CN118159555A

CN118159555A - Il12受体激动剂及其使用方法

Info

Publication number: CN118159555A
Application number: CN202280062617.9A
Authority: CN
Inventors: A·张; 吴家曦; 张彤; N·布洛赫; E·乌尔曼; E·史密斯; C-Y·林; S·戴维斯
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2021-07-19
Filing date: 2022-07-18
Publication date: 2024-06-07

Abstract

本公开涉及具有改进的治疗概况的IL12受体激动剂。

Description

IL12受体激动剂及其使用方法

1.相关申请的交叉引用

本申请要求2021年7月19日提交的美国临时申请号63/223,534；2021年8月13日提交的美国临时申请号63/233,084；2021年11月19日提交的美国临时申请号63/281,580；和2022年4月29日提交的美国临时申请号63/337,038的优先权，其每一篇的内容均通过对其的引用以其整体并入本文。

2.序列表

本申请包含序列表，该序列表已以XML文件形式以电子方式提交，并且特此通过引用以其整体并入。所述XML副本创建于2022年7月13日，名为RGN-009WO_SL.xml，并且大小为166,344字节。

3.发明背景

白细胞介素12(IL-12或IL12)是一种促炎细胞因子，在先天免疫和适应性免疫两者中具有重要作用。Hamza等人,2010,Int.J.Mol.Sci.,11(3):789-806。IL12主要作为由二硫键连接的p35和p40亚基组成的70kDa异二聚体发挥功能(同上)。多种不同的免疫细胞，包括B细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞，在受到刺激时表达IL12(Tugues等人,2015,Cell Death Differ.,22:237-246)，其中活性异二聚体在蛋白质合成后形成。IL12与T细胞和自然杀伤(NK)细胞上的IL12受体复合物的结合，经由信号转导子及转录活化子4(STAT4)和信号转导子及转录活化子3(STAT3)导致信号传导，以及随后的干扰素γ(IFN-γ)产生和分泌。Ullrich等人,2020,EXCLI J.,19:1563-1589。IFN-γ的下游信号传导包括活化T框转录因子TBX21(Tbet)并诱导辅助性T细胞1(T_H1)细胞的促炎功能(同上)。

由于IL12的活化NK细胞和细胞毒性T细胞的能力，自20世纪90年代初以来，IL12已经作为抗癌疗法进行研究。Lasek等人,2014,Cancer Immunol.Immunother.63(5):419-435。然而，在大多数患者中，重复施用IL12导致适应性应答，并且IL12诱导的IFN-γ血液水平逐渐下降(同上)。进一步的，IFN-γ连同其他细胞因子(例如TNF-α)和/或趋化因子(IP-10或MIG)的同时诱导导致严重毒性(同上)。为了最小化IFN-γ毒性并改进IL12功效，开发了不同的剂量和时间方案(同上)。这些方法很少有效果，并且没有显著改善患者的存活(同上)。

尽管正在开发用于免疫疗法(包括抗癌疗法)的IL12疗法领域被普遍接受，但IL12分子通常展示出差的治疗指数，需要高毒性剂量才能产生适度的抗癌效果。

因此，本领域中需要具有改善的治疗功效和安全性概况的新型IL12疗法。

4.发明内容

本公开提供了新型IL12受体激动剂。在某些方面，IL12受体激动剂解决了IL12疗法的缺点，并且其特征在于凭借改善的半衰期和/或改善的安全概况而改善的治疗概况。在某些方面，IL12受体激动剂解决了与传统IL12融合构建体，例如包含p35、p40和Fc结构域的融合蛋白相关联的聚集问题。本公开的IL12受体激动剂通常包含IL12突变蛋白或由IL12突变蛋白组成，该IL12突变蛋白与天然IL12的差异在于p35和/或p40的一级氨基酸序列，和/或在于包含正常来说不存在于IL12中的额外的结构域或部分。示例性IL12受体激动剂公开于第6.2节，编号的实施方案3至847。

本公开进一步提供了掺入氨基酸取代的变体p35和p40部分，该氨基酸取代有助于改进治疗概况，例如通过由于减少的受体结合来减弱IL12活性。示例性p35部分和p40部分，包括可用于掺入到IL12受体激动剂中的示例性p35部分，公开于第6.3节和编号的实施方案1、2、676至719和589至674中。

本公开进一步提供了核酸，其编码本公开的IL12受体激动剂、IL12突变蛋白、p35部分和p40部分。编码由两条或更多条多肽链构成的IL12受体激动剂和IL12突变蛋白的核酸可以是单个核酸(例如，编码所有多肽链的载体)或多个核酸(例如，编码不同多肽链的两个或更多个载体)。本公开进一步提供了经工程化以表达本公开的核酸和IL12受体激动剂、IL12突变蛋白、p35部分和p40部分的宿主细胞和细胞系。本公开进一步提供了产生本公开的IL12受体激动剂、IL12突变蛋白、p35部分和p40部分的方法。示例性核酸、宿主细胞、细胞系和产生IL12受体激动剂、IL12突变蛋白、p35部分和p40部分的方法描述于下文第6.9节和编号的实施方案848至850中。

本公开进一步提供了药物组合物，其包含本公开的IL12受体激动剂、IL12突变蛋白、p35部分和p40部分。示例性药物组合物描述于下文第6.10节和编号的实施方案851中。

本文进一步提供了使用本公开的IL12受体激动剂、IL12突变蛋白、p35部分、p40部分和药物组合物例如用于治疗癌症病况的方法。示例性方法描述于下文第6.11节和编号的实施方案852至860中。

5.附图简述

图1是代表IL12(左)、IL12受体复合物(中)和IL12信号传导(右)的结构的图。

图2A-2P是代表以下的卡通图：具有IL12的结构组织的p35和p40部分(图2A)，和本公开的IL12受体激动剂可以包含的或由其组成的单价IL12-Fc融合蛋白(图2B-2G)和二价IL12-Fc融合蛋白(图2H-2O)的各种实施方案。在图2B-2P的实施方案中，IL12部分可以附接至Fc的N末端(图2B、2C、2H-2J和2N)或者Fc的C末端(图2D-2G、2K-2M、2O和2P)。当根据图2B-2M的实施方案附接至Fc时，IL12部分可以以p40部分-p35部分(图2F、2H、2I、2K和2M)或p35部分-p40部分(图2G、2J和2L)的顺序(N末端至C末端)排列。或者，p40部分可以p40单体的形式提供。p40部分和p35部分之间出现的星形指示亚基之间任选地去除的二硫键。虽然仅指示了某些IL12部分在p40部分和p35部分之间具有去除的二硫键，但是图2A-2O的任何IL12-Fc融合蛋白可以在p40和p35部分之间去除二硫键。可以掺入到图2A-2O的IL12融合蛋白中的合适的p35部分和p40部分的实例公开于例如第6.3节中。图2B至2P中所示的CH2结构域和CH3结构域形成Fc结构域，其是一种多聚化部分。可用于IL12受体激动剂的Fc结构域和其他多聚化部分描述于第6.6节中。异二聚体IL12-Fc融合蛋白(例如，如图2B至2G和2P中所示)中的Fc结构域可以掺入适合于异二聚化或选择性纯化的突变(例如，旋钮入孔和/或星形突变)的任何组合，例如，如第6.6.1.2节中所述(未显示)。

图3A-3I是代表以下的卡通图：具有IL12结构取向的p35部分和p40部分(图3A)，和本公开的IL12受体激动剂可以包含的或由其组成的可以与彼此组合以形成二价IL12-Fc融合蛋白的IL12-Fc融合蛋白的各种实施方案(图3B-3I)。p40部分可包含D1、D2和D3结构域(图3B-3F)，或仅包含D2和D3结构域(图3G-3I)。可以掺入到图3A-3I的IL12融合蛋白中的合适的p35部分和p40部分的实例公开于例如第6.3节中。存在于p40部分或者p35部分上的星形指示IL12部分中任选存在突变，例如第6.3节中所述的一个或多个突变。图3B至3I中所示的CH2结构域和CH3结构域形成Fc结构域，其是一种多聚化部分。可用于IL12受体激动剂的Fc结构域和其他多聚化部分描述于第6.6节中。

图4A-4W是代表以下的卡通图：本公开的IL12受体激动剂可以包含的或由其组成的IL12-Fc融合蛋白的额外实施方案的结构取向，其掺入IL12受体(IL12R)β1受体部分或IL12Rβ2受体部分(图4B-4N和4S-4W)或抗IL12抗体片段(图4O-4R)形式的掩蔽部分。可以掺入到图4A-4W的IL12融合蛋白中的合适的p35部分和p40部分的实例公开于例如第6.3节中。合适的IL12受体部分的实例公开于例如第6.4.1节和第6.4.2节中。合适的基于IL12抗体的掩蔽部分的实例公开于例如第6.4.3节中。图4B至4W中所示的CH2结构域和CH3结构域形成Fc结构域，其是一种多聚化部分。可用于IL12受体激动剂的Fc结构域和其他多聚化部分描述于第6.6节中。异二聚体IL12-Fc融合蛋白(例如，如图4F至4W中所示)中的Fc结构域可以掺入适合于异二聚化或选择性纯化的突变(例如，旋钮入孔和/或星形突变)的任何组合，例如，如第6.6.1.2节中所述(未显示)。

图5A-5S和5V-5X是代表以下的卡通图：本公开的IL12受体激动剂可以包含的或由其组成的IL12-Fc融合蛋白的额外实施方案的结构取向，其掺入了作为靶向部分的抗体(例如抗PD1(αPD1)抗体)-Fab结构域。可以掺入到图5A-5X的IL12融合蛋白中的合适的p35部分和p40部分的实例公开于例如第6.3节中。合适的靶向部分的实例公开于例如第6.5节中。图5B至5S和5V至5X中所示的CH2结构域和CH3结构域形成Fc结构域，其是一种多聚化部分。可用于IL12受体激动剂的Fc结构域和其他多聚化部分描述于第6.6节中。异二聚体IL12-Fc融合蛋白(例如，如图5B、5C、5E、5G至5S和5V至5X中所示)中的Fc结构域可以掺入适合于异二聚化或选择性纯化的突变(例如，旋钮入孔和/或星形突变)的任何组合，例如，如第6.6.1.2节中所述(未显示)。在一些方面，IL12-Fc融合蛋白例如通过受体(如图5H至5K、5O、5R、5S和5V至5X中所示)或抗体(如图5L至5N中所示)来掩蔽。尽管图5L至5N中的抗体描绘为Fv，特别是scFv，但是scFv可以用Fab替换，如图39A-39B中所示。

图5T-5U是代表本文公开的靶向IL12-Fc融合蛋白(例如图5B至5S和5V至5X中的)的示例性作用机制的卡通图。

图6描绘了小鼠和人IL12 p35的比对，其中箭头描绘了代表性突变蛋白位置的实例。图6按出现顺序分别公开了SEQ ID NO 126和6。

图7描绘了小鼠和人IL12 p40的比对，其中箭头描绘了代表性突变蛋白位置的实例。图7按出现顺序分别公开了SEQ ID NO 127和5。

图8描绘了人IL12 p35与其他代表性IL6家族细胞因子的序列比对。箭头描绘了代表性氨基酸取代的位置。图8按出现顺序分别公开了SEQ ID NO 6、128-132。

图9描绘了IL12(p35和p40)的3维结构，其突出显示了涉及p35与IL12Rβ2的相互作用的潜在残基，p35/p40异源二聚体界面上的残基，以及位于p40的D1或D1-D2连接处、潜在地涉及与IL12Rβ1的相互作用的表面暴露残基。

图10A-10B是描绘IL12-Fc融合蛋白的大小的SDS-PAGE凝胶的照片。图10A：泳道1)单价：IL12(p35xp40)-Fc；泳道2)单价：Fc-IL12(p35xp40)；泳道3)单价：IL12^*(p35^*xp40^*)-Fc。图10B：泳道4)二价：IL12(p40-p35)-Fc；泳道5)二价：IL12(p35-p40)-Fc；泳道6)二价：Fc-IL12(p40-p35)；泳道7)二价：Fc-IL12(p35-p40)；泳道10)二价：IL12^*(p40^*-p35^*)-Fc；泳道11)二价：IL12^*(p35^*-p40^*)-Fc；泳道12)二价：Fc-IL12^*(p40^*-p35^*)；泳道13)二价：Fc-IL12^*(p35^*-p40^*)。

图11描绘了与多角度光散射(MALS)偶联的尺寸排阻超高效液相色谱(SEC)(SEC-MALS)的迹线，这指示单价：IL12(p35xp40)-Fc的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为110.5kDa。该融合蛋白具有6个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的122.5kDa的估计的MW。融合蛋白展示出125.6kDa的单体蛋白，其具有约75％峰面积和两个HMW种类(峰2，Mw约258kDa，18.1％峰面积)，(峰1，6.0％峰面积)。

图12描绘了SEC-MALS的迹线，这指示Fc-单价：Fc-IL12(p35xp40)的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为110.5kDa。该融合蛋白具有6个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的122.5kDa的估计的MW。融合蛋白主要展示出244.3kDa的潜在二聚蛋白，占约50％总峰面积。还检测到推定的单体和三聚寡聚物(分别为峰1和3)。

图13描绘了SEC-MALS的迹线，这指示单价：IL12^*(p35^*xp40^*)-Fc的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为110.5kDa。该融合蛋白具有6个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的122.5kDa的估计的MW。融合蛋白展示出128.6kDa的单体蛋白，占约72％峰面积，其中检测到推定的二聚体和四聚体寡聚体(峰2和3)。

图14描绘了SEC-MALS的迹线，这指示二价：IL12(p35-p40)-Fc的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为170.0kDa。该融合蛋白具有10个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的190.0kDa的估计的MW。融合蛋白主要展示出聚集的蛋白，其中高分子量种类约占总峰面积的45％，并且表观摩尔质量为1.7MDa。

图15描绘了SEC-MALS的迹线，这指示二价：IL12(p40-p35)-Fc的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为171.2kDa。该融合蛋白具有12个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的195.2kDa的估计的MW。融合蛋白展示出195.2kDa的单体蛋白，占约70％总峰面积。还检测出推定的二聚体(峰2)。

图16描述了SEC-MALS的迹线，这指示Fc-二价：Fc-IL12(p35-p40)的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为171.2kDa。该融合蛋白具有12个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的195.2kDa的估计的MW。融合蛋白主要展示出聚集蛋白，其中主导的种类为约450kDa，占47.7％峰面积。

图17描述了SEC-MALS的迹线，这指示二价：Fc-IL12(p40-p35)的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为170kDa。该融合蛋白具有10个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的190.0kDa的估计的MW。融合蛋白展示出198.9kDa的单体蛋白，占约82％总峰面积。还检测出推定的二聚体(峰2)。

图18描绘了SEC-MALS的迹线，这指示二价：IL12^*(p40^*-p35^*)-Fc的大小和排列。融合蛋白的预测分子量为171.2kDa。该融合蛋白具有12个预测的糖基化位点，这导致具有糖基化的195.2kDa的估计的MW。融合蛋白主要由具有201.0kDa的表观摩尔质量的单体种类(约60％总峰面积)组成。

图19呈现了说明所述对照或IL12-Fc融合蛋白在CTLL2/STAT3-Luc细胞上的生物活性的曲线。

图20A-20B呈现了说明所述对照或IL12-Fc融合蛋白或突变蛋白在CTLL2/STAT3-Luc细胞上的生物活性的曲线。

图21是代表用MC38癌细胞植入C57BL/6小鼠并随后用测试融合蛋白进行给药的实验方案的示意图。

图22是描绘所述对照或融合蛋白对MC38肿瘤模型中的肿瘤体积的效应的图。

图23A-23F是描绘所述对照或融合蛋白对MC38肿瘤模型中的个体肿瘤生长的效应的图。

图24是描绘所述对照或融合蛋白对MC38肿瘤模型中的小鼠体重变化的效应的图。

图25A-25B描绘了所述对照或融合蛋白或突变蛋白融合蛋白对MC38肿瘤模型中的肿瘤体积和体重变化的效应。

图26A-26B描绘了来自结合测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白与原代小鼠T细胞的结合。

图27A-27B描绘了来自基于pSTAT4的生物测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白对原代小鼠T细胞中pSTAT4活性的效应。

图28描绘了来自基于STAT3的生物测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白对NK92细胞(NK92/STAT3-Luc cl.7F7)中的STAT3活性的效应。

图29描绘了来自基于STAT3的生物测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白对NK92细胞(NK92/STAT3-Luc cl.7F7)中的STAT3活性的效应。

图30描绘了来自基于pSTAT4的生物测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白对原代小鼠T细胞中pSTAT4活性的效应。

图31描绘了来自基于STAT3的生物测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白对NK92细胞(NK92/STAT3-Luc cl.7F7)中的STAT3活性的效应。

图32描绘了来自基于STAT3的生物测定的迹线，这指示与非靶向对照构建体相比，所述IL12-Fc融合蛋白对表达靶标的细胞中的STAT3活性的效应。

图33描绘了来自基于STAT3的生物测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白对人NK92细胞(NK92/STAT3-Luc cl.7F7)中的STAT3活性的效应。

图34描绘了来自基于STAT3的生物测定的迹线，这指示所述IL12-Fc融合蛋白对鼠HT-2细胞中的STAT3活性的效应。

图35A-35C描绘了受体掩蔽的Fc-IL12降低毒性并保留一定水平的体内抗肿瘤活性。

图36A-36E描绘了靶向PD1的受体掩蔽的IL12具有靶标增强的抗肿瘤功效，同时没有体重减轻和减少的全身性IFN_γ。

图37A-37B描绘了相比PD-1阻断或非靶向受体掩蔽的IL12与PD-1阻断的组合，靶向PD1的受体掩藏的IL12具有优异的抗肿瘤功效。

图38A-38C描绘了靶向PD1的受体掩蔽的IL12具有靶标增强的抗肿瘤功效，同时没有体重减轻和极小的全身性IFN_γ。

图39A-39D是代表示例性抗体掩蔽的IL12/Fc融合构建体的卡通图。尽管将掩蔽抗体描绘为Fab，但是Fab可以用Fv替代，如图5L至5N中所示。图39A和39B中描绘的构建体还可以包含靶向部分。图39C和39D分别代表图39A和39B中的构建体的实施方案，在其N末端具有靶向部分。在图39C和39D中，将靶向部分表示为Fab；然而，可以使用其他形式。因此，涵盖图39A和39B的形式的本文所述的实施方案(包括第6.2节中，A组和B组编号的实施方案和权利要求)可以进一步包括靶向部分，例如如第6.5.2节中所述的靶向部分，其中Fab形式如图39和39D中所示。

图40A-40B描绘了NK92细胞中对于具有R1掩蔽或scFv掩蔽的靶向PD1的mIL12的来自基于STAT3的生物测定的迹线。

图41A-41D描绘了靶向PD1的抗体掩蔽的IL12具有肿瘤生长抑制作用，同时没有体重减轻和极小的全身IFN_γ。

图42描绘了与单独的受体掩蔽相比，一个IL12亚基的受体掩蔽和p40突变蛋白的组合进一步减弱了活性。

图43描绘了与单独的受体掩蔽相比，一个IL12亚基的受体掩蔽和p35突变蛋白的组合进一步减弱了活性。

图44描绘了具有受体掩蔽的“3链”形式蛋白质构建体减弱IL12的生物活性。

图45描绘了具有靶标增强的生物活性的受体掩蔽的IL12的示例性形式。

图46A-46D描绘了用于体内施用具有受体掩蔽的’3链’形式蛋白质构建体的方案(图46A)以及所得的对肿瘤生长(图46B)、体重减轻(图46C)和IFNγ产生(图46D)的活性。

6.发明详述

6.1.定义

约，大约：在整个说明书中，在数字前面的术语“约”、“大约”等等，用以表明该数字不一定确切(例如，以解释分数、测量准确度和/或精确度中的变化、计时等)。应当理解，“约X”或“大约X”的公开，其中X是数字，也是“X”的公开。因此，例如，其中一个序列与另一个序列具有“约X％序列同一性”的实施方案的公开也是其中该序列与其他序列具有“X％序列同一性”的实施方案的公开。

和，或：除非另有说明，否则“或”连词旨在以其正确的含义用作布尔逻辑运算符，其涵盖替代地选择特征(A或B，其中A的选择与B互斥)和结合地选择特征(A或B，其中选择A和B两者)两者。在本文的某些地方，术语“和/或”用于相同目的，这不应解释为暗示“或”参照互斥的替代选择来进行使用。

抗原结合结构域或ABD：如本文所用，术语“抗原结合结构域”或“ABD”指能够与靶分子特异性、非共价且可逆结合的靶向部分的部分。

缔合：在IL12受体激动剂或其组分(例如，IL12 p40部分；IL12 p35部分；靶向部分诸如抗体)的情况下，术语“缔合”指两条或更多条多肽链之间的功能性关系。具体地，术语“缔合”意指两个或更多个多肽彼此缔合，例如通过分子相互作用非共价地或通过一个或多个二硫桥或化学交联共价地缔合，从而产生功能性IL12受体激动剂。本公开的IL12受体激动剂中可能存在的缔合的实例包括(但不限于)IL12 p40部分和IL12 p35部分之间的缔合、Fc区中同二聚体Fc结构域或异二聚体Fc结构域之间的缔合、Fab或scFv中VH区和VL区之间的缔合、Fab中CH1和CL之间的缔合以及结构域取代的Fab中CH3和CH3之间的缔合。

二价：如本文所用，关于IL12和/或IL12受体激动剂中的靶向部分的术语“二价”指分别具有两个IL12异二聚体(即，两个p40xp35异二聚体)和/或靶向部分的IL12受体激动剂。通常，对于IL12部分和/或靶向部分是二价的IL12受体激动剂是二聚体(同二聚体或者异二聚体)。

癌症：术语“癌症”指特征在于异常细胞的不受控的(且通常快速的)生长的疾病。癌细胞可以局部扩散或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部分。本文描述了各种癌症的实例，并且其包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、胰腺癌、结直肠癌、肾癌、肝癌、脑癌、肾上腺癌、自主神经癌、胆道癌、骨癌、子宫内膜癌、眼癌、输卵管癌、生殖道癌、大肠癌、脑膜癌、食管癌、腹膜癌、垂体癌、阴茎癌、胎盘癌、胸膜癌、唾液腺癌、小肠癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、上呼吸道消化道癌、尿路癌(urinary tract cancer)、阴道癌、外阴癌、淋巴瘤、白血病、肺癌等等。

互补决定区或CDR：如本文所用，术语“互补决定区”或“CDR”指抗体可变区之内赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。一般而言，每个重链可变区中有3个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，每个轻链可变区中有3个CDR(CDR1-L1、CDR-L2、CDR-L3)。可用于鉴定CDR的边界的示例性惯例包括，例如Kabat定义、Chothia定义、ABM定义和IMGT定义。参见，例如，Kabat,1991,“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”NationalInstitutes of Health,Bethesda,编(Kabat编号方案)；Al-Lazikani等人,1997,J.Mol.Biol.273:927-948(Chothia编号方案)；Martin等人,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(ABM编号方案)；以及Lefranc等人,2003,Dev.Comp.Immunol.27:55-77(IMGT编号方案)。公用数据库也可用于鉴定抗体之内的CDR序列。

EC50：术语“EC50”指在指定的暴露时间后诱导基线和最大值之间的中间的应答的分子(例如IL12受体激动剂)的半最大有效浓度。EC50基本上代表抗体或IL12受体激动剂的浓度，其中观察到其最大效应的50％。在某些实施方案中，EC50值等于如第8.1.2节中所述的测定中给出半最大STAT3活化的IL12受体激动剂的浓度。

表位：表位或抗原决定簇是由如本文所述的抗体或其他抗原结合部分识别的抗原(例如靶分子)的一部分。表位可以是线性的或构象的。

Fab：在本公开的靶向部分的情况下，术语“Fab”指一对多肽链，第一条多肽链包含位于第一恒定结构域(本文称为C1)N末端的抗体的可变重(VH)结构域，并且第二条多肽链包含位于能够与第一恒定结构域配对的第二恒定结构域(本文称为C2)N末端的抗体的可变轻(VL)链结构域。在天然抗体中，VH位于重链第一恒定结构域(CH1)的N末端，并且VL位于轻链恒定结构域(CL)的N末端。本公开的Fab可以根据天然方向来排列或包括促进正确的VH和VL配对的结构域取代或调换。例如，以下是可能的：用CH3结构域对替换Fab中的CH1和CL结构域对，以促进异二聚体分子中正确的经修饰的Fab链配对。还可以颠倒CH1和CL，使得CH1附接至VL并且CL附接至VH，该配置通常被称为Crossmab。

Fc结构域和Fc区域：术语“Fc结构域”指与另一重链的相应部分配对的重链的一部分。术语“Fc区”指通过两个重链Fc结构域的缔合而形成的基于抗体的结合分子的区。Fc区之内的两个Fc结构域可以彼此相同或不同。在天然抗体中，Fc结构域通常是相同的，但可以有利地修饰一个或两个Fc结构域以允许(例如，经由旋钮-孔相互作用)异二聚化。

宿主细胞：如本文所用，术语“宿主细胞”指已经将本公开的核酸引入到其中的细胞。术语“宿主细胞”和“重组宿主细胞”在本文中可互换地使用。应当理解，此类术语指特定的受试细胞和此类细胞的后代或潜在后代。因为由于突变或者环境影响，某些修饰可能在后代中发生，所以此类后代实际上可能与亲代细胞不同，但仍然包括在如本文所用术语的范围之内。典型的宿主细胞是真核宿主细胞，诸如哺乳动物宿主细胞。示例性真核宿主细胞包括酵母和哺乳动物细胞，例如脊椎动物细胞诸如小鼠、大鼠、猴或人细胞系，例如HKB11细胞、PER.C6细胞、HEK细胞或CHO细胞。

IL12激动剂或IL12受体激动剂：术语“IL12激动剂”和“IL12受体激动剂”在本文中可互换地使用，以指包含IL12突变蛋白或由IL12突变蛋白组成并且具有IL12活性的分子。在一个或多个体外或体内生物测定(例如第8.1.2节中所述的基于STAT3驱动的萤光素酶报告基因测定或第8.1.3节中所述的MC38协同肿瘤模型)中，IL12活性可以大于、低于或等于野生型或重组IL12(例如，人或小鼠IL12)的活性。在各种实施方案中，IL12激动剂相对于重组IL12具有范围为5％至90％、5％至85％、5％至80％、10％至80％、15％至80％、20％至80％、25％至80％、30％至80％、35％至80％、45％至80％、50％至80％、5％至70％、10％至70％、15％至70％、20％至70％、25％至70％、30％至70％、35％至70％、45％至70％、或50％至70％的活性。

IL12部分：术语“IL12部分”指p35部分或p40部分。因此，相关术语“IL12部分内接头”指连接两个IL12部分例如p35部分和p40部分的接头。

IL12突变蛋白：“IL12突变蛋白”是由一条或多条多肽链(例如，一条、两条、三条或四条多肽链)构成的变体IL12分子，这些多肽链包含彼此缔合的IL12 p35(称为“p35”)部分和IL12 p40(“p40”)部分，并且其与天然IL12不同在于(a)一级氨基酸序列和/或(b)与天然不与IL12缔合的额外的结构域缔合，该额外的结构域例如(i)多聚化部分(例如，二聚化结构域，诸如Fc结构域)和/或(ii)靶向部分和/或(iii)稳定化部分和/或(iv)IL12βR部分。

在一些实施方案中，术语突变蛋白指(a)具有或不具有靶向部分和/或(b)具有或不具有稳定化部分和/或(c)具有或不具有多聚化部分的结构。除非上下文另有说明，否则在本公开的IL12激动剂的情况下，术语“IL12突变蛋白”有时指变体IL12分子的核心组分，即p35和p40部分，并且有时还指多聚化部分，诸如Fc结构域和任何/或缔合的接头部分，并且应当理解，术语“IL12突变蛋白”还延伸至包含额外特征的IL12分子，例如，一个或多个靶向部分、一个或多个稳定化部分、一个或多个多聚化部分、一个或多个IL12R部分、一个或多个接头部分，以及上述的任何组合。

因此，与野生型p35和/或p40相比，IL12突变蛋白可以包含具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入的p35和/或p40部分。

如本文所公开的，p35部分可以包括IL12Rβ2部分并且p40部分可以包括IL12Rβ1部分。p35部分和IL12Rβ2部分可以位于相同或不同的多肽链上。p40部分和IL12Rβ1部分可以位于相同或不同的多肽链上。IL12Rβ1和IL12Rβ2部分通常充当掩蔽部分，并且因此当存在时通常经配置以分别与p40部分和p35部分相互作用。

在一些实施方案中，IL12突变蛋白在其p35亚基或其p40亚基中具有一个或多个突变，或者在其p35亚基和其p40亚基两者中具有一个或多个突变。示例性突变，例如取代，尤其公开于第6.3节及其小节中、表1和2中、以及编号的实施方案1、2、676至719和589至674中。IL12突变蛋白的p35和p40亚基可以包含在同一多肽链中，或者可以包含在不同的多肽链中。本公开的IL12突变蛋白和激动剂的示例性配置尤其公开于图2A至5X、第6.2节中以及编号的实施方案3至847中。

在一些实施方案中，IL12突变蛋白包含掩蔽部分。本公开的示例性掩蔽部分尤其如以下所公开：图4B-4E、4G-4W、5H-5O、5R-5S、5V-5X和39A-39D、第6.4节以及公开在下文第7节的编号实施方案，第7节参考了这些图和/或其构成示例性单体。

在一些实施方案中，IL12突变蛋白包含基于受体的掩蔽部分。在其他实施方案中，IL12突变蛋白包含基于抗体的掩蔽部分。示例性的基于抗体的掩蔽部分和包含它们的IL12受体激动剂尤其公开于图4O-4R、5L-5N和39A-39D、第6.2节和第6.4节以及在下文第7节中公开的编号的实施方案中，第7节参考了这些图和/或其构成示例性单体。示例性的基于受体的掩蔽部分和包含它们的IL12受体激动剂尤其公开在图4B至4E、4G至4N、4S至4W、5H至5K、5O、5R、5S和5V-5X、第6.2节和6.4节以及在下文第7节中公开的编号的实施方案中，第7节参考了这些图和/或其构成示例性单体。

IL12突变蛋白对于p35和p40可以是单价的(即，具有单个p35部分和单个p40部分)，或者对于p35和p40可以是多价的(即，具有多个p35部分和p40部分)。在一些实施方案中，IL12突变蛋白对于p35和p40是二价的(即，具有两个p35部分和两个p40部分)。当IL12突变蛋白对于p35和p40是多价的时，多个p35部分可以彼此相同或不同，和/或多个p40部分可以彼此相同或不同。

与野生型IL12相比，IL12突变蛋白可以具有改变的功能(例如，受体结合、亲和力、细胞因子活性)和/或改变的药代动力学。

IL12 p35部分或p35部分：IL12 p35部分或p35部分是氨基酸序列，其包含与哺乳动物(例如人或鼠)p35(有时称为IL12或IL12α的α亚基)的IL12Rβ2结合部分(任选地具有一个或如下文第6.3.2节中定义的氨基酸取代)的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。人p35的序列具有Uniprot标识符P29459(uniprot.org/uniprot/P29459)。鼠p35的序列具有Uniprot标识符P43431(uniprot.org/uniprot/P43431)。

p35(在人p35的氨基酸1-22处)包含信号序列。在天然IL12中，p35具有形成两个链间二硫键的四个保守半胱氨酸残基，该链间二硫键桥接人p35的C64和C96以及C85和C123。p35还包括与p40(在人p40的氨基酸C177处)形成链间键的半胱氨酸(人p35的C74)。

P35部分优选包含氨基酸序列，该氨基酸序列与成熟哺乳动物p35，例如人或鼠p35(对应于人p35的氨基酸23-219)(任选地具有一个或多个如下文第6.3.2节中所定义的氨基酸取代)包含至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。

在各种实施方案中，本公开的IL12突变蛋白的p35部分保留以下的任何组合：(a)不保留链间二硫键、保留其中之一或两者和/或(b)保留与p40形成链间键的半胱氨酸。

IL12 p40部分或p40部分：IL12 p40部分或p40部分是氨基酸序列，其包含与哺乳动物(例如人或鼠)p40(有时称为IL12或IL12β的β亚基)的IL12Rβ1结合部分(任选地具有一个或如下文第6.3.1节中定义的氨基酸取代)的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。人p40的序列具有Uniprot标识符P29460(uniprot.org/uniprot/P29460)。鼠p40的序列具有Uniprot标识符P43432(uniprot.org/uniprot/P43432)。p40包含信号序列(在人p40的氨基酸1-22处)、称为D1的Ig样C2型结构域(在人p40的氨基酸23至106处)、称为D2的第一纤连蛋白III型结构域(在人p40的氨基酸107至236处)和称为D3的第二纤连蛋白III型结构域(在人p40的氨基酸237至328处)。在天然IL12中，p40的D2结构域具有四个保守半胱氨酸残基，形成两个链间二硫键，桥接人p40中的C109和C120以及C148和C171，D3结构域也包含一个菌株间二硫键，桥接人p40中的C278和C305。D2还包含与p35(在人p35的氨基酸C74处)形成链间键的半胱氨酸(人p40中的C177)。D3还含有高度保守的WSXWS基序(SEQ ID NO:3)(人p40中的WSEWAS(SEQ ID NO:4))。

p40部分优选地包含以下：哺乳动物(例如人或鼠)p40的D2结构域和D3结构域(或包含与哺乳动物(例如人或鼠)p40的D2结构域和D3结构域至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列)，任选地具有如下文第6.3.1节定义的一个或多个氨基酸取代。

p40部分还可以包含以下：哺乳动物(例如人或鼠)p40的D1结构域(或包含与哺乳动物(例如人或鼠)p40的D1结构域至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列)，任选地具有如下文第6.3.1节定义的一个或多个氨基酸取代。

在各种实施方案中，本公开的IL12突变蛋白的p40部分保留以下的任何组合：(a)不保留链间二硫键、保留其中任一个、其中任两个或其中全部三个，和/或(b)保留与p35形成链间键的半胱氨酸，和/或(c)保留保守WSXWS基序(SEQ ID NO:3)。

IL12Rβ1部分：IL12Rβ1部分是包含以下的氨基酸序列：与哺乳动物例如人或鼠的IL12受体亚基β-1(IL12Rβ1)的IL12 p40结合部分的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。IL12Rβ1的IL12 p40结合部分包含受体亚基的胞外结构域或由受体亚基的胞外结构域组成。人IL12Rβ1的序列具有Uniprot标识符P42701(uniprot.org/uniprot/P42701)，其中氨基酸24至545构成胞外结构域。鼠IL12Rβ1的序列具有Uniprot标识符Q60837(uniprot.org/uniprot/Q60837)，其中氨基酸20至565构成胞外结构域。IL12Rβ1包含信号序列(在人IL12Rβ1的氨基酸1-23处)、胞外p40结合结构域(在人IL12Rβ1的氨基酸24至545处)、螺旋跨膜结构域(在人IL12Rβ1的氨基酸546至570处)和细胞质结构域(在人IL12Rβ1的氨基酸571至662处)。

优选地，IL12Rβ1部分包含以下：哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ1的胞外结构域(或包含与哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ1的胞外结构域至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列)。

IL12Rβ部分：如本文所用，术语IL12Rβ部分指IL12Rβ1或IL12Rβ2部分。

IL12Rβ2部分：IL12Rβ2部分是包含以下的氨基酸序列：与哺乳动物例如人或鼠的IL12受体亚基β-2(IL12Rβ2)的IL12 p35结合部分的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。IL12Rβ2的IL12 p35结合部分包含受体亚基的胞外结构域或由受体亚基的胞外结构域组成。人IL12Rβ的序列具有Uniprot标识符Q99665(uniprot.org/uniprot/Q99665)，其中氨基酸24至622构成胞外结构域。鼠IL12Rβ2的序列具有Uniprot标识符P97378(uniprot.org/uniprot/Q60837)，其中氨基酸24至637构成胞外结构域。IL12Rβ2包含信号序列(在人IL12Rβ2的氨基酸1-23处)、胞外p40结合结构域(在人IL12Rβ2的氨基酸24至622处)、螺旋跨膜结构域(在人IL12Rβ2的氨基酸623至643处)和细胞质结构域(在人IL12Rβ2的氨基酸644至862处)。

优选地，IL12Rβ2部分包含以下：哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ2的胞外结构域(或包含与哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ2的胞外结构域至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列)。

主要组织相容性复合物和MHC：这些术语指天然存在的MHC分子、MHC分子的各个链(例如，MHC I类α(重)链、β2微球蛋白、MHC II类α链和MHC II类β链)、MHC分子的此类链的各个亚基(例如，MHC I类α链的α1、α2和/或α3亚基、MHC II类α链的α1-α2亚基、MHC II类β链的β1-β2亚基)以及部分(例如，肽结合部分，例如肽结合槽)、突变体及其各种衍生物(包括融合蛋白)，其中此类部分、突变体和衍生物保留展示抗原肽以用于由T细胞受体(TCR，例如抗原特异性TCR)识别的能力。MHC I类分子包含由重a链的α1结构域和α2结构域形成的肽结合槽，其可以装载大约8-10个氨基酸的肽。尽管事实上两类MHC都结合肽之内的约9个氨基酸(例如5至17个氨基酸)的核心，但MHC II类肽结合槽的开放式性质(II类MHC a肽的α1结构域与II类MHCβ多肽的β1结构域相缔合)允许更广泛的肽长度范围。结合MHC II类的肽的长度通常在13个至17个氨基酸之间变化，但较短或较长的长度并不是不常见。因此，肽可以在MHC II类肽结合槽之内移动，这改变在任何给定时间直接位于槽之内的9聚体。本文使用特定MHC变体的常规鉴定。该术语涵盖“人白细胞抗原”或“HLA”。

掩蔽部分或IL12掩蔽部分：术语(与IL12相关的)“掩蔽部分”和“IL12掩蔽部分”指能够与p35部分和/或p40部分可逆结合的部分。在一些实施方案中，掩蔽部分是IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)。在其他实施方案中，掩蔽部分是抗IL12(例如抗p35或抗p40)抗体片段。

单体和IL12单体：如本文所用，术语单体和IL12单体指包含第一多肽链的分子，其(a)包含p35部分和p40部分并且能够与第二多肽链缔合；(b)包含p35部分并且能够与第二多肽链上的p40部分缔合；(c)包含p40部分并且能够与第二多肽链上的p35部分缔合；(d)包含多聚化部分(例如，Fc结构域)并且能够与第二多肽链上的相应多聚化部分(例如，另一个Fc结构域)缔合；或(e)以上(a)、(b)、(c)和(d)的任何组合。因此，单体能够通过p35部分/p40部分配对和/或多聚化部分(例如，Fc结构域)配对与其他单体缔合。在一些实施方案中，单体之间的一个或多个缔合通过链间二硫键桥来稳定化，例如，在p35/p40界面处或通过铰链序列或Fc结构域的其他部分。因此，本公开的单体能够与另一个单体缔合以形成二聚体。二聚体可以是同二聚体，其中每个构成单体是相同的，或者是异二聚体，在这种情况下每个构成单体是不同的。如本文所用，提及“单体”不排除以下的存在：不包含p35、p40或多聚化部分的第二多肽链，例如Fab结构域的轻链。因此，两个单体的“二聚体”可以包含多于两个的多肽链，例如可以包含三个或四个多肽链。

单体p40或单体p40多肽链：术语“单体p40”、“单体p40多肽链”等等指包含IL12-p40部分而没有二聚化部分(例如，没有Fc结构域)的多肽链。单体p40多肽链可以任选地包括p40掩蔽部分(例如IL12Rβ1的p40结合部分或基于抗p40抗体的掩蔽部分)。此类多肽链有时在本文中称为“掩蔽的单体p40”。

单价：如本文所用，涉及IL12和/或IL12受体激动剂中的靶向部分的术语“单价”意指分别仅具有单个IL12异二聚体(即，一个p40xp35异二聚体)和/或靶向部分的IL12受体激动剂。

可操作地连接：如本文所用，术语“可操作地连接”指多肽链的两个或更多个区之间的功能性关系，其中两个或更多个区连接从而产生功能性多肽，或指两个或更多个核酸序列之间的功能性关系，例如，以产生两个多肽组分的框内融合或以将调节序列连接至编码序列。

肽-MHC复合物、pMHC复合物、槽内肽：“肽-MHC复合物”、“pMHC复合物”和“槽内肽”指(i)MHC结构域(例如，人MHC分子或其部分(例如，其肽-结合槽，例如其胞外部分)、(ii)抗原肽，和任选地，(iii)β2微球蛋白结构域(例如人β2微球蛋白或其部分)，其中MHC结构域、抗原肽和任选的β2微球蛋白结构域以此类方式复合：允许与T细胞受体特异性结合的方式。在一些实施方案中，pMHC复合物至少包含人HLA I类/人β2微球蛋白分子和/或人HLA II类分子的胞外结构域。

单链Fv或scFv：如本文所用，术语“单链Fv”或“scFv”指包含抗体的VH结构域和VL结构域的多肽链，其中这些结构域存在于单个多肽链中。

特异性地(或选择性地)结合：如本文所用，术语“特异性地(或选择性地)结合”指靶向部分(例如抗体或其抗原结合结构域(“ABD”))与在生理条件下相对稳定的靶分子形成复合物。特异性结合可以特征在于约5x10^-2M或更低(例如，小于5x10^-2M、小于10^-2M、小于5x10^-3M、小于10^-3M、小于5x10^-4M、小于10^-4M、小于5x10^-5M、小于10^-5M、小于5x10^-6M、小于10^- ⁶M、小于5x10^-7M、小于10^-7M、小于5x10^-8M、小于10^-8M、小于5x10^-9M、小于10^-9M或小于10^-10M)的K_D。用于确定抗体或抗体片段(例如IL12受体激动剂或组分靶向部分)与靶分子的结合亲和力的方法是本领域众所周知的，并且包括例如平衡透析、表面等离振子共振(例如，Biacore测定)、荧光活化细胞分选(FACS)结合测定等等。然而，包含特异性结合来自一个物种的靶分子的靶向部分或其ABD的本公开的IL12受体激动剂可以与来自一个或多个其他物种的靶分子具有交叉反应性。

受试者：术语“受试者”包括人和非人动物。非人动物包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。除非另有说明，否则术语“患者”或“受试者”在本文中可互换地使用。

靶分子：如本文所用，术语“靶分子”指在细胞表面上或细胞外基质中表达的任何生物分子(例如，蛋白质、碳水化合物、脂质或其组合)，其可以被本公开的IL12受体激动剂中的靶向部分特异性结合。

靶向部分：如本文所用，术语“靶向部分”是指任何分子或其结合部分(例如，免疫球蛋白或抗原结合片段)，其可以结合至本公开的IL12受体激动剂待定位至的部位处的细胞表面或细胞外基质分子，例如在肿瘤细胞上或肿瘤微环境中的淋巴细胞上。除了将IL12受体激动剂定位于特定位点之外，靶向部分还可以具有功能性活性。例如，作为抗PD1抗体或其抗原结合部分的靶向部分还可以通过抑制PD1信号传导而展示出抗肿瘤活性或增强通过IL12突变蛋白的抗肿瘤活性。

治疗(treat、treatment、treating)：如本文所用，术语“治疗(treat、treatment、treating)”指减少或改善增殖性病症的进展、严重性和/或持续时间，或由施用本公开的一种或多种IL12受体激动剂所引起的增殖性病症的一个或多个症状(优选地，一个或多个可辨别的症状)的改善。在特定的实施方案中，术语“治疗(treat、treatment、treating)”指改善增殖性病症的至少一个可测量的物理参数，诸如肿瘤的生长，而不一定可由患者辨别。在其他实施方案中，术语“治疗(treat、treatment、treating)”指(通过例如可识别症状的稳定化来在物理上，通过例如物理参数的稳定化来在生理上，或两者)抑制增殖性病症的进展。在其他实施方案中，术语“治疗(treat、treatment、treating)”指肿瘤大小或癌细胞计数的减小或稳定化。

肿瘤：术语“肿瘤”在本文中与术语“癌症”可互换地使用，例如，这两个术语都涵盖固体瘤和液体瘤，例如弥漫性肿瘤或循环性肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括癌前以及恶性癌症和肿瘤。

肿瘤相关抗原：术语“肿瘤相关抗原”或“TAA”指在癌细胞表面上整体地或者作为片段(例如MHC/肽)表达的分子(通常是蛋白质、碳水化合物、脂质或其某些组合)，并且其可用于药剂对癌细胞的优先靶向。在一些实施方案中，TAA是由正常细胞和癌细胞两者表达的标志物，例如谱系标志物，例如B细胞上的CD19。在一些实施方案中，TAA是与正常细胞相比在癌细胞中过表达的细胞表面分子，例如与正常细胞相比，1倍过表达、2倍过表达、3倍过表达或更多。在一些实施方案中，TAA是在癌细胞中不适当合成的细胞表面分子，例如与正常细胞上表达的分子相比，含有缺失、添加或突变的分子。在一些实施方案中，TAA将整体地或作为片段(例如，MHC/肽)仅在癌细胞的细胞表面上表达，并且不在正常细胞的表面上合成或表达。因此，术语“TAA”涵盖对癌细胞特异的抗原，有时在本领域中称为肿瘤特异性抗原(“TSA”)。

通用轻链：如本文所用，术语“通用轻链”在靶向部分的情况下指能够与靶向部分的重链区配对并且还能够与其他重链区配对的轻链多肽。通用轻链还称为“共同轻链”。

VH：术语“VH”指抗体的免疫球蛋白重链的可变区，其包括scFv或Fab的重链。

VL:术语“VL”指免疫球蛋白轻链的可变区，其包括scFv或Fab的轻链。

6.2.IL12受体激动剂

本公开提供了包含IL12突变蛋白或由IL12突变蛋白组成的IL12受体激动剂。IL12突变蛋白包含p35部分和p40部分，并且与野生型IL12的不同之处在于(a)一级氨基酸序列(例如，与p35和/或p40相比的氨基酸插入、缺失或取代或上述任何组合)，和/或(b)与不与IL12天然缔合的额外结构域缔合，例如(i)多聚化部分(例如，二聚化结构域，诸如Fc结构域)结构域，和/或(ii)靶向部分，和/或(iii)稳定化部分，和/或(iv)IL12β受体(IL12βR1和/或IL12βR2)序列。

本公开的IL12受体激动剂和/或本公开的IL12受体激动剂中的IL12突变蛋白可具有氨基酸修饰，其导致与野生型IL12相比的与IL12受体复合物(例如包含IL12Rβ1和IL12Rβ2的受体复合物)的结合亲和力降低。总体而言，本公开的IL12受体激动剂和/或本公开的IL12受体激动剂中的IL12突变蛋白可以具有正常或减弱的与IL12受体复合物的结合(即，降低的亲和力)(例如，减弱了最多10倍、最多50倍、最多100倍、最多200倍、最多500倍、最多1,000倍、最多2,000倍或最多5,000倍)。在一些实施方案中，结合减弱了100至5,000倍、200至2,000倍、500至2,000倍或500至1,000倍。可以通过p35序列和/或p40序列中的一个或多个氨基酸取代和/或在IL12受体激动剂中包含的一个或多个IL12Rβ部分来减弱结合。

在某些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂和IL12突变蛋白在IL12p40部分、IL12 p35部分、或IL12 p40和p35部分两者中具有一个或多个氨基酸取代，其减少与IL12受体复合物的结合，例如如第6.3节及其小节中所公开的。例如，在一些实施方案中，与野生型人IL12相比，IL12突变蛋白可以具有与人IL12受体复合物最多100倍至1,000倍减弱的结合。示例性氨基酸取代在第6.3.1节和第6.3.2节中公开，并且包含全长人p40或全长鼠p40的W37处的取代，其减少与IL12Rβ1的结合，例如取代W37A。

本公开的某些方面涉及IL12受体激动剂，包括：(a)第一多肽链，其在N末端至C末端方向上包含第一靶向部分或靶向部分组分、第一Fc结构域和p35部分；(b)第二多肽链，其在N末端至C末端方向上包含第二靶向部分或靶向部分组分和第二Fc结构域；(c)第一Fc结构域与p35部分之间的p40部分或形式为单体p40的p40部分；(d)经配置以掩蔽p35部分或p40部分的IL12Rβ部分或IL12抗体片段。p40部分和/或p35部分可以具有减弱取代，例如，如第6.3节中所述。在一些实施方案中，p40部分在对应于全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37的位置处具有氨基酸取代，例如取代W37A。

本公开的进一步方面涉及IL12受体激动剂，其包含IL12突变蛋白，其中IL12受体激动剂与野生型IL12相比具有至少500倍的减弱，其中IL12受体激动剂包含：(a)通过第一Fc结构域和第二Fc结构域二聚化的第一多肽链和第二多肽链；(b)第一多肽链上的任选的第一靶向部分或靶向部分组分，和第二多肽链上的任选的第二靶向部分或靶向部分组分；(c)p35部分和p40部分；以及(d)经配置以掩蔽p35部分或p40部分的IL12Rβ部分或IL12抗体片段。

本公开的又进一步方面涉及IL12受体激动剂，其在通过第一Fc结构域和第二Fc结构域二聚化的第一多肽链和第二多肽链上包含：(a)任选的第一靶向部分和任选的第二靶向部分；(b)包含p35部分和p40部分的IL12突变蛋白，其中：(i)p35部分包含减弱氨基酸取代，任选地其中减弱氨基酸取代位于以下位置处：(A)全长人p35的氨基酸Y189或全长鼠p35的氨基酸Y185，其中该取代任选地是A、V、R或E；(B)全长人p35的氨基酸I193或全长鼠p35的氨基酸M189，其中该取代任选地是A、V或E；(C)全长人p35的氨基酸R211或全长鼠p35的氨基酸R207，其中该取代任选地是A或K；或(D)(A)-(C)的任何组合；和/或(ii)p40部分包含减弱氨基酸取代，任选地其中减弱氨基酸取代位于以下位置处：(A)全长人p40的氨基酸K28或全长鼠p40的氨基酸K28，其中该取代任选地是A；(B)全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37，其中该取代任选地是A；(C)全长人p40的氨基酸D115或全长鼠p40的氨基酸E115，其中该取代任选地是A；(D)全长人p40的氨基酸K118或全长鼠p40的氨基酸K118，其中该取代任选地是A；(E)全长人p40的氨基酸K126或全长鼠p40的氨基酸K126，其中该取代任选地是A；(F)全长人p40的氨基酸Y268或全长鼠p40的氨基酸Y265，其中该取代任选地是V或F；(G)全长人p40的氨基酸Y314或全长鼠p40的氨基酸Y318，其中该取代任选地是F；或(H)(A)至(G)的任何组合；和(c)经配置以掩蔽p35部分或p40部分的IL12Rβ部分或IL12抗体片段。

p40与IL12Rβ1和p35与IL12Rβ2的结合亲和力可以通过表面等离子共振(SPR)技术(在Biacore仪器上分析)进行测定(Liljeblad等人,2000,Glyco J17:323-329)。

在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂和IL12突变蛋白可包含IL12受体序列，例如IL12Rβ1和/或IL12Rβ2序列，如第6.4节及其小节中所述，据信其减弱IL12受体激动剂治疗的副作用。

IL12受体激动剂或IL12突变蛋白可以由一个或多个多肽构成。在一些实施方案中，IL12受体激动剂由多个(例如两个)单体构成，该单体包含p40和/或p35部分，并且在一些实施方案中还包含多聚化部分。

IL12受体激动剂或IL12突变蛋白进一步可以包含和/或一个或多个靶向部分和/或一个或多个稳定化部分和/或一个或多个IL12βR部分。示例性多聚化部分在第6.6节中描述，并且包含赋予IL12受体激动剂同二聚化或异二聚化能力的Fc结构域。游离IL12具有差的药代动力学(约5小时至约20小时的血清半衰期)，并且不受理论束缚，据信包含多聚化结构域，诸如Fc结构域，改善了血清稳定性以及IL12受体激动剂的药代动力学概况。因此，Fc结构域可以是双重目的结构域，这赋予稳定化部分的稳定特性，如第6.7节中所述。

示例性靶向部分在第6.4节中描述，并且包含：结合至肿瘤相关抗原、结合至肿瘤微环境抗原或结合至肿瘤淋巴细胞的抗原结合结构域(例如，scFv或Fab)，以及识别肿瘤淋巴细胞的肽-MHC复合体。

在一些实施方案中，IL12受体激动剂包含一个或多个掩蔽部分。

在一些实施方案中，IL12受体激动剂包含一个或多个基于IL12Rβ的掩蔽部分，例如IL12Rβ1部分、IL12Rβ2部分，或IL12Rβ1部分和IL12Rβ1部分两者。示例性IL12Rβ1部分在第6.4.1节中描述。示例性IL12Rβ2部分在第6.4.2节中描述。

在其他实施方案中，IL12受体激动剂包含一个或多个基于抗体的掩蔽部分，例如基于抗p35抗体的掩蔽部分或基于抗p40抗体的掩蔽部分。在一些实施方案中，基于抗体的掩蔽部分是Fv(例如scFv)。在其他实施方案中，基于抗体的掩蔽部分是Fab。

在一些实施方案中，本公开的IL12激动剂由两个单体构成，任选地其与一个或多个额外的多肽链缔合(例如，与包含Fab靶向部分的轻链的多肽链缔合)。单体可以相同，从而形成同二聚体，或不同，从而形成异二聚体。IL12受体激动剂的每个单体的多聚化部分可以经配置以二聚化在一起。示例性多聚化部分在第6.6节中进行了描述，并且包括Fc结构域。

已经发现，掺入位于Fc结构域C末端的p40部分和p35部分提高了表达产量并减少聚集，从而导致更高质量的本公开的IL12受体激动剂制剂，其中该Fc结构域配置有位于p35部分的N末端的p40部分。当p35部分位于紧邻Fc结构域的C末端时(有或没有分隔p35部分和Fc结构域的接头)，可以通过在缺少Fc结构域的单独的多肽链上提供作为单体p40部分的p40部分来改进表达和聚集。因此，在一些实施方案中，本公开的IL12激动剂进一步包含与两个单体之一中的p35部分缔合的单体p40多肽链。

在一些实施方案中，IL12突变蛋白或IL12激动剂可以包含连接其一条或多条多肽链的各种组分的一个或多个接头序列，例如(1)当存在于相同多肽链上时，IL12的p35部分和p40部分，(2)p35部分和多聚化结构域(例如，Fc结构域)，(3)p40部分和多聚化结构域(例如，Fc结构域)，(4)p35部分和靶向部分或其组分(例如，scFv或Fab的重链)，(5)p40部分和靶向部分或其组分(例如，scFv或Fab的重链)，(6)多聚化结构域(例如，Fc结构域)和靶向部分或其组分(例如scFv或Fab的重链)，(7)p35部分、p40部分、多聚化结构域或靶向部分，或其组分，以及IL12βR部分，例如，IL12βR1部分或IL12βR2部分，或(8)上述的任何组合。示例性接头在第6.8节中描述。

大多数IL12突变蛋白和IL12激动剂是多聚体，例如，二聚体，由于存在于不同多肽链上的p35和p40部分的缔合和/或由于经配置以与彼此(例如，Fc结构域)缔合的多聚化部分的缔合。本公开通常涉及含有p35部分、p40部分和/或多聚化部分(例如，第一Fc结构域)的多肽链，其能够分别与作为“单体”或“IL12单体”的含有p40部分、p35部分和/或相应的多聚化部分(例如，第二Fc结构域)的另一条多肽链缔合。以下是本公开的IL12单体的一些说明性实例，以N末端至C末端方向进行描述。每个单体的单个元件在本文中详细描述，例如在随后的小节和编号的实施方案中。

(1)示例性单体1：IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分(参见例如图2B，左侧单体，图2C，左侧单体和图2N(两个单体))。

(2)示例性单体2：IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分(参见例如图2B，右侧单体和图2C，右侧单体)。

(3)示例性单体3：多聚化部分-任选的接头-IL12 p35部分(参见，例如，图2D(左侧单体)、图2E(左侧单体)、图2O(两个单体)、图2P(左侧单体)、图4M(左侧单体)、图4U(左侧单体)、图4V(左侧单体)和图4W(左侧单体))。

(4)示例性单体4：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分(参见例如图2D(右侧单体)、图2E(右侧单体)和图4L(右侧单体))。

(5)示例性单体5：IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分(参见例如图2H(两个单体)、图2I(两个单体)、图3B、图3D、图3G、图5E(右侧单体)、图5P(左侧单体)和图5Q(左侧单体))。

(6)示例性单体6：IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分(参见例如图2J，两个单体)。

(7)示例性单体7：多聚化部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分(参见例如图2G(左侧单体)、图2L(两个单体)、图3I)。

(8)示例性单体8：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分(参见例如图2F(左侧单体)、图2K(两个单体)、图2M(两个单体)、图3C、图3E、图3F、图3H、图4F(左侧单体)、图4J(左侧单体)、图4K(左侧单体)、图4S(左侧单体)、图39A(左侧单体)和图39B(左侧单体))。

(9)示例性单体9：多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分(参见例如图4C(两个单体)、图4E(两个单体)、图4I(左侧单体)、图4N(左侧单体)和图4T(左侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(10)示例性单体10：多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(11)示例性单体11：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12p35部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)(参见例如图4B(两个单体)、图4D(两个单体)、图4G(左侧单体)和图4H(左侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(12)示例性单体12：多聚化部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12p40部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)。

(13)示例性单体13：IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(14)示例性单体14：IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(15)示例性单体15：IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分(参见例如图5O(左侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(16)示例性单体16：IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(17)示例性单体17：IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分(参见例如图5G，左侧单体)。

(18)示例性单体18：IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分(参见例如图5G，右侧单体)。

(19)示例性单体19：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p35部分(参见例如图5B(左侧单体)、图5V(左侧单体)、图5W(左侧单体)和图5X(左侧单体))。

(20)示例性单体20：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p40部分(参见例如图5B，右侧单体)。

(21)示例性单体21：靶向部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分。

(22)示例性单体22：靶向部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分。

(23)示例性单体23：多聚化部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-靶向部分。

(24)示例性单体24：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-靶向部分。

(25)示例性单体25：IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分(参见例如图5F，两个单体)。

(26)示例性单体26：IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。

(27)示例性单体27：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p35部分-任选的接头-IL12 p40部分。

(28)示例性单体28：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p40部分-任选的接头-IL12 p35部分(参见例如图5C(左侧单体)、图5D(两个单体)、图5I(左侧单体)、图5J(左侧单体)、图5M(左侧单体)、图5N(左侧单体)、图39C(左侧单体)和图39D(左侧单体))。

(29)示例性单体29：靶向部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分。

(30)示例性单体30：靶向部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分。

(31)示例性单体31：多聚化部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12p40部分-任选的接头-靶向部分。

(32)示例性单体32：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12p35部分-任选的接头-靶向部分。

(33)示例性单体33：靶向部分-任选的接头-多聚化部分(参见例如图5C(右侧单体)、图5E(左侧单体)、图5H(右侧单体)、图5L(右侧单体)、图5O(右侧单体)、图5P(右侧单体)、图5Q(右侧单体)、图5R(右侧单体)和图5V(右侧单体))。

(34)示例性单体34：多聚化部分-任选的接头-靶向部分。

(35)示例性单体35：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分(参见例如图5H(左侧单体)、图5K(左侧单体)和图5R(左侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(36)示例性单体36：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(37)示例性单体37：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(38)示例性单体38：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(39)示例性单体39：多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(40)示例性单体40：多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(41)示例性单体41：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12p35部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(42)示例性单体42：多聚化部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12p40部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(43)示例性单体43：IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(44)示例性单体44：IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(45)示例性单体45：IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(46)示例性单体46：IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(47)示例性单体47：靶向部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(48)示例性单体48：靶向部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(49)示例性单体49：靶向部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(50)示例性单体50：靶向部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-靶向部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(51)示例性单体51：多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)(参见例如图4J(右侧单体)、图4K(右侧单体)、图4N(右侧单体)、图4S(右侧单体)、图4V(右侧单体)和图4W(右侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(52)示例性单体52：IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分。

(53)示例性单体53：多聚化部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)(参见例如图4L(左侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(54)示例性单体54：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)(参见例如图4M(右侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(55)示例性单体55：多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12p35部分-任选的接头-基于抗体的掩蔽部分(参见例如图4O(左侧单体)和图4P(左侧单体))。

(56)示例性单体56：多聚化部分-任选的接头-基于抗体的掩蔽部分(参见例如图4Q(右侧单体)、图4R(右侧单体)、图39A(右侧单体)和图39B(右侧单体))。

(57)示例性单体57：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12Rβ部分(例如IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)(参见例如图5I(右侧单体)、图5J(右侧单体)、图5K(右侧单体)、图5S(右侧单体)、图5W(右侧单体)和图5X(右侧单体))。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(58)示例性单体58：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-基于抗体的掩蔽部分(参见例如图5L(左侧单体))。

(59)示例性单体59：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-基于抗体的掩蔽部分(参见例如图5M(右侧单体)、图5N(右侧单体)、图39C(右侧单体)和图39D(右侧单体))。

(60)示例性单体60：多聚化部分(参见例如图2F(右侧单体)、图2G(右侧单体)、图4O(右侧单体)、图4P(右侧单体)、图4T(右侧单体)和图4U(右侧单体))。

(61)示例性单体61：IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-IL12 p40部分-任选的接头-IL12 p35部分-任选的接头-多聚化部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(62)示例性单体62：IL12Rβ部分(例如，IL12Rβ1部分或IL12Rβ2部分)-任选的接头-多聚化部分。在一些实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

(63)示例性单体63：靶向部分-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12p40部分-任选的接头-IL12 p35部分(参见例如图5S(左侧单体))。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体1的单体(参见例如图2N)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体1和示例性单体2(参见例如图2B和2C)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体3的单体(参见例如图2O)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体3和示例性单体4(参见例如图2D和2E)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体3和示例性单体51的IL12受体激动剂，其中示例性单体3与单体p40缔合(参见例如图4V(左侧单体)和图4W(左侧单体))。在一些实施方案中，单体p40是掩蔽的单体p40(参见例如图4U和图4W)。掩蔽可以是例如基于IL12Rβ1或基于抗p40抗体的掩蔽。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体3和示例性单体54(参见例如图4M)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体3和示例性单体60的IL12受体激动剂，其中示例性单体3与单体p40(参见例如图2P(左侧单体)和图4U(左侧单体))缔合。在一些实施方案中，单体p40是掩蔽的单体p40(参见例如图4U)。掩蔽可以是例如基于IL12Rβ1或基于抗p40抗体的掩蔽。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体4和示例性单体53(参见例如图4L)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体5的单体(参见例如图2H和2I)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体5和示例性单体33(参见例如图5E、5P和5Q)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体6的单体(参见例如图2J)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体7的单体(参见例如图2L)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体7和示例性单体60(参见例如图2G)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体8的单体(参见例如图2K和2M)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体8和示例性单体60(参见例如图2F和4F)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体8和示例性单体51(参见例如图4J、4K和4S)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体8和示例性单体56(参见，例如图4Q、4R、39A和39B)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体9的单体(参见例如图4C和图4E)的IL12受体激动剂。根据示例性单体9的单体中的IL12Rβ部分可以两者都是IL12Rβ1部分，可以两者都是IL12Rβ2部分，或者可以是IL12Rβ1部分和IL12Rβ2部分的组合。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体9和示例性单体60(参见例如图4I和图4T)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体11的单体(参见例如图4B和图4D)的IL12受体激动剂。根据示例性单体11的单体中的IL12Rβ部分可以两者都是IL12Rβ1部分，可以两者都是IL12Rβ2部分，或者可以是IL12Rβ1部分和IL12Rβ2部分的组合。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体11和示例性单体60(参见例如图4G和4H)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体15和示例性单体33(参见例如图5O)的IL12受体激动剂。在一个实施方案中，示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在另一个实施方案中，示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体17和示例性单体18(参见例如图5G)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体19和示例性单体20(参见例如图5B)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体19和示例性单体33的IL12受体激动剂，其中示例性单体19与单体p40(参见例如图5V(左侧单体))缔合。在一些实施方案中，单体p40是掩蔽的单体p40(参见例如图5V)。掩蔽可以是例如基于IL12Rβ1或基于抗p40抗体的掩蔽。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体19和示例性单体57的IL12受体激动剂，其中示例性单体19与单体p40(参见例如图5W(左侧单体)和图5X(左侧单体))缔合。在一些实施方案中，单体p40是掩蔽的单体p40(参见例如图5X)。掩蔽可以是例如基于IL12Rβ1或基于抗p40抗体的掩蔽。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体25的单体(参见例如图5F)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含两个根据示例性单体28的单体(参见例如图5D)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体28和示例性单体33(参见例如图5C)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体28和示例性单体57(参见例如图5I和5J)的IL12受体激动剂。在一个实施方案中，示例性单体57中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在另一个实施方案中，示例性单体57中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体28和示例性单体59(参见例如图5M、5N、39C和39D)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体33和示例性单体35(参见例如图5H和5R)的IL12受体激动剂。在一个实施方案中，示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。在另一个实施方案中，示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体33和示例性单体58(参见例如图5L)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体35和示例性单体57(参见例如图5K)的IL12受体激动剂。示例性单体35和示例性单体57中的IL12Rβ部分可以两者都是IL12Rβ1部分，可以两者都是IL12Rβ2部分，或者可以是IL12Rβ1部分和IL12Rβ2部分的组合。在一个实施方案中，示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体57中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分。在另一个实施方案中，示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体57中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体55和示例性单体60(参见例如图4O和4P)的IL12受体激动剂。

在一些实施方案中，本公开提供了包含示例性单体57和示例性单体63(参见例如图5S)的IL12受体激动剂。

示例性单体配对的额外的实施方案如第7节中公开的编号的实施方案中所示。

在上述包含具有IL12Rβ部分的两个示例性单体的IL12受体激动剂的实施方案中，IL12Rβ部分可以两者都是IL12Rβ1部分，可以两者都是IL12Rβ2部分，或者可以是IL12Rβ1部分和IL12Rβ2部分的组合。

在本公开的IL12受体激动剂中，当靶向部分为抗体的抗原结合结构域(“ABD”)时，每个单体可以由两条多肽链构成，其中一条多肽链携带重链可变区，并且另一条多肽链携带轻链可变区。靶向部分本身可以包含在单独的多肽链上的重链可变结构域和轻链可变结构域。例如，就包括靶向部分的IL12受体激动剂单体而言，该单体可以由多肽A和多肽B构成。多肽A从N末端到C末端可以包括，例如：靶向部分的重链可变结构域-任选的接头-多聚化部分-任选的接头-IL12 p40部分-IL12 p35部分；并且多肽B可以包含靶向部分的轻链可变结构域。

或者，scFv可用作靶向部分，其中靶向部分的重链可变区和轻链可变区在单个多肽中与彼此融合。

在某些方面，本公开的IL12受体激动剂具有大于1、并且优选大于2、和甚至更优选大于10的治疗指数。在特定的实施方案中，治疗指数为约10、约20、约100或约200。

在各种实施方案中，IL12受体激动剂不包含(a)除了IL12之外的细胞因子；(b)抗IL12抗体或抗体片段；(c)抗DNA抗体或抗体片段；(b)非结合抗体可变结构域；或其中两个、三个或全部四个的任何组合。

本公开的IL12受体激动剂的组分的进一步细节呈现如下。

6.2.1.IL12受体激动剂的生化特性

在体内，抗体的大复合物可以通过吞噬作用迅速消除，这导致抗体降低的功效。大复合物还可以增加治疗抗体的免疫原性。参见例如WO2020047067A1。在制造期间，聚集是常见的问题，其损害抗体的质量、安全性和有效性。本公开的IL12受体激动剂(例如，包含单种受体结构域类型(例如，IL12Rβ1或IL12Rβ2的D1)的掩蔽的IL12受体激动剂)与具有替代结构的受体激动剂(例如，包含两种受体结构域类型(例如，IL12Rβ1或IL12Rβ2的D1和D2)的掩蔽的IL12受体激动剂相比，可以不太容易聚集，例如在体内或离体条件下。因此，在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂在哺乳动物细胞系中重组生产期间，具有比具有替代结构的IL12受体激动剂至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少95％或至少99％更少的聚集。IL12受体激动剂的寡聚状态可以通过例如尺寸排阻超高效液相色谱来确定。

在一些实施方案中，据信本公开的IL12受体激动剂具有良好的热稳定性。高热稳定性和低聚集倾向促进抗体的制造和储存，并促进长的血清半衰期。Carter和Merchant,1997,Curr Opin Biotechnol,8(4):449-454。热稳定性可以通过本领域已知的方法测量，包括差示扫描荧光测定法(DSF)。

6.3.IL12 p40和p35部分

本公开提供了具有野生型或变体p35和p40序列的p35和p40部分的IL12受体激动剂。本公开进一步提供了分别具有变体p35和p40序列的p35和p40部分。示例性p40部分在第6.3.1节中公开，示例性p35部分在第6.3.2节中公开。

6.3.1.IL12 p40部分

本公开的IL12受体激动剂的每个IL12 p40部分包括野生型IL12 p40部分或变体IL12 p40部分。在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含单个IL12 p40部分(例如，在其中IL12受体激动剂对于IL12是单价的实施方案中，在第一单体上或在第二单体上的IL12 p40部分)。在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含两个IL12 p40部分(例如，在IL12激动剂对于IL12是二价的实施方案中，在第一单体上的第一IL12 p40部分和在第二单体上的第二IL12 p40部分)。在此类实施方案中，两个IL12 p40部分可以是相同的，或者它们可以是不同的。

在真核细胞中，人IL12 p40亚基合成为328个氨基酸的前体多肽，其中去除22个氨基酸以生成成熟的IL12 p40。在一些实施方案中，IL12 p40部分是包含以下的氨基酸序列：与哺乳动物例如人或鼠p40的IL12Rβ1结合部分(有时称为IL12的β亚基或IL12β)的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。在一些实施方案中，哺乳动物p40是全长人p40。在其他实施方案中，哺乳动物p40是成熟人p40。人p40的序列具有Uniprot标识符P29460(uniprot.org/uniprot/P29460)。在一些实施方案中，哺乳动物p40是全长鼠p40。在一些实施方案中，哺乳动物p40是成熟鼠p40。鼠p40的序列具有Uniprot标识符P43432(uniprot.org/uniprot/P43432)。

在一些实施方案中，p40部分包含p40 D2和D3结构域，但不包含p40D1结构域。在其他实施方案中，p40部分包含p40 D1、D2和D3结构域。

全长人IL12 p40具有以下氨基酸序列(信号序列＝下划线；D1结构域＝斜体；D2结构域＝粗体；D3结构域＝粗体并下划线)：

全长人p40的氨基酸23是成熟人p40的氨基酸1。

在某些实施方案中，IL12 p40部分包含减少与IL12Rβ1结合的一个或多个氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，与野生型人IL12 p40相比，IL12p40部分可以具有最高1,000倍减弱的与人IL12Rβ1的结合。在一些实施方案中，与野生型人IL12 p40相比，IL12部分可以具有最高100倍、最高50倍、最高25倍、最高20倍、最高15倍、最高10倍或最高5倍减弱的与人IL12Rβ1的结合。

有用的IL12 p40变体的其他特征可以包括使与IL12 p35二聚化不稳定的能力。

示例性的氨基酸取代包括但不限于以下位置处的取代：K6、W15、D18、E32、E33、D34、Q42、S43、E45、Q56、E59、F60、D62、E73、K84、D87、D93、K96、K99、E100、N103、K104、N113、Q144、R159、D161、K163、E187、N200、N218、Q229、E235、Y246、C252、Q256、K258、K260、E262、K264、N281、Y292和E299，其中除非另有说明，否则氨基酸位置相对于成熟人IL12 p40氨基酸序列，不包括22个氨基酸信号序列。表1中提供了全长人序列、全长鼠序列和成熟鼠序列中相应的氨基酸位置。表1还提供了每个所注意的位置处的示例性取代。

成熟人K6处的示例性氨基酸取代是K6A。

成熟人W15处的示例性氨基酸取代是W15A。

成熟人D18处的示例性氨基酸取代包括D18N、D18K和D18A。成熟人E32处的示例性氨基酸取代包括E32Q和E32A。

成熟人E33处的示例性氨基酸取代包括E33Q和E33A。

成熟人D34处的示例性氨基酸取代包括D34N、D34K和D34A。

成熟人Q42处的示例性氨基酸取代是Q42E。

成熟人S43处的示例性氨基酸取代包括S43E和S34K。

成熟人E45处的示例性氨基酸取代是E45Q。

成熟人Q56处的示例性氨基酸取代是Q56E。

成熟人E59处的示例性氨基酸取代包括E59K、E59Q和E59A。

成熟人F60处的示例性氨基酸取代是F60A。

成熟人D62处的示例性氨基酸取代是D62N。

成熟人E73处的示例性氨基酸取代是E73Q。

成熟人K84处的示例性氨基酸取代是K84A。

成熟人D87处的示例性氨基酸取代是D87N。

成熟人D93处的示例性氨基酸取代是D93A。

成熟人K96处的示例性氨基酸取代是E93A。

成熟人K99处的示例性氨基酸取代包括K99E、K99Y和K99A。

成熟人E100处的示例性氨基酸取代是E100Q。

成熟人N103处的示例性氨基酸取代包括N103D和N103Q。

成熟人K104处的示例性氨基酸取代是K104A。

成熟人N113处的示例性氨基酸取代包括N113D和N113Q。

成熟人Q144处的示例性氨基酸取代是Q144E。

成熟人R159处的示例性氨基酸取代是R159E。

成熟人D161处的示例性氨基酸取代是D161N。

成熟人K163处的示例性氨基酸取代是K163E。

成熟人E187处的示例性氨基酸取代是E187Q。

成熟人N200处的示例性氨基酸取代包括N200D和N200Q。

成熟人N218处的示例性氨基酸取代是N218Q。

成熟人Q229处的示例性氨基酸取代是Q229E。

成熟人E235处的示例性氨基酸取代是E235Q。

成熟人Y246处的示例性氨基酸取代包括Y246V和Y246F。

成熟人C252处的示例性氨基酸取代是C252S。

成熟人Q256处的示例性氨基酸取代是Q256N。

成熟人K258处的示例性氨基酸取代是K258E。

成熟人K260处的示例性氨基酸取代是K260E。

成熟人E262处的示例性氨基酸取代是E262Q。

成熟人K264处的示例性氨基酸取代是K264E。

成熟人N281处的示例性氨基酸取代包括N281D和N281Q。

成熟人Y292处的示例性氨基酸取代是Y292F。

成熟人E299处的示例性氨基酸取代是E299Q。

在某些实施方案中，成熟人Y246和/或Y292处的氨基酸取代通过阻止两个亚基之间的二硫键的形成而使p40/p35异二聚体不稳定。Y246处的示例性氨基酸取代包括Y246V和Y246F。Y292处的示例性氨基酸取代是Y292F。

在一些实施方案中，p40部分直接或者间接地(任选地经由接头(例如，如第6.8节中所述))融合至IL12Rβ1的IL12 p40结合结构域(即IL12Rβ1片段，例如，如第6.4.1节中所述的)。当存在时，IL12Rβ1的IL12 p40结合结构域可以位于IL12 p40部分的N末端或C末端。当p40部分“直接”融合至IL12Rβ1的IL12 p40结合结构域时，p40部分和IL12Rβ1的IL12 p40结合结构域相邻地位于同一单体上，仅由接头(如果存在)分隔。当p40部分“间接”融合至IL12Rβ1的IL12 p40结合结构域时，p40部分和IL12Rβ1的IL12 p40结合结构域由同一单体上的一个或多个其他结构域(例如，IL12 p35部分)分隔，或位于单独的单体上。

6.3.2.IL12 p35部分

本公开的IL12受体激动剂的每个IL12 p35部分包括野生型IL12 p35部分或变体IL12 p35部分。在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含单个IL12 p35部分(例如，在其中IL12受体激动剂对于IL12是单价的实施方案中，在第一单体上或在第二单体上的IL12 p35部分)。在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含两个IL12 p35部分。在此类实施方案中，两个IL12 p35部分可以是相同的，或者它们可以是不同的。

在真核细胞中，人IL12 p35亚基合成为219个氨基酸的前体多肽，其中去除22个氨基酸以生成成熟的IL12 p35。在一些实施方案中，IL12 p35部分是包含以下的氨基酸序列：与哺乳动物例如人或鼠p35的IL12Rβ2结合部分(有时称为IL12的α亚基或IL12α)的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。在一些实施方案中，哺乳动物p35是全长人p35。在其他实施方案中，哺乳动物p40是成熟人p35。人p35的序列具有Uniprot标识符P29459(uniprot.org/uniprot/P29459)。在一些实施方案中，哺乳动物p35是全长鼠p35。在一些实施方案中，哺乳动物p35是成熟鼠p40。鼠p40的序列具有Uniprot标识符P43431(uniprot.org/uniprot/P43431)。

全长人IL12 p35具有以下氨基酸序列(信号序列＝下划线)：

全长人p35的氨基酸23是成熟人p35的氨基酸1。

在某些实施方案中，IL12 p35部分包含减少与IL12Rβ2结合的一个或多个氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，与野生型人IL12 p35相比，IL12p35部分可以具有最高1,000倍减弱的与人IL12Rβ1的结合。在一些实施方案中，与野生型人IL12 p35相比，IL12部分可以具有最高100倍、最高50倍、最高25倍、最高20倍、最高15倍、最高10倍或最高5倍减弱的与人IL12Rβ2的结合。

有用的IL12 p35变体的其他特征可以包括使与IL12 p40的二聚化不稳定的能力。

示例性的氨基酸取代包括但不限于以下位置处的取代：N21、Q35、E38、E45、D55、N71、L75、N76、E79、N85、L89、F96、M97、L124、M125、Q130、Q135、N136、E143、Q146、Y167、I171和R189，其中氨基酸位置相对于成熟人IL12 p35氨基酸序列，不包括22个氨基酸信号序列。表2中提供了全长人序列、全长鼠序列和成熟鼠序列中相应的氨基酸位置。表2还提供了每个所注意的位置处的示例性取代。

成熟人N21处的示例性氨基酸取代是N21D。

成熟人Q35处的示例性氨基酸取代是Q35D。

成熟人E38处的示例性氨基酸取代是E38Q。

成熟人E45处的示例性氨基酸取代是E45Q。

成熟人D55处的示例性氨基酸取代包括D55Q和D55K。成熟人N71处的示例性氨基酸取代是N71D。

成熟人L75处的示例性氨基酸取代是L75A。

成熟人N76处的示例性氨基酸取代是N76D。

成熟人E79处的示例性氨基酸取代是E79Q。

成熟人N85处的示例性氨基酸取代包括N85D和N85Q。

成熟人L89处的示例性氨基酸取代是L89A。

成熟人F96处的示例性氨基酸取代是F96A。

成熟人M97处的示例性氨基酸取代是M97A。

成熟人L124处的示例性氨基酸取代是L124A。

成熟人M125处的示例性氨基酸取代是M125A。

成熟人Q130处的示例性氨基酸取代是Q130E。

成熟人Q135处的示例性氨基酸取代是Q135E。

成熟人N136处的示例性氨基酸取代是N136D。

成熟人E143处的示例性氨基酸取代是E143Q。

成熟人Q146处的示例性氨基酸取代是Q146E。

成熟人Y167处的示例性氨基酸取代包括Y167A、Y167V、Y167R和Y167E。

成熟人I171处的示例性氨基酸取代包括I171A、I171V和I171E。

在某些实施方案中，成熟人R189处的氨基酸取代通过阻止两个亚基之间的二硫键的形成而使p40/p35异二聚体不稳定。成熟人R189处的示例性氨基酸取代包括R189A和R189K。

在一些实施方案中，p35部分直接或者间接地(任选地经由接头(例如，如第6.8节中所述))融合至IL12Rβ2的IL12 p35结合结构域(即IL12Rβ2片段，例如，如第6.4.2节中所述的)。当存在时，IL12Rβ2的IL12 p35结合结构域可以位于IL12 p35部分的N末端或C末端。当p35部分“直接”融合至IL12Rβ2的IL12 p35结合结构域时，p35部分和IL12Rβ2的IL12 p35结合结构域相邻地位于同一单体上，仅由接头(如果存在)分隔。当p35部分“间接”融合至IL12Rβ2的IL12 p35结合结构域时，p35部分和IL12Rβ2的IL12 p35结合结构域由同一单体上的一个或多个其他结构域(例如，IL12 p40部分)分隔，或位于单独的单体上。

6.4.IL12掩蔽部分

本公开提供了具有一个或多个能够结合IL12 p40部分和/或p35部分的IL12掩蔽部分的IL12受体激动剂。在一些方面，本文所述的IL12掩蔽部分结合IL12 p40部分和/或p35部分，从而减弱靶细胞上的IL12活性。在一些实施方案中，IL12掩蔽部分是能够结合IL12 p40部分的IL12Rβ1部分。在其他实施方案中，IL12掩蔽部分是能够结合IL12 p35部分的IL12Rβ2部分。示例性IL12Rβ1部分在第6.4.1节中公开，并且示例性IL12Rβ2部分在第6.4.2节中公开。在其他实施方案中，IL12掩蔽部分是IL12抗体片段。示例性IL12抗体片段在第6.4.3节中公开。

6.4.1.IL12Rβ1部分

本公开的IL12受体激动剂任选地包含一个或多个IL12Rβ1部分。一个或多个IL12Rβ1部分中的每个能够结合本公开的IL12 p40部分。IL12Rβ1部分是包含以下的氨基酸序列：与哺乳动物例如人或鼠的IL12受体亚基β-1(IL12Rβ1)的IL12 p40结合部分的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。IL12Rβ1的IL12 p40结合部分包含受体亚基的胞外结构域或由受体亚基的胞外结构域组成。人IL12Rβ1的序列具有Uniprot标识符P42701(uniprot.org/uniprot/P42701)，其中氨基酸24至545构成胞外结构域。鼠IL12Rβ1的序列具有Uniprot标识符Q60837(uniprot.org/uniprot/Q60837)，其中氨基酸24至545构成胞外结构域。

在一些实施方案中，IL12Rβ1部分包含以下：哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ1的胞外结构域(或包含与哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ1的胞外结构域至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列)。

在某些方面，IL12Rβ1部分可以包含以下或由以下组成：与全长人IL12Rβ1(即Uniprot标识符P42701)的氨基酸24至545具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％,87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，任选地其中结合部分具有以下的氨基酸序列：来自全长人IL12Rβ1的氨基酸24至545中的(a)至少160个氨基酸、至少161个氨基酸、至少162个氨基酸、至少164个氨基酸或至少165个氨基酸和/或(b)最多251个、最多240个、最多230个、最多220个、最多210个、最多200个、最多190个、最多180个或最多170个氨基酸。在特定的实施方案中，人IL12Rβ1的部分由前一句中的(a)和(b)中的任一个结合，例如，来自人IL12Rβ1的至少160个和最多180个氨基酸、来自人IL12Rβ1的至少162个和最多200个氨基酸、来自人IL12Rβ1的至少160个和最多220个氨基酸、来自人IL12Rβ1的至少164个和最多190个氨基酸，等等。

在一些实施方案中，IL12Rβ1部分包含以下或由以下组成：与全长人IL12Rβ1的氨基酸24至545具有至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％序列同一性的氨基酸序列，其中有或没有位于IL12Rβ1的氨基酸残基545的C末端的额外的最多5个氨基酸、最多10个氨基酸、最多15个氨基酸、最多20个氨基酸、最多30个氨基酸、或最多40个氨基酸。

当位于同一单体上时，本公开的含有IL12Rβ1部分的IL12受体激动剂可以在IL12p40部分的N末端或C末端处具有IL12Rβ1胞外结构域。在一些实施方案中，本公开的含有IL12Rβ1部分的IL12受体激动剂优选在IL12 p40部分的N末端处具有IL12Rβ1胞外结构域。

6.4.2.IL12Rβ2部分

本公开的IL12受体激动剂任选地包含一个或多个IL12Rβ2部分。一个或多个IL12Rβ2部分中的每个能够结合本公开的IL12 p35部分。IL12Rβ2部分是包含以下的氨基酸序列：与哺乳动物例如人或鼠的IL12受体亚基β-2(IL12Rβ2)的IL12 p35结合部分的至少70％序列同一性，例如至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。IL12Rβ2的IL12 p35结合部分包含受体亚基的胞外结构域或由受体亚基的胞外结构域组成。人IL12Rβ的序列具有Uniprot标识符Q99665(uniprot.org/uniprot/Q99665)，其中氨基酸24至622构成胞外结构域。

在一些实施方案中，IL12Rβ2部分包含以下：哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ2的胞外结构域(或包含与哺乳动物(例如人或鼠)IL12Rβ2的胞外结构域至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列)。

在某些方面，IL12Rβ2部分可以包含以下或由以下组成：与氨基酸24至637或全长人IL12Rβ2(即Uniprot标识符Q99665)具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，任选地其中结合部分具有以下的氨基酸序列：来自全长IL12Rβ2的氨基酸24至637中的(a)至少160个氨基酸、至少161个氨基酸、至少162个氨基酸、至少164个氨基酸或至少165个氨基酸和/或(b)最多251个、最多240个、最多230个、最多220个、最多210个、最多200个、最多190个、最多180个或最多170个氨基酸。在特定的实施方案中，人IL12Rβ2的部分由前一句中的(a)和(b)中的任一个结合，例如，来自人IL12Rβ2的至少160个和最多180个氨基酸、来自人IL12Rβ2的至少162个和最多200个氨基酸、来自人IL12Rβ2的至少160个和最多220个氨基酸、来自人IL12Rβ2的至少164个和最多190个氨基酸，等等。

在一些实施方案中，IL12Rβ2部分包含以下或由以下组成：与全长IL12Rβ2的氨基酸24至637具有至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％序列同一性的氨基酸序列，其中有或没有位于IL12Rβ2的氨基酸残基637的C末端的额外的最多5个氨基酸、最多10个氨基酸、最多15个氨基酸、最多20个氨基酸、最多30个氨基酸、或最多40个氨基酸。

当位于同一单体上时，本公开的含有IL12Rβ2部分的IL12受体激动剂可以在IL12p35部分的N末端或C末端处具有IL12Rβ2胞外结构域。在一些实施方案中，本公开的含有IL12Rβ2部分的IL12受体激动剂优选在IL12 p35部分的N末端处具有IL12Rβ2胞外结构域。

6.4.3.IL12抗体片段

在一些方面，本公开的IL12受体激动剂包括IL12抗体片段。在一些实施方案中，IL12单体包含连接至多聚化部分(例如，Fc结构域)的N末端或C末端的p40部分和p35部分，其中IL12抗体片段位于p40部分和p35部分的N末端或C末端(参见例如图4O和4P，左侧单体)。在其他实施方案中，缺乏p40部分和p35部分的IL12单体包含多聚化部分(例如，Fc结构域)和连接至其N末端或C末端的IL12抗体片段。在一些实施方案中，IL12受体激动剂包含单个IL12抗体片段(例如，构成IL12受体激动剂的两个IL12单体之一包含IL12抗体片段；参见例如图4O-4R)。在其他实施方案中，IL12受体激动剂包含两个IL12抗体片段(例如，构成IL12受体激动剂的两个IL12单体包含IL12抗体片段；例如，图4O的两个左侧单体，图4P的两个左侧单体，或图4O的一个左侧单体和图4P的一个左侧单体)。在此类实施方案中，两个IL12抗体片段可以是相同的，或者它们可以是不同的。在一些实施方案中，第一IL12抗体片段可以靶向p40部分，并且第二IL12抗体片段可以靶向p35部分。在其他实施方案中，两个IL12抗体片段可以靶向p40部分，或者两个IL12抗体片段可以靶向p35部分。

在一些实施方案中，IL12抗体片段包含任何已知抗IL12抗体的抗体结合结构域。已知的抗IL12抗体的例子包括但不限于：乌司奴单抗(ustekinumab)；布雷奴单抗(briakinumab)；WO/2017/172771中所述的抗IL12抗体；WO/2012/094623中所述的抗IL12抗体；WO/2006/069036中所述的抗IL12抗体；WO/2009/068627中所述的抗IL12抗体；克隆B-T21(Diaclone)；MAB219(R&D系统)；MAB1510(R&D系统)；克隆C17.8(Bio X细胞)；克隆R1-5D9(Bio X细胞)；AP-MAB0853(ab80682)(abcam)；和ab9992(abcam)。抗IL12抗体可以结合至p35和/或p40(例如，结合至p35、结合至p40、或结合至p35和p40两者)。

在一些实施方案中，IL12抗体片段包含与以下结合相同表位和/或与以下竞争结合IL12的抗体结构域：乌司奴单抗；布雷奴单抗；WO/2017/172771中所述的抗IL12抗体；WO/2012/094623中所述的抗IL12抗体；WO/2006/069036中所述的抗IL12抗体；WO/2009/068627中所述的抗IL12抗体；克隆B-T21(Diaclone)；MAB219(R&D系统)；MAB1510(R&D系统)；克隆C17.8(Bio X细胞)；克隆R1-5D9(Bio X细胞)；AP-MAB0853(ab80682)(abcam)；和ab9992(abcam)。用于测量抗体竞争的测定是本领域已知的。例如，可以将IL12的样品结合至固体支持物。然后，添加第一抗体和第二抗体。标记两种抗体之一。如果标记的抗体和未标记的抗体结合至IL12上单独且离散的位点，那么无论是否存在未标记的抗体，标记的抗体将以相同水平结合。然而，如果相互作用的位点相同或重叠，那么未标记的抗体将竞争结合抗原，并且与抗原结合的标记的抗体的量将降低。如果未标记的抗体过量存在，那么标记的抗体将很少结合(如果有的话)。在一些实施方案中，竞争抗体是使另一种抗体与IL12的结合降低约50％、约60％、约70％、约80％、约85％、约90％、约95％或约99％的抗体。用于进行此类竞争测定的程序的细节是本领域众所周知的并且可以在例如Greenfield,编,Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,New York,2014中找到。此类测定可通过使用纯化的抗体进行定量。标准曲线可以通过针对自身滴定一种抗体来建立，即相同的抗体用于标记物和竞争物两者。滴定未标记的竞争抗体抑制标记的抗体与板结合的能力。可以绘制结果，并比较达到期望结合抑制程度所需的浓度。在一些实施方案中，可以例如在Octet HTX生物传感器平台(PallForteBio Corp.)上使用实时、无标记生物层干涉测定来确定与靶分子结合的竞争。

例如，IL12抗体片段可以根据第6.5.2节中对于靶向部分描述的任何形式进行形式化。例如，如第6.5.2.1节中所述，IL12抗体片段形式可以为scFv，或者如第6.5.2.2节中所述，形式为Fab。也可以合适地使用其他形式(例如纳米抗体)。在一些实施方案中，scFV的VH位于VL的N末端。在其他实施方案中，scFv的VH位于VL的C末端。

可以将抗IL12抗体的抗原结合片段掺入到具有本文所述的任何配置的IL12受体激动剂中。IL12受体激动剂通常由多个多肽链构成，例如如第6.2节中所述的示例性单体所代表的。如第6.2节中所述，可以将IL12抗体片段掺入到示例性单体8、28、33和59中的任一种中，这分别形成示例性单体54、57、58和55。掺入了示例性单体54、55、57和58中的一个或多个的示例性IL12受体激动剂详述于第6.2节中。

6.5.靶向部分

本公开的IL12受体激动剂中的靶向部分的掺入，允许将高浓度的IL12递送至肿瘤微环境中或递送至肿瘤反应性淋巴细胞(包括CART淋巴细胞)中，其中伴随全身暴露的减少，这导致比用野生型IL12所获得的相比更少的副作用。

合适的靶向部分形式在第6.5.2节中描述。靶向部分优选地是抗原结合部分，例如抗体或抗体的抗原结合部分，例如如第6.5.2.1节中所述的scFv，或如第6.5.2.2节中所述的Fab。

抗体和抗原结合部分通常结合至特异性的抗原决定簇并且能够将IL12受体激动剂指导至靶位点，例如指导至携带抗原决定簇的特异性类型的肿瘤细胞或肿瘤基质。由本公开的靶向部分识别的示例性靶分子在第6.5.1节中描述。

在其他实施方案中，靶向部分是肽-MHC复合物，如第6.5.3节中所述，例如，由肿瘤淋巴细胞识别的肽-MHC复合物。

6.5.1.靶分子

由本公开的IL12受体激动剂的靶向部分识别的靶分子通常发现于例如活化的T细胞的表面上、肿瘤细胞的表面上、病毒感染的细胞的表面上、游离于血清中、细胞外基质(ECM)中、或靶位点中存在的免疫细胞中，例如肿瘤反应性淋巴细胞。当外源施用免疫细胞(例如，表达嵌合抗原受体(“CAR”)的T细胞)时，靶向部分可以识别嵌合抗原受体(CAR)或在CAR T细胞的表面上发现的另一种分子。在各种实施方案中，CAR包含特异性识别TAA或pMHC复合物的CDR或VH和VL序列(例如，形式为scFv)。

示例性靶分子是成纤维细胞活化蛋白(FAP)、腱糖蛋白-C(Tenascin-C)的A1结构域(TNC A1)、腱糖蛋白-C(Tenascin-C)的A2结构域(TNC A2)、纤连蛋白的额外结构域B(EDB)、黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)、MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结直肠相关抗原(CRC)-C017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、aml1、前列腺特异性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2、PSA-3、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、T细胞受体/CD3-ζ链、肿瘤抗原MAGE家族(例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、肿瘤抗原GAGE家族(例如GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、甲胎蛋白、E-钙粘蛋白、α-连环蛋白、β-连环蛋白和γ-连环蛋白、p120ctn、gp100Pmel117、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性息肉病大肠杆菌蛋白(APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig-独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物诸如人乳头瘤病毒蛋白、肿瘤抗原Smad家族、Imp-1、P1A、EBV编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7、c-erbB-2、Her2、EGFR、IGF-1R、CD2(T细胞表面抗原)、CD3(与TCR相关联的异多聚体)、CD22(B细胞受体)、CD23(低亲和力IgE受体)、CD30(细胞因子受体)、CD33(骨髓细胞表面抗原)、CD40(肿瘤坏死因子受体)、IL-6R(IL6受体)、CD20、MCSP、PDGFβR(β-血小板衍生的生长因子受体)、ErbB2上皮细胞粘附分子(EpCAM)、EGFR变体III(EGFRvIII)、CD19、双唾液酸神经节苷脂GD2、导管上皮粘蛋白、gp36、TAG-72、神经胶质瘤相关抗原、β-人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白(AFP)、凝集素反应性AFP、甲状腺球蛋白、MN-CA IX、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2(As)、肠羧基酯酶、mut hsp70-2、M-CSF、前列腺酶、前列腺酶特异性抗原(PSA)、PAP、LAGA-1a、p53、前列腺蛋白、PSMA、存活和端粒酶、前列腺-癌肿瘤抗原-1(PCTA-1)、ELF2M、中性粒细胞弹性蛋白酶、肝配蛋白B2、胰岛素生长因子(IGF1)-I、IGF-II、IGFI受体、5T4、ROR1、Nkp30、NKG2D、肿瘤基质抗原、CA166-9、纤连蛋白的额外结构域A(EDA)和额外结构域B(EDB)和腱糖蛋白-C(tenascin-C)的A1结构域(TnCA1)。

在一些实施方案中，靶分子是CD20。在此类实施方案中，靶向部分包含任何已知抗CD20抗体的抗体结合结构域。在非限制性实例中，CD20靶向部分包含来自以下重链可变区(VH)和以下轻链可变区(VL)之一的抗原结合结构域：

抗CD20 VH

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

Ser Val Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

Ala Lys Asp Asn His Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Gln Tyr

Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser(SEQ IDNO:7)；

抗CD20 VL1

Ala Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ile Asn Trp Pro

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO:8)；

抗CD20 VL2

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser His Ser Val Ser Arg Asn

Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Leu

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO:9)；

抗CD20 VL3

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ile Asn Trp Pro Leu

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO:10)；

抗CD20 VL4

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Asn

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Leu

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys(SEQ ID NO:11)；

抗CD20 VL5

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Ser Ser Asn

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ser Pro Ala Arg Phe Ser Gly

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Asn Trp Pro Leu

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO:12)；

抗CD20 VL6

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Tyr Met

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys(SEQ ID NO:13)。

病毒抗原的非限制性实例包括EBV抗原(例如，Epstein-Barr病毒LMP-1)、丙型肝炎病毒抗原(例如，丙型肝炎病毒E2糖蛋白)、HIV抗原(例如，HIV gp160和HIV gp120))；CMV抗原；HPV特异性抗原或流感病毒抗原(例如流感病毒血凝素)。

ECM抗原的非限制性实例包括粘结蛋白聚糖(syndecan)、乙酰肝素酶、整联蛋白、骨桥蛋白、link、钙粘蛋白、层粘连蛋白、层粘连蛋白型EGF、凝集素、纤连蛋白、纤连蛋白的额外结构域B(ED-B)、notch、腱糖蛋白、胶原和基质蛋白。

其他靶分子是肿瘤或病毒淋巴细胞的细胞表面分子，例如T细胞共刺激蛋白，诸如CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C和B7-H3。

在特定的实施方案中，靶分子是检查点抑制剂，例如CTLA-4、PD1、PDL1、PDL2、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2。在特定的实施方案中，靶分子是PD1。在其他实施方案中，靶分子是LAG3。

在一些实施方案中，靶分子是PD1。在此类实施方案中，靶向部分包含任何已知抗PD1抗体的抗体结合结构域。在非限制性实例中，PD1靶向部分包含来自以下重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗原结合结构域：

抗PD1 VH

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe

Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO:14)；

抗PD1 VL

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

Asp Ser Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Ser Ile Asn Thr Phe

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Thr Leu Gln Pro

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Thr Pro Phe

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Val Val Asp Phe Arg(SEQ ID NO:15)。

额外的CD20和PD1靶向部分如下表3中所示。

在一些实施方案中，靶向部分靶向下表3中所示的示例性靶分子，并参照靶向部分可以基于的示例性抗体或抗体序列。

在一些方面，靶向部分与上文(包括表3中)所示的抗体竞争与靶分子的结合。在进一步的方面，靶向部分包含具有以上(包括表3中)所示的抗体的CDR序列的CDR。在一些实施方案中，靶向部分包含以上所示抗体(包括表3中所示的抗体)的所有6个CDR序列。在其他实施方案中，靶向部分至少包含此类抗体的重链CDR序列(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)和通用轻链的轻链CDR序列。在进一步的方面，靶向部分包含VH，其包含以上例如表3中所示的抗体的VH的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向部分还包含VL，其包含以上例如表3中所示的抗体的VL的氨基酸序列。在其他实施方案中，靶向部分进一步包含通用轻链VL序列。

在一些实施方案中，检查点抑制剂靶向部分不阻断或不良地阻断配体-受体结合。非阻断性或不良阻断性抗PD1抗体的实例包括具有以下的VH/VL氨基酸序列的抗体：PCT公开号WO2015/112800A1的SEQ ID NO:2/10；美国专利号11,034,765B2的SEQ ID NO:16/17；美国专利号10,294,299B2的SEQ ID NO 164/178、165/179、166/180、167/181、168/182、169/183、170/184、171/185、172/186、173/187、174/188、175/189、176/190和177/190。非阻断性或不良阻断性抗LAG3抗体的实例包括具有美国公开号US2022/0056126A1的SEQ IDNO:23/24、3/4和11/12的VH/VL氨基酸序列的抗体.

可以由IL12受体激动剂靶向的额外的靶分子公开于下文表6中以及例如Hafeez等人,2020,Molecules 25:4764,doi:10.3390/molecules25204764中，特别是表1中。Hafeez等人的表1以其整体通过引用并入本文。

6.5.2.靶向部分形式

在某些方面，靶向部分可以是保留与抗原决定簇的特异性结合的任何类型的抗体或其片段。在一个实施方案中，抗原结合部分是全长抗体。在一个实施方案中，抗原结合部分是免疫球蛋白分子，特别是IgG类免疫球蛋白分子，更特别是IgG₁或IgG₄免疫球蛋白分子。抗体片段包括但不限于VH(或V_H)片段、VL(或V_L)片段、Fab片段、F(ab’)₂片段、scFv片段、Fv片段、微型抗体、双抗体、三抗体和四抗体。

6.5.2.1.scFv

单链Fv或“scFv”抗体片段包含在单条多肽链中的抗体的VH和VL结构域，其能够表达为单链多肽，并保留其所衍生自的完整抗体的特异性。通常，scFv多肽进一步包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv能够形成用于靶标结合的期望结构。适合于连接scFv的VH和VL链的接头的实例是第6.5.3节中定义的接头。

除非另有说明，否则如本文所用，scFv可以以任一顺序具有VL和VH可变区，例如，就多肽的N末端和C末端而言，scFv可以包含VL-接头-VH或可以包含VH-接头-VL。

scFv可包含来自任何合适物种的VH和VL序列，例如鼠、人或人源化VH和VL序列。

为了产生scFv编码核酸，将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接至编码接头的另一个片段，例如编码第6.5.3节中所述的任何接头(通常是含有氨基酸甘氨酸和丝氨酸的序列的重复，例如氨基酸序列(Gly4～Ser)₃(SEQ ID NO:16)，使得VH序列和VL序列可以表达为连续的单链蛋白，其中VL区和VH区通过柔性接头连接(参见，例如，Bird等人,1988,Science 242:423-426；Huston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883；McCafferty等人,1990,Nature 348:552-554)。

6.5.2.2.Fab

Fab结构域传统上是通过使用酶诸如木瓜蛋白酶对免疫球蛋白分子进行蛋白水解切割来产生的。在本公开的IL12受体激动剂中，Fab结构域通常重组表达为IL12受体激动剂的一部分。

Fab结构域可以包含来自任何合适物种的恒定结构域和可变区序列，并且因此可以是鼠的、嵌合的、人的或人源化的。

Fab结构域通常包含附接至VH结构域的CH1结构域，其与附接至VL结构域的CL结构域配对。在野生型免疫球蛋白中，VH结构域与VL结构域配对以构成Fv区，并且CH1结构域与CL结构域配对以进一步稳定化结合模块。两个恒定结构域之间的二硫键可以进一步稳定化Fab结构域。

对于本公开的IL12受体激动剂，特别是当轻链不是共同或通用轻链时，有利的是使用Fab异二聚化策略以允许属于相同ABD的Fab结构域的正确缔合并最小化属于不同ABD的Fab结构域的异常配对。例如，可以使用下表4中所示的Fab异二聚化策略：

因此，在某些实施方案中，通过彼此交换Fab的VL和VH结构域或彼此交换CH1和CL结构域来促进Fab的两个多肽之间的正确缔合，例如，如WO 2009/080251中所述。

还可以通过在Fab的CH1结构域中引入一个或多个氨基酸修饰和在CL结构域中引入一个或更多个氨基酸修饰，和/或在VH结构域中引入一个或更多个氨基酸修饰和在VL结构域中引入一个或者更多个氨基酸修饰，来促进正确的Fab配对。经修饰的氨基酸通常是VH:VL和CH1:CL界面的一部分，使得Fab组分优先与彼此配对，而不是与其他Fab的组分配对。

在一个实施方案中，一个或多个氨基酸修饰限于如残基的Kabat编号所指示的可变(VH、VL)结构域和恒定(CH1、CL)结构域的保守框架残基。Almagro,2008,Frontiers InBioscience 13:1619-1633基于Kabat、Chothia和IMGT编号方案提供了框架残基的定义。

在一个实施方案中，在VH和CH1结构域，和/或VL和CL结构域中引入的修饰彼此互补。重链和轻链界面处的互补性可以基于空间接触和疏水接触、静电/电荷相互作用或各种相互作用的组合来实现。蛋白质表面之间的互补性在文献中就以下而言进行了广泛描述：锁和钥匙适合、旋钮进入孔(knob into hole)、突起和空腔、供体和受体等，所有这些都意味着两个相互作用表面之间结构和化学匹配的性质。

在一个实施方案中，一个或多个所引入的修饰在Fab组分的界面上引入新的氢键。在一个实施方案中，一个或多个所引入的修饰在Fab组分的界面上引入新的盐键。示例性取代描述于WO 2014/150973和WO 2014/082179中，其内容在此通过引用并入。

在一些实施方案中，Fab结构域包含CH1结构域中的192E取代，以及CL结构域中的114A和137K取代，其在CH1结构域和CL结构域之间引入盐桥(参见例如Golay等人,2016,JImmunol 196:3199-211)。

在一些实施方案中，Fab结构域包含CH1结构域中的143Q和188V取代，以及CL结构域中的113T和176V取代，其用于调换CH1结构域和CL结构域之间接触的疏水区和极性区(参见例如Golay等人,2016,J Immunol196:3199-211)。

在一些实施方案中，Fab结构域可以在一些或所有VH、CH1、VL、CL结构域中包含修饰以引入促进Fab结构域正确组装的正交Fab界面(Lewis等人,2014Nature Biotechnology32:191-198)。在一个实施方案中，在VH结构域中引入39K、62E修饰，在CHl结构域中引入H172A、F174G修饰，在VL结构域中引入1R、38D、(36F)修饰，并且在CL结构域中引入L135Y、S176W修饰。在另一个实施方案中，在VH结构域中引入39Y修饰并且在VL结构域中引入38R修饰。

还可以修饰Fab结构域，以用工程化的二硫键替换天然的CH1:CL二硫键，从而提高Fab组分配对的效率。例如，可以通过在CH1结构域中引入126C并且在CL结构域中引入121C来引入工程化的二硫键(参见，例如，Mazor等人,2015,MAbs 7:377-89)。

还可以通过用正确组装的替代性结构域替换CH1结构域和CL结构域来修饰Fab结构域。例如，Wu等人,2015,MAbs 7:364-76，描述了用T细胞受体的恒定结构域取代CH1结构域，并用T细胞受体的b结构域取代CL结构域，并通过在VL结构域中引入38D修饰并且在VH结构域中引入39K修饰，来将这些结构域替代用VL结构域和VH结构域之间的额外电荷-电荷相互作用进行配对。

替代地或额外地，使用Fab异二聚化策略来促进正确的VH-VL配对，共同轻链(也称为通用轻链)的VL还可用于本公开的IL12受体激动剂的每个Fab VL区。在各种实施方案中，与采用原始同源VL相比，采用如本文所述的共同轻链减少了IL12受体激动剂的不适当种类的数量。在各种实施方案中，IL12受体激动剂的VL结构域从包含共同轻链的单特异性抗体中鉴定。在各种实施方案中，IL12受体激动剂的VH区域包含人重链可变基因片段，这些片段在小鼠B细胞内体内重排，这些B细胞此前经工程化以表达有限的人轻链库，或单个人轻链，这些轻链与人重链同源，并且(应答于用感兴趣的抗原进行暴露)生成含有与一种或者一种或两种可能的人VL同源的多种人VH的抗体库，其中抗体库对感兴趣的抗原特异。共同轻链是衍生自重排的人Vκ1-39Jκ5序列或重排的人Vκ3-20Jκ1序列的轻链，并且包括体细胞突变(例如，亲和力成熟)形式。参见例如美国专利号10,412,940。

6.5.3.MHC-肽融合物

本公开的IL12受体激动剂的靶向部分可以是肽-MHC复合物(“pMHC复合物”)，例如与MHC I类结构域复合的肽或与MHC II类结构域复合的肽，在每个情况中任选地具有β2微球蛋白结构域。

pMHC复合物中的肽可以具有可以与MHC I类分子缔合、例如由MHC I类分子呈递的肽的氨基酸序列。在某些实施方案中，序列可包含6至20个连续氨基酸。在某些实施方案中，肽序列可以是蛋白质片段的肽序列，其中该蛋白质衍生自例如细胞蛋白质的一部分，诸如与癌症或癌症新抗原相关联的蛋白质，并且其中该肽可以与MHC I类重链结合。

在一些实施方案中，pMHC复合物靶向片段包含抗原肽、MHC多肽或其片段、突变体或衍生物，以及任选地β2微球蛋白多肽或其片段、突变体或衍生物，其具有PCT公开WO2021/127487 A2的第6.4.3节中所述的特征和/或配置，该节通过引用具体地并入本文。在一些实施方案中，pMHC复合物的一个或多个组分经由PCT公开WO 2021/127487 A2的第6.7.1节中所述的pMHC接头连接，该节通过引用具体地并入本文。

本公开的pMHC复合物中的肽通常是感染原(例如细菌、病毒或寄生生物体)、过敏原和肿瘤相关蛋白的蛋白质的至少一部分，例如抗原决定簇。优选地，pMHC复合物包含癌细胞的抗原决定簇。癌细胞的示例性抗原决定簇包括LCMV衍生肽gp33-41、APF(126-134)、BALF(276-284)、CEA(571-579)、CMV pp65(495-503)、FLU-M1(58-66)、gp100(154-162)、gp100(209-217)、HBV核心(18-27)、Her2/neu(369-377；V2v9)；HPV E7(11-20)、HPV E7(11-19)、HPV E7(82-90)、KLK4(11-19)、LMP1(125-133)、MAG-A3(112-120)、NYES01(157-165、C165A)、NYES1(157-165、C165V)、p54 WT(264-272)、PAP-3(136-143)、PSMA(4-12)、PSMA(135-145)、生存素(96-014)、酪氨酸酶(369-377,371D)和WT1(126-134)。癌细胞的其他抗原决定簇描述于PCT公开WO 2021/127487 A2的第6.4.3节和表3中，该节和表通过引用具体地并入本文。

6.6.多聚化部分

6.6.1.Fc结构域

在一些实施方案中，本公开的IL12激动剂和IL12单体包括一个或多个多聚化部分，例如是Fc结构域或包含Fc结构域的一个或多个多聚化部分。在某些实施方案中，本公开的IL12单体包含单个多聚化部分(例如，单个Fc结构域)和/或本公开的IL12激动剂包含两个多聚化部分(例如，可以缔合以形成Fc区的两个Fc结构域)。

本公开的IL12受体激动剂和IL12单体可以包含Fc结构域或缔合以形成Fc区的一对Fc结构域，其衍生自可操作地连接至IL12部分的任何合适的物种。在一个实施方案中，Fc结构域衍生自人Fc结构域。在优选的实施方案中，IL12部分与IgG Fc分子融合。

IL12部分可以与IgG Fc结构域的N末端或C末端融合。如实施例中所示，包含与IgGFc结构域的C末端融合的IL12部分的IL12激动剂比当IL12部分与IgG Fc的N末端融合时更大程度地维持IL12活性。

本公开的一个实施方案涉及包含两个Fc融合多肽的二聚体，其通过以下来产生：将一个或多个IL12部分(例如，p35部分和p40部分)融合至抗体的Fc区，例如通过将p35部分和p40部分融合至Fc结构域，这在表达后可以形成能够同二聚化的IL12单体，或者通过将p35部分融合至第一Fc结构域并且将p40部分融合至第二Fc结构域，这在表达后形成能够异二聚化的两个不同的IL12单体。二聚体可以通过以下来制备：例如，将编码融合蛋白的基因融合物插入到适当的表达载体中，在用重组表达载体转化的宿主细胞中表达基因融合物，并允许表达的融合蛋白非常类似于抗体分子一样组装，于是在Fc部分之间形成链间键以产生二聚体。

可以掺入到IL12单体中的Fc结构域可以衍生自任何合适类别的抗体，这包括IgA(包括亚类IgA1和IgA2)、IgD、IgE、IgG(包括亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)和IgM。在一个实施方案中，Fc结构域衍生自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一个实施方案中，Fc结构域衍生自IgG1。在一个实施方案中，Fc结构域衍生自IgG4。

Fc区之内的两个Fc结构域可以与彼此相同或不同。在天然抗体中，Fc结构域通常是相同的，但出于产生多特异性结合分子(例如本公开的IL12受体激动剂)的目的，Fc结构域可以有利地不同以允许异二聚化，如下第6.6.1.2节中所述。

在天然抗体中，IgA、IgD和IgG的重链Fc结构域由两个重链恒定结构域(CH2和CH3)构成，并且IgE和IgM的重链Fc结构域由三个重链恒定结构域(CH2、CH3和CH4)组成。这些二聚化以产生Fc区域。

在本公开的IL12受体激动剂中，Fc区和/或其之内的Fc结构域可以包含来自一种或多种不同类别的抗体(例如一种、两种或三种不同类别)的重链恒定结构域。

在一个实施方案中，Fc区包含衍生自IgG1的CH2和CH3结构域。

在一个实施方案中，Fc区包含衍生自IgG2的CH2和CH3结构域。

在一个实施方案中，Fc区包含衍生自IgG3的CH2和CH3结构域。

在一个实施方案中，Fc区包含衍生自IgG4的CH2和CH3结构域。

在一个实施方案中，Fc区包含来自IgM的CH4结构域。IgM CH4结构域通常位于CH3结构域的C末端。

在一个实施方案中，Fc区包含衍生自IgG的CH2和CH3结构域以及衍生自IgM的CH4结构域。

应当理解，用于产生本公开的IL12受体激动剂的Fc区的重链恒定结构域可以包括上述天然存在的恒定结构域的变体。与野生型恒定结构域相比，此类变体可以包含一个或多个氨基酸变异。在一个实例中，本公开的Fc区包含至少一个恒定结构域，其在序列上与野生型恒定结构域不同。应当理解，变体恒定结构域可以比野生型恒定结构域更长或更短。优选地，变体恒定结构域与野生型恒定结构域至少60％相同或相似。在另一个实例中，变体恒定结构域至少70％相同或相似。在另一个实例中，变体恒定结构域至少80％相同或相似。在另一个实例中，变体恒定结构域至少90％相同或相似。在另一个实例中，变体恒定结构域至少95％相同或相似。

IgM和IgA作为常见H2L2抗体单元的共价多聚体天然存在于人中。当IgM已经掺入J链时，它会作为五聚体存在；当IgM缺少J链时，它会作为六聚体存在。IgA作为单体和二聚体存在。IgM和IgA的重链具有延伸至C末端恒定结构域的18个氨基酸，其称为尾片(tailpiece)。尾片包含半胱氨酸残基，该残基在聚合物中的重链之间形成二硫键，并且据信其在聚合中具有重要作用。尾片还含有一个糖基化位点。在某些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂不包含尾片。

掺入到本公开的IL12受体激动剂中的Fc结构域可以包含改变蛋白质的功能性特性的一个或多个修饰，功能性特性例如与Fc受体诸如FcRn或白细胞受体结合、与补体结合、修饰的二硫键架构、或改变的糖基化模式。改变效应功能的示例性Fc修饰在第6.6.1.1节中进行了描述。

还可以改变Fc结构域以包括改进不对称IL12受体激动剂的可制备性的修饰，例如通过允许异二聚化，异二聚化是相对于相同Fc结构域的不同Fc结构域优先配对。异二聚化允许产生IL12受体激动剂，其中不同的多肽组分通过含有在序列上不同的Fc结构域的Fc区与彼此连接。异二聚化策略的实例在第6.6.1.2节中例证。

将理解，上述任何修饰可以以任何合适的方式进行组合以实现期望的功能性特性，和/或与其他修饰进行组合以改变IL12受体激动剂的特性。

6.6.1.1.具有改变的效应功能Fc结构域

在一些实施方案中，Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或效应功能的一个或多个氨基酸取代。

在特定的实施方案中，Fc受体是Fcγ受体。在一个实施方案中，Fc受体是人Fc受体。在一个实施方案中，Fc受体是活化性Fc受体。在具体的实施方案中，Fc受体是活化人Fcγ受体，更具体地是人FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa，最具体地是人FcγRIIIa。在一个实施方案中，效应功能是选自下组的一个或多个：补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和细胞因子分泌。在特定的实施方案中，效应功能是ADCC。

在一个实施方案中，Fc结构域(例如，IL12单体的Fc结构域)或Fc区(例如，可以缔合以形成Fc区的IL12受体激动剂的一个或两个Fc结构域)包含选自下组的位置处的氨基酸取代：E233、L234、L235、N297、P331和P329(根据Kabat EU索引编号)。在更具体的实施方案中，Fc结构域或Fc区包含选自L234、L235和P329(根据Kabat EU索引编号)的组的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc结构域或Fc区包含氨基酸取代L234A和L235A(根据Kabat EU索引编号)。在一个此类实施方案中，Fc结构域或Fc区是Igd Fc结构域或Fc区，特别是人Igd Fc结构域或Fc区。在一个实施方案中，Fc结构域或Fc区包含位置P329处的氨基酸取代。在更具体的实施方案中，氨基酸取代是P329A或P329G，特别是P329G(根据Kabat EU索引编号)。在一个实施方案中，Fc结构域或Fc区包含在位置P329处的氨基酸取代和在选自E233、L234、L235、N297和P331(根据Kabat EU索引编号)的位置处的进一步氨基酸取代。在更具体的实施方案中，进一步的氨基酸取代是E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S。在特定的实施方案中，Fc结构域或Fc区包含位置P329、L234和L235处的氨基酸取代(根据Kabat EU索引编号)。在更特定的实施方案中，Fc结构域包含氨基酸突变L234A、L235A和P329G(“P329G LALA”、“PGLALA”或“LALAPG”)。

通常，Fc区的两个Fc结构域中的每个中存在相同的一个或多个氨基酸取代。因此，在特定的实施方案中，Fc区的每个Fc结构域包含氨基酸取代L234A、L235A和P329G(KabatEU索引编号)，即在Fc区的第一Fc结构域和第二Fc结构域的每个中，用丙氨酸残基取代位置234处的亮氨酸残基(L234A)，用丙氨酸残基取代位置235处的亮氨酸残基(L235A)，通过甘氨酸残基取代位置329处的脯氨酸残基(P329G)(根据Kabat EU索引编号)。

在一个实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域，特别是人IgG1 Fc结构域。在一些实施方案中，IgG1 Fc结构域是包含D265A、N297A突变(EU编号)以降低效应功能的变体IgG1。

在另一个实施方案中，Fc结构域是具有降低的Fc受体的结合的IgG4 Fc结构域。具有降低的与Fc受体的结合的示例性IgG4 Fc结构域可以包含选自以下表5的氨基酸序列：在一些实施方案中，Fc结构域仅包括以下所示的序列的粗体部分：

在特定的实施方案中，具有降低的效应功能的IgG4包含WO2014/121087的SEQ IDNO:31(SEQ ID NO:20)的氨基酸序列的粗体部分，其在本文中有时称为IgG4s或hIgG4s。

对于异二聚体Fc区，掺入以上所示的变体IgG4 Fc序列的组合是可能的，该变体IgG4 Fc序列的组合例如：Fc区，其包含含有WO2014/121087的SEQ ID NO:30(SEQ ID NO:19)(或其粗体部分)的氨基酸序列的Fc结构域和含有WO2014/121087的SEQ ID NO:37(SEQID NO:21)(或其粗体部分)的氨基酸序列的Fc结构域；或Fc区，其包含含有WO2014/121087的SEQ ID NO:31(SEQ ID NO:20)(或其粗体部分)的氨基酸序列的Fc结构域和含有WO2014/121087的SEQ ID NO:38(SEQ ID NO:22)(或其粗体部分)的氨基酸序列的Fc结构域。

6.6.1.2.Fc异二聚化变体

某些IL12受体激动剂需要两个Fc结构域之间的二聚化，这两个Fc结构域不同于天然免疫球蛋白，而可操作地连接至不相同的N末端区，例如，一个Fc结构域连接至Fab的并且另一个Fc结构域连接至IL12部分。两个Fc结构域形成Fc区的不充分异二聚化已经能够成为增加期望的异二聚体分子的产量的障碍，并且代表了对纯化的挑战。本领域可获得的多种方法可用于增强可以存在于本公开的IL12受体激动剂中的Fc结构域的二聚化，例如如以下中所公开的：EP 1870459A1；美国专利号5,582,996；美国专利号5,731,168；美国专利号5,910,573；美国专利号5,932,448；美国专利号6,833,441；美国专利号7,183,076；美国专利申请公开号2006204493A1；以及PCT公开号WO 2009/089004A1。

本公开提供了包含Fc异二聚体的IL12受体激动剂，即包含异源、不相同的Fc结构域的Fc区。通常，Fc异二聚体中的每个Fc结构域包含抗体的CH3结构域。CH3结构域衍生自任何同种型、类别或亚类的抗体的恒定区，并且优选IgG(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)类别的抗体的恒定区，如前节中所述。

两条不同重链在CH3结构域处的异二聚化导致期望的IL12受体激动剂，而相同重链的同二聚化将降低期望的IL12受体激动剂的产量。因此，在优选的实施方案中，缔合以形成本公开的IL12受体激动剂的多肽将含有具有相对于未经修饰的Fc结构域有利于异二聚体缔合的修饰的CH3结构域。

在特定的实施方案中，所述促进Fc异二聚体形成的修饰是所谓的“旋钮进入孔(knob-into-hole)”或“旋钮入孔(knob-in-hole)”修饰，其包含Fc结构域之一中的“旋钮”修饰和另一个Fc结构域中的“孔”修饰。旋钮进入孔技术在例如美国专利号5,731,168；US7,695,936；Ridgway等人,1996,Prot Eng 9:617-621，以及Carter,2001,Immunol Meth248:7-15中描述。一般而言，该方法涉及在第一多肽的界面处引入突起(“旋钮”)和在第二多肽的界面中引入相应的空腔(“孔”)，使得突起可以位于空腔中，从而促进异二聚体形成并阻碍同二聚体形成。通过用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换来自第一多肽的界面的小氨基酸侧链来构建突起。通过用较小的氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)替换大的氨基酸侧链，在第二多肽的界面中产生与突起大小相同或相似的补偿空腔。

因此，在一些实施方案中，用具有较大侧链体积的氨基酸残基替换Fc结构域的第一亚基的CH3结构域中的氨基酸残基，从而在第一亚基的CH3结构域之内生成突起，突起可定位在第二亚基的CH3结构域之内的空腔中，并且用具有较小侧链体积的氨基酸残基替换Fc结构域的第二亚基的CH3结构域中的氨基酸残基，从而在第二亚基的CH3结构域之内生成空腔，空腔之内可定位第一亚基的CH3结构域之内的突起。优选地，所述具有较大侧链体积的氨基酸残基选自由精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)组成的组。优选地，所述具有较小侧链体积的氨基酸残基选自由丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和缬氨酸(V)组成的组。突起和空腔可以通过改变编码多肽的核酸(例如通过位点特异性诱变或通过肽合成)来制备。示例性取代是Y470T。

在具体的此类实施方案中，在第一Fc结构域中，用色氨酸残基替换位置366处的苏氨酸残基(T366W)，并且在Fc结构域中，用缬氨酸残基替换位置407处的酪氨酸残基(Y407V)，并且任选地，用丝氨酸残基替换位置366处的苏氨酸残基(T366S)并且用丙氨酸残基替换位置368处的亮氨酸残基(L368A)(根据Kabat EU索引编号)。在进一步的实施方案中，在第一Fc结构域中，用半胱氨酸残基额外地替换位置354处的丝氨酸残基(S354C)，或用半胱氨酸残基替换位置356处的谷氨酸残基(E356C)(特别是用半胱氨酸残基替换位置354处的丝氨酸残基)，并且在第二Fc结构域中，额外地通过半胱氨酸残基替换位置349处的酪氨酸残基(Y349C)(根据Kabat EU索引编号)。在特定实施方案中，第一Fc结构域包含氨基酸取代S354C和T366W，并且第二Fc结构域包含氨基酸取代Y349C、T366S、L368A和Y407V(根据Kabat EU索引编号)。

在一些实施方案中，静电转向(例如，如Gunasekaran等人,2010,J Biol Chem 285(25):19637-46中所述)可以用于促进Fc区的第一Fc结构域和第二Fc结构域的缔合。

替代地或额外地，对于经修饰以促进异二聚化的Fc结构域的使用，可以修饰Fc结构域以允许使得能够选择Fc异二聚体的纯化策略。在一个此类实施方案中，一种多肽包含经修饰的Fc结构域，其消除其与蛋白A的结合，因此使得能够进行产生异二聚体蛋白的纯化方法。参见例如美国专利号8,586,713。因此，IL12受体激动剂包含第一CH3结构域和第二IgCH3结构域，其中第一Ig CH3结构域和第二Ig CH3结构域与彼此不同在于至少一个氨基酸，并且其中与缺乏该氨基酸差异的相应IL12受体激动剂相比，至少一个氨基酸差异减少IL12受体激动剂与蛋白A的结合。在一个实施方案中，第一CH3结构域结合蛋白A并且第二CH3结构域含有减少或消除蛋白A结合的突变/修饰，诸如H95R修饰(通过IMGT外显子编号；H435R通过EU编号)。第二CH3可以进一步包含Y96F修饰(通过IMGT；Y436F通过EU)。此类修饰在本文中称为“星形”突变。

在一些实施方案中，Fc可以含有一个或多个突变(例如，旋钮和孔突变)以促进异二聚化以及星形突变以促进纯化。

6.7.稳定化部分

本公开的IL12受体激动剂可以包含可以延长分子的体内血清半衰期的稳定化部分。血清半衰期通常分成α相(phase)和β相。通过添加适当的稳定化部分可以显著改善任一相或两相。例如，相对于不含有稳定化部分的相应IL12受体激动剂，稳定化部分可以将IL12受体激动剂的血清半衰期增加超过5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、200％、400％、600％、800％、1000％或更多。出于本公开的目的，血清半衰期可以指人或其他哺乳动物(例如，小鼠或非人灵长类动物)中的半衰期。

野生型IL12具有小于10分钟的血清半衰期。在人和/或小鼠中，本公开的IL12受体激动剂优选具有至少约2小时、至少约4小时、至少约6小时或至少约8小时的血清半衰期。在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂具有至少10小时、至少12小时、至少15小时、至少18小时、至少24小时、至少36小时、至少48小时、至少60小时、或至少72小时的血清半衰期。

稳定化部分包括聚氧化烯部分(例如聚乙二醇)、糖(例如唾液酸)和耐受性良好的蛋白质部分(例如Fc及其片段和变体、转铁蛋白或血清白蛋白)。

可以用于本公开的IL12受体激动剂中的其他稳定化部分包括Kontermann等人,2011,Current Opinion in Biotechnology 22:868-76中所述的那些。此类稳定化部分包括但不限于人血清白蛋白融合物、人血清白蛋白缀合物、人血清白蛋白结合物(如AdnectinPKE、AlbudAb、ABD)、XTEN融合物、PAS融合物(即基于三种氨基酸脯氨酸、丙氨酸和丝氨酸的重组PEG模拟物)、碳水化合物缀合物(如羟乙基淀粉(HES))、糖基化、聚唾液酸缀合物和脂肪酸缀合物。

因此，在一些实施方案中，本公开提供了包含作为聚合糖的稳定化部分的IL12受体激动剂。

血清白蛋白还可以通过具有与白蛋白非共价相互作用的能力的模块来参与半衰期延长。因此，本公开的IL12受体激动剂可以包括白蛋白结合蛋白作为稳定化部分。白蛋白结合蛋白可以与本公开的IL12受体激动剂的一个或多个其他组分缀合或遗传地融合。已知来自某些细菌的具有白蛋白结合活性的蛋白质。例如，链球菌蛋白G含有若干由大致50个氨基酸残基(6kDa)构成的小白蛋白结合结构域。血清白蛋白结合蛋白的额外实例诸如美国公开号2007/0178082和2007/0269422中所述的那些。白蛋白结合结构域与蛋白质的融合导致半衰期强烈地延长(参见Kontermann等人,2011,Current Opinion in Biotechnology 22:868-76)。

在其他实施方案中，稳定化部分是人血清白蛋白。在其他实施方案中，稳定化部分是转铁蛋白。

在一些实施方案中，稳定化部分是Fc结构域，例如第6.6.1节及其小节中所述的任何Fc结构域，其通过引用并入本文。第6.6.1节中所述的Fc结构域通常能够二聚化。然而，出于稳定化的目的，Fc结构域可以是具有降低的自缔合能力的可溶性单体Fc结构域。参见例如，Helm等人,1996,J.Biol.Chem.271:7494-7500和Ying等人,2012,J Biol Chem.287(23):19399–19408。如美国专利公开号2019/0367611中所述，可溶性单体Fc结构域的实例包含在对应于CH3中的T366和/或Y407的位置处的氨基酸取代。如第6.6.1节及其小节中所述，单体Fc结构域可以是任何Ig亚型，并且可以包括降低效应功能的额外取代。

在又一些其他的实施方案中，稳定化部分是聚乙二醇部分或另一种聚合物，如下文第6.7.1节中所述。

稳定化部分可以经由接头(例如如下文第6.8节中所述的)连接至本公开的IL12受体激动剂的一个或多个其他组分。

在一些实施方案中，IL12受体激动剂包含聚乙二醇(PEG)或另一种亲水聚合物作为稳定化部分，例如乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚1,3-二氧戊环、聚1,3,6-三恶烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、右旋糖酐或聚(正乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇(propropyleneglycol)均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是支化的或非支化的。

6.8.接头

在某些方面，本公开提供了IL12受体激动剂，其中IL12受体激动剂的两个或更多个组分通过肽接头与彼此连接。通过示例而非限制的方式，接头可用于连接(a)IL12部分和多聚化部分；(b)IL12部分和靶向部分；(c)靶向部分和多聚化部分(例如，Fab结构域和Fc结构域)；(d)IL12部分之内的不同结构域(例如，IL12结构域和IL-Rα结构域)；或(e)靶向部分之内的不同结构域(例如，肽-MHC复合物的不同组分或scFv中的VH结构域和VL结构域)。

肽接头的长度可以范围为2个氨基酸至60个或更多个氨基酸，并且在某些方面，肽接头可以范围为3个氨基酸至50个氨基酸、4个至30个氨基酸、5至25个氨基酸、10个至25个氨基酸、10个氨基酸至60个氨基酸、12个氨基酸至20个氨基酸、20个氨基酸至50个氨基酸、或25个氨基酸至35个氨基酸。

在特定的方面，肽接头的长度为至少5个氨基酸、至少6个氨基酸或至少7个氨基酸，并且任选地为最多30个氨基酸、最多40个氨基酸、最多50个氨基酸或最多60个氨基酸。

在上述的一些实施方案中，接头的长度范围为5个氨基酸至50个氨基酸，例如长度范围为5至50个、5至45个、5至40个、5至35个、5至30个、5至25个、或5至20个氨基酸。在上述的其他实施方案中，接头的长度范围为6个氨基酸至50个氨基酸，例如长度范围为6至50个、6至45个、6至40个、6至35个、6至30个、6至25个、或6至20个氨基酸。在上述的又一些其他的实施方案中，接头的长度范围为7个氨基酸至50个氨基酸，例如长度范围为7至50个、7至45个、7至40个、7至35个、7至30个、7至25个、或7至20个氨基酸。

带电荷的(例如，带电荷的亲水性接头)和/或柔性接头是特别优选的。

可以用于本公开的IL12受体激动剂中的其他稳定化部分包括Chen等人,2013,AdvDrug Deliv Rev.65(10):1357-1369和Klein等人,2014,Protein Engineering,Design&Selection 27(10):325-330中公开的那些。特别有用的柔性接头是甘氨酸和丝氨酸的重复或包含甘氨酸和丝氨酸的重复，例如G_nS(SEQ ID NO:23)或SG_n的单体或多聚体，其中n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10(SEQ ID NO:24)。在一个实施方案中，接头是G₄S(SEQ ID NO:25)重复的单体或多聚体或包含G₄S(SEQ ID NO:25)重复的单体或多聚体，例如(GGGGS)_n(SEQ ID NO:26)。

聚甘氨酸接头可以合适地用于本公开的IL12受体激动剂中。在一些实施方案中，肽接头包含两个连续甘氨酸(2Gly)、三个连续甘氨酸(3Gly)、四个连续甘氨酸(4Gly)(SEQID NO:27)、五个连续甘氨酸(5Gly)(SEQ ID NO:28)、六个连续甘氨酸(6Gly)(SEQ ID NO:29)、七个连续甘氨酸(7Gly)(SEQ ID NO:30)、八个连续甘氨酸(8Gly)(SEQ ID NO:31)或九个连续甘氨酸(9Gly)(SEQ ID NO:32)。

6.8.1.pMHC接头

对于pMHC复合物，合适的接头可以范围为1个氨基酸(例如，Gly)至20个氨基酸、2个氨基酸至15个氨基酸、3个氨基酸至12个氨基酸，包括4个氨基酸至10个氨基酸、5个氨基酸至9个氨基酸、6个氨基酸至8个氨基酸，或7个氨基酸至8个氨基酸，并且可以是1、2、3、4、5、6或7个氨基酸。除了上述接头之外，pMHC接头还包括甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n、(GSGGS)n(SEQ ID NO:33)和(GGGS)n，其中n是至少一的整数(SEQID NO:34))、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物和本领域已知的其他柔性接头。可以使用甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物；Gly和Ser两者都是相对非结构化的，因此可以充当组分之间的中性系链(tether)。可以使用甘氨酸聚合物；甘氨酸甚至比丙氨酸接近更多的phi-psi空间，并且比具有较长侧链的残基受到少得多的限制(参见Scheraga,1992,Rev.Computational Chem.1 1173-142，其通过引用以其整体并入本文)。示例性接头可以包含包括但不限于以下的氨基酸序列：GGSG(SEQ ID NO:35)、GGSGG(SEQ ID NO:36)、GSGSG(SEQ ID NO:37)、GSGGG(SEQ ID NO:38)、GGGSG(SEQ ID NO:39)、GSSSG(SEQ ID NO:40)、GCGASGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:41)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:42)、GGGASGGGGSGGGGS(SEQ IDNO:43)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:44)、GGGASGGGGS(SEQ ID NO:45)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:46)、GCGGS(SEQ ID NO:47)等等。在一些实施方案中，接头多肽包含可以与存在于pMHC复合物的另一部分中的半胱氨酸残基形成二硫键的半胱氨酸残基。在某些实施方案中，接头包含氨基酸序列GCGGS(SEQ ID NO:47)。用半胱氨酸取代G₄S接头(SEQ ID NO:25)中的甘氨酸可以导致形成二硫键，例如在HLA.A2中具有相应半胱氨酸取代的MHC靶向部分，其稳定MHC复合物之内的MHC肽。

6.8.2.铰链序列

在其他实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含作为铰链区的接头。具体地，当IL12受体激动剂含有基于免疫球蛋白的靶向部分时，铰链可用于将靶向部分(例如Fab结构域)连接至多聚化结构域(例如Fc结构域)。铰链区可以是天然的或经修饰的铰链区。铰链区通常发现于Fc区的N末端。术语“铰链区”(除非上下文另有规定)指天然或非天然存在的铰链序列，其在单个多肽链或单体多肽链的情况下是单体铰链结构域，并且在二聚体多肽的情况下(例如通过两个Fc结构域的缔合而形成的同二聚体或异二聚体IL12受体激动剂)可以包含在单独的多肽链上的两个缔合的铰链序列。

天然铰链区是通常在天然存在的抗体中的Fab和Fc结构域之间发现的铰链区。经修饰的铰链区是在长度和/或组成中不同于天然铰链区的任何铰链。此类铰链可以包括来自其他物种的铰链区，诸如人、小鼠、大鼠、兔、鲨鱼、猪、仓鼠、骆驼、美洲驼或山羊铰链区。其他经修饰的铰链区可以包含以下的完整铰链区：衍生自具有与重链Fc结构域或Fc区的不同类别或亚类的抗体的。或者，修饰的铰链区可以包含天然铰链或重复单元的一部分，其中重复中的每个单元衍生自天然铰链区。在进一步的替代方案中，可以通过将一个或多个半胱氨酸或其他残基转化成中性残基，诸如丝氨酸或丙氨酸，或通过将适当放置的残基转化成半胱氨酸残基来改变天然铰链区。通过这种方式，铰链区中半胱氨酸残基的数量可以增加或减少。其他修饰的铰链区可以是完全合成的并且可以进行设计以具有期望的特性，诸如长度、半胱氨酸组成和柔性。

许多经修饰的铰链区已经描述于例如美国专利号5,677,425、WO 99/15549、WO2005/003170、WO 2005/003169、WO 2005/003170、WO 98/25971和WO 2005/003171中，并且它们通过引用并入本文。

在一个实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含Fc区，其中一个或两个Fc结构域在其N末端拥有完整的铰链区。

在各种实施方案中，铰链区之内的位置233-236可以是G、G、G和未占据；G、G、未占据和未占据；G、未占据、未占据和未占据；或全部未占据，其中通过EU编号来编号位置。

在一些实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含经修饰的铰链区，其相对于相同同种型(例如，人IgG1或人IgG4)的野生型铰链区降低对Fcγ受体的结合亲和力。

在一个实施方案中，本公开的IL12受体激动剂包含Fc区，其中每个Fc结构域在其N末端处具有完整的铰链区，其中每个Fc结构域和铰链区衍生自IgG4并且每个铰链区包含经修饰的序列CPPC(SEQ ID NO:48)。与含有序列CPPC(SEQ ID NO:48)的IgG1相比，人IgG4的核心铰链区含有序列CPSC(SEQ ID NO:49)。IgG4序列中存在的丝氨酸残基导致该区域中增加的灵活性，并且因此一部分分子在同一蛋白链之内形成二硫键(链内二硫键)，而不是桥接到IgG分子中的其他重链以形成链间二硫键。(Angel等人,1993,Mol Immunol30(1):105-108)。将丝氨酸残基变为脯氨酸以给出与IgG1相同的核心序列，这允许在IgG4铰链区完全形成链间二硫键，从而减少纯化产物中的异质性。这种改变的同种型称为IgG4P。

6.8.2.1.嵌合铰链序列

铰链区可以是嵌合铰链区。

例如，嵌合铰链可以包含与“下游铰链(lower hinge)”序列组合的“上游铰链(upper hinge)”序列，该“上游铰链”序列衍生自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区，该“下游铰链”衍生自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区。

在特定实施方案中，嵌合铰链区包含氨基酸序列EPKSCDKTHTCPPCPAPPVA(SEQ IDNO:50)(此前公开为WO2014/121087的SEQ ID NO:8，其通过引用以其整体并入本文)或ESKYGPPCPPCPAPPVA(SEQ ID NO:51)(此前公开为WO2014/121087的SEQ ID NO:9)。此类嵌合铰链序列可以适当地连接至IgG4 CH2区(例如通过并入到IgG4 Fc结构域，例如人或鼠Fc结构域中，其可以在CH2结构域和/或CH3结构域中进一步修饰以降低效应功能(例如如第6.6.1.1节中所述)。

6.8.2.2.具有降低的效应功能的铰链序列

在进一步的实施方案中，铰链区可以经修饰以降低效应功能，例如如WO2016161010A2中所述，其通过引用以其整体并入本文。在各种实施方案中，经修饰的铰链区的位置233-236是G、G、G和未占据；G、G、未占据和未占据；G、未占据、未占据和未占据；或全部未占据，其中通过EU编号来编号位置(如WO2016161010A2的图1中所示)。这些段可以表示为GGG-、GG--、G---或----，其中“-”表示未占据的位置。

位置236在典型的人IgG2中未被占据，但在其他典型的人IgG同种型中被占据。在所有四种人类同种型中，位置233-235由除了G以外的残基占据(如WO2016161010A2的图1中所示)。

位置233-236之内的铰链修饰可以与由P占据的位置228组合。位置228在人IgG1和IgG2中天然地由P占据，但在人IgG4中由S占据，并且在人IgG3中由R占据。IgG4抗体中的S228P突变有利于稳定化IgG4抗体并减少外源抗体和内源抗体之间重链轻链对的交换。优选地，位置226-229分别由C、P、P和C占据。

示例性的铰链区具有残基226-236，有时称为中间(或核心)和下游铰链，其由指定了GGG-(233-236)、GG--(233-236)、G---(233-236)和无G(233-236)的经修饰的铰链序列占据。任选地，铰链结构域氨基酸序列包含CPPCPAPGGG-GPSVF(SEQ ID NO:52)(此前公开为WO2016161010A2的SEQ ID NO:1)、CPPCPAPGG--GPSVF(SEQ ID NO:53)(此前公开为WO2016161010A2的SEQ ID NO:2)、CPPCPAPG---GPSVF(SEQ ID NO:54)(此前公开为WO2016161010A2的SEQ ID NO:3)、或CPPCPAP----GPSVF(SEQ ID NO:55)(此前公开为WO2016161010A2的SEQ ID NO:4)。

上述经修饰的铰链区可以并入到重链恒定区中，其通常包含CH2和CH3结构域，并且其可以具有位于指定区域侧翼的额外的铰链区片段(例如，上游铰链)。存在的此类额外的恒定区片段通常具有相同的同种型，优选人同种型，尽管可以是不同同种型的杂合。此类额外的人恒定区片段的同种型优选是人IgG4，但还可以是人IgG1、IgG2或IgG3或其杂合，其中结构域具有不同同种型。人IgG1、IgG2和IgG4的示例性序列显示于WO2016161010A2的图2-4中。

在具体实施方案中，修饰的铰链序列可以连接至IgG4 CH2区(例如通过并入到IgG4 Fc结构域，例如人或鼠Fc结构域中，其可以在CH2结构域和/或CH3结构域中进一步修饰以降低效应功能(例如如第6.6.1.1节中所述)。

6.9.核酸和宿主细胞

在另一个方面，本公开提供了编码本公开的IL12受体激动剂的核酸。在一些实施方案中，IL12受体激动剂由单个核酸编码。在其他实施方案中，例如在异二聚体分子或包含由超过一条多肽链构成的靶向部分的分子的情况下，IL12受体激动剂可以由多个(例如，两个、三个、四个或更多)核酸编码。

单个核酸可以编码包含单条多肽链的IL12受体激动剂、包含两条或更多条多肽链的IL12受体激动剂、或包含多于两条多肽链的IL12受体激动剂的一部分(例如，单个核酸可以编码包含三条、四条或更多条多肽链的IL12受体激动剂的两条多肽链，或包含四条或更多条多肽链的IL12受体激动剂的三条多肽链)。为了单独控制表达，编码两条或更多条多肽链的开放阅读框可以处于单独的转录调控元件(例如启动子和/或增强子)的控制之下。编码两个或更多个多肽的开放阅读框还可以由相同的转录调控元件控制，并且由内部核糖体进入位点(IRES)序列分开，这允许翻译成单独的多肽。

在一些实施方案中，包含两条或更多条多肽链的IL12受体激动剂由两个或更多个核酸编码。编码IL12受体激动剂的核酸的数量可以等于或小于IL12受体激动剂中的多肽链的数量(例如，当多于一条多肽链由单个核酸编码时)。

本公开的核酸可以是DNA或RNA(例如，mRNA)。

在另一个方面，本公开提供了含有本公开的核酸的宿主细胞和载体。核酸可以存在于单个载体中或存在于相同宿主细胞或单独的宿主细胞中的单独的载体中，如下文更详细地描述。

6.9.1.载体

本公开提供了载体，其包含编码本文所述的IL12受体激动剂或IL12受体激动剂组分(例如半抗体的一条或两条多肽链)的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、黏粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。

可以采用许多载体系统。例如，一类载体利用衍生自以下的DNA元件：动物病毒，诸如，例如牛乳头状瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、杆状病毒、逆转录病毒(劳斯肉瘤病毒、MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一类载体利用衍生自以下的RNA元件：RNA病毒，诸如塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒和黄病毒。

额外地，可以通过引入允许选择转染的宿主细胞的一个或多个标志物来选择已将DNA稳定地整合到其染色体中的细胞。标志物可以提供例如对营养缺陷型宿主的质子移变、杀生物剂抗性(例如抗生素)或对重金属(诸如铜)的抗性等等。可选的标志物基因可以直接连接至待表达的DNA序列，或者通过共转化引入到同一细胞中。mRNA的最佳合成可能还需要额外的元件。这些元件可以包括剪接信号以及转录启动子、增强子和终止信号。

一旦已经制备好用于表达的含有构建体的表达载体或DNA序列，就可以将表达载体转染或引入到适当的宿主细胞中。可以采用各种技术来实现这一点，诸如原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。用于培养所得转染细胞和用于回收表达的多肽的方法和条件是本领域技术人员已知的，并且可以基于本说明书进行改变或优化，这取决于所采用的具体表达载体和哺乳动物宿主细胞。

6.9.2.细胞

本公开还提供了包含本公开的核酸的宿主细胞。

在一个实施方案中，宿主细胞经遗传工程化以包含本文所述的一个或多个核酸。

在一个实施方案中，通过使用表达盒对宿主细胞进行遗传工程化。短语“表达盒”指能够影响基因在与此类序列相容的宿主中的表达的核苷酸序列。此类盒可包含启动子、具有或不具有内含子的开放阅读框和终止信号。还可以使用影响表达所必需的或有助于影响表达的额外的因子，诸如诱导型启动子。

本公开还提供了包含本文所述的载体的宿主细胞。

细胞可以是但不限于真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于Vero细胞、HeLa细胞、COS细胞、CHO细胞、HEK293细胞、BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于Sf9细胞。

6.10.药物组合物

6.10.1.包含IL12受体激动剂多肽的药物组合物

本公开的IL12受体激动剂可以是以组合物的形式，该组合物包含IL12受体激动剂和一种或多种载剂、赋形剂和/或稀释剂。可以配制组合物以用于具体的用途，诸如用于兽医用途或人的药物用途。所使用的组合物的形式(例如干粉、液体制剂等)和赋形剂、稀释剂和/或载剂的形式将取决于IL12受体激动剂的预期用途以及对于治疗性用途而言的施用的模式。

对于治疗性用途，组合物可以作为包含药学上可接受的载剂的无菌药物组合物的一部分来提供。该组合物可以是任何合适的形式(这取决于将其施用于患者的期望的方法)。药物组合物可以通过多种途径施用至患者，例如口服、经皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、瘤内、鞘内、表面或局部。在任何给定情况下最合适的施用的途径将取决于特定的抗体、受试者、以及疾病的性质和严重性、以及受试者的身体状况。通常，药物组合物将静脉内或皮下施用。

药物组合物可以方便地以单位剂型存在，该单位剂型每剂量含有预定量的本公开的IL12受体激动剂。单位剂量中包含的IL12受体激动剂的量将取决于所正在治疗的疾病以及本领域众所周知的其他因素。此类单位剂量可以是含有适合于单次施用的量的IL12受体激动剂的冻干干粉的形式，或者是液体的形式。干粉单位剂型可以与注射器、适量的稀释剂和/或用于施用的其他组分一起包装在试剂盒中。液体形式的单位剂量可以以预先填充有适合单次施用的量的IL12受体激动剂的注射器的形式方便地提供。

药物组合物还可以以含有适合于多次施用的量的IL12受体激动剂批量形式提供。

药物组合物可以通过将具有期望纯度的IL12受体激动剂与以下进行混合来进行制备，以储存为冻干配制剂或水性溶液：本领域通常使用的任选的药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(所有这些在本文中称为“载剂”)，即缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等张剂(isotonifier)、非离子去污剂、抗氧化剂和其他各种各样的添加剂。参见Remington’sPharmaceutical Sciences,第16版(Osol,编1980)。此类添加剂在所使用的剂量和浓度下应当对接受者无毒。

缓冲剂有助于将pH值维持在近似生理条件的范围中。它们可以以各种各样的浓度存在，但通常将以范围为约2mM至约50mM的浓度存在。用于本公开的合适的缓冲剂包括有机酸和无机酸及其盐，诸如柠檬酸盐缓冲剂(例如柠檬酸一钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸一钠混合物等)、琥珀酸盐缓冲剂(例如，琥珀酸-琥珀酸一钠混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等)、酒石酸盐缓冲剂(例如，酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等)、富马酸盐缓冲剂(例如，富马酸-富马酸一钠混合物、富马酸-富马酸二钠混合物、富马酸一钠-富马酸二钠混合物等)、葡萄糖酸盐缓冲剂(例如，葡萄糖酸-葡萄糖酸钠混合物)、草酸盐缓冲液(例如，草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等)、乳酸盐缓冲液(例如，乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等)和乙酸盐缓冲液(例如，乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等)。额外地，可以使用磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和三甲胺盐，诸如Tris。

可以添加防腐剂以延缓微生物生长，并且可以以约0.2％-1％(w/v)的范围的量添加。用于本公开的合适的防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基苄基氯化铵、苯扎卤化物(例如氯化物、溴化物和碘化物)、六甲铵氯化物和对羟基苯甲酸烷基酯(诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、儿茶酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。可以添加有时称为“稳定剂”的等渗剂(isotonicifier)以确保本公开的液体组合物的等渗性，并且包括多元糖醇，例如三元或高级糖醇，诸如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇。稳定剂指广泛种类的赋形剂，其功能范围可以从填充剂到使治疗剂溶解或有助于防止变性或粘附到容器壁的添加剂。典型的稳定剂可以是多元糖醇(以上列举的)；氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等，有机糖或糖醇诸如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、半乳糖醇、甘油等等，包括环醇诸如肌醇；聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫还原剂，诸如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、巯基乙酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽(例如10个残基或更少的肽)；蛋白质，诸如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮单糖，诸如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖，诸如乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖；以及三糖，诸如棉子糖；和多糖，诸如右旋糖酐。稳定剂的存在的量可以范围为每重量的IL12受体激动剂的0.5至10wt％。

可以添加非离子表面活性剂或去污剂(也称为“润湿剂”)来帮助使糖蛋白溶解并保护糖蛋白免受搅拌引起的聚集，这还允许配制剂暴露于剪切表面应力而不会导致蛋白质的变性。合适的非离子表面活性剂包括聚山梨醇酯(20、80等)、聚泊洛沙姆(184、188等)和复合多元醇(pluronic polyol)。非离子表面活性剂可以以约0.05mg/mL至约1.0mg/mL、例如约0.07mg/mL至约0.2mg/mL的范围存在。

额外的各种赋形剂包括填充剂(例如淀粉)、螯合剂(例如EDTA)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、甲硫氨酸、维生素E)和共溶剂。

6.10.2.用于递送编码IL12受体激动剂的核酸的药物组合物

本公开的IL12受体激动剂可以通过用于基因疗法的任何方法(例如作为mRNA或通过在合适的启动子控制下的编码IL12受体激动剂的病毒载体)进行递送。

示例性基因疗法载体包括基于腺病毒或AAV的疗法。用于本文的方法、用途或组合物中的基于腺病毒或基于AAV的疗法的非限制性实例包括但不限于：rAd-p53，其是编码野生型人肿瘤抑制蛋白p53的重组腺病毒载体，例如其用于治疗癌症(还称为Qi等人,2006,Modern Oncology,14:1295-1297)；Ad5_d11520，其是缺乏用于灭活宿主p53的E1B基因的腺病毒(还称为H101或ONYX-015；参见例如Russell等人,2012,Nature Biotechnology 30:658-670)；AD5-D24-GM-CSF，含有细胞因子GM-CSF的腺病毒，例如其用于治疗癌症(Cerullo等人,2010,Cancer Res.70:4297)；rAd-HSVtk，具有HSV胸苷激酶基因的复制缺陷型腺病毒，例如其用于治疗癌症(开发为Ark Therapeutics，参见例如美国专利号6,579,855；由Advantagene开发为ProstAtak^TM；国际PCT申请号WO2005/049094)；rAd-TNFα，在放化疗可诱导的EGR-1启动子控制下表达人肿瘤坏死因子α(TNFα)的复制缺陷型腺病毒载体，例如其用于治疗癌症(TNFerade^TM，GenVec；Rasmussen等人,2002,Cancer Gene Ther.9:951-7；Ad-IFNβ，腺病毒血清型5载体，其中已缺失E1和E3基因，在巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子的指导下表达人干扰素-β基因，例如其用于治疗癌症(BG00001和H5.110CMVhIFN-β，Biogen；Sterman等人,2010,Mol.Ther.18:852-860)。

核酸分子(例如，mRNA)或病毒可以配制为药物组合物中的唯一药物活性成分，或者可以与用于所治疗的特定病症的其他活性剂组合。任选地，本文提供的组合物中可以包含其他药剂、药物制剂、载剂、佐剂、稀释剂。例如，组合物中还可以存在：润湿剂、乳化剂和润滑剂中的任何一种或多种，例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体。可以包含在组合物中的示例性其他药剂和赋形剂包括例如水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠(sodium metabisulfite)、亚硫酸钠；油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚；以及金属螯合剂，诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸和磷酸。

6.11.治疗适应症和治疗的方法

本公开提供了本公开的IL12受体激动剂的使用和应用的方法。

本公开的IL12受体激动剂可用于治疗疾病状态，其中刺激宿主的免疫系统是有益的，特别是其中期望增强的细胞免疫应答的情况。这些可能包括其中宿主免疫应答不足或有缺陷的疾病状态。

可以施用本公开的IL12受体激动剂的疾病状态包括例如肿瘤或感染，其中细胞免疫应答将是特异性免疫的关键机制。可以采用本公开的IL12受体激动剂的特定的疾病状态包括癌症，包括乳腺癌、前列腺癌和结肠直肠癌。本公开的IL12受体激动剂可以本身或在任何合适的药物组合物中进行施用。

在一方面，提供了用作药物的本公开的IL12受体激动剂。在进一步的方面，提供了用于治疗疾病的本公开的IL12受体激动剂。在某些实施方案中，提供了用于治疗的方法的本公开的IL12受体激动剂。在一个实施方案中，本公开提供了如本文所述的IL12受体激动剂用于治疗有此需要的受试者中的疾病。在某些实施方案中，本公开提供了用于治疗患有疾病的受试者的方法中的IL12受体激动剂，该方法包括向个体施用治疗有效量的IL12受体激动剂。在某些实施方案中，待治疗的疾病是增殖性病症。在优选的实施方案中，疾病是癌症。在某些实施方案中，方法进一步包括向个体施用治疗有效量的至少一种另外的治疗剂，例如，如果待治疗的疾病是癌症，则为抗癌剂。在进一步的实施方案中，本公开提供了用于刺激免疫系统的IL12受体激动剂。在某些实施方案中，本公开提供了用于刺激受试者的免疫系统的方法中的IL12受体激动剂，该方法包括向个体施用有效量的IL12受体激动剂以刺激免疫系统。根据任何上述实施方案的“个体”是哺乳动物，优选是人。根据任何以上实施方案的“免疫系统的刺激”可以包括以下的任何一个或多个：免疫功能的一般增加、T细胞功能的增加、B细胞功能的增加、淋巴细胞功能的恢复、IL12受体表达的增加、T细胞应答性的增加、自然杀伤细胞活性或淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞活性的增加等等。

在另一方面，本公开提供了本公开的IL12受体激动剂在制备(manufacture)或制备(preparation)用于治疗有此需要的受试者中的疾病的药物中的用途。在一个实施方案中，药物用于治疗疾病的方法，该方法包括向患有该疾病的受试者施用治疗有效量的该药物。在某些实施方案中，待治疗的疾病是增殖性病症。在优选的实施方案中，疾病是癌症。在一个此类实施方案中，方法进一步包括向个体施用治疗有效量的至少一种另外的治疗剂，例如，如果待治疗的疾病是癌症，则为抗癌剂。在进一步的实施方案中，药物用于刺激免疫系统。在进一步的实施方案中，药物用于刺激受试者的免疫系统的方法中，该方法包括向个体施用有效量的药物以刺激免疫系统。根据任何上述实施方案的“个体”可以是哺乳动物，优选是人。根据任何以上实施方案的“免疫系统的刺激”可以包括以下的任何一个或多个：免疫功能的一般增加、T细胞功能的增加、B细胞功能的增加、淋巴细胞功能的恢复、IL12受体表达的增加、T细胞应答性的增加、自然杀伤细胞活性或淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞活性的增加等等。

在进一步的方面，本公开提供了用于治疗受试者中的疾病的方法，其包括向个体施用治疗有效量的本公开的IL12受体激动剂。在一个实施方案中，向所述个体施用组合物，其包含药学上可接受的形式的本公开的IL12受体激动剂。在某些实施方案中，待治疗的疾病是增殖性病症。在优选的实施方案中，疾病是癌症。在某些实施方案中，方法进一步包括向个体施用治疗有效量的至少一种另外的治疗剂，例如，如果待治疗的疾病是癌症，则为抗癌剂。在进一步的方面，本公开提供了用于刺激受试者中的免疫系统的方法，其包括向个体施用有效量的IL12受体激动剂以刺激免疫系统。根据任何上述实施方案的“个体”可以是哺乳动物，优选是人。根据任何以上实施方案的“免疫系统的刺激”可以包括以下的任何一个或多个：免疫功能的一般增加、T细胞功能的增加、B细胞功能的增加、淋巴细胞功能的恢复、IL12受体表达的增加、T细胞应答性的增加、自然杀伤细胞活性或淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞活性的增加等等。

在某些方面，本公开提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用如本文所述的IL12受体激动剂或药物组合物。

在一些实施方案中，本公开提供了用靶向癌组织的IL12受体激动剂蛋白治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用如本文所述的IL12受体激动剂或药物组合物，其中IL12受体激动剂包含识别在肿瘤组织(例如，癌细胞、细胞外基质、肿瘤淋巴细胞等)中表达的靶分子的靶向部分。

本公开进一步提供了局部递送IL12蛋白的方法，包括向受试者施用如本文所述的IL12受体激动剂或药物组合物，其中IL12受体激动剂包含识别由IL12受体激动剂所局部递送至的组织表达的靶分子的靶向部分。如本文所用，术语“局部递送”不需要局部施用，而是指IL12受体激动剂在施用后选择性地定位至感兴趣的组织。

本公开还提供了向受试者施用具有降低的全身暴露和/或降低的全身毒性的IL12疗法的方法，其包括向受试者施用如本文所述的IL12受体激动剂或药物组合物形式的IL12疗法。因此，上述方法凭借将IL12受体激动剂优先靶向至特定的靶组织和/或减弱和/或掩蔽IL12部分直至预期活性的位点处，来允许具有降低的脱靶副作用的IL12疗法。

本公开进一步提供了在靶组织中局部诱导免疫应答的方法，其包括向受试者施用如本文所述的IL12受体激动剂或药物组合物，其具有能够结合在靶组织中表达的靶分子的一个或多个靶向部分。IL12受体激动剂随后可以诱导针对靶组织中至少一种细胞类型的免疫应答。

在一些实施方案中，施用不是在组织的局部。例如，当靶组织是癌组织时，施用可以是全身的或皮下的。

在某些实施方案中，待治疗的疾病是增殖性病症，优选地癌症。癌症的非限制性实例包括膀胱癌、脑癌、头颈癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、子宫内膜癌、食道癌、结肠癌、结直肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、血癌、皮肤癌、鳞状细胞癌、骨癌和肾癌。可以使用本公开的IL12受体激动剂治疗的其他细胞增殖病症包括但不限于位于以下的赘生物：腹部、骨、乳房、消化系统、肝、胰腺、腹膜、内分泌腺(肾上腺、甲状旁腺、垂体、睾丸、卵巢、胸腺、甲状腺)、眼、头颈、神经系统(中枢和外周)、淋巴系统、盆腔、皮肤、软组织、脾脏、胸部区域和泌尿生殖系统。还包括癌变前期病况或病变以及癌症转移。在某些实施方案中，癌症选自由肾细胞癌、皮肤癌、肺癌、结直肠癌、乳腺癌、脑癌、头颈癌组成的组。相似地，其他细胞增殖病症还可以通过本公开的IL12受体激动剂来治疗。此类细胞增殖病症的实例包括但不限于：高丙种球蛋白血症、淋巴增殖性病症、副蛋白血症、紫癜、结节病、塞扎里综合征(Sezary Syndrome)、Waldenstron’s巨球蛋白血症、戈谢病、组织细胞增多症、以及除瘤形成之外的位于以上列出的器官中的任何其他细胞增殖疾病。

下表6显示了靶向特定靶分子的IL12受体激动剂可用于的示例性适应症。

额外的靶分子和相应的适应症公开于例如Hafeez等人,2020,Molecules25:4764,doi:10.3390/molecules25204764中，特别是表1中。表1通过引用以其整体并入本文。

在另一个实施方案中，疾病与自身免疫、移植排斥、创伤后免疫应答和感染性疾病(例如，HIV)有关。更具体地，IL12受体激动剂可以用于消除涉及免疫细胞介导的病症的细胞，包括淋巴瘤；自身免疫、移植排斥、移植物抗宿主病、缺血和中风。

技术人员容易认识到，在许多情况下，IL12受体激动剂可以无法提供治愈，而可以仅提供部分益处。在一些实施方案中，具有一些益处的生理变化也被视为是治疗上有益的。因此，在一些实施方案中，提供生理变化的IL12受体激动剂的量被视为“有效量”或“治疗有效量”。

需要治疗的受试者、患者或个体通常是哺乳动物，更具体地是人。

为了预防或治疗疾病，本公开的IL12受体激动剂(当单独使用或与一种或多种其他额外的治疗剂组合使用时)的适当剂量将取决于待治疗的疾病的类型、施用的途径、患者的体重、特定的IL12受体激动剂、疾病的严重程度和进程、施用抗体是否出于预防或治疗目的、先前或同时的治疗干预、患者的临床病史和对IL12受体激动剂的应答、以及主治医生的自由裁量。在任何情况下，负责施用的从业者将确定组合物中活性成分的浓度以及对于个体受试者的适当剂量。本文考虑了各种给药方案，包括但不限于在不同时间点单次或多次施用、推注施用和脉冲输注。

未缀合的IL12的单次施用范围可以为约50,000IU/kg至约1,000,000IU/kg或更多，更典型地约600,000IU/kg的IL12。这可以一天重复几次(例如，2-3次)，持续几天(例如，连续约3-5天)，然后可以在一段时间(例如，约7天-14天)的休息后重复一次或多次。因此，治疗有效量可以包括仅单次施用或一段时间内的多次施用(例如，约600,000IU/kg的IL12的约20-30次单独施用，每次在约10-20天的时间段内给予)。

相似地，将IL12受体激动剂一次或在一系列治疗中适合地施用于患者。取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg(例如，0.1mg/kg-10mg/kg)的IL12受体激动剂可以是用于施用至患者的初始候选剂量，无论是，例如通过一次或多次单独的施用，或通过连续输注。典型的每日剂量范围可以为约1μg/kg至100mg/kg或更多，取决于上述因素。对于几天或更长时间内的重复施用，取决于病况，治疗通常将持续直到期望的疾病症状的抑制出现。Il12受体激动剂的一种示例性剂量范围将为约0.005mg/kg至约10mg/kg。在其他非限制性实例中，剂量还可包含每次施用约1μg/kg/体重、约5μg/kg/体重、约10μg/kg/体重、约50μg/kg/体重、约100μg/kg/体重、约200μg/kg/体重、约350μg/kg/体重、约500μg/kg/体重、约1mg/kg/体重、约5mg/kg/体重、约10mg/kg/体重、约50mg/kg/体重、约100mg/kg/体重、约200mg/kg/体重、约350mg/kg/体重、约500mg/kg/体重至约1000mg/kg/体重或更多，以及其中可衍生的任何范围。在可从本文列出的数字衍生出的范围的非限制性实例中，基于上述数字，可以施用约5mg/kg/体重至约100mg/kg/体重、约5μg/kg/体重至约500mg/kg/体重等的范围。因此，可以向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、5.0mg/kg或10mg/kg(或其任何组合)的一个或多个剂量。此类剂量可以间歇地施用，例如每周或每三周(例如，使得患者接受约二至约二十、或例如约六剂的IL12受体激动剂)。可以施用初始较高的负荷剂量，随后施用一个或多个较低剂量。然而，其他剂量方案可以是有用的。这种疗法的进展很容易通过常规技术和测定来监测。

本公开的IL12受体激动剂通常以对实现预期目的有效的量进行使用。为了用于治疗或预防疾病病况，以治疗有效量施用或应用本公开的IL12受体激动剂或其药物组合物。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，特别是考虑到本文提供的详细公开。

对于全身施用，治疗有效剂量最初可以通过体外测定(诸如细胞培养测定)来估计。然后可以在动物模型中进行剂的配制以达到循环范围，该范围包括如在细胞培养物中所测定的EC₅₀。此类信息可以用于更准确地确定在人中的有用剂量。

还可以使用本领域众所周知的技术从体内数据例如动物模型来估计初始剂量。本领域普通技术人员可以基于动物数据容易地优化对人类的施用。

剂量量和间隔可以单独进行调整以提供足以维持治疗效果的IL12受体激动剂的血浆水平。用于通过注射进行的施用的常用患者剂量范围为约0.1至50mg/kg/天，通常为约0.5至1mg/kg/天。可以通过每天施用多剂来达到治疗有效的血浆水平。血浆中的水平可以例如通过ELISA HPLC来测量。

在局部施用或选择性摄取的情况下，IL12受体激动剂的有效局部浓度可以与血浆浓度不相关。本领域技术人员将能够在无需过度实验的条件下优化治疗有效的局部剂量。

在不引起实质上的毒性的条件下，本文所述的IL12受体激动剂的治疗有效剂通常将提供治疗益处。IL12受体激动剂的毒性和治疗功效可以通过细胞培养物或实验动物中的标准制药程序来去确定(参见例如实施例7和8)。细胞培养测定和动物研究可用于确定LD₅₀(对50％的群体致命的剂量)和ED₅₀(对50％的群体治疗有效的剂量)。毒性作用与治疗作用之间的剂量比率是治疗指数，可以表达为比率LD₅₀/ED₅₀。展示出大治疗指数的IL12受体激动剂是优选的。在一个实施方案中，根据本发明的IL12受体激动剂展示出高治疗指数。从细胞培养测定和动物研究获得的数据可以用于配制适合用于人类的一系列剂量。剂量优选在具有很小毒性或没有毒性的包括ED₅₀的循环浓度的范围之内。剂量可以在此范围之内变化，这取决于多种因素，例如所采用的剂型、所利用的施用的途径、受试者的病况等等。确切的配制剂、施用的途径和剂量可以由个体医生考虑到患者的病况来选择。(参见，例如Fingl等人,1975,In:The Pharmacological Basis of Therapeutics,第1章，第1页，其通过引用以其整体并入本文)。

用本公开的IL12受体激动剂治疗的患者的主治医师将知道如何以及何时由于毒性、器官功能障碍等等而终止、中断或调整施用。相反，如果临床应答不足够(排除毒性)，主治医生还将知道将治疗调整至更高水平。在感兴趣的病症的管理中施用剂量的大小将随着待治疗的病况的严重性、随着施用的途径等等而变化。例如，可以部分地通过标准预后评估方法来评估病况的严重性。此外，剂量和可能的剂量频率也将根据个体患者的年龄、体重和应答而变化。

由于较低的毒性，本公开的IL12受体激动剂可以具有比野生型IL12更高的最大治疗剂量，尽管由于延长的半衰期，含有稳定化部分的IL12受体激动剂通常以比野生型IL12更低的剂量施用。

6.12.组合疗法

根据本公开的IL12受体激动剂可以在疗法中与一种或多种其他药剂组合施用。例如，本公开的IL12受体激动剂可以与至少一种额外的治疗剂共同施用。术语“治疗剂”涵盖施用以治疗需要此类治疗的受试者中的症状或疾病的任何药剂。这种另外的治疗剂可以包含适合于所治疗的特定适应症的任何活性成分，优选具有不会彼此不利影响的互补活性的那些活性成分。在某些实施方案中，额外的治疗剂是免疫调节剂、细胞生长抑制剂、细胞黏附抑制剂、细胞毒性剂、细胞凋亡活化剂或增加细胞对凋亡诱导剂敏感性的药剂。在特定实施方案中，额外的治疗剂是抗癌剂，例如微管破坏剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、DNA嵌入剂、烷化剂、激素疗法、激酶抑制剂、受体拮抗剂、肿瘤细胞凋亡活化剂或抗血管生成剂。

此类其他药剂合适地以对预期目的有效的量存在于组合物中。此类其他药剂的有效量取决于所使用的IL12受体激动剂的量、病症或治疗的类型以及以上讨论的其他因素。IL12受体激动剂通常以与本文所述相同的剂量和施用途径使用，或以本文所述剂量的约1％至99％使用，或以经验/临床确定为适当的任何剂量和任何途径使用。

上述此类联合疗法涵盖组合的施用(其中两种或更多种治疗剂包括在同一或单独的组合物中)和单独施用，在这种情况下，施用本发明的IL12受体激动剂可以在施用额外的治疗剂和/或佐剂之前、同时和/或之后发生。本公开的IL12受体激动剂还可以与放射疗法组合使用。

本公开的IL12受体激动剂可以有利地与以下组合使用：表达嵌合抗原受体(“CAR”)的细胞(例如表达CAR的T(“CAR-T”)细胞)，例如在治疗癌症或自身免疫病中的CAR-T。在一些实施方案中，CAR-T细胞由IL12受体激动剂中的靶向部分识别。靶向部分可以识别CART细胞上的T细胞受体或另一细胞表面分子。在一些实施方案中，IL12受体激动剂中的靶向部分能够结合至CAR的胞外结构域，例如抗原结合结构域。

示例性的CAR结构、制剂、施用方案和组合治疗方案公开于例如PCT公开WO 2021/127487 A2的第6.11.1节中，该节通过引用具体地并入本文，并进行必要修改后应用于本公开的IL12受体激动剂。

7.编号的实施方案

尽管已经说明和描述了各种具体实施方案，但是将理解，在不脱离本公开的精神和范围的条件下可以做出各种改变。本公开通过以下所示的编号的实施方案来举例说明。除非另有说明，否则以上详细描述中描述的任何构思、方面和/或实施方案的特征经过必要的修改可适用于以下编号的实施方案中的任何一个。

1.p35部分，其包含变体p35部分，该变体p35部分具有与成熟人p35或成熟鼠p35的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应以下的位置处包含一个或多个氨基酸取代：

(a)全长人p35的氨基酸Y189或全长鼠p35的氨基酸Y185，其中取代任选地是A、V、R或E；

(b)全长人p35的氨基酸I193或全长鼠p35的氨基酸M189，其中取代任选地是A、V或E；

(c)全长人p35的氨基酸R211或全长鼠p35的氨基酸R207，其中取代任选地是A或K；或

(d)(a)至(c)的任何组合；

任选地，其中变体包含表2中所述的一个或多个额外的取代或实施方案676至719中任一个中列举的取代的任何组合。

2.p40部分，其包含变体p40部分，该变体p40部分具有与成熟人p35或成熟鼠p35的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应以下的位置处包含一个或多个氨基酸取代：

(a)全长人p40的氨基酸K28或全长鼠p40的氨基酸K28，其中取代任选地是A；

(b)全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37，其中取代任选地是A；

(c)全长人p40的氨基酸D115或全长鼠p40的氨基酸E115，其中取代任选地是A；

(d)全长人p40的氨基酸K118或全长鼠p40的氨基酸K118，其中取代任选地是A；

(e)全长人p40的氨基酸K126或全长鼠p40的氨基酸K126，其中取代任选地是A；

(f)全长人p40的氨基酸Y268或全长鼠p40的氨基酸Y265，其中取代任选地是V或F；

(g)全长人p40的氨基酸Y314或全长鼠p40的氨基酸Y318，其中取代任选地是F；或

(h)(a)至(g)的任何组合；

任选地，其中变体包含表1中列举的一个或多个额外的取代或实施方案589至674中任一个中列举的取代的任何组合。

3.IL12受体激动剂，其包含：

(a)第一多肽链，其在N末端至C末端方向上包含第一靶向部分或靶向部分组分、第一Fc结构域和p35部分，任选地其中p35部分具有减弱取代，例如表2中所示的一个或多个减弱取代；

(b)第二多肽链，其在N末端至C末端方向上包含第二靶向部分或靶向部分组分和第二Fc结构域；

(c)第一Fc结构域和p35部分之间的p40部分或以单体p40形式的p40部分，任选地其中p40部分具有减弱取代，例如在对应于全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37的位置处的减弱取代，和/或表1中所示的一个或多个减弱取代；

(d)经配置以掩蔽p35部分或p40部分的IL12Rβ部分或IL12抗体片段。

4.IL12受体激动剂，其包含IL12突变蛋白，其中IL12受体激动剂与野生型IL12相比具有至少500倍的减弱，其中IL12受体激动剂包含：

(a)通过第一Fc结构域和第二Fc结构域二聚化的第一多肽链和第二多肽链；

(b)第一多肽链上的任选的第一靶向部分或靶向部分组分，和第二多肽链上的任选的第二靶向部分或靶向部分组分；

(c)p35部分和p40部分；以及

5.Il12受体激动剂，其在通过第一Fc结构域和第二Fc结构域二聚化的第一多肽链和第二多肽链上包含：

(a)任选的第一靶向部分和任选的第二靶向部分；

(b)包含p35部分和p40部分的IL12突变蛋白，其中：

(i)p35部分包含减弱氨基酸取代，任选地其中减弱氨基酸取代位于以下位置处：(A)全长人p35的氨基酸Y189或全长鼠p35的氨基酸Y185，其中取代任选地是A、V、R或E；(B)全长人p35的氨基酸I193或全长鼠p35的氨基酸M189，其中取代任选地是A、V或E；(C)全长人p35的氨基酸R211或全长鼠p35的氨基酸R207，其中取代任选地是A或K；或(D)(A)-(C)的任何组合；和/或

(ii)p40部分包含减弱氨基酸取代，任选地其中减弱氨基酸取代位于以下位置处：(A)全长人p40的氨基酸K28或全长鼠p40的氨基酸K28，其中取代任选地是A；(B)全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37，其中取代任选地是A；(C)全长人p40的氨基酸D115或全长鼠p40的氨基酸E115，其中取代任选地是A；(D)全长人p40的氨基酸K118或全长鼠p40的氨基酸K118，其中取代任选地是A；(E)全长人p40的氨基酸K126或全长鼠p40的氨基酸K126，其中取代任选地是A；(F)全长人p40的氨基酸Y268或全长鼠p40的氨基酸Y265，其中取代任选地是V或F；(G)全长人p40的氨基酸Y314或全长鼠p40的氨基酸Y318，其中取代任选地是F；或(H)(A)至(G)的任何组合；

(iii)经配置以掩蔽p35部分或p40部分的IL12Rβ部分或IL12抗体片段。

6.包含IL12突变蛋白的IL12受体激动剂，其任选地包含：

(a)实施方案1的p35部分和/或实施方案的p40部分；

(b)与成熟人p35或成熟鼠p35的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的p35部分，和/或与成熟人p40或成熟鼠p40的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％的序列同一性的p40部分；和/或

(c)具有图2B-2P、3B-3I、4B-4Y、5B-5T、5V-5X和39A-39D中任一个所示的任何配置的多肽链或多肽链对。

7.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至6中任一个的IL12受体激动剂，其包含一种、两种或更多种IL12单体。

8.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体1的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体2的配置的第二IL12单体。

9.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体1的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体18的配置的第二IL12单体。

10.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体1的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体22的配置的第二IL12单体。

11.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体2的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体17的配置的第二IL12单体。

12.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体2的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体21的配置的第二IL12单体。

13.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体3的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体4的配置的第二IL12单体。

14.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体3的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体20的配置的第二IL12单体。

15.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体3的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体24的配置的第二IL12单体。

16.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体3的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体53的配置的第二IL12单体。

17.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有与单体p40(其任选地是掩蔽的单体p40)缔合的示例性单体3的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中单体p40包含根据实施方案2的p40部分。

18.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有与单体p40(其任选地是掩蔽的单体p40)缔合的示例性单体3的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体，任选地其中单体p40包含根据实施方案2的p40部分。

19.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体4的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体19的配置的第二IL12单体。

20.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体4的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体23的配置的第二IL12单体。

21.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体4的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体52的配置的第二IL12单体。

22.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体5的配置的第二IL12单体。

23.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体6的配置的第二IL12单体。

24.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体13的配置的第二IL12单体。

25.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体14的配置的第二IL12单体。

26.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体15的配置的第二IL12单体。

27.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体16的配置的第二IL12单体。

28.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体25的配置的第二IL12单体。

29.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

30.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

31.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

32.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

33.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

34.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体。

35.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体。

36.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体。

37.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体。

38.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体。

39.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体。

40.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体。

41.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体。

42.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体5的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

43.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体6的配置的第二IL12单体。

44.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体13的配置的第二IL12单体。

45.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体14的配置的第二IL12单体。

46.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体15的配置的第二IL12单体。

47.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体16的配置的第二IL12单体。

48.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体25的配置的第二IL12单体。

49.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

50.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

51.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

52.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

53.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

54.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体。

55.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体。

56.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体。

57.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体。

58.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体。

59.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体。

60.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体。

61.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体。

62.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体6的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

63.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体7的配置的第二IL12单体。

64.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体。

65.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体8的配置的第二IL12单体。

66.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体9的配置的第二IL12单体。

67.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体10的配置的第二IL12单体。

68.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体11的配置的第二IL12单体。

69.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体12的配置的第二IL12单体。

70.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体27的配置的第二IL12单体。

71.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

72.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

73.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

74.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

75.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

76.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

77.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

78.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

79.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

80.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

81.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

82.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

83.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

84.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

85.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体59的配置的第二IL12单体。

86.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体7的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

87.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体8的配置的第二IL12单体。

88.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体。

89.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体9的配置的第二IL12单体。

90.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体10的配置的第二IL12单体。

91.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体11的配置的第二IL12单体。

92.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体12的配置的第二IL12单体。

93.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体27的配置的第二IL12单体。

94.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

95.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

96.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

97.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

98.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

99.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

100.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

101.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

102.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

103.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

104.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

105.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

106.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

107.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

108.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体55的配置的第二IL12单体。

109.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体59的配置的第二IL12单体。

110.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体8的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

111.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体9的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)第一IL12单体和第二IL12单体中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)第一IL12单体和第二IL12单体中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2；

(c)第一IL12单体中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且第二IL12单体中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；

(d)第一IL12单体中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且第二IL12单体中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

112.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体。

113.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体10的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体10中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体10中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

114.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体11的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体11中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体1中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

115.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体12的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体12中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体12中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

116.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体27的配置的第二IL12单体。

117.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

118.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

119.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

120.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

121.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

122.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

123.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

124.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

125.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

126.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

127.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

128.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

129.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

130.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体9和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体9和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体9中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

131.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体24的配置的第二IL12单体。

132.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体。

133.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体9的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

134.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体10的配置的第二IL12单体，任选地其中：

135.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体11的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体11中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体11中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

136.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体12的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体12中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体12中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

137.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体27的配置的第二IL12单体。

138.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

139.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

140.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

141.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

142.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

143.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

144.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

145.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

146.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

147.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

148.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

149.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

150.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

151.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体10和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体10和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体10中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

152.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体10的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

153.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体11的配置的第二IL12单体，任选地其中：

154.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体。

155.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体12的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体12中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体12中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

156.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体27的配置的第二IL12单体。

157.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

158.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

159.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

160.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

161.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

162.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

163.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

164.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体7中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

165.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

166.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

167.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

168.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

169.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

170.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体11和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体11和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体11中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

171.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体59的配置的第二IL12单体。

172.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体11的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

173.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体12的配置的第二IL12单体，任选地其中：

174.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体27的配置的第二IL12单体。

175.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

176.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

177.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

178.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

179.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

180.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体35中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

181.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

182.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

183.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

184.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

185.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

186.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

187.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

188.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体12和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体12和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体12中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

189.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体12的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

190.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体13的配置的第二IL12单体，任选地其中：

191.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体14的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体14中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体14中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体4中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

192.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体15的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体15中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体15中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

193.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体16的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体16中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体16中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

194.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体25的配置的第二IL12单体。

195.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

196.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

197.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

198.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

199.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

200.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

201.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

202.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

203.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

204.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

205.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

206.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

207.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体13的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体13和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体13和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体13中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

208.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体14的配置的第二IL12单体，任选地其中：

209.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体15的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体15中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体15中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

210.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体16的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体16中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体16中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

211.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体25的配置的第二IL12单体。

212.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

213.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

214.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

215.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

216.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

217.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

218.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体4中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

219.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

220.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

221.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

222.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

223.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

224.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体14的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体14和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体14和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体14中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

225.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体15的配置的第二IL12单体，任选地其中：

226.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体16的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体16中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体16中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

227.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体25的配置的第二IL12单体。

228.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

229.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

230.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

231.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

232.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

233.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体3中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

234.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

235.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

236.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

237.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

238.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

239.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

240.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体15的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体15和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体15和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体15中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

241.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体16的配置的第二IL12单体，任选地其中：

242.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体25的配置的第二IL12单体。

243.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

244.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

245.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

246.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

247.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

248.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体43中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

249.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

250.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

251.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

252.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

253.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

254.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

255.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体16的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体16和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体16和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体16中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

256.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体17的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体18的配置的第二IL12单体。

257.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体19的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体20的配置的第二IL12单体。

258.Il12受体激动剂，其任选地是实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有与单体p40(其任选地是掩蔽的单体p40)缔合的示例性单体19的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

259.Il12受体激动剂，其任选地是实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有与单体p40(其任选地是掩蔽的单体p40)缔合的示例性单体19的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体57的配置的第二IL12单体。

260.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体25的配置的第二IL12单体。

261.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

262.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

263.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

264.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

265.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

266.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体。

267.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体。

268.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体。

269.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体。

270.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体。

271.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体。

272.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体。

273.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体25的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体。

274.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体26的配置的第二IL12单体。

275.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

276.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

277.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

278.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

279.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体。

280.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体。

281.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体。

282.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体。

283.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体。

284.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体。

285.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体。

286.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体26的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体。

287.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体27的配置的第二IL12单体。

288.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

289.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

290.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

291.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

292.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

293.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

294.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

295.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

296.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

297.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

298.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

299.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

300.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

301.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体27的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

302.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体28的配置的第二IL12单体。

303.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

304.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

305.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

306.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

307.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

308.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

309.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

310.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

311.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

312.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

313.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

314.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

315.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

316.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体59的配置的第二IL12单体。

317.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

318.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体29的配置的第二IL12单体。

319.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

320.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

321.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

322.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体。

323.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体。

324.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体。

325.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体。

326.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体。

327.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体。

328.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体。

329.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体29的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体。

330.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体30的配置的第二IL12单体。

331.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

332.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体。

333.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体。

334.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体。

335.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体。

336.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体。

337.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体。

338.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体。

339.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体30的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体。

340.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体31的配置的第二IL12单体。

341.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

342.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

343.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

344.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

345.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

346.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

347.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

348.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

349.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

350.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

351.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

352.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

353.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体31的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

354.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体32的配置的第二IL12单体。

355.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

356.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

357.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

358.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

359.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

360.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

361.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

362.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

363.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

364.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

365.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

366.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体32的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

367.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体34的配置的第二IL12单体。

368.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

369.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

370.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

371.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

372.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

373.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

374.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

375.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

376.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体。

377.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体。

378.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体。

379.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体。

380.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体。

381.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体。

382.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体。

383.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体。

384.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

385.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

386.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

387.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体。

388.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体。

389.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体。

390.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体。

391.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体。

392.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体。

393.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体。

394.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体。

395.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体34的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

396.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体，任选地其中：

397.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体36中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

398.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

399.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

400.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

401.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

402.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

403.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

404.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体35和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体35和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体35中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

405.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

406.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体36的配置的第二IL12单体，任选地其中：

407.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体36和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体36和示例性单体37中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

408.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体36和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体36和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

409.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体36和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体36和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

410.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体36和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体36和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

411.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体36和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体36和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

412.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体36和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体36和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

413.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体36和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体36和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体36中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

414.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体36的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

415.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体37的配置的第二IL12单体，任选地其中：

416.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体37和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体37和示例性单体38中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

417.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体37和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体37和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

418.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体37和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体37和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

419.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体37和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体37和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

420.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体37和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体37和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

421.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体37和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体37和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体37中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

422.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体37的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

423.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体38的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体38的配置的第二IL12单体，任选地其中：

424.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体38的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体38和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体38和示例性单体39中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

425.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体38的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体38和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体38和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

426.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体38的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体38和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体38和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

427.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体38的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体38和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体38和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

428.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体38的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体38和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体38和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体38中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

429.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体38的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

430.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体39的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体39的配置的第二IL12单体，任选地其中：

431.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体39的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体39和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体39和示例性单体40中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

432.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体39的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体39和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体39和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

433.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体39的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体39和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体39和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

434.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体39的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体39和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体39和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体39中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

435.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体39的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

436.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体40的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体40的配置的第二IL12单体，任选地其中：

437.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体40的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体40和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体40和示例性单体41中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

438.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体40的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体40和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体40和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

439.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体40的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体40和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体40和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体40中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

440.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体40的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

441.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体41的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体41的配置的第二IL12单体，任选地其中：

442.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体41的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体41和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体41和示例性单体42中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

443.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体41的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体41和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体41和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体41中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

444.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体41的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

445.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体42的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体42的配置的第二IL12单体，任选地其中：

446.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体42的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体42和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体42和示例性单体51中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体42中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体51中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

447.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体42的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

448.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体43的配置的第二IL12单体，任选地其中：

449.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体43和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体43和示例性单体44中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

450.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体43和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体43和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

451.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体43和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体43和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

452.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体43和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体43和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

453.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体43和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体43和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

454.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体43和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体43和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

455.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体43的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体43和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体43和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体43中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

456.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体44的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体44的配置的第二IL12单体，任选地其中：

457.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体44的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体44和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体44和示例性单体45中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

458.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体44的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体44和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体44和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

459.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体44的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体44和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体44和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

460.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体44的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体44和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体44和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

461.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体44的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体44和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体44和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

462.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体44的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体44和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体44和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体44中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

463.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体45的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体45的配置的第二IL12单体，任选地其中：

464.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体45的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体45和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体45和示例性单体46中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

465.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体45的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体45和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体45和示例性单体47中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

466.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体45的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体45和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体45和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

467.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体45的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体45和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体45和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

468.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体45的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体45和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体45和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体45中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

469.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体46的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体46的配置的第二IL12单体，任选地其中：

470.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体46的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体46和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体46和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

471.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体46的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体46和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体46和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

472.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体46的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体46和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体46和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体46中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

473.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体46的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

474.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体47的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体47的配置的第二IL12单体，任选地其中：

475.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体47的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体47和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体47和示例性单体48中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

476.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体47的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体47和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体47和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

477.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体47的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体47和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体47和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体47中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

478.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体48的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体48的配置的第二IL12单体，任选地其中：

479.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体48的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体48和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体48和示例性单体49中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

480.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体48的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体48和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体48和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体48中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

481.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体49的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体49的配置的第二IL12单体，任选地其中：

482.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体49的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

(a)示例性单体49和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ1部分；

(b)示例性单体49和示例性单体50中的IL12Rβ部分两者都是IL12Rβ2部分；

(c)示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分；或

(d)示例性单体49中的IL12Rβ部分是IL12Rβ2部分，并且示例性单体50中的IL12Rβ部分是IL12Rβ1部分。

483.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体50的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体50的配置的第二IL12单体，任选地其中：

484.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体51的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体51的配置的第二IL12单体，任选地其中：

485.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体51的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

486.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体55的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体。

487.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体55的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体60的配置的第二IL12单体。

488.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体57的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

489.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体61的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体61的配置的第二IL12单体。

490.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体61的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体62的配置的第二IL12单体。

491.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含具有示例性单体63的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

492.实施方案6至491中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一p40部分和第一p35部分并且其任选地包含第一多肽链和第二多肽链。

493.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案3至7中任一个的IL12激动剂，其包含：

(a)第一多肽链，其包含：

(i)任选地，第一多聚化部分；

(ii)任选地，第一靶向部分或第一靶向部分组分；和

(iii)任选地，稳定化部分；和

(b)第二多肽链，其包含：

(i)任选地，第二多聚化部分；

(ii)任选地，第二靶向部分或第二靶向部分组分；和

(iii)任选地，稳定化部分；

(c)包含p40 D2结构域和p40 D3结构域的第一p40部分；和

(d)第一p35部分。

494.实施方案493的IL12受体激动剂，其中第一p40部分进一步包含p40 D1结构域。

495.实施方案493或实施方案494的IL12受体激动剂，其中第一p40部分位于第一多肽链或第二多肽链上。

496.实施方案493或实施方案494中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分是以单体p40多肽的形式。

497.实施方案493至495中任一个的IL12受体激动剂，其对于IL12是二价的并且包含第二p40部分和第二p35部分，该第二p40部分包含p40 D2结构域和p40 D3结构域。

498.实施方案497的IL12受体激动剂，其中第二p40部分进一步包含p40 D1结构域。

499.实施方案493至498中任一个的IL12受体激动剂，其中:

(a)第一多肽包含第一p40部分和第一p35部分；并且

(b)第二多肽包含第二p40部分和第二p35部分，该第二p40部分包含p40 D2结构域和p40 D3结构域。

500.实施方案499的IL12受体激动剂，其中第二p40部分进一步包含p40 D1结构域。

501.实施方案493至500中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一IL12单体和第二IL12单体。

502.实施方案501的IL12受体激动剂，其中第一IL12单体和第二IL12单体不是相同的。

503.实施方案494的IL12受体激动剂，其中第一IL12单体和第二IL12单体是相同的。

504.实施方案493至496中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一p40部分和第一p35部分位于第一多聚化部分的N末端，并且第二p40部分和第二p35部分位于第二多聚化部分的N末端。

505.实施方案486至503中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一p40部分和第一p35部分位于第一多聚化部分的C末端，并且第二p40部分和第二p35部分位于第二多聚化部分的C末端。

506.实施方案493至505中任一个的IL激动剂，其中第一p40部分位于第一p35部分的N末端，并且第二p40部分位于第二IL12部分的p35部分的N末端。

507.实施方案493至505中任一个的IL激动剂，其中第一p40部分位于第一p35部分的C末端，并且第二p40部分位于第二IL12部分的p35部分的C末端。

508.实施方案493至507中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中：

(a)第一多聚化部分与第一p40部分或者第一p35部分经由第一多聚化部分接头连接；并且

(b)第二多聚化部分与第二p40部分或者第二p35部分经由第二多聚化部分接头连接。

509.实施方案508的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个的长度为至少5或至少10个氨基酸。

510.实施方案508或实施方案509的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

511.实施方案508至510中任一项的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

512.实施方案511的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个是氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体或包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的多聚体。

513.实施方案512的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

514.实施方案493至507中任一项的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第一p35部分经由第一IL12部分内接头连接，并且第二p40部分和第二p35部分经由第二IL12部分内接头连接。

515.实施方案514的IL12受体激动剂，其中第一IL12部分内接头和第二IL12部分内接头的每个的长度为至少5或至少10个氨基酸。

516.实施方案507或515的IL12受体激动剂，其中第一IL12部分内接头和第二IL12部分内接头的每个是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

517.实施方案516的IL12受体激动剂，其中第一IL12部分内接头和第二IL12部分内接头的每个包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

518.实施方案517的IL12受体激动剂，其中第一IL12部分内接头和第二接头的每个是氨基酸序列G4S(SEQ ID NO:25)的多聚体或包含氨基酸序列G4S(SEQ ID NO:25)的多聚体。

519.实施方案518的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

520.实施方案6至496中任一个的IL12受体激动剂，其对于IL12是单价的。

521.实施方案6至491和520中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多肽链、第二多肽链、包含p40 D2结构域和p40 D3结构域的第一p40部分、以及第一p35部分。

522.实施方案521的IL12受体激动剂，其中:

(a)第一多肽包含第一p40部分；并且

(b)第二多肽包含第一p35部分。

523.实施方案522的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一p40部分位于第一多聚化部分的N末端，并且第一p35部分位于第二多聚化部分的N末端。

524.实施方案522的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一p40部分位于第一多聚化部分的C末端，并且第一p35部分位于第二多聚化部分的C末端。

525.实施方案522至524中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中

(a)第一多聚化部分和第一p40部分经由第一多聚化部分接头连接；并且

(b)第二多聚化部分和第一p35部分经由第二多聚化部分接头连接。

526.实施方案525的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个的长度为至少5或至少10个氨基酸。

527.实施方案525或实施方案526的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

528.实施方案525至527中任一项的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

529.实施方案528的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头和第二多聚化部分接头的每个是氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体或包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的多聚体。

530.实施方案529的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

531.实施方案521的IL12受体激动剂，其中:

(a)第一多肽包含第一p40部分和第一p35部分；并且

(b)第二多肽不包含p40部分或p35部分。

532.实施方案531的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一p40部分和第一p35部分位于第一多聚化部分的N末端。

533.实施方案531的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一p40部分和第一p35部分位于第一多聚化部分的C末端。

534.实施方案531至533中任一个的IL12激动剂，其中第一p40部分位于第一p35部分的N末端。

535.实施方案531至533中任一个的IL12激动剂，其中第一p40部分位于第一p35部分的C末端。

536.实施方案531至535中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一多聚化部分与第一p40部分或者第一p35部分经由第一多聚化部分接头连接。

537.实施方案536的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头的长度为至少5个或至少10个氨基酸。

538.实施方案536或实施方案537的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

539.实施方案538的IL12受体激动剂，其中第一多聚化部分接头包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

540.实施方案539的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

541.实施方案531至540中任一项的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第一p35部分经由第一IL12部分内接头连接。

542.实施方案541的IL12受体激动剂，其中IL12部分内接头的长度为至少5个或至少10个氨基酸。

543.实施方案541或实施方案542的IL12激动剂，其中第一IL12部分内接头是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

544.实施方案543的IL12受体激动剂，其中第一IL12部分内接头包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

545.实施方案544的IL12受体激动剂，其中第一IL12部分内接头是氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体或包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体。

546.实施方案545的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

547.实施方案6至546中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一p40部分，并且其中第一p40部分是人p40或其变体。

548.实施方案547的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟人p40具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

549.实施方案547或实施方案548的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟人p40具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

550.实施方案547至549中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟人p40具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

551.实施方案547至550中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟人p40具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

552.实施方案6至551中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一p35部分并且其中第一p35部分是人p35部分或其变体。

553.实施方案552的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟人p35具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

554.实施方案552或实施方案553的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟人p35具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

555.实施方案552至554中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟人p35具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

556.实施方案552至555中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟人p35具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

557.实施方案6至546中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一p40部分，并且其中第一p40部分是鼠p40或其变体。

558.实施方案557的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

559.实施方案557或实施方案558的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

560.实施方案557至559中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

561.实施方案557至560中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

562.实施方案6至546和557至561中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分是鼠p35部分或其变体。

563.实施方案562的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟鼠p35具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

564.实施方案562或实施方案563的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟鼠p35具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

565.实施方案562至564中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟鼠p35具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

566.实施方案562至565中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分包含与成熟鼠p35具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

567.实施方案497至519和从属于其的实施方案547至551中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p40部分是人p40或其变体。

568.实施方案567的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟人p40具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

569.实施方案567或实施方案568的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟人p40具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

570.实施方案567至569中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟人p40具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

571.实施方案567至570中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟人p40具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

572.实施方案497至519、从属于其的实施方案552至556、以及实施方案567至571中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p35部分是人p35部分或其变体。

573.实施方案572的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

574.实施方案572或实施方案545的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

575.实施方案572至546中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

576.实施方案572至547中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

577.实施方案497至519和从属于其的实施方案557至561中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p40部分是鼠p40或其变体。

578.实施方案577的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

579.实施方案577或实施方案578的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

580.实施方案577至579中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

581.实施方案577至580中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p40部分包含与成熟鼠p40具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

582.实施方案497至519、从属于其的实施方案562至566、以及实施方案577至581中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p35部分是鼠p35部分或其变体。

583.实施方案582的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。

584.实施方案582或实施方案583的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约93％序列同一性的氨基酸序列。

585.实施方案582至584中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约96％序列同一性的氨基酸序列。

586.实施方案582至585中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p35部分包含与成熟人p35具有至少约98％序列同一性的氨基酸序列。

587.实施方案6至586中任一个的IL12受体激动剂，其中第一多肽或者第二多肽均不包含除了IL12(例如p35或p40)部分之外的细胞因子部分。

588.实施方案6至587中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分以及第二p40部分(如果存在)包含至少一个氨基酸取代。

589.实施方案6至588中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟鼠p40的残基6的位置(例如，成熟鼠p40残基6)处的氨基酸取代。

590.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案589的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p40的残基6的位置(例如，成熟鼠p40残基6)处具有丙氨酸取代的第一p40部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p40残基6的位置(例如，成熟鼠p40残基6)处具有丙氨酸取代的第二p40部分。

591.实施方案6至590中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基15的位置(例如，成熟鼠p40残基15)处的氨基酸取代。

592.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案591的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p40的残基15的位置(例如，成熟鼠p40残基15)处具有丙氨酸取代的第一p40部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p40残基15的位置(例如，成熟鼠p40残基15)处具有丙氨酸取代的第二IL12 p40部分。

593.实施方案6至592中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含包含在对应于成熟人p40的残基18的位置(例如，成熟鼠p40残基18)处的氨基酸取代。

594.实施方案593的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是D18A、D18N或D18K。

595.实施方案6至594中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含包含在对应于成熟人p40的残基32的位置(例如，成熟鼠p40残基32)处的氨基酸取代。

596.实施方案595的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E32Q。

597.实施方案6至596中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基33的位置(例如，成熟鼠p40残基33)处的氨基酸取代。

598.实施方案597的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E33Q。

599.实施方案6至598中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基34的位置(例如，成熟鼠p40残基40)处的氨基酸取代。

600.实施方案599的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是D34N或D34K。

601.实施方案6至600中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基42的位置(例如，成熟鼠p40残基42)处的氨基酸取代。

602.实施方案601的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q42E。

603.实施方案6至602中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基43的位置(例如，成熟鼠p40残基43)处的氨基酸取代。

604.实施方案603的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是S43E或S43K。

605.实施方案6至604中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基45的位置(例如，成熟鼠p40残基45)处的氨基酸取代。

606.实施方案605的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E45Q。

607.实施方案6至606中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基56的位置(例如，成熟鼠p40残基56)处的氨基酸取代。

608.实施方案607的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q56E。

609.实施方案6至608中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基59的位置(例如，成熟鼠p40残基59)处的氨基酸取代。

610.实施方案609的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E59A、E59K或E59Q。

611.实施方案6至610中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基60的位置(例如，成熟鼠p40残基60)处的氨基酸取代。

612.实施方案611的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是F60A。

613.实施方案6至612中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基62的位置(例如，成熟鼠p40残基62)处的氨基酸取代。

614.实施方案613的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是D62N。

615.实施方案6至614中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基73的位置(例如，成熟鼠p40残基73)处的氨基酸取代。

616.实施方案615的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E73Q。

617.实施方案6至616中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基84的位置(例如，成熟鼠p40残基84)处的氨基酸取代。

618.实施方案617的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是K84A。

619.实施方案6至618中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基87的位置(例如，成熟鼠p40残基87)处的氨基酸取代。

620.实施方案619的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是D87N。

621.实施方案6至620中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基93的位置(例如，成熟鼠p40残基93)处的氨基酸取代。

622.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案621的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p40的残基93的位置(例如，成熟鼠p40残基93)处具有丙氨酸取代的第一p40部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p40残基93的位置(例如，成熟鼠p40残基93)处具有丙氨酸取代的第二p40部分。

623.实施方案6至622中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基96的位置(例如，成熟鼠p40残基96)处的氨基酸取代。

624.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案623的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p40的残基96的位置(例如，成熟鼠p40残基96)处具有丙氨酸取代的第一p40部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p40残基96的位置(例如，成熟鼠p40残基96)处具有丙氨酸取代的第二p40部分。

625.实施方案6至624中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基99的位置(例如，成熟鼠p40残基99)处的氨基酸取代。

626.实施方案625的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是K99A、K99E或K99Y。

627.实施方案6至626中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基100的位置处的氨基酸取代。

628.实施方案627的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E100Q。

629.实施方案6至628中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基104的位置(例如，成熟鼠p40残基101)处的氨基酸取代。

630.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案629的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p40的残基104的位置(例如，成熟鼠p40残基101)处具有丙氨酸取代的第一p40部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p40残基104的位置(例如，成熟鼠p40残基101)处具有丙氨酸取代的第二p40部分。

631.实施方案6至630中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基103的位置(例如，成熟鼠p40残基100)处的氨基酸取代。

632.实施方案631的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N103D、N103Q。

633.实施方案6至632中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基113的位置(例如，成熟鼠p40残基110)处的氨基酸取代。

634.实施方案633的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N113D、N113Q。

635.实施方案6至634中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基144的位置(例如，成熟鼠p40残基141)处的氨基酸取代。

636.实施方案635的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q144E。

637.实施方案6至636中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基159的位置(例如，成熟鼠p40残基156)处的氨基酸取代。

638.实施方案637的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是R159E。

639.实施方案6至638中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基161的位置(例如，成熟鼠p40残基158)处的氨基酸取代。

640.实施方案639的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是D161N。

641.实施方案6至640中任一个的IL12受体激动剂，其中在对应于成熟人p40的残基163的位置(例如，成熟鼠p40残基160)处的氨基酸取代。

642.实施方案641的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是K163E。

643.实施方案6至642中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基177的位置(例如，成熟鼠p40残基175)处的氨基酸取代。

644.实施方案643的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是C177S。

645.实施方案6至644中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基187的位置(例如，成熟鼠p40残基185)处的氨基酸取代。

646.实施方案645的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E187Q。

647.实施方案6至646中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基200的位置(例如，成熟鼠p40残基198)处的氨基酸取代。

648.实施方案647的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N200D或N200Q。

649.实施方案6至648中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基218的位置(例如，成熟鼠p40残基216)处的氨基酸取代。

650.实施方案649的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N218Q。

651.实施方案6至650中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基229的位置(例如，成熟鼠p40残基226)处的氨基酸取代。

652.实施方案651的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q229E。

653.实施方案6至652中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基235的位置(例如，成熟鼠p40残基232)处的氨基酸取代。

654.实施方案653的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E235Q。

655.实施方案6至654中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基246的位置(例如，成熟鼠p40残基243)处的氨基酸取代。

656.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案655的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p40的残基246的位置(例如，鼠p40残基243)处具有缬氨酸取代或苯丙氨酸取代的第一p40部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p40的残基246的位置(例如成熟鼠p40残基243)处具有缬氨酸取代或苯丙氨酸取代的第二p40部分。

657.实施方案6至656中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基252的位置(例如，成熟鼠p40残基249)处的氨基酸取代。

658.实施方案657的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是C252S。

659.实施方案6至658中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基256的位置(例如，成熟鼠p40残基253)处的氨基酸取代。

660.实施方案659的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q256N。

661.实施方案6至660中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基258的位置(例如，成熟鼠p40残基255)处的氨基酸取代。

662.实施方案661的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是K258E。

663.实施方案6至662中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基260的位置(例如，成熟鼠p40残基257)处的氨基酸取代。

664.实施方案663的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是K260E。

665.实施方案6至664中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基262的位置(例如，成熟鼠p40残基267)处的氨基酸取代。

666.实施方案665的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E262Q。

667.实施方案6至666中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基264的位置(例如，成熟鼠p40残基269)处的氨基酸取代。

668.实施方案667的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是K264E。

669.实施方案6至668中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基281的位置(例如，成熟鼠p40残基285)处的氨基酸取代。

670.实施方案669的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N281D或N281Q。

671.实施方案6至670中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基292的位置(例如，成熟鼠p40残基296)处的氨基酸取代。

672.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案671的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p40的残基292的位置(例如，鼠p40残基296)处具有苯丙氨酸取代的第一p40部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p40残基292的位置(例如，成熟鼠p40残基296)处具有苯丙氨酸取代的第二p40部分。

673.实施方案6至672中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第二p40部分(如果存在)包含在对应于成熟人p40的残基299的位置(例如，成熟鼠p40残基303)处的氨基酸取代。

674.实施方案673的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E299Q。

675.实施方案6至674中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分以及第二p35部分(如果存在)包含至少一个氨基酸取代。

676.实施方案6至675中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基21的位置(例如，成熟鼠p35残基17)处的氨基酸取代。

677.实施方案676的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N21D。

678.实施方案6至677中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基35的位置(例如，成熟鼠p35残基31)处的氨基酸取代。

679.实施方案678的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q35D。

680.实施方案6至679中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基38的位置(例如，成熟鼠p35残基34)处的氨基酸取代。

681.实施方案680的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E38Q。

682.实施方案6至681中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基55的位置(例如，成熟鼠p35残基51)处的氨基酸取代。

683.实施方案682的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是D55Q或D55K。

684.实施方案6至683中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基71的位置(例如，成熟鼠p35残基67)处的氨基酸取代。

685.实施方案684的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N71D。

686.实施方案6至685中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基75的位置(例如，成熟鼠p35残基7571)处的氨基酸取代。

687.实施方案686的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是L75A。

688.实施方案6至687中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基76的位置(例如，成熟鼠p35残基72)处的氨基酸取代。

689.实施方案688的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N76D。

690.实施方案6至689中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基79的位置(例如，成熟鼠p35残基75)处的氨基酸取代。

691.实施方案690的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E79Q。

692.实施方案6至691中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基85的位置(例如，成熟鼠p35残基81)处的氨基酸取代。

693.实施方案692的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N85D或N85Q。

694.实施方案6至693中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基89的位置(例如，成熟鼠p35残基85)处的氨基酸取代。

695.实施方案694的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是L89A。

696.实施方案6至695中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基96的位置(例如，成熟鼠p35残基92)处的氨基酸取代。

697.实施方案696的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是F96A。

698.实施方案6至697中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基97的位置(例如，成熟鼠p35残基93)处的氨基酸取代。

699.实施方案698的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是M97A。

700.实施方案6至699中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基124的位置(例如，成熟鼠p35残基120)处的氨基酸取代。

701.实施方案700的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是L124A。

702.实施方案6至701中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基125的位置(例如，成熟鼠p35残基121)处的氨基酸取代。

703.实施方案702的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是M125A。

704.实施方案6至703中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基130的位置(例如，成熟鼠p35残基126)处的氨基酸取代。

705.实施方案704的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q130E。

706.实施方案6至705中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基135的位置(例如，成熟鼠p35残基131)处的氨基酸取代。

707.实施方案706的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q135E。

708.实施方案6至707中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基136的位置(例如，成熟鼠p35残基132)处的氨基酸取代。

709.实施方案708的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是N136D。

710.实施方案6至709中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基143的位置(例如，成熟鼠p35残基139)处的氨基酸取代。

711.实施方案710的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是E143Q。

712.实施方案6至711中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基146的位置(例如，成熟鼠p35残基142)处的氨基酸取代。

713.实施方案712的IL12受体激动剂，其中氨基酸取代是Q146E。

714.实施方案6至713中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基167的位置(例如，成熟鼠p35残基163)处的氨基酸取代。

715.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案714的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p35的残基167的位置(例如，成熟鼠p35残基163)处具有丙氨酸取代、缬氨酸取代、精氨酸取代或谷氨酸取代的第一p35部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p35残基167的位置(例如，成熟鼠p35残基163)处具有丙氨酸取代、缬氨酸取代、精氨酸取代或谷氨酸取代的第二p35部分。

716.实施方案6至715中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基171的位置(例如，成熟鼠p35残基167)处的氨基酸取代。

717.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案716的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p35的残基171的位置(例如，鼠p35残基167)处具有丙氨酸取代、缬氨酸取代或谷氨酸取代的第一p35部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p35残基171的位置(例如，成熟鼠p35残基167)处具有丙氨酸取代、缬氨酸取代或谷氨酸取代的第二p35部分。

718.实施方案6至717中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p35部分和第二p35部分(如果存在)包含在对应于成熟人p35的残基189的位置(例如，成熟鼠p35残基185)处的氨基酸取代。

719.IL12受体激动剂，其任选地是根据实施方案718的IL12受体激动剂，其包含在对应于成熟人p35的残基189的位置(例如，成熟鼠p35残基185)处具有丙氨酸取代或赖氨酸取代的第一p35部分，并且其任选地进一步包含在对应于成熟人p35残基189的位置(例如，成熟鼠p35残基185)处具有丙氨酸取代或赖氨酸取代的第二p35部分。

720.实施方案6至719中任一个的IL12受体激动剂，其中第一多肽或第二多肽进一步包含第一IL12掩蔽部分。

721.实施方案720的IL12受体激动剂，其中第一IL12掩蔽部分是第一IL12受体部分。

722.实施方案721的IL12受体激动剂，其中第一IL12受体部分包含IL12Rβ1、其p40结合片段或其与IL12Rβ1或其p40结合片段具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的变体。

723.实施方案722的IL12受体激动剂，其中第一IL12受体部分包含IL12Rβ2、其p35结合片段或其与IL12Rβ2或其p35结合片段具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的变体。

724.实施方案720至723中任一个的IL12受体激动剂，其中第一多肽包含第一IL12受体部分并且第二多肽包含第二IL12受体部分。

725.实施方案724的IL12受体激动剂，其中第一IL12受体部分或第二IL12受体部分包含IL12Rβ1、其p40结合片段或其与IL12Rβ1、其p40结合片段具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的变体。

726.实施方案724的IL12受体激动剂，其中第一IL12受体部分或第二IL12受体部分包含IL12Rβ2、其p35结合片段或其与IL12Rβ2或其p35结合片段具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的变体。

727.实施方案724至726中任一个的IL12受体激动剂，其中第一IL12受体部分和第二IL12受体部分是相同的。

728.实施方案724至726中任一个的IL12受体激动剂，其中第一IL12受体部分和第二IL12受体部分不是相同的。

729.实施方案720至728中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一IL12受体部分位于第一多聚化部分与第一p40部分或第一p35部分之间。

730.实施方案720至728中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚部分，并且其中第一IL12受体部分相对于第一p40部分和第一p35部分位于第一多聚部分远端。

731.实施方案720至730中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第二IL12受体部分位于第二多聚化部分与第二p40部分或第二p35部分之间。

732.实施方案720至730中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第二IL12受体部分相对于第二p40和第二p35部分位于第二多聚化部分的远端。

733.实施方案720至732中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分或第一p35部分，与第一IL12受体部分经由第一受体部分接头连接。

734.实施方案724至733中任一个的IL12受体激动剂，其中第二p40部分或第二p35部分，与第二IL12受体部分经由第二受体部分接头连接。

735.实施方案733或734的IL12受体激动剂，其中第一受体部分接头和第二受体部分接头(当存在时)的长度为至少10个或至少15个氨基酸。

736.实施方案733至735中任一个的IL12受体激动剂，其中第一受体部分接头和第二受体部分接头(当存在时)是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

737.实施方案736的IL12受体激动剂，其中甘氨酸-丝氨酸接头包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

738.实施方案737的IL12受体激动剂，其中第一受体部分接头和第二受体部分接头的每个是氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体或包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体。

739.实施方案738的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

740.实施方案720至739中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一IL12受体部分和第一多聚化部分经由第一接头连接。

741.实施方案724至740中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第二IL12受体部分和第二多聚化部分经由第二接头连接。

742.实施方案740或实施方案741的IL12受体激动剂，其中第一接头和第二接头(当存在时)的长度为至少10个或至少15个氨基酸。

743.实施方案740至742中任一个的IL12受体激动剂，其中第一接头和第二接头(当存在时)是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

744.实施方案740至743中任一个的IL12受体激动剂，其中第一接头和第二接头(当存在时)包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

745.实施方案744的IL12受体激动剂，其中第一接头和第二接头的每个是氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体或包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体。

746.实施方案745的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

747.实施方案720的IL12受体激动剂，其中第一IL12掩蔽部分是IL12抗体片段。

748.实施方案747的IL12受体激动剂，其中IL12抗体片段为Fab、Fv、scFv或sdAb的形式。

749.实施方案747或实施方案748的IL12受体激动剂，其中IL12抗体片段是抗IL12抗体的抗原结合片段。

750.实施方案750的IL12受体激动剂，其中IL12抗体片段:

(a)包含选自以下的抗体的抗体片段：乌司奴单抗；布雷奴单抗；WO/2017/172771中所述的抗IL12抗体；WO/2012/094623中所述的抗IL12抗体；WO/2006/069036中所述的抗IL12抗体；WO/2009/068627中所述的抗IL12抗体；克隆B-T21(Diaclone)；MAB219(R&D系统)；MAB1510(R&D系统)；克隆C17.8(Bio X细胞)；克隆R1-5D9(Bio X细胞)；AP-MAB0853(ab80682)(abcam)；和ab9992(abcam)；或者

(b)与选自以下的抗IL12抗体竞争与IL12的结合和/或与其结合相同的表位：乌司奴单抗；布雷奴单抗；WO/2017/172771中所述的抗IL12抗体；WO/2012/094623中所述的抗IL12抗体；WO/2006/069036中所述的抗IL12抗体；WO/2009/068627中所述的抗IL12抗体；克隆B-T21(Diaclone)；MAB219(R&D系统)；MAB1510(R&D系统)；克隆C17.8(Bio X细胞)；克隆R1-5D9(Bio X细胞)；AP-MAB0853(ab80682)(abcam)；和ab9992(abcam)。

751.实施方案747至750中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中IL12抗体片段相对于第一p40部分和第一p35部分位于第一多聚化部分的远端。

752.实施方案751的IL12受体激动剂，其中第一p40部分或第一p35部分，与IL12抗体片段经由抗体片段接头连接。

753.实施方案747至752中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一p40部分和第一p35部分连接至第一多聚化部分，并且IL12抗体片段连接至第二多聚化部分。

754.实施方案753的IL12受体激动剂，其中第二多聚化部分和IL12抗体片段经由抗体片段接头连接。

755.实施方案752或实施方案754的IL12受体激动剂，其中抗体片段接头的长度为至少10个或至少15个氨基酸。

756.实施方案752、754和755中任一个的IL12受体激动剂，其中抗体片段接头是甘氨酸-丝氨酸接头或包含甘氨酸-丝氨酸接头。

757.实施方案756的IL12受体激动剂，其中甘氨酸-丝氨酸接头包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)。

758.实施方案757的IL12受体激动剂，其中抗体片段接头是氨基酸序列G₄S(SEQID NO:25)的多聚体或包含氨基酸序列G₄S(SEQ ID NO:25)的多聚体。

759.实施方案758的IL12受体激动剂，其中多聚体包含氨基酸序列G₄S(SEQ IDNO:25)的2、3、4、5、6个或更多个重复。

760.实施方案6至731中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一多聚化部分和第二多聚化部分经配置以二聚化在一起。

761.实施方案6至760中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一多聚化部分和第二多聚化部分，并且其中第一多聚化部分和第二多聚化部分各自是Fc结构域或包含Fc结构域。

762.实施方案761的IL12受体激动剂，其中Fc结构域是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc结构域。

763.实施方案761或实施方案762的IL12受体激动剂，其中Fc结构域具有降低的效应功能。

764.实施方案761至763中任一个的IL12受体激动剂，其中Fc结构域是IgG4 Fc结构域。

765.实施方案761至764中任一个的IL12受体激动剂，其中Fc结构域包含氨基酸序列ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:60)或其一部分。

766.实施方案6至765中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一靶向部分。

767.实施方案766的IL12受体激动剂，其包含第一多肽链上的第一靶向部分组分并且进一步包含第三靶向部分组分，该第三靶向部分组分经配置以与第一靶向部分组分缔合以形成第一靶向部分，其中第三靶向部分组分不是第一多肽或第二多肽的一部分。

768.实施方案6至767中任一个的IL12受体激动剂，其包含第二靶向部分。

769.实施方案768的IL12受体激动剂，其包含第二多肽链上的第二靶向部分组分并且进一步包含第四靶向部分组分，该第四靶向部分组分经配置以与第二靶向部分组分缔合以形成第二靶向部分，其中第四靶向部分组分不是第一多肽或第二多肽的一部分。

770.实施方案766至769中任一个的IL12受体，其中(a)第一靶向部分或第一靶向部分组分，如果存在于第一多肽链上，则位于第一多聚化部分的N末端，和/或(b)第二靶向部分或第二靶向部分组分，如果存在于第二多肽链上，则位于第二多聚化部分的N末端。

771.实施方案766至769的IL12受体，其中(a)第一靶向部分或第一靶向部分组分，如果存在于第一多肽链上，则位于第一多聚化部分的C末端，和/或(b)第二靶向部分或第二靶向部分组分，如果存在于第二多肽链上，则位于第二多聚化部分的C末端。

772.实施方案766至771中任一个的IL12受体激动剂，其包含第一靶向部分和/或第二靶向部分，并且其中第一靶向部分和/或第二靶向部分：

(a)结合至肿瘤相关抗原；

(b)结合至肿瘤微环境抗原；

(c)结合至肿瘤反应性淋巴细胞的细胞表面分子；

(d)结合至检查点抑制剂；

(e)结合至肽-MHC复合物；

(f)是肽-MHC复合物；

(g)结合至与自身免疫应答相关联或被自身免疫应答靶向的抗原；或

(h)独立地选自以上(a)至(g)。

773.实施方案768或769的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和第二靶向部分是相同的。

774.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分结合至肿瘤相关抗原。

775.实施方案774的IL12受体激动剂，其中肿瘤相关抗原是成纤维细胞活化蛋白(FAP)、腱糖蛋白-C(Tenascin-C)的A1结构域(TNC A1)、腱糖蛋白-C(Tenascin-C)的A2结构域(TNC A2)、纤连蛋白的额外结构域B(EDB)、黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)、MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结直肠相关抗原(CRC)-C017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、aml1、前列腺特异性抗原(PSA)或其免疫原性表位PSA-1、PSA-2、PSA-3、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、T细胞受体/CD3-ζ链、肿瘤抗原MAGE家族(例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、肿瘤抗原GAGE家族(例如GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、甲胎蛋白、E-钙粘蛋白、α-连环蛋白、β-连环蛋白和γ-连环蛋白、p120ctn、gp100 Pmel117、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性息肉病大肠杆菌蛋白(APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig-独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物诸如人乳头瘤病毒蛋白、肿瘤抗原Smad家族、Imp-1、P1A、EBV编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7、c-erbB-2、Her2、EGFR、IGF-1R、CD2(T细胞表面抗原)、CD3(与TCR相关联的异多聚体)、CD22(B细胞受体)、CD23(低结合亲和力IgE受体)、CD30(细胞因子受体)、CD33(骨髓细胞表面抗原)、CD40(肿瘤坏死因子受体)、IL-6R(IL6受体)、CD20、MCSP、PDGFβR(β-血小板衍生的生长因子受体)、ErbB2上皮细胞粘附分子(EpCAM)、EGFR变体III(EGFRvIII)、CD19、双唾液酸神经节苷脂GD2、导管上皮粘蛋白、gp36、TAG-72、神经胶质瘤相关抗原、β-人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白(AFP)、凝集素反应性AFP、甲状腺球蛋白、MN-CA IX、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2(AS)、肠羧基酯酶、mut hsp70-2、M-CSF、前列腺酶、前列腺酶特异性抗原(PSA)、PAP、LAGA-1a、p53、前列腺蛋白、PSMA、存活和端粒酶、前列腺-癌肿瘤抗原-1(PCTA-1)、ELF2M、中性粒细胞弹性蛋白酶、肝配蛋白B2、胰岛素生长因子(IGF1)-I、IGF-II、IGFI受体、5T4、ROR1、Nkp30、NKG2D、肿瘤基质抗原、纤连蛋白的额外结构域A(EDA)或额外结构域B(EDB)、或腱糖蛋白-C(tenascin-C)的A1结构域(TnC A1)。

776.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中肿瘤相关抗原是CD20。

777.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中肿瘤相关抗原是病毒抗原。

778.实施方案777的IL12受体激动剂，其中病毒抗原是Epstein-Barr病毒LMP-1、丙型肝炎病毒E2糖蛋白、HIV gp 160、或HIV gp 120、HPV E6、HPV E7、CMV早期膜抗原(EMA)或CMV晚期膜抗原(LMA)。

779.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分结合至肿瘤微环境抗原。

780.实施方案779的IL12受体激动剂，其中肿瘤微环境抗原是细胞外基质蛋白。

781.实施方案780的IL12受体激动剂，其中细胞外基质蛋白是粘结蛋白聚糖(syndecan)、乙酰肝素酶、整联蛋白、骨桥蛋白、link、钙粘蛋白、层粘连蛋白、层粘连蛋白型EGF、凝集素、纤连蛋白、notch、腱糖蛋白(tenascin)、胶原和基质蛋白。

782.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分结合至肿瘤淋巴细胞的细胞表面分子。

783.实施方案782的IL12受体激动剂，其中细胞表面分子是CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、LAG3、TIM3或B7-H3。

784.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中细胞表面分子是PD1。

785.实施方案784的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分是抗PD1抗体或其抗原结合片段。

786.实施方案785的IL12受体激动剂，其中抗PD1抗体或其抗原结合片段抑制PD1信号传导。

787.实施方案785的IL12受体激动剂，其中抗PD1抗体或其抗原结合片段不抑制PD1信号传导。

788.实施方案782的IL12受体激动剂，其中细胞表面分子是LAG3。

789.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分结合至检查点抑制剂。

790.实施方案789的IL12受体激动剂，其中检查点抑制剂是CTLA-4、PD1、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、VISTA、PSGL1或CHK2。

791.实施方案790的IL12受体激动剂，其中检查点抑制剂是PD1。

792.实施方案791的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分是抗PD1抗体或其抗原结合片段。

793.实施方案792的IL12受体激动剂，其中抗PD1抗体或其抗原结合片段抑制PD1信号传导。

794.实施方案792的IL12受体激动剂，其中抗PD1抗体或其抗原结合片段不抑制PD1信号传导。

795.实施方案790的IL12受体激动剂，其中检查点抑制剂是LAG3。

796.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分结合至MHC-肽复合物。

797.实施方案797的IL12受体激动剂，其中肽-MHC复合物中的肽包含肿瘤新抗原。

798.实施方案798的IL12受体激动剂，其中肿瘤新抗原是LCMV衍生的肽gp33-41、APF(126-134)、BALF(276-284)、CEA(571-579)、CMV pp65(495-503)、FLU-M1(58-66)、gp100(154-162)、gp100(209-217)、HBV核心(18-27)、Her2/neu(369-377；V2v9)；HPV E7(11-20)、HPV E7(11-19)、HPV E7(82-90)、KLK4(11-19)、LMP1(125-133)、MAG-A3(112-120)、NYESO1(157-165、C165A)、NYESO1(157-165、C165V)、p54 WT(264-272)、PAP-3(136-143)、PSMA(4-12)、PSMA(135-145)、生存素(96-014)、酪氨酸酶(369-377、371D)或WT1(126-134)。

799.实施方案796至798中任一个的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分包含具有互补决定区(“CDR”)的抗体或其抗原结合片段，该互补决定区包含：

(a)CDR-H1，其具有选自国际专利公开号WO 2019005897 A1的SEQ ID NO:4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364、380、396、412、428、444、460、476、492、508和524中任一个的氨基酸序列，它们通过引用并入本文；

(b)CDR-H2，其具有选自国际专利公开号WO 2019005897 A1的SEQ ID NO:6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366、382、414、430、446、462、478、494、510和526中任一个的氨基酸序列，它们通过引用并入本文；

(c)CDR-H3，其具有选自国际专利公开号WO 2019005897 A1的SEQ ID NO:8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368、384、400、416、432、448、464、480、496、512和528中任一个的氨基酸序列，它们通过引用并入本文；

(d)CDR-L1，其具有选自国际专利公开号WO 2019005897 A1的SEQ ID NO:12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、204、228、244、260、276、292、308、324、340、356、372、388、404、420、436、452、468、484、500、516和532中任一个的氨基酸序列，它们通过引用并入本文；

(e)CDR-L2，其具有选自国际专利公开号WO 2019005897 A1的SEQ ID NO:14、30、46、62、78、94、110、126、142、158，174、190、206、230、246、262、278、294、310、326、342、358、374、390、406、422、438、454、470、486、502、518和534中任一个的氨基酸序列，它们其通过引用并入本文；和

(f)CDR-L3，其具有选自国际专利公开号WO 2019005897 A1的SEQ ID NO:16、32、48、64、80、96、1、12、128、144,160、176、192、208、232、248、264、280、296、312、328、344、360、376、392、408、424、440、456、472、488、504、520和536中一个的氨基酸序列，它们通过引用并入本文。

800.实施方案799的IL12受体激动剂，其中抗体或抗原结合片段具有选自以下中任一个的VH-VL氨基酸序列：国际专利公开号WO 2019005897A1的SEQ ID NO:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/202、218/226、234/242、250/258、266/274、282/290、298/306、314/322、330/338、346/354、362/370、378/386、394/402、410/418、426/434、442/450、458/466、474/482、490/498、506/514和522/530，它们通过引用并入本文。

801.实施方案800的IL12受体激动剂，其中抗体或抗原结合片段具有选自以下中任一个的VH-VL氨基酸序列：国际专利公开号WO 2019005897A1的SEQ ID NO:2/10、34/42、82/90、194/202、282/290和506/514，它们通过引用并入本文。

802.实施方案772或实施方案773的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分结合至与自身免疫反应相关联或由自身免疫应答靶向的抗原。

803.实施方案802的IL12受体激动剂，其中肽衍生自麦醇溶蛋白、GAD 65、IA-2、胰岛素B链、醋酸格拉替雷(GA)、乙酰胆碱受体(AChR)、p205、胰岛素、促甲状腺激素、酪氨酸酶、TRP I或髓磷脂抗原。

804.实施方案803的IL12受体激动剂，其中肽衍生自IL-4R、IL-6R或DLL4。

805.实施方案767至804中任一个的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和第二靶向部分(如果存在)是抗体或其抗原结合片段。

806.实施方案805的IL12受体激动剂，其中靶向部分是Fab。

807.实施方案805的IL12受体激动剂，其中靶向部分是scFv。

808.实施方案767至804中任一个的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和第二靶向部分(如果存在)是肽-MHC复合物。

809.实施方案808的IL12受体激动剂，其中肽-MHC复合物结合至肿瘤淋巴细胞的T细胞受体。

810.实施方案808或实施方案809的IL12受体激动剂，其中肽-MHC复合物中的肽包含肿瘤新抗原。

811.实施方案810的IL12受体激动剂，其中肿瘤新抗原是LCMV衍生的肽gp33-41、APF(126-134)、BALF(276-284)、CEA(571-579)、CMV pp65(495-503)、FLU-M1(58-66)、gp100(154-162)、gp100(209-217)、HBV核心(18-27)、Her2/neu(369-377；V2v9)；HPV E7(11-20)、HPV E7(11-19)、HPV E7(82-90)、KLK4(11-19)、LMP1(125-133)、MAG-A3(112-120)、NYESO1(157-165、C165A)、NYESO1(157-165、C165V)、p54 WT(264-272)、PAP-3(136-143)、PSMA(4-12)、PSMA(135-145)、生存素(96-014)、酪氨酸酶(369-377、371D)或WT1(126-134)。

812.实施方案808的IL12受体激动剂，其中肽-MHC复合物中的肽包含病毒抗原。

813.实施方案812的IL12受体激动剂，其中病毒抗原是CMVpp65或HPV16E7。

814.实施方案808至813中任一个的IL12受体激动剂，其中肽-MHC复合物进一步包含β2微球蛋白或其片段。

815.实施方案814的IL12受体激动剂，其中肽MHC复合物包含I型MHC结构域。

816.实施方案815的IL12受体激动剂，其中肽MHC复合物以N末端至C末端方向包含MHC肽、接头、β2-微球蛋白结构域、接头和I型MHC结构域。

817.实施方案816的IL12受体激动剂，其中连接MHC肽和β2-微球蛋白结构域的接头包含氨基酸序列GCGGS(SEQ ID NO:47)。

818.实施方案808至813中任一个的IL12受体激动剂，其中肽-MHC复合物不包含β2微球蛋白或其片段。

819.实施方案818的IL12受体激动剂，其中肽MHC复合物包含II型MHC结构域。

820.实施方案6至819中任一个的IL12受体激动剂，其包含稳定化部分。

821.实施方案820的IL12受体激动剂，其中稳定化部分是人血清白蛋白、人血清白蛋白结合物、XTEN、PAS、碳水化合物、聚唾液酸、亲水聚合物或脂肪酸。

822.实施方案821的IL12受体激动剂，其中稳定化是人血清白蛋白结合物。

823.实施方案的IL12受体激动剂，其中人血清白蛋白结合物是Adnectin PKE、AlbudAb、或白蛋白结合结构域。

824.实施方案820的IL12受体激动剂，其中稳定化部分是亲水聚合物。

825.实施方案824的IL12受体激动剂，其中亲水聚合物是聚乙二醇(PEG)。

826.实施方案825的IL12受体激动剂，其中PEG具有范围为约7.5kDa至约80kDa的分子量。

827.实施方案826的IL12受体激动剂，其中PEG具有约30kDa至约60kDa的分子量，任选地其中分子量为约50kDa。

828.实施方案824至827中任一个的IL12受体激动剂，其中亲水聚合物附接至p40部分的IL12Rβ1结合表面。

829.实施方案824至828中任一个的IL12受体激动剂，其中亲水聚合物附接至p35部分的IL12Rβ2结合表面。

830.实施方案6至829中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第一p35部分、第二p40部分和第二p35部分(当存在时)、和/或IL12受体激动剂，与野生型IL12相比，具有50倍至1,000倍或1.5倍至10倍减弱的与人IL12受体复合物的结合。

831.实施方案6至829中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第一p35部分、第二p40部分和第二p35部分(当存在时)、和/或IL12受体激动剂，与野生型人IL12相比，具有最多100倍、最多500倍、最多1,000倍或最多5,000倍减弱的与人IL12受体复合物的结合。

832.实施方案6至831中任一个的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第一p35部分、第二p40部分和第二p35部分(当存在时)、和/或IL12受体激动剂，对肿瘤反应性淋巴细胞具有比外周淋巴细胞更高的细胞因子活性。

833.实施方案832的IL12受体激动剂，其中第一p40部分和第一p35部分、第二p40部分和第二p35部分(当存在时)、和/或IL12受体激动剂，对肿瘤反应性淋巴细胞具有比外周淋巴细胞至少5倍或至少10倍更高的细胞因子活性。

834.实施方案6至833中任一个的IL12受体激动剂，其具有至少1的治疗指数。

835.实施方案834的IL12受体激动剂，其具有至少2的治疗指数。

836.实施方案834的IL12受体激动剂，其具有至少5的治疗指数。

837.实施方案834的IL12受体激动剂，其具有至少10的治疗指数。

838.实施方案834的IL12受体激动剂，其具有至少20的治疗指数。

839.实施方案834的IL12受体激动剂，其具有至少50的治疗指数。

840.实施方案834至839中任一个的IL12受体激动剂，其具有最多500的治疗指数。

841.实施方案806至839中任一个的IL12受体激动剂，其具有最多250的治疗指数。

842.实施方案6至841中任一个的IL12受体激动剂，其具有约2的治疗指数。

843.实施方案6至841中任一个的IL12受体激动剂，其具有约10的治疗指数。

844.实施方案6至841中任一个的IL12受体激动剂，其具有约20的治疗指数。

845.实施方案6至841中任一个的IL12受体激动剂，其具有约50的治疗指数。

846.实施方案6至841中任一个的IL12受体激动剂，其具有约100的治疗指数。

847.实施方案6至841中任一个的IL12受体激动剂，其具有约200的治疗指数。

848.一个核酸或多个核酸，其编码实施方案1的p35部分、实施方案2的p40部分或实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂。

849.宿主细胞，其经工程化以表达实施方案1的p35部分、实施方案2的p40部分、实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂或实施方案848的一个或多个核酸。

850.产生实施方案1的p35部分、实施方案2的p40部分、实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂的方法，其包括培养实施方案849的宿主细胞并回收由其表达的p35部分、p40部分或IL12受体激动剂。

851.药物组合物，其包含实施方案1的p35部分、实施方案2的p40部分、实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂，以及赋形剂。

852.治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用实施方案1的p35部分、实施方案2的p40部分、实施方案6至847中的任一个的IL12受体激动剂或实施方案816的药物组合物。

853.靶向治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂，或包含根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂的药物组合物，其中该IL12受体激动剂包含一个或两个靶向部分，任选地其中该一个或两个靶向部分如实施方案766至819中任一个中所定义或如第6.5节所述。

854.局部递送IL12蛋白的方法，其包括向有此需要的受试者施用根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂，或包含根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂的药物组合物，其中该IL12受体激动剂包含一个或两个靶向部分，任选地其中该一个或两个靶向部分如实施方案766至819中任一个中所定义或如第6.5节所述。

855.向受试者施用具有减少的全身暴露和/或减少的全身毒性的IL12疗法的方法，其包括向受试者施用形式为以下的疗法：根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂，或包含根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂的药物组合物，其中该IL12受体激动剂包含(a)一个或两个靶向部分，任选地其中该一个或两个靶向部分如实施方案766至819中任一个中所定义或如第6.5节所述，和/或(b)通过突变和/或掩蔽(例如，通过例如如第6.4节所述的IL12受体或抗IL12抗体或其抗原结合部分)减弱的IL12部分。

856.在靶组织中局部诱导免疫应答的方法，包括向有此需要的受试者施用：根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂，或包含根据实施方案6至847中任一个的IL12受体激动剂的药物组合物，其中该IL12受体激动剂包含(a)一个或两个靶向部分，任选地其中该一个或两个靶向部分如实施方案766至819中任一个中所定义或如第6.5节所述，和/或(b)通过突变和/或掩蔽(例如，通过例如如第6.4节所述的IL12受体或抗IL12抗体或其抗原结合部分)减弱的IL12部分。

857.实施方案852至856中任一个的方法，其中施用是全身性的，任选地静脉内的。

858.实施方案852至856中任一个的方法，其中施用是皮下的。

859.实施方案852至858中任一个的方法，其进一步包括向受试者施用抗PD1抗体。

860.实施方案859的方法，其中抗PD1抗体是MDX-1106(纳武单抗)、MK-3475(派姆单抗)、MEDI-0680(AMP-514)、PDR001或BGB-108。

8.实施例

8.1.材料和方法

8.1.1.产生IL12受体激动剂

生成编码下表7至10中的IL12、IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白以及Fc对照的构建体。IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白包括不同配置的鼠或人IL12 p40和p35亚基、IgG4 Fc结构域和来自G₄S(SEQ ID NO:25)的不同重复的不同长度的接头。将来自鼠失活酪氨酸蛋白激酶跨膜受体ROR1(mROR1)的29氨基酸信号序列添加到构建体的N末端。所有IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白均表达为含有信号序列的前蛋白。信号序列通过胞内加工进行切割以产生成熟蛋白质。

通过瞬时转染(Thermo Fisher Scientific)在Expi293F^TM细胞中表达构建体。使用ProteinMaker系统(Protein BioSolutions，Gaithersburg，MD)，以及HiTrap^TM ProteinG HP或者MabSelect SuRe pcc柱(Cytiva)纯化Expi293F上清液中的蛋白质。单步洗脱后，将抗体中和、透析到含5％甘油的磷酸盐缓冲盐水(PBS)的最终缓冲液中、等分并储存在-80℃。

IL12 p35和p40中的比对和所选的突变蛋白位置分别描绘于图6和7中。使用MacVector生成比对。图8中提供了IL12 p35与其他代表性IL6家族细胞因子的序列比对。图9描绘了IL12的3维结构，包括涉及p35与IL12Rβ2的相互作用的潜在残基、p35/p40异二聚体界面处的残基、以及位于p40的D1或D1-D2连接处的表面暴露的疏水或带电荷的残基。

8.1.2.STAT3报告基因测定

使用STAT3驱动的基于萤光素酶的报告基因测定来评估IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白在CTLL-2中激活STAT3介导的转录的能力，此前报道其对mIL12做出应答(Khatri等人,2007,J Immunol Methods.326(1-2):41-53)。

8.1.2.1.报告CTLL-2细胞的工程化

CTLL2(ATCC，#TIB-214)在存在5μg/mL聚凝胺(Millipore TR-1003-G)的条件下，用编码STAT3驱动的萤光素酶报告基因((Cignal STAT3-Luc lenti报告基因,SABiosciences,CLS-6028L)的慢病毒载体进行转导，然后选择并维持在以下中：RPMI-1640+10％胎牛血清(FBS)+L-谷氨酰胺/青霉素-链霉素+10mM HEPES+1mM丙酮酸钠+10％含有ConA的大鼠T细胞培养补充剂(Corning，354115)+3μg/mL嘌呤霉素，所得细胞系更名为CTLL2/STAT3-Luc。

8.1.2.2.IL12刺激报告细胞

在此实验中，经由重组IL12、IL12-Fc融合蛋白或IL12突变蛋白-Fc融合蛋白刺激经工程化的报告细胞。该细胞因子通过与IL12受体β1(IL12Rβ1)和IL12受体β2(IL12Rβ2)的结合，激活信号传导复合物并诱导STAT3磷酸化。STAT3磷酸化导致STAT3应答元件的转录活性增强，这驱动报告基因萤光素酶的产生。

8.1.2.3.萤光素酶测定设置

使用补充有10％ FBS和P/S/G的RPMI1640作为测定培养基来制备细胞悬浮液和融合蛋白稀释液。

测定前一天，将CTLL2/Stat3-Luc细胞旋转沉降并以3x10^5个细胞/mL重悬于RPMI-1640+10％胎牛血清(FBS)+L-谷氨酰胺/青霉素-链霉素+10mM HEPES+1mM丙酮酸钠中。测定当天，将细胞离心并以5x10⁵个/mL重悬于测定培养基中。IL12、IL12-Fc融合蛋白、IL12突变蛋白-Fc融合蛋白和对照在11点稀释(图上所示范围)后1:5稀释，其中第12点不含重组蛋白。将2.5x10⁴个报告细胞添加到96孔白色平底板中，并与系列稀释的IL12、IL12-Fc融合蛋白、IL12突变蛋白-Fc融合蛋白构建体或对照蛋白进行孵育。将板在37℃/5％ CO₂下孵育5小时30分钟，然后添加100μL ONE-Glo^TM(Promega)试剂以裂解细胞并检测萤光素酶活性。发射光在多标记板读数器Envision(PerkinElmer)上以相对光单位(RLU)捕获。所有系列稀释液均一式两份进行测试。

为了确定EC50值，排除了导致钩状效应(hook effect)的点(其中高于最大信号的蛋白质浓度导致信号的剂量依赖性下降)。EC50值使用GraphPad Prism^TM软件通过12点剂量-应答曲线上的四参数逻辑方程确定，其中第12个稀释点不含有重组蛋白。特定浓度下的诱导倍数作为存在固定量蛋白质的条件下的平均信号除以不存在该蛋白质的条件下的平均信号的比率。最大诱导计算为蛋白质剂量范围内的最大平均信号除以不存在该蛋白质的条件下的平均信号的比率

8.1.3.IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白在MC38同基因肿瘤模型中的活性

将3×10⁵个MC38肿瘤细胞皮下植入到8-10周龄雌性C57BL/6小鼠(JacksonLaboratory)的右后胁中。

当肿瘤大小达到75-85mm³时，将小鼠随机分组，并用不同的IL12-Fc融合蛋白腹膜内治疗。每2天一次腹膜内施用治疗，总共5剂(研究#1，参见图21)或每3天一次腹膜内施用治疗，总共3剂(研究#2，参见图25A)。研究#1中的一组小鼠还每周两次接受腹膜内抗mPD1注射，持续两周。每半周使用数字卡尺测量肿瘤，并将肿瘤大小计算为长度x宽度²/2。进行测量直到对照组的平均肿瘤大小达到2250mm³，或直到任何组中的任何小鼠由于溃疡或体重减轻超过20％而需要进行安乐死。观察延长至第71天(最后一次治疗后7.5周)以确定无肿瘤小鼠的频率。

8.1.4.通过与多角度光散射检测器偶联的尺寸排阻色谱法(SEC-MALS)测定IL12-Fc融合蛋白的寡聚状态

采用与多角度光散射(MALS)偶联的尺寸排阻超高效液相色谱(SEC)来评估不同融合蛋白的寡聚状态。SEC分析在Waters Acquity UPLC H-Class系统上进行。将10μg的每个蛋白质样品注射到Acquity BEH SEC柱(1.7μm,4.6x300 mm)中。流速设定为0.3ml/min。流动相缓冲液含有10mM磷酸钠、500mM NaCl，pH 7.0。使用Wyatt Optilab T-Rex和Wyatt-uDawn Treos LSDetector监测280nm处的UV吸光度、光散射和折射率变化。

8.1.5.原代T细胞结合测定

从C57BL/6小鼠中收获脾脏并手动解离。通过在以下条件下培养48小时来刺激脾细胞：在RPMI+10％FBS+2mM L-谷氨酰胺/Pen/Strep中，在存在抗CD3和抗CD28激活珠(Thermo/11456D)的条件下，以1:3(珠子:脾细胞)比率，并且在存在30U/mL人IL-2(阿地白介素)的条件下。去除珠子，然后用活力标志物(Invitrogen/L34976)在PBS中以1:500对细胞进行15分钟室温染色，将其洗涤，然后用抗CD90.2(BD/563008)、抗CD8(BD/563786)和抗CD25(BD/553072)在冰上染色30分钟。将细胞洗涤一次，然后将每孔200,000个细胞铺板到96孔板中，并在冰上染色指示浓度的测试IL12-Fc融合蛋白或变体分子持续2小时。将细胞洗涤两次，然后使用ahuFC抗体(Jackson Immuno109-136-170)来染色Fc部分。使用BDLSRFortessa^TMX-20仪器获取数据。数据图代表来自CD25+、CD8+CD90.2+T细胞的ahuFC信号的几何平均荧光强度(MFI)。

8.1.6.来自C57BL/6小鼠的原代T细胞的pSTAT4测定

从C57BL/6小鼠中收获脾脏并手动解离。通过在以下条件下培养48小时来刺激脾细胞：在RPMI+10％FBS+2mM L-谷氨酰胺/Pen/Strep中，在存在aCD3和aCD28激活珠(Thermo/11456D)条件下，以1:3(珠子:脾细胞)比率，并且在存在30U/mL人IL-2(阿地白介素)的条件下。去除珠子，然后用活力标志物(Invitrogen/L34976)在PBS中以1:500对细胞进行15分钟室温染色，将其洗涤。将细胞以每孔500,000个细胞铺板在96孔板中，然后用指示浓度的IL12-Fc融合蛋白或IL12-Fc变体蛋白在37℃下刺激20分钟，然后用Cytofix缓冲液(BD/554655)在37℃固定12分钟，然后用预冷的Perm Buffer III(BD/558050)在冰上透化细胞15分钟并洗涤2次。然后将细胞用aCD90.2(BD/563008)、aCD8(BD/563786)、aCD25(BD/553072)和pSTAT4(BD/558137)在冰上染色30分钟。在使用BD LSRFortessa^TMX-20仪器获取数据之前，将细胞洗涤两次。数据图代表来自CD25+、CD8+CD90.2+T细胞的pSTAT4信号的几何平均荧光强度(MFI)。

8.1.7.NK92报告基因测定

使用STAT3驱动的基于萤光素酶的报告基因测定来评估IL12-Fc融合蛋白和IL12-IL12R-Fc融合蛋白在CTLL-2中激活STAT3介导的转录的能力。

8.1.7.1.报告NK92细胞的工程化

将人自然杀伤细胞系NK92用信号转导子和转录激活子3(STAT3)应答元件驱动的萤光素酶报告构建体转导，并维持在不含核苷的α最小必需培养基+2mM L-谷氨酰胺/Pen/Strep+1.5g/L碳酸氢钠+12.5％马血清+12.5％ FBS+0.2mM肌醇+0.1mM 2-巯基乙醇+0.02mM叶酸+200U/mL重组hIL-2+1mg/mL嘌呤霉素中。鉴定出对IL12具有高应答性的单细胞克隆，并将其重命名为NK92/STAT3-Luc cl.7F7，并用于如上所述的测定。

工程化NK92/STAT3-Luc cl.7F7以稳定表达人PD1(登录号NP_005009.2的氨基酸M1-L288，其具有2QèE突变)，并在补充有0.5mg/mL G418的培养基中选择细胞。细胞通过流式细胞术验证并重命名为NK92/STAT3-Luc cl.7F7/hPD1。

8.1.7.2.萤光素酶测定设置

测定前一天，将NK92/STAT3-Luc和/或NK92/STAT3-Luc cl.7F7细胞旋转沉降并以5x10⁵个细胞/mL重悬于不含核苷的α最小必需培养基+2mM L-谷氨酰胺/Pen/Strep+1.5g/L碳酸氢钠+12.5％马血清+12.5％ FBS+0.2mM肌醇+0.1mM 2-巯基乙醇+0.02mM叶酸中。测定当天，将细胞离心并以5x10⁵个/mL重悬于测定培养基中。IL12、IL12-Fc融合蛋白或IL12-IL12R-Fc融合蛋白和对照按照9点稀释范围(重组IL12的范围为10nM至5.12fM，并且IL12-Fc融合蛋白或IL12-IL12R-Fc融合蛋白的范围为50nM至25.6fM)1:5稀释，其中第10个点不含有重组蛋白。将2.5x10⁵个报告细胞添加到96孔白色平底板中，并与系列稀释的IL12、IL12-Fc融合蛋白、IL12-IL12R-Fc融合蛋白构建体或对照蛋白进行孵育。将板在37℃/5％CO2下孵育5小时，然后添加100μL ONE-Glo^TM(Promega)试剂以裂解细胞并检测萤光素酶活性。发射光在多标记板读数器Envision(PerkinElmer)上以相对光单位(RLU)捕获。所有系列稀释液均一式两份进行测试。使用GraphPad Prism^TM软件通过10点剂量-应答曲线上的四参数逻辑方程确定抗体的EC₅₀值。

8.1.8.来自PD-1xLAG3敲入小鼠的原代T细胞的pSTAT4测定

从PD-1xLAG3敲入小鼠(DOI:10.1158/1535-7163.MCT-18-1376)收获脾脏并手动解离。通过在以下条件下培养48小时来刺激脾细胞：在RPMI+10％FBS+2mM L-谷氨酰胺/Pen/Strep中，在存在抗CD3和抗CD28激活珠(Thermo/11456D)的条件下，以1:3(珠子:脾细胞)的比率，并且存在30U/mL人IL-2(阿地白介素)的条件下。去除珠子，然后用活力标志物(Invitrogen/L34976)在PBS中以1:500对细胞进行15分钟室温染色，将其洗涤。将细胞以每孔200,000个细胞铺板在96孔板中，然后用Fc-IL12或Fc-IL12变体蛋白在37℃下刺激20分钟，然后用Cytofix缓冲液(BD/554655)在37℃固定12分钟。然后用预冷的Perm Buffer III(BD/558050)在冰上透化细胞15分钟并洗涤2次。然后将细胞用抗CD90.2(BD/563008)、抗CD8(BD/563786)、抗CD25(BD/553072)和pSTAT4(BD/558137)在冰上染色30分钟。在使用BDLSRFortessa^TMX-20仪器获取数据之前，将细胞洗涤两次。数据图代表来自CD25+、CD8+CD90.2+T细胞的pSTAT4信号的几何平均荧光强度(MFI)。

8.1.9.经工程化的HT-2报告细胞测定

用STAT3驱动的萤光素酶报告构建体转导小鼠淋巴母细胞克隆细胞系HT-2克隆A5E，并将其维持在RPMI-1640+10％ FBS+10mM HEPES+1mM丙酮酸钠+50mMβ-巯基乙醇+P/S/G+200IU/mL阿地白介素+1mg/mL嘌呤霉素。鉴定出对IL12具有高应答性的单细胞克隆，并将其重命名为HT-2/STAT3-Luc cl.94。

经由重组IL12或者Fc-IL12融合蛋白(包括包含IL12抗体片段的那些)刺激经工程化的HT-2报告细胞。功能性IL12受体通过IL12R亚基(IL12Rb1和IL12Rb2)的差异化组装形成。通过IL12R的对细胞因子的结合导致STAT1/3/4的活化，这驱动经工程化的细胞系中萤光素酶的产生。

8.1.9.1.测定设置

使用补充有10％胎牛血清(FBS)和青霉素/链霉素/L-谷氨酰胺的RPMI-1640作为测定培养基来制备细胞悬浮液和抗体稀释液。筛选前一天，将经工程化的报告细胞旋转并以3x10⁵个细胞/mL重悬于不含IL2的同源培养基中。在测定当天，将细胞离心，重悬于测定培养基中，以2.5x10⁴个报告细胞/孔铺板在96孔白色平底板中，并与在11点滴定范围内连续稀释(1:5)的蛋白质孵育，其中第12点不含有重组蛋白。将板在37℃、5％ CO₂下孵育5小时，然后将100mL ONE-Glo^TM(Promega)试剂添加到孔中以裂解细胞并检测萤光素酶活性。发射光在多标记板读数器Envision(PerkinElmer)上以RLU进行测量。使用GraphPad Prism^TM软件通过12点剂量-应答曲线上的四参数逻辑方程确定抗体的EC₅₀值。

8.2.实施例1：IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的克隆和表达

8.2.1.概述

编码各种小鼠或人p40、p35、各种接头(G₄S(SEQ ID NO:25))长度和IgG4Fc结构域的DNA片段，其具有或不具有形成旋钮的突变(T366W，EU编号)、形成孔的突变(T366S、L368A、Y407V，EU编号)和星形突变(H435R、Y436F，EU编号)，由Integrated DNATechnologies,Inc.(San Diego,California)和Geneart/Thermo Fisher Scientific(Regensburg,Germany)合成

通过以下来产生用于单个链的哺乳动物表达载体：NEBuilder HiFi DNA组装试剂盒(New England BioLabs Inc.)或者限制性消化，然后按照New England BioLabs Inc.提供的标准分子克隆方案进行连接。将DNA作为单个质粒、重链和轻链对，或作为用于形成旋钮的突变(T366W,EU编号)、形成孔的突变(T366S、L368A、Y407V,EU编号)和星形突变(H435R、Y436F,EU编号)的对按照制造商的方案转染到Expi293F细胞(ThermoFisherScientific)中。收获50ml细胞培养物上清液并经由HiTrap^TM Protein G HP或MabSelectSuRe pcc柱(Cytiva)进行纯化。

8.2.2.结果

融合蛋白的取向(N末端与C末端Fc融合物)影响表达IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的能力，以及它们的正确组装(例如，以最小聚集的组装)。

图10A和10B显示，各种IL12突变蛋白-Fc融合蛋白可以体外表达。然而，在某些情况下，所表达的融合蛋白形成高分子量种类，这表明蛋白质聚集。

单价IL12-Fc融合蛋白可表达至不同程度和正确组装的种类(参见图10A和图11-13以及表11)。相对于IL12(p35xp40)-Fc的N末端mIL12取向，Fc-IL12(p35xp40)的C末端mIL12取向降低了融合蛋白的终浓度并减少了正确组装的种类(参见表11以及图11和12，其中图12显示检测出除了预期二聚体之外的单体和三聚寡聚体)。N末端取向的二硫键去除引起共价结合的高分子量物质的减少(参见图10A)。

所有二价IL12-Fc融合蛋白均可表达至不同程度和纯度(参见图10B和图14-18，以及表12和13)。通常，具有p35-p40的mIL12取向的mIL12-Fc融合蛋白更难以表达(参见图10B和表12)，并且表现出最低的纯度(参见图14、15、16和17以及表12)。二硫键去除并没有很大程度上影响p35-p40表达。在一些情况下，二硫化物去除似乎减少了共价高分子量种类(参见图10B)。二价IL12(p35-p40)N(泳道5)末端和C(泳道7)末端Fc融合物两者，很大程度上表达为共价高分子量种类，而二价IL12^*(p35^*-p40^*)N(泳道11)末端和C(泳道13)末端Fc融合物在非还原变性凝胶上增加了预期分子量的种类的比例(图10B)。

8.3.实施例2：STAT3报告测定中IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的活性

重组IL12、IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白刺激IL12受体的能力在基于STAT3报告细胞的生物测定中进行评估，如第8.1.2节中所述。

8.3.1.结果

活化曲线如图19、20A和20B中所示。CTLL-2/STAT3-Luc报告细胞与小鼠IL12的孵育诱导了萤光素酶活性。CTLL-2/STAT3-Luc细胞与所述单价、二价和去除二硫键的IL12-Fc融合蛋白的孵育也诱导了萤光素酶活性(图19)。表13提供了图19的IL12-Fc融合蛋白的EC₅₀和最大STAT3-Luc活性。图20A显示来自额外的二价IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的萤光素酶活性。表14提供了图20A的IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的EC₅₀和最大STAT3-Luc活性。图20B显示来自额外的二价IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的萤光素酶活性。表15提供了图20B的IL12-Fc融合蛋白的EC₅₀和最大STAT3-Luc活性。

单价mIL12 N末端Fc融合物很大程度上保留了mIL12的活性(图19)。在二价Fc融合物中，p40-p35 mIL12取向，无论N末端还是C末端，都显示出比重组mIL12更低的最大活性(图19)。消除p40和p35之间的二硫键(即去除二硫键)具有最小的对活性的效应(图19)。

8.4.实施例3：IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的抗肿瘤活性

评估了MC38肿瘤模型中IL12-Fc融合蛋白和IL12突变蛋白-Fc融合蛋白的活性。如第8.1.3节中所述，将MC38肿瘤细胞植入到C57BL/6小鼠中。对于图21-24，一旦肿瘤在第8天已经达到85mm³的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝6/组)中，并用hIgG4s同种型对照、单价IL12(p35xp40)-Fc融合蛋白、或4种二价IL12-Fc融合蛋白之一进行腹膜内(IP)给药。结果如图22-24中所示。

参考图25A和25B，一旦肿瘤在第9天已经达到75mm³的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝5-6/组)中，并用hIgG4s同种型对照、二价Fc-p40-p35或二价测试突变蛋白融合蛋白每3天一次进行给药，共3剂。

8.4.1.结果

图22和23A-23F显示了测试融合蛋白对肿瘤体积的效应。每个测量代表n＝6只/组+/-SEM的平均值。单价IL12(p35xp40)-Fc、二价IL12(p40-p35)-Fc、二价IL12(p40-p35)-Fc与αPD1组合、以及二价Fc-IL12(p40-p35)在测试剂量下均表现出抗肿瘤功效和肿瘤生长抑制。个体肿瘤生长曲线(图23A-F)表现了研究的结束时无肿瘤小鼠的比例，以及研究期间具有>20％的体重减轻并进行安乐死的小鼠的比例。用2μg的单价：IL12(p35xp40)-Fc进行的治疗对肿瘤消退有效，但导致4/6小鼠具有>20％的体重减轻，这证明了实质上的毒性。2μg的二价：IL12(p40-p35)-Fc导致肿瘤消退，其中没有小鼠具有>20％的体重减轻，但3/6的肿瘤复发。2μg的二价：IL12(p40-p35)-Fc和100μg的aPD-1的组合导致增强的抗肿瘤功效，其中5/6的小鼠无肿瘤。10μg的二价：IL12(p40-p35)-Fc导致稳健的肿瘤控制，但导致3/6的小鼠具有>20％的体重减轻，这证明了实质上的毒性。2μg的二价：Fc-IL12(p40-p35)导致5/6的小鼠无肿瘤，其中没有小鼠具有>20％的体重减轻。

图24显示了测试融合蛋白对体重的效应。将体重减轻用作毒性的量度。2μg的IL12(p40-p35)-Fc导致最小的体重减轻，2μg的并且二价：Fc-IL12(p40-p35)导致低水平的体重减轻。与单独的2μg的二价：IL12(p40-p35)-Fc相比，2μg的二价：IL12(p40-p35)-Fc和100μg的aPD-1的组合导致更严重的体重减轻。与单独的2μg的二价：IL12(p40-p35)-Fc相比，2μg的单价：IL12(p35xp40)-Fc和10μg的二价：IL12(p40-p35)-Fc导致更严重的体重减轻。

图25A和25B显示了测试突变蛋白对肿瘤体积和体重减轻的效应。每3天IP施用一次测试突变蛋白3剂。二价：Fc-IL12(突变蛋白1)(20μg)和二价：Fc-IL12(突变蛋白8)(20μg)突变蛋白维持了抗肿瘤功效和肿瘤生长抑制。与匹配剂量的二价：Fc-IL12(突变蛋白1)(20μg)或减少剂量的野生型二价：Fc-IL12(p40-p35)(10μg)相比，二价：Fc-IL12(突变蛋白8)(20μg)减少了体重减轻。

8.5.实施例4：掩蔽部分对IL12-Fc融合蛋白的效应

8.5.1.原代T细胞结合测定

如图26A中可观察到的，与Fc-IL12(p40-p35)对照相比，Fc-IL12(突变蛋白1)和Fc-IL12(突变蛋白4)在与活化的原代小鼠T细胞的结合中没有显示出重大差异。Fc-IL12(突变蛋白16)和Fc-IL12(突变蛋白15)显示出减少的与活化的原代小鼠T细胞的结合。

如图26B中可观察到的，与Fc-p40-p35 x Fc对照相比，Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)在与活化的原代小鼠T细胞的结合中没有显示出重大差异，而Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc和Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ1(D1)具有减少的与活化的原代小鼠T细胞的结合。这些结果表明，IL12Rβ1亚基对于将IL12募集到表达该受体复合物的细胞来说是关键的。

在活化的原代小鼠T细胞中，与Fc-IL12(p40-p35)对照相比，Fc-IL12(突变蛋白1)显示出最小地降低的pSTAT4活性(图27A)。Fc-IL12(突变蛋白4)没有可检测出的pSTAT4活性(图27A)。Fc-IL12(突变蛋白16)和Fc-IL12(突变蛋白15)显示出减少的pSTAT4活性(图27A)。与Fc-p40-p35×Fc相比，Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)、Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35x Fc和Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ1(D1)在活化的原代小鼠T细胞中具有减少的pSTAT4活性(图27B)。

8.5.1.1.相比任一单独的掩蔽，组合的IL12Rβ1受体和IL12Rβ2受体掩蔽的Fc-IL12在原代小鼠T细胞上具有进一步降低的活性

在活化的原代小鼠T细胞中，与未掩蔽的单价对照Fc-p40-p35 x Fc相比，Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc和Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)具有降低的对pSTAT4活性的效力(图30)。在与Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)相同的分子中的IL12Rβ1(D1)掩蔽和IL12Rβ2(D1)掩蔽两者的组合，导致与任一单独的掩蔽相比的进一步减弱(图30)。

8.5.2.经工程化的NK92报告测定

经由重组IL12、IL12-Fc融合蛋白或IL12-IL12R-Fc融合蛋白来刺激经工程化的报告细胞。该细胞因子通过与IL12受体β1(IL12Rβ1)和IL12受体β2(IL12Rβ2)的结合，激活了信号传导复合物并诱导STAT3磷酸化。STAT3磷酸化导致了STAT3应答元件的转录活性增强，这驱动报告基因萤光素酶的产生。与未掩蔽的二价对照Fc-IL12(p40-p35)相比，二价Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35具有降低的STAT3生物活性效力(图28)。与未掩蔽的单价对照Fc-p40-p35xFc相比，Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc、Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ1(D1)和Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)都具有降低的STAT3生物活性的效力(图28)。Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc是本实验中所测试的最减弱的分子。

与未掩蔽的单价对照Fc-p40-p35 x Fc相比，Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35xFc和Fc-p40-p35xFc-IL12Rβ2(D1)具有降低的STAT3生物活性效力(图29)。在与Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)相同的分子中的IL12Rβ1(D1)掩蔽和IL12Rβ2(D1)掩蔽两者的组合，导致与任一单独的掩蔽相比的进一步减弱(图29)。

8.5.2.1.与单独的IL12Rb1(D1)相比，IL12Rb1(D1&D2)不会进一步减弱IL12，并且与单独的IL12Rb2(D1)相比，IL12Rb2(D1&D2)不会进一步减弱IL12

经由重组IL12、IL12-Fc融合蛋白或IL12-IL12R-Fc融合蛋白来刺激经工程化的报告细胞。与未掩蔽的Fc-p40-p35 x Fc对照相比，Fc-p40-p35xFc-IL12Rβ1(D1)具有减弱的STAT3生物活性(图31)。与如Fc-p40-p35xFc-IL12Rβ1(D1)中的单独的IL12Rβ1结构域1(D1)相比，如Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ1(D1-2)中的IL12Rβ1结构域2(D2)的添加不会导致进一步减弱(图31)。与未掩蔽的Fc-p40-p35 x Fc对照相比，Fc-p40-p35xFc-IL12Rβ2(D1)具有减弱的STAT3生物活性(图31)。与如Fc-p40-p35xFc-IL12Rβ2(D1)中的单独的IL12Rβ2结构域1(D1)相比，如Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1-2)中的IL12Rβ2结构域2(D2)的添加不会导致进一步减弱(图31)。

8.5.2.2.与非靶向对照构建体相比，靶向mAb的IL12变体在表达靶标的细胞上具有增强的pSTAT3活性

经由重组IL12、抗hCD20-IL12融合蛋白或者抗hPD1-IL12融合蛋白来刺激经工程化以表达hPD-1的报告细胞。与重组mIL12和未掩蔽的Fc-p40-p35 x Fc对照相比，非靶向抗hCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>和抗hCD20-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>在过表达hPD1的工程化NK92报告细胞上具有减弱的STAT3生物活性(图32)。与抗hCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>相比，抗hPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>具有增加的STAT3活性效力，并且与抗-hCD20-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>相比，抗hPD1-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>具有增加的STAT3活性效力，这证明靶标增强的STAT3活性(图32)。

8.5.2.3.基于mAb的掩蔽减弱人NK92细胞上的IL12活性

经由重组IL12、IL12-Fc融合蛋白或IL12抗体片段掩蔽的Fc融合蛋白来刺激经工程化的报告细胞。与重组mIL12或未掩蔽的对照Fc-p40-p35 x Fc相比，Fc-p40-p35 x Fc-scFv#A(VL-VH)、Fc-p40-p35 x Fc-scFv#A(VH-VL)、Fc-p40-p35 x Fc-Fab#A和Fc-p40-p35x scFv#B(VL-VH)都具有降低的STAT3生物活性效力(图33)。与Fc-p40-p35 x scFv#B(VL-VH)相比，Fc-p40-p35 x Fc-scFv#A(VL-VH)具有进一步降低的STAT3生物活性效力(图33)。

8.5.3.HT-2报告测定-基于IL12抗体片段的掩蔽减弱小鼠HT-2细胞上的IL12活性

经由重组IL12、IL12-Fc融合蛋白或基于IL12-mAb的掩蔽-Fc融合蛋白来刺激经工程化的报告细胞。与重组mIL12或未掩蔽的对照Fc-p40-p35 x Fc相比，Fc-p40-p35 x Fc-scFv#A(VL-VH)、Fc-p40-p35 x Fc-scFv#A(VH-VL)、Fc-p40-p35 x Fc-Fab#A和Fc-p40-p35x scFv#B(VL-VH)都具有降低的STAT3生物活性效力(图34)。与Fc-p40-p35 x scFv#B(VL-VH)相比，Fc-p40-p35 x Fc-scFv#A(VL-VH)具有进一步降低的STAT3生物活性效力(图34)。

8.6.实施例5：受体掩蔽的Fc-IL12具有减弱的生物活性和降低的体内毒性

参考图35A和35B，评估了MC38肿瘤模型中受体掩蔽的Fc-IL12融合蛋白的抗肿瘤活性。将3×10⁵个MC38肿瘤细胞皮下植入C57BL/6小鼠的右胁。一旦肿瘤在第10天已经达到100mm3的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝6-7只/组)中，并在第10天和第13天用hIgG4s同种型对照或10微克Fc-p40-p35 x Fc、Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc或Fc-p40-p35 xFc-IL12Rβ2(D1)进行腹膜内(IP)给药。每个肿瘤测量代表平均值+/-SEM。与同种型组相比，Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc和Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)两者均导致肿瘤生长抑制。Fc-p40-p35 x Fc测量仅在直到第16天才进行，此时来自该组的小鼠由于>20％的体重减轻而进行安乐死。

图35C表现了图35A和35B中的实验期间体重的百分比变化。与Fc-p40-p35 x Fc相比，Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc或Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)导致降低的体重减轻。

8.7.实施例6：靶向PD1的受体掩蔽的IL12构建体对抗肿瘤功效和毒性的效应

图36A和36B描绘了MC38肿瘤模型中靶向PD1的受体掩蔽的IL12融合蛋白的抗肿瘤活性。将3×10⁵个MC38肿瘤细胞皮下植入PD-1xLAG3敲入小鼠(doi:10.1158/1535-7163.MCT-16-0665)的右胁。一旦肿瘤在第9天已经达到115mm3的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝6-7只/组)中，并在第9、12和16天用hIgG4s同种型对照或指示剂量的靶向PD1的受体掩蔽的IL12融合蛋白进行腹膜内(IP)给药。与同种型对照或靶向至不相关抗原的αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>测试蛋白相比，αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>导致肿瘤生长抑制。与同种型对照或靶向至不相关抗原的αhCD20-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>测试蛋白相比，αhPD1-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>导致肿瘤生长抑制。与同种型对照或靶向至不相关抗原的αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>测试蛋白相比，αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35xIL12Rβ2(D1)>导致肿瘤生长抑制。每个肿瘤测量代表平均值+/-SEM。

图36C描绘了来自与图36A和36B相关的小鼠的百分体重变化。数据代表平均值+/-SEM。在整个研究过程中，没有治疗组表现出体重减轻(明显毒性的量度)。

图36D和36E描绘了在荷有MC38肿瘤的小鼠中用指示的蛋白质进行腹膜内给药后3、24和72小时后的血清IFNγ水平。使用来自Meso Scale Discovery,LLC(Rockville,Maryland)的V-PLEX促炎性面板1(小鼠)试剂盒(K15048D-1)来测量血清IFNγ水平。与相同时间点来自未掩蔽的Fc-p40-p35x Fc对照的数据(图36E)相比，αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>、不相关靶标αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>、αhPD1-<p40-p35 xIL12Rβ2(D1)>、不相关靶标αhCD20-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>、αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>和不相关靶标αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>都导致更低的血清IFNγ水平(毒性的生物标志物)。

图37A和37B评估了αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>与不相关靶标αhCD20-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>加αPD1(REGN2810)(doi:10.1158/1535-7163.MCT-16-0665)的组合的抗肿瘤功效。将3×10⁵个MC38肿瘤细胞皮下植入PD-1xLAG3敲入小鼠(doi:10.1158/1535-7163.MCT-16-0665)的右胁。一旦肿瘤在第9天已经达到125mm³的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝5-7只/组)中，并在第9、12和16天用hIgG4s同种型对照或指示剂量的测试蛋白质进行腹膜内(IP)给药。相比αhCD20-<p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>加αPD1(REGN2810)的组合，αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>的单一疗法具有优异的抗肿瘤功效。

图38A描绘了图38B和图38C的实验方案。将3×10⁵个MC38肿瘤细胞皮下植入PD-1xLAG3敲入小鼠(doi:10.1158/1535-7163.MCT-16-0665)的右胁。一旦肿瘤在第7天已经达到105mm³的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝5-6只/组)中，并在第7、10和14天进行腹膜内(IP)给药。

图38B-1描绘了来自图38A中所描述的实验的百分体重变化。用Fc-p40-p35 x Fc(1μg)治疗的小鼠具有显著的体重减轻，而用较高剂量的αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 xIL12Rβ2(D1)>(10μg)或靶向不相关抗原的αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>(10μg)治疗的小鼠没有体重减轻。

图38B-2描绘来自如图38A中所描述的实验的小鼠中的第一次给药后72小时(且在第二次给药之前)的血清IFNγ水平。IFNγ水平通过AlphaLISA(Perkin Elmer AL501C,Waltham,MA)测量。Fc-p40-p35 x Fc(1μg)导致显著的血清IFNγ(毒性的生物标志物)，而αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>(10μg)或αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 xIL12Rβ2(D1)>(10μg)导致极小的血清IFNγ。

图38C-1描绘了将3×105个MC38肿瘤细胞皮下植入PD-1xLAG3敲入小鼠(doi:10.1158/1535-7163.MCT-16-0665)的右胁后小鼠的肿瘤生长。一旦肿瘤在第7天已经达到105mm³的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝5-6只/组)中，并在第7、10和14天进行腹膜内(IP)给药。Fc-p40-p35 x Fc(1μg)导致稳健的肿瘤控制(图38C-1)，然而还导致如体重减轻所证明的毒性(图38B-1)。αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x IL12Rβ2(D1)>(10μg)导致与Fc-p40-p35 x Fc(1μg)相当的肿瘤控制，其中没有任何体重减轻(图38B-1)。

图38C-2、3、4、5描绘了个体小鼠的个体肿瘤生长曲线。

8.8.实施例7：靶向PD1的抗体掩蔽的IL12构建体对生物活性、抗肿瘤功效和毒性的效应

图40A：经由Fc-p40-p35 x Fc对照、各种靶向和非靶向抗体掩蔽的IL12蛋白构建体或者靶向和非靶向受体掩蔽的IL12蛋白构建体来刺激如第8.1.7节中所述的经工程化以表达hPD-1的NK92/STAT3-Luc cl.7F7/hPD1报告细胞。在4小时时间点，与未掩蔽的Fc-p40-p35 x Fc对照相比，以下靶向不相关抗原hCD20的构建体具有降低的STAT3生物活性：αhCD20-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>、αhCD20-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>和αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>。与αhCD20-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>相比，αhPD1-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>具有靶标增强的活性。与αhCD20-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>相比，αhPD1-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>具有靶标增强的活性，并且与αhCD20-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>相比，αhPD1-<IL12Rβ1(D1)-p40-p35(单价)>具有靶标增强的活性。图40A-1描绘了图40A的缩放轴，以更好地说明与αhCD20-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>相比，αhPD1-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>的在NK92/STAT3-Luc/hPD1细胞上的靶标增强的活性。NK92/STAT3-Luc亲本不表达hPD-1。αhPD1-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>在NK92/STAT3-Luc亲本上具有与αhCD20-<scFV#A(VL-VH)xmIL12p40-p35>相似的生物活性，这证明了这些蛋白质的靶标依赖活性是相似的。

图40B：经由Fc-p40-p35 x Fc对照、各种靶向和非靶向抗体掩蔽的IL12蛋白构建体或者靶向和非靶向受体掩蔽的IL12蛋白构建体来刺激如第8.1.7节中所述的经工程化以表达hPD-1的NK92/STAT3-Luc cl.7F7/hPD1报告细胞。在24小时时间点，与αhCD20-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>相比，αhPD1-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>具有靶标增强的活性，并且与αhCD20-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>相比，αhPD1-<scFV#B(VL-VH)xmIL12p40-p35>具有靶标增强的活性。

图41A描绘了图41B、41C和41D的实验方案。将3×10⁵个MC38肿瘤细胞皮下植入PD-1xLAG3敲入小鼠(doi:10.1158/1535-7163.MCT-16-0665)的右胁。一旦肿瘤在第7天已经达到105mm³的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝5-6只/组)中，并在第7、10和14天进行腹膜内(IP)给药。

图41B描绘了用指示的剂量和蛋白质治疗的如图41A中所述的小鼠的肿瘤生长曲线。与同种型治疗的小鼠或αhCD20-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>(靶向不相关抗原)治疗的小鼠相比，αhPD1-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>治疗的小鼠具有肿瘤生长抑制。与αhCD20-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>(靶向不相关抗原)治疗的的小鼠相比，αhPD1-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>治疗的小鼠具有肿瘤生长抑制。

图41C描绘了用指示剂量和蛋白质治疗的如图41A中所述的小鼠的百分体重变化。用Fc-p40-p35 x Fc(1μg)治疗的小鼠具有显著的体重减轻，而用αhPD1-<scFV#A(VL-VH)xmIL12p40-p35>(5μg)、αhCD20-<scFV#A(VL-VH)x mIL12p40-p35>(5μg)(靶向不相关抗原)、αhPD1-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>(0.25μg)或αhCD20-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>(0.25μg)(靶向不相关抗原)治疗的小鼠没有体重减轻。

图41D描绘来自如图41A中所描述的实验的小鼠中的第一次给药后72小时的血清IFNγ水平。IFNγ水平通过AlphaLISA(Perkin Elmer AL501C,Waltham,MA)测量。Fc-p40-p35 x Fc(1μg)导致显著的血清IFNγ(毒性生物标志物)，而αhPD1-<scFV#A(VL-VH)xmIL12p40-p35>(5μg)、αhCD20-<scFV#A(VL)-VH)x mIL12p40-p35>(5μg)(靶向不相关抗原)、αhPD1-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>(0.25μg)或αhCD20-<scFV#B(VL-VH)x mIL12p40-p35>(0.25μg)(靶向不相关抗原)治疗导致极小的血清IFNγ。

8.9.实施例8：一个IL12亚基与对侧亚基上的突变蛋白的受体掩蔽的组合的效应

经由重组IL12、IL12-Fc融合蛋白、受体掩蔽的IL12-Fc融合蛋白或者受体掩蔽的IL12(突变蛋白)-Fc融合蛋白来刺激如第8.1.7节中所述的经工程化的HT-2报告细胞。参见图42，与重组mIL12和未掩蔽的Fc-p40-p35 x Fc对照相比，Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)具有降低的生物活性。Fc-p40(突变蛋白24)-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)的具有进一步降低的生物活性，这证明了IL12Rβ2(D1)掩蔽和p40突变蛋白的组合减弱效应。

参见图43，经由重组IL12、IL12-Fc融合蛋白、受体掩蔽的IL12-Fc融合蛋白或者受体掩蔽的IL12(突变蛋白)-Fc融合蛋白来刺激如第8.1.7节中所述的经工程化的HT-2报告细胞。与重组mIL12和未掩蔽的Fc-p40-p35 x Fc对照相比，Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35具有降低的生物活性。Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35(突变蛋白25)、Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35(突变蛋白26)、Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35(突变蛋白27)和Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35(突变蛋白28)都具有实质上进一步降低的生物活性。这证明了IL12Rβ1(D1)掩蔽和p35突变蛋白的组合减弱效应。

8.10.实施例9：具有受体掩蔽的“3链”形式蛋白质构建体减弱IL12的生物活性

经由重组mIL12、IL12-Fc融合蛋白或者受体掩蔽的IL12融合蛋白刺激如第8.1.7节中所述的经工程化的HT-2报告细胞。如图44中所示，与重组mIL12相比，未掩蔽的Fc-p35x Fc x p40具有相当的生物活性。与未掩蔽的Fc-p35 x Fc x p40相比，Fc-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)x p40和Fc-p35 x Fc x IL12Rβ1(D1)-p40具有降低的生物活性。与Fc-p35 xFc-IL12Rβ2(D1)x p40和Fc-p35 x Fc x IL12Rβ1(D1)-p40相比，Fc-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)x IL12Rβ1(D1)-p40具有进一步降低的生物活性。与Fc-p40-p35 x Fc、Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc、Fc-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)和Fc-IL12Rβ1(D1)-p40-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)相比，Fc-p35 x Fc-IL12Rβ2(D1)x IL12Rβ1(D1)-p40也具有降低的生物活性。

8.11.实施例10：受体掩蔽的IL12具有靶标增强的生物活性

经由IL12融合蛋白刺激如第8.1.7节所述的经工程化以表达hPD-1的报告细胞。如图45中所示，与未掩蔽的Fc-p40-p35 x Fc对照相比，IL12Rβ1(D1)-IL12p40-p35 xαhCD20(其靶向不相关的CD20抗原)具有减弱的生物活性。与IL12Rβ1(D1)-IL12p40-p35 xαhCD20相比，IL12Rβ1(D1)-IL12p40-p35 xαhPD1具有靶标增强的生物活性。

8.12.实施例11：受体掩蔽的IL12具有靶标增强的生物活性

8.12.1.材料与方法

根据图46A中所示的方案，评估具有受体掩蔽的“3链”形式蛋白质构建体在MC38肿瘤模型中的体内活性。将3×10⁵个MC38肿瘤细胞皮下植入C57/BL6雌性小鼠的右胁。一旦肿瘤在第10天以达到80mm³的平均体积，就将小鼠随机化到组(n＝5只/组)中，并在第10、13和16天用hIgG4s同种型对照或(1)Fc-p35 x Fc x p40(未掩蔽)、(2)Fc-p35 x Fc x IL12Rβ2(D1)-p40(单掩蔽)、(3)Fc-p35 x Fc-IL12Rβ1(D1)x p40(单掩蔽)或(4)Fc-p35 x Fc xIL12Rβ2(D1)x IL12Rβ2(D1)-p40(双掩蔽)进行腹膜内(IP)给药。

测量肿瘤生长、体重和72小时血清IFNγ(使用AlphaLISA(Perkin Elmer AL501C,Waltham,MA))。结果分别示于图46B、46C和46D中。

8.12.2.结果

所有“3链”形式蛋白质构建体都显示出减少肿瘤生长的功效(图46B)。此外，如通过体重(图46C)和全身IFNγ水平(图46D)的降低所测量到的，双掩蔽构建体展示出无毒性。

9.参考文献的引用

本申请中引用的所有公开、专利、专利申请和其他文件出于所有目的通过引用以其整体在此并入，其程度如同每个单独的公开、专利、专利申请或其他文件单独指示出于所有目的通过引用并入一样。如果在本文中并入的一个或多个参考文献的教导与本公开之间存在不一致，则本说明书的教导是预期的。

Claims

1.IL12受体激动剂，其包含：

(a)第一多肽链，其在N末端至C末端方向上包含第一靶向部分或靶向部分组分、第一Fc结构域和p35部分；

(c)所述第一Fc结构域和所述p35部分之间的p40部分或以单体p40形式的p40部分，任选地其中所述p40部分在对应于全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37的位置处具有减弱取代；

(d)经配置以掩蔽所述p35部分或所述p40部分的IL12Rβ部分或IL12抗体片段。

2.IL12受体激动剂，其包含IL12突变蛋白，其中所述IL12受体激动剂与野生型IL12相比具有至少500倍的减弱，其中所述IL12受体激动剂包含：

(b)所述第一多肽链上的任选的第一靶向部分或靶向部分组分，和所述第二多肽链上的任选的第二靶向部分或靶向部分组分；

(c)p35部分和p40部分；以及

3.IL12受体激动剂，其在通过第一Fc结构域和第二Fc结构域二聚化的第一多肽链和第二多肽链上包含：

(a)任选的第一靶向部分和任选的第二靶向部分；

(b)包含p35部分和p40部分的IL12突变蛋白，其中：

(i)所述p35部分包含减弱氨基酸取代，任选地其中所述减弱氨基酸取代位于以下位置处：(A)全长人p35的氨基酸Y189或全长鼠p35的氨基酸Y185，其中所述取代任选地是A、V、R或E；(B)全长人p35的氨基酸I193或全长鼠p35的氨基酸M189，其中所述取代任选地是A、V或E；(C)全长人p35的氨基酸R211或全长鼠p35的氨基酸R207，其中所述取代任选地是A或K；或(D)(A)-(C)的任何组合；和/或

(ii)所述p40部分包含减弱氨基酸取代，任选地其中所述减弱氨基酸取代位于以下位置处：(A)全长人p40的氨基酸K28或全长鼠p40的氨基酸K28，其中所述取代任选地是A；(B)全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37，其中所述取代任选地是A；(C)全长人p40的氨基酸D115或全长鼠p40的氨基酸E115，其中所述取代任选地是A；(D)全长人p40的氨基酸K118或全长鼠p40的氨基酸K118，其中所述取代任选地是A；(E)全长人p40的氨基酸K126或全长鼠p40的氨基酸K126，其中所述取代任选地是A；(F)全长人p40的氨基酸Y268或全长鼠p40的氨基酸Y265，其中所述取代任选地是V或F；(G)全长人p40的氨基酸Y314或全长鼠p40的氨基酸Y318，其中所述取代任选地是F；或(H)(A)至(G)的任何组合；

(c)经配置以掩蔽所述p35部分或所述p40部分的IL12Rβ部分或IL12抗体片段。

4.权利要求1至3中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述p40部分包含与成熟人p40或成熟鼠p40的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的氨基酸序列。

5.权利要求1至3中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述p40部分包含与成熟人p40或成熟鼠p40的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应于全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37的位置处包含氨基酸取代，任选地其中所述取代任选地是A。

6.权利要求1至5中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述p35部分与成熟人p35或成熟鼠p35的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性。

7.权利要求1至6中任一项所述的IL12受体激动剂，其对于所述p35部分和所述p40部分是单价的。

8.权利要求1至7中任一项所述的IL12受体激动剂，其具有图5H、5I、5J、5K、5L、5M、5N、5R、5S、5V、5W、5X、39C或39D中任一项中所示的任何配置。

9.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有与单体p40(任选地是掩蔽的单体p40)缔合的示例性单体19的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体33的配置的第二IL12单体。

10.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有与单体p40(任选地是掩蔽的单体p40)缔合的示例性单体19的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体57的配置的第二IL12单体。

11.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体57的配置的第二IL12单体。

12.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体35的配置的第二IL12单体。

13.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有示例性单体35的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体57的配置的第二IL12单体。

14.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有示例性单体57的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体63的配置的第二IL12单体。

15.权利要求9至14中任一项所述的IL12受体激动剂，其包含经配置以掩蔽所述p40部分的IL12Rβ1部分。

16.权利要求9至15中任一项所述的IL12受体激动剂，其包含经配置以掩蔽所述p35部分的IL12Rβ2部分。

17.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有示例性单体33的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体58的配置的第二IL12单体。

18.IL12受体激动剂，其任选地是根据权利要求1至8中任一项所述的IL12受体，所述IL12受体激动剂包含具有示例性单体28的配置的第一IL12单体，和具有示例性单体59的配置的第二IL12单体。

19.权利要求17或权利要求18所述的IL12受体激动剂，其包含经配置以掩蔽所述p35部分和/或所述p40部分的抗IL12抗体的抗原结合片段。

20.权利要求19所述的IL12受体激动剂，其中所述抗IL12抗体结合至所述p40部分。

21.权利要求19所述的IL12受体激动剂，其中所述抗IL12抗体结合至所述p35部分。

22.权利要求1至21中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述p40部分包含p40 D2结构域和p40 D3结构域。

23.权利要求22所述的IL12受体激动剂，其中所述p40部分包含p40D1结构域。

24.权利要求1至23中任一项所述的IL12受体激动剂，其中第一靶向部分和/或第二靶向部分：

(a)结合至肿瘤相关抗原；

(b)结合至肿瘤微环境抗原；

(c)结合至肿瘤反应性淋巴细胞的细胞表面分子；

(d)结合至检查点抑制剂；

(e)结合至肽-MHC复合物；

(f)是肽-MHC复合物；

(h)独立地选自以上(a)至(g)。

25.权利要求24所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分是抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述靶向部分是Fab或scFv。

26.权利要求24或权利要求25所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和所述第二靶向部分是相同的。

27.权利要求24至26中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分结合至肿瘤相关抗原。

28.权利要求24至26中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分结合至肿瘤微环境抗原。

29.权利要求24至26中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分结合至肿瘤淋巴细胞的细胞表面分子。

30.权利要求29所述的IL12受体激动剂，其中所述细胞表面分子是CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、LAG3、TIM3或B7-H3。

31.权利要求29或权利要求30所述的IL12受体激动剂，其中所述细胞表面分子是PD1或LAG3。

32.权利要求31所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分是阻断抗体。

33.权利要求24至26中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分结合至检查点抑制剂。

34.权利要求33所述的IL12受体激动剂，其中所述检查点抑制剂是CTLA-4、PD1、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、VISTA、PSGL1或CHK2。

35.权利要求34所述的IL12受体激动剂，其中所述检查点抑制剂是PD1或LAG3。

36.权利要求35所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分是阻断抗体。

37.权利要求24至26中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分结合至MHC-肽复合物。

38.权利要求24至26中任一项所述的IL12受体激动剂，其中所述第一靶向部分和/或所述第二靶向部分是肽-MHC复合物。

39.p40部分，其包含与成熟人p40或成熟鼠p40的受体结合结构域具有至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应于全长人p40的氨基酸W37或全长鼠p40的氨基酸W37的位置处包含氨基酸取代，任选地其中所述取代任选地是A。

40.一个核酸或多个核酸，其编码权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂或权利要求39所述的p40部分。

41.宿主细胞，其经工程化以表达权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂，或权利要求39所述的p40部分，或权利要求40所述的一个或多个核酸。

42.产生权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂或权利要求39所述的p40部分的方法，所述方法包括培养权利要求41所述的宿主细胞，并回收由其表达的所述IL12受体激动剂或p40部分。

43.药物组合物，其包含权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂或权利要求39所述的p40部分，以及赋形剂。

44.治疗癌症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂，或权利要求39所述的p40部分，或权利要求43所述的药物组合物。

45.靶向治疗癌症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂或权利要求43所述的药物组合物。

46.局部递送IL12蛋白的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂或权利要求43所述的药物组合物。

47.向受试者施用具有降低的全身暴露和/或降低的全身毒性的IL12疗法的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂或权利要求43所述的药物组合物。

48.在靶组织中局部诱导免疫应答的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用权利要求1至38中任一项所述的IL12受体激动剂或权利要求43所述的药物组合物。

49.权利要求44至48中任一项所述的方法，其中所述施用是全身性的，任选地静脉内的。

50.权利要求44至48中任一项所述的方法，其中所述施用是皮下的。

51.权利要求44至50中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用抗PD1抗体。

52.权利要求51所述的方法，其中所述抗PD1抗体是MDX-1106(纳武单抗)、MK-3475(派姆单抗)、MEDI-0680(AMP-514)、PDR001或BGB-108。

53.如本文所述的发明，例如，如编号的实施方案1至860中任一个中所定义的发明。