构域和抗糖-cMET VH之间的接头。
755.实施方案735和750至754中任一项的嵌合TCR，其中第一多肽链还包含共同的重链1(CH1)结构域。
756.实施方案735和750至755中任一项的嵌合TCR，其中第二多肽链还包含共同的轻链(CL)结构域。
757.实施方案735的嵌合TCR，其中抗原结合片段是抗糖-cMET Fab结构域。
758.实施方案738的嵌合TCR，其中用于结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位的形式是抗糖-cMET Fab结构域。
759.实施方案757或758的嵌合TCR，其包含一个抗糖-cMET Fab结构域。
760.实施方案757或758的嵌合TCR，其包含两个抗糖-cMET Fab结构域。
761.实施方案760的嵌合TCR，其中两个Fab结构域具有相同的氨基酸序列。
762.实施方案760的嵌合TCR，其中两个Fab结构域具有不同的氨基酸序列。
763.实施方案757至762中任一项的嵌合TCR，其中Fab结构域或每个Fab结构域包含抗糖-cMET可变重链(VH)和抗糖-cMET可变轻链(VL)，任选地其中VH和VL是根据实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或结合片段的VH和VL。
764.实施方案763的嵌合TCR，其中第一多肽链包含抗糖-cMET VH和CH1结构域或CL结构域，任选地其中第一多肽链包含第一TCR结构域和CH1结构域或CL结构域之间的接头。
765.实施方案764的嵌合TCR，其中第二多肽链包含抗糖-cMET VL和CL结构域或CH1结构域，任选地其中第二多肽链包含第二TCR结构域和CL结构域或CH1结构域之间的接头。
766.实施方案764的嵌合TCR，其包含含有抗糖-cMET VL和CL结构域或CH1结构域的第三多肽链，该第三多肽链能够与第一多肽链的抗糖-cMET VH和CH1结构域或CL结构域缔合。
767.实施方案763的嵌合TCR，其中第二多肽链包含抗糖-cMET VH和CH1结构域或CL结构域，任选地其中第二多肽链包含第二TCR结构域和CH1结构域或CL结构域之间的接头。
768.实施方案767的嵌合TCR，其中第一多肽链包含抗糖-cMET VL和CL或CH1结构域，任选地其中第一多肽链包含第二TCR结构域和CL结构域或CH1之间的接头。
769.实施方案767的嵌合TCR，其包含含有抗糖-cMET VL和CL结构域或CH1结构域的第三多肽链，该第三多肽链能够与第二多肽链的抗糖-cMET VH和CH1结构域或CL结构域缔合。
770.实施方案763的嵌合TCR，其中第一多肽链包含第一抗糖-cMET VH和第一链CH1结构域或第一链CL结构域，第二多肽链包含第二抗糖-cMET VH和第二链CH1结构域或第二链CL结构域，任选地其中第一多肽链包含第一TCR结构域和第一链CH1结构域或第一链CL结构域之间的接头，并且任选地其中第二多肽链包含第二TCR结构域和第二链CH1结构域或第二链CL结构域之间的接头。
771.实施方案770的嵌合TCR，其包含:
(a)第三多肽链，其包含第一抗糖-cMET VL和第三链CL结构域或第三链CH1结构域，能够与第一多肽的第一抗糖-cMET VH和第一链CH1结构域或第一链CL结构域缔合；和
(b)第四多肽链，其包含第二抗糖-cMET VL和第四链CL结构域或第四链CH1结构域，能够与第二多肽的第二抗糖-cMET VH和第二链CH1结构域或第二链CL结构域缔合。
772.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
773.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
774.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
775.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
776.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
777.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
778.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
779.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
780.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，其中抗糖-cMET可变重链包含直接或间接从属于实施方案708的氨基酸，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
781.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
782.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
783.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
784.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
785.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
786.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
787.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
788.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
789.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含氨基酸序列
790.实施方案735至771中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变重链，该抗糖-cMET可变重链包含:
(a)互补决定区(CDR)H1，其包含GYTFTDHA(SEQ ID NO:133)、DHAIH(SEQ ID NO:139)、GYTFTDH(SEQ ID NO:145)、GYTFTDHAIH(SEQ ID NO:205)或DH(SEQ ID NO:253)的氨基酸序列；
(b)CDR-H2，其包含FSPGNX1DX2(SEQ ID NO:134)、YFSPGNX1DX2X3YX4EKFKX5(SEQ IDNO:140)、SPGNX1D(SEQ ID NO:146)或YFSPGNX1DX2X3YX4EKFKX5(SEQ ID NO:206)的氨基酸序列；和
(c)CDR-H3，其包含KRSLPGX6X7DX8(SEQ ID NO:135)或SLPGX6X7DX8(SEQ ID NO:141)的氨基酸序列。
791.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
792.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
793.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
794.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
795.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
796.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
797.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
798.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
799.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
800.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
801.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
802.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
803.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
804.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
805.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含氨基酸序列
806.实施方案735至790中任一项的嵌合TCR，当直接或间接从属于实施方案708时，其中抗原结合片段包含抗糖-cMET可变轻链，该抗糖-cMET可变轻链包含:
(a)CDR-L1，其包含氨基酸序列X10X11X12X13X14Y(SEQ ID NO:136)或X9ASX10X11X12X13X14YX15X16(SEQ ID NO:142)，
(b)CDR-L2，其包含氨基酸序列X17X18S(SEQ ID NO:137)或X17X18SX19X20X21X22(SEQID NO:143)；和
(c)CDR-L3，其包含氨基酸序列X23QX24X25X26YPFT(SEQ ID NO:138)。
807.实施方案740、741、747至749、753和754中任一项的嵌合TCR，当包含第一和/或第二接头时，第一和/或第二接头各自包含来自免疫球蛋白或来自T细胞受体亚基的恒定结构域或其片段。
808.实施方案807的嵌合TCR，其中第一和/或第二接头分别包含CH1、CH2、CH3、CH4或CL抗体结构域或其任一片段。
809.实施方案807的嵌合TCR，其中第一和/或第二接头分别包含Cα、Cβ、Cγ或CδTCR结构域或其任一片段。
810.实施方案809的嵌合TCR，其中第一多肽链包含CαTCR结构域或其片段，第二多肽链包含CβTCR结构域或其片段。
811.实施方案809的嵌合TCR，其中第一多肽链包含CβTCR结构域或其片段，第二多肽链包含CαTCR结构域或其片段。
812.实施方案809的嵌合TCR，其中第一多肽链包含CγTCR结构域或其片段，第二多肽链包含CδTCR结构域或其片段。
813.实施方案809的嵌合TCR，其中第一多肽链包含CδTCR结构域或其片段，第二多肽链包含CγTCR结构域或其片段。
814.实施方案809至813中任一项的嵌合TCR，其中第一TCR恒定区结构域和第二TCR恒定区结构域相对于野生型TCR恒定区结构域各自包含至少一个突变。
815.实施方案814的嵌合TCR，其中CαTCR结构域在对应于野生型人CαTCR的氨基酸位置48的氨基酸处包含取代，并且CβTCR结构域在对应于野生型人CβTCR的氨基酸位置57的氨基酸处包含取代。
816.实施方案814或815的嵌合TCR，其中CαTCR结构域在对应于野生型人CαTCR的氨基酸位置85的氨基酸处包含取代，并且CβTCR结构域在对应于野生型人CβTCR的氨基酸位置88的氨基酸处包含取代。
817.实施方案735至816中任一项的嵌合TCR，其中第一TCR结构域还包含第一TCR跨膜结构域N端的TCR亚基的第一连接肽或其片段。
818.实施方案735至817中任一项的嵌合TCR，其中第二TCR结构域还包含第二TCR跨膜结构域N端的TCR亚基的第二连接肽或其片段。
819.实施方案818的嵌合TCR，其包含第一连接肽中的残基和第二连接肽中的残基之间的二硫键。
820.实施方案735至819中任一项的嵌合TCR，其中第一TCR结构域还包含第一TCR胞内结构域，该第一TCR胞内结构域包含第一跨膜结构域C端的TCR胞内序列。
821.实施方案735至820中任一项的嵌合TCR，其中第二TCR结构域还包含第二TCR胞内结构域，该第二TCR胞内结构域包含第二跨膜结构域C端的TCR胞内序列。
822.实施方案735至821中任一项的嵌合TCR，其中第一多肽链还包含第一附加胞内结构域，该第一附加胞内结构域包含第一跨膜结构域C端的共刺激胞内信号传导序列。
823.实施方案735至822中任一项的嵌合TCR，其中第二多肽链还包含第二附加胞内结构域，该第二附加胞内结构域包含第二跨膜结构域C端的共刺激胞内信号传导序列。
824.实施方案735至823中任一项的嵌合TCR，还包含可裂解的肽接头，其被配置为在蛋白质翻译期间和/或翻译后不久将第一多肽链与第二多肽链暂时缔合。
825.实施方案824的嵌合TCR，其中可裂解肽接头是蛋白酶可裂解肽接头。
826.实施方案824或825的嵌合TCR，其中肽接头包含序列
827.实施方案735至826中任一项的嵌合TCR，其中第一TCR结构域是TCRα链或其片段，第二TCR结构域是TCRβ链或其片段。
828.实施方案735至826中任一项的嵌合TCR，其中第一TCR结构域是TCRβ链或其片段，第二TCR结构域是TCRα链或其片段。
829.实施方案735至826中任一项的嵌合TCR，其中第一TCR结构域是TCRδ链或其片段，第二TCR结构域是TCRγ链或其片段。
830.实施方案735至826中任一项的嵌合TCR，其中第一TCR结构域是TCRγ链或其片段，第二TCR结构域是TCRδ链或其片段。
831.实施方案735至830中任一项的嵌合TCR从N-端至C-端包含(i)抗糖-cMET可变重链(VH)，(ii)第一TCR结构域，(iii)可裂解肽接头，(iv)抗糖-cMET可变轻链(VL)，和(v)第二TCR结构域。
832.实施方案735至830中任一项的嵌合TCR从N-端至C-端包含(i)抗糖-cMET可变重链(VH)，(ii)第二TCR结构域，(iii)可裂解肽接头，(iv)抗糖-cMET共有轻链(CL)，和(v)第一TCR结构域。
833.实施方案735至830中任一项的嵌合TCR从N-端至C-端包含(i)抗糖-cMET可变轻链(VL)，(ii)第一TCR结构域，(iii)可裂解肽接头，(iv)抗糖-cMET可变重链(VH)，和(v)第二TCR结构域。
834.实施方案735至830中任一项的嵌合TCR从N-端至C-端包含(i)抗糖-cMET可变轻链(VL)，(ii)第二TCR结构域，(iii)可裂解肽接头，(iv)抗糖-cMET可变重链(VH)，和(v)第一TCR结构域。
835.核酸，其包含实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR或实施方案735至834中任一项的嵌合TCR的编码区。
836.实施方案835的核酸，其中编码区被密码子优化用于在人细胞中表达。
837.载体，其包含实施方案835或实施方案836的核酸。
838.实施方案837的载体，其是病毒载体。
839.实施方案838的载体，其中病毒载体是慢病毒载体。
840.宿主细胞，其经工程化以表达实施方案835或实施方案836的核酸。
841.实施方案840的宿主细胞，其是经工程化以表达实施方案689至724中任一项的CAR的人T细胞。
842.实施方案840的宿主细胞，其是经工程化以表达实施方案689至724中任一项的CAR的人NK细胞。
843.实施方案840的宿主细胞，其是经工程化以表达实施方案735至834中任一项的嵌合TCR的人T细胞。
844.宿主细胞，其包含实施方案837至839中任一项的载体。
845.实施方案844的宿主细胞，其为T细胞，其中载体编码实施方案690至725中任一项的CAR。
846.实施方案844的宿主细胞，其为T细胞，其中载体编码实施方案735至834中任一项的嵌合TCR。
847.药物组合物，其包含(a)实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞，以及(b)生理学上合适的缓冲剂、佐剂、稀释剂或其组合。
848.治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物。
849.实施方案848的方法，其中受试者患有肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胆管癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌或胃癌。
850.实施方案849的方法，其中受试者患有肺癌。
851.实施方案849的方法，其中受试者患有乳腺癌。
852.实施方案849的方法，其中受试者患有胰腺癌。
853.实施方案849的方法，其中受试者患有卵巢癌。
854.实施方案849的方法，其中受试者患有胆管癌。
855.实施方案849的方法，其中受试者患有结肠癌。
856.实施方案849的方法，其中受试者患有甲状腺癌。
857.实施方案849的方法，其中受试者患有肝癌。
858.实施方案849的方法，其中受试者患有胃癌。
859.检测生物样品中癌症的方法，其包括将样品与根据实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段接触，并检测抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的结合。
860.实施方案859的方法，还包括定量抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的结合。
861.实施方案859或实施方案860的方法，其中将结合与作为阴性/基线对照的正常组织对照和/或作为阳性对照的癌性组织对照进行比较。
862.实施方案859至861中任一项的方法，其中癌症为肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胆管癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌或胃癌。
863.实施方案862的方法，其中癌症是肺癌。
864.实施方案862的方法，其中癌症是乳腺癌。
865.实施方案862的方法，其中癌症是胰腺癌。
866.实施方案862的方法，其中癌症是卵巢癌。
867.实施方案862的方法，其中癌症是胆管癌。
868.实施方案862的方法，其中癌症是结肠癌。
869.实施方案862的方法，其中癌症是甲状腺癌。
870.实施方案862的方法，其中癌症是肝癌。
871.实施方案862的方法，其中癌症是胃癌。
872.实施方案848至868中任一项的方法，当从属于实施方案670至673中任一项时，其进一步包括向受试者施用经工程化以表达CAR的遗传修饰的T细胞，该CAR包含能够特异性结合MIC蛋白结构域的NKG2D受体。
873.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，作为药物使用。
874.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗癌症，任选地其中该癌症是肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胆管癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、胃癌。
875.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗肺癌。
876.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗乳腺癌。
877.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗胰腺癌。
878.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗卵巢癌。
879.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗胆管癌。
880.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗结肠癌。
881.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗甲状腺癌。
882.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗肝癌。
883.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物，用于治疗胃癌。
884.实施方案1至657中任一项的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、实施方案658至663中任一项的双特异性抗体、实施方案664至688中任一项的融合蛋白、实施方案689至724中任一项的CAR、实施方案725至734中任一项的抗体-药物缀合物、实施方案735至834中任一项的嵌合TCR、实施方案835或实施方案836的核酸、实施方案837至839中任一项的载体或实施方案840至846中任一项的宿主细胞或实施方案847的药物组合物用于制备治疗癌症的药物的用途，任选地其中该癌症是肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胆管癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、胃癌。
885.根据实施方案884的用途，其中癌症是肺癌。
886.根据实施方案884的用途，其中癌症是乳腺癌。
887.根据实施方案884的用途，其中癌症是胰腺癌。
888.根据实施方案884的用途，其中癌症是卵巢癌。
889.根据实施方案884的用途，其中癌症是胆管癌。
890.根据实施方案884的用途，其中癌症是结肠癌。
891.根据实施方案884的用途，其中癌症是甲状腺癌。
892.根据实施方案884的用途，其中癌症是肝癌。
893.根据实施方案884的用途，其中癌症是胃癌。
894.长度为13-30个氨基酸的肽，其包含含有PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)的cMET肽，或含有对应于PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)的氨基酸9和10的氨基酸的其片段。
895.实施方案894的肽，其长度为15-25个氨基酸。
896.实施方案894的肽，其长度为18-25个氨基酸。
897.实施方案894至896中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含SEQ ID NO:286的氨基酸7-11、7-12、7-13、7-14、7-15、7-16、7-17、7-18、7-19或7-20。
898.实施方案894至897中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含SEQ ID NO:286的氨基酸6-11、6-12、6-13、6-14、6-15、6-16、6-17、6-18、6-19或6-20。
899.实施方案894至898中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含SEQ ID NO:286的氨基酸5-11、5-12、5-13、5-14、5-15、5-16、5-17、5-18、5-19或5-20。
900.实施方案894至899中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含SEQ ID NO:286的氨基酸4-11、4-12、4-13、4-14、4-15、4-16、4-17、4-18、4-19或4-20。
901.实施方案894至900中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含SEQ ID NO:286的氨基酸3-11、3-12、3-13、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19或3-20。
902.实施方案894至901中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含SEQ ID NO:286的氨基酸2-11、2-12、2-13、2-14、2-15、2-16、2-17、2-18、2-19或2-20。
903.实施方案894至902中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含SEQ ID NO:286的氨基酸1-11、1-12、1-13、1-14、1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。
904.实施方案894至903中任一项的肽，其包含
905.实施方案894至904中任一项的肽，其由PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)组成。
906.实施方案894至905中任一项的肽，其在对应于PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQID NO:286)的位置9的苏氨酸和/或对应于PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)的位置10的苏氨酸处被O-糖基化。
907.实施方案906的肽，其中O-糖基化包含GalNAc或由其组成。
908.长度为13-30个氨基酸的肽，其包含cMET肽或包含对应于的氨基酸9和10的氨基酸的其片段，该cMET肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上被O-糖基化。
909.实施方案894的肽，其长度为15-25个氨基酸。
910.实施方案894的肽，其长度为18-25个氨基酸。
911.实施方案908至910中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含氨基酸SEQ ID NO:285的7-11、7-12、7-13、7-14、7-15、7-16、7-17、7-18、7-19或7-20。
912.实施方案908至911中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含氨基酸SEQ ID NO:285的6-11、6-12、6-13、6-14、6-15、6-16、6-17、6-18、6-19或6-20。
913.实施方案908至912中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含氨基酸SEQ ID NO:285的5-11、5-12、5-13、5-14、5-15、5-16、5-17、5-18、5-19或5-20。
914.实施方案908至913中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含氨基酸SEQ ID NO:285的4-11、4-12、4-13、4-14、4-15、4-16、4-17、4-18、4-19或4-20。
915.实施方案908至914中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含氨基酸SEQ ID NO:285的3-11、3-12、3-13、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19或3-20。
916.实施方案908至915中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含氨基酸SEQ ID NO:285的2-11、2-12、2-13、2-14、2-15、2-16、2-17、2-18、2-19或2-20。
917.实施方案908至916中任一项的肽，其中cMET肽的片段包含氨基酸SEQ ID NO:285的1-11、1-12、1-13、1-14、1-15、1-16、1-17、1-18、1-19或1-20。
918.实施方案908至917中任一项的肽，其包含
919.实施方案908至918中任一项的肽，其由组成。
920.实施方案908至919中任一项的肽，其中O-糖基化包含GalNAc或由其组成。
921.组合物，其包含实施方案894至920中任一项的肽和佐剂。
922.实施方案921的组合物，其中佐剂包含弗氏佐剂和/或铝盐(例如氢氧化铝)。
923.生成针对肿瘤相关形式的cMET的抗体的方法，其包括向动物施用:
(a)实施方案906至920中任一项的肽；或者
(b)实施方案921或922的组合物，其中组合物包含实施方案906至920中任一项的肽。
924.实施方案923的方法，还包括在施用步骤后从动物中收集抗体。
925.引发针对肿瘤相关形式的cMET的免疫应答的方法，其包括向受试者施用:
(a)实施方案906至920中任一项的肽；或者
(b)实施方案921或922的组合物，其中组合物包含实施方案906至920中任一项的肽。
926.实施方案923至925中任一项的方法，其中动物为小鼠或兔子。
927.如上述任何一个实施方案中所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、双特异性抗体、融合蛋白、CAR、抗体-药物缀合物、嵌合TCR、药物组合物、方法或用途，其中竞争的确定是使用抗体竞争测定进行的，任选地其中该测定是第5.1节中描述的测定。
928.实施方案927的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、双特异性抗体、融合蛋白、CAR、抗体-药物缀合物、嵌合TCR、药物组合物、方法或用途，其中，当参考抗体浓度为所使用的特定测定条件下最大结合浓度的80％，且测试抗体浓度比参考抗体浓度高10倍时进行测试，如果抗糖-cMET抗体或抗糖-LAMP1抗体片段使参考抗体的结合减少至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％，则存在竞争。
本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请和其他文件均通过引用以其整体并入本文以用于所有目的，如同每个单独的出版物、专利、专利申请或其他文件被单独指出通过引用并入相同的程度用于所有目的。如果在本文并入的一个或多个参考文献的教导与本公开内容之间存在不一致的情况，那么本说明书的教导是预期的。

Claims (56)

1.特异性结合cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:285)的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，所述cMET肽已经在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化(“cMET糖肽”)。
2.权利要求1所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含以下的重链可变(VH)序列和轻链可变(VH)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合所述cMET糖肽:
(a)分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；
(b)分别为SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；
(c)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；
(d)分别为SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68；
(e)分别为SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90；或者
(f)分别为SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:112。
3.权利要求1所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含SEQ ID NO:264-275中任一项的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:276-284中任一项的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合所述cMET糖肽。
4.权利要求1至3中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其特异性结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
5.权利要求4所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含以下的重链可变(VH)序列和轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞:
(a)分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；
(b)分别为SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；或者
(c)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46。
6.权利要求4所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与包含SEQ ID NO:264-275中任一项的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:276-284中任一项的轻链可变(VL)序列的抗体或抗原结合片段竞争结合COSMC敲除T47D细胞或COSMC敲除A549细胞。
7.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是根据权利要求1至6中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，包含:
(a)互补决定区(CDR)H1，其包含SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:145、SEQID NO:205或SEQ ID NO:253的氨基酸序列；
(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:254的氨基酸序列；
(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:207或SEQ ID NO:255的氨基酸序列；
(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:208或SEQ ID NO:256的氨基酸序列；
(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:209或SEQ ID NO:257的氨基酸序列；和
(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:210或SEQ ID NO:258的氨基酸序列。
8.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地为权利要求1至7中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含:
(a)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:3-5的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:6-8的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
(b)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:9-11的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:12-14的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者
(c)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:15-17的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:18-20的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
9.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地为权利要求1至7中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含:
(a)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:25-27的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:28-30的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
(b)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:31-33的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:34-36的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者
(c)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:37-39的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:40-42的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
10.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地为权利要求1至7中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含:
(a)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:47-49的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:50-52的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
(b)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:53-55的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:56-58的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者
(c)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:59-61的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:62-64的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
11.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是权利要求1至6中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，包含:
(a)互补决定区(CDR)H1，其包含SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:163、SEQID NO:211或SEQ ID NO:259的氨基酸序列；
(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:212或SEQ ID NO:260的氨基酸序列；
(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:213或SEQ ID NO:261的氨基酸序列；
(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:214或SEQ ID NO:262的氨基酸序列；
(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:215或SEQ ID NO:263的氨基酸序列；和
(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:216或SEQ ID NO:342的氨基酸序列。
12.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地为权利要求1至6中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含:
(a)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:69-71的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:72-74的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
(b)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:75-77的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:78-80的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者
(c)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:81-83的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:84-86的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
13.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地为权利要求1至6中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含:
(a)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:91-93的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:94-96的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
(b)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:97-99的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:100-102的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者
(c)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:103-105的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:106-108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
14.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地为权利要求1至6中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含:
(a)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:113-115的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:116-118的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
(b)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:119-121的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:122-124的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者
(c)VH和VL，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:125-127的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:128-130的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
15.权利要求1至14中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其为嵌合或人源化抗体或者嵌合或人源化抗体的抗原结合片段。
16.权利要求1至15中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其包含:
(a)VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO：1具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO：2具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列；
(b)VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO：23具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO：24具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列；
(c)VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO：45具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO：46具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列；
(d)VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO：67具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO：68具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列；
(e)VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO：89具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO：90具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列；或者
(f)VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO：111具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO：112具有至少95％的序列同一性的氨基酸序列。
17.抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其任选地是根据权利要求1至16中任一项所述的抗cMET抗体或抗原结合片段，其与参考抗体或抗原结合片段竞争结合cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:285)，所述cMET肽在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc糖基化(“cMET糖肽”)，所述参考抗体或抗原结合片段包含:
(a)SEQ ID NO:1的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:2的轻链可变(VL)序列；
(b)SEQ ID NO:23的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:24的轻链可变(VL)序列；
(c)SEQ ID NO:45的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:46的轻链可变(VL)序列；
(d)SEQ ID NO:67的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:68的轻链可变(VL)序列；
(e)SEQ ID NO:89的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:90的轻链可变(VL)序列；
(f)SEQ ID NO:111的重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:112的轻链可变(VL)序列；或者
(g)SEQ ID NO:264-275中任一项的人源化重链可变(VH)序列和SEQ ID NO:276-284的人源化轻链可变(VL)序列，
所述抗糖-cMET抗体或抗原结合片段包含:
(h)在所述VH序列内具有第一、第二和第三CDR形式的VH序列；和
(i)在所述VL序列内具有第四、第五和第六CDR形式的VL序列，
其中所述第一、第二、第三、第四、第五和第六CDR形式协同作用以实现所述抗糖-cMET抗体或抗原结合片段与所述cMET糖肽的结合。
18.权利要求1至17中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其优先结合与正常细胞相比在癌细胞上过表达的糖cMET表位。
19.权利要求1至18中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其特异性结合cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:285)，所述cMET肽已经在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用STn糖基化。
20.权利要求1至18中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:285)，所述cMET肽已经在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用STn糖基化。
21.权利要求1至20中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其以1nM至200nM的结合亲和力(KD)结合cMET糖肽，如通过表面等离子共振或生物层干涉法所测量的。
22.权利要求1至21中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合未糖基化的cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)(“未糖基化的cMET肽”)。
23.权利要求1至22中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合MUC1串联重复(VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG)3(SEQ ID NO:288)，所述MUC1串联重复已经用纯化的重组人糖基转移酶GalNAc-T1、GalNAc-T2和GalNAc-T4体外糖基化(“第一MUC1糖肽”)。
24.权利要求1至23中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合MUC1肽
TAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVT(SEQ ID NO:289)，所述MUC1肽已经在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和酪氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“第二MUC1糖肽”)。
25.权利要求1至24中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合CD44v6肽GYRQTPKEDSHSTTGTAAA(SEQ ID NO:345)，所述CD44v6肽在以粗体和和下划线文本显示的苏氨酸和丝氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“CD44v6糖肽”)。
26.权利要求1至25中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合MUC4肽CTIPSTAMHTRSTAAPIPILP(SEQ ID NO:291)，所述MUC4肽已经在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和酪氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“MUC4糖肽”)。
27.权利要求1至26中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其不特异性结合LAMP1肽CEQDRPSPTTAPPAPPSPSP(SEQ ID NO:292)，所述LAMP1肽已经在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上用GalNAc体外糖基化(“LAMP1糖肽”)。
28.权利要求1至27中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其是多价的。
29.权利要求1至28中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其是抗原结合片段。
30.权利要求29所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述抗原结合片段为单链可变片段(scFv)的形式。
31.权利要求1至28中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其为多特异性抗体的形式。
32.权利要求31所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述多特异性抗体是结合不同于所述第一表位的第二表位的双特异性抗体。
33.权利要求32所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述双特异性抗体是开瓶器、mAb-Fv、mAb-scFv、中心-scFv、单臂中心-scFv或双scFv形式的双特异性抗体。
34.权利要求32所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述双特异性抗体是双特异性结构域交换抗体(例如CrossMab)、Fab臂交换抗体、双特异性T细胞衔接器(BiTE)或双亲和力重靶向分子(DART)。
35.权利要求32至34中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述第二表位是cMET表位。
36.权利要求32至34中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述第二表位是与正常细胞相比在癌细胞上过表达的cMET表位。
37.权利要求32至34中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述第二表位是T细胞表位。
38.权利要求37所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段，其中所述T细胞表位包含CD3表位、CD8表位、CD16表位、CD25表位、CD28表位或NKG2D表位。
39.融合蛋白，其包含权利要求1至38中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的氨基酸序列，其可操作地连接至至少一个第二氨基酸序列。
40.嵌合抗原受体(CAR)，其包含一个或多个根据权利要求29或权利要求30所述的抗原结合片段。
41.嵌合抗原受体(CAR)，其氨基酸序列包含SEQ ID NO:348、SEQ ID NO:339、SEQ IDNO:340或SEQ ID NO:341的氨基酸序列。
42.抗体-药物缀合物，其包含与细胞毒性剂缀合的权利要求1至38中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段或权利要求39所述的融合蛋白。
43.嵌合T细胞受体(TCR)，其包含
(a)根据权利要求29或权利要求30所述的抗原结合片段；
(b)包含第一TCR结构域的第一多肽链，所述第一TCR结构域包含来自第一TCR亚基的第一TCR跨膜结构域；和
(c)包含第二TCR结构域的第二多肽链，所述第二TCR结构域包含来自第二TCR亚基的第二TCR跨膜结构域。
44.核酸，其包含权利要求1至38中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、权利要求39所述的融合蛋白、权利要求40或权利要求41所述的CAR、或权利要求43所述的嵌合TCR的编码区。
45.载体，其包含权利要求44所述的核酸。
46.宿主细胞，其经工程化以表达权利要求44所述的核酸或包含权利要求45所述的载体。
47.药物组合物，其包含(a)权利要求1至38中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、权利要求39所述的融合蛋白、权利要求40或权利要求41所述的CAR、权利要求42所述的抗体-药物缀合物、权利要求43所述的嵌合TCR、权利要求44所述的核酸、权利要求45所述的载体、或权利要求46所述的宿主细胞，以及(b)生理上合适的缓冲液、佐剂、稀释剂或其组合。
48.治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的权利要求1至38中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段、权利要求39所述的融合蛋白、权利要求40或权利要求41所述的CAR、权利要求42所述的抗体-药物缀合物、权利要求43所述的嵌合TCR、权利要求44所述的核酸、权利要求45所述的载体、权利要求46所述的宿主细胞、或权利要求47所述的药物组合物。
49.权利要求48所述的方法，其中所述受试者患有肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胆管癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌或胃癌。
50.检测生物样品中癌症的方法，其包括将样品与根据权利要求1至38中任一项所述的抗糖-cMET抗体或抗原结合片段接触，并检测所述抗糖-cMET抗体或抗原结合片段的结合。
51.权利要求50所述的方法，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胆管癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌或胃癌。
52.长度为13-30个氨基酸的肽，其包含含有
PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)的cMET肽，或含有对应于PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:286)的氨基酸9和10的氨基酸的其片段。
53.长度为13-30个氨基酸的肽，其包含cMET肽PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:285)，或包含对应于PTKSFISGGSTITGVGKNLN(SEQ ID NO:285)的氨基酸9和10的氨基酸的其片段，所述cMET肽已经在以粗体和下划线文本显示的丝氨酸和苏氨酸残基上被O-糖基化。
54.组合物，其包含权利要求52或权利要求53所述的肽和佐剂。
55.生成针对肿瘤相关形式的cMET的抗体的方法，其包括向动物施用:
(a)权利要求53所述的肽；或者
(b)权利要求54所述的组合物，其中所述组合物包含权利要求53所述的肽。
56.引发针对肿瘤相关形式的cMET的免疫应答的方法，其包括向受试者施用:
(a)权利要求53所述的肽；或者
(b)权利要求54所述的组合物，其中所述组合物包含权利要求53所述的肽。
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