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CN117561260A - 一类杂环化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

一类杂环化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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CN117561260A
CN117561260A CN202280042003.4A CN202280042003A CN117561260A CN 117561260 A CN117561260 A CN 117561260A CN 202280042003 A CN202280042003 A CN 202280042003A CN 117561260 A CN117561260 A CN 117561260A
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刘金明
刘谦
段霜霜
景连栋
杨志
吴勇勇
田强
宋宏梅
葛均友
王晶翼
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Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co Ltd
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Abstract

Description

一类杂环化合物及其制备方法和用途 技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种具有Axl和/或Mer抑制活性的化合物及其制备和用途。
背景技术
目前人类已发现58个受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinases，RTKs)，它们是细胞表面的跨膜受体，主要由胞外域、跨膜域和胞内域组成，其中胞内域具有激酶活性。RTKs与配体结合后进行二聚化、自磷酸化，从而自身活化，继而激活胞内的下游信号级联，调控细胞的有丝分裂发生、细胞周期、细胞粘附、迁移和血管生成等功能。
TAM家族属于受体酪氨酸激酶亚家族，成员包括Tyro-3、Axl和Mer，其中Axl和Mer在信号转导通路中调节多种细胞功能。Axl(Ufo，Ark或Tyro7)于1991年由Bryan等在人类慢性髓细胞白血病的DNA中发现，Axl不仅与Tyro3具有相似的基因结构，与Mer具有相似的酪氨酸激酶域氨基酸序列，而且它们还拥有共同的生长停滞特异性蛋白6(Growth Arrest Specific 6，Gas6)配体。
Axl的活化有多种不同的方式：(1)通过配体结合而产生的同源二聚化；(2)不依赖于配体结合而产生的同源二聚化，即Axl的过度表达而发生的自二聚化；(3)Axl受体与其他2个TAM受体的异源二聚化；(4)Axl受体与非TAM受体的异型二聚化；(5)两个不同细胞的细胞外域结合激活。其中与配体结合是主要的Axl活化方式，Gas6与Axl的胞外域结合后，Axl发生二聚化，从而导致Axl的胞内域中3个磷酸化位点(Y779、Y821、Y866)发生磷酸化，这些磷酸化位点可与磷脂酰肌醇3激酶亚基(PI3K)、磷脂酶C(PLC)和生长因子受体结合蛋白2(Grb2)结合，激活RAS/ERK、PI3K/Akt等多条相关信号通路，促进细胞炎症，细胞的生存、迁移、侵袭和转移等生理学效应。
Axl除了在人体多种细胞和组织中高表达外，在肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、肝癌和卵巢癌等多种恶性肿瘤中均有发现Axl的高表达。Axl异常表达能够拮抗肿瘤细胞的凋亡，促进肿瘤细胞的侵袭和转移，促进肿瘤血管新生，推动肿瘤的发生和发展，与肿瘤的发生、复发和不良预后密切相关。近年来研究显示，Axl的高表达可能介导EGFR的获得性耐药，临床研究表明约20％的EGFR耐药病人中存在Axl的高表达。临床前研究发现Axl抑制剂与EGFR抑制剂的联合用药可以有效克服和改善EGFR抑制剂耐药的问题，临床上的联合用药也正在开展。此外Axl在肿瘤微环境(如巨噬细胞、树突状细胞等)中高表达，可以通过与肿瘤细胞以及其他基质细胞交互作用，协同促进肿瘤的进展，Axl过度表达导致的异常激活，与其他靶向药物的耐药以及化疗药物的耐药也存在密切关系。
MerTK信号传导在多种生理过程中起作用，例如凋亡细胞的巨噬细胞清除，血小板聚集，细胞骨架重组和吞噬，并调节许多生理过程，包括细胞存活，迁移，分化和凋亡细胞的吞噬作用，Mer介导的信号传导通路主要包括：(1)AKT信号通路：Mer受体与Gas6结合后使PI3K磷酸化激活，在磷酯酰肌醇依赖性蛋白激酶的参与下，活化的AKT进一步影响下游因子的活化状态，参与调节细胞凋亡，对细胞的增殖和迁移也有一定调节作用；(2)MAPK信号通路：Gas6与Mer结合使MAPK(主要为细胞外调节蛋白激酶和p38亚族)磷酸化，激活的MAPK将信号转导入细胞核,通过激活核转录因子影响细胞增殖和侵袭，同时也参与细胞凋亡进程。(3)信号转导子和转录激活子(STAT)信号通路：Mer信号通路激活后，STAT5、STAT6被磷酸化后形成二聚体，进入细胞核结合靶基因调控区域，使细胞因子信号抑制物的表达增加，起抑制炎症反应的作用，并与肿瘤细胞增殖密切相关。
在人类癌症治疗上仍有大量未得到满足的临床需求，基于Axl和/或Mer抑制剂在临床前显示出的确切抗肿瘤效果以及大量正在开展的临床研究现状，Axl和/或Mer抑制剂的开发已成为抗肿瘤药物研究的热点方向。综上所述，本领域亟待开发新型的Axl和/或Mer小分子抑制剂。
发明概述
本发明的第一方面涉及式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多 晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，
其中，
R 1选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 6取代；
R 6在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-NH 2、-NO 2、-S(O) pR A、-COR A、＝O、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、C 1-C 6烷氧基、3-8元杂环基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、C 1-C 6烷氧基、3-8元杂环基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 7取代；
R 7在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-NH 2、-NO 2、-S(O) pR A、-COR A和＝O；
R A独立地选自H和C 1-C 6烷基；
p选自1和2；
R 2在每次出现时各自独立地选自H、-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基和C 3-C 8环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基或C 3-C 8环烷基任选地被一个或多个R 8取代；
R 8在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基和C 1-C 6卤代烷氧基；
m选自0、1、2、3和4；
R 3选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 9取代；
R 9在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基和C 1-C 6卤代烷氧基；
R 4选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基和3-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基任选地被一个或多个R 10取代；
R 10在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基、C 1-C 6卤代烷氧基和3-8元杂环基；
X选自CH和N；
R 5选自H、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、卤素、-CN、-CONR 5aR 5b和C 1-C 6卤代烷基；且
R 5a和R 5b各自独立地选自H和C 1-C 6烷基。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，以及一种或多种药学可接受的载体。
另一方面，本发明提供了一种药盒，其包含：
a)本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物；和
b)任选存在的包装和/或说明书。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物，或者本发明的药盒，其用于预防或治疗与Axl和/或Mer相关的疾病(特别是肿瘤疾病)。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的 药物组合物或者本发明的药盒在制备用于预防或治疗与Axl和/或Mer相关的疾病(特别是肿瘤疾病)的药物中的用途。
另一方面，本发明提供了预防或治疗与Axl和/或Mer相关的疾病(特别是肿瘤疾病)的方法，其包括向有此需要的个体给药预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物，或者本发明的药盒。
另一方面，本发明提供了制备本发明的化合物的方法，其包括以下反应路线1所示的步骤：
反应路线1
其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、X和m如上文中所定义。
发明详述
在进一步描述本发明之前，应当理解，本发明不限于文中所述的具体实施方案。还应理解，文中所使用的术语仅用于描述而非限制具体实施方案。
定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
如本文中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。
如本文中所使用，术语“烷基”定义为直链或支链的饱和脂肪族烃基。例如，如本文中所使用，术语“C 1-C 6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链的基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基或正己基)，其任选地被一或多个(诸如1至3个)适合的取代基如卤素取代。
如本文中所使用，术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如单环，诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基，或双环，包括螺环、稠合或桥连系统，诸如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、双环[3.2.1]辛基或双环[5.2.0]壬基、十氢化萘基等)，其任选地被一个或多个(诸如1至3个)适合的取代基取代。所述环烷基具有3至15个，例如3至10个碳原子、3至8个碳原子或3至6个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C 3-C 8环烷基”指具有3至8个成环碳原子的饱和或不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基)，其任选地被一或多个(诸如1至3个)适合的取代基取代，例如甲基取代的环丙基。
如本文中所使用，术语“烷氧基”意指通过氧原子连接至母体分子部分的如上文所定义的“烷基”，例如C 1-C 6烷氧基、C 1-C 3烷氧基。C 1-C 6烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等，所述烷氧基可以任选地被一或多个(诸如1至3个)相同或不同的取代基取代。
如本文中所使用，术语“卤代”或“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
如本文中所使用，术语“卤代烷基”是指被一或多个(诸如1至3个)相同或不同的卤素原子取代的烷基。例如，本文中所使用的术语“C 1-C 6卤代烷基”是指具有1至6个碳原子的卤代烷基，包括但不限于-CH 2F、-CHF 2、-CF 3、-CH 2CF 3、-CF 2CF 3、-CH 2CH 2CF 3、-CH 2Cl等。本文中的卤代烷基任选地被一或多个(诸如1至3个)本文所描述的取代基取代。
如本文中所使用，术语“卤代烷氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的如上文所定义的“卤代烷基”，例如C 1-C 6卤代烷氧基。
如本文中所使用，术语“杂环基”指单环或多环基团，其在环中例如具有2、3、4、5、6、7、8、9个碳原子和一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)选自O、S、S(＝O)、S(＝O) 2、N和NR(R表示氢原子或取代基，例如但不限于烷基或环烷基)的基团。杂环基包括饱和及部分不饱和的非芳香 杂环。饱和杂环基可称为杂环烷基，例如3-8元杂环烷基、3-6元杂环烷基、5-6元杂环烷基等。除非本说明书中另外特别指明，否则杂环基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，其可包括稠合环体系、并环体系、桥环体系或螺环体系。特别地，3-8元杂环基为在环中具有3-8个碳原子及杂原子的基团，例如，其具有4至8、4至7、4至6、5至8、5至7或者5至6个碳原子及杂原子(分别称作4至8元、4至7元、4至6元、5至8元、5至7元以及5至6元杂环基)，例如但不限于环氧乙烷基、氮丙啶基、氮杂环丁基、氮杂环庚基、氧杂环丁基、四氢呋喃基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢吡喃基、氮杂 基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基(dithianyl)、硫吗啉基、哌嗪基、三噻烷基(trithianyl)等；以及它们的并环衍生物或苯并衍生物或杂芳基并衍生物或螺环衍生物等。
如本文中所使用，术语“芳基”指具有共轭π电子系统的全碳单环或稠合环多环芳族基团。常见的芳基包括(但不限于)苯基、萘基、蒽基、菲基、苊基、薁基、芴基、茚基、芘基等。例如，术语“C 6-C 10芳基”指含有6至10个碳原子的芳族基团，诸如苯基或萘基。芳基任选地被一或多个(诸如1至3个)适合的取代基(例如卤素、-OH、-CN、-NO 2、C 1-C 6烷基等)取代。
如本文中所使用，术语“杂芳基”指含有至少一个选自N、O和S的杂原子的单环、双环或三环芳族环系，其具有例如5、6、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是具有1或2或3或4或5或6或9或10个碳原子，并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。例如，如本文中所使用，术语“5-10元杂芳基”意指具有5-10个环原子的单环、双环或三环芳族环系统，并且其中包含至少一个可以相同或不同的杂原子(所述杂原子是例如N、O或S)。5-10元杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物。杂芳基任选地被1或多个(诸如1至3个)适合的取代基(例如卤素、C 1-C 6烷基等)取代。
如本文中所使用，术语“烯基”是指含有至少一个C＝C双键的烃基。烯基可以是直链或支链烯基，并且含有2至15个碳原子。例如本文中“C 2-C 6烯基”为含有2至6个碳原子的烯基。烯基的非限制性例子包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、辛烯基和癸烯基。烯基可以是未取代的，也可以被一或多个相同或不同的取代基取代。
如本文中所使用，术语“炔基”是指具有至少一个C≡C三键的烃基。炔基可以是直链或支链炔基，并且含有2至15个碳原子。例如本文中“C 2-C 6炔基”为含有2至6个碳原子的炔基。炔基的非限制性实例包括但不限于乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基和1,3-丁二炔基等。炔基可以是未取代的，也可以被一或多个相同或不同的取代基取代。
术语“取代”指所指定的原子上的一个或多个(例如1个、2个、3个、4个或5个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。
如果取代基被描述为“任选地被….取代”，则取代基可(1)未被取代或(2)被取代。如果取代基的碳被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则碳上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可单独和/或一起被独立地选择的取代基替代或未替代。如果取代基的氮被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则氮上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可各自被独立地选择的取代基替代或未替代。
如果取代基被描述为“独立地选自”一组基团，则各取代基独立于另一者被选择。因此，各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。
如本文中所使用，术语“一或多个”意指在合理条件下的1个或超过1个，例如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个。
除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
本发明所用术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与构成制剂的其他组分和/或用其治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上相容。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。适合的酸加成盐由形成药学上可接受盐的酸来形成。适合的碱加成盐由形成药学上可接受盐的碱来形成。适合的盐的综述参见Stahl及Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH,2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。
术语“立体异构体”(或称“旋光异构体”)是指由于具有至少一个手性因素(包括手性中心、手性轴、手性面等)而导致具有垂直的不对称平面，从而能够使平面偏振光旋转的稳定异构体。由于本 发明的化合物存在可能导致立体异构的不对称中心以及其他化学结构，因此本发明也包括这些立体异构体及其混合物。由于本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)包括不对称碳原子，因而能够以单一立体异构体形式、外消旋物、对映异构体和非对映异构体的混合物形式存在。通常，这些化合物能够以外消旋物的形式制备。然而，如果需要的话，可以将这类化合物制备或分离后得到纯的立体异构体，即单一对映异构体或非对映异构体，或者单一立体异构体富集化(纯度≥98％、≥95％、≥93％、≥90％、≥88％、≥85％或≥80％)的混合物。如下文中所述，化合物的单一立体异构体是由含有所需手性中心的旋光起始原料合成制备得到的，或者是通过制备得到对映异构体产物的混合物之后再分离或拆分制备得到的，例如转化为非对映异构体的混合物之后再进行分离或重结晶、色谱处理、使用手性拆分试剂，或者在手性色谱柱上将对映异构体进行直接分离。具有特定立体化学的起始化合物既可以商购得到，也可以按照下文中描述的方法制备再通过本领域熟知的方法拆分得到。术语“对映异构体”是指彼此具有不能重叠的镜像的一对立体异构体。术语“非对映异构体”或“非对映体”是指彼此不构成镜像的旋光异构体。术语“外消旋混合物”或“外消旋物”是指含有等份的单一对映异构体的混合物(即两种R和S对映体的等摩尔量混合物)。术语“非外消旋混合物”是指含有不等份的单一对映异构体的混合物。除非另外指出，本发明的化合物的所有立体异构体形式都在本发明的范围之内。
术语“互变异构体”(或称“互变异构形式”)是指具有不同能量的，可通过低能垒互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(或称质子转移互变异构体)包括(但不限于)通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化、亚胺-烯胺异构化、酰胺-亚胺醇异构化等。除非另外指出，本发明的化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。
术语“多晶型物”(或称“多晶型形式”)是指化合物或复合物的固体晶体形式。本领域技术人员可通过许多已知的方法获得分子的多晶型物。这些方法包括(但不限于)熔融重结晶、熔融冷却、溶剂重结晶、去溶剂化、快速蒸发、快速冷却、慢速冷却、汽相扩散和升华。另外，可用熟知的技术检测、分类和鉴定多晶型物，这些技术包括(但不限于)差示扫描量热法(DSC)、热重分析法(TGA)、X射线粉末衍射法(XRPD)、单晶X射线衍射法(SCXRD)、固态核磁共振(NMR)、红外光谱法(IR)、拉曼光谱法和扫描电镜术(SEM)等。
术语“溶剂合物”是指由本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)与至少一种溶剂分子通过非共价分子间作用力结合而形成的物质。常见的溶剂合物包括(但不限于)水合物(包括半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等)、乙醇合物、丙酮合物等。
术语“氮氧化物”是指叔胺类或含氮(芳)杂环类化合物结构中的氮原子经氧化而形成的化合物。例如，式I化合物母核中的1位氮原子可以形成相应的氮氧化物。
本发明还包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其与本发明的化合物相同，除了一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数的原子替代。适合包含入本发明的化合物中的同位素的实例包括但不限于氢的同位素(例如 2H、 3H、氘D、氚T)；碳的同位素(例如 11C、 13C及 14C)；氯的同位素(例如 37Cl)；氟的同位素(例如 18F)；碘的同位素(例如 123I及 125I)；氮的同位素(例如 13N及 15N)；氧的同位素(例如 15O、 17O及 18O)；及硫的同位素(例如 35S)。
在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物，当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)及“Bioreversible Carriers in Drug Design,”Pergamon Press,1987(E.B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard(Elsevier,1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。
术语“各自独立地”是指结构中存在的取值范围相同或相近的至少两个基团(或环系)可以在特定情形下具有相同或不同的含义。例如，取代基X和取代基Y各自独立地为氢、卤素、羟基、氰基、烷基或芳基，则当取代基X为氢时，取代基Y既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基；同理；当取代基Y为氢时，取代基X既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基。
本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在Protective Groups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,1991中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，可以在适当的后续阶段移除保护基。
本发明所用术语“约”在用于修饰某一数值或数值范围时，是指包括该数值或数值范围以及该数值或数值范围的本领域技术人员可接受的误差范围，例如该误差范围为±10％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％等。
化合物
本发明的一个目的在于提供一种式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，
其中，
R 1选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 6取代；
R 6在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-NH 2、-NO 2、-S(O) pR A、-COR A、＝O、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、C 1-C 6烷氧基、3-8元杂环基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、C 1-C 6烷氧基、3-8元杂环基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 7取代；
R 7在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-NH 2、-NO 2、-S(O) pR A、-COR A和＝O；
R A独立地选自H和C 1-C 6烷基；
p选自1和2；
R 2在每次出现时各自独立地选自H、-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基和C 3-C 8环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基或C 3-C 8环烷基任选地被一个或多个R 8取代；
R 8在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基和C 1-C 6卤代烷氧基；
m选自0、1、2、3和4；
R 3选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 9取代；
R 9在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基和C 1-C 6卤代烷氧基；
R 4选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基和3-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基任选地被一个或多个R 10取代；
R 10在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基、C 1-C 6卤代烷氧基和3-8元杂环基；
X选自CH和N；
R 5选自H、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、卤素、-CN、-CONR 5aR 5b和C 1-C 6卤代烷基；且
R 5a和R 5b各自独立地选自H和C 1-C 6烷基。
根据本发明的一些实施方案，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基和3-8元杂环基，所述C 1-C 6 烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基任选地被一个或多个R 6取代。
根据本发明的一些实施方案，R 6在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-S(O) pR A、C 3-C 8环烷基和C 6-C 10芳基，所述C 3-C 8环烷基或C 6-C 10芳基任选地被一个或多个R 7取代。
根据本发明的一些实施方案，R 7在每次出现时各自独立地选自卤素和＝O。
根据本发明的一些实施方案，R A为C 1-C 6烷基。
根据本发明的一些实施方案，p为2。
根据本发明的一些实施方案，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基和3-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基任选地被一个或多个R 6取代；
R 6在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-S(O) pR A、C 3-C 8环烷基和C 6-C 10芳基，所述C 3-C 8环烷基或C 6-C 10芳基任选地被一个或多个R 7取代；
R 7在每次出现时各自独立地选自卤素和＝O；
R A为C 1-C 6烷基；且
p为2。
在本发明的一些实施方案中，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基和3-6元杂环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或3-6元杂环烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、-OH、-S(O) 2(C 1-C 6烷基)、任选地被卤素或＝O取代的C 3-C 6环烷基、以及任选地被卤素取代的苯基。
在本发明的一些实施方案中，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基和3-6元含氧杂环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或3-6元含氧杂环烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、-OH、-S(O) 2(C 1-C 6烷基)、任选地被卤素或＝O取代的C 3-C 6环烷基、以及任选地被卤素取代的苯基。
在本发明的一些实施方案中，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基或C 3-C 6环烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、-OH、-S(O) 2(C 1-C 6烷基)、任选地被卤素或＝O取代的C 3-C 6环烷基、以及任选地被卤素取代的苯基。
在本发明的一些实施方案中，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基或C 3-C 6环烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：-F、-CN、-OH、-S(O) 2CH 3、四氢吡喃基、以及氟代苯基。
在本发明的一些实施方案中，R 1选自C 1-C 6烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基任选地被1、2或3个-F取代。
在本发明的一些实施方案中，R 1选自 CF 3CH 2-、CH 3-、
其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
在本发明的一些实施方案中，R 1选自 CF 3CH 2-、CH 3-、
其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，R 2在每次出现时各自独立地选自H和卤素。
在本发明的一些实施方案中，R 2在每次出现时各自独立地选自H和F。
在本发明的一些实施方案中，R 2为H。
根据本发明的一些实施方案，m为1。
根据本发明的一些实施方案，R 3选自C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 9取代。
根据本发明的一些实施方案，R 9在每次出现时各自独立地选自卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基。
根据本发明的一些实施方案，R 9在每次出现时各自独立地选自卤素。
根据本发明的一些实施方案，R 9在每次出现时各自独立地选自卤素和C 1-C 6卤代烷基。
根据本发明的一些实施方案，R 9在每次出现时各自独立地选自F、Cl、-CF 3和-CH 3。
根据本发明的一些实施方案，R 9在每次出现时各自独立地选自F和Cl。
根据本发明的一些实施方案，R 3选自C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基。
在本发明的一些实施方案中，R 3选自苯基和5-6元杂芳基，所述苯基或5-6元杂芳基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基。
在本发明的一些实施方案中，R 3选自苯基和5-6元含氮杂芳基，所述苯基或5-6元含氮杂芳基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基。
在本发明的一些实施方案中，R 3选自苯基和吡啶基，所述苯基或吡啶基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基。
在本发明的一些实施方案中，R 3选自苯基和吡啶基，所述苯基或吡啶基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：F、Cl、-CF 3和-CH 3。
在本发明的一些实施方案中，R 3选自苯基和吡啶基，所述苯基或吡啶基任选地被F或Cl取代。
在本发明的一些实施方案中，R 3选自：
其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
在本发明的一些实施方案中，R 3选自：
其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被一个或多个C 1-C 6烷氧基或3-8元杂环基取代。
在本发明的一些实施方案中，R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被C 1-C 6烷氧基或5-6元含氧杂环烷基取代。
在本发明的一些实施方案中，R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被C 1-C 6烷氧基、四氢呋喃基或四氢吡喃基取代。
在本发明的一些实施方案中，R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被甲氧基、四氢呋喃基或四氢吡喃基取代。
在本发明的一些实施方案中，R 4选自异丙基、2-甲基丙基、甲氧基乙基、
其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，R 5选自H、C 1-C 6烷基和卤素。
在本发明的一些实施方案中，R 5为H。
本发明涵盖对上述优选基团进行任意组合所得的式I的化合物。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-1的化合物：
其中，
R 1、R 2、R 3、R 4、R 5和m如上文中所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-1-1的化合物：
其中，
R 1、R 2、R 4、R 5、R 9和m如上文中所定义；且
q选自0、1、2、3、4和5；优选地，q为1。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-1-1a的化合物：
其中，
R 1、R 4、R 9和q如上文中所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-1-2的化合物：
其中，
R 1、R 2、R 4、R 5、R 9和m如上文中所定义；且
q选自0、1、2、3、4和5；优选地，q为1。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-1-2a的化合物：
其中，
R 1、R 4、R 9和q如上文中所定义。
本发明涵盖对上述优选基团进行任意组合所得的式I-1、I-1-1、I-1-1a、1-1-2、1-1-2a的化合物。
例如，根据本发明的一些实施方案，在式I-1-1a或I-1-2a中，
R 1选自C 1-C 6烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基任选地被1、2或3个-F取代；
R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被C 1-C 6烷氧基、四氢呋喃基或四氢吡喃基取代；
R 9在每次出现时各自独立地选自卤素；且
q为1。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-2的化合物：
其中，
R 1、R 2、R 3、R 4、R 5和m如上文中所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-2-1的化合物：
其中，
R 1、R 2、R 4、R 5、R 9和m如上文中所定义；且
q选自0、1、2、3、4和5；优选地，q为1。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-2-1a的化合物：
其中，
R 1、R 4、R 9和q如上文中所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-2-2的化合物：
其中，
R 1、R 2、R 4、R 5、R 9和m如上文中所定义；且
q选自0、1、2、3、4和5；优选地，q为1。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式I-2-2a的化合物：
其中，
R 1、R 4、R 9和q如上文中所定义。
本发明涵盖对上述优选基团进行任意组合所得的式I-2、I-2-1、I-2-1a、1-2-2、1-2-2a的化合物。
例如，根据本发明的一些实施方案，在式I-2-1a或I-2-2a中，
R 1选自C 1-C 6烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基任选地被1、2或3个-F取代；
R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被C 1-C 6烷氧基、四氢呋喃基或四氢吡喃基取代；
R 9在每次出现时各自独立地选自卤素；且
q为1。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物选自：
制备方法
本发明的另一目的在于提供制备本发明的化合物的方法，其包括以下反应路线1所示的步骤：
反应路线1
其中，
R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、X和m如上文中所定义。
该反应优选在适合的有机碱或无机碱的存在下进行。所述有机碱或无机碱可选自二异丙基乙胺、三乙胺、碳酸钠、碳酸钾和碳酸铯，优选二异丙基乙胺。
该反应优选在合适的缩合剂的存在下进行，所述缩合剂可选自DCC、EDCI、HOBt、BOP、PyBOP、HATU、HBTU，优选HATU。
该反应在适合的有机溶剂中进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜及其任意组合，优选N,N-二甲基甲酰胺。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为20-80℃。
该反应进行合适的时间，例如2-24小时。
另一方面，本发明提供了中间体I-A和I-B的合成方法，其中中间体I-A可通过以下反应路线2所示的方法合成：
反应路线2
其中，
LG表示离去基团，所述离去基团包括但不限于卤素原子、甲磺酰基氧基、三氟甲磺酸酯等；且
R 1、R 2、X和m如上文中对式I的化合物所定义。
步骤一：使化合物I-A-I与R 1-LG反应以得到化合物I-A-II
该反应优选在适合的有机碱或无机碱的存在下进行。所述有机碱或无机碱可选自二异丙基乙胺、三乙胺、碳酸钠、碳酸钾和碳酸铯，优选碳酸铯。
该反应在适合的有机溶剂中进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜及其任意组合，优选N,N-二甲基甲酰胺。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为80-90℃。
该反应进行合适的时间，例如2-24小时。
步骤二：使化合物I-A-II与对氨基苯基硼酸酯反应以得到化合物I-A
该反应优选在金属催化剂和碱的存在下进行。所述金属催化剂优选为钯金属催化剂，例如三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、三苯基膦钯、醋酸钯，优选[1,1'-双(二苯基 膦基)二茂铁]二氯化钯。所述碱优选为无机碱，例如磷酸钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾，优选碳酸钠。
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、乙醇、乙二醇二甲醚、水、1,4-二氧六环及其任意组合，优选1,4-二氧六环和水的混合溶剂。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为60-100℃。
该反应进行合适的时间，例如2-8小时。
或者，中间体I-A也可通过以下反应路线3所示的方法合成：
反应路线3
其中，
R 1、R 2、X和m如如上文中对式I的化合物所定义。
步骤一：使化合物I-A-III与R 1OH反应以得到化合物I-A-IV
该反应优选在膦催化剂和偶氮二甲酸酯的存在下进行。所述膦催化剂优选为膦配体催化剂，例如三苯基膦、三丁基膦、三已基膦、三(2-甲基苯基)膦，优选三苯基膦。所述偶氮二甲酸酯例如偶氮二甲酸二乙酯、偶氮二甲酸二异丙酯、偶氮二甲酸二叔丁酯、双(4-氯苄基)偶氮二甲酸酯，优选偶氮二甲酸二乙酯。
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自四氢呋喃、乙醚、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺及其任意组合，优选四氢呋喃。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为25-70℃。
该反应进行合适的时间，例如8-16小时。
步骤二：使化合物I-A-IV与氨水发生取代反应以得到化合物I-A-II
该反应在合适的有机溶剂中进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、1,4-二氧六环及其任意组合，优选1,4-二氧六环。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为80-90℃。
该反应在合适的条件下进行。所述条件优选为微波加热。
该反应进行合适的时间，例如2-24小时。
步骤三：使化合物I-A-II与对氨基苯基硼酸酯反应以得到化合物I-A
该反应优选在金属催化剂和碱的存在下进行。所述金属催化剂优选为钯金属催化剂，例如三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、三苯基膦钯、醋酸钯，优选[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯。所述碱优选为无机碱，例如磷酸钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾，优选碳酸钠。
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、乙醇、乙二醇二甲醚、水、1,4-二氧六环及其任意组合，优选1,4-二氧六环和水的混合溶剂。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为60-100℃。
该反应进行合适的时间，例如2-8小时。
中间体I-B可通过以下反应路线4所示的方法合成：
反应路线4
步骤一：使化合物I-B-I与氯化试剂反应以得到化合物I-B-II
该反应在适合的溶剂存在下进行。所述溶剂可选自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿及其任意组合， 优选二氯甲烷。
该反应在氯化试剂的存在下进行。所述氯化试剂优选为草酰氯、氯化亚砜，优选草酰氯。
该反应优选在催化剂的存在下进行。所述催化剂优选为N,N-二甲基甲酰胺。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为0-25℃。
该反应进行合适的时间，例如2-8小时。
步骤二：使化合物I-B-II和重氮乙酸乙酯反应以得到化合物I-B-III
该反应优选在惰性气体的存在下进行。所述惰性气体可选自氮气、氩气，优选氮气。
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿及其任意组合，优选二氯甲烷。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为0-25℃。
该反应进行合适的时间，例如4-16小时。
步骤三：将化合物I-B-III还原以得到化合物I-B-IV
该反应在还原剂的存在下进行。所述还原剂优选为三丁基膦。
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自四氢呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚、异丙醚及其任意组合，优选异丙醚。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为0-25℃。
该反应进行合适的时间，例如2-8小时。
步骤四：使化合物I-B-IV与二碳酸二叔丁酯反应以得到化合物I-B-V
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙醚及其任意组合，优选四氢呋喃。
该反应优选在碱的存在下进行。所述碱优选为有机碱，例如三乙胺、二异丙基乙基胺，优选三乙胺。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为0-25℃。
该反应进行合适的时间，例如4-16小时。
步骤五：使化合物I-B-V通过闭环反应和脱除保护基Boc以得到化合物I-B-VI
该反应在合适的溶剂中进行。所述溶剂可选自四氢呋喃、甲苯及其任意组合，优选四氢呋喃。
该反应在合适的温度下进行。所述温度优选为0-90℃。
该反应在合适的酸的存在下进行。所述酸优选为盐酸的溶液，例如盐酸二氧六环、盐酸乙酸乙酯，优选盐酸二氧六环。
步骤六：使化合物I-B-VI与R 4-LG反应以得到化合物I-B-VII
其中LG表示离去基团，所述离去基团包括但不限于卤素原子、甲磺酰基氧基、三氟甲磺酸酯等；
该反应在合适的溶剂中进行。所述有机溶剂可选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜及其任意组合，优选N,N-二甲基甲酰胺。
该反应优选在适合的有机碱或无机碱的存在下进行。所述有机碱或无机碱可选自二异丙基乙胺、三乙胺、碳酸钠、碳酸钾和碳酸铯，优选碳酸铯。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为80-90℃。
该反应进行合适的时间，例如2-24小时。
步骤七：使化合物I-B-VII经酯基水解以得到化合物I-B
该反应在合适比例的甲醇/四氢呋喃/水的混合溶剂中进行。优选的溶剂比例为甲醇/四氢呋喃/水＝1/1/1。
该反应优选在适合的无机碱的存在下进行。所述无机碱可选自氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾，优选氢氧化钠。
或者，中间体I-B也可通过以下反应路线5所示的方法合成：
反应路线5
步骤一：化合物I-B-I与N,N’-羰基二咪唑反应以得到化合物I-B-VIII
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自四氢呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚及其任意组合，优选四氢呋喃。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为0-25℃。
该反应进行合适的时间，例如6-16小时。
步骤二：化合物I-B-VIII与丙二酸单乙酯钾盐反应以得到化合物I-B-IX
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自四氢呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚及其任意组合，优选四氢呋喃。
该反应优选在碱的存在下进行。所述碱优选为有机碱，例如三乙胺、二异丙基乙基胺，优选三乙胺。
该反应在合适的催化剂下进行。所述催化剂优选为氯化镁。
该反应在适合的温度下进行。所述温度优选为0-25℃。
该反应进行合适的时间，例如4-24小时。
步骤三：使化合物I-B-IX与对甲苯磺酰叠氮反应以得到化合物I-B-III
该反应在适合的溶剂中进行。所述溶剂可选自四氢呋喃、乙醚、乙腈、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺及其任意组合，优选乙腈。
该反应优选在碱存在下进行。所述碱优选为有机碱，例如三乙胺、二异丙基乙基胺，优选三乙胺。
该反应在适合的温度下进行，所述温度优选为0-10℃。
该反应进行合适的时间，例如1-4小时。
步骤四至步骤八同反应路线3中的步骤三到步骤七。
本文所用的术语“适合的”意指对具体化合物或条件的选择会取决于所要进行的特定合成操作以及所要转化的一个或多个分子的特性，但该选择在本领域技术人员的能力范围内。本文所述的所有工艺/方法的步骤均在足以提供所示产物的条件下进行。本领域技术人员会理解，可以改变所有反应条件(包括例如反应溶剂、反应时间、反应温度以及反应是否应在无水或惰性气氛下进行，等等)以优化期望的产物的收率，且这些变化在本领域技术人员的能力范围内。
药物组合物和药盒
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包含预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，以及一种或多种药学可接受的载体。
本发明的另一目的在于提供一种药盒，其包含：
a)本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物；和
b)任选存在的包装和/或说明书。
本发明中“药学可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应 或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。
本发明的药物组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以适合的途径给药，例如通过胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂给药。
对于这些给药途径，可以适合的剂型给药本发明的药物组合物。所述剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂等。
本发明的药物组合物还可以无菌注射剂的形式给药，包括无菌注射水或油混悬剂、或者无菌注射水或油溶液剂。
本发明的药物组合物可以包含0.01mg至1000mg的本发明的化合物。
在一些实施方案中，本发明提供制备本发明的药物组合物或药物制剂的方法，所述方法包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药与一种或多种药学上可接受的载体组合。
本发明的药物组合物可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它药剂联合给药。在一些实施方案中，本发明提供同时、分开或依次用于治疗的本发明化合物与额外治疗剂的组合制剂。
治疗方法和用途
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物，或者本发明的药盒，其用于预防或治疗与Axl和/或Mer相关的疾病(特别是肿瘤疾病)。
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物或者本发明的药盒在制备用于预防或治疗与Axl和/或Mer相关的疾病(特别是肿瘤疾病)的药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供预防或治疗与Axl和/或Mer相关的疾病(特别是肿瘤疾病)的方法，其包括向有此需要的个体给药预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物，或者本发明的药盒。
如本文中所使用的术语“有效量”是指足以实现所需预防或治疗效果的量，例如，实现减轻与待治疗疾病相关的一或多种症状的量。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可给药单次推注，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言，有效剂量为约0.001mg/千克体重/天至约10000mg/千克体重/天。在合适的情况下，有效剂量为约0.01mg/千克体重/天至约1000mg/千克体重/天。可以每天、每两天或每三天给药约0.01至1000mg/kg受试者体重，通常0.1至500mg/kg受试者体重。示例性的治疗方案为每天一次或多次或每周一次或多次或每月一次或多次给药。通常多次给予所述制剂，单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。或者，可以缓释制剂的形式给予所述制剂，在这种情况下，需要较低的给药频率。剂量和频率根据制剂在受试者中的半衰期而不同。也可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，以相对低频率的间隔长期给予相对低的剂量。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展被延缓或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善，在此之后，可以给予患者预防方案。
所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。
本发明所用的术语“治疗”目的是减轻或消除所针对的疾病状态或病症。如果受试者按照本文所述方法接受了治疗量的化合物、其旋光异构体或其药学上可接受的盐或其药物组合物，该受试者一种或多种指征和症状表现出可观察到的和/或可检测出的降低或改善，则受试者被成功地“治疗”了。还应当理解，所述的疾病状态或病症的治疗的不仅包括完全地治疗，还包括未达到完全地治疗，但实现了一些生物学或医学相关的结果。
“治疗”表示本发明化合物的任何给药，包括：
(1)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中抑制疾病(也就是阻止病理学和/或症状学的进一步发展)；或者
(2)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中改善疾病(也就是逆转病理学和/或症状学)。
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
本发明所用的术语“预防”包括抑制和延迟疾病的发作，并且不仅包括在发展疾病之前的预防，还包括在治疗后预防疾病的复发。
实施例
为了使本发明的目的和技术方案更加清楚，以下结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在本申请中，当化学名称和结构式不一致时，应当以结构式所示为准，除非根据上下文可以推断化学名称而非结构式是正确的。
在常规的合成法以及实施例和中间体合成例中，各缩写的含义如下表所示。
以下实施例中记载的化合物的结构通过 1H-NMR或MS来确证。 1H-NMR的测定仪器使用Bruker 400MHz核磁共振仪，测定溶剂为DMSO-d 6，内标物质为TMS，全部δ值用ppm值表示。质谱(MS)的测定仪器使用Agilent(ESI)质谱仪，型号为Agilent 6120B。
薄层色谱硅胶板(TLC)使用Merck产的铝板(20×20cm)，薄层层析分离纯化采用的是GF 254(0.4～0.5mm)。
反应的监测采用薄层色谱法(TLC)或LC-MS，使用的展开剂体系包括：二氯甲烷和甲醇体系、正己烷和乙酸乙酯体系、以及石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节或者加入三乙胺等进行调节。
柱层析一般使用200～300目硅胶为载体。洗脱剂的体系包括：二氯甲烷和甲醇体系、以及石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺进 行调节。
制备高效液相色谱仪，仪器型号：Agilent 1260，色谱柱：Waters XBridge Prep C 18OBD(19mm×150mm×5.0μm)；色谱柱温：25℃；流速：20.0mL/min；检测波长：214nm；洗脱梯度：(0min：10％A，90％B；16.0min：90％A，10％B)；流动相A：100％乙腈；流动相B：0.05％碳酸氢铵水溶液。
仪器型号：Agilent 1260，色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD(19mm×150mm×5.0μm)；色谱柱温：25℃；流速：20.0mL/min；检测波长：214nm；洗脱梯度：(0min：10％A，90％B；16.0min：90％A，10％B)；流动相A：100％乙腈；流动相B：100％水，0.05％甲酸。
除非特别指出，实施例的反应温度为室温(20℃～30℃)。
本发明所使用的试剂购自Acros Organics、Aldrich Chemical Company、上海特伯化学科技有限公司等。
中间体制备例：
中间体制备例1：3-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(T1)
步骤一：3-溴-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(T1-2)
将化合物T1-1(1g，4.67mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后冰浴下加入NaH(537.09mg，14.02mmol)，0℃反应0.5小时后,滴加碘甲烷(729.51mg，5.14mmol)，0℃反应1h后，加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后得标题化合物T1-2(600mg)。
MS m/z(ESI):228.1[M+H] +.
步骤二：3-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(T1)
将化合物T1-2(600mg，1.32mmol)溶解在1,4-二氧六环/水(10ml/2ml)中，然后加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)苯胺(576.42mg,2.63mmol)、碳酸钠(278.86mg,2.63mmol)、Pd(dppf)Cl 2(214.86mg,263μmol)，用氮气置换三次后，于90℃反应16小时。向反应液中加入硫酸钠固体后用硅藻土过滤，将滤液浓缩，将浓缩后的粗品用硅胶柱分离(二氯甲烷/甲醇＝50/1)得标题化合物T1(490mg)。
MS m/z(ESI):241.1[M+H] +.
中间体制备例2：5-(4-氨基苯基)-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(T2)
步骤一：5-溴-4-氯-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(T2-2)
将化合物T2-1(600mg,2.53mmol)、3-氧杂环丁醇(574mg,7.59mmol)、三苯基膦(1.38g,5.16mmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)中，室温下加入偶氮二甲酸二乙酯(917mg,5.16mmol)，向反应容器中充入氮气，于85℃微波反应1小时。反应完毕，将反应液浓缩，加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，分别用水和饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)分离得标题化合物T2-2(350mg)。
MS m/z(ESI):289.1[M+H] +.
步骤二：5-溴-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(T2-3)
将化合物T2-2(250mg,0.81mmol)溶于氨水(2mL)和1,4-二氧六环(1mL)的混合溶剂中，于90℃微波反应1.5小时。反应完毕，浓缩，用乙酸乙酯打浆，抽滤，得标题化合物T2-3(195mg)。
MS m/z(ESI):270.1[M+H] +.
步骤三：5-(4-氨基苯基)-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(T2)
将化合物T2-3(160mg,0.56mmol)、4-氨基苯硼酸频哪醇酯(126mg,0.56mmol)、PdCl 2(dppf)(42 mg,0.06mmol)和碳酸铯(372mg,1.12mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)中，在氮气保护下加热至90℃反应12小时。反应完毕，冷却至室温，向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，分别用水和饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得标题化合物T2(102mg)。
MS m/z(ESI):282.2[M+H] +.
中间体制备例3：5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T3)
步骤一：2-(4-氟苯基)乙酰氯(T3-2)
将化合物T3-1(20.0g，127.8mmol)溶解在二氯甲烷(200mL)中，向体系中加入催化量的N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL)，然后缓慢加入草酰氯(33.1g，255.6mmol)，于25℃反应2小时。直接浓缩反应体系得标题化合物T3-2(22.0g)。
MS m/z(ESI):173.3[M+H] +.
步骤二：2-重氮-4-(4-氟苯基)-3-氧代丁酸乙酯(T3-3)
将化合物T3-2(22g，121mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，在氮气保护、冰水浴下加入重氮乙酸乙酯(29g，242mmol)，于25℃反应8小时。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得标题化合物T3-3(10.4g)。
MS m/z(ESI):251.2[M+H] +.
步骤三：(E)-4-(4-氟苯基)-2-腙-3-氧代丁酸乙酯(T3-4)
将化合物T3-3(10.4g，36.99mmol)溶于异丙醚(100mL)中，冰水浴下加入三丁基膦(8.4g，40.69mmol)，于25℃反应2小时。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后得标题粗产品化合物T3-4(9.0g)。
MS m/z(ESI):251.3[M-H] +.
步骤四：(E)-2-(叔丁氧羰基-腙)-4-(4-氟苯基)-3-氧代丁酸乙酯(T3-5)
将化合物T3-4(9.0g，31.40mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，分别加入二碳酸二叔丁酯(7.69g，34.54mmol)、三乙胺(9.73g，94.2mmol)、4-二甲氨基吡啶(40mg，0.31mmol)，于25℃反应8小时。将反应体系直接抽滤即得标题化合物T3-5(5.0g)。
MS m/z(ESI):351.1[M-H] +.
步骤五：5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T3-6)
将化合物T3-5(5.0g，13.72mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，加热回流，滴加1-叔丁氧基-N,N,N',N'-四甲基-甲二胺(4.88g，27.45mmol)，于70℃反应2小时。反应完毕后降至室温，滴加盐酸二氧六环(10mL，4M)，搅拌30分钟，直接进行抽滤得标题化合物T3-6(4.0g)。
MS m/z(ESI):263.1[M+H] +.
步骤六：5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T3-7)
将化合物T3-6(770mg，2.08mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后加入碳酸钾(1.17g，8.3mmol)、4-(溴甲基)四氢吡喃(455mg，2.49mmol)，于80℃反应8小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得标题化合物T3-7(700mg)。
MS m/z(ESI):361.2[M+H] +.
步骤七：5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T3)
将化合物T3-7(700mg，2.3mmol)溶解在甲醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)、水(5mL)中，然后加入氢氧化钠(500mg，12.49mmol)，于25℃反应2小时。浓缩溶剂，滴加1N盐酸调至酸性，直接抽滤得标题化合物T3(600mg)。
MS m/z(ESI):333.1[M+H] +.
中间体制备例4：5-(4-氟苯基)-1-异丁基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T4)
步骤一：5-(4-氟苯基)-1-异丁基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T4-1)
将化合物T3-6(500mg，1.22mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后加入碳酸钾(516mg，3.66mmol)、1-碘-2-甲基丙烷(241mg，1.3mmol)，于70℃反应8小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得标题化合物T4-1(260mg)。
MS m/z(ESI):319.1[M+H] +.
步骤二：5-(4-氟苯基)-1-异丁基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T4)
将化合物T4-1(222mg，0.691mmol)加入到甲醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)、水(5mL)的混合液中，然后加入氢氧化锂(33.4mg，1.38mmol)，于25℃反应2小时。浓缩溶剂，滴加1N盐酸调至酸性，直接过滤得标题化合物T4(200mg)。
MS m/z(ESI):291.1[M+H] +.
中间体制备例5：5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T5)
步骤一：5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T5-1)
将化合物T3-6(920mg,1.97mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后加入碳酸钾(1.11g,7.88mmol)、2-碘丙烷(410mg,2.37mmol)，于70℃反应8小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得标题化合物T5-1(550mg)。
MS m/z(ESI):305.1[M+H] +.
步骤二：5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T5)
将化合物T5-1(550mg,1.91mmol)溶解在甲醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)、水(5mL)中，然后加入氢氧化钠(300mg,7.71mmol)，于25℃反应2小时。浓缩溶剂，滴加1N盐酸调至酸性，直接抽滤得标题化合物T5(350mg)。
MS m/z(ESI):277.1[M+H] +.
中间体制备例6：5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T6)
步骤一：2-(5-氟吡啶-2-基)-1-(1H-咪唑-1-基)乙烷-1-酮(T6-2)
将化合物T6-1(3.00g,15.74mmol)溶于THF(10mL)中，然后加入N,N-羰基二咪唑(2.70g,18.60mmol)，于25℃反应1小时，反应不处理直接用在下一步。
步骤二：4-(5-氟吡啶-2-基)-3-氧代丁酸甲酯(T6-3)
将丙二酸单乙酯钾盐(8.14g,47.37mmol)、氯化镁(4.56g,47.37mmol)和三乙胺(6.46g,63.16mmol)溶解在四氢呋喃(100mL)和N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，然后在冰浴下持续搅拌1小时，升至室温， 持续搅拌一小时，再降至零度后，缓慢加入T6-2，在室温下持续搅拌16小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T6-3(3.00g)。
MS m/z(ESI):228.1[M+H] +.
步骤三：4-(5-氟吡啶-2-基)-2-重氮-3-氧代丁酸乙酯(T6-4)
将T6-3(3.00g,12.65mmol)溶解在乙腈(30mL)中，然后在冰浴下加入三乙胺(3.08g,37.96mmol)、对甲苯磺酰叠氮(3.16g,12.02mmol)，持续搅拌2小时。加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T6-4(3.00g)。
MS m/z(ESI):268.1[M+H] +.
步骤四：4-(5-氟吡啶-2-基)-2-腙-3-氧代丁酸乙酯(T6-5)
将化合物T6-4(3.00g,11.34mmol)溶解在异丙醚(30mL)中，然后加入三丁基膦(2.81g,13.61mmol)，于室温下持续搅拌2小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相无水硫酸钠干燥，旋干得标题化合物T6-5(2.50g)。
MS m/z(ESI):270.1[M+H] +.
步骤五：2-(叔丁氧羰基-腙)-(4-(5-氟吡啶-2-基)-3-氧代丁酸乙酯(T6-6)
将化合物T6-5(2.34g,9.06mmol)溶解在四氢呋喃(10mL)中，然后加入二碳酸二叔丁酯(2.12g,9.51mmol)、三乙胺(2.81g,27.17mmol)、4-二甲氨基吡啶(112mg,900μmol)，于室温下持续搅拌16小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T6-6(2.50g)。
MS m/z(ESI):370.1[M+H] +.
步骤六：5-(5-氟吡啶-2-基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T6-7)
将化合物T6-6(2.10g,5.65mmol)溶解在四氢呋喃(20mL)中，然后加入叔丁氧基双(二甲胺基)甲烷(1.97g,11.29mmol)，于70℃下持续搅拌1小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T6-7(1g)。
MS m/z(ESI):280.1[M+H] +.
步骤七：5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T6-8)
将化合物T6-7(900mg,3.25mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入碘代异丙烷(552mg,3.25mmol)、碳酸钾(1.35g,9.74mmol)，于70℃下持续搅拌1小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T6-8(700mg)。
MS m/z(ESI):322.1[M+H] +.
步骤八：5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T6)
将化合物T6-8(660mg,1.95mmol)溶解在四氢呋喃(5mL)和水(1mL)的混合溶剂中，然后加入氢氧化锂(141mg,5.84mmol)，于25℃下持续搅拌1小时，用1N盐酸调节PH＝5，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得标题化合物T6(500mg)。
MS m/z(ESI):294.1[M+H] +.
中间体制备例7：5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T7)
步骤一：5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T7-1)
将化合物T3-6(1.0g,2.14mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后加入碳酸钾(1.21g,8.57mmol)、1-甲氧基-2-甲基磺酰乙烷(370mg,2.57mmol)，于70℃反应8小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得标题化合物T7-1(600mg)。
MS m/z(ESI):321.2[M+H] +.
步骤二：5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T7)
将化合物T7-1(600mg,1.84mmol)溶解在甲醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)、水(5mL)中，然后加入氢氧化钠(300mg,7.34mmol)，于25℃反应2小时。浓缩溶剂，滴加1N盐酸调至酸性，直接抽滤得标题化合物T7(470mg)。
MS m/z(ESI):293.2[M+H] +.
中间体制备例8：5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T8)
步骤一：5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T8-1)
将化合物T3-6(500mg,1.22mmol)分散到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后加入碳酸钾(516mg,3.66mmol)、四氢呋喃-3-基甲基甲磺酸酯(222mg,1.3mmol)，于70℃反应8小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得标题化合物T8-1(260mg)。
MS m/z(ESI):347.2[M+H] +.
步骤二：5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T8)
将化合物T8-1(230mg,0.69mmol)加入到甲醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)、水(5mL)的混合液中，然后加入氢氧化锂(33.4mg，1.38mmol)，于25℃反应2小时。浓缩溶剂，滴加1N盐酸调至pH＝3-4，直接过滤得标题化合物T8(198mg)。
MS m/z(ESI):319.1[M+H] +.
中间体制备例9：5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T9)
步骤一：2-(4-氯苯基)乙酰氯(T9-2)
将化合物T9-1(11.22g,64.48mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)与催化量的N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL)中，然后缓慢滴加草酰氯(16.7g,128.96mmol)，于25℃反应2小时。直接浓缩反应体系得标题化合物T9-2(12.19g)。
MS m/z(ESI):185.3[M+H] +.
步骤二：2-重氮-4-(4-氯苯基)-3-氧代丁酸乙酯(T9-3)
将化合物T9-2(10g,51.84mmol)溶于乙酸乙酯(100mL)中，于氮气保护、冰水浴下加入重氮乙酸乙酯(12.07g,103.68mmol)，于25℃反应16小时。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得标题化合物T9-3(10.8g)。
MS m/z(ESI):267.2[M+H] +.
步骤三：(E)-4-(4-氯苯基)-2-腙-3-氧代丁酸乙酯(T9-4)
将化合物T9-3(10.8g,28.35mmol)溶于异丙醚(100mL)中，冰水浴下加入三丁基膦(6.44g,31.18mmol)，于25℃反应2小时。加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得标题化合物T9-4(5.6g)。
MS m/z(ESI):269.2[M+H] +.
步骤四：(E)-2-(叔丁氧羰基-腙)-(4-(4-氯苯基)-3-氧代丁酸乙酯(T9-5)
将化合物T9-4(5.6g,16.67mmol)溶于四氢呋喃(60mL)中，分别加入二碳酸二叔丁酯(4.08g,18.34mmol)、三乙胺(5.16g,50.02mmol)、4-二甲氨基吡啶(20.8mg,166.7μmol)，于25℃反应16小时。反应体系直接浓缩即得标题化合物T9-5(6.0g)。
MS m/z(ESI):369.1[M+H] +.
步骤五：5-(4-氯苯基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T9-6)
将化合物T9-5(5.0g,13.72mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，加热回流后，滴加1-叔丁氧基- N,N,N',N'-四甲基-甲二胺(3.38g,18.98mmol)，于70℃反应2小时。反应完毕降至室温，滴加盐酸1,4-二氧六环(15mL,4M)，搅拌30分钟，直接进行抽滤得标题化合物T9-6(2.8g)。
MS m/z(ESI):279.3[M+H] +.
步骤六：5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T9-7)
将化合物T9-6(1.01g,3.05mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，然后加入碳酸钾(1.29g,9.14mmol)、2-碘丙烷(634.07mg,3.66mmol)，于70℃反应16小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，将浓缩后的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得标题化合物T9-7(970mg)。
MS m/z(ESI):321.3[M+H] +.
步骤七：5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T9)
将化合物T9-7(900mg,2.67mmol)溶解在甲醇(5mL)、四氢呋喃(5mL)、水(5mL)中，然后加入氢氧化钠(326mg,8mmol)，于25℃反应2小时。浓缩溶剂，滴加1N盐酸调至PH＝3，直接抽滤得标题化合物T9(490mg)。
MS m/z(ESI):293.3[M+H] +.
中间体制备例10：5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T10)
步骤一：2-(5-氯吡啶-2-基)-1-(1H-咪唑-1-基)乙烷-1-酮(T10-2)
将化合物T10-1(3.00g,14.60mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入N,N-羰基二咪唑(2.70g,18.60mmol)，于25℃反应1小时，反应不处理直接用在下一步。
步骤二：4-(5-氯吡啶-2-基)-3-氧代丁酸甲酯(T10-3)
将丙二酸单乙酯钾盐(8.14g,47.37mmol)、氯化镁(4.56g,47.37mmol)和三乙胺(6.46g,63.16mmol)溶解在四氢呋喃(100mL)/N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，然后在冰浴下持续搅拌一小时，升至室温，持续搅拌一小时，再降至零度后，缓慢加入T10-2，在室温下持续搅拌16小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T10-3(3.00g)。
MS m/z(ESI):228.1[M+H] +.
步骤三：4-(5-氯吡啶-2-基)-2-重氮-3-氧代丁酸乙酯(T10-4)
将T10-3(3.00g,14.20mmol)溶解在乙腈(30mL)中，然后在冰浴下加入三乙胺(3.08g,37.96mmol)、对甲苯磺酰叠氮(3.16g,12.02mmol)，持续搅拌2小时。加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T10-4(3.00g)。
MS m/z(ESI):268.1[M+H] +.
步骤四：4-(5-氯吡啶-2-基)-2-腙-3-氧代丁酸乙酯(T10-5)
将化合物T10-4(3.00g,11.95mmol)溶解在异丙醚(30mL)中，然后加入三丁基膦(2.81g,13.61mmol)，于室温下持续搅拌2小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得标题化合物T10-5(2.50g)。
MS m/z(ESI):270.1[M+H] +.
步骤五：2-(叔丁氧羰基-腙)-(4-(5-氯吡啶-2-基)-3-氧代丁酸乙酯(T10-6)
将化合物T10-5(2.34g,9.24mmol)溶解在四氢呋喃(10mL)中，然后加入二碳酸二叔丁酯(2.12g,9.51mmol)、三乙胺(2.81g,27.17mmol)、4-二甲氨基吡啶(112mg,900μmol)，于室温下持续搅拌16小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T10-6(2.50g)。
MS m/z(ESI):370.1[M+H] +.
步骤六：5-(5-氯吡啶-2-基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(T10-7)
将化合物T10-6(2.10g,5.94mmol)溶解在四氢呋喃(20mL)中，然后加入叔丁氧基双(二甲胺基)甲烷(1.97g,11.29mmol)，于70℃下持续搅拌1小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T10-7(1g)。
MS m/z(ESI):280.1[M+H] +.
步骤七：5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸乙酯(T10-8)
将化合物T10-7(900mg,3.42mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入碘代异丙烷(552mg,3.25mmol)、碳酸钾(1.35g,9.74mmol)，于70℃下持续搅拌1小时，加水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机相无水硫酸钠干燥、浓缩后用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)得标题化合物T10-8(700mg)。
MS m/z(ESI):322.1[M+H] +.
步骤八：5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-羧酸(T10)
将化合物T10-8(660mg,2.16mmol)溶解在四氢呋喃(5mL)和水(1mL)的混合溶剂中，然后加入氢氧化锂(141mg,5.84mmol)，于室温下持续搅拌1小时，用1N盐酸调节PH＝5，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得标题化合物T10(500mg)。
MS m/z(ESI):294.1[M+H] +.
制备例：
实施例1：N-(4-(4-氨基-1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物1)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(40mg,0.12mmol)、T3(43mg,0.12mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(69mg,0.18mmol)、N,N-二异丙基乙胺(47mg,0.36mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆得标题化合物1(44mg)。
MS m/z(ESI):597.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.39(s,1H),8.96(s,1H),8.29(s,1H),8.01-7.92(m,4H),7.77(d,J＝8.4Hz,2H),7.43-7.34(m,2H),6.11-6.00(m,1H),5.13(t,J＝6.4Hz,2H),5.03(t,J＝7.2Hz,2H),4.25(d,J＝7.2Hz,2H),3.90(dd,J＝11.2,2.8Hz,2H),3.31(d,J＝11.2Hz,2H),2.26(d,J＝3.6Hz,1H),1.56(d,J＝11.2Hz,2H),1.38(qd,J＝12.0,4.0Hz,2H).
实施例2：N-(4-(4-氨基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丁基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物2)
将化合物T4(45mg,0.15mmol)和3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(50mg,0.18mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(89mg,0.23mmol)、N,N-二异丙基乙胺(60mg,0.46mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物2(66mg)。
MS m/z(ESI):555.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.35(s,1H),8.92(s,1H),8.25(s,1H),7.99-7.83(m,4H),7.77(d,J＝8.0Hz,2H),7.37-7.32(m,2H),6.04-6.01(m,1H),5.13-5.09(m,2H),5.02-4.98(m,2H),4.15(d,J＝8.0 Hz,2H),2.35-2.14(m,1H),2.33-2.21(m,1H),0.98(t,J＝8.0Hz,6H).
实施例3：N-(4-(4-氨基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物3)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(60mg,0.19mmol)、T5(43mg,0.12mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(111mg,0.29mmol)、N,N-二异丙基乙胺(76mg,0.54mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆得标题化合物3(36mg)。
MS m/z(ESI):541.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.44(s,1H),8.92(s,1H),8.28(s,1H),8.02-7.93(m,4H),7.76(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(t,J＝8.8Hz,2H),6.10-6.01(m,1H),5.14(t,J＝6.4Hz,2H),5.03(t,J＝7.2Hz,2H),4.82-4.74(m,1H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例4：N-(4-(4-氨基-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物4)
将化合物T1(78mg,0.29mmol)、T5(85mg,0.29mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(170mg,0.44mmol)、N,N-二异丙基乙胺(115mg,0.88mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物4(43mg)。
MS m/z(ESI):499.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.39(s,1H),8.92(s,1H),8.28(s,1H),8.00-7.95(m,2H),7.92(d,J＝8.4Hz,2H),7.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.40-7.32(m,2H),4.76(hept,J＝6.4Hz,1H),3.98(s,3H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例5：N-(4-(4-氨基-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物5)
将化合物T1(72mg,0.27mmol)、T7(83mg,0.27mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(160mg,0.40mmol)、N,N-二异丙基乙胺(106mg,0.81mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物5(37mg)。
MS m/z(ESI):515.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.29(s,1H),8.87(s,1H),8.30(s,1H),7.99-7.89(m,4H),7.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.42-7.33(m,2H),4.58-4.47(m,2H),3.99(s,3H),3.85(t,J＝5.2Hz,2H),3.33(s,3H).
实施例6：N-(4-(4-氨基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物6)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(75mg,0.23mmol)、T5(66mg,0.23mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(132mg,0.34mmol)、N,N-二异丙基乙胺(90mg,0.68mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物6(30mg)。
MS m/z(ESI):555.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.42(s,1H),8.92(s,1H),8.28(s,1H),8.00-7.96(m,2H),7.93(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(dd,J＝12.4,5.6Hz,2H),5.56-5.50(m,1H),4.81-4.72(m,1H),4.18-4.08(m,2H),3.96(ddd,J＝21.6,12.0,5.6Hz,2H),2.44(q,J＝6.8Hz,2H),1.55(d,J＝6.8Hz,6H).
实施例7：N-(4-(4-氨基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物7)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(75mg,0.24mmol)、T7(74mg,0.24mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(140mg,0.36mmol)、N,N-二异丙基乙胺(95mg,0.72mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物7(44mg)。
MS m/z(ESI):557.15[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.33(s,1H),8.88(s,1H),8.28(s,1H),7.98-7.93(m,4H),7.77(d,J＝8.4Hz,2H),7.41-7.35(m,2H),6.10-6.00(m,1H),5.17-5.11(m,2H),5.03(t,J＝7.2Hz,2H),4.53(t,J＝5.2Hz,2H),3.85(t,J＝5.2Hz,2H),3.33(s,3H).
实施例8：N-(4-(4-氨基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物8)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(89mg,0.27mmol)、T7(83mg,0.27mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(157mg,0.41mmol)、N,N-二异丙基乙胺(107mg,0.81mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物8(60mg)。
MS m/z(ESI):571.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.32(s,1H),8.87(s,1H),8.28(s,1H),7.99-7.86(m,4H),7.71(d,J＝8.8Hz,2H),7.37(t,J＝8.8Hz,2H),5.59-5.47(m,1H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),4.19-4.03(m,2H),3.95 (ddd,J＝21.6,12.0,5.6Hz,2H),3.85(t,J＝5.2Hz,2H),3.33(d,J＝4.8Hz,3H),2.44(q,J＝6.8Hz,2H).
实施例9：N-(4-(4-氨基-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物9)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(80mg,0.26mmol)、T5(74mg,0.26mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(148mg,0.38mmol)、N,N-二异丙基乙胺(100mg,0.77mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物9(55mg)。
MS m/z(ESI):541.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.41(s,1H),8.92(s,1H),8.27(s,1H),8.01-7.95(m,2H),7.93(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(t,J＝8.8Hz,2H),4.82-4.74(m,1H),4.19(d,J＝7.2Hz,2H),2.30(dt,J＝13.6,6.8Hz,1H),1.55(d,J＝6.8Hz,6H),0.92(d,J＝6.8Hz,6H).
实施例10：N-(4-(4-氨基-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物10)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(80mg,0.26mmol)、T7(78mg,0.26mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(148mg,0.38mmol)、N,N-二异丙基乙胺(100mg,0.77mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物10(70mg)。
MS m/z(ESI):557.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.30(s,1H),8.87(s,1H),8.27(s,1H),7.97-7.90(m,4H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.40-7.34(m,2H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),4.19(d,J＝7.2Hz,2H),3.85(t,J＝4.8Hz,2H),3.33-3.30(m,3H),2.36-2.24(m,1H),0.92(d,J＝6.8Hz,6H).
实施例11：N-(4-(4-氨基-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丁基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物11)
将化合物T4(45mg,0.15mmol)和T1(45mg,0.18mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(89mg,0.23mmol)、N,N-二异丙基乙胺(60mg,0.46mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物11(10mg)。
MS m/z(ESI):513.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.33(s,1H),8.94(s,1H),8.29(s,1H),8.07-7.86(m,4H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.37(s,2H),4.16(s,2H),3.98(s,3H),2.30(s,1H),0.99(d,J＝4.0Hz,6H).
实施例12：N-(-(4-氨基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丁 基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物12)
将化合物T4(60mg,0.21mmol)和化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(74mg,0.25mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(119mg,0.31mmol)、N,N-二异丙基乙胺(80mg,0.61mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物12(25mg)。
MS m/z(ESI):569.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.37(s,1H),8.95(s,1H),8.29(s,1H),7.97-7.97(m,4H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.48-7.26(m,2H),5.55-5.52(m,1H),4.27-4.04(m,4H),4.04-3.85(m,2H),2.47-2.41(m,2H),2.30-2.29(m,1H),1.37(t,J＝8.0Hz,1H),0.99-0.95(m,7H).
实施例13：N-(4-(4-氨基-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丁基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物13)
将化合物T4(60mg,0.21mmol)和化合物3-(4-氨基苯基)-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(74mg,0.25mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(119mg,0.31mmol)、N,N-二异丙基乙胺(80mg,0.61mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物13(28mg)。
MS m/z(ESI):555.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.35(s,1H),8.95(s,1H),8.27(s,1H),8.04-7.84(m,4H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.39-7.35(m,2H),4.20-4.16(m,4H),2.31(s,2H),0.99(d,J＝8.0Hz,6H),0.92(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例14：N-(4-(4-氨基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物14)
将化合物T8(67mg,0.21mmol)和化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(74mg,0.25mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(119mg,0.31mmol)、N,N-二异丙基乙胺(80mg,0.61mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物14(25mg)。
MS m/z(ESI):597.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),8.96(s,1H),8.25(s,1H),7.96-7.88(m,4H),7.68(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(t,J＝8.0Hz,2H),5.53-5.47(m,1H),4.33(d,J＝8.0Hz,2H),4.13-4.06(m,2H),3.97-3.74(m,4H),3.70-3.56(m,2H),2.91-2.84(m,1H),2.44-2.39(m,2H),2.05-1.97(m,2H).
实施例15：N-(4-(4-氨基-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物15)
将化合物T8(60mg,0.21mmol)和化合物3-(4-氨基苯基)-1-异丁基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(74mg,0.25mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(119mg,0.31mmol)、N,N-二异丙基乙胺(80mg,0.61mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物15(27mg)。
MS m/z(ESI):583.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.36(s,1H),9.02(s,1H),8.30(s,1H),8.03-7.99(m,2H),7.95(d,J＝8.0Hz,2H),7.74(t,J＝8.0Hz,2H),4.39(d,J＝8.0Hz,2H),4.22(d,J＝8.0Hz,2H),3.91-3.81(m,2H),3.76-3.62(m,2H),2.97-2.90(m,1H),2.39-2.29(m,1H),2.11-2.03(m,1H),1.82-1.74(m,1H),0.95(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例16：N-(4-(4-氨基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物16)
将化合物T8(61mg,0.21mmol)和化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(74mg,0.25mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(119mg,0.31mmol)、N,N-二异丙基乙胺(80mg,0.61mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物16(23mg)。
MS m/z(ESI):583.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),8.96(s,1H),8.24(s,1H),7.95-7.90(m,4H),7.74-7.71(m,2H),7.33(t,J＝8.0Hz,2H),6.04-5.97(m,1H),5.11-5.08(m,2H),4.98(t,J＝8.0Hz,2H),4.32(d,J＝8.0Hz,2H),3.84-3.77(m,2H),3.69-3.63(m,1H),3.59-3.55(m,1H),2.90-2.83(m,1H),2.02-1.96(m,1H),1.75-1.66(m,1H).
实施例17：N-(4-(4-氨基-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(四氢呋喃-3-基甲基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物17)
将化合物T8(46mg,0.15mmol)和化合物T1(45mg,0.18mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(119mg,0.31mmol)、N,N-二异丙基乙胺(80mg,0.61mmol)，于20℃反应2小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物17(20mg)。
MS m/z(ESI):513.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.34(s,1H),9.01(s,1H),8.32(s,1H),8.02-7.94(m,4H),7.73(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(t,J＝8.0Hz,2H),4.39-4.38(m,2H),4.01(s,3H),3.91-3.80(m,2H),3.76-3.62(m,2H),2.97-2.90(m,1H),2.11-2.03(m,1H),1.82-1.73(m,1H)
实施例18：N-(4-(4-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物18)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(40mg,0.12mmol)、T7(36mg,0.12mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(67mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.35mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物18(28mg)。
MS m/z(ESI):585.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),8.87(s,1H),8.28(s,1H),7.99-7.90(m,5H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(t,J＝8.8Hz,2H),5.02-4.93(m,1H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),4.04(d,J＝8.0Hz,2H),3.85(t,J＝4.8Hz,2H),3.58(t,J＝11.6Hz,2H),3.33(s,3H),2.25(qd,J＝12.4,4.4Hz,2H),1.92(d,J＝10.4Hz,2H).
实施例19：N-(4-(4-氨基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物19)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(37mg,0.12mmol)、T7(36mg,0.12mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(67mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.35mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物19(18mg)。
MS m/z(ESI):564.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.23(s,1H),8.87(s,1H),8.21(s,1H),7.95(dd,J＝8.4,5.6Hz,2H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(t,J＝8.8Hz,3H),6.60(s,1H),6.46(s,1H),6.32(s,1H),4.68(dd,J＝15.6,12.4Hz,2H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),3.85(t,J＝5.2Hz,2H),3.33(s,3H).
实施例20：N-(4-(4-氨基-7-(2,2,2-三氟-1-甲基乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物20)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(64mg,180μmol)、T5(55mg,180μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(138mg,360μmol)、N,N-二异丙基乙胺(23mg,80μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物20(15mg)。
MS m/z(ESI):580.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.35(s,1H),8.93(s,1H),8.23(s,1H),7.98(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(t,J＝8.8Hz,2H),5.70(d,J＝7.2Hz,1H),4.82-4.72(m,1H),3.33(s,3H),1.78(d,J＝7.2Hz,3H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例21：N-(4-(4-氨基-1-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物21)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(58mg,172μmol)、T5(50mg,172μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,257μmol)、N,N-二异丙基乙胺(45mg,343μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物21(24mg)。
MS m/z(ESI):581.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.43(s,1H),8.94(s,1H),8.34(s,1H),8.01-7.93(m,4H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(t,J＝8.8Hz,2H),5.79-5.69(m,1H),4.82-4.72(m,1H),1.82(d,J＝7.2Hz,3H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例22：N-[4-[4-氨基-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯基]-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物22)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(84mg,295μmol)、T5(69mg,236μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(134mg,353μmol)、N,N-二异丙基乙胺(38mg,295μmol)，于25℃搅拌2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水水洗，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆得标题化合物22(20mg)。
MS m/z(ESI):530.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.32(s,1H),8.93(s,1H),8.19(s,1H),7.99-7.96(m,2H),7.86(d,J＝8.0Hz,2H),7.50(d,J＝8.0Hz,2H),7.40-7.34(m,3H),4.90-4.88(m,1H),4.80-4.73(m,2H),4.55(t,J＝4.8Hz,1H),4.49(t,J＝4.8Hz,1H),1.55(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例23：N-(4-(4-氨基-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物23)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(130mg,0.35mmol)、T5(102mg,0.12mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(67mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.35mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物23(40mg)。
MS m/z(ESI):548.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.34(s,1H),8.93(s,1H),8.21(s,1H),7.98(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(dd,J＝11.6,6.4Hz,3H),4.81-4.62(m,3H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例24：N-(4-(4-氨基-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物24)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(13mg,0.038mmol)、T7(12mg,0.038mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(23mg,0.058mmol)、N,N-二异丙基乙胺(15mg,0.12mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆分离得标题化合物24(13mg)。
MS m/z(ESI):584.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.24(s,1H),8.87(s,1H),8.17(s,1H),7.97-7.92(m,2H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.54-7.49(m,3H),7.41-7.35(m,2H),4.87(tt,J＝12.0,4.0Hz,1H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),4.03(dd,J＝11.2,4.0Hz,2H),3.84(t,J＝4.8Hz,2H),3.60-3.51(m,2H),3.32(s,3H),2.15(qd,J＝12.4,3.6Hz,2H),1.96-1.86(m,2H).
实施例25：N-(4-(4-氨基-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物25)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(6mg,19μmol)、T5(6mg,19μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(15mg,39μmol)、N,N-二异丙基乙胺(6mg,48μmol)，在25℃下搅拌10分钟。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物25(5mg)。
MS m/z(ESI):568.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),8.90(s,1H),8.14(s,1H),7.97-7.93(m,2H),7.83(d,J＝8.4Hz,2H),7.50(d,J＝4.8Hz,2H),7.47(s,1H),7.34(t,J＝8.8Hz,2H),4.75-4.72(m,1H),4.00(d,J＝8Hz,2H),3.53(t,J＝12Hz,2H),3.30(m,1H),2.12(m,1H),1.87(d,J＝12Hz,2H),1.52(d,J＝8Hz,6H).
实施例26：N-[4-[4-氨基-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物26)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(100mg,349μmol)、T5(81mg,279μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(159mg,419μmol)、N,N-二异丙基乙胺(90mg,697μmol)，于25℃搅拌2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相。用饱和食盐水水洗，用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经制备HPLC分离得标题化合物26(86mg)。
MS m/z(ESI):531.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.39(s,1H),8.93(s,1H),8.29(s,1H),7.99-7.96(m,2H),7.95-7.92(m,2H),7.72(d,J＝8.0Hz,2H),7.40-7.34(m,2H),4.97(t,J＝4.8Hz,1H),4.86(t,J＝4.8Hz,1H),4.80-7.75(m,1H),4.72(t,J＝4.8Hz,1H),4.65(t,J＝4.8Hz,1H),1.55(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例27：N-[4-[4-氨基-1-(2-氟乙基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物27)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(100mg,349μmol)、T7(86mg,279μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(90mg,697μmol)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(134mg,353μmol)，于25℃搅拌2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相。用饱和食盐水水洗，用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经柱层析分离得标题化合物27(38mg)。
MS m/z(ESI):547.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.30(s,1H),8.88(s,1H),8.29(s,1H),7.97-7.92(m,4H),7.72(d,J＝8.0Hz,2H),7.40-7.36(m,2H),4.97(t,J＝4.8Hz,1H),4.86(t,J＝4.8Hz,1H),4.72(t,J＝4.8Hz,1H),4.65(t,J＝4.8Hz,1H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),3.84(t,J＝4.8Hz,2H),3.32(s,3H).
实施例28：N-(4-(4-氨基-7-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物28)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(52mg,162μmol)、T5(50mg,162μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(93mg,243μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42mg,325μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物28(6mg)。
MS m/z(ESI):596.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.25(s,1H),8.88(s,1H),8.23(s,1H),7.95(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(s,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(t,J＝8.8Hz,2H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),3.84(t,J＝4.8Hz,2H),3.32(s,3H),1.78(d,J＝7.2Hz,3H).
实施例29：N-(4-(4-氨基-1-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物29)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(69mg,195μmol)、T5(60mg,195μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(112mg,292μmol)、N,N-二异丙基乙胺(51mg,390μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物29(34mg)。
MS m/z(ESI):597.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.33(s,1H),8.89(s,1H),8.34(s,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,4H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(t,J＝8.8Hz,2H),4.52(t,J＝4.8Hz,2H),3.85(d,J＝5.2Hz,2H),3.32(s,3H),1.81(d,J＝7.2Hz,3H).
实施例30：N-(4-(4-氨基-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异 丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物30)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(68mg,230μmol)、T5(67mg,230μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(175mg,459μmol)、N,N-二异丙基乙胺(59mg,459μmol)，在25℃下搅拌10分钟。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物30(33mg)。
MS m/z(ESI):540.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.32(s,1H),8.91(s,1H),8.15(s,1H),8.00-7.90(m,2H),7.85(d,J＝8.0Hz,2H),7.76(s,1H),7.52(d,J＝4.0Hz,2H),7.34(t,J＝4.0Hz,2H),5.90-5.86(m,1H),5.04-4.96(m,4H),4.76-4.72(m,1H),1.52(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例31：N-(4-(4-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物31)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(153mg,0.44mmol)、T9(111mg,0.34mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(198mg,0.51mmol)、N,N-二异丙基乙胺(135mg,1.02mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物31(100mg)。
MS m/z(ESI):585.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.34(s,1H),8.97(s,1H),8.28(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,2H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),5.02-4.93(m,1H),4.82-4.72(m,1H),4.04(d,J＝7.2Hz,2H),3.58(t,J＝11.2Hz,2H),2.24(td,J＝12.0,7.6Hz,2H),1.92(d,J＝10.4Hz,2H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例32：N-(4-(4-氨基-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物32)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(64mg,0.21mmol)、T9(54mg,0.17mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(120mg,0.31mmol)、N,N-二异丙基乙胺(82mg，0.62mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5m)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物32(41mg)。
MS m/z(ESI):584.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.26(s,1H),8.96(s,1H),8.17(s,1H),7.97(d,J＝8.8Hz,2H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.55-7.49(m,3H),4.86(dd,J＝13.6,10.0Hz,1H),4.76(dt,J＝13.2,6.4Hz,1H),4.03(dd,J＝11.2,3.6Hz,2H),3.56(t,J＝11.2Hz,2H),2.14(td,J＝12.4,8.0Hz,2H),1.90(d,J＝12.4Hz,2H),1.54(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例33：N-(4-(4-氨基-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物33)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(160mg,0.62mmol)、T9(120mg,0.48mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(278mg,0.72mmol)、N,N-二异丙基乙胺(190mg,1.43mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物33(78mg)。
MS m/z(ESI):564.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.27(s,1H),8.96(s,1H),8.21(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,2H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(s,1H),6.61(s,1H),6.47(t,J＝3.6Hz,1H),6.33(s,1H),4.82-4.62(m,3H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例34：N-(4-(4-氨基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物34)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(70mg,229μmol)、T5(67mg,229μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(174mg,458μmol)、N,N-二异丙基乙胺(59mg,458μmol)，在25℃下搅拌10分钟。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物34(5mg)。
MS m/z(ESI):549.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.38(s,1H),8.91(s,1H),8.29(s,1H),7.97-7.90(m,4H),7.69(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(t,J＝12.0Hz,2H),6.63-6.36(m,1H),4.85-4.76(m,2H),4.75-4.71(m,1H),1.52(d,J＝4.0Hz,6H).
实施例35：N-(4-(4-氨基-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物35)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(90mg,293μmol)、T5(81mg,293μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(167mg,439μmol)、N,N-二异丙基乙胺(76mg,586μmol)，在25℃下搅拌10分钟。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物35(9.4mg)。
MS m/z(ESI):566.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),8.90(s,1H),8.21(s,1H),7.97-7.93(m,2H),7.85(d,J＝8.0Hz,2H),7.48(d,J＝8.0Hz,2H),7.38(s,1H),7.34(t,J＝8.0Hz,2H),5.10(q,J＝8.0Hz,2H),4.75-4.72(m,1H),1.52(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例36：N-(4-(4-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物36)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(100mg,323μmol)、T5(89mg,323μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(184mg,485μmol)、N,N-二异丙基乙胺(84mg,646μmol)，在25℃下搅拌10分钟。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物36(5mg)。
MS m/z(ESI):569.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.38(s,1H),8.91(s,1H),8.25(s,1H),7.96(q,J＝4.0Hz,2H),7.90(d,J＝8.0Hz,2H),7.68(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(t,J＝4.0Hz,2H),4.76-4.72(m,1H),4.01(d,J＝8.0Hz,2H),3.55(t,J＝8.0Hz,2H),3.34(br,1H),2.23-2.19(m,2H),1.89(d,J＝8.0Hz,2H),1.52(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例37：N-(4-(4-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物37)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(89mg,276μmol)、T5(80mg,276μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(157mg,414μmol)、N,N-二异丙基乙胺(71mg,551μmol)，在25℃下搅拌10分钟。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物37(70mg)。
MS m/z(ESI):567.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.39(s,1H),8.91(s,1H),8.32(s,1H),7.97-7.94(m,2H),7.92(d,J＝8.0Hz,2H),7.70(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(t,J＝8.0Hz,2H),5.27(q,J＝8.0Hz,2H),4.77-4.71(m,1H),1.52(d,J＝8.0Hz,6H).
实施例38：N-[4-[4-氨基-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物38)
将化合物T2(53mg,178μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,355μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物38(38mg)。
MS m/z(ESI):541.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.0(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(s,1H),8.18(s,1H),7.94-7.87(m,3H),7.79(s,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H),5.93-5.89(m,1H),5.08-5.01(m,4H),4.99-4.88(m,1H),1.28(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例39：N-[4-[4-氨基-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物39)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(54mg,178μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,355μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物39(28mg)。
MS m/z(ESI):549.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.98(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.21(s,1H),7.94-7.87(m,3H),7.52(d,J＝8.0Hz,2H),7.39(s,1H),6.60-6.30(m,1H),4.93-4.88(m,4H),4.72-4.64(m,1H),1.53(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例40：N-[4-[4-氨基-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物40)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(150mg,276μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(81mg,276μmol)、N,N-二异丙基乙胺(71mg,553μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(210mg,553μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物40(30mg)。
MS m/z(ESI):531.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.98(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.19(s,1H),7.94-7.87(m,3H),7.52(d,J＝8.0Hz,2H),7.41(s,1H),4.90-4.88(m,4H),4.78-4.76(m,1H),4.57-4.55(m,1H),4.50-4.48(m,1H),1.53(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例41：N-[4-(4-氨基-7-四氢吡喃-4-基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物41)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(58mg,178μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,356μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物41(28mg)。
MS m/z(ESI):569.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.98(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.17(s,1H),7.94-7.87(m,3H),7.54-7.50(m,3H),4.91-4.86(m,2H),4.05-4.01(m,2H),3.59-3.54(m,2H),2.17-2.12(m,2H),1.91-1.89(m,2H),1.53(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例42：N-[4-[4-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物42)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(58mg,178μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,356μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物42(8mg)。
MS m/z(ESI):568.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.05(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.36(s,1H),7.96-7.89(m,3H),7.75-7.73(m,2H),5.34-5.27(m,2H),4.93-4.88(m,1H),1.53(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例43：N-[4-(4-氨基-1-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物43)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(58mg,178μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,356μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物43(27mg)。
MS m/z(ESI):570.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.05(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.28(s,1H),7.96-7.89(m,3H),7.75-7.73(m,2H),5.00-4.88(m,2H),4.06-4.02(m,2H),3.61-3.55(m,2H),2.27-2.23(m,2H),1.93-1.91(m,2H),1.53(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例44：N-[4-[4-氨基-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物44)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(51mg,178μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,356μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物44(26mg)。
MS m/z(ESI):532.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.04(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.29(s,1H),7.96-7.89(m,3H),7.75-7.72(m,2H),5.00-4.88(m,3H),4.73-4.64(m,2H),1.53(d,J＝7.2 Hz,6H).
实施例45：N-[4-[4-氨基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物45)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(53mg,177.78μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,356μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物45(28mg)。
MS m/z(ESI):542.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.08(s,1H),9.34(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.29(s,1H),7.98-7.89(m,3H),7.79-7.77(m,2H),6.10-6.02(m,1H),5.16-5.12(m,2H),5.03-5.01(m,2H),4.94-4.87(m,1H),1.53(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例46：N-[4-[4-氨基-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物46)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(170mg,276μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(81mg,276μmol)、N,N-二异丙基乙胺(71mg,553μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(210mg,553μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物46(29mg)。
MS m/z(ESI):567.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.98(s,1H),9.33(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.29(s,1H),7.98-7.87(m,3H),7.53-7.51(m,2H),7.41(s,1H),5.16-5.09(m,2H),4.92-4.86(m,1H),1.53(d,J＝7.2Hz,6H).
实施例47：N-[4-[4-氨基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-5-(5-氟吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物47)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(54mg,178μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入T6(52mg,178μmol)、N,N-二异丙基乙胺(46mg,356μmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,267μmol)，于25℃下反应2小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物47(27mg)。
MS m/z(ESI):550.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.05(s,1H),9.37(s,1H),8.86-8.83(m,1H),8.76(d,J＝3.2Hz,1H),8.32(s,1H),7.98-7.89(m,3H),7.74-7.72(m,2H),6.66-6.38(m,1H),4.93-4.80(m,3H),1.53(d,J＝7.2 Hz,6H).
实施例48：N-(4-(4-氨基-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物48)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(90mg,0.29mmol)、T9(71mg,0.23mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(386mg,1.00mmol)、N,N-二异丙基乙胺(116mg,0.88mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆抽滤得标题化合物48(25mg)。
MS m/z(ESI):582.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.28(s,1H),8.95(d,J＝5.2Hz,1H),8.23(s,1H),7.97(d,J＝8.8Hz,2H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(s,1H),5.13(q,J＝9.2Hz,2H),4.81-4.70(m,1H),1.54(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例49：N-(4-(4-氨基-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物49)
将化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(135mg,0.50mmol)、T9(120mg,0.40mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(289mg,0.75mmol)、N,N-二异丙基乙胺(197mg,1.49mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物滴加盐酸1,4-二氧六环成盐后经制备HPLC分离得标题化合物49(1.73mg)。
MS m/z(ESI):546.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.26(s,1H),8.96(s,1H),8.19(s,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,2H),7.86(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(s,1H),4.89(s,1H),4.77(s,2H),4.52(d,J＝27.2Hz,2H),1.54(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例50：N-(4-(4-氨基-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物50)
将化合物T2(125mg,0.40mmol)、T9(96mg,0.32mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(232mg,0.60mmol)、N,N-二异丙基乙胺(158mg,1.20mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆抽滤得标题化合物50(109mg)。
MS m/z(ESI):556.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),8.89(s,1H),8.10(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.80 (d,J＝8.8Hz,2H),7.72(s,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,2H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),5.83(dd,J＝14.4,7.2Hz,1H),4.96(dt,J＝14.4,7.2Hz,4H),4.73-4.65(m,1H),1.47(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例51：N-(4-(4-氨基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物51)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(112mg,0.39mmol)、T9(93mg,0.31mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(224mg,0.58mmol)、N,N-二异丙基乙胺(153mg,1.16mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经甲醇打浆抽滤得标题化合物51(100mg)。
MS m/z(ESI):565.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.36(s,1H),8.99(s,1H),8.34(s,1H),7.98(dd,J＝14.4,8.8Hz,4H),7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),6.68(s,1H),6.54(t,J＝3.6Hz,1H),6.41(t,J＝3.6Hz,1H),4.91-4.75(m,3H),1.56(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例52：N-(4-(4-氨基-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物52)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(54mg,0.20mmol)、T9(60mg,0.20mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(115mg,0.30mmol)、N,N-二异丙基乙胺(78mg,0.60mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后经甲醇打浆纯化抽滤得标题化合物52(47mg)。
MS m/z(ESI):547.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.34(s,1H),8.96(s,1H),8.29(s,1H),7.96(dd,J＝16.4,8.4Hz,4H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),4.98(t,J＝4.8Hz,1H),4.86(t,J＝4.8Hz,1H),4.75(ddd,J＝16.8,11.6,5.6Hz,2H),4.65(t,J＝4.8Hz,1H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例53：N-(4-(4-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物53)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(55mg,0.17mmol)、T9(53mg,0.18mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(102mg,0.26mmol)、N,N-二异丙基乙胺(69mg,0.52mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后经甲醇打浆纯化抽滤得标题化合物53(31mg)。
MS m/z(ESI):583.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.35(s,1H),8.96(s,1H),8.35(s,1H),7.96(dd,J＝12.0,8.4Hz,4H), 7.73(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),5.38-5.18(m,2H),4.82-4.71(m,1H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例54：N-(4-(4-氨基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物54)
将化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(176mg,0.62mmol)、T9(150mg,0.50mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(362mg,0.94mmol)、N,N-二异丙基乙胺(246mg,1.87mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，于25℃反应4小时。加水，用乙酸乙酯萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后经甲醇打浆纯化抽滤得标题化合物54(130mg)。
MS m/z(ESI):557.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.37(s,1H),8.97(s,1H),8.29(s,1H),7.97(dd,J＝10.8,8.4Hz,4H),7.77(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),5.14(t,J＝6.4Hz,2H),5.03(t,J＝7.2Hz,2H),4.83-4.74(m,1H),3.20(d,J＝5.2Hz,1H),1.55(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例55：N-(4-(4-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物55)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(50mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(33mg,258μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物55(21mg)。
MS m/z(ESI):587.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.98(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.28(s,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),4.97(s,1H),4.94-4.82(m,1H),4.04(d,J＝7.2Hz,2H),3.58(t,J＝11.2Hz,2H),2.25(td,J＝12.4,8.0Hz,2H),1.92(d,J＝10.4Hz,2H),1.53(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例56：N-(4-(4-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物56)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(50mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(33mg,258μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩， 将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物56(22mg)。
MS m/z(ESI):584.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.98(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,2H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),5.31(q,J＝9.2Hz,2H),4.94-4.83(m,1H),1.53(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例57：N-(4-(4-氨基-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物57)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(50mg,163μmol)、T10(50mg,163μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(94mg,245μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42mg,327μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物57(29mg)。
MS m/z(ESI):566.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.97(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.32(s,1H),8.12(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),6.71-6.33(m,1H),4.88(s,1H),4.88-4.78(m,2H),1.53(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例58：N-(4-(4-氨基-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物58)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2-二氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(47mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42mg,327μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物58(33mg)。
MS m/z(ESI):565.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.21(s,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(s,1H),4.94-4.85(m,1H),4.68(dd,J＝15.2,12.0Hz,2H),1.53(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例59：N-(4-(4-氨基-7-(氧杂环丁-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物59)
称取化合物T2(45mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42 mg,327μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物59(30mg)。
MS m/z(ESI):558.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.18(s,1H),8.12(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.79(s,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,2H),5.91(dd,J＝14.4,7.2Hz,1H),5.04(dt,J＝14.4,6.8Hz,4H),4.95-4.85(m,1H),1.53(d,J＝6.8Hz,6H).
实施例60：N-(4-(4-氨基-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物60)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(50mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42mg,327μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物60(5mg)。
MS m/z(ESI):586.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),9.38(s,1H),8.82(s,1H),8.79(s,1H),8.30(s,1H),8.13(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.70(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),4.92-4.89(m,1H),4.05(d,J＝7.2Hz,2H),3.59(d,J＝11.2Hz,2H),2.18(d,J＝8.0Hz,2H),1.92(d,J＝9.2Hz,2H),1.54(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例61：N-(4-(4-氨基-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物61)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(2-氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(46mg,161μmol)、T10(50mg,161μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(94mg,245μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42mg,327μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物61(30mg)。
MS m/z(ESI):548.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.97(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.73(d,J＝8.4Hz,2H),4.98(t,J＝4.8Hz,3H),4.69(d,J＝26.8Hz,2H),1.53(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例62：N-(4-(4-氨基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物62)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(45mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(33mg,258μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物62(18mg)。
MS m/z(ESI):558.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.00(s,1H),9.38(s,1H),8.82(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.96(d,J＝8.4Hz,2H),7.78(d,J＝8.4Hz,2H),6.06(t,J＝7.2Hz,1H),5.14(t,J＝6.4Hz,2H),5.03(t,J＝7.2Hz,2H),4.95-4.85(m,1H),1.53(s,6H).
实施例63：N-(4-(4-氨基-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物63)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(50mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(33mg,258μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物63(11mg)。
MS m/z(ESI):583.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.24(s,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H),7.52(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(s,1H),5.13(q,J＝9.2Hz,2H),4.93-4.84(m,1H),1.53(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例64：N-(4-(4-氨基-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物64)
称取化合物5-(4-氨基苯基)-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(46mg,161μmol)、T10(50mg,161μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(94mg,245μmol)、N,N-二异丙基乙胺(42mg,323μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物64(11mg)。
MS m/z(ESI):547.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝12.4Hz,2H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.86(s,2H),7.53(s,2H),7.42(s,1H),4.90(s,2H),4.78(s,1H),4.50(s,3H),1.53(s,7H).
实施例65：N-(4-(4-氨基-1-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-5-(5-氯吡啶-2-基)-1-异丙基-4-氧代-1,4-二氢哒嗪-3-甲酰胺(化合物65)
称取化合物3-(4-氨基苯基)-1-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺(52mg,129μmol)、T10(40mg,129μmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(99mg,258μmol)、N,N-二异丙基乙胺(33mg,258μmol)，在25℃下搅拌5小时。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，将浓缩后的残留物经制备HPLC分离得标题化合物65(77mg)。
MS m/z(ESI):598.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.93(s,1H),9.37(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.23(s,1H),8.12(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),5.76-5.65(m,1H),4.91(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),1.78(d,J＝7.2Hz,3H),1.53(d,J＝6.4Hz,6H).
生物学评价：
试验例1：化合物对Axl、Mer和Tyro3激酶活性测试
1.试验系统：
激酶：Axl(Carna)；激酶：Mer(Carna)；激酶：Tyro3(Carna)
HTRF试剂盒：HTRF KinEASE TM-TK(Cisbio)
2.试验参数：
3.实验方法：
将酶分别与不同浓度的测试化合物在25℃下预孵育一定时间，然后加入5×TK-substrate-biotin/ATP混合工作液，在25℃下分别反应一段时间，最后加入2×Streptavidin-XL665与TK Antibody-Cryptate的混合工作液，在25℃下孵育一段时间后，通过酶标仪检测荧光信号比值(Ratio)。
4.数据处理：
以溶剂组(DMSO)为阴性对照、反应缓冲液组为空白对照，按照下式计算不同浓度化合物的百分比抑制率：
百分比抑制率＝(1-(不同浓度化合物Ratio-空白对照Ratio)/(阴性对照Ratio-空白对照Ratio))×100％；
当百分比抑制率介于30-80％时，按照下述公式计算化合物的半数抑制浓度(IC 50)或范围：
IC 50＝X×(1-百分比抑制率(％))/百分比抑制率(％)，其中：X为抑制率介于30-80％时化合物的测试浓度。
5.试验结果：
按照上述方法测定化合物对Axl/Mer/Tyro3的抑制作用，结果如表1-1、1-2、1-3中所示。
表1-1.本发明的化合物对Axl的抑制活性
化合物编号 Axl IC 50(nM)
1 2.4
2 3.3
3 2.6
4 6.1
5 1.6
6 1.3
7 1.9
8 0.4
9 3.7
10 2.1
11 3.6
12 4.0
13 18.7
14 0.2
15 4.0
16 0.2
17 1.5
18 2.3
19 5.8
20 1.6
21 12.9
22 4.2
23 0.3
24 4.3
25 1.3
26 1.8
27 0.2
28 12.4
29 3.2
30 3.2
31 2.3
32 2.9
33 4.2
34 2.1
35 11.8
36 9.0
37 1.8
38 9.7
39 0.7
40 0.5
41 4.8
42 10.9
43 7.4
44 11.5
45 71.8
46 14.4
47 8.3
48 19.1
49 3.0
50 21.4
51 34.5
52 27.3
53 30.5
54 19.8
55 10.0
56 46.2
57 14.4
58 4.8
59 7.9
60 1.8
61 4.8
62 36.9
63 6.8
64 3.4
65 5.7
表1-2.本发明的化合物对Mer的抑制活性
化合物编号 Mer IC 50(nM)
1 9.3
7 65.1
18 13.8
19 7.3
23 2.5
25 4.6
26 3.5
27 6.2
28 6.1
29 18.8
39 8.7
40 4.0
46 29.5
58 6.2
63 20.8
表1-3.本发明的化合物对Tyro3的抑制活性
化合物编号 Tyro3IC 50(nM)
1 138.7
16 86.7
17 104.0
28 170.6
29 244.1
63 140.8
结论：
本发明的化合物对Axl和Mer表现出较强的抑制活性。
试验例2：化合物对Ba/F3-TEL-Axl细胞的增殖活性抑制试验
1.试验系统：
细胞名称/制造商：Ba/F3-TEL-Axl/合肥普瑞昇
试剂盒名称/制造商： Luminescent Cell Viability Assay,Promega
2.试验参数：
细胞数量：2000细胞/孔
培养基：RPMI-1640+10％FBS+1％P/S
DMSO含量：0.1％
化合物孵育条件：37℃，5％CO 2
孵育时间：72h
检测温度：RT
检测仪器：Molecular Devices
3.试验步骤：
将Ba/F3-TEL-Axl细胞体外单层培养，培养条件为10％FBS+1％P/S的RPMI-1640培养基，于37℃、含5％CO 2空气的培养箱中培养。在96孔板中铺入细胞，2000个/孔，然后加入预先稀释的化合物，阴性对照组加DMSO，空白对照组加培养基，于37℃、5％CO 2空气的培养箱孵育72h 后，向每孔中加入检测试剂CellTiter-Glo，在酶标仪化学发光检测模式下读取相对化学发光单位值(RLU)。
4.数据处理：
按照下述公式计算不同浓度化合物的百分比抑制率：
百分比抑制率＝(1-(测试化合物的化学发光信号值-空白对照的化学发光信号值)/(阴性对照的化学发光信号值-空白对照的化学发光信号值))×100％，采用Graphpad 7.0按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC 50)。
5.试验结果：
按照上述方法测定化合物对Ba/F3-TEL-Axl细胞的增殖抑制活性，结果如表2中所示。
表2.化合物对Ba/F3-TEL-Axl细胞增殖活性抑制结果
化合物编号 Ba/F3-TEL-Axl,IC 50(nM)
4 9.6
5 34.3
7 29.7
8 33.6
9 8.3
16 6.1
17 5.9
23 0.9
29 1.0
30 2.7
31 4.3
32 2.3
33 2.1
34 3.4
35 1.4
36 2.6
37 6.6
38 14.3
39 3.2
40 5.4
41 3.5
42 33.2
43 12.3
44 16.6
45 44.7
46 9.7
47 24.7
48 4.0
49 3.6
50 4.8
51 7.0
58 9.8
结论：
本发明的化合物对Ba/F3-TEL-Axl细胞具有较强的增殖抑制活性。
试验例3：化合物对HCC827erlotinib R细胞的增殖活性抑制试验
1.试验系统：
细胞名称：HCC827erlotinib R(厄洛替尼耐药的HCC827细胞)
试剂盒名称/制造商： Luminescent Cell Viability Assay,Promega
2.试验参数：
细胞数量：4000细胞/孔
培养基：RPMI1640+10％FBS
DMSO含量：0.5％
化合物孵育条件：37℃，5％CO 2
孵育时间：72h
检测温度：RT
检测仪器：Thermo Varioskan
3.试验步骤：
将HCC827 erlotinib R细胞体外单层培养，培养条件为RPMI1640+10％FBS培养基+200nM厄洛替尼，于37℃、含5％CO 2空气的培养箱中培养。在96孔板中铺入细胞，4000个/孔，然后加入预先稀释的化合物，阴性对照组加DMSO，空白对照组加培养基，铺板所用培养基不含厄洛替尼，于37℃、5％CO 2空气的培养箱孵育72h后，向每孔中加入检测试剂CellTiter-Glo，在酶标仪化学发光检测模式下读取相对化学发光单位值(RLU)。
4.数据处理：
按照下述公式计算不同浓度化合物的百分比抑制率：
百分比抑制率＝(1-(测试化合物的化学发光信号值-空白对照的化学发光信号值)/(阴性对照的化学发光信号值-空白对照的化学发光信号值))×100％，采用Graphpad 7.0按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC 50)。
5.试验结果：
按照上述方法测定化合物对HCC827 erlotinib R细胞的增殖抑制活性，结果如表3中所示。
表3.化合物对HCC827 erlotinib R细胞增殖抑制活性结果
化合物编号 HCC827 erlotinib R,IC 50(μM)
19 0.11
21 0.05
23 0.58
25 0.37
31 0.36
32 0.16
34 0.60
38 0.72
39 0.30
40 0.24
41 0.40
46 0.71
48 0.12
50 0.15
51 0.20
结论：
本发明的化合物对厄洛替尼耐药的HCC827细胞具有较强的增殖抑制活性。
试验例4：CYP酶(细胞色素P450)抑制试验
1、试验系统：
P450-Glo TM CYP1A2筛选系统(Promega)；
P450-Glo TM CYP2D6筛选系统(Promega)；
P450-Glo TM CYP3A4筛选系统(Promega)。
2、测试仪器：
BMG PHERAstar FS Luminescent。
3、试验方法：
分别按照试剂盒说明书进行试验，步骤如下：
3.1.对CYP1A2的抑制：
测试组：将不同浓度的待测化合物加入到微孔板中。向每孔中加入Luciferin-ME(100μM)、K 3PO 4(100mM)和CYP1A2(0.01pmol/μL)，在室温下预孵育10min。随后加入NADPH再生系统，在室温下反应30min。最后加入等体积的检测缓冲液，在室温下孵育20min。然后进行化学发光检测。
阴性对照组：实验方法同测试组，但不加待测化合物。
空白对照组：实验方法同测试组，但不加待测化合物，并且用CYP1A2 Membrance(0.01pmol/μL)代替CYP1A2。
3.2.对CYP2D6的抑制：
测试组：将不同浓度的待测化合物加入到微孔板中。向每孔中加入Luciferin-ME EGE(3μM)、K 3PO 4(100mM)和CYP2D6(5nM)，在室温下预孵育10min。随后加入NADPH再生系统，在37℃下反应30min。最后加入等体积的检测缓冲液，在室温下孵育20min。然后进行化学发光检测。
阴性对照组：实验方法同测试组，但不加待测化合物。
空白对照组：实验方法同测试组，但不加待测化合物，并且用CYP2D6 Membrance(5nM)代替CYP2D6。
3.3.对CYP3A4的抑制：
测试组：将不同浓度的待测化合物加入到微孔板中。向每孔中加入Luciferin-IPA(3μM)、K 3PO 4(100mM)和CYP3A4(2nM)，在室温下预孵育10min。随后加入NADPH再生系统，在室温下反应30min。最后加入等体积的检测缓冲液，在室温下孵育20min。然后进行化学发光检测。
阴性对照组：实验方法同测试组，但不加待测化合物。
空白对照组：实验方法同测试组，但不加待测化合物，并且用CYP3A4 Membrance(2nM)代替CYP3A4。
4、数据处理：
百分比抑制率(％)＝(1-(待测化合物的化学发光信号值-空白对照的化学发光信号值)/(阴性对照的化学发光信号值-空白对照的化学发光信号值))×100％；
根据不同浓度化合物对CYP酶的抑制率，估算化合物的半数抑制浓度(IC 50)或范围：
IC 50＝X×(1-百分比抑制率(％))/百分比抑制率(％)，其中：X为化合物的测试浓度。
5、实验结果：
按照上述方法测定本发明化合物对三种CYPs的抑制，结果如下表4中所示。
表4.CYPs抑制试验结果
结论：
本发明的化合物对3种主要CYP亚型均无明显抑制作用，表明其潜在的药物相互作用可能性相对较低。
试验例5.生化hERG抑制试验
1.试验系统：
试剂盒：Predictor TM hERG Fluorescence Polarization Assay,(ThermoFisher)，
试剂盒中含有：
阳性对照化合物hERG钾通道阻断剂E4031；
hERG细胞膜；
亲和性示踪剂Tracer；
hERG缓冲液。
2.试验参数：
hERG浓度：1×
Tracer浓度：1nM
孵育时间：2h
BMG PHERAstar FS FP
3.试验方法：
按照试剂盒说明书进行试验，步骤如下：
测试组：将不同浓度的待测化合物加入到含有hERG细胞膜的微孔板中，每孔中再加入具有高hERG亲和性示踪剂Tracer，将微孔板在室温孵育2小时后，使用多功能酶标仪检测荧光 偏振(Excitation：540nm；Emission：590nm)值的变化。
阳性对照组：用30μM阳性对照化合物E4031代替待测化合物，实验方法与测试组相同。
空白对照组：用hERG缓冲液代替待测化合物，并且不加hERG细胞膜，实验方法与测试组相同。
4.数据处理：
根据下述公式，计算本发明的化合物在不同浓度下对hERG的百分比抑制率。
百分比抑制率＝(1-(待测化合物的荧光偏振值-阳性对照组的荧光偏振值)/(空白对照组的的荧光偏振值-阳性对照组的荧光偏振值))*100％
当百分比抑制率介于30-80％之间时，根据下述公式，估算化合物对hERG的半数抑制浓度(IC 50)或范围：
IC 50＝X×(1-百分比抑制率(％))/百分比抑制率(％)，其中：X为抑制率介于30-80％时化合物的测试浓度。
5.实验结果：
采用上述方法测定化合物对hERG的抑制，结果如下表5中所示。
表5.hERG抑制试验结果
实施例编号 IC 50(μM)
4 >10
5 >10
7 >10
8 >10
9 10.4
10 >10
19 10.0
21 >10
22 9.2
23 >10
25 >10
31 >10
34 >10
35 >10
37 >10
38 >10
40 >10
41 >10
43 >10
44 >10
46 >10
47 >10
55 >10
58 >10
59 >10
60 9.8
63 >10
65 >10
测试结果表明，本发明绝大多数化合物与hERG亲和性低，与亲和性示踪剂Tracer竞争的 IC 50均＞10μM。证明本发明的绝大多数化合物hERG离子通道相关的心脏毒性风险较低。
试验例6：化合物肝微粒体代谢稳定性测试
1.材料与方法
1.1主要试验材料
睾酮 Dr.Ehrenstorfer，德国
混合人肝微粒体 Xenotech或BioIVT，美国
混合雄性SD大鼠肝微粒体 BioIVT，美国
1.2肝微粒体孵育体系
将阳性化合物睾酮或待测物(肝微粒体溶液，50μl)与PBS(25μl)混合，预孵(37℃)5min后，加入NADPH(25μl)，使阳性化合物或待测物终浓度为1μM，人和大鼠肝微粒体蛋白终浓度为0.5mg/ml，将待测物组和阳性化合物组孵育0、15min。反应相应时间后加入300μl含内标的冰乙腈终止反应，涡旋，存于-80℃待测。所有孵育样本均为双样本。
1.3样品预处理
将待测物涡流1min，离心10min(4℃，4000rpm)。取上清液160μl，向其中加入160μl的50％乙腈-水，混匀后，进行LC-MS/MS分析。
2.数据处理
使用Excel软件，计算孵育体系中原形药物的剩余率(％)：
原形剩余率(％)＝100×(A 孵育样品/A 0h)
注：A 孵育样品：孵育相应时间后化合物与内标峰面积比；A 0h：未反应时化合物与内标峰面积比。
3.结果与结论
按照上述方法测定化合物在人和大鼠肝微粒体中孵育15min后的原形剩余率如表6所示。
表6.本发明的化合物在人和大鼠肝微粒体中孵育15min后的原形剩余率
结论：
本发明的大部分化合物在人肝微粒体中代谢稳定，在大鼠肝微粒体中代谢也较为稳定，总体代谢稳定性良好。
试验例7：化合物在SD大鼠体内药代动力学试验测试
通过灌胃(PO)向雄性SD大鼠给予本发明的化合物，考察药代动力学特点。
将本发明的化合物进行PO给药，给药剂量如表7所示。在PO给药前(0h)以及给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、24h采集血样，经尾静脉取血0.3ml，置于K 2-EDTA抗凝试管中，在4000rpm下离心5min(4℃)，分离血浆，-80℃保存待测。血浆样品经沉淀蛋白处理后进行LC-MS/MS分析。应用WinNonlin 6.3软件，采用非房室模型计算药代动力学参数，结果见表7。
表7：本发明化合物在大鼠体内的药代动力学参数
a溶媒为：0.5％MC；b溶媒为：10％DMSO:10％Solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):80％生理盐水的混合物(pH＝2)；c溶媒为：10％DMSO:20％Solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):70％超纯水。
结论：
本发明的化合物23、40和63通过PO给药后在大鼠体内暴露量高。
本说明书中公开的所有技术特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的技术特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。

Claims (21)

  1. 式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，
    其中，
    R 1选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 6取代；
    R 6在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-NH 2、-NO 2、-S(O) pR A、-COR A、＝O、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、C 1-C 6烷氧基、3-8元杂环基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、C 1-C 6烷氧基、3-8元杂环基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 7取代；
    R 7在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-NH 2、-NO 2、-S(O) pR A、-COR A和＝O；
    R A独立地选自H和C 1-C 6烷基；
    p选自1和2；
    R 2在每次出现时各自独立地选自H、-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基和C 3-C 8环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基或C 3-C 8环烷基任选地被一个或多个R 8取代；
    R 8在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基和C 1-C 6卤代烷氧基；
    m选自0、1、2、3和4；
    R 3选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个R 9取代；
    R 9在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基和C 1-C 6卤代烷氧基；
    R 4选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基和3-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基任选地被一个或多个R 10取代；
    R 10在每次出现时各自独立地选自-OH、卤素、-CN、-NH 2、-NO 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基、C 1-C 6卤代烷氧基和3-8元杂环基；
    X选自CH和N；
    R 5选自H、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环基、卤素、-CN、-CONR 5aR 5b和C 1-C 6卤代烷基；且
    R 5a和R 5b各自独立地选自H和C 1-C 6烷基。
  2. 权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基和3-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基任选地被一个或多个R 6取代；
    R 6在每次出现时各自独立地选自卤素、-CN、-OH、-S(O) pR A、C 3-C 8环烷基和C 6-C 10芳基，所述C 3-C 8环烷基或C 6-C 10芳基任选地被一个或多个R 7取代；
    R 7在每次出现时各自独立地选自卤素和＝O；
    R A为C 1-C 6烷基；且
    p为2。
  3. 权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基和3-6元含氧杂环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或3-6元含氧杂环烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、-OH、-S(O) 2(C 1-C 6烷基)、任选地被卤素或＝O取代的C 3-C 6环烷基、以及任选地被卤素取代的苯基；
    优选地，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基或C 3-C 6环烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、-CN、-OH、-S(O) 2(C 1-C 6烷基)、任选地被卤素或＝O取代的C 3-C 6环烷基、以及任选地被卤素取代的苯基，
    更优选地，R 1选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基或C 3-C 6环烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：-F、-CN、-OH、-S(O) 2CH 3、四氢吡喃基、以及氟代苯基；
    更优选地，R 1选自C 1-C 6烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基任选地被1、2或3个-F取代；
    更优选地，R 1选自 CF 3CH 2-、CH 3-、
    更优选地，R 1选自 CF 3CH 2-、CH 3-、
    其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
  4. 权利要求1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    R 2在每次出现时各自独立地选自H和卤素；
    优选地，R 2在每次出现时各自独立地选自H和F；
    更优选地，R 2为H。
  5. 权利要求1-4中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    m为1。
  6. 权利要求1-5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    R 3选自C 6-C 10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基；
    优选地，R 3选自苯基和5-6元含氮杂芳基，所述苯基或5-6元含氮杂芳基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基；
    更优选地，R 3选自苯基和吡啶基，所述苯基或吡啶基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：卤素、C 1-C 6烷基和C 1-C 6卤代烷基；
    更优选地，R 3选自苯基和吡啶基，所述苯基或吡啶基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的基团取代：F、Cl、-CF 3和-CH 3；
    更优选地，R 3选自苯基和吡啶基，所述苯基或吡啶基任选地被F或Cl取代；
    更优选地，R 3选自：
    更优选地，R 3选自：
    其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
  7. 权利要求1-6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被一个或多个C 1-C 6烷氧基或3-8元杂环基取代；
    优选地，R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被C 1-C 6烷氧基或5-6元含氧杂环烷基取代；
    更优选地，R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被C 1-C 6烷氧基、四氢呋喃基或四氢吡喃基取代；
    更优选地，R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被甲氧基、四氢呋喃基或四氢吡喃基取代；
    更优选地，R 4选自异丙基、2-甲基丙基、甲氧基乙基、
    其中波浪线 表示该基团与分子其余部分的连接点。
  8. 权利要求1-7中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    R 5选自H、C 1-C 6烷基和卤素；
    优选地，R 5为H。
  9. 权利要求1-8中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物为式I-1的化合物：
  10. 权利要求9的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物为式I-1-1的化合物：
    其中，
    q选自0、1、2、3、4和5；
    优选地，q为1。
  11. 权利要求9的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物为式I-1-2的化合物：
    其中，
    q选自0、1、2、3和4；
    优选地，q为1。
  12. 权利要求1-8中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物为式I-2的化合物：
  13. 权利要求12的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物为式I-2-1的化合物：
    其中，
    q选自0、1、2、3、4和5；
    优选地，q为1。
  14. 权利要求13的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物为式I-2-1a的化合物：
  15. 权利要求14的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中，
    R 1选自C 1-C 6烷基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基，所述C 1-C 6烷基任选地被1、2或3个-F取代；
    R 4选自C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选地被C 1-C 6烷氧基、四氢呋喃基或四氢吡喃基取代；
    R 9为卤素；且
    q为1。
  16. 权利要求12的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物为式I-2-2的化合物：
    其中，
    q选自0、1、2、3和4；
    优选地，q为1。
  17. 权利要求1-8中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：
  18. 药物组合物，其包含预防或治疗有效量的权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，以及一种或多种药学可接受的载体。
  19. 药盒，其包含：
    a)权利要求1-17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者权利要求18所述的药物组合物；和
    b)任选存在的包装和/或说明书。
  20. 权利要求1-17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者权利要求18所述的药物组合物或者权利要求19所述的药盒在制备用于预防或治疗与Axl和/或Mer相关的疾病(特别是肿瘤疾病)的药物中的用途。
  21. 制备权利要求1-17中任一项所述的化合物的方法，其包括反应路线1所示的步骤：
    反应路线1
    其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、X和m如权利要求1-17中任一项所定义。
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